KR20100001773A - 2차 효소반응을 이용하여 헤마토코커스 풀루비알리스균주로부터 아스타잔틴의 추출방법 - Google Patents

2차 효소반응을 이용하여 헤마토코커스 풀루비알리스균주로부터 아스타잔틴의 추출방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 2차 효소반응을 이용하여 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출방법에 관한 것으로 보다 상세하게는 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출에 있어서, 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소를 첨가하여 1차 효소반응시키는 단계; 및 상기 1차 효소반응 후 단백질 분해효소를 첨가하여 2차 효소반응을 시키는 단계를 포함하는 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출방법에 관한 것이다.
2차 효소반응, 헤마토코커스 풀루비알리스, 아스타잔틴

Description

2차 효소반응을 이용하여 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출방법{Method of extraction for astaxanthin from Haematococcus pluvialis using second enzyme reaction}
본 발명은 2차 효소반응을 이용하여 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출방법에 관한 것으로 보다 상세하게는 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출에 있어서, 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소를 첨가하여 1차 효소반응시키는 단계; 및 상기 1차 효소반응 후 단백질 분해효소를 첨가하여 2차 효소반응을 시키는 단계를 포함하는 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출방법에 관한 것이다.
의료수준의 향상, 고른 영양섭취에 의한 고령화 인구의 증가추세에 따른 현대인의 건강에 대한 관심 증가 및 삶의 질에 대한 인식변화와 더불어 노화억제와 질병치료에 영향을 미치는 기능성 식품과 천연물에 대한 관심이 높아지고 있다.
노화억제에 대한 기능성 물질로서 항산화 물질에 대한 관심이 증가되고 있 다.
항산화 물질로서 지용성 비타민 E인 알파-토코페롤(α-tocopherol)이 널리 알려져 있으며, 이외에도 아스타잔틴(astaxanthin)이 있다.
알파-토코페롤에 비하여 항산화력이 550배에 해당하는 강력한 항산화 물질인 아스타잔틴(astaxanthin, 3,3'-dihydroxy-β,β'-carotene-4,4'-dione)은 갑각류, 조류 등의 해양생물에 존재하는 케토-카로티노이드(keto-carotenoid)로서 베타-카로틴(β-carotene)과 매우 유사한 구조를 지니고 있다(Shimidzu et al., Carotenoids as singlet oxygen quenchers in marine organisms. Fish. Sci., 62, 134-137. 1996).
기존에 상용화된 아스타잔틴은 화학적으로 합성하거나 갑각류나 미생물에서 추출하여 생산되고 있다. 화학적으로 합성된 아스타잔틴은 대부분 유리형태(free astaxanthin)로 생체 내에서 활성이 감소되고, 빛이나 온도에 대한 안정성이 낮아 사용에 제한이 있는 실정이다. 게, 새우 등의 갑각류로부터 추출에 의해 제조된 아스타잔틴도 높은 회분과 키틴 함량으로 사용이 제한되고 있고, 효모인 파피아 로도지마(Phaffia rhodozyma)는 효모의 성장속도가 빠르고 별도의 색소 추출 과정을 필요로 하지 않는 다른 점에서 유리하지만, 아스타잔틴 함량이 0.15∼0.4％로 생산성이 낮고, 생체이용률이 낮은 3R, 3'R 형태(form)만을 생산하는 단점이 있어서 현재 식품으로 사용이 금지되어 있다. 반면 해양 녹조류인 헤마토코커스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)는 아스타잔틴 함유량이 6-8％로 높은 편이고, 생체이용율이 높은 3S, 3'S 아이소머(isomer) 형태의 아스타잔틴(astaxanthin)을 생산하 는 천연공급원으로 알려져 있다.
헤마토코커스 플루비알리스(Haematococcus pluvialis)는 광합성 미생물 중의 하나인 녹색 단세포조류(unicellular green algae)로 휴면 단계에서 세포내부에 아스타잔틴을 다량 축적한다.
따라서, 헤마토코커스 플루비알리스로부터 아스타잔틴을 추출하는 것은 세포벽을 깨고 내부에 있는 색소를 유리시켜야 하기 때문에 오랜 추출 시간을 필요로 하고 추출이 어렵다.
근래에 헤마토코커스 플루비알리스로부터 아스타잔틴을 추출하는 방법으로 이산화탄소(CO2)를 이용한 초임계 추출방법, 마이크로웨이브(microwave)를 이용한 추출방법, 유기용매 추출법 등이 있다.
