KR20100094614A - Cosmetic composition comprising an extract of black garlic having skin whitening and wrinkle improving activity - Google Patents
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Abstract
Description
본 발명은 흑마늘 추출물을 유효성분으로 포함하는 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a cosmetic composition for improving skin whitening and wrinkles comprising black garlic extract as an active ingredient.
[문헌 1] Tobin DJ, et al., Melanin pigmentation in mammalian skin and its hormonal regulation, J. Physiol Rev, 84(4), pp.1155-1228, 2004[1] Tobin DJ, et al., Melanin pigmentation in mammalian skin and its hormonal regulation, J. Physiol Rev, 84 (4) , pp. 1155-1228, 2004
[문헌 2] 전희정, 전희정 교수의 마늘이야기, 지구문화사, p.11-12, 2002[Reference 2] Chun Hee-jung, Professor Hee-jung Chun's Garlic Story, Earth Culture History, p.11-12, 2002
[문헌 3] Mosmann T., Rapid colorimetric assay for the cellular growth and survival:application to proliferation and cytotoxic assay, J. Immun., Methods 65, pp.55, 1983Mosmann T., Rapid colorimetric assay for the cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxic assay, J. Immun., Methods 65 , pp. 55, 1983
[문헌 4] Hosoi J, et al., Regulation of melanin synthesis of B16 mouse melanoma cells by α-25-dehydroxyvitamin D3 and retinoic acid, Cancer Res. 45, pp.1474-78, 19854 Hosoi J, et al., Regulation of melanin synthesis of B16 mouse melanoma cells by α-25-dehydroxyvitamin D3 and retinoic acid, Cancer Res. 45 , pp.1474-78, 1985
[문헌 5] Matinez Esparza M., et al., Mechanisms and melanogenesis inhibition by tumor necrosis factor-α in B16/F10 mouse melanoma cells, Eur. J. Biochem, 225, pp.139, 1998[5] Matinez Esparza M., et al., Mechanisms and melanogenesis inhibition by tumor necrosis factor-α in B16 / F10 mouse melanoma cells, Eur. J. Biochem, 225 , pp. 139, 1998
최근 의료 및 약학 분야의 비약적인 발전으로 인한 평균수명의 증가는 사회생활 기간연장을 필연적으로 가져오게 되었으며, 이에 따라 좀더 젊고 아름다운 피부를 유지하는 것은 인간의 단순한 욕망을 넘어 사회생활을 원활하게 하는 필수적 항목으로 여겨지고 있다. 인간의 피부는 연령이 증가함에 따라 호르몬 분비의 저하 및 면역세포 기능저하로 인해 피부 단백질의 합성 저하가 유발되며 이는 자연적인 피부노화로 이어지게 된다. 또한, 환경의 파괴로 인한 자외선 증가 및 각종 산화성 물질의 증가는 피부 각질세포(keratinocyte)의 이상증식이나 세포상해를 유발한다. 이러한 피부 세포의 손상이나 기능 저하는 피부 두께를 얇아지게 하며, 탄력의 감소와 피부 주름살의 증가, 기미와 주근깨 등 피부 미용에 치명적인 현상들을 유발한다. 외부환경물질에 의한 세포기능의 변화는 피부 각질세포와 피부 진피세포로부터 다양한 세포조절물질들인 사이토카인(cytokine)을 분비하게 되는데, TGF-beta(transforming growth factor), TNF-alpha(tumor necrosis factor), PGE2(prostaglandin E2), alpha-MSH(melanocyte stimulating hormone), GSF(granulocyte stimulating factor), IL-1(interleukin-1), IL-6, IL-8, IL-10 등은 각질세포(keratinocyte)에서 분비되는 물질이다. α-MSH는 UV와 같은 외부 스트레스를 받으면 피부 각질세포로부터 유리되며 멜라노사이트에 존재하는 수용체에 결합하여 기능을 나타내는 성장 호르몬의 일종이다. 각질세포(keratinocyte)에서 분비된 TGF-beta, PGE2, α-MSH는 멜라닌을 합성하는 멜라노사이트의 세포활성화를 자극하여 외부 스트레스로부터 피부를 방어하는 기전의 일환으로 멜라닌을 합성하며, 분비된 멜라닌은 수지상세포(dendrite)등을 통하여 각질세포(keratinocyte) 등에 전해져서 스트레스에 의한 세포상해를 억제하는 작용을 나타내게 한다. 그러나, 멜라노사이트에서 생성된 갈색 색소와 흑색 색소는 피부미용뿐 만아니라 피부질환에도 부정적 영향을 주기 때문에 향장품 산업분야에서는 피부질환 백색 피부를 얻기 위한 연구의 일환으로 멜라닌 합성을 차단하기 위한 다양한 시도가 있었다 (Tobin DJ, et al., Melanin pigmentation in mammalian skin and its hormonal regulation, J. Physiol Rev, 84(4), pp.1155-1228, 2004). The recent increase in life expectancy due to the rapid development of medical and pharmacy has inevitably lead to the extension of social life period. Therefore, maintaining younger and beautiful skin is essential to smooth social life beyond human desire. Is considered. As human skin ages, a decrease in hormone secretion and a decrease in immune cell function cause a decrease in the synthesis of skin proteins, which leads to natural skin aging. In addition, the increase of ultraviolet rays and the increase of various oxidizing substances due to the destruction of the environment cause abnormal proliferation or cytotoxicity of keratinocytes. The damage or deterioration of the skin cells thins the skin thickness and causes fatal phenomena on skin beauty such as decreased elasticity, increased skin wrinkles, blemishes and freckles. Changes in cellular function caused by external environmental substances secrete cytokines (cytokine), a variety of cellular regulators, from skin keratinocytes and dermal dermal cells, including TGF-beta (transforming growth factor) and TNF-alpha (tumor necrosis factor). , PGE2 (prostaglandin E2), alpha-MSH (melanocyte stimulating hormone), GSF (granulocyte stimulating factor), IL-1 (interleukin-1), IL-6, IL-8, IL-10, and keratinocyte It is a substance secreted by. α-MSH is a type of growth hormone that is released from keratinocytes under external stress such as UV and binds to receptors present in melanocytes. TGF-beta, PGE2, and α-MSH secreted from keratinocytes stimulate melanocyte synthesis of melanocytes to synthesize melanin as part of a mechanism that protects the skin from external stress. It is transmitted to keratinocytes through dendrite and the like to suppress the cytotoxicity caused by stress. However, brown pigments and black pigments produced by melanocytes have negative effects on skin diseases as well as skin care, so the cosmetics industry has tried to block melanin synthesis as a part of research to obtain skin white skin diseases. (Tobin DJ, et al., Melanin pigmentation in mammalian skin and its hormonal regulation, J. Physiol Rev, 84 (4) , pp. 1155-1228, 2004).
멜라닌 합성은 멜라노좀 내에 존재하는 티로시나아제의 작용을 통해 이루어진다. 이 티로시나아제는 L-타이로신을 산화시켜 L-DOPA를 만드는 타이로신 하이드록실레이즈로 작용하며 또한, DOPA를 산화시켜 DOPA 퀴논을 만드는 DOPA 산화제로 작용하여 멜라닌을 합성하는 중요한 효소로 알려져 있다. 따라서, 멜라닌 생성을 억제하는 피부 미백제 개발에는 티로시나아제의 활성을 억제하는 것이 필수적이다.Melanin synthesis is achieved through the action of tyrosinase present in melanosomes. This tyrosinase acts as a tyrosine hydroxylase that oxidizes L-tyrosine to form L-DOPA, and is also known as an important enzyme for synthesizing melanin by acting as a DOPA oxidant which oxidizes DOPA to form DOPA quinones. Therefore, it is essential to inhibit the activity of tyrosinase in the development of skin whitening agents that inhibit melanin production.
TRP-1(tyrosinase related protein-1)은 TRP-2에 의해 생성된 DHICA (5,6-dihydroxy indole-2-carboxylic acid)를 산화시켜 IQCA(indole-2-carboxylic acid)를 생성하는데, IQCA는 흑갈색을 나타낸다. 따라서, TRP-1 발현을 억제하면 미백효과를 기대할 수 있다.Tyrosinase related protein-1 (TRP-1) oxidizes DHICA (5,6-dihydroxy indole-2-carboxylic acid) produced by TRP-2 to produce indole-2-carboxylic acid (IQCA). It is dark brown. Therefore, whitening effect can be expected by inhibiting TRP-1 expression.
마늘은 식물분류학적으로 백합목 백합과 알리움속 (ALLium sativum for peiinense Makino, Alium scorodoprassum L.)에 속하는 다년생 구근 식물로 인류의 역사에 최초로 등장한 것은 기원전 4,500년경 나일강을 중심으로 한 고대 이집트로 고대 문명의 발전과 더불어 아라비아, 아프카니스탄을 거쳐 인도, 중국으로 전해지며 세계로 보급되어 현재는 각지에서 재배되고 있다.Garlic is a perennial bulb plant belonging to the allium sativum for peiinense Makino (Alium scorodoprassum L.) as the plant taxonomy, and the first to appear in the history of mankind is ancient Egypt, centered on the Nile around 4,500 BC. With the development of China, it is spread to Arabia, Afghanistan, India, and China, and is now being cultivated all over the world.
마늘은 주로 56~68% 정도의 수분, 26~30% 탄수화물로 구성되어 있으며, 2.3% 유기황화합물, 2% 단백질(주로 allinase), 1.5% 섬유소 등으로 이루어져 있으며, 마늘의 독특한 맛과 향은 마늘의 유기황화합물 중의 하나인 알리신(allicin)에 의한 것으로 알려져 있는데, 상기 알리신은 물에 대한 용해도가 매우 낮은 화합물로서, 마늘내에서는 알린(alliin)으로 존재한다. 마늘의 구조상 알린(alliin)이란 성분은 단백질로서 자체로는 고약한 냄새가 나지 않으나, 마늘 표면에 상처를 내거나 식칼로 도려내거나 갈거나 하는 등의 외부적 변화가 생기면 순식간에 특유한 냄새가 나게 되는데 이것은 마늘내의 알리나아제(allinase) 효소가 산소와의 접촉으로 인해 냄새와 매운맛이 강한 알리신(allicin)으로 변화하게 된다(전희정, 전희정 교수의 마늘이야기, 지구문화사, p.11-12, 2002).Garlic is mainly composed of 56 ~ 68% water, 26 ~ 30% carbohydrate, 2.3% organosulfur compound, 2% protein (mainly allinase), 1.5% fiber, etc. It is known to be due to allicin (allicin) which is one of the organic sulfur compounds of the allicin is a compound having a very low solubility in water, present in the garlic (alliin) in garlic. The structure of garlic is a protein called allin, which does not have a bad smell on its own, but when an external change occurs, such as a wound, a knife cut or grind on the surface of the garlic, it has a unique smell. The alinase enzyme in the body changes into allicin, which has a strong smell and pungent taste due to contact with oxygen (Cheon Story, Hee-Jung Chun, Professor Hee-Jung Chun, Earth Culture History, p. 11-12, 2002).
