KR20160035219A - 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 조성물 - Google Patents
틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 조성물 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 조성물에 관한 것으로, 틴달화 유산균 사균체가 자외선 조사에 의해 저하된 피부 보습 및 주름개선에 미치는 영향을 확인하였다. 그 결과 피부에서 증발하는 수분량을 감소시키고 피부에 함유된 수분량을 증가시켰음을 확인하였다. 또한, 표피두께를 감소시키며, 주름 관련 단백질의 발현량을 감소시키는 것을 확인하였다. 따라서, 본 발명의 조성물은 자외선조사로 유발된 피부 장벽의 손상을 개선하여 피부 수분 손실 또는 주름생성을 억제하는 효능이 있다.
Description
본 발명은 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 조성물에 관한 것이다.
피부는 외부의 환경과 항상 접하고 있는 기관으로 주로 외부의 물리적 손상 및 화학물질로부터 인체를 보호하고, 세균, 곰팡이, 바이러스 등이 피부로 침범하는 것을 방지하며, 수분 손실을 막는 보호장벽 역할을 한다. 피부의 구조를 보면 표피, 진피, 피하지방의 3개 층으로 구성되고 표피는 3개 층 중 가장 얇은 층으로 피부의 보습 및 보호를 담당하는 중요한 기능을 한다. 특히 표피의 각질층에 존재하는 수분에 의하여 피부가 탄력 있고 부드럽게 되는데, 각질층의 탄력이 유지되려면 10% 이상의 수분함유가 필수적인 것으로 알려져 있다(O. K. Jacobi, Proc. Sci. Sec. Toilet Goods Assoc. 1959, 31, 22).
최근 들어, 환경오염 등의 이유로 강한 자외선에 노출되는 경우가 많아졌고, 이에 의한 피부의 수분 손실이 증가하면서 피부 노화가 가속화되고, 피부의 손상에 의한 관련 질병의 발병률이 증가함에 따라, 자외선에 노출된 피부의 보습력을 유지 및 주름개선 효과를 오랫동안 지속시켜주는 조성물에 대한 요구는 점점 증가하는 추세이다.
한편, 유산균은 인체 내에서 유익한 역할을 하는 세균으로서 탄수화물 같은 당을 발효시켜 유산(젖산)을 생성하는 균으로, 지금까지 400여 종이 발견되었으며, 그 중 상품성이 있는 것은 18종으로 알려져 있다. 이들 유산균은 면역증강 특히, 위 장관 면역 증강의 생리활성을 가진다고 알려져 있으며, 최근 웰빙 추세에 따라, 먹어서 좋은 식품이 발랐을 때도 좋을 것이라는 사회적 분위기가 조성됨에 따라, 몸에 이로운 다양한 화장품 소재들이 개발되면서 유산균의 배양액이 피부의 보습, 각질층의 턴오버(turn over) 속도 증가, 주름살 완화 등의 효과가 보고되어 있으나, 실제로 화장품을 사용하였을 때 전달받는 그 효과가 미미한 경우가 많았다.
