KR20090038740A - Entomopathogenic lecanicillium attenuatum cnu-23, and agents and methods for controling green peach aphid using the same - Google Patents

Entomopathogenic lecanicillium attenuatum cnu-23, and agents and methods for controling green peach aphid using the same Download PDF

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Abstract

Entomopathogenic lecanicillium attenuatum CNU-23 having excellent extermination capability against myzus persicae is provided to effectively prevent myzus persicae in a cultivation land, thereby improving productivity of farming peaches. Entomopathogenic lecanicillium attenuatum CNU-23(KFCC 1397P) has excellent extermination capability against myzus persicae. A myzus persicae preventing agent comprises the Entomopathogenic lecanicillium attenuatum CNU-23 as an active ingredient, a culture fluid thereof or spore suspension. The spore suspension contains 10^7-10^8/ml of spores. The spore suspension is obtained by shake-cultivating the Entomopathogenic lecanicillium attenuatum CNU-23 in a liquid culture medium containing a surfactant and vegetable oil. The surfactant represents polyoxyethylene sorbitan monooleate and the vegetable oil is soybean oil.

Description

곤충병원성 레카니실리움 어테뉴에이튬 ＣＮＵ-23, 및 이를 이용한 복숭아혹진딧물 방제제 및 방제방법{Entomopathogenic Lecanicillium attenuatum CNU-23, and agents and methods for controling green peach aphid using the same} Entomopathogenic Lecanicillium attenuatum CNU-23, and agents and methods for controling green peach aphid using the same}

본 발명은 곤충병원성(entomopathogenic) 미생물 및 이의 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는, 복숭혹진딧물(green peach aphid; Myzus persicae)로부터 분리된 곤충병원성 미생물 레카니실리움 어테뉴에이튬(Lecanicillium attenuatum) CNU-23 및 이를 이용한 복숭아혹진딧물 방제제 및 방제방법에 관한 것이다.The present invention relates to entomopathogenic microorganisms and uses thereof, and more particularly, to the entomopathogenic microorganism Lecanicillium attenuatum isolated from green peach aphid ( Myzus persicae ) CNU- 23 and the peach aphid control agent and a method for controlling the same.

작물은 생육전반에 걸쳐 다양한 해충에 의해 공격당한다. 특히, 작물이 흡즙성 해충에 의해 공격당하면 해충에게 양분을 빼앗겨 생육 초기부터 수확기까지 건강하게 성장하지 못한 결과 생산성이 급격히 감소한다. 흡즙성 해충의 대표적인 예로서 복숭아혹진딧물을 들 수 있다. 복숭아혹진딧물은 우리나라 시설재배지에서 사계절에 걸쳐 발생하는 대표적인 해충의 하나로서, 단시간에 성충이 되어 급격히 개체수가 증가하므로 작물에 막대한 피해를 주고 있다. 이 진딧물에 의한 작물의 피해는 진딧물 자체에 의해 발생하지만, 진딧물이 배설하는 감로(甘露)에 의해 식물병원균이 발생하여 복합적으로 발생하기도 한다. 복숭아혹진딧물에 의해 발생되 는 식물병의 대표적인 예는 모자이크바이러스이다. 복숭아혹진딧물이 매개하는 바이러스에 의해 작물이 피해를 받으면, 약제로도 방제가 되지 않아 작물의 수량이 급격하게 감소할 뿐만 아니라, 농산품의 품질 또한 떨어져 농가에게 이중적인 피해를 주고 있다. 이와 같이, 복숭아혹진딧물의 방제는 이 진딧물에 의한 작물 피해뿐만 아니라 식물병에 의한 작물 피해를 줄일 수 있으므로, 이 해충을 방제하기 위한 다양한 합성농약이 사용되고 있다. 그러나, 합성농약은 독성이 있으며 농업환경을 오염시키고 환경 생태계에 악영향을 가져올 수 있을 뿐만 아니라, 지속적으로 살포하면 약제에 대한 진딧물의 저항성을 일으킬 수 있으므로, 진딧물 방제를 위한 대안에 대한 연구가 요구되고 있다. 이에, 근래에는 범국가적인 친환경농업 정책에 힘입어 화학합성 농약이 아닌 천연물이나 미생물을 이용한 진딧물 방제법이 그 대안의 하나로 제시되고 있다.Crops are attacked by various pests throughout their growth. In particular, when the crop is attacked by the absorptive pest, the pest is deprived of nutrients, resulting in a rapid decrease in productivity as a result of healthy growth from the beginning of the growing season to the harvesting season. A representative example of the absorptive pest is peach aphid. Peach aphids are one of the most common pests that occur throughout the four seasons in Korea's facility cultivation site, and become a large adult in a short time, causing a huge damage to crops. The damage of crops caused by aphids is caused by aphids themselves, but phytopathogens are sometimes caused by nectar excreted by aphids. A representative example of plant diseases caused by peach aphids is mosaic virus. When crops are damaged by viruses mediated by peach aphids, they are not controlled by drugs, resulting in a sharp decline in crop yields, as well as poor quality of agricultural products, causing double damage to farmers. As described above, the control of peach aphids can reduce not only crop damage caused by aphids but also crop damage caused by plant diseases, and various synthetic pesticides for controlling this pest are used. However, synthetic pesticides are toxic, polluting the agricultural environment and adversely affecting the environmental ecosystem, and continuous application of them may lead to resistance of aphids to pharmaceuticals, so studies on alternatives for aphid control are required. have. Recently, the aphid control method using natural products or microorganisms, not chemical synthetic pesticides, has been proposed as an alternative based on the nationwide eco-friendly agricultural policy.

