KR20080100806A - 항­ｃｄ40 항체의 용도 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료 방법을 제공하며, 인간 환자는 FcγRIIIa-158F에 대하여 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)이다. 또한 FcγRIIIa-158F에 대하여 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자 내의 B 세포에 의한 항체 생산 억제 방법을 제공한다. 본 방법은 인간 환자에게 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 항-CD40 항체로 치료가능한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유하며, 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 미반응 또는 내성인 인간 환자를 확인하는 방법 및 키트, 및 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유하며, 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 미반응 또는 내성인 인간 환자의 치료용 항체 요법을 선택하는 방법 및 키트를 제공한다. 본 발명의 방법은 CD40-발현 세포와 관련된 암 및 전암 상태의 치료에 있어서 용도를 발견하였다. 이러한 방법은 특히 CD40 및 CD20 둘 모두를 발현하는 세포와 관련된 암 및 전암 상태에 대하여 이점이 있으며, 이는 다른 종양치료제 요법 예컨대, 항-CD20 항체 요법에 미반응 또는 내성인 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 환자를 치료할 수 있기 때문이다.
Figure 112008038625174-PCT00001
CD40-발현 세포, 염증 질환 또는 자가면역 질환, FcγRIIIa.

Description

항­ＣＤ40 항체의 용도{USES OF ANTI-CD40 ANTIBODIES}
본 발명은, 특히 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 및 자가면역 질환의 치료에 있어서 항-CD40 항체의 용도에 관한 것이다.
종양 괴사 인자(TNF) 과(family)의 리간드의 다수의 구성원 및 이들의 상응하는 수용체는 세포자멸사를 유도하거나 또는 세포 생존 및 증식을 증진시킴으로써 정상 세포의 성장을 조절한다. 세포자멸 신호와 생존 및 증식 신호 간의 균형이 정상 세포의 항상성을 유지시킨다. 최소한 26 종의 TNF 과(family) 수용체 및 18 종의 TNF 과(family) 리간드가 현재까지 확인되어 왔다. 수용체 및 리간드 모두의 생물학적 활성 형태는 자가-결합 단백질 삼량체(trimer)이다. 수용체 및 리간드 모두의 경막 및 가용 형태가 확인되어 왔다. 수용체의 세포내 도메인은 서열 상동성을 공유하지 못함에도, 이들의 세포외 도메인은 40-아미노산, 시스테인-풍부 반복체를 포함한다. 이들의 세포질 테일(tails)은 세포내 단백질의 두 개의 주요 군과 상호작용함으로써 신호를 보낸다: TNF 수용체-유관 인자 (TRAF) 및 사멸(death) 도메인(DD)-함유 단백질. 이러한 수용체의 일부의 세포질 테일 상의 최소한 6 개의 인간 TRAF와 TRAF-결합 부위 간의 상호작용은 AKT(세린/트레오닌 키나아제, 단백질 키나아제 B 또는 PKB로 언급), 핵 인자-κB (NF-κB), 및 미토겐-활성화 단백질 키 나아제 (MAPK)를 포함하는 수개의 신호 경로를 개시한다. 예를 들면, 문헌 Younes and Kadin (2003) J CHn. Oncol. 18:3526-3534를 참조한다.
TNF 과(family) 수용체 구성원 CD40은 정상 및 종양성 인간 B 세포, 수지상 세포, 단핵구, 대식세포, CD8+ T 세포, 내피 세포, 단핵 및 상피 세포, 및 폐, 유방, 난소, 방광, 및 결장암을 포함하는 다수의 고형 종양의 표면상에 존재하는 50-55 kDa 세포-표면 항원이다. CD40 항원은 활성화 T 세포, 활성화 혈소판, 염증 맥관성 평활근 세포, 호산구, 류마티스 관절염의 윤활막, 피부 섬유모세포, 및 기타 비-림프종 세포 유형 상에서 발현된다. CD40 발현 세포의 유형에 의존하여, 결찰은 세포간 결합, 분화, 활성화 및 증식을 포함할 수 있다. 예를 들어, CD40가 이들의 동족 리간드, CD40L(또는 CD154)에 결합하여, B-세포 증식 및 혈장 세포로의 분화, 항체 생산, 아이소타입 스위칭, 및 B-세포 기억 생성을 자극한다. B-세포 분화시, CD40은 선-B 세포상에서 발현되나 혈장 세포로의 분화는 잃게된다.
CD40 리간드(CD40L), 또는 CD154로 알려진 CD40L은, 각각 18 kDa 및 31 kDa인 두 개의 소형의 생물학적 활성인 가용성 형태로 존재하는 32-33 kDa의 경막 단백질이다(Graf et al. (1995) EMr. J. Immunol. 25:1749-1754; Mazzei et al. (1995) J Biol. Chem. 270:7025-7028; Pietravalle et al. (1996) J. Biol. Chem. 271 :5965-5967). CD40L은 휴지 상태가 아닌 활성화된 CD4+ T-헬퍼 세포로 발현된다(Lane et al. (1992) Eur. J. Immunol. 22:2573-2578; Spriggs et al. (1992) J Exp. Med. 176:1543-1550; 및 Roy et al. (1993) J Immunol. 151:1-14). CD40와 CD40L 모두는 클론되었으며, 특성화되었다(Stamenkovi et al. (1989) EMBOJ. 8:1403-1410; Armitage et al. (1992) Nature 357:80-82; Lederman et al. (1992) J Exp. Med. 175:1091-1101; 및 Hollenbaugh et al. (1992) EMBO J. 11 :4313-4321). 또한 인간 CD40L를 설명하는 미국 등록 특허 번호 5,945,513를 참고한다. CD40L 유전자로 전달감염되어, 이들의 표면상에서 CD40L 단백질을 발현하는 세포는 B-세포 증식을 촉발시킬 수 있으며, 다른 자극 신호와 함께, 항체 생산을 유도할 수 있다(Armitage et al. (1992) 전게서; 및 미국 등록 특허 번호 5,945,513). 자가면역 질환을 보유한 환자에서는 건강한 대상체에서는 발견되지 않는 가용성 CD40L (sCD40L)의 혈청 수준이 증가하게 된다. CD40L의 과다발현은 설치류 모델 내의 전신성 홍반 루푸스와 유사한 자가면역 질환을 유발시킨다(Higuchi et al. (2002) J Immunol. 168:9-12). 이와 대조하면, 활성화 T 세포에 대한 기능적 CD40L의 부재는 X-링크 하이퍼-IgM 신드롬을 유발시킨다 (Allen et al (1993) Science 259:990; and Korthauer et al. (1993) Nature 361 :539). 추가적으로, CD40/CD40L 상호작용을 차단함으로서 비 인간 영장류 모델 내의 이식 거부반응을 예방할 수 있다. 예를 들어, Wee et al. (1992) Transplant 53:501-7를 참조한다.
APC 상의 CD40 발현은 이러한 세포의 활성화에 중대한 보조자극 열할을 하게된다. 예를 들어, 작용제성 항-CD40 단클론 항체(mAbs)는 B-세포 활성화에 대한 T 헬퍼 세포의 효과를 모사하는 것으로 나타났다. FcγRII 발현 유착 세포 상에 제시되는 경우, 이러한 항체는 B-세포 증식을 유도한다(Banchereau et al. (1989) Science 251:70). 더욱이, 작용제성 항-CD40 mAbs는 T 헬퍼 신호를 IgM, IgG, 및 IgE의 분비로 대체할 수 있다(Gascan et al. (199I) J. Immunol. 147:8). 또한, 작 용제성 항-CD40 mAbs는 림프절에서 분리한 B 세포의 프로그램 세포 사멸(세포자멸)을 예방할 수 있다.
이러한 관찰 및 다른 관찰들은 CD40 및 CD40L의 상호작용이 체액성 및 세포-매개 면역 반응 양자를 조절하는 중추적 역할을 한다는 현재의 이론을 뒷받침한다. 근자의 연구는 다양한 생리학적 및 병리학적 진행에 있어서 CD40/CD40L 상호작용의 광범위한 역할을 밝혀왔다.
CD40 신호 전달 경로는 많은 세포간 인자의 조화된 조절에 의존한다. TNF 수용체 과의 다른 구성원과 마찬가지로, CD40는 TRAF-2, -3, -5, 및 -6을 포함하는 TRAF를 활성화시키며, 세포외 신호-조절 키나아제(ERK), c-jun 아미노 말단 키나아제(JNK), p38 MAPK, AKT, 및 NF-κB를 포함하는 CD40L(막-결합 CD40L 또는 가용성 CD40L 중의 하나)의 CD40의 진입이 수반되는 다양한 신호 경로를 상향조절하게 된다(예를 들면, Younes and Carbone (1999) Int. J. Biol. Markers 14:135-143; van Kooten and Banchereau (2000) J. Leukoc. Biol. 67:2-17).
CD40를 경유한 신호는 세포자멸에 의한 세포 사멸을 예방하는 것으로 알려져있다(Makus et al. (2002) J. Immunol. 14:973-982). 세포자멸 신호는 조화된 방법으로프로그램 세포 사멸을 유도하는데 필수적이다. 세포 사멸 신호는 소포체 스트레스 등의 세포 내부로부터의 내인성 자극 또는 FasL 또는 TNFα의 수용체 결합 등의 외인성 자극을 포함할 수 있다. 카스파아제, 예컨대 카스파아제-3 및 카스파아제-9, 및 폴리(ADP 리보오스) 폴리머라아제 (PARP)의 활성화에 관련되어 있는 신호 경로는 복잡하다. 케스케이드 과정에서, 항-세포자멸 신호 단백질, 예컨대 mcl-1 및 bcl-x, 및 IAP 과의 단백질 구성원, 예컨대 세포자멸사의 X-링크 억제제(XIAP)는 하향조절되었다(Budihardjo et al. (1999) Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 15:269-290). 예를 들어, 수지상 세포에서, CD40 세포 신호는 FasL에 의하여 전달된 세포자멸 신호를 차단할 수 있다(Bjorck et al. (1997) Intl. Immunol. 9:365-372).
따라서, CD40L에 의한 CD40 진입 및 CD40 신호의 후속 활성화는 정상 면역 반응에 필수적인 단계이다; 그러나, CD40 신호의 조절곤란은 질병을 유발시킬 수 있다. CD40 신호 경로는 자가면역 질환에 관여한다고 알려져 있다(Ichikawa et al. (2002) J Immunol. 169:2781-2787 and Moore et al (2002) J. Autoimmun. 19:139-145). 추가적으로, CD40/CD40L 상호작용은 염증 진행에 중대한 역할을 한다. 예를 들어, CD40 및 CD40L 모두는 인간 및 실험적 죽상동맥경화증 병변에서 과다 발현된다. CD40 자극은 죽종(atheroma)-유관 세포 유형, 예컨대 내피 세포, 평활근 세포, 및 대식세포 내에서 매트릭스-분해 효소의 발현 및 조직 인자 발현을 유도한다. 추가로, CD40 자극은 IL-I5 IL-6, 및 IL-8등의 전염증 사이토카인 생산 및 ICAM-I, E-selectin, 및 VCAM 등의 유착 분자를 유도한다. CD40/CD40L 상호작용의 억제는 동물 모델에서 아테로마발생을 예방한다. 유전자 이식 모델에서, CD40/CD40L 상호작용의 차단은 염증을 예방한다. CD40/CD40L 결합이 알츠하이머 아밀로이드-베타 펩타이드와 시너지적으로 활동하여 미세아교세포 활성을 증진시키고, 따라서 신경독소를 유발시킨다는 사실이 알려졌다.
류마티스 관절염(RA) 환자에 있어서, CD40 발현은 관절낭 연골세포에서 증가되며, 따라서, CD40 신호는 손상된 사이토카인 및 매트릭스 메탈로프로티나아제의 생산에 기여하는 것 같다. Gotoh et al. (2004) J Rheumatol. 31 :1506-1512를 참조한다. 추가적으로, 이는 윤활 염증 반응의 증폭은 RA 환자의 CD14+ 윤활 세포 상의 CD40 결찰을 경유하는 MAPKs 및 NF-κB의 활성화를 통하여 발생한다는 사실을 보여준다(Harigai et al. (2004) Arthritis. Rheum. 50:2167-2177). RA의 실험 모델에서, 항-CD40L 항체 치료는 질환 유도, 관절 염증 및 항-콜라겐 항체 생산을 예방하였다 (Durie et al. (1993) Science 261:1328-1330). 마지막으로, 임상 시험에서, Rituxan® 투여에 의한 RA 환자의 CD20+ 양성 B 세포 고갈(일반적으로 B 세포 림프종)은 증상을 개선시켰다고 알려져 있다(Shaw et al. (2003) Ann. Rheum. Dis. 62(Suppl. 2):ii55-ii59).
T 세포에 항원 제시 중의 CD40/CD40L 상호작용 차단은 T 세포 내성을 유발하였다고 나타났다. 따라서, CD40/CD40L 상호작용 차단은 초기 T 세포 활성화를 예방하며, 항원에 재노출에 대한 장기 내성을 유도한다.
인간 항-CD40 단클론 항체 및 다수의 이들의 용도는 WO 2005/044854, WO 2005/044304, WO 2005/044305, WO 2005/044306, WO 2005/044855, WO 2005/044307, 및 WO 2005/044294로 공개된 공유 특허 출원에 게시되어 있다. 이러한 출원들은 특히 명세서상에 CHIR-12.12로 지정된 인간 IgG1 항-CD40 단클론 항체를 개시하며, 이들은 인간 중쇄 유전좌 및 인간 κ 경쇄 유전좌를 함유한 유전자삽입 마우스의 접종에 의하여 생성된다(Xeno마우스® technology; Abgenix, California).
FACS 분석에 의하여 나타난 바와 같이, CHIR-12.12는 인간 CD40에 특이적으 로 결합하며, CD40-리간드(CD40L) 결합을 예방할 수 있다. CHIR-12.12는 세포 표면 CD40에 선-결합한 CD40L와 경쟁하였다. CHIR-12.12 단클론 항체는 강력한 길항제이며, 정상 및 악성 B 세포의 시험관 내 CD40L-매개 증식을 억제한다. CHIR-12.12 단클론 항체는 정상 인간 B-림프구 내의 CD40L에 의하여 매개되는 생존 및 신호 경로를 직접 억제한다. 시험관 내에서, CHIR-12.12는 ADCC에 의하여 NHL 환자의 원발암 세포를 사멸시킨다. 투여량-의존성 항-종양 활성은 이종이식 인간 림프종 모델에서 나타난다. CHIR-12.12은 현재 B-세포 악성종양에 대한 임상 제I기 시험 중에 있다.
CD20은 B 세포 분화 과정에서 조기 발현되는 세포-표면 항원이며, B 세포 발달을 통하여 세포 표면상에 잔존한다. CD20은 B 세포 활성화에 관여하며, 종양성 B 세포에서 매우 높은 수준으로 발현되는, 임상적으로 인식된 치료 표적이다(예를 들면, Hooijberg et al. (1995) Cancer Research 55:2627). 항체 표적화 CD20, 예컨대, 리툭시맙(rituximab, Rituxan®)은 미국 식품 의약국(U.S. Food and Drug Administration)으로부터 비-호지킨 림프종의 치료제로 인증받았다(예를 들면, Boye et al. (2003) Ann. Oncol. 14:520). Rituxan®은 저도, 중등도, 및 고도의 비-호지킨 림프종(NHL)의 치료에 효과적인 것으로 나타났다(예를 들면, Maloney et al. (1994) Blood 84:2457-2466, McLaughlin et al. (1998) J Clin. Oncol 16:2825-2833, Maloney et al (1997) Blood 90:2188-2195, Hainsworth et al. (2000) Blood 95:3052-3056, Colombat et al. (2001) Blood 97:101-106, Coiffer et al. (1998) Blood 92:1927-1932), Foran et al. (2000) J. Clin. Oncol. 18:317-324, Anderson et al. (1997) Biochem. Soc. Trans. 25:705-708, 또는 Vose et al. (1999) Ann. Oncol. 10:58a). Rituxan®은 염증 및 자가면역 질환에 역할을 하는 정상 B 세포를 격감시킨다. 이는 자가면역 질환에 대한 임상적 시험이다.
활성의 정확한 기작은 알려진바 없지만, 증거는 Rituxan®의 항-림프종 효과는 부분적으로는 보체-매개 세포독성 (CMC), 항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC), 세포 증식의 억제, 및 최종적으로는 세포자멸사의 직접 유도에 기인한다는 사실을 적시한다. 일부 환자는, 그러나, Rituxan®에 의한 치료에 내성이 된다(Witzig et al. (2002) J. Clin. Oncol. 20:3262, Grillo-Lopez et al. (1998) J Clin. Oncol. 16:2825, 또는 Jazirehi et al. (2003) MoI. Cancer Ther. 2:1183-1193). 예를 들면, 일부 환자는 항-CD20 항체 요법 후 악성 B 세포에 대한 CD20 발현을 잃게 된다 (Davis et al. (1999) Clin. Cancer Res. 5:611). 더 자세히 살펴보면, 30% 내지 50%의 저도 NHL 환자는 이 단클론 항체에 대한 임상적인 반응을 나타내지 않는다(Hainsworth et al. (2000) Blood 95:3052-3056; Colombat et al. (2001) Blood 97:101-106). NHL에 대한 리툭시맙의 임상적 활성은 환자의 FcγRIIIa 유전형과 상호연관되어 있음을 나타내왔다. V/V 또는 V/F의 FcγRIIIa 158aa 다형성을 보유한 환자는 F/F를 보유한 환자들보다 리툭시맙에 더 민감하다(예를 들면, Cartron et al. (2002) Blood 99(3):754-758 또는 Dall'Ozzo et al. Cancer Res. (2004) 64:4664-4669). 이 단클론 항체에 대한 내성을 발달시키거나, 또는 이 항체의 초기 요법에 내성인 염증 질환 및 자가면역 질환을 보유한 환자에 있어서, 치료적 중재의 대안 형태가 필요하다.
추가적으로 Rituxan®은 환자의 정상 B 세포를 격감시킨다. 따라서, 이는 B 세포 의존성 자가면역 및 염증 질환의 치료에 사용될 수 있다.
따라서 염증 질환 및 자가면역 질환의 신규의 치료제 및 신규의 치료 전략에 대한 지속적인 수요가 존재한다. 특히, 항-CD20 항체, 예컨대, 리툭시맙(Rituxan®) 등에 의한 치료에 내성인 환자의 신규의 치료 전략에 대한 수요가 존재한다.
발명의 개요
본 발명은 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서, 인간 환자는 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)이다. 방법은 인간 환자에 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 것을 포함한다. 본 발명은 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자 내의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료용 의약의 제조시 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량의 용도를 제공한다.
또한 본 발명은 인간 환자에게 항-CD40 항체의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자 내에서 B 세포에 의하여 항체 생산을 억제하는 방법을 제공한다. 본 발명은 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(V/F 또는 F/F)인 인간 환자 내에서 B 세포에 의한 항체 생산의 억제용 의약 제조시 항-CD40 항체의 유효량의 용도를 제공한다.