일례로, 한국공개특허 제1991-0019600호에 보습 및 활성 산소 제거 능이 있는 화장료용 유산균 배양액에 관한 기술이 개시되어 있으며, 한국공개특허 제2013-0096604호에 발아곡물의 발효 추출물을 주성분으로 하는 발효 화장품 및 그 제조방법에 관한 기술로, 유산균을 발효 배양하여 생성되는 산물을 화장료 조성물에 포함하거나, 발아 곡물 등을 특정 속의 유산균으로 발효시켜 얻어진 발효액을 화장료에 배합하여 사용하는 기술이 개시되어 있을 뿐만 아니라, 한국공개특허 제2013-0115943호에 개시된 유산균 파쇄물의 상등액을 포함하는 항 염증, 피부 미백 및 항 노화용 조성물에 관한 기술이 알려져 있다. 하지만, 생균의 유산균을 사용하는 경우, 동결건조한 분말의 형태라도 함습 등의 문제점이 있을 뿐만 아니라, 유산균의 안정성 등과 관련된 문제점이 여전히 남아 있다. 이와 같은 문제점을 해소할 수 있는 것으로, 본 발명의 유효성분인 틴달화 유산균 사균체는 성상이 균질한 제품을 생산하는 것이 가능하며, 동결건조되어 장기 보관이 가능한 장점이 있는 것으로, 아직까지 틴달화 유산균 사균체의 피부 보습 또는 주름개선에 대한 효과는 보고된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로서, 본 발명자들은 피부 보습 또는 주름개선용 조성물을 개발하고자 연구한 결과, 틴달화 유산균 사균체가 자외선 조사에 의해 유발되는 피부 수분의 손실을 억제하거나 감소시키고, 피부 장벽을 보호하는 피부 보습효과가 우수한 것을 확인하였고, 주름생성과 관련 있는 단백질인 MMP-9의 발현량을 억제한다는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 건강기능식품을 제공한다.
또한, 본 발명은 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 조성물은 자외선 조사에 의해 유발된 피부 수분의 손실을 억제하거나 감소시키는 피부의 보습 또는 주름개선 효과가 있는 것이다. 또한, 본 발명의 조성물은 성상이 균질한 제품의 생산이 가능하며, 장기간 보관이 가능한 장점이 있다.
도 1은 틴달화 유산균 사균체의 경피수분손실량 억제효능을 확인한 결과이다. *은 대조군에 비해 유의성이 있으며(P<0.0001); #은 자외선 조사군에 비해 유의성이 있고(P<0.0001); CON은 대조군; UV는 자외선 조사군; Lactob는 틴달화 유산균 사균체의 처리군을 의미한다.
도 2는 틴달화 유산균 사균체의 피부수분량을 평가한 결과이다. *은 대조군에 비해 유의성이 있으며(P<0.0001); #은 자외선 조사군에 비해 유의성이 있고(P<0.0001); CON은 대조군; UV는 자외선 조사군; Lactob는 틴달화 유산균 사균체의 처리군을 의미한다.
도 3은 표피 두께 변화 측정을 통한 주름 개선 효능을 평가한 결과이다. *은 대조군에 비해 유의성이 있으며(P<0.0001); #은 자외선 조사군에 비해 유의성이 있고(P<0.0001); CON은 대조군; UV는 자외선 조사군; Lactob는 틴달화 유산균 사균체의 처리군을 의미한다.
도 4는 H&E 염색을 통한 주름개선 효능을 평가한 결과이다. Control은 정상 대조군; Vehicle: 자외선조사 대조군; Lactob는 틴달화 유산균 사균체의 처리군을 의미한다.
도 5는 틴달화 유산균 사균체의 주름 관련 단백질의 발현량을 확인한 결과이다. CON은 대조군; UV는 자외선 조사군; Lactob는 틴달화 유산균 사균체의 처리군을 의미한다.
도 2는 틴달화 유산균 사균체의 피부수분량을 평가한 결과이다. *은 대조군에 비해 유의성이 있으며(P<0.0001); #은 자외선 조사군에 비해 유의성이 있고(P<0.0001); CON은 대조군; UV는 자외선 조사군; Lactob는 틴달화 유산균 사균체의 처리군을 의미한다.
도 3은 표피 두께 변화 측정을 통한 주름 개선 효능을 평가한 결과이다. *은 대조군에 비해 유의성이 있으며(P<0.0001); #은 자외선 조사군에 비해 유의성이 있고(P<0.0001); CON은 대조군; UV는 자외선 조사군; Lactob는 틴달화 유산균 사균체의 처리군을 의미한다.
도 4는 H&E 염색을 통한 주름개선 효능을 평가한 결과이다. Control은 정상 대조군; Vehicle: 자외선조사 대조군; Lactob는 틴달화 유산균 사균체의 처리군을 의미한다.