그러나, 마늘의 항암, 항균, 해독 효과 등의 잘 알려져 있는 유익한 효과에도 불구하고 자극성이 심하여 빈속에 날것으로 먹을 경우 위장에 손상을 주는 등의 어려움으로 인하여 그대로 섭취하기가 쉽지 않고, 주로 향신료로 국한되어 사용되어 왔으나, 이마저도 일정시간이 경과하면 쉽게 변질되는 문제점이 있어, 단지 소량만을 섭취하는데 그치게 되어 마늘의 유용한 성분이 인체에 영향을 미치는데 한계가 있어왔다.However, despite the well-known beneficial effects such as garlic's anti-cancer, antibacterial and detoxification effects, it is irritating and difficult to eat as it is due to the difficulty of damaging the stomach when eaten raw on an empty stomach. It has been used, but even after a certain period of time there is a problem that is easily deteriorated, only to eat only a small amount has been limited to the useful components of garlic affect the human body.
피부 미백 및 주름살은 멜라닌 생성과 밀접한 관계를 갖고 있다는 사실은 매우 잘 알려져 있다. 따라서, 멜라닌 생성을 억제하거나 멜라닌 생성에 관여하는 인 자들을 평가하는 것은 피부미백 및 주름 개선용 물질의 개발에 매우 중요한 일이라고 판단된다. 이와 함께 피부미용제는 장기간 피부 적용 또는 복용해야 한다는 점을 고려하면, 유효성과 더불어 안전성이 높은 마늘에 대한 연구는 매우 유익한 결과를 나타낼 것이다.It is well known that skin whitening and wrinkles are closely related to melanin production. Therefore, it is considered that it is very important for the development of substances for skin whitening and wrinkle improvement to inhibit melanin production or to evaluate factors involved in melanin production. Considering the fact that skin cosmetics should be applied or taken for a long time, research on garlic having high efficacy and safety will have very beneficial results.
이에 본 발명자들은 자극성이 강한 마늘을 오랜 기간 숙성시켜서 만든 흑마늘 추출물이 멜라닌 생성 억제 효과, 티로시나아제 활성 억제 효과 및 멜라닌 생성관련 유전자의 발현 억제 효과를 확인함으로써 본 발명을 완성하게 되었다.Accordingly, the present inventors have completed the present invention by confirming that the black garlic extract made by aging garlic for a long time has a melanin inhibitory effect, a tyrosinase activity inhibitory effect, and a melanin production related gene expression inhibitory effect.
상기한 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 흑마늘 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다. In order to achieve the above object, the present invention provides a cosmetic composition for improving skin whitening and wrinkles containing black garlic extract as an active ingredient.
본원에서 정의되는 흑마늘 추출물은 생마늘을 숙성, 건조, 숙성의 단계를 거쳐 흑마늘로 가공하여 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물, 메탄올 또는 에탄올에 가용한 추출물을 포함한다. The black garlic extract as defined herein is processed into black garlic through the steps of ripening, drying, and ripening raw garlic, thereby extracting an extract available in water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a mixed solvent thereof, preferably water, methanol or ethanol. Include.
본원에서 정의되는 생마늘은 국내산 남해마을, 국내산 의성마늘 또는 국내산 무안마늘등이며, 바람직하게는 국내산 남해마늘임을 특징으로 한다.Raw garlic, as defined herein, is a domestic Namhae village, domestic seongseong garlic or domestic Muan garlic, etc., preferably characterized by domestic Namhae garlic.
이하, 본 발명의 흑마늘 추출물을 수득하는 방법을 상세히 설명한다. Hereinafter, a method of obtaining the black garlic extract of the present invention will be described in detail.
본 발명의 흑마늘 추출물은 국내산 남해마을, 국내산 의성마늘 또는 국내산 무안마늘 등이며, 바람직하게는 국내 경상남도 남해군에서 재배된 생마늘을 10 내지 120℃, 바람직하게는 40 내지 90℃에서 150 내지 500시간, 바람직하게는 280 내 지 320시간 동안 열풍으로 1차 숙성하는 제 1단계; 상기 단계에서 숙성된 마늘을 10 내지 60시간, 바람직하게는 38 내지 42시간 동안 자연 건조하는 제 2단계; 상기 건조 마늘을 다시 10 내지 50℃, 바람직하게는 20 내지 30℃의 온도의 열풍으로 10 내지 100시간, 바람직하게는 30 내지 50시간 동안 숙성하는 2차 숙성 단계를 포함하는 제 3단계: 상기 제 3단계에서 수득한 흑마늘을 동결건조하고 이를 분쇄한 후, 시료중량의 1 내지 30배, 바람직하게는 5 내지 15배 부피의 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 물, 메탄올 또는 에탄올로부터 선택된 용매, 더욱 바람직하게는 60-100% 메탄올에 가용한 추출물을 1 내지 48시간, 바람직하게는 5 내지 12시간 동안 실온에서 열수추출, 냉침추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출, 가열추출 등의 추출방법, 바람직하게는 냉침추출법으로 추출하는 제 4단계: 상기 제 4단계에서 수득한 추출물을 감압여과하여 수득한 제 1차 추출액과 잔사를 분리하는 제 5단계: 상기 5단계에서 수득한 잔사에 추출 시작 당시의 흑마늘 시료중량의 1 내지 20배, 바람직하게는 5 내지 10배 부피(w/v)의 물, 탄소수 1 내지 4의 저급알코올 또는 이들의 혼합용매로부터 선택된 용매, 바람직하게는 물과 메탄올의 혼합용매, 더욱 바람직하게는 60-100% 메탄올에 가용한 추출물을 실온에서 1 내지 10시간, 바람직하게는 1 내지 5시간 동안 열수추출, 냉침추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출, 가열추출 등의 추출방법, 바람직하게는 냉침추출법으로 추출하여 감압여과하고 제 1차 추출액과 합쳐 농축 및 건조하는 제 6단계의 제조공정을 통하여 본 발명의 흑마늘 추출물을 수득할 수 있다. The black garlic extract of the present invention is a domestic Namhae village, domestic acidic garlic or domestic Muan garlic, etc., Preferably, the raw garlic grown in Namhae-gun, Gyeongsangnam-do, Korea, 10 to 120 ℃, preferably 150 to 500 hours at 40 to 90 ℃ Preferably a first stage of aging for 1 to 280 hours with hot air; A second step of naturally drying garlic aged in the step for 10 to 60 hours, preferably 38 to 42 hours; Third step comprising the second ripening step of ripening the dried garlic for 10 to 100 hours, preferably 30 to 50 hours with hot air at a temperature of 10 to 50 ℃, preferably 20 to 30 ℃ After freeze-drying the black garlic obtained in step 3 and pulverizing it, a solvent selected from 1 to 30 times the weight of the sample, preferably 5 to 15 times the volume of water, a lower alcohol having 1 to 4 carbon atoms or a mixed solvent thereof, Preferably, the extract available in a solvent selected from water, methanol or ethanol, more preferably in 60-100% methanol, is subjected to hot water extraction, cold extraction, ultrasonic extraction, at room temperature for 1 to 48 hours, preferably 5 to 12 hours. Extraction method such as reflux cooling extraction and heating extraction, preferably extraction by cold extraction method: the first extract and residue obtained by filtration under reduced pressure of the extract obtained in the fourth step 5th step of separating: 1-20 times the weight of the black garlic sample at the time of extraction start, preferably 5-10 times the volume (w / v) of water, and the lower the carbon number 1-4 An extract selected from an alcohol or a mixed solvent thereof, preferably a mixed solvent of water and methanol, more preferably 60-100% methanol, was subjected to hot water for 1 to 10 hours, preferably 1 to 5 hours at room temperature. Extraction method such as extraction, cold extraction, ultrasonic extraction, reflux cooling extraction, heating extraction, preferably by cold extraction extraction under reduced pressure filtration and combined with the first extract, concentrated and dried in the sixth step manufacturing process Black garlic extract of can be obtained.
본 발명은 상기의 제조공정으로 얻어진 흑마늘 추출물을 유효성분으로 함유 하는 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물을 제공한다.The present invention provides a cosmetic composition for skin whitening and anti-wrinkle containing black garlic extract obtained by the above manufacturing process as an active ingredient.
본 발명의 흑마늘 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물은, 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 ~ 50 중량% 포함한다.Skin whitening and anti-wrinkle cosmetic composition containing the black garlic extract of the present invention as an active ingredient, the extract contains 0.1 to 50% by weight based on the total weight of the composition.
또한, 마늘은 오랫동안 식용으로 사용되어 오던 약재로서 이로부터 추출된 본 발명의 흑마늘 추출물 역시 독성 및 부작용 등의 문제가 없으며, 피부 자극 시험에서 무자극 시료임이 입증되었으므로 장기간 사용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.In addition, garlic has been used for a long time as a medicinal herb extract of the present invention extracted from it also has no problems such as toxicity and side effects, it can be used safely even in the long-term use because it has been proved to be a non-irritating sample in the skin irritation test .
본 발명의 흑마늘 추출물을 포함하는 조성물은 피부 미백 및 주름개선 효과를 위한 화장품 및 샴푸 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를들어, 각종 크림, 로션, 스킨, 에센스 등과 같은 화장품류와 샴푸, 린스, 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 팩, 미용액 등이 있다.The composition comprising the black garlic extract of the present invention can be used in various ways, such as cosmetics and shampoo for skin whitening and wrinkle improvement effect. Examples of products to which the present composition can be added include cosmetics such as various creams, lotions, skins, essences, shampoos, rinses, cleansing agents, face washes, soaps, treatments, packs, and essences.
본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.Cosmetics of the present invention comprises a composition selected from the group consisting of water-soluble vitamins, oil-soluble vitamins, polymer peptides, polymer polysaccharides, sphingolipids and seaweed extract.
수용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 B1, 비타민 B2, 비타민 B6, 피리독신, 염산피리독신, 비타민 B12, 판토텐산, 니코틴산, 니코틴산아미드, 엽산, 비타민 C, 비타민 H 등을 들 수 있으며, 그들의 염 (티아민염산염, 아스코르빈산나트륨염 등)이나 유도체 (아스코르빈산-2-인산나트륨염, 아스코르빈산-2-인산마그네슘염 등)도 본 발명에서 사용할 수 있는 수용성 비타민에 포함된다. 수용성 비타민은 미생물 변환법, 미생 물의 배양물로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 수득할 수 있다.The water-soluble vitamins may be any compound that can be incorporated into cosmetics, but preferably vitamin B1, vitamin B2, vitamin B6, pyridoxine, pyridoxine, vitamin B12, pantothenic acid, nicotinic acid, nicotinic acid amide, folic acid, vitamin C, vitamin H, and the like. Their salts (thiamine hydrochloride, sodium ascorbate salt, etc.) and derivatives (ascorbic acid-2-sodium phosphate salt, ascorbic acid-2-magnesium phosphate salt, etc.) may also be used in the water-soluble vitamins that can be used in the present invention. Included. The water-soluble vitamins can be obtained by conventional methods such as microbial transformation, purification of microorganisms from cultures, enzymatic or chemical synthesis.
