KR20100020511A - 폐로의 약물 전달을 위한 조성물, 이의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 개시 내용은 표면 활성제와 폐 활성 약물의 접합체(conjugate)를 포함하는, 흡입용으로 제형화된 약물 조성물을 제공한다. 상기 표면 활성제는 사람 폐포/가스 계면에 친화성을 가지며, 포유류 폐 계면활성제 또는 그의 모방체의 적어도 일부를 포함한다. 또한, 본 개시 내용은 폐 질환으로 고생하거나 고생할 위험이 있는 대상을 치료하는 방법으로서, 폐 치료용 약물과 표면 활성제를 포함하는 접합체를 폐에서 약물 효과를 유도하기에 유효한 양으로 흡입에 의해 상기 대상에게 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다.

Description

폐로의 약물 전달을 위한 조성물, 이의 용도 {COMPOSITIONS FOR DELIVERING MEDICAMENTS INTO THE LUNGS, USES THEREOF}
<관련 출원>
본 출원은 2007년 6월 5일자로 출원된 미국 특허 출원 제60/942,026호의 우선권을 주장하며, 이는 전체적으로 본 명세서에 참조로 포함된다.
<배경>
만성 폐쇄성 폐 질환(chronic obstructive pulmonary disease, COPD), 만성 기관지염 및 폐기종을 포함한 폐 장애에서는, 폐의 안과 밖에서 공기 유동의 만성 폐쇄가 있다. 이들 장애에서 발증하는 폐쇄는 흔히 영구적이며, 시간이 지남에 따라 진행된다. 호흡 기능의 급성 악화인 증오(exacerbation)는 증가된 이환율 및 사망률을 초래한다.
지난 수십년에 걸쳐, COPD와 같은 만성 폐 장애의 치료에 대한 연구는 사람 호중구 엘라스타아제(human neutrophil elastase, HNE)의 억제제를 확인하는 데 초점을 맞추어 왔다. HNE는 구조 단백질인 피브로넥틴, 콜라겐 및 엘라스틴을 포함한 다수의 단백질을 분해시킬 수 있는 프로테아제이다. 이상하게 발현될 경우, HNE는 체내에서 가장 파괴적인 효소 중 하나이다. HNE는 조직 파괴 및 염증과 관련되어 있으며, COPD, 낭성 섬유증 및 급성 호흡 곤란 증후군(acute respiratory distress syndrome, ARDS)을 포함한 다수의 폐 질환뿐만 아니라 기타 신체 질환에도 관여되어 있다. 그러나, HNE 억제제의 개발은 어려웠으며, 수십년의 연구에도 불구하고, 단지 하나의 HNE 치료제만이 현재 일본에서만 사용 승인을 받아서 출시되어 있다.
HNE 억제제 및 폐 치료용으로 고안된 기타 약물의 개발은 전신 치료에 초점을 맞추어 왔다. 그러한 접근과 관련된 주요 장애물은, 약물이 경구, 비경구 또는 흡입에 의해 전달되든지 간에, 폐에서의 의미있는 체류 시간을 달성하는 것이다. 따라서, 효과적인 폐 치료제에 대한 만족되어 있지 않은 요구가 여전히 남아 있다.
<개요>
본 개시 내용은 폐로의 약물 전달을 위한 방법 및 조성물을 제공한다. 지금, 폐 질환의 치료와 관련된 핵심 문제는 폐에서의 활성 약물 분자들의 충분한 체류 시간을 얻는 데 있어서의 어려움이라는 것이 이해되어 있다. 폐는 외래 물질을 청소함에 있어 매우 능숙하여, 원하는 약물 효과가 달성되기도 전에 활성 약물 분자들이 폐로부터 청소될 수 있게 된다.
폐 계면활성제는 폐 내의 제2형 폐포세포에 의해 분비되어 폐포 내부의 표면 장력을 감소시키고, 이에 따라 호기 동안 폐포 허탈(alveolar collapse)이 방지된다. 지질과 단백질의 복합체인 폐 계면활성제는 폐포 표면에 걸쳐 퍼져 있어 표면 장력을 낮추며, 장기간 폐에서 유지된다. 따라서, 활성 약물 분자를 계면활성제의 지질 또는 단백질에 공유 결합시킴으로써, 폐에서의 활성 약물 분자들의 체류 시간을 증가시킬 수 있다. 계면활성제의 지질 또는 단백질에 공유 결합된 활성 약물 분자들을 투여하는 것은 폐에서의 작용의 증가된 지속시간을 제공하고, 그 결과, 실질적으로 더 적은 용량 및 더 우수한 환자의 순응, 전신 독성의 감소를 가져오는 활성 약물 분자의 폐로의 국소화, 그리고 강화된 효능으로 인한 상당히 더 높은 국소화된 폐 농도를 가져온다.
일 태양에서, 본 발명은 사람 폐포/가스 계면에 친화성을 갖는 표면 활성제를 포함하는, 흡입용으로 제형화된 약물 조성물을 제공한다. 상기 표면 활성제는 사람에게 실질적으로 비-면역원성인 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그 모방체의 적어도 일부분을 포함한다.
표면 활성제는, 폐/가스 계면에 접근 가능한 세포외 또는 세포-표면 표적에 결합하는 폐 활성 약물에 공유 결합된다. 세포외 또는 세포-표면 표적은, 예를 들어 엘라스타아제, TNF 수용체, EGF 수용체, 아드레날린성 수용체 또는 P2X 퓨린성 수용체일 수 있다. 소정의 실시 형태에서, 세포외 또는 세포 표면 표적에 결합하는, 폐 활성 약물에 공유 결합된 표면 활성제는 결핵, 천식 및 폐암을 포함하지만, 이로 한정되지 않는 폐 질환으로 고생하는 대상에게 투여된다. 예를 들어, 결핵(TB)의 병인체는 파괴를 피하고, 대식세포에서 아폽토시스를 하향-조절함으로써 세포내 증식을 달성한다. TB를 나르는 대식세포는 P2X 퓨린성 수용체를 과잉발현시킨다(Placido et al., Cell Immunol. 244:10-8 (2006)). ATP와 같은 P2X 작용제는 이들 대식세포에서 아폽토시스를 유도하고, 따라서 기생 TB를 살해할 것이다(Pfeiffer et al., J. Leukoc. Biol. 75:1173 (2004)). ATP의 벤조일 유도체는 P2X 수용체의 강력한 세포외 작용제이며, 장시간 지속되는 TB 치료제로서 표면 활성제에 공유 결합되어 흡입에 의해 전달될 수 있다. β2-아드레날린성 수용체에 대한 작용제는 천식 치료용으로 정착된 기관지확장제이다(Anderson, Clin. Rev. Allergy Immunol. 31:119-30 (2006)). 그러나, β2-아드레날린성 수용체는 편재적으로(ubiquitously) 발현되며, 따라서 반복된 투여는 해로운 전신 부작용을 가질 가능성이 높을 것이다. β2-아드레날린성 수용체 작용제를 표면 활성 펩타이드에 공유 결합시키는 것은 당해 활성제를 폐로 본질적으로 고립시킬 것이며, 따라서 잠재적인 전신 독성을 피하거나 감소시키게 된다. 표피 성장 인자 수용체(epidermal growth factor receptor, EGFR)는 항암 표적으로서의 유효성이 입증되어 왔으며(Carney, Expert Rev. Mol. Diagn. 7:309-19 (2007)), 헤르셉틴과 같은 제품이 유방암을 치료하기 위해 출시되어 있다. 매트릭스 메탈로프로테아제는 세포 표면 탈락(shedding) 기전에 의해 EGFR의 내인성 작용제를 방출하는 것으로 밝혀져 왔다(Horiuchi et al., Mol. Biol. Cell 18:176-188 (2007)). EGFR의 활성화를 억제하는 것은 비소세포(nonsmall cell) 폐암을 위한 잠재력 있는 치료이다(Y.H. Ling et al., Molecular Pharmacology 72:248-58 (2007)). MMP의 소분자 억제제(들)를 흡입에 의해 전달될 폐 표면 활성 펩타이드에 부착시킴으로써, EGFR은 폐에서 불활성화될 수 있다. 폐기종, 결핵, 천식 및 비소세포 폐암을 포함한 이러한 예들은 치료학적 분자들을, 흡입 전달에 의해 폐에서 우선적으로 체재하는 제제에 공유 결합하는 것에 대한 일반성을 입증한다.
다른 실시 형태에서, 표면 활성제는 폐 활성 약물 및 폐 세포에 들어가는 세포막 투과성 수송 분자에 공유 결합된다. 세포 내부에서 작용하는 표면 활성제는 레티노이드, 서비빈(survivin) 억제제 및 카스파아제 촉진제를 포함하지만, 이로 한정되지 않는다.
다른 실시 형태에서, 표면 활성제는 사람 폐 계면활성제 또는 사람이 아닌 포유류 폐 계면활성제 또는 그의 일부분을 포함한다. 예시적인 사람이 아닌 포유류 폐 계면활성제는 소, 돼지 또는 양의 폐 계면활성제 또는 그의 일부분을 포함한다. 상기 표면 활성제는 사람 또는 사람이 아닌 포유류의 폐로부터 수집된 포유류 폐 계면활성제를 포함하거나, 이로부터 유래될 수 있다.
다른 실시 형태에서, 표면 활성제는 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드, 그의 대립 변이체 또는 그의 합성 모방체의 적어도 일부분을 포함한다. 상기 표면 활성제는 SP-A, SP-B, SP-C, SP-D와 같은 천연 계면활성제 폴리펩타이드, 이들의 일부분 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. 상기 표면 활성제는 SP-A, SP-B, SP-C, SP-D 또는 그의 일부분의 혼합물을 포함할 수 있다. 예시적인 펩타이드는 천연 계면활성제 폴리펩타이드의 적어도 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50개의 아미노산 절편을 포함한다. 상기 표면 활성제는 SP-B의 일부분을 포함할 수 있다. 예시적인 SP-B 폴리펩타이드는 SP-B의 적어도 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50개의 아미노산 절편을 포함한다. SP-B 펩타이드는 아미노-말단 펩타이드일 수도 있고 카르복시-말단 펩타이드일 수도 있다. 예시적인 SP-B 펩타이드는 25-아미노산 아미노 말단 펩타이드일 수 있다.
다른 실시 형태에서, 표면 활성제는 합성적으로 생성된 펩타이드를 포함한다. 펩타이드모방체(peptidomimetic)는 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드의 적어도 하나의 결실 또는 아미노산 치환 변이체를 포함할 수 있다. 펩타이드모방체는 사람 폐 계면활성제 폴리펩타이드의 적어도 하나의 결실 또는 아미노산 치환 변이체를 포함할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 표면 활성제는 재조합적으로 생성되는 계면활성제 폴리펩타이드를 포함할 수 있다. SP-A, SP-B, SP-C, SP-D와 같은 재조합 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 일부분은 원핵생물 또는 진핵생물의 발현 시스템에서 SP-A, SP-B, SP-C, SP-D 또는 그의 일부분을 암호화하는 DNA를 발현시킴으로써 생성될 수 있다. 재조합 계면활성제 폴리펩타이드는 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드와 동일하거나 상이할 수 있다. 재조합 폴리펩타이드는 포유류, 바람직하게는 사람의 폐 계면활성제 폴리펩타이드의 적어도 하나의 결실 또는 아미노산 치환 변이체를 포함할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 표면 활성제는 계면활성제 폴리펩타이드 및 지질 둘 모두를 포함한다.
표면 활성제는 폐 활성 약물에 공유 결합된다. 폐 활성 약물은 계면활성제 단백질 또는 지질에 공유 결합될 수 있다. 폐 활성 약물은 계면활성제 폴리펩타이드의 아미노- 또는 카르복시-말단 아미노산 또는 내부 아미노산에 공유 결합될 수 있다. 소정의 실시 형태에서, 하나 초과의 폐 활성 약물이 표면 활성제에 결합된다. 다른 실시 형태에서, 단일 폐 활성 약물이 표면 활성제에 결합되고, 표면 활성제에 결합된 적어도 하나의 다른 폐 활성 약물과 혼합된다.
일 실시 형태에서, 폐 활성 약물 분자는 아미노산 또는 모방체 링커(linker), 예를 들어 글리신 링커에 의해 신장되어, 자동 펩타이드 합성에 사용될 수 있는 비천연 아미노산을 생성한다. 이어서, 신장된 분자(즉, 약물 + 아미노산 링커)는 아미노 기 또는 하이드록시 기를 통하여 표면 활성제에 부착될 수 있다.
폐 활성 약물은 폐/가스 계면에 접근 가능한 세포외 또는 세포-표면에 결합된 표적에 결합한다. 폐 활성 약물은 엘라스타아제 억제제, 코르티코스테로이드, 기관지확장제, 항생제 또는 화학치료학적 제제일 수 있다. 소정의 실시 형태에서, 하나 초과의 폐 활성 약물이 표면 활성제에 공유 결합되고, 조합된 상태로 투여될 수 있다. 하나 초과의 폐 활성 약물이 표면 활성제에 공유 결합될 경우, 당해 약물은 동일한 약물, 동일한 약물 부류의 구성원 또는 상이한 약물 부류의 구성원일 수 있다.
약물 조성물은 흡입 장치에 의해 사람 환자의 폐에 전달된다. 예시적인 흡입 장치는 고정 용량식(fixed dose) 흡입기, 정량식(metered dose) 흡입기 및 네불라이저를 포함한다.
다른 태양에서, 본 발명은 폐 질환으로 고생하거나 폐 질환의 위험이 있는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 사람 폐포/가스 계면에의 친화성을 특징으로 하는 표면 활성제에 공유 결합된 폐 활성 약물을 포함하는 접합체(conjugate)를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 상기 표면 활성제는 사람에게 실질적으로 비-면역원성인 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 모방체의 적어도 일부분을 포함한다. 상기 접합체는 폐에서 약물 효과를 유도하기에 유효한 양으로 흡입에 의해 대상에게 투여된다.
투여 방법은 폐 활성 약물이 이를 필요로 하는 대상의 폐에 향하도록 한다. 상기 투여 방법은 비접합된 약물의 흡입 투여에 비하여 상기 약물의 전신 생체이용률을 감소시킨다. 상기 투여 방법은 비접합된 약물의 흡입 투여에 비하여 폐에서의 상기 약물의 체류 시간을 증가시킨다.
일 실시 형태에서, 폐 활성 약물-표면 활성제 접합체의 투여는 비접합된 약물의 투여에 비하여 투여 빈도(dosing frequency)를 감소시킨다. 투여 단계는 날마다, 2일마다, 3일마다, 4일마다, 5일마다 또는 매주마다 1회 반복될 수 있다. 투여 단계는 흡입기, 에어로졸, 추진제를 함유하거나 함유하지 않은 미립자, 정량식 투여(metered dosage) 또는 네불라이저를 사용하여 수행될 수 있다.
소정의 실시 형태에서, 치료를 필요로 하는 대상은 폐 염증 또는 폐 질환으로 고생하고 있거나, 폐 질환으로 고생할 위험이 있다. 치료를 필요로 하는 대상은 폐기종, 만성 기관지염, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 천식, 호흡 곤란 장애(RDS), 폐렴, 결핵 또는 기타 세균 감염, 낭성 섬유증, 및/또는 폐암으로 고생하고 있을 수 있다.
<상세한 설명>
계면활성제 단백질
표면 활성제는 사람에게 실질적으로 비-면역원성인 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드의 적어도 일부분을 포함한다. 상기 폴리펩타이드 또는 그의 일부분은 포유류 폐 계면활성제 부분(moiety) 또는 그의 합성 모방체일 수 있다. 예시적인 계면활성제 폴리펩타이드는 동물-유래, 재조합, 합성, 동족체 또는 펩타이드 모방체일 수 있다.
천연 폐 계면활성제 단백질은 단독 또는 지질과 조합된, SP-A, SP-B, SP-C, SP-D 또는 그의 일부분을 포함한다(미국 특허 제5, 302, 581호). 일부 실시 형태에서, 표면 활성제는 전장(full length) 계면활성제 폴리펩타이드를 포함한다. 다른 실시 형태에서, 표면 활성제는 계면활성제 폴리펩타이드의 일부분을 포함한다. 예를 들어, 사람 SP-B는 79개의 아미노산 잔기 폴리펩타이드이지만, SP-B의 N-말단 25개의 아미노산 잔기는 펩타이드 전체에 필적할 만한 치료학적 효과를 갖는다(Kurutz and Lee, Biochem., 41, 9627-36 (2002)). 천연 폐 계면활성제 단백질의 예시적인 펩타이드는 적어도 약 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45 또는 50개의 아미노산 길이일 수 있다. 사람 SP-B의 예시적인 펩타이드가 표 1에 나타나 있다.
일 실시 형태에서, 표면 활성제는 부검시 사람 시체의 폐 세척(lavage)에 의해 획득되거나, 동의 성인(consenting adult)의 폐 세척에 의해 획득된 사람 폐 계면활성제를 포함한다.
소정의 실시 형태에서, 표면 활성제는 사람이 아닌 포유류의 폐 계면활성제 또는 그의 일부분을 포함한다. 예시적인 사람이 아닌 포유류의 계면활성제는 당업계에 익히 공지된 기술을 이용하여 사람이 아닌 포유류의 폐로부터 수집될 수 있다. 예를 들어, 돼지 계면활성제는 문헌[Bernhard et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 17:41-50 (1997)] (본 명세서에 참조로 포함됨)에 기술된 바와 같이, 식염수를 사용한 폐의 기관지폐포 세척(bronchoalveolar lavage, BAL)액을 수집하여, 신생 돼지 및/또는 성체 돼지로부터 획득될 수 있다. 수집된 BAL액을 원심분리하여 세포를 제거하고, 이어서 무세포(cell-free) BAL액을 추가로 원심분리하여 비가공(raw) 계면활성제 펠릿을 생성한다. 양 계면활성제는 문헌[Brackenbury et al., Am. J. Respir Cir. Care Med. 163:1135-1142 (2001)] (본 명세서에 참조로 포함됨)에 기술된 바와 같이, 성체 양의 폐 전체의 세척액으로부터 획득될 수 있다. 수집된 폐포 세척액을 원심분리하여 세포 부스러기(cellular debris)를 제거하고, 이어서 추가로 원심분리하여, 계면활성제 응집(aggregate) 펠릿에 대응하는 펠릿을 획득한다. 소 계면활성제는 문헌[Panda et al., J Colloid Interface Sci., 311:551-5 (2007)] (본 명세서에 참조로 포함됨)에 기술된 바와 같이, 성체 젖소의 폐 세척액으로부터 또한 획득될 수 있다. 인지질, 천연 지질, SP-B 및 SP-C 폴리펩타이드를 함유하는 천연 소 계면활성제 추출물인 알베오팩트(Alveofact)® 또한 사용될 수 있다.
