KR20160121636A - 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물 - Google Patents

포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물 Download PDF

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KR20160121636A KR1020150050118A KR20150050118A KR20160121636A KR 20160121636 A KR20160121636 A KR 20160121636A KR 1020150050118 A KR1020150050118 A KR 1020150050118A KR 20150050118 A KR20150050118 A KR 20150050118A KR 20160121636 A KR20160121636 A KR 20160121636A
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김창덕
최대경
김동일
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충남대학교산학협력단
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Abstract

본 발명은 포공영(Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt), 어성초(Heartleaf Houttuynia), 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer) 및 유근피(root bark of Ulmus davidiana)의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물이 세포독성을 나타내지 않고, 피부 각질 세포막을 구성하는 단백질인 인볼루크린(involucrin) 및 로리크림(loricrin)의 발현을 증가시키며, 세포 증식을 촉진하고, 마우스에 처리하였을 때 피부의 수분 손실을 억제함을 확인함으로써, 본 발명의 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물이 피부 보습 개선용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하였다.

Description

포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물{Cosmetic composition for skin moisturizing comprising the extract of Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt, Heartleaf Houttuynia, Glycyrrhiza uralensis Fischer, root bark of Ulmus davidiana}
본 발명은 포공영(Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt), 어성초(Heartleaf Houttuynia), 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer) 및 유근피(root bark of Ulmus davidiana)의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.
피부는 인체의 가장 바깥층에 존재하는 신체 조직으로 외부 환경과 내부 신체 조직 사이의 장벽 역할을 하며 외부의 화학물질, 병원균 및 UV 등으로부터 조직을 보호하고 있다. 표피(epidermis)는 케라틴세포(keratinocytes) 및 멜라닌세포(melanocytes)와 같은 다양한 세포로 구성된 다층의 상피세포로서, 이러한 보호기능에 핵심적인 역할을 하고 있다. 케라틴세포는 분화(differentiation) 과정을 통해 피부 보호 물질을 생성해내며, 세포 주기(cell cycle) 억제 과정 및 많은 유전자의 발현 개시와 밀접한 관련을 가지고 있다. 예를 들어, 케라틴 5(keratin 5) 및 케라틴 14(keratin 14)의 발현이 감소되면, 케라틴 1(keratin 1), 케라틴 10(keratin 10), 인볼루크린(involucrin), 로리크린(loricrin) 및 필라그린(filaggrin)과 같은 분화 관련 유전자의 발현이 시간에 따라 증가하게 된다. 케라틴세포의 분화 조절에 장애가 생기게 되면, 이는 피부 장벽의 기능 및 면역 반응의 악화를 유발하며 건선(psoriasis) 및 아토피(atopic dermatitis)와 같은 피부 질환으로 이어진다. 현재 사이클로스포린 A(cyclosporine A), 타크로리무스(tacrolimus) 및 피메클로리무스(pimecrolimus) 와 같은 면역성 약제가 세계적으로 피부 분화 관련 질환의 약제로 시판되었으며, 피부 보습이 관련 질환 및 피부 질감에 긍정적인 효과를 준다고 알려져 있다. 케라틴세포의 분화에서 세포 외피의 필라그린은 천연보습인자(natural moisturizing factor)을 생성함으로써, 피부 건강을 유지하는 역할을 하고 있다. 그러므로, 케라틴 세포 분화 연구의 발전은 피부 분화 관련 질환 치료제 및 치료 요법의 발전 가능성을 높일 수 있을 것이다.
이러한 피부 질환을 해결하기 위해, 최근 많은 약용 식물들이 약제 및 화장료 원료로 개발되고 있다. 약용 식물의 종류는 무수히 많지만, 화장료 조성료로 이용되고 연구되고 있는 약용 식물은 아직 일부분으로 알려져 있다. 약용 식물의 연구는 피부 질환 치료 및 화장료 원료 개발에 있어서 매우 높은 가능성을 지니고 있으며, 이를 이용한 체계적인 연구 수행이 필요하다.
포공영은 우리나라에서는 국화과의 민들레(Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt) 또는 동속 식물의 전초를 지칭하며, 냄새가 거의 없고, 맛은 쓰고 달다. 열독을 내리고 종기를 삭히는 약으로 종창, 유방염, 인후염, 옹종(맹장염, 폐농양, 복막염)에 쓰이며, 안구충혈, 급성간염, 황달, 열로 인해 소변을 보지 못하는 증상에 사용한다. 또한, 약리작용으로 억균작용, 면역기능강화, 담즙분비작용, 간기능보호작용, 이뇨작용이 보고되었다.
어성초(Heartleaf Houttuynia)는 삼백초과로, 우리나라의 제주도와 울릉도를 비롯한 남부지방의 산속 그늘지고 물기가 많은 땅에 자라는 여러해살이풀의 지상부이다. 약리작용으로는 항균작용이 있어, 황색포도상구균, 용혈성연쇄상구균등의 발육을 억제하며, 면역기능 증강효과, 항염증작용, 이뇨작용, 진해작용, 만성기관지염 등에 효과가 있다. 화장료로는 피지분비 억제 및 항균, 소취, 염증억제 효과등이 알려져 있다.
