KR20170082172A - 핑크 과색을 나타내는 토마토의 유전자형 판별용 분자마커 및 이를 이용한 핑크 과색을 나타내는 토마토 선별방법 - Google Patents

핑크 과색을 나타내는 토마토의 유전자형 판별용 분자마커 및 이를 이용한 핑크 과색을 나타내는 토마토 선별방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20170082172A
KR20170082172A KR1020160000908A KR20160000908A KR20170082172A KR 20170082172 A KR20170082172 A KR 20170082172A KR 1020160000908 A KR1020160000908 A KR 1020160000908A KR 20160000908 A KR20160000908 A KR 20160000908A KR 20170082172 A KR20170082172 A KR 20170082172A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
slmyb12
seq
tomato
gene
pink
Prior art date
Application number
KR1020160000908A
Other languages
English (en)
Other versions
KR101832457B1 (ko
Inventor
노일섭
황인덕
정희정
박종인
양기웅
정남희
김회택
Original Assignee
순천대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 순천대학교 산학협력단 filed Critical 순천대학교 산학협력단
Priority to KR1020160000908A priority Critical patent/KR101832457B1/ko
Publication of KR20170082172A publication Critical patent/KR20170082172A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR101832457B1 publication Critical patent/KR101832457B1/ko

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/6895—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for plants, fungi or algae
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/13—Plant traits
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/156—Polymorphic or mutational markers
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/158—Expression markers

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 토마토의 SlMYB12 유전자형을 판별할 수 있는 분자마커, 및 상기 분자마커를 사용하여 SlMYB12 유전자의 변이를 확인함으로써 핑크 과색을 나타내는 토마토를 선별하는 방법에 관한 것으로, 상기 분자마커 및 선별방법은 토마토의 과실이 완전히 성숙하게 전에 간단하고 정확하게 핑크 과색을 나타내는 토마토를 선별 및 특정할 수 있으므로, 실제 핑크 과색을 나타내는 토마토를 재배함에 있어서 시간, 비용, 및 노동력을 절감시킬 수 있을 것으로 기대된다.