또한 본 발명은 항-CD40 항체로 치료가능하며, 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성인 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 방법 및 키트를 제공한다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 방법은: a) 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성인 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 단계; 및 b) 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형 (V/V, V/F 또는 F/F)을 결정하는 단계를 포함하며; 여기서, 인간 환자가 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 경우, 염증 질환 또는 자가면역 질환은 항-CD40 항체로 치료가 가능하다. 본 발명은 이 방법을 사용하여 확인된 인간 환자에 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 항-CD40 항체로 치료가능한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 확인을 위하여 제공되는 본 발명의 키트는 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위한 시약을 포함한다.
본 발명은 또한 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성인 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 치료용 항체 요법을 선택하기 위한 방법 및 키트를 제공한다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 방법은: a) 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성인, CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 단계; 및 b) 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형 (V/V, V/F 또는 F/F)을 결정하는 단계를 포함하며; 여기서 인간 환자가 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 경우, 항-CD40 항체는 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료용으로 선택된다. 본 발명은 이 방법을 사용하여 확인된 인간 환자에게 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 항-CD40 발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 치료용 항체 요법을 선택하기 위하여 제공되는 본 발명의 키트는 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위한 시약을 포함한다.
본 발명은 또한 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 방법은 인간 환자에게 저속-내재화 항체를 투여하는 단계를 포함한다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량이 인간 환자에게 투여되면, 항-CD40 항체가 이들의 투여 후 CD40-발현 세포에 의하여 현저하게 내재화되지 않게 된다. 본 발명의 다른 실시 상태에서, 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량이 인간 환자에 투여되면, 항-CD40 항체는 이들의 투여 후 CD40-발현 세포의 표면상에 실질적으로 균일하게 분포된 상태로 남게 된다. 본 발명의 또 다른 실시 상태에서, 항-CD40 항체가 인간 환자에게 투여되면, 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량은 이들의 투여 후 인간 환자 내의 CD40-발현 세포의 표면에 존재하게 된다.
본 발명에 따라 사용되는 항-CD40 항체는 CD40 항원과 특이적으로 결합한다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체, 특히 단클론 항체는, 인간 FcγRIIIa-158V에 대한 강한 결합 친화도, 인간 FcγRIIIa-158F에 대한 강한 결합 친화도, 또는 인간 FcγRIIIa-158V 및 FcγRIIIa-158F에 대한 강한 결합 친화도를 나타낸다. 본 발명의 이러한 실시 상태의 일부로서, 항-CD40 항체는 잠재적 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)을 유발시키기 적합한 결합 특성을 지닌 인간 환자의 자연살상(NK) 세포에 대한 두 FcγRIIIa 아미노산 158 동종이형(V 또는 F)의 어느 한쪽에 결합할 수 있다. 적합한 항-CD40 항체는, 예를 들면, CD40-발현 세포에 대한 CD40-CD40L 신호의 길항제인 항-CD40 항체를 포함하는, 현저한 작용제 활성이 없는 항-CD40 항체를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 항-CD40 항체는: a) 단클론 항체 CHIR-12.12; b) 하이브리도마 세포주 12.12에의해 생산된 단클론 항체; c) SEQ ID NO:2로 나타낸 서열, SEQ ID NO:4로 나타낸 서열, SEQ ID NO:5로 나타낸 서열, SEQ ID NO:2 및 SEQ ID NO:4로 나타낸 두 서열 모두, 및 SEQ ID NO:2 및 SEQ ID NO:5로 나타낸 두 서열 모두로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단클론 항체; d) SEQ ID NO:1로 나타낸 서열, SEQ ID NO:3에 나타낸 서열, 및 SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:3에 나타낸 두 서열 모두로 구성되는 군으로부터 선택되는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자에 의하여 암호화되는 아미노산 서열을 보유한 단클론 항체; e) 하이브리도마 세포주 12.12에의해 생산된 단클론 항체에 결합가능한 에피토프에 결합하는 단클론 항체; f) SEQ ID NO:7 또는 SEQ ID NO:9로 나타낸 인간 CD40 서열의 잔기 82-87을 포함하는 에피토프에 결합하는 단클론 항체; g) SEQ ID NO:7 또는 SEQ ID NO:9로 나타낸 인간 CD40 서열의 잔기 82-89를 포함하는 에피토프에 결합하는 단클론 항체; h) 경쟁적 결합 분석에서 단클론 항체 CHIR-12.12와 경합하는 단클론 항체; i) 전술한 항목 a)의 단클론 항체 또는 전술한 항목 c)-h) 중의 하나의 단클론 항체로서, 항체는 재조합적으로 생산된 것인 단클론 항체; 및 j) 전술한 항목 a)-i) 중의 하나의 단클론 항체의 항원-결합 절편인 단클론 항체로서, 절편은 인간 CD40 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 능력을 보유한 것인 단클론 항체로 구성되는 군으로부터 선택된다.
본 발명의 방법은 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 및 자가면역 질환의 치료에 있어서의 용도를 발견한다. 예에는, 전신성 홍반성 루푸스 (SLE),
원판상 루푸스, 루푸스 신장염, 사르코이드증, 염증성 관절염, 예컨대 연소성 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군, 강직척추염, 및 통풍관절염을 포함하는 염증성 관절염, 장기 또는 조직 이식 거부반응, 초급성, 급성, 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 대 숙주 질환, 다발성 경화증, 고 IgE 증후군, 결절다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 창자병, 크론씨병, 만성소화장애증(글루텐님감성 창자병증), 자가면역 간염, 악성 빈혈, 자가면역 용혈 빈혈, 건선, 공피증, 중증근무력증, 자가면역 혈소판감소자색반증, 자가면역 감상선염, 그레이브스병, 하시모토 감상선염, 면역복합체병, 만성 피로 면역 조절불능 증후군 (CFIDS), 다발성근육염 및 피부근육염, 한랭글로블린혈증, 혈전용해, 심근병증, 보통 천포창,
간질성 폐섬유증, 타입 I 및 타입 II 당뇨병, 타입 1, 2, 3, 및 4 지연성 과민, 알러지 또는 알러지 질환, 치료용 단백질에 대한 원치않는/의도하지않은 면역 반응, 천식, 초그-스트라우스 증후군 (알러지성 육아종증), 아토피 피부염, 알러지 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE-매개 알러지, 죽상동맥경화증, 맥관염, 특발성 염증 근병증, 용혈증, 알츠하이머병, 및 만성 염증성 말이집탈락 다발신경증, 폐 이식 거부반응을 포함하나 이에 한정되지 않는 폐렴, 천식, 사르코이드증, 폐기종, 낭성 섬유증, 특발성 폐섬유증, 만성 기관지염, 알러지성 비염 및 과민성 폐렴, 호산구성 폐렴 등의 폐 알러지 질환, 골수 및/또는 폐 이식 또는 다른 원인에 기인한 폐쇄성 세기관지염, 이식 죽상동맥경화증/이식 정맥경화증, 콜라겐, 관상, 및류마티스 관절염 등의 자가면역 질환에 의한 폐 섬유증, 및 홍반성 루푸스뿐만 아니라 CD20-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 방법은 CD40 및 CD20를 모두 발현하는 세포와 관련된 염증 질환 및 자가면역 질환에 대하여 특히 유리하다. 이 방식에 있어서, 본 발명은 FcγRIIIa-158F(유전형 V/F 또는 F/F)에 대한 동종접합 또는 이종접합인 환자의 항-CD20 항체를 포함하는 다른 종양치료제에 의한 요법에 내성인 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 환자의 치료를 가능하게 한다.
도 1A-1F는 6 개의 세포주의 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)의 분석 결과를 나타낸다.
도 2A-2D는 CLL 환자 세포(n=8) 내의 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)의 분석 결과를 나타낸다.
도 3은 CLL 환자 세포(n=9) 내의 ADCC의 분석 결과를 요약한다.
도 4는 두 개의 다른 공여자로부터의 NK 작동 세포를 사용한 CLL 환자 세포 내의 ADCC의 분석 결과를 나타낸다.
도 5는 CLL 환자 세포 및 정상 B 세포에서의 CD40 및 CD20 세포-표면 발현의 정량 결과를 나타낸다.
도 6은 정량된 CD40 및 CD20 세포-표면 발현에 의한 세포의 ADCC 활성을 요 약한다.
도 7은 다우디(Daudi) 및 ARH77 세포주에 대한 세포-표면 결합 CHIR-12.12의 수준을 나타내는 막대 그래프이다.
도 8은 FACS 분석에 의한 CLL 환자 세포 내의 CHIR-12.12 및 리툭시맙의 내재화 실험 결과를 나타낸다.
도 9는 FITC-표지 항체의 공초첨 현미경에 의한 정상 B 세포 내에서의 CHIR-12.12 및 리툭시맙의 내재화 실험 결과를 나타낸다.
도 10은 Alexa488-표지 항체의 공초첨 현미경에 의한 CLL 환자 세포 내에서의 CHIR-12.12 및 리툭시맙의 내재화 실험 결과를 나타낸다.
도 11은 ADCC 활성 및 내재화 간의 관련성을 요약한다.
도 12는 다른 FcγRIIIa 유전형을 보유한 공여자의 정제된 NK 작동 세포를 사용한 CHIR-12.12 또는 리툭시맙에 의한 다우디 세포의 특이적 용해 최대 백분율을 나타내는 막대 그래프이다.
도 13은 다른 FcγRIIIa 유전형을 보유한 공여자의 정제된 NK 작동 세포 내에서 다우디 세포에 대한 CHIR-12.12 또는 리툭시맙의 ADCC 역가(ED50)를 나타내는 막대 그래프이다.
도 14는 다중 유전형인 인간 공여자의 인간 NK 세포에 의한 CLL 환자 세포(n=9)에 대한 CHIR-12.12 또는 리툭시맙의 경쟁적 ADCC를 요약한다.
발명의 상세한 설명
발명자들은 항-CD40 항체, 예컨대, CHIR-12.12은, 다른 ADCC 매개 항체가 덜 효과적이거나 또는 상대적으로 무력한 상태 하에서 CD40-발현 표적 세포의 잠재적 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)을 매개할 수 있다는 사실을 발견하였다. 다른 항체와 달리, 예컨대, 본 발명에세 사용되는 리툭시맙(Rituxan®), 항-CD40 항체는 잠재적 ADCC를 유발시키기 적합한 결합 특성을 지닌 인간 환자의 자연살상(NK) 세포 상의 두 FcγRIIIa 아미노산 158 동종이형(V 또는 F) 중의 한쪽에 결합할 수 있다. 이 발견은 기대치 않았던 것이며, 전체 환자의 일 단면을 교차하는 염증 질환 및 자가면역 질환을 치료하는 우리의 능력을 진보하도록 한다.
따라서, 항-CD40 항체, 예컨대, CHIR-12.12는 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자, 추가로 FcγRIIIa-158V에 대한 동종접합(유전형 V/V)인 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 및 자가면역 질환의 치료에 사용될 수 있다.
본 발명은 따라서 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서 상기 인간 환자는 FcγRIIIa-158F 이종접합 또는 동종접합 (유전형 V/F 또는 F/F)이며, 상기 인간 환자에 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 것을 포함하는 방법이다. 본 발명은 또한 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자 내의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료용 의약의 제조시 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량의 용도를 제공한다.
전술한 바와 같이, NHL 내의 리툭시맙의 임상적 활성은 환자의 FcγRIIIa 유전형과 상관 관계에 있음을 나타내 왔다. F/F의 FcγRIIIa 158aa 다형성을 보유한 환자는 V/V 또는 V/F를 보유한 환자 보다 리툭시맙에 덜 민감하다(예를 들면, Cartron et al. (2002) Blood 99(3): 754-758 또는 Dall'Ozzo et al. (2004) Cancer Res. 64:4664-4669). 전술한 바와 같이, Rituxan®은 자가면역 질환의 임상적 시도이다. 따라서, 본 발명은 특히, 항-CD20 항체 예컨대, 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 민감하지 않은 염증 질환 및 자가면역 질환의 치료에 특히 유리하다.
항-CD40 항체, 예컨대, CHIR-12.12는 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자, 추가로 FcγRIIIa-158V에 대한 동종접합(유전형 V/V)인 인간 환자 내의 B 세포에 의한 항체 생산의 억제 방법에 사용될 수 있다.
따라서 본 발명은 인간 환자에 항-CD40 항체, 예컨대, CHIR-12.12의 유효량을 투여하는 것을 포함하는, FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합 (유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자 내의 B 세포에 의한 항체 생산의 억제 방법을 제공한다. 본 발명은 또한 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(V/F 또는 F/F)인 인간 환자 내의 B 세포에 의한 항체 생산의 억제용 의약의 제조시 항-CD40 항체의 유효량의 용도를 제공한다.
이는 당해 기술 분야의 숙련자에 의하여 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자 내의 B 세포에 의한 항체 생산을 억제할 수 있는 것으로 기대되지 않았었다.
본 발명은 ADCC-매개 항-CD40 항체 투여에 의하여 환자의 FcγRIIIa-158 유전형에 기초하여 치료법을 개별 인간 환자를 위하여 선택되도록 하였다.
본 발명은 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성인, 항-CD40 항체로 치료가능한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 방법을 제공하며, 다음을 포함한다:
a) 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성인, CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 단계; 및
b) 상기 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형(V/V, V/F 또는 F/F)을 결정하는 단계;
여기서 상기 인간 환자가 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 경우, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 항-CD40 항체로 치료가 가능하다. 본 발명은 이 방법을 사용하여 확인된 인간 환자에게 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
항-CD40 항체로 치료가능한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 이 방법은 적합한 진단 키트를 사용하여 당해 기술 분야의 숙련자에 의하여 손쉽게 수행될 수 있다. 키트는 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기에 적합한 시약을 포함한다. 따라서, 본 발명은 또한 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위한 시약을 포함하는, 항-CD40 항체로 치료가능한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하기 위한 키트를 제공한다. 적합한 키트는 본 명세서의 다른 부분에서 좀 더 자세하게 설명된다.
본 발명은 또한 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성인, 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 치료용 항체 요법을 선택하는 방법을 제공하며, 다음을 포함한다:
a) 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성인, CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 단계; 및
b) 상기 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하는 단계 (V/V, V/F 또는 F/F);
여기서, 상기 인간 환자가 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 경우, 항-CD40 항체는 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료를 위하여 선택된다. 특히, 항-CD40 항체는 리툭시맙(Rituxan®)에 의한 치료에 우선하여 선택될 수 있다. 본 발명은 이 방법을 사용하여 확인된 인간 환자에게 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자 치료용 항체 요법을 선택하는 이 방법은 적합한 진단 키트를 사용하여 당해 기술 분야의 숙련자에 의하여 손쉽게 수행될 수 있다. 키트는 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기에 적합한 시약을 포함하여야 한다. 따라서, 본 발명은 또한 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위한 시약을 포함하는, CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 치료용 항체 요법의 선택을 위한 키트를 제공한다.
발명자들은 놀랍게도 항-CD40 항체, 예컨대, CHIR-12.12는 투여 후 CD40-발현 세포에 의하여 현저하게 내재화되지 않는다는 사실을 발견하였다. 그 대신에, 항-CD40 항체, 예컨대, CHIR-12.12은 투여 후 상당 시간 경과 후 CD40-발현 세포의 표면상에 실질적으로 균일하게 분포되었다. 다른 항체와 대조하면, 이는 특히 항-CD20 항체, 예컨대, 리툭시맙(Rituxan®)이다.
CD40-발현 세포의 표면에서의 CD40 결합 지속시간 및 CD40-발현 세포의 표면상의 항-CD40 항체의 균일 분포는 항-CD40 항체가 자연살상(NK) 세포 상에서 FcR, 예컨대, FcγRIIIa에 결합을 통하여 CD40-발현 표적 세포의 잠재적 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)을 매개할 수 있게 한다.
따라서, 본 발명은 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 인간 환자에 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 항-CD40 항체가 투여 후 CD40-발현 세포에 의하여 현저하게 내재화되지 않는다.
본 발명은 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 인간 환자에 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 항-CD40 항체는 투여 후 CD40-발현 세포의 표면상에 실질적으로 균일하게 분포된다.
본 발명은 또한 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료 방법을 제공하며, 상기 인간 환자에게 항-CD40 항체를 투여하는 단계를 포함하는 방법으로서, 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량은 투여 후 상기 인간 환자 내의 CD40-발현 세포의 표면에 존재한다.
이러한 본 발명의 특징은, 따라서 환자에게 저속-내재화 항체를 투여하는 것과 관련이 있다. "저속-내재화 항체"는 상당 기간의 시간 동안 세포 표면상에 배치되어 잔존하는 항체를 의미한다. 기술 분야의 숙련자가 이해하고 있는 바와 같이, 이 특성은 효과적인 요법을 위한 항체-수용체 복합체의 내재화에 실제로 요구되는 다수의 치료적 용례에 유리하다고 간주되는 특성과 대비된다. 본원에서, 상당 기간의 시간은 일반적으로 3 시간, 바람직하게는 6 시간, 더 바람직하게는 12 시간, 더 바람직하게는 24 시간, 36 시간, 48 시간, 72 시간, 96 시간, 120 시간, 144 시간, 168 시간 또는 그 이상을 초과한다.
바람직하게는, 최소한 5%, 최소한 10%, 최소한 20%, 최소한 30%, 최소한 40%, 최소한 50%, 최소한 60%, 최소한 70%, 최소한 80%, 최소한 90%, 또는 그 이상의 CD40-발현 세포의 표면상에 초기에 배치된 항체가 전술한 상당 기간의 시간의 경과 후 세포 표면상에 배치되어 잔존한다.
항체의 내재화는 다양한 측정법에 의하여 사정될 수 있다. 예를 들면, 세포주 예컨대, 다우디 림프종 세포주, 또는 ARH77 MM 세포주가 내재화시 항체 결합 후보 물질의 효과를 평가하기 위하여 사용될 수 있다. 세포는 인간 IgG1 (대조구 항체) 또는 후보 항체와 함께 얼음(내재화 차단을 위한 0.1% 아지드화 나트륨 첨가) 상에서 또는 37℃(아지드화 나트륨 미첨가)로 일정 시간, 적합하게는 3 시간 동안 배양되었다. 냉각 염색 완충액 (예컨대, PBS+l%BSA+0.1% 아지드화 나트륨)으로 세척한 후, 세포는 염색되었다. 예를 들면 염소 항-인간 IgG-FITC로 30 분간 얼음 상 에서 염색된다. 염색의 정도는 이후 평가될 수 있다; 이 실시예에 있어서, 기하 평균 형광 강도 (MFI)는 예컨대, FACS 칼리버(Calibur)에 의하여 기록될 수 있었다. 다른 적합한 측정법은 기술 분야의 숙련자에게 공지되어 있다(예를 들면, http://www.abgenix.com/documents/SBS2003%20poster.pdf).
본원의 실시예 4 및 5에서 설명된 실험에 있어서, 얼음 상에서 아지드화 나트륨의 존재하에 또는 아지드화 나트륨이 결핍된 상태로 CH12.12로 배양된 세포 간에 MFI의 차이를 관찰할 수 없었다(도 7-10 참조). 이러한 데이터는 CH12.12는, CD40에 결합하는 경우, 내재화되지 않고, 세포 표면상에 계속하여 현시되어 있게 된다는 사실을 나타낸다.