상기에서 초임계 추출방법은 헤마토코커스 플루비알리스 조류를 배양한 후 건조, 분쇄한 것을 초임계유체를 이용하여 약 5∼10％의 함량을 가진 아스타잔틴 추출물을 얻는 방법으로서 효율이 좋고 유기용매의 사용을 최소화할 수 있어서 화장품이나 의약품의 첨가제로 사용할 수 있으나 추출비용이 매우 높아 경제성이 매우 낮은 추출방법이다.
상기에서 마이크로웨이브를 이용한 추출방법은 헤마토코커스 플루비알리스를 배양한 후 이를 물에 현탁시켜 마이크로웨이브 처리하고 용매를 이용하여 추출한 후 원심분리를 통해 농축하는 방법으로서 대량생산이 어렵운 문제점을 수반한다.
상기에서 용매추출법은 공정이 단순한 장점은 있으나 추출물의 수율이 낮은 단점이 있으다.
현재, 상기에서 언급한 방법 이외에도 헤마토코커스 플루비알리스로부터 아스타잔틴을 안정적으로 추출하기 위한 연구가 계속 시도되고 있다.
본 발명은 헤마토코커스 플루비알리스로부터 아스타잔틴의 추출방법을 제공하고자 한다.
본 발명은 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출에 있어서, 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소를 첨가하여 1차 효소반응시키는 단계; 및 상기 1차 효소반응 후 단백질 분해효소를 첨가하여 2차 효소반응을 시키는 단계를 포함하는 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출방법을 제공하고자 한다.
본 발명에 의해 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 높은 수율의 아스타잔틴을 추출할 수 있다.
본 발명은 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출방법을 나타낸다.
본 발명은 헤마토코커스 풀루비알리스 균주를 1차 효소반응 및 2차 효소반응 을 이용한 아스타잔틴의 추출방법을 나타낸다.
본 발명은 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출에 있어서, 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소를 첨가하여 1차 효소반응시키는 단계; 및 상기 1차 효소반응 후 단백질 분해효소를 첨가하여 2차 효소반응을 시키는 단계를 포함하는 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출방법을 나타낸다.
상기에서 1차 효소반응은 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소로서 비스코자임(Viscozyme), 아라바나아제(arabanase), 셀룰라아제(cellulase), 헤미셀룰라아제(hemicellulase), 자일라아제(xylanase) 중에서 선택된 어느 하나 이상을 반응시킬 수 있다.
상기에서 1차 효소반응은 수산화나트륨(NaOH)를 첨가하여 pH를 4.0∼5.0으로 조절한 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소로서 비스코자임(Viscozyme), 아라바나아제(arabanase), 셀룰라아제(cellulase), 헤미셀룰라아제(hemicellulase), 자일라아제(xylanase) 중에서 선택된 어느 하나 이상을 상기 현탁액 고형분 중량 대비 1∼10%로 첨가하고 45∼55℃에서 1∼2시간 동안 반응시킬 수 있다.
상기에서 1차 효소반응은 수산화나트륨(NaOH)를 첨가하여 pH를 4.0∼5.0으로 조절한 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소로서 비스코자임(Viscozyme)을 상기 현탁액 고형분 중량 대비 1∼10%로 첨가하고 45∼55℃에서 1∼2시간 동안 반응시킬 수 있다.
상기에서 2차 효소반응은 1차 효소반응 후 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 단백질 분해효소로서 알카라아제(Alcalase), 파파인(Papain), 코지자임(Kojizyme), 뉴트라아제(Nutrase), 프로타멕스(Protamex), 에스퍼라아제(Esperase), 플라보자임(Flavourzyme)를 반응시킬 수 있다.
상기에서 2차 효소반응은 1차 효소반응 후 수산화나트륨(NaOH)를 첨가하여 pH를 6.0∼8.0으로 조절한 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 단백질 분해효소로서 알카라아제(Alcalase), 파파인(Papain), 코지자임(Kojizyme), 뉴트라아제(Nutrase), 프로타멕스(Protamex), 에스퍼라아제(Esperase), 플라보자임(Flavourzyme)를 상기 현탁액 고형분 중량 대비 1∼10%로 첨가하고 45∼55℃에서 1∼2시간 동안 반응시킬 수 있다.