화학합성 농약을 사용하지 않고 미생물을 이용하여 진딧물을 방제하는 대표적인 예에는 곤충병원성 미생물을 이용하는 방법이 있다. 지금까지 진딧물을 방제하는데 사용되는 곤충병원성 미생물로는 레카니실리움 롱지스포룸(Lecanicillium longisporum)(문헌 [Zare and Gams, 2001, Nova Hedwigia 73, 1-50]), 보우베리아 바씨아나(Beauveria bassiana)(문헌 [Knudsen et al., 1990, J. Econo. Entomol., 83, 2225-2228]), 패실로마이세스 푸모소로서스(Paecilomyces fumosoroseus)(문헌 [Ksvkova and Curn, 2005, Mycopathologia, 159, 53-63]), 버티실리움 레카니(Verticillium lecanii)(문헌 [Hall, 1976, J. Invertebr. Pathol., 27, 41-48]), 메타리지움 아니소플리애(Metarhizium anisopliae)(문헌 [Chandler, 1997, Biocontr. Sci Technol., 7, 95-104]) 등이 알려져 있다. 특히, 한국등록특허 제475,346호(2004. 1. 24. 공개)는 국내토착 균주 버티실리움 레카니 CS625 균주, 상기 균주 및 균주의 포자 현탁액을 함유하는 진딧물 방제용 조성물, 및 상기 조성물을 농작물에 살포하여 진딧물, 특히 목화진딧물 및 복숭아혹진딧물을 생물학적으로 방제하는 방법을 개시하고 있다. 이 특허에서는 CS625 균주를 복숭아혹진딧물 2령 약충에 살포한 경우 6 일후에 약 100%의 살충율을 보인 것으로 기재하고 있으나, 실제 농작물을 재배하는 시설재배지에 적용한 경우의 효과에 대해서는 전혀 기재하지 않았다. 한국등록특허 제404,767호(2002. 10. 11. 공개)는 국내토착 균주 버티실리움 레카니 CS626 균주, 및 상기 균주를 미생물 제제로 만들어서 이를 온실가루이나 복숭아혹진딧물이 발생할 염려가 있거나 이미 발생한 시설재배지에 살포하여 시설해충을 방제하는 방법을 개시하고 있다. 이 특허에서는 CS626 균주의 온실가루이에 대한 살충효과를 기재하고 있으나, 복숭아혹진딧물에 대한 효과는 전혀 기재하고 있지 않다. 또한, 문헌 [Jeong Jun Kim et al., Biological Control, 40(3), March 2007, pp327-332]에는 레카니실리움 롱지스포룸 및 레카니실리움 어테튜에이튬 (CS625)이 복숭아혹진딧물은 물론 오이 흰가루병균에 대해 높은 병원성을 가짐이 보고되어 있다. 상기 선행기술들에서는, 곤충병원성 미생물을 감자배지나 일반 영양배지에 배양하여 이 배양물에 0.001~0.01% 수준으로 계면활성제(트윈 80 또는 트윈 20)를 첨가하여 살충성 포자현탁액을 제조하였다.A representative example of controlling aphids using microorganisms without using chemical synthetic pesticides is a method of using entomopathogenic microorganisms. The entomopathogenic microorganisms used to control aphids to date include Lecanicillium longisporum (Zare and Gams, 2001, Nova Hedwigia 73, 1-50), Beauveria bassiana . (Knudsen et al., 1990, J. Econo. Entomol., 83, 2225-2228), Paecilomyces fumosoroseus (Ksvkova and Curn, 2005, Mycopathologia, 159, 53-63]), Verticillium lecanii (Hall, 1976, J. Invertebr. Pathol., 27, 41-48), Metarhizium anisopliae (Literature) Chandler, 1997, Biocontr. Sci Technol., 7, 95-104) and the like. In particular, Korean Patent No. 475,346 (published Jan. 24, 2004) discloses a domestic native strain Verticilium Lecani CS625 strain, a composition for controlling aphids containing the spore suspension of the strain and strain, and the composition on the crop. A method of biologically controlling aphids, in particular cotton aphids and peach aphids, by spraying is disclosed. In this patent, when the CS625 strain was sprayed on peach aphid larvae 2 insects, the insecticide rate was about 100% after 6 days, but the effect of applying it to the plant cultivation planting the actual crops was not described at all. . Korean Registered Patent No. 404,767 (published Oct. 11, 2002) is a domestic indigenous strain Verticillium Recani CS626 strain, and the strain is made of microbial agents, which may cause greenhouse dust or peach aphids, or a facility that has already occurred. Disclosed is a method for controlling plant pests by spraying on plantations. This patent describes the insecticidal effect of the CS626 strain on greenhouse powder, but does not describe the effect on peach aphids at all. In addition, Jeong Jun Kim et al., Biological Control, 40 (3), March 2007, pp327-332 discloses that Recanicillium longjisporum and Recanicillium atitiumium (CS625) are not only peach or aphids. It has been reported to have high pathogenicity against cucumber powdery mildew. In the above prior arts, insecticidal spore suspensions were prepared by culturing insect pathogenic microorganisms in potato medium or general nutrient medium and adding a surfactant (Tween 80 or Tween 20) to the culture at a level of 0.001 to 0.01%.

