KR20130031704A - Methods of culturing inonotus obliquus, phellinus linteus, ganoderma lucidum, sparassis crispa and vegetable worms using mushroom media - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 버섯배지를 이용한 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합배양방법에 관한 것이다.The present invention relates to a hybrid culture method of chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and cordyceps using mushroom medium.
또한, 본 발명은 베타글루칸(β-glucan, 다당류의 일종으로 면역증강작용을 가지고 있으며 효모의 세포벽, 버섯류, 곡류 등에 존재함) 또는 AHCC(active hexose correlated compound, 담자균류의 균사체 배양 추출물 중에서 얻은 다당류를 총칭함)를 함유하는 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합배양균사체의 항암효과를 확인하고, 상기 복합배양된 균사체를 이용하여 제조할 수 있는 기능성 식품들의 실례 및 제조방법을 제공한다.In addition, the present invention is a beta glucan (β-glucan, a kind of polysaccharide has an immune enhancing action and is present in yeast cell walls, mushrooms, grains, etc.) or AHCC (active hexose correlated compound, polysaccharide obtained from mycelium culture extract of basidiomycetes (Collectively referred to) to check the anti-cancer effect of the complex culture mycelium of chaga, situation mushroom, Ganoderma lucidum mushroom, mushroom mushroom and Cordyceps sinensis, examples of functional foods that can be prepared using the complex cultured mycelium To provide.
차가버섯(Inonotus obliquus)은 러시아, 캐나다, 일본 홋카이도와 같은 한랭지역에서 자생하는 자작나무, 오리나무 등에 기생하는 균핵이다. 최근 일본에서는 차가버섯이 C형 간염 예방과 간암 치료 효과가 있다고 보고되었고, 미국에서도 차가버섯이 특수 천연 물질로 분류되어 미래 제약 및 건강식품으로 개발 중이다. 우리나라에서도 민간에서 위암 환자와 당뇨병 환자에게 차가버섯을 사용한 결과, 그 효과가 기타 버섯류에 비해 뛰어났던 것으로 보고된 바 있다. 그 외에 차가버섯이 신체 저항력 증가, 종양 발생 억제, 미백 등에도 효과가 있다고 보고되어 있다. Chaga ( Inonotus obliquus ) is a fungal nucleus that grows in birch and alder trees that grow in cold regions such as Russia, Canada, and Hokkaido, Japan. Recently, chaga was reported to be effective in preventing hepatitis C and treating liver cancer, and chaga is classified as a special natural substance in the US and is being developed as a future pharmaceutical and health food. In Korea, chaga mushroom was used in gastric cancer patients and diabetic patients in Korea, and the effect was reported to be superior to other mushrooms. In addition, chaga has been reported to be effective in increasing body resistance, suppressing tumor development, and whitening.
상황버섯(phellinus linteus)은 목질진흙버섯이라고도 하며, 동의보감에서는 상목이(桑木耳)라는 이름으로 탕액편에 기록되어 있다. 뽕나무 줄기에 자생하며 삿갓 표면을 제외하고는 모두 황색이다. 초기에는 진흙 덩어리가 뭉쳐진 것처럼 보이다가 다 자란 후에는 나무 그루터기에 혓바닥을 내민 모습이어서 수설(樹舌)이라고도 한다. 예로부터 상황버섯은 자궁출혈, 월경불순 등에 이용되어 왔으며 최근에는 종양 억제, 면역력 강화 및 미백에 우수한 효과가 있다고 보고된 바 있다. Situation mushrooms ( phellinus linteus ) is also known as woody mud mushroom, and it is written on the liquid juice piece under the name Sangmokyi (桑 木耳) in Dongbogam. It is native to the stems of mulberry and is yellow except for the surface of the hat. In the early days, mud lumps seemed to be agglomerate, and after they are grown, they are sometimes called snow solstice because the tongue is placed on a stump. Situation mushrooms have been used for a long time, such as uterine bleeding, menstrual irregularities, and recently have been reported to have excellent effects on tumor suppression, strengthening immunity and whitening.
영지버섯(Ganoderma lucidum)은 여름에 활엽수 뿌리에서 발생한다. 진시황의 불로초라고도 알려져 있고 본초강목에서는 인삼과 함께 이 버섯을 상약의 반열에 올려놓았다. 영지버섯은 강장, 진해, 소종(消腫) 등의 효능이 있어 호흡기 질환, 신경쇠약, 심장병, 고혈압 등에 효과가 있고 콜레스테롤을 낮춰주며 항암 효과가 있다고도 알려져 있다. Ganoderma lucidum mushroom lucidum ) occurs in the hardwood roots in summer. It is also known as the Bulchocho of Qin Shi Huang. Ganoderma lucidum mushroom is effective in tonic, Jinhae, and small (消腫), so it is effective in respiratory diseases, nervous breakdown, heart disease, high blood pressure, lower cholesterol and anti-cancer effect.
꽃송이버섯(Sparassis crispa)은 여름부터 가을까지 살아있는 나무의 뿌리 근처 줄기나 그루터기에 뭉쳐서 발생한다. 하얀 꽃이 무리를 지어 핀 것처럼 보이며 송이와 비슷한 향을 낸다. 가을에 침엽수를 자른 그루터기나 고목의 언저리에서 자생한다. 꽃송이버섯은 면역 증강, 고혈압 억제, 혈당 상승 억제, 혈액 순환 개선, 조혈 작용 등의 효과가 있다. Sparassis crispa ) occurs from summer to autumn on clusters or stumps near the roots of living trees. White flowers seem to bloom in groups and have a scent similar to clusters. It grows on the stump cut off in the fall or on the edge of an old tree. Blossom mushroom has the effect of enhancing immunity, suppressing hypertension, suppressing blood sugar rise, improving blood circulation, hematopoietic effect.
동충하초(Vegetable Worms)는 대부분 곤충을 숙주로 하여 기생하여 상기 곤충의 시체에 자실체를 내는 것을 특징으로 하며, 겨울에는 벌레이던 것이 여름에는 버섯으로 변한다는 뜻을 지닌다. 숙주의 종류에 따라 나비를 숙주로 하는 붉은동충하초(Cordyceps militaris), 매미를 숙주로 하는 매미동충하초(C. sobolifera), 벌을 숙주로 하는 벌동충하초(C. sphecocephala) 등이 있으며 그 밖에 딱정벌레, 메뚜기, 거미를 숙주로 하는 동충하초도 있다. 면역 기능 강화, 항암, 호흡기 기능의 회복, 노화 억제, 피로 회복, 비만이나 빈혈 억제 등의 효과가 알려져 있다. Vegetable Worms are characterized by giving off fruiting bodies to the bodies of insects, most of which are parasitic with insects as hosts, meaning that the blaiden in winter turns to mushroom in summer. Cordyceps with Butterfly as a Host militaris the like), to a Cordyceps cicada cicada as a host (C. sobolifera), Cordyceps to make the suit as a host (C. sphecocephala) and besides there is a fungus beetles, grasshoppers, spiders as a host. The effects of strengthening immune function, anticancer, respiratory function, suppressing aging, restoring fatigue, suppressing obesity and anemia are known.
표고버섯(Lentinus edodes, 또는 Continellus shiitake)은 사물기생균(死物寄生菌)으로 참나무류에 기생하는 목재부유균(wood rotting fungi)이다. 표고버섯의 약리 작용으로는 항종양, 항균, 면역증강, 암 전이 억제, 발암 억제, 탈콜레스테롤, 산성음식의 중독방지, 항바이러스 효과, 식물 생장 촉진, 자실체형성 유도 촉진 등이 알려져 있다.Shiitake mushrooms ( Lentinus) edodes , or Continellus shiitake is a wood rotting fungi that is parasitic on oaks. The pharmacological effects of shiitake mushrooms are known to be antitumor, antibacterial, immune boosting, cancer metastasis suppression, carcinogenesis suppression, decholesterol, acidic food poisoning prevention, antiviral effect, plant growth promotion, fruit body formation induction.
상기 버섯류는 뛰어난 항암 효과 및 면역력 강화 효과가 있다고 공통적으로 보고되어 있으며 기능성 식품 및 건강보조식품은 물론 의약품의 제조에도 널리 사용되고 있다. The mushrooms are commonly reported to have an excellent anticancer effect and strengthening immunity, and are widely used in the manufacture of pharmaceuticals as well as functional foods and health supplements.