상기에서 2차 효소반응은 1차 효소반응 후 수산화나트륨(NaOH)를 첨가하여 pH를 6.0∼8.0으로 조절한 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 단백질 분해효소로서 알카라아제(Alcalase)를 상기 현탁액 고형분 중량 대비 1∼10%로 첨가하고 45∼55℃에서 1∼2시간 동안 반응시킬 수 있다.
본 발명의 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출에 있어서, 상기 1차 효소반응 및 2차 효소반응을 시킨 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액은 원심분리 및 용매추출 단계를 거쳐 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출할 수 있다.
본 발명의 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출에 있어 서, 상기 1차 효소반응 및 2차 효소반응을 시킨 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액은 원심분리 및 용매추출 단계를 거쳐 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출할 수 있다. 이때 원심분리는 100∼500rpm, 1∼30분 동안 실시할 수 있으며, 용매추출은 아세톤, 메탄올, 에탄올, 부탄올, 프로판올의 군으로부터 선택된 어느 하나를 사용할 수 있으며, 상기 용매는 70∼99.9％ 농도의 용매로 30분∼180분 동안 추출할 수 있다.
본 발명의 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출에 대해 다양한 조건으로 실시한바, 본 발명의 목적을 달성하기 위해서는 상기에서 언급한 조건에 의해 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출하는 것이 바람직하다.
이하 본 발명의 내용을 실시예 및 시험예를 통하여 구체적으로 설명한다. 그러나, 이들은 본 발명을 보다 상세하게 설명하기 위한 것으로 본 발명의 권리범위가 이들에 의해 한정되는 것은 아니다.
<실험예 1>
pH 4.0∼5.0인 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소로서 비스코자임(Viscozyme), 아라바나아제(arabanase), 셀룰라아제(cellulase), 헤미셀룰라아제(hemicellulase), 자일라아제(xylanase)를 각각 상기 현탁액 고형분 중량 대비 4%로 첨가하고 50℃에서 2시간 동안 반응시킨 후 300rpm, 20분 동안 원심분리를 실시한 후 90％ 농도의 아세톤으로 30분 동안 추출하여 헤마토코커스 풀루비알리스로부터 아스타잔틴을 추출하였다.
상기에서 아스타잔틴의 추출함량은 HPLC(C18 컬럼, UV 검출기(474nm), 용매 90％ 농도의 메탄올)을 이용하여 측정하고 그 결과를 아래의 표 1에 나타내었다.
표 1. 세포벽 분해 효소에 따른 아스타잔틴 함량
효소 아스타잔틴 함량(μg/g)
비스코자임* 1099.78
아라바나아제 928.79
셀룰라아제 958.69
헤미셀룰라아제 957.84
자일라아제 967.52
* 비스코자임(Viscozyme) : 아라바나아제(arabanase), 셀룰라아제(cellulase), 글루카나아제(glucanase), 헤미셀룰라아제(hemicellulase), 자일라아제(xylanase)의 혼합제제(제조회사 : 덴마크 노보(NOVO)사 제품)
상기 표 1에서처럼 헤마토코커스 풀루비알리스를 세포벽 분해효소로 처리시 비스코자임 효소를 처리한 것이 아스타잔틴 추출에 가장 우수한 효과를 지닌 효소임을 알 수 있었다.
<실험예 2>
수산화나트륨(NaOH)를 첨가하여 pH를 4.5로 조절한 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소로서 비스코자임(Viscozyme, 덴마크 노보(NOVO)사 제품)을 각각 상기 현탁액 고형분 중량 대비 0%(대조군, 효소무첨가), 2%, 4%, 8%, 10%로 첨가하고 50℃에서 2시간 동안 반응시킨 후 300rpm, 20분 동안 원심분리를 실시한 후 90％ 농도의 아세톤으로 30분 동안 추출하여 헤마토코커스 풀루비알리스로부터 아스타잔틴을 추출하였다.
상기에서 아스타잔틴의 추출함량은 HPLC(C18 컬럼, UV 검출기(474nm), 용매 90％ 농도의 메탄올)을 이용하여 측정하고 그 결과를 아래의 표 2에 나타내었다.