감초(Glycyrrhiza)는 콩과 다년생 초본식물로 항염증, 항알레르기, 항균효과가 우수하고 피부탄력, 주름개선, 피부 보습 효과와 밀접한 관련이 있는 콜라겐 합성 및 히아론산 합성 증진효과가 우수하다. 감초의 생리활성 성분으로는 글리시리친(Glycyrrhizin), 후라보노이드(Flavonoid), 마니톨(mannitol) 등이다.
유근피(Ulmus davidiana)는 느릅나무의 뿌리껍질을 말하며, 느릅나무줄기의 껍질은 유백피(楡白皮)라고 하여 구분된다. 우리나라 중부와 북부지방의 산골짜기나 물가에 흔히 자라며, 이른 봄이나 가을에 뿌리껍질을 벗겨 약으로 쓰여왔다. 동의보감에서는 느릅나무가 성질이 평하고 맛이 달며 독이 없어 부드러워 대소변을 잘 통하게 하고 장, 위의 사열을 없애 장염에 효과적이며, 각종 종창과 비위 질환에 효과적이면서도 중독성이 없어 장복해도 무방한 것으로 기록되어있다.
이에 본 발명자들은 약용 식물을 이용하여 경제적이며, 부작용이 적은 피부 보습 개선용 조성물을 개발하기 위해 노력하던 중, 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물이 세포독성을 나타내지 않고, 피부 각질 세포막을 구성하는 단백질인 인볼루크린(involucrin) 및 로리크림(loricrin)의 발현을 증가시키며, 세포 증식을 촉진하고, 마우스에 처리하였을 때 피부의 수분 손실을 억제함을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 포공영(Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt), 어성초(Heartleaf Houttuynia), 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer) 및 유근피(root bark of Ulmus davidiana)의 혼합물을 함유하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 포공영(Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt), 어성초(Heartleaf Houttuynia), 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer) 및 유근피(root bark of Ulmus davidiana)의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 피부외용제를 제공한다.
본 발명은 포공영(Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt), 어성초(Heartleaf Houttuynia), 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer) 및 유근피(root bark of Ulmus davidiana)의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물에 관한 것으로, 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물이 세포독성을 나타내지 않고, 피부 각질 세포막을 구성하는 단백질인 인볼루크린(involucrin) 및 로리크림(loricrin)의 발현을 증가시키며, 세포 증식을 촉진하고, 마우스에 처리하였을 때 피부의 수분 손실을 억제함을 확인함으로써, 본 발명의 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물이 피부 보습 개선용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 혼합 생약제 추출물의 세포 독성을 나타낸 도이다:
CTL: 대조군; 및
ECMP: 혼합 생약제 추출물.
도 2는 혼합 생약제 추출물을 처리한 SV-HEKs 세포의 피부 세포막 구성 단백질의 발현을 나타낸 도이다.
CTL: 대조군;
Ca2 +: 칼슘; 및
ECMP: 혼합 생약제 추출물.
도 3은 혼합 생약제 추출물을 처리한 SV-HEKs 세포의 인볼루크린린(involucrin) 프로모터 활성을 나타낸 도이다.
CTL: 대조군;
Ca2 +: 칼슘; 및
ECMP: 혼합 생약제 추출물.
도 4는 혼합 생약제 추출물을 처리한 SV-HEKs 세포의 로리크린(loricrin) 프로모터 활성을 나타낸 도이다.
CTL: 대조군;
Ca2 +: 칼슘; 및
ECMP: 혼합 생약제 추출물.
도 5는 혼합 생약제 추출물을 처리한 SV-HEKs 세포의 세포 증식을 나타낸 도이다.
CTL: 대조군;
Ca2 +: 칼슘; 및
ECMP: 혼합 생약제 추출물.
도 6은 마우스의 피부 조직에 혼합 생약제 추출물을 도포한 후 피부 기능 회복 측정을 나타낸 도이다.
Vehicle: 대조군; 및
ECMP: 혼합 생약제 추출물.
도 7은 마우스의 피부 조직에 혼합 생약제 추출물을 처리한 후 면역염색법을 이용하여 케라틴 결합단백질 발현을 나타낸 도이다.
Vehicle: 대조군; 및
ECMP: 혼합 생약제 추출물.