Description

핑크 과색을 나타내는 토마토의 유전자형 판별용 분자마커 및 이를 이용한 핑크 과색을 나타내는 토마토 선별방법{Molecular marker for determining genotype of pink tomato and sorting method for pink tomato using same}
본 발명은 핑크 과색을 나타내는 토마토의 유전자형 판별용 분자마커 및 이를 이용한 핑크 과색을 나타내는 토마토 선별방법에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 토마토의 SlMYB12 유전자형을 판별할 수 있는 분자마커, 및 상기 분자마커를 사용하여 SlMYB12 유전자의 변이를 확인함으로써 핑크 과색을 나타내는 토마토를 선별하는 방법에 관한 것이다.
최근 토마토(Solanum lycopersicum)와 같은 과채류의 소비에서 과색은 소비자에게서 중요한 요인이다. 이러한 과색은 카로티노이드(carotenoid)와 플라보노이드(flavonoid) 등과 같은 식물 색소에 의해 결정된다.
구체적으로, 카로티노이드(carotenoid)는 C40 이소프레노이드 화합물(isoprenoid compounds)을 가지는 유기분자로서, 꽃과 과실에 축적되어 주황색, 노란색, 및 빨강색을 나타낸다. 상기 카로티노이드는 광합성이 이루어지는 동안 광으로부터 보호하고, 수분(pollination) 유지와 종자를 퍼뜨리는데 중요한 역할을 한다(Ronene, G. et al., 2000, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 97:11102-11107.; Grotewold E, 2006, Auun Rev Plant Biol., 57:761-780.).
플라보노이드(flabonoid)는 수분(pollination), 병원균 보호, 및 종자 번식(dispense) 등을 포함한 다양한 기능을 갖는 식물 색소의 또 다른 큰 그룹 중 하나이다. 상기 플라보노이드는 빨강, 보라, 파랑 색소(안토시아닌)와 일부 노란 색소(칼콘 및 오론)에 분산되어 있으며, 주로 과실의 표피에 축적된다(Harborne JB, 1986, Prog. Clin. Biol. Res., 213:15-24.; Harborne JB and Wiliiams CA, 2000, Phytochemistry, 55:481-504.; Tanaka Y. et al., 2008, Plant J., 54:733-749.). 플라보노이드 화합물 중 나린제닌 칼콘(naringenin chalcone)은 성숙단계에서 과실의 표피에 축적되어 노란 색소를 부여하는 색소로서, 가장 풍부한 플라보노이드 기능을 나타낸다. 나린제닌 칼콘(naringenin chalcone)이 결핍된 토마토 등의 과채류는 표피의 외관이 투명하고, 핑크 과색을 나타낸다. 나린제닌 칼콘(naringenin chalcone)의 결핍은 p-쿠마로일-CoA(p-coumaroyl-CoA)와 말로닐-CoA(malonyl-CoA)로부터 칼콘 중합효소(chalcone synthase, CHS)가 생성된 다음, 칼콘 이성화 효소(calcone isomerase, CHI)에 의해 나린제닌(Naringenin, Nar)으로 변환되어 이루어진다(Muri SR, et al., 2001, Nature Biotechnology, 19:470-474.). 또한, 많은 플라보노이드 유전자의 발현은 핑크 과색의 과채류를 생성하는데 영향을 미치지 않으며, 생합성 효소보다는 플라보노이드 합성 경로에서 핑크 표현형을 암호화하는 단백질의 조절에 의해 핑크 과채류가 생성된다고 보고되었다(Bovy A, et al, 2002, Plant Cell, 14:2509-2526.; Willits MG, et al., 2005, J. Agric. Food Chem., 53:1231-1236.; Verhoeyen ME, et al., 2002, J. Exp. Bot., 53:2099-2106.; Schijlen E. et al., 2007, Plant Physiol., 152:71-84.).
한편, SlMYB12는 토마토에서 플라보노이드 생합성을 조절하는 전사인자로서, 핑크 토마토 계통에서 발현이 억제된다고 알려져 있다(Ballester, A.R. et al., 2010, Plant Physiol., 152:71-84.; Adato, A. et al., 2009, PLoS Gent., 5:e1000777.). 또한, 유전자 지도 작성, 분리 분석, 및 VIGS(virus-induced gene silencing) 결과 SlMYB12 유전자는 염색체 1번(chromosome 1)의 y 유전자좌(locus)에 존재하며, 핑크 과실을 형성하는데 중요한 역할을 한다(Ballester, A.R., et al., 2010, Plant Physiol., 152:71-84.). 보다 구체적으로, 핑크색 토마토는 염색체 1번에서 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기결실과 2번째 엑손 영역에서 두 개의 점 돌연변이(nonsense mutation; 염기 치환 C>T 및 1bp 삽입 TG>TAG)가 일어나 SIMYB12의 전사 억제와 정상보다 이른 종결코돈(stop codon)이 도입됨으로써 표피에 나린제닌 칼콘(naringenin chalcone)의 축적을 감소시켜 생성된다(Lin T, et al., 2014, Nat. Genet., 46(11):1220-1226.). 그러나 실제 핑크 과색을 가지는 모든 토마토가 상기와 같은 SIMYB12 유전자에서 상류 영역의 603bp 염기삭제 및 2번째 엑손 영역에서 두 개의 점 돌연변이를 나타내는 것이 아니므로 핑크 과색을 나타내는 토마토를 명확하게 선별하기는 어려운 문제가 있다.
이에 본 발명자들은 핑크 과색을 가지는 모든 토마토를 선별할 수 있는 새로운 분자마커를 개발하기 위해 연구하던 중, 핑크 과색을 가지는 토마토의 SlMYB12 유전자에서 나타나는 신규한 변이영역을 발견하고, 상기 신규한 변이영역을 검출할 수 있는 분자마커를 개발하였으며, 상기 분자마커를 이용하여 토마토의 SlMYB12 유전자형을 판별함으로써 핑크 과색을 나타내는 모든 토마토를 간단하고 정확하게 선별할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 하나의 목적은 토마토의 SlMBY12 유전자형을 판별하기 위한 분자마커를 제공하는데 있다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 상기 분자마커를 이용하여 핑크 과색을 가지는 토마토를 선별하는 방법을 제공하는 것이다.
하나의 양태로서, 본 발명은 토마토의 SlMBY12 유전자형을 판별하기 위한 분자마커를 제공한다.
구체적으로, 본 발명은 (1)서열번호 5 및 6으로 이루어진 프라이머 세트 및 서열번호 5 및 7로 이루어진 프라이머 세트로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 프라이머 세트와, (2) 서열번호 8 및 9로 이루어진 프라이머 세트를 포함하는 토마토의 SlMBY12 유전자형을 판별하기 위한 분자마커를 제공하는 것이다.
본 발명에 있어서, 상기 분자마커는 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기결실(Lin T, et al., 2014, Nat. Genet., 46(11):1220-1226.) 및/또는 SlMBY12 유전자 염기서열 중 2번째 인트론 영역에서 첫번째 염기인 G염기가 T염기로 치환되는 여부를 검출하기 위해 고안된 것을 특징으로 한다. 여기서, 상기 SlMBY12 유전자의 염기서열은 Sol genomics network(http://solgenomics.net)에서 확인할 수 있다.
