KR20170118442A - 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물 - Google Patents

염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 염소계 살균소독제; 및 과산화나트륨, 설파믹산 및 이들의 혼합물 중 선택된 어느 하나의 성분;을 포함하여 염소계 소독제의 우수한 효력을 유지 향상시키면서 염소 냄새를 효과적으로 제거하여 환경친화적이고, 작업자 및 동물에 안전하여 구제역, AI 등의 악성 전염병에 효율적인 적용이 가능한 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물에 관한 것이다.

Description

염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물{Composition of chlorine disinfections free of chlorine smell}
본 발명은 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 염소계 살균소독제와 과산화나트륨, 설파믹산 및 이들의 혼합물 중 선택된 어느 하나의 성분을 포함하여 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물에 관한 것이다.
살균소독제로서 염소계 살균소독제는 유리염소성분이 세균의 세포막의 투과성에 장애를 주고 원형질 성분을 산화시키며 효소반응을 저해함으로써 강력한 살균력을 발휘하며, 실제로 인체의 면역 시스템에서도 백혈구의 일종인 호중구(Neutrophils)에서 차아염소산(HOCl)을 만들어 세균을 파괴시키는 것을 알려져 있다.
염소계 살균소독제는 흔히 락스라고 알려진 차아염소산나트륨(NaOCl)이나, 이산화염소(ClO2), 염소 가스(Cl2), 차아염소산(HOCl), 차아염소산 이온(OCl-) 등의 형태로 살균에 이용되고 있다.
한편, 이염화이소시아눌산나트륨(NaDCC)은 차아염소산보다 약 100배의 효력을 나타내는 성분으로, 100% 생분해되어 잔류되지 않아 환경에 악영향을 끼치지 않으며 발포성 산제로서 탄산소다와의 상승작용으로 더 한층 소독효과를 증진시킨다고 알려져 있다.
한편, NaDCC 소독제의 경우 우수한 소독효과 및 안전한 사용 및 직접적인 가축적용 등 우수한 제품력을 가지고 있으나, 사용 시 염소냄새를 발생시켜 방역기관 및 축산농가에서 수요 확대가 제한적이었다. 따라서, 이들 NaDCC 소독제가 살균소독의 광범위한 유효성 외에 탈취 및 악취제거의 효능이 부가된다면 그 사용이 더욱 확대될 수 있고, 소독제에 의한 잔존 냄새가 제거된다면 이상적인 가축전용 살균소독제로 각광받을 수 있을 것이다.
국내등록특허 제10-1054947호
이에 본 발명은 염소계 소독제의 우수한 효력을 유지 향상시키면서 염소 냄새를 효과적으로 제거한 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
또한 본 발명은 환경친화적이고, 작업자 및 동물에 안전하여 구제역, AI 등의 악성 전염병에 효율적인 적용이 가능한 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 염소계 살균소독제; 및 과산화나트륨, 설파믹산 및 이들의 혼합물 중 선택된 어느 하나의 성분;을 포함하는 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물을 제공한다.
본 발명에 따르면 염소계 소독제의 우수한 효력을 유지 향상시키면서 염소 냄새를 효과적으로 제거되어 환경 친화적이고, 작업자 및 동물에 안전하여 구제역, AI 등의 악성 전염병 효율적인 적용이 가능한 염소취가 제거된 염소계 살균소독제를 제공할 수 있다.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 염소계 살균소독제; 및 과산화나트륨, 설파믹산 및 이들의 혼합물 중 선택된 어느 하나의 성분;을 포함하는 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물을 제공한다.
상기 과산화나트륨, 설파믹산 또는 이들의 혼합물은 염소계 살균소독제에 사용되어 물속의 유리염소를 치환하여 염소계 화합물을 안정화시킴으로써 염소계 화합물로부터 발생하는 염소 냄새를 저감화시킨다.
상기 과산화나트륨 또는 설파믹산은 염소계 살균소독제에 단독으로 사용될 수도 있으나, 보다 효과적인 염소취 제거와, 소독제 사용 이후의 잔존하는 염소취의 제거를 위해서는 과산화나트륨과 설파믹산을 병용하는 것이 가장 바람직하다. 이때, 상기 과산화나트륨과 설파믹산은 1~10:2~20의 중량비로 혼합하여 사용하는 것이 최적의 염소취 제거효과 발현에 있어 바람직하다.
상기 과산화나트륨, 설파믹산 또는 이들의 혼합물은 염소계 살균소독제에 사용된 염소계 화합물의 종류에 따라 그 함량을 적절히 조절하여 사용할 수 있으며, 예를 들어 조성물 총 100중량부에 대하여 10~50중량부로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 20~40중량부로 포함되는 것이다. 그 함량이 10중량부 미만일 경우에는 염소냄새가 발생할 수 있으며, 50중량부를 초과할 경우에는 소독력이 낮아질 수 있다.