한편, 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초를 의약품, 기능성 식품의 혼합 원료로서 사용하기 위해서는 자실체인 버섯을 채취하여 사용해야 하지만 버섯 자체가 자연 상태에서 번식이 잘 되지 않는다는 점과, 채취 남용으로 인해 자원 고갈 및 생태계 파괴가 야기된다는 문제점이 있다. 톱밥 등을 이용하여 자실체를 재배하는 방법이 이용되기도 하나 이러한 방법도 재배 기간만 수개월이 소요된다. 산업적으로 사용할 수 있을 정도로 원료를 공급하기 위해서도 대량의 생산 시설 및 경비가 소요된다는 난점 때문에 대량 생산의 수요를 충족시키지 못하고 있다. On the other hand, in order to use chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, zinnia mushroom, and Cordyceps sinensis as a mixed raw material of medicines and functional foods, mushrooms, which are fruiting bodies, should be used, but mushrooms do not grow well in nature. There is a problem that abuse causes resource depletion and ecosystem destruction. A method of growing fruiting bodies using sawdust or the like may be used, but this method also takes several months. The difficulty of supplying raw materials for industrial use also requires a large amount of production facilities and costs, which does not meet the demand for mass production.
이와 같이, 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초는 항암제나 면역 증강제로서 효과가 있음에도 그 공급이 제한적이며 대량 생산 및 속성 생산이 용이하지 않아 널리 활용되지 못하고 있다. As such, chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, zinnia mushroom, and Cordyceps sinensis are effective as an anticancer agent or immune enhancer, but their supply is limited, and mass production and rapid production are not easy to use.
따라서, 상기 버섯들에 대하여, 버섯균의 자실체와 동등한 효과를 나타내는 균사체를 생산할 수 있는 대량 배양 방법에 대한 연구가 최근 활발하게 이루어지고 있다. 특히 한국등록특허 제218897호, 제393254호에는 상황버섯 균사체의 배양방법, 한국등록특허 제787170호, 제592129호에는 차가버섯 균사체의 배양방법, 한국공개특허 제2002-0029361호, 제2009-0003779호에는 영지버섯 균사체의 배양방법, 한국등록특허 제474979호에는 꽃송이버섯 균사체의 배양방법, 한국등록특허 제432472호, 제465283호에는 동충하초의 배양방법이 공지되어 있다. Therefore, research on a mass culture method capable of producing a mycelium having an effect equivalent to the fruiting bodies of the mushrooms with respect to the mushrooms has been actively conducted in recent years. In particular, Korean Patent No. 218897, No. 393254, the method of cultivating the situation mushroom mycelium, Korean Patent No. 787170, 592129 are the method of cultivating chaga mushroom mycelium, Korean Patent Publication No. 2002-0029361, 2009-0003779 No. cultivation method of Ganoderma lucidum mycelium, Korean Patent No. 474979, a method of cultivating the mushroom mushroom mycelium, Korean Patent Nos. 432472, No. 4,465, 83, the method of cultivating cordyceps is known.
또한 한국등록특허 제889927호, 제889930호에는 이미 상황버섯과 차가버섯의 균사체를 복합배양하는 방법이 개시되어 있고, 한국등록특허 제922311호에는 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초 균사체를 복합배양하는 방법이 개시되어 있다. 한편, 이렇게 버섯을 복합배양하는 경우 각 버섯에 미량으로 존재하던 AHCC라는 물질의 양이 증가된다고 알려져 있다. AHCC는 항암효과가 있다고 널리 알려진 물질로서 담자류의 버섯에서 생성되는 물질로 담자균류의 균사체 배양 추출물 중에서 얻은 다당류를 총칭한다. 상기 AHCC는 암세포를 배제하는 면역 세포인 백혈구나 림프구를 활성화하여 우리의 몸에 본래 갖춰져 있는 면역력을 높여 항암작용을 하는 것으로 알려져 있다. 상기 한국등록특허 제922311호에는 서로 성질이 다른 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 균사체들이 서로에게 간섭을 주고받으며 증식하면서, 균사체에서 회백색을 띄는 AHCC를 함유하는 물질이 생성되는 과정이 확인된 바 있다. In addition, Korean Patent Nos. 889927 and 889930 have already disclosed a method for complex cultivation of mycelium of situation mushrooms and chaga mushrooms, and Korean Patent No. 922311 has chaga mushrooms, situation mushrooms, ganoderma lucidum mushrooms, cauliflower mushrooms and cordyceps fungi. Disclosed is a method for complex culture of mycelium. On the other hand, in the case of the complex culture mushrooms are known to increase the amount of a substance called AHCC in each mushroom in trace amounts. AHCC is a substance that is widely known to have anticancer effects. It is a substance produced from mushrooms of basidiomycetes. The AHCC is known to have anticancer activity by activating leukocytes or lymphocytes, which are immune cells that exclude cancer cells, to increase immunity inherent in our bodies. In Korean Patent No. 922311, the mycelium of chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, flowering mushroom, and Cordyceps sinensis, which have different properties from each other, interfering with and propagating to each other, a substance containing AHCC having grayish white color is produced in the mycelium. The process has been confirmed.
한편, 본 발명에서는 상기 한국등록특허 제922311호 등에서 사용된 곡물배지 대신, 버섯배지를 이용하여 복합배양균사체를 배양함으로써, 상기 곡물배지에서 배양된 복합배양균사체보다 베타글루칸이나 AHCC 같은 기능성 물질의 양이 더 증가되는 것과, 상기 복합배양균사체의 항암효과가 더욱 증강된 것을 확인한다. On the other hand, in the present invention, by culturing the complex culture mycelium using a mushroom medium instead of the grain medium used in the Korean Patent No. 922311, etc., the amount of functional substances such as beta glucan or AHCC than the complex culture mycelium cultured in the grain medium This further increases and confirms that the anticancer effect of the complex culture mycelia is further enhanced.
본 발명의 기술적 과제는 버섯배지를 이용한 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초 균사체의 복합배양방법을 제공하는 데 있다. The technical problem of the present invention is to provide a hybrid culture method of chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, mushroom mushroom and Cordyceps mycelia using mushroom medium.
본 발명의 또 다른 목적은 상기 방법으로 생성된 복합배양균사체를 함유하는 물질을 이용하여 항암기능이 있는 의약품 및 기능성 식품 등을 제공하는데 있다. Another object of the present invention to provide a drug and a functional food with anti-cancer function using a material containing a complex culture mycelium produced by the above method.
본 발명은 버섯배지를 이용한 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합배양방법, 및, 상기 방법에 따라 배양된 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합배양균사체에 관한 것이다.The present invention is a complex culture method of chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, mushroom mushroom and Cordyceps sinensis using a mushroom medium, and the hybrid culture mycelia of chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, mushroom mushroom and cordyceps cultured according to the above method It is about.
상기 버섯배지를 이용한 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합배양방법은,Chaga mushroom, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and cordyceps hybrid culture method using the mushroom medium,
(1공정) 버섯을 건조한 후 잘게 분쇄하는 단계;(Step 1) drying the mushrooms and then grinding them finely;
(2공정) 상기 1공정의 버섯분말의 수분을 20~60%로 조절하고 멸균하여 버섯배지를 제조하는 단계; 및, (Step 2) controlling the moisture of the mushroom powder of the first step to 20 ~ 60% and sterilizing to prepare a mushroom medium; And
(3공정) 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초를 무균처리하여 상기 2공정에서 제조된 버섯배지에 접종하고, 20~40℃에서 15~50일 동안 배양하는 단계; (3 step) aseptically treated chaga, situation mushroom, Ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and Cordyceps sinensis, inoculated in the mushroom medium prepared in the above 2 step, and incubated for 15-50 days at 20-40 ℃;
를 포함하는 것을 특징으로 한다. Characterized in that it comprises a.
상기 1공정의 버섯은 표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯에서 선택되는 1종 이상의 버섯일 수 있다.The mushroom of the first step may be one or more mushrooms selected from shiitake mushroom, matsutake mushroom and agaricus mushroom.
상기 3공정에서, 버섯배지 100 중량부를 기준으로, 상기 버섯배지에, 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초를 각각 0.1~1 중량부씩 접종할 수 있다. In the third step, based on 100 parts by weight of the mushroom medium, the mushroom medium, can be inoculated by chaga mushroom, situation mushroom, Ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and Cordyceps sinensis 0.1 to 1 parts by weight, respectively.
상기 3공정에서, In the above three steps,
차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초를 각각 버섯배지에 접종하는 대신, 5종 버섯의 복합배양균사체를 접종할 수 있으며, 버섯배지 100 중량부를 기준으로, 상기 버섯배지에, 5종 버섯의 복합배양균사체 0.5~5 중량부를 접종할 수 있다. Instead of inoculating chaga, situation mushrooms, ganoderma lucidum mushrooms, matsutake mushrooms, and Cordyceps sinensis mushrooms, mushroom culture medium of five kinds of mushrooms can be inoculated. The mushroom can be inoculated 0.5 to 5 parts by weight of the complex culture mycelia.