유용성 비타민으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 비타민 A, 카로틴, 비타민 D2, 비타민 D3, 비타민 E(d1-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤, d-알파 토코페롤) 등을 들 수 있으며, 그들의 유도체 (팔미틴산아스코르빈, 스테아르산아스코르빈, 디팔미틴산아스코르빈, 아세트산 dl-알파 토코페롤, 니코틴산dl-알파 토코페롤비타민 E, DL-판토테닐알코올, D-판토테닐알코올, 판토테닐에틸에테르 등) 등도 본 발명에서 사용되는 유용성 비타민에 포함된다. 유용성 비타민은 미생물 변환법, 미생물의 배양물로부터의 정제법, 효소 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 취득할 수 있다.The oil-soluble vitamin may be any compound that can be formulated into cosmetics, but preferably vitamin A, carotene, vitamin D2, vitamin D3, vitamin E (d1-alpha tocopherol, d-alpha tocopherol, d-alpha tocopherol), and the like. , Derivatives thereof (ascorbic palmitate, ascorbic stearate, ascorbic acid dipalmitate, dl-alpha tocopherol acetate, dl-alpha tocopherolvitamin E, DL-pantothenyl alcohol, D-pantothenyl alcohol, pantotenylethyl Ethers, etc.) are also included in the oil-soluble vitamins used in the present invention. Oil-soluble vitamins can be obtained by conventional methods such as microbial transformation, purification of microorganism culture, enzyme or chemical synthesis.
고분자 펩티드로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 콜라겐, 가수 분해 콜라겐, 젤라틴, 엘라스틴, 가수 분해 엘라스틴, 케라틴 등을 들 수 있다. 고분자 펩티드는 미생물의 배양액으로부터의 정제법, 효소법 또는 화학 합성법 등의 통상의 방법에 의해 정제 취득할 수 있으며, 또는 통상 돼지나 소 등의 진피, 누에의 견섬유 등의 천연물로부터 정제하여 사용할 수 있다.The polymer peptide may be any compound as long as it can be incorporated into cosmetics. Preferably, collagen, hydrolyzed collagen, gelatin, elastin, hydrolyzed elastin, keratin, and the like can be given. Polymeric peptides can be purified and obtained by conventional methods such as purification from microbial cultures, enzymatic methods or chemical synthesis methods, or can be purified and used from natural products such as dermis and pig silk such as pigs and cattle.
고분자 다당으로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 히드록시에틸셀룰로오스, 크산탄검, 히알루론산나트륨, 콘드로이틴 황산 또는 그 염(나트륨염 등) 등을 들 수 있다. 예를 들어, 콘드로이틴 황산 또는 그 염 등은 통상 포유 동물이나 어류로부터 정제하여 사용할 수 있다.The polymer polysaccharide may be any compound as long as it can be incorporated into cosmetics. Preferably, hydroxyethyl cellulose, xanthan gum, sodium hyaluronate, chondroitin sulfate or a salt thereof (sodium salt, etc.) may be mentioned. For example, chondroitin sulfate or its salt can be normally purified from a mammal or fish.
스핑고 지질로서는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 세라미드, 피토스핑고신, 스핑고당지질 등을 들 수 있다. 스핑고 지질은 통상 포유류, 어류, 패류, 효모 또는 식물 등으로부터 통상의 방법에 의해 정제하거나 화학 합성법에 의해 취득할 수 있다.The sphingolipid may be any compound as long as it can be blended into cosmetics. Preferably, ceramide, phytosphingosine, sphingosaccharide lipid, etc. may be mentioned. Sphingo lipids can usually be purified from mammals, fish, shellfish, yeasts or plants by conventional methods or obtained by chemical synthesis.
해초 엑기스로는 화장품에 배합 가능한 것이라면 어떠한 것이라도 되지만, 바람직하게는 갈조 엑기스, 홍조 엑기스, 녹조 엑기스 등을 들 수 있으며, 또, 이들의 해초 엑기스로부터 정제된 칼라기난, 아르긴산, 아르긴산나트륨, 아르긴산칼륨 등도 본 발명에서 사용되는 해초 엑기스에 포함된다. 해초 엑기스는 해초로부터 통상의 방법에 의해 정제하여 취득할 수 있다.The seaweed extract may be any compound as long as it can be blended into cosmetics. Preferably, the seaweed extract may include brown algae extract, red algae extract, green algae extract, and the like. Also, calginine, arginic acid, sodium arginate, Potassium arginate and the like are also included in the seaweed extract used in the present invention. Seaweed extract can be obtained by purification from seaweed by conventional methods.
본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다.In addition to the said essential component, you may mix | blend the cosmetics of this invention with the other components normally mix | blended with cosmetics as needed.
이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.Other components that may be added include fats and oils, moisturizers, emollients, surfactants, organic and inorganic pigments, organic powders, ultraviolet absorbers, preservatives, fungicides, antioxidants, plant extracts, pH adjusters, alcohols, pigments, flavorings, Blood circulation accelerators, cooling agents, restriction agents, purified water and the like.
유지 성분으로서는 에스테르계 유지, 탄화수소계 유지, 실리콘계 유지, 불소계 유지, 동물 유지, 식물 유지 등을 들 수 있다.Examples of the fat or oil component include ester fats, hydrocarbon fats, silicone fats, fluorine fats, animal fats, and vegetable fats and oils.
에스테르계 유지로서는 트리2-에틸헥산산글리세릴, 2-에틸헥산산세틸, 미리스틴산이소프로필, 미리스틴산부틸, 팔미틴산이소프로필, 스테아르산에틸, 팔미틴산옥틸, 이소스테아르산이소세틸, 스테아르산부틸, 리놀레산에틸, 리놀레산이소프 로필, 올레인산에틸, 미리스틴산이소세틸, 미리스틴산이소스테아릴, 팔미틴산이소스테아릴, 미리스틴산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 세바신산디에틸, 아디핀산디이소프로필, 네오펜탄산이소알킬, 트리(카프릴, 카프린산)글리세릴, 트리2-에틸헥산산트리메틸롤프로판, 트리이소스테아르산트리메틸롤프로판, 테트라2-에틸헥산산펜타엘리슬리톨, 카프릴산세틸, 라우린산데실, 라우린산헥실, 미리스틴산데실, 미리스틴산미리스틸, 미리스틴산세틸, 스테아르산스테아릴, 올레인산데실, 리시노올레인산세틸, 라우린산이소스테아릴, 미리스틴산이소트리데실, 팔미틴산이소세틸, 스테아르산옥틸, 스테아르산이소세틸, 올레인산이소데실, 올레인산옥틸도데실, 리놀레산옥틸도데실, 이소스테아르산이소프로필, 2-에틸헥산산세토스테아릴, 2-에틸헥산산스테아릴, 이소스테아르산헥실, 디옥탄산에틸렌글리콜, 디올레인산에틸렌글리콜, 디카프린산프로필렌글리콜, 디(카프릴,카프린산)프로필렌글리콜, 디카프릴산프로필렌글리콜, 디카프린산네오펜틸글리콜, 디옥탄산네오펜틸글리콜, 트리카프릴산글리세릴, 트리운데실산글리세릴, 트리이소팔미틴산글리세릴, 트리이소스테아르산글리세릴, 네오펜탄산옥틸도데실, 옥탄산이소스테아릴, 이소노난산옥틸, 네오데칸산헥실데실, 네오데칸산옥틸도데실, 이소스테아르산이소세틸, 이소스테아르산이소스테아릴, 이소스테아르산옥틸데실, 폴리글리세린올레인산에스테르, 폴리글리세린이소스테아르산에스테르, 시트르산트리이소세틸, 시트르산트리이소알킬, 시트르산트리이소옥틸, 락트산라우릴, 락트산미리스틸, 락트산세틸, 락트산옥틸데실, 시트르산트리에틸, 시트르산아세틸트리에틸, 시트르산아세틸트리부틸, 시트르산트리옥틸, 말산디이소스테아릴, 히드록시스테아르산 2-에틸헥실, 숙신산디2-에틸 헥실, 아디핀산디이소부틸, 세바신산디이소프로필, 세바신산디옥틸, 스테아르산콜레스테릴, 이소스테아르산콜레스테릴, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 올레인산콜레스테릴, 올레인산디히드로콜레스테릴, 이소스테아르산피트스테릴, 올레인산피트스테릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소세틸, 12-스테알로일히드록시스테아르산스테아릴, 12-스테알로일히드록시스테아르산이소스테아릴 등의 에스테르계 등을 들 수 있다.As ester fats and oils, glyceryl tri2-ethylhexanoate, cetyl 2-ethylhexanoate, isopropyl myristate, butyl mystinate, isopropyl palmitate, ethyl stearate, octyl palmitate, isocetyl isostearate, and stearic acid Butyl, ethyl linoleate, isopropyl linoleate, ethyl oleate, isocetyl acid isetyl, isostyl acid mystearyl, isostaryl palmitate, octylate acid octyldodecyl, isostearic acid isetyl, diethyl sebacinate, adidi Diisopropyl phosphate, isoalkyl neopentane, tri (capryl, capric acid) glyceryl, trimethyl ethyl trimethylolpropane, trimethyl stearate trimethylol propane, tetra 2-ethylhexanopentane Tol, cetyl caprylate, lauric acid decyl, lauric acid hexyl, myristic acid decyl, myristic acid myristyl, myristic acid cetyl, stearyl stearate, decyl oleate, lisinooleic acid Teyl, isostearyl laurate, isotridecyl myristin, isocetyl palmitate, octyl stearate, isocetyl stearate, isodecyl oleate, octyl dodecyl oleate, octyl dodecyl linoleate, isopropyl isopropyl acid, 2-ethylhexanoate cetostearyl, 2-ethylhexanoate stearyl, hexyl isostearate, ethylene glycol dioctanoate, ethylene glycol dioleate, propylene glycol dicapric acid, propylene glycol di (capryl, capric acid), Dicaprylic acid propylene glycol, dicapric acid neopentyl glycol, dioctanoate neopentyl glycol, tricaprylate glyceryl, triundecyl glyceryl, triisopalmitinate glyceryl, triisostearate glyceryl, octylate octadodode Sil, isostearyl octanoate, octyl isononanoate, hexyldecyl neodecanoate, octyldodecyl neodecanoate, isocetyl isostearate, isstearyl isostearate, Sothete octylate, polyglycerol oleate, polyglycerine isostearate, triisocetyl citrate, triisoalkyl citrate, triisoctyl citrate, lauryl lactate, myritic lactate, octyl lactate, octyl lactate, tricitric acid Ethyl, acetyl triethyl citrate, acetyl tributyl citrate, trioctyl citrate, diisostearyl malate, 2-ethylhexyl hydroxystearate, di2-ethyl hexyl succinate, diisobutyl adipic acid, diisopropyl sebacinate, Dioctyl sebacate, cholesteryl stearate, cholesteryl isostearate, cholesteryl hydroxystearate, cholesteryl oleate, dihydrocholesteryl oleate, physteryl isostearate, phytic oleate, 12-Steloylhydroxystearate isocetyl, 12-Steloylhydroxystearate stearyl, 12-steal One hydroxy stearic acid and the like esters such as cetearyl source.
탄화 수소계 유지로서는 스쿠알렌, 유동 파라핀, 알파-올레핀올리고머, 이소파라핀, 세레신, 파라핀, 유동 이소파라핀, 폴리부덴, 마이크로크리스탈린왁스, 와셀린 등의 탄화 수소계 유지 등을 들 수 있다.Hydrocarbon-based fats and oils, such as squalene, a liquid paraffin, alpha-olefin oligomer, isoparaffin, ceresin, paraffin, a liquid isoparaffin, polybutene, microcrystal wax, and a vaseline, etc. are mentioned as a hydrocarbon-type fats and oils.