상기와 같이, 여러 곤충병원성 미생물 제제가 알려져 있었으나, 현재까지 농가에 보급되어 사용되고 있는 미생물 제제는 전무한 실정이다. 이것은 개발된 미 생물 제제들을 실제 농작물을 재배하는 시설재배지에서 사용할 경우 살충효과가 기대하는 만큼 우수하지 못한데서 기인한 것으로 사료된다. 따라서 진딧물의 성공적인 방제를 위해서는, 다양한 진딧물 방제용 미생물 자원의 확보와 더불어, 이를 농가현장에 직접 적용할 수 있는 진딧물 방제제 및 방제방법의 개발이 반드시 필요하다할 것이다. As described above, various insect pathogenic microbial agents have been known, but there are no microbial agents that have been used and distributed to farms. This may be due to the fact that the pesticide effect was not as good as expected when the developed microorganisms were used in the plant cultivation of actual crops. Therefore, in order to successfully control aphids, it is necessary to secure a variety of aphid control microorganism resources, and to develop aphid control agents and control methods that can be directly applied to farm sites.

본 발명자들은 시설재배지에서 복숭아혹진딧물의 효과적인 방제를 위하여, 농가현장에 살포시 환경오염의 폐해 및 생태계 악영향의 가능성이 낮고, 이 진딧물에 대한 저항성 발현이 적으며, 농가현장에서도 복숭아혹진딧물 방제효율이 우수한 미생물의 확보와 더불어, 이를 이용한 복숭아혹진딧물 방제제 및 방제방법을 개발하고자 지속적인 연구를 수행하였다. 그 결과, 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23이 복숭아혹진딧물에 대하여 우수한 살충력을 가짐과, 시설재배지에서 직접 이 균주를 이용하여 복숭아혹진딧물을 효과적으로 방제할 수 있음을 검증함으로써, 상기 균주가 복숭아혹진딧물 방제용 미생물 제제로 유용하게 이용될 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.In order to effectively control peach aphids from plant cultivation, the present inventors have a low possibility of harmful effects of environmental pollution and ecosystem when spraying farms, less resistance to aphids, and peach aphids control efficiency at farms. In addition to securing excellent microorganisms, continuous research was conducted to develop peach aphid control agents and control methods. As a result, by verifying that Recanicillium attenuateium CNU-23 has excellent insecticidal ability against peach aphids and that it can effectively control peach aphids using this strain directly in the facility cultivation, It was confirmed that it can be usefully used as a microbial agent for controlling aphids, and came to complete the present invention.

따라서 본 발명의 목적은 복숭아혹진딧물에 대해 살충력을 갖는 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23을 제공하기 위한 것이다.Therefore, an object of the present invention is to provide a recanicillium attenuiteium CNU-23 having insecticidal properties against peach aphids.

본 발명의 다른 목적은 유효성분으로서, 상기 균주, 또는 이의 배양물 또는 포자현탁액을 함유하는 진딧물 방제제를 제공하기 위한 것이다.Another object of the present invention is to provide an aphid control agent containing the strain, or a culture or spore suspension thereof, as an active ingredient.

본 발명의 또 다른 목적은 상기 방제제를 식물 또는 그의 서식지에 적용하는 단계를 포함하는, 진딧물 방제방법을 제공하기 위한 것이다.Still another object of the present invention is to provide a method for controlling aphids, comprising applying the control agent to a plant or its habitat.

첫째, 본 발명은 복숭아혹진딧물에 대해 살충력을 갖는 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23에 관한 것이다.First, the present invention relates to Recanicillium attenuiteium CNU-23 having insecticidal properties against peach aphids.

둘째, 본 발명은 유효성분으로서, 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23, 또는 그의 배양물 또는 포자현탁액을 포함하는, 진딧물 방제제에 관한 것이다.Secondly, the present invention relates to an aphid control agent, which comprises Recanicillium athenium lithium CNU-23, or a culture or spore suspension thereof as an active ingredient.

셋째, 본 발명은 상기 방제제를 식물 또는 그의 서식지에 적용하는 단계를 포함하는, 진딧물 방제방법에 관한 것이다.Third, the present invention relates to a method for controlling aphids, comprising applying the control agent to a plant or its habitat.

본 발명의 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23 균주는 기존에 알려져 있는 균주들과는 상이한 균주로서, 상기 균주, 또는 그의 배양물 또는 포자현탁액은 식물, 예를 들어, 고추에 발생한 진딧물, 예를 들어, 복숭아혹진딧물에 대해 우수한 살충력을 가질 뿐만 아니라, 시설재배 온실 및 농가포장에 적용시 우수한 방제효과를 나타내는 것으로 검증된 바, 진딧물 방제제로 효과적으로 사용될 수 있으며, 농작물 재배에 적용 시 농작물의 생산성을 높일 수 있다. 나아가, 본 발명의 방제제는 화학적으로 합성된 것이 아닌 생물학적으로 얻어진 것으로서, 친환경농업, 예를 들어, 무농약 작물 시설재배에서 진딧물 방제에 적용될 수 있다.The Recanicillium attenuateium CNU-23 strain of the present invention is a different strain from previously known strains, and the strain, or a culture or spore suspension thereof, may be aphids generated in plants, for example, peppers. As well as having excellent insecticidal properties against peach aphids, it has been proven to have excellent control effects when applied to facility cultivation greenhouses and farm packaging, and can be effectively used as aphid control agents, and can increase the productivity of crops when applied to crop cultivation. have. Furthermore, the control agent of the present invention is biologically obtained, not chemically synthesized, and can be applied to aphid control in environmentally friendly agriculture, for example, cultivation of pesticide-free crops.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명에서는, 복숭아혹진딧물에 대한 살충성이 우수한 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23 균주를 분리하고, 이 균주의 배양물을 이용하여 진딧물 살충효능을 온실 및 농가현장 포장실험에서 확인함으로써, 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23이 진딧물 방제제로서 실내외에서 널리 이용될 수 있음을 입증하였다.In the present invention, by separating the Recanicillium attenuateium CNU-23 strain excellent in insecticidal properties against peach aphids, using a culture of this strain to confirm the aphid insecticidal effect in greenhouse and farm field field experiment, Nisilium attenuiteium CNU-23 has proven to be widely used indoors and outdoors as aphid control agents.