상기 염소계 살균소독제는 통상 탈색, 표백, 살균, 소독 등의 목적으로 염소계 살균소독제에 사용되는 화합물이면 그 종류가 제한되지 않으며, 예를 들어 이염화이소시아눌산나트륨(sodium dichloroisocyanurate, NaDCC), 트리클로로이소시아눌산(trichloroisocyanuric acid), 차아염소산 칼슘(calcium hypochlorite), 염소수(chlorine water), 차아염소산나트륨(sodium hypochlorite), 차아염소산(sodium hypochlorite) 등을 사용할 수 있다. 살균소독 효과의 발현을 위해서 바람직하게는 이염화이소시아눌산나트륨, 차아염소산 등을 사용하는 것이며, 특히 이염화이소시아눌산나트륨을 사용하는 것이 가장 바람직하다.
상기 염소계 살균소독제는 조성물 총 100중량부에 대하여 50~80중량부로 포함될 수 있다.
상기와 같은 본 발명의 염소계 살균소독제 조성물은 기존 염소계 살균소독제가 사용되던 모든 대상에 적용하여 세균, 바이러스 등을 살균 및 소독할 수 있음은 물론이다. 특히, 본 발명의 염소계 살균소독제는 동물에 적용되어 살모넬라 타이피뮤리움(Salmonella typhimurium) 등과 같은 살모넬라속, 브루셀라 오비스(Brucella ovis) 등과 같은 브루셀라속, 클로스트리디움 퍼프리젠스(Clostridium perfringens) 등과 같은 클로스티리디움속 세균 등의 세균류 또는 이들의 변종; 조류인플루엔자바이러스(Avian influenza virus, AI), 뉴캐슬병바이러스(Newcastle disease virus, ND), 돼지 유행성 설사증 바이러스(Porcine epidemic diarrhea virus, PED), 돼지 호흡기 및 생식 증후군 바이러스(Porcine respiratory and reproductive syndrome virus, PRRS), 구제역 바이러스(Foot and mouth disease virus, FMD) 등의 바이러스류 또는 이들의 변종의 살균, 소독을 위해 사용될 수 있다.
또한 본 발명은 필요에 따라 통상의 염소계 살균소독제에 사용되는 산제제, 염기성 제제 등을 포함할 수 있다.
상기 산제제는 통상의 살균소독제에 사용되는 성분이면 그 종류가 제한되지 않으며, 예를 들어 아디핀산, 무수 시트릭산 등을 사용할 수 있다.
상기 산제제는 조성물 총 100중량부에 대하여 10~40중량부로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 20~30중량부로 포함되는 것이다.
상기 염기성 제제는 통상의 살균소독제에 사용되는 성분이면 그 종류가 제한되지 않으며, 예를 들어 중탄산나트륨, 무수탄산나트륨, 탄산수소나트륨, 수산화나트륨, 과탄산나트륨 등을 사용할 수 있다.
상기 염기성 제제는 조성물 총 100중량부에 대하여 5~25중량부로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 10~20중량부로 포함되는 것이다.
또한 본 발명은 과산화나트륨, 설파믹산 등의 작용에 영향을 주지 않으며, 염소취 제거에 효과가 있는 성분을 추가로 더 포함할 수 있다. 추가 가능한 성분으로는 비타민 C(ascobic acid), 과산화수소(hydrogen peroxide), 탄산수소나트륨(sodium bicarbonate), 탄산나트륨(sodium carbonate), 구연산(citric acid) 등이 있으며, 그 함량은 필요에 따라 적절히 조절하여 사용할 수 있다.
본 발명에 따르면 상기와 같은 염기성 화합물, 산제제 및 염기성 제제를 포함하는 염소계 살균소독제에 과산화나트륨, 설파믹산 또는 이들의 혼합물이 함께 사용되어 기존 염소계 살균소독제의 문제점이었던 염소 냄새를 효과적으로 제거할 수 있어 작업자나 살균소독제가 적용되는 동물에의 사용이 안전하고 용이할 수 있으며, 더욱이 살균소독제 사용 이후에도 염소 냄새가 잔존하지 않아 사용의 범위가 광범위하게 확장될 수 있다.
즉, 본 발명의 염소취가 제거된 살균소독제는 광범위한 살균소독의 유효성과 염소취 제거 효능을 가져 국내 뿐 아니라 구제역, AI 등 악성 전염병이 잘 발생되는 해외 각국으로의 수출이 가능하다.
이하에서는 실시예를 들어 본 발명에 관하여 더욱 상세하게 설명할 것이나. 이들 실시예는 단지 설명의 목적을 위한 것으로 본 발명의 보호 범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.
실시예 1. 염소계 살균소독제 제조-1
이염화이소시아눌산나트륨 650g, 설파믹산 250g 및 과산화나트륨 100g을 혼합하여 염소계 살균소독제를 제조하였다.
실시예 2. 염소계 살균소독제 제조-2
이염화이소시아눌산나트륨 600g, 설파믹산 270g, 중탄산나트륨 100g 및 무수탄산나트륨 30g을 혼합하여 염소계 살균소독제를 제조하였다.
