KR20140068008A

KR20140068008A - ACCase 억제인자에 대해 저항성인 벼를 생산하는 조성물 및 방법

Info

Publication number: KR20140068008A
Application number: KR1020147002566A
Authority: KR
Inventors: 멜리사 힌가; 스티븐 그리핀; 멜리사 샤논 문; 러셀 디. 라스무센; 페드리코 퀘바스
Original assignee: 리체텍 악티엔게젤샤프트
Priority date: 2011-07-22
Filing date: 2012-07-20
Publication date: 2014-06-05
Also published as: JP6121998B2; BR112014001434A2; EP2734616A1; UY39280A; US20130023416A1; CN105745320A; US20170002375A1; WO2013016210A1; US9370149B2; UY34211A; JP2014528701A; PE20141541A1; AR087290A1; EP2734616A4; AU2012287107B2; AU2012287107A1; HK1198542A1

Abstract

ACCase 억제 제초제, 구체적으로는 FOP 제초제에 대한 저항성/내성인 돌연변이 벼가 표 1에 기재되어 있다. 선별을 위해 사용된 ACCase 억제 제초제는 퀴잘로폽이다. ACCase 제초제에 대해 내성인 예시적인 돌연변이 벼가 개시되는데, 벼 게놈은 블랙-그래스 번호 시스템을 사용하는, ACCase 코딩 유전자의 카르복실 트랜스퍼라아제 도메인에서, G2096S 또는 동등한 것을 갖는다. 이 돌연변이는 FOP 대 DIM 제초제에 대한 차등 반응을 보여주고 비교가능한 비-저항성 벼 계통과는 더 큰 차이를 보여준다. 잡초를 방제하는 방법 및 형질도입 벼를 포함하는 제초제 저항성 벼를 생산하는 방법이 개시되어 있다.

Description

ACCase 억제인자에 대해 저항성인 벼를 생산하는 조성물 및 방법{METHODS AND COMPOSITIONS TO PRODUCE RICE RESISTANT TO ACCASE INHIBITORS}

본 출원은 모두 참고로 포함된, 2011년 7월 22일에 출원된 미국 가출원 번호 61/510,585 및 2011년 9월 30일에 출원된 미국 가출원 번호 61/541,832로부터의 우선권을 청구한다. ACCase 억제인자인 제초제에 대한 내성/저항성을 특징으로 하고 벼 작물에 유익한 다른 특징을 나타내는 신규한 벼 식물이 기술되고 개시된다. 또한, 논에서 제초제 저항성 벼의 사용에 의한 잡초의 방제 방법, 및 돌연변이 ACCase 효소를 코딩하는 형질도입유전자를 사용하여 제초제 저항성 벼를 생산하는 방법이 개시된다.

서열목록

본 출원은 EFS-웹을 통해 ASCII 서식으로 제출되었고 그 전체가 본원에 참고로 포함된 서열 목록을 포함한다. 2012년 7월 20일에 생성된 상기 ASCII 사본은 115760_SEQ_ST25.txt로 명명되고 크기로는 32,768 바이트이다.

벼 작물의 가치

벼는 아주 오래된 농작물이고 오늘날 세계의 주된 식용 작물 중 하나이다. 벼의 두 가지 재배종: 오리자 사티바 엘.(Oryza sativa L.), 아시아 벼, 및 오리자 글라베리마 스테우드.(Oryza glaberrima Steud .), 아프리카 벼가 존재한다. 아시아 종은 사실상 전세계의 재배 벼를 구성하고 미국에서 성장한 종이다. 세 개의 주요 벼 생산 지역: 미시시피 델타(Mississippi Delta)(아칸소, 미시시피, 북동 루이지애나, 남동 미주리), 멕시코 연안 지역(Gulf Coast)(남서 루이지애나, 남동 텍사스), 및 캘리포니아의 센트럴밸리(Central Valley)가 미국에 존재한다.

벼는 뿌리와 대기 사이의 줄기를 통해 기체 교환을 할 수 있는 고유한 구조를 갖기 때문에 얕은 물에서 성장할 수 있는 몇 안되는 작물 중 하나이다. 얕은 물에서의 성장은 최상의 수확량을 야기하는데, 벼가 보통 중점토 또는 표토 바로 아래의 불투과성 경반층인 토양에서 성장하기 때문이다. 이 토양 유형은 보통 다른 작물에 적합하지 않거나 기껏해야 작물이 저조하게 수확된다.

벼의 지속적인 향상은 증가하는 세계 인구에 대해 필수적인 영양을 제공하기 위해 반드시 해야한다. 세계 인구의 대부분은 영양의 일차적인 공급원으로 벼를 소비한다. 벼 향상은 통상적인 육종 관행을 통해 그리고 재조합 유전 기술에 의해 수행된다. 이 학문의 외부 사람에게는 간단하게 보일지라도, 작물 향상은 깊은 과학적 예술적 기술을 필요로 한다.

구체적인 육종 목적은 서로 다른 벼 생산 지역에서 다소 달라지지만, 수확량 증가가 모든 프로그램에서 일차적인 목적이다.

식물 육종은 현재 품종의 강점 및 약점의 분석 및 정의로 시작한 후, 프로그램 목표를 설정하여, 구체적인 육종 목적의 정의를 포함하는 후자를 처리한다. 이 목표는 모 공급원으로부터 바람직한 형질의 향상된 조합을 단일 품종에서 조합하는 것이다. 이 중요한 형질은 더 높은 수확량, 환경적 스트레스, 질병 및 곤충에 대한 저항성, 더 좋은 줄기 및 뿌리, 저온에 대한 내성, 더 좋은 작물 특징, 및 곡물 품질을 포함할 수 있다.

재배자는 처음에 2개 이상의 모 계통(line)을 선택하고 교배시킨 후, 여러 새로운 유전 재조합 중에서 선택한다. 재배자는 이론적으로 교배를 통해 수십억개의 새롭고 상이한 유전 재조합을 생성할 수 있다. 재배자는 세포 수준에서는 직접 조절하지 못하므로, 2명의 재배자가 같은 계통, 또는 심지어 동일한 벼 형질을 갖는 매우 유사한 계통을 절대 개발하지 못할 것이다.

가계 육종은 벼와 같은 자가수분 작물의 향상을 위해 일반적으로 사용된다. 유리하고 상보적인 형질을 보유한 2개의 모체가 교배되어 F₁ 세대를 생산한다. 1개 또는 2개 모두의 모체는 그 자체가 이전 교배로부터 F₁을 나타낼 수 있다. 뒤이어 2개의 모체가 순수 계통이라면 1개 또는 몇 개의 F₁을 자가수정하여 얻은 종자를 성장시키거나, 모체 중 적어도 하나가 F₁이면 초기 교배로부터 얻은 종자를 바로 성장시켜서, 분리군을 생산한다. 최상의 개체 선별은 첫 번째 분리군 또는 F₂에서 시작할 수 있고; 이어서, F₃ 초기에, 최상의 가계 중 최상의 개체가 선별된다. "최상"은 구체적인 재배 프로그램의 목적, 예컨대 수확량 증가, 질병 저항에 따라 정의된다. 전반적으로 다원적인 접근이 유전적 상호작용 때문에 "최상"을 정의하는데 사용된다. 하나의 유전적 배경에서의 바람직한 유전자는 상이한 배경에서는 다를 수 있다. 추가로, 유전자의 도입은 다른 유리한 유전적 특징을 방해할 수 있다. 가계의 복제 검정은 낮은 유전력을 갖는 형질에 대한 선별의 유효성을 향상시키기 위해 F₄ 세대에서 시작할 수 있다. 근친교배(즉, F₆ 및 F₇)의 진행 단계에서, 표현형적으로 유사한 계통의 혼합 또는 최상의 계통이 새로운 모계통으로의 잠재적 분리에 대해 시험된다.

역교배 육종은 바람직한 동형접합성 품종 또는 회귀 모체인 근교배 계통 내로 매우 유전가능한 형질에 대한 유전자를 전달시키기 위해 사용되어 왔다. 전달될 형질의 출처는 공여 모체라 불린다. 생성된 식물은 회귀 모체(예컨대, 품종)의 속성 및 공여 모체로부터 전달된 바람직한 형질을 가질 것으로 예상된다. 초기 교배 후에, 공여 모체의 표현형을 보유한 개체가 선별되고 회귀 모체와 반복적으로 교배(역교배)된다. 이 방법은 공여 모체에 의해 제공된 새로운 형질의 추가와 함께 회귀 모체의 모든 유리한 특징을 회복하는데 사용된다.

유망한 진행 육종 계통은 철저하게 시험하고 적어도 3년 또는 그 이상 동안 상업용 목적 지역(들)의 환경 표본의 적절한 표준과 비교한다. 최상의 계통은 새로운 상업용 변종 또는 잡종의 모체에 대한 후보이고; 몇 개의 형질이 여전히 부족한 것은 추가 선별을 위한 새로운 집단을 생산하기 위해 모체로 사용될 수 있다.

마케팅 및 유통의 최종 단계로 이어지기까지 이 방법은 보통 첫 번째 교배가 이뤄진 때로부터 8 내지 12년이 걸리고, 전구체로서의 향상된 육종 계통의 개발에 의존할 수 있다. 그러므로 새로운 품종의 개발은 정확한 장래 계획, 자원의 효율적 사용 및 최소한의 방향 수정을 요구하는 시간이 많이 걸리는 방법이다.

육종을 통한 벼의 향상은 벼의 자연적인 유전적 변이 및 교잡종, 예컨대 야생벼(wild rice)로 제한된다. 육종 프로그램에서의 새로운 변이의 도입은 보통 기술된 교배 프로그램, 예컨대 가계 또는 역교배 육종을 거친다. 그러나, 때로는 질병 저항성 또는 키 변화와 같은 새로운 형질의 도입을 야기하는 자연 돌연변이가 발견된다. 또한, 재배자는 벼 게놈 내로 돌연변이(DNA 서열의 작은 변경)를 유도하여 새로운 형질을 개발해 왔다. 흔히, EMS 또는 MNU를 더한 아지드화 나트륨이 돌연변이원으로 사용된다. 이 화학물질은 보통 G 및 C가 A 및 T로 변경되는, DNA의 단일 염기 변경을 랜덤하게 유도한다. 이 변경의 대부분은 유전자 코딩 영역 외부에 속하거나 유전자 생성물의 아미노산 서열을 변경시키지 않으므로, 작물에 미치는 영향이 없다.

재배자는 DNA 서열 내 돌연변이 부위를 직접적으로 조절하지 못한다. 유용한 변경의 식별은 효과적인 돌연변이가 유도될 랜덤한 가능성과 재배자가 그 돌연변이를 선별할 수 있을 랜덤한 가능성에 기인한다. 종자는 돌연변이유발 화학물질로 처리되고 곧바로 심어져 성장하고 M2 종자를 생산한다. M2 종자는 수많은 새로운 변이를 가질 것이고; 그러므로, 어떤 실험이든 동일한 조합을 생산하지 않을 것이다. 이 변종 중에서, 벼에 이전에 존재하지 않았고 식물 재배자에 의한 선별을 이용할 수 없는 새로운 형질이 발견되어 벼 향상을 위해 사용될 수 있다.

새로운 형질을 발견하기 위해서는, 재배자는 방법이 완전하게 랜덤하고 극도로 낮은 빈도의 유용하고 새로운 조합을 갖기 때문에, 반드시 효율적이고 전략적인 선별 전략을 사용해야 한다. 수천개의 유도된 새로운 유전적 변이 중에서, 바람직한 새로운 형질을 갖는 것이 단 한 개만 있을 수 있다. 최적의 선별 시스템은 수천개의 새로운 변이를 통해 스크리닝할 것이고 새로운 형질을 가질 수 있는 몇 개 또는 심지어 한 개의 식물의 검출을 가능하게 할 것이다. 가능한 새로운 형질을 식별하거나 발견한 후에, 재배자는 반드시 가계 또는 역교배 육종에 의해 새로운 품종을 개발해야하고 새로운 형질 및 품종을 확인하는 광범위한 시험이 벼 생산자에게 안정한 유전적 가치를 보여줘야 한다.

재조합 유전 기술을 사용하여, 벼에 향상된 특징을 코딩하는, 돌연변이를 갖는 핵산 분자가 상업적으로 적합한 게놈을 갖는 벼 내로 도입될 수 있다. 돌연변이가 식별된 후에, 이것은 재조합 기술로 벼 내로 전달될 수 있다.