하나의 구체적 예로서, 상기 서열번호 5 및 6으로 이루어진 프라이머 세트는 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열이 결실된 염기서열을 포함하는 8개 이상의 연속된 뉴클레오티드로 구성된 폴리뉴클레오티드, 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 증폭할 수 있다.
다른 하나의 구체적 예로, 상기 서열번호 5 및 7로 이루어진 프라이머 세트는 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열이 결실된 염기서열을 포함하는 8개 이상의 연속된 뉴클레오티드로 구성된 폴리뉴클레오티드, 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 증폭할 수 있다.
또 다른 하나의 구체적 예로, 상기 서열번호 8 및 9로 이루어진 프라이머 세트는 SlMBY12 유전자의 2번째 인트론에서 첫번째 염기를 포함하는 8개 이상의 연속된 뉴클레오티드로 구성된 폴리뉴클레오티드, 또는 이의 상보적인 폴리뉴클레오티드를 증폭할 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열의 결실은 SlMBY12의 전사를 억제하고, 2번째 인트론 영역의 시작에서 G염기가 T염기로 치환됨으로 인해 CDS에서 GTAACAG의 염기의 결실이 발생해 90번째 아미노산 위치에서 종결코돈(TAG)이 발생함으로써 토마토의 과색이 핑크색의 표현형을 나타내는 것을 특징으로 한다.
따라서, 본 발명의 분자마커는 핑크 과색을 나타내는 토마토의 SlMBY12 유전자형을 판별하고, 핑크 과색을 나타내는 토마토를 선별하기 위한 키트로 이용될 수 있다.
본 발명에 있어서, 상기 분자마커를 핑크 과색을 나타내는 토마토를 선별하기 위한 키트로 사용하는 경우, 상기 분자마커 이외에 증폭반응을 수행하기 위한 시약, 예컨대, 완충용액, DNA 중합효소(예를 들어, Thermus aquatiucs(Taq), Thermus thermophilus(Tth), Thermus filiformis, Thermis flavus, Thermococcus literalis 또는 Phyrococcus furiosis(Pfu)로부터 얻은 열 안정성 DNA 중합효소), DNA 중합효소 조인자(Mg2+), dNTPs(dATP, dCTP, dGTP 및 dTTP) 및 물(dH2O)을 포함할 수 있다. 상기 완충용액은 이에 제한되지는 않으나 적당량의 트리톤 X-100(Triton X-100), 디메틸설폭사이드(dimethylsufoxide, DMSO), Tween20, nonidet P40, PEG 6000, 포름아마이드 및 소혈청 알부민(BSA) 등이 추가로 포함할 수 있다.
본 발명의 명세서에서, 용어 "프라이머"는 카피하려는 유전자에 상보적인 단일가닥의 올리고뉴클레오티드로서, 적절한 완충용액 및 온도에서 중합반응을 위한 시약(DNA 중합효소 또는 역전사 효소) 및 상이한 4가지 dNTP(deoxynucleoside triphosphate)의 존재하에서 주형-지시적 DNA 합성을 개시할 수 있는 개시점으로서 작용하는 것을 의미한다. 프라이머의 적합한 길이는 사용하고자 하는 프라이머의 특성에 의해 결정하지만, 통상적으로 18개 이상, 바람직하게는 20 내지 200개, 보다 바람직하게는 20 내지 100개, 보다 더 바람직하게는 20 내지 30개의 연속된 뉴클레오티드로 구성되며, 주형과 충분히 안정된 염기쌍을 형성하기 위하여 일반적으로 보다 낮은 온도를 요구한다.
또한, 상기 프라이머는 DNA 합성의 개시점으로 작용하는 프라이머의 기본 성질을 변화시키지 않는 추가의 특징을 혼입할 수 있다. 본 발명의 프라이머는 포스포르아미다이트 고체 지지체 방법, 또는 기타 널리 공지된 방법을 사용하여 화학적으로 합성할 수 있다. 이러한 핵산 서열은 또한 당해 분야에 공지된 많은 수단을 이용하여 변형시킬 수 있다. 이러한 변형의 비제한적인 예로는 메틸화, "캡화", 천연 뉴클레오타이드 하나 이상의 동족체로의 치환, 및 뉴클레오타이드 간의 변형, 예를 들면, 하전되지 않은 연결체(예: 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포로아미데이트, 카바메이트 등) 또는 하전된 연결체(예: 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)로의 변형이 있다. 핵산은 하나 이상의 부가적인 공유 결합된 잔기, 예를 들면, 단백질(예: 뉴클레아제, 독소, 항체, 시그날 펩타이드, 폴리-L-리신 등), 삽입제(예: 아크리딘, 프소랄렌 등), 킬레이트화제(예: 금속, 방사성 금속, 철, 산화성 금속 등), 및 알킬화제를 함유할 수 있다.
또한, 본 발명의 프라이머는 필요한 경우, 분광학적, 광화학적, 생화학적, 면역화학적 또는 화학적 수단에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 검출 가능한 표지를 포함할 수 있다. 표지의 예로는, 효소 (예컨대, 호스래디쉬 옥시다제, 알칼린 포스파타아제), 방사성 동위원소(예컨대, 32P), 형광성 분자, 화학그룹 (예컨대, 바이오틴) 등이 있다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 분자마커를 사용하여 토마토 시료로부터 SlMYB12 유전자의 염기서열 변이를 확인함으로써 핑크 과색을 나타내는 토마토를 선별하는 방법에 관한 것이다.
구체적으로, 본 발명의 핑크 과색을 나타내는 토마토의 선별 방법은 1) SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열이 결실되고, SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기가 'G'인 경우, 2) SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열이 존재하고, SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기인 'G'가 'T'로 변이된 경우, 및/또는 3) SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열이 결실되거나, SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기인 'G'가 'T'로 변이된 경우가 이형접합체 형태(heterozygous type)로 동시에 나타나는 경우 핑크 과색을 나타내는 토마토임을 판정하여 이루어진다.
본 발명에 있어서, 상기 SlMYB12 유전자의 염기서열 변이 여부의 확인은 중합효소연쇄반응(polymerase chain reaction, PCR), 실시간 중합효소연쇄반응(real-time polymerase chain reaction, real-time PCR; quantitative real time polymerase chain reaction, qPCR), 웨스턴 블롯(western blot), DNA 마이크로어레이(microarray) 등과 같이 당업계에 공지된 다양한 DNA 분석을 이용하여 확인할 수 있으며, 반드시 이로 한정되는 것은 아니다.