이하 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 포공영(Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt), 어성초(Heartleaf Houttuynia), 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer) 및 유근피(root bark of Ulmus davidiana)의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 추출에 있어서, 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물의 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올은 C1 내지 C2 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올 또는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 추출용매를 포공영, 어성초, 감초 및 유근피를 혼합한 분량에 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 4 내지 6배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출온도는 20 내지 100℃ 인 것이 바람직하고, 20 내지 40℃ 인 것이 더욱 바람직하고, 실온인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 10 내지 48시간 인 것이 바람직하며, 15 내지 30시간 인 것이 더욱 바람직하고, 24시간 인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러 추출 횟수는 1 내지 5회 인 것이 바람직하며, 3 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회 인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하는 것은 아니다. 또한, 상기 혼합 추출물은 포공영, 어성초, 감초 및 유근피를 혼합하여 추출하는 것을 특징으로 하고 있으나, 상기 포공영, 어성초, 감초 및 유근피에 대한 각각의 추출물을 제조하여 이를 혼합하여도 무방하다.
또한, 상기 방법에 있어서, 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한, 상기 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합물은 전체 혼합물 100 중량부에 대하여, 포공영 25 내지 40 중량부, 어성초 25 내지 40 중량부, 감초 10 내지 20 중량부 및 유근피 10 내지 20 중량부를 포함하는 것이 바람직하고, 포공영 30 내지 38 중량부, 어성초 30 내지 38 중량부, 감초 13 내지 18 중량부 및 유근피 13 내지 18 중량부로 포함하는 것이 더욱 바람직하며, 포공영 32 내지 35 중량부, 어성초 32 내지 35 중량부, 감초 15 내지 17 중량부 및 유근피 15 내지 17 중량부로 포함하는 것이 가장 바람직하다.
또한, 상기 조성물은 각질 세포 분화를 촉진하는 것을 특징으로 한다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합물을 분쇄하여 물 및 알코올의 혼합용매를 이용하여 열수추출 후 동결건조하여 추출물을 수득하였으며, 수득된 혼합 추출물을 SV-HEKx 세포에 처리하여 세포 독성이 나타나지 않음을 확인하였다(도 1 참조). 또한, SV-HEKx 세포에 상기 혼합 추출물을 처리하여 인볼루크린 및 로리크린의 단백질 발현이 증가하고, 프로모터 활성이 증가하여 세포 분화가 촉진됨을 확인하였으며(도 2, 도 3 및 도 4 참조), 혼합 추출물을 처리한 세포의 성장이 칼슘을 처리한 양성대조군과 유사함을 확인하였다(도 5 참조). 또한, 상기 혼합 추출물을 처리한 마우스의 피부 조직에서 수분 손실 회복이 촉진되며(도 6 참조), 케라틴 결합단백질의 발현이 증가함을 확인하였다(도 7 참조). 따라서, 본 발명의 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물이 피부 보습 개선용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 구체적으로는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염(티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체(아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 구체적으로는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E (d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 및, 그들의 유도체(팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산 dl-알파 토코페롤, 니코틴산 dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등)를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 상기 고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 구체적으로 콜라겐, 가수분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴 또는 케라틴이나 이에 한정되지 않는다. 상기 고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 구체적으로는 히드록시에틸 셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등)이나 이에 한정되지 않는다. 상기 스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 구체적으로 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질이나 이에 한정되지 않는다. 상기 해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 구체적으로 갈조 엑기스, 홍조 엑기스 또는 녹조 엑기스, 구체적으로 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨 또는 아르긴산칼륨이나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 화장료 조성료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합할 수 있다. 상기 다른 성분으로서 구체적으로는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제 또는 정제수이나 이에 한정되지 않는다. 상기 유지 성분으로서 구체적으로는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지 또는 식물 유지를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 에스테르계 유지로서 구체적으로는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴 또는 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계이나 이에 한정되지 않는다.
상기 탄화 수소계 유지로서 구체적으로는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스 또는 와셀린 등의 탄화 수소계 유지이나 이에 한정되지 않는다. 상기 실리콘계 유지로서 구체적으로는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유 또는 아미노 변성 실리콘유이나 이에 한정되지 않는다. 상기 불소계 유지로서 구체적으로 퍼플루오로폴리에테르이나 이에 한정되지 않는다. 상기 동물 또는 식물 유지로서 구체적으로 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린 또는 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지이나 이에 한정되지 않는다.
상기 보습제로서 구체적으로 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자 또는 지용성 고분자이나 이에 한정되지 않는다. 수용성 저분자 보습제로서는 구체적으로 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n=2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n=2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n=2 이상), 락트산 또는 락트산염이나 이에 한정되지 않는다. 지용성 저분자 보습제로서는 구체적으로 콜레스테롤 또는 콜레스테롤에스테르이나 이에 한정되지 않는다. 수용성 고분자로서는 구체적으로 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산 또는 덱스트린이나 이에 한정되지 않는다. 지용성 고분자로서는 구체적으로 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르 또는 고분자 실리콘이나 이에 한정되지 않는다. 에몰리엔트제로서는 구체적으로 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산 또는 라놀린지방산콜레스테릴에스테르이나 이에 한정되지 않는다.