도 5는 틴달화 유산균 사균체의 주름 관련 단백질의 발현량을 확인한 결과이다. CON은 대조군; UV는 자외선 조사군; Lactob는 틴달화 유산균 사균체의 처리군을 의미한다.
본 발명은 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 건강기능식품을 제공한다.
상기 유산균은 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 페디오코커스(Pediococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 바이셀라(Weissella) 속 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 균주인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않으며, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus)이다.
또한, 유산균 발효 과정은 제한하는 것은 아니지만, 당류 효모추출물, 소이펩톤 및 이온성분, 그 외 생육인자를 첨가한 후 유산균을 발효시키는 것이 바람직하다.
상기 유산균의 틴달화는 생균의 유산균을 사균화 하는 방법으로서, 알려진 틴달화 방법은 어느 방법이든 무방하게 사용할 수 있으며, 제품화된 틴달화 유산균 사균체를 구입하여 사용하는 것이 가능하다. 바람직한 유산균 발효액의 틴달화는 유산균 발효균체와 발효여액을 분리한 후, 유산균 발효균체를 60 내지 160℃에서 10 내지 60 분간 가열하고, 20 내지 40℃ 또는 20℃ 이하로 급속 냉각하여 사멸시키는 방법인 간헐멸균법으로 틴달화하는 것이다.
또한, 상기 틴달화 유산균 사균체는 동결건조한 분말 형태인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.
상기 피부 보습은 자외선에 의해 유발되는 피부 수분 손실의 억제 또는 감소일 수 있으나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 건강기능식품은 틴달화 유산균 사균체를 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 제조될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 제조될 수 있다. 상기 틴달화 유산균 사균체를 첨가할 수 있는 식품의 예로는 카라멜, 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합제 중에서 선택된 어느 하나의 형태일 수 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다. 즉, 상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다.
상기 건강기능식품은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 및 천연 풍미제, 착색제 및 증진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알킨산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한 천연 과일 주스 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 상기의 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다.
또한, 본 발명의 건강기능식품은 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 단당류, 말토스, 슈크로스와 같은 이당류, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 다당류, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 크게 중요하지 않지만, 본 발명의 건강기능식품 100g에 대하여, 0.01 ~ 0.04g 인 것이 바람직하고, 더욱 바람직하게는 0.02 내지 0.03 g을 포함하는 것이지만 이에 한정하지 않는다.
감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다.
본 발명의 건강기능식품은 상기 틴달화 유산균 사균체 외에 공지의 피부 건강 관련 성분을 추가로 포함할 수 있다. 추가적인 피부건강에 도움을 주는 원료를 포함하게 되면 본 발명의 건강식품의 피부 보습 또는 주름개선 효과는 더욱 증진될 수 있을 것이며, 피부건강에 도움을 주는 원료의 추가 시, 복합 사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다.
상기 추가적인 피부 보습 또는 주름개선 성분은 식품의약품안전청의 건강기능식품으로 고시된 고시원료 또는 개별 인정형 원료를 사용할 수 있다.
상기 개별인정형 원료는 소나무껍질 추출물 등의 복합물, 홍삼, 사상자, 산수유복합 추출물, 핑거루트추출분말, N-아세틸글루코사민, 히알루론산, 곤약감자추출물, AP콜라겐 효소분해 펩티드, 지초추출분말, 민들레 등의 복합추출물, 펩티드가 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.
또한, 본 발명은 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물을 제공한다.
상기 유산균은 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 페디오코커스(Pediococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 바이셀라(Weissella) 속 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 균주인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않으며, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus)이다.
또한, 유산균 발효 과정은 제한하는 것은 아니지만, 당류 효모추출물, 소이펩톤 및 이온성분, 그 외 생육인자를 첨가한 후 유산균을 발효시키는 것이 바람직하다.