상기 5종 버섯의 복합배양균사체는, Complex culture mycelium of the five mushrooms,
곡물배지 100 중량부를 기준으로, 상기 곡물배지에, 차가버섯 0.1~1 중량부, 상황버섯 0.1~1 중량부, 영지버섯 0.1~1 중량부, 꽃송이버섯 0.1~1 중량부 및 동충하초 0.1~1 중량부를 동시에 접종하여, 20~40℃에서 15~50일 동안 배양한 복합배양균사체인 것을 특징으로 한다. Based on 100 parts by weight of the grain medium, 0.1-1 weight part of chaga mushroom, 0.1-1 weight part of situation mushroom, 0.1-1 weight part of Ganoderma lucidum mushroom, 0.1-1 weight part of matsutake mushroom and 0.1-1 weight of Cordyceps sinensis Simultaneously inoculating the part, it is characterized in that the complex culture mycelium cultured for 15 to 50 days at 20 ~ 40 ℃.
상기 곡물배지는, 수분이 20~60%로 조절된 곡물배지인 것으로서,The grain medium, as the grain medium is adjusted to 20 to 60% moisture,
찹쌀, 쌀, 현미, 밀 및 콩을 포함하는 그룹에서 선택되는 1가지 이상의 곡물을 준비하는 단계; Preparing at least one grain selected from the group comprising glutinous rice, rice, brown rice, wheat and soybeans;
상기 곡물 100 중량부를 기준으로, 상기 곡물을 물 100~500 중량부에 침지하고, 탄산칼슘 1~5 중량부를 혼합하여, 상기 곡물이 침지된 물의 수소이온지수를 pH 6.0~7.0으로 맞추는 단계; Based on 100 parts by weight of the grains, immersing the grains in 100 to 500 parts by weight of water, and mixing 1 to 5 parts by weight of calcium carbonate to adjust the hydrogen ion index of the water in which the grains are soaked to pH 6.0 to 7.0;
상기 곡물을 1~5시간 동안 침지시키는 단계; Immersing the grain for 1 to 5 hours;
상기 침지된 곡물을 1~5시간 동안 탈수하는 단계; 및,Dewatering the soaked grains for 1 to 5 hours; And
탈수된 곡물을 멸균하는 단계;Sterilizing the dehydrated grains;
를 포함하여 제조될 수 있다. . ≪ / RTI >
또한, 3공정에서는, In the third step,
상기 2공정 후 3공정 전에, 상기 2공정의 버섯배지 100 중량부를 기준으로, 표고버섯 0.1~1 중량부를 접종한 후, 5~10일간 20~40℃에서 표고버섯 균사체를 전배양하여 제조된 표고버섯 균사체 배양물을 제조하고, 상기 3공정에서, 상기 표고버섯 균사체 배양물을 2공정에서 제조된 버섯배지 대신 사용할 수 있다. After the two steps before the three steps, based on 100 parts by weight of the mushroom medium, inoculated 0.1 ~ 1 parts by weight of shiitake mushrooms, and prepared by pre-cultivation of shiitake mushroom mycelium at 20 ~ 40 ℃ for 5-10 days Mushroom mycelium culture is prepared, and in step 3, the shiitake mushroom mycelium culture may be used in place of the mushroom medium prepared in step 2.
본 발명의 복합배양균사체는, 상기 복합배양균사체 중량의 2~20배의 추출용매를 넣고 20~130℃에서 1~10시간 동안 추출하여 수거한 액상을 이용하여 복합배양균사체의 추출물로 제조될 수 있다. The complex culture mycelium of the present invention can be prepared as an extract of the complex culture mycelium by using a liquid collected by extracting 2 to 20 times the weight of the complex culture mycelium and extracted for 1 to 10 hours at 20 ~ 130 ℃ have.
상기 복합배양균사체의 추출물은 여과 및 농축할 수 있으며, 분무건조, 동결건조 또는 열풍건조를 이용하여 분말화할 수 있다. Extract of the complex culture mycelia can be filtered and concentrated, it can be powdered using spray drying, freeze drying or hot air drying.
상기 복합배양균사체의 추출물을 제조하는 추출용매는 그 선택에 있어서 특별히 한정되지는 않으며, 추출용매로는 물, 에탄올, 메탄올, 이소프로필알코올, n-부탄올 등의 저급 알코올, 글리세롤, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜 등의 다가 알코올, 에틸아세테이트, 메틸아세테이트, 벤젠, n-헥산, 디에틸에테르, 디클로로메탄 등의 탄화수소계 용매 등을 예로 들 수 있고, 이들 중에서 하나 또는 두 종류 이상의 용매를 혼합하여 추출에 사용할 수 있다.The extraction solvent for preparing the extract of the complex culture mycelium is not particularly limited in its selection, and as the extraction solvent, lower alcohols such as water, ethanol, methanol, isopropyl alcohol, n-butanol, glycerol, propylene glycol, 1 Polyhydric alcohols such as, 3-butylene glycol, hydrocarbon-based solvents such as ethyl acetate, methyl acetate, benzene, n-hexane, diethyl ether, dichloromethane, and the like, and the like. Can be mixed and used for extraction.
또한, 본 발명의 복합배양균사체 또는 이의 추출물을 이용하여 항암기능이 있는 건강식품이나 정제, 캡슐제, 환제, 액제 등을 포함하는 기능성 의약품, 항암 투병 중의 환자를 위한 유동식, 면역력을 증강시키는 동물의 사료, 식물 질병의 발생을 억제하는 유기 비료 등을 제조할 수 있다. In addition, by using the complex culture mycelium of the present invention or extracts thereof, functional foods, including tablets, capsules, pills, liquid medicines and health foods with anticancer function, fluid for patients during anticancer disease, enhancing the immune system of animals Feed, organic fertilizers for suppressing the occurrence of plant diseases, and the like can be produced.
본 발명의 복합배양균사체 또는 이의 추출물을 함유하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 상기 약학조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화 할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다. The pharmaceutical compositions containing the complex culture mycelium of the present invention or extracts thereof are oral formulations, external preparations, suppositories, and sterile injections of powders, granules, tablets, capsules, suspensions, emulsions, syrups, aerosols, etc., respectively, according to conventional methods. It can be formulated and used in the form of a solution. Carriers, excipients and diluents that may be included in the pharmaceutical composition include lactose, dextrose, sucrose, sorbitol, mannitol, xylitol, erythritol, maltitol, starch, acacia rubber, alginate, gelatin, calcium phosphate, calcium silicate, cellulose , Methyl cellulose, microcrystalline cellulose, polyvinyl pyrrolidone, water, methylhydroxybenzoate, propylhydroxybenzoate, talc, magnesium stearate and mineral oil. In the case of formulation, a diluent or excipient such as a filler, an extender, a binder, a wetting agent, a disintegrant, or a surfactant is usually used. Solid preparations for oral administration include tablets, pills, powders, granules, capsules, and the like, and such solid preparations may contain at least one excipient such as starch, calcium carbonate, sucrose or lactose, gelatin, or the like. Mix is prepared. In addition to simple excipients, lubricants such as magnesium stearate and talc are also used. Oral liquid preparations include suspensions, solvents, emulsions, and syrups, and may include various excipients, such as wetting agents, sweeteners, fragrances, and preservatives, in addition to commonly used simple diluents such as water and liquid paraffin. . Formulations for parenteral administration include sterilized aqueous solutions, non-aqueous solutions, suspensions, emulsions, freeze-dried preparations, and suppositories. Examples of the suspending agent include propylene glycol, polyethylene glycol, vegetable oil such as olive oil, injectable ester such as ethyl oleate, and the like. As the base of the suppository, witepsol, macrogol, tween 61, cacao butter, laurin butter, glycerogelatin and the like can be used.
본 발명의 복합배양균사체 또는 이의 추출물의 투여량은 치료받을 대상의 연령, 성별, 체중과, 치료할 특정 질환 또는 병리 상태, 질환 또는 병리 상태의 심각도, 투여경로 및 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 투여량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 일반적으로 투여량은 0.001㎎/㎏/일 내지 대략 2000㎎/㎏/일의 범위이다. 더 바람직한 투여량은 1㎎/㎏/일 내지 100㎎/㎏/일이다. 투여는 하루에 한번 투여할 수도 있고, 수회 나누어 투여할 수도 있다. 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. The dosage of the complex culture mycelium of the present invention or extract thereof will depend on the age, sex, weight of the subject to be treated, the specific disease or pathology to be treated, the severity of the disease or pathology, the route of administration and the judgment of the prescriber. Dosage determination based on these factors is within the level of skill in the art and generally dosages range from 0.001 mg / kg / day to approximately 2000 mg / kg / day. More preferred dosage is 1 mg / kg / day to 100 mg / kg / day. The administration may be carried out once a day or divided into several times. The dose is not intended to limit the scope of the invention in any way.