비교예 1. 염소계 살균소독제
이염화이소시아눌산나트륨 500g, 아디핀산 240g, 중탄산나트륨 220g 및 무수탄산나트륨 40g으로 이루어진 (주)동방의 애니가드를 사용하였다.
실험예 1. 살균소독제의 염소취 측정
상기 실시예 1~2 및 비교예 1의 살균소독제를 물과 1:10~500의 배율로 희석한 후 Honeywell의 휴대용 Cl2 측정기인 MINIMAX-XP-Cl2를 이용하여 염소취를 측정하고, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
Figure pat00001
상기 표 1에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따라 과산화나트륨, 설파믹산 또는 이들의 혼합물이 첨가된 실시예 1 내지 2의 살균소독제는 염소계 화합물을 사용하고도 전 희석배율에서 염소취의 발생이 없었으나, 기존 염소계 살균소독제인 비교예 1의 경우 희석비율에 무관하게 염소냄새를 나타냄을 확인할 수 있었다.
이같은 결과로부터, 과산화나트륨, 설파믹산 또는 이들의 혼합물을 포함하는 본 발명의 염소계 살균소독제는 염소취의 발생이 없어 사용이 안전할 것임을 알 수 있었다.
실험예 2. 염소취 제거 기전 확인
상기 실시예 1 또는 2의 살균소독제의 염소취 제거 기전을 확인하고, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
구분 반응식
NaDCC C3Cl2N3NaO3+H2O -> C3H3N3O3+HOCl
실시예 1 H2NSO3H+Na2O2+C3Cl2N3NaO3+H2O
→ H2NSO3H+Na2O2+C3H3N3O3+HOCl
→ H2NO2+Na2SO3+H20+C3Cl2N3NaO3
실시예 2 H2NSO3H+C3Cl2N3NaO3+NaHCO3+Na2CO3+H2O
→ H2NSO3H+NaHCO3+Na2CO3+C3H3N3O3+HOCl
→ Na2CO3+C3Cl2N3NaO3+H2O+NaSO3
본 발명에서 염소계 화합물로 사용된 이염화이소시아눌산나트륨(NaDCC)은 물과 반응 시 비해리형 염소산으로서 염소취의 원인이 되는 HOCl을 형성한다. 그러나, 본 발명의 염소계 살균소독제의 경우에는 상기 표 2에 나타낸 바와 같이 과산화나트륨, 설파믹산 또는 이들의 혼합물을 포함하여 염소취의 원인 물질인 HOCl을 형성하지 않았으며, 이 결과 염소취 제거 효과를 발현함을 알 수 있었다.
실험예 3. 세균류 살균소독의 유효 희석배율 도출
3-1. Salmonella typhimurium 에 대한 살균소독력
세균의 배양에는 고압멸균된 Nutrient agar에 살모넬라 타이피뮤리움(Salmonella typhimurium)을 도말하여 37±2℃에서 20시간 동안 배양하였다. 배양된 살모넬라 타이피뮤리움을 20mL Nutrient broth가 담긴 시험관에 접종하여 37±2℃에서 20시간 동안 진탕배양하였다. 배양한 세균은 사용 직전까지 37℃로 유지시켰으며, 사용 세균의 농도는 mL당 1×108CFU 이상이었다.
상기 실시예 1~2 및 비교예의 살균소독제를 경수(증류수 1L에 CaCl2 0.305g과 MgCl2·6H2O 0.139g(w/v)이 함유되게 조제)와 유기물(경수에 yeast 5%(w/v)가 함유되게 조제)을 이용하여 다음과 같이 희석하였다. 실시예 1의 살균소독제는 경수를 이용하여 4,100, 4,500, 5,000, 5,600, 6,200의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 70, 75, 8, 95, 100의 배율로 희석하였다. 실시예 2의 살균소독제는 경수를 이용하여 4,100, 4,500, 5,000, 5,600, 6,200의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 60, 70, 75, 85, 95의 배율로 희석하였다. 또한 비교예의 살균소독제는 경수를 이용하여 12,000, 13,500, 15,000, 16,500, 18,500의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 60, 70, 75, 85, 95의 배율로 희석하였다.
이후, 37℃에서 배양한 세균 4mL를 경수 또는 5% 유기물 희석액 96mL에 각각 혼합하였다. 상기 혼합액 중 2.5mL를 취하여 실시예 1~2 및 비교예의 각 소독제 희석액(4℃) 2.5mL에 넣고 혼합한 후, 4℃에서 정확히 30분간 반응시켰다. 이때, 각 시험관 처리는 차례대로 1분의 간격으로 실시하였으며, 반응 중 10분마다 흔들어주었다. 또한 병원체 대조군은 소독제 희석액이 없는 경수를 사용하였다.
반응이 끝난 즉시 1mL을 꺼내어 미리 37℃에 넣어 놓은 9mL의 중화배지(Nutrient broth에 비동화된 말혈청 5%(v/v) 포함되게 조제)에 넣고 혼합하였다. 그 다음, 각 소독제 희석단계별로 5mL씩 5개를 준비하여 Nutrient broth 시험관에 0.1mL씩 접종한 후 37℃ 배양기에서 48시간 동안 배양하였다.