표 2. 비스코자임 효소 함량에 따른 아스타잔틴 추출 함량
효소량 아스타산틴 함량 (μg/g)
0%(대조군) 426.77
2.0% 1001.18
4.0% 1099.78
8.0% 1072.24
10.0% 1125.53
상기 표 2에서 알 수 있듯이 비스코자임(Viscozyme) 효소를 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액 고형분 중량 대비 4% 사용시 아스타잔틴의 추출함량이 대조군에 비하여 2.6배 상승하여, 비스코자임 효소의 함량은 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액 고형분 중량 대비 4% 사용하는 것이 최적 임을 알 수 있었다.
<실험예 3>
수산화나트륨(NaOH)를 첨가하여 pH를 6.0∼8.0으로 조절한 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 단백질 분해효소로서 알카라아제(Alcalase), 파파인(Papain), 코지자임(Kojizyme), 뉴트라아제(Nutrase), 프로타멕스(Protamex), 에스퍼라아제(Esperase), 플라보자임(Flavourzyme)를 각각 상기 현탁액 고형분 중량 대비 4%로 첨가하고 50℃에서 2시간 동안 반응시킨 후 300rpm, 20분 동안 원심분리 를 실시한 후 90％ 농도의 아세톤으로 30분 동안 추출하여 헤마토코커스 풀루비알리스로부터 아스타잔틴을 추출하였다.
상기에서 아스타잔틴의 추출함량은 HPLC(C18 컬럼, UV 검출기(474nm), 용매 90％ 농도의 메탄올)을 이용하여 측정하고 그 결과를 아래의 표 2에 나타내었다.
표 3. 단백질 분해 효소에 따른 아스타잔틴 함량
효소 반응 pH 아스타산틴 함량 (μg/g)
대조군* 7.5 417.22
papain 6.0 579.92
Kojizyme 6.0 990.61
Alcalase 7.5 1143.48
Nutrase 6.0 599.78
Protamex 6.0 832.97
Esperase 8.0 692.80
Flavourzyme 6.0 817.16
* 대조군은 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 대해 효소처리를 하지 않고 원심분리 및 용매처리를 실시한 후 아스타잔틴의 함량을 나타낸 것이다.
상기 표 3에서처럼 단백질 분해 효소 중에서 알카라아제를 사용한 실험군이 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출함량이 가장 우수함을 알 수 있었다.
<실험예 4>
수산화나트륨(NaOH)를 첨가하여 pH를 7.5으로 조절한 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 단백질 분해효소로서 알카라아제(Alcalase)를 각각 상기 현탁액 고형분 중량 대비 0%(대조군, 효소무첨가), 2%, 4%, 8%, 10%로 첨가하고 50℃에서 2시간 동안 반응시킨 후 300rpm, 20분 동안 원심분리를 실시한 후 90％ 농도의 아세톤으로 30분 동안 추출하여 헤마토코커스 풀루비알리스로부터 아스타잔틴을 추출하였다.
상기에서 아스타잔틴의 추출함량은 HPLC(C18 컬럼, UV 검출기(474nm), 용매 90％ 농도의 메탄올)을 이용하여 측정하고 그 결과를 아래의 표 2에 나타내었다.
표 4. 알카라아제 효소 함량에 따른 아스타잔틴 추출 함량
효소량 아스타산틴 함량 (μg/g)
0%(대조군) 410.22
2.0% 977.91
4.0% 1143.48
8.0% 1155.78
10.0% 1173.57
상기 표 2에서 알 수 있듯이 알카라아제 효소를 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액 고형분 중량 대비 4% 사용시 아스타잔틴이 제일 많이 추출되어, 알칼라아제 효소의 함량은 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액 고형분 중량 대비 4% 사용하는 것이 최적 임을 알 수 있었다.
<실시예 1>
헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출에 있어서, 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소로서 비스코자임을 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액 중량 대비 4% 첨가하여 1차 효소반응시킨 후 상기 1차 효소반응 후 단백질 분해효소로서 알카라아제를 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액 중량 대비 4% 첨가하여 2차 효소반응을 시켰다.
상기 2차 효소반응 후 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액을 300rpm, 20 분 동안 원심분리를 실시한 후 90％ 농도의 아세톤 30분 동안 추출하여 헤마토코커스 풀루비알리스로부터 아스타잔틴을 추출하고 이의 함량을 아래의 표 5에 나타내었다.
상기에서 1차 효소반응은 수산화나트륨(NaOH)를 첨가하여 pH가 4.5인 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 비스코자임을 첨가하고 50℃에서 1시간 반응시켰으며, 2차 효소반응은 상기 1차 효소반응 후 수산화나트륨(NaOH)를 첨가하여 pH를 7.5로 조절한 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 알칼라아제를 첨가하고 50℃에서 1시간 반응시켰다.