본 발명을 이용하기 위하여 사용될 수 있는 표분 방법 및 절차의 개요를 아래에 제시한다. 본 발명은 제시된 특정 방법론, 프로토콜, 세포주, 벡터 및 시약에 한정되는 것은 아님을 이해하여야 한다. 또한 본원의 용어는 특정 실시 상태를 설명하기 위한 목적일 뿐이며, 이 용어가 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 의도되어 있지 않음을 이해하여야 한다. 본 발명의 범위는 첨부된 청구 범위에 의하여 제한될 뿐이다.
본 명세서에서는 뉴클레오타이드 및 아미노산의 표준 약어를 사용한다.
본 발명의 실시에는, 달리 적시하지 않는다면, 분자 생물학, 미생물학, 재조합 DNA 기술 및 면역학의 종래 기술을 사용하게 되며, 이는 당해 기술 분야의 숙련자의 범위 내에 있다.
이러한 기법은 문헌 상에 전부 설명되어 있다. 자문을 위하여 특히 적합한 교재의 예는 다음을 포함한다: Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning; A Laboratory Manual (2d ed.); D.N Glover, ed. (1985) DNA Cloning, Volumes I and II; M.J. Gait, ed. (1984) Oligonucleotide Synthesis; B.D. Hames & SJ. Higgins, eds. (1984) Nucleic Acids Hybridization; B.D. Hames & S.J. Higgins, eds. (1984) Transcription and Translation; R.I. Freshney, ed. (1986) Animal Cell Culture; Immobilized Cells and Enzymes (IRL Press, 1986); B. Perbal (1984) A Practical Guide to Molecular Cloning; the Methods in Enzymology series (Academic Press, Inc.), especially volumes 154 & 155; J.H. Miller and M.P. Calos, eds. (1987) Gene Transfer Vectors for Mamalian Cells (Cold Spring Harbor Laboratory); Mayer and Walker, eds. (1987) Immunochemical Methods in Cell and Molecular Biology (Academic Press, London); Scopes (1987) Protein Purification: Principles and Practice (2d ed.; Springer Verlag, N.Y.); and D.M. Weir and C. C. Blackwell, eds. (1986) Handbook of Experimental Immunology, Volumes I-IV.
본 발명의 방법은 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 및 자가면역 질환의 치료에 있어서 항-CD40 항체의 용도와 관련되어 있다.
"CD40", "CD40 항원", 또는 "CD40 수용체"는 50-55 kDa의 종양 괴사 인자(TNF) 수용체 족(family)의 경막 글리코프로테인을 의미한다(예를 들면, 미국 등록 특허 번호 5,674,492 및 4,708,871; Stamenkovic et al. (1989) EMBO 8:1403; Clark (1990) Tissue Antigens 36:33; Barclay et al. (1997) The Leucocyte Antigen Facts Book (2d ed.; Academic Press, San Diego)). 택일적으로 스플라이싱된 이 유전자의 전사 변이체에 의하여 암호화된 인간 CD40의 두 종의 아이소형(isoform)이 확인되었다. 제1 아이소형(또한 "긴 아이소형" 또는 "아이소형 1"로 알려짐)은 277-아미노산 전구체 폴리펩타이드로서 발현되며(SEQ ID NO:9; GenBank 승인 번호 CAA43045로 최초 보고, GenBank 승인 번호 NP_001241의 아이소형 1로 확인됨), 이는 SEQ ID NO:8(GenBank 승인 번호 X60592 및 NM_001250)에 의하여 암호화되고, 최초 19 잔기에 의하여 제시된 신호 서열을 보유한다. 제2 아이소형(또한 "짧은 아이소형" 또는 "아이소형 2"로 알려짐)은 203-아미노산 전구체 폴리펩타이드로 발현되며(SEQ ID NO:7; GenBank 승인 번호 NP_690593), 이는 SEQ ID NO:6(GenBank 승인 번호 NM_152854)에 의하여 암호화되며, 또한 최초 19 잔기에 의하여 제시된 신호 서열을 보유한다. 이러한 인간 CD40의 두 종의 아이소형의 전구체 폴리펩타이드는 최초 165 잔기를 공유한다(즉, SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:9의 1-165 잔기). 짧은 아이소형의 전구체 폴리펩타이드(SEQ ID NO: 7로 나타냄)는 암호화 부분이 결핍된 전사 변이체(SEQ ID NO:6)에 의하여 암호화되며, 번역 프레임 이동(shift)을 유도한다; 결과물인 CD40 아이소형은 CD40의 긴 아이소형에 함유된 것과 구별되는 더 짧은 C-말단(SEQ ID NO:7의 166-203 잔기)을 함유한다(SEQ ID NO:9의 166-277 잔기에 나타낸 C-말단). 본 발명의 목적을 위하여, "CD40," 또는 "CD40 항원," "CD40 세포 표면 항원" 또는 "CD40 수용체"라는 용어는 CD40의 짧은 아이소형과 긴 아이소형 둘 모두를 포괄한다. CD40 항원은 전부 또는 부분적으로 글리코실화되었다.
본원의 다른 부분에서 적시한 바와 같이, CD40는 정상 및 종양성 인간 B 세포 둘 모두, 수지상 세포, 단핵구, 대식세포, CD8+ T 세포, 내피 세포, 단핵 및 상피 세포, 활성화 T 세포, 활성화 혈소판, 염증 맥관성 평활근 세포, 호산구, 류마티스 관절염의 윤활막, 피부 섬유모세포, 및 다른 비-림프종 세포 유형의 표면상에서 발견된다.
본원에서 "CD40-발현 세포"는 CD40 항원을 검출가능한 수준으로 발현하는 모든 정상 또는 악성 세포를 의미한다. 바람직하게는, CD40-발현 세포는 세포-표면 CD40 항원을 검출가능한 수준으로 발현하는 세포이다. 세포 내에서 CD40 발현을 검출하는 방법은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있으며, PCR 기법, 면역조직화학법, 흐름 세포측정법, 웨스턴 블롯, ELISA, 등에 한정되지 않는다. 이러한 방법은 CD40 mRNA, CD40 항원 및 세포-표면 CD40 항원의 검출을 가능하게 한다. 세포-표면 CD40 발현의 검출은 본원의 실시예 3에서 설명한 바와 같이 또는 다른 적합한 방법에 의하여 수행될 수 있다.
"CD40 리간드" 또는 "CD40L"은 1차적으로 각각 18 kDa 및 31 kDa인 두 개의 소형의 생물학적 활성인 가용성 형태로 존재하는 32-33 kDa의 경막 단백질을 의미한다(Graf et al (1995) Eur. J. Immunol. 25:1749-1754; Mazzei et al. (1995) J Biol. Chem. 270:7025-7028; Pietravalle et al. (1996) J Biol Chem. 271:5965-5967). 인간 CD40L은 CD154 또는 gp39로 알려져 있다. "CD40 리간드" 또는 "CD40L"는 하나 또는 그 이상의 CD40 신호 경로에 결합하고, 활성화할 수 있는 모든 다른 펩타이드, 폴리펩타이드, 또는 단백질을 의미한다. 따라서, "CD40 리간드"는 전장 CD40 리간드 단백질 및 변이체, 및 CD40-발현 세포 상의 CD40 신호 자극을 수행하기위한 충분한 활성을 보유하는 이들의 절편을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 천연 CD40 리간드, 예를 들면, 인간 CD40L의 변형은 치환, 결실, 절단, 연장, 융합 단백질, 절편, 펩티도미메틱스(peptidomimetics), 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
"CD40 신호"는 세포-표면 CD40와 CD40 리간드 또는 다른 작용제, 예컨대, 작용제 항체의 상호작용에 의하여 나타나는 모든 생물학적 활성을 의미한다. CD40 신호의 예는 CD40-발현 세포의 증식 및 생존, 및 CD40-발현 세포 내의 하나 또는 그 이상의 CD40-신호 경로의 자극을 유도하는 신호이다. CD40 "신호 경로" 또는 "신호 전달 경로"는 CD40 수용체와 CD40 리간드, 예를 들면, CD40L의 상호작용에 의한 반응으로서, 신호 경로를 통하여 전송되는 경우, 분자 신호 캐스케이드(cascade) 내의 하나 또는 그 이상의 하류(downstream) 분자의 활성화를 유도하는 신호를 생성하는, 최소한 하나의 생화학적 반응, 또는 생화학적 반응의 군을 의미한다. 신호 전달 경로는 하나 또는 그 이상의 일련의 신호 전달 분자를 통하여, 일 예로서, 세포의 세포질을 통하여, 세포의 형질막을 통과하여 세포-표면 CD40 수용체로부터 세포 핵으로의 신호 전송을 유도하는 다수의 신호 전달 분자와 관련되어 있다. 본 발명의 대상은 특히CD40 신호 전달 경로이며, AKT의 활성화를 유도하고, 궁극적으로 NF-κB 신호 경로를 경유하여 NF-κB를 활성화하는 AKT 신호 경로; 및 MEK/ERK 신호 경로 및 MEK/p38 신호 경로를 포함하고, 각각 ERK 및 p38의 활성화를 유도하는 미토겐-활성화 단백질 키나아제 (MAPK) 신호 경로를 포함한다.
전술한 바와 같이, 본 발명은 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법을 제공하며, 여기서, 상기 인간 환자는 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)이고, 방법은 상기 인간 환자에 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.
"인간 환자"는 모든 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환과 투병중인, 발병 또는 재발의 위험이 있는 인간 환자를 의미한다.
"CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환"은 모든 CD40-발현 세포에 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 의미한다. CD40-발현 세포에 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환은 CD40-발현 세포 상의 바람직스럽지 못한 수준의 CD40 신호에 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환이거나, 또는 염증 질환 또는 자가면역 질환은 CD40-발현 세포에 간접적으로만 관련된 것일 수 있다. "CD40 신호가 바람직스럽지 못한 수준인 염증 질환 또는 자가면역 질환"는 발병 또는 진행이 바람직스럽지 않은 수준의 CD40 신호와 관계된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 의미한다.
"바람직스럽지 못한 수준의 CD40 신호"는 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 CD40-발현 세포 내에서 발생되는, 생리학적으로 바람직스럽지 못한 수준의 모든 CD40 신호를 의미한다.
염증 질환은 염증 및 조직 파괴, 또는 이들의 조합에 의하여 특성화된다. "염증 질환" 면역 반응의 개시 또는 표적이 비-자기 항원(들), 예를 들어, 동종항 원, 이종항원, 바이러스 항원, 박테리아 항원, 미지의 항원, 또는 알러지항원을 포함하는 비-자기 항원(들)이 관여하는 모든 염증성 면역-매개 과정을 포함한다.
본원에서 사용되는 용어 "자가면역"은 "자기" 항원이 관여하는 염증성 면역-매개 과정을 포괄한는 것으로 일반적으로 이해할 수 있다. 자가면역 질환에 있어서, 자기 항원(들)은 숙주 면역 반응을 유발시킨다.
본 발명은 조직 이식 거부반응과 유관된 염증의 치료에 사용될 수 있다. "이식(transplant) 거부반응" 또는 "이식(gr aft) 거부반응"은 HLA 항원, 혈액 그룹 항원, 등을 포함하나 이에 한정되지 않는 이식에 대한 모든 숙주 탑재 면역 반응을 말한다.
본 발명은 예를 들어, 골수 이식에 관련된 이식 대 숙주 질환을 치료하기 위하여 사용될 수 있다. 이러한 이식 대 숙주 질환에 있어서, 공여자 골수는 림프구 및 림프구로 성숙하는 세포를 포함한다. 공여자의 림프구는 수용자의 항원을 비-자기로 인식하며, 염증성 면역 반응을 개시한다. 따라서, 본원에 사용되는, "이식 대 숙주 질환" 또는 "이식 대 숙주 반응"은 공여자 림프구가 숙주의 항원과 반응하는 모든 T 세포 매개 면역 반응을 말한다.
본 발명의 방법에 따라 치료될 수 있는 염증 질환 및 자가면역 질환은 전신성 홍반성 루푸스 (SLE), 원판상 루푸스, 루푸스 신장염, 사르코이드증, 연소성 관절염, 류마티스 관절염을 포함하는 염증성 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군, 강직척추염, 및 통풍관절염, 기관 또는 조직 이식의 거부반응, 초급성, 급성, 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 대 숙주 질환, 다발성 경화증, 고 IgE 증후군, 결절다 발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 창자병, 크론씨병, 만성소화장애증 (글루텐님감성 창자병증), 자가면역 간염, 악성 빈혈, 자가면역 용혈 빈혈, 건선, 공피증, 중증근무력증, 자가면역 혈소판감소자색반증, 자가면역 감상선염, 그레이브스병, 하시모토 감상선염, 면역복합체병, 만성 피로 면역 조절불능 증후군 (CFIDS), 다발성근육염 및 피부근육염, 한랭글로블린혈증, 혈전용해, 심근병증, 보통 천포창, 간질성 폐섬유증, 타입 I 및 타입 II 당뇨병, 타입 1, 2, 3, 및 4 지연과민, 알러지 또는 비알러지성 질환, 치료성 단백질에 대한 원치않는/의도하지않는 면역반응(예를 들어, 미국 특허 출원 번호 US 2002/0119151 및 Koren, et al (2002) Curr. Pharm. Biotechnol. 3:349-60), 천식, 초그-스트라우스 증후군(알러지성 육아종증), 아토피 피부염, 일러지성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE-매개 알러지, 죽상동맥경화증, 맥관염, 특발성 염증 근병증, 용혈증, 알츠하이머병, 만성 염증성 말이집탈락성 다발신경증, 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 방법은 폐 이식 거부반응, 천식, 사르코이드증, 폐기종, 낭성 섬유증, 특발성 폐섬유증, 만성 기관지염, 알러지성 비염 및 과민성 폐렴, 호산구성 폐렴 등의 알러지성 폐 질환, 골수 및/또는 폐이식 또는 다른 원인에 기인한 폐쇄성 세기관지염, 이식 죽상동맥경화증/이식 정맥경화증, 뿐만 아니라 콜라겐, 관상, 및, 류마티스 관절염 및 홍반성 루푸스 등의 자가면역 질환에 의한 폐 섬유증을 포함하나 이에 한정되지 않는 폐 염증의 치료에 사용될 수 있다.
염증 질환 또는 자가면역 질환은 CD40-발현 세포에 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환이 될 수 있다. 항체 의존성 자가면역 질환의 예는 류마티스 관절염, 건선, 전신성 홍반성 루푸스, 크론씨병, 중증근무력증, 특발성 혈소판감소성 자반증, 또는 쇼그렌 증후군을 포함한다.
추가적으로, B 세포 및 다른 CD40 함유 세포의 고갈은 CD40 리간드 결합을 통한 신호에 의하여 T 세포 활성화를 제한할 수 있다. 따라서, B 세포 및 다른 CD40 함유 세포의 고갈은 T-세포 매개 자가면역 및 예컨대 다발성 경화증, 이식 거부반응, 이식 대 숙주 질환, 알츠하이머병, 또는 당뇨병 등의 염증 질환의 치료에 사용될 수 있다. 이는 골수 이식에 사용될 수도 있다.
본 발명은 CD40를 발현하는 세포와 관련된 염증 질환 및 자가면역 질환에 대하여 특히 유리하다. 본원의 CHIR-12.12는 본원에서 자세하게 설명한 항-CD20 항체, 예컨대 Rituxan®을 포함하는 다른 치료제에의한 치료에 내성인 염증 질환 또는 자가면역 질환의 환자를 치료하기 위하여 사용될 수 있다.
"치료"는 본 명세서에서 환자가 자가면역 질환 및/또는 염증 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증 질환의 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증 질환에 대한 성향을 보유한 경우, 자가면역 질환 및/또는 염증 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증 질환의 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증 질환에 대한 성향을 치료, 치유, 경감, 완화, 변경, 치료, 개선, 개량, 또는 영향을 미칠 목적으로, 항-CD40 항체를 환자에 도포 또는 투여, 또는 항-CD40 항체를 환자로부터 분리된 조직 또는 세포주에 도포 또는 투여하는 것으로 정의된다. "치료"는 또한 자가면역 질환 및/또는 염증 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증 질환의 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증 질환에 대한 성향을 치료, 치유, 경감, 완화, 변경, 치료, 개선, 개량, 또는 영향을 미칠 목적으로, 항-CD40 항체를 포함하는 약학적 조성물을 자가면역 질환 및/또는 염증 질환, 자가면역 질환 및/또는 염증 질환의 증상, 또는 자가면역 질환 및/또는 염증 질환에 대한 성향을 보유한 환자에 도포 또는 투여, 또는 항-CD40 항체를 포함하는 약학적 조성물을 환자에서 분리된 조직 또는 세포주에 도포 또는 투여하는 것을 의미한다.
"항-염증 활성"은 염증의 감소 또는 예방을 의미한다. 본원에서 정의된 항-CD40 항체 요법은 CD40 항원을 발현하는 세포가 관여하는 자가면역 질환 및/또는 염증 질환의 치료에 대하여 이점이 있는 생리학적 반응을 유발시킨다. 본 발명의 방법은 이러한 증식, 활성화, 등의 세포의 표현형 변화를 예방하는데 유용하다고 인식된다.
본 발명의 치료 방법에 있어서, 본원에서 정의된 적어도 하나의 항-CD40 항체는 염증 질환 또는 자가면역 질환에 대한 치료적 양성 반응을 증진시키기 위하여 사용된다.
염증 질환 및/또는 자가면역 질환에 대한 "치료적 양성 반응"은 항체의 항-염증 활성에 관한 질병의 개선, 및/또는 질병에 관계된 증상의 개선을 의미한다. 즉, 항-증식 효과, CD40-발현 세포의 추가의 증식의 예방, 예컨대, 염증성 사이토카인, 접착분자, 프로테아제, 면역글로블린(예컨대, CD40 함유 세포는 B 세포), 이들의 조합, 등의 분비 감소를 포함하나 이에 한정되지 않는 염증성 반응의 감소, 항-염증성 단백질의 생산 증가, 자가반응세포 수의 감소, 면역 내성의 증가, 자가반응 세포 생존의 억제, 및/또는 CD40-발현 세포의 자극에 의하여 매개된 하나 이 상의 증상의 감소가 관찰될 수 있다. 이러한 치료적 양성 반응은 투여 경로에 제한받지 않으며, 공여자, 공여자 조직(예를 들어 장기 관류), 숙주, 모든 이들의 조합, 등에 투여를 포함할 수 있다.
임상적 반응은 ELISA, RIA, 크로마토그래피에의하여 검출가능한 변화를 포함하는, 자기 공명 영상화(MRI) 스캔, x-방사선 영상화, 컴퓨터 단층촬영(CT) 스캔, 흐름 세포측정 또는 형광-활성화 세포 분류기(FACS) 분석, 조직학, 전체 병리학, 및 혈액화학 등의 선병 기법을 사용하여 사정될 수 있다. 이러한 치료적 양성 반응과 함께, 항-CD40 항체 요법을 행하는 대상체는 이러한 질병과 관련된 증상의 개선에 유리한 효과를 경험하게될 것이다.