사람 폐 계면활성제로부터 유래된 단백질 및 폴리펩타이드 또는 사람 폐 계면활성제와 유사한 특성을 가진 단백질 및 폴리펩타이드가 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, SP-B는 문헌[Beers et al., Am. J. Physiol Lung Cell Mol. Physiol. 262:L773-L778 (1992)] (본 명세서에 참고로 포함됨)에 기술된 바와 같이, 차등 유기 추출(differential organic extraction), 컬럼 크로마토그래피 및/또는 분취 SDS-PAGE를 이용하여 소 계면활성제로부터 단리될 수 있다.
포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 일부분이 또한 재조합적으로 생성될 수 있다. 재조합 SP-A, SP-B, SP-C, SP-D 또는 그의 일부분이 각종 공지된 기술을 이용하여 적합한 원핵생물 또는 진핵생물 발현 시스템에서 SP-A, SP-B, SP-C, SP-D 또는 그의 일부분을 암호화하는 DNA 서열을 발현시킴으로써 획득 가능하다. 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 일부분을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하도록 용이하게 적합화된 재조합 벡터들, 재조합 백터들을 함유하는 숙주 세포들 및 그러한 벡터들 및 숙주 세포들을 제조하는 방법과, 이외에도 재조합 기술에 의한 인코딩된 폴리펩타이드의 생성에 있어서의 그들의 사용은 익히 공지되어 있다. 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 일부분을 인코딩하는 핵산은, 적어도 하나의 조절 서열에 작동 가능하게 연결되는 계면활성제 폴리펩타이드를 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 발현 벡터에서 제공될 수 있다. 발현 벡터의 설계는 형질전환될 숙주 세포의 선택 및/또는 발현되기를 원하는 단백질의 유형과 같은 인자들에 달려 있을 수 있음이 이해되어야 한다. 벡터 카피 수, 그 카피 수의 제어 능력, 및 벡터에 의해 인코딩된 임의의 다른 단백질(예를 들어, 항생제 마커(antibiotic marker))의 발현이 고려되어야 한다. 예를 들어, 융합 단백질 또는 폴리펩타이드를 포함한 단백질 또는 폴리펩타이드를 생성하기 위해서, 배양으로 증식된 세포에서 키나아제 및 포스파타아제 폴리펩타이드의 발현 및 과잉발현을 야기시키는 데 대상의 핵산이 사용될 수 있다.
계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 일부분을 발현하기 위해서, 숙주 세포들이 재조합 유전자로 형질감염될 수 있다. 숙주 세포는 임의의 원핵생물 또는 진핵생물 세포일 수 있다. 예를 들어, 폴리펩타이드는 세균성 세포, 예를 들어 E. 콜리(E. coli), 곤충 세포(바큘로바이러스), 효모 또는 포유류 세포에서 발현될 수 있다. 이러한 예들에서, 숙주 세포가 사람일 경우, 그것은 살아 있는 대상에서 일 수도 있고 아닐 수도 있다. 다른 적합한 숙주 세포가 당업자들에게 공지되어 있다. 추가적으로, 숙주 세포는 폴리펩타이드의 발현을 최적화하도록 하기 위해서, 숙주에서는 전형적으로는 발견되지 않는 tRNA 분자들로 보충될 수 있다. 폴리펩타이드의 발현을 최대화하는 데 적합한 다른 방법들이 당업자들에게 공지되어 있을 것이다.
폴리펩타이드를 생성하는 방법은 당업계에 익히 공지되어 있다. 예를 들어, 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 일부분을 인코딩하는 발현 벡터로 형질감염된 숙주 세포가 폴리펩타이드의 발현이 일어나게 하는 적절한 조건 하에서 배양될 수 있다. 폴리펩타이드는 세포들과 폴리펩타이드를 함유하는 배지의 혼합물로부터 분비되고 단리될 수 있다. 대안적으로, 폴리펩타이드는 세포질적으로(cytoplasmically) 그대로 유지될 수 있다. 이어서, 세포가 수집되고, 용해되고, 단백질이 세포 용해물로부터 단리된다.
세포 배양액은 숙주 세포들, 배지 및 기타 부산물을 포함한다. 세포 배양에 적합한 배지는 당업계에 익히 공지되어 있다. 폴리펩타이드는 단백질 정제용으로 당업계에 공지된 기술을 이용하여 세포 배양 배지, 숙주 세포들 또는 둘 모두로부터 단리될 수 있으며, 이러한 공지된 정제 기술에는 황산암모늄 또는 에탄올 침전, 산 추출, 음이온 또는 양이온 교환 크로마토그래피, 겔 여과 크로마토그래피, 인산셀룰로오스 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 친화성 크로마토그래피, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 렉틴 크로마토그래피, 한외여과, 전기영동, 본 발명의 폴리펩타이드의 특정 에피토프에 특이적인 항체에 의한 면역친화성 정제가 포함되며, 고성능 액체 크로마토그래피(“HPLC”)가 정제를 위해 채용된다. 따라서, 계면활성제 폴리펩타이드 전부 또는 선택된 일부분만을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열이 미생물 또는 진핵생물 세포 과정을 거쳐 단백질의 재조합 형태를 생성하는 데 사용될 수 있다. 이 서열을 폴리뉴클레오티드 작제물(construct), 예를 들어 발현 벡터 내로 연결시키고, 진핵생물(효모, 조류, 곤충 또는 포유류) 또는 원핵생물(세균성 세포들) 중 어느 하나의 숙주 내로 형질전환 또는 형질감염시키는 것이 표준 절차이다. 이와 유사한 절차나 이의 수정이 미생물 수단 또는 조직-배양 기술에 의한 본 발명의 재조합 폴리펩타이드를 제조하는 데 채용될 수 있다.
재조합 단백질의 생성을 위한 발현 매개체(vehicle)는 플라스미드 및 다른 벡터들을 포함한다. 예를 들어, 본 발명의 폴리펩타이드의 발현에 적합한 벡터들은 하기 유형들의 플라스미드를 포함한다: 원핵생물 세포, 예를 들어 E. 콜리에서의 발현을 위한, pBR322-유래 플라스미드, pEMBL-유래 플라스미드, pEX-유래 플라스미드, pBTac-유래 플라스미드 및 pUC-유래 플라스미드.
소정의 실시 형태에서, 포유류 발현 벡터들은 세균 내 벡터의 증식을 촉진시키기 위한 원핵생물 서열 및 진핵생물 세포에서 발현되는 하나 이상의 진핵생물 전사 단위 둘 모두를 함유한다. pcDNAI/amp, pcDNAI/neo, pRc/CMV, pSV2gpt, pSV2neo, pSV2-dhfr, pTk2, pRSVneo, pMSG, pSVT7, pko-neo 및 pHyg 유래 벡터들이 진핵생물 세포의 형질감염에 적합한 포유류 발현 벡터들의 예이다. 이들 벡터의 일부는 원핵생물 및 진핵생물 세포 둘 모두에서의 복제 및 약물 내성 선택을 촉진시키기 위해, 세균 플라스미드, 예를 들어 pBR322로부터의 서열을 사용하여 변형된다. 대안적으로, 소 파필로마 바이러스(bovine papilloma virus, BPV-I) 또는 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스(pHEBo, pREP-유래된 것 및 p205)와 같은 바이러스들의 유도체가 진핵생물 세포에서의 단백질의 일시적 발현에 사용될 수 있다. 플라스미드의 제조 및 숙주 유기체의 형질전환에 채용되는 각종 방법들이 당업계에 익히 공지되어 있다. 원핵생물 및 진핵생물 세포 둘 모두에 적합한 다른 발현 시스템뿐만 아니라 일반적 재조합 절차에 대해서는, 문헌[Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989) Chapters 16 and 17]을 참조한다. 일부 예에서는, 바큘로바이러스 발현 시스템을 사용하여 재조합 단백질을 발현하는 것이 바람직할 수 있다. 그러한 바큘로바이러스 발현 시스템의 예에는 pVL-유래 벡터(예를 들어, pVL1392, pVL1393 및 pVL941), pAcUW-유래 벡터(예를 들어, pAcUWl) 및 pBlueBac-유래 벡터(예를 들어, [베타]-gal 함유 pBlueBac III)가 포함된다.
다른 실시 형태에서, 단백질 생성은 시험관내 번역 시스템을 사용하여 달성될 수 있다. 시험관내 번역 시스템은, 일반적으로, RNA 분자의 단백질로의 번역에 필요한 적어도 최소한의 요소들을 함유하는 무세포 추출물인 번역 시스템이다. 시험관내 번역 시스템은 전형적으로, 적어도 리보솜, tRNA, 개시자 메티오닐-tRNAMet, 번역에 관여하는 단백질 또는 복합체(예를 들어, eIF2, eIF3, 캡-결합 단백질(cap-binding protein, CBP)을 포함하는 캡-결합(CB) 복합체) 및 진핵생물 개시 인자 4F(eIF4F)를 포함한다. 다양한 시험관내 번역 시스템이 당업계에 익히 공지되어 있으며, 구매 가능한 키트들을 포함한다. 시험관내 번역 시스템의 예에는 진핵생물 용해물, 예를 들어 토끼 세망적혈구 용해물, 토끼 난모세포 용해물, 사람 세포 용해물, 곤충 세포 용해물 및 맥아 추출물이 포함된다. 용해물은 프로메가 코포레이션(Promega Corp., 미국 위스콘신주 매디슨 소재); 스트라테이진(Stratagene, 미국 캘리포니아주 라졸라 소재); 아머샴(Amersham, 미국 일리노이즈주 알링톤 하이츠 소재); 및 GIBCO/BRL(미국 뉴욕주 그랜드 아일랜드 소재)과 같은 제조업체로부터 구매 가능하다. 시험관내 번역 시스템은 전형적으로 거대분자(예를 들어, 효소), 번역, 개시 및 신장 인자, 화학 시약 및 리보솜을 포함한다. 추가적으로, 시험관내 전사 시스템이 사용될 수 있다. 그러한 시스템들은 전형적으로 적어도 RNA 폴리머라아제 완전효소(holoenzyme), 리보뉴클레오티드 및 임의의 필요한 전사 개시, 신장 및 종결 인자들을 포함한다. 시험관내 전사 및 번역은 원-포트 반응(one-pot reaction)으로 결합되어 하나 이상의 단리된 DNA로부터 단백질을 생성할 수 있다. 폴리펩타이드의 카르복시 말단 절편의 발현이 요망될 경우(즉, 절단(truncation) 변이체), 발현되기를 원하는 서열을 함유하는 올리고뉴클레오티드 절편에 개시 코돈(ATG)을 첨가하는 것이 필요할 수 있다. N-말단 위치의 메티오닌이 효소 메티오닌 아미노펩티다아제(methionine aminopeptidase, MAP)의 사용에 의해 효소적으로 개열(cleave)될 수 있음이 당업계에 익히 공지되어 있다. MAP는 E. 콜리로부터 클로닝되어 왔으며(Ben- Bassat et al., (1987) J Bacteriol. 169:751-757), 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium) 및 그의 시험관내 활성이 재조합 단백질에서 입증되어 왔다(Miller et al., (1987) PNAS USA 54:2718-1722). 따라서, N-말단 메티오닌의 제거는, 원한다면, 그러한 재조합 폴리펩타이드를, MAP를 생성하는 숙주(예를 들어, E. 콜리 또는 CM89 또는 S. 세레비시아에(S. cerevisiae)에서 발현시킴으로써 생체내에서 달성되거나, 또는 정제된 MAP의 사용에 의해 시험관내에서(예를 들어, Miller et al의 절차) 달성될 수 있다.
본 발명의 폴리펩타이드는 또한 다양한 변화, 예를 들어 보존적 또는 비-보존적 중 어느 하나의 삽입, 결실 및 치환에 처해질 수 있으며, 여기서 그러한 변화들은 그들의 사용에 소정의 이점들을 제공한다. 보존적 치환은 하나의 아미노산 잔기가 생물학적으로 유사한 다른 잔기로 대체되는 것이다. 보존적 치환의 예에는, 하나의 소수성 잔기, 예를 들어 이소류신, 발린, 류신 또는 메티오닌을 다른 것 대신에 사용하거나, 하나의 극성 잔기를 다른 것, 예를 들어 아르기닌과 리신 사이, 글루탐산과 아스파르트산 사이 또는 글루타민과 아스파라긴 사이 등 대신에 사용하는 것이 포함된다. 용어 “보존적 치환”은 그러한 폴리펩타이드가 또한 필요한 결합 활성을 나타낸다는 조건에서, 비치환된 부모 아미노산 대신에 치환된 아미노산의 사용을 또한 포함한다.
본 발명의 폴리펩타이드는 또한, 전장 성숙 폴리펩타이드에 비하여, 절단될 수도 있다. 폴리펩타이드는 아미노-말단 또는 카르복시-말단 중 어느 하나 또는 둘 모두의 말단에서 절단될 수 있다. 폴리펩타이드는 적어도 하나의 아미노산이나, 적어도 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65 또는 70개의 아미노산까지 절단될 수 있다.
포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 일부분이 폴리펩타이드 기술분야의 숙련자들에게 공지된 기술에 의해 아미노산으로부터 합성될 수 있다. 이용 가능한 많은 기술에 대한 요약을, 고상 펩타이드 합성에 대해서는 문헌[J. M. Steward and J. D. Young, "Solid Phase Peptide Synthesis", W. H. Freeman Co., San Francisco, 1969] 및 문헌[J. Meienhofer, "Hormonal Proteins and Peptides", Vol. 2, p. 46, Academic Press (New York), 1983]에서, 그리고 고전적인 용액 합성에 대해서는 문헌[E. Schroder and K. Kubke, "The Peptides", Vol. 1, Academic Press (New York), 1965]에서 찾아볼 수 있다.
일반적으로, 이들 방법은 성장하는 펩타이드 사슬에의, 하나 이상의 아미노산 잔기들이나 적합하게 보호된 아미노산 잔기들의 축차 부가를 포함한다. 보통, 처음 아미노산 잔기의 아미노 기 또는 카르복시 기 중 어느 하나가 적합한, 선택적으로 제거 가능한 보호기에 의해 보호된다. 상이한, 선택적으로 제거 가능한 보호 기가 반응성 측기를 함유하는 아미노산(예를 들어, 리신)에 사용된다.
예로서 고상 합성을 이용하면, 보호되거나 유도체화된 아미노산이 그의 비보호된 카르복시 기 또는 아미노 기를 통하여 불활성 고체 지지체에 부착된다. 이어서, 아미노 기 또는 카르복시 기의 보호기가 선택적으로 제거되고, 적합하게 보호된 상보적인(아미노 또는 카르복시) 기를 갖는 서열 내의 다음 아미노산이 혼합되고, 고체 지지체에 이미 부착된 잔기와 아미드 결합을 형성하기에 적합한 조건 하에서 반응된다. 이어서, 아미노 기 또는 카르복시 기의 보호기가 새로 부가된 이 아미노산 잔기로부터 제거되고, (적합하게 보호된) 다음 아미노산이 부가되고, 등등이다. 원하는 아미노산들 모두가 적절한 서열로 결합된 후, 임의의 남아 있는 말단기 및 측기의 보호기들(및 임의의 고체 지지체)이 순차적으로 또는 동시발생적으로 제거되어, 최종 폴리펩타이드를 생성하게 된다. 이어서, 그 폴리펩타이드는 저급 지방족 알코올 중에 용해시킴으로써 세정되고, 건조된다. 건조된 계면활성제 폴리펩타이드는, 원한다면, 공지된 기술에 의해 추가로 정제될 수 있다.
소정의 실시 형태에서는, 통상적으로 사용되는 방법, 예를 들어 알파-아미노 기들의 t-BOC 또는 f-MOC 보호가 이용될 수 있다. 두 방법 모두 펩타이드의 C 말단으로부터 출발하여 각각의 단계에서 단일 아미노산이 부가되게 하는 단계적 합성을 포함한다(Coligan et al., Current Protocols in Immunology, Wiley Interscience, 1991, Unit 9 참조). 본 발명의 펩타이드는, 예를 들어 0.1 내지 1.0 mMol 아민/g 중합체를 함유하는 코폴리(스티렌-디비닐벤젠)을 사용하여, 문헌[Merrifield, J. Am. Chem. Soc. 85: 2149, 1962, and Stewart and Young, 1969, Solid Phase Peptides Synthesis, pp. 27-62]에 기술되어 있는, 익히 공지된 고상 펩타이드 합성 방법에 의해 합성될 수 있다. 화학 합성의 완료시, 이들 펩타이드는 탈보호되고, 0℃에서 약 1/4 내지 1시간 동안 액체 HF-10% 아니솔에 의한 처리에 의해 중합체로부터 개열될 수 있다. 시약의 증발 후, 1% 아세트산 용액에 의해 중합체로부터 펩타이드가 추출되고, 이어서 이것은 동결건조되어 조 물질(crude material)이 수득된다. 이것은 보통, 용매로서 5% 아세트산을 사용하는 세파덱스(Sephadex) G-15 상의 겔 여과와 같은 기술에 의해 정제될 수 있다. 이 컬럼의 적절한 분획들의 동결건조는 균질(homogeneous) 펩타이드 또는 펩타이드 유도체를 수득할 것이며, 이어서, 이들은 아미노산 분석, 박층 크로마토그래피, 고성능 액체 크로마토그래피, 자외선 흡수 분광법, 몰 선광도, 용해도와 같은 표준 기술에 의해 특성화되거나, 고상 에드만 분해에 의해 정량화될 수 있다.
일 실시 형태에서, 재조합 및/또는 합성 SP-B 펩타이드는 서열번호 5의 아미노산 2, 4, 6 및 9를 함유한다. 서열번호 5의 프롤린 2, 4 및 6과 트립토판 9는 단백질 기능을 위한 본질적인 구조 모티브를 구성할 수 있다. 일부 실시 형태에서, SP-B 펩타이드는 (서열번호 5에 비하여) 트립토판 9 아미노산을 제외한 임의의 아미노산 잔기에서 치환될 수 있다.
폐 계면활성제 폴리펩타이드 모방체는 일반적으로, 사람 계면활성제 단백질의 본질적인 속성을 모방하도록 조작된(engineered) 폴리펩타이드이다. 예시적인 모방체 펩타이드는 SP-B를 모방한다. SP-B 모방체의 일례는 서열 KLLLLKLLLLKLLLLKLLLLK(서열번호 94)을 포함하는 21개의 아미노산 잔기 펩타이드인 KL4이다. 이 SP-B 모방체 단백질은 루시낙탄트(Lucinactant) (서팍신(Surfaxin)®, 디스커버리 래버러토리즈(Discovery Laboratories))로도 알려져 있다.
계면활성제 지질
소정의 실시 형태에서, 본 발명에 사용하는 표면 활성제는, 생체내 천연 계면활성제 지질과 회합되는, 계면활성제 단백질, 그의 일부분 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 다른 실시 형태에서, 본 발명에 사용하기 위한 표면 활성제는 지질 또는 지질-단백질 복합체를 포함한다.