벼에서의 제초제 저항성 모체의 적용

작물 내 잡초는 공급원에 대해 경쟁하여 작물의 수확량 및 질을 크게 감소시킨다. 잡초를 죽이지만 작물에 해가 가지 않는 선택적인 제초제의 적용을 통해 작물에서 잡초가 방제되어 왔다. 보통 제초제의 선택성은 작물과 잡초간의 생화학적 변이 또는 차이에 기초한다. 일부 제초제는 비선택적인데, 이는 모든 혹은 대부분의 식물을 죽이는 것을 의미한다. 제초제에 대한 내성 또는 저항성을 전달하는 특정 단백질을 발현시키는 새로운 유전자가 삽입되면, 비선택적이거나 넓은 스펙트럼의 제초제는 작물에 사용될 수 있다. 또한, 작물에서 제초제에 대한 저항성은 단백질을 변경시키는 유전적 돌연변이 및 생화학적 방법을 통해 달성되어 왔다. 이 돌연변이는 자연적으로 발생할 수 있지만 주로 작물에서 또는 시험관내(in vitro) 조직 배양물에서 유도되어 왔다. 불행하게도 일부 경우에, 특히 특정 제초제의 반복적인 사용으로, 잡초는 저항성을 제공하는 자연 돌연변이의 의도되지 않은 선별을 통해 저항성을 개발해 왔다. 잡초가 특정 제초제에 대해 저항성이 되면, 그 제초제는 더이상 잡초 방제용으로 유용하지 않다. 상이한 방식의 잡초 방제 조치를 번갈아 사용하는 것을 통해 잡초 내 저항성의 개발을 가장 지연시켜 저항성 잡초의 개발을 방해한다.

벼 생산은 특히 방제하기 어려운 앵미(red rice)라 불리는 잡초에 시달리고 있다. 앵미가 재배되는 벼와 너무 유전적으로 유사해서(이들은 가끔 교차 수분한다) 앵미를 표적으로 하나 재배되는 벼를 해치지 않는 이용가능한 선택적인 제초제가 없기 때문에, 어려움이 발생한다. 현재, 넓은 스펙트럼의 제초제, 예컨대 이미다졸리논 및 술포닐우레아 제초제에 대해 저항성인 벼를 만드는, 벼에서 발견된 돌연변이의 개발을 통해 상업용 벼 생산에 방제가 제공된다.

제초제, 및 대체 작용 방식을 갖는 제초제들의 조합에 대해 저항성으로 만들어주는 벼에서의 새로운 돌연변이의 발견은 벼 생산에 매우 유익할 것이다. 추가적인 유리한 특징 및 대체 저항성을 갖는 벼 게놈 내로 제초제 저항성에 대한 유전자를 획득하고 혼입시키는 것은 도전적이고, 예측 불가능하고, 시간이 많이 들고 비싸지만, 세계의 증가하는 식량 수요를 충족시키기 위해서 필요하다.

대체 작용 방식의 제초제에 대해 고유한 저항성을 갖는 특유의 벼 계통이 본원에 기술된다. 이 벼 계통은 재배자의 논에 적용된 제초제의 종류를 교대시킬 수 있어 잡초 저항성의 개발을 느리게 하기 때문에, 몇몇 제초제의 내용 연한을 연장시켜야 한다. 몇몇 방법은 잡종 종자 생산을 위한 옵션뿐 아니라, 잡초 방제를 위한 잡종 또는 변종 내로 이 저항성을 배치하는 것이 가능하다. 본원에 기술된 벼 계통은 벼에서의 잡초 방제를 위한 새로운 방법을 제시하고, 잡초를 방제하고 이것과 다른 잡초 방제 방법의 장기간 사용을 대비한 임의의 많은 가능한 전략으로 배치될 수 있다. 구체적으로, ACCase 억제 제초제에 대해 내성인 돌연변이 벼가 개시되어 있다. 이것은 정의된 아미노산 서열을 갖는 식물이다.

예를 들면, ACCase 돌연변이 G2096S를 갖는 벼가 이미 작물학적으로 채택되어 본원에서 기술된 육종 또는 역교배를 통해, 상업적으로 적합한 생물학적 재료로 제초제 저항성을 제공할 것이다.

블랙 그래스(Black Grass)(쥐꼬리뚝새풀; Alopecurus myosuroides) 번호 시스템을 사용하여, ACCase 유전자의 카르복실 트랜스퍼라아제 코딩 영역 내 돌연변이 G2096S를 갖는, ACCase 억제인자 제초제에 대해 내성인 돌연변이 벼가 개시되어 있다. 돌연변이는 제초제로 사용된 ACCase 억제인자에 대해 내성/저항성인 아세틸-코엔자임 A 카르복실라아제 효소를 만든다.

제초제 저항성 종자로부터 유래된 세포, 이러한 종자로부터 성장한 식물 및 이러한 식물로부터 유래된 세포, 이러한 종자로부터 자란 식물의 자손 및 이러한 자손으로부터 유래된 세포가 본 개시의 범위 내에 있다. 기탁된 종자로부터 생산된 식물의 성장, 및 이러한 식물의 자손은 전형적으로, 상응하는 야생형 식물의 성장을 정상적으로 억제할 제초제 수준에서 아세틸-코엔자임 A 카르복실라이제-억제 제초제에 대해 저항성/내성일 것이다.

또한, 벼 식물 인근의 잡초의 성장을 방제하는 방법이 본 개시 범위 내에 있다. 이러한 방법의 한 예는 벼 식물의 성장을 정상적으로 억제할 제초제 수준에서 잡초 및 벼 식물에 하나 이상의 제초제를 적용하는 것이다. 예를 들면, 하나 이상의 제초제는 아세틸-코엔자임 A 카르복실라아제 활성을 억제시킨다. 이러한 방법은 아세틸-코엔자임 A 카르복실라아제 활성을 억제하는 임의의 제초제 및 임의의 저항성 벼 돌연변이, 예컨대 본원에 개시된 3개의 실시태양으로 실행될 수 있다.

제초제-내성 벼 식물의 성장 방법은 (a) 저항성 벼 종자를 심는 것; (b) 벼 종자가 발아되게 하는 것; (c) 벼 식물의 성장을 정상적으로 억제할 제초제의 수준으로 벼 눈에 하나 이상의 제초제를 적용하는 것을 포함한다. 예를 들면, 제초제 중 적어도 하나는 아세틸-코엔자임 A 카르복실라아제를 억제한다. 이러한 방법은 아세틸-코엔자임 A 카르복실라아제 활성을 억제하는 임의의 제초제로 실행될 수 있다.

또한, 제초제-내성 벼 식물의 생산 방법은 형질도입유전자를 사용할 수 있다. 이러한 방법의 한 예는 형질도입유전자로 벼 식물의 세포를 형질전환시키는 것이고, 여기서 형질도입유전자는 생성된 벼 식물에 아릴옥시페녹시프로피오네이트 제초제, 시클로헥산디온 제초제, 페닐피라졸린 제초제 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 제초제에 대한 내성을 부여하는 아세틸-코엔자임 A 카르복실라아제 효소를 코딩한다. 임의의 적합한 세포는 이 방법의 실행에 사용될 수 있고, 예를 들면, 이 세포는 캘러스(callus) 형태일 수 있다. 형질도입의 실시태양은 ACCase를 코딩하는 핵산에서 2096 위치(블랙 그래스 번호 시스템)의 G가 S로 되는 돌연변이를 포함하는 것이다.

벼 식물의 돌연변이 유발된 아세틸-코엔자임 A 카르복실라아제를 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하고, 여기서 돌연변이 유발된 아세틸-코엔자임 A 카르복실라아제의 아미노산 서열이 상응하는 야생형 식물의 아세틸-코엔자임 A 카르복실라아제의 아미노산 서열과 상이한, 재조합, 돌연변이 유발된, 합성, 및/또는 단리된 핵산 분자가 본 개시의 범위 내에 있다.

ACCase 코딩 유전자 내 상이한 돌연변이는 보통 특이적 유형의 ACCase 억제 제초제(FOPS), (DIMS)에 대한 저항성과 관련이 있다. 따라서, 상이한 돌연변이의 특이성이 벼에서 잡초 방제를 위한 다중 작용 방식의 개발 가능성을 제시한다.

도 1은 깃발로 표시된 퀴잘로폽(quizalofop)이 분무된 열 11USAG51477에서 생존한 식물을 도시한다.
도 2는 이식 후의 퀴잘로폽 생존물을 도시한다.
도 3은 종자 세트를 갖는 11USAG52084-2 벼 식물을 도시한다.
도 4a, 4b, 4c 및 4d는 ACCase 코딩 유전자에서 카르복실 트랜스퍼라아제 코딩 영역에 대한 DNA 서열을 도시하고; G2096S로부터의 단일 뉴클레오티드 변경은 돌연변이 계통 ML0831265-0149에서 식별되고, 이것은 09PM72399로 식별된다. 도 4a, 4b, 4c 및 4d는 등장 순서대로 서열 2-4를 각각 개시한다.
도 5는 ACCase 유전자의 카르복실 트랜스퍼라아제 영역에 대한 단백질 서열의 비교를 도시하고; 코드 09PM72399가 있는 계통은 계통 ML0831265-0149이고; 이 계통은 블랙-그래스에 대해 2096 위치에서 단일 아미노산의 변경을 도시하고; R0146은 돌연변이군을 생산하기 위해 돌연변이원으로 처리된 본래 계통이다. 도 5는 등장 순서대로 서열 5-7을 각각 개시한다.
도 6은 퀴잘로폽 제초제의 상이한 적용률에서 ML0831265-0149로부터의 식물의 결과를 도시한다.
도 7은 상이한 ACCase 유형 제초제의 적용으로 ML0831265-0149으로부터의 식물의 결과를 도시한다.
도 8은 2096 위치(블랙 그래스 번호 시스템)에서 G 대신에 S가 있는 ACCase 효소를 코딩하는 돌연변이 뉴클레오티드 서열(서열 1)이다.
도 9는 (a) G2096S 돌연변이를 갖는 벼 식물; 및 (b) 돌연변이가 없는 벼 식물에서 FOP의 ACCase 억제 제초제와 접촉한 후의 상해 %의 비교를 상이한 돌연변이에 대한 공개된 비교와 함께 도시한다.

오리자 사티바 엘. 벼는 중요하고 가치있는 농작물이다. 따라서, 벼 재배자의 지속적인 목표는 작물학적으로 괜찮은, 안정하고 높은 수확량의 벼 품종을 개발하는 것이다. 재배자는 그의 경제적 상태를 증가시키는 방법으로 새로운 변종 및 잡종으로부터 수확량을 증가시키는 것을 끊임없이 기대하고 있다. 인구 수준 외에도, 영양 수요가 확장되나 생산원이 제한되어 있기 때문에 수확량 증가가 필요하다. 이 목표를 성취하기 위해, 벼 재배자는 반드시 요구되는 형질 및 우수한 수확량을 보유한 벼 식물을 선택하고 개발해야 한다.

아세틸-코엔자임 A 카르복실라아제(ACCase; EC 6.4.1.2) 효소는 식물 엽록체에서 드 노보(de novo) 지방산 합성 경로의 시작으로 말로닐-CoA를 합성한다. 풀 엽록체 내 ACCase는 N-말단 형질 펩티드를 통해 색소체 내로 이동된, 다기능성 핵-게놈-코딩된 매우 큰 단일 폴리펩티드이다. 풀 엽록체의 활성 형태는 단독 이량체 단백질이다.

풀 내 ACCase 효소는 3가지 부류의 제초제 활성 성분에 의해 억제된다. 2가지 가장 두드러진 부류는 아릴옥시페녹시프로파노에이트("FOP") 및 시클로헥산디온("DIM")이다. 이 두 부류 외에, 3번째 부류로 페닐피라졸린("DEN")이 기술되어 왔다.

ACCase 효소의 카르복실 트랜스퍼라아제 영역 내 특정 돌연변이는 ACCase 제초제에 대해 저항성이 되는 풀을 야기한다. 잡초 블랙-그래스에서, 5개 이상의 돌연변이가 ACCase 제초제의 FOP 또는 DIM 부류에 대한 저항성을 제공하는 것으로 기술되어 왔다. 이 제초제에 대해 저항성인 ACCase 효소를 만드는 일부 돌연변이는 감소된 적응도와 관련이 있을 수 있다.

돌연변이군 및 수립

돌연변이 육종 프로그램은 독점적인 제초제 내성 계통을 개발하는 것으로 개시되었다. 영구적인 돌연변이군은 P1003, R0146, 및 P1062을 포함하는 3개 계통의 대략 10,000개 종자(낱알의 평균 중량으로 추정됨)를 돌연변이유발 아지드화 나트륨(AZ) 및 메틸-니트로소우레아(MNU)에 노출시켜 생성되었다. 처리된 종자를 일정 간격으로 심었다. 개개의 식물을 수확하여 8,281개 돌연변이 계통을 생성하였다. 돌연변이 계통은 형질 스크리닝을 위한 영구적인 돌연변이군으로 유지되었다.