<비교예>
1차 효소반응시 알칼라아제를 사용하고, 2차 효소반응시 비스코자임을 사용하는 것을 제외하고는 상기 실시예와 동일한 방법으로 헤마토코커스 풀루비알리스로부터 아스타잔틴을 추출하고 이의 함량을 아래의 표 5에 나타내었다.
표 5. 실시예, 비교예 및 대조구의 아스타잔틴 함량
항목 반응조건 아스타잔틴 함량 (μg/g)
대조군(효소 무처리)* - 408.51
실시예 (Viscozyme → Alcalase 순차적으로 처리) pH 4.5, 50℃, 1시간 → pH 7.5, 50℃, 1시간 1621.68
비교예 (Alcalase → Viscozyme 순차적으로 처리) pH 7.5, 50℃, 1시간 → pH 4.5, 50℃, 1시간 1025.21
*대조군(효소 무처리)은 1차 효소반응 및 2차 효소반응을 실시하지 않는 것을 제외하고는 실시에와 동일한 방법으로 헤마토코커스 풀루비알리스로부터 아스타잔틴을 추출하였다.
상기 표 5의 결과에서처럼 헤마토코커스 풀루비알리스를 세포벽 분해효소로 1차 효소반응 시킨 후 단백질 분해효소로 2차 효소반응을 연속적으로 실시하면 헤마토코커스 풀루비알리스로부터 고수율의 아스타잔틴을 얻을 수 있다.
상술한 바와 같이, 본 발명의 바람직한 실시예를 참조하여 설명하였지만 해당 기술 분야의 숙련된 당업자라면 하기의 특허청구범위에 기재된 본 발명의 사상 및 영역으로부터 벗어나지 않는 범위 내에서 본 발명을 다양하게 수정 및 변경시킬 수 있음을 이해할 수 있을 것이다.
헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출에 있어서, 본 발명과 같이 헤마토코커스 풀루비알리스 균주를 세포벽 분해효소를 첨가하여 1차 효소반응 및 상기 1차 효소반응 후 단백질 분해효소를 첨가하여 2차 효소반응을 시키면 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 고수율의 아스타잔틴을 추출할 수 있다.
본 발명과 같이 세포벽 분해효소 및 단백질 분해효소로 연속하여 헤마토코커스 풀루비알리스 균주를 처리하면 종래의 이산화탄소(CO2)를 이용한 초임계 추출방법, 마이크로웨이브(microwave)를 이용한 추출방법, 유기용매 추출법에 비해 적은 비용으로 고수율의 아스타잔틴을 대량으로 추출할 수 있다.

Claims (3)

  1. 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출에 있어서,
    헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소를 첨가하여 1차 효소반응시키는 단계; 및
    상기 1차 효소반응 후 단백질 분해효소를 첨가하여 2차 효소반응을 시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출방법.
  2. 제1항에 있어서, 1차 효소반응은 pH 4.0∼5.0인 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 세포벽 분해효소로서 비스코자임(Viscozyme), 아라바나아제(arabanase), 셀룰라아제(cellulase), 헤미셀룰라아제(hemicellulase), 자일라아제(xylanase) 중에서 선택된 어느 하나 이상을 상기 현탁액 고형분 중량 대비 1∼10%로 첨가하고 45∼55℃에서 1∼2시간 동안 반응시키는 것을 특징으로 하는 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출방법.
  3. 제1항에 있어서, 2차 효소반응은 1차 효소반응 후 pH 6.0∼8.0인 헤마토코커스 풀루비알리스 균주 현탁액에 단백질 분해효소로서 알카라아제(Alcalase), 파파인(Papain), 코지자임(Kojizyme), 뉴트라아제(Nutrase), 프로타멕스(Protamex), 에스퍼라아제(Esperase), 플라보자임(Flavourzyme)를 상기 현탁액 고형분 중량 대비 1∼10%로 첨가하고 45∼55℃에서 1∼2시간 동안 반응시키는 것을 특징으로 하는 헤마토코커스 풀루비알리스 균주로부터 아스타잔틴의 추출방법.
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CN105503683A (zh) * 2015-12-29 2016-04-20 广西钦州市绿源天然食品加工有限公司 一种利用木瓜蛋白酶水解虾壳提取虾青素的方法
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