3-2. Brucella ovis 에 대한 살균소독력
세균의 배양에는 고압멸균된 5% Sheep blood agar에 브루셀라 오비스(Brucella ovis)를 도말하여 37±2℃에서 20시간 동안 배양하였다. 배양된 브루셀라 오비스를 20mL Brain heart infusion broth가 담긴 시험관에 접종하여 37±2℃에서 20시간 동안 진탕배양하였다. 배양한 세균은 사용 직전까지 37℃로 유지시켰으며, 사용 세균의 농도는 mL당 1×108CFU 이상이었다.
상기 실시예 1~2 및 비교예의 살균소독제를 경수(증류수 1L에 CaCl2 0.305g과 MgCl2·6H2O 0.139g(w/v)이 함유되게 조제)와 유기물(경수에 yeast 5%(w/v)가 함유되게 조제)을 이용하여 다음과 같이 희석하였다. 실시예 1의 살균소독제는 경수를 이용하여 2,500, 2,800, 3,000, 3,500, 4,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 80, 90, 10, 11, 12의 배율로 희석하였다. 실시예 2의 살균소독제는 경수를 이용하여 1,600, 1,800, 2,000, 2,200, 2,500의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 60, 70, 75, 85, 95의 배율로 희석하였다. 또한 비교예의 살균소독제는 경수를 이용하여 4,100, 4,500, 5,000, 5,600, 6,200의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 40, 45, 50, 55, 62의 배율로 희석하였다.
이후, 37℃에서 배양한 세균 4mL를 경수 또는 5% 유기물 희석액 96mL에 각각 혼합하였다. 상기 혼합액 중 2.5mL를 취하여 실시예 1~2 및 비교예의 소독제 희석액(4℃) 각각 2.5mL씩에 넣고 혼합한 후, 4℃에서 정확히 30분간 반응시켰다. 이때, 각 시험관 처리는 차례대로 1분의 간격으로 실시하였으며, 반응 중 10분마다 흔들어주었다. 또한 병원체 대조군은 소독제 희석액이 없는 경수를 사용하였다.
반응이 끝난 즉시 1mL을 꺼내어 미리 37℃에 넣어 놓은 9mL의 중화배지(Nutrient broth에 비동화된 말혈청 5%(v/v) 포함되게 조제)에 넣고 혼합하였다. 그 다음, 각 소독제 희석단계별로 5mL씩 5개를 준비하여 Brain heart infusion broth 시험관에 0.1mL씩 접종한 후 37℃ 배양기에서 120시간 동안 배양하였다.
3-3. Clostridium perfringens 에 대한 살균소독력
세균의 배양에는 고압멸균된 5% Sheep blood agar에 클로스트리디움 퍼프리젠스(Clostridium perfringens)를 도말하여 37±2℃인 혐기성균 배양장치에서 20시간 동안 배양하였다. 배양된 클로스트리디움 퍼프리젠스를 20mL NIH thioglycollate broth가 담긴 시험관에 접종하여 37±2℃에서 혐기성균 배양장치에서 20시간 동안 진탕배양하였다. 배양한 세균은 사용 직전까지 37℃로 유지시켰으며, 사용 세균의 농도는 mL당 1×108CFU 이상이었다.
상기 실시예 1~2 및 비교예의 살균소독제를 경수(증류수 1L에 CaCl2 0.305g과 MgCl2·6H2O 0.139g(w/v)이 함유되게 조제)와 유기물(경수에 yeast 5%(w/v)가 함유되게 조제)을 이용하여 다음과 같이 희석하였다. 실시예 1의 살균소독제는 경수를 이용하여 2,000, 2,300, 2,500, 2,700, 3,000의 배율로 희석하였고, 유기물은 25, 27, 30, 33, 37의 배율로 희석하였다. 실시예 2의 살균소독제는 경수를 이용하여 2,300, 2,500, 2,700, 3,000, 3,300의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 25, 27, 30, 33, 37의 배율로 희석하였다. 또한 비교예의 살균소독제는 경수를 이용하여 6,000, 7,000, 7,500, 8,500, 9,500의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 25, 27, 30, 33, 37의 배율로 희석하였다.
이후, 37℃에서 배양한 세균 4mL를 목적에 맞게 경수 또는 5% 유기물 희석액 96mL에 각각 혼합하였다. 상기 혼합액 중 2.5mL를 취하여 실시예 1~2 및 비교예의 소독제 희석액(4℃) 각각 2.5mL씩에 넣고 혼합한 후, 4℃에서 정확히 1시간 동안 반응시켰다. 이때, 각 시험관 처리는 차례대로 1분의 간격으로 실시하였으며, 반응 중 10분마다 흔들어주었다. 또한 병원체 대조군은 소독제 희석액이 없는 경수를 사용하였다.