상기 유산균의 틴달화는 생균의 유산균을 사균화 하는 방법으로서, 알려진 틴달화 방법은 어느 방법이든 무방하게 사용할 수 있으며, 제품화된 틴달화 유산균 사균체를 구입하여 사용하는 것이 가능하다. 바람직한 유산균 발효액의 틴달화는 유산균 발효균체와 발효여액을 분리한 후, 유산균 발효균체를 60 내지 160℃에서 10 내지 60 분간 가열하고, 20 내지 40℃ 또는 20℃ 이하로 급속 냉각하여 사멸시키는 방법인 간헐멸균법으로 틴달화하는 것이다.
또한, 상기 틴달화 유산균 사균체는 동결건조한 분말 형태인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.
상기 피부 보습은 자외선에 의해 유발되는 피부 수분 손실의 억제 또는 감소일 수 있으나 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 화장료 조성물은 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로 에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형 리포좀, 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 에센스, 스프레이 또는 콘실 스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.
또한, 상기 화장료 조성물은 본 발명의 틴달화 유산균 사균체에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화 제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다.
본 발명의 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물에 있어서, 통상적으로 함유되는 화장료 조성물에 대하여 본 발명의 틴달화 유산균 사균체가 0.01 내지 15 중량%, 바람직하게는 2 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있다.
본 발명의 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물은 상기 틴달화 유산균 사균체 이외에 공지의 피부 보습 또는 주름개선용 성분을 추가로 포함할 수 있다. 추가적인 피부건강에 도움을 주는 원료를 포함하게 되면, 본 발명의 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물의 효과는 더욱 증진될 수 있을 것이며, 피부건강에 도움을 주는 원료의 추가 시에는 복합사용에 따른 피부 안전성, 제형화의 용이성, 유효성분들의 안정성을 고려할 수 있다.
또한, 본 발명은 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 약학 조성물을 제공한다.
상기 유산균은 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 페디오코커스(Pediococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 바이셀라(Weissella) 속 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 균주인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않으며, 더욱 바람직하게는 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus)이다.
또한, 유산균 발효 과정은 제한하는 것은 아니지만, 당류 효모추출물, 소이펩톤 및 이온성분, 그 외 생육인자를 첨가한 후 유산균을 발효시키는 것이 바람직하다.
상기 유산균의 틴달화는 생균의 유산균을 사균화 하는 방법으로서, 알려진 틴달화 방법은 어느 방법이든 무방하게 사용할 수 있으며, 제품화된 틴달화 유산균 사균체를 구입하여 사용하는 것이 가능하다. 바람직한 유산균 발효액의 틴달화는 유산균 발효균체와 발효여액을 분리한 후, 유산균 발효균체를 60 내지 160℃에서 10 내지 60 분간 가열하고, 20 내지 40℃ 또는 20℃ 이하로 급속 냉각하여 사멸시키는 방법인 간헐멸균법으로 틴달화하는 것이다.
또한, 상기 틴달화 유산균 사균체는 동결건조한 분말 형태인 것이 바람직하지만 이에 한정하지 않는다.
본 발명의 약학 조성물은 투여를 위하여 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 포함하여 제조할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 본 발명의 유효성분과 양립 가능하여야 하며, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 덱스트로즈 용액, 말토덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있고, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한, 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형으로 제제화할 수 있다.
또한, 산제, 정제, 캡슐제, 액제, 주사제, 연고제, 시럽제 등의 다양한 형태로 제제화할 수 있으며 단위-투여량 또는 다-투여량 용기, 예를 들면 밀봉된 앰플 및 병 등으로 제공될 수도 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 경구 또는 비 경구 투여가 가능하다. 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여경로는 이들로 한정되는 것은 아니지만, 예를 들면, 구강, 정맥 내, 근육 내, 동맥 내, 골수 내, 경막 내, 심장 내, 경피, 피하, 복강 내, 장관, 설하 또는 국소 투여가 가능하다.
이와 같은 임상 투여를 위해 본 발명의 약학적 조성물은 공지의 기술을 이용하여 적합한 제형으로 제제화할 수 있다. 본 발명의 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하며, 본 기술분야의 통상의 전문가가 용이하게 결정할 수 있다.