실리콘계 유지로서는 폴리메틸실리콘, 메틸페닐실리콘, 메틸시클로폴리실록산, 옥타메틸폴리실록산, 데카메틸폴리실록산, 도데카메틸시클로실록산, 디메틸실록산ㆍ메틸세틸옥시실록산 공중합체, 디메틸실록산ㆍ메틸스테알록시실록산 공중합체, 알킬 변성 실리콘유, 아미노 변성 실리콘유 등을 들 수 있다.Examples of the silicone-based oils and fats include polymethylsilicone, methylphenylsilicone, methylcyclopolysiloxane, octamethylpolysiloxane, decamethylpolysiloxane, dodecamethylcyclosiloxane, dimethylsiloxane, methylcetyloxysiloxane copolymer, dimethylsiloxane and methylsteoxysiloxane copolymer, and alkyl. Modified silicone oil, amino modified silicone oil and the like.
불소계 유지로서는 퍼플루오로폴리에테르 등을 들 수 있다.Perfluoro polyether etc. are mentioned as fluorine-based fats and oils.
동물 또는 식물 유지로서는 아보카도유, 아르몬드유, 올리브유, 참깨유, 쌀겨유, 새플라워유, 대두유, 옥수수유, 유채유, 행인(杏仁)유, 팜핵유, 팜유, 피마자유, 해바라기유, 포도종자유, 면실유, 야자유, 쿠쿠이너트유, 소맥배아유, 쌀 배아유, 시아버터, 월견초유, 마커데이미아너트유, 메도홈유, 난황유, 우지(牛脂), 마유, 밍크유, 오렌지라피유, 호호바유, 캔데리러왁스, 카르나바왁스, 액상 라놀린, 경화피마자유 등의 동물 또는 식물 유지를 들 수 있다.Animal or vegetable oils include avocado oil, almond oil, olive oil, sesame oil, rice bran oil, soybean oil, soybean oil, corn oil, rapeseed oil, almond oil, palm kernel oil, palm oil, castor oil, sunflower oil, grape seed oil. , Cottonseed oil, Palm oil, Cucumber nut oil, Wheat germ oil, Rice germ oil, Shea butter, Walnut colostrum oil, Marker demia nut oil, Meadow home oil, Egg yolk oil, Uji, Horse oil, Mink oil, Orange rape oil, Jojoba oil And animal or plant fats and oils such as candeler wax, carnava wax, liquid lanolin and hardened castor oil.
보습제로서는 수용성 저분자 보습제, 지용성 분자 보습제, 수용성 고분자, 지용성 고분자 등을 들 수 있다.Examples of the moisturizing agent include a water-soluble low molecular moisturizer, a fat-soluble molecular moisturizer, a water-soluble polymer, and a fat-soluble polymer.
수용성 저분자 보습제로서는 세린, 글루타민, 솔비톨, 만니톨, 피롤리돈-카르복실산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸렌글리콜, 에틸렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜B(중합도 n = 2 이상), 폴리프로필렌글리콜(중합도 n = 2 이상), 폴리글리세린B(중합도 n = 2 이상), 락트산, 락트산염 등을 들 수 있다.Water-soluble low molecular humectants include serine, glutamine, sorbitol, mannitol, pyrrolidone-sodium carboxylate, glycerin, propylene glycol, 1,3-butylene glycol, ethylene glycol, polyethylene glycol B (polymerization degree n = 2 or more), polypropylene Glycol (polymerization degree n = 2 or more), polyglycerol B (polymerization degree n = 2 or more), lactic acid, lactic acid salt, etc. are mentioned.
지용성 저분자 보습제로서는 콜레스테롤, 콜레스테롤에스테르 등을 들 수 있다.Examples of the fat-soluble low molecular humectants include cholesterol and cholesterol esters.
수용성 고분자로서는 카르복시비닐폴리머, 폴리아스파라긴산염, 트라가칸트, 크산탄검, 메틸셀룰로오스, 히드록시메틸셀룰로오스, 히드록시에틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 수용성 키틴, 키토산, 덱스트린 등을 들 수 있다.Examples of the water-soluble polymer include carboxyvinyl polymer, polyasparaginate, tragacanth, xanthan gum, methyl cellulose, hydroxymethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropyl cellulose, carboxymethyl cellulose, water soluble chitin, chitosan, and dextrin. Can be.
지용성 고분자로서는 폴리비닐피롤리돈ㆍ에이코센 공중합체, 폴리비닐피롤리돈ㆍ헥사데센 공중합체, 니트로셀룰로오스, 덱스트린지방산에스테르, 고분자 실리콘 등을 들 수 있다.Examples of the fat-soluble polymers include polyvinylpyrrolidone-eicosene copolymers, polyvinylpyrrolidone-hexadecene copolymers, nitrocellulose, dextrin fatty acid esters, polymer silicones, and the like.
에몰리엔트제로서는 장쇄아실글루타민산콜레스테릴에스테르, 히드록시스테아르산콜레스테릴, 12-히드록시스테아르산, 스테아르산, 로진산, 라놀린지방산콜레스테릴에스테르 등을 들 수 있다.Examples of the emollient include long-chain acyl glutamic acid cholesteryl esters, hydroxy stearic acid cholesterol, 12-hydroxystearic acid, stearic acid, rosin acid, lanolin fatty acid cholesteryl esters, and the like.
계면 활성제로서는 비이온성 계면 활성제, 음이온성 계면 활성제, 양이온성 계면 활성제, 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.As surfactant, nonionic surfactant, anionic surfactant, cationic surfactant, amphoteric surfactant, etc. are mentioned.
비이온성 계면 활성제로서는 자기 유화형 모노스테아르산글리세린, 프로필렌글리콜지방산에스테르, 글리세린지방산에스테르, 폴리글리세린지방산에스테르, 솔비탄지방산에스테르, POE (폴리옥시에틸렌)솔비탄지방산에스테르, POE 솔비트지방산에스테르, POE 글리세린지방산에스테르, POE 알킬에테르, POE 지방산에스테르, POE 경화피마자유, POE 피마자유, POEㆍPOP (폴리옥시에틸렌ㆍ폴리옥시프로필렌) 공중합체, POEㆍPOP 알킬에테르, 폴리에테르변성실리콘, 라우린산알카놀아미드, 알킬아민옥시드, 수소첨가대두인지질 등을 들 수 있다.As the nonionic surfactant, self-emulsifying glycerin monostearate, propylene glycol fatty acid ester, glycerin fatty acid ester, polyglycerol fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, POE (polyoxyethylene) sorbitan fatty acid ester, POE sorbitan fatty acid ester, POE Glycerin fatty acid ester, POE alkyl ether, POE fatty acid ester, POE hardened castor oil, POE castor oil, POE / POP (polyoxyethylene / polyoxypropylene) copolymer, POE / POP alkyl ether, polyether modified silicone, lauric acid Alkanolamide, alkylamine oxide, hydrogenated soybean phospholipid, etc. are mentioned.
음이온성 계면 활성제로서는 지방산비누, 알파-아실술폰산염, 알킬술폰산염, 알킬알릴술폰산염, 알킬나프탈렌술폰산염, 알킬황산염, POE 알킬에테르황산염, 알킬아미드황산염, 알킬인산염, POE 알킬인산염, 알킬아미드인산염, 알킬로일알킬타우린염, N-아실아미노산염, POE 알킬에테르카르복실산염, 알킬술포숙신산염, 알킬술포아세트산나트륨, 아실화 가수분해 콜라겐펩티드염, 퍼플루오로알킬인산에스테르 등을 들 수 있다.Anionic surfactants include fatty acid soaps, alpha-acyl sulfonates, alkyl sulfonates, alkyl allyl sulfonates, alkyl naphthalene sulfonates, alkyl sulfates, POE alkyl ether sulfates, alkylamide sulfates, alkyl phosphates, POE alkyl phosphates, and alkylamide phosphates. , Alkyloyl alkyl taurine salt, N-acylamino acid salt, POE alkyl ether carboxylate, alkyl sulfosuccinate, sodium alkyl sulfo acetate, acylated hydrolyzed collagen peptide salt, perfluoroalkyl phosphate ester, etc. are mentioned. .
양이온성 계면 활성제로서는 염화알킬트리메틸암모늄, 염화스테아릴트리메틸암모늄, 브롬화스테아릴트리메틸암모늄, 염화세토스테아릴트리메틸암모늄, 염화디스테아릴디메틸암모늄, 염화스테아릴디메틸벤질암모늄, 브롬화베헤닐트리메틸암모늄, 염화벤잘코늄, 스테아르산디에틸아미노에틸아미드, 스테아르산디메틸아미노프로필아미드, 라놀린 유도체 제 4급 암모늄염 등을 들 수 있다.As cationic surfactant, alkyl trimethylammonium chloride, stearyl trimethyl ammonium chloride, stearyl trimethyl ammonium chloride, cetostearyl trimethyl ammonium chloride, distearyl dimethyl ammonium chloride, stearyl dimethyl benzyl ammonium bromide, behenyl trimethyl ammonium chloride, chloride Benzalkonium, diethylaminoethyl stearate, dimethylaminopropyl stearate, lanolin derivatives, quaternary ammonium salts, and the like.
양성 계면 활성제로서는 카르복시베타인형, 아미드베타인형, 술포베타인형, 히드록시술포베타인형, 아미드술포베타인형, 포스포베타인형, 아미노카르복실산염 형, 이미다졸린 유도체형, 아미드아민형 등의 양성 계면 활성제 등을 들 수 있다.Examples of amphoteric surfactants include carboxybetaine type, amidebetaine type, sulfobetaine type, hydroxysulfobetaine type, amide sulfobetaine type, phosphobetaine type, aminocarboxylate type, imidazoline derivative type and amideamine type. An amphoteric surfactant etc. are mentioned.