반응이 끝난 즉시 1mL을 꺼내어 미리 37℃에 넣어 놓은 9mL 중화배지(NIH thioglycollate broth에 비동화된 말혈청 5%(v/v) 포함되게 조제)에 넣고 혼합하였다. 그 다음, 각 소독제 희석단계별로 5mL씩 5개를 준비하여 NIH thioglycollate broth 시험관에 0.1mL씩 접종한 후 37℃ 혐기성 배양기에서 48시간 동안 배양하였다.
3-4. 실험결과
상기 3-1 내지 3-3의 배양 후 각 세균의 증식여부를 육안으로 관찰하고, 5개의 동일 소독제 희석배율의 영양배지에서 4개 이상 세균이 증식되지 않은 소독제 희석배율을 최종 유효 희석배율로 판정하고, 그 결과를 하기 표 3에 나타내었다.
Figure pat00002
상기 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 염소계 살균소독제는 살모넬라 타이피뮤리움(Salmonella typhimurium ), 브루셀라 오비스(Brucella ovis) 및 클로스트리디움 퍼프리젠스(Clostridium perfringens)의 세균류에 대하여 우수한 살균소독력을 나타내었으며, 비교예 1과 대비하여 염소취가 전혀 없으면서도 유사한 수준의 희석배율에서 유효한 살균소독력을 나타냄을 확인할 수 있었다.
실험예 4. 바이러스류 살균소독의 유효 희석배율 도출
4-1. Avian influenza virus (AI) H9N2에 대한 살균소독력
냉동보관 된 조류인플루엔자바이러스(Avian influenza virus, AI)를 녹인 후 사용직전까지 단시간 동안 4℃에 보관하였다.
상기 실시예 1~2 및 비교예의 살균소독제를 경수(증류수 1 L에 CaCl2 0.305g과 MgCl2·6H2O 0.139g(w/v)이 함유되게 조제)와 유기물(경수에 소태아혈청 5%(v/v)가 함유되게 조제)을 이용하여 다음과 같이 희석하였다. 실시예 1의 살균소독제는 경수를 이용하여 3,000, 4,000, 5,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 1,800, 2,000, 2,200의 배율로 희석하였다. 실시예 2의 살균소독제는 경수를 이용하여 6,000, 7,000, 8,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 1,600, 1,800, 2,000의 배율로 희석하였다. 비교예의 살균소독제는 경수를 이용하여 6,000, 7,000, 8,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 900, 1,100, 1,400의 배율로 희석하였다.
이후, 4℃에서 보관한 바이러스액 1.0mL(1×10~1×107EID50/mL)를 바이러스 희석용 용액인 경수 또는 유기물 19mL에 넣고 각각 혼합하였다. 상기 바이러스액 중 2.5mL를 취하여 동량의 실시예 1~2 및 비교예의 소독제 희석액이 들어 있는 시험관에 각각 넣어 혼합한 후(총 5mL) 4℃에서 정확히 30분간 반응시켰다. 이때, 각 시험관 처리는 차례대로 1분의 간격으로 실시하였으며, 반응 중 10분마다 흔들어주었다. 또한 병원체 대조군은 소독제 희석액이 없는 경수를 사용하였고, 독성 대조군은 경수로 희석된 소독제 희석액을 사용하였다.
반응이 끝난 즉시 1mL을 꺼내어 미리 37℃에 넣어 놓은 5mL 중화배지(PBS에 비동화된 소태아혈청 10%(v/v) 포함되게 조제)에 넣고 혼합하였다. 그 다음, 중화반응을 한 용액을 PBS를 사용하여, 원액, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5의 농도로 희석하고, 희석배율 당 5개씩 준비하여 9~10일 발육란에 0.2mL로 요막강 내로 접종하였다.
접종 후 37℃에서 5일 동안 배양하며 매일 검란을 실시하고, 접종 24시간 이내에 죽은 발육란은 사고사로 간주하여 시험성적에서 제외하였다. 접종 24시간 후부터 5일 이내에 죽은 접종란은 모두 4℃에 보관하였다.
접종 5일 후까지 살아남은 모든 발육란과 4℃에 보관된 죽은 접종란으로부터 요막강액을 각각 채취하고, 1% 닭적혈구를 사용한 혈구응집반응을 실시하여 바이러스의 존재 유무 및 바이러스 역가를 최종 판정하였고. Karber method로 바이러스 함유량을 계산하였다.
병원체 대조군은 경수조건에서 소독제 없이 실험하고 중화반응 단계에서 병원체의 역가가 2×10EID50/mL 이상임을 확인하였다. 독성대조군에서는 살균소독제에 의한 종란독성이 일어나지 않음을 확인하였다.
4-2. Newcastle disease virus (ND) LsSota에 대한 살균소독력
냉동보관 된 뉴캐슬병바이러스(Newcastle disease virus, ND)를 녹인 후 사용직전까지 단시간 동안 4℃에 보관하였다.