상기 계면 활성제로서 구체적으로는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제 또는 양성 계면 활성제이나 이에 한정되지 않는다. 비이온성 계면 활성제로서는 구체적으로 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드또는 수소첨가대두인지질이나 이에 한정되지 않는다. 음이온성 계면 활성제로서는 구체적으로 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인삼염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염 또는 퍼플루오로알킬인산에스테르이나 이에 한정되지 않는다. 양이온성 계면 활성제로서는 구체적으로 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드 또는 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염이나 이에 한정되지 않는다. 양성 계면 활성제로서는 구체적으로 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염형, 이미다졸린 유도체형 또는 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제이나 이에 한정되지 않는다.
상기 유기 및 무기 안료로서 구체적으로는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료이나 이에 한정되지 않는다.
상기 유기 분체로서 구체적으로는 스테아르산칼슘 등의 금속비누; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산; 또는 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌이나 이에 한정되지 않는다.
상기 자외선 흡수제로서 구체적으로는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert -부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p -(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진 또는 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸이나 이에 한정되지 않는다.
상기 살균제로서 구체적으로는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소301호, 모노니트로과이어콜나트륨 또는 운데시렌산이나 이에 한정되지 않는다.
상기 산화 방지제로서 구체적으로는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필 또는 엘리소르빈산이나 이에 한정되지 않는다.
상기 pH 조정제로서 구체적으로는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨 또는 인산일수소나트륨이나 이에 한정되지 않는다.
상기 알코올로서 구체적으로는 세틸알코올 등의 고급 알코올이나 이에 한정되지 않는다.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 구체적으로는 총중량에 대하여 0.01 ~ 5% 중량 백분율로 배합되는 것이고, 더욱 구체적으로는 0.01 ~ 3% 중량 백분율로 배합되는 것이나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 화장료 조성물은 용액, 유화물 또는 점성형 혼합물의 형상을 취할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 본 발명의 포공영, 어성초, 감초 및 포공영 혼합 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액 또는 모발화장료로 제조될 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 또는 바디클린저의 제형을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연이 이용될 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트가 이용될 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르가 이용될 수 있으나 이에 한정되지 않는다.
본 발명은 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환 예방 및 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
상기 추출에 있어서, 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물의 추출용매는 물, 알코올 또는 이들의 혼합물을 사용하는 것이 바람직하다. 상기 알코올은 C1 내지 C2 저급 알코올을 이용하는 것이 바람직하며, 저급 알코올 또는 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하다. 추출방법으로는 진탕추출, Soxhlet 추출 또는 환류 추출을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 상기 추출용매를 포공영, 어성초, 감초 및 유근피를 혼합한 분량에 1 내지 10배 첨가하여 추출하는 것이 바람직하고, 4 내지 6배 첨가하여 추출하는 것이 더욱 바람직하다. 추출온도는 20 내지 100℃ 인 것이 바람직하고, 20 내지 40℃ 인 것이 더욱 바람직하고, 실온인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출시간은 10 내지 48시간 인 것이 바람직하며, 15 내지 30시간 인 것이 더욱 바람직하고, 24시간 인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하지 않는다. 아울러 추출 횟수는 1 내지 5회 인 것이 바람직하며, 3 내지 4회 반복 추출하는 것이 더욱 바람직하고, 3회 인 것이 가장 바람직하나, 이에 한정하는 것은 아니다. 또한, 상기 혼합 추출물은 포공영, 어성초, 감초 및 유근피를 혼합하여 추출하는 것을 특징으로 하고 있으나, 상기 포공영, 어성초, 감초 및 유근피에 대한 각각의 추출물을 제조하여 이를 혼합하여도 무방하다.
또한, 상기 방법에 있어서, 감압농축은 진공감압농축기 또는 진공회전증발기를 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다. 또한, 건조는 감압건조, 진공건조, 비등건조, 분무건조 또는 동결건조하는 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
또한, 상기 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합물은 전체 혼합물 100 중량부에 대하여, 포공영 25 내지 40 중량부, 어성초 25 내지 40 중량부, 감초 10 내지 20 중량부 및 유근피 10 내지 20 중량부를 포함하는 것이 바람직하고, 포공영 30 내지 38 중량부, 어성초 30 내지 38 중량부, 감초 13 내지 18 중량부 및 유근피 13 내지 18 중량부로 포함하는 것이 더욱 바람직하며, 포공영 32 내지 35 중량부, 어성초 32 내지 35 중량부, 감초 15 내지 17 중량부 및 유근피 15 내지 17 중량부로 포함하는 것이 가장 바람직하다.