하나의 구체적 양태로서, 본 발명의 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열의 결실은 토마토의 표피로부터 분리한 SlMYB12 유전자를 주형으로 하고, SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열을 증폭하기 위해 제작된 프라이머 세트(서열번호 5 및 6으로 이루어진 프라이머 세트, 및 서열번호 5 및 7로 이루어진 프라이머 세트)를 첨가하여 중합효소연쇄반응(PCR)을 수행한 후 아가로스 겔에 전기영동을 실시하여 확인할 수 있다. 하나의 예로, 상기 방법으로 실험을 수행한 후 전기영동 결과에서 단일 밴드(347bp)가 확인되는 경우 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열이 결실되었다고 판정하고, 2개 밴드(950bp 및 614bp)가 확인되는 경우 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열이 결실되지 않았다고 판정하며, 3개의 밴드(950bp, 614bp 및 347bp)가 확인되는 경우 이형접합체형(heterozygous type)으로 판정한다.
본 발명에 있어서, 상기 SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기의 변이는 염기서열 분석법(direct sequencing), DNA 마이크로어레이(microarray), TGGE(temperature gradient gel electroresis), SSCP(single strand conformation polymorphism), DHPLC(denaturing high performance liqueid chromatography), HRM(high-resolution melting) 분석 등과 같이 당업계에 공지된 다양한 DNA 분석을 이용하여 탐색할 수 있으며, 바람직하게는 염기서열 분석법(direct sequencing) 및 HRM(high-resolution melting) 분석법, 보다 바람직하게는 HRM(high-resolution melting)을 사용하여 검정할 수 있다.
하나의 구체적 양태로서, SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기의 변이는 토마토의 표피로부터 분리한 SlMYB12 유전자를 주형으로 하고, SlMYB12 유전자의 염기서열 중 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기를 증폭하기 위해 제작된 프라이머 세트(서열번호 8 및 9)와 비표지된 프로브(서열번호 10)를 사용하여 실시간(real-time) 중합효소반응(PCR)을 실시한 다음 멜팅 커브 분석(melting curve analysis)을 실시하여 확인할 수 있다. 하나의 예로, 상기한 방법으로 실험을 수행한 결과, 60 내지 65℃, 바람직하게는 63℃에서 멜팅 커브(melting curve)가 확인되는 경우 SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기인 'G'가 'T'로 변이되었다고 판정하고, 55 내지 60℃, 바람직하게는 57.25℃에서 멜팅 커브(melting curve)가 확인되는 경우 SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기가 변이되지 않았다고 판정할 수 있으며, 두 개의 멜팅 커브가 동시에 확인되는 경우 이형접합체 형태(heterozygous type)로 판정한다.
따라서, 본 발명에 따른 선별하는 방법은 토마토의 과실이 완전히 성숙하게 전에 간단하고 정확하게 핑크 과색을 나타내는 품종을 선별 및 특정할 수 있으므로, 실제 핑크 과색을 나타내는 토마토를 재배함에 있어서 시간 및 노동력을 절감시킬 수 있는 효과가 있다. 또한, 종래 제한효소 처리나 염기서열 분석 등의 과정을 추가적으로 수행할 필요가 없기 때문에 시간과 비용을 크게 절약할 수 있는 이점이 있다.
본 발명에 따른 분자마커 및 선별방법은 토마토의 과실이 완전히 성숙하기 전에 간단하고 정확하게 핑크 과색을 나타내는 토마토를 선별 및 특정할 수 있으므로, 실제 핑크 과색을 나타내는 토마토를 재배함에 있어서 시간, 비용, 및 노동력을 절감시킬 수 있을 것이다.
도 1(A)는 핑크 과색을 나타내는 토마토의 표피와 빨간 과색을 나타내는 토마토의 표피를 나타낸 사진이다.
도 1(B)는 핑크 과색을 나타내는 토마토와 빨간 과색을 나타내는 토마토의 SlMYB12 유전자에서 603bp 결실과 2번째 인트론의 점 돌연변이 여부를 나타낸 모식도 이다.
도 2는 핑크 과색을 나타내는 토마토의 표피로부터 분리한 SlMYB12 유전자를 주형으로 하고, 본 발명에 따라 제조된 프라이머 세트(서열번호 5 및 6; 및 서열번호 5 및 7)을 사용하여 중합효소연쇄반응(PCR)을 통해 증폭시킨 산물의 크기를 1.5% 아가로스 겔에서 확인한 그림이다.
도 3은 핑크 과색을 나타내는 토마토의 표피로부터 분리한 SlMYB12 유전자를 주형으로 하고, 본 발명에 따라 제조된 프라이머 세트(서열번호 8 및 9)와 프로브(서열번호 10)를 사용하여 HRM 분석을 통해 SlMYB12 유전자의 2번째 인트론에서 변이된 염기의 유전자형을 확인한 그래프이다.
이하, 실시예 등을 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예 등은 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예 등에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 토마토 재료 준비
토마토 생명공학 연구소(한국)에서 20점의 핑크색 계통의 토마토를 제공받아 준비하였다. 상기 20점의 핑크 계통명은 하기 표 1에 나타내었다.
No. 계통명 No. 계통명
1 JSSW17-1 11 JSSW17-11
2 JSSW17-2 12 JSSW17-12
3 JSSW17-3 13 JSSW17-13
4 JSSW17-4 14 JSSW17-14
5 JSSW17-5 15 JSSW17-15
6 JSSW17-6 16 JSSW17-16
7 JSSW17-7 17 JSSW17-17
8 JSSW17-8 18 JSSW17-18
9 JSSW17-9 19 JSSW17-19
10 JSSW17-10 20 JSSW17-20
실시예 2: 각 계통의 SlMYB12 게놈 DNA(gDNA) 및 cDNA 준비
2-1. 각 계통의 SlMYB12 게놈 DNA(gDNA) 준비
상기 실시예 1에서 준비한 각 계통으로부터 표피만을 분리한 다음, 식물 DNA 추출 키트(Plant DNA isolation kit, Qiagen, USA)를 이용하여 제조업체의 방법에 따라 각 계통의 게놈 DNA를 추출하였다. 그 다음, 상기 추출된 5ng 게놈 DNA에 0.5 unit Taq DNA 중합효소(PROMEGA, Madison, USA), 2.0 mM MgCl2, 0.2 mM dNTPs, PCR 용액(TaKara, Japan), 및 0.2 μM 프라이머 세트를 혼합하고, 중합효소연쇄반응(PCR)을 실시하여 SlMYB12 게놈 DNA를 증폭하여 SlMYB12 게놈 DNA(gDNA)를 준비하였다. 이때, 상기 프라이머 세트는 Sol genomics network(http://solgenomics.net)에 공시된 SlMYB12 유전자 정보를 기반으로 합성하였으며, 그 염기서열은 하기 표 2에 나타내었다. 상기 중합효소연쇄반응은 94℃에서 5분 동안 전변성(pre-denaturation)시킨 다음 94℃에서 30초 동안 변성(denaturation), 60℃에서 30초 동안 증폭(annealing), 72℃에서 45초 동안 연장(extension)을 30 사이클을 실시한 후, 후기 연장(post-extension)을 72℃에서 5분 동안 실시하였다.
2-2. 각 계통의 SlMYB12 cDNA 준비