제초제 스크리닝

영구적인 돌연변이군을 퀴잘로폽 제초제로 스크리닝하였다. 출원인은 각 반복 실험에서 총 평가된 식물이 250,000개인 두 번의 반복 실험에서, R0146으로부터의 2,735개 M2 자손 열, P1003으로부터의 3,774개 M2 자손 열 및 P1062으로부터의 655개 M2 자손 열을 심었다. 심은 후 첫 번째 반복 실험 27일 차에 15 oz/acre(115.59 gmai/ha)의 비율로 퀴잘로폽을 적용하였다. 식물은 3-4 잎 단계였고 제초제가 도포될 때 활발히 자라고 있었다. 적용 후 다음날 논을 물로 씻었다. 약 9일 후에, 생존한 식물이 0.006 %의 추산된 돌연변이 비율을 보여주는 4개의 상이한 자손 열에서 발견되었다(도 1-3).

ACCase 제초제에 대한 저항성을 보여주는 계통에 대한 단백질 서열 비교

색소체성 ACCase 단백질을 코딩하는 유전자 부분을 퀴잘로폽의 적용에서 생존된 모든 식물에서 서열 분석하였다. 오직 유전자의 카르복실 트랜스퍼라아제 코딩 영역만을 서열 분석하였다(도 4a ,4b, 4c 및 4d). 계통 ML0831265-01493으로부터 유래한 모든 식물은 ACCase 단백질 내 아미노산 변경이 초래된 DNA 서열 내 돌연변이를 가졌다. 하나의 DNA 염기가 블랙-그래스의 넘버링에 대해 아미노산 2096에 대한 코돈에서 변경되었다. (유전자 은행 CAC84161.1, "Am"으로 표시)(도 5). 벼 및 블랙-그래스 모두에서, 위치 2096의 아미노산은 글리신이다. 블랙-그래스에서 발견된 저항성 돌연변이는 이 위치의 아미노산을 알라닌으로 변경시킨다. 명칭 ML0831265-01493인, 퀴잘로폽 적용에서 생존한 벼에서 발견된 돌연변이는 아미노산 2096에 대한 DNA 코돈을 GGC로부터 AGC로 변경시켜 위치 2096에 글리신 대신에 세린이 삽입되도록 한다. 돌연변이 계통은 돌연변이군의 첫 번째 스크리닝에서 퀴잘로폽에 대한 저항성을 보여주었다. 퀴잘로폽을 이용한 이후의 스크리닝이 FOP에 대한 저항성을 확인하였다. 생존한 돌연변이 계통은 DIM 유형 ACCase 억제 제초제에 약하였다.

퀴잘로폽을 이용한 스크리닝에서 생존하였던 돌연변이군에서의 다른 계통 중 어느 것도 ACCase 코딩 유전자의 카르복실 트랜스퍼라아제 영역 내 돌연변이를 가지고 있지 않았지만, 그것은 퀴잘로폽 제초제에 대한 저항성을 가지는 것으로 확인되었다. 이 계통의 저항성은 ACCase의 카르복실 트랜스퍼라아제 영역 외부의 변경으로부터 유래된 것일 수 있거나 상이한 유형의 저항성 메카니즘으로부터 유래될 수 있다.

저항성 식물

제초제 처리 후, 그 열 내에서와 인접한 열의 모든 주위 식물은 죽어 있었던 반면, 이식 전 생존한 식물은 푸르렀고 건강해 보였다. 이식 후 식물을 유지하여 수확하였다. 자손을 생산 벼에서 제초제 저항성의 출처로 유지하고 시험하고, 개발하였다(표 1). 이 형질을 역교배하거나 독점적 벼 계통 내로 육종하고, 벼에서 잡초를 방제하는 대체 작용 방식을 생산자에게 제공할 새로운 변종 또는 잡종을 개발하기 위해 사용하였다. 이 기회를 재배자에게 제공하는 것은 높은 수확량을 제공하고 현재 사용되는 잡초 방제 기술의 내용 연한을 연장시키는 큰 가치를 갖는다. 이 제초제 저항성 계통을 식물을 성장시키는 제초제의 단순한 적용을 통해 또는 분자 기술을 통해 추적할 수 있다. 제초제 저항성에 대한 원인 돌연변이를 비롯하여, 돌연변이 계통의 완전한 서열이 알려져 있으므로, 저항성을 가지고 있는 식물 및 계통의 선별을 위해 분자 마커, 예컨대 단일 뉴클레오티드 다형체 마커를 설계할 수 있다. 제초제 생물검정과 함께 이 마커는 벼 내의 적어도 FOP 유형의 ACCase 제초제 저항성의 개발을 용이하게 한다.

육종 프로그램에서의 제초제 저항성 벼의 선별은 생물검정에서 제초제를 자손 재료에 분무하고 저항성을 유전하는 재료를 관찰함으로써 성취된다. 별법으로, 계통 ML0831265-01493은 돌연변이를 함유하는 유전자 영역을 서열분석하거나 돌연변이를 검출하기 위해 단일 뉴클레오티드 다형체 마커를 만들어서 선별될 수 있다.

ACCase 억제인자에 대한 내성/저항성인 잡종 벼의 생산

ACCase FOP 유형의 제초제의 적용에 기초한 벼에서의 잡초 방제를 위한 형질의 현실적인 개발이 이제 가능하다. 이전에, 이 제초제는 벼 식물을 죽이기 때문에 벼에 적용하지 않았다. 기술된 임의의 벼 계통이 벼 품종 또는 잡종으로 개발되어 잡초 방제 방법으로 벼 생산에서 사용되기에 적합하다. 저항성 형질은 육종 및 개발을 가능하게 하는 완전히 유전 가능한 것으로 증명되었다.

이 형질은 정상적으로 벼를 죽이는 비율로 FOP 제초제의 적용 후에 살아남아 정상 종자 세트를 생산하는 것으로 증명되었다. 그 외에, 이 형질은 다중 FOP 제초제의 적용에 개량될 수 있었다. 제초제 저항성의 수준은 앵미 및 다른 풀 유형의 잡초의 완전한 방제를 가능하게 하는 것이다.

이 형질은 제초제 생물검정 또는 분자 마커 중 하나로 완전히 선별가능하여 FOP 제초제 저항성을 갖는 새로운 벼 품종 및 잡종을 개발하는 선별 및 육종 전략을 가능하게 한다. 계통 ML0831265-01493에 제공된 저항성은, 부분적 우성으로 또는 완전한 우성으로 작용하여, 현재 상업용 품종 내로 역교배되기에 이상적으로 적합하게 되는 단일 유전자에 기인한다. 별법으로, 계통 ML0831265-01493은, 일부 시장에 대한 일부 핵심 품질 특징이 결핍되어 있지만, 여전히 가계 육종 프로그램에서 모체 계통으로 사용되기에 작물학적으로 적합하다. 별법으로, 특정 여성 계통과 교배되면, 이 계통은 본원에 기술된 바와 같이, 제초제 저항성을 가지고 있는 잡종 종자를 직접 생산하는데 사용될 수 있다.

본원에 기술된 유전자로 전환되면 ACCase 억제 제초제에 대해 저항성인 상업용 벼인 벼 종자를 생산하는 적합한 계통은 PTA-8504, PTA-8505, PTA-836 및 PTA-6795로 ATCC에 기탁된다. 전환은 육종 또는 재조합 방법에 의할 수 있다.

실시예

실시예 1: ML0831265 -01493 식물의 퀴잘로폽 제초제 비율 반응의 결과

G2096S 돌연변이를 갖는 벼 계통을 제초제의 일련의 상이한 적용 비율을 시험하여 퀴잘로폽 제초제(어슈얼(Assure) II^®)에 대한 저항성 수준에 대해 시험하였다. 제초제 비율 처리는 도 6에서 도시된 것과 같다. 모든 처리를 2-3 잎 단계에서 적용하였다. 플롯(plot)을 적용 후 21일차에 평가하였다. 1% 작물 오일 농도로 10 gal/acre의 부피에서 분무를 적용하였다. 처리를 비분무된 대조 플롯에 대해 백분율 상해로 평가하였다.

G2096S 돌연변이의 출처는 계통 ML0831265-01493이었다. ML0831265-01493으로부터의 종자의 샘플이 ATCC에 기탁된다. 이 계통은 ACCase 유전자 내 2096 위치에서 글리신 대신에 세린으로 아미노산 변경을 야기한 돌연변이로 인해 일부 ACCase 제초제에 대한 저항성을 갖는 것 외에는 R0146와 같다.

모두 G2096S 돌연변이를 갖는 ML0831265-01493의 4개의 상이한 선별을 각 처리에서 3번 복제하였고, 비돌연변이 계통 R0146과 함께 시험하였다. 결과는 제초제 적용 후 21일차에 점수를 매긴 것에 기초한다.

실시예 2: G2096S 돌연변이를 갖는 벼 계통의 ACC 억제인자 제초제 비율 반응의 결과

G2096S 돌연변이를 갖는 벼 계통(ML0831265-01493)을 상이한 ACCase 억제 제초제에 대한 반응에 대해 시험하였다. 제초제의 세트(도 7)를 선택하여 비돌연변이된 본래 변종 R0146과 함께 G2096S 돌연변이를 갖는 3개의 벼 계통에 적용하였다. R0146 및 돌연변이된 계통의 반응이 도 7에 도시된다. 제초제 적용의 비율은 퀴잘로폽 및 클레토딤(clethodim)을 제외하고는 표지된 비율 수준의 두 배이고, 이것은 벼를 죽이기 충분한 비율로 선택되는 비율의 두 배이다.

모든 처리를, 종자를 심은 후 약 20일에 2-3 잎 단계에서 적용하였다. 플롯을 적용 후 21일차에 평가하였다. 1% 작물 오일 농도로 10 gal/acre의 부피에서 분무를 적용하였다. 처리를 비분무된 대조 플롯에 대해 백분율 상해로 평가하였다.

ML0831265-01493으로부터의 종자의 샘플이 ATCC에 기탁된다. 이 계통은 ACCase 유전자 내 위치 2096에서 글리신 대신에 세린으로 아미노산 변경을 야기한 돌연변이로 인해 일부 ACCase 제초제에 대한 저항성을 갖는 것 외에는 R0146과 유사하다.

모두 G2096S 돌연변이를 갖는 ML0831265-01493의 3개의 상이한 선별을 각 처리에서 2번 또는 3번 복제하였고, 비돌연변이체 R0146 계통과 함께 시험하였다. 결과는 제초제 적용 후 21일차에 점수를 매긴 것에 기초한다.

ACCase 코딩 유전자 내 상이한 돌연변이는 보통 특이적 유형의 ACCase 억제 제초제(FOPS), (DIMS)에 대한 저항성과 관련이 있다. 따라서, 상이한 돌연변이의 특이성이 벼에서 잡초 방제를 위한 다중 작용 방식의 개발 가능성을 제시한다. 예를 들면, 도 9는 본원에 개시된 G2096S 돌연변이가 2개의 흔한 FOP 유형의 ACCase 억제 제초제에 대해 최근에 공개된 돌연변이 대안보다 벼에 더 큰 내성을 전달하는 것을 도시한다. FOP 제초제에 대한 계통 ML0831265-01493 벼의 상이한 반응은 이 계통 또는 근본적으로 유사한 계통의 상업용 개발이, 다른 출처에서 현재 이용할 수 없는 잡초 방제에 대한 새로운 작용 방식을 제공하는 것을 도시한다.

실시예 3: 돌연변이 벼 계통 ML0831265 -01493은 ACCase 억제인자 저항성 벼외의 특징에서는 비돌연변이된 R0146 벼와 분명한 차이가 없음을 도시한다.

연구 플롯에서, 돌연변이 계통 ML0831265-01493을 본래의 비돌연변이 계통 R0146과 나란히 관찰하였다. 관찰할 수 있는 차이를 식별하지 못하였다. 이 식물들은 동일한 성장 패턴을 보여주었다. 또한, 이 식물들의 건강 및 건장함은 임의의 검출할 수 있는 차이없이 유사하게 나타났다. 또한, 측정된 일부 특징은 돌연변이 계통 ML0831265-01493 및 비돌연변이된 계통 R0146 사이의 새로운 중요한 차이를 보여주었다(표 2). 계통 ML0831265-01493 내 G2096S 돌연변이는 식물의 정상적인 성장 또는 적응도에 미치는 부정적인 영향이 없음을 보여준다.