천연 포유류 폐 계면활성제는 인지질, 천연 인지질 및 단백질의 복합체이다. 본 명세서에 개시된 본 발명에 사용하는 표면 활성제는 하나 이상의 지질을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 표면 활성제는, 생성된 조성물이 계면활성제 활성을 갖는 한, 예를 들어 적게는 약 0.05중량%부터 100중량%까지의 지질을 포함한다. 중량%는 중량을 기준으로 한 조성물 중의 중량을 기준으로 한 화합물의 퍼센트를 의미한다. 따라서, 50중량% 지질을 갖는 조성물은, 예를 들어 총 조성물 100 그램 당 지질 50그램을 함유한다. 표면 활성제는 0.1 내지 50중량% 지질을 함유할 수 있지만, 더 높은 농도의 지질이 사용될 수 있다. 인지질 및 계면활성제 폴리펩타이드나 그의 일부분 둘 모두를 함유하는 표면 활성제는, 따라서, 0.1, 1, 10, 50, 80, 거의 100중량%까지의 지질 및 약 50, 20, 10, 1중량% 미만까지의 계면활성제 폴리펩타이드를 함유할 수 있다. 대안적으로, 표면 활성제는 지질 대 계면활성제 폴리펩타이드의 역비(reverse ratio)를 가질 수 있다.
본 명세서에 사용되는 “지질”이라는 용어는, 일반적으로 양친매성인 천연 발생이거나, 합성 또는 반-합성(즉, 개질된 천연) 화합물을 의미한다. 지질은 전형적으로 친수성 성분과 소수성 성분을 포함한다. 예시적인 지질에는 인지질, 지방산, 지방 알코올, 중성 지방, 포스파디드, 오일, 당지질, 지방족 알코올, 왁스, 테르펜 및 스테로이드가 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. “반-합성(또는 개질된 천연)”이라는 어구는 어떠한 방법으로 화학적으로 개질된 천연 화합물을 나타낸다.
인지질의 예에는 천연 및/또는 합성 인지질이 포함된다. 사용될 수 있는 인지질에는 포스파티딜콜린(포화 및 불포화), 포스파티딜글리세롤, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티딜세린, 포스파티드산, 포스파티딜이노시톨, 스핑고지질, 디아실글리세라이드, 카르디올리핀, 세라마이드 및 세레브로사이드 등이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 예시적인 인지질에는 디팔미토일 포스파티딜콜린(DPPC), 디라우릴 포스파티딜콜린(DLPC) (C12:0), 디미리스토일 포스파티딜콜린(DMPC) (C14:0), 디스테아로일 포스파티딜콜린(DSPC), 디피타노일 포스파티딜콜린, 노나데카노일 포스파티딜콜린, 아라키도일 포스파티딜콜린, 디올레오일 포스파티딜콜린(DOPC) (C18:1), 디팔미톨레오일 포스파티딜콜린(C16:1), 리노레오일 포스파티딜콜린(C18:2), 미리스토일 팔미토일 포스파티딜콜린(MPPC), 스테로일 미리스토일 포스파티딜콜린(SMPC), 스테로일 팔미토일 포스파티딜콜린(SPPC), 팔미토일올레오일 포스파티딜콜린(POPC), 팔미토일 팔미토올레오일 포스파티딜콜린(PPoPC), 디팔미토일 포스파티딜에탄올아민(DPPE), 팔미토일올레오일 포스파티딜에탄올아민(POPE), 디올레오일포스파티딜에탄올아민(DOPE), 디미리스토일 포스파티딜에탄올아민(DMPE), 디스테아로일 포스파티딜에탄올아민(DSPE), 디올레오일 포스파티딜글리세롤(DOPG), 팔미토일올레오일 포스파티딜글리세롤(POPG), 디팔미토일 포스파티딜글리세롤(DPPG), 디미리스토일 포스파티딜글리세롤(DMPG), 디스테아로일 포스파티딜글리세롤(DSPG), 디미리스토일포스파티딜세린(DMPS), 디스테아로일포스파티딜세린(DSPS), 팔미토일올레오일 포스파티딜세린(POPS), 대두 레시틴, 난황 레시틴, 스핑고미엘린, 포스파티딜이노시톨, 디포스파티딜글리세롤, 포스파티딜에탄올아민, 포스파티드산 및 달걀 포스파티딜콜린(EPC)이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
지방산 및 지방 알코올의 예에는 스테롤, 팔미트산, 세틸 알코올, 라우르산, 미리스트산, 스테아르산, 피탄산 및 디팔미트산 등이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 예시적인 지방산에는 팔미트산이 포함된다.
지방산 에스테르의 예에는 메틸 팔미테이트, 에틸 팔미테이트, 이소프로필 팔미테이트, 콜레스테릴 팔미테이트, 팔미틸 팔미테이트, 나트륨 팔미테이트, 칼륨 팔미테이트 및 트리팔미틴 등이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
계면활성제 폴리펩타이드와 계면활성제 지질은 정수압 상호작용(hydrostatic interaction)에 의해 상호작용한다. 하전된 아미노산은 지질의 극성 머리 기와 상호작용하고, 소수성 아미노산은 인지질 아실 측쇄와 상호작용한다. 예를 들어, SP-B 및 SP-C는 소수성 단백질이다. SP-B 및 SP-C 둘 모두 음이온성 지질(예를 들어, 포스파티딜글리세롤(PG)이며, DPPC는 아님)과 우선적으로 결합한다. SP-A 및 SP-D는 친수성 단백질이며, 글리세로인지질, 스핑고인지질, 스핑고당지질, 지질 A 및 리포글리칸을 포함한, 넓은 범위의 양친매성 지질들과 상호작용한다. SP-A는 DPPC와 결합한다. 예로서, SP-B 모방체인 KL4과 천연 계면활성제 중의 지질들 또는 표면 활성제 중에 포함된 지질들의 정수압 상호작용이 관찰된다. 예를 들어, KL4 펩타이드 중의 리신 잔기는 DPPC의 하전된 머리 기와 상호작용하고, 소수성 류신 잔기는 포스파티딜글리세롤의 인지질 아실 측쇄와 상호작용한다.
소정의 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 약물 조성물은 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 모방체의 일부분을 포함하는 표면 활성제를 포함하며, 지질 또는 지질의 혼합물을 추가로 포함하지 않는다. 단지 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 모방체의 일부분만을 포함하는 표면 활성제를 포함하는, 흡입에 의해 투여되는 약물 조성물은 정수압 상호작용을 통하여 폐 내의 천연 계면활성제와 상호작용할 수 있다. 예를 들어, 재조합 SP-B는 음이온성 인지질, 예를 들어 포스파티딜글리세롤과 결합함으로써 폐에서 천연 계면활성제와 상호작용할 수 있다.
다른 실시 형태에서, 본 명세서에 개시된 약물 조성물은 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 모방체의 일부분 및 적어도 하나의 지질 둘 모두를 포함하는 표면 활성제를 포함한다. 폐 내의 천연 계면활성제 내로의 폴리펩타이드 또는 그의 모방체 및 적어도 하나의 지질 둘 모두를 포함하는 약물 조성물의 흡수를 촉진시키기 위해서, 천연 계면활성제에서 발견되는 것을 모방한 인지질 단분자층이 사용될 수 있다. 지질 혼합물의 예에는, 예를 들어 7:3 w/w 비의 디팔미토일포스파티딜콜린/팔미토일올레오일포스파티딜글리세롤이 포함된다. 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드는 인지질 단분자층 내로 삽입될 수 있으며, 단백질/지질 혼합물이, 흡입 후에, 폐에서의 폐포/가스 계면에서 천연 계면활성제 내로 흡수될 수 있다.
폐 활성 약물
폐 활성 약물에는 엘라스타아제 억제제, 코르티코스테로이드, 기관지확장제, 항생제 및 화학치료학적 제제가 포함될 수 있지만, 이로 한정되지 않는다.
예시적인 엘라스타아제 억제제에는 도 17에 나타낸 화합물들이 포함된다. 다른 예시적인 엘라스타아제 억제제에는 문헌[Philip D. Edwards and Peter R. Bernstein in “Synthetic Inhibitors of Elastase”, Medicinal Research Reviews, Vol. 14, No. 2, 127-194 (1994)] (본 명세서에 참조로 포함됨)에 기술된 화합물이 포함된다. 둘 이상의 엘라스타아제 억제제가 본 발명의 표면 활성제에 결합되어, 조합된 상태로 투여될 수 있다. 대안적으로, 엘라스타아제 억제제는 표면 활성제에 결합되어, 표면 활성제에 결합된 제2 엘라스타아제 억제제와 조합된 상태로 투여될 수 있다.
폐로 전달될 수 있는 예시적인 코르티코스테로이드에는 알클로메타손, 알도스테론, 암시노나이드, 베클로메타손, 베타메타손, 부데소나이드, 시클레소나이드, 클로베타솔, 클로베타손, 클로코르톨론, 클로프레드놀, 코르티손, 코르티바졸, 데플라자코르트, 데옥시코르티코스테론, 데소나이드, 데속시메타손, 데속시코르톤, 덱사메타손, 디플로라손, 디플루코르톨론, 디플루프레드네이트, 플루클로롤론, 플루드로코르티손, 플루드록시코르티드, 플루메타손, 플루니솔리드, 플루오시놀론 아세토니드, 플루오시노니드, 플루오코르틴, 플루오코르톨론, 플루오로메톨론, 플루페롤론, 플루프레드니덴, 플루티카손, 포르모코르탈, 할시노니드, 할로메타손, 하이드로코르티손/코르티솔, 하이드로코르티손 아세포네이트, 하이드로코르티손 부테프레이트, 하이드로코르티손 부티레이트, 로테프레드놀, 메드리손, 메프레드니손, 메틸프레드니솔론, 메틸프레드니솔론 아세포네이트, 모메타손 푸로에이트, 파라메타손, 프레드니카르베이트, 프레드니손, 프레드니솔론, 프레드닐리덴, 리멕솔론, 틱소코르톨, 트리암시놀론 및 울로베타솔이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 둘 이상의 코르티코스테로이드가 본 발명의 표면 활성제에 결합되어, 조합된 상태로 투여될 수 있다. 대안적으로, 코르티코스테로이드는 표면 활성제에 결합되어, 표면 활성제에 결합된 제2 코르티코스테로이드와 조합된 상태로 투여될 수 있다.
폐 활성 약물은 기관지확장제, 예를 들어 단시간-작용성 β2-아드레날린성 수용체 작용제, 장시간-작용성 β2-아드레날린성 수용체 작용제, 단시간-작용성 항-콜린제 및 장시간-작용성 항-콜린제를 또한 포함할 수 있다. 비-제한적인 단시간-작용성 β2-아드레날린성 수용체 작용제에는 살부타몰 또는 알부테롤, 테르부탈린, 페노테롤, 페노테롤 하이드로브로마이드, 리미테롤, 레프로테롤, 피르부테롤, 이소프레날린, 오르시프레날린, 비톨테롤 및 브록사테롤이 포함된다. 비-제한적인 장시간-작용성 β2-아드레날린성 수용체 작용제에는 살메테롤, 살메테롤 크시나포에이트, 포르모테롤, 포르모테롤 푸마레이트, 클렌부테롤 및 프로카테롤이 포함된다. 비-제한적인 단시간-작용성 항-콜린제에는 이프라트로퓸, 이프라트로퓸 브로마이드, 옥시트로퓸 및 그의 염이 포함된다. 비-제한적인 장시간-작용성 항-콜린제에는 티오트로퓸 및 티오트로퓸 브로마이드 1수화물이 포함된다. 기타 기관지확장제에는 아미노필릴린, 이오르시프레날린, 옥소트리필린, 테르부탈린 설페이트 및 테오필린이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 둘 이상의 기관지확장제가 본 발명의 표면 활성제에 결합되어, 조합된 상태로 투여될 수 있다. 대안적으로, 기관지확장제는 표면 활성제에 결합되어, 표면 활성제에 결합된 제2 기관지확장제와 조합된 상태로 투여될 수 있다.
폐로 전달될 수 있는 예시적인 항생제에는 페니실린, 페니실린 및 베타-락타마아제 억제제, 세팔로스포린(I, II, III 및 IV세대), 마크롤리드 및 린코사민, 퀴놀론 및 플루오로퀴놀론, 카르베펨, 몬박탐, 아미노글리코사이드, 글리코펩타이드, 테라실린, 설폰아미드, 리팜핀, 옥사졸리돈, 스트렙토그라민, 설파노미드 및 기타 물질이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 둘 이상의 항생제가 본 발명의 표면 활성제에 결합되어, 조합된 상태로 투여될 수 있다. 대안적으로, 항생제는 표면 활성제에 결합되어, 표면 활성제에 결합된 제2 항생제와 조합된 상태로 투여될 수 있다.
예시적인 페니실린에는 아목시실린, 암피실린, 바캄피실린, 카르베니실린, 카르베니실린 인다닐, 메즐로실린, 피페라실린 및 티카르실린이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
예시적인 페니실린 및 베타-락타마아제 억제제에는 아목시실린-클라불라닉산, 암피실린-설박탐, 벤질페니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 페녹시메틸페니실린, 카르베니실린, 메티실린, 옥사실린, 페니실린 G(벤자틴, 칼륨, 프로카인), 페니실린 V, 프로피실린, 에피실린, 시클라실린, 피페라실린 플러스 타조박탐, 티카르실린 플러스 클라불라닉산 및 나피실린이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
예시적인 세팔로스포린(I세대)에는 세파드록실, 세파졸린, 세팔렉신, 세팔로틴, 세파피린 및 세프라딘이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 세팔로스포린(II세대)에는 세파클로르, 세파만돌, 세포이시드, 세포라니드, 세폭시틴, 세프프로질, 세프트메타졸, 세푸록심, 세푸록심 악세틸 및 로라카르베프가 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 세팔로스포린(III세대)에는 세프디니르, 세프티부텐, 세프디토렌, 세파타메트, 세포페라존, 세픽심, 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심 및 세프트리아옥손이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 세팔로스포린(IV세대)은 세페핌을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다.
예시적인 마크롤리드 및 린코사민에는 아지트로마이신, 클라리트로마이신, 클린다마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신, 린코마이신, 텔리트로마이신 및 트롤레안도마이신이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
모노박탐에는 아즈트레오남이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 카르베페넴에는 도리페넴, 이미페넴-실라스타틴 및 메로페넴이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
아미노글리코사이드에는 아미카신, 아미카신 설페이트, 젠타미신, 젠타미신 설페이트, 카나마이신, 메틸미신, 네오마이신, 네틸미신, 스트렙토마이신, 토브라마이신 및 파로마이신이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
글리코펩타이드에는 달바반신, 오리타반신, 텔라반신, 테이코플라닌 및 반코마이신이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
테트라실린에는 뎀클로실린, 독시시클린, 메타실린, 미노실린, 옥시테트라시클린, 테트라실린 및 클로레트라시클린이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
옥사졸리도논에는 리네졸리드가 포함되지만, 이로 한정되지 않는다. 스트렙토그라민에는 퀴노프리시틴 플러스 달포프리스틴이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
설포나미드에는 마페니드, 은 설파디아진, 설파세타미드, 설파디아진, 설파메톡사졸, 설파살진, 설파닐아미드, 설피속사졸, 트리메토프림-설파메톡사졸 및 설파메티졸이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
기타 항생제에는 박시트라신, 클로람페니칼, 콜리스테메테이트, 포스포마이신, 이소니아지드, 메테나민, 메트로니다졸, 무피로신, 니트로푸란토인, 니트로푸라존, 노보비오신, 폴리믹신 B, 스펙티노마이신, 트리메토프림, 콜리스틴, 사이클로세린, 카프레오마이신, 피라지나미드, 파라-아미노살리실산, 에리트로마이신 에틸석시네이트 플러스 설피속사졸 및 티제사이클린이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
폐로 전달될 수 있는 화학치료학적 약물에는 알킬화제, 항에스트로겐, 아클라루비신, 악티노마이신 D, 알데스류킨, 알렘투주마브, 알리트레티노인, 알로푸리놀, 알트레타민, 아미포스틴, 아나스트로졸, 아스파라기나아제, 벡사로텐, 비산트렌, 블레오마이신, 부설판, BCNU(카르무스틴), 칼루스테론, 카페시타빈, 카르보플라틴, 셀레콕시브, 클로람부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 사이클로포스파미드, 사이클로옥시게나아제-2 억제제, 시트라빈, CCNU(로무스틴), 다카르바진, 다우노루빈, 다우노마이신, 데닐류킨 디프티톡스, 덱스라족산, 디아지쿠온, 도세탁셀, 독소루비신, 에피루비신, 에포에틴 알파, 에소루비신, 에스트라무스틴, 에토포시드(VP-16), 엑세메스탄, 필그라스팀, 플록수리딘, 플루다라빈, 5-플루오로우라실, 풀베스트란트, 갈락티톨, 젬시타빈, 젬투주마브, 고세렐린 아세테이트, 하이드록시우레아, 이브리투모마브 티욱세탄, 이다루비신, 이포스파미드, 이마티니브 메실레이트, 인터페론 알파, 인터페론 감마, 이리니오테칸, 이로플라틴, 레트로졸, 류코보린, 레바미솔, 로니다민, 메그레스트롤 아세테이트, 멜팔란, 메르캅토푸린, 메스나, 메토트렉세이트, 메톡스살렌, 미토마이신 C, 미토탄, 미토크산트론, 미토구아존, 난드롤론 펜프로피오네이트, 노페투모마브, 질소 머스타드, 오프렐베킨, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파미드로네이트, 페가데마아제, 페가스파르가아제, 페그필그라스팀, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 포르피메르 나트륨, 프로카르바진, 프로제스틴, 프레드니무스틴, PCNU, 퀴나크린, 라스부리카아제, 리툭시마브, 사르그라모스팀, 스트렙토조신, 탈크, 타목시펜, 테모졸로미드, 테니포시드(VM-26), 테스토락톤, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸, 토레미펜, 토시투모마브, 트라스투주마브, 테르티노인, 우라실 머스타드, 발루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데스틴, 비노렐빈 및 졸레드로네이트가 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
둘 이상의 화학치료학적 제제는 본 발명의 표면 활성제에 결합되어, 조합된 상태로 투여될 수 있다. 대안적으로, 화학치료학적 제제는 표면 활성제에 결합되어, 표면 활성제에 결합된 제2 화학치료학적 제제와 조합된 상태로 투여될 수 있다. 예시적인 병용 치료에는 파클리탁셀과 카르보플라틴, 시스플라틴과 비노렐블린 타르트레이트, 시스플라틴과 에토포시드, 및 카르보플라틴과 에토포시드가 포함된다.
공유 결합
폐 활성 약물을 본 발명에 사용되는 표면 활성제에 공유 결합시키는 데 많은 전략이 이용될 수 있다. 일반적으로, 폐 활성 약물은 당해 약물의 본래의 부위(native site)를 보존하고, 폐/공기 계면에서 표면 활성제의 상당한 체류 시간을 유지하는 결합 또는 링커를 사용하여 표면 활성제에 공유 결합될 수 있다. 약물 분자를 표면 활성제에 공유 결합시키기 위한 링커를 생성하기 위해, 적어도 하나의 추가의 잔기가 본 명세서에 개시된 계면활성제 폴리펩타이드의 아미노- 또는 카르복시-말단이나 내부 아미노산 잔기에 부가될 수 있다. 예시적인 실시 형태에서, SP-B는 적어도 하나의 아미노산에 의해 신장되어, 자동 펩타이드 합성에 의한 비천연 아미노산을 생성한다. 약물은 아미노 기 또는 하이드록시 기를 통하여 아미노산, 예를 들어 글리신 잔기에 접합될 수 있다. 대표적인 공유 결합에는 에스테르, 아미드, 또는 우레아가 포함될 수 있을 것이다. (March, Advanced Organic Chemistry, 4th Ed., John Wiley & Sons, 1992.)