또한, 상기 피부질환은 건선, 아토피 피부염, 전신 홍반성 낭창, 접촉성 피부염, 알레르기성 피부질환, 여드름, 좌창 및 두드러기인 것이 바람직하나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 구체적인 실시예에서, 본 발명자들은 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합물을 분쇄하여 물 및 알코올의 혼합용매를 이용하여 열수추출 후 동결건조하여 추출물을 수득하였다. 수득된 혼합 추출물을 SV-HEKx 세포에 처리하였을 때 세포독성이 나타나지 않고(도 1 참조), 피부 각질 세포막을 구성하는 인볼루크린 및 로리크린의 단백질 발현 및 프로모터 활성이 증가하여 세포 분화가 촉진되며(도 2, 도 3 및 도 4 참조), 혼합 추출물을 처리한 세포의 성장이 칼슘을 처리한 양성대조군과 유사함을 확인하였다(도 5 참조). 또한, 상기 혼합 추출물을 마우스에 처리 하였을 때 피부의 수분 손실을 억제하고(도 6 참조), 케라틴 결합단백질의 발현이 증가함을 확인하였다(도 7 참조). 따라서, 본 발명의 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물이 피부 보습 개선용 화장료 조성물로 유용하게 사용될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있다. 발명의 용어 "약학적으로 허용 가능한"이란 상기 조성물에 노출되는 세포나 인간에게 독성이 없는 특성을 나타내는 것을 의미한다. 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 상기 담체, 부형제 및 희석제로는 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 생리식염수, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜 및 리퀴드 파라핀으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며, 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용 가능하다. 상기 성분들은 상기 유효성분인 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물에 독립적으로 또는 조합하여 추가될 수 있다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함될 수 있으며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌 글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween)61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용 될 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다. 그 투여 용량에 특별한 제약은 없고, 체내 흡수도, 체중, 환자의 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 유효량 범위를 고려하여 제조하도록 하며, 이렇게 제형화된 단위 투여형 제제는 필요에 따라 약제의 투여를 감시하거나 관찰하는 전문가의 판단과 개인의 요구에 따라 전문화된 투약법을 사용하거나 일정 시간 간격으로 수회 투여할 수 있다. 바람직하게는 본 발명의 약학 조성물은 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물의 양을 기준으로 1일 0.5 내지 5000 mg/kg으로, 바람직하게는 50 내지 500 mg/kg으로, 더욱 바람직하게는 50 mg/kg으로 투여할 수 있으며, 상기 투여는 하루에 한 번 투여할 수도 있고, 수 회 나누어 투여할 수도 있다.
또한, 본 발명은 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 피부외용제를 제공한다.
본 발명의 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물은 화장품, 목욕용품, 비누, 의약품 연고류, 동물 의약품 또는 팩제품의 원료로 사용하는 것이 바람직하다. 즉, 본 발명의 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 질환 치료제는 용액제, 현탁제, 스프레이제, 패취제, 패드제, 크림제, 연고제, 겔제, 정제 또는 환제로 제조될 수 있다.
용액제는 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물 이외에 통상의 부형제, 예를 들면 용매, 가용화제 및 유화제, 예를 들면 물, 에틸알코올, 이소프로필알코올, 에틸카보네이트, 에틸아세테이트, 벤질알코올, 벤질벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 디메틸포름아미드, 오일, 특히 면실유, 낙화생유, 동백유, 알로에베라, 글리세린, 천연옥수수 배종유, 올리브유, 피마자유, 아몬드유 및 참깨유, 글리세롤, 글리세롤 포름알코올, 테티라히드로푸르푸릴 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 소르비탄의 지방산 에스테르, 또는 이들 물질의 혼합물을 포함할 수 있으며, 보존제로서 메틸 또는 프로필-p-히드록시벤조에이트 또는 솔브산 등을 포함할 수 있다.
현탁제는 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물 이외에 통상의 부형제, 예를 들면 액상 희석제 (예: 물, 에틸알코올 및 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 및 현탁제 (예: 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨, 소르비탄 에스테르, 셀룰로스 유도체 및 수소화 식용유지), 미세 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 한천 및 트라가칸트, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다.
연고제, 크림제 및 겔제는 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물 이외에 통상의 부형제, 예를 들면 동물성 및 식물성 지방, 왁스 파라핀, 전분, 타르가칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 규산, 활석 및 산화 아연 또는 이들 물질의 혼합물을 함유할 수 있다.
또한, 투여방법은 일반적으로 환부에 도포하는 방법이 사용될 수 있으며, 제형에 따라 바람직한 투여방법을 선택할 수 있다. 본 발명의 조성물의 일일 투여량은 투여대상, 투여방법, 증상에 따라 결정되지만, 일반적으로 조성물에 포함되어 있는 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물이 0.01 내지 100 ㎍/㎖의 양으로 투여되는 것이 바람직하다. 투여 회수는 1일 2회 이상이 바람직하나 증상 정도에 따라 투여 회수 또한 조절될 수 있다. 그러나, 상기 투여량은 변화시킬 필요가 있으며, 특히 치료할 객체의 체질 특이성 및 체중, 질병의 종류 및 심도, 제형의 성질, 의약품 투여의 성질, 및 투여기간 또는 간격을 고려해서 변화시킬 수 있다.