상기 실시예 1에서 준비한 각 계통으로부터 표피만을 분리한 다음, RNA 추출 키트(RNeasy plant mini kit, Qiagen, USA)를 이용하여 제조업체의 방법에 따라 각 계통의 RNA를 추출하였다. 구체적으로, 상기 실시예 1에서 준비한 각 계통의 표피에 구아니딘 티오시아네이트(guanidine thiocyanate)가 함유된 용액을 첨가하여 용해 및 균질화한 후 RNase를 불활성화시켰다. 그 다음, RNeasy mini spin 컬럼에 에탄올을 넣어준 후, 상기 컬럼에 용해, 균질화 및 RNase를 불활성화시킨 시료를 넣어 총 RNA를 컬럼막에 결합시켰다. 그 다음, 상기 컬럼에 RNase free 증류수 30㎕를 첨가하여 전체 RNA를 추출하였다. 그 후 상기 추출된 RNA는 역전사 효소(superscript Ⅱ reverse-transcriptase, Invitrogen, USA)를 사용하여 cDNA로 합성하였다. 구체적으로, 앞서 분리한 RNA 1㎍에 50 mM oligo dT 프라이머 및 RNase/DNase free 증류수를 첨가한 후 65℃에서 5분 동안 처리하여 전체 RNA를 변성시켰다. 그 다음 얼음에서 1~2분 동안 급속히 냉각시킨 후 역전사 효소 2μL 및 2X 혼합 반응액 10μL를 첨가하고 50℃에서 50분 동안 반응시켜 cDNA를 합성하였다. 그 다음 80℃에서 5분 동안 열처리를 통해 반응 중지시켰다.
상기 합성한 cDNA에 0.5 unit Taq DNA 중합효소(PROMEGA, Madison, USA), 2.0 mM MgCl2, 0.2 mM dNTPs, PCR 용액(TaKara, Japan), 및 0.2 μM 프라이머 세트를 혼합하고, 중합효소연쇄반응(PCR)을 실시하여 SlMYB12 cDNA를 증폭하여 준비하였다. 이때, 상기 프라이머 세트는 Sol genomics network(http://solgenomics.net)에 공시된 SlMYB12 유전자 정보를 기반으로 합성하였으며, 그 염기서열은 하기 표 2에 나타내었다. 상기 중합효소연쇄반응은 94℃에서 5분 동안 전변성(pre-denaturation)시킨 다음 94℃에서 30초 동안 변성(denaturation), 60℃에서 30초 동안 증폭(annealing), 72℃에서 45초 동안 연장(extension)을 30 사이클을 실시한 후, 후기 연장(post-extension)을 72℃에서 5분 동안 실시하였다.
프라이머 명 프라이머 서열(5′→3′) 용도
MYB12F3 ATGCCGGTACGATTACCTACTAATCT(서열번호 1) 게놈 DNA 클로닝
MYB12-i2-cR2 CTAGCTCGAATCCATTACACTATGTTA(서열번호 2) 게놈 DNA 클로닝
MYB12CDSF TCATTGCCTTTTGCTTCTCCATTTTGT(서열번호 3) cDNA 클로닝
MYB12CDSR CTAAGACAAAAGCCAAGATACAATGGTAC(서열번호 4) cDNA 클로닝
실시예 3: 각 계통의 SlMYB12 게놈 DNA(gDNA) 및 cDNA 염기서열 분석
상기 실시예 2에서 준비한 각 계통별 SlMYB12 게놈 DNA(gDNA), 또는 cDNA를 양 끝이 반듯이 절단되어 있는 블런트(blunt) 벡터(TOPcloner™ Blunt kit, EZ002S, Enzynomics, Korea)에 클로닝 하였다. 그 다음, 상기 SlMYB12 게놈 DNA(gDNA), 또는 cDNA가 포함된 벡터를 막투과성이 증가된 대장균, 즉 형질전환세포에 형질전환시킨 후 플라스미드 DNA 정제 키트(plasmid mini kit, 12125, Qiagen, USA)를 이용하여 SlMYB12 유전자가 포함된 벡터를 추출하였다. 그 다음 상기 추출한 SlMYB12 게놈 DNA(gDNA), 또는 cDNA가 포함된 벡터는 마크로젠(macrogen crop., Korea)에 의뢰하여 벡터에 있는 M13 프라이머를 사용하여 염기서열 분석을 의뢰하였다.
종래 Lin 등(2014)에 의해 핑크색의 표현형질이 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열 결실, 및 2번째 엑손에서 'A'염기가 삽입되거나 'C'염기가 'T'로 치환되어 나타난다고 알려진 사실과 달리, 본 발명의 실시예에서 사용한 모든 토마토의 SlMYB12 유전자의 2번째 엑손 영역에서 'A'염기가 첨가되거나, 'C'염기가 'T'로 치환되는 두 SNP 영역은 확인되지 않았으며, 토마토 계통 중 JSSW17-4, 11, 13 및 20에서만 시작코돈의 603 bp가 결실된 유전자가 확인되었다. 또한, SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 영역에서 'G'가 'T'로 치환된 새로운 유전자가 확인되었으며, 'G'가 'T'로 치환된 경우 2번째 엑손의 마지막 영역에서 7bp의 염기(GTAACAG)가 결실되었음을 확인하였다. 상기 유전자형 분석 결과는 표 3에 요약하여 나타내었다.
No. 계통명 표현형 유전자형
상류 영역의 603bp 염기 결실 2번째 엑손에서 ‘A’삽입 2번째 엑손에서
‘C’가 ‘T’로 치환		 2번째 인트론 시작위치에서 ‘G’가 ‘T’로 치환
1 JSSW17-1 핑크 H -/- C T/G
2 JSSW17-2 핑크 H -/- C T/G
3 JSSW17-3 핑크 H -/- C T/G
4 JSSW17-4 핑크 D -/- C G
5 JSSW17-5 핑크 H -/- C T/G
6 JSSW17-6 핑크 H -/- C T/G
7 JSSW17-7 핑크 H -/- C T/G
8 JSSW17-8 핑크 H -/- C T/G
9 JSSW17-9 핑크 N -/- C T
10 JSSW17-10 핑크 H -/- C T/G
11 JSSW17-11 핑크 D -/- C G
12 JSSW17-12 핑크 H -/- C T/G
13 JSSW17-13 핑크 D -/- C G
14 JSSW17-14 핑크 N -/- C T
15 JSSW17-15 핑크 H -/- C T/G
16 JSSW17-16 핑크 H -/- C T/G
17 JSSW17-17 핑크 N -/- C T
18 JSSW17-18 핑크 H -/- C T/G
19 JSSW17-19 핑크 H -/- C T/G
20 JSSW17-20 핑크 D -/- C G
N: 정상, H: 이형접합체(heterozygote), D: 결실
상기 표 3에서 보듯이, 본 연구에 사용한 핑크색 표현 형질을 나타내는 토마토는 SlMYB12 유전자의 y 위치에서 ⅰ) 2번째 인트론에서 'G'가 'T'로 치환만 있는 경우, ⅱ) SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp만 결실된 경우, ⅲ) SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 결실되고, 2번째 인트론에서 'G'가 'T'로 치환되는 경우, 및 ⅳ) SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 결실과 2번째 인트론에서 첫번째 염기인 'G'가 'T'로 치환되는 영역이 이형접합체 형태로 나타냄을 알 수 있었다.
실시예 4: 핑크색 표현형을 나타내는 토마토의 유전자형을 구분할 수 있는 판별마커 제조 및 상기 판별마커를 이용한 핑크색 표현형을 나타내는 토마토의 유전자형 판별
4-1. 판별마커 제조
상기 실시예 3에서 분석한 SlMYB12 유전자의 염기서열을 바탕으로 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열 결실 영역을 증폭할 수 있는 프라이머 세트와, 2번째 인트론에서 'G'가 'T'로 치환되는 영역을 증폭할 수 있는 프라이머 세트와 프로브를 설계한 후, 마크로젠에 의뢰하여 합성하였다. 상기 프라이머 세트와 프로브의 서열은 하기 표 4에 나타내었다.
명칭 프라이머 서열(5′→3′) 용도