이하, 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
재료 및 방법
틴달화 유산균 사균체의 준비: 시판되는 틴달화 유산균 사균체는 일동제약으로부터 구입하여 사용하였다.
[실험동물 및 시료투여]
무모 생쥐는 7주령의 수컷 무모쥐(male HR-1, Hairless mice, Japan SLC Inc.)를 중앙실험동물로부터 구입하여 1주 동안 적응시킨 후 사용하였다. 적응기간 중 일반 상태를 관찰하여 건강한 상태의 동물을 시험에 사용하였다. 사육환경은 온도 23±3℃, 습도 50±5%, 명암주기 12시간(07:00-19:00/조명시간)으로 유지하였다. 시험기간 중 실험동물은 군당 7마리로 사육하였고, 사료는 마우스 전용사료 5L79(Charles river, USA)를 자유 급이 하였으며, 음수는 자외선으로 소독한 상수도수를 자유급이 하였다.
시료의 투여는 대조군(control), 자외선 처리군(UV), 틴달화 유산균 사균체 투여군(Lactob)으로 총 3개 군으로 나누어 실험을 하였다. 시료투여는 마우스 존대를 이용하여 경구투여를 실시하였다. 투여기간은 총 12주로 주 5일 동안 투여하였다.
[자외선 조사]
자외선조사는 대조군을 제외한 실험군에 12주 동안 주 3회 실시하였고, 자외선은 UVB 램프 (Mineralight UV Display lamp, UVP, USA)를 사용하였다. 자외선 조사량은 1 내지 7주간은 60mJ/㎠, 8 내지 12주는 90mJ/㎠으로 12주 동안 조사하였다. 자외선 조사량은 광측정기 (Delta OHM, Italy)를 이용하여 광량을 측정한 후 조사시간을 조절하였다.
[보습효능평가]
1) 경피수분손실량(TEWL: transepidermal water loss) 평가
경피수분증발량은 항온, 항습조건 (23℃, 상대습도 50%)에서 투와미터(Tewameter Courage & Khazaka, Germany) 장비를 이용하여 피부에서 증발하는 수분의 양을 면적과 시간에 따라 계산하여, 증발하는 수분의 양(g/㎡/hr)을 보습 전자 센서로 읽고, 이를 수치화하여 피부의 보습력을 측정하였다.
2) 피부수분량 측정
피부수분량은 항온항습 조건 (23℃, 상대습도 50%)에서 코니오미터 (Corneometer Courage & Khazaka, Germany) 장비를 이용하여 피부에 함유된 수분을 측정하였다. 피부의 표피 내에 존재하는 수분의 양을 센서를 이용하여 수분의 이온정도를 측정하고, 이를 수치화하여 수분의 양을 계산함으로써 보습력을 측정하였다.
[피부의 조직학적 관찰]
무모 생쥐 등 피부조직을 적출하고 10% 중성 포르말린 용액에 고정한 후 통상적인 방법으로 수세, 탈수, 투명, 침투과정을 거친 다음 파라핀으로 포매하고 4㎛ 두께로 절편을 만든 다음 조직염색(Hematoxylin & Eosin;H&E)을 실시하였다.
[전기영동 및 Western blotting]
피부조직 20 내지 30 mg을 이용하여 단백질을 추출하는 용액을 첨가하여 분쇄한 후, 단백질을 분리하여 정량하고, 대조구(actin)와 동일한 양의 단백질을 전기영동하여 PVDF 멤브레인으로 옮긴 후 항체와 반응시켜 단백질의 발현량을 측정하였다.
[통계학적 방법]
본 발명에서 얻은 결과치는 one-way ANOVA와 Student t-test를 이용하여 대조군과 실험군 간의 유의성을 검정하였다 (p<0.05).
실시예
1.