아미노산 잔기 링커는 통상적으로 적어도 하나의 잔기이며, 40개 이상의 잔기, 더욱 흔하게는 1 내지 10개의 잔기, 그리고 가장 흔하게는 1 내지 5개의 아미노산 잔기 길이일 수 있다. 상기 링커는 통상적으로 작은 중성의 극성 또는 비-극성 아미노산이다. 결합에 사용되는 전형적인 아미노산 잔기는 글리신, 티로신, 시스테인, 리신, 글루탐산 및 아스파르트산 등이다.
다른 실시 형태에서, 링커는 천연 발생 아미노산이 아닌 이종이작용성(heterobifunctional) 링커일 수 있다.
투여 방법
본 발명의 조성물은 흡입에 의해 폐로 전달된다. 흡입 장치, 예를 들어 흡입기(건조 분말 흡입기 및 정량식 흡입기를 포함함) 및 네불라이저(아토마이저로도 알려짐)가 본 개시된 조성물을 폐로 전달하는 데 사용될 수 있다. 예시적인 건조 분말 흡입기는 미국 특허 제5,458,135호; 제5,740,794호; 제5,785,049호(이들은 본 명세서에 참조로 포함됨)에 개시된 바와 같이 인헤일 테라퓨틱 시스템즈(Inhale Therapeutic Systems)으로부터 획득될 수 있다. 건조 분말 흡입기는 미국 특허 제6,029,661호(본 명세서에 참조로 포함됨)에 개시된 바와 같이 쓰리엠(3M)으로부터 또한 획득될 수 있다.
본 명세서에 개시된 조성물은, 미국 특허 제5,320,094호 및 미국 특허 제5,672,581호(이들 둘 모두는 본 명세서에 참조로 포함됨)에 개시된 바와 같이, 약제학적으로 불활성인 액체 추진제(예를 들어, 클로로플루오로카본(CFC) 또는 플루오로카본) 중의 약물의 용액 또는 현탁액을 함유하는 정량식 흡입기(MDI)를 사용하여 또한 투여될 수 있다. 정량식 흡입기는 작동 또는 “퍼프(puff)”당 고정 단위 투여량의 약물을, 예를 들어 퍼프당 10 내지 5000 마이크로그램 약물의 범위로 전달하도록 설계된다. 예시적인 정량식 흡입기는 미국 특허 제5,224,183호; 제5,290,534호; 제5,511,540호; 제6,454,140호; 및 제6,615,826호(이들은 본 명세서에 참조로 포함됨)에 개시된 바와 같이 쓰리엠(3M)으로부터 획득될 수 있다. 정량식 흡입기는 또한 CFC가 없을 수도 있다. 흡입기에 의해 사용될 약물 조성물은 에어로졸화된 고체 입자 형태이거나 액체 또는 현탁액의 점적 형태일 수 있다.
대안적으로, 본 명세서에 기술된 조성물은 용매, 예를 들어 물 또는 식염수 중에 용해되거나 현탁되어, 분무(nebulization)에 의해 투여될 수 있다. 에어로졸화된 용액을 전달하기 위한 예시적인 네불라이저에는 에어렉스(AERx)TM (애러다임(Aradigm)), 울트라벤트(Ultravent) (말린크로드트(Mallinkrodt)), 파리 엘씨 플러스(Pari LC Plus)TM 또는 파리 엘씨 스타(Pari LC Star)TM (파리 게엠바하(Pari GmbH), 독일), 데빌비스 풀모-아이데(DeVilbiss Pulmo-Aide) 및 아콘(Acorn) II® (마르퀘스트 메디칼 프로덕츠(Marquest Medical Products))가 포함된다.
약물 제형
본 명세서에 개시된 약물 조성물은 기도 및 폐 내로의 흡입에 적절한 담체 중의 입자의 용액 및/또는 현탁액으로 제형화될 수 있다. 그러한 담체들은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, 1980, Ed. By Arthur Osol] (본 명세서에 참조로 포함됨)에 기술된 바와 같이, 기도 내로의, 예를 들어 분말, 미스트 또는 에어로졸로 이루어진 약 0.5 내지 1 마이크론, 그리고 바람직하게는 약 0.5 내지 약 0.7 마이크론 정도의, 미세한 점적의 전달을 위한 흡입제(inhalant) 및 흡입 가능한 미세한 입자의 전달을 위한 통기법(insufflation)에 대해 정통하고 있는 당업자에게 또한 익히 공지되어 있다.
일 실시 형태에서, 흡입 투여용 약물 조성물은 분말로 투여될 수 있다. 분말형 약물 또는 조성물은 보통 경질 젤라틴 캡슐이나 블리스터 포장, 또는 다회-용량 장치와 같은 용기 내에 놓여진다. 캡슐 또는 블리스터는 흡입기 장치 내부에서 파열되거나 브로칭되고(broached), 이에 의해 분말이 흡입될 수 있게 된다. 일반적으로, 흡입에 사용되는 약물의 평균 입자 크기는 1 내지 10 마이크론이며, 2 내지 5 마이크론의 크기 범위가 폐의 말초 기도를 침투하는 데 특히 적합하다. 그러한 입자 크기 범위는 통상적으로, 마이크론화 또는 분무 건조에 의해 달성된다.
분말형 약물 조성물은 약물과 불활성 담체의 블렌드 또는 혼합물을 포함하는 조성물로서 흔히 투여된다. 통상적으로, 불활성 담체는 평균 입자 크기가 약물의 평균 입자 크기보다 실질적으로 더 크다. 이는 다른 이점들 중에서도 특히, 조성물의 유동 특성 및 분배 정확성(dispensing accuracy)의 개선을 제공한다.
생성된 약물에 통상적으로 기재되는 담체 재료에는 탄산칼슘 및 당류, 예를 들어 수크로오스, 만니톨 또는 덱스트로오스 또는, 보다 특히 락토오스가 포함되며, 이들은 약제학적으로 허용되고 어떠한 독성 문제도 내포하지 않는데, 그 이유는 투여 과정에서 흡수된 어떠한 잔기도 소화시에 잘 견디거나, 폐로부터의 각성(disillusion) (예를 들어, 당류의 경우) 또는 점액섬모 청소에 의해 용이하게 제거될 수 있기 때문이다.
캡슐 또는 블리스터 내의 조성물은 빈번하게 약 25 mg이다. 이 중량은 아마도 과도한 부작용(예를 들어, 기침) 없이 편안하게 흡입될 수 있는 분말의 최대량을 나타낼 것이며, 또한, 충전기에 의해 통상적으로 분배되는 최소량에 상응될 것이다.
소정의 실시 형태에서, 분말 흡입용으로 제형화된 조성물은 약 95.0 내지 99.99 중량%, 보다 특히, 97.0 내지 99.9중량%, 특히 98.0 내지 99.8중량%의 농도로 존재하는 담체를 포함한다. 공지된 방법의 적용 또는 개조에 의해 그러한 분말제를 제조하는 방법은 본 발명의 특징부를 또한 구성한다.
다른 실시 형태에서, 약물 조성물은 당업계에 익히 공지된 방법을 이용하여 에어로졸 제형으로 제형화될 수 있다. 그러한 에어로졸 제형을 분배하는 데 널리 사용되는 한 가지 방법은 액화 추진제 가스 중에의 미분된 분말로서의 약물의 현탁 제형을 제조하는 것을 포함한다. 대안적으로, 약물이 추진제 시스템 - 약물의 용해를 돕기 위해서 가용화제 및 공-용매를 아마도 함유할 것임 - 중에 용해되는 용액 제형이 제조될 수 있다. 가압 정량식 흡입기(pressurized metered dose inhaler, pMDI)가 그러한 제형을 환자에게 분배하는 데 보통 사용된다. 추진제는 클로로플루오로카본(CFC), 플루오로카본(FC) 또는 하이드로플루오로알칸(HFA) 추진제를 포함할 수 있다.
치료 방법
또한, 본 개시 내용은 폐 염증 또는 폐 질환으로 고생하는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 다른 실시 형태에서, 본 개시 내용은 폐 장애로 고생할 위험이 있는 대상을 치료하는 방법을 제공한다. 상기 방법은 사람 폐포/가스 계면에 친화성을 갖고, 사람에게 실질적으로 비-면역원성인 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 모방체의 적어도 일부분을 포함하는 표면 활성제에 공유 결합된 폐 활성 약물을 포함하는 접합체를 대상에게 투여하는 것을 포함한다. 상기 접합체는 폐에서 약물 효과를 유도하기에 유효한 양으로 흡입에 의해 대상에게 투여된다. 상기 대상은 사람, 원숭이, 침팬지, 말, 개, 고양이, 젖소, 양, 돼지, 래트 또는 마우스일 수 있다. 예시적인 실시 형태에서, 대상은 사람이다.
치료를 필요로 하는 대상은 폐 염증으로 고생하고 있거나, 폐 질환으로 고생하고 있거나 고생할 위험이 있다. 본 명세서에 기술된 약물 조성물로 치료될 수 있는 예시적인 폐 질환에는 폐기종, 만성 기관지염, 만성 폐쇄성 폐 질환(COPD), 천식, 호흡 곤란 장애(RDS), 폐렴, 결핵 또는 기타 세균 감염, 낭성 섬유증 및/또는 폐암이 포함되지만, 이로 한정되지 않는다.
투여량
표면 활성제에 접합된 폐 활성 약물의 투여는 비접합된 약물의 투여에 비하여 투여 빈도를 감소시킨다. 소정의 실시 형태에서, 투여 단계는 날마다, 2일마다, 3일마다, 4일마다, 5일마다 또는 매주마다 1회 반복될 수 있다.
도 1A는 사람 계면활성제 단백질 A를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 1)을 나타낸다. 도 1B는 사람 계면활성제 단백질 A에 대한 아미노산 서열(서열번호 2)을 나타낸다.
도 2A는 사람 계면활성제 단백질 B를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 3)을 나타낸다. 도 2B는 사람 계면활성제 단백질 B 에 대한 아미노산 서열(서열번호 4)을 나타낸다. 도 2C는 성인 계면활성제 단백질 B 에 대한 아미노산 서열(서열번호 5)을 나타낸다.
도 3A는 사람 계면활성제 단백질 C를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 6)을 나타낸다. 도 3B는 사람 계면활성제 단백질 C 에 대한 아미노산 서열(서열번호 7)을 나타낸다. 도 3C는 성인 계면활성제 단백질 C 에 대한 아미노산 서열(서열번호 8)을 나타낸다.
도 4A는 사람 계면활성제 단백질 D를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 9)을 나타낸다. 도 4B는 사람 계면활성제 단백질 D 에 대한 아미노산 서열(서열번호 10)을 나타낸다. 도 4C는 성인 계면활성제 단백질 D 에 대한 아미노산 서열(서열번호 11)을 나타낸다.
도 5A는 소 계면활성제 단백질 A를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 12)을 나타낸다. 도 5B는 소 계면활성제 단백질 A 에 대한 아미노산 서열(서열번호 13)을 나타낸다.
도 6A는 소 계면활성제 단백질 B를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 14)을 나타낸다. 도 6B는 소 계면활성제 단백질 B 에 대한 아미노산 서열(서열번호 15)을 나타낸다.
도 7A는 소 계면활성제 단백질 C를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 16)을 나타낸다. 도 7B는 소 계면활성제 단백질 C 에 대한 아미노산 서열(서열번호 17)을 나타낸다.
도 8A는 소 계면활성제 단백질 D를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 18)을 나타낸다. 도 8B는 소 계면활성제 단백질 D에 대한 아미노산 서열(서열번호 19)을 나타낸다.
도 9A는 돼지 계면활성제 단백질 A를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 20)을 나타낸다. 도 9B는 돼지 계면활성제 단백질 A에 대한 아미노산 서열(서열번호 21)을 나타낸다.
도 10A는 부분 돼지 계면활성제 단백질 B를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 22)을 나타낸다. 도 10B는 돼지 계면활성제 단백질 B에 대한 부분 아미노산 서열(서열번호 23)을 나타낸다.
도 11A는 돼지 계면활성제 단백질 C를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 24)을 나타낸다. 도 11B는 돼지 계면활성제 단백질 C에 대한 아미노산 서열(서열번호 25)을 나타낸다.
도 12A는 돼지 계면활성제 단백질 D를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 26)을 나타낸다. 도 12B는 돼지 계면활성제 단백질 D에 대한 아미노산 서열(서열번호 27)을 나타낸다.
도 13A는 양 계면활성제 단백질 A를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 28)을 나타낸다. 도 13B는 양 계면활성제 단백질 A에 대한 아미노산 서열(서열번호 29)을 나타낸다.
도 14A는 양 계면활성제 단백질 B를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 30)을 나타낸다. 도 14B는 양 계면활성제 단백질 B에 대한 아미노산 서열(서열번호 31)을 나타낸다.
도 15A는 양 계면활성제 단백질 C를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 32)을 나타낸다. 도 15B는 양 계면활성제 단백질 C에 대한 아미노산 서열(서열번호 33)을 나타낸다.
도 16A는 부분 양 계면활성제 단백질 D를 인코딩하는 핵산 서열(서열번호 34)을 나타낸다. 도 16B는 양 계면활성제 단백질 D에 대한 부분 아미노산 서열(서열번호 35)을 나타낸다.
도 17A 내지 17E는 예시적인 사람 호중구 엘라스타아제(HNE) 억제제를 나타낸 표이다. 표에 열거된 참조 번호는 문헌[Philip D. Edwards and Peter R. Bernstein in “Synthetic Inhibitors of Elastase”, Medicinal Research Reviews, Vol. 14, No. 2, 127-194 (1994)]에 언급된 화합물 식별번호에 대응한다.
도 18은 대표적인 폐기종 억제제의 화학 합성을 나타낸 개략도이다. 도시된 바와 같은 폐기종 억제제는 글리신 링커를 함유한다. 글리신 링커(원으로 표시됨)는 당해 화합물을, SP-B의 N-말단 1 내지 25개의 아미노산에 공유 결합시키기 위한 표준 펩타이드 합성 반응에 사용될 수 있는 비천연 아미노산으로 전환시킨다.
도 19는 HNE 억제제로서의 사용을 위한 예시적인 표적을 나타낸 표이다. 사람 계면활성제 B 펩타이드의 처음 25개 잔기의 N-말단에 부착된 표적 2는 표적 C를 형성한다. 이와 유사하게, 사람 계면활성제 B 펩타이드의 처음 25개 잔기의 N-말단에 부착된 표적 3은 표적 B를 형성한다.
<실시예>
본 발명은 하기 실시예에 의해 추가로 설명한다. 이들 실시예는 예시적인 목적으로만 제공되며, 어떤 식으로든 본 발명의 범주 또는 내용을 제한하는 것으로서 해석되어서는 안 된다.
실시예 1: SP -B 펩타이드에의 사람 호중구 엘라스타아제 억제제의 접합
강력한 소분자 사람 호중구 엘라스타아제(HNE) 억제제의 패널을 SP-B의 아미노 말단 25개의 아미노산(FPIPLPYCWLCRALIKRIQAMIPKG) (서열번호 88)을 포함하는 SP-B 펩타이드에 접합시킬 수 있다. 아미노 말단 25개의 아미노산을 포함하는 SP-B 펩타이드의 총 분자량은, 물 분자 제거 후, 2926.97이다. 도 18에 나타낸 결합과 유사한 글리신 링커를 사용하여 HNE 억제제를 SP-B N-말단 25-mer에 접합시킨다.
실시예 2: 표적 B의 합성
반응에 사용되는 모든 용매는 LR 등급 용매였다. 실온(RT)은 27 내지 32℃ 범위의 온도를 가리킨다. 모든 반응들은, 명시되지 않는 한, TLC로 모니터링하였다. 용액들은 회전 증발기를 사용하여 감압 하에서 증발시켰다. NMR은 바리안(Varian) 400 MHz 상에서 얻어졌다. 컬럼 크로마토그래피는, 명시되지 않는 한, 실리카 겔 100 내지 200 메쉬를 사용하여 행해졌다.
단계 1의 합성
Figure pct00001
무수 테트라하이드로푸란(85 mL) 중의 Cbz-Val-Pro-OH(5 g, 14 mmol)의 용액을 질소 하에서 -20℃로 냉각시켰다. N-메틸모르폴린(1.74 mL, 15 mmol)에 이어 이소부틸 클로로포르메이트(2 mL, 15 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 -20℃에서 15분 동안 교반하고, 이어서 -40℃로 냉각시켰다. 테트라하이드로푸란(25 mL) 중의 L-발리놀(1.62 g, 15 mmol)의 용액을 반응 혼합물에 적가하였다. 반응 혼합물을 하룻밤 실온으로 가온되게 두었다. 반응 혼합물을 여과하고, 여과액을 에틸 아세테이트(60 mL)로 희석하였다. 합한 유기층들을 1N HCl (60 mL), NaHCO3 (30 mL) 및 브라인(30 mL)으로 연속하여 세정하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고 농축시켜 원하는 생성물(5.7 g)을 수득하였다. HPLC Rt: 5.76; LCMS (M+1): 434; 수율: 92.5%.
단계 2의 합성
Figure pct00002
무수 디클로로메탄(110 mL) 중의 옥살릴 클로라이드(2.45 mL, 28 mmol)의 용액을 -60℃로 냉각시키고, 디클로로메탄(35 mL) 중의 DMSO(4.09 mL, 57.7 mmol)의 용액을 1시간에 걸쳐 적가하였으며, 이때 반응 혼합물 온도를 -45℃로 유지하여 적가하였다. 이 반응 혼합물을 -30℃로 가온되게 두고, 디클로로메탄(35 mL) 중의 단계-1(6.1 g, 14 mmol)의 용액을 1시간에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 -25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 -40℃로 냉각시키고, 디이소프로필에틸아민(10 mL, 57.7 mmol)을 1시간에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온시키고, 이어서 1 N HCl(60 mL) 및 브라인(60 mL)으로 세정하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 여과액을 감압 하에서 농축시켜 원하는 생성물(5.7 g)을 수득하였다. HPLC Rt: 6.81; LCMS (M+1): 432; 수율: 94%.
단계 3의 합성
Figure pct00003
무수 테트라하이드로푸란(100 mL) 중의 아연(2.5 g, 39 mmol) 및 단계-2(5.64 g, 13 mmol)의 현탁액을 질소 분위기 하에서 60℃로 가열하였다. 에틸 브로모디플루오로아세테이트(7.93 g, 39 mmol)를 첨가하고, 반응물을 60℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 테트라하이드로푸란을 감압 하에서 제거하고, 에틸 아세테이트(100 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 1M KHSO4 (50 mL) 및 브라인(50 mL)으로 세정하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기층을 여과하고, 감압 하에서 농축시켜 조(crude) 생성물을 수득하고, 이어서 이것을 분취 HPLC로 정제하여 원하는 생성물(2.9 g)을 수득하였다. HPLC Rt: 7.44; LCMS (M+1): 556; 수율:40%.