실시예 4: 돌연변이를 갖는 식물을 선별하는 DNA 마커의 개발

DNA 마커는 표현형을 관찰해야 할 필요 없이 특정 형질에 대해 선별을 가능하게 한다. 계통 ML0831265-01493의 경우에, 저항성을 야기하는 돌연변이는 특이적인 DNA 서열 및 주위 서열을 포함하는 것으로 알려져 있다. 이 서열을 아는 것은 단일 뉴클레오티드 다형성을 검출할 임의의 마커 시스템의 설계, 제작 및 사용을 가능하게 한다.

대부분의 단일 뉴클레오티드 검출 분석에서, 프라이머를 특이적 형광 염료로 표지하고 및 돌연변이 부위에서의 1개의 뉴클레오티드로 어닐링시킨 DNA 서열을 기초로 합성한다. 또한, 두 번째 프라이머를 상이한 색의 두 번째 형광 염료를 가지게 하여 돌연변이 부위에서의 대체 뉴클레오티드와 어닐링한다. 이어서, 두 프라이머를 개개의 식물로부터의 DNA 샘플과 어닐링하게 한다. 세척 후, 오직 어닐링 매치(annealing match)를 갖는 프라이머만 샘플에 남는다. 형광을 측정하고 검출된 색을 기초로 돌연변이 부위에서의 뉴클레오티드를 결정한다. 단일 색은 샘플이 비돌연변이 유형 또는 돌연변이 유형 중 하나에 대해 동형접합성임을 나타내고, 두 색 모두의 검출은 샘플이 이형접합성임을 나타낸다.

돌연변이에 대한 단일 뉴클레오티드 마커를 적용하는 것은 식물에 미치는 제초제 적용의 효과를 관찰해야 할 필요 없이 제초제 저항성에 대한 선별을 가능하게 한다. 새로운 계통이 돌연변이에 대해 동형접함성임을 증명하기 전까지는 분자 마커 또는 표현형에 의한 시험을 필요로 한다. 계통 또는 식물이 동형접합의 검출을 가능하게 하는 동형접합성이거나 이형접합성이면, 분자 마커는 제초제 적용 효과를 관찰하는 것을 가능한 한 세대 더 일찍 보여준다.

실시예 5: 상업용 계통 내로의 ACCase 저항성의 통합

G2096S 돌연변이를 갖는 계통 ML0831265-01493(공여 모체) 및 회귀 모체로부터의 식물로부터 식물을 성장시키고, 이 예는 P1233이다. P1233 식물을 하기 표준 교배 절차에 따라 무성생식화하고 계통 ML0831265-01493의 식물의 화분으로 수분한다. 개개의 식물의 2-4 인치의 잎 재료를, 총괄적으로 교배물을 만들고 다형성 마커의 세트를 식별하기 위해 분자 마커로 식물을 분석하는데 사용한다. 벼 게놈에 걸쳐 고르게 간격을 둔 대략 100개의 다형성 마커를 식별하는 것이 최상이다. P1233 식물로부터 F1 종자를 수확하고, 이것은 교배에서 여성 모체로 사용된다.

F1 종자 및 회귀 모체 계통인 P1233을 심고 다시 성장시킨다. 제초제 저항성 공여 모체로부터 발생한 성공적인 교배를 확인하기 위해 F1 모종에 제초제를 분무한다. 저항성이 유전되지 않은 이 식물은 죽을 것이다. 추가로, 또한, 이 식물은 이것이 진짜 F1 식물, 즉, 두 모체 모두로부터 마커를 받았음을 확인하기 위해 몇개의 다형성 마커로 시험될 수 있고, 무성생식화되고 여성 모체로 사용된 계통 P1233으로부터의 식물에 대해 남성 또는 화분 공여 모체로 저항성 F1 식물을 사용하여 이 교배 방법을 반복한다. 종자가 성숙한 후에, BC1F1 종자를 수확한다.

BC1F1 종자 및 회귀 모체 계통인 P1233을 심고 성장시킨다. 공여 모체로부터 제초제 내성 돌연변이를 유전 받았다는 것을 식별하기 위해 F1 모종을 제초제로 분무한다. 잎 조직을 내성 모종으로부터 수집하고 다형성 마커로 분석하기 위해 실험실에 제출한다. 마커 분석을 기초로 계통 P1233 게놈의 가장 높은 분율을 보여주는 5개의 식물을 선별한다. 이것은 계통 P1233의 무성생식화된 식물에 대한 화분 공여체로 사용된다. 종자가 성숙한 후에, BC2F1 종자를 수확한다.

BC2F1 및 회귀 모체 계통인 P1233을 심고 성장시킨다. 공여 모체로부터 제초제 내성 돌연변이를 유전 받았다는 것을 식별하기 위해 BC2F1 모종을 제초제로 분무한다. 잎 조직을 내성 모종으로부터 수집하고 모든 비고정된(분리) 마커를 이용한 분석을 위해 실험실에 제출한다. P1233 게놈의 95% 초과의 회복을 보여주는 5개의 식물을 선택하고, 이것을 자가 수분하게 한다. 개체가 P1233 게놈의 95% 이상의 회복을 보여주지 못하면 역교배 단계를 반복한다. BC2F2 종자를 개개의 자가 수분한 식물로부터 수확한다.

각 식물로부터의 24개 이상의 개개의 BC2F2 종자를 심고 성장시킨다. 잎 조직을 수집하고; DNA를 추출하여 서열 분석하여, 동형접합성 조건에서 G2096S 돌연변이를 가지고 있는 개체를 식별한다. 식물을 자가 수분하게 한다. 이 식물로부터의 BC2F3 종자를 수확하고 P1233의 새로운 제초제 내성 계통으로서 식별한다. 계통 또는 자손 열을 머리 열에서 성장시키고 최상의 열에 대한 선별을 하여 잡종 교배 및 수확량 시험을 진척시킨다.

또한, 동일한 방법을 ACCase FOP 유형 제초제에 대한 저항성을 가지고 있는 다른 계통을 개발하기 위해 따를 수 있다. 잡종 생산에 사용되는 여성 모체에서 저항성을 개발하기 위해 S-계통으로 회귀 모체를 선별한다. 별법으로, 저항성을 1개 초과의 회귀 모체에서 개발할 수 있다. 1개의 회귀 모체 계통은 잡종에 사용되는 남성 계통이고, 다른 것은 동형접합성 조건에서 저항성(G2096S 돌연변이)을 가지고 있었던 잡종을 만들기 위해 잡종에 사용되는 여성 계통이다. 회귀 모체의 다른 예는 다른 제초제 저항성 또는 심지어 형질도입유전자 형질과 같은 현재 상업용 형질을 가지고 있는 계통일 수 있다. 다른 모체는 돌연변이 계통의 다른 스크리닝으로부터 유래될 수 있고 단일 계통 내로 다중 형질을 조합하기 위해 선택될 수 있다.

실시예 6: ACCase 유형 FOP 제초제에 대한 저항성을 갖는 새로운 상업용 계통의 개발

육종 접근을 통한 변종 또는 잡종 모체 계통 중 하나에서 ACCase FOP 유형 제초제에 대한 벼의 저항성을 개발한다. 선천적인 강점 및 약점에 대한 계통 ML0831265-01493의 신중한 분석이 계통 ML0831265-01493 내 약점을 바로잡을 계통을 식별하기 위해 행해진다. 단순한 생물검정(제초제를 식물에 분무하고 저항성을 유전받은 개체로 살아남는 것을 관찰하는 것)을 성공적인 교배를 확인하기 위해 적용할 수 있도록 남성 모체로서 제초제 저항성을 가지고 있는 계통 ML0831265-01493을 사용한다.

하나 이상의 적절한 모체를 선별한 후에, 먼저 1개의 선택된 계통으로 교배가 이뤄진다. 다른 모체와의 교배가 추가적인 형질 또는 유전적 변이에 기여하는 이후 세대에서 이뤄질 수 있다. 이 실시예에서, 개발 방법은 돌연변이 계통 ML0831265-01493의 약한 특징을 향상시키기 위해 P1003와 오직 한번의 교배를 수반할 것이다. 다중 제초제가 벼 생산에서 잡초 방제를 위해 사용되게 하는, 대체 제초제에 대한 저항성을 가지고 있는 돌연변이군으로부터 다른 모체를 선택한다. 또한, 이미 개발되고 상업화된 제초제 저항성 또는 형질도입유전자 형질을 가지고 있는 모체를 선택한다.

첫 번째 단계에서, 여성으로 사용되고 고유한 특징을 제공하는 것으로 고려되는 선별된 모체 계통 P1003을 무성생식화하고, 이것을 계통 ML0831265-01493과 재조합하면, 새로운 변종 또는 잡종에 대한 모체 계통의 개발로 이끌 것이다. G2096S 돌연변이 ML0831265-01493를 가지고 있는 돌연변이 계통으로부터의 화분을 계통 P1003의 무성생식화된 식물을 수분하는데 사용한다. F1 종자를 수확하여 심는다. 원한다면, 추가적인 교배가 모체 계통 또는 다른 특징 및 유전적 변이의 도입 목적을 위한 다른 모체 중 하나에 이뤄질 수 있다.

교배가 성공적이었다는 것을 확인하기 위해 F1 종자의 성장 및 제초제의 적용을 행한다. 생존한 식물은 진짜 F1이어야 F2 종자를 스스로 생산할 수 있다. 이어서, 제초제 저항성을 유전받은 식물을 식별하기 위해 F2 종자를 심고 다시 분무할 것이다. 살아남은 나머지 식물은 저항성 형질에 대한 이형접합성이거나 동형접합성이어야 한다. 다른 형질에 관심이 있다면, 이것은 F2 식물에서 유전에 대해 이 단계에서 또한 평가되어야 한다. 제초제 처리에 살아남은 F2 식물 중에서 선별하고 이것을 자가 수분하게 하여 F3 종자를 생산한다. 개개의 식물로부터 F3 종자를 수확하고 개개의 F3계로 유지한다.

이어서, F3계를 일렬로 심고 다시 제초제를 적용하여 제초제 저항성에 대해 동형접합성인 F3계 및 F2 식물을 식별한다. 관심있는 다른 형질 및 특징에 대한 선별은 제초제 저항성에 대해 동형접합성인 F3계 중에서 이뤄진다. F4 종자를 선별된 열로부터 수확한다.

새로운 변종을 개발하기 위한 수확량 시험 또는 이 수확량 시험에서 시험하기 위한 잡종 종자를 생산하는 모체를 선택하기 위한 검정 교배에서 F4 종자를 직접 사용한다. 선별은 수확량 및 다른 목표 형질 및 품질과 같은 특징에 대한 수확량 시험의 계통들 중에서 이뤄진다. 또한, F4 종자는 목표 형질을 위한 선별도 이뤄질 수 있는 F5로 증가되어야 한다. F5 종자는 잡종 종자와 함께 수확량 시험을 위한 검정 교배에 사용되어야 할 뿐 아니라 변종이 개발될 것이라면 수확량 시험에 직접 넣어져야 한다.

다중-위치 및 복제 검정을 비롯하여 수확량 시험 및 형질 반응의 전체 검정 후에, 최종 선별이 코딩된 계통으로 분리하는 한 개 또는 몇 개의 계통을 식별하기 위해 이뤄진다. 이어서, 이 계통을 종자 증가 및 분리를 위해 새로운 변종 또는 잡종의 모체 중 하나로 사용한다.

실시예 7: 잡종에 배치된 제초제 저항성

계통 ML0831265-01493에 기술된 제초제 저항성은 우성이거나 부분적으로 우성일 것이다. 저항성 사건은 남성 모체, 여성 모체 또는 두 모체 모두 내로 통합되어 잡종에 배치된다. ACCase FOP 유형의 제초제를 갖는 벼에서 잡초를 성공적으로 방제하기 위해 임의의 조합을 개발한다. 실시예의 하기 방법을 통해 상기 모체 계통을 ACCase 제초제 저항성을 가지게 되도록 개발한다. 이어서 이 모체 계통을 FOP 유형의 제초제에 대해 ACCase 저항성을 가지고 있는 잡종 종자를 생산하기 위해 잡종 종자 생산 시스템에 사용한다. 이 종자 생산 방법은 남성 계통의 옆에 일렬로 여성 계통을 심는 것을 수반한다. 여성 계통은 자가 수분을 방지하기 위하여 남성 불임이다. 이어서, 여성 계통을 남성 계통으로 수분하고 수확하여 F1 종자를 생산한다. F1 종자는 잡종 종자이고 재배자에 의해 심어져 벼 곡물을 생산한다. 변종이 개발된 상황에서, 종자를 따로 심어서 수확하여 벼 곡물을 생산하는 재배자에게 판매한다.