유기 및 무기 안료로서는 규산, 무수규산, 규산마그네슘, 탤크, 세리사이트, 마이카, 카올린, 벵갈라, 클레이, 벤토나이트, 티탄피막운모, 옥시염화비스무트, 산화지르코늄, 산화마그네슘, 산화아연, 산화티탄, 산화알루미늄, 황산칼슘, 황산바륨, 황산마그네슘, 탄산칼슘, 탄산마그네슘, 산화철, 군청, 산화크롬, 수산화크롬, 칼라민 및 이들의 복합체등의 무기 안료 ; 폴리아미드, 폴리에스테르, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리우레탄, 비닐수지, 요소수지, 페놀수지, 불소수지, 규소수지, 아크릴수지, 멜라민수지, 에폭시수지, 폴리카보네이트수지, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 실크파우더, 셀룰로오스, CI 피그먼트옐로우, CI 피그먼트오렌지 등의 유기 안료 및 이들의 무기 안료와 유기 안료의 복합 안료 등을 들 수 있다.Examples of the organic and inorganic pigments include inorganic pigments such as silicic acid, silicic anhydride, magnesium silicate, talc, sericite, mica, kaolin, Bengala, clay, bentonite, titanium mica, titanium oxide, bismuth chloride, zirconium oxide, magnesium oxide, Inorganic pigments such as calcium sulfate, barium sulfate, magnesium sulfate, calcium carbonate, magnesium carbonate, iron oxide, chromium oxide, chromium oxide, chromium hydroxide, Polyamide, polyester, polypropylene, polystyrene, polyurethane, vinyl resin, urea resin, phenol resin, fluorine resin, silicon resin, acrylic resin, melamine resin, epoxy resin, polycarbonate resin, divinylbenzene, styrene copolymer, Organic pigments such as silk powder, cellulose, CI pigment yellow, CI pigment orange, and composite pigments of these inorganic pigments and organic pigments;
유기 분체로서는 스테아르산칼슘 등의 금속비누 ; 세틸린산아연나트륨, 라우릴린산아연, 라우릴린산칼슘 등의 알킬인산금속염 ; N-라우로일-베타-알라닌칼슘, N-라우로일-베타-알라닌아연, N-라우로일글리신칼슘 등의 아실아미노산 다가금속염 ; N-라우로일-타우린칼슘, N-팔미토일-타우린칼슘 등의 아미드술폰산 다가금속염 ; N-엡실론-라우로일-L-리진, N-엡실론-팔미토일리진, N-알파-파리토일올니틴, N-알파-라우로일아르기닌, N-알파-경화우지지방산아실아르기닌 등의 N-아실염기성아미노산 ; N-라우로일글리실글리신 등의 N-아실폴리펩티드 ; 알파-아미노카프릴산, 알파-아미노라우린산 등의 알파-아미노지방산 ; 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 나일론, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리스티렌, 디비닐벤젠ㆍ스티렌 공중합체, 사불화에틸렌 등을 들 수 있다.As organic powder, Metal soaps, such as a calcium stearate; Alkyl phosphate metal salts such as sodium cetylinate, zinc lauryl acid and calcium laurate; Acylamino acid polyvalent metal salts such as N-lauroyl-beta-alanine calcium, N-lauroyl-beta-alanine zinc, and N-lauroylglycine calcium; Amide sulfonic acid polyvalent metal salts, such as N-lauroyl-taurine calcium and N-palmitoyl-taurine calcium; N-epsilon-lauroyl-L-lysine, N-epsilon-palmitolyzine, N-alpha-paratoylol nitin, N-alpha-lauroyl arginine, N-alpha-cured fatty acid acyl arginine -Acyl basic amino acid; N-acyl polypeptides, such as N-lauroyl glycyl glycine; Alpha-amino fatty acids such as alpha-aminocaprylic acid and alpha-aminolauric acid; Polyethylene, polypropylene, nylon, polymethyl methacrylate, polystyrene, divinylbenzene-styrene copolymer, ethylene tetrafluoride and the like.
자외선 흡수제로서는 파라아미노벤조산, 파라아미노벤조산에틸, 파라아미노벤조산아밀, 파라아미노벤조산옥틸, 살리실산에틸렌글리콜, 살리신산페닐, 살리신산옥틸, 살리신산벤질, 살리신산부틸페닐, 살리신산호모멘틸, 계피산벤질, 파라메톡시계피산-2-에톡시에틸, 파라메톡시계피산옥틸, 디파라메톡시계피산모노-2-에틸헥산글리세릴, 파라메톡시계피산이소프로필, 디이소프로필ㆍ디이소프로필계피산에스테르 혼합물, 우로카닌산, 우로카닌산에틸, 히드록시메톡시벤조페논, 히드록시메톡시벤조페논술폰산 및 그 염, 디히드록시메톡시벤조페논, 디히드록시메톡시벤조페논디술폰산나트륨, 디히드록시벤조페논, 테트라히드록시벤조페논, 4-tert-부틸-4'-메톡시디벤조일메탄, 2,4,6-트리아닐리노-p-(카르보-2'-에틸헥실-1'-옥시)-1,3,5-트리아진, 2-(2-히드록시-5-메틸페닐)벤조트리아졸 등을 들 수 있다.Examples of the ultraviolet absorber include paraaminobenzoic acid, ethyl paraaminobenzoate, amyl paraaminobenzoic acid, octyl paraaminobenzoate, ethylene glycol salicylate, phenyl salicylate, octyl salicylate, benzyl salicylate, butylphenyl salicylate, homomentyl salicylic acid and benzyl cinnamic acid. , Paramethoxy cinnamic acid-2-ethoxyethyl, paramethoxy cinnamic acid octyl, diparamethoxy cinnamic acid mono-2-ethylhexaneglyceryl, paramethoxy cinnamic acid isopropyl, diisopropyl diisopropyl cinnamic acid ester mixture, wuro Canonic acid, ethyl urokanoate, hydroxymethoxybenzophenone, hydroxymethoxybenzophenonesulfonic acid and salts thereof, dihydroxymethoxybenzophenone, dihydroxymethoxybenzophenone sodium sulfonate, dihydroxybenzophenone , Tetrahydroxybenzophenone, 4- tert -butyl-4'-methoxydibenzoylmethane, 2,4,6-trianilino- p- (carbo-2'-ethylhexyl-1'-oxy) -1 , 3,5-triazine, 2- (2-hi And the like can be mentioned hydroxy-5-methylphenyl) benzotriazole.
살균제로서는 히노키티올, 트리클로산, 트리클로로히드록시디페닐에테르, 크로르헥시딘글루콘산염, 페녹시에탄올, 레조르신, 이소프로필메틸페놀, 아줄렌, 살리칠산, 진크필리티온, 염화벤잘코늄, 감광소 301 호, 모노니트로과이어콜나트륨, 운데시렌산 등을 들 수 있다.Examples of fungicides are hinokithiol, triclosan, trichlorohydroxydiphenyl ether, chlorhexidine gluconate, phenoxyethanol, resorcin, isopropylmethylphenol, azulene, salicylic acid, zincitionone, benzalkonium chloride, and photosensitive Sodium No. 301, sodium mononitroguicol, undecylenic acid, and the like.
산화 방지제로서는 부틸히드록시아니솔, 갈릭산프로필, 엘리소르빈산 등을 들 수 있다.Examples of the antioxidant include butylhydroxyanisole, propyl gallic acid, and erythorbic acid.
pH 조정제로서는 시트르산, 시트르산나트륨, 말산, 말산나트륨, 프말산, 프말산나트륨, 숙신산, 숙신산나트륨, 수산화나트륨, 인산일수소나트륨 등을 들 수 있다.Examples of the pH adjuster include citric acid, sodium citrate, malic acid, sodium malate, fmaric acid, sodium pmarate, succinic acid, sodium succinate, sodium hydroxide, sodium dihydrogen phosphate, and the like.
알코올로서는 세틸알코올 등의 고급 알코올을 들 수 있다.Examples of the alcohol include higher alcohols such as cetyl alcohol.
또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01-5% 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01-3% 중량 백분율로 배합된다.Moreover, the compounding component which may be added other than this is not limited to this, Moreover, Although all said components can be mix | blended within the range which does not impair the objective and effect of this invention, Preferably it is 0.01-5% weight percentage with respect to a total weight, More preferably 0.01-3% by weight.
본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다.The cosmetic of the present invention may take the form of a solution, an emulsion, a viscous mixture, or the like.
본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 흑마늘 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.Ingredients included in the cosmetic composition of the present invention may include components commonly used in cosmetic compositions in addition to black garlic extract as an active ingredient, for example, conventional auxiliary agents such as stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavorings. And carriers.
본 발명의 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액 등을 들 수 있다.The cosmetic composition for skin whitening and wrinkle improvement of the present invention may be prepared in any formulation commonly prepared in the art, for example, emulsion, cream, lotion, pack, foundation, lotion, essence and the like.
구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 헤어로션, 헤어토닉, 헤어에센스, 헤어샴푸, 헤어린스, 헤어트리트먼트, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.Specifically, the cosmetic composition of the present invention skin lotion, skin softener, skin toner, astringent, lotion, milk lotion, moisturizing lotion, nutrition lotion, massage cream, nutrition cream, moisturizing cream, hand cream, foundation, essence, nutrition essence, Formulations of packs, soaps, cleansing foams, cleansing lotions, cleansing creams, hair lotions, hair tonics, hair essences, hair shampoos, hair rinses, hair treatments, body lotions and body cleansers.
본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a paste, cream or gel, animal carriers, vegetable fibers, waxes, paraffins, starches, tracantes, cellulose derivatives, polyethylene glycols, silicones, bentonites, silicas, talc or zinc oxide, etc. may be used as carrier components. Can be.
본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.In the case where the formulation of the present invention is a powder or a spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate or polyamide powder may be used as a carrier component. Especially, in the case of a spray, a mixture of chlorofluorohydrocarbons, propane / Propane or dimethyl ether.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.When the formulation of the present invention is a solution or emulsion, a solvent, solvating or emulsifying agent is used as the carrier component, such as water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl alcohol, benzyl benzoate, propylene glycol, 1 Fatty acid esters of, 3-butylglycol oil, glycerol aliphatic ester, polyethylene glycol or sorbitan.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.When the dosage form of the present invention is a suspension, liquid carrier diluents such as water, ethanol or propylene glycol, suspending agents such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystalline Cellulose, aluminum metahydroxy, bentonite, agar or tracant and the like can be used.
본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.When the formulation of the present invention is a surfactant-containing cleansing, the carrier component is an aliphatic alcohol sulfate, an aliphatic alcohol ether sulfate, a sulfosuccinic acid monoester, an isethionate, an imidazolinium derivative, a methyltaurate, a sarcosinate, a fatty acid amide. Ether sulfates, alkylamidobetaines, aliphatic alcohols, fatty acid glycerides, fatty acid diethanolamides, vegetable oils, linolin derivatives or ethoxylated glycerol fatty acid esters and the like can be used.
본 발명의 흑마늘 추출물은 멜라닌 생성 억제 효과, 티로시나아제 활성 억제 효과 및 멜라닌 생성관련 유전자의 발현 억제 효과를 나타내므로 피부 미백 및 주름 개선용 화장료 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.The black garlic extract of the present invention has a melanin production inhibitory effect, tyrosinase activity inhibitory effect and melanin production-related gene expression inhibitory effect can be usefully used as a cosmetic composition for skin whitening and wrinkle improvement.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예, 참고예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 이에 의해 한정되는 것은 아니다.Below, The present invention will be described in detail. However, the following Examples, Reference Examples and Experimental Examples are merely illustrative of the present invention, but the content of the present invention is not limited thereto.