틴달화
유산균
사균체
처리군의
보습효능평가
1) 경피 수분손실량(TEWL: transepidermal water loss) 분석
보습 효과를 확인하기 위하여 각 실험군의 무모 생쥐의 등 피부에서 경피 수분손실량 분석을 실시하였다. 경피 수분손실량 수치는 피부로부터 발산되는 수분량으로서, 수치가 높을수록 피부의 보습 기능이 떨어져 있음을 의미하며, 피부 고유의 장벽 기능이 손상되었음을 나타낸다. 경피 수분 증발량은 항온, 항습 조건(23℃, 상대습도: 50%)에서 투와미터(Tewameter Courage & Khazaka, Germany)를 이용하여 피부에서 증발하는 수분의 양을 면적과 시간에 따라 계산하였으며, 증발하는 수분의 양(g/m2/hr)을 보습 전자센서로 읽고, 이를 수치화하여 피부의 보습력을 측정하였다. 결과를 도 1에 나타내었다. 도 1과 같이, 자외선조사에 의해 피부 장벽이 손상되어 피부 보습 기능이 떨어졌음을 확인할 수 있었으며 (p<0.0001), 틴달화 유산균 사균체(Lactob) 처리군에 의하여 자외선에 의해 유발된 피부 수분 손실을 유의성 있게 방지하는 것을 확인하였다 (p<0.0001).
2) 피부수분량 측정
피부에 함유된 수분의 양을 측정하기 위하여 각 실험군의 무모 생쥐의 등 피부에서 피부수분량 분석을 실시한 결과, 도 2에서와 같이 자외선 조사군은 피부수분량이 대조군에 비해서 감소하였음을 확인하였고(p<0.0001), 틴달화 유산균 사균체 처리군은 자외선 조사군에 비해서 수분함유량이 높게 나타났다. 이런 결과를 토대로 틴달화 유산균 사균체 처리군이 피부 보습효과가 있음을 확인하였다.
실시예
2. 표피 두께 변화에 의한 효능평가
주름억제 효능을 표피두께 변화측정을 통해서 확인하였다. 표피두께는 H&E 염색을 실시한 조직의 각질층(keratin layer)에서 표피 기저 막(epidermal basement membrane)까지의 두께를 현미경에 장착된 자를 이용하여 측정하였다. 도 3에 개시한 결과를 보면, 자외선조사시 표피두께가 증가되었음을 확인할 수 있었고, 틴달화 유산균 사균체 투여군에 의해서 표피두께가 감소하였음을 확인할 수 있었다.
실시예
3. 조직염색에 의한 효능평가 (H&E 염색)
자외선으로 유발된 주름억제 효능을 확인하기 위해 무모 생쥐의 피부조직을 떼어낸 후 조직염색을 통해서도 확인하였다. 도 4에 개시한 바와 같이 자외선 조사군은 대조군에 비해서 각질층이 일어났으며, 표피두께 또한 증가된 것을 확인할 수 있었고, 자외선 조사군 중에서 틴달화 유산균 사균체 투여군은 틴달화 유산균 사균체를 투여하지 않은 자외선 조사군에 비해서 각질층이 완화되었고, 표피두께 또한 감소함을 확인할 수 있었다.
실시예
4.
MMP
-9(
matrix
metallopeptidase
9) 단백질 발현량 평가
주름 생성에 중요한 역할을 하는 단백질로 알려진 MMP-9(matrix metallopeptidase 9)의 발현량을 측정한 결과, 도 5에 개시한 바와 같이, 자외선 조사군 (UV)은 조사하지 않은 시험군(Con)에 비하여 단백질의 발현량이 증가 되었음을 확인하였고, 이에 비해 유산균 사균체를 처리한 시험군(Lactob)은 자외선에 의해서 발현된 MMP-9 단백질의 발현량을 감소시켰다. 상기 결과로부터 자외선에 의해 생기는 주름개선에 효과가 있는 것으로 판단하였다.
제조예 1. 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용
화장료의
제조
1) 유연 화장수의 제조
본 발명의 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 유연 화장수를 제조하였다.