MYB12-603del-aF1 GTGACGAACAACCGACCTAGAATAA(서열번호 5) SCAR marker
MYB12-603del-aR6 GCGGACAAAGTTAATTGGTCACTCA(서열번호 6) SCAR marker
MYB12-603del-aR5 ATTCTAGCGTTATCAGTCGGCATACA(서열번호 7) SCAR marker
SlMYB12-i2-aF1 GATTATTGAGATGCGGAAAGAGTTGT(서열번호 8) HRM primer
SlMYB12-i2-aR1 ACAAAATGAGTGGTTTAATTAGCAAGCT(서열번호 9) HRM primer
SlMYB12-i2-pF2 CTTTGGGTAACAGTTAATTAGTCAATTA(서열번호 10) HRM probe
4-2. 토마토의 SlMYB12 유전자형을 구분하기 위한 SCAR(sequence characterized amlified region) 분석
상기 실시예 2에서 준비한 각 계통별 SlMYB12 게놈 DNA(gDNA)를 주형으로 하고, 상기 4-1에서 제조한 서열번호 5 및 6로 이루어진 프라이머 세트, 또는 서열번호 6 및 7로 이루어진 프라이머 세트를 이용하여 중합효소연쇄반응(PCR)을 실시하였다. PCR은 94℃에서 5분 동안 전변성(pre-denaturation)시킨 다음 94℃에서 30초 동안 변성(denaturation), 60℃에서 30초 동안 증폭(annealing), 72℃에서 45초 동안 연장(extension)을 30 사이클을 실시한 후, 후기 연장(post-extension)을 72℃에서 5분 동안 수행하였다. 상기 PCR을 통해 생성된 산물은 1.5% 아가로스 겔에 EtBr 0.5㎍/㎖을 넣고 UV 상에서 밴드를 확인하였다. 그 결과를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 보듯이, SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열이 결실되지 않은 유전자형을 가지는 계통인 JSSW17-9, 14, 및 17은 960bp와 614bp 크기의 2개 밴드가 확인되었으며, SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열이 결실된 유전자형을 가지는 계통인 JSSW17-4, 11, 13, 및 20은 347bp 크기의 단일 밴드가 확인되었다. 이외 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열 결실된 영역이 이형 접합체 형태로 나타나는 13개 계통에서는 960bp, 614bp, 및 347bp 크기의 3개 밴드가 확인되었다.
4-3. 토마토의 SlMYB12 유전자형을 구분하기 위한 HRM(high-resolution melting) 분석
상기 실시예 2에서 준비한 각 계통별 SlMYB12 게놈 DNA(gDNA)에 상기 4-1에서 제조한 서열번호 8 및 9로 이루어진 프라이머 세트와 3′말단이 비표지된 서열번호 10의 프로브, 및 2× 반응용액(LightScanner Master mix)을 넣고 최종 부피가 20㎕가 되도록 증류수를 첨가한 다음 95℃에서 5분 동안 전변성(pre-denaturation)시킨 다음 95℃에서 20초 동안 변성(denaturation), 60℃에서 20초 동안 증폭(annealing), 72℃에서 30초 동안 연장(extension)을 30 사이클을 실시한 후, 후기 연장(post-extension)을 72℃에서 40초 동안 실시간 중합효소연쇄반응(PCR)을 수행하였다. 그 다음 상기 증폭된 시료를 LightScanner(LightScanner® Instrument System, Idaho Technology, USA)의 프로그램화 된 온도 40℃에서 80℃까지 초당 0.2℃ 간격으로 형광량을 측정하여 녹는 곡선(melting curve)을 분석하였다. 그 결과를 도 3에 나타내었다.
도 3에서 보듯이, SlMYB12 유전자의 2번째 인트론에서 G'가 'T'로 치환된 염기서열을 갖는 계통인 JSSW17-9, 14, 및 17은 63℃에서 멜팅 커브(melting curve, 빨강)가 확인되었고, SlMYB12 유전자의 2번째 인트론에서 G'가 'T'로 치환되지 않은 염기서열을 갖는 계통인 JSSW17-4, 11, 13, 및 20은 57.25℃에서 멜팅 커브(melting curve, 파랑)가 확인되었으며, SlMYB12 유전자의 2번째 인트론에서 G/T의 이형접합체의 염기서열을 갖는 나머지 13개 계통은 57.25℃와 63℃에서 두 개의 멜팅 커브(melting curve, 초록)가 확인되었다.
<110> Sunchon University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Molecular marker for determining genotype of pink tomato and sorting method for pink tomato using same <130> PA-15-0216 <160> 10 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MYB12F3 primer sequence <400> 1 atgccggtac gattacctac taatct 26 <210> 2 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MYB12-i2-cR2 primer sequence <400> 2 ctagctcgaa tccattacac tatgtta 27 <210> 3 <211> 27 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MYB12CDSF primer sequence <400> 3 tcattgcctt ttgcttctcc attttgt 27 <210> 4 <211> 29 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MYB12CDSR primer sequence <400> 4 ctaagacaaa agccaagata caatggtac 29 <210> 5 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MYB12-603del-aF1 primer sequence <400> 5 gtgacgaaca accgacctag aataa 25 <210> 6 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MYB12-603del-aR6 primer sequence <400> 6 gcggacaaag ttaattggtc actca 25 <210> 7 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MYB12-603del-aR5 primer sequence <400> 7 attctagcgt tatcagtcgg cataca 26 <210> 8 <211> 26 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SlMYB12-i2-aF1 primer sequence <400> 8 gattattgag atgcggaaag agttgt 26 <210> 9 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SlMYB12-i2-aR1 primer sequence <400> 9 acaaaatgag tggtttaatt agcaagct 28 <210> 10 <211> 28 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> SlMYB12-i2-pF2 probe sequence <400> 10 ctttgggtaa cagttaatta gtcaatta 28