본 발명의 복합배양균사체 또는 이의 추출물은 쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 주사에 의해 투여될 수 있다. 본 발명의 복합배양균사체 또는 이의 추출물은 독성 및 부작용은 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용시에도 안심하고 사용할 수 있는 약제이다. The complex culture mycelium of the present invention or an extract thereof may be administered to various mammals such as rats, livestock, humans, and the like. All modes of administration may be expected, for example, by oral, rectal or intravenous, intramuscular, subcutaneous, intra-uterine dural or intracerebral injection. The complex culture mycelium of the present invention or extract thereof has little toxicity and side effects, so it is a drug that can be used with confidence even for prolonged administration for prophylactic purposes.
또한, 본 발명의 복합배양균사체 또는 이의 추출물은 식품학적으로 허용 가능한 식품보조 첨가제를 포함하는 암 치료 개선을 위한 건강기능식품으로 제공될 수 있다. 본 발명의 건강기능식품은 정제, 캡슐제, 환제 또는 액제 등의 형태를 포함하며, 본 발명의 복합배양균사체 또는 이의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제 등이 있다. In addition, the complex culture mycelium of the present invention or extracts thereof may be provided as a health functional food for improving cancer treatment, including food acceptable additives. The health functional food of the present invention includes the form of tablets, capsules, pills, or liquids, and as a food to which the complex culture mycelium of the present invention or an extract thereof can be added, for example, various foods, drinks, gum , Tea and vitamin complexes.
본 발명은 버섯배지를 이용한 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합배양방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 복합배양방법에 따르면, 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초 균사체의 복합배양균사체를 대량 생산할 수 있었다. 또한, 상기 방법을 이용해 배양된 본 발명의 복합배양균사체는, 베타글루칸 또는 AHCC를 다량으로 함유하여 위암세포주와 위암세포를 주입한 마우스에서 뛰어난 항암 효과가 있음이 확인되었고, 기존 곡물배지를 이용해서 배양한 복합배양균사체보다 전체적인 배양시간이 짧아졌음에도 불구하고 항암효과가 더 탁월하였다. The present invention relates to a hybrid culture method of chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and cordyceps using mushroom medium. According to the complex culture method according to the present invention, it was possible to mass-produce a complex culture mycelium of chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, mushroom mushroom and Cordyceps mycelia. In addition, the complex culture mycelium of the present invention cultivated using the above method, it was confirmed that there is an excellent anti-cancer effect in mice injected with gastric cancer cell lines and gastric cancer cells containing a large amount of beta glucan or AHCC, Although the overall culture time was shorter than the cultured mycelia, the anticancer effect was more excellent.
도 1은 본 발명의 방법대로 표고버섯배지를 이용하여 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합배양균사체를 배양하는 방법을 나타내는 순서도이다.
도 2는 본 발명의 실시예 2의 방법대로 표고버섯배지를 이용하여 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합배양균사체를 배양한 배양물을나타내는 사진이다. 1 is a flow chart illustrating a method of cultivating the complex culture mycelium of chaga, situation mushroom, Ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and Cordyceps sinensis using shiitake mushroom medium according to the method of the present invention.
Figure 2 is a photograph showing the culture of the culture culture mycelium complex of chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and Cordyceps sinensis using shiitake mushroom medium according to the method of Example 2 of the present invention.
이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다. 그러나, 본 발명은 여기서 설명되는 실시예에 한정되지 않고 다른 형태로 구체화될 수도 있다. 오히려, 여기서 소개되는 실시예는 개시된 내용이 철저하고 완전해질 수 있도록 그리고 당업자에게 본 발명의 사상이 충분히 전달될 수 있도록 하기 위해 제공되는 것이다. Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail. However, the present invention is not limited to the embodiments described herein but may be embodied in other forms. Rather, the embodiments disclosed herein are provided so that the disclosure can be thorough and complete, and will fully convey the scope of the invention to those skilled in the art.
<실시예 1: 표고버섯배지에 5종 버섯의 복합배양>Example 1 Complex Culture of Five Mushrooms in Shiitake Mushroom Medium
표고버섯을 5mm 너비로 절단하고 건조한 후 분쇄하였다. 상기 표고버섯분말을 수분 50%, 및 pH 6.5로 맞추어 1ℓ 유리병에 300g을 넣고 병마개를 닫았다. 이 후, 상기 유리병을 멸균기에 넣고, 1.2기압에서 1시간 20분 동안 멸균하였다. 멸균후에는, 상기 유리병을 꺼내어 25℃로 냉각한 다음, 무균실에서, 70% 알코올로 소독된 차가버섯 0.3g, 상황버섯 0.3g, 영지버섯 0.3g, 꽃송이버섯 0.3g 및 동충하초 0.3g을 각각 상기 유리병 안의 표고버섯배지에 접종하였다(표 1 참조). 이어서 상기 유리병의 마개를 닫고 상기 유리병을 배양실로 옮겨 24~25℃에서 배양하였다. 배양 시작 후, 10일 후에 표고버섯배지의 표면에 균사체가 피어나기 시작하였고, 45일 후에는 균사체에서 AHCC 또는 베타글루칸을 함유하는 고분자 물질들이 생성되어 있는 것이 확인되었다. Shiitake mushrooms were cut to a width of 5 mm, dried and then ground. The shiitake mushroom powder was adjusted to 50% of moisture and pH 6.5, and 300 g of the 1 liter glass bottle was put in a bottle cap. Thereafter, the glass bottle was placed in a sterilizer and sterilized for 1 hour and 20 minutes at 1.2 atmospheres. After sterilization, the glass bottle was taken out and cooled to 25 ° C., and then, in a sterile chamber, 0.3 g of chaga mushroom, 0.3 g mushroom, 0.3 g mushroom, 0.3 g mushroom, 0.3 g mushroom and 0.3 g cordyceps, respectively, sterilized with 70% alcohol. Shiitake mushroom medium in the vial was inoculated (see Table 1). Subsequently, the stopper of the glass bottle was closed, and the glass bottle was transferred to a culture chamber and incubated at 24 to 25 ° C. After incubation, the mycelium began to bloom on the surface of the shiitake mushroom medium after 10 days, and after 45 days, it was confirmed that polymer materials containing AHCC or beta glucan were produced.
<실시예 2: 표고버섯배지에 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합균사체 배양>Example 2 Culture of Mycelia of Chaga, Situary Mushroom, Ganoderma Lucidum Mushroom, Blossom Mushroom, and Cordyceps Sinensis
실시예 1과 동일하게 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초 복합배양균사체를 배양하되, 5종의 버섯을 각각 접종하는 대신, 비교예 2에 개시된 곡물배지에서 배양된 5종 버섯균사체 1.5g을 접종하였다(표 1 참조). In the same manner as in Example 1 chaga, situation mushrooms, Ganoderma lucidum mushroom, mushroom mushroom and Cordyceps sinensis hybrid culture mycelium, but instead of inoculating each of the five mushrooms, five mushroom mycelium cultured in the grain medium disclosed in Comparative Example 2 1.5 g was inoculated (see Table 1).
<실시예 3: 표고버섯배지에 표고버섯, 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합균사체 배양><Example 3: Culture of mycelia of shiitake mushroom, chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and Cordyceps sinensis>
실시예 2와 동일하게 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초 복합배양균사체를 배양하되, 표고버섯배지를 멸균 후, 0.25g의 표고버섯을 접종하고 10일간 배양하여 표고버섯균사체가 20% 정도 자라게 하여 이를 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초 복합배양균사체의 배지로 이용하였으며, 비교예 2에 개시된 곡물배지에서 배양된 5종 버섯균사체는 1.25g을 접종하였다(표 1 참조). In the same manner as in Example 2 chaga, situation mushroom, Ganoderma lucidum mushroom, mushroom mushroom and Cordyceps sinensis culture cultured mycelia, sterilized shiitake mushroom medium, inoculated 0.25g shiitake mushrooms and incubated for 10 days, shiitake mushroom mycelium 20 It was used as a medium of chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and Cordyceps sinensis hybrid culture mycelium, and the five mushroom myceliums cultured in the grain medium disclosed in Comparative Example 2 were inoculated with 1.25 g (Table 1). Reference).
<실시예 4: 아가리쿠스버섯배지에 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합균사체 배양>Example 4 Culture of Mycelia of Chaga, Situation Mushroom, Ganoderma Lucidum Mushroom, Blossom Mushroom, and Cordyceps Sinensis>
실시예 2와 동일하게 복합배양균사체를 배양하되, 표고버섯배지 대신에 아가리쿠스버섯으로 제조한 버섯배지를 이용하였다(표 1 참조).The culture medium was cultured in the same manner as in Example 2, but mushroom medium prepared with Agaricus mushroom was used instead of shiitake mushroom medium (see Table 1).