실시예 1. 흑마늘 추출물의 제조Example 1 Preparation of Black Garlic Extract
1-1. 흑마늘 열수 추출물의 제조1-1. Preparation of Black Garlic Hot Water Extract
경상남도 남해군에서 재배된 국내산 생마늘을 남해 농협에서 구입하여 이 중 생마늘 500g을 40 ∼ 90℃에서 약 280 ∼ 320시간 열풍으로 숙성하고, 숙성한 마을을 약 38 ∼ 42시간 동안 자연 건조한 후, 다시 20 ∼ 30℃의 열풍으로 약 30 ∼ 50시간 숙성하여 흑마늘 347.5g을 수득하여, 수득한 흑마늘 중 100g을 동결 건조기(Clean-Vac 24T, 바이오트론)로 동결 건조하여 분쇄한 후, 시료 중량의 약 7배 부피의 증류수로 실온에서 10시간 동안 추출하고, 감압 여과하여 얻은 1차 추출액 및 잔사를 각각 분리하였다. 여기에서 수득한 잔사에 추출 시작 당시의 흑마늘 시 료중량의 약 6배 부피의 증류수로 실온에서 다시 3시간 동안 추출한 후, 감압여과하고 상기의 1차 추출액과 합하여 농축 및 동결건조하여 본 발명의 흑마늘 열수 추출물 58.5 g을 수득하였다. Domestic fresh garlic grown in Namhae-gun, Gyeongsangnam-do is purchased from the Namhae Agricultural Cooperatives. Among them, 500g of fresh garlic is aged at 40-90 ℃ for about 280-320 hours with a hot air. Aged for about 30 to 50 hours with hot air at 30 ° C. to obtain 347.5 g of black garlic, and 100 g of the obtained black garlic was lyophilized by a freeze dryer (Clean-Vac 24T, Biotron) and crushed, and then about 7 times the weight of the sample. The mixture was extracted with a volume of distilled water at room temperature for 10 hours, and the primary extract obtained by filtration under reduced pressure and the residue were separated. The residue obtained here was extracted for 3 hours at room temperature with distilled water having a volume of about 6 times the weight of black garlic sample at the start of extraction, filtered under reduced pressure, concentrated and lyophilized with the primary extract, and then dried. 58.5 g of hot water extract were obtained.
1-2. 흑마늘 메탄올 추출물의 제조1-2. Preparation of Black Garlic Methanol Extract
경상남도 남해군에서 재배된 국내산 생마늘을 남해 농협에서 구입하여 이 중 생마늘 500g을 40 ∼ 90℃에서 280 ∼ 320시간 열풍으로 숙성하고, 이를 38 ∼ 42시간 동안 자연 건조한 후, 다시 20 ∼ 30℃의 열풍으로 30 ∼ 50시간 숙성하여 흑마늘 347.5g을 수득하여, 수득한 흑마늘 중 100g을 동결 건조기(Clean-Vac 24T, 바이오트론)로 동결 건조하여 분쇄한 후, 시료 중량의 약 7배 부피의 100% 메탄올로 실온에서 10시간 동안 추출하고, 감압 여과하여 얻은 1차 추출액 및 잔사를 각각 분리하였다. 여기에서 수득한 잔사에 추출 시작 당시의 흑마늘 시료중량의 약 6배 부피의 100% 메탄올로 실온에서 다시 3시간 동안 추출한 후, 감압여과하고 상기의 1차 추출액과 합하여 농축 및 동결건조하여 본 발명의 흑마늘 메탄올 추출물 30.9 g을 수득하였다. Domestic fresh garlic grown in Namhae-gun, Gyeongsangnam-do is purchased from Namhae Agricultural Cooperatives, 500g of which is aged at 40-90 ℃ for 280-320 hours, naturally dried for 38-42 hours, and then again with hot air of 20-30 ℃. After aging for 30 to 50 hours, 347.5 g of black garlic was obtained. 100 g of the obtained black garlic was lyophilized by a freeze dryer (Clean-Vac 24T, Biotron), and then pulverized. Extraction was performed at room temperature for 10 hours, and the primary extract obtained by filtration under reduced pressure and the residue were separated. The residue obtained here was extracted with 100% methanol in a volume of about 6 times the weight of black garlic sample at the beginning of extraction for 3 hours at room temperature, filtered under reduced pressure, combined with the primary extract, and concentrated and lyophilized. 30.9 g of black garlic methanol extract was obtained.
1-3. 흑마늘 에탄올 추출물의 제조1-3. Preparation of Black Garlic Ethanol Extract
경상남도 남해군에서 재배된 국내산 생마늘을 남해 농협에서 구입하여 이 중 생마늘 500g을 40 ∼ 90℃에서 280 ∼ 320시간 열풍으로 숙성하고, 이를 38 ∼ 42시간 동안 자연 건조한 후, 다시 20 ∼ 30℃의 열풍으로 30 ∼ 50시간 숙성하여 흑 마늘 347.5g을 수득하여, 수득한 흑마늘 중 100g을 동결 건조기(Clean-Vac 24T, 바이오트론)로 동결 건조하여 분쇄한 후, 시료 중량의 약 7배 부피의 100% 에탄올로 실온에서 10시간 동안 추출하고, 감압 여과하여 얻은 1차 추출액 및 잔사를 각각 분리하였다. 여기에서 수득한 잔사에 추출 시작 당시의 흑마늘 시료중량의 약 6배 부피의 100% 에탄올로 실온에서 다시 3시간 동안 추출한 후, 감압여과하고 상기의 1차 추출액과 합하여 농축 및 동결건조하여 본 발명의 흑마늘 에탄올 추출물 47.7 g을 수득하였다. Domestic fresh garlic grown in Namhae-gun, Gyeongsangnam-do is purchased from Namhae Agricultural Cooperatives, 500g of which is aged at 40-90 ℃ for 280-320 hours, naturally dried for 38-42 hours, and then again with hot air of 20-30 ℃. After aging for 30 to 50 hours, 347.5 g of black garlic was obtained. 100 g of the obtained black garlic was freeze-dried by a freeze dryer (Clean-Vac 24T, Biotron), and then pulverized, and then 100% ethanol in a volume of about 7 times the weight of the sample. The mixture was extracted at room temperature for 10 hours, and the primary extract obtained by filtration under reduced pressure and the residue were separated. The residue obtained here was extracted with 100% ethanol in a volume of about 6 times the weight of black garlic at the beginning of extraction for 3 hours at room temperature, filtered under reduced pressure, combined with the primary extract, and concentrated and lyophilized. 47.7 g of black garlic ethanol extract was obtained.
비교예 1. 생마늘 추출물의 제조 Comparative Example 1. Preparation of Raw Garlic Extract
1-1. 생마늘 열수 추출물의 제조1-1. Preparation of Raw Garlic Hot Water Extract
경상남도 남해군에서 재배된 국내산 생마늘을 남해 농협에서 구입하여 이 중 생마늘 100g을 동결 건조기(Clean-Vac 24T, 바이오트론)로 동결건조하여 분쇄한 후, 시료 중량의 약 7배 부피의 증류수로 실온에서 10시간 동안 추출하고, 감압 여과하여 얻은 1차 추출액 및 잔사를 각각 분리하였다. 여기에서 수득한 잔사에 추출 시작 당시의 생마늘 시료중량의 약 6배 부피의 증류수로 실온에서 다시 3시간 동안 추출한 후, 감압여과하고 상기의 1차 추출액과 합하여 농축 및 동결건조하여 생마늘 열수 추출물 26.9 g을 수득하였다.Domestic fresh garlic grown in Namhae-gun, Gyeongsangnam-do is purchased from Namhae Agricultural Cooperatives, 100g of which is lyophilized by freeze dryer (Clean-Vac 24T, Biotron), and then pulverized with distilled water of about 7 times the weight of the sample at room temperature. Extraction was performed for hours, and the primary extract obtained by filtration under reduced pressure and the residue were separated. The residue thus obtained was extracted with distilled water having a volume of about 6 times the weight of fresh garlic sample at the beginning of extraction for 3 hours at room temperature, filtered under reduced pressure, concentrated and lyophilized with the primary extract, and 26.9 g of fresh garlic hot water extract. Obtained.
1-2. 생마늘 메탄올 추출물의 제조1-2. Preparation of Raw Garlic Methanol Extract
경상남도 남해군에서 재배된 국내산 생마늘을 남해 농협에서 구입하여 이 중 생마늘 100g을 동결 건조기(Clean-Vac 24T, 바이오트론)로 동결건조하여 분쇄한 후, 시료 중량의 약 7배 부피의 100% 메탄올로 실온에서 10시간 동안 추출하고, 감압 여과하여 얻은 1차 추출액 및 잔사를 분리하였다. 여기에서 수득한 잔사에 추출 시작 당시의 생마늘 시료중량의 약 6배 부피의 100% 메탄올로 실온에서 다시 3시간 동안 추출한 후, 감압여과하고 상기의 1차 추출액과 합하여 농축 및 동결건조하여 생마늘 메탄올 추출물 6.5 g을 수득하였다.Domestic fresh garlic grown in Namhae-gun, Gyeongsangnam-do is purchased from Namhae Agricultural Cooperatives, 100g of which is lyophilized by a freeze dryer (Clean-Vac 24T, Biotron), and then pulverized. Extracted for 10 hours, and the primary extract obtained by filtration under reduced pressure and the residue was separated. The residue obtained here was extracted with 100% methanol in a volume of about 6 times the weight of fresh garlic sample at the beginning of extraction at room temperature for 3 hours, filtered under reduced pressure, concentrated and lyophilized with the primary extract, and extracted with fresh garlic. 6.5 g were obtained.
1-3. 생마늘 에탄올 추출물의 제조1-3. Preparation of Raw Garlic Ethanol Extract
경상남도 남해군에서 재배된 국내산 생마늘을 남해 농협에서 구입하여 이 중 생마늘 100g을 동결 건조기(Clean-Vac 24T, 바이오트론)로 동결건조하여 분쇄한 후, 시료 중량의 약 7배 부피의 100% 에탄올로 실온에서 10시간 동안 추출하고, 감압 여과하여 얻은 1차 추출액 및 잔사를 분리하였다. 여기에서 수득한 잔사에 추출 시작 당시의 생마늘 시료중량의 약 6배 부피의 100% 에탄올로 실온에서 다시 3시간 동안 추출한 후, 감압여과하고 상기의 1차 추출액과 합하여 농축 및 동결건조하여 생마늘 에탄올 추출물 40.7 g을 수득하였다.Domestic fresh garlic grown in Namhae-gun, Gyeongsangnam-do is purchased from Namhae Agricultural Cooperatives, 100g of which is lyophilized by freeze dryer (Clean-Vac 24T, Biotron), and then pulverized. Extracted for 10 hours, and the primary extract obtained by filtration under reduced pressure and the residue was separated. The residue obtained here was extracted with 100% ethanol, about 6 times the volume of raw garlic sample at the beginning of extraction, at room temperature for 3 hours, filtered under reduced pressure, concentrated and lyophilized with the primary extract, and then extracted with fresh garlic ethanol. 40.7 g were obtained.
참고예 1. 시약 및 재료Reference Example 1. Reagents and Materials
1-1. 실험 준비1-1. Experiment preparation
본 실험에 사용된 B16F10 세포는 한국 세포주 은행에서 구입하여, DMEM 배지(Gibco BRL, Grand Island, NY, USA)에 10% fetal bovine serum(FBS, Sigma), 1% 의 페니실린/스트렙토마이신을 첨가하여 기본배지로 사용하였으며, CO2 세포 배양기 (37℃, 5% CO2)에서 배양한 후 실험에 이용하였다. 약 24시간 주기로 DMEM 배지를 교환하였다.B16F10 cells used in this experiment were purchased from the Bank of Korea Cell Line, and added 10% fetal bovine serum (FBS, Sigma) and 1% penicillin / streptomycin to DMEM medium (Gibco BRL, Grand Island, NY, USA). It was used as a basic medium, and used in experiments after culturing in a CO 2 cell incubator (37 ℃, 5% CO 2 ). The DMEM medium was changed at about 24 hour intervals.