즉, 본 발명에서는 고추 잎에 감염된 복숭아혹진딧물의 몸체로부터 직접 분리된 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23 균주의 배양물을 이용한다. 본 발명의 균주는 국내토착 미생물로서, 지금까지 국내에 유일하게 알려진 진딧물 살충성 미생물인 버티실리움 레카니 균주(한국등록특허 제475,346호 및 제404,767호)와 유전학적으로 전혀 다르고 분자계통분류학적으로 차이를 보이는, 복숭아혹진딧물에 대한 살충력이 있는 신규 곤충병원성 미생물이다. 버티실리움 레카니 균주(한국등록특허 제475,346호 및 제404,767호)와 관련한 문헌 [Jeong Jun Kim et al., Biological Control, 40(3), March 2007, pp327-332]에 따르면, 버티실리움 레카니 균주 CS625가 레카니실리움 어테뉴에이튬 CS625와 동일한 균주로 기재하고 있으나, 상기 특허와 문헌에는 이 균주의 유전학적 자료와 분자계통분류학적인 자료가 전혀 기재되어 있지 않다. 따라서 본 발명의 균주는, 균주명만을 고려할 때 버티실리움 레카니 균주 CS625와 동일한 종에 속한 것일 수는 있지만, 유전학적 자료를 근거로 한 분자계통분류학적 측면에서 버티실리움 레카니 균주 CS625와는 전혀 상이한 균주(strain)이다. 본 발명의 균주는 국내토착 미생물이기 때문에 국내포장 환경에 적용하는데 용이한 점이 많으며, 균주 자체를 사용하는데 검역의 문제가 전혀 없다. That is, the present invention uses a culture of the Recanicillium attenuiteium CNU-23 strain isolated directly from the body of the peach aphid infected with pepper leaves. The strain of the present invention is a domestic indigenous microorganism, which is genetically completely different from the verticillium lecani strain (Korean Patent Nos. 475,346 and 404,767), which is the only aphid insecticidal microorganism so far known in Korea. It is a new insectogenic pathogenic microorganism with insecticidal properties against peach or aphids. According to Jejun Jun Kim et al., Biological Control, 40 (3), March 2007, pp327-332, which relates to Verticillium lecani strains (Korean Patent Nos. 475,346 and 404,767), Verticillium Although Recani strain CS625 is described as the same strain as Recanicillium attenuateium CS625, the patent and literature do not describe any genetic or molecular lineage data of this strain. Therefore, the strain of the present invention may belong to the same species as Verticillium Lecani strain CS625, considering only the strain name, but in terms of molecular systemic classification based on genetic data, it is different from Verticillium Lecani strain CS625. It is a completely different strain. Since the strain of the present invention is a domestic indigenous microorganism, there are many easy points to apply to the domestic packaging environment, and there is no problem of quarantine in using the strain itself.

또한, 지금까지 보고된 다양한 곤충병원성 미생물들의 살충성 포자현탁액은 미생물을 감자배지나 일반 영양배지에 배양하여 이 배양물에 0.001~0.01% 수준으로 계면활성제(트윈 80 또는 트윈 20)를 첨가하여 얻은 것임에 비해, 본 발명의 살충성 포자현탁액은 미생물 자체를 계면활성제, 바람직하게는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트(Polyoxyethyelene Sorbitan Monooleate), 보다 바람직하게는 트윈 80, 가장 바람직하게는 1% 트윈 80과, 식물성 오일, 바람직하게는 대두유(soybean oil), 보다 바람직하게는 0.2% 대두유를 탄소원으로 배양하여 얻어지는 것이다. 이렇게 얻은 포자현탁액은 생물학적 방제분야에 알려져 있는 통상적인 방법에 따라 진딧물 방제제로 제제화될 수 있다. 포자현탁액은 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23의 출아포자 및 분생포자 중 하나 이상을 함유할 수 있다. 배양배지에서 얻어진 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23의 포자현탁액은 1010~1012/㎖ 수준의 포자를 함유하는 것이며, 이 포자현탁액의 원액을 적용할 수도 있으나, 107~108/㎖ 수준의 포자를 함유하도록 100~100,000배, 특히 100~1,000배, 보다 특히 250~500배 수준으로 희석하여 적용할 수 있다. 본 발명의 포자현탁액은 통상적인 진딧물 방제방법에 따라 적용될 수 있으며, 예를 들어, 식물 엽면에 살포하여 적용할 수 있다. 본 발명에 따른 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23의 포자현탁액은 기존의 버카니실리움 레카니 균주에 비해, 인위적으로 진딧물을 식재하여 살충력을 검정한 경우 보다 우수한 살충력을 나타낼 뿐만 아니라, 실제로 시설재배 농가포장에 적용한 경우에도 우수한 살충력을 나타내는 것으로 확인되었다. 따라서 시설재배지에 서 실제로 진딧물, 특히 복숭혹진딧물에 대해 우수한 살충력을 나타내어, 화학농약을 대체할 수 있다.In addition, the insecticidal spore suspension of various insect pathogenic microorganisms reported so far is obtained by adding a surfactant (Tween 80 or Tween 20) to the culture by culturing the microorganisms in potato medium or general nutrient medium. In contrast, the insecticidal spore suspension of the present invention is a microorganism itself is a surfactant, preferably Polyoxyethyelene Sorbitan Monooleate, more preferably Tween 80, most preferably 1% Tween 80 And vegetable oils, preferably soybean oil, more preferably 0.2% soybean oil, obtained by culturing with a carbon source. The spore suspension thus obtained can be formulated into aphid control agents according to conventional methods known in the biological control arts. The spore suspension may contain one or more of the sprouted spores and conidia of the Recanicillium attenuateium CNU-23. The spore suspension of Recanicillium attenuiteium CNU-23 obtained from the culture medium contains 10 10 to 10 12 / ml of spores, although the stock solution of this spore suspension may be applied, but 10 7 to 10 8 / ml Dilution can be applied to levels of 100 to 100,000 times, in particular 100 to 1,000 times, more particularly to 250 to 500 times, to contain levels of spores. Spore suspension of the present invention can be applied according to a conventional aphid control method, for example, it can be applied by spraying on the foliar surface. Spore suspension of Recanicillium attenuiteium CNU-23 according to the present invention, compared to the existing Bercanicillium recani strain, exhibits excellent insecticidal properties when artificially planted aphids and assayed insecticidal properties, in fact, facilities When applied to cultivated farm packaging, it was found to exhibit excellent insecticidal properties. Thus, in plant cultivation, it actually shows excellent insecticidal properties against aphids, especially peach aphids, which can replace chemical pesticides.