조건
Condition
버섯car
mushroom
버섯situation
mushroom
버섯wisdom
mushroom
버섯Blossom
mushroom
하초Insect
Hakodate
복합
균사체5 types
complex
mycelium
(표고버섯 0.25g 접종)○
(0.25 g of shiitake mushrooms)
<비교예 1: 표고버섯배지에 2종의 버섯 균사체 배양>Comparative Example 1 Culture of Two Mushroom Mycelium on Shiitake Mushroom Medium
실시예 1과 동일하게 버섯 균사체를 배양하되, 버섯은 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초 중 각각 2종씩만 접종하였고, 접종한 버섯 종류는 표 2에 나타내었다.The mushroom mycelium was incubated in the same manner as in Example 1, except that the mushrooms were inoculated with only two of chaga mushrooms, situation mushrooms, ganoderma lucidum mushrooms, zinnia mushrooms, and cordyceps sinensis, and the types of inoculated mushrooms are shown in Table 2.
<비교예 2: 곡물배지에 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합배양> Comparative Example 2: Complex Culture of Chaga, Situation Mushroom, Ganoderma Lucidum Mushroom, Blossom Mushroom and Cordyceps Sinensis on Grain Medium>
찹쌀 300g을 깨끗한 물로 세척하고, 정제수 600g에 식용 탄산칼슘을 6g을 넣고 희석하였다. 이 후, 상기 찹쌀을 넣고 2시간 동안 침강시켜 최종적으로 상기 찹쌀을 함유한 물의 pH를 6.5로 조절하였다. 2시간 후에는, 상기 찹쌀이 섞인 물을 탈수 그릇에 담아놓고 2시간 동안 탈수하여, 찹쌀의 수분을 50%로 맞추었다. 그리고, 상기 탈수된 찹쌀 중 300g(수분이 함유된 상태에서 300g)을 세척된 1ℓ 유리병에 넣고 마개를 닫은 후에, 유리병을 멸균기에 넣고, 1.2기압에서 1시간 20분 동안 멸균하였다. 상기 유리병을 꺼내어 25℃로 냉각한 다음, 무균실에서, 70% 알코올로 소독된 차가버섯 0.3g, 상황버섯 0.3g, 영지버섯 0.3g, 꽃송이버섯 0.3g 및 동충하초 0.3g을 각각 상기 유리병 안의 찹쌀에 접종하였다(표 2 참조). 300 g of glutinous rice was washed with clean water, and 6 g of edible calcium carbonate was diluted in 600 g of purified water. Thereafter, the glutinous rice was added and settled for 2 hours to finally adjust the pH of the water containing the glutinous rice to 6.5. After 2 hours, the water containing the glutinous rice was placed in a dehydration bowl and dehydrated for 2 hours to adjust the moisture of the glutinous rice to 50%. Then, 300 g (300 g in the state of containing water) of the dehydrated glutinous rice was put in a washed 1 L glass bottle and the cap was closed, the glass bottle was put into a sterilizer and sterilized for 1 hour and 20 minutes at 1.2 atm. After removing the glass bottle and cooling to 25 ° C., in a clean room, 0.3 g of chaga mushroom, 0.3 g of mushrooms, 0.3 g of Ganoderma lucidum mushroom 0.3 g, 0.3 g of mushroom mushrooms and 0.3 g of Cordyceps sinensis were each sterilized with 70% alcohol. Glutinous rice was inoculated (see Table 2).
이어서 상기 유리병의 마개를 닫고 배양실로 옮겨, 상기 버섯 접종물을 24~25℃에서 배양하였다. 배양 시작 후, 10일 후에 찹쌀의 표면에 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 균사체가 피어나기 시작하였고, 45일 후에는 찹쌀의 80% 정도에 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 균사체가 흡수/배양되었다. Subsequently, the cap of the vial was closed and transferred to the culture chamber, and the mushroom inoculation was incubated at 24 to 25 ° C. After 10 days of incubation, the mycelium of chaga, sang mushroom, ganoderma lucidum, cauliflower and cordyceps began to bloom on the surface of the glutinous rice. After 45 days, 80% of glutinous rice, chaga, sang mushroom, ganoderma lucidum, Mycelium of zinnia mushroom and Cordyceps sinensis were absorbed / cultured.
상기 방법은 한국등록특허 제922311호에 개시되어 있다.The method is disclosed in Korean Patent No. 922311.
<비교예 3. 곡물배지에 표고버섯, 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합배양><Comparative Example 3. Complex culture of shiitake mushroom, chaga mushroom, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and cordyceps in grain medium>
상기 비교예 2와 동일하게 버섯 균사체를 배양하되, 표고버섯, 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초를 각각 0.25g씩 곡물배지에 접종하였다(표 2 참조). Mushroom mycelium was incubated in the same manner as in Comparative Example 2, but the shiitake mushroom, chaga mushroom, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, zinnia mushroom, and Cordyceps sinensis were inoculated into the grain medium by 0.25 g each (see Table 2).
조건
Condition
버섯car
mushroom
버섯situation
mushroom
버섯wisdom
mushroom
버섯Blossom
mushroom
하초Insect
Hakodate
버섯Elevation
mushroom
배지grain
badge
<실험예 1: 위암 세포주 AGS에 대한 항암효과 비교>Experimental Example 1 Comparison of Anticancer Effects on Gastric Cancer Cell Line AGS
본 발명의 버섯배지를 이용해 배양한 복합배양균사체의 항암효과를 확인하기 위해, 상기 실시예 1 내지 4, 및, 비교예 1 내지 3의 버섯균사체를 용기에서 꺼내어 스텐레스 스틸 용기에 담아 골고루 편 다음 건조로에 넣어 60℃에서 10시간 동안 건조하였고 수분이 5% 이하 되었을 때 꺼내어 분쇄기에서 분쇄하였고, 이후 상기 분말들을 이용하여 항암효과를 확인하였다. In order to confirm the anticancer effect of the complex culture mycelium cultured using the mushroom medium of the present invention, the mushroom mycelium of Examples 1 to 4, and Comparative Examples 1 to 3 were taken out of the container and placed in a stainless steel container, and then evenly dried. It was dried for 10 hours at 60 ℃ and was taken out when the moisture is less than 5% and pulverized in the pulverizer, after which the anticancer effect was confirmed using the powders.
상기 복합배양균사체들이 암세포 사멸효과가 있는지를 확인하기 위해서는 MTT 어세이를 실시하였다. MTT assay was performed to confirm whether the complex culture mycelium has a cancer cell killing effect.
이를 위해, 위암 세포주 AGS를 96-웰 플레이트에 각 웰당 세포수가 3000개가 되도록 분주하였고, 5% FBS(fetal bovine serum)가 포함된 RPMI 세포 배양액을 이용하여, 24시간 동안 37℃의 5% CO2 습윤 배양기에 세포를 배양하였다. To this end, gastric cancer cell line AGS was dispensed in a 96-well plate with 3000 cell numbers per well, using RPMI cell culture medium containing 5% FBS (fetal bovine serum) for 5 hours at 37 ° C., 5% CO 2. The cells were cultured in a wet incubator.
복합배양균사체 분말은 PBS를 용매로 하여 녹였고, 0.03, 0.003, 0.0003, 0.00003%의 농도가 되도록 세포 배양액에 넣어, 72시간 동안 처리한 후, 세포의 생존 여부를 MTT 어세이를 통해 확인하였다. MTT 5mg당 1㎖의 PBS 완충용액에 녹여 만든 MTT 용액을 각 웰당 20㎕씩 넣고 4시간 동안 37℃의 5% CO2 습윤 배양기에 넣어두었다. 4시간 후 세포 배양액을 제거하고 여기에 DMSO(dimethylsulfoxide)를 200㎕씩 넣었고, DMSO를 잘 섞어주고 5분 정도 기다린 후 550㎚에서 흡광도를 측정하였다. MTT 어세이 결과는, 암세포의 성장을 50% 저해하는 IC50값(maximal inhibitory concentration)으로 나타내었다. The complex culture mycelium powder was dissolved in PBS as a solvent, put into a cell culture solution at a concentration of 0.03, 0.003, 0.0003, and 0.00003%, and after 72 hours of treatment, the survival of the cells was confirmed through an MTT assay. MTT solution prepared by dissolving in 1 ml of PBS buffer per 5 mg of MTT was added to 20 μl of each well and placed in a 5% CO 2 wet incubator at 37 ° C. for 4 hours. After 4 hours, the cell culture was removed, and 200 μl of DMSO (dimethylsulfoxide) was added thereto. After mixing the DMSO well and waiting for 5 minutes, the absorbance was measured at 550 nm. MTT assay results are expressed as IC 50 values (maximal inhibitory concentrations) that inhibit the growth of cancer cells by 50%.