ML0831265-01493으로부터 유래된 ACCase 저항성을 가지고 있는 선별된 계통으로부터의 잡종 또는 변종 종자 중 하나를 생산하는 준비로 계통이 먼저 정화되고, 광범위하게 시험되고, 증가되어야 한다.

ACCase FOP 유형의 제초제에 대한 저항성을 갖는 잡종 종자를 생산하는 예로는, 저항성은 남성 모체, 여성 모체 또는 두 모체 모두에 제공될 수 있다. 두 모체 모두에 저항성을 제공하는 것은 제초제가 적용될 때 벼에 대한 제초제 손상을 방지하기 위해 충분히 높은 수준의 저항성을 갖는데 필요할 수 있다. 그러나, 저항성이 오직 여성 또는 오직 남성 모체에 제공될 수 있다면, 잡종에서의 더 적합한 전달 메카니즘이 있다.

오직 남성 모체에 저항성을 제공함으로써, 재배자의 논에 임의의 여성 자가수분된 종자를 제거하는 방법을 제시한다. 남성 모체로부터만 저항성이 제공된다면, 재배자가 그의 논에 제초제를 적용할 때, 모든 여성 자가수분된 식물은 제초제에 대해 약할 것이고, 따라서 죽을 것이다. 재배자의 논은 화학적으로 솎아지고 잡종 식물의 순수한 생립을 야기한다.

또한, 다른 형질과의 조합을 통해 FOP 제초제에 대한 ACCase 저항성을 제공하는 것이 가능하다. 예를 들면, 대체 작용 방식 또는 곤충 저항성, 건조 저항성과 같은 다른 형질과 제초제에 대한 저항성이다. 다른 형질과의 조합은 통상적이거나 형질도입 방법 중 하나에 의할 수 있다.

한 예로, ACCase 저항성은 여성 모체 내로 통합되고 다른 제초제 저항성은 남성 모체 내로 통합된다. 종자는 두 제초제 모두에 대해 저항성이고 재배자는 잡초 방제를 위해 제초제 중 하나 또는 둘 모두를 사용할 수 있다. 별법으로, 제초제 중 단 하나의 유형만이 단일 잡종에 전달된다. 이 두 시스템뿐 아니라 다른 모든 전략이 재배자에게 잡초 방제에 대한 추가적인 선택권을 제공하고, 제초제의 내용 연한을 연장할 수 있을 것이다. 오직 하나의 모체 또는 오직 하나의 잡종에 배치한 경우에, 이종교배를 통해 저항성을 개발한 임의의 앵미는 저항성 중 한 유형만을 유전받을 것이고, 대체 작용 방식을 갖는 제초제의 적용을 통해 여전히 방제 가능할 것이다.

실시예 8: 종자 생산

제초제 저항성은 잡종 종자의 생산을 위해 사용될 수 있다. 일례로, 여성 모체가 계통 ML0831265-01493으로부터의 유전을 통해 ACCase FOP 유형의 제초제에 대한 저항성으로 개발된다면, 제초제는 남성 모체를 제거하는 종자 생산에 사용될 수 있다. 여성 모체에 배치하여 저항성이 있게함으로써, 종자를 뿌리기 전이지만 수분한 후에 남성 모체를 죽이기 위해 종자 생산 논에 제초제가 적용된다. 이 방식으로, 남성 모체는 종자 뿌리기가 방지되고 종자 생산 논이 여성 열 만을 수확하는 대신에 대량으로 수확되게 한다. 추가로, 잡종 종자의 순도도 오직 하나의 모체에 저항성을 배치하는 것을 통해 확인될 수 있다. 다른 모체의 임의의 자가수분된 종자를 제초제의 적용으로 죽인다.

기탁 정보

상기 개시되고 첨부된 청구항에서 인용된 라이스텍, 인크.(RiceTec Inc.) ML0831265-0149의 기탁은 20110 버지니아주 매너서스 불러바드 대학교 10801 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection; ATCC)에 이뤄졌다. 기탁일은 2012년 5월 30일이었다. 모든 제한은 특허의 등록시 제거될 것이고, 기탁은 37 C.F.R. §§1.801-1.809의 요건을 모두 만족하고자 함이다. ATCC 기탁 번호는 PTA-12933이다. 기탁은 마지막 요청 후 5년 또는 30년의 기간 동안 또는 특허의 실시 가능한 기간 중 더 긴 기간 동안 기탁소에서 유지될 것이고, 이 기간 동안 필요하다면 교체될 것이다.

종자는 기탁을 위해 다른 제초제 저항성 계통으로부터 제조되고 있다.

다수의 예시적인 측면 및 실시태양이 상기 논의되었지만, 통상의 기술자는 어느 정도의 변형, 치환, 추가 및 이것의 서브-조합을 인식할 것이다. 따라서, 하기 첨부된 청구항 및 이후에 도입된 청구항은 이것의 진정한 취지 및 범위 내에서 이러한 변경, 치환, 추가 및 이것의 서브-조합을 모두 포함하는 것으로 해석되는 것이 의도된다.

정의

본 서술 및 하기 표에서, 다수의 용어가 사용된다. 주어진 이러한 용어의 범위를 비롯하여, 본 명세서 및 청구항의 명확하고 일관된 이해를 제공하기 위해, 하기 정의가 제공된다.

대립유전자. 대립유전자는 유전자의 많은 대체 형태 중 어느 하나이고, 이 모든 것은 일반적으로 하나의 형질 또는 특징과 관련이 있다. 이배체 세포 또는 유기체에서, 주어진 유전자의 2개의 대립유전자는 상동염색체의 짝 상의 상응하는 유전자 자리를 점유한다.

역교배. 모체 중 하나와 잡종 자손, 예를 들면, 첫 번째 세대인 잡종 F1과 F1 잡종의 부모 유전자형 중 하나를 교배하는 방법,

블렌드. 이 블렌드 내의 벼 종자 및 식물의 모든 특징을 함유하는 작물을 생산하기 위해, 1개, 2개, 3개, 4개, 또는 그 이상의 다른 벼 잡종, 벼 변종 또는 벼 근교배의 종자와 벼 잡종의 벼종자를 물리적으로 혼합한 것.

세포. 본원에 사용된 세포는, 단리되거나 조직 배양물 내이거나 식물 또는 식물 일부에 혼입된 식물 세포를 포함한다.

품종. 재배하에서 존속하는 변종 또는 종족(strain).

배아. 배아는 성숙한 종자 내에 함유된 작은 식물이다.

본질적으로 모든 생리학적이고 형태학적인 특징. 전환된 유전자로부터 유래된 특징을 제외하고는, 잡종 또는 품종의 모든 생리학적이고 형태학적인 특징을 본질적으로 갖는 식물.

곡물 수확량. 주어진 구역으로부터 수확된 곡물의 중량. 또한, 곡물 수확량은 구역 당 원추 화서의 수 곱하기 원추 화서 당 곡물의 수 곱하기 곡물 중량으로 간접적으로 결정될 수 있다.

유전자 자리. 유전자 자리는 DNA 서열에 의해 점유되는 염색체 상의 위치이고; 이것은, 예를 들면 남성 불임, 제초제 내성, 곤충 저항성, 질병 저항성, 찰녹말, 변형 지방산 대사, 변형 피틴산 대사, 변형 탄수화물 대사 및 변형 단백질 대사와 같은 하나 이상의 형질을 부여한다. 예를 들면, 천연 또는 유도된 돌연변이, 또는 유전적 형질전환 기술을 통해 도입된 형질전환유전자를 역교배시켜 변종의 게놈 내로 도입된 자연적으로 발생한 유전자에 의해 이 형질이 부여될 수 있다. 유전자 자리는 단일 염색체성 위치에서 통합된 하나 이상의 대립유전자를 포함할 수 있다.

식물. 본원에서 사용된 용어 "식물"은 종자 또는 곡물 또는 꽃밥이 제거된 식물을 비롯하여, 미성숙하거나 성숙한 전체 식물에 대한 언급을 포함한다. 식물을 생산할 종자 또는 배아가 또한 식물로 고려된다.

식물 일부. 본원에서 사용된 용어 "식물 일부" (또는 벼 식물, 또는 그의 일부)는 원형질체, 잎, 줄기, 뿌리, 뿌리 끝, 꽃밥, 씨앗, 곡물, 배아, 꽃가루, 난자, 자엽, 배축, 포영, 원추 화서, 꽃, 새순, 조직, 세포, 분열 조직 세포 등을 포함한다.

양적형질 유전자 자리( QTL ). 보통 연속적으로 분포된 어느 정도 수적으로 측정가능한 형질을 조절하는 유전자 자리.

재생. 재생은 조직 배양물로부터 식물의 발생을 지칭한다.

단일 유전자 전환됨(전환). 단일 유전자 전환됨(전환)은 식물 육종 기술, 소위 역교배에 의해 개발된 식물을 포함하고, 교배 및 역교배를 통해 근교배 내로 전달된 단일 유전자를 유지하면서, 근교배의 본질적으로 모든 원하는 형태학적이고 생리학적인 특징이 회복된 것이다. 또한, 용어는 당업계에 알려진 유전 공학 기술을 통한 단일 유전자의 도입을 지칭할 수 있다.

표 1 - 영구적인 돌연변이군에서 생존한 식물로부터 유래된 벼 계통이 퀴잘로폽 제초제에 대한 저항성을 가지고 있는 것을 확인하였다. ATCC 기탁 번호가 ACCase 유전자의 카르복실 트랜스퍼라아제 내 돌연변이를 갖는 계통에 대해 도시된다. ATCC 기탁 번호는 다른 2개 계통에 대해 계류중이다.