이하, 본 발명을 실시예에 의해 보다 구체적으로 설명하나, 이는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것일 뿐 본 발명의 범위를 어떤 식으로든지 제한하고자 하는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples, which are intended to aid the understanding of the present invention but are not intended to limit the scope of the present invention in any way.

실시예Example 1: 균주의 분리 및 배양 1: Isolation and Culture of Strains

곤충병원성 미생물에 감염된 복숭아혹진딧물에서 분리된 균사체를 100 ㎎/ℓ의 테트라사이클린, 1% 트윈 80 및 0.2% 대두유를 함유하는 감자한천(PDA; Potato Dextrose Agar)배지에 접종하여 25 ℃에서 배양하였다. 배양 후 백색의 단일 콜로니를 형성하는 순수 분리된 배양체로부터 균사, 포자, 분생자경의 구조를 관찰하였다. 균사의 색깔은 앞면이 백색이며 뒷면은 옅은 황백색을 띠었으며, 분생포자원세포(phialide)는 균사 또는 이차 분지 균사체 상에 형성하였으며 크기는 9~16(길이)×1~2(폭) ㎛였다. 분생포자의 모양은 주로 단세포로 실린더형이 일반적이고, 가끔 중간부분이 휘어진 모양을 하고 있으며, 약간 움푹 들어간 모양을 보이기도 하고, 종종 2개의 세포로 이루어지며, 그 크기는 4~6(길이)×1.5~2(폭) ㎛였다. 상기 형태학적 특성은 한국등록특허 제475,346호 및 제404,767호에 기재된 버티실리움 레카니 균주의 형태학적 특성과 상이한 것이므로, 본 균주는 버티실리움 레카니 균주와 상이한 균주임을 알 수 있었다. 균사와 포자 등의 모양은 주사전자현미 경을 통해 보다 상세히 관찰하였으며, 그 결과 레카니실리움 속(Lecanicillium sp.)에 속하는 곰팡이로 동정하였다(도 1 참조). Mycelia isolated from peach aphids infected with entomopathogenic microorganisms were inoculated in potato agar (PDA) containing 100 mg / l tetracycline, 1% Tween 80 and 0.2% soybean oil and incubated at 25 ° C. . After incubation, the structures of mycelia, spores and conidia were observed from purely isolated cultures that formed single colonies of white color. Mycelia were white on the front and pale yellowish white on the back. Pyloriides were formed on mycelia or secondary branched mycelium, and the size was 9 ~ 16 (length) × 1 ~ 2 (width) ㎛. . Conidia are mainly single-cylindrical, usually cylindrical in shape, sometimes curved in the middle, slightly dented, often composed of two cells, and the size of 4-6 (length) × It was 1.5-2 (width) micrometers. Since the morphological characteristics are different from the morphological characteristics of the verticillium lecani strains described in Korean Patent Nos. 475,346 and 404,767, it was found that the strain is different from the verticillium lecani strain. The mycelia and spores were observed in more detail by scanning electron microscopy. As a result, they were identified as fungi belonging to the genus Lecanicillium sp. (See FIG. 1).

실시예 2: 염기서열 분석에 의한 레카니실리움 어테뉴에이튬의 동정Example 2 Identification of Recanicillium Attenuitium by Sequencing

실시예 1에서 얻은 레카니실리움 균주의 정확한 동정을 위해 염색체 DNA를 추출하여 그중에서 18S 리보솜의 ITS(Internal Transcribed Spacer) 부위의 유전자 서열(5.8S를 포함하고 있음)을 분석하여 동정하였다. 네이버-조이닝(Neighbor-joining) 분석에 의한 계통수를 보면, 본 균주가 레카니실리움 어테뉴에이텀 CBS402.78(AJ292434) 균주와 분류학적으로 매우 유사한 균주임을 알 수 있으며, 레카니실리움 레카니, 레카니실리움 롱지스포룸을 포함한 다른 레카니실리움 균주와 분류학적인 차이가 있음을 알 수 있었다(도 2 참조).For accurate identification of the Recanicillium strain obtained in Example 1, the chromosomal DNA was extracted and analyzed by analyzing the gene sequence (containing 5.8S) of ITS (Internal Transcribed Spacer) site of 18S ribosomes. The phylogenetic tree by Neighbor-joining analysis shows that the strain is taxonomically very similar to the strain Recanicillium athenium CBS402.78 (AJ292434). It can be seen that there is a taxonomic difference with other Recanicillium strains, including Recanicillium longjisporum (see Figure 2).