세포배양에 사용된 배지 및 시약은 따로 표시가 없으면 Invitrogen Gibco BRL 사(Grand Island, NY, USA) 제품으로 사용하였으며, 기타 α-MSH (synthetic α-melanocyte stimulating hormone), L-DOPA (dopamine hydrochloride), 코직 산 (kojic acid)등의 시약은 시그마(Sigma)사로부터 구입하여 사용 하였다.Media and reagents used for cell culture were used by Invitrogen Gibco BRL (Grand Island, NY, USA) unless otherwise indicated, and other α-MSH (synthetic α-melanocyte stimulating hormone), L-DOPA (dopamine hydrochloride) Reagents such as kojic acid were purchased from Sigma.
1-2. 기기1-2. device
세포실험을 위하여 CO2 세포 배양기, 무균실험대 (Clean bench, 수공양행), 역상현미경 (Inverted Microscope, 올림푸스, 일본), 원심분리기 (한일원심분리), 헤마토사이토미터, 셀 카운터, 초저온냉동고 (Deep freezer), 질소저장탱크, 반응수조 (water bath), 펌프 (pump)등을 사용하였고, 전기영동기(Electro phoresis apparatus, 바이오라드), pH 미터기 (ATI Orion model 370, 미국) 등을 사용하였으며, 실험에 사용한 정제수는 밀리-큐 시스템 (mili-Q system, Milipore Co., 미국)으로 제조하였다. For cell experiments, CO 2 cell incubator, clean bench (hand-held), inverted microscope (Inverted Microscope, Olympus, Japan), centrifuge (Korea-Japan centrifuge), hematocytometer, cell counter, cryogenic freezer (Deep) freezer), nitrogen storage tank, water bath, pump, etc., electrophoresis apparatus (Biorad), pH meter (ATI Orion model 370, USA), etc. Purified water used in the was prepared in a mili-Q system (Milipore Co., USA).
실험예 1. 세포독성 측정Experimental Example 1. Measurement of cytotoxicity
상기 실시예 1의 흑마늘 추출물의 세포 독성률을 알아보기 위해 모스만의 방 법(Mosmann T., Rapid colorimetric assay for the cellular growth and survival:application to proliferation and cytotoxic assay, J. Immun., Methods 65, pp.55, 1983)을 변형하여 하기와 같이 실험을 수행하였다.In order to determine the cytotoxicity rate of the black garlic extract of Example 1 (Mosmann T., Rapid colorimetric assay for the cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxic assay, J. Immun., Methods 65 , pp.55, 1983) was modified to perform the experiment as follows.
세포배양용 48 웰 플레이트(well plate)에 B16F10 희석세포를 5 × 104개/200㎕/웰 농도로 분주하여 약 6 ~ 8 시간 동안 안정화시킨 다음, 50%(w/v)농도의 생마늘 추출물 및 흑마늘 추출물 희석 시료를 배지에 적절히 희석하여 각 실험 농도별((메탄올의 경우만 0.06, 0.12 추가) 0.25, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0 %)로 처리하여 24 시간 배양하였다. 이 후 PBS로 두 번 수세한 다음 웰 당 200㎕의 1:100 희석 MTS 용액 (Celltiter 96R AQueous one solution reagent, Promega)을 넣고 은박지로 포장한 후 1시간 이상 배양한 후 마이크로플레이트 리더기(microplate reader)로 490nm에서 흡광도를 측정하였다. 또한, 양성 대조군으로 코직 산(kojic acid)을 사용하였고, 측정은 세 번 이상 하였으며, 그에 대한 평균값과 표준 오차 및 그림을 시그마 플롯(Sigma Plot) 프로그램을 이용하여 측정하였다. 48-well plate for cell culture (well plate) B16F10 cells diluted to 5 × 10 4 gae / 200㎕ / well were seeded in a concentration to stabilize for about 6 to 8 hours and then, 50% (w / v) concentration of fresh garlic extract in And black garlic extract dilution sample was appropriately diluted in the medium and treated with each experiment concentration (addition of 0.06, 0.12 only for methanol) 0.25, 0.5, 1.0, 1.5, 2.0, 2.5, 3.0% and incubated for 24 hours. After washing twice with PBS, 200 μl of 1: 100 dilute MTS solution (Celltiter 96 R AQueous one solution reagent, Promega) was added to the wells, packaged in silver foil, incubated for at least 1 hour, and then microplate reader. The absorbance was measured at 490 nm. In addition, kojic acid was used as a positive control, and the measurement was performed three times or more, and the average value, the standard error, and the picture were measured using the Sigma Plot program.
실험결과, 도 1에서 나타낸 바와 같이 상기 실시예 1-1 및 실시예 1-3의 흑마늘 열수 추출물, 흑마늘 에탄올 추출물에서는 0.5% (500 μg/ml)까지, 상기 실시예 1-2의 흑마늘 메탄올 추출물에서는 0.25%(250 μg/ml)까지 세포 증식에 큰 영향이 없는 것으로 나타났으나, 상기 비교예 1-2의 생마늘 메탄올 추출물(비교군)의 경우 흑마늘 메탄올 추출물에 비해 상대적으로 세포독성이 매우 강한 것으로 나타났다(도 1 참조).Experimental results, as shown in Figure 1 black garlic hot water extract of Example 1-1 and Example 1-3, black garlic ethanol extract to 0.5% (500 μg / ml), black garlic methanol extract of Example 1-2 Was found to have no significant effect on cell proliferation up to 0.25% (250 μg / ml), but the fresh garlic methanol extract of Comparative Example 1-2 (comparative group) was more cytotoxic than black garlic methanol extract. (See FIG. 1).
실험예 2. 멜라닌 생성 억제 효과 측정Experimental Example 2. Measurement of melanin production inhibitory effect
상기 실시예 1의 흑마늘 추출물의 멜라닌 생성 억제 효과를 알아보기 위해 호세이 등의 방법(Hosoi J, et al., Regulation of melanin synthesis of B16 mouse melanoma cells by α-25-dehydroxyvitamin D3 and retinoic acid, Cancer Res. 45, pp.1474-78, 1985)을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다. In order to determine the melanin production inhibitory effect of the black garlic extract of Example 1 (Hosoi J, et al., Regulation of melanin synthesis of B16 mouse melanoma cells by α-25-dehydroxyvitamin D3 and retinoic acid, Cancer Res 45 , pp. 1474-78, 1985).
세포 배양용 6-웰 플레이트에 1.0 ×105/2ml/well 농도로 분주하고 24시간이 지난 뒤 멜라닌(melanin) 생성세포로 분화를 촉진하기 위하여 α-MSH(100 nM)와 멜라닌 생성 억제 시약으로 알려진 코직 산 (kojic acid; 0.5 mM 또는 1 mM(도 3에서는 0.5 mM 사용)을 멜라닌 생성 억제 양성대조군 시약으로 하여 각각의 흑마늘 추출물 및 생마늘 추출물 시료 0.3%(w/v)(생마늘 메탄올 추출물은 0.03%(w/v))를 처리하여 2일 마다 배지를 갈아주며 5일간 처리 배양하였다. 최종 배양 후 배양액을 모아 배양배지에 분비된 멜라닌 농도 측정에 사용하였으며, 동시에 수집된 세포에 1N NaOH를 첨가하여 60℃에서 약 1시간 동안 반응시켜 멜라닌을 용출시킨 후 세포내 멜라닌의 양을 405nm 흡광도로 측정하였다. Cells were cultured in 6-well plates for culture at 1.0 × 10 5 / 2ml / well and after 24 hours, with α-MSH (100 nM) and melanogenesis inhibitors to promote differentiation into melanocytes. 0.3% (w / v) of black garlic extract and fresh garlic extract samples (0.03 mg of fresh garlic extract) using known kojic acid (0.5 mM or 1 mM (0.5 mM in FIG. 3)) as melanogenesis inhibitory positive control reagent. % (w / v)) was treated and cultured for 5 days while the medium was changed every 2 days After the final culture, the culture solution was collected and used for measuring melanin concentration secreted into the culture medium, and at the same time, 1N NaOH was added to the collected cells. After reacting at 60 ° C. for about 1 hour to elute melanin, the amount of intracellular melanin was measured by 405 nm absorbance.
실험결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 세포외(배지) 멜라닌 생성 억제 효과는 양성대조군으로 사용된 코직 산(kojic acid) 1 mM (도 2-A, 2-C), 0.5 mM (도 2-B)에서 농도 의존적으로 멜라닌 분비 억제효과가 나타났으며, 상기 실시예 1의 흑마늘 추출물이 상기 비교예 1의 생마늘 추출물들에 비해 약 2배 이상 탁월한 멜라닌 분비 억제 효과를 보였다(도 2 참조).As a result, as shown in Figure 2, the inhibitory effect of the extracellular (medium) melanin production was 1 mM kojic acid (Fig. 2-A, 2-C), 0.5 mM (Fig. 2-) used as a positive control In B) concentration-dependent melanin secretion inhibitory effect was shown, the black garlic extract of Example 1 showed melanin secretion inhibitory effect about two times more than the raw garlic extract of Comparative Example 1 (see Fig. 2).
또한, 도 3에 나타난 바와 같이, 세포내 멜라닌 생성 억제 효과는 상기 도 2의 결과인 세포외(배지) 멜라닌 생성 억제효과의 결과와 매우 유사하게 나타났다. 이러한 결과는 흑마늘 추출물이 세포내에서의 멜라닌 생성을 억제하여 분비 멜라닌의 농도를 억제함을 나타낸다(도 3 참조). In addition, as shown in Figure 3, the inhibitory effect of intracellular melanin production appeared very similar to the results of the extracellular (medium) melanin production inhibitory effect of the result of FIG. These results indicate that black garlic extract inhibits melanin production in cells to inhibit the concentration of secreted melanin (see FIG. 3).
실험예 3. 티로시나아제(Tyrosinase) 활성 측정Experimental Example 3. Measurement of Tyrosinase Activity
상기 세포내 멜라닌 생합성의 주요 경로의 가장 주요한 효소인 티로시나아제(Tyrosinase) 활성 효과를 알아보기 위해 마티네즈의 방법(Matinez Esparza M., et al., Mechanisms and melanogenesis inhibition by tumor necrosis factor-α in B16/F10 mouse melanoma cells, Eur. J. Biochem, 225, pp.139, 1998)을 이용하여 하기와 같이 실험을 수행하였다. Matinez's method (Matinez Esparza M., et al., Mechanisms and melanogenesis inhibition by tumor necrosis factor-α in B16) to determine the effect of tyrosinase activity, the most important enzyme of the main pathway of the intracellular melanin biosynthesis / F10 mouse melanoma cells, Eur. J. Biochem, 225 , pp. 139, 1998).