"치료적으로 또는 예방적으로 효과적인 복용량" 또는 "치료적으로 또는 예방적으로 효과적인 양"은 투여시 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 환자의 치료에 대한 양성 치료 반응을 나타내는 항-CD40 항체의 양을 의미한다. 적합한 복용량은 본원에서 더 상세하게 설명하였다. 치료 방법은 본원에서 상세하게 설명한 바와 같이, 항-CD40 항체의 치료적 유효 복용량의 단일 투여 또는 치료적 유효 복용량의 다중 투여를 포함할 수 있다.
본 발명의 방법은 염증성 또는 자가면역 질환의 하나 이상의 공지의 요법에 내성이며, 전술한 목록을 것들을 포함하는 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료용으로 특히 적합하다. 이러한 요법은 본원에서 상세하게 설명한 수술 또는 외과적 절차(예컨대 비장절제술, 림프절절제술, 갑상선절제술, 혈장분리반출술, 백혈구이동, 세포, 조직, 또는 기관 이식, 창자 시술, 장기 관류, 등), 방사선 요법, 스테 로이드 요법 및 비스테로이드 요법 등의 요법, 호르몬 요법, 사이토카인 요법, 피부치료제 요법(예를 들어, 알러지, 접촉 피부염, 및 건선 등의 피수 상태를 치료하는 국소제제), 면역억제 요법, 및 기타 항-염증성 단클론 항체 요법, 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다. "내성"은 특정 염증 질환 또는 자가면역 질환이 특정 요법에 저항성 또는 비반응인 것을 의미한다. 염증 질환 또는 자가면역 질환은 치료제에 의한 제1 치료기간 중 또는 치료제에 의한 후속 치료기간 중에 특정 치료제에 의한 치료 개시시부터(즉, 치료제의 초기 노출에 비-반응성인), 또는 치료제에 대한 내성 발달의 결과로서 특정 치료제에 의한 요법에 내성일 수 있다. 따라서, 본 발명은 인간 환자가 염증성 또는 자가면역 질환에 의한 요법에 내성이거나 또는 비-반응성인 경우, 요법에 내성인 인간 환자의 치료에 유용하다.
본 발명의 방법은 항-CD40 항체의 용도에 관련되어 있다. "항체"는 일반적으로 약 150,000 달톤의 이종테트라 글리코프로테인이며, 두 개의 동일한 경쇄(L) 및 두 개의 동일한 중쇄(H)로 이루어진다. 각 경쇄는 하나의 공유 이황화 결합에 의하여 중쇄에 결합되며, 이황화 결합의 수는 서로 다른 면역글로블린 아이소타입의 중쇄 마다 다르다. 각 중쇄 및 경쇄는 사슬간 이황화 브릿지로 규칙적으로 채워진다. 각 중쇄는 다수의 불변 도메인에 연결된 가변 도메인(VH)을 일 말단에 보유한다. 각 경쇄는 일 말단에 가변 도메인(VL)을, 다른 말단에 불변 도메인을 보유한다; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 함께 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 함께 정렬된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 간의 인터페이스를 형성한다고 알려져 있다. "가변"이라는 용어는 가변 도메 인의 특정 부분은 항체 간의 서열이 광범위하게 서로 다르다는 사실을 말하는 것이다. 가변 영역은 항원-결합 특이성을 부여한다. 불변 도메인은 항체가 항원에 결합하는데 직접 관여하지 않으나, 예컨대, Fc 수용체 (FcR) 결합, 항체-의존성 세포 세포독성에 있어서의 항체의 참여, 보체 의존성 세포독성의 개시, 및 비만 세포 탈과립 등의 다양한 효과기(effector) 기능을 발휘한다.
척추 동물 종의 항체(면역글로블린)의 "경쇄"는 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 카파(K)와 람다(λ)라 칭하는 두 개의 분명하게 구별되는 유형으로 지정된다.
이들의 "중쇄"의 불변 도메인의 아미노산 서열에 의존하여, 면역글로블린을 서로 다른 클래스로 지정할 수 있다. 인간 면역글로블린의 5 종의 주요 클래스가 존재한다: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM 이며, 이들 중 몇 종은 하부클래스(아이소타입)로 추가로 나누어질 수 있다, 예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2이다. 면역글로블린의 다른 클래스에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각, 알파, 델타, 입실론, 감마, 및 뮤로 칭한다. 다른 클래스의 면역글로블린의 하부유닛 구조 및 3차원 입체구조는 잘 알려져 있다. 다른 아이소타입은 서로 다른 효과기 기능을 보유한다. 예를 들면, 인간 IgG1 및 IgG3 아이소타입은 ADCC(항체 의존성 세포-매개 세포독성) 활성을 보유한다. IgG1 항체, 특히 인간 IgG1 항체는 본 발명의 방법에 특히 유용하다.
"인간 작동 세포"는 하나 또는 그 이상의 FcRs를 발현하고, 효과기 기능을 수행하는 백혈구이다. 바람직하게는, 세포는 최소한 FcγRIII를 발현하고, 항원-의 존성 세포-매개 세포독성(ADCC) 효과기 기능을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 자연살상(NK) 세포, 단핵구, 대식세포, 호산구, 및 중성구를 포함하며, PBMC 및 NK 세포가 바람직하다. ADCC 활성을 보유한 항체는 일반적으로 IgG1 또는 IgG3 아이소타입이다. IgG1 및 IgG3 항체의 분리와 함께, 이러한 ADCC-매개 항체는 비-ADCC 항체 또는 가변 영역 절편의 가변 영역을 IgG1 또는 IgG3 아이소타입 불변 영역으로 유전자 조작하여 제조할 수 있다는 사실을 주지한다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"이라는 용어는 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 설명하기 위하여 사용된다. 바람직한 FcR은 천연-서열 인간 FcR이다. 더욱이, 바람직한 FcR은 IgG 항체(감마 수용체)에 결합하는 것이며 대립 변이체, 다른 실시 상태에서는 이러한 수용체의 스플라이싱된 형태를 포함하는 FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII 하위클래스의 수용체를 포함한다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하며, 이들의 세포질 도메인이 1차적으로 다른 유사한 아미노산 서열을 보유한다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 이들의 세포질 도메인 내에 면역수용체 티로신-기초 활성화 모티브(ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 이들의 세포질 도메인 내에 면역수용체 티로신-기초 억제 모티브(ITIM)를 함유한다(Daeron (1997) Annu. Rev. Immunol. 15:203-234). FcRs는 문헌 Ravetch and Kinet (1991) Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991); Capel et al. (1994) Immunomethods 4:25-34; 및 de Haas et al. (1995) J Lab. Clin. Med. 126:330-341에서 연구되었다. 장래 확인될 것을 포함하는 다른 FcR들은 본원의 용 어 "FcR"에 의하여 포괄된다. 이 용어는 모계 IgG들을 태아에 전달하는 역할을 책임지는 신생아 수용체, FcRn를 포함한다(Guyer et al. (1976) J. Immunol. 117:587 및 Kim et al. (1994) J Immunol. 24:249 (1994)).
용어 "항체"는 본원에서 광범위한 의미로 사용되며, 전부 결합된 항체, CD40 항원과 특이적으로 결합할 수 있는 능력을 보유한 항체 절편(예컨대, Fab, F(ab')2, Fv, 및 다른 절편), 단일 사슬 항체, 이량체(diabodies), 항체 키메라, 혼성 항체, 양특이성 항체, 인체적응형 항체, 등), 및 전술한 것들을 포함하는 재조합 펩타이드를 포괄한다. 용어 "항체"는 다클론 및 단클론 항체 모두를 포함한다.
본원에서 사용된 "항-CD40 항체"는 CD40 항원을 특이적으로 인식하는 모든 항체를 포괄한다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체, 특히 단클론 항-CD40 항체는 CD40 항원에 대한 강한 단일-부위 결합 친화도를 나타낸다. 이러한 단클론 항체는 표준 측정법 예컨대, Biacore™를 사용하여 측정하는 경우 최소한 10-5 M, 최소한 3 x 10-5 M, 바람직하게는 최소한 10-6 M, 또는 최소한 10-7 M, 더 바람직하게는 최소한 10-8 M, 또는 최소한 10-12 M의 CD40에 대한 친화도(KD)를 나타낸다. Biacore 분석은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 자세한 사항은 "BIAapplications handbook"에 소개되어 있다. WO 01/27160에 설명된 방법은 결합 친화도를 조정하기 위하여 사용할 수 있다.
"특이적으로 인식" 또는 "특이적으로 결합"은 항-CD40 항체가 무관한 항원, 예컨대, CD20 항원과는 결합하지 않는다는 것을 의미한다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체, 특히 단클론 항체는 인간 FcγRIIIa-158V에 대한 강한 결합 친화도를 나타낸다. 바람직하게는, 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 표준 측정법 예컨대, Biacore™로 측정하는 경우 최소한 약 0.5 μM의 친화도(KD)로 인간 FcγRIIIa-158V에 결합한다. 본원의 실시예 6에서 설명한 바와 같이, CHIR-12.12 항체는 492 nM의 친화도(KD)로 인간 FcγRIIIa-158V에 결합한다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체, 특히 단클론 항체는 인간 FcγRIIIa-158F에 대한 강한 결합 친화도를 나타낸다. 바람직하게는, 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 표준 측정법 예컨대, Biacore™로 측정하는 경우, 최소한 약 12 μM의 친화도 (KD)로 인간 FcγRIIIa-158F에 결합한다. 바람직하게는, 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 최소한 약 10 μM, 최소한 약 8 μM, 최소한 약 6 μM, 최소한 약 5 μM, 최소한 약 4 μM, 또는 최소한 약 3 μM의 친화도 (KD)로 인간 FcγRIIIa-158F에 결합한다. 본원의 실시예 6에서 설명한 바와 같이, CHIR-12.12 항체는 2.8 μM의 친화도 (KD)로 인간 FcγRIIIa-158F에 결합한다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체, 특히 단클론 항체는 인간 FcγRIIIa-158V 및 FcγRIIIa-158F 둘 모두에 대한 강한 결합 친화도를 나타낸다. 바람직하게는, 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 표준 측정법 예컨대, Biacore™로 측정하는 경우, 최소한 약 0.5 μM의 친화도(KD)로 인간 FcγRIIIa-158V에 결합하며, 최소한 약 12 μM의 친화도 (KD)로 인간 FcγRIIIa-158F에 결합한다.
본 발명의 방법에 사용되는 항체는 기술 분야의 숙련자에게 공지된 모든 적합한 항체 생산 방법을 사용하여 생산할 수 있다.
본 발명의 방법에 사용된 항-CD40 항체는 다클론 항체가 될 수 있다. 따라서, 다클론 세라(sera)는 종래의 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 일반적으로, 대상 항원(이 경우, CD40 항원)을 함유한 용액을 먼저 사용하여 적합한 동물, 바람직하게는 마우스, 레트, 토끼, 또는 염소를 면역시킨다. 토끼 또는 염소가 다클론 세라(sera)의 제조에 바람직하며, 이는 획득가능한 혈청의 부피 및 표지된 항-토끼 및 항-염소 항체의 가용성에 기인한다.
면역된 동물의 세라(Sera)는 초기 항원에 대한 항체 반응성에 대해서 선별될 수 있다. 림프구는 림프절 또는 췌장 세포로부터 분리될 수 있으며, CD138-음성 및 CD 19-양성 세포를 선택함으로써 B 세포에 대하여 추가로 선택될 수 있다. 본 발명의 일 특징으로서, 이러한 B 세포 배양물(BCC)은 골수종 세포와 융합되어 본원에서 상세하게 설명한 하이브리도마를 생성할 수 있다.
다클론 세라(sera)는 유전자삽입 동물, 바람직하게는 인간 면역글로블린 좌(loci)를 포함하는 마우스 내에서 제조할 수도 있다. 본 발명의 바람직한 실시 상태에서, 대상 단백질(이 경우, CD40 항원)을 발현하는 Sf9 세포는 면역원으로서 사용될 수 있다. 예방접종은 항원-함유 용액을 식염수 내에서, 바람직하게는 항원 보강제 예컨대, 프로인트 완전 항원보강제 내에서 혼합 또는 에멀젼화하고, 이 혼합물 또는 에멀젼을 비경구적(일반적으로 피하조직 또는 근육 내)으로 주입함으로써 수행된다. 50-200 μg/주입의 복용량이 일반적으로 충분하다. 예방접종은 일반적으로 단백질 식염수 용액, 바람직하게는 프로인트 불완전 항원보강제를 사용하여, 일회 또는 그 이상의 주입 후 2 내지 6주 후에 상승된다. 다른 실시 상태에서는 기술 분야에 알려진 것을 사용한 시험관 내 예방접종에 의한 항체를 생성하며, 이는 본 발명의 목적을 위하여 생체 내 예방접종과 동등한 것으로 간주된다. 다클론 안티세라(antisera)는 면역된 동물을 유리 또는 플라스틱 용기로 방혈(bleeding)시키고, 혈액을 25℃에서 1시간 동안 배양한 뒤, 4℃로 2-18 시간 동안 배양하여 획득할 수 있다. 혈청은 원심분리에 의하여 회수된다(예컨대, 1,000 x g, 10 분). 약 20-50 ml/방혈(bleed)을 토끼로 부터 획득할 수 있다.
Sf9(Spodoptera frugiperda) 세포의 생산은 미국 등록 특허 번호 6,004,552에 개시되어 있으며, 참고자료로서 본원에 통합되어 있다. CD40의 경우, 간략히 설명하면, 인간 CD40를 암호화한 서열은 전달 벡터를 사용하는 바큘로바이러스(baculo virus) 내로 재조합된다. 플라스미드는 야생형 바큘로바이러스 DNA와 함께 Sf9 세포 내로 전달감염된다. 재조합 바큘로바이러스-감염 Sf9 세포는 확인되고, 클론에 의하여 분리정제되었다.
본 발명의 방법에 사용된 항-CD40 항체는 단클론 항체가 될 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "단클론 항체" (및 "mAb")는 항체의 실질적으로 균질한 개체군으로부터 획득한 항체를 의미하며, 즉, 소량으로 존재하는 자연 발생적으로 가능한 돌 연변이를 제외하고 개체군을 포함하는 개개의 항체는 동일하다. 이 용어는 항체의 종에 관한 제한을 두지 않으며, 어떠한 특정 방법에 의한 항체의 생산에 필요치 않다.
다클론 항체 제조와 대조하면, 이는 일반적으로 다른 항원 결정인자(에피토프)에 대해 조절받는 다른 항체를 포함하며, 각 단클론 항체는 항원상의 단일 결정인자(에피토프)에 대하여 조절 받는다.
"에피토프"는 항원 분자의 일부로서, 항체가 생산되며, 결합되는 것을 의미한다. 에피토프는 선형 아미노산 잔기 (즉, 에피토프 내의 잔기가 선형으로 차례로 순차적으로 배열된 것), 비선형 아미노산 잔기 ("비선형 에피토프"; 이러한 에피토프는 순차적으로 배열되지 않는다), 또는 선형 및 비선형 아미노산 잔기 둘 모두를 포함할 수 있다. 본 발명의 방법의 사용에 적합한 항-CD40 단클론 항체는 인간 세포의 표면상에서 발현되는 인간 CD40 항원의 에피토프에 특이적으로 결합할 수 있다.
본 발명에 따라 사용되는 단클론 항체는 Kohler et al. (1975) Nature 256:495에 최초로 개시된 하이브리도마 방법, 또는 재조합 DNA 방법 (예컨대, 미국 등록 특허 번호 4,816,567)에 의하여 제조될 수 있다. 단클론 항체는, 예를 들면, McCafferty et al. (1990) Nature 348:552-554 (1990) 및 미국 등록 특허 번호 5,514,548에 설명된 기법을 사용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로 분리될 수 있다. Clackson et al. (1991) Nature 352:624-628 및 Marks et al. (1991) J MoI. Biol. 222:581-597에서 파지 라이브러리를 이용하여 각각 뮤린 및 인간 항체의 분 리를 설명한다. 후속 문헌에서는 사슬 셔플링에 의한 고 친화도(nM 범위) 인간 항체의 제조(Marks et al. (1992) Bio/Technology 10:779-783), 및 매우 큰 파지 라이브러리의 구축용 전략으로서 조합 감염 및 생체 내 재조합(Waterhouse et al. (1993) Nucleic. Acids Res. 21:2265-2266)을 설명한다. 따라서, 이러한 기법은 단클론 항체의 분리를 위한 전통적인 단클론 항체 하이브리도마 기법에 대한 생육성 대안이 된다.
문헌 Kohler et al. ((1975) Nature 256:495-496)의 전통적인 방법에서, 일반적으로 마우스는 항원이 함유된 용액으로 면역된다. 예방접종은 항원-함유 용액을 식염수 내에서, 바람직하게는 항원보강제 예컨대, 프로인트 완전 항원보강제 내에서 혼합 또는 에멀젼화하고 이 혼합물 또는 에멀젼을 비경구적으로 주입함으로써 수행될 수 있다. 기술분야에 알려진 모든 예방접종 방법은 본 발명의 단클론 항체를 획득하기 위하여 사용될 수 있다. 동물의 예방접종 후, 이자 (및 선택적으로, 몇 종의 거대 림프절)를 제거하고, 단일 세포로 해리한다. 세포 현탁액을 대상 항원으로 코팅된 플레이트 또는 웰에 도포함으로써 이자 세포를 선별할 수 있다. 항원 특이적 B 세포 발현 막 경계 면역글로블린은 플레이트에 결합하고, 헹구어 지지 않는다. 결과 B 세포, 또는 모든 해리된 이자 세포는 그 다음, 골수종 세포와 융합하여 하이브리도마를 형성하도록 유도되고, 선택 배지 내에서 배양된다. 결과 세포는 연속 희석에 의하여 평판되고 대상 항원에 특이적으로 결합하는(무관 항원에 결합하지 않는) 항체의 생산이 측정된다. 선택된 단클론 항체(mAb)-분비 하이브리도마는 시험관 내 (예컨대, 조직 배양 용기 또는 중공 반응기 내), 또는 생체 내 (마 우스의 복수)에서도 배양될 수 있다.
본 발명의 또 다른 특징으로서, B 세포 배양액은 초기 항원에 대한 반응성에 의하여 추가로 선별될 수 있다, 바람직하게는. 이러한 선별은 표적/항원 단백질을 이용한 효소-링크 면역 측정법(ELISA), 대상 항원에 결합하는 알려진 항체를 이용한 경쟁적 측정법, 및 일시적으로 전달감염된 CHO 또는 표적 항원을 발현하는 다른 세포와 시험관 내 결합을 포함한다.