단계 4의 합성
Figure pct00004
에탄올(40 mL) 중의 단계-3(1.8 g, 3.2 mmol) 및 벤질 아민(1.06 mL, 9.7 mmol)의 용액을 4시간 동안 환류에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 질소 분위기 하에서 추가 48시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에서 제거하였다. 잔기를 에틸 아세테이트(50 mL) 중에 용해시키고, 이 용액을 1N HCl(20 mL) 및 브라인(20 mL)로 세정하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공 하에서 제거하여 원하는 생성물(1.7 g)을 수득하였다. HPLC Rt: 7.56; LCMS (M+1): 616; 수율: 88%.
단계-5
Figure pct00005
에틸 아세테이트(50 mL) 중의 단계-4(1.85 g, 3 mmol) 및 20% 수산화팔라듐(1 g)의 혼합물을 20시간 동안 200 psi의 압력 베셀(vessel) 안에 넣어 두었다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통하여 여과하고, 여과액을 진공 하에서 농축시켜 약간의 출발 재료와 함께 원하는 생성물(1.1 g)을 수득하였으며, 이것을 어떠한 정제 없이 추가의 반응에 그대로 사용하였다. HPLC Rt: 4.90; LCMS (M+1): 482; 수율: 80%.
단계-6
Figure pct00006
0 ℃의, 무수 디클로로메탄(50 mL) 중의 단계-5(1 g, 2.1 mmol)의 용액에 트리에틸아민(0.25 mL, 1.8 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 디클로로메탄(20 mL) 중의 에틸옥살릴 클로라이드(0.2 mL, 1.87 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되게 두고, 추가 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물(25 mL)로 식혔다(quench). 유기층을 분리하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 증발시켜 원하는 생성물을 수득하였으며, 이어서 이것을 분취 HPLC로 정제하였다. HPLC Rt: 6.72; LCMS (M+1): 583; 수율: 0.5 g (42%).
단계-7
Figure pct00007
트리플루로아세트산(0.92 mL, 12.02 mmol)을 무수 디클로로메탄(25 mL) 중의 단계-6(1.75 g, 3 mmol) 및 데스-마틴(Dess-Martin) 페리오디난(5.1 g, 12.02 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 이 혼합물을 질소 분위기 하에서 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트(100 mL)를 첨가하고, 혼합물을 포화 티오황산나트륨(60 mL), 포화 NaHCO3 (60 mL) 및 브라인(60 mL)으로 세정하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 감압 하에서 증발시켜 원하는 생성물을 수득하였으며, 이것을 추가의 단계에 그대로 사용하였다. HPLC Rt: 7.32; LCMS (M+1): 581; 수율: 1.7 g (97%).
단계-8
Figure pct00008
메탄올 물 1:1(20 mL) 중의 단계-7(2.2 g, 3.7 mmol)의 용액을 1N NaOH(0.18 g, 4.5 mmol)로 처리하고, 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 메탄올을 제거하고, 1N HCl로 산성화하고, 에틸 아세테이트(60 mL)로 추출하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 증발시켜 원하는 생성물을 수득하였으며, 이어서 이것을 분취 HPLC로 정제하였다. HPLC Rt: 6.47-6.61; LCMS (M+1): 553; 수율: 500 mg (24%, 분취 후).
단계-9
Figure pct00009
왕(Wang) 수지(2.5 g, 0.5eq)를 DMF(15 mL) 중의 20% 피페리딘으로 처리하고, 약 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 그것을 DMF(2회, 15 mL), DCM(3회, 15 mL)으로 세정한 다음, 진공 하에서 건조시켰다. 수지에 카이저(Kaiser) 시험을 수행하여 F-moc 기의 완전한 제거를 확실히 하였다. 이어서, 그것을 단계-8 생성물과의 결합에 사용하였다. DMF 중의 수지의 용액에, DMF(5 mL) 중의 상기 산(97 mg, 0.176 mmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 PyBoP(91 mg, 0.176 mmol) 및 N-메틸 모르폴린(0.24 mL, 0.22 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 약 3시간 동안 진탕기(shaker) 상에서 진탕되게 하였다. 이 용액을 디캔팅하고, 새로운 다량의 상기 시약들을 다시 첨가하고, 그것을 3시간 동안 추가로 진탕되게 하였다. 이 과정을 약 4회 동안 반복하였다. 이 용액을 디캔팅하고, 수지를 DMF(3회, 15 mL), DCM(3회, 15 mL)으로 세정하고, 진공 하에서 건조시켰다. 이 수지에 카이저 시험을 수행하여 결합이 일어났음을 확실히 하였다.
단계-10
Figure pct00010
개열 용액(cleavage solution)의 제조 절차. TFA(81%), 페놀(5%), 티오아니솔(5%), 1,2-에탄디티올(2.5%), 물(3%), 디메틸설파이드(2%), 요오드화암모늄(1.5%). 수지에 개열 용액을 첨가하고, 약 3시간 동안 진탕기 상에서 진탕되게 하였다. 수지를 목면을 통하여 여과하고, TFA로 세정하였다. 이어서, 여과액을 진공 하에서 농축시키고, 차가운 에테르로 분쇄(triturate)하여 백색 고체를 수득하고, 이어서 이것을 분취 HPLC로 정제하여 원하는 생성물을 수득하였다. LCMS (M/3): 1155; 수율: 46 mg (1.84%).
실시예 3: 표적 C의 합성
단계-6
Figure pct00011
실온에서, 무수 THF(50 mL) 중의 단계-5(3.2 g, 6.6 mmol)의 용액에 모노에틸 말로네이트(0.7 mL, 6 mmol)에 이어, HOBT(1.63 g, 12 mmol), EDCI(1.27 g, 6.6 mmol) 및 N-메틸 모르폴린(1.6 mL, 15 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반되게 하였다. 이어서, 반응 혼합물을 물로 식히고(quench), THF를 제거하기 위해 감압 하에서 증발시켰다. 이어서, 수성층을 에틸 아세테이트(100 mL)로 추출하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였으며, 이어서 이것을 분취 HPLC로 정제하였다(0.98 g). HPLC Rt: 6.44; LCMS (M+1): 596; 수율: 25%, 분취 후.
단계-7
Figure pct00012
트리플루로아세트산(0.45 mL, 5.7 mmol)을 무수 디클로로메탄(30 mL) 중의 단계-6(0.86 g, 1.45 mmol) 및 데스-마틴 페리오디난(2.46 g, 5.7 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 이 혼합물을 질소 분위기 하에서 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트(50 mL)를 첨가하고, 혼합물을 포화 티오황산나트륨(20 mL), 포화 NaHCO3 (20 mL) 및 브라인(20 mL)으로 세정하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 용매를 진공 하에서 제거하여 원하는 생성물(0.74 g)을 수득하였다. HPLC Rt: 7.05; LCMS (M+1): 595; 수율: 86%.
단계-8
Figure pct00013
메탄올 물 1:1(5 mL:5 mL) 중의 단계-7(0.75 g, 1.2 mmol)의 용액을 1N NaOH(0.060 g, 1.5 mmol)로 처리하고, 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시켜 메탄올을 제거하고, 1N HCl(pH 2에 이르기까지)로 산성화하고, 에틸 아세테이트(50 mL)로 추출하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 하에서 농축시켜 원하는 생성물을 수득하였으며, 이어서 이것을 분취 HPLC로 정제하였다(0.4 g). HPLC Rt: 6.01-6.51; LCMS (M+1): 567; 수율: 56%, 분취 후.
단계-9
Figure pct00014
왕 수지(2 g, 0.08 mmol)를 DMF(20 mL) 중의 20% 피페리딘으로 처리하고, 약 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 그것을 DMF(2회), DCM(3회)으로 세정한 다음, 감압 하에서 건조시켰다. 이 수지에 카이저 시험을 수행하여 F-moc 기의 완전한 제거를 확실히 하였다. 이어서, 그것을 단계-8과의 결합에 사용하였다. DMF(5 mL) 중의 수지(2 g, 0.08 mmol)의 용액에, DMF(3 mL) 중의 상기 산(0.1 g, 0.16 mmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 PyBoP(0.83 g, 0.16 mmol) 및 N-메틸 모르폴린(0.2 mL, 0.2 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 약 3시간 동안 진탕기 상에서 진탕되게 하였다. 이 용액을 디캔팅하고, 새로운 다량의 상기 시약들을 다시 첨가하고, 그것을 3시간 동안 추가로 진탕되게 하였다. 이 과정을 약 4회 동안 반복하였다. 이 용액을 디캔팅하고, 수지를 DMF(3회), DCM(3회)으로 세정하고, 감압 하에서 건조시켰다. 이 수지에 카이저 시험을 수행하여 결합이 일어났음을 확실히 하였다.
단계-10
Figure pct00015
개열 용액의 제조 절차. TFA(81%), 페놀(5%), 티오아니솔(5%), 1,2-에탄디티올(2.5%), 물(3%), 디메틸설파이드(2%), 요오드화암모늄(1.5%). 수지에 개열 용액(25 mL)을 첨가하고, 약 3시간 동안 진탕기 상에서 진탕되게 하였다. 수지를 목면을 통하여 여과하고, TFA로 세정하였다. 이어서, 여과액을 감압 하에서 농축시키고, 차가운 에테르로 분쇄하여 백색 고체를 수득하고, 이어서 이것을 분취 HPLC로 정제하여 원하는 생성물(0.080 g)을 수득하였다. LCMS (M/3): 1160; 수율: 2.4%.
실시예 4: HNE 노출 후 폐의 기관지폐포 세척
총 14마리의 동물이 이번 연구에 사용되었다. 마취된 마우스에 0.1 ml의 용액을 무딘 선단 카테터로 기관(trachea)의 구멍(opening)에 전달하여 투여하고, 이들 동물들이 이 용액을 그들의 폐 안으로 흡인하게 두었다. 모든 동물들을 2시간 동안 이 처리제에 노출시키고, 재-마취시켰다. 하기에 설명된 바와 같이, 이들의 폐의 기관지폐포 세척을 수행하였다. HNE(폐기공의 원인물질(causative agent))를 투여받은 4마리의 동물은 평균 폐 혈액 세포 수준이 중량 기준으로 0.053 그램이었다. 표적 2(1990년대 초기에 제네카(Zeneca)에 의해 개발된 강력한 HNE 억제제)가 HNE와 함께 투여될 때, 폐에서의 평균 혈액 수준을 34%인 0.035 그램까지 감소시켰다. 표적 C(사람 계면활성제 B 펩타이드의 처음 25개 잔기의N-말단에 공유 결합된 제네카 분자)가 HNE와 함께 투여될 때, 폐에서의 평균 혈액 수준을 87%인 0.007 그램까지 감소시켰다.
한 조의 동물을 사용하여 이번 연구를 위한 HNE의 최적 농도를 측정하였다. 50 마이크로그램의 HNE에 노출된 초기 샘플은 노출에 견디지 못했다. 40 마이크로그램의 HNE에 노출된 동물들은 완전한 연구를 수행하기에 충분할 정도로 오래 존속할 수 있었다. 완전한 연구에서 여전히 남아 있는 모든 동물들은 40 마이크로그램의 HNE에 노출되었다.
표적 2(제네카 분자)를 HNE에 비하여 70배의 몰 과잉으로 투여하였다. 동력학적 연구에서, 표적 2는 2 nM의 친화도를 갖는다. 표적 C(사람 계면활성제 펩타이드 B의 처음 25개 잔기에 공유 결합된 제네카 분자)는 동력학적 연구에서 표적 2와 비교하여, 근사적으로 102배의 효능을 잃게 되며, 따라서 표적 C는 HNE에 대하여 근사적으로 200 nM의 친화도를 갖는다. 따라서, 이들 연구에서는 표적 C를 HNE에 비하여 100배의 몰 과잉으로 동물에 투여하였다.
기관지-폐포 세척(BAL)은, 1) 동물들을 마취시키고; 2) 동물들에 기관절개술을 수행하고, 가슴을 절개하여, 늑골들을 벌려서 완전한 폐 확장을 가능하게 하고; 3) 기관절개 카테터를 통하여 1 ml의 PBS 완충 용액을 폐 안으로 가압하고; 4) 폐 밖으로 이 용액을 빨아내고; 5) 회수된 용액을 원심분리하여 액체 부분으로부터 적혈구 부분을 분리하고; 6) 적혈구 세포 부분의 중량을 측정함으로써 수행된다.
Figure pct00016
<참조에 의한 포함>
본 명세서에 인용된 특허 문헌 및 과학 논문 각각의 전체 개시 내용은 모든 목적으로 참조로 포함된다.
<등가물>
본 발명은 본 발명의 정신 또는 본질적 특징을 벗어남 없이 다른 특정 형태들로 구체화될 수 있다. 따라서, 전술한 실시 형태들은 모든 점에서 본 명세서에 기술된 본 발명에 대한 제한이라기보다는 예시적인 것으로 고려되어야 한다. 따라서, 본 발명의 범주는 전술한 설명에 의한 것이라기보다는 첨부된 청구의 범위로 나타나며, 청구의 범위의 등가의 의미 및 범위 내에 속하는 모든 변경은 본 발명에 포함되는 것으로 의도된다.
Figure pct00017
Figure pct00018
SEQUENCE LISTING <110> PAKA PULMONARY PHARMACEUTICALS, INC. <120> COMPOSITIONS FOR DELIVERING MEDICAMENTS INTO THE LUNGS, USES THEREOF <130> SOL-001PC <140> PCT/US08/65776 <141> 2008-06-04 <150> 60/942,026 <151> 2007-06-05 <160> 94 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 968 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 ccaagcagct ggaggctctg tgtgtgggtc gctgatttct tggagcctga aaagaaagta 60 acacagcagg gatgaggaca gatggtgtga gtcagtgaga gcagcgactg gacccagagc 120 catgtggctg tgccctctgg ccctcaacct catcttgatg gcagcctctg gtgctgtgtg 180 cgaagtgaag gacgtttgtg ttggaagccc tggtatcccc ggcactcctg gatcccacgg 240 cctgccaggc agggacggga gagatggtct caaaggagac cctggccctc caggccccat 300 gggtccacct ggagaaatgc catgtcctcc tggaaatgat gggctgcctg gagcccctgg 360 tatccctgga gagtgtggag agaaggggga gcctggcgag aggggccctc cagggcttcc 420 agctcatcta gatgaggagc tccaagccac actccacgac tttagacatc aaatcctgca 480 gacaagggga gccctcagtc tgcagggctc cataatgaca gtaggagaga aggtcttctc 540 cagcaatggg cagtccatca cttttgatgc cattcaggag gcatgtgcca gagcaggcgg 600 ccgcattgct gtcccaagga atccagagga aaatgaggcc attgcaagct tcgtgaagaa 660 gtacaacaca tatgcctatg taggcctgac tgagggtccc agccctggag acttccgcta 720 ctcagacggg acccctgtaa actacaccaa ctggtaccga ggggagcccg caggtcgggg 780 aaaagagcag tgtgtggaga tgtacacaga tgggcagtgg aatgacagga actgcctgta 840 ctcccgactg accatctgtg agttctgaga ggcatttagg ccatgggaca gggaggacgc 900 tctctggcct tcggcctcca tcctgaggct ccacttggtc tgtgagatgc tagaactccc 960 tttcaaca 968 <210> 2 <211> 248 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Trp Leu Cys Pro Leu Ala Leu Asn Leu Ile Leu Met Ala Ala Ser 1 5 10 15 Gly Ala Val Cys Glu Val Lys Asp Val Cys Val Gly Ser Pro Gly Ile 20 25 30 Pro Gly Thr Pro Gly Ser His Gly Leu Pro Gly Arg Asp Gly Arg Asp 35 40 45 Gly Leu Lys Gly Asp Pro Gly Pro Pro Gly Pro Met Gly Pro Pro Gly 50 55 60 Glu Met Pro Cys Pro Pro Gly Asn Asp Gly Leu Pro Gly Ala Pro Gly 65 70 75 80 Ile Pro Gly Glu Cys Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Glu Arg Gly Pro 85 90 95 Pro Gly Leu Pro Ala His Leu Asp Glu Glu Leu Gln Ala Thr Leu His 100 105 110 Asp Phe Arg His Gln Ile Leu Gln Thr Arg Gly Ala Leu Ser Leu Gln 115 120 125 Gly Ser Ile Met Thr Val Gly Glu Lys Val Phe Ser Ser Asn Gly Gln 130 135 140 Ser Ile Thr Phe Asp Ala Ile Gln Glu Ala Cys Ala Arg Ala Gly Gly 145 150 155 160 Arg Ile Ala Val Pro Arg Asn Pro Glu Glu Asn Glu Ala Ile Ala Ser 165 170 175 Phe Val Lys Lys Tyr Asn Thr Tyr Ala Tyr Val Gly Leu Thr Glu Gly 180 185 190 Pro Ser Pro Gly Asp Phe Arg Tyr Ser Asp Gly Thr Pro Val Asn Tyr 195 200 205 Thr Asn Trp Tyr Arg Gly Glu Pro Ala Gly Arg Gly Lys Glu Gln Cys 210 215 220 Val Glu Met Tyr Thr Asp Gly Gln Trp Asn Asp Arg Asn Cys Leu Tyr 225 230 235 240 Ser Arg Leu Thr Ile Cys Glu Phe 245 <210> 3 <211> 2026 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 gccatggctg agtcacacct gctgcagtgg ctgctgctgc tgctgcccac gctctgtggc 60 ccaggcactg ctgcctggac cacctcatcc ttggcctgtg cccagggccc tgagttctgg 120 tgccaaagcc tggagcaagc attgcagtgc agagccctag ggcattgcct acaggaagtc 180 tggggacatg tgggagccga tgacctatgc caagagtgtg aggacatcgt ccacatcctt 240 aacaagatgg ccaaggaggc cattttccag gacacgatga ggaagttcct ggagcaggag 300 tgcaacgtcc tccccttgaa gctgctcatg ccccagtgca accaagtgct tgacgactac 360 ttccccctgg tcatcgacta cttccagaac cagactgact caaacggcat ctgtatgcac 420 ctgggcctgt gcaaatcccg gcagccagag ccagagcagg agccagggat gtcagacccc 480 ctgcccaaac ctctgcggga ccctctgcca gaccctctgc tggacaagct cgtcctccct 540 gtgctgcccg gggccctcca ggcgaggcct gggcctcaca cacaggatct ctccgagcag 600 caattcccca ttcctctccc ctattgctgg ctctgcaggg ctctgatcaa gcggatccaa 660 gccatgattc ccaagggtgc gctagctgtg gcagtggccc aggtgtgccg cgtggtacct 720 ctggtggcgg gcggcatctg ccagtgcctg gctgagcgct actccgtcat cctgctcgac 780 acgctgctgg gccgcatgct gccccagctg gtctgccgcc tcgtcctccg gtgctccatg 840 gatgacagcg ctggcccaag gtcgccgaca ggagaatggc tgccgcgaga ctctgagtgc 900 cacctctgca tgtccgtgac cacccaggcc gggaacagca gcgagcaggc cataccacag 960 gcaatgctcc aggcctgtgt tggctcctgg ctggacaggg aaaagtgcaa gcaatttgtg 1020 gagcagcaca cgccccagct gctgaccctg gtgcccaggg gctgggatgc ccacaccacc 1080 tgccaggccc tcggggtgtg tgggaccatg tccagccctc tccagtgtat ccacagcccc 1140 gacctttgat gagaactcag ctgtccagct gcaaaggaaa agccaagtga gacgggctct 1200 gggaccatgg tgaccaggct cttcccctgc tccctggccc tcgccagctg ccaggctgaa 1260 aagaagcctc agctcccaca ccgccctcct caccgccctt cctcggcagt cacttccact 1320 ggtggaccac gggcccccag ccctgtgtcg gccttgtctg tctcagctca accacagtct 1380 gacaccagag cccacttcca tcctctctgg tgtgaggcac agcgagggca gcatctggag 1440 gagctctgca gcctccacac ctaccacgac ctcccagggc tgggctcagg aaaaaccagc 1500 cactgcttta caggacaggg ggttgaagct gagccccgcc tcacacccac ccccatgcac 1560 tcaaagattg gattttacag ctacttgcaa ttcaaaattc agaagaataa aaaatgggaa 1620 catacagaac tctaaaagat agacatcaga aattgttaag ttaagctttt tcaaaaaatc 1680 agcaattccc cagcgtagtc aagggtggac actgcacgct ctggcatgat gggatggcga 1740 ccgggcaagc tttcttcctc gagatgctct gctgcttgag agctattgct ttgttaagat 1800 ataaaaaggg gtttcttttt gtctttctgt aaggtggact tccagctttt gattgaaagt 1860 cctagggtga ttctatttct gctgtgattt atctgctgaa agctcagctg gggttgtgca 1920 agctagggac ccattcctgt gtaatacaat gtctgcacca atgctaataa agtcctattc 1980 tcttttatga aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaa 2026 <210> 4 <211> 381 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Met Ala Glu Ser