세포내 티로시나아제 활성에 미치는 영향을 알아보기 위하여 시료 처리 2일째의 효소활성을 조사하였다. 세포 배양용 12-웰 플레이트에 세포를 5 × 104/ml/well을 분주하고, 24시간 후 α-MSH(100 nM)와 코직 산(kojic acid; 0.5 mM)를 포함하여 50%(w/v)농도의 생마늘 추출물 및 흑마늘 추출물 희석 시료를 배지에 적절히 희석하여 각 실험 농도별(열수 추출물: 0.5%, 에탄올 추출물: 0.1, 0.2, 0.3, 0.4%, 메탄올 추출물: 0.001, 0.003, 0.01, 0.03%)로 첨가 하였다. 시료 처리 2일 경과 후 media를 제거하고 PBS로 수세한 후 세포 용해 완충액(cell lysis buffer; 50mM sodium phosphate buffer, containing 1% triton X-100, 0.2mM PMSF) 250㎕씩 가하고, 동결-해동법으로 세포를 용해시켰다. 용해된 세포를 모은 후 4℃에서 13,000xg로 30분간 원심분리 한 후, 상층액을 취하였다. L-DOPA 용액(2mg/ml) 40㎕씩을 96-well 마이크로플레이트의 웰에 분주한 후 세포 용해 상층액 160㎕을 가하여 잘 섞은 다음 37℃에서 반응 시키며 490nm에서 10분 간격으로 70분까지 측정하였다. 이 중 가장 높은 변화 값을 보이는 30분 또는 40분 시간대의 측정값을 효소활성 계산에 사용하였다. 이 때 사용된 세포 용해액 내의 단백질 정량은 BCA법 (SmartTM BCA Protein Assay kit, iNtRON)으로 하였으며, 표준 단백질을 이용 562nm에서의 흡광도를 측정하여 단백질 농도 표준곡선과 농도공식을 구한 후 구하였다.In order to investigate the effect on intracellular tyrosinase activity, the enzyme activity was examined on the second day of sample treatment. Dispense 5 × 10 4 / ml / well of cells into a 12-well plate for cell culture, and after 24 hours, 50% (w /) containing α-MSH (100 nM) and kojic acid (0.5 mM). v) Diluted samples of fresh garlic extract and black garlic extract in the concentration are appropriately diluted in the medium, and for each experiment concentration (hot water extract: 0.5%, ethanol extract: 0.1, 0.2, 0.3, 0.4%, methanol extract: 0.001, 0.003, 0.01, 0.03 %). After 2 days of sample treatment, the media was removed and washed with PBS, followed by adding 250 µl of cell lysis buffer (50 mM sodium phosphate buffer, containing 1% triton X-100, 0.2 mM PMSF) and freezing-thawing. Was dissolved. After collecting the lysed cells and centrifuged for 30 minutes at 13,000xg at 4 ℃, the supernatant was taken. 40 μL of L-DOPA solution (2 mg / ml) was dispensed into the wells of a 96-well microplate, and 160 μl of the cell lysis supernatant was mixed well, followed by reaction at 37 ° C., and measured at 70 minutes at 10 minutes at 490 nm. . The 30 minute or 40 minute time period with the highest change was used to calculate the enzyme activity. At this time, the protein quantification in the cell lysate was carried out by BCA method (Smart TM BCA Protein Assay kit, iNtRON), and the standard concentration was calculated by measuring the absorbance at 562 nm using a standard protein.
실험결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 흑마늘 추출물 및 코직 산의 세포내 티로시나아제 저해활성은 각각 56%, 66%로 나타나 대조군(0.5 mM 코직 산)보다 흑마늘 추출물이 탁월한 세포내 티로시나아제 활성 억제 효과를 보였다(도 4 참조). As shown in FIG. 4, the intracellular tyrosinase inhibitory activity of the black garlic extract and kojic acid was 56% and 66%, respectively, and the intracellular tyrosinase activity of the black garlic extract was superior to that of the control (0.5 mM kojic acid). It showed an inhibitory effect (see FIG. 4).
실험예 4. 웨스턴 블롯 분석에 의한 멜라닌 생성관련 유전자 발현에 대한 영향Experimental Example 4. Effect on gene expression related to melanin production by Western blot analysis
실시예 1-3의 흑마늘 추출물의 세포내 멜라닌 합성경로에서 가장 중요한 티로시나아제 활성과 함께 멜라닌 생성관련 유전자인 티로시나아제 및 TRP-1 유전자 발현에 대한 영향을 알아보기 위해 하기와 같이 실험을 수행하였다. Experiments were performed as follows to determine the effects of tyrosinase and TRP-1 genes related to melanin production along with the most important tyrosinase activity in the intracellular melanin synthesis pathway of the black garlic extracts of Examples 1-3. It was.
세포 배양용 6-well 플레이트에 B16F10 세포를 1.0 × 105/2ml/well 농도로 분주하고, 37℃, 5% CO2 조건하에서 24시간 배양 후 α-MSH(100 nM)와 코직 산(kojic acid; 0.5 mM)를 포함하여 상기 실시예 1-3의 흑마늘 에탄올 추출물과 비교군으로 상기 비교예 1-3의 생마늘 에탄올 추출물시료를 각각 0.3% 처리하였다. 처리 후 2일과 3일째 세포를 용해 완충액(lysis buffer; Pro-Prep, iNtRON)을 첨가하여 수확한 후, 4℃에서 13,000×g로 약 30분간 원심분리 하여 얻은 상층액을 BCA Protein Assay kit(SmartTM BCA Protein Assay kit, iNtRON)를 이용하여 단백질 농도를 정량하였다. SDS (sodium dodecyl sulphate)-폴리아크릴아미드 겔(polyacrylamide gel) 전기영동을 위하여 20 ~ 50㎍의 단백질을 취하고 동량의 램나이 샘플 용액(Laemmli sample buffer, Bio-Rad)을 섞어서 열변성 단백질 샘플(sample)을 만들어 전기영동으로 분리하였다. 분리된 단백질을 PVDF 막(membrane) (Bio-Rad)으로 일렉트로블롯팅(electroblotting)법에 의해 전이시킨 후, 5% 알부민(albumin)을 함유한 PBS-T (0.1% Tween 20 in PBS)에 담구어 4℃에서 하룻밤(over night) 동안 반응시켜 비특이적인 단백질들에 대한 블록킹(blocking)을 실시하였다. 준비된 막(membrane)에 1차 항체로 TRP-1(tyrosinase related protein-1, Santa Cruz; 2일째)와 TYR(tyrosinase, Santa Cruz; 3일째)를 처리하여 실온에서 2시간 이상 반응시킨 다음 PBS-T로 세척하고 처리된 1차 항체에 맞는 2차 항체로 bovine anti-goat IgG-AP(Santa Crutz)를 사용하여 실온에서 1시간 정도 반응시켰다. 다시 PBS-T로 세척한 후 BCIP/NBT 발색제 (Promega)로 반응시켜 나타나는 밴드를 관찰하였다. In a 6-well plate for cell culture, B16F10 cells were dispensed at a concentration of 1.0 × 10 5 / 2ml / well, and cultured for 24 hours at 37 ° C. and 5% CO 2, followed by α-MSH (100 nM) and kojic acid. 0.5 mM) was treated with the black garlic ethanol extract of Example 1-3 and 0.3% of the raw garlic ethanol extract samples of Comparative Example 1-3 in the comparative group. Cells were harvested by adding lysis buffer (Pro-Prep, iNtRON) at 2 and 3 days after treatment, and then the supernatant obtained by centrifugation at 13,000 × g for 30 minutes at 4 ° C was subjected to BCA Protein Assay kit (Smart). Protein concentration was quantified using TM BCA Protein Assay kit (iNtRON). SDS (sodium dodecyl sulphate) -polyacrylamide gel (20%) 50 ㎍ protein for electrophoresis and the same amount of Laymmli sample buffer (Bio-Rad) was mixed and heat-denatured protein samples (sample ) Was separated by electrophoresis. The isolated protein was transferred to the PVDF membrane (Bio-Rad) by electroblotting, and then immersed in PBS-T (0.1
실험 결과, 도 5에 나타난 바와 같이, 멜라닌 세포 분화 촉진제인 a-MSH에 의해 그 발현이 촉진됨과 양성 대조군인 코직 산에 의해 발현이 억제됨을 뚜렷이 보여 주었다. 흑마늘 에탄올 추출물은 티로시나아제의 발현을 현저하게 억제시킴을 보임으로써, 흑마늘 추출물이 멜라닌 생합성에 중요한 역할을 수행하는 티로시나아제의 발현에 크게 영향을 미쳐 세포의 멜라닌 생성을 억제할 수 있음을 보여 주었다. 반면에 TRP-1의 발현은 추출물간에 거의 차이가 없는 것으로 보아 서로 다른 기전으로 작용하는 것으로 사료된다(도 5 참조).As shown in FIG. 5, it was clearly shown that a-MSH, which is a melanocyte differentiation promoter, promotes its expression, and that expression is inhibited by the positive control kojic acid. Black garlic ethanol extract showed a significant inhibition of the expression of tyrosinase, showing that black garlic extract can significantly inhibit the expression of tyrosinase, which plays an important role in melanin biosynthesis, thereby inhibiting melanogenesis in cells. gave. On the other hand, the expression of TRP-1 seems to be almost no difference between the extracts, it seems to act as a different mechanism (see Figure 5).
하기에 상기 조성물의 제형예를 설명하나, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.Examples of the formulation of the composition are described below, which is intended to explain in detail only and not intended to limit the present invention.
제형예 1. 유연 화장수(스킨)Formulation Example 1 Flexible Lotion (Skin)
함량(w/w %)Formulation Example 1
Content (w / w%)
제형예 2. 로션(에멀젼)Formulation Example 2. Lotion (Emulsion)
함량(w/w %)Formulation Example 2
Content (w / w%)
제형예 3. 에센스Formulation Example 3. Essence
함량(w/w %)Formulation Example 3
Content (w / w%)
제형예 4. 세안제(클렌징 폼)Formulation Example 4 Facial Cleanser (Cleansing Foam)
함량(w/w %)Formulation Example 4
Content (w / w%)
도 1은 흑마늘 추출물의 세포 생존률을 용매(열수, 메탄올, 에탄올)별로 비교하여 나타낸 도이고,1 is a diagram showing the cell viability of the black garlic extract by comparing the solvent (hot water, methanol, ethanol),
도 2는 B16F10세포의 배지내의 멜라닌 생성 억제 효과를 흑마늘 추출물의 용매(열수, 메탄올, 에탄올)별로 비교하여 나타낸 도이며,2 is a diagram showing the melanin production inhibitory effect in the medium of B16F10 cells by comparing the solvent (hot water, methanol, ethanol) of black garlic extract,
도 3은 B16F10세포의 멜라닌 생성 억제 효과를 흑마늘 추출물의 용매(열수, 메탄올, 에탄올)별로 비교하여 나타낸 도이고,3 is a diagram showing the melanin production inhibitory effect of B16F10 cells by comparing the solvent (hot water, methanol, ethanol) of black garlic extract,
도 4는 B16F10세포의 티로시나아제(tyrosinase) 억제효과를 흑마늘 추출물의 용매(열수, 메탄올, 에탄올)별로 비교하여 나타낸 도이며,4 is a diagram showing the tyrosinase inhibitory effect of B16F10 cells by comparing the solvents (hot water, methanol, ethanol) of black garlic extract,
도 5는 B16F10세포의 멜라닌 생성관련 유전자(TRP-1, 티로시나아제) 발현에 미치는 흑마늘 에탄올 추출물의 영향을 웨스턴 블롯 분석으로 비교하여 나타낸 도이다.5 is a diagram showing the effect of black garlic ethanol extract on the melanogenesis-related gene (TRP-1, tyrosinase) expression of B16F10 cells by Western blot analysis.
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