실시예 3: 레카니실리움 어테뉴에이튬 균주의 포자현탁액 제조Example 3: Preparation of Spore Suspension of Recanicillium Attenuitium Strain

실시예 1의 레카니실리움 어테뉴에이튬 균주를 함유한 한천배지를 가로×세로 기준 3×3 ㎜ 크기로 잘랐다. 한천배지 조각을 1% 트윈 80과 0.2% 대두유를 함유하는 무기염류 배지에 가하고, 25 ℃에서 150 rpm 수준으로 5 일간 진탕배양하였다. 거즈를 이용하여 균사체를 여과한 후 헤마사이토미터(hemacytometer)를 사용하여 포자농도가 107~108/㎖가 되도록 포자현탁액을 제조하였다. 이때 무기염류 배지의 조성은 리터당 2.0 g KH2PO4, 2.0 g Na2HPO4, 0.4 g (NH4)2SO4, 0.4 g MgSO4· 7H2O 및 미량원소 용액 10%로 하였다. 미량원소 용액은 리터당 0.1 g Al(OH)3, 0.05 g SnCl2·2H2O, 0.05 g KI, 0.05 g LiCl, 0.08 g MnSO4·4H2O, 0.05 g H3BO3, 0.1 g ZnSO4·7H2O, 0.1 g CoCl2·6H2O, 0.1 g NiSO4·6H2O, 0.05 g BaCl2 및 0.05 g (NH4)6Mo7O·4H2O를 함유하였다.The agar medium containing the Recanicillium attenuiteium strain of Example 1 was cut to a size of 3 × 3 mm based on the width × length. Agar medium pieces were added to an inorganic salt medium containing 1% Tween 80 and 0.2% soybean oil and shaken at 25 ° C. for 150 days at 150 rpm. After filtering the mycelium with gauze, a spore suspension was prepared using a hemacytometer so that the spore concentration was 10 7-10 8 / ml. At this time, the composition of the inorganic salt medium was 2.0 g KH 2 PO 4 , 2.0 g Na 2 HPO 4, 0.4 g (NH 4 ) 2 SO 4 , 0.4 g MgSO 4 · 7H 2 O and a trace element solution per 10%. The trace element solution is 0.1 g Al (OH) 3 , 0.05 g SnCl 2 · 2H 2 O, 0.05 g KI, 0.05 g LiCl, 0.08 g MnSO 4 4H 2 O, 0.05 g H 3 BO 3 , 0.1 g ZnSO 4 per liter 7 H 2 O, 0.1 g CoCl 2 6 H 2 O, 0.1 g NiSO 4 6 H 2 O, 0.05 g BaCl 2 and 0.05 g (NH 4) 6 Mo 7 O 4H 2 O.

실험예 1: 온실에서 레카니실리움 어테뉴에이튬 균주의 복숭아혹진딧물에 대한 살충력 검정Experimental Example 1: Insecticidal assay of peach aphids of Recanicillium attenuitium strains in a greenhouse

실시예 1의 레카니실리움 어테뉴에이튬 균주의 복숭아혹진딧물에 대한 살충력을 검정하기 위한 실험을 온도 25 ℃와 상대습도 75% 이상 조건의 온실에서 실시하였다. 실시예 3에서 얻은 레카니실리움 어테뉴에이튬 균주의 포자현탁액을 복숭아혹진딧물 2령 약충이 붙어있는 고추 잎 뒷면에 분무하여 살포한 다음 7 일간 매일 살충력을 조사하였다. 실험은 복숭아혹진딧물 50마리 이상씩 3회 반복으로 수행하였다. 살충율은 하기하는 바와 같은 무처리구 복숭아혹진딧물 생충수에 대한 처리구 복숭아혹진딧물 생충수 비율을 기준으로 하는 애보트(Abbott's) 식에 의해 계산하였다.The experiment for assaying the insecticidal activity against the peach aphid of the Recanicillium attenuiumium strain of Example 1 was carried out in a greenhouse at a temperature of 25 ° C. and a relative humidity of 75% or more. The spore suspension of the Recanicillium attenuiteium strain obtained in Example 3 was sprayed onto the back of the pepper leaf attached to the peach aphid larvae 2 nymphs were examined for pesticide daily for 7 days. The experiment was carried out in three iterations of more than 50 peach aphids. The insecticidal rate was calculated by the Abbott's equation based on the ratio of the treated peach aphid live worm to the untreated peach aphid live worm as described below.

살충율 = [(무처리구 진딧물 생충수 - 처리구 진딧물 생충수) / 무처리구 진딧물 생충수]×100Insecticidal rate = [(Untreated Aphids)-Untreated Aphids] × 100

여기서 무처리구에는 무기염류 배지만을 살포하였으며, 대조구로서 1% 트윈 80과 0.2% 대두유가 함유된 무기염류 배지를 균주 살포 시와 동일하게 희석하여 사 용하였다. 그 결과를 표 1과 도 3에 나타내었다. Herein, only the inorganic salt medium was sprayed to the untreated, and the inorganic salt medium containing 1% Tween 80 and 0.2% soybean oil was diluted and used in the same manner as when spraying the strain. The results are shown in Table 1 and FIG.