His Leu Leu Gln Trp Leu Leu Leu Leu Leu Pro Thr 1 5 10 15 Leu Cys Gly Pro Gly Thr Ala Ala Trp Thr Thr Ser Ser Leu Ala Cys 20 25 30 Ala Gln Gly Pro Glu Phe Trp Cys Gln Ser Leu Glu Gln Ala Leu Gln 35 40 45 Cys Arg Ala Leu Gly His Cys Leu Gln Glu Val Trp Gly His Val Gly 50 55 60 Ala Asp Asp Leu Cys Gln Glu Cys Glu Asp Ile Val His Ile Leu Asn 65 70 75 80 Lys Met Ala Lys Glu Ala Ile Phe Gln Asp Thr Met Arg Lys Phe Leu 85 90 95 Glu Gln Glu Cys Asn Val Leu Pro Leu Lys Leu Leu Met Pro Gln Cys 100 105 110 Asn Gln Val Leu Asp Asp Tyr Phe Pro Leu Val Ile Asp Tyr Phe Gln 115 120 125 Asn Gln Thr Asp Ser Asn Gly Ile Cys Met His Leu Gly Leu Cys Lys 130 135 140 Ser Arg Gln Pro Glu Pro Glu Gln Glu Pro Gly Met Ser Asp Pro Leu 145 150 155 160 Pro Lys Pro Leu Arg Asp Pro Leu Pro Asp Pro Leu Leu Asp Lys Leu 165 170 175 Val Leu Pro Val Leu Pro Gly Ala Leu Gln Ala Arg Pro Gly Pro His 180 185 190 Thr Gln Asp Leu Ser Glu Gln Gln Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys 195 200 205 Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys 210 215 220 Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu 225 230 235 240 Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile 245 250 255 Leu Leu Asp Thr Leu Leu Gly Arg Met Leu Pro Gln Leu Val Cys Arg 260 265 270 Leu Val Leu Arg Cys Ser Met Asp Asp Ser Ala Gly Pro Arg Ser Pro 275 280 285 Thr Gly Glu Trp Leu Pro Arg Asp Ser Glu Cys His Leu Cys Met Ser 290 295 300 Val Thr Thr Gln Ala Gly Asn Ser Ser Glu Gln Ala Ile Pro Gln Ala 305 310 315 320 Met Leu Gln Ala Cys Val Gly Ser Trp Leu Asp Arg Glu Lys Cys Lys 325 330 335 Gln Phe Val Glu Gln His Thr Pro Gln Leu Leu Thr Leu Val Pro Arg 340 345 350 Gly Trp Asp Ala His Thr Thr Cys Gln Ala Leu Gly Val Cys Gly Thr 355 360 365 Met Ser Ser Pro Leu Gln Cys Ile His Ser Pro Asp Leu 370 375 380 <210> 5 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tcggctccac tggcctcgtg 480 gtgtatgact accagcagct gctgatcgcc tacaagccag cccctggcac ctgctgctac 540 atcatgaaga tagctccaga gagcatcccc agtcttgagg ctctcaatag aaaagtccac 600 aacttccaga tggaatgctc tctgcaggcc aagcccgcag tgcctacgtc taagctgggc 660 caggcagagg ggcgagatgc aggctcagca ccctccggag gggacccggc cttcctgggc 720 atggccgtga acaccctgtg tggcgaggtg ccgctctact acatctagga cgcctccggt 780 gagcagggtc agtggaagcc ccaacgggaa aggaaacgcc ccgggcaaag ggtcttttgc 840 agcttttgca gacgggcaag aagctgcttc tgcccacacc gcagggacaa accctggaga 900 aatgggagct tggggagagg atgggagtgg gcagaggtgg cacccagggg cccgggaact 960 cctgccacaa cagaataaag cagcctgatt g 991 <210> 7 <211> 197 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Asp Val Gly Ser Lys Glu Val Leu Met Glu Ser Pro Pro Asp Tyr 1 5 10 15 Ser Ala Ala Pro Arg Gly Arg Phe Gly Ile Pro Cys Cys Pro Val His 20 25 30 Leu Lys Arg Leu Leu Ile Val Val Val Val Val Val Leu Ile Val Val 35 40 45 Val Ile Val Gly Ala Leu Leu Met Gly Leu His Met Ser Gln Lys His 50 55 60 Thr Glu Met Val Leu Glu Met Ser Ile Gly Ala Pro Glu Ala Gln Gln 65 70 75 80 Arg Leu Ala Leu Ser Glu His Leu Val Thr Thr Ala Thr Phe Ser Ile 85 90 95 Gly Ser Thr Gly Leu Val Val Tyr Asp Tyr Gln Gln Leu Leu Ile Ala 100 105 110 Tyr Lys Pro Ala Pro Gly Thr Cys Cys Tyr Ile Met Lys Ile Ala Pro 115 120 125 Glu Ser Ile Pro Ser Leu Glu Ala Leu Asn Arg Lys Val His Asn Phe 130 135 140 Gln Met Glu Cys Ser Leu Gln Ala Lys Pro Ala Val Pro Thr Ser Lys 145 150 155 160 Leu Gly Gln Ala Glu Gly Arg Asp Ala Gly Ser Ala Pro Ser Gly Gly 165 170 175 Asp Pro Ala Phe Leu Gly Met Ala Val Asn Thr Leu Cys Gly Glu Val 180 185 190 Pro Leu Tyr Tyr Ile 195 <210> 8 <211> 174 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 8 Phe Gly Ile Pro Cys Cys Pro Val His Leu Lys Arg Leu Leu Ile Val 1 5 10 15 Val Val Val Val Val Leu Ile Val Val Val Ile Val Gly Ala Leu Leu 20 25 30 Met Gly Leu His Met Ser Gln Lys His Thr Glu Met Val Leu Glu Met 35 40 45 Ser Ile Gly Ala Pro Glu Ala Gln Gln Arg Leu Ala Leu Ser Glu His 50 55 60 Leu Val Thr Thr Ala Thr Phe Ser Ile Gly Ser Thr Gly Leu Val Val 65 70 75 80 Tyr Asp Tyr Gln Gln Leu Leu Ile Ala Tyr Lys Pro Ala Pro Gly Thr 85 90 95 Cys Cys Tyr Ile Met Lys Ile Ala Pro Glu Ser Ile Pro Ser Leu Glu 100 105 110 Ala Leu Asn Arg Lys Val His Asn Phe Gln Met Glu Cys Ser Leu Gln 115 120 125 Ala Lys Pro Ala Val Pro Thr Ser Lys Leu Gly Gln Ala Glu Gly Arg 130 135 140 Asp Ala Gly Ser Ala Pro Ser Gly Gly Asp Pro Ala Phe Leu Gly Met 145 150 155 160 Ala Val Asn Thr Leu Cys Gly Glu Val Pro Leu Tyr Tyr Ile 165 170 <210> 9 <211> 1299 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 9 agtttgcttg gagctcctgg ggcctaacaa aaagaaacct gccatgctgc tcttcctcct 60 ctctgcactg gtcctgctca cacagcccct gggctacctg gaagcagaaa tgaagaccta 120 ctcccacaga acaatgccca gtgcttgcac cctggtcatg tgtagctcag tggagagtgg 180 cctgcctggt cgcgatggac gggatgggag agagggccct cggggcgaga agggggaccc 240 aggtttgcca ggagctgcag ggcaagcagg gatgcctgga caagctggcc cagttgggcc 300 caaaggggac aatggctctg ttggagaacc tggaccaaag ggagacactg ggccaagtgg 360 acctccagga cctcccggtg tgcctggtcc agctggaaga gaaggtcccc tggggaagca 420 ggggaacata ggacctcagg gcaagccagg cccaaaagga gaagctgggc ccaaaggaga 480 agtaggtgcc ccaggcatgc agggctcggc aggggcaaga ggcctcgcag gccctaaggg 540 agagcgaggt gtccctggtg agcgtggagt ccctggaaac acaggggcag cagggtctgc 600 tggagccatg ggtccccagg gaagtccagg tgccagggga cccccgggat tgaaggggga 660 caaaggcatt cctggagaca aaggagcaaa gggagaaagt gggcttccag atgttgcttc 720 tctgaggcag caggttgagg ccttacaggg acaagtacag cacctccagg ctgctttctc 780 tcagtataag aaagttgagc tcttcccaaa tggccaaagt gtcggggaga agattttcaa 840 gacagcaggc tttgtaaaac catttacgga ggcacagctg ctgtgcacac aggctggtgg 900 acagttggcc tctccacgct ctgccgctga gaatgccgcc ttgcaacagc tggtcgtagc 960 taagaacgag gctgctttcc tgagcatgac tgattccaag acagagggca agttcaccta 1020 ccccacagga gagtccctgg tctattccaa ctgggcccca ggggagccca acgatgatgg 1080 cgggtcagag gactgtgtgg agatcttcac caatggcaag tggaatgaca gggcttgtgg 1140 agaaaagcgt cttgtggtct gcgagttctg agccaactgg ggtgggtggg gcagtgcttg 1200 gcccaggagt ttggccagaa gtcaaggctt agaccctcat gctgccaata tcctaataaa 1260 aaggtgacca tctgtgccgg gaaaaaaaaa aaaaaaaaa 1299 <210> 10 <211> 375 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 10 Met Leu Leu Phe Leu Leu Ser Ala Leu Val Leu Leu Thr Gln Pro Leu 1 5 10 15 Gly Tyr Leu Glu Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser His Arg Thr Met Pro 20 25 30 Ser Ala Cys Thr Leu Val Met Cys Ser Ser Val Glu Ser Gly Leu Pro 35 40 45 Gly Arg Asp Gly Arg Asp Gly Arg Glu Gly Pro Arg Gly Glu Lys Gly 50 55 60 Asp Pro Gly Leu Pro Gly Ala Ala Gly Gln Ala Gly Met Pro Gly Gln 65 70 75 80 Ala Gly Pro Val Gly Pro Lys Gly Asp Asn Gly Ser Val Gly Glu Pro 85 90 95 Gly Pro Lys Gly Asp Thr Gly Pro Ser Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly 100 105 110 Val Pro Gly Pro Ala Gly Arg Glu Gly Pro Leu Gly Lys Gln Gly Asn 115 120 125 Ile Gly Pro Gln Gly Lys Pro Gly Pro Lys Gly Glu Ala Gly Pro Lys 130 135 140 Gly Glu Val Gly Ala Pro Gly Met Gln Gly Ser Ala Gly Ala Arg Gly 145 150 155 160 Leu Ala Gly Pro Lys Gly Glu Arg Gly Val Pro Gly Glu Arg Gly Val 165 170 175 Pro Gly Asn Thr Gly Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Met Gly Pro Gln 180 185 190 Gly Ser Pro Gly Ala Arg Gly Pro Pro Gly Leu Lys Gly Asp Lys Gly 195 200 205 Ile Pro Gly Asp Lys Gly Ala Lys Gly Glu Ser Gly Leu Pro Asp Val 210 215 220 Ala Ser Leu Arg Gln Gln Val Glu Ala Leu Gln Gly Gln Val Gln His 225 230 235 240 Leu Gln Ala Ala Phe Ser Gln Tyr Lys Lys Val Glu Leu Phe Pro Asn 245 250 255 Gly Gln Ser Val Gly Glu Lys Ile Phe Lys Thr Ala Gly Phe Val Lys 260 265 270 Pro Phe Thr Glu Ala Gln Leu Leu Cys Thr Gln Ala Gly Gly Gln Leu 275 280 285 Ala Ser Pro Arg Ser Ala Ala Glu Asn Ala Ala Leu Gln Gln Leu Val 290 295 300 Val Ala Lys Asn Glu Ala Ala Phe Leu Ser Met Thr Asp Ser Lys Thr 305 310 315 320 Glu Gly Lys Phe Thr Tyr Pro Thr Gly Glu Ser Leu Val Tyr Ser Asn 325 330 335 Trp Ala Pro Gly Glu Pro Asn Asp Asp Gly Gly Ser Glu Asp Cys Val 340 345 350 Glu Ile Phe Thr Asn Gly Lys Trp Asn Asp Arg Ala Cys Gly Glu Lys 355 360 365 Arg Leu Val Val Cys Glu Phe 370 375 <210> 11 <211> 355 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 11 Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser His Arg Thr Met Pro Ser Ala Cys Thr 1 5 10 15 Leu Val Met Cys Ser Ser Val Glu Ser Gly Leu Pro Gly Arg Asp Gly 20 25 30 Arg Asp Gly Arg Glu Gly Pro Arg Gly Glu Lys Gly Asp Pro Gly Leu 35 40 45 Pro Gly Ala Ala Gly Gln Ala Gly Met Pro Gly Gln Ala Gly Pro Val 50 55 60 Gly Pro Lys Gly Asp Asn Gly Ser Val Gly Glu Pro Gly Pro Lys Gly 65 70 75 80 Asp Thr Gly Pro Ser Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Val Pro Gly Pro 85 90 95 Ala Gly Arg Glu Gly Pro Leu Gly Lys Gln Gly Asn Ile Gly Pro Gln 100 105 110 Gly Lys Pro Gly Pro Lys Gly Glu Ala Gly Pro Lys Gly Glu Val Gly 115 120 125 Ala Pro Gly Met Gln Gly Ser Ala Gly Ala Arg Gly Leu Ala Gly Pro 130 135 140 Lys Gly Glu Arg Gly Val Pro Gly Glu Arg Gly Val Pro Gly Asn Thr 145 150 155 160 Gly Ala Ala Gly Ser Ala Gly Ala Met Gly Pro Gln Gly Ser Pro Gly 165 170 175 Ala Arg Gly Pro Pro Gly Leu Lys Gly Asp Lys Gly Ile Pro Gly Asp 180 185 190 Lys Gly Ala Lys Gly Glu Ser Gly Leu Pro Asp Val Ala Ser Leu Arg 195 200 205 Gln Gln Val Glu Ala Leu Gln Gly Gln Val Gln His Leu Gln Ala 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ggaggaatgc caggcctccc tgggcgtgat gggatgactg gagcccctgg 300 cctccctgga gagcgtggag aaaagggaga gcctggcgag agaggtcctc cagggtttcc 360 agcatatcta gatgaagagc tccagggcac actccatgag atcagacatc aagtcctgca 420 gtcacagggc gtcctccgtt tgcaggggtc cgtgctggcg gtgggagaga aggtcttctc 480 taccaatggg cagtcagtca attttgatgc cattaaagag ttatgtgcca gagtaggtgg 540 acatattgct gccccgagga gtccagagga gaatgaagcc attgtgagca tcgtgaagaa 600 gtacaacact tatgcttacc tgggcctggt cgaaggcccc accgctggag acttctatta 660 cctggatgga gcccctgtga attataccaa ttggtaccca ggggagccca ggggccgggg 720 taaagagaag tgtgtagaaa tatacacaga tggtcagtgg aatgacaaga actgcctgca 780 gtaccgactg gccatctgtg agttctgagc aggcaccaaa gccacaggat ggacacagtc 840 ctatctttcc ttttagcctc catcctgggg atccacctgg tctatgaatc aggtgctata 900 attcccttgt ggctatcaga attgaaggca ctcttgagca ctccactcct gggtggatcc 960 tgactcctcc ccaatgatca ctaatcagtc tgactccccc agaacccctt ctcagcattg 1020 cactcttggc agccactcta actttgccct tctgcaagag acagaggttt ctttcctcct 1080 tttcttgtcc agttccttta tttatagatg gcaacagtaa ggtcctgaga tgaaggttcc 1140 ctccacagca ccacactgcc tacttcctgg cccccctcta ctctgtcttt gcagctcact 1200 gcttgcccag cctcatcaag atttagcagt gctgctcaag cacaatgata gatgtacttc 1260 tgggaaattt cacatgtgtg gagctaagga tacatttggg tttatctatc aacctgagat 1320 ctgtggggag gcatcttgtt aggctctcca tgaagtcaga gggccaggtg gtgctccagc 1380 atgatggaag ccaacttatt cctagtgatt ggcaggtatt atccacttcc ttgagtctta 1440 gggtgtcagc caacacctct aaggaagatg tcacccccac catagacatt acccaagtac 1500 ctgcctgctg atgaacacat tccccacctc ttcagaaatc agtgaggagt tcacgctcct 1560 tgtcacacca ccgtttattg agcacatact atataccaag caccgtgaca tgcacttcta 1620 agacatatga tttaatcttc acacagtgtc atgggatgag catcattttc cccaatcttt 1680 tatacaagga cactgaaatt tagagaagtt aaatgttttg catttttttt tttttaacat 1740 gaagcaattg gcagaggctg gtttcaaacc catctacctg gacctaaagc ttgtgctcat 1800 aattacctct ccttctcatt gaacagagat gattcacgtg taataaatca tgaatgtgtt 1860 aaaaaaaaaa aaaaaaaata aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1920 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1980 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaa 2037 <210> 13 <211> 248 <212> PRT <213> Bos sp. <400> 13 Met Leu Leu Cys Ser Leu Thr Leu Thr Leu Leu Trp Met Val Ala Ser 1 5 10 15 Gly Leu Glu Cys Asp Val Lys Glu Val Cys Leu Gly Ser Pro Gly Ile 20 25 30 Pro Gly Thr Pro Gly Ser His Gly Leu Pro Gly Arg Asp Gly Arg Asp 35 40 45 Gly Ile Lys Gly Asp Pro Gly Pro Pro Gly Pro Met Gly Pro Pro Gly 50 55 60 Gly Met Pro Gly Leu Pro Gly Arg Asp Gly Met Thr Gly Ala Pro Gly 65 70 75 80 Leu Pro Gly Glu Arg Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Glu Arg Gly Pro 85 90 95 Pro Gly Phe Pro Ala Tyr Leu Asp Glu Glu Leu Gln Gly Thr Leu His 100 105 110 Glu Ile Arg His Gln Val Leu Gln Ser Gln Gly Val Leu Arg Leu Gln 115 120 125 Gly Ser Val Leu Ala Val Gly Glu Lys Val Phe Ser Thr Asn Gly Gln 130 135 140 Ser Val Asn Phe Asp Ala Ile Lys Glu Leu Cys Ala Arg Val Gly Gly 145 150 155 160 His Ile Ala Ala Pro Arg Ser Pro Glu Glu Asn Glu Ala Ile Val Ser 165 170 175 Ile Val Lys Lys Tyr Asn Thr Tyr Ala Tyr Leu Gly Leu Val Glu Gly 180 185 190 Pro Thr Ala Gly Asp Phe Tyr Tyr Leu Asp Gly Ala Pro Val Asn Tyr 195 200 205 Thr Asn Trp Tyr Pro Gly Glu Pro Arg Gly Arg Gly Lys Glu Lys Cys 210 215 