하기 MTT 어세이의 결과를 참고하면, 표 3에 나타난 바와 같이, 비교예 1 내지 3의 복합배양균사체는, 대략 0.019~0.13% 사이의 첨가농도에서 위암 세포주 AGS가 50%의 증식억제활성을 보였으나, 본 발명의 복합배양균사체(실시예 1 내지 4)는 0.005% 첨가농도 이하에서 위암 세포주 AGS가 50%의 증식억제 활성을 나타내어 비교예 1 내지 3의 균사체에 비해 강한 항암효과가 있는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 실시예 2 및 4의 결과를 비교했을 때, 표고버섯배지와 아가리쿠스버섯배지에서 배양된 복합배양균사체는 모두 항암효과가 우세함을 확인할 수 있었다. Referring to the results of the following MTT assay, as shown in Table 3, the complex culture mycelium of Comparative Examples 1 to 3 showed a 50% proliferation inhibitory activity of gastric cancer cell line AGS at an concentration of approximately 0.019 to 0.13%. B, the complex culture mycelium of the present invention (Examples 1 to 4) showed a strong anticancer effect compared to the mycelium of Comparative Examples 1 to 3 gastric cancer cell AGS showed a 50% proliferation inhibitory activity below the concentration of 0.005% Could. In addition, when comparing the results of Examples 2 and 4, it was confirmed that the anti-cancer effect of both culture culture mycelium cultured in shiitake mushroom medium and Agaricus mushroom medium.
한편, 곡물배지에 5종 버섯 이외에도, 표고버섯을 추가하여 접종한 비교예 3의 항암효과가 실시예 2에 비해 높지 않은 것을 통해서, 본 발명의 복합배양균사체의 항암효과가 버섯배지를 이용하였기에 증강된 것이라고 추측할 수 있었다. On the other hand, in addition to the five mushrooms in the grain medium, the anti-cancer effect of Comparative Example 3 inoculated with the addition of shiitake mushroom was not higher than that of Example 2, the anti-cancer effect of the complex culture mycelium of the present invention was enhanced by using the mushroom medium I could have guessed.
<실험예 2: 본 발명의 복합배양균사체의 마우스 항암효과 비교>Experimental Example 2: Comparison of Mouse Anticancer Effects of the Complex Culture Mycelium of the Present Invention
실험예 1에서 제조한, 본 발명의 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초의 복합배양균사체 분말(실시예 1)과 비교예 1-1, 2 및 3의 복합배양균사체 분말 1g을 PBS 완충용액에 최종부피가 10㎖이 되도록 녹여 10%(w/v)의 균사체 용액을 만들어 1㎖씩 1.5㎖ 튜브에 분주하여 상기 용액을 냉장 보관 후 실험에 사용하였다. 이 실험에는 5주령의 BalB/C 암컷 누드 마우스 4마리가 각각 그룹별로 사용되었다. RPMI 세포배양액에 5%의 FBS를 첨가하여 배양된 위암 세포주인 AGS를 2×106개씩의 세포를 50㎕의 PBS와 매트리젤 50㎕와 함께 마우스의 피하조직에 두 군데씩 주사하였다. 항암효과를 확인하기 위하여 각 그룹에 하루에 한 번씩 10% 용액을 100㎕씩 경구투여를 하였고, 대조군에는 PBS를 사용하였다. 6일째부터 2~3일마다 종양의 크기를 측정하였고 25일째에 측정을 종료하였다. 표 4는 마우스에 위암 세포를 피하주사한 후 복합배양균사체 분말 용액을 투여하여 각각의 마우스에서 생성된 종양의 크기를 수치화한 값이다.1 g of the complex culture mycelium powder (Example 1) and the comparative culture mycelium powder of Example 1-1, 2 and 3 of chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and Cordyceps sinensis of the present invention prepared in Experiment 1 The final volume was dissolved in 10 ml PBS buffer solution to make a mycelial solution of 10% (w / v) and dispensed into 1.5 ml tubes by 1 ml each was used in the experiment after refrigerated storage. Four BalB / C female nude mice, 5 weeks old, were used in each group. 5% FBS was added to the RPMI cell culture medium, and 2 × 10 6 cells of AGS cultured gastric cancer cell lines were injected into the subcutaneous tissues of mice with 50 μl of PBS and 50 μl of Matrigel. To confirm the anticancer effect, 100 μl of 10% solution was administered to each group once a day, and PBS was used as a control group. Tumor size was measured every 2 to 3 days from day 6 and the measurement was terminated on day 25. Table 4 shows the values of tumors generated in each mouse by subcutaneous injection of gastric cancer cells into the mouse, followed by administration of the mixed culture mycelia powder solution.
그룹
group
종양 크기(㎣) 확인 날짜
Tumor size confirmation date
표 4에 나타난 바와 같이, PBS를 사용한 대조군 마우스의 경우, 거대확장된 종양을 확인할 수 있었다. 반면, 실시예 1의 균사체 용액이 경구투여된 군에서나 식수로 공급된 군에서는 종양 생성이 대조군보다 현저하게 억제되어 있는 것을 확인할 수 있었다. 비교예 1-1, 2 및 3도 종양억제 효과가 나타났으나, 실시예 1의 효과보다는 낮은 종양억제효과를 나타내었다. 상기 결과를 통하여 본 발명의 버섯배지를 이용한 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초 균사체의 항암 효과를 다시 입증할 수 있었으며, 곡물배지에서 배양된 복합배양균사체보다, 버섯배지에서 배양된 복합배지균사체가 훨씬 항암효과가 좋음을 확인할 수 있었다. As shown in Table 4, in the case of the control mouse using PBS, it was able to confirm the enlarged tumor. On the other hand, the mycelium solution of Example 1 orally administered group or in the group supplied with drinking water was confirmed that the tumor production is significantly suppressed than the control group. Comparative Examples 1-1, 2 and 3 also showed tumor suppression effect, but showed a lower tumor suppression effect than the effect of Example 1. Through the above results, the anticancer effect of chaga, situation mushroom, ganoderma lucidum, cauliflower mushroom, and Cordyceps mycelium using the mushroom medium of the present invention could be proved again, and cultured in mushroom medium rather than the complex culture mycelium cultured in grain medium The complex medium mycelium was able to confirm that the anticancer effect is much better.
<실험예 3. 베타글루칸 함량의 확인>Experimental Example 3. Confirmation of Beta Glucan Content
베타글루칸의 측정은 메가자임 베타글루칸 어세이 키트(Megazyme β-glucan assay kit, Megazyme International Ireland Ltd., Ireland)를 이용하여 상기 고분자 분말의 총글루칸(total glucan)을 구한 후, 알파글루칸(α-glucan) 값을 빼서 구하였다. Beta glucan was measured using a megazyme beta glucan assay kit (Megazyme β-glucan assay kit, Megazyme International Ireland Ltd., Ireland) to determine the total glucan of the polymer powder, and then alpha glucan (α- obtained by subtracting glucan).