피부 질환을 효과적으로 치료하기 위해서는 적합한 외용제형을 선택하는 것이 중요하다. 피부 질환을 치료하기 위해 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물을 적당히 희석하여 피부에 직접 도포할 수도 있으며, 본 발명에서는 상기 피부 치료제를 환부에 효과적으로 적용될 수 있는 연고제를 제공한다. 본 발명의 연고제는 상기 기재된 피부 질환 치료제를 무기물질과 배합한 다음, 이를 지용성 기제로 코팅하여 제조한다. 상기 무기물질은 항균성, 소염효과, 표피재생 효과 등이 우수한 소재를 사용하는 것이 바람직하고, 이들의 구체적인 예로는 산화아연, 탄산아연, 산화철 등이 있다.
또한, 본 발명의 피부 질환 치료제를 안전하게 함침할 수 있는 세라믹 담체를 추가로 사용하는 것이 바람직하다. 상기 세라믹 담체로는 제올라이트, 활석, 석고, 모려분 및 이들의 혼합물이 바람직하게 사용된다. 이러한 세라믹 담체는 수용성 성분의 함침성이 우수하여 피부에 수용성 성분의 공급을 원활히 할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.
단, 하기 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예 및 실험예에 의해서 한정되는 것은 아니다.
< 실시예 1> 혼합 생약제 추출물의 제조
본 발명에 사용된 포공영(Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt), 어성초(Heartleaf Houttuynia), 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer) 및 유근피(root bark of Ulmus davidiana)의 혼합 생약제 추출물을 하기와 같은 방법으로 제조하였다.
구체적으로, 모든 약용 식물은 Omniherb 사(Daegu, Korea)에서 구입하였다. 포공영 80 g, 어성초 80 g, 감초 40 g 및 유근피의 뿌리껍질 40 g을 분쇄하고 8배의 에탄올을 첨가하여 추출하였다. 상기 혼합 추출물은 여과지(Whatman paper)를 이용해 여과하고, 감압증류 후 동결건조(Eyela, Irvine, CA)하였다.
< 실험예 1> 혼합 생약제 추출물의 세포독성 실험
상기 <실시예 1>에서 제조된 혼합 생약제 추출물의 세포독성을 알아보기 위하여 SV-HEKs 세포를 배양하여 MTT 분석을 수행하였다.
구체적으로, 세포독성 실험을 위해 SV-HEKs(Simian virus 10 large T antigen-transformed human epidermal keratinocytes) 세포를 BPE(bovine pituitary extract)와 EGF(recombinant human epidermal growth factor)를 첨가한 K-SFM 배양액(Keratinocyte-serum free media)으로 배양하여, 이를 12 웰 배양 플레이트에서 2 ×105 농도로 12시간 배양한 뒤, 상기 <실시예 1>에서 제조된 혼합 생약제 추출물을 DMSO에 용해하여 이를 세포에 처리하여 3일 동안 배양하였다. 그리고 나서, 2 ㎎/㎖ MTT 용액을 첨가하여 2시간 동안 반응시킨 뒤, ELISA 리더기로 540 nm에서 흡광도를 측정하였다.
그 결과, 도 1에 나타난 바와 같이 포공영, 어성초, 감초 및 유근피를 포함하는 혼합 생약제 추출물이 10 ㎍/㎖의 농도에서도 세포독성을 나타내지 않음을 확인하였다(도 1).
< 실험예 2> 혼합 생약제 추출물에 의한 세포 분화 측정
<2-1> 혼합 생약제 추출물에 의한 단백질 발현 확인
본 발명의 혼합 생약제 추출물의 케라틴세포(keratinocyte) 분화에의 영향을 확인하기 위해 피부 각질 세포막을 구성하는 단백질인 인볼루크린(involucrin) 단백질과 로리크린(loricrin) 단백질의 세포 분화를 측정하였다. 이때, 양성대조군으로 세포 분화 촉진제로 알려진 칼슘(Ca2 +)을 사용하여 비교 관찰 하였다.
구체적으로, 상기 <실시예 1>에서 제조된 혼합 생약제 추출물을 DMSO에 용해하여 SV-HEKs 세포에 10 ㎍/㎖ 처리 후 3일 또는 7일 동안 배양하였다. 상기 배양 세포를 프로프랩 용액(proprep solution, Intron, Korea)으로 용해 시킨 후, 총 단백질량을 BCA 용액(BCA protein assay reagent, Pierce Biotechnology, Rockford, IL)을 이용해 정량하였다. 웨스턴 블랏을 수행하기 위해 SDS-PAGE를 전개하고, 전개 후 니트로셀룰로즈 막(nitrocellulose membranes)으로 이동 후 다음의 1차 항체를 1 : 1000의 희석농도로 반응시켰다: 인볼루크린(Cat# sc-21748, Santa Cruz Biotechnologies, Santa Cruz, CA), 로리크린(Cat# sc-133757, Santa Cruz Biotechnologies, Santa Cruz, CA), 필라그린(filaggrin, Cat# sc-30229, Santa Cruz Biotechnologies, Santa Cruz, CA) 및 액틴(actin, Cat# A2668, Sigma, St Louis, MO). 또한, 2차 항체로는 과산화효소가 결합된 2차 항체를 사용하였다.