220 Val Glu Ile Tyr Thr Asp Gly Gln Trp Asn Asp Lys Asn Cys Leu Gln 225 230 235 240 Tyr Arg Leu Ala Ile Cys Glu Phe 245 <210> 14 <211> 1581 <212> DNA <213> Bos sp. <400> 14 ggtccaggct gtggaggtgc catggccaag tcacacctgc ttccatggct tctgctgctg 60 cccatactct gtggtccggg cactgctgct gcgatcacct attccctggc ctgtgcccag 120 ggccccgagt tctggtgtca aagtctggag caagcattgc agtgcagagc cctagggcac 180 tgcctgcagg aagtctgggg acatgtggaa gccgatgacc tgtgccagga atgtgagaac 240 atctcccgcc tcctcaccaa gatggccaag gaggccattt tccaggactc agtgcgcaaa 300 tttctggagc aggagtgcga tgtccttccg ctgaaactgt tggcgcccct gtgtcgccac 360 ctgctggaca cctatttccc tctgatcatt gagcacttcc agagccatat gaacccgaag 420 ttcatctgtc agcacgtggg cctatgcaag cccaggcacc cagagccagg gaaggggcca 480 gagccatggg gccctctgct ggacaagctg gccctccccc tgctgccagg ggtcccccag 540 gccaagcctg ggcctcagac acaggacctc tctgagcagc tgttccccat tcccatcccc 600 tactgctggc tctgccggac tctgatcaaa cggatccagg ctgtgattcc caagggtgtt 660 ctggccatga ctgtggccca ggtgtgccac gtggtccccc tgctggtggg cggcatctgc 720 cagtgcctgg ttgagcgcta ctcggtcatc ctcctggaca cgctgctagg ccgcatgctg 780 ccccagctgg tctgcggcct cgtcctccgg tgctccagtg aggacagcgc tggcccagcc 840 ctccctgccc tggggtccgt gcctggagaa tggctgccac aagactctga ctgccagctc 900 tgcatgtttg tgaccaccca ggcagggaac agcagtgagc aggccacgcc acaggcaatg 960 cgccaggcct gcctgggcac ctggctggac aggcaaaagt gtgagcggtt cgtggaggag 1020 aacgcgcccc ggctgcagac tctggtgtcc agtggctggg atgcccacat ggcctgccag 1080 gccctgggga catgtgcggc tccgttcagt cctctccagt gtgtccacag cccccacttc 1140 tgatgagaat gcacagccat ggcagcctgg aaccagaggc acttccgtcc actttgggag 1200 tgaggggtgg ccaaggcctc gtcttctgga caaggaatgc agatggggct tccggcccag 1260 ggccacctgc acatcccacc agtgccagcc caactctcac cacaccccca gcactgggct 1320 gatgggacct tgtcgtgggc ccccagtcct tctctaagtc ctggcatcaa gaggacagcg 1380 gagggagaat cctgtgctgg cgtcactccc atctccatgt gcatgagatg ctagctttta 1440 caatcactct gctaacgctt tcacaaaatt aagaattcgg aagaataaaa gtgggaacag 1500 aaagtcccag aaaagacaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1560 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a 1581 <210> 15 <211> 373 <212> PRT <213> Bos sp. <400> 15 Met Ala Lys Ser His Leu Leu Pro Trp Leu Leu Leu Leu Pro Ile Leu 1 5 10 15 Cys Gly Pro Gly Thr Ala Ala Ala Ile Thr Tyr Ser Leu Ala Cys Ala 20 25 30 Gln Gly Pro Glu Phe Trp Cys Gln Ser Leu Glu Gln Ala Leu Gln Cys 35 40 45 Arg Ala Leu Gly His Cys Leu Gln Glu Val Trp Gly His Val Glu Ala 50 55 60 Asp Asp Leu Cys Gln Glu Cys Glu Asn Ile Ser Arg Leu Leu Thr Lys 65 70 75 80 Met Ala Lys Glu Ala Ile Phe Gln Asp Ser Val Arg Lys Phe Leu Glu 85 90 95 Gln Glu Cys Asp Val Leu Pro Leu Lys Leu Leu Ala Pro Leu Cys Arg 100 105 110 His Leu Leu Asp Thr Tyr Phe Pro Leu Ile Ile Glu His Phe Gln Ser 115 120 125 His Met Asn Pro Lys Phe Ile Cys Gln His Val Gly Leu Cys Lys Pro 130 135 140 Arg His Pro Glu Pro 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gctatagttg cttcctgtag gactgcagac tccagtacta gtctgtccag 60 agcaacaagt gataggaaac aagccagcat tgtaagagga catgcttctc ctccctctct 120 ccgtgctgct cctgctcaca cagccctgga gatccctggg agcagaaatg aagatctatt 180 cccagaaaac aatggccaac gcctgtaccc tggtcatgtg tagccccccg gaggatggtt 240 tgcctggtcg tgatggacga gatgggagag aaggcccccg gggggagaag ggagatccag 300 gttcaccagg acctgcagga cgagcaggaa tgcctggacc agctggccct attgggctga 360 aaggagacaa tggctctgct ggagaacccg gaccaaaggg agacactgga ccacctgggc 420 ctccaggtat gcctggacca gctggaagag agggcccctc agggaagcag gggagcatgg 480 gacctccagg cacaccaggc cccaaaggag acactgggcc caaaggagga gtgggtgccc 540 caggcattca gggctcccca ggccctgcag gtctcaaagg agagagaggt gcccctggtg 600 agcccggagc ccctggacgt gctggggcac cagggcctgc tggagccata ggtccacagg 660 ggccttcagg tgccaggggc cccccaggac tgaagggaga cagaggtact cctggagaaa 720 gaggagcaaa gggggagagt gggcttgcag aggtcaatgc tctcaggcag cgggtgggaa 780 tcttagaggg acaactacaa cggctccaga atgccttctc tcagtataag aaagcgatgc 840 tcttccctaa tggccggagt gtcggggaga agatctttaa gacggtaggc tctgaaaaaa 900 cgtttcagga tgcccagcag atctgcacac aggctggagg acagttgccc tccccacgtt 960 ctggagctga aaacgaggcc ttgactcagc tggccacagc ccagaacaag gctgctttcc 1020 tgagcatgag cgacaccagg aaggagggta ctttcatcta ccccacgggg gagcccctgg 1080 tctattccaa ctgggccccc caggagccca acaatgatgg cggctcagag aactgtgtgg 1140 agatctttcc caatggcaag tggaatgaca aagtctgcgg agagcagcgc ctcgtgatct 1200 gcgagttctg agctcctcct gcacacacac acacacatag tgtgtgtgtt ggggcggtgg 1260 gggtcggggg gggggatggg cagtgcccag agctgcattt ttccagtgtt tgaataaaat 1320 agtgaccctc tactggccag ggcttctcca cagagccaca ggataaggcc agaggcaggg 1380 ctcctatgga atacatccct cagaataaag tttgaaactg gcttcacaca aaaaaaaaaa 1440 aaaaaccgga attc 1454 <210> 19 <211> 369 <212> PRT <213> Bos sp. <400> 19 Met Leu Leu Leu Pro Leu Ser Val Leu Leu Leu Leu Thr Gln Pro Trp 1 5 10 15 Arg Ser Leu Gly Ala Glu Met Lys Ile Tyr Ser Gln Lys Thr Met Ala 20 25 30 Asn Ala Cys Thr Leu Val Met Cys Ser Pro Pro Glu Asp Gly Leu Pro 35 40 45 Gly Arg Asp Gly Arg Asp Gly Arg Glu Gly Pro Arg Gly Glu Lys Gly 50 55 60 Asp Pro Gly Ser Pro Gly Pro Ala Gly Arg Ala Gly Met Pro Gly Pro 65 70 75 80 Ala Gly Pro Ile Gly Leu Lys Gly Asp Asn Gly Ser Ala Gly Glu Pro 85 90 95 Gly Pro Lys Gly Asp Thr Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly Met Pro Gly 100 105 110 Pro Ala Gly Arg Glu Gly Pro Ser Gly Lys Gln Gly Ser Met Gly Pro 115 120 125 Pro Gly Thr Pro Gly Pro Lys Gly Asp Thr Gly Pro Lys Gly Gly Val 130 135 140 Gly Ala Pro Gly Ile Gln Gly Ser Pro Gly Pro Ala Gly Leu Lys Gly 145 150 155 160 Glu Arg Gly Ala Pro Gly Glu Pro Gly Ala Pro Gly Arg Ala Gly Ala 165 170 175 Pro Gly Pro Ala Gly Ala Ile Gly Pro Gln Gly Pro Ser Gly Ala Arg 180 185 190 Gly Pro Pro Gly Leu Lys Gly Asp Arg Gly Thr Pro Gly Glu Arg Gly 195 200 205 Ala Lys Gly Glu Ser Gly Leu Ala Glu Val Asn Ala Leu Arg Gln Arg 210 215 220 Val Gly Ile Leu Glu Gly Gln Leu Gln Arg Leu Gln Asn Ala Phe Ser 225 230 235 240 Gln Tyr Lys Lys Ala Met Leu Phe Pro Asn Gly Arg Ser Val Gly Glu 245 250 255 Lys Ile Phe Lys Thr Val Gly Ser Glu Lys 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540 ggaggagggc cgtgtcgctg gctcagcacc ctccggggac ctggccttcc tgggcagcac 600 catgagcacc ctgtgtggcg aagtgcccct cttgtacatc taggaaacat cagggcctca 660 ggaagcccca agaggacagc aaagatccag gagcaaagag tcttgtgcag actcacagga 720 agccgcttct gggacaccac ggggactggc cctggagaaa tgggagctgt ggggagaggt 780 gggcagagga gaagcagctg ttaggggccc gggggcttct accaccaaag aataaagcag 840 cctgattgaa aaaaaaaaaa aaaaaaa 867 <210> 25 <211> 190 <212> PRT <213> Sus sp. <400> 25 Met Asp Val Gly Ser Lys Glu Val Leu Met Glu Ser Pro Pro Asp Tyr 1 5 10 15 Ser Ala Val Pro Gly Gly Arg Leu Arg Ile Pro Cys Cys Pro Val Asn 20 25 30 Leu Lys Arg Leu Leu Val Val Val Val Val Val Val Leu Val Val Val 35 40 45 Val Ile Val Gly Ala Leu Leu Met Gly Leu His Met Ser Gln Lys His 50 55 60 Thr Glu Met Val Leu Glu Met Ser Leu Ala Gly Pro Glu Ala Gln Gln 65 70 75 80 Arg Leu Ala Leu Ser Glu His Val Gly Thr Thr Ala Thr Phe Ser Ile 85 90 95 Gly Ser Ser Gly Asn Val Val Tyr Asp Tyr Gln Arg Leu Leu Ile Ala 100 105 110 Tyr Lys Pro Ala Pro Gly Thr Cys Cys Tyr 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aaaaaaaaaa 1380 aaaaa 1385 <210> 27 <211> 378 <212> PRT <213> Sus sp. <400> 27 Met Leu Leu Leu Pro Leu Ser Val Leu Ile Leu Leu Thr Gln Pro Pro 1 5 10 15 Arg Ser Leu Gly Ala Glu Met Lys Thr Tyr Ser Gln Arg Ala Val Ala 20 25 30 Asn Ala Cys Ala Leu Val Met Cys Ser Pro Met Glu Asn Gly Leu Pro 35 40 45 Gly Arg Asp Gly Arg Asp Gly Arg Glu Gly Pro Arg Gly Glu Lys Gly 50 55 60 Asp Pro Gly Leu Pro Gly Ala Val Gly Arg Ala Gly Met Pro Gly Leu 65 70 75 80 Ala Gly Pro Val Gly Pro Lys Gly Asp Asn Gly Ser Thr Gly Glu Pro 85 90 95 Gly Ala Lys Gly Asp Ile Gly Pro Cys Gly Pro Pro Gly Pro Pro Gly 100 105 110 Ile Pro Gly Pro Ala Gly Lys Glu Gly Pro Ser Gly Gln Gln Gly Asn 115 120 125 Ile Gly Pro Pro Gly Thr Pro Gly Pro Lys Gly Glu Thr Gly Pro Lys 130 135 140 Gly Glu Val Gly Ala Leu Gly Met Gln Gly Ser Thr Gly Ala Arg Gly 145 150 155 160 Pro Ala Gly Leu Lys Gly Glu Arg Gly Ala Pro Gly Glu Arg Gly Ala 165 170 175 Pro Gly Ser Ala Gly Ala Ala Gly Pro Ala Gly Ala Thr Gly Pro Gln 180 185 190 Gly Pro Ser Gly Ala Arg Gly Pro Pro Gly Leu Lys Gly Asp Arg Gly 195 200 205 Pro Pro Gly Glu Arg Gly Ala Lys Gly Glu Ser Gly Leu Pro Gly Ile 210 215 220 Thr Ala Leu Arg Gln Gln Val Glu Thr Leu Gln Gly Gln Val Gln Arg 225 230 235 240 Leu Gln Lys Ala Phe Ser Gln Tyr Lys Lys Val Glu Leu Phe Pro Asn 245 250 255 Gly Arg Gly Val Gly Glu Lys Ile Phe Lys Thr Gly Gly Phe Glu Lys 260 265 270 Thr Phe Gln Asp Ala Gln Gln Val Cys Thr Gln Ala Gly Gly Gln Met 275 280 285 Ala Ser Pro Arg Ser Glu Thr Glu Asn Glu Ala Leu Ser Gln Leu Val 290 295 300 Thr Ala Gln Asn Lys Ala Ala Phe Leu Ser Met Thr Asp Ile Lys Thr 305 310 315 320 Glu Gly Asn Phe Thr Tyr Pro Thr Gly Glu Pro Leu Val Tyr Ala Asn 325 330 335 Trp Ala Pro Gly Glu Pro Asn Asn Asn Gly Gly Ser Ser Gly Ala Glu 340 345 350 Asn Cys Val Glu Ile Phe Pro Asn Gly Lys Trp Asn Asp Lys Ala Cys 355 360 365 Gly Glu Leu Arg Leu Val Ile Cys Glu Phe 370 375 <210> 28 <211> 1901 <212> DNA <213> Ovis sp. <400> 28 agcatgggct gtgttcgtgc aggaggagcc gctggagcag gcgccatgct gctgtgctct 60 ttgaccctta tgctcctctg gatggtggct tctggcctcg agtgcgacac aaaggaagtt 120 tgtcttggaa gccctggcat tcctggcact cccggatccc atggcctgcc aggaagagat 180 gggagagatg gtatcaaagg agaccctggg cctccaggcc ccatgggccc ccctggagga 240 atgccaggcc tccctgggcg tgatgggatg actggagccc ctggcctccc tggagaacgt 300 ggagaaaagg gagagcctgg cgagagaggt cctccagggt ttccagcgta tctagatgaa 360 gagctccagg gcacactcca tgagatcaga catcaagtcc tgcagtcaca gggcgtcctc 420 attttgcagg ggtccatgct ggaagtggga gagaaggtct tctctaccaa tgggcagtca 480 ctcaattttg atgccattaa agagttatgt gccagagcag gtggacacat cgctgcccca 540 aggagtccgg aggagaatga ggccattacc agcatcgtga agaagcacaa cacttatgct 600 tacctggggc tggctgaagg ccccaccgct ggagacttct attacctgga tggagcccct 660 gtgaattata ccaactggta cccaggggag cccaggggcc ggggtaaaga gaagtgtgta 720 gagatataca cagatggtca gtggaatgac aagaactgcc tgcagtaccg actggccatc 780 tgtgagttct gagcaggcac caaagccaca ggatggacag agtcctatct ttcctttcag 840 cctccatcct gggaatccac ctggtctatg gatcaggtgc tataattcct ttgtggctat 900 cagaagtgaa ggcactcttg atcactccac tcctgggtgg atcctaactc ctccccaatg 960 atcactaatc agtctgactc ccccagaacc ccttctcagc attgcactct tggcagccac 1020 tctaactttg cccttctgca agagacagag gtttctttcc tcctcttctt gtccagttcc 1080 tttatttata gatggcaaca gtaaggtcct gagatgaagg ttccctccat agcaccacac 1140 tgggtgcctg cttcctggcc ccctctactc tgtctttgca gctcactgct tgcccagcct 1200 catcaagatt tagcagttct gctcaagcac aatgataggt ggacttctgg gaaatttcac 1260 acatgtggag ctaaggatac atttgggttt atctatcaac ctgagatcta tggggaggca 1320 tcttgttagg ctctccatga agtcagaggg tcaggtggtg ctccagcatg atggaggcca 1380 atttattcct agtgattggc aggtattatc cacttccttg agtcttgggg tgtcagccag 1440 cgcctctaag gaagatctta cccccaccgt agacattacc caagtaactg cctgctgatg 1500 aacacattcc ccacctcttc agaactcagt gaggagttca caccacttgt cacaccacca 1560 tttattgagc acatactata caccaagcac cttgacatgc acttctaaaa catcttatgt 1620 gatttaatct tcacacagtg tcatgggatg agcattattt tccccaatct tttatataac 1680 aacgctgaaa tttagagaag ttaaatgttt tgagtttctt tttttaaaca tgaagcaatt 1740 ggcagaggct ggtttcaaac tcatctacct ggacctgaag cttgtgctca taaccacccc 1800 acctcactga acagagatga ttcaagtgta ataaatcatg actgtgttaa aaaaaaaaaa 1860 aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa a 1901 <210> 29 <211> 248 <212> PRT <213> Ovis sp. <400> 29 Met Leu Leu Cys Ser Leu Thr Leu Met Leu Leu Trp Met Val Ala Ser 1 5 10 15 Gly Leu Glu Cys Asp Thr Lys Glu Val Cys Leu Gly Ser Pro Gly Ile 20 25 30 Pro Gly Thr Pro Gly Ser His Gly Leu Pro Gly Arg Asp Gly Arg Asp 35 40 45 Gly Ile Lys Gly Asp Pro Gly Pro Pro Gly Pro Met Gly Pro Pro Gly 50 55 60 Gly Met Pro Gly Leu Pro Gly Arg Asp Gly Met Thr Gly Ala Pro Gly 65 70 75 80 Leu Pro Gly Glu Arg Gly Glu Lys Gly Glu Pro Gly Glu Arg Gly Pro 85 90 95 Pro Gly Phe Pro Ala Tyr Leu Asp Glu Glu Leu Gln Gly Thr Leu His 100 105 110 Glu Ile Arg His Gln Val Leu Gln Ser Gln Gly Val Leu Ile Leu Gln 115 120 125 Gly Ser Met Leu Glu Val Gly Glu Lys Val Phe Ser Thr Asn Gly Gln 130 135 140 Ser Leu Asn Phe Asp Ala Ile Lys Glu Leu Cys Ala Arg Ala Gly Gly 145 150 155 160 His Ile Ala Ala 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tggctttccc 1320 ctcacagacc accctctgca tgcactgatc ctcagtacca aatgtgcttg caccaagccc 1380 tgcctttcct gaaactcagg ggacaccaga cattgctccc caaagatgcc aggaactcct 1440 ccatcgcctg actcctccta cctgagactc ctccctgtct ccctcaatgt cactgggtca 1500 gaggtgaccc cttaggacag agtgggggtc agaggcagac tccatgccag gtgcctccgg 