틴달화 유산균 사균체 10.00 중량부, 1,3-부틸렌글리콜 1.00 중량부, 디소듐이디티에이 0.05 중량부, 알란토인 0.10 중량부, 디포타슘글리시리제이트 0.05 중량부, 시트릭애씨드 0.01 중량부, 소듐시트레이트 0.02 중량부, 글리세레스-26 1.00 중량부, 알부틴 2.00 중량부, 하이드로제네이티드캐스터오일 1.00 중량부, 에탄올 30.00 중량부, 보존제, 착색제 및 착향제 미량, 정제수 잔량의 제조비로 이루어진 유연화장수를 제조하였다.
2) 영양크림의 제조
본 발명의 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 함유하는 영양크림을 제조하였다.
틴달화 유산균 사균체 10.0 중량부; 1,3-부틸렌글리콜 7.0 중량부; 글리세린 1.0 중량부; D-판테놀 0.1 중량부; 식물 추출물 3.2 중량부; 마그네슘알루미늄실리케이트 0.3 중량부; PEG-40스테아레이트 1.2 중량부; 스테아릭애씨드 2.0 중량부; 포리소르베이트60 1.5 중량부; 친유형글리세릴스테아레이트 2.0 중량부; 소르비탄세스귀올리에이트 1.5 중량부; 세테아릴알코올 3.0 중량부; 메네랑오일 4.0 중량부; 스쿠알란 3.8 중량부; 카르릴릭/카프릭트리굴리세라이드 2.8 중량부; 식물성오일 1.8 중량부; 디메치콘 0.4 중량부; 디포타슘글리세리제이트 미량; 알란토인 미량; 소듐히아루로네이트 미량; 토코페릴아세테이트 적량; 트리에탄올아민 적량; 보존제 적량; 착향제 적량; 및 정제수 잔량의 제조비로 이루어진 영양크림을 제조하였다.
3) 에센스의 제조
하기의 조성비에 따라, 틴달화 유산균 사균체, 정제수, 메틸파라벤, 하이알루론산 추출물, 글리세린을 계량하여 80±2℃에서 혼합하여, 수상(water phase)을 완성하였다. 또한, 프로필파라벤, 레시틴, 마카데이마 넛 오일을 계량하여 80±2℃에서 혼합하여 유상(oil phase)을 완성하였다. 이후에 상기 유상을 수상에 첨가하면서 두 개의 상(phase)이 서로 섞이도록 하여 에멀젼 형태의 혼합물을 만들었고, 상기 혼합물에 향료를 첨가하고 35±2℃까지 냉각시켜 틴달화 유산균 사균체를 포함하는 에센스를 제조하였다.
수상 성분으로 틴달화 유산균 사균체 8.00 중량부; 정제수 7.58 중량부; 메틸파라벤 0.15 중량부; 하이알루론산 추출물 2.50 중량부; 글리세린 8.00 중량부의 제조비로 구성하였다.
유상 성분으로 프로필파라벤 0.10 중량부; 레시틴 0.60 중량부; 마카데미아 넛 오일 10.0 중량부; 및 첨가제로 향료 0.07 중량부의 제조비로 구성하였다.
제조예
2.
틴달화
유산균
사균체를
유효성분으로 함유하는 피부 보습 및 주름개선용 건강기능식품의 제조
1) 밀가루 식품의 제조
본 발명의 틴달화 유산균 사균체 0.5~5.0 중량부를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하였다.
2) 유제품(dairy products)의 제조
본 발명의 틴달화 유산균 사균체 5~10 중량부를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.
3) 선식의 제조
현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다.
검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로서 건조한 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60 메쉬의 분말로 제조하였다. 본 발명의 틴달화 유산균 사균체를 진공 농축기에서 감압농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60 메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.