상기 실시예 1~2 및 비교예의 살균소독제를 경수(증류수 1 L에 CaCl2 0.305g과 MgCl2·6H2O 0.139g(w/v)이 함유되게 조제)와 유기물(경수에 소태아혈청 5%(v/v)가 함유되게 조제)을 이용하여 다음과 같이 희석하였다. 실시예 1의 살균소독제는 경수를 이용하여 4,000, 6,000, 8,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 600, 1,000, 1,400의 배율로 희석하였다. 실시예 2의 살균소독제는 경수를 이용하여 3,000, 4,000, 6,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 600, 1,000, 1,400의 배율로 희석하였다. 또한 비교예의 살균소독제는 경수를 이용하여 6,000, 8,000, 12,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 500, 600, 1,000의 배율로 희석하였다.
이후, 4℃에서 보관한 바이러스액 1.0mL(1×10~1×107EID50/mL)를 바이러스 희석용 용액인 경수 또는 유기물 19mL에 넣고 각각 혼합하였다. 상기 바이러스액 중 2.5mL를 취하여 동량의 실시예 1~2 및 비교예의 소독제 희석액이 들어 있는 시험관에 각각 넣어 혼합한 후(총 5mL) 4℃에서 정확히 30분간 반응시켰다. 이때, 각 시험관 처리는 차례대로 1분의 간격으로 실시하였으며, 반응 중 10분마다 흔들어주었다. 또한 병원체 대조군은 소독제 희석액이 없는 경수를 사용하였고, 독성 대조군은 경수로 희석된 소독제 희석액을 사용하였다.
반응이 끝난 즉시 1mL을 꺼내어 미리 37℃에 넣어 놓은 5mL 중화배지(PBS에 비동화된 소태아혈청 10%(v/v) 포함되게 조제)에 넣고 혼합하였다. 그 다음, 중화반응을 한 용액을 PBS를 사용하여, 원액, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5의 농도로 희석하고, 희석배율 당 5개씩 준비하여 9~10일 발육란에 0.2mL로 요막강 내로 접종하였다.
접종 후 37℃에서 5일 동안 배양하며 매일 검란을 실시하고, 접종 24시간 이내에 죽은 발육란은 사고사로 간주하여 시험성적에서 제외하였다. 접종 24시간 후부터 5일 이내에 죽은 접종란은 모두 4℃에 보관하였다.
접종 5일 후까지 살아남은 모든 발육란과 4℃에 보관된 죽은 접종란으로부터 요막강액을 각각 채취하고, 1% 닭적혈구를 사용한 혈구응집반응을 실시하여 바이러스의 존재 유무 및 바이러스 역가를 최종 판정하였고. Karber method로 바이러스 함유량을 계산하였다.
병원체 대조군은 경수조건에서 소독제 없이 실험하고 중화반응 단계에서 병원체의 역가가 2×10EID50/mL 이상임을 확인하였다. 독성대조군에서는 살균소독제에 의한 종란독성이 일어나지 않음을 확인하였다.
4-3. Porcine epidemic diarrhea virus (PED)에 대한 살균소독력
시험을 수행하기 전 Vero cell(antibiotic·antimycotic을 함유한 α-MEM를 배양 배지로 사용)을 2×105cell/mL이 되도록 96 well plate에 200μL씩 분주하여 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 배양하였다.
상기 실시예 1~2 및 비교예의 살균소독제를 경수(증류수 1 L에 CaCl2 0.305g과 MgCl2·6H2O 0.139g(w/v)이 함유되게 조제)와 유기물(경수에 소태아혈청 5%(v/v)가 함유되게 조제)을 이용하여 다음과 같이 희석하였다. 실시예 1의 살균소독제는 경수를 이용하여 30,000, 40,000, 50,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 400, 800, 1,200의 배율로 희석하였다. 실시예 2의 살균소독제는 경수를 이용하여 30,000, 40,000, 50,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 800, 1,200, 1,600의 배율로 희석하였다. 또한 비교예의 살균소독제는 경수를 이용하여 30,000, 40,000, 50,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 100, 200, 400의 배율로 희석하였다.
이후, 4℃에서 보관한 바이러스액 1.0mL(1×10~1×107EID50/mL)를 바이러스 희석용 용액인 경수 또는 유기물 19mL에 넣고 각각 혼합하였다. 상기 바이러스액 중 2.5mL를 취하여 동량의 실시예 1~2 및 비교예의 소독제 희석액이 들어 있는 시험관에 각각 넣어 혼합한 후(총 5mL) 4℃에서 정확히 30분간 반응시켰다. 이때, 각 시험관 처리는 차례대로 1분의 간격으로 실시하였으며, 반응 중 10분마다 흔들어주었다. 또한 병원체 대조군은 소독제 희석액이 없는 경수를 사용하였고, 독성 대조군은 경수로 희석된 소독제 희석액을 사용하였다.
반응이 끝난 즉시 1mL을 꺼내어 미리 37℃에 넣어 놓은 5mL 중화배지(antibiotic·antimycotic을 함유한 α-MEM에 비동화된 소태아혈청 10%(v/v) 포함되게 조제)에 넣고 혼합하였다. 그 다음, 중화반응을 한 용액을 바이러스 배지(antibiotic·antimycotic을 함유한 α-MEM에 0.3%(v/v) tryptose phosphate boroth, 0.02%(v/v) yeast extract 및 2㎍/mL trypsin이 함유되게 조제)를 사용하여, 원액, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5의 농도로 희석하고, 희석배율 당 8well의 monolayer(80~90%)가 형성된 vero cell에 각각 100μL씩 접종하였다.