1560 agagggaagc gcccctgaga agagacctgg caacttcaca gttctgtcca gagcaagccc 1620 ccaacatgaa ggtcatgtat tcaaaaaaaa aaaaaaaaaa 1660 <210> 31 <211> 374 <212> PRT <213> Ovis sp. <400> 31 Ala Lys Ser Arg Leu Leu Pro Trp Leu Leu Leu Leu Leu Pro Met Leu 1 5 10 15 Cys Gly Leu Gly Ser Ala Ala Val Gly Thr Thr Tyr Ser Leu Thr Cys 20 25 30 Ala Gln Gly Pro Thr Phe Trp Cys Gln Ser Leu Glu Gln Ala Leu Gln 35 40 45 Cys Arg Ala Leu Gly His Cys Leu Gln Glu Val Trp Gly His Ala Glu 50 55 60 Ala Asp Asp Leu Cys Gln Glu Cys Glu Asn Ile Ser Arg Ile Leu Thr 65 70 75 80 Lys Met Ala Lys Glu Ala Ile Phe Gln Asp Thr Val Arg Lys Phe Leu 85 90 95 Glu Gln Glu Cys Asp Val Leu Pro Leu Lys Leu Leu Val Pro Gln Cys 100 105 110 Arg His 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Leu Asp Arg Gln Lys Cys Glu Gln Phe Val Glu Glu His Ala 325 330 335 Pro Arg Leu Gln Thr Leu Val Ser Ser Gly Trp Asp Ala His Met Ala 340 345 350 Cys Gln Ala Leu Gly Thr Cys Ala Thr Pro Phe Ser Pro Leu Gln Cys 355 360 365 Ile His Ser Pro His Phe 370 <210> 32 <211> 809 <212> DNA <213> Ovis sp. <400> 32 gtctacagca agatggatgt gggcagcaaa gaggtcttga tggagagccc gccggactac 60 tcagcagtcc ccgggggccg gctccgcatc ccctgctgtc ccgtgaacat caaacgcctt 120 ctcatcgtgg ttgtggttgt ggtccttgtc gtcgtggtga tcgtaggagc cctgctcatg 180 ggtcttcaca tgagccagaa acatacagag atggttctag agatgagcat cgcaggcccg 240 gaagcacagc aacgcctggc cctgagtgag cgtgtgggaa ccactgccac tttctccatc 300 ggctccactg gcactgtggt gtatgactac cagcggctcc tgattgccta caagccagcc 360 cccggaacct gctgctacat tatgaaggtg gctccgcaga gcatcccaag tctcgaggct 420 ctcactagaa aattgccgaa cttccaggcc aagcccccag tgccttcctc gaagctgggc 480 caggagcagg gccgtgacgc cggctcagca ttctctgggg acctggcctt cctgggcagg 540 accgtgagca ccctgtgtgg cgaggtgccc ctgtactaca cttaggactg gtcagggcct 600 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Ser Lys Leu Gly Gln Glu Gln Gly 145 150 155 160 Arg Asp Ala Gly Ser Ala Phe Ser Gly Asp Leu Ala Phe Leu Gly Arg 165 170 175 Thr Val Ser Thr Leu Cys Gly Glu Val Pro Leu Tyr Tyr Thr 180 185 190 <210> 34 <211> 304 <212> DNA <213> Ovis sp. <400> 34 ttccctgatg gccggagtgt cgggaagaag atctttaaga cggcaggctc tgaaaaaacg 60 tttcaggatg cccagcaggt ctgcacacag gctggaggac agctgccctc cccacgttct 120 gcagctgaga atgaggcttt gactcagctg gccacagccc agaacaagac tgctttcctg 180 agcatgaccg ataccaggaa ggagggtact ttcatctacc ccacggggga gcccctggtc 240 tattccaact gggcccccca ggagcccaac aatgatggcg gctcagagaa ctgtgtggag 300 atct 304 <210> 35 <211> 101 <212> PRT <213> Ovis sp. <400> 35 Phe Pro Asp Gly Arg Ser Val Gly Lys Lys Ile Phe Lys Thr Ala Gly 1 5 10 15 Ser Glu Lys Thr Phe Gln Asp Ala Gln Gln Val Cys Thr Gln Ala Gly 20 25 30 Gly Gln Leu Pro Ser Pro Arg Ser Ala Ala Glu Asn Glu Ala Leu Thr 35 40 45 Gln Leu Ala Thr Ala Gln Asn Lys Thr Ala Phe Leu Ser Met Thr Asp 50 55 60 Thr Arg Lys Glu Gly Thr Phe Ile Tyr Pro Thr Gly Glu 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Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile Leu Leu Asp Thr Leu Leu Gly Arg 50 55 60 Met 65 <210> 49 <211> 64 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile Leu Leu Asp Thr Leu Leu Gly Arg 50 55 60 <210> 50 <211> 63 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile Leu Leu Asp Thr Leu Leu Gly 50 55 60 <210> 51 <211> 62 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile Leu Leu Asp Thr Leu Leu 50 55 60 <210> 52 <211> 61 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile Leu Leu Asp Thr Leu 50 55 60 <210> 53 <211> 60 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 53 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile Leu Leu Asp Thr 50 55 60 <210> 54 <211> 59 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 54 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile Leu Leu Asp 50 55 <210> 55 <211> 58 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 55 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile Leu Leu 50 55 <210> 56 <211> 57 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile Leu 50 55 <210> 57 <211> 56 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val Ile 50 55 <210> 58 <211> 55 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser Val 50 55 <210> 59 <211> 54 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr Ser 50 <210> 60 <211> 53 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 60 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg Tyr 50 <210> 61 <211> 52 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu Arg 50 <210> 62 <211> 51 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala Glu 50 <210> 63 <211> 50 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 63 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu Ala 50 <210> 64 <211> 49 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 Leu <210> 65 <211> 48 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 65 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln Cys 35 40 45 <210> 66 <211> 47 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 66 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys Gln 35 40 45 <210> 67 <211> 46 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile Cys 35 40 45 <210> 68 <211> 45 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly Ile 35 40 45 <210> 69 <211> 44 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly Gly 35 40 <210> 70 <211> 43 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala Gly 35 40 <210> 71 <211> 42 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val Val Pro Leu Val Ala 35 40 <210> 72 <211> 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Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg Val 35 <210> 77 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys Arg 35 <210> 78 <211> 35 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val Cys 35 <210> 79 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln Val <210> 80 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 Gln <210> 81 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 81 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val Ala 20 25 30 <210> 82 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala Val 20 25 30 <210> 83 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 83 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val Ala 20 25 30 <210> 84 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala Val 20 25 <210> 85 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 85 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu Ala 20 25 <210> 86 <211> 27 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 86 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala Leu 20 25 <210> 87 <211> 26 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 87 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly Ala 20 25 <210> 88 <211> 25 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 88 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys Gly 20 25 <210> 89 <211> 24 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro Lys 20 <210> 90 <211> 23 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 90 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile Pro 20 <210> 91 <211> 22 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met Ile 20 <210> 92 <211> 21 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 92 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala Met 20 <210> 93 <211> 20 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93 Phe Pro Ile Pro Leu Pro Tyr Cys Trp Leu Cys Arg Ala Leu Ile Lys 1 5 10 15 Arg Ile Gln Ala 20 <210> 94 <211> 21 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <221> source <223> /note="Description of artificial sequence: Synthetic peptide" <400> 94 Lys Leu Leu Leu Leu Lys Leu Leu Leu Leu Lys Leu Leu Leu Leu Lys 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Lys 20

Claims (20)

  1. 사람에게 실질적으로 비-면역원성인 포유류 폐 계면활성제(surfactant) 폴리펩타이드 또는 그의 모방체의 적어도 일부분을 포함하는, 사람 폐포/가스 계면에의 친화성을 특징으로 하는 표면 활성제(surface active agent); 및,
    상기 표면 활성제에 공유 결합된,
    폐/가스 계면에 접근 가능한 세포외 또는 세포 표면-결합된 표적에 결합하는 폐 활성 약물
    을 포함하는, 흡입용으로 제형화된 약물 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 표면 활성제가 사람 폐 계면활성제, 돼지 또는 소 폐 계면활성제와 같은 사람이 아닌 포유류 폐 계면활성제, 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드의 결실 또는 아미노산 치환 변이체를 포함하는 펩타이드모방체 또는 그의 일부분을 포함하는, 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 표면 활성제가 포유류 폐 계면활성제 부분(moiety)의 폴리펩타이드 성분의 합성 또는 재조합적으로 생성된 일부분을 포함하는, 조성물.
  4. 제3항에 있어서, 상기 표면 활성제가 SP-A, SP-B, SP-C, SP-D의 적어도 일부분 또는 이들의 혼합물을 포함하는, 조성물.
  5. 제3항에 있어서, 상기 표면 활성제가 SP-B의 N-말단으로부터의 25개의 아미노산 절편과 같은, SP-B의 적어도 일부분을 포함하는, 조성물.
  6. 제1항에 있어서, 지질을 추가로 포함하는, 조성물.
  7. 제1항에 있어서, 상기 표면 활성제가 포유류의 폐로부터 수집된 포유류 폐 계면활성제를 포함하거나, 이로부터 유래되는, 조성물.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐 활성 약물이 엘라스타아제 억제제, 코르티코스테로이드, 기관지확장제, 항생제 및 화학치료학적 제제로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조성물.
  9. 제8항에 있어서, 상기 폐 활성 약물이 베타메타손, 부데소나이드, 코르티손, 덱사메타손, 하이드로코르티손, 메틸프레드니솔론, 프레드니솔론, 프레드니손 및 트리암시놀론으로부터 선택되는 코르티코스테로이드인, 조성물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐 활성 약물이 살부타몰, 알부테롤, 테르부탈린, 페노테롤, 페노테롤 하이드로브로마이드, 리미테롤, 레프로테롤, 피르부테롤, 이소프레날린, 오르시프레날린, 비톨테롤, 브록사테롤, 살메테롤, 살메테롤 크시나포에이트, 포르모테롤, 포르모테롤 푸마레이트, 클렌부테롤, 프로카테롤, 이프라트로퓸, 이프라트로퓸 브로마이드, 티오트로퓸, 티오트로퓸 브로마이드 1수화물, 아미노필릴린, 이오르시프레날린, 옥소트리필린, 테르부탈린 설페이트 및 테오필린으로부터 선택되는 기관지확장제인, 조성물.
  11. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐 활성 약물이 아목시실린, 암피실린, 바캄피실린, 카르베니실린, 카르베니실린 인다닐, 메즐로실린, 피페라실린, 티카르실린, 아목시실린-클라불라닉산, 암피실린-설박탐, 벤질페니실린, 클록사실린, 디클록사실린, 페녹시메틸페니실린, 카르베니실린, 메티실린, 옥사실린, 페니실린 G(벤자틴, 칼륨, 프로카인), 페니실린 V, 프로피실린, 에피실린, 시클라실린, 피페라실린 플러스 타조박탐, 티카르실린 플러스 클라불라닉산, 나피실린, 세파드록실, 세파졸린, 세팔렉신, 세팔로틴, 세파피린, 세프라딘, 세파클로르, 세파만돌, 세포이시드, 세포라니드, 세폭시틴, 세프프로질, 세프트메타졸, 세푸록심, 세푸록심 악세틸, 로라카르베프, 세프디니르, 세프티부텐, 세프디토렌, 세파타메트, 세포페라존, 세픽심, 세포탁심, 세프포독심, 세프타지딤, 세프티부텐, 세프티족심, 세프트리아옥손, 세페핌, 아지트로마이신, 클라리트로마이신, 클린다마이신, 디리트로마이신, 에리트로마이신, 린코마이신, 텔리트로마이신, 트롤레안도마이신, 아즈트레오남, 도리페넴, 이미페넴-실라스타틴, 메로페넴, 아미카신, 아미카신 설페이트, 젠타미신, 젠타미신 설페이트, 카나마이신, 메틸미신, 네오마이신, 네틸미신, 스트렙토마이신, 토브라마이신, 파로마이신, 달바반신, 오리타반신, 텔라반신, 테이코플라닌, 반코마이신, 뎀클로실린, 독시시클린, 메타실린, 미노실린, 옥시테트라시클린, 테트라실린, 클로레트라시클린, 리네졸리드, 퀴노프리시틴 플러스 달포프리스틴, 마페니드, 은 설파디아진, 설파세타미드, 설파디아진, 설파메톡사졸, 설파살진, 설파닐아미드, 설피속사졸, 트리메토프림-설파메톡사졸, 설파메티졸, 박시트라신, 클로람페니칼, 콜리스테메테이트, 포스포마이신, 이소니아지드, 메테나민, 메트로니다졸, 무피로신, 니트로푸란토인, 니트로푸라존, 노보비오신, 폴리믹신 B, 스펙티노마이신, 트리메토프림, 콜리스틴, 사이클로세린, 카프레오마이신, 피라지나미드, 파라-아미노살리실산, 에리트로마이신 에틸석시네이트 플러스 설피속사졸 및 티제사이클린으로 이루어진 군으로부터 선택되는 항생제인, 조성물.
  12. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 폐 활성 약물이 알킬화제, 항에스트로겐, 아클라루비신, 악티노마이신 D, 알데스류킨, 알렘투주마브, 알리트레티노인, 알로푸리놀, 알트레타민, 아미포스틴, 아나스트로졸, 아스파라기나아제, 벡사로텐, 비산트렌, 블레오마이신, 부설판, BCNU(카르무스틴), 칼루스테론, 카페시타빈, 카르보플라틴, 셀레콕시브, 클로람부실, 시스플라틴, 클라드리빈, 사이클로포스파미드, 사이클로옥시게나아제-2 억제제, 시트라빈, CCNU(로무스틴), 다카르바진, 다우노루빈, 다우노마이신, 데닐류킨 디프티톡스, 덱스라족산, 디아지쿠온, 도세탁셀, 독소루비신, 에피루비신, 에포에틴 알파, 에소루비신, 에스트라무스틴, 에토포시드(VP-16), 엑세메스탄, 필그라스팀, 플록수리딘, 플루다라빈, 5-플루오로우라실, 풀베스트란트, 갈락티톨, 젬시타빈, 젬투주마브, 고세렐린 아세테이트, 하이드록시우레아, 이브리투모마브 티욱세탄, 이다루비신, 이포스파미드, 이마티니브 메실레이트, 인터페론 알파, 인터페론 감마, 이리니오테칸, 이로플라틴, 레트로졸, 류코보린, 레바미솔, 로니다민, 메그레스트롤 아세테이트, 멜팔란, 메르캅토푸린, 메스나, 메토트렉세이트, 메톡스살렌, 미토마이신 C, 미토탄, 미토크산트론, 미토구아존, 난드롤론 펜프로피오네이트, 노페투모마브, 질소 머스타드, 오프렐베킨, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파미드로네이트, 페가데마아제, 페가스파르가아제, 페그필그라스팀, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 포르피메르 나트륨, 프로카르바진, 프로제스틴, 프레드니무스틴, PCNU, 퀴나크린, 라스부리카아제, 리툭시마브, 사르그라모스팀, 스트렙토조신, 탈크, 타목시펜, 테모졸로미드, 테니포시드(VM-26), 테스토락톤, 티오구아닌, 티오테파, 토포테칸, 토레미펜, 토시투모마브, 트라스투주마브, 테르티노인, 우라실 머스타드, 발루비신, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 빈데스틴, 비노렐빈 및 졸레드로네이트로 이루어진 군으로부터 선택되는 화학치료학적 제제인, 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 사람 환자가 사용하기 위한 흡입 장치에 배치된, 조성물.
  14. 폐 질환으로 고생하거나 폐 질환의 위험이 있는 사람을 치료하는 방법으로서,
    사람 폐포/가스 계면에의 친화성을 특징으로 하는 표면 활성제에 공유 결합된 폐 치료용 약물을 포함하는 접합체(conjugate)를 제공하며, 여기서 상기 표면 활성제는 사람에게 실질적으로 비-면역원성인 포유류 폐 계면활성제 폴리펩타이드 또는 그의 모방체의 적어도 일부분을 포함하는 단계, 및
    상기 접합체를 폐에서 약물 효과를 유도하기에 유효한 양으로 흡입에 의해 사람에게 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 투여가 비접합된 약물의 흡입 투여에 비하여 상기 약물의 전신 생체이용률을 감소시키는, 방법.
  16. 제14항에 있어서, 상기 투여가 비접합된 약물의 흡입 투여에 비하여 폐에서의 상기 약물의 체류 시간을 증가시키는, 방법.
  17. 제14항에 있어서, 상기 투여 단계가 날마다, 2일마다, 3일마다, 5일마다 또는 매주마다 1회 반복되는, 방법.
  18. 제14항에 있어서, 상기 투여 단계가 흡입 장치를 사용하여 수행되는, 방법.
  19. 제14항에 있어서, 상기 제공된 접합체가 제1항 내지 제13중 어느 한 항의 조성물을 포함하는, 방법.
  20. 사람 폐의 질환 또는 상태를 치료하기 위한 약물의 제조에 있어서의 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 조성물의 용도.
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