본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체가 재조합 DNA 방법을 사용하여 제조되는 경우, 단클론 항체를 암호화하는 DNA는 종래의 절차법(예컨대, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오타이드 프로브를 사용함으로써)을 이용하여 손쉽게 분리 및 서열화된다. 본원에서 설명된 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서 제공된다. 분리되는 경우, DNA는 발현 벡터 내로 위치되며, 이는 재조합 숙주 세포 내에서 단클론 항체의 합성을 획득하기 위하여 면역글로블린 단백질을 생산할 수 없는 숙주 세포, 예컨대, 이 콜리(E. coli) 세포, 시미안(simian) COS 세포, 차이니스 햄스터 난소(Chinese Hamster Ovary (CHO)) 세포, 또는 골수종 세포 내로 전달감염 된다. 박테리아 내의 항체를 암호화한 DNA 재조합 발현에 관한 연구 문헌은 Skerra et al. (1993) Curr. Opinion in Immunol. 5:256 및 Phickthun (1992) Immunol. Revs. 130:151를 포함한다. 다른 실시 상태에서는, 항체는 세포주 예컨대, CHO 세포주 내에서 생산되며, 이는 미국 등록 특허 번호 5,545,403; 5,545,405; 및 5,998,144에서 개시되어 있고; 참고자료로서 본원에 통합되어 있다. 간략히 설명하면, 세포주 는 경쇄 및 중쇄를 각각 발현할 수 있는 벡터로 전달감염된다. 분리된 벡터 상의 두 단백질을 전달감염함으로써, 키메라 항체를 생성할 수 있다. 또 다른 이점은 항체의 정확한 글리코실화이다.
본원에서 사용된 "숙주 세포"는, 재조합 벡터 또는 다른 전달 폴리뉴클레오타이드의 피전달자가 될 수 있고, 되어 왔으며, 이로 사용되는 단세포 단위(entity)로서 배양된 미생물 또는 진핵 세포 또는 세포주를 의미하며, 전달감염된 원 세포의 자손을 포함한다. 단일 세포의 자손은 형태학적으로 또는 게놈 또는 총 DNA 보체가 원 모세포와 완전하게 일치할 필요는 없으며, 이는 자연적, 우연적 또는 고의적 돌연변이에 기인한다는 사실을 이해하여야 한다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 항-CD40 항체, 예컨대, CHIR-12.12는 GS 유전자 발현 시스템을 사용한 CHO 세포 내에서 생산될 수 있으며(Lonza Biologies, Portsmouth, New Hampshire), 이는 글루타민 합성효소를 마커로서 사용한다. 미국 등록 특허 번호 5,122,464; 5,591,639; 5,658,759; 5,770,359; 5,827,739; 5,879,936; 5,891,693; 및 5,981,216를 참조하며; 이들의 내용은 일체성을 지니고 본원에서 참고자료로서 포함되었다.
CD40의 단클론 항체는 당해 기술 분야에 공지되어 있다. 예를 들면, McMichael, ed. (1987; 1989) Leukocyte Typing III and IV (Oxford University Press, New York)의 B-세포 항원에 관한 절; 미국 등록 특허 번호 5,674,492; 5,874,082; 5,677,165; 6,056,959; WO 00/63395; 국제 공개 번호 WO 02/28905 및 WO 02/28904; Gordon et al. (1988) J. Immunol. 140:1425; Valle et al. (1989) Eur. J. Immunol. 19:1463; Clark et al. (1986) PNAS 83:4494; Paulie et al. (1989) J Immunol. 142:590; Gordon et al. (1987) Eur. J. Immunol. 17:1535; Jabara et al. (199O) J Exp. Med. 172:1861; Zhang et al (199I) J Immunol. 146:1836; Gascan et al. (199I) J Immunol. 147:8; Banchereau et al. (1991) Clin. Immunol. Spectrum 3:8; and Banchereau et al. (1991) Science 251:70를 참조하며; 이들 모두는 본원에서 참고자료로서 포함되어 있다.
전술한 바와 같이, 본원에서 사용된 용어 "항체"는 키메라 항체를 포괄한다. "키메라" 항체는 재조합 디옥시리보핵산 기법을 사용하여 유도된 것이 가장 바람직한 항체를 의미하며, 인간(면역학적으로 "유관" 종, 예컨대, 침팬지를 포함) 및 비-인간 성분 둘 모두를 포함한다. 따라서, 키메라 항체의 불변 영역은 가장 바람직하게는 실질적으로 천연 인간 항체의 불변 영역과 일치하며; 키메라 항체의 가변 영역은 가장 바람직하게는 비-인간 공급원으로부터 유도되며, 대상 항원(CD40)에 대한 소망하는 항원 특이성을 보유한다. 비-인간 공급원은 CD40 항원에 대한 항체를 생성하기위하여 사용할 수 있는 모든 척추동물 공급원이 될 수 있다. 이러한 비-인간 공급원은 설치류(예컨대, 토끼, 레트, 마우스, 등; 예를 들면, 미국 등록 특허 번호 4,816,567, 본원에서 참고자료로서 포함됨) 및 비-인간 영장류 (예컨대, 구세계 원숭이, 유인원, 등; 예를 들면, 미국 등록 특허 번호 5,750,105 및 5,756,096; 본원에서 참고자료로서 포함됨)를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
전술한 바와 같이, 본원에서 사용된 용어 "항체"는 인체적응형 항체를 포괄한다. "인체적응형"은 비-인간 면역글로블린 서열로부터 유도된 최소 서열을 함유 하는 항체의 형태이다. 대부분의 경우, 인체적응형 항체는 인간 면역글로블린(피전달자 항체)이며, 피전달자의 초가변 영역(상보성 결정 영역 또는 CDR)의 잔기는 소망하는 특이성, 친화도, 및 용량을 지닌 비-인간 종(공여자 항체) 예컨대, 마우스, 레트, 토끼, 또는 비인간 영장류의 초가변 영역의 잔기로 대체되었다. "상보성 결정 영역"이라는 용어는 천연 면역글로블린 결합 부위의 천연 Fv 영역의 결합 친화도 및 특이성을 함께 정의하는 아미노산 서열을 의미한다. 예컨대, Chothia et al. (1987) J MoI. Biol. 196:901-917; Kabat et al. (1991) U.S. Dept. of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242를 참조한다. 용어 "불변 영역"은 효과기 기능을 부여하는 항체 분자의 부분을 의미한다. 인간 질병 치료법에 사용되는 비-면역원 항체의 생산에 관한 이전의 연구에서, 마우스 불변 영역은 인간 불변 영역에 의하여 치환되었다. 대상체 인체적응형 항체의 불변 영역은 인간 면역글로블린에서 유도된다. 그러나, 이러한 인체적응형 항체는 원치않는, 잠재적으로 위험한 인간의 면역반응을 유도할 수 있으며, 친화도 손실이 존재한다.
인체적응화는 설치류 또는 돌연변이 설치류 CDR 또는 CDR 서열을 인간 항체의 상응 서열로 치환함으로써 윈터(Winter)와 공동연구자의 방법에 따라 수행될 수 있다(Jones et al. (1986) Nature 321 :522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-327; Verhoeyen et al. (1988) Science 239:1534-1536). 또한 미국 등록 특허 번호 5,225,539; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 5,859,205를 참조하며; 본원에서 참고자료로서 포함되어 있다. 일 예를 들면, 인간 면역글로블린 하나 또는 그 이상의 가변 영역의 프레임워크 영역 내의 잔기는 비-인간 잔기에 상응시킴 으로써 대체된다(예를 들면, 미국 등록 특허 번호 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 및 6,180,370). 또한, 인체적응형 항체는 피전달자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변경은 항체 성능(예컨대, 소망하는 친화도 획득)을 추가로 개량할 수 있다. 일반적으로, 인체적응형 항체는 실질적으로 최소한 하나의, 및 일반적으로 두 개의, 가변 도메인의 모두를 포함하게 되며, 모든 또는 실질적으로 비-인간 면역글로블린의 것에 상응하는 초가변 영역의 모두 및 모두 또는 실질적으로 프레임워크 영역의 모두는 인간 면역글로블린 서열의 것이다. 인체적응형 항체는 선택적으로 최소한 면역글로블린 불변 영역(Fc), 일반적으로 인간 면역글로블린 불변 영역의 일부를 포함한다. 더 상세한 내용은 Jones et al. (1986) Nature 331:522-525; Riechmann et al. (1988) Nature 332:323-329; 및 Presta (1992) Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596을 참조하며; 본원에서 참고자료로서 포함된다. 따라서, 이러한 "인체적응형" 항체는 항체를 포함할 수 있으며, 여기서, 무손상 인간 가변 도메인이 비-인간 종의 상응 서열에 의하여 치환된 것보다 실질적으로 덜 치환된 것이다. 실시에 있어서, 인체적응형 항체는 일반적으로 일부 CDR 잔기 및 가능하다면 일부 프레임워크 잔기가 설치류 항체 내의 상동 부위의 잔기에 의하여 치환된 인간 항체이다. 예를 들면, 미국 등록 특허 번호 5,225,539; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 5,859,205를 참조한다. 또한 미국 등록 특허 번호 6,180,370, 및 국제 공개 번호 WO 01/27160를 참조하며, 선결정된 항원에 대한 개량된 친화도를 보유한 인체적응형 항체 및 인체적응형 항체의 생산 방법을 개시하였다.
인체적응형 항-CD40 항체는 Human Engineering™ technology (Xoma Ltd., Berkeley, California)를 사용하여 생산될 수 있다.
인체적응형 항-CD40 단클론 항체는 항체 예컨대, SGN-40 (Tai et al. (2004) Cancer Res. 64:2846-52; 미국 등록 특허 번호 6,838,261)를 포함하며, 이는 뮤린 항-CD40 항체 SGN-14의 인체적응 형태(Francisco et al. (2000) Cancer Res. 60:3225-31), 및 미국 특허 출원 번호 2004/0120948에서 개시된 항체이며; 본원에서 일체성을 가지고 참고자료로서 포함되어 있다.
본 발명은 활성화 내인성 면역글로블린(Ig) 좌에 의하여 특성화된 비-인간 포유류 숙주, 더 상세하게는 유전자삽입 마우스에서 생산된 이종(xenogeneic) 또는 변형 항체를 사용하여 수행될 수도 있다. 이러한 유전자삽입 동물에 있어서, 숙주 면역글로블린의 경쇄 및 중쇄 하부유닛의 발현용 내인성 유전자 성분은 비-기능성을 부여하고 상동 인간 면역글로블린 좌로 치환된다. 이러한 유전자삽입 동물은 경쇄 또는 중쇄 숙주 면역글로블린 하부유닛의 실질적인 부재 상태에서 인간 항체를 생산한다. 예를 들면, 미국 등록 특허 번호 5,877,397 및 5,939,598를 포함하며, 본원에서 참고자료로서 포함된다.
따라서, 본 발명의 일 실시 상태에서, CD40의 전 인간 항체는, 예를 들면, 유전자삽입 마우스를 면역화하여 획득할 수 있다. 이러한 마우스는 XenoMouse® technology(Abgenix; Fremont, California)를 사용하여 획득할 수 있으며, 이는 미국 등록 특허 번호 6,075,181, 6,091,001, 및 6,114,598에 개시되어 있으며, 이 모든 것은 참고자료로서 본원에 통합되어 있다. 예를 들면, CHIR-12.12 항체를 생산 하기 위하여, 인간 IgG1 중쇄 유전좌 및 인간 κ 경쇄 유전좌의 유전자삽입 마우스는 Sf9 세포 발현 인간 CD40로 면역된다. 마우스는 다른 아이소타입의 유전자삽입이 될 수도 있다. 본 발명의 방법에 유용한 전 인간 항-CD40 항체는 CHIR-12.12 단클론 항체에 의하여 발휘되는 것과 유사한 결합 특성에 의하여 특성화되었다.
전술한 바와 같이, 본원에서 사용된 용어 "항체"는 항원에 결합할 수 있는 항체 절편을 포괄한다. "항체 절편"은 무손상 항체의 일부, 바람직하게는 무손상 항체의 항원-결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 절편의 예는 Fab, Fab, F(ab')2, 및 Fv 절편; 이량체; 선형 항체 (Zapata et al. (1995) Protein Eng. 10:1057-1062); 단일-사슬 항체 분자; 및 항체 절편으로 형성된 다중특이성 항체를 포함한다. 항체의 파파인(Papain) 분해에 의하여 "Fab" 절편으로 지칭되는 두 개의 동일한 항원-결합 절편이 생산되며, 각각은 단일 항원-결합 부위 및 잔기 "Fc" 절편을 지니고, 이들의 이름은 이들의 쉬운 결정화 능력을 반영한다. 펩신 처리는 두 항원-결합 부위를 F(ab')2 절편을 산출하며, 이것이 항원의 가교-결합을 가능하게 한다.
"Fv"는 완전한 항원 인식 및 결합 부위를 함유하는 최소 항체 절편이다. 이 영역은 견고한, 비-공유 결합 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 구성되어 있다. 각 가변 도메인의 3 개의 CDR이 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면상에 항원-결합 부위를 정의하는 것은 이 배치 구조이다. 집합적으로, 6개의 CDR는 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인도 (또는, 항원 특 이적 3 CDR만을 포함하는 Fv의 반) 전체 결합 부위보다 친화도가 낮음에도 항원 인식 및 결합 능력을 보유한다.
Fab 절편은 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)을 함유한다. Fab 절편은 항체 힌지(hinge) 영역의 하나 또는 그 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CH1 도메인이 카르복시 말단의 소수 잔기의 첨가됨으로써 Fab' 절편과 달라진다. Fab'-SH는 본원에서 Fab'로 할당되며, 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)는 유리 티올기를 함유한다. Fab' 절편은 F(ab')2 절편의 중쇄 이황화 브릿지를 감소시켜 생산된다. 항체 절편의 다른 화학적 커플링이 이미 공지되어 있다.
항-CD40 항체의 절편은 전장 항체의 소망하는 친화도를 보유하는 한 본 발명의 방법의 사용에 적합하다. 따라서, 예를 들면, 항-CD40 항체의 절편은 CD40 항원과의 결합 능력을 보유한다. 이러한 절편은 상응 전장 항체와 유사한 특성에 의하여 특성화된다. 따라서, 예를 들면, 전장 길항제 항-CD40 항체의 절편은 바람직하게는 인간 세포의 표면상에서 발현된 인간 CD40 항원에 특이적으로 결합될 수 있으며, 인간 CD40-발현 세포 상에서 CD40 항원과 결합하는 경우, 현저한 작용제 활성이 없으나 길항제 활성을 나타낸다. 이러한 절편은 본원에서 "항원-결합" 절편으로 언급된다. 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체의 절편은 바람직하게는 적절한 FcR 또는 FcR에 결합하는 능력을 보유한다. 따라서, 예를 들면, 항-CD40 항체의 절편은 FcγRIIIa에 결합하는 능력을 보유할 수 있다. 따라서, 예를 들면, 전장 항-CD40 항체의 절편은 세포-표면 CD40 항원에 특이적으로 결합가능하며, 인간 작동 세포, 예컨대, 자연살상(NK) 세포 상의 FcγRIIIa에 결합 가능하다. 이러한 절편은 본원에서 "FcR-결합" 절편으로 언급된다. 이러한 절편은 일반적으로 중쇄의 불변 도메인의 최소한 일부를 포함한다.
항체 절편의 생산을 위한 다양한 기법이 개발되었다. 전통적으로, 이러한 절편은 무손상 항체의 단백질 분해를 통하여 유도되었다(예컨대, Morimoto et al. (1992) Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24:107-117 (1992) 및 Brennan et al. (1985) Science 229:81). 그러나, 이러한 절편은 이제 재조합 숙주 세포에 의하여 직접 생산될 수 있다. 예를 들면, 항체 절편은 전술한 항체 파지 라이브러리로부터 분리될 수 있다. 다른 실시 상태에서는, Fab'-SH 절편은 이. 콜리(E. coli)로부터 직접 회복될 수 있으며, 화학적으로 커플링되어 F(ab')2 절편을 형성할 수 있다(Carter et al. (1992) Bio/Technology 10:163-167). 또 다른 방법에 따르면, F(ab')2 절편은 재조합 숙주 세포 배양물로부터 직접 분리될 수 있다. 항체 절편을 생산하는 다른 기법은 기술 숙련자에게 자명하다.
항체의 적합한 항원-결합 절편은 전장 항체의 부분, 일반적으로 이들의 항원-결합 또는 가변 영역을 포함한다. 항체 절편의 예는 Fab, F(ab')2, 및 Fv 절편 및 단일-사슬 항체 분자를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 경쇄 및 중쇄의 일부로 구성된 면역글로블린의 1가 항원-결합 절편을 의미한다. F(ab')2는 두 경쇄 및 두 중쇄의 일부를 함유하는 면역글로블린의 2가 항원-결합 절편을 의미한다. "단일-사슬 Fv" 또는 "sFv" 항체 절편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 절편을 의미하며, 이러한 도메인은 단일 폴리펩타이드 사슬 내에 존재한다. 예를 들면, 미국 등록 특허 번호 4,946,778, 5,260,203, 5,455,030, 및 5,856,456을 참조하며, 본원에서 참고자료로서 포함된다. 일반적으로, Fv 폴리펩타이드는 sFv가 항원 결합을 위한 소망하는 구조를 형성하게 할 수 있도록 하는 VH 및 VL 도메인 간의 폴리펩타이드 링커와 추가로 결합한다. sFv의 연구를 위하여 문헌 Pluckthun (1994) The Pharmacology of Momoclonal Antibodies, Vol. 113, ed. Rosenburg and Moore (Springer-Verlag, New York), pp. ss269-315를 참조한다. 본원에서 개시한 길항제 항-CD40 항체의 항원-결합 절편은 세포독소에 컨쥬게이션되어, 이하 설명하는 바와 같이 표적 세포의 살상에 영향을 미칠 수 있다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 항-CD40 항체는 길항제 항-CD40 항체이다. 이러한 항체가 인간 세포, 예컨대, 인간 B 세포의 표면상에 현시된 CD40에 결합하는 경우, 이들은 현저한 작용제 활성을 유발시키지 못한다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 이들이 인간 세포의 표면상에 현시된 CD40에 결합하여 이러한 인간 세포의 증식 및 분화를 억제하게 된다. 본 발명의 방법의 사용에 적합한 항-CD40 항체는 세포-표면 CD40 항원을 발현하는 정상 및 악성 인간 세포에 대한 길항제 활성을 나타낼 수 있는 이러한 항체를 포함한다.
"작용제 활성"은 작용제로서 기능하는 물질을 의미한다. 작용제는 세포 상의 수용체와 결합하며, 수용체의 천연 리간드에 의하여 개시된 것과 유사한 또는 동일한 반응 또는 활성을 개시한다. CD40의 작용제는 어떠한 또는 모든 다음의 반응을 유도하나 이에 한정되지는 않는다: B 세포 증식 및/또는 분화; 이러한 분자, ICAM- I, E-selectin, VCAM, 등을 통한 세포간 결합의 상향조절; 염증전 사이토카인 예컨대, IL-I, IL-6, IL-8, IL-12, TNF, 등의 분비; 경로 예컨대, TRAF (예컨대, TRAF2 및/또는 TRAF3), MAP 키나아제 예컨대, NIK (키나아제를 포함하는NF-κB), I-kappa B 키나아제s (IKK α/β), 전사 인자 NF-κB, Ras 및 MEK/ERK 경로, PI3K/AKT 경로, P38 MAPK 경로, 등에 의한 CD40 수용체를 통한 신호전달; 분자 예컨대, XIAP, mcl-1, bcl-x, 등; B 및/또는 T 세포 기억 생성; B 세포 항체 생산; B 세포 아이소타입 스위칭, MHC 클래스 II 및 CD80/86의 세포-표면 발현 등의 상향 조절.