그 결과, 도 2에 나타난 바와 같이 혼합 생약제 추출물을 3일간 처리한 세포에서 인볼루크린과 로리크린의 발현이 크게 증가하였다. 또한, 혼합 생약제 추출물을 7일간 처리한 세포에서 분화 후기 마커인 필라그린의 발현이 크게 증가하여(도 2), 혼합 생약제 추출물이 케라틴세포의 분화를 향상시킴을 확인하였다.
<2-2> 혼합 생약제 추출물에 의한 프로모터 발현 확인
상기 <실시예 4>의 결과에서 혼합 생약제를 처리한 세포에서 피부 각질 세포막을 구성하는 단백질 인볼루크린 및 로리크린 단백질 발현이 증가됨을 확인하였다. 이에, 상기 단백질 발현이 DNA 전사 단계에서 이루어지는 것인지 확인하기 위해 루시퍼라아제 리포터 실험(luciferase reporter assay)을 수행하였다.
구체적으로, 인볼루크린-루시퍼라아제 리포터 아데노바이러스(involucrin-luc reporter adenovirus, Ad/lnv-luc)및 로리크린-루시퍼라아제 리포터 아데노바이러스(loricrin-luc reporter adenovirus, Ad/lor-luc)를 만들기 위해 케라틴세포에서 gDNA를 분리하여 PCR 주형으로 이용하였다. 프라이머의 서열은 하기 <표 1>과 같다.
서열번호 명칭 서열 (5' - 3')
1 인볼루크린 프로모터 F CTCCATGTGTCATGGGATATG
2 인볼루크린 프로모터 R TCAACCTGAAAGACAGAAGAG
3 로리크린 프로모터 F TACCAAGCAATCCTCTCACCTTGG
4 로리크린 프로모터 R TGAGGAGAGAAGATGCTGGC
각각의 PCR 결과물은 인볼루크린 전사 부위 -2,467부터 +1,239 bp(base pair) 및 로리크린 전사 부위 -2,033부터 +12 bp를 포함하며, 상기의 프로모터 PCR 결과물은 pGL3 벡터(vector)에 클로닝 후, pENTR 벡터로 옮겨 리포터 아데노바이러스를 완성하였다.
SV-HEKs 세포를 12 웰 배양 플레이트에 50% 정도 자라게 한 후, 상기 리포터 아데노바이러스를 형질도입(transduction)하였다. 형질도입 후 새로운 배양 배지로 세포 배지를 채워 준 후 상기 <실시예 1>에서 제조된 혼합 생약제 추출물을 DMSO에 용해하여 10 ㎍/㎖ 처리 후 48시간 배양 하였다. 48시간 후 세포 용해 버퍼(cell lysis buffer)를 이용해 세포 추출물을 획득하여 루시퍼라아제 실험 시스템(luciferase reporter assay, Promega, Medison, WI)을 이용, 제조사의 프로토콜에 따라 수행하였다.
그 결과, 도 3 및 도 4에 나타난 바와 같이 혼합 생약제 추출물을 처리한 세포에서 인볼루크린과 로리크린의 프로모터 활성이 증가함을 확인 할 수 있었다(도 3 및 도 4). 이러한 결과는 혼합 생약제 추출물이 케라틴세포의 분화를 향상시킴을 입증하는 결과이다.
< 실험예 3> 혼합 생약제 추출물에 의한 세포 증식 측정
케라틴 세포의 분화는 세포주기(cell cycle)의 휴지기(arrest)를 촉진함을 근거로 본 발명의 혼합 생약제 추출물이 세포 성장에는 어떠한 영향을 미치는지 확인하기 위해 DNA의 전구물질의 하나인 티미딘(thymidine)에 표지자로 동위원소(3H)를 붙인 것을 첨가하여 세포가 흡수한 동위원소의 양을 측정하는 티미딘 흡수 분석법([3H] thymidine uptake assay)을 수행하였다.
구체적으로, SV-HEKs 세포를 60 mm 배양 플레이트에서 배양 후, 1 μCi의 [3H] 티미딘(Amersham, Buckinghamshire, UK)과 <실시예 1>에서 제조된 혼합 생약제 추출물을 DMSO에 용해하여 10 ㎍/㎖ 처리하였다. 각각 1일, 3일 및 5일 배양 후, PBS를 이용하여 2차례 세포를 씻어준 뒤 0.1 N 수산화나트륨(NaOH)을 첨가하여 상온에서 배양하였다. 세포 용해 후 액체 섬광 계수기(liquid scintillation counter)를 이용하여 방사능(radioactivity)을 측정하였다.