Figure 112007074068882-PAT00001
Figure 112007074068882-PAT00001

표 1과 도 3에 나타낸 바와 같이, 레카니실리움 어테뉴에이튬 균주에 의한 복숭아혹진딧물의 살충율은 균주 처리 4 일후 70% 이상이고, 6 일후 거의 100%에 달하는 수준이었다. 레카니실리움 어테뉴에이튬 균주에 의한 복숭아혹진딧물의 살충율은 균주 처리 경과시간이 증가함에 따라 점차 증가하여 반수치사시간(LT50)은 3.72일이었다. 도 4는 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23이 복숭아혹진딧물에 기생부착하여 생장하는 사진이다. 도 4에 나타난 바와 같이, 레카니실리움 어테뉴에이튬 균주는 처리 4 일후부터 진딧물에 부착기생하여 생장함으로써 진딧물을 살충하였다. 이러한 결과는 한국등록특허 제475,346호에 개시된 버티실리움 레카니 CS625 균주의 처리 4 일후 살충율 50% 정도(도 12 참조)에 비해 우수한 것이라 할 수 있는 바, 본 발명의 레카니실리움 어테뉴에이튬 균주가 복숭아혹진딧물 방제제로서 보다 효과적으로 사용될 수 있음을 의미하는 것이다. As shown in Table 1 and Figure 3, the insecticidal rate of peach aphids by the Recanicillium attenuitium strain was 70% or more after 4 days of strain treatment, and nearly 100% after 6 days. Insecticidal rate of peach aphids by Recanicillium attenuiteium strains increased gradually with increasing strain treatment time, and the half lethal time (LT 50 ) was 3.72 days. Figure 4 is a photograph of Recanicillium attenuiteium CNU-23 grown by parasitic attachment to peach aphids. As shown in Figure 4, Recanicillium attenuitium strains were insecticides by growing parasitic attachment to aphids from 4 days after treatment. This result can be said to be superior to the insecticidal rate of about 50% (see FIG. 12) after 4 days of treatment of the Vertisilium Lecany CS625 strain disclosed in Korean Patent No. 475,346, Recanicillium attenuium of the present invention This means that the strain can be used more effectively as a peach aphid control agent.

이에, 상기 레카니실리움 어테뉴에이튬 균주를 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23이라 명명하고, 2007년 9월 27일자로 서울시 서대문구 홍제1동 361-221에 소재하는 한국미생물보존센터에 기탁완료하여 수탁번호 제KFCC 11397P호를 부여받았다. Thus, the Recanicillium attenuateium strain was named Recanicillium attenuateium CNU-23, and deposited on September 27, 2007 at the Korea Microorganism Conservation Center located at 361-221, Hongje 1-dong, Seodaemun-gu, Seoul. Accession No. KFCC 11397P was assigned.

실험예 2: 시설재배 농가포장에서 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23의 복숭아혹진딧물 살충력 검정Experimental Example 2: Pesticide Insecticidal Test of Recanicillium Atheneiumium CNU-23 in Facility Cultivated Farm Packaging

농가포장에서 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23의 복숭아혹진딧물 살충력 검정을 복숭아혹진딧물에 감염된 고추 시설재배 농가(전남 나주시 반남면 대안리 139번지 정상진씨 농가)를 선정하여 실시하였다. 시험대상 농가는 시설재배 무농약 고추를 3년 이상 재배해온 농가로서, 해마다 7월에 복숭아혹진딧물에 의한 피해가 매우 심하게 발생하였다. 농가에 따르면, 진딧물의 발생밀도가 높지 않은 7월 이전에는 데리스나 제충국 같은 천연식물 추출물 제제로 진딧물을 효율적으로 방제해왔으나 7월부터 급격하게 진딧물의 밀도가 높아짐에 따라 효율적인 진딧물 방제가 어려워 작물의 피해가 매우 심하다고 하였다. 본 발명자들은 우리나라의 경우 7~8월에 강우량이 높아 시설재배에서 습도를 높게 유지할 수 있다는 것을 고려하고, 이 시기에 본 발명의 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23을 상기에서와 같이 살포처리하면 진딧물 밀도를 떨어뜨릴 수 있을 것으로 가정하였다. 이에, 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23의 진딧물 살충력 검정을 복숭아혹진딧물의 밀도가 높은 2006년 7월에 실시하였다. 즉, 실시예 3에서와 같이 얻은 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23의 포자현탁액을 복숭아혹진딧물이 발생한 10주의 고추나무 잎 뒷면에 3 일 간격으로 2회 살포처리하였다. 진딧물의 개체수는 각주당 3개 잎에 붙어있는 진딧물 성충과 약충을 구분하지 않고 조사하였다. 처리기간 동안에는 강우량이 높아 시설재배 내부 및 외부에서 습도가 80% 이상이었으며 온도는 평균 23~28 ℃였다. 그 결과를 도 5에 나타내었다. 도 5에 나타난 바와 같이, 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23의 포자가 고추 잎 뒷면에 있는 대부분의 진딧물에 부착하여 성장하여 진딧물을 살충하는 것을 확인하였다. 그 살충율을 표 2에 나타내었다. Peasant aphid insecticidal test of Recanicillium attenuiteium CNU-23 was carried out in farming field. The farms tested were farmers who had grown plant-free pesticide-free peppers for more than three years, and the damage caused by peach aphids occurred very much in July every year. According to farmers, aphids have been efficiently controlled with natural plant extracts such as Deris and Pyrethrum before July, when aphids are not high in density.However, since acute aphids are rapidly increasing in July, it is difficult to control aphids. The damage was very severe. The present inventors consider that Korea can maintain high humidity in facility cultivation due to high rainfall in July-August, and at this time, if the recanicillium attenuiteium CNU-23 of the present invention is sprayed as described above It was assumed that aphid density could be reduced. Thus, the acaricidal insecticidal assay of Recanicillium attenuiteium CNU-23 was conducted in July 2006 with high density of peach aphids. That is, the spore suspension of Recanicillium attenuiteium CNU-23 obtained as in Example 3 was sprayed twice every three days on the back of the red pepper leaf of 10 weeks where peach aphids were generated. Aphid populations were examined without distinguishing between aphid adults and nymphs attached to three leaves per foot. During the treatment period, the rainfall was high, the humidity was over 80% inside and outside the plant cultivation, and the average temperature was 23 ~ 28 ℃. The results are shown in FIG. As shown in Figure 5, it was confirmed that the spores of Recanicillium attenuiteium CNU-23 attached to most aphids on the back of the pepper leaf to kill aphids. The insecticidal rate is shown in Table 2.