"현저한" 작용제 활성이란 B 세포 반응의 측정법으로 측정한 바와 같이 중성 물질 또는 음성 대조구에 의한 작용제 활성보다 작용제 활성이 최소한 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 100% 더 크다. 바람직하게는, "현저한" 작용제 활성는 B 세포 반응의 측정법으로 측정한 바와 같이 중성 물질 또는 음성 대조구에 의한 작용제 활성보다 작용제 활성이 최소한 2-배 더 큰 또는 최소한 3-배 더 큰 것을 말한다. 따라서, 예를 들면, 대상 B 세포 반응이 B 세포 증식인 경우, "현저한" 작용제 활성은 중성 물질 또는 음성 대조구에 의하여 유도된 B 세포 증식 수준보다 최소한 2-배 더 큰 또는 최소한 3-배 더 큰 B 세포 증식 수준을 유도한다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 비-특이적 면역글로블린, 예를 들면 CD40에 결합하지 않는 IgG1은 음성 대조구로 제공된다. "현저한 작용제 활성이 없는" 물질은 천연 물질 또는 음성 대조구에 의하여 유도된 작용제 활성보다 최소한 약 25% 이상의 작용제 활성을 나타내며, B 세포 반응의 측정법으로 측정한 바와 같이 중성 물질 또는 음성 대조구에 의한 작용제 활성보다 바람직하게는 최소 한 약 20% 이상, 15% 이상, 10% 이상, 5% 이상, 1% 이상, 0.5% 이상, 또는 최소한 약 0.1% 이상의 작용제 활성을 나타낸다.
"길항제 활성"은 길항제로서 기능하는 물질을 의미한다. CD40의 길항제는 CD40 수용체와 작용제 리간드, 특히 CD40L의 결합에 의하여 유도된 모든 반응의 유도를 차단 또는 감소시킨다. 길항제는 모든 하나 또는 그 이상의 작용제 결합 반응의 유도를 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 바람직하게는 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 더 바람직하게는 70%, 80%, 85%, 및 가장 바람직하게는 90%, 95%, 99%, 또는 100% 감소시킬 수 있다. 항-CD40 치료제, 예를 들면, 항-CD40 항체의 CD40 리간드 결합 특이성 및 길항제 활성의 측정법은 공지되어 있으며, 표준 경쟁적 결합 측정법, B 세포의 면역글로블린 분비 모니터링 측정법, B 세포 증식 측정법, 반체로(Banchereau)-유사-B 세포 증식 측정법, 항체 생산을 위한 T 세포 헬퍼 측정법, B 세포 증식의 보조 자극 측정법, 및 B 세포 활성화 마커의 상향-조절용 측정법을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 예를 들면, WO 00/75348 및 미국 등록 특허 번호 6,087,329에 개시된 측정법을 참고하며, 본원에서 참고자료로서 포함되어 있다. 또한 WO 2005/044854, WO 2005/044304, WO 2005/044305, WO 2005/044306, WO 2005/044855, WO 2005/044307, 및 WO 2005/044294WO를 참조하며, 이들의 내용은 일체성을 가지고 본원에서 참고자료로서 포함되어 있다.
길항제/작용제 활성 결핍은 측정법에 의하여 평가될 수 있으며, CHIR-12.12는 작용제 활성이 결핍되어 있다는 것을 보여준다. 적합한 측정법은 US 5677165(Chiron Corporation)에서 설명된 측정법에 나타나 있다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 길항제 항-CD40 항체는 일 세포 반응에서 현저한 작용제 활성이 없다. 본 발명의 또 다른 실시 상태에서, 길항제 항-CD40 항체는 측정시 일 세포 반응보다 현저한 작용제 활성이 없다 (예컨대, 증식 및 분화, 또는 증식, 분화, 및, B 세포에 있어서, 항체 생산).
특히 관심 대상이 되는 것은 인간 B 세포에 CD40 항원을 결합하는 경우 본원에서 정의한 바와 같이 현저한 작용제 활성이 없으나 길항제 활성을 나타내는 길항제 항-CD40 항체이다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 길항제 항-CD40 항체는 B 세포 반응에서 현저한 작용제 활성이 없다. 본 발명의 또 다른 실시 상태에서, 길항제 항-CD40 항체는 하나 이상의 B 세포 반응에서 측정시 현저한 작용제 활성이 없다 (예컨대, 증식 및 분화, 또는 증식, 분화, 및 항체 생산).
공지의 모든 측정법은 항-CD40 항체가 하나 또는 그 이상의 B 세포 반응의 길항제로서 작용하는지 여부를 결정하기 위하여 사용될 수 있다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 항-CD40 항체는 B 세포 증식, B 세포 분화, 항체 생산, 세포간 결합, B 세포 기억 생성, 아이소타입 스위칭, MHC 클래스 II 및 CD80/86의 세포-표면 발현의 상향-조절, 및 염증전 사이토카인 예컨대, IL-8, IL-12, 및 TNF의 분비로 구성되는 군으로부터 선택되는 최소한 하나의 B 세포 반응의 길항제로서 작용한다. 특히 관심의 대상이 되는 것은 인간 B 세포의 표면상에 인간 CD40 항원이 결합하는 경우, B 세포 증식에 관하여 현저한 작용제 활성이 없는 길항제 항-CD40 항체이다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 항-CD40 항체는, B 세포 증식 분석에서 측정된 바와 같이 가용성 또는 세포-표면 CD40L에 의하여 유도된 B 세포 증식의 길항제일 수 있다. 적합한 B 세포 증식 측정법은 기술 분야에 공지되어 있다. 바람직한 것은, 길항제 항-CD40 항체는 천연 물질 또는 음성 대조구에 의하여 유도된 B 세포 증식보다 B 세포 증식을 최소한 약 25% 이상의 수준으로 자극하며, 천연 물질 또는 음성 대조구에 의하여 유도된 B 세포 증식보다 바람직하게는 최소한 약 20% 이상, 15% 이상, 10% 이상, 5% 이상, 1% 이상, 0.5% 이상, 또는 최소한 약 0.1% 이상의 수준으로 자극한다.
본 발명의 다른 실시 상태에서, 항-CD40 항체는 B 세포 증식에서 측정된 바와 같이 또 다른 항-CD40 항체, 예를 들면, S2C6 항-CD40 항체에 의하여 유도된 B 세포 증식의 길항제이며, 길항제 항-CD40 항체의 존재하에 다른 항-CD40 항체에 의하여 자극된 B 세포 증식의 수준은 길항제 항-CD40 항체의 부재하의 다른 항-CD40 항체에 의하여 유도된 B 세포 증식의 최소한 약 25%(즉, 최소한 75% 억제)이며, 바람직하게는 길항제 항-CD40 항체의 부재하에 다른 항-CD40 항체에 의하여 유도된 B 세포 증식의 최소한 약 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, 0.5%, 또는 최소한 약 0.1%이다.
본 발명의 또 다른 일 실시상태에서, 항-CD40 항체는 B 세포 활성화 측정법으로 측정한 바와 같이, 세포주 EL4B5에 의하여 유도된 B 세포 증식의 길항제이며, 길항제 항-CD40 항체의 존재하에 EL4B5 세포주에 의하여 자극된 B 세포 증식의 수준은 세포주 길항제 항-CD40 항체의 부재하에 이에 의하여 유도된 B 세포 증식의 최소한 약 25%(즉, 최소한 75% 억제)이고, 바람직하게는 세포주 길항제 항-CD40 항체의 부재하에 이에 의하여 유도된 B 세포 증식의 최소한 약 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, 0.5%, 또는 최소한 약 0.1%이다.
본 발명의 또 다른 실시 상태에서, 항-CD40 항체는 B 세포에 의한 항체 생산에 관한 인간 T-세포 헬퍼 측정법으로 측정된 바에 따르면 인간 B 세포에 의한 인간 T-세포-유도성 항체 생산의 길항제이다. 이 방식에 있어서, 길항제 항-CD40 항체의 존재하에 T 세포에 의하여 자극받은 B 세포에 의하여 IgG 항체 생산, IgM 항체 생산, 또는 IgG 및IgM 두 항체 모두 생산의 수준은 길항제 항-CD40 항체의 부재하에 T 세포에 의하여 자극받은 B 세포에 의한 개별적인 항체 생산의 최소한 약 50%(즉, 최소한 75% 억제), 바람직하게는 길항제 항-CD40 항체의 부재하에 T 세포에 의하여 자극받은 B 세포에 의한 개별적인 항체 생산의 최소한 약 25%, 20%, 15%, 10%, 5%, 1%, 0.5%, 또는 최소한 약 0.1%이다. 추가적인 길항제 항-CD40 항체는 5D12, 3A8 및 3C6로 지칭되는 단클론 항체를 포함하며, 이는 각각 ATCC 승인 번호 HB 11339, HB 12024 및 HB 11340를 보유한 하이브리도마에 의하여 분비된다. 예를 들면, 미국 등록 특허 번호 6,315,998를 참조하며, 본원에서 이들은 일체성을 지니고 참고자료로서 포함되었다.
길항제 항-CD40 항체가 기술 분야에 공지되었다. 예를 들면, F4-465로 지정된 하이브리도마에 의하여 생산된 인간 항-CD40 항체가 미국 특허 출원 번호 20020142358 및 20030059427에 개시되었으며; 본원에서 일체성을 가지고 참고자료로서 포함되었다. F4-465는 HAC 마우스로(Kuroiwa et al. (2000) Nature Biotech 10:1086 (2000))부터 획득하였으며, 따라서 인간 람다 경쇄를 발현한다. 또한 WO 2005/044854, WO 2005/044304, WO 2005/044305, WO 2005/044306, WO 2005/044855, WO 2005/044307, 및 WO 2005/044294 WO를 참조하며, 각각의 내용은 본원에서 일체 성을 가지고 참고자료로서 포함된다.
길항제 활성과 함께, 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 바람직하게는 또 다른 표적 세포에 대한 활성 기작을 보유하게 된다. 예를 들면, 항-CD40 항체는 바람직하게는 ADCC 활성을 보유하게 된다. 다른 실시 상태에서는, 항-CD40 항체의 가변 영역은 ADCC 활성을 보유한 또 다른 항체 아이소타입 상에서 발현될 수 있다. 본원에서 추가로 설명되는, 천연 형태, 재조합 형태, 또는 세포독소에 대한 항-CD40 항체의 항원-결합 절편, 치료제, 또는 방사성 금속 이온 또는 방사성동위원소와 컨쥬게이션될 수 있다.
본원의 다른 부분에서 설명된 바와 같이, 발명자들은 다른 항체와 비교하면, 항-CD40 항체, 예컨대, CHIR-12.12는 인간 환자의 자연살상(NK) 세포에 대한 두 FcγRIIIa 아미노산 158 동종이형 (V 또는 F)중의 하나와의 결합을 통하여 CD40-발현 표적 세포의 잠재적 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)을 매개할 수 있다는 놀라운 사실을 발견하였다. 따라서, 항-CD40 항체, 예컨대, CHIR-12.12는 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자, 및 FcγRIIIa-158V에 대한 동종접합(유전형 V/V)인 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 및 자가면역 질환의 치료에 사용될 수 있다. 본 발명은 특히 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 반응하지 않는 염증 질환 및 자가면역 질환의 치료에 이점이 있으며, 이는 NHL 내의 리툭시맙의 임상적 활성은 환자의 FcγRIIIa 유전형과 상관관계가 있음을 나타내기 때문이다.
따라서, 특히 바람직한 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체는, 길항제 활성과 함께, 인간 작동 세포, 예컨대, FcγRIIIa를 발현하는 자연살상 세포(NK 세포)에의한 CD40-발현 세포의 ADCC를 매개할 수 있는 것이다. 가장 바람직한 것은 본원에서 추가로 설명하는 바와 같이, 고 친화도로 FcγRlIIa-158F 및 FcγRIIIa-158V에 모두 결합할 수 있는 항-CD40 항체이다.
특히 바람직한 항-CD40 항체는 WO 2005/044854, WO 2005/044304, WO 2005/044305, WO 2005/044306, WO 2005/044855, WO 2005/044307, 및 WO 2005/044294WO에서 개시된 것들이며, 각각의 내용은 일체성을 가지고 본원에서 참고자료로서 포함된다.
특히 본 발명의 대상은 WO 2005/044854, WO 2005/044304, WO 2005/044305, WO 2005/044306, WO 2005/044855, WO 2005/044307, 및 WO 2005/044294에서 설명된 CHIR-12.12 단클론 항체의 결합 특성을 공유하는 길항제 항-CD40 항체이다. 이러한 항체는 다음을 포함하나 이에 한정되지 않는다:
a) 단클론 항체 CHIR-12.12;
b) 하이브리도마 세포주 12.12에의해 생산된 단클론 항체;
c) SEQ ID NO:2에 나타낸 서열, SEQ ID NO:4에 나타낸 서열, SEQ ID NO:5에 나타낸 서열, SEQ ID NO:2 및 SEQ ID NO:4에 나타낸 두 서열 모두, 및 SEQ ID NO:2 및 SEQ ID NO:5에 나타낸 두 서열 모두로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단클론 항체;
d) SEQ ID NO:1에 나타낸 서열, SEQ ID NO:3에 나타낸 서열, 및 SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:3에 나타낸 두 서열 모두로 구성되는 군으로부터 선택된 뉴클레오타 이드 서열을 포함하는 핵산 분자에 의하여 암호화되는 아미노산 서열을 보유하는 단클론 항체;
e) 결합 하이브리도마 세포주 12.12에의해 생산된 단클론 항체와 결합이 가능한 에피토프에 결합하는 단클론 항체;
f) SEQ ID NO:7 또는 SEQ ID NO:9에 나타낸 인간 CD40 서열의 잔기 82-87를 포함하는 에피토프에 결합하는 단클론 항체;
g) SEQ ID NO:7 또는 SEQ ID NO:9에 나타낸 인간 CD40 서열의 잔기 82-89을 포함하는 에피토프에 결합하는 단클론 항체;
h) 경쟁적 결합 분석에서 단클론 항체 CHIR-12.12와 경쟁하는 단클론 항체;
i) 전술한 항목 a)의 단클론 항체 또는 전술한 항목 c)-h)중의 하나인 단클론 항체로서, 상기 항체가 재조합적으로 생산되는 것인 단클론 항체; 및
j) 전술한 항목 a)-i)중의 하나인 단클론 항체의 항원-결합 절편인 단클론 항체로서, 상기 절편은 인간 CD40 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 단클론 항체.
단클론 항체 CHIR-12.12는 본 발명의 방법에 사용하기에 특히 바람직하다.
단클론 항체 CHIR-12.12는 WO 2005/044854, WO 2005/044304, WO 2005/044305, WO 2005/044306, WO 2005/044855, WO 2005/044307, 및 WO 2005/044294에 상세하게 설명하였다. CHIR-12.12 항체는 하이브리도마 세포주 153.8E2.D10.D6.12.12(세포주 12.12)로부터 생산된 IgG1 아이소타입의 전 인간 항-CD40 단클론 항체이다. 세포주는 인간 IgG1 중쇄 유전좌 및 인간 κ 사슬 유전좌를 함유한 면역된 이종형 마우스 (XenoMouse® technology; Abgenix; Fremont, California)의 비세포를 사용하여 생성하였다. 이자 세포를 마우스 골수종 SP2/0 세포(Sierra Biosource)와 융합시켰다. 결과 하이브리도마를 수 회 하위-클론하여 안정한 단클론 세포주 12.12를 생성하였다. 본 발명의 방법의 사용에 적합한 다른 항체는 본원에세 설명한 바와 같이, 인간 면역글로블린 유전좌에 대한 마우스 유전자삽입을 사용하여 유사하게 제조될 수 있었다.
CHIR-12.12 단클론 항체는 ELISA-타입 분석에서 가용성 CD40에 결합하고, CD40-리간드와 세포-표면 CD40의 결합을 차단하여, 흐름 세포 측정법에 의하여 측정되는 경우 사전-결합 CD40-리간드를 치환한다. 항체 CHIR-5.9 및 CHIR-12.12는 CD40에 결합하기 위하여 서로 경쟁하나 15B8, 항-CD40 단클론 항체와는 경쟁하지 않으며, 이는 미국 가 명세서 출원 번호 60/237,556, "인간 항-CD40 항체,"(October 2, 2000,) 및 PCT 국제 출원 PCT/US01/30857 "인간 항-CD40 항체" (October 2, 2001) (대리인 지정 번호 PP 16092.003) 및 WO 2002/028904에 설명되어 있으며, 이들은 일체성을 지니고 본원에서 참고자료로서 포함된다. 정상 인간 대상체의 B 세포의 증식의 효과에 관한 시험관 내 시험의 경우, CHIR-12.12는 길항제 항-CD40 항체로서 작용한다. 또한, CHIR-12.12는 정상 대상체의 인간 림프구의 강력한 증식을 유도하지는 않는다. 항체는 항체 의존성 세포독성 (ADCC)에 의하여 CD40-발현 표적 세포를 사멸시킬 수 있다. 인간 CD40에 대한 CHIR-12.12의 결합 친화도는 Biacore™ 측정법에 의한 측정시 5 x 10-10M이다.
CHIR-12.12 항체의 가변 영역의 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열을 본원에서 제공하였다. 더 상세하게는, mAb CHIR-12.12에 대한 경쇄 및 중쇄의 선도체, 가변, 및 불변 영역을 위한 아미노산 서열은 SEQ ID NO:2(mAb CHIR-12.12의 경쇄를 위한 완전 서열), SEQ ID NO:4(mAb CHIR-12.12의 중쇄를 위한 완전 서열), 및 SEQ ID NO: 5(SEQ ID NO:4에 나타낸 mAb CHIR-12.12의 중쇄의 완전서열 또는 변이체로서, 여기서, 변이체는 SEQ ID NO: 4의 153 위치에 알라닌 잔기의 세린 치환을 포함한다)내에 나타나 있다. mAb CHIR-12.12의 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열은 SEQ ID NO:1 ( mAb CHIR-12.12를 위한 경쇄 암호화 서열) 및 SEQ ID NO:3 (mAb CHIR-12.12를 위한 중쇄 암호화 서열)에 나타나 있다. CHIR-12.12 항체를 발현하는 하이브리도마는 특허 기탁 번호 PTA-5543로 ATCC에 기탁되었다.