접종 후 37℃에서 5일 동안 배양하며 매일 CPE 형성 여부를 관찰하였고, Karber method로 바이러스 함유량을 계산하였다.
병원체 대조군은 경수조건에서 소독제 없이 실험하고 중화반응 단계에서 병원체의 역가가 2×105TCID50/mL 이상임을 확인하였다. 독성대조군에서는 살균소독제에 의한 세포독성이 일어나지 않음을 확인하였다.
4-4. Porcine respiratory and reproductive syndrome virus (PRRS)에 대한 살균소독력
시험을 수행하기 전 Porcine Alveolar Macrophage cell(antibiotic·antimycotic을 함유한 RPMI-1640을 배양 배지로 사용)을 2×105cell/mL이 되로록 96 well plate에 200μL씩 분주하여 37℃, 5% CO2 조건의 배양기에서 배양하였다.
상기 실시예 1~2 및 비교예의 살균소독제를 경수(증류수 1 L에 CaCl2 0.305g과 MgCl2·6H2O 0.139g(w/v)이 함유되게 조제)와 유기물(경수에 소태아혈청 5%(v/v)가 함유되게 조제)을 이용하여 다음과 같이 희석하였다. 실시예 1의 살균소독제는 경수를 이용하여 10,000, 16,000, 20,000의 배율로 희석하였고, 유기물은 2,000, 2,400, 3,000의 배율로 희석하였다. 실시예 2의 살균소독제는 경수를 이용하여 10,000, 16,000, 20,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 2,000, 2,400, 3,000의 배율로 희석하였다. 또한 비교예의 살균소독제는 경수를 이용하여 10,000, 16,000, 20,000의 배율로 희석하였고, 유기물을 이용하여 1,600, 2,000, 2,400의 배율로 희석하였다.
이후, 4℃에서 보관한 바이러스액 1.0mL(1×10~1×107EID50/mL)를 바이러스 희석용 용액인 경수 또는 유기물 19mL에 넣고 각각 혼합하였다. 상기 바이러스액 중 2.5mL를 취하여 동량의 실시예 1~2 및 비교예의 소독제 희석액이 들어 있는 시험관에 각각 넣어 혼합한 후(총 5mL) 4℃에서 정확히 30분간 반응시켰다. 이때, 각 시험관 처리는 차례대로 1분의 간격으로 실시하였으며, 반응 중 10분마다 흔들어주었다. 또한 병원체 대조군은 소독제 희석액이 없는 경수를 사용하였고, 독성 대조군은 경수로 희석된 소독제 희석액을 사용하였다.
반응이 끝난 즉시 1mL을 꺼내어 미리 37℃에 넣어 놓은 5mL 중화배지(antibiotic·antimycotic을 함유한 RPMI-1640에 비동화된 소태아혈청 10%(v/v) 포함되게 조제)에 넣고 혼합하였다. 그 다음, 중화반응을 한 용액을 바이러스 배지(antibiotic·antimycotic을 함유한 RPMI-1640)를 사용하여, 원액, 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5의 농도로 희석하고, 희석배율 당 8well의 monolayer(80~90%)가 형성된 MARC-145 cell에 각각 100μL씩 접종하였다.
접종 후 37℃에서 5일 동안 배양하며 매일 CPE 형성 여부를 관찰하였고, Karber method로 바이러스 함유량을 계산하였다.
병원체 대조군은 경수조건에서 소독제 없이 실험하고 중화반응 단계에서 병원체의 역가가 2×105TCID50/mL 이상임을 확인하였다. 독성대조군에서는 살균소독제에 의한 세포독성이 일어나지 않음을 확인하였다.
4-5. Foot and mouth disease virus( FMD)에 대한 살균 소독력
시험을 수행하기 전 Lamb kidney cell(L-glutamine, sodium bicarbonate, non-essential amino acid, sodium pyruvate, FBS 및 항생제가 첨가된 EMEM을 배양 배지로 사용)을 3×105cell/mL이 되도록 6 well plate에 분주하여 37℃, 5% CO2 배양기에서 배양하였다. 계대배양 중의 바이러스 역가가 107.0TCID50/mL 이상임이 확인된 FMD 바이러스를 사용직전까지 단시간 동안 4℃에 보관하였다.
상기 실시예 1~2 및 비교예의 살균소독제를 유기물 함유 경수(증류수 1 L에 CaCl2 0.304g과 MgCl2·6H2O 0.139g(w/v), FBS가 1%가 함유되게 조제)를 이용하여 다음과 같이 희석하였다. 실시예 1, 실시예 2 및 비교예의 살균소독제는 각각 100, 200, 300, 600, 900의 배율로 희석하였다.