표 2 - 두 계통 간의 높은 유사성을 보여주는 본래의 비돌연변이된 계통 R0146과 돌연변이 계통 ML0831265-0149의 비교

ATCC

PTA12933

20120531

ATCC

PTA13619

20130319

ATCC

PTA13620

20130319

SEQUENCE LISTING <110> RICETEC AKTIENGESELLSCHAFT <120> METHODS AND COMPOSITIONS TO PRODUCE RICE RESISTANT TO ACCASE INHIBITORS <130> 50970-115760 <140> <141> <150> 61/541,832 <151> 2011-09-30 <150> 61/510,585 <151> 2011-07-22 <160> 7 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 2501 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 1 cctgttctgc taggaataat agaactacat actgctatga ttttccactg gtgagttgac 60 tgctccctta tattcaatgc attaccatag caaattcata ttcgttcatg ttgtcaaaat 120 aagccgatga aaattcaaaa ctgtaggcat ttgaaactgc agtgaggaag tcatggtcct 180 ctagtacctc tggtgcttct aaaggtgttg aaaatgccca atgttatgtt aaagctacag 240 agttggtatt tgcggacaaa catgggtcat ggggcactcc tttagttcaa atggaccggc 300 ctgctgggct caatgacatt ggtatggtag cttggacctt gaagatgtcc actcctgaat 360 ttcctagtgg tagggagatt attgttgttg caaatgatat tacgttcaga gctggatcat 420 ttggcccaag ggaagatgca ttttttgaag ctgttaccaa cctagcctgt gagaagaaac 480 ttcctcttat ttatttggca gcaaattctg gtgctcgaat tggcatagca gatgaagtga 540 aatcttgctt ccgtgttggg tggtctgatg atggcagccc tgaacgtggg tttcagtaca 600 tttatctaag cgaagaagac tatgctcgta ttggcacttc tgtcatagca cataagatgc 660 agctagacag tggtgaaatt aggtgggtta ttgattctgt tgtgggcaag gaagatggac 720 ttggtgtgga gaatatacat ggaagtgctg ctattgccag tgcttattct agggcatata 780 aggagacatt tacacttaca tttgtgactg gaagaactgt tggaatagga gcttatcttg 840 ctcgacttgg catccggtgc atacagcgtc ttgaccagcc tattattctt acaggctatt 900 ctgcactgaa caagcttctt gggcgggaag tgtacagctc ccacatgcag ttgggtggtc 960 ccaaaatcat ggcaactaat ggtgttgtcc atcttactgt ttcagatgac cttgaaggcg 1020 tttctaatat attgaggtgg ctcagttatg ttcctgccta cattggtgga ccacttccag 1080 taacaacacc gttggaccca ccggacagac ctgttgcata cattcctgag aactcgtgtg 1140 atcctcgagc ggctatccgt ggtgttgatg acagccaagg gaaatggtta ggtggtatgt 1200 ttgataaaga cagctttgtg gaaacatttg aaggttgggc taagacagtg gttactggca 1260 gagcaaagct tggtggaatt ccagtgggtg tgatagctgt ggagactcag accatgatgc 1320 aaactatccc tgctgaccct ggtcagcttg attcccgtga gcaatctgtt cctcgtgctg 1380 gacaagtgtg gtttccagat tctgcaacca agactgcgca ggcattgctg gacttcaacc 1440 gtgaaggatt acctctgttc atcctcgcta actggagagg cttctctggt ggacaaagag 1500 atctttttga aggaattctt caggctggct cgactattgt tgagaacctt aggacataca 1560 atcagcctgc ctttgtctac attcccatgg ctgcagagct acgaggaggg gcttgggttg 1620 tggttgatag caagataaac ccagaccgca ttgagtgcta tgctgagagg actgcaaaaa 1680 gcaatgttct ggaaccgcaa gggttaattg agatcaagtt caggtcagag gaactccagg 1740 attgcatgag tcggcttgac ccaacattaa ttgatctgaa agcaaaactc gaagtagcaa 1800 ataaaaatgg aagtgctgac acaaaatcgc ttcaagaaaa tatagaagct cgaacaaaac 1860 agttgatgcc tctatatact cagattgcga tacggtttgc tgaattgcat gatacatccc 1920 tcagaatggc tgcgaaaggt gtgattaaga aagttgtgga ctgggaagaa tcacgatctt 1980 tcttctataa gagattacgg aggaggatct ctgaggatgt tcttgcaaaa gaaattagag 2040 ctgtagcagg tgagcagttt tcccaccaac cagcaatcga gctgatcaag aaatggtatt 2100 cagcttcaca tgcagctgaa tgggatgatg acgatgcttt tgttgcttgg atggataacc 2160 ctgaaaacta caaggattat attcaatatc ttaaggctca aagagtatcc caatccctct 2220 caagtctttc agattccagc tcagatttgc aagccctgcc acagggtctt tccatgttac 2280 tagataaggt aattagctta ctgatgctta tataaattct ttttcattac atatggctgg 2340 agaactatct aatcaaataa tgattataat tccaatcgtt ctttttatgc cattatgatc 2400 ttctgaaatt tccttctttg gacacttatt cagatggatc cctctagaag agctcaactt 2460 gttgaagaaa tcaggaaggt ccttggttga atcatatgat g 2501 <210> 2 <211> 2501 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 2 cctgttctgc taggaataat agaactacat actgctatga ttttccactg gtgagttgac 60 tgctccctta tattcaatgc attaccatag caaattcata ttcgttcatg ttgtcaaaat 120 aagccgatga aaattcaaaa ctgtaggcat ttgaaactgc agtgaggaag tcatggtcct 180 ctagtacctc tggtgcttct aaaggtgttg aaaatgccca atgttatgtt aaagctacag 240 agttggtatt tgcggacaaa catgggtcat ggggcactcc tttagttcaa atggaccggc 300 ctgctgggct caatgacatt ggtatggtag cttggacctt gaagatgtcc actcctgaat 360 ttcctagtgg tagggagatt attgttgttg caaatgatat tacgttcaga gctggatcat 420 ttggcccaag ggaagatgca ttttttgaag ctgttaccaa cctagcctgt gagaagaaac 480 ttcctcttat ttatttggca gcaaattctg gtgctcgaat tggcatagca gatgaagtga 540 aatcttgctt ccgtgttggg tggtctgatg atggcagccc tgaacgtggg tttcagtaca 600 tttatctaag cgaagaagac tatgctcgta ttggcacttc tgtcatagca cataagatgc 660 agctagacag tggtgaaatt aggtgggtta ttgattctgt tgtgggcaag gaagatggac 720 ttggtgtgga gaatatacat ggaagtgctg ctattgccag tgcttattct agggcatata 780 aggagacatt tacacttaca tttgtgactg gaagaactgt tggaatagga gcttatcttg 840 ctcgacttgg catccggtgc atacagcgtc ttgaccagcc tattattctt acaggctatt 900 ctgcactgaa caagcttctt gggcgggaag tgtacagctc ccacatgcag ttgggtggtc 960 ccaaaatcat ggcaactaat ggtgttgtcc atcttactgt ttcagatgac cttgaaggcg 1020 tttctaatat attgaggtgg ctcagttatg ttcctgccta cattggtgga ccacttccag 1080 taacaacacc gttggaccca ccggacagac ctgttgcata cattcctgag aactcgtgtg 1140 atcctcgagc ggctatccgt ggtgttgatg acagccaagg gaaatggtta ggtggtatgt 1200 ttgataaaga cagctttgtg gaaacatttg aaggttgggc taagacagtg gttactggca 1260 gagcaaagct tggtggaatt ccagtgggtg tgatagctgt ggagactcag accatgatgc 1320 aaactatccc tgctgaccct ggtcagcttg attcccgtga gcaatctgtt cctcgtgctg 1380 gacaagtgtg gtttccagat tctgcaacca agactgcgca ggcattgctg gacttcaacc 1440 gtgaaggatt acctctgttc atcctcgcta actggagagg cttctctggt ggacaaagag 1500 atctttttga aggaattctt caggctggct cgactattgt tgagaacctt aggacataca 1560 atcagcctgc ctttgtctac attcccatgg ctgcagagct acgaggaggg gcttgggttg 1620 tggttgatag caagataaac ccagaccgca ttgagtgcta tgctgagagg actgcaaaag 1680 gcaatgttct ggaaccgcaa gggttaattg agatcaagtt caggtcagag gaactccagg 1740 attgcatgag tcggcttgac ccaacattaa ttgatctgaa agcaaaactc gaagtagcaa 1800 ataaaaatgg aagtgctgac acaaaatcgc ttcaagaaaa tatagaagct cgaacaaaac 1860 agttgatgcc tctatatact cagattgcga tacggtttgc tgaattgcat gatacatccc 1920 tcagaatggc tgcgaaaggt gtgattaaga aagttgtgga ctgggaagaa tcacgatctt 1980 tcttctataa gagattacgg aggaggatct ctgaggatgt tcttgcaaaa gaaattagag 2040 ctgtagcagg tgagcagttt tcccaccaac cagcaatcga gctgatcaag aaatggtatt 2100 cagcttcaca tgcagctgaa tgggatgatg acgatgcttt tgttgcttgg atggataacc 2160 ctgaaaacta caaggattat attcaatatc ttaaggctca aagagtatcc caatccctct 2220 caagtctttc agattccagc tcagatttgc aagccctgcc acagggtctt tccatgttac 2280 tagataaggt aattagctta ctgatgctta tataaattct ttttcattac atatggctgg 2340 agaactatct aatcaaataa tgattataat tccaatcgtt ctttttatgc cattatgatc 2400 ttctgaaatt tccttctttg gacacttatt cagatggatc cctctagaag agctcaactt 2460 gttgaagaaa tcaggaaggt ccttggttga atcatatgat g 2501 <210> 3 <211> 2501 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 3 cctgttctgc taggaataat agaactacat actgctatga ttttccactg gtgagttgac 60 tgctccctta tattcaatgc attaccatag caaattcata ttcgttcatg ttgtcaaaat 120 aagccgatga aaattcaaaa ctgtaggcat ttgaaactgc agtgaggaag tcatggtcct 180 ctagtacctc tggtgcttct aaaggtgttg aaaatgccca atgttatgtt aaagctacag 240 agttggtatt tgcggacaaa catgggtcat ggggcactcc tttagttcaa atggaccggc 300 ctgctgggct caatgacatt ggtatggtag cttggacctt gaagatgtcc actcctgaat 360 ttcctagtgg tagggagatt attgttgttg caaatgatat tacgttcaga gctggatcat 420 ttggcccaag ggaagatgca ttttttgaag ctgttaccaa cctagcctgt gagaagaaac 480 ttcctcttat ttatttggca gcaaattctg gtgctcgaat tggcatagca gatgaagtga 540 aatcttgctt ccgtgttggg tggtctgatg atggcagccc tgaacgtggg tttcagtaca 600 tttatctaag cgaagaagac tatgctcgta ttggcacttc tgtcatagca cataagatgc 660 agctagacag tggtgaaatt aggtgggtta ttgattctgt tgtgggcaag gaagatggac 720 ttggtgtgga gaatatacat ggaagtgctg ctattgccag tgcttattct agggcatata 780 aggagacatt tacacttaca tttgtgactg gaagaactgt tggaatagga gcttatcttg 840 ctcgacttgg catccggtgc atacagcgtc ttgaccagcc tattattctt acaggctatt 900 ctgcactgaa caagcttctt gggcgggaag tgtacagctc ccacatgcag ttgggtggtc 960 ccaaaatcat ggcaactaat ggtgttgtcc atcttactgt ttcagatgac cttgaaggcg 1020 tttctaatat attgaggtgg ctcagttatg ttcctgccta cattggtgga ccacttccag 1080 taacaacacc gttggaccca ccggacagac ctgttgcata cattcctgag aactcgtgtg 1140 atcctcgagc ggctatccgt ggtgttgatg acagccaagg gaaatggtta ggtggtatgt 1200 ttgataaaga cagctttgtg gaaacatttg aaggttgggc taagacagtg gttactggca 1260 gagcaaagct tggtggaatt ccagtgggtg tgatagctgt ggagactcag accatgatgc 1320 aaactatccc tgctgaccct ggtcagcttg attcccgtga gcaatctgtt cctcgtgctg 1380 gacaagtgtg gtttccagat tctgcaacca agactgcgca ggcattgctg gacttcaacc 1440 gtgaaggatt acctctgttc atcctcgcta actggagagg cttctctggt ggacaaagag 1500 atctttttga aggaattctt caggctggct cgactattgt tgagaacctt aggacataca 1560 atcagcctgc ctttgtctac attcccatgg ctgcagagct acgaggaggg gcttgggttg 1620 tggttgatag caagataaac ccagaccgca ttgagtgcta tgctgagagg actgcaaaag 1680 gcaatgttct ggaaccgcaa gggttaattg agatcaagtt caggtcagag gaactccagg 1740 attgcatgag tcggcttgac ccaacattaa ttgatctgaa agcaaaactc gaagtagcaa 1800 ataaaaatgg aagtgctgac acaaaatcgc ttcaagaaaa tatagaagct cgaacaaaac 1860 agttgatgcc tctatatact cagattgcga tacggtttgc tgaattgcat gatacatccc 1920 tcagaatggc tgcgaaaggt gtgattaaga aagttgtgga ctgggaagaa tcacgatctt 1980 tcttctataa gagattacgg aggaggatct ctgaggatgt tcttgcaaaa gaaattagag 2040 ctgtagcagg tgagcagttt tcccaccaac cagcaatcga gctgatcaag aaatggtatt 2100 cagcttcaca tgcagctgaa tgggatgatg acgatgcttt tgttgcttgg atggataacc 2160 ctgaaaacta caaggattat attcaatatc ttaaggctca aagagtatcc caatccctct 2220 caagtctttc agattccagc tcagatttgc aagccctgcc acagggtctt tccatgttac 2280 tagataaggt aattagctta ctgatgctta tataaattct ttttcattac atatggctgg 2340 agaactatct aatcaaataa tgattataat tccaatcgtt ctttttatgc cattatgatc 2400 ttctgaaatt tccttctttg gacacttatt cagatggatc cctctagaag agctcaactt 2460 gttgaagaaa tcaggaaggt ccttggttga atcatatgat g 2501 <210> 4 <211> 2501 <212> DNA <213> Oryza sativa <400> 4 cctgttctgc taggaataat agaactacat actgctatga ttttccactg gtgagttgac 60 tgctccctta tattcaatgc attaccatag caaattcata ttcgttcatg ttgtcaaaat 120 aagccgatga aaattcaaaa ctgtaggcat ttgaaactgc agtgaggaag tcatggtcct 180 ctagtacctc tggtgcttct aaaggtgttg aaaatgccca atgttatgtt aaagctacag 240 agttggtatt tgcggacaaa catgggtcat ggggcactcc tttagttcaa atggaccggc 300 ctgctgggct caatgacatt ggtatggtag cttggacctt gaagatgtcc actcctgaat 360 ttcctagtgg tagggagatt attgttgttg caaatgatat tacgttcaga gctggatcat 420 ttggcccaag ggaagatgca ttttttgaag ctgttaccaa cctagcctgt gagaagaaac 480 ttcctcttat ttatttggca gcaaattctg gtgctcgaat tggcatagca gatgaagtga 540 aatcttgctt ccgtgttggg tggtctgatg atggcagccc tgaacgtggg tttcagtaca 600 tttatctaag cgaagaagac tatgctcgta ttggcacttc tgtcatagca cataagatgc 660 agctagacag tggtgaaatt aggtgggtta ttgattctgt tgtgggcaag gaagatggac 720 ttggtgtgga gaatatacat ggaagtgctg ctattgccag tgcttattct agggcatata 780 aggagacatt tacacttaca tttgtgactg gaagaactgt tggaatagga gcttatcttg 840 ctcgacttgg catccggtgc atacagcgtc ttgaccagcc tattattctt acaggctatt 900 ctgcactgaa caagcttctt gggcgggaag tgtacagctc ccacatgcag ttgggtggtc 960 ccaaaatcat ggcaactaat ggtgttgtcc atcttactgt ttcagatgac cttgaaggcg 1020 tttctaatat attgaggtgg ctcagttatg ttcctgccta cattggtgga ccacttccag 1080 taacaacacc gttggaccca ccggacagac ctgttgcata cattcctgag aactcgtgtg 1140 atcctcgagc ggctatccgt ggtgttgatg acagccaagg gaaatggtta ggtggtatgt 1200 ttgataaaga cagctttgtg gaaacatttg aaggttgggc taagacagtg gttactggca 1260 gagcaaagct tggtggaatt ccagtgggtg tgatagctgt ggagactcag accatgatgc 1320 aaactatccc tgctgaccct ggtcagcttg attcccgtga gcaatctgtt cctcgtgctg 1380 gacaagtgtg