실험예 1에서 제조한 균사체 분말(0.5㎜ 크기 이하) 100㎎에, 1.5㎖ 하이드로클로릭산(hydrochloric acid, 37% v/v)을 첨가 후, 내용물을 잘 섞어준 다음, 30℃에서 60분 동안 15분 간격으로 총 글루칸이 녹아 나올 수 있도록 잘 섞어주었다. 전분 및 단백질 성분을 효과적으로 변성, 제거시키기 위해 증류수를 10㎖씩 첨가한 후 2시간 동안 끓는 물(100℃)에 방치하였다. 이 후, 실온에서 내용물을 식힌 후, 2N KOH를 첨가하여 pH를 맞추고, 200mM 염화아세트산 나트륨 완충액(sodium acetate buffer, pH 5.0)으로 희석하였다. 희석된 내용물은 원심분리를 통해 상층액을 얻은 후, 각각의 상층액 100㎕에 엑소-1,2-베타글루카네이즈(exo-1,3-β-Glucanase, 100U/㎖)와 베타글루코시데이즈(β-Glucosidase, 20U/㎖)의 혼합용액을 100㎕씩 첨가하여 1시간 동안 40℃에서 방치하고, 포도당 측정 용액(glucose determination reagent) 3㎖를 첨가한 후 40℃에서 20분 동안 방치하였다. 그 다음, 510nm에서 흡광도를 측정하여 총 글루칸 값을 얻었다. 또한, 알파글루칸 값은 각각의 균사체 분말 100㎎에 2M KOH 2㎖을 넣고, 마그네틱 바(magnetic bar)를 이용하여 수조(ice/water bath)에서 20분 동안 섞어준 후, 1.2M 염화아세트산 완충액(pH3.8) 8㎖를 첨가하였다. 이 후, 아밀로글루코시데이즈(amyloglucosidase, 1630U/㎖)과 인버테이즈(invertase, 500U/㎖)의 혼합용액을 200㎕ 첨가한 후, 40℃에서 30분 동안 방치하고, 200mM 염화 아세테이트 완충액(pH 5.0)을 이용하여 희석하였다. 희석 후에는, 포도당 측정 용액 3㎖를 첨가한 후 20분 동안 40℃에서 방치하였고, 510nm에서 흡광도를 측정하여 알파글루칸 값을 얻었다. 베타글루칸의 값은 아래의 식을 통해 얻어내었고, 상기 결과는 표 5에 나타내었다.To 100 mg of the mycelium powder (0.5 mm or less) prepared in Experimental Example 1, 1.5 ml hydrochloric acid (37% v / v) was added, the contents were mixed well, and then the mixture was stirred at 30 ° C. for 60 minutes. Mix well to allow total glucan to dissolve every 15 minutes. In order to effectively denature and remove starch and protein components, 10 ml of distilled water was added and then left in boiling water (100 ° C.) for 2 hours. Thereafter, the contents were cooled at room temperature, pH was adjusted by adding 2N KOH, and diluted with 200 mM sodium acetate buffer (pH 5.0). After diluting the contents, the supernatant was obtained by centrifugation, and then, 100 μl of each supernatant was extracted with exo-1,2-beta-glucanase (exo-1,3-β-Glucanase, 100 U / ml). 100 μl of a mixed solution of Days (β-Glucosidase, 20U / ml) was added thereto, and the mixture was left at 40 ° C. for 1 hour, and 3 ml of glucose determination reagent was added thereto and then left at 40 ° C. for 20 minutes. . The absorbance was then measured at 510 nm to obtain a total glucan value. In addition, the alpha glucan value was added to 2 mg KOH 2ml in each 100mg of mycelium powder, and mixed for 20 minutes in an ice / water bath using a magnetic bar, 1.2M acetic acid chloride buffer ( pH3.8) 8 ml was added. Thereafter, 200 µl of a mixed solution of amyloglucosidase (amyloglucosidase, 1630 U / ml) and invertase (500 U / ml) was added thereto, and then left at 40 ° C. for 30 minutes, followed by 200 mM acetate chloride buffer solution ( pH 5.0). After dilution, 3 ml of the glucose measuring solution was added and left at 40 ° C. for 20 minutes, and the absorbance was measured at 510 nm to obtain an alpha glucan value. The value of beta glucan was obtained through the following formula, and the results are shown in Table 5.
베타글루칸 = 총글루칸 - 알파글루칸Beta Glucan = Total Glucan-Alpha Glucan
상기 표 5를 확인하면 실시예의 복합배양균사체의 베타글루칸 함량이, 비교예의 버섯균사체의 베타글루칸 함량보다 더 많음을 확인할 수 있었다. Checking the Table 5 it was confirmed that the beta glucan content of the complex culture mycelium of the Example, the beta glucan content of the mushroom mycelium of the comparative example.
따라서, 상기와 같은 결과를 통해, 본 발명의 복합배양균사체는, 버섯배지 및 5종 버섯의 복합배양으로 인해 베타글루칸을 비롯한 다양한 고분자물질들의 함량이 증가하여 뛰어난 항암효과를 갖는 것으로 확인되었다. Therefore, through the above results, it was confirmed that the complex culture mycelium of the present invention has an excellent anticancer effect by increasing the content of various polymers including beta glucan due to the complex culture of the mushroom medium and five mushrooms.
<사용예 1: 약제의 제조예> <Use Example 1: Preparation of Pharmaceuticals>
1-1. 산제의 제조1-1. Manufacture of powder
실시예 2의 복합배양균사체를 건조한 분말................ 300 mgDry powder of the mixed culture mycelium of Example 2 ... 300 mg
유당 ................................................. 100 mgLactose ... 100 mg
탈크 ................................................. 10 mgTalc ........................ 10 mg
상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.The above ingredients are mixed and filled in an airtight cloth to prepare a powder.
1-2. 정제의 제조1-2. Manufacture of tablets
실시예 2의 복합배양균사체를 건조한 분말................. 300 mgDry powder of the complex culture mycelium of Example 2 ....... 300 mg
옥수수전분 ............................................. 100 mgCorn starch ........................... 100 mg
유당 .................................................. 100 mgLactose ... 100 mg
스테아린산 마그네슘 ..................................... 2 mgMagnesium Stearate ......................................... 2 mg
상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.After mixing the above components, tablets are prepared by tableting according to a conventional method for preparing tablets.
1-3. 캅셀제의 제조1-3. Manufacture of capsules
실시예 2의 복합배양균사체를 건조한 분말 ............ .. 300 mgDry powder of the mixed culture mycelium of Example 2 ...... 300 mg
옥수수전분 ........................................... 100 mgCorn starch ........................... 100 mg
유당 ................................................. 100 mgLactose ... 100 mg
스테아린산마그네슘 ..................................... 2 mgMagnesium Stearate ......................................... 2 mg
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.According to a conventional capsule preparation method, the above ingredients are mixed and filled into gelatin capsules to prepare capsules.
<사용예 2: 건강식품의 제조예> <Use Example 2: Production Example of Health Food>
2-1. 건강식품의 제조2-1. Manufacture of health food
실시예 2의 복합배양균사체를 건조한 분말 .............. 1000 ㎎Dry powder of the complex culture mycelium of Example 2 .............. 1000 mg
비타민 혼합물........................................... 적량Vitamin Blend ...........
비타민 A 아세테이트 ................................... 70 ㎍Vitamin A Acetate ......................... 70 μg
비타민 E ............................................. 1.0 ㎎Vitamin E ......................................... 1.0 mg
비타민 B1 ........................................... 0.13 ㎎Vitamin B1 ..................................... 0.13 mg
비타민 C .............................................. 10 ㎎Vitamin C ......................................... 10 mg
비오틴 ................................................. 10 ㎍Biotin ... 10 μg
니코틴산아미드 ......................................... 1.7㎎Nicotinic Acid Amide ................................... 1.7mg
엽산.................................................... 50 ㎍Folic Acid ... ... 50 μg
판토텐산 칼슘 ......................................... 0.5 ㎎Calcium Pantothenate ......................................... 0.5 mg
황산제1철............................................. 1.75 ㎎Ferrous Sulfate ............................................. 1.75 Mg
산화아연.............................................. 0.82 ㎎Zinc Oxide ......................................... 0.82 mg
탄산마그네슘 ......................................... 25.3 ㎎Magnesium Carbonate ......................................... 25.3 mg
제1인산칼륨............................. .............. 15 ㎎Potassium monophosphate ............................................ 15 mg
제2인산칼슘............................................ 55 ㎎Dicalcium Phosphate Dioxide ......................................... 55 mg
구연산칼륨............................................. 90 ㎎Potassium Citrate ............... 90 mg
탄산칼슘 ............................................. 100 ㎎Calcium Carbonate ......................................... 100 mg
염화마그네슘 ........................................ 24.8 ㎎Magnesium Chloride ......................................... 24.8 mg
상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 제제예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.The composition ratio of the above-mentioned vitamin and mineral mixture is a composition suitable for the health food in the preferred formulation example, but may be arbitrarily modified by the compounding ratio, after mixing the above components in accordance with a conventional health food production method, Granules may be prepared and used to prepare health food compositions according to conventional methods.
2-2. 건강 음료의 제조2-2. Manufacture of healthy drinks
실시예 2의 복합배양균사체를 건조한 분말 ................ 500 ㎎Dry powder of Example 2 complex culture mycelium ... 500 mg
구연산 ................................................. 100 ㎎Citric Acid ... 100 mg
올리고당 ............................................... 100 gOligosaccharide ............................................... 100 g
매실농축액 ............................................... 2 gPlum Concentrate ......................................................... 2 g
타우린 ................................................... 1 gTaurine ... .. 1 g
정제수를 가하여 전체 .................................. 900 ㎖Purified water is added to the whole ..................... 900 ㎖
통상의 건강 음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간 동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관하여 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다. After mixing the above components according to a conventional healthy beverage production method, and stirred and heated at 85 ℃ for about 1 hour, the resulting solution is filtered and obtained in a sterilized 2 L container sealed sterilization and refrigerated storage of the present invention Used to prepare healthy beverage compositions.