본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 CHIR-12.12 단클론 항체와 다르나 CDR을 함유하는 항체, 및 하나 또는 그 이상의 아미노산 첨가(들), 결실(들), 또는 치환(들)을 보유한 항체를 포함한다. 본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체는 탈면역된 항체, 특히 탈면역된 길항제 항-CD40 항체가 될 수 있으며, 이는 예를 들면, 국제 공개 번호 WO 98/52976 및 WO 0034317에서 설명된 바와 같이 생산될 수 있으며; 본원에서 참고자료로서 포함된다. 이 방식에 있어서, 본 발명의 길항제 항-CD40 항체 내의 잔기를 변형시켜 항체에 인간에 대한 비면역원성 또는 적은 면역원성을 부여하면서, 인간 CD40-발현 세포에 대한 이들의 길항제 활성을 보유하도록 하며, 여기서, 이러한 활성은 본원에서 설명된 측정법에 의하여 측정된다. 또한 본 발명의 범위에는 대상 항체, 예를 들면, 길항제 항-CD40 항체 또는 길항제 항- CD40L 항체, 또는 이들의 절편을 포함하는 융합 단백질을 포함하며, 이는 융합 단백질은 당해 기술 분야에 공지된 바와 같이, 상응 폴리뉴클레오타이드 벡터로부터 합성되거나 또는 발현될 수 있다. 이러한 융합 단백질은 본원에서 설명한 바와 같이 항체의 컨쥬게이션에 관하여 설명되어 있다.
대상 결합 특이성을 보유한 모든 공지의 항체는 예를 들면, 특허 공개 번호 EP 0983303 Al, WO 00/34317, 및 WO 98/52976에 설명된 방법을 사용하여 생산된 서열 변이를 보유할 수 있으며, 이는 참고 자료로서 본원에 포함되어 있다. 예를 들면, 니는 CDR 내의 서열이 항체를 MHC 클래스 II에 결합하도록 하고, 원치않는 헬퍼 T-세포 반응을 촉발시키도록 할 수 있다는 것을 보여준다. 보존적 치환은 항체가 결합 활성을 보유하면서도 원치않는 T-세포 반응을 촉발시키는 이들의 능력을 상실하도록 할 수 있다. 모든 이러한 보존적 또는 비-보존적 치환은 기술 분야에 인식된 방법, 예컨대, 본원에서 언급된 것을 사용하여 제조할 수 있으며, 결과 항체는 본 발명의 방법에 사용될 수 있다. 변이 항체는 본원에서 설명된 방법을 사용하여 특정 활성, 예를 들면, 길항제 활성, 친화도, 및 특이성을 통상적으로 시험할 수 있다.
예를 들면, 길항제 항-CD40 항체, 예를 들면, CHIR-12.12 단클론 항체의 아미노산 서열 변이체는 대상 항체를 암호화하는 클론된 DNA 서열 내의 돌연변이에의하여 제조될 수 있다. 돌연변이발생 및 뉴클레오타이드 서열 변경의 방법은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있다. 예를 들면, Walker and Gaastra, eds. (1983) Techniques in Molecular Biology (MacMillan Publishing Company, New York); Kunkel (1985) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82:488-492; Kunkel et al. (1987) Methods Enzymol. 154:367-382; Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor, New York); 미국 등록 특허 번호 4,873,192; 및 본원에 언급된 참고자료를 참고하며; 이는 본원에서 참고자료로서 포함된다. 대상 폴리펩타이드의 생물학적 활성에 영향을 미치지 않는 적합한 아미노산 치환의 지침은 Dayhoff et al. (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure (Natl. Biomed. Res. Found., Washington, D. C)의 모델에서 발견할 수 있으며, 이는 본원에서 참고자료로서 포함되어 있다. 보존적 치환, 예컨대, 일 아미노산을 유사한 특성을 보유한 다른 아미노산으로 교환하는 것이 바람직할 수 있다. 보존적 치환의 예는 Gly<=>Ala, Val<=>Ile<=>Leu, Asp<=>Glu, Lys<=>Arg, Asn<=>Gln, 및 PheoTrp<=>Tyr를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
대상 항체, 예를 들면, 대상 길항제 항-CD40 항체 폴리펩타이드 변이체의 구축에 있어서, 변경에 의하여 변이체가 소망하는 활성, 즉, 유사한 결합 친화도를 보유하게 하며, 길항제 항-CD40 항체의 경우, 인간 세포의 표면상에서 발현된 인간 CD40 항원에 특이적으로 결합할 수 있게 되고, 인간 CD40-발현 세포 상에서 CD40 항원이 결합하는 경우, 현저한 작용제 활성이 없이 길항제 활성을 발휘하게 된다. 명백하게도, 변이 폴리펩타이드를 암호화하는 DNA 내에 생성된 모든 돌연변이는 리딩 프레임 외의 서열에 위치하여야 하며, 바람직하게는 2차 mRNA 구조를 생산할 수 있는 상보 영역을 생성하지 않는다. EP 특허 출원 공개 번호 75,444를 참조한다.
이와 함께, 항체, 예를 들면, 길항제 항-CD40 항체의 불변 영역은 다양한 방 법으로 효과기 기능을 변경하도록 돌연변이 된다. 예를 들면, 미국 등록 특허 번호 6,737,056Bl 및 미국 특허 출원 번호 2004/0132101 Al를 참조하며, 이는 Fc 수용체에 항체 결합을 최적화하는 Fc 돌연변이를 개시한다.
바람직하게는, 언급된 항체, 예를 들면, 길항제 항-CD40 항체의 변이체는 언급된 항체, 예를 들면, 길항제 항-CD40 항체 분자, 예를 들면, 본원에서 설명된 CHIR-12.12 단클론 항체의 아미노산 서열, 또는 언급된 항체 분자의 짧은 부분과 최소한 70% 또는 75% 서열 일치, 바람직하게는 최소한 80% 또는 85% 서열 일치, 더 바람직하게는 최소한 90%, 91%, 92%, 93%, 94% 또는 95% 서열 일치하는 아미노산 서열을 보유한다. 더 바람직하게는, 분자는 최소한 96%, 97%, 98% 또는 99% 일치 처열을 공유한다. 본 발명의 목적을 위하여, 서열 일치 백분율은 갭 개방 페널티가 12이고 갭 확장 패널티가 2이며, BLOSUM matrix가 62인 아핀(affine) 갭 검색을 사용하는 스미스-워터맨(Smith-Waterman) 상동 검색 알고리즘을 이용하여 결정된다. 스미스-워터맨 상동 검색 알고리즘은 문헌 Smith and Waterman (1981) Adv. Appl. Math. 2:482-489에서 습득할 수 있다. 변이체는, 예를 들면, 언급된 항체, 예를 들면, 길항제 항-CD40 항체와, 1 내지 15 아미노산 잔기보다 적게, 1 내지 10 아미노산 잔기보다 적게, 예컨대, 6-10, 5 보다 작게, 4, 3, 2보다 적게, 또는 1 아미노산 잔기만큼 다르다.
두 아미노산 서열의 최적 정렬에 관하여, 변이 아미노산 서열의 인접 부분은 언급된 아미노산 서열에 대하여 추가된 아미노산 잔기 또는 결실된 아미노산 잔기를 보유할 수 있다. 언급된 아미노산 서열과 비교하기 위하여 사용되는 인접 부분 은 최소한 20 개의 산 잔기를 포함할 수 있으며 30, 40, 50, 또는 그 이상의 아미노산 잔기일 수 있다. 보존적 잔기 치환 또는 갭에 관련된 서열 일치의 보정을 수행할 수 있다(스미스-워터맨 상동 검색 알고리즘).
특히 표적 세포 상에 CD40 항원이 결합되는 경우, CD40에 특이적으로 결합이 가능하며, 길항제 활성을 보유하는 폴리펩타이드의 정확한 화학적 구조는 다수의 인자에 의존하게 된다. 이온화가능 아미노기 및 카르복실기는 분자 내에 존재하며, 특정 폴리펩타이드는 산성염 또는 염기성염, 또는 중성 형태로서 획득할 수 있다. 적합한 환경 조건 하에 위치하는 경우 이들의 생물학적 활성을 보유하는 모든 이러한 제조품은 본원에 사용된 길항제 항-CD40 항체의 정의에 포함된다. 추가로, 폴리펩타이드의 1차 아미노산 서열은 당 모이어티(글리코실화)를 사용한 유도 또는 다른 보충 분자 예컨대, 지질, 인산염, 아세틸기 등에 의하여 증가될 수 있다. 이는 당류와 컨쥬게이션에 의하여 증가될 수도 있다. 이러한 증가의 특정한 특징은 숙주 생산의 번역-후처리 시스템을 통하여 달성될 수 있다; 이러한 다른 변경은 시험관 내로 도입될 수 있다. 어떠한 경우에도, 이러한 변경은 항-CD40 항체의 길항제 특성이 파괴되지 않는 한 본원에서 사용된 항-CD40 항체의 정의 내에 포함된다. 이러한 변경이 다양한 측정법 내에서 폴리펩타이드 활성을 증진시키거나 또는 감소시킴으로써 정량적으로 또는 정성적으로 활성에 영향을 미칠 수 있다고 기대된다. 또한, 사슬 내의 개개의 아미노산 잔기는 산화, 환원, 또는 다른 유도에 의하여 변형될 수 있으며, 폴리펩타이드를 분해하여 활성을 보유한 절편을 획득할 수 있다. 길항제 활성을 파괴하지 않는 이러한 변경은 폴리펩타이드 서열에서 본원에서 사용된 항-CD40 대상 항체의 정의를 제거하지 못한다.
이 기술은 폴리펩타이드 변이체의 제조 및 용도에 관한 실질적인 지침을 제공한다. 항-CD40 항체 변이체의 생산에 있어서, 당해 기술 분야의 숙련자라면 어떠한 천연 단백질 뉴클레오타이드 또는 아미노산 서열의 변경이 본 발명의 방법에 사용된 약학적 조성물의 치료적 활성 성분으로 사용되기 적합한 변이를 나타내는지를 손쉽게 결정할 수 있다.
본 발명의 방법에 사용되는 항-CD40 항체 바람직하게는 다음 중 최소한 하나의 시험관 내 및/또는 생체 내 생물학적 활성을 보유한다: T 세포에 의하여 자극받은 정상 인간 말초 B 세포에 의한 면역글로블린 분비의 억제; CD40L-발현 세포 또는 가용성 CD40 리간드(sCD40L)에 의하여 자극되는 정상 인간 말초 B 세포의 생존 및/또는 증식의 억제; Jurkat T 세포에 의하여 자극받은 정상 인간 말초 B 세포의 생존 및/또는 증식의 억제; sCD40L 또는 고체-상 CD40L에 의하여 자극받은 모든 세포 내 "생존" 항-세포자멸 세포내 신호의 억제; 및, sCD40L 또는 고체-상 CD40L에 의한 결찰, CD40-함유 표적 세포 또는 T 세포 및 B 세포를 포함하나 이에 한정되지 않는 CD40의 동족 리간드를 함유하는 세포의 결실, 무반응 및/또는 면역 관용 유발, CD4+CD25+ 조절 T 세포의 확장 또는 활성화의 유도 (예를 들면, CD40-CD40L 인터페이스를 통한 공여자 동종항원-특이적 조직 거부, van Maurik et al. (2002) J Immunol. 169:5401-5404), 모든 기작을 통한 세포독성(항체-의존성 세포-매개 세포독성 (ADCC), 보체-의존성 세포독성 (CDC), 표적 세포 내의 증식 및/또는 세포자멸사의 하향-조절을 포함하나 이에 한정되지 않음), 표적 세포 사이토카인 분비 및/ 또는 세포 표면 분자 발현의 조절, 및 이들의 조합을 하는 모든 세포 내의 CD40 신호 전달의 억제.
이러한 생물학적 활성의 측정법은 본원에 설명된 바와 같이 수행할 수도 있으며, 가출원 "길항제 항-CD40 단클론 항체 및 이들의 사용 방법"(2003. 11. 4/ 2003. 11. 26/ 및 2004. 4. 27) 및 미국 특허 출원 번호 60/517,337 (대리인 지정 번호 PP20107.001 (035784/258442)), 60/525,579 (대리인 지정 번호 PP20107.002 (035784/271525)), 및 60/565,710 (대리인 지정 번호 PP20107.003 (035784/277214))로 각각 지정된 출원; 및 국제 특허 출원 번호 PCT/US2004/037152 (대리인 지정 번호 PP20107.004 (035784/282916))이고, WO 2005/044854로 공개된 "길항제 항-CD40 단클론 항체 및 이들의 사용 방법"(2004. 11. 4.)에 의하여 수행될 수 있으며; 이들의 내용은 일체성을 가지고 본원에서 참고자료로서 포함된다. 또한 문헌 Schultze et al. (1998) Proc. Natl. Acad. ScL USA 92:8200-8204; Denton et al. (1998) Pediatr. Transplant. 2:6-15; Evans et al. (2000) J. Immunol. 164:688-697; Noelle (1998) Agents Actions SuppL 49:17-22; Lederman et al. (1996) Curr. Opin. Hematol. 3:77-86; Coligan et al. (1991) Current Protocols in Immunology 13:12; Kwekkeboom et al (1993) Immunology 79:439-444; 및 미국 등록 특허 번호 5,674,492 및 5,847,082에 설명된 측정법을 참조하며; 이는 본원에서 참고자료로서 포함되어 있다.
본원에서 확인된 CD40-항원 에피토프에 특이적인 길항제 항-CD40 항체를 검출하는 대표적인 측정법은 "경쟁적 결합 측정법"이다. 경쟁적 결합 측정법은 미지 의 항체가 이들의 특이적 항체에 대한 표지된 공지의 리간드의 결합 억제능에 의하여 검출되고 정량화되는 혈청학적 측정법이다. 이는 또한 경쟁적 억제 측정법이라 한다. 대표적인 경쟁적 결합 측정법에 있어서, 표지 CD40 폴리펩타이드는 시료, 예를 들면, 본 발명의 단클론 항체의 하나 또는 그 이상의 에피토프에 대하여 발생하는 단클론 항체와의 조합에서 후보 항체에 의하여 침전된다. 대상 에피토프와 특이적으로 반응하는 항-CD40 항체는 CD40 단백질 또는 대상 CD40 단백질의 특정 에피토프를 포함하는 단백질 절편에 대하여 제조된 일련의 항체를 선별함으로써 확인할 수 있다. 예를 들면, 인간 CD40에 있어서, 대상 에피토프는 SEQ ID NO: 10에 나타나며, SEQ ID NO:9에 나타난 서열에 의하여 암호화된 인간 CD40(GenBank 승인 번호 NP_690593)의 짧은 아이소형(GenBank 승인 번호 NM_152854), 또는 인간 CD40 긴 아이소형 (GenBank 승인 번호 CAA43045 및 NP_001241, SEQ ID NO:12에 나타나며, SEQ ID NO:11에 나타난 서열에 의하여 암호화됨; GenBank Accession Nos. X60592 and NM_001250)의 선형 및/또는 비선형 아미노산 잔기를 포함하는 에피토프를 포함한다. 다른 실시 상태에서는, 사전에 확인된 적합한 길항제 항-CD40 항체에 의한 경쟁적 결합 측정법은 사전에 확인된 항체와 비교가능한 단클론 항체를 선택할 수 있다.
이러한 면역측정법에 사용된 항체는 표지되거나 또는 미표지될 수 있다. 미표지 항체는 응집에 사용될 수 있다; 표지 항체는 다양한 표지를 사용하는 광범위한 다양한 측정법에 사용할 수 있다. 항-CD40 항체 및 대상 에피토프 간의 항체-항원 복합체의 형성을 검출은 검출가능한 물질을 항체에 접착시킴으로써 촉진시킬 수 있다. 적합한 검출 수단은 표지 예컨대, 방사성뉴클레오타이드, 효소, 조효소, 형광물질, 화학발광, 색소원, 효소 기질 또는 보조-인자, 효소 억제제, 배합군 복합체, 유리 라디칼, 입자, 색소, 등의 사용을 포함한다. 적합한 효소의 예는 당근 퍼옥시다아제, 알칼리성 인산분해효소, β-갈락토시다아제, 또는 아세틸콜린에스테라아제를 포함하며; 적합한 배합기 복합체의 예는 스트렙타비딘/바이오틴 및 아비딘/바이오틴을 포함하며; 적합한 형광 물질의 예는 움벨리페론, 플루오레신, 플루오레신 이소티오시아네이트, 로다민, 디클로로트리아지닐라민 플루오레신, 염화 단실 또는 피코에리스린을 포함한다; 발광 물질의 예는 루미놀이다; 생체발광 물질의 예는 루시퍼라아제, 루시페린, 및 아쿠오린을 포함하며; 적합한 방사성 물질의 예는 125I, 131I, 35S, 또는 3H이다. 이러한 표지 시약은 잘 알려진 측정법, 예컨대, 방사성면역측정법, 효소 면역측정법, 예컨대, ELISA, 형광 면역측정법, 등에서 사용될 수 있다. 예를 들면, 미국 등록 특허 번호 3,766,162; 3,791,932; 3,817,837; 및 4,233,402를 참조한다.
항체를 유전자 조작하여 증가된 ADCC 활성을 보유도록 할 수 있다. 특히, CH2 도메인의 카르복시-말단 절반은 FcRIII 수용체를 통하여 매개되는 ADCC에 결정적이다. CH2 및 힌지 영역은 효과기 기능에 중요한 역할을 보유하기 때문에, 여분의 CH2 및/또는 힌지 영역을 함유한 일련의 다중-도메인 항체를 생성할 수 있으며, 효과기 역가의 모든 변화에 대하여 조사될 수 있다(Greenwood, J., Gorman, S. D., Routledge, E.G., Lloyd, LS. & Waldmann , H., Ther Immunol. 1994 Oct;l(5):247- 55). 다른 접근법에서는 병행하여 여분의 도메인을 조작할 수 있으며, 예를 들면, 키메라 Ig의 H-사슬 내로 시스테인을 조작함으로써 이량체를 형성한다(Shopes B. (1992) J. Immunol. 1992 1; 148(9): 2918-22). 또한, ADCC 활성을 증가시키는 변화를 위하여 돌연변이를 Fc 영역에 도입(예를 들면, US 6,737,056 Bl), 푸코실 전이효소 결핍 세포주 내의 세포 발현(예를 들면, US2003/0115614), 또는 항체를 글리코실화하는 다른 변화에 영향(예를 들면, US 6,602,684)을 주도록 조작될 수도 있다.
본 발명은 CD20 발현 세포와 관련된 염증 질환 및 자가면역 질환의 치료에 특히 이점이 있으며, 환자는 Rituxan®에 내성인, 특히 FcγRIIIa-158F에 대한 동종접합 또는 이종접합(유전형 V/F 또는 F/F)이다.