Claims (4)

  1. (1) 서열번호 5 및 서열번호 6으로 이루어진 프라이머 세트 및 서열번호 5 및 서열번호 7로 이루어진 프라이머 세트로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 프라이머 세트와, (2) 서열번호 8 및 9로 이루어진 프라이머 세트를 포함하는 토마토의 핑크 과색 유전자형을 판별하기 위한 분자마커.
  2. SlMYB12 유전자의 변이를 분석하여 핑크 과색을 나타내는 토마토를 선별하는 방법으로, 상기 토마토의 선별은 1) SlMYB12 유전자의 염기서열 중 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열이 결실되고, SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기가 'G'인 경우, 2) SlMYB12 유전자의 염기서열 중 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열의 결실이 존재하고, SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기인 'G'가 'T'로 변이된 경우, 및/또는 3) SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열이 결실되거나, SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기인 'G'가 'T'로 변이된 경우가 이형접합체 형태(heterozygous type)로 동시에 나타나는 경우, 핑크 과색을 나타내는 토마토임을 판정하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 핑크 과색을 나타내는 토마토의 선별방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 SlMYB12 유전자의 상류 영역의 603bp 염기서열의 결실은 토마토로부터 분리한 SlMYB12 유전자를 주형으로 하고, 서열번호 5 및 서열번호 6으로 이루어진 프라이머 세트 및 서열번호 5 및 서열번호 7로 이루어진 프라이머 세트로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 프라이머 세트를 사용하여 중합효소연쇄반응(PCR)을 통해 밴드의 개수에 따라 확인하는 것을 특징으로 하는 핑크 과색을 나타내는 토마토의 선별방법.
  4. 제2항에 있어서, 상기 SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기의 변이는 토마토로부터 분리한 SlMYB12 유전자를 주형으로 하고, 서열번호 8 및 9로 이루어진 프라이머 세트와 서열번호 10의 프로브를 사용하여 실시간(real-time) 중합효소반응(PCR)을 실시한 다음 멜팅 커브(melting curve)를 분석하여 확인하며, 상기 멜팅 커브가 60 내지 65℃에서 확인되는 경우 SlMYB12 유전자의 2번째 인트론 염기서열 중 첫번째 염기가 변이된 것으로 판정하는 것을 특징으로 하는 핑크 과색을 나타내는 토마토의 선별방법.
KR1020160000908A 2016-01-05 2016-01-05 핑크 과색을 나타내는 토마토의 유전자형 판별용 분자마커 및 이를 이용한 핑크 과색을 나타내는 토마토 선별방법 KR101832457B1 (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020160000908A KR101832457B1 (ko) 2016-01-05 2016-01-05 핑크 과색을 나타내는 토마토의 유전자형 판별용 분자마커 및 이를 이용한 핑크 과색을 나타내는 토마토 선별방법