gtttccagat tctgcaacca agactgcgca ggcattgctg gacttcaacc 1440 gtgaaggatt acctctgttc atcctcgcta actggagagg cttctctggt ggacaaagag 1500 atctttttga aggaattctt caggctggct cgactattgt tgagaacctt aggacataca 1560 atcagcctgc ctttgtctac attcccatgg ctgcagagct acgaggaggg gcttgggttg 1620 tggttgatag caagataaac ccagaccgca ttgagtgcta tgctgagagg actgcaaaaa 1680 gcaatgttct ggaaccgcaa gggttaattg agatcaagtt caggtcagag gaactccagg 1740 attgcatgag tcggcttgac ccaacattaa ttgatctgaa agcaaaactc gaagtagcaa 1800 ataaaaatgg aagtgctgac acaaaatcgc ttcaagaaaa tatagaagct cgaacaaaac 1860 agttgatgcc tctatatact cagattgcga tacggtttgc tgaattgcat gatacatccc 1920 tcagaatggc tgcgaaaggt gtgattaaga aagttgtgga ctgggaagaa tcacgatctt 1980 tcttctataa gagattacgg aggaggatct ctgaggatgt tcttgcaaaa gaaattagag 2040 ctgtagcagg tgagcagttt tcccaccaac cagcaatcga gctgatcaag aaatggtatt 2100 cagcttcaca tgcagctgaa tgggatgatg acgatgcttt tgttgcttgg atggataacc 2160 ctgaaaacta caaggattat attcaatatc ttaaggctca aagagtatcc caatccctct 2220 caagtctttc agattccagc tcagatttgc aagccctgcc acagggtctt tccatgttac 2280 tagataaggt aattagctta ctgatgctta tataaattct ttttcattac atatggctgg 2340 agaactatct aatcaaataa tgattataat tccaatcgtt ctttttatgc cattatgatc 2400 ttctgaaatt tccttctttg gacacttatt cagatggatc cctctagaag agctcaactt 2460 gttgaagaaa tcaggaaggt ccttggttga atcatatgat g 2501 <210> 5 <211> 674 <212> PRT <213> Oryza sativa <400> 5 Met Asp Arg Pro Ala Gly Leu Asn Asp Ile Gly Met Val Ala Trp Thr 1 5 10 15 Leu Lys Met Ser Thr Pro Glu Phe Pro Ser Gly Arg Glu Ile Ile Val 20 25 30 Val Ala Asn Asp Ile Thr Phe Arg Ala Gly Ser Phe Gly Pro Arg Glu 35 40 45 Asp Ala Phe Phe Glu Ala Val Thr Asn Leu Ala Cys Glu Lys Lys Leu 50 55 60 Pro Leu Ile Tyr Leu Ala Ala Asn Ser Gly Ala Arg Ile Gly Ile Ala 65 70 75 80 Asp Glu Val Lys Ser Cys Phe Arg Val Gly Trp Ser Asp Asp Gly Ser 85 90 95 Pro Glu Arg Gly Phe Gln Tyr Ile Tyr Leu Ser Glu Glu Asp Tyr Ala 100 105 110 Arg Ile Gly Thr Ser Val Ile Ala His Lys Met Gln Leu Asp Ser Gly 115 120 125 Glu Ile Arg Trp Val Ile Asp Ser Val Val Gly Lys Glu Asp Gly Leu 130 135 140 Gly Val Glu Asn Ile His Gly Ser Ala Ala Ile Ala Ser Ala Tyr Ser 145 150 155 160 Arg Ala Tyr Lys Glu Thr Phe Thr Leu Thr Phe Val Thr Gly Arg Thr 165 170 175 Val Gly Ile Gly Ala Tyr Leu Ala Arg Leu Gly Ile Arg Cys Ile Gln 180 185 190 Arg Leu Asp Gln Pro Ile Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Ala Leu Asn Lys 195 200 205 Leu Leu Gly Arg Glu Val Tyr Ser Ser His Met Gln Leu Gly Gly Pro 210 215 220 Lys Ile Met Ala Thr Asn Gly Val Val His Leu Thr Val Ser Asp Asp 225 230 235 240 Leu Glu Gly Val Ser Asn Ile Leu Arg Trp Leu Ser Tyr Val Pro Ala 245 250 255 Tyr Ile Gly Gly Pro Leu Pro Val Thr Thr Pro Leu Asp Pro Pro Asp 260 265 270 Arg Pro Val Ala Tyr Ile Pro Glu Asn Ser Cys Asp Pro Arg Ala Ala 275 280 285 Ile Arg Gly Val Asp Asp Ser Gln Gly Lys Trp Leu Gly Gly Met Phe 290 295 300 Asp Lys Asp Ser Phe Val Glu Thr Phe Glu Gly Trp Ala Lys Thr Val 305 310 315 320 Val Thr Gly Arg Ala Lys Leu Gly Gly Ile Pro Val Gly Val Ile Ala 325 330 335 Val Glu Thr Gln Thr Met Met Gln Thr Ile Pro Ala Asp Pro Gly Gln 340 345 350 Leu Asp Ser Arg Glu Gln Ser Val Pro Arg Ala Gly Gln Val Trp Phe 355 360 365 Pro Asp Ser Ala Thr Lys Thr Ala Gln Ala Leu Leu Asp Phe Asn Arg 370 375 380 Glu Gly Leu Pro Leu Phe Ile Leu Ala Asn Trp Arg Gly Phe Ser Gly 385 390 395 400 Gly Gln Arg Asp Leu Phe Glu Gly Ile Leu Gln Ala Gly Ser Thr Ile 405 410 415 Val Glu Asn Leu Arg Thr Tyr Asn Gln Pro Ala Phe Val Tyr Ile Pro 420 425 430 Met Ala Ala Glu Leu Arg Gly Gly Ala Trp Val Val Val Asp Ser Lys 435 440 445 Ile Asn Pro Asp Arg Ile Glu Cys Tyr Ala Glu Arg Thr Ala Lys Gly 450 455 460 Asn Val Leu Glu Pro Gln Gly Leu Ile Glu Ile Lys Phe Arg Ser Glu 465 470 475 480 Glu Leu Gln Asp Cys Met Ser Arg Leu Asp Pro Thr Leu Ile Asp Leu 485 490 495 Lys Ala Lys Leu Glu Val Ala Asn Lys Asn Gly Ser Ala Asp Thr Lys 500 505 510 Ser Leu Gln Glu Asn Ile Glu Ala Arg Thr Lys Gln Leu Met Pro Leu 515 520 525 Tyr Thr Gln Ile Ala Ile Arg Phe Ala Glu Leu His Asp Thr Ser Leu 530 535 540 Arg Met Ala Ala Lys Gly Val Ile Lys Lys Val Val Asp Trp Glu Glu 545 550 555 560 Ser Arg Ser Phe Phe Tyr Lys Arg Leu Arg Arg Arg Ile Ser Glu Asp 565 570 575 Val Leu Ala Lys Glu Ile Arg Ala Val Ala Gly Glu Gln Phe Ser His 580 585 590 Gln Pro Ala Ile Glu Leu Ile Lys Lys Trp Tyr Ser Ala Ser His Ala 595 600 605 Ala Glu Trp Asp Asp Asp Asp Ala Phe Val Ala Trp Met Asp Asn Pro 610 615 620 Glu Asn Tyr Lys Asp Tyr Ile Gln Tyr Leu Lys Ala Gln Arg Val Ser 625 630 635 640 Gln Ser Leu Ser Ser Leu Ser Asp Ser Ser Ser Asp Leu Gln Ala Leu 645 650 655 Pro Gln Gly Leu Ser Met Leu Leu Asp Lys Val Ile Ser Leu Leu Met 660 665 670 Leu Ile <210> 6 <211> 674 <212> PRT <213> Oryza sativa <400> 6 Met Asp Arg Pro Ala Gly Leu Asn Asp Ile Gly Met Val Ala Trp Thr 1 5 10 15 Leu Lys Met Ser Thr Pro Glu Phe Pro Ser Gly Arg Glu Ile Ile Val 20 25 30 Val Ala Asn Asp Ile Thr Phe Arg Ala Gly Ser Phe Gly Pro Arg Glu 35 40 45 Asp Ala Phe Phe Glu Ala Val Thr Asn Leu Ala Cys Glu Lys Lys Leu 50 55 60 Pro Leu Ile Tyr Leu Ala Ala Asn Ser Gly Ala Arg Ile Gly Ile Ala 65 70 75 80 Asp Glu Val Lys Ser Cys Phe Arg Val Gly Trp Ser Asp Asp Gly Ser 85 90 95 Pro Glu Arg Gly Phe Gln Tyr Ile Tyr Leu Ser Glu Glu Asp Tyr Ala 100 105 110 Arg Ile Gly Thr Ser Val Ile Ala His Lys Met Gln Leu Asp Ser Gly 115 120 125 Glu Ile Arg Trp Val Ile Asp Ser Val Val Gly Lys Glu Asp Gly Leu 130 135 140 Gly Val Glu Asn Ile His Gly Ser Ala Ala Ile Ala Ser Ala Tyr Ser 145 150 155 160 Arg Ala Tyr Lys Glu Thr Phe Thr Leu Thr Phe Val Thr Gly Arg Thr 165 170 175 Val Gly Ile Gly Ala Tyr Leu Ala Arg Leu Gly Ile Arg Cys Ile Gln 180 185 190 Arg Leu Asp Gln Pro Ile Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Ala Leu Asn Lys 195 200 205 Leu Leu Gly Arg Glu Val Tyr Ser Ser His Met Gln Leu Gly Gly Pro 210 215 220 Lys Ile Met Ala Thr Asn Gly Val Val His Leu Thr Val Ser Asp Asp 225 230 235 240 Leu Glu Gly Val Ser Asn Ile Leu Arg Trp Leu Ser Tyr Val Pro Ala 245 250 255 Tyr Ile Gly Gly Pro Leu Pro Val Thr Thr Pro Leu Asp Pro Pro Asp 260 265 270 Arg Pro Val Ala Tyr Ile Pro Glu Asn Ser Cys Asp Pro Arg Ala Ala 275 280 285 Ile Arg Gly Val Asp Asp Ser Gln Gly Lys Trp Leu Gly Gly Met Phe 290 295 300 Asp Lys Asp Ser Phe Val Glu Thr Phe Glu Gly Trp Ala Lys Thr Val 305 310 315 320 Val Thr Gly Arg Ala Lys Leu Gly Gly Ile Pro Val Gly Val Ile Ala 325 330 335 Val Glu Thr Gln Thr Met Met Gln Thr Ile Pro Ala Asp Pro Gly Gln 340 345 350 Leu Asp Ser Arg Glu Gln Ser Val Pro Arg Ala Gly Gln Val Trp Phe 355 360 365 Pro Asp Ser Ala Thr Lys Thr Ala Gln Ala Leu Leu Asp Phe Asn Arg 370 375 380 Glu Gly Leu Pro Leu Phe Ile Leu Ala Asn Trp Arg Gly Phe Ser Gly 385 390 395 400 Gly Gln Arg Asp Leu Phe Glu Gly Ile Leu Gln Ala Gly Ser Thr Ile 405 410 415 Val Glu Asn Leu Arg Thr Tyr Asn Gln Pro Ala Phe Val Tyr Ile Pro 420 425 430 Met Ala Ala Glu Leu Arg Gly Gly Ala Trp Val Val Val Asp Ser Lys 435 440 445 Ile Asn Pro Asp Arg Ile Glu Cys Tyr Ala Glu Arg Thr Ala Lys Gly 450 455 460 Asn Val Leu Glu Pro Gln Gly Leu Ile Glu Ile Lys Phe Arg Ser Glu 465 470 475 480 Glu Leu Gln Asp Cys Met Ser Arg Leu Asp Pro Thr Leu Ile Asp Leu 485 490 495 Lys Ala Lys Leu Glu Val Ala Asn Lys Asn Gly Ser Ala Asp Thr Lys 500 505 510 Ser Leu Gln Glu Asn Ile Glu Ala Arg Thr Lys Gln Leu Met Pro Leu 515 520 525 Tyr Thr Gln Ile Ala Ile Arg Phe Ala Glu Leu His Asp Thr Ser Leu 530 535 540 Arg Met Ala Ala Lys Gly Val Ile Lys Lys Val Val Asp Trp Glu Glu 545 550 555 560 Ser Arg Ser Phe Phe Tyr Lys Arg Leu Arg Arg Arg Ile Ser Glu Asp 565 570 575 Val Leu Ala Lys Glu Ile Arg Ala Val Ala Gly Glu Gln Phe Ser His 580 585 590 Gln Pro Ala Ile Glu Leu Ile Lys Lys Trp Tyr Ser Ala Ser His Ala 595 600 605 Ala Glu Trp Asp Asp Asp Asp Ala Phe Val Ala Trp Met Asp Asn Pro 610 615 620 Glu Asn Tyr Lys Asp Tyr Ile Gln Tyr Leu Lys Ala Gln Arg Val Ser 625 630 635 640 Gln Ser Leu Ser Ser Leu Ser Asp Ser Ser Ser Asp Leu Gln Ala Leu 645 650 655 Pro Gln Gly Leu Ser Met Leu Leu Asp Lys Val Ile Ser Leu Leu Met 660 665 670 Leu Ile <210> 7 <211> 674 <212> PRT <213> Oryza sativa <400> 7 Met Asp Arg Pro Ala Gly Leu Asn Asp Ile Gly Met Val Ala Trp Thr 1 5 10 15 Leu Lys Met Ser Thr Pro Glu Phe Pro Ser Gly Arg Glu Ile Ile Val 20 25 30 Val Ala Asn Asp Ile Thr Phe Arg Ala Gly Ser Phe Gly Pro Arg Glu 35 40 45 Asp Ala Phe Phe Glu Ala Val Thr Asn Leu Ala Cys Glu Lys Lys Leu 50 55 60 Pro Leu Ile Tyr Leu Ala Ala Asn Ser Gly Ala Arg Ile Gly Ile Ala 65 70 75 80 Asp Glu Val Lys Ser Cys Phe Arg Val Gly Trp Ser Asp Asp Gly Ser 85 90 95 Pro Glu Arg Gly Phe Gln Tyr Ile Tyr Leu Ser Glu Glu Asp Tyr Ala 100 105 110 Arg Ile Gly Thr Ser Val Ile Ala His Lys Met Gln Leu Asp Ser Gly 115 120 125 Glu Ile Arg Trp Val Ile Asp Ser Val Val Gly Lys Glu Asp Gly Leu 130 135 140 Gly Val Glu Asn Ile His Gly Ser Ala Ala Ile Ala Ser Ala Tyr Ser 145 150 155 160 Arg Ala Tyr Lys Glu Thr Phe Thr Leu Thr Phe Val Thr Gly Arg Thr 165 170 175 Val Gly Ile Gly Ala Tyr Leu Ala Arg Leu Gly Ile Arg Cys Ile Gln 180 185 190 Arg Leu Asp Gln Pro Ile Ile Leu Thr Gly Tyr Ser Ala Leu Asn Lys 195 200 205 Leu Leu Gly Arg Glu Val Tyr Ser Ser His Met Gln Leu Gly Gly Pro 210 215 220 Lys Ile Met Ala Thr Asn Gly Val Val His Leu Thr Val Ser Asp Asp 225 230 235 240 Leu Glu Gly Val Ser Asn Ile Leu Arg Trp Leu Ser Tyr Val Pro Ala 245 250 255 Tyr Ile Gly Gly Pro Leu Pro Val Thr Thr Pro Leu Asp Pro Pro Asp 260 265 270 Arg Pro Val Ala Tyr Ile Pro Glu Asn Ser Cys Asp Pro Arg Ala Ala 275 280 285 Ile Arg Gly Val Asp Asp Ser Gln Gly Lys Trp Leu Gly Gly Met Phe 290 295 300 Asp Lys Asp Ser Phe Val Glu Thr Phe Glu Gly Trp Ala Lys Thr Val 305 310 315 320 Val Thr Gly Arg Ala Lys Leu Gly Gly Ile Pro Val Gly Val Ile Ala 325 330 335 Val Glu Thr Gln Thr Met Met Gln Thr Ile Pro Ala Asp Pro Gly Gln 340 345 350 Leu Asp Ser Arg Glu Gln Ser Val Pro Arg Ala Gly Gln Val Trp Phe 355 360 365 Pro Asp Ser Ala Thr Lys Thr Ala Gln Ala Leu Leu Asp Phe Asn Arg 370 375 380 Glu Gly Leu Pro Leu Phe Ile Leu Ala Asn Trp Arg Gly Phe Ser Gly 385 390 395 400 Gly Gln Arg Asp Leu Phe Glu Gly Ile Leu Gln Ala Gly Ser Thr Ile 405 410 415 Val Glu Asn Leu Arg Thr Tyr Asn Gln Pro Ala Phe Val Tyr Ile Pro 420 425 430 Met Ala Ala Glu Leu Arg Gly Gly Ala Trp Val Val Val Asp Ser Lys 435 440 445 Ile Asn Pro Asp Arg Ile Glu Cys Tyr Ala Glu Arg Thr Ala Lys Ser 450 455 460 Asn Val Leu Glu Pro Gln Gly Leu Ile Glu Ile Lys Phe Arg Ser Glu 465 470 475 480 Glu Leu Gln Asp Cys Met Ser Arg Leu Asp Pro Thr Leu Ile Asp Leu 485 490 495 Lys Ala Lys Leu Glu Val Ala Asn Lys Asn Gly Ser Ala Asp Thr Lys 500 505 510 Ser Leu Gln Glu Asn Ile Glu Ala Arg Thr Lys Gln Leu Met Pro Leu 515 520 525 Tyr Thr Gln Ile Ala Ile Arg Phe Ala Glu Leu His Asp Thr Ser Leu 530 535 540 Arg Met Ala Ala Lys Gly Val Ile Lys Lys Val Val Asp Trp Glu Glu 545 550 555 560 Ser Arg Ser Phe Phe Tyr Lys Arg Leu Arg Arg Arg Ile Ser Glu Asp 565 570 575 Val Leu Ala Lys Glu Ile Arg Ala Val Ala Gly Glu Gln Phe Ser His 580 585 590 Gln Pro Ala Ile Glu Leu Ile Lys Lys Trp Tyr Ser Ala Ser His Ala 595 600 605 Ala Glu Trp Asp Asp Asp Asp Ala Phe Val Ala Trp Met Asp Asn Pro 610 615 620 Glu Asn Tyr Lys Asp Tyr Ile Gln Tyr Leu Lys Ala Gln Arg Val Ser 625 630 635 640 Gln Ser Leu Ser Ser Leu Ser Asp Ser Ser Ser Asp Leu Gln Ala Leu 645 650 655 Pro Gln Gly Leu Ser Met Leu Leu Asp Lys Val Ile Ser Leu Leu Met 660 665 670 Leu Ile