이후, 4℃의 바이러스액 1.8mL(1×105~1×107TCID50/mL)를 최종 희석액보다 10배 농축된 소독제 희석액 0.2mL에 넣고 혼합한 후, 소독제 희석액과 바이러스액 혼합물을 4℃에서 30분간 반응시켰다. 반응이 끝나기 직전 바이러스와 소독제 희석액 혼합물(test mixture)을 잘 혼합하였다.
반응이 끝난 즉시 소독제를 중화하기 위하여 test mixture 0.05mL를 4℃ water bath에 보관된 중화배지(2% 항생제 및 5% FBS가 함유된 EMEM) 5mL에 첨가하였다. 상기 혼합액(final mixture)을 4℃의 중화배지를 이용하여 10배 계단희석(10-2~10-6)하였다. 음성대조군(증류수 접종), 양성대조군(NaOH 1%)을 포함한 각 희석배수 당 혼합액(final mixture) 0.2mL를 세포단층이 형성된 96 well plate에 접종하였다.
37℃, 5% CO2 습윤 배양기에서 1시간 동안 배양시키면서, 8~10분마다 잘 흔들어 주었다. 접종 1시간 후, 1% 메틸셀룰로오즈(methylcellulose)를 함유한 배지 2.5mL를 첨가한 후 37℃, 5% CO2 습윤 배양기에서 2일간 추가 배양하였다.
배양 후 0.01~0.05% 시트르산(citric acid)으로 세포를 세척하고 아미도블랙(amidoblack)으로 염색한 후, 플라크(plaque) 수를 계수하여 PFU 값을 산출하였다.
4-6. 실험결과
상기 4-1 내지 4-5에서 실험한 살균소독력 시험결과는 병원체 대조군과 비교하여 유효희석배수를 확인하였다. 즉, 병원체 대조군과 비교하여 병원체가 104(최소 4 log10) 이상의 감소가 확인된 희석배수를 유효희석배수로 결정하였다. 3회 반복 시험하여 20%의 오차범위 내의 결과의 중위수(median)를 공시제품에 대한 최종 유효희석배수로 결정하였다. 그 결과는 하기 표 4에 나타내었다.
Figure pat00003
상기 표 4에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 염소계 살균소독제는 조류인플루엔자바이러스(Avian influenza virus, AI), 뉴캐슬병바이러스(Newcastle disease virus, ND), 돼지 유행성 설사증 바이러스(Porcine epidemic diarrhea virus, PED), 돼지 호흡기 및 생식 증후군 바이러스(Porcine respiratory and reproductive syndrome virus, PRRS), 구제역 바이러스(Foot and mouth disease virus, FMD) 등의 바이러스에 대하여 우수한 살균소독력을 나타내었으며, 비교예 1과 대비하여 염소취가 전혀 없으면서도 유사한 수준의 희석배율에서 유효한 살균소독력을 나타냄을 확인할 수 있었다.
비록 본 발명이 상기에 언급된 바람직한 실시예로서 설명되었으나, 발명의 요지와 범위로부터 벗어남이 없이 다양한 수정이나 변형을 하는 것이 가능하다. 또한 첨부된 청구 범위는 본 발명의 요지에 속하는 이러한 수정이나 변형을 포함한다.

Claims (5)

  1. 염소계 살균소독제; 및
    과산화나트륨, 설파믹산 및 이들의 혼합물 중 선택된 어느 하나의 성분;을 포함하는 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 염소계 살균소독제 조성물은 살모넬라 타이피뮤리움(Salmonella typhimurium), 브루셀라 오비스(Brucella ovis), 클로스트리디움 퍼프리젠스(Clostridium perfringens), 조류인플루엔자바이러스(Avian influenza virus, AI), 뉴캐슬병바이러스(Newcastle disease virus, ND), 돼지 유행성 설사증 바이러스(Porcine epidemic diarrhea virus, PED), 돼지 호흡기 및 생식 증후군 바이러스(Porcine respiratory and reproductive syndrome virus, PRRS) 및 구제역 바이러스(Foot and mouth disease virus, FMD) 중 선택된 어느 하나 이상의 살균 또는 소독 용도인 것을 특징으로 하는 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 염소계 살균소독제는 이염화이소시아눌산나트륨(sodium dichloroisocyanurate, NaDCC), 트리클로로이소시아눌산(trichloroisocyanuric acid), 차아염소산 칼슘(calcium hypochlorite), 염소수(chlorine water), 차아염소산나트륨(sodium hypochlorite) 및 차아염소산(sodium hypochlorite) 중 선택된 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    조성물 총 100중량부에 대하여 염소계 살균소독제 50~80중량부; 및 과산화나트륨, 설파믹산 및 이들의 혼합물 중 선택된 어느 하나의 성분 10~50중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 비타민 C(ascobic acid), 과산화수소(hydrogen peroxide), 탄산수소나트륨(sodium bicarbonate), 탄산나트륨(sodium carbonate) 및 구연산(citric acid) 중 선택된 어느 하나 이상의 성분을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 염소취가 제거된 염소계 살균소독제 조성물.
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