상기에서 제조한 곡물류, 종실류, 및 틴달화 유산균 사균체를 다음의 비율로 배합하여 제조하였다. 곡물류(현미 30 중량부, 율무 15 중량부, 보리 20 중량부); 종실류(들깨 7 중량부, 검정콩 8 중량부, 검정깨 7 중량부): 틴달화 유산균 사균체(3 중량부); 영지(0.5 중량부); 지황(0.5 중량부)
4) 초콜릿의 제조
카카오버터 30.0 중량부; 전지분유 30.0 중량부; 분당 41.85 중량부; 레시틴 0.45 중량부; 향료 0.1 중량부; 틴달화 유산균 사균체 0.6 중량부의 제조비로 혼합하여, 틴달화 유산균 사균체를 포함하는 초콜릿을 제조하였다.
5) 건강음료의 제조
액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 본 발명의 틴달화 유산균 사균체 5g을 균질하게 배합하여 순간 살균한 후, 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 제조하였다.
6) 야채주스의 제조
본 발명의 틴달화 유산균 사균체 5g을 토마토 또는 당근 주스 1,000㎖에 가하여 야채 주스를 제조하였다.
7) 과일주스의 제조
본 발명의 틴달화 유산균 사균체 1g을 사과 또는 포도 주스 1,000㎖에 가하여 과일 주스를 제조하였다.
Claims (14)
- 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 건강기능식품.
- 제1항에 있어서, 상기 유산균은 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 페디오코커스(Pediococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 바이셀라(Weissella) 속 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 균주인 것을 특징으로 하는 피부 보습 또는 주름개선용 건강기능식품.
- 제1항에 있어서, 상기 틴달화 유산균 사균체는 유산균 발효균체와 발효여액을 분리한 후, 유산균 발효균체를 60 내지 160℃에서 10 내지 60분간 가열하고, 20 내지 40℃ 또는 20℃ 이하로 급속 냉각하여 사멸시키는 방법으로 제조된 것을 특징으로 하는 피부 보습 또는 주름개선용 건강기능식품.
- 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 유산균은 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 페디오코커스(Pediococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 바이셀라(Weissella) 속 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 균주인 것을 특징으로 하는 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 틴달화 유산균 사균체는 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.01 내지 15 중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 틴달화 유산균 사균체는 유산균 발효균체와 발효여액을 분리한 후, 유산균 발효균체를 60 내지 160℃에서 10 내지 60분간 가열하고, 20 내지 40℃ 또는 20℃ 이하로 급속 냉각하여 사멸시키는 방법으로 제조된 것을 특징으로 하는 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 틴달화 유산균 사균체는 동결건조된 분말 형태인 것을 특징으로 하는 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 피부 보습은 자외선 조사에 의해 유발되는 피부 수분 손실의 억제 또는 감소인 것을 특징으로 하는 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물.
- 제4항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 중에서 선택된 하나 이상의 보조제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물.
- 제4항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로 에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형 리포좀, 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 에센스, 스프레이 또는 콘실 스틱 중에서 선택된 어느 하나의 제형인 것을 특징으로 하는 피부 보습 또는 주름개선용 화장료 조성물.
- 틴달화 유산균 사균체를 유효성분으로 포함하는 피부 보습 또는 주름개선용 약학 조성물.
- 제12항에 있어서, 상기 유산균은 스트렙토코커스(Streptococcus) 속, 락토코커스(Lactococcus) 속, 엔테로코커스(Enterococcus) 속, 락토바실러스(Lactobacillus) 속, 페디오코커스(Pediococcus) 속, 류코노스톡(Leuconostoc) 속, 바이셀라(Weissella) 속 및 비피도박테리움(Bifidobacterium) 속으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 균주인 것을 특징으로 하는 피부 보습 또는 주름개선용 약학 조성물.
- 제12항에 있어서, 상기 틴달화 유산균 사균체는 유산균 발효균체와 발효여액을 분리한 후, 유산균 발효균체를 60 내지 160℃에서 10 내지 60분간 가열하고, 20 내지 40℃ 또는 20℃ 이하로 급속 냉각하여 사멸시키는 방법으로 제조된 것을 특징으로 하는 피부 보습 또는 주름개선용 약학 조성물.
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