Claims

(a) 돌연변이로 인해 ACCase 억제 제초제에 대해 저항성이고, 육종, 조직 배양 또는 형질변환을 통해 ATCC 기탁 번호 PTA-12933으로부터 유래된 벼를 논에 심는 것; 및
(b) 상기 논에 상기 제초제를 적용하는 것
을 포함하는 논에서의 잡초 방제 방법.
(a) 복수개의 제초제에 대해 저항성인 제초제 저항성 벼를 논에 심는 것; 및
(b) 벼 식물이 저항성을 갖는 복수개의 제초제와 논을 접촉시키는 것
을 포함하는 논에서의 잡초 방제 방법.
제2항에 있어서, 복수개의 제초제가 하나 이상의 ACCase 억제 제초제를 포함하고 저항성이 돌연변이로 인한 것인 방법.
제2항에 있어서, 제초제 저항성 벼가 PTA-12933인 방법.
제1항 또는 제3항에 있어서, ACCase 억제 제초제가 FOP 제초제인 방법.
제2항에 있어서, 벼가 표 1로부터 선택되는 것인 방법.
제1항 또는 제3항에 있어서, ACCase 제초제가 퀴잘로폽(quizalofop), 클로디나폽(clodinafop)-프로파르길, 할록시폽(haloxyfop)-메틸, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
제1항 또는 제3항에 있어서, 저항성과 관련된 돌연변이가 G2096S인 방법.
제4항에 있어서, 돌연변이의 출처가 ATCC 기탁번호 PTA-12933으로 기탁된 종자인 방법.
(a) 저항성 출처가 없는 벼에 ATCC 기탁번호 PTA-12933을 갖는 벼를 유전질 침투시키는 것; 및
(b) 벼가 저항성이 있는지 확인하는 것
을 포함하는, ATCC 기탁번호 PTA-12933의 유전자로부터 유래된 ACCase 억제 제초제에 대한 저항성을 갖는 벼의 개발 방법.
형질도입유전자로 벼 식물을 형질전환시키는 것을 포함하고, 형질도입유전자가 제7항의 군으로부터 선택되는 제초제에 대한 저항성을 부여하는 것인, 제초제 저항성 벼 식물의 생산 방법.
제11항에 있어서, 형질도입유전자가 서열 1에서와 같은 핵산 서열을 갖는 것인 방법.
제11항에 있어서, 촉진제, 터미네이터(terminator), 선별 마커, 또는 ACCase 코딩 유전자의 다른 도메인의 임의의 조합으로 서열 1을 갖는 핵산 분자로 벼를 형질전환시키는 것을 포함하는 제초제 저항성 벼의 생산 방법.
상이한 벼 식물과 제15항, 제17항, 제19항, 제22항 또는 제23항의 식물을 교배하고 생성된 잡종 벼 종자를 수확하는 것을 포함하는 벼 종자의 생산 방법.
제14항의 방법에 의해 생산된 종자로부터 생산된 제초제 저항성 벼 식물.
종자의 표본 샘플이 ATCC 기탁번호 PTA-12933으로 기탁된, ML0831265-01493으로 명칭된 벼 종자.
제16항의 종자를 성장시켜 생산된 벼 식물, 또는 그의 일부.
제15항 또는 제17항의 식물의 화분 또는 밑씨.
제16항의 벼 식물의 모든 생리학적 및 형태학적 특징을 갖는 벼 식물, 또는 그의 일부.
조직 배양물의 세포 또는 원형질체가 잎, 화분, 배아, 자엽, 배축, 분열 세포, 뿌리, 뿌리 끝, 암술, 꽃밥, 꽃, 줄기, 영포 및 원추 화서로 이루어진 군으로부터 선택된 식물 일부로부터 생산된 것인, 제15항 또는 제17항의 벼 식물로부터의 원형질체 또는 세포로부터 생산된 조직 배양물.
제15항 또는 제17항의 식물로부터 생산된 원형질체.
제16항의 벼 식물의 모든 형태학적 및 생리학적 특징을 갖는, 제20항의 조직 배양물로부터 재생된 벼 식물.
퀴잘로폽, 클로디나폽-프로파르길, 할록시폽-메틸, 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 ACCase 제초제에 대한 저항성을 부여하는 ACCase 코딩 유전자의 색소체성 카르복실라아제 트랜스퍼라아제 도메인을 포함하는 DNA 서열을 포함하는 제초제 저항성 벼 식물.
제23항에 있어서, 서열 1을 포함하는 제초제 저항성 벼 식물.
ACCase 억제 화학약품에 대한 내성을 전달하는, ACCase 코딩 유전자의 색소체성 카르복실라아제 트랜스퍼라아제 도메인의 서열 1을 포함하는 단리된 DNA 서열.
효소를 갖는 벼에 ACCase 억제인자에 대한 저항성을 전달하는 도 5(서열 7)에서와 같은 아미노산 서열을 포함하는 돌연변이 ACCase 효소.
제26항에 있어서, 상이한 돌연변이를 갖는 벼의 공개된 반응보다 FOP에 대해 더 큰 차등 반응을 전달하는 돌연변이 효소.