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표 2에 나타낸 바와 같이, 농가포장에서 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23에 의한 복숭아혹진딧물 방제효율은 72~97% 수준으로서, 자연적인 진딧물 발생이 아니라 인위적으로 진딧물을 식재하여 살충력을 검정한 실험예 1의 결과와 살충력에서 현저한 차이가 없었다. 이상의 시험결과는 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23이 시설재배지에서 실제로 복숭아혹진딧물 방제제로서 효과적으로 사용될 수 있음을 의미하는 것이다.As shown in Table 2, the peach aphid control efficiency by Recanicillium attenuateium CNU-23 in farming packaging was 72-97%, which was tested by artificially planting aphids instead of natural aphids. There was no significant difference in the results and experimental insecticide of Experimental Example 1. The above test results indicate that Recanicillium attenuiteium CNU-23 can be effectively used as a peach aphid control agent in plant cultivation.

도 1은 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23 균주의 포자와 균사의 구조를 보여주는 주사전자현미경 사진이고;1 is a scanning electron micrograph showing the structure of spores and mycelia of the Recanicillium attenuateium CNU-23 strain;

도 2는 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23 균주의 ITS 염기서열 분석에 기초한 분자계통분류학적 위치를 보여주는 도면이며;FIG. 2 is a diagram showing the molecular phylogenetic location based on ITS sequencing of the Recanicillium attenuateium CNU-23 strain; FIG.

도 3은 온실조건에서 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23의 복숭아혹진딧물 살충력을 보여주는 그래프이고;3 is a graph showing the insecticidal insecticidal activity of Recanicillium attenuiteium CNU-23 under greenhouse conditions;

도 4는 온실조건에서 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23이 복숭아혹진딧물에 기생부착하여 생장함으로써 살충력을 나타냄을 보여주는 사진이며;Figure 4 is a photograph showing the insecticidal by growing parasitic attachment to the recanicillium attenuiteium CNU-23 in a peach or aphid under greenhouse conditions;

도 5는 농가포장 조건에서 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23이 복숭아혹진딧물에 기생부착하여 생장함으로써 살충력을 나타냄을 보여주는 사진이다.Figure 5 is a photograph showing the insecticidal by growing the parasitic attachment to the recanicillium attenuiteium CNU-23 in a peach aphid under farming conditions.

Claims (7)

복숭아혹진딧물(Myzus Persicae)에 대해 살충력을 갖는 레카니실리움 어테뉴에이튬(Lecanicillium attenuatum) CNU-23(수탁번호 제KFCC 11397P호). Lecanicillium attenuatum CNU-23 (Accession No. KFCC 11397P) having insecticidal properties against peach aphids ( Myzus Persicae ). 유효성분으로서, 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23(수탁번호 제KFCC 11397P호), 또는 그의 배양물 또는 포자현탁액을 포함하는, 진딧물 방제제.An aphid control agent containing Recanicillium attenuiteium CNU-23 (Accession No. KFCC 11397P), or its culture or spore suspension as an active ingredient. 제2항에 있어서, 진딧물이 복숭아혹진딧물인 방제제.The control agent according to claim 2, wherein the aphid is a peach or aphid. 제2항에 있어서, 포자현탁액은 107~108/㎖의 포자를 함유하는 것인 방제제.The control agent according to claim 2, wherein the spore suspension contains 10 7-10 8 / ml of spores. 제2항에 있어서, 포자현탁액은 레카니실리움 어테뉴에이튬 CNU-23(수탁번호 제KFCC 11397P호)을 계면활성제 및 식물성 오일을 함유하는 액체배지에서 진탕배양한 후, 그 배양액을 여과하여 얻은 것인 방제제.The spore suspension is obtained by shaking culture of Recanicillium attenuiteium CNU-23 (Accession No. KFCC 11397P) in a liquid medium containing a surfactant and vegetable oil, and then filtering the culture solution. Control agents. 제5항에 있어서, 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올리에이트이고, 식물성 오일은 대두유인 방제제.6. The control agent according to claim 5, wherein the surfactant is polyoxyethylene sorbitan monooleate and the vegetable oil is soybean oil. 제2항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 방제제를 식물 또는 그의 서식지에 적용하는 단계를 포함하는, 진딧물 방제방법.A method for controlling aphids, comprising applying the control agent according to any one of claims 2 to 6 to a plant or its habitat.
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