그 결과, 도 5에 나타난 바와 같이 혼합 생약제 추출물을 처리한 군이 칼슘을 처리한 군과 유사하게 케라틴세포의 세포주기를 휴지기로 유지시켜 상기 세포의 분화를 증가시킴을 확인하였다(도 5).
< 실험예 4> 혼합 생약제 추출물에 의한 피부 기능 회복 측정
피부 수분 손실(Transepidermal water loss) 측정은 피부 장벽 기능(Skin barrier function)의 손상 정도를 측정하는 방법으로 잘 알려져 있다. 본 발명의 혼합 생약제 추출물이 피부 장벽 기능에 어떠한 영향을 미치는지 알아보기 위해 피부 수분 손실 측정 및 면역염색법을 이용한 피부 단면 관찰을 수행하였다.
구체적으로, 7주령 마우스(hairless mouse, Orient Bio Inc., Seongnam, Korea)의 피부에 테이프를 이용하여 피부 표면 구획을 나누었다. 상기 <실시예 1>에서 제조된 혼합 생약제 추출물을 70% 폴리에틸렌 글리콜(polyethylene glycol), 30% 에탄올(ethanol)에 용해하여 나눠진 피부 표면 구획에 따라 100 ㎍/㎖을 피부 표면에 도포 후, 수분 측정기(Tewameter TM210, Germany)를 이용해 피부의 수분 손실을 측정하였다.
면역염색을 위해서는 피부의 수분손실을 측정한 마우스를 해부하여 피부 조직 샘플을 얻어 10% 포르말린(formalin)에 고정 시킨 후 파라핀에 끼워 넣어 절단하였다. 절단된 파라핀 섹션(section)은 다시 왁스를 바르고, 재수화시켰으며, PBS로 3회 세척한 뒤, 프로테이나아제 K(proteinase K)를 첨가하여 37℃에서 5분간 반응시켰다. 프로테이나아제 K 반응 후 파라핀 섹션은 10분동안 상온에서 과산화수소(H2O2)를 처리하였으며, 여기에 0.1% 트윈-20(tween-20) 및 1% BSA(bovine serum albumin)가 포함된 PBS로 30분동안 전처리를 수행한 뒤, 항-마우스-필라그린 항체로 1시간동안 반응시켰다. 그리고나서, 상기 파라핀 섹션을 페록시다아제가 결합된 2차 항체로 반응시킨 뒤, Chemmate envision(Dako, Carpinteria, CA) 탐지 키트를 이용하여 확인하였다.
그 결과, 도 6에 나타난 바와 같이 대조군에 비하여 혼합 생약제 추출물을 도포한 그룹에서 피부의 수분 손실에 대해 더욱 빠른 회복 능력을 보였다(도 6). 또한, 면역염색법을 이용하여 상기 피부 조직에서 케라틴 결합단백질인 필라그린의 발현을 확인한 결과, 혼합 생약제 추출물을 도포한 경우 마우스 피부 표피에 필라그린의 발현이 증가하였다(도 7).
<110> Chungnam National University - Industry Collaboration Foundation <120> Cosmetic composition for skin moisturizing comprising the extract of Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt, Heartleaf Houttuynia, Glycyrrhiza uralensis Fischer, root back of Ulmus davidiana <130> 2015P-03-017 <160> 4 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IC_F <400> 1 ctccatgtgt catgggatat g 21 <210> 2 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IC_R <400> 2 tcaacctgaa agacagaaga g 21 <210> 3 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LC_F <400> 3 taccaagcaa tcctctcacc ttgg 24 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> LC_R <400> 4 tgaggagaga agatgctggc 20

Claims (8)

  1. 포공영(Taraxacum platycarpum H. Dahlstedt), 어성초(Heartleaf Houttuynia), 감초(Glycyrrhiza uralensis Fischer) 및 유근피(root bark of Ulmus davidiana)의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 혼합 추출물을 물 또는 C1 내지 C2의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물을 용매로 하여 추출하는 것을 특징으로 하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 혼합물은 전체 혼합물 100 중량부에 대하여, 포공영 25 내지 40 중량부, 어성초 25 내지 40 중량부, 감초 10 내지 20 중량부 및 유근피 10 내지 20 중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 조성물은 각질세포 분화를 촉진하는 것을 특징으로 하는 피부 보습 개선용 화장료 조성물.
  5. 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  6. 제 5항에 있어서, 상기 혼합물은 전체 혼합물 100 중량부에 대하여, 포공영 25 내지 40 중량부, 어성초 25 내지 40 중량부, 감초 10 내지 20 중량부 및 유근피 10 내지 20 중량부를 포함하는 것을 특징으로 하는 피부질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  7. 제 5항에 있어서, 상기 피부질환은 건선(psoriasis) 또는 아토피(atopic dermatitis)인 것을 특징으로 하는 피부질환 예방 및 치료용 약학적 조성물.
  8. 포공영, 어성초, 감초 및 유근피의 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 피부외용제.
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