상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 제제예로 혼합 조성하였지만 수요계층이나, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.Although the composition ratio is a composition suitable for a preferred beverage in a preferred formulation example, the compounding ratio may be arbitrarily modified according to regional and ethnic preferences such as demand hierarchy, demand country, and usage.
Claims (11)
(2공정) 상기 1공정의 표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯 중에서 선택되는 1종 이상의 버섯 분말의 수분을 20~60%로 조절하고 멸균하여 표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯 중에서 선택되는 1종 이상의 버섯이 함유된 배지를 제조하는 단계; 및,
(3공정) 차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초를 각각 무균처리하여 상기 2공정에서 제조된 표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯 중에서 선택되는 1종 이상의 버섯이 함유된 배지에 접종하고 20~40℃에서 15~50일 동안 배양하는 단계;
를 포함하는 것을 특징으로 하는 버섯 균사의 복합배양방법. (Step 1) drying one or more mushrooms selected from shiitake mushrooms, matsutake mushrooms and agaricus mushrooms, and then grinding them finely;
(Step 2) at least one mushroom powder selected from shiitake mushrooms, matsutake mushrooms and agaricus mushrooms by controlling the moisture of at least one mushroom powder selected from shiitake mushrooms, matsutake mushrooms and agaricus mushrooms at 20 to 60% and sterilizing Preparing a medium containing mushrooms; And
(Step 3) Aseptic treatment of chaga, situation mushroom, Ganoderma lucidum mushroom, matsutake mushroom and Cordyceps sinensis, respectively, and inoculated into a medium containing at least one mushroom selected from shiitake mushroom, matsutake mushroom and agaricus mushroom prepared in step 2 above. Incubating at 20-40 ° C. for 15-50 days;
Complex culture method of mushroom hyphae comprising a.
상기 3공정에서, 표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯 중에서 선택되는 1종 이상의 버섯이 함유된 배지 100 중량부를 기준으로, 상기 표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯 중에서 선택되는 1종 이상의 버섯이 함유된 배지에,
차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초를 각각 0.1~1 중량부씩 접종하는 것을 특징으로 하는 버섯 균사의 복합배양방법. The method of claim 1,
In the step 3, based on 100 parts by weight of the medium containing at least one mushroom selected from shiitake mushroom, matsutake mushroom and agaricus mushroom, the medium containing at least one mushroom selected from shiitake mushroom, matsutake mushroom and agaricus mushroom on,
Chaga mushroom, situation mushroom, ganoderma lucidum mushroom, mushroom mushroom and Cordyceps sinensis hybrid culture method characterized in that the inoculation of 0.1 to 1 parts by weight, respectively.
상기 3공정에서,
차가버섯, 상황버섯, 영지버섯, 꽃송이버섯 및 동충하초를 표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯 중에서 선택되는 1종 이상의 버섯이 함유된 배지에 접종하는 대신, 이들 5종 버섯의 복합배양균사체를 표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯 중에서 선택되는 1종 이상의 버섯이 함유된 배지에 접종하는 것을 특징으로 하는 버섯 균사의 복합배양방법. The method of claim 1,
In the above three steps,
Chaga, situation mushrooms, ganoderma lucidum mushrooms, matsutake mushrooms and cordyceps mushrooms were inoculated into a medium containing one or more mushrooms selected from shiitake mushrooms, matsutake mushrooms and agaricus mushrooms. Method for complex culture of mushroom hyphae, characterized in that inoculated into a medium containing at least one mushroom selected from zinnia mushroom and agaricus mushroom.
표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯 중에서 선택되는 1종 이상의 버섯이 함유된 배지 100 중량부를 기준으로, 상기 표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯 중에서 선택되는 1종 이상의 버섯이 함유된 배지에, 상기 5종 버섯의 복합배양균사체 0.5~5 중량부를 접종하는 것을 특징으로 하는 버섯 균사의 복합배양방법. The method of claim 3, wherein
On the medium containing at least one mushroom selected from shiitake, zinnia mushroom and agaricus mushroom, based on 100 parts by weight of the medium containing at least one mushroom selected from shiitake mushroom, matsutake mushroom and agaricus mushroom, the five species A composite culture method of mushroom mycelia, inoculating 0.5 to 5 parts by weight of the complex culture mycelia of the mushroom.
상기 5종 버섯의 복합배양균사체는,
곡물배지 100 중량부를 기준으로, 상기 곡물배지에, 차가버섯 0.1~1 중량부, 상황버섯 0.1~1 중량부, 영지버섯 0.1~1 중량부, 꽃송이버섯 0.1~1 중량부 및 동충하초 0.1~1 중량부를 동시에 접종하여, 20~40℃에서 15~50일 동안 배양한 버섯의 복합배양균사체인 것을 특징으로 하는 버섯 균사의 복합배양방법. The method of claim 3, wherein
Complex culture mycelium of the five mushrooms,
Based on 100 parts by weight of the grain medium, 0.1-1 weight part of chaga mushroom, 0.1-1 weight part of situation mushroom, 0.1-1 weight part of Ganoderma lucidum mushroom, 0.1-1 weight part of matsutake mushroom and 0.1-1 weight of Cordyceps sinensis Simultaneously inoculating part, the complex culture method of mushroom mycelia, characterized in that the mushroom culture complex mycelium cultured for 15 to 50 days at 20 ~ 40 ℃.
상기 곡물배지는, 수분이 20~60%로 조절된 곡물배지인 것으로서,
찹쌀, 쌀, 현미, 밀 및 콩을 포함하는 그룹에서 선택되는 1가지 이상의 곡물을 준비하는 단계;
상기 곡물 100 중량부를 기준으로, 상기 곡물을 물 100~500 중량부에 침지하고, 탄산칼슘 1~5 중량부를 혼합하여, 상기 곡물이 침지된 물의 수소이온지수를 pH 6.0~7.0으로 맞추는 단계;
상기 곡물을 1~5시간 동안 침지시키는 단계;
상기 침지된 곡물을 1~5시간 동안 탈수하는 단계; 및,
탈수된 곡물을 멸균하는 단계;
를 포함하여 제조하는 것을 특징으로 하는 버섯 균사의 복합배양방법. The method of claim 5, wherein
The grain medium, as the grain medium is adjusted to 20 to 60% moisture,
Preparing at least one grain selected from the group comprising glutinous rice, rice, brown rice, wheat and soybeans;
Based on 100 parts by weight of the grains, immersing the grains in 100 to 500 parts by weight of water, and mixing 1 to 5 parts by weight of calcium carbonate to adjust the hydrogen ion index of the water in which the grains are soaked to pH 6.0 to 7.0;
Immersing the grain for 1 to 5 hours;
Dewatering the soaked grains for 1 to 5 hours; And
Sterilizing the dehydrated grains;
Complex culture method of mushroom hyphae, characterized in that comprising the production.
상기 2공정 후 3공정 전에, 상기 2공정의 표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯 중에서 선택되는 1종 이상의 버섯이 함유된 배지 100 중량부를 기준으로, 표고버섯 0.1~1 중량부를 접종한 후, 5~10일간 20~40℃에서 표고버섯 균사체를 전배양하여 제조된 표고버섯 균사체 배양물을 제조하고, 상기 3공정에서, 상기 표고버섯 균사체 배양물을 2공정에서 제조된 표고버섯, 꽃송이버섯 및 아가리쿠스버섯 중에서 선택되는 1종 이상의 버섯이 함유된 배지 대신 사용하는 것을 특징으로 하는 버섯 균사의 복합배양방법. The method of claim 1,
After the two steps before the three steps, based on 100 parts by weight of the medium containing one or more mushrooms selected from shiitake mushrooms, matsutake mushrooms and agaricus mushrooms of the second step, inoculated 0.1 ~ 1 parts by weight of shiitake mushrooms, 5 ~ Shiitake mushroom mycelium culture was prepared by preculture of shiitake mushroom mycelium at 20-40 ° C. for 10 days, and in step 3, shiitake mushroom, mushroom mushroom and agaricus mushroom were prepared in step 2 of the shiitake mushroom mycelium culture. Complex culture method of mushroom hyphae, characterized in that used in place of a medium containing one or more mushrooms selected from.
상기 복합배양균사체는 건조된 복합 배양균사체를 기준으로, 베타글루칸 함량이 전체 중량의 30(w/w)% 이상인 것을 특징으로 하는 복합배양균사체. The method of claim 8,
The complex culture mycelium is a complex culture mycelium, characterized in that the beta glucan content of more than 30 (w / w)% of the total weight of the dry culture culture mycelium.
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| KR1020110095432A KR101269410B1 (en) | 2011-09-21 | 2011-09-21 | Methods of culturing Inonotus obliquus, Phellinus linteus, Ganoderma lucidum, Sparassis crispa and Vegetable Worms using mushroom media |
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