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020160000908A KR101832457B1 (ko) 2016-01-05 2016-01-05 핑크 과색을 나타내는 토마토의 유전자형 판별용 분자마커 및 이를 이용한 핑크 과색을 나타내는 토마토 선별방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20170082172A true KR20170082172A (ko) 2017-07-14
KR101832457B1 KR101832457B1 (ko) 2018-02-27

Family

ID=59358499

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020160000908A KR101832457B1 (ko) 2016-01-05 2016-01-05 핑크 과색을 나타내는 토마토의 유전자형 판별용 분자마커 및 이를 이용한 핑크 과색을 나타내는 토마토 선별방법

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR101832457B1 (ko)

Families Citing this family (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019235907A1 (ko) * 2018-06-08 2019-12-12 충남대학교 산학협력단 Crispr/cas9 시스템을 이용하여 플라보노이드 생합성 유전체를 편집하기 위한 조성물 및 이의 이용
KR102530404B1 (ko) 2021-07-15 2023-05-08 세종대학교산학협력단 내염성 토마토 판별용 분자마커 및 이를 이용한 토마토 선별방법

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2011525804A (ja) 2008-06-26 2011-09-29 イェダ リサーチ アンド デベロップメント カンパニー リミテッド トマトＳｌＭＹＢ１２転写因子およびその遺伝学的選択法

Also Published As

Publication number Publication date
KR101832457B1 (ko) 2018-02-27

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101680570B1 (ko) 양배추 자색 품종 판별용 snp 마커 및 이의 용도
CN111910013A (zh) 与茄子花青素合成基因紧密连锁的InDel分子标记及其引物和应用
KR101832457B1 (ko) 핑크 과색을 나타내는 토마토의 유전자형 판별용 분자마커 및 이를 이용한 핑크 과색을 나타내는 토마토 선별방법
KR101805164B1 (ko) 과채류의 오렌지 과색 판정방법
KR101395883B1 (ko) 양파의 구피색 선발용 분자 표지
KR101814173B1 (ko) 토마토의 초록 과색 판정방법
KR101639136B1 (ko) 과채류의 노란 과색 판정방법
KR101748366B1 (ko) 토마토 잎곰팡이병 저항성 선별용 분자마커 및 그를 이용한 선별방법
Kimura et al. Development of SSR markers in carnation (Dianthus caryophyllus)
JP2021052687A (ja) モモ果肉色の多様化方法
KR101805166B1 (ko) 토마토의 핑크과색 유전자형을 판별하기 위한 분자마커 및 이를 이용하여 토마토의 핑크과색을 선별하는 방법
JP5709140B2 (ja) 白色花を生じるトルコギキョウ［Ｅｕｓｔｏｍａｇｒａｎｄｉｆｌｏｒｕｍ（Ｒａｆ．）Ｓｈｉｎｎ．］を選別する方法
CN112921112B (zh) 鉴定万寿菊瓣型的caps分子标记、检测引物及检测试剂盒
KR101832458B1 (ko) 노란 과색을 나타내는 토마토 판별용 분자마커 및 이를 이용한 노란 과색을 나타내는 토마토 선별방법
JP4581101B2 (ja) Ｄｎａマーカーを用いるパパイアの性識別方法
KR101961855B1 (ko) 식물의 화분 발달에 관여하는 phd 유전자 및 이를 이용한 유전자적 웅성불임성의 판별방법
JP6876334B2 (ja) 形質転換感受性のオオムギの作出方法
KR101886849B1 (ko) 토마토 핑크 과색 선별방법
KR101766977B1 (ko) 자색 고추 선별용 프라이머 세트, 자색 고추 선별방법, 및 자색 고추 선별키트
KR101803077B1 (ko) 양배추 시들음병 저항성 관련 마커를 표지하는 프라이머 세트 및 이를 이용한 저항성 양배추 품종 선별 방법
KR101855984B1 (ko) 단일염기다형성을 이용한 꾸지뽕 계통 판별용 마커 조성물, 및 이를 이용한 꾸지뽕 계통 및 교잡종 판별 방법
KR101828709B1 (ko) 연녹과 고추 선별용 프라이머 세트, 연녹과 고추 선별방법, 및 연녹과 고추 선별키트
CN112852996B (zh) 鉴定万寿菊舌状花花瓣裂片性状的scar分子标记、检测引物及其应用
KR102524050B1 (ko) 다래의 성 판별용 분자마커 및 이의 용도
CN112029889B (zh) 一种检测烟草白粉病抗性基因型的多重pcr方法及其在育种中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant