KR20160139521A - Entomopathogenic fungi Metarhizium anisopliae SD4-2 and Beauveria bassiana SD15 having antimicrobial activities and insectcide - Google Patents

Entomopathogenic fungi Metarhizium anisopliae SD4-2 and Beauveria bassiana SD15 having antimicrobial activities and insectcide Download PDF

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김동우
이보람
이설화
김동준
배성민
신태영
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충북대학교 산학협력단
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Abstract

The present invention relates to a biological formulation using an entomopathogenic fungi Metarhizium anisopliae SD4-2 strain or Beauveria bassiana SD15 strain having insecticidal and antimicrobial activities. The strain of the present invention has an excellent effect in repelling Tetranychus urticae or Myzus persicae, and simultaneously has an effect in repelling microorganisms. Accordingly, the Metarhizium anisopliae SD4-2 strain or the Beauveria bassiana SD15 strain shows high pathogenic properties with respect to facility cultivation plants, thereby being used as an insecticidal agent and a biological formulation for repelling plant pathogens. Thus, the strain of the present invention is environmentally and industrially very useful.

Description

해충방제 및 항균활성을 가지는 곤충병원성 곰팡이 메타리지움 아니소플리애 SD4-2 균주와 뷰베리아 바시아나 SD15 균주{Entomopathogenic fungi Metarhizium anisopliae SD4-2 and Beauveria bassiana SD15 having antimicrobial activities and insectcide}Insect pathogenic fungi having insect pest control and antimicrobial activity, Methylysium anisopria SD4-2 strain and V. bovisiana SD15 strain {Entomopathogenic fungi Metarhizium anisopliae SD4-2 and Beauveria bassiana SD15 having antimicrobial activities and insectcide}

본 발명은 해충방제 및 항균활성을 가지는 곤충병원성 곰팡이 메타리지움 아니소플리애 SD4-2 균주와 뷰베리아 바시아나 SD15 균주를 이용한 생물학적 제제에 관한 것이다. The present invention relates to a biological agent using an insect pathogenic fungus methionylium anisoprya SD4-2 strain and a buberivaciana SD15 strain having pest control and antimicrobial activity.

식물 생육의 장애요인으로는 물, 온도 그리고 영양분 등의 환경적 요인들과 더불어 생물적 장애요인으로 식물을 가해하는 해충과 여러 가지 식물병(disease)인 미생물이 있다. 이들 장애 요인들 중 특히, 경제적인 관점에서 식물을 키우는 사람들의 가장 큰 관심사는 식물병과 해충으로써 이들 문제점을 해결하기 위하여 살균제, 진균제, 바이러스제제 등이 식물병 방제를 위한 농약과 해충을 방제하기 위한 살충제에 대한 연구 개발 및 이용에 현재에도 전 세계적으로 활발히 이루어지고 있다. 기본적으로 식량 생산을 위한 농업과 산림 그리고 조경수, 잔디 등 다양한 목적으로 식물을 키우는데 있어서 이들 식물병 및 해충방제를 위한 작물보호제는 필수적으로 여겨지고 있으며, 그로 인하여 병 및 해충으로 부터 식물을 보호하기 위하여 막대한 경제적 비용 발생이 초래되고 있다. 특히, 최근에는 이들 작물보호제의 환경 위해성 문제와 더불어 인간에게 안전한 농산물 생산의 중요성이 강조되면서 식물병 및 해충의 친환경 방제법에 대한 관심이 높아지고 실제로 그러한 방제법이 확대 실시되고 있다.Barriers to plant growth include environmental factors such as water, temperature, and nutrients, as well as microorganisms, which are insects and diseases that affect plants as biological barriers. Among these obstacles, especially those who raise plants from an economic point of view, the most important concern is to solve these problems as botanicals and pests. In order to solve these problems, disinfectants, fungicides, viral agents, The research and development and use of pesticides have been actively carried out all over the world. Basically, in order to grow plants for various purposes such as agriculture, forests, landscaping, and lawns for food production, crop protection agents for controlling these plant diseases and pests are considered to be essential. Therefore, in order to protect plants from diseases and insects, Resulting in economic costs. In particular, recently, the importance of the production of safe agricultural products along with the environmental risk of these crop protection agents has been emphasized, and the interest in the environment friendly control method of plant diseases and pests has increased, and such control methods are actually being expanded.

곤충병원성 곰팡이는 곤충에 병을 일으켜 치사시키는 미생물로써 100 여 년 전부터 살충제의 소재로 널리 이용되고 있다. 최근에는 이러한 곰팡이가 기주를 침입하여 증식하는 과정 중에 생성되는 다양한 세포외효소, 단백질 독소, 2차 대사산물들이 기주의 면역반응을 극복하거나, 기주 정복을 위해 이용되는 동시에 다른 미생물과의 경쟁을 위해서도 사용되는 등 여러 가지 다양한 물질들이 항세균, 항진균의 용도로 연구되고 있다. 현재 식물병과 해충의 방제를 위해서는 각각의 개별적 방제를 위한 작물보호제가 필수적으로 사용되고 있으나 하나의 약제로 특히, 친환경 방제제로써 이러한 두 가지 목적을 동시에 달성할 수 있다면, 경제적인 면에서 뿐 만 아니라 사용자의 편이성과 안전까지 모두 만족시킬 수 있는 방제제의 개발이 가능할 것으로 여겨지고 있다.Insect pathogenic fungi are microorganisms that cause insect diseases and kill them and have been widely used as pesticide materials for over 100 years. Recently, a variety of extracellular enzymes, protein toxins, and secondary metabolites produced during the intrusion and proliferation of these fungi have been used to overcome the host immune response, to be used for host defense, and to compete with other microorganisms And various other substances are being studied for the use of antibacterial and antifungal agents. Currently, crop protection agents for individual control are essential for the control of plant diseases and pests. However, if these two purposes can be achieved at the same time as one drug, especially as an environmentally friendly control agent, It is believed that it is possible to develop a control agent that can satisfy both convenience and safety.

이에 식물병과 해충의 동시방제가 가능한 친환경소재의 개발이 시급한 실정이다.Therefore, it is urgent to develop environmentally friendly materials that can control both plant diseases and pests simultaneously.

한국등록특허 제10-2011-0004731호Korean Patent No. 10-2011-0004731 한국등록특허 제10-0404767호Korean Patent No. 10-0404767

이에 본 발명에서는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주가 해충방제능이 우수하며, 동시에 미생물도 방제할 수 있음을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다. In the present invention, it has been confirmed that the strain SD4-2 of Metarhizium anisopliae or the strain SD15 of Beauveria bassiana have excellent pest control ability and can control microorganisms at the same time, Completed.

따라서 본 발명의 목적은 해충방제능을 갖는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주(기탁번호 KACC93228P) 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주(기탁번호 KACC93229P)를 제공하는 것이다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a strain of Metarhizium anisopliae SD4-2 (Accession No. KACC93228P) or Beauveria bassiana SD15 strain (Accession No. KACC93229P) having pest control ability will be.

또한, 본 발명의 다른 목적은 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물 및 상기 배양물의 건조물로 이루어지는 군 중에서 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 해충방제용 조성물을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a method for producing a strain of Metarhizium anisopliae SD4-2 or a strain of Beauveria bassiana SD15, a culture of the strain, a concentrate of the culture and a culture of the culture And a dried material, as an active ingredient. The present invention also provides a composition for controlling an insect pest.

또한, 본 발명의 다른 목적은 상기 본 발명의 해충방제용 조성물을 해충이 번식한 지역에 살포하는 단계를 포함하는 해충방제방법을 제공하는 것이다.Another object of the present invention is to provide a pest control method comprising the step of spraying the insect pest control composition of the present invention on a region where pest is propagated.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 해충방제능을 갖는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주(기탁번호 KACC93228P) 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주(기탁번호 KACC93229P)를 제공한다.In order to achieve the above object, the present invention relates to a method for producing a pest control agent, which comprises a strain of Metarhizium anisopliae SD4-2 (accession number KACC93228P) or a strain of Beauveria bassiana SD15 (accession number KACC93229P ).

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 균주는 점박이응애 또는 복숭아혹진딧물을 방제할 수 있다.In one embodiment of the present invention, the strain is capable of controlling the spotted mite or the peach aphid.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 균주는 항진균능 또는 항세균능을 갖는 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the strain may have antifungal or antibacterial activity.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 곤충병원성 곰팡이로부터 분리한 것일 수 있다.In one embodiment of the present invention, it may be isolated from the insect pathogenic fungus.

또한, 본 발명은 상기 본 발명에 따른 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물 및 상기 배양물의 건조물로 이루어지는 군 중에서 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 해충방제용 조성물을 제공한다.The present invention also relates to a strain of Metarhizium anisopliae SD4-2 or a strain of Beauveria bassiana SD15 according to the present invention, a culture of the strain, a concentrate of the culture, As an active ingredient, at least one compound selected from the group consisting of a plant extract and a dried product of a culture.

또한, 본 발명은 상기 본 발명에 따른 해충방제용 조성물을 해충이 번식한 지역에 살포하는 단계를 포함하는 해충방제방법을 제공한다.The present invention also provides a pest control method comprising the step of spraying the insect pest control composition according to the present invention in a region where pests have been propagated.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 지역은 토양 또는 작물일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the area may be soil or crop.

본 발명의 일실시예에 있어서, 상기 작물은 가지, 고추, 배, 복숭아, 사과, 오이, 장미, 벚, 돈나무, 해당화, 매실, 초피나무, 귤, 감자, 담배, 목화, 사철나무, 협죽도, 작살나무, 구기자나무, 참오동나무, 살구나무, 자두나무 및 고욤나무일 수 있다.In one embodiment of the present invention, the crop is selected from the group consisting of egg, pepper, pear, peach, apple, cucumber, rose, cherry, Ginger tree, ginger tree, paulownia tree, apricot tree, plum tree and cypress tree.

본 발명은 해충방제능을 갖는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주에 관한 것으로서, 본 발명의 균주는 점박이응애 또는 복숭아혹진딧물을 방제하는 효과가 뛰어나고 동시에 미생물도 방제하는 효과가 있다.The present invention relates to a strain of Metarhizium anisopliae SD4-2 or Beauveria bassiana SD15 having pest control ability, wherein the strain of the present invention is a strain of a spider mite or a peach aphid It has an excellent effect of controlling and at the same time has an effect of controlling microorganisms.

따라서 본 발명의 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주는 시설 재배지 작물에 높은 병원성을 보여 해충방제와 더불어 식물병원균을 동시에 방제하기 위한 생물학적 제제로 사용할 수 있어 환경 산업적으로도 매우 유용하다. Therefore, the strain SD4-2 of Metarhizium anisopliae or the strain SD15 of Beauveria bassiana of the present invention showed high pathogenicity to the plantation crops, It can be used as a biological agent, which is very useful for environmental industry.

도 1은 본 발명에 따른 곤충병원성 곰팡이(오른쪽 부분)와 곰팡이 B. cinerea(왼쪽 부분)에 대한 항진균활성 검정 결과이다.
A) 강한 항진균활성을 보이는 L. attenuatum SD4-1
B) 중간 항진균활성을 보이는 B. bassiana SD7
C) 항진균활성을 보이지 않은 M. flavoviride SD4
도 2는 본 발명에 따른 곤충병원성 곰팡이(가운데 부분)와 세균 B. cereus(배지 전체적인 부분)에 대한 항세균활성 검정 결과이다.
A) 강한 항세균활성을 보이는 B. bassiana SD5-1
B) 중간 항세균활성을 보이는 B. bassiana SD14
C) 항세균활성을 보이지 않은 L. attenuatum SDMp1
도 3은 본 발명의 곤충병원성 곰팡이 배양액의 항균활성 결과 그래프이다.
A) 세균 B. cereus에 대한 항세균활성
B) 곰팡이 B. cinerea에 대한 항진균활성 Fig. 1 shows the result of the test for antifungal activity against insect pathogenic fungi (right part) and B. cinerea (left part) according to the present invention.
A) L. attenuatum SD4-1 with strong antifungal activity
B) B. bassiana SD7 showing intermediate antifungal activity
C) M. flavoviride SD4 without antifungal activity
Fig. 2 shows the result of the test for the antibacterial activity against the insect pathogenic fungus (middle part) and the bacterium B. cereus (whole part of the medium) according to the present invention.
A) Strong anti-bacterial activity of B. bassiana SD5-1
B) B. bassiana SD14 showing intermediate antibacterial activity
C) L. attenuatum SDMp1 without antibiotic activity
FIG. 3 is a graph showing antimicrobial activity of the insect pathogenic fungus culture of the present invention.
A) Antibacterial activity against B. cereus
B) Antifungal activity against mold B. cinerea

본 발명은 해충방제능이 우수하며, 동시에 미생물도 방제할 수 있는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주를 제공함에 그 특징이 있으며, 또한 상기 균주를 이용하여 해충을 방제할 수 있는 방법을 제공함에 그 특징이 있다.The present invention is characterized by providing Metarhizium anisopliae SD4-2 strain or Beauveria bassiana SD15 strain which is excellent in pest control ability and can control microorganisms at the same time, The present invention also provides a method for controlling pests using the strain.

식물을 재배함에 있어서 생물적 장애요인으로는 해충과 미생물로 인한 식물병이 있으며, 이들 문제점을 해결하기 위하여 살균제, 진균제, 바이러스제제 등이 식물병 방제를 위한 농약과 해충을 방제하기 위한 살충제에 대한 연구가 활발히 이루어지고 있으나, 막대한 비용과 많은 시간이 소비되고 있는 문제가 있다. In order to solve these problems, there is a need for a pesticide for control of plant diseases and a pesticide for controlling pests such as a bactericide, a fungicide, and a virus agent. Research has been actively carried out, but there is a problem in that it is costly and time consuming.

따라서 해충과 미생물을 방제하기 위해 각각의 개별적 방제를 위한 작물보호제가 필수적으로 사용되고 있으나, 동시에 두 가지 목적을 달성할 수 없다는 문제점이 있다.Therefore, although a crop protection agent for each individual control is essentially used to control pests and microorganisms, there is a problem in that two objectives can not be achieved at the same time.

이에 본 발명자들은 해충과 미생물을 동시에 방제할 수 있는 방법을 개발하기 위해 해충 및 미생물 방제능이 우수한 자연계에 존재하는 균주를 분리하였다.Therefore, the present inventors have isolated a strain that exists in a natural environment having excellent insect pest and microbial control ability in order to develop a method for simultaneously controlling insects and microorganisms.

그 결과, 본 발명자들이 분리한 균주는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2과 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15이고, 상기 균주는 함께 분리된 다른 균주들에 비해 해충 및 미생물 방제능이 가장 우수한 균주인 것으로 확인되었다. 따라서 상기 균주를 2014년 5월 22일자로 국립농업과학원 농업유전자원센터(KACC)에 기탁하여 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주 기탁번호 KACC93228P 와 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주 기탁번호 KACC93229P를 부여받았다.As a result, the strains isolated by the present inventors were Metarhizium anisopliae SD4-2 and Beauveria bassiana SD15. The strains were more resistant to pests and microorganisms It was confirmed that the antifungal activity was the best. Therefore, the above strain was deposited on May 22, 2014 with the National Institute of Agricultural Science and Technology (KACC), Metarhizium anisopliae SD4-2 strain Accession No. KACC93228P and Beauveria bassiana ) ≪ / RTI > SD15 strain Accession No. KACC93229P.

이에 본 발명자들은 상기 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주가 정말 우수한 해충방제능이 있는지 조사하기 위해, 본 발명의 일실시예에서는 점박이응애와 복숭아혹진딧물 각각을 대상으로 생물검정을 하였고, 구체적으로는 우리나라 토양에서 분리한 300여 개의 곤충병원성 곰팡이 균주를 PDA 배지에서 배양하고 포자생성을 유도한 후 포자현탁액을 만들어 점박이응애 또는 복숭아혹진딧물 성충 50마리에 스프레이하여 7일 동안 매일 관찰하여 사충을 수거하였다. 그 결과, 점박이응애에서는 Aspergillus flavus SD7; B. bassiana SD5-1, SD6, SD2R-3-3-1, SD2R-4-5, SD2R-4-7, SDTu; C. rosea SD5-2; L. attenuatum SD4-1; M. anisopliae SD2-2, SD4-2; P. lilacinus SD2R-4-6 12개의 균주를, 복숭아혹진딧물에서는 Aspergillus sp. SD6(2-6); B. bassiana SD1(1-3), SD2(1-4), SD7(2-8), SD8(2-19-4), SD9(2-20), SD10(3-1), SD12(3-3), SD14(3-5), SD15(4-2); L. attenuatum SD16(4-3), SDMp1, SDMp2; M. anisopliae SD3(1-5); M. flavoviride SD4(1-6); P. lilacinus SD5(2-1), SD11(3-2), SD13(3-4), SD17(4-4), SD18(4-5) 20개의 균주가 해충방제 효과가 있음을 확인하였고, 특히 이중 점박이응애에서는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2가 우수한 효능을 보였고 복숭아혹진딧물에서는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15가 우수한 효능을 나타낸 것으로 확인하였다(실시예 1 및 2 참조).Therefore, in order to investigate whether the above-mentioned Metarhizium anisopliae SD4-2 or Beauveria bassiana SD15 strain has excellent pest control ability, in the present invention, And a peach aphid, respectively. Specifically, about 300 insect pathogenic fungi isolated from soil in Korea were cultivated in PDA medium and induce spore formation. Then, spore suspension was prepared to produce spore mite or peach aphid Fifty adults were sprayed and observed daily for 7 days to collect the larvae. As a result, Aspergillus flavus SD7; B. bassiana SD5-1, SD6, SD2R-3-3-1, SD2R-4-5, SD2R-4-7, SDTu; C. rosea SD5-2; L. attenuatum SD4-1; M. anisopliae SD2-2, SD4-2; Twelve isolates of P. lilacinus SD2R-4-6 were isolated from Aspergillus sp. SD6 (2-6); B. bassiana SD1 (1-3), SD2 (1-4), SD7 (2-8), SD8 (2-19-4), SD9 (2-20), SD10 (3-1), SD12 -3), SD14 (3-5), SD15 (4-2); L. attenuatum SD16 (4-3), SDMp1, SDMp2; M. anisopliae SD3 (1-5); M. flavoviride SD4 (1-6); Twenty strains of P. lilacinus SD5 (2-1), SD11 (3-2), SD13 (3-4), SD17 (4-4) and SD18 (4-5) In particular, in the double spotted mite, Metarhizium anisopliae SD4-2 showed excellent efficacy and Beauveria bassiana SD15 showed excellent efficacy in peach aphid (Examples 1 and 2) 2).

따라서 본 발명자들은 상기 균주를 해충을 방제하기 위한 용도로 활용할 수 있음을 알 수 있었다.Therefore, the inventors of the present invention have found that the above-mentioned strain can be used for controlling pests.

나아가 본 발명자들은 상기 균주의 항진균 또는 항세균능을 확인하는 실험을 수행하여 해충에 병원력이 높고 항균활성이 뛰어난 점박이응애 병원성 곰팡이 B. bassiana SD2R-4-5, M. anisopliae SD4-2, 복숭아혹진딧물 병원성 곰팡이 B. bassiana SD15, L. attenuatum SDMp2를 선발하였고, 그 결과 실험에 이용된 4개 균주(B. bassiana SD2R-4-5, M. anisopliae SD4-2, B. bassiana SD15, L. attenuatum SDMp2) 배양액 모두 각기 다른 능력으로 미생물 생장을 억제하는 것을 확인하였고, 본 실험에 이용된 균주는 각각의 미생물에 항균활성 물질을 만들어내는 것을 다시 확인되어, 이를 이용하여 다양한 미생물 방제가 실제로 가능함을 확인하였다(실시예 3 내지5 참조).Furthermore, the present inventors have conducted experiments to confirm the antifungal or antibacterial activity of the above-mentioned strains, and found that the bacterium B. bassiana SD2R-4-5, M. anisopliae SD4-2, B. bassiana SD15, L. attenuatum SDMp2 were selected and the four strains ( B. bassiana SD2R-4-5, M. anisopliae SD4-2, B. bassiana SD15, L. attenuatum SDMp2) were found to inhibit microbial growth with different abilities, and the strains used in this experiment were confirmed to produce antimicrobial active substances in each microorganism. (See Examples 3 to 5).

그러므로 본 발명은 해충방제능을 갖는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주(기탁번호 KACC93228P) 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주(기탁번호 KACC93229P)를 제공할 수 있다.Therefore, the present invention can provide Metarhizium anisopliae SD4-2 strain (Accession No. KACC93228P) or Beauveria bassiana SD15 strain (Accession No. KACC93229P) having pest control ability .

또한, 본 발명에 따른 상기 균주가 방제할 수 있는 해충으로는 이에 제한되지는 않으나, 점박이응애 또는 복숭아혹진딧물일 수 있다.In addition, the pests which can be controlled by the strain according to the present invention include, but are not limited to, a spotted mite or a peach aphid.

또한, 본 발명에 따른 상기 균주는 항진균능 또는 항세균능을 제공할 수 있다. In addition, the strain according to the present invention can provide antifungal or antibacterial activity.

또한, 본 발명은 상기 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물 및 상기 배양물의 건조물로 이루어지는 군 중에서 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 해충방제용 조성물을 제공할 수 있다.In addition, the present invention relates to a method for producing a microorganism, which comprises culturing the strain of Metarhizium anisopliae SD4-2 or Beauveria bassiana SD15, a culture of the strain, a concentrate of the culture and a culture of the culture The present invention provides a composition for controlling insects, which comprises at least one selected from the group consisting of

상기 배양물은 통상적인 미생물의 배양방법에 의해 대량으로 배양하여 수득할 수 있으며, 배양배지로는 탄소원, 질소원, 비타민 및 미네랄을 포함하는 배지를 사용할 수 있으며, 상기 탄소원으로는 전분, 수크로즈, 시트레이트, 말토스, 글루코스, 만니톨, 글리세롤 또는 자일로스를 사용할 수 있다. The culture can be obtained by culturing a large amount by a conventional culture method of microorganisms. As the culture medium, a medium containing a carbon source, a nitrogen source, a vitamin and a mineral can be used. Examples of the carbon source include starch, sucrose, Citrate, maltose, glucose, mannitol, glycerol or xylose can be used.

또한, 상기 배양물은 본 발명의 균주를 포함하는 배양물 자체의 형태로도 사용할 수 있으며, 또는 배양액 중의 배양배지를 제거하고 농축된 균체만을 회수하기 위해 원심분리 또는 여과과정을 거칠 수 있으며, 이러한 단계는 당업자가 필요에 따라 수행할 수 있다. 농축된 균체는 통상적인 방법에 따라 냉동(frozen)하거나 또는 냉동건조(lyophilized)하여 그 활성을 잃지 않도록 보존할 수 있다.
In addition, the culture can be used in the form of a culture containing the strain of the present invention, or can be subjected to centrifugation or filtration to remove the culture medium from the culture and recover only concentrated cells. The steps may be carried out as required by those skilled in the art. The concentrated cells may be frozen or lyophilized according to a conventional method so as not to lose their activity.

따라서 본 발명의 타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주는 해충을 방제할 수 있는 활성 뿐만 아니라 미생물을 방제할 수 있는 특징을 모두 가지고 있다.
Therefore, the strain SD4-2 of Metarhizium anisopliae or the strain SD15 of Beauveria bassiana according to the present invention has all the characteristics capable of controlling not only insect pest control activity but also microorganisms .

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. These examples are for further illustrating the present invention, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

<실시예 1>&Lt; Example 1 >

점박이응애 및 복숭아혹진딧물 병원성 균주의 선발Selection of spotted mite and peach aphid pathogenic strains

<1-1> 해충 사육 조건<1-1> Pest conditions

본 발명자들은 병원성 균주의 해충 방제 효과를 규명하기 위해, 점박이 응애(Tetranychus urticae)는 강낭콩을 공급하면서 온도 25℃, 상대습도 70%, 광조건 12L:12D 조건으로 사육하며, 복숭아혹진딧물(Myzus persica)은 배추를 공급하고 광조건 16L:8D을 제외한 다른 조건은 점박이응애와 같은 조건으로 사육하면서 실험에 이용하였다.
 Tetranychus urticae was cultivated under the condition of temperature 25 ° C, relative humidity 70%, light condition 12L: 12D, feeding with kidney beans, and inoculation of peach aphid ( Myzus persica ) Were used for the experiment while the other conditions except the light condition 16L: 8D were kept under the same condition as the spotted mite.

<1-2> 해충 방제용 병원성 균주의 선발<1-2> Selection of pathogenic strains for pest control

우리나라 토양으로부터 곤충병원성 곰팡이를 분리하기 위한 토양 시료의 수집은 2007년부터 2009년까지 겨울에 진행하였다. 대략 50 g의 토양 시료를 전국 9개 도의 다양한 토양(논, 밭, 과수원, 수목, 산, 강기슭)에서 5~10 cm 깊이로 플라스틱 팩에 채집하였고, 실험실로 가져와 곰팡이 분리에 이용하였다.Collection of soil samples to isolate insect pathogenic fungi from soil in Korea was conducted in winter from 2007 to 2009. Approximately 50 g of soil samples were collected in plastic packs at depths of 5 to 10 cm from various soil (rice field, field, orchard, tree, mountain, riverbank) in 9 provinces nationwide and taken to the laboratory for isolation of fungi.

토양시료로부터 곤충병원성 곰팡이의 분리는 1.5 ml microcentrifuge tube에 1.3 ml의 0.02% tween 80과 토양시료 0.2 g을 넣고 강하게 혼합한 후, 10-1 희석하였다. 희석 된 샘플 150 ul를 곤충병원성 곰팡이 선택배지 SDA-D50 (sabouraud dextrose agar, 100 μg/ml chloramphenicol, 50 μg/ml streptomycin, 50 μg/ml dodine)에 도말한 후, 25℃ 암 조건에서 6일간 배양하였다. 배양 후 곤충병원성 곰팡이 특이적 증식상(색, 크기, 질감)을 보이는 콜로니들을 멸균된 이쑤시개를 사용하여 PDA 배지로 옮겨 25℃, 암 조건에서 7일간 배양하였다. 배양 후, 분리된 300여 개의 곤충병원성 균주를 점박이응애 및 복숭아혹진딧물 병원성 균주 선발 실험에 이용하였다(표 1 참조).To isolate insect pathogenic fungi from soil samples, 1.3 ml of 0.02% tween 80 and 0.2 g of soil sample were added to a 1.5 ml microcentrifuge tube and mixed vigorously and diluted to 10 -1 . 150 μl of the diluted sample was plated on an insect pathogenic fungus selective medium SDA-D50 (sabouraud dextrose agar, 100 μg / ml chloramphenicol, 50 μg / ml streptomycin, 50 μg / ml dodine) Respectively. After cultivation, colonies showing an insect pathogenic fungus-specific proliferation phase (color, size, texture) were transferred to a PDA medium using a sterilized toothpick and cultured at 25 ° C for 7 days under dark conditions. After culturing, 300 isolated insect pathogenic strains were used in the selection test for the pathogenic strains of spotted mite and peach aphid (Table 1).

본 발명에 사용된 곰팡이 병원성 균주The fungal pathogenic strain used in the present invention IsolatesIsolates Number of isolatesNumber of isolates Acremonium spp.Acremonium spp. 1One Aspergillus spp.Aspergillus spp. 88 Beauveria bassianaBeauveria bassiana 109109 Beauveria brongniartiiBeauveria brongniartii 88 Beauveria pseudobassianaBeauveria pseudobassiana 88 Bionectria spp.Bionectria spp. 77 Chaunopycnis spp.Chaunopycnis spp. 2323 Clonostachys roseaClonostachys rosea 1One Fusarium spp.Fusarium spp. 22 Isaria farinosaIsaria farinosa 1212 Isaria fumosoroseaIsaria fumosorosea 66 Isaria spp.Isaria spp. 2222 Lecanicillium spp.Lecanicillium spp. 88 Metarhizium anisopliae var. anisopliae There is Metarhizium anisopliae. anisopliae 6565 M. anisopliae var. lepidiotumI have M. anisopliae. leptidium 1One M. flavoviride var. pemphigumI have M. flavoviride. pemphigum 1616 Mortierella spp.Mortierella spp. 1One MucoraleanMucoralean 1One Myrothecium spp.Myrothecium spp. 55 Paecilomyces carneusPaecilomyces carneus 33 P. lilacinusP. lilacinus 33 P. marquandiiP. marquandii 55 Paraconiothyrium spp.Paraconiothyrium spp. 22 Phialocephala spp.Phialocephala spp. 1One Pochonia spp.Pochonia spp. 1717 Simplicillium spp.Simplicillium spp. 1One Tolypocladium spp.Tolypocladium spp. 33 Verticillium spp.Verticillium spp. 33

점박이응애 또는 복숭아혹진딧물 병원성 균주를 선발하기 위하여 표 1의 곤충병원성 곰팡이 균주를 PDA (potato dextrose agar)배지에서 2주 동안 배양하여 포자 생성을 유도한 후, 곰팡이의 포자들을 무작위로 100개씩 그룹으로 나누고 포자현탁액을 만들어 각각의 해충에 병원성 곰팡이 선발을 위해 사용하였다. 각각의 해충에 대한 병원성 곰팡이 선발을 위한 생물검정은 준비된 포자현탁액을 점박이응애 또는 복숭아혹진딧물 성충 50마리에 스프레이 하는 방법으로 접종하였고, 7일 동안 매일 관찰하면서 사충을 수거하였다. 사충들은 표피에서 곰팡이의 발생이 육안으로 관찰될 경우에만 곰팡이에 의한 치사로 인정하였으며, 사멸한 사충으로부터 병원성 곰팡이를 분리하기 위해 곰팡이병 사충에서 포자를 멸균된 이쑤시개로 수거하여 0.02% tween 80용액에 현탁한 후 곤충병원성 곰팡이 선택배지인 SDA-D50 (sabouraud dextrose agar, 100 μg/ml chloramphenicol, 50 μg/ml streptomycin, 50 μg/ml dodine)에 도말하였다. 이 후 25℃, 암 조건에서 7일간 배양하면서 형성된 콜로니를 분리하여 다시 PDA배지에 접종하여 순수 분리 후 다음 실험에 이용하였다.In order to select a pathogenic strain of spotted mite or peach aphid, the insect pathogenic fungus strain of Table 1 was cultivated in PDA (potato dextrose agar) medium for 2 weeks to induce spore formation, and then spores of the fungi were randomly grouped into 100 And a suspension of spores was used to select for pathogenic fungi in each pest. The bioassay for the selection of pathogenic fungi for each insect was carried out by inoculating the prepared spore suspension with spraying 50 mites of the spotted mite or peach aphid adult, and collecting the larvae daily for 7 days. In order to isolate the pathogenic fungus from the killed dead larvae, the spores were picked up with a sterilized toothpick in a fungal sickle, and a 0.02% tween 80 solution (SDA-D50, Sabouraud dextrose agar, 100 μg / ml chloramphenicol, 50 μg / ml streptomycin, and 50 μg / ml dodine) after the suspension. Then, colonies formed by culturing at 25 ° C for 7 days in dark condition were separated and again inoculated into PDA medium.

점박이응애 또는 복숭아혹진딧물 병원성 곰팡이를 선발하고자 만들어진 포자현탁액을 각기 해충에 처리하여 생성된 사충으로부터 포자를 멸균된 이쑤시개로 수거하여 0.02% tween 80용액에 현탁한 후 곤충병원성 곰팡이 선택배지인 SDA-D50 (sabouraud dextrose agar, 100 μg/ml chloramphenicol, 50 μg/ml streptomycin, 50 μg/ml dodine)에 도말하여 위와 같은 방법으로 순수 분리한 결과, 사멸한 사충으로부터 점박이응애에서는 Aspergillus flavus SD7; B. bassiana SD5-1, SD6, SD2R-3-3-1, SD2R-4-5, SD2R-4-7, SDTu; C. rosea SD5-2; L. attenuatum SD4-1; M. anisopliae SD2-2, SD4-2; P. lilacinus SD2R-4-6 12개의 균주를 분리하였다. 복숭아혹진딧물에서는 Aspergillus sp. SD6(2-6); B. bassiana SD1(1-3), SD2(1-4), SD7(2-8), SD8(2-19-4), SD9(2-20), SD10(3-1), SD12(3-3), SD14(3-5), SD15(4-2); L. attenuatum SD16(4-3), SDMp1, SDMp2; M. anisopliae SD3(1-5); M. flavoviride SD4(1-6); P. lilacinus SD5(2-1), SD11(3-2), SD13(3-4), SD17(4-4), SD18(4-5) 20개의 균주를 분리하여 다음 실험에 이용하였다.
The spore suspension was prepared by treating the spore suspensions prepared for the selection of the pathogenic fungus of the spotted mite or the peach lupus aphid. The spores were collected from the generated mites by a sterilized toothpick and suspended in a 0.02% tween 80 solution. The insect pathogenic fungus selection medium SDA-D50 (100 μg / ml chloramphenicol, 50 μg / ml streptomycin, and 50 μg / ml dodine) were used for the isolation of Aspergillus flavus SD7; B. bassiana SD5-1, SD6, SD2R-3-3-1, SD2R-4-5, SD2R-4-7, SDTu; C. rosea SD5-2; L. attenuatum SD4-1; M. anisopliae SD2-2, SD4-2; Twelve strains of P. lilacinus SD2R-4-6 were isolated. In peach aphid, Aspergillus sp. SD6 (2-6); B. bassiana SD1 (1-3), SD2 (1-4), SD7 (2-8), SD8 (2-19-4), SD9 (2-20), SD10 (3-1), SD12 -3), SD14 (3-5), SD15 (4-2); L. attenuatum SD16 (4-3), SDMp1, SDMp2; M. anisopliae SD3 (1-5); M. flavoviride SD4 (1-6); Twenty strains of P. lilacinus SD5 (2-1), SD11 (3-2), SD13 (3-4), SD17 (4-4) and SD18 (4-5) were isolated and used in the following experiments.

<실시예 2>&Lt; Example 2 >

곤충병원성 곰팡이의 살충활성Insecticidal activity of insect pathogenic fungi

상기 실시예 1을 통해 얻어진 점박이응애 및 복숭아혹진딧물 병원성 곰팡이 균주의 정량적 병원력 검정을 위하여 상기에서 선발된 점박이응애 또는 복숭아혹진딧물 각각의 곰팡이 균주를 PDA (potato dextrose agar)배지에서 2주 동안 배양하여 포자 생성을 유도한 후, 생성된 포자를 0.05% tween-80을 이용하여 포자현탁액을 만들고 hemocytometer를 이용하여 계수하고 실험에 사용하였다. 생물검정 전 포자의 생존률은 모두 90%이상인 것을 사용하였다.For the quantitative test of the pathogenic fungus of the spotted mite and peach aphid pathogenic fungus obtained through Example 1, the fungal strains of each of the spotted mite or peach aphid selected in the above were cultured on a PDA (potato dextrose agar) medium for 2 weeks After inducing spore formation, spore suspension was prepared using 0.05% tween-80 and counted using a hemocytometer and used in the experiment. Survival rates of all the spores were 90% or more.

점박이응애 및 복숭아혹진딧물에 대한 생물검정은 과습된 탈지면이 포함된 90 mm 패트리디쉬에 지름 60 mm로 잘린 강낭콩(점박이응애), 배추(복숭아혹진딧물) 잎을 놓고, 그 위에 점박이응애 또는 복숭아혹진딧물 성충 10마리를 조심스럽게 올려놓은 후에 준비된 각 균주의 포자현탁액 1 ml (1 × 108 conidia/ml)을 SD tower sprayer를 사용하여 접종하였다. 접종 후, 24시간 간격으로 5일 동안 사충수를 매일 관찰하였다.The bioassay for spotted mite and peach aphid is carried out in a 90 mm Petri dish containing a humidified cotton wool and placed in a green bean (spotted mite), Chinese cabbage (aphid) leaf cut to a diameter of 60 mm, Ten adult aphids were carefully placed and 1 ml (1 × 10 8 conidia / ml) of spore suspension of each strain prepared was inoculated using an SD tower sprayer. After the inoculation, mushroom water was observed daily for 5 days at 24 hour intervals.

분리된 균주들을 이용하여 점박이응애와 복숭아혹진딧물 성충에 대한 생물검정을 실시하였고, 각 균주들의 살충률은 5일차에서 10 ~ 100%로 다양하게 나타났다. 구체적으로, 점박이응애 병원성 균주중 병원력이 높은 균주의 순서는 B. bassiana SD2R-4-7, B. bassiana SD2R-3-3-1, L. attenuatum SD4-1, M. anisopliae SD4-2, P. lilacinus SD2R-4-6, B. bassiana SD6, M. anisopliae SD2-2, C. rosea SD5-2순으로 8개 균주였으며, 복숭아혹진딧물 병원성 균주중 병원성이 높은 균주는 7균주로 L. attenuatum SD16(4-3), SDMp1, SDMp2, B. bassiana SD8(2-19-4), SD15(4-2), M. anisopliae SD3(1-5)와 M. flavoviride SD4(1-6)로 나타났다(표 2 및 3 참조).The isolates were used for biotest tests on the spotted mites and the peach aphid adults. The mortality rate of each strain varied from 10 to 100% at 5 days. Specifically, the order of the strains with high pathogenicity among the spot-borne pathogenic strains was B. bassiana SD2R-4-7, B. bassiana SD2R-3-3-1, L. attenuatum SD4-1, M. anisopliae SD4-2, P , 8 strains were sequenced in the order of lilacinus SD2R-4-6, B. bassiana SD6, M. anisopliae SD2-2, and C. rosea SD5-2. Among the pathogenic strains of the peach aphid pathogens, 7 strains were L. attenuatum SD16 (4-3), SDMpl, SDMp2, B. bassiana SD8 (2-19-4), SD15 (4-2), M. anisopliae SD3 (1-5) and M. flavoviride SD4 (See Tables 2 and 3).

본 생물검정의 결과로 분리된 점박이응애 또는 복숭아혹진딧물 병원성 곰팡이 균주의 포자는 그 자체로 점박이응애 또는 복숭아혹진딧물의 생물적 방제제로 이용될 수 있음을 확인하였다.As a result of this bioassay, spore isolates of the spider mite or peach aphid pathogenic fungi isolates themselves could be used as biological control agents for spotted mite or peach aphid.

본 발명에 사용된 점박이응애 병원성 곰팡이의 점박이응애에 대한 살비률The percentage of the spider mite pathogenic fungi used in the present invention to the spotted mite 균주명Strain name 살비률(%)Survival rate (%) LT50 (days)LT50 (days) Aspergillus flavusAspergillus flavus SD7SD7 5959 4.2 4.2 B. bassianaB. bassiana SD5-1SD5-1 5555 4.1 4.1 SD6SD6 6767 3.7 3.7 SD2R-3-3-1SD2R-3-3-1 7575 2.7 2.7 SD2R-4-5SD2R-4-5 6767 4.0 4.0 SD2R-4-7SD2R-4-7 8282 2.6 2.6 SDTuSDTu 5959 4.7 4.7 C. roseaC. rosea SD5-2SD5-2 6060 3.83.8 L. attenuatumL. attenuatum SD4-1SD4-1 100100 2.8 2.8 M. anisopliaeM. anisopliae SD2-2SD2-2 6969 3.8 3.8 SD4-2SD4-2 100100 2.9 2.9 P. lilacinusP. lilacinus SD2R-4-6SD2R-4-6 8484 3.1 3.1

본 발명에 사용된 복숭아혹진딧물 병원성 곰팡이의 복숭아혹진딧물에 대한 살충률The insecticidal rate of the peach aphid mildew of aphid mildew used in the present invention 균주명Strain name 살충률(%)Insecticide rate (%) LT50 (days)LT50 (days) Aspergillus sp.Aspergillus sp. SD6SD6 13.313.3 6.96.9 B. bassianaB. bassiana SD1SD1 73.373.3 4.54.5 SD2SD2 36.636.6 5.35.3 SD7SD7 7070 4.34.3 SD8SD8 8080 4.04.0 SD9SD9 51.651.6 4.84.8 SD10SD10 4545 5.15.1 SD12SD12 5050 4.84.8 SD14SD14 5555 4.34.3 SD15SD15 81.681.6 3.63.6 L. attenuatumL. attenuatum SD16SD16 100100 3.13.1 SDMp1SDMp1 100100 2.22.2 SDMp2SDMp2 98.398.3 3.13.1 M. anisopliaeM. anisopliae SD3SD3 100100 2.82.8 M. flavovirideM. flavoviride SD4SD4 93.393.3 3.73.7 P. lilacinusP. lilacinus SD5SD5 3535 N/DN / D SD11SD11 41.641.6 N/DN / D SD13SD13 23.323.3 N/DN / D SD17SD17 71.671.6 4.24.2 SD18SD18 6060 4.34.3 N/D, not determinedN / D, not determined

<실시예 3>&Lt; Example 3 >

곤충병원성 균주의 항진균 활성Antifungal activity of insect pathogenic strains

곤충병원성 균주의 항진균활성 검정은 PDA배지에 점박이응애 및 복숭아혹진딧물 병원성 곰팡이와 곰팡이 Botrytis cinerea의 각각의 포자 현탁액 5 ul (1×106 conidia/ml)를 30 mm 간격으로 접종하여 4일간 25℃ 암 조건으로 배양 후 두 곰팡이 간 생장저해능(clear zone)을 측정하였다.The antifungal activity of insect pathogenic strains was evaluated by inoculating 5 μl (1 × 10 6 conidia / ml) of spore mite and phytophthora infestant fungus and fungal Botrytis cinerea in PDA medium at 30 mm intervals for 4 days at 25 ° C After incubation under dark conditions, the clear zone of growth between two fungi was measured.

그 결과, 시험 수행한 29 개의 곤충병원성 곰팡이 중에서 약 69%에 해당하는 20개의 균주가 B. cinerea의 생장을 서로 다른 능력으로 억제하여 생장저해능(clear zone)을 형성하는 것을 관찰 할 수 있었다(도 1 참조).As a result, it was observed that about 20% of the 29 insect pathogenic fungi tested, which accounted for 69%, inhibited the growth of B. cinerea with different ability to form a clear zone 1).

20개의 항진균활성을 보이는 균주 중에서 15%에 해당하는 3개의 균주 B. bassiana SD2R-4-5, L. attenuatum SD4-1, B. bassiana SD15가 3 mm 이상의 높은 활성을, 65%에 해당하는 대다수의 균주가 1~3 mm 사이의 중간 활성을 보였으며 마지막으로 20%에 해당하는 4개의 균주 B. bassiana SD8, SD9; L. attenuatum SDMp2l P. lilacinus SD17는 낮은 활성을 보였다.
Among the strains showing 20 antifungal activities, 3 strains belonging to 15% B. bassiana SD2R-4-5, L. attenuatum SD4-1 and B. bassiana SD15 showed high activity of 3 mm or more and 65% Of strains showed intermediate activities between 1 and 3 mm, and finally, four strains of B. bassiana SD8, SD9, corresponding to 20%. L. attenuatum SDMp2l P. lilacinus SD17 showed low activity.

<실시예 4><Example 4>

곤충병원성 곰팡이의 항세균 활성Antibacterial activity of insect pathogenic fungi

항세균활성 검정은 점박이응애 및 복숭아혹진딧물 병원성 곰팡이의 포자 현탁액 5 ul (1×106 conidia/ml)를 PDA 배지 중앙에 접종하여 3일간 배양한 후, 비지(BG, 1 g casamino acid, 1 g yeast extract, 10 g peptone in 1000 ml distilled water, pH 7.4)배지에서 배양한 Bacillus cereus 현탁액(1×106 cfu/ml with 0.5% agar) 4 ml을 PDA 배지에 전체적으로 접종하였다. 그 후, 25℃에서 24시간 배양 후, 생장저해능(clear zone)을 측정하였다.Anti-bacterial activity test was performed by inoculating 5 μl (1 × 10 6 conidia / ml) of spore suspension of spotted mite and peach aphid pathogenic fungus to the center of PDA medium for 3 days, 4 ml of Bacillus cereus suspension (1 × 10 6 cfu / ml with 0.5% agar), which had been cultured in 10 g peptone in 1000 ml distilled water, pH 7.4, was inoculated in the PDA medium as a whole. Then, after culturing at 25 DEG C for 24 hours, a clear zone of growth was measured.

그 결과, 시험 수행한 29 개의 곤충병원성 곰팡이 중에서 약 83%에 해당하는 24개의 균주가 B. cereus의 생장에 서로 다른 능력으로 억제하여 생장저해능(clear zone)을 형성하는 것을 관찰 할 수 있었다(표 4 및 도 2참조).As a result, it was observed that 24 strains of about 29% of the 29 insect pathogenic fungi tested had different ability to grow B. cereus to form a clear zone (Table 4 and Fig. 2).

B. cereus의 생장에 서로 다른 능력으로 억제하여 생장저해능(clear zone)을 형성하는 24개의 균주Twenty-four strains that inhibit B. cereus growth by different abilities to form a clear zone 균주명Strain name Aspergillus sp. Aspergillus sp. SD6, SD7SD6, SD7 B. bassianaB. bassiana SD1, SD2, SD7, SD8, SD9, SD10, SD12, SD14, SD15, SD5-1, SD6, SD2R-3-3-1, SD2R-4-5, SD2R-4-7, SDTu SD1, SD2, SD7, SD8, SD9, SD10, SD12, SD14, SD15, SD5-1, SD6, SD2R-3-3-1, SD2R- L. attenuatumL. attenuatum SDMp2, SD4-1SDMp2, SD4-1 M. anisopliaeM. anisopliae SD3, SD2-2, SD4-2SD3, SD2-2, SD4-2 M. flavovirideM. flavoviride SD4SD4 P. lilacinusP. lilacinus SD13SD13

24개의 항세균활성을 보이는 균주 중에서 24%에 해당하는 7개의 균주가 20 mm 이상의 높은 활성을, 45%에 해당하는 13개의 균주가 10~20 mm 사이의 중간 활성을 보였으며 마지막으로 14%에 해당하는 4개의 균주는 낮은 활성을 보였다(표 5 참조). 이에 대한 상세한 결과는 하기 표 6 내지 7에 나타내었다.Of the 24 strains exhibiting antifungal activity, 24 strains exhibited high activity of 20 mm or more, and 45 strains of 13 strains exhibited intermediate activity between 10 and 20 mm. Finally, 14% The corresponding four strains showed low activity (see Table 5). The detailed results are shown in Tables 6 to 7 below.

활성 정도에 따른 균주Strain according to degree of activity 균주명Strain name 높은 항세균활성High antimicrobial activity B. bassianaB. bassiana SD5-1, SD2R-3-3-1, SD2R-4-5, SDTu, SD15 SD5-1, SD2R-3-3-1, SD2R-4-5, SDTu, SD15 M. anisopliaeM. anisopliae SD3SD3 Aspergillus sp. Aspergillus sp. SD6SD6 중간 항세균활성Intermediate antibacterial activity B. bassianaB. bassiana SD6, SD1, SD2, SD7, SD8, SD10, SD12, SD14SD6, SD1, SD2, SD7, SD8, SD10, SD12, SD14 L. attenuatumL. attenuatum SD4-1, SDMp2SD4-1, SDMp2 M. anisopliaeM. anisopliae SD4-2SD4-2 M. flavovirideM. flavoviride SD4SD4 낮은 항세균활성Low antimicrobial activity Aspergillus sp. Aspergillus sp. SD7, SD7, B. bassianaB. bassiana SD2R-4-7, SD9SD2R-4-7, SD9 P. lilacinusP. lilacinus SD13 SD13

<실시예 5>&Lt; Example 5 >

곤충병원성 곰팡이의 살충력과 항균활성Insecticidal and antimicrobial activity of insect pathogenic fungi

곤충병원성 곰팡이의 항균활성 검정 결과와 기존의 목적 해충에 대한 살충활성 결과를 통합하여 살충·항균활성을 동시에 가지는 균주를 선발한 결과, 점박이응애 병원성 곰팡이 균주에서는 8개, 복숭아혹진딧물 병원성 곰팡이 균주에서는 11개를 선발할 수 있었다(표 6 및 7 참조). As a result of selecting the strains which have both insecticidal and antimicrobial activities by integrating the results of the antimicrobial activity test of the insect pathogenic fungi and the insecticidal activity results of the existing target insect pests, 8 strains were found in the spider mite pathogenic fungi strains, 8 strains were found in the fungal pathogenic fungus strains Eleven can be selected (see Tables 6 and 7).

이를 바탕으로 목적 해충에 병원력이 높고 항균활성이 뛰어난 점박이응애 병원성 곰팡이 B. bassiana SD2R-4-5, M. anisopliae SD4-2를 선발하였고, 복숭아혹진딧물 병원성 곰팡이 B. bassiana SD15, L. attenuatum SDMp2를 선발하여 다음 실험에 이용하였다.Based on the results, B. bassiana SD2R-4-5 and M. anisopliae SD4-2 were selected as the pathogenic fungi of the present invention, and B. bassiana SD15, L. attenuatum SDMp2 Were selected and used for the next experiment.

점박이응애 병원성 곰팡이의 점박이응애에 대한 살비력과 항균능력Antibacterial and Antifungal Activity against Spotted Mite of Spotted Mature Pathogenic Fungi 균주명Strain name 살비률(%)Survival rate (%) LT50 (days)LT 50 (days) 항균활성 (Clear zone, mm)Antimicrobial activity (Clear zone, mm) 항세균(± SE)Antibacterial (± SE) 항진균(± SE)Antifungal (± SE) Aspergillus flavusAspergillus flavus SD7SD7 5959 4.2 4.2 7.3 ± 0.27.3 ± 0.2 0 ± 00 ± 0 B. bassianaB. bassiana SD5-1SD5-1 5555 4.1 4.1 21 ± 0.821 ± 0.8 2.6 ± 0.42.6 ± 0.4 SD6SD6 6767 3.7 3.7 16.4 ± 0.216.4 ± 0.2 2.1 ± 0.12.1 ± 0.1 SD2R-3-3-1SD2R-3-3-1 7575 2.7 2.7 21 ± 0.321 ± 0.3 1.3 ± 0.31.3 ± 0.3 SD2R-4-5SD2R-4-5 6767 4.0 4.0 25.7 ± 0.525.7 ± 0.5 3.3 ± 0.33.3 ± 0.3 SD2R-4-7SD2R-4-7 8282 2.6 2.6 6.5 ± 0.36.5 ± 0.3 0 ± 00 ± 0 SDTuSDTu 5959 4.7 4.7 20.3 ± 0.220.3 ± 0.2 2.4 ± 0.62.4 ± 0.6 C. roseaC. rosea SD5-2SD5-2 6060 3.83.8 N/DN / D N/DN / D L. attenuatumL. attenuatum SD4-1SD4-1 100100 2.8 2.8 12.6 ± 0.312.6 ± 0.3 4.1 ± 0.54.1 ± 0.5 M. anisopliaeM. anisopliae SD2-2SD2-2 6969 3.8 3.8 23.2 ± 0.423.2 ± 0.4 2.0 ± 0.92.0 ± 0.9 SD4-2SD4-2 100100 2.9 2.9 14.7 ± 0.414.7 ± 0.4 1.8 ± 0.31.8 ± 0.3 P. lilacinusP. lilacinus SD2R-4-6SD2R-4-6 8484 3.1 3.1 0 ± 00 ± 0 0 ± 00 ± 0 N/D, not determinedN / D, not determined

복숭아혹진딧물 병원성 곰팡이의 복숭아혹진딧물에 대한 살충력과 항균활성Insecticidal and antimicrobial activity against peach aphid of peach aphid pathogenic fungus 균주명Strain name 살충력(%)Insecticide (%) LT50 (days)LT 50 (days) 항균활성 (Clear zone, mm)Antimicrobial activity (Clear zone, mm) 항세균(± SE)Antibacterial (± SE) 항진균(± SE)Antifungal (± SE) Aspergillus sp. Aspergillus sp. SD6SD6 13.313.3 6.96.9 14.5 ± 1.414.5 ± 1.4 0 ± 00 ± 0 B. bassianaB. bassiana SD1SD1 73.373.3 4.54.5 13.0 ± 0.313.0 ± 0.3 2.3 ± 0.42.3 ± 0.4 SD2SD2 36.636.6 5.35.3 16.9 ± 0.416.9 ± 0.4 0 ± 00 ± 0 SD7SD7 7070 4.34.3 15.3 ± 0.315.3 ± 0.3 2.5 ± 0.12.5 ± 0.1 SD8SD8 8080 4.04.0 10.2 ± 0.510.2 ± 0.5 0.5 ± 0 0.5 ± 0 SD9SD9 51.651.6 4.84.8 7.5 ± 0.57.5 ± 0.5 0.2 ± 0.20.2 ± 0.2 SD10SD10 4545 5.15.1 12.6 ± 0.412.6 ± 0.4 1.8 ± 0.11.8 ± 0.1 SD12SD12 5050 4.84.8 10.5 ± 0.710.5 ± 0.7 2.4 ± 0.22.4 ± 0.2 SD14SD14 5555 4.34.3 12.1 ± 0.412.1 ± 0.4 1.0 ± 0.11.0 ± 0.1 SD15SD15 81.681.6 3.63.6 21.1 ± 0.621.1 ± 0.6 5.2 ± 0.35.2 ± 0.3 L. attenuatumL. attenuatum SD16SD16 100100 3.13.1 N/DN / D N/DN / D SDMp1SDMp1 100100 2.22.2 0 ± 00 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 SDMp2SDMp2 98.398.3 3.13.1 11.6 ± 0.111.6 ± 0.1 0.6 ± 0.20.6 ± 0.2 M. anisopliaeM. anisopliae SD3SD3 100100 2.82.8 33.4 ± 0.533.4 ± 0.5 1 ± 0 1 ± 0 M. flavovirideM. flavoviride SD4SD4 93.393.3 3.73.7 13.8 ± 1.013.8 ± 1.0 0 ± 0 0 ± 0 P. lilacinusP. lilacinus SD5SD5 3535 N/DN / D N/DN / D N/DN / D SD11SD11 41.641.6 N/DN / D 0 ± 00 ± 0 0 ± 0 0 ± 0 SD13SD13 23.323.3 N/DN / D 6.6 ± 1.46.6 ± 1.4 2 ± 0.62 ± 0.6 SD17SD17 71.671.6 4.24.2 0 ± 0 0 ± 0 0.2 ± 0.20.2 ± 0.2 SD18SD18 6060 4.34.3 0 ± 00 ± 0 0 ± 00 ± 0 N/D, not determinedN / D, not determined

<실시예 6>&Lt; Example 6 >

곤충병원성 곰팡이 배양액의 항균활성Antimicrobial activity of insect pathogenic fungi

상기 실시예 5에서 선발된 곤충병원성 곰팡이 배양액의 항균활성을 확인하기 위한 배양액 생산은 2주간 배양된 곰팡이 표면을 긁어 수확된 포자를 hemocytometer를 이용하여 계수하고, 얻어진 포자현탁액을 30 ml의 PDB (patato dextrose broth)배지가 들어있는 100 ml flask (1.5 × 103 conidia/ml)에 접종 하고 25℃, 150 rpm으로 10일간 배양 후 원심 분리 및 필터링 하였다. 얻어진 배양액은 항균활성 실험 전 항진균활성 검정에 이용되는 배양액은 pH 5.6, 항세균활성 검정에 이용되는 배양액은 pH 7.4로 각각 보정하여 실험에 이용하였다.In order to confirm the antimicrobial activity of the insect pathogenic fungus culture liquid selected in Example 5, spores harvested by scraping the fungus surface cultured for 2 weeks were counted using a hemocytometer, and the resulting spore suspension was inoculated into 30 ml of PDB dextrose broth) inoculated in 100 ml flask (1.5 × 10 3 conidia / ml) containing culture medium and 25 ℃, after 10 days incubation at 150 rpm centrifugation and was filtered. The culture broth was used for the antifungal activity test before the experiment. The culture solution used for the antifungal activity assay was adjusted to pH 5.6, and the culture solution used for the antibacterial activity assay was adjusted to pH 7.4.

대치배양으로 선발된 균주 배양액의 항진균활성 검정은 B. cinerea의 포자를 PDB (pH 5.6)배지를 이용하여 만든 현탁액을 약 2 × 104 conidia/ml이 되도록 조절한 후, 96 well plate에 100 ul를 접종하였다. 그 후, PDB배지에 1%, 10%, 20%, 40%, 60%, 80%, 100% 희석된 곰팡이 균주의 배양액 100 ul를 접종하여 22℃에서 48시간 배양 후 595 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조구는 100 ul의 PDB배지에 1%, 10%, 20%, 40%, 60%, 80%, 100% 희석된 멸균수를 사용하였다. The antifungal activity of B. cinerea sp. Was adjusted to about 2 × 10 4 conidia / ml by using PDB (pH 5.6) medium, and then 100 μl . Subsequently, 100 μl of a culture of the fungal strain diluted with 1%, 10%, 20%, 40%, 60%, 80% and 100% was inoculated into the PDB medium and cultured at 22 ° C. for 48 hours and then the absorbance was measured at 595 nm Respectively. The control was sterilized with 1%, 10%, 20%, 40%, 60%, 80% and 100% diluted in 100 μl of PDB medium.

대치배양으로 선발된 균주 배양액의 항세균활성 검정은 B. cereus를 비지(BG) 배지에 약 5 105 CFU/ml이 되도록 조절한 후, 96 well plate에 100 ul접종하였다. 그 후, PDB (pH 7.4)배지에 1%, 10%, 20%, 40%, 60%, 80%, 100% 희석된 곰팡이 균주의 배양액 100 ul를 접종하여 25℃에서 16시간 배양 후 650 nm에서 흡광도를 측정하였다. 대조구는 100 ul의 PDB배지에 1%, 10%, 20%, 40%, 60%, 80%, 100% 희석된 멸균수를 사용하였다.Bacterial activity of B. cereus was adjusted to about 5 105 CFU / ml in BG medium and 100 μl was inoculated in a 96-well plate. Subsequently, 100 μl of a culture solution of fungal strains diluted with 1%, 10%, 20%, 40%, 60%, 80% and 100% was inoculated into the PDB (pH 7.4) medium and cultured at 25 ° C for 16 hours. The absorbance was measured. The control was sterilized with 1%, 10%, 20%, 40%, 60%, 80% and 100% diluted in 100 μl of PDB medium.

그 결과 실험에 이용된 4개 균주(점박이응애 병원성 곰팡이 B. bassiana SD2R-4-5, M. anisopliae SD4-2, 복숭아혹진딧물 병원성 곰팡이 B. bassiana SD15, L. attenuatum SDMp2) 배양액 모두 각기 다른 능력으로 미생물 생장을 억제하는 것이 확인되었고, 본 실험에 이용된 균주는 각각의 미생물에 항균활성 물질을 만들어내는 것을 다시 확인되어, 이를 이용하여 다양한 미생물 방제가 실제로 가능할 것으로 판단되었다(도 3 참조).
As a result, the four strains used in the experiment ( B. bassiana SD2R-4-5, M. anisopliae SD4-2, B. bassiana SD15, and L. attenuatum SDMp2) , And it was confirmed that the strain used in the present experiment was able to produce an antimicrobial active substance in each microorganism, and it was judged that various microbial control could be practically practiced using the microorganism (see FIG. 3).

상기 실시예의 결과에 의해 점박이응애 또는 복숭아혹진딧물 각각에 높은 병원성을 가지고 동시에 세균과 곰팡이에 항균활성을 가지는 곤충병원성 곰팡이 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2(수탁번호: KACC93228P), 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15(수탁번호: KACC93229P)는 2015년 5월 22일자로 국립농업과학원 농업유전자원센터에 기탁하였다.
According to the results of the above examples, the insect pathogenic fungus Metarhizium anisopliae SD4-2 (accession number: KACC93228P), which has a high pathogenicity to each of the spotted mite or peach aphid and has antibacterial activity against bacteria and fungi, , And Beauveria bassiana SD15 (accession number: KACC93229P) deposited on May 22, 2015 with the National Institute of Agricultural Science and Technology Center for Agricultural Genetic Resources.

이제까지 본 발명에 대하여 그 바람직한 실시예들을 중심으로 살펴보았다. 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 본 발명이 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 변형된 형태로 구현될 수 있음을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 개시된 실시예들은 한정적인 관점이 아니라 설명적인 관점에서 고려되어야 한다. 본 발명의 범위는 전술한 설명이 아니라 특허청구범위에 나타나 있으며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 차이점은 본 발명에 포함된 것으로 해석되어야 할 것이다.The present invention has been described with reference to the preferred embodiments. It will be understood by those skilled in the art that various changes in form and details may be made therein without departing from the spirit and scope of the invention as defined by the appended claims. Therefore, the disclosed embodiments should be considered in an illustrative rather than a restrictive sense. The scope of the present invention is defined by the appended claims rather than by the foregoing description, and all differences within the scope of equivalents thereof should be construed as being included in the present invention.

농업생명공학연구원Agricultural Biotechnology Research Institute KACC93228KACC93228 2015052220150522 농업생명공학연구원Agricultural Biotechnology Research Institute KACC93229KACC93229 2015052220150522

Claims (8)

해충방제능을 갖는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주(기탁번호 KACC93228P) 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주(기탁번호 KACC93229P). Metarhizium anisopliae SD4-2 strain (Accession No. KACC93228P) or Beauveria bassiana SD15 strain (Accession No. KACC93229P) having pest control ability. 제1항에 있어서,
상기 균주는 점박이응애 또는 복숭아혹진딧물을 방제할 수 있는 것을 특징으로 하는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주(기탁번호 KACC93228P) 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주(기탁번호 KACC93229P).The method according to claim 1,
Wherein the strain is selected from the group consisting of Metarhizium anisopliae SD4-2 strain (Accession No. KACC93228P) or Beauveria bassiana SD15 strain (strain KACC93228P), which is capable of controlling spotted mite or peach aphid Accession No. KACC93229P). 제1항에 있어서,
상기 균주는 항진균능 또는 항세균능을 갖는 것을 특징으로 하는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주(기탁번호 KACC93228P) 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주(기탁번호 KACC93229P).The method according to claim 1,
The strain is a strain of Metarhizium anisopliae SD4-2 (Accession No. KACC93228P) or a strain of Beauveria bassiana SD15 (Accession No. KACC93229P) which is characterized by having antifungal or antibacterial activity ). 제1항에 있어서,
상기 균주는 곤충병원성 곰팡이로부터 분리한 것을 특징으로 하는 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주(기탁번호 KACC93228P) 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주(기탁번호 KACC93229P).The method according to claim 1,
The strain is isolated from an insect pathogenic fungus, a strain of Metarhizium anisopliae SD4-2 (Accession No. KACC93228P) or a strain of Beauveria bassiana SD15 (Accession No. KACC93229P). 제1항의 메타리지움 아니소필리애(Metarhizium anisopliae) SD4-2 균주 또는 뷰베리아 바시아나(Beauveria bassiana) SD15 균주, 상기 균주의 배양물, 상기 배양물의 농축물 및 상기 배양물의 건조물로 이루어지는 군 중에서 선택되는 1종 이상을 유효성분으로 포함하는 해충방제용 조성물.A strain of the strain of Metarhizium anisopliae SD4-2 or a strain of Beauveria bassiana SD15 according to claim 1, a culture of the strain, a concentrate of the culture and a dried product of the culture And at least one selected as an active ingredient. 제5항의 해충방제용 조성물을 해충이 번식한 지역에 살포하는 단계를 포함하는 해충방제방법. A pest control method comprising the step of spraying the pest control composition of claim 5 in a pest-breeding area. 제6항에 있어서,
상기 지역은 토양 또는 작물인 것을 특징으로 하는 해충방제방법.The method according to claim 6,
Wherein said area is a soil or a crop. 제7항에 있어서,
상기 기주는 가지, 고추, 배, 복숭아, 사과, 오이, 장미, 벚, 돈나무, 해당화, 매실, 초피나무, 귤, 감자, 담배, 목화, 사철나무, 협죽도, 작살나무, 구기자나무, 참오동나무, 살구나무, 자두나무 및 고욤나무인 것을 특징으로 하는 해충방제방법.8. The method of claim 7,
The host is a tree, a red pepper, a pear, a peach, an apple, a cucumber, a rose, a cherry tree, a Japanese quince tree, a plum tree, a plum tree, a tangerine, a potato, a cigarette, , Apricot tree, plum tree, and gomoma tree.
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