본원에서 사용하는, "항-CD20 항체"는 CD20 세포 표면 항원을 특이적으로 인식하는 모든 항체를 포괄하며, 다클론 항체, 단클론 항체, 단일-사슬 항체, 및 이들의 절편 예컨대, Fab, F(ab')2, Fv, 및 모체 항-CD20 항체의 항원-결합 기능을 보유하는 다른 절편을 포함한다. 특히 본 발명의 방법의 대상은 IDEC-C2B8 단클론 항체(Biogen IDEC Inc., Cambridge, MA)에 의하여 나타나는 결합 특성을 보유한 항-CD20 항체 또는 항원-결합 이들의 절편이다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 본 발명의 방법에 사용된 항-CD40 항체는 키메라 항-CD20 단클론 항체 IDEC-C2B8보다 더 강력한 치료적 활성을 나타내며, 치료적 활성은 적절한 실험 모델 내의 이러한 항체의 등가량으로 측정된다. IDEC-C2B8 (IDEC Pharmaceuticals Corp., San Diego, California; Rituxan®이라는 상표로 구 득가능, 리툭시맙)는 뮤린 항-CD20 단클론 항체, IDEC-2B8로부터 분리된 뮤린 가변 영역을 지닌 인간 IgG1 및 카파 불변 영역을 함유하는 키메라 항-CD20 단클론 항체이다(Reff et al. (1994) Blood 83:435-445). 리툭시맙은 재발된 B 세포 저도의 또는 소포 비-호지킨 림프종 (NHL)의 치료에 승인되었으며, 자가면역 질환에 대한 임상적 시도이다. Rituxan®에 비하여 우수한 치료적 활성을 지닌 항체의 발견은 염증 질환 및 자가면역 질환의 치료 방법을 급진적으로 개량할 수 있게 한다.
설명한 바와 같이 전신성 홍반성 루푸스 (SLE), 다발성 경화증, 염증 및 죽상동맥경화증, 이식, 및 알츠하이머병의 활성을 시험하기 위한 적합한 모델이 존재한다.
예를 들어, 인간 전신성 홍반성 루푸스(SLE)에 대한 효능을 시험하기 위하여, SLE 환자의 말초 혈액 단핵 세포를 SCID 마우스에 이식하였다. 예를 들어, 모델은 Duchosal et al. (1990) J Exp. Med. 172:985-8에 설명되어 있다. PBMC를 SLE 환자로부터 SCID 마우스를 이식한 후에, 치료가 T 림프구 반응이 자가-항원 및 자가-항체 생산 및 사구체신염 등의 질병 현시에 영향을 미치는지 여부를 결정하게 된다
마모셋 원숭이 실험적 자가면역 뇌염(EAE)은 인간 다발성 경화증 모델이다. 예를 들어, 모델은 Raine et al. (1999) Ann. Neurol. 46:144-60 and Hart et al. (2004) Lancet Neurol. 3:588-97에 설명되어 있다.
항체는 매트릭스-분해 효소의 CD40L-유도성 생산, 조직 인자 발현, 선염증성 사이토카인, 접착분자의 상향조절의 억제능에 대하여 시험관 내에서 시험 되었다. 후속 연구에서는 인간 CD40 및/또는 CD20 분자를 발현하는 유전자이식 마우스를 사용하여 생체 내에서 항-염증 활성을 나타내는 항체의 능력을 시험하였다. 예를 들어, 모델을 Yasui (2002) Int. Immunol. 14:319-29에서 설명하였다.
항체는 비인간 영장류모델 내의 이식 거부반응을 예방하는 능력에 대하여 시험되었다. 사이노몰로구스 원숭이 신장 동종이식 수용체는 추가의 면역억제제 예컨대 시클로스포린, FK506, 라파마이신, 코르티코스테로이드, CTLA4-Ig, 및 항-B 림프구 자극제 항체, 등의 존재 또는 부재하에 이식 수용성에 대한 효과를 시험하기 위하여 항체로 처리되었다. 예를 들어, 모델은 Wee et al. (1992) Transplantation 53:501-7에 설명되었다.
알츠하이머병에 대하여, 항체는 미생물 활성화의 차단능에 대하여 시험관 내에서 우선 시험되었다. 항체의 생체 내 효능 연구는 인간 CD40 및/또는 CD20를 발현하며, 아밀로이드-베타 펩타이드를 과다생산하는 이중-유전자이식 마우스로 수행하였다. 예를 들어, 모델은 Tan et al (2002) Nat. Neurosci. 5:1288-93에 설명되었다.
본 발명의 항-CD40 항체 및 Rituxan®의 "등가량"은 동일 또는 이하의 mg 투여량이 질량 당의 기초로 투여되었음을 의미한다. 따라서, 항-CD40 항체가 0.01 mg/kg 체중(모델에 사용된 마우스)으로 투여되는 경우, Rituxan®이 0.01 mg/kg 체중(마우스)로 투여된다. 유사하게, 항-CD40 항체가 0.1, 1, 또는 10 mg/kg 체중(모델에 사용된 마우스)으로 투여되는 경우, Rituxan®은 0.1, 1, 또는 10 mg/kg 체중(마우스)로 각각 투여된다.
또 다른 항체 효능 차이는 NK 세포가 존재하는 시험관 내 표적 세포의 최대 용해를 얻기 위하여 필요한 시험관 내 항체 농도를 측정하는 것이다. 예를 들면, 본 발명의 항-CD40 항체는 1/2, 및 바람직하게는 1/4, 및 가장 바람직하게는, 1/10의 Rituxan® 농도 이하의 EC 50에서 다우디 세포의 최대 용해를 달성한다. 이 유형의 측정은 본원의 실시예에서 설명되었다.
전술한 분석에서 등가량의 Rituxan®보다 현저하게 큰 효능을 보유하는 장점을 지닌 항-CD40 항체는:
a) 단클론 항체 CHIR-12.12;
b) 하이브리도마 세포주 12.12에의해 생산된 단클론 항체;
c) SEQ ID NO:2에 나타낸 서열, SEQ ID NO:4에 나타낸 서열, SEQ ID NO:5에 나타낸 서열, SEQ ID NO:2 및 SEQ ID NO:4에 나타낸 두 서열 모두, 및 SEQ ID NO:2 및 SEQ ID NO:5에 나타낸 두 서열 모두로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단클론 항체;
d) SEQ ID NO:1에 나타낸 서열, SEQ ID NO:3에 나타낸 서열, 및 SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:3에 나타낸 두 서열 모두로 구성되는 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자에 의하여 암호화되는 아미노산 서열을 보유한 단클론 항체;
e) 결합 하이브리도마 세포주 12.12에의해 생산된 단클론 항체와 결합 가능한 에피토프와 결합하는 단클론 항체;
f) SEQ ID NO:7 또는 SEQ ID NO:9에 나타낸 인간 CD40 서열의 잔기 82-87을 포함하는 에피토프에 결합하는 단클론 항체;
g) SEQ ID NO:7 또는 SEQ ID NO:9에 나타낸 인간 CD40 서열의 잔기 82-89를 포함하는 에피토프에 결합하는 단클론 항체;
h) 경쟁적 결합 분석에서 단클론 항체 CHIR-12.12와 경쟁하는 단클론 항체;
i) 전술한 항목 a)의 단클론 항체 또는 전술한 항목 c)-h) 중의 하나의 단클론 항체로서, 상기 항체는 재조합적으로 생산된 것인 단클론 항체; 및
j) 전술한 항목 a)-i) 중의 하나의 단클론 항체의 항원-결합 절편인 단클론 항체로서, 상기 절편이 인간 CD40 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 능력을 보유한 단클론 항체.
본 발명은 항-CD40 항체로 치료가능한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 방법을 제공하며, 다음을 포함한다:
a) CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 단계; 및
b) 상기 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하는 단계 (V/V, V/F 또는 F/F);
여기서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은, 상기 인간 환자가 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 경우, 항-CD40 항체로 치료가능하다. 염증 질환 또는 자가면역 질환은 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성이다.
항-CD40 항체로 치료가능한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환 자가 확인된 경우, 그 다음 그 인간 환자를 항-CD40 항체로 치료할 수 있다. 따라서, 상기 방법에는 (c) FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)로 확인된 인간 환자에 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
항-CD40 항체로 치료가능한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 이 방법은 적합한 진단 키트를 사용하여 당해 기술 분야의 숙련자가 손쉽게 수행할 수 있다. 키트는 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기에 적합한 시약을 포함하여야 한다. 따라서, 본 발명은 또한 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위한 시약을 포함하는, 항-CD40 항체로 치료가능한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 확인을 위한 키트를 제공한다. 적합한 키트는 본원의 다른 부분에서 상세히 설명한다.
본 발명은 또한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 치료를 위한 항체 요법을 선택하는 방법을 제공하며, 이는 다음을 포함한다:
a) CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 단계; 및
b) 상기 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하는 단계 (V/V, V/F 또는 F/F);
여기서, 상기 인간 환자가 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 경우, 항-CD40 항체가 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료를 위하여 선택된다. 염증 질환 또는 자가면역 질환은 리툭시맙(Rituxan ®)의 치료에 내성일 수 있다.
염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 치료를 위한 항-CD40 항체 요법이 선택된 경우, 그 다음, 그 인간 환자를 항-CD40 항체로 치료할 수 있다. 따라서, 상기 방법에는 (c) FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)으로 확인된 인간 환자에게 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 치료를 위한 항체 요법을 선택하는 이 방법은 적합한 진단 키트를 사용하여 당해 기술 분야의 숙련자가 손쉽게 수행할 수 있다. 키트는 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기에 적합한 시약을 포함하여야 한다. 따라서, 본 발명은 또한 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위한 시약을 포함하는, CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 치료를 위한 항체 요법을 선택하기 위한 키트를 제공한다.
"항-CD40 항체로 치료가능한"이라는 것은 인간 환자 (즉, 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 개체)가 항-CD40 항체로 치료시, 치료되어야 하는 염증 질환 또는 자가면역 질환에 관하여 "양성 치료 반응"(본원에서 정의)에 이득이 되는 것을 의미한다.
인간 환자로부터 획득한 생물학적 시료를 사용하여 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하는 모든 방법이 고려되었다.
예를 들면, 본 발명은 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위하여 사용되는 키트를 제공하며, 여기에는 10 또는 그 이상 뉴클레오타이드 길이의, 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기에 적합한 서열의 최소한 하나의 프로브를 포함하는 마이크로어레이(microarray)가 포함된다. 표지 RNA 또는 DNA가 상보적 프로브가 배열상에서 혼성화되고, 레이저 스캐닝에 의하여 검출된다. 배열상의 각 프로브의 혼성화 강도가 측정되고, 상대적 유전자 발현 수준을 나타내는 정량 값으로 환산된다. 프로브 서열 및 길이의 선택은 당해 기술 분야의 숙련자에 의하여 손쉽게 수행될 수 있다. FcγRIIIa-158 F 및 V 동종이형을 암호화하는 인간 유전자 및 mRNA의 뉴클레오타이드 서열이 공지되었다. 따라서, 당해 기술 분야의 숙련자는, 적합한 실험 조건 하에서, 표적 서열의 FcγRIIIa-158 유전형 결정을 허용하는 프로브(들)을 선택할 수 있다.
기계적인 합성 방법을 사용하는 이러한 배열의 합성 기법은, 예컨대, 미국 등록 특허 번호 5,384,261에 설명되어 있으며, 이는 참고자료로서 일체성을 가지고 본원에 통합되어 있다. 평면 배열 표면이 바람직함에도, 배열은 실제 모든 모양의 표면, 또는 심지어 표면의 다중성으로 제작된다. 배치는 비드, 겔, 고분자 표면, 섬유 예컨대, 광섬유, 유리 또는 모든 다른 적합한 기질 상의 펩타이드 또는 핵산이 될 수 있으며, 미국 등록 특허 번호 5,770,358, 5,789,162, 5,708,153, 6,040,193 및 5,800,992를 참조하고, 이들 각각은 일체성을 가지고 본원에 포함되어 있다. 배열은 이러한 방식으로 패키징되어 진단 또는 전부-포함 기기의 조작이 가능하게 된다. 예를 들면, 미국 등록 특허 번호 5,856,174 및 5,922,591를 참조하며, 본원에서 참고자료로서 포함된다.
예를 들면, 본 발명은 또한 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위하여 사용되는 키트를 제공하며, 아미노산 158 of FcγRIIIa를 암호화하는 유전자 또는 mRNA의 영역의 폴리머라아제-촉매 증폭의 프라이머로 사용되기 적합한 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 프라이머 서열 및 길이의 선택은 당해 기술 분야의 숙련자에 의하여 손쉽게 수행될 수 있다. FcγRIIIa-158 F 및 V 동종이형을 암호화한 인간 유전자 및 mRNA의 뉴클레오타이드 서열이 공지되어 있다. 따라서, 당해 기술 분야의 숙련자는, 적합한 실험 조건 하에서, 아미노산 158 of FcγRIIIa를 암호화하는 유전자 또는 mRNA의 영역을 증폭하는 프라이머를 선택할 수 있다. 증폭된 서열은 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위하여 알려진 방법을 사용하여 서열화될 수 있다.
인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하는 또 다른 방법은 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형의 특징인 DNA 절편화를 검출하는 핵산-기초 방법을 사용하는 것이다. 아가로스 겔 전기 영동을 사용하여 결정하는 경우, 각 FcγRIIIa-158 유전형의 DNA는 특징적인 패턴을 보유한다. 따라서, 본 발명은 또한 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기에 적합한 하나 또는 그 이상의 제한 효소를 포함하는, 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위하여 사용되는 키트를 제공한다. 적합한 제한 효소가 당해 기술 분야에 공지되어 있다(예를 들면, Koene et al. (1997) Blood 90(3): 1109-1114).
본 발명의 키트는 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하는 본 키트의 사용 방법을 지시하는 설명서를 포함할 수 있다. 키트는 또한, 예컨대, 완충제, 보 존제, 또는 단백질 안정화제를 포함할 수 있다. 키트의 각 성분은 일반적으로 개별 용기 내에 밀봉되어 있으며, 모든 다양한 용기가 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하는 본 키트의 사용 방법을 지시하는 설명서와 함께 단일 포장안에 포함된다.
본 발명은 본원에 설명된 바와 같은 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 치료하기위한 의약의 제조시 항-CD40 항체의 용도를 제공한다.
본 발명의 항-CD40 항체는 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료 또는 예방하기 위하여 치료적으로 유효한 농도로 투여된다. 이 목적을 달성하기 위하여, 항체는 다양한 허용가능한 담체 및/또는 공지의 부형제를 사용하여 제형화될 수 있다. 항-CD40 항체는 비경구적 경로의 투여에 의하여 투여될 수 있다. 일반적으로, 항체는 정맥내 또는 피하적으로 주입에 의하여 투여된다. 이러한 투여의 달성 방법은 당해 기술 분야의 숙련자에게 공지되어 있다.
정맥내 투여는 바람직하게는 1 시간 내지 약 10 시간 (1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 시간 이하) 이하의 기간을 두고 주입함으로써 발생된다. 후속 주입은 예를 들면, 약 1 내지 약 4 시간, 약 1 내지 약 3 시간, 또는 약 1 내지 약 2 시간 또는 그 이하의 시간을 포함하는, 1 내지 약 6 시간 이하의 시간을 두고 투여될 수 있다. 다른 실시 상태에서는, 항-CD40 항체, 예컨대 CHIR-12.12는 피하적으로 투여될 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 이들이 의도한 투여 경로와 호환되도록 제형화된다. 비경구적 용도에 사용되는 용액 또는 현탁액은 다음의 성분을 포함할 수 있다: 멸균 희석액 예컨대, 주입용 물, 식염수 용액; 항박테리아제 예컨대, 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제 예컨대, 아스코르브산 또는 나트륨 바이설파이트; 킬레이트제 예컨대, 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충액 예컨대, 아세트산염, 시트르산염 또는 인산염 및 등장성 조절제 예컨대, 염화 나트륨 또는 덱스트로스. pH는 산 또는 염기, 예컨대, 염산 또는 수산화나트륨에 의하여 조정될 수 있다. 비경구 제품은 앰플, 1회용 주사기, 또는 다중 투여 비알에 밀봉될 수 있다.
항-CD40 항체는 일반적으로 약학적으로 허용가능한 완충액, 예를 들면, 멸균 식염수, 멸균 완충수, 전술한 것들의 조합, 등을 포함하는 표준 기법에 의하여 제공된다. 비경구적 투여가능 약제의 제조 방법은 문헌 Remington's Pharmaceutical Sciences (18th ed.; Mack Publishing Company, Eaton, Pennsylvania, 1990)에 설명되어 있으며, 이는 본원에서 참고자료로서 포함되어 있다. 또한, 예를 들면, 본 발명의 방법의 사용에 적합한 안정화된 항체 약학적 제형을 설명하는 WO 98/56418를 참조한다.
최소한 하나의 항-CD40 항체의 투여량은 당해 기술 분야의 숙련자에 의하여 과도한 실험 없이 쉽게 결정될 수 있다. 최소한 하나의 항-CD40 항체의 투여 방법 및 각각의 양에 영향을 미치는 인자는 질병의 격렬성, 질병의 병력 및, 요법을 실시 중인 개체의 연령, 신장, 체중, 건강, 및 물리적 상태를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 이와 유사하게, 항-CD40 항체의 투여량은 투여 방법 및 대상체가 이 항종양제를 단일 투여하는지 또는 다중 투여하는지 여부에 의존하게 된다. 일반적으로, 항-CD40 항체의 고복용량은 요법을 실시 중인 대상체의 체중 증가에 바람직하 다.
투여되는 항-CD40 항체의 단일 투여량은 약 0.003 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 0.01 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 0.1 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 0.5 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 3 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 3 mg/kg 내지 약 25 mg/kg, 약 3 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 약 15 mg/kg, 또는 약 7 mg/kg 내지 약 12 mg/kg의 범위 내에 있다.
따라서, 예를 들면, 복용량은 0.3 mg/kg, 0.5 mg/kg, 1 mg/kg, 1.5 mg/kg, 2 mg/kg, 2.5 mg/kg, 3 mg/kg, 5 mg/kg, 7 mg/kg, 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg, 또는 50 mg/kg이 될 수 있으며, 다른 복용량이라도 약 0.3 mg/kg 내지 약 50 mg/kg의 범위에 포함될 것이다.
항체의 치료적 유효량에 의한 대상체의 치료는 단일 치료를 포함할 수 있거나, 또는, 바람직하게는, 일련의 치료를 포함할 수 있다. 따라서, 본 발명의 또 다른 실시 상태에서, 방법은 항-CD40 항체의 다중 복용량의 투여를 포함할 수 있다. 이 방법은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40회, 또는 그 이상의 항-CD40 항체를 포함하는 약학적 조성물의 치료적 유효 복용량의 투여를 포함한다. 항-CD40 항체를 포함하는 약학적 조성물의 다중 복용량의 투여 빈도와 지속시간은 부적절한 실험없이 당해 기술 분야의 숙련자가 쉽게 결정할 수 있다. 항-CD40 항체의 동일한 치료적 유효 복용량이 치료기간 과정에 계속 투여될 수 있다. 다른 실시 상태에서는, 항-CD40 항체의 다른 치료적 유효 복용량이 치료기간 과정 에 계속 사용될 수 있다.
바람직한 실시예에 있어서, 대상체는 약 0.1 내지 20 mg/kg 체중, 약 1 내지 10 주간 1회/주, 바람직하게는 약 2 내지 8 주, 더 바람직하게는 약 3 내지 7 주, 및 더 바람직하게는 약 4, 5, 또는 6 주간의 범위에서 항-CD40 항체로 치료된다. 치료는 재발을 방지하기 위하여 또는 재발의 징후가 있는 경우 매년 내지 6개월의 간격으로 시행한다. 치료에 사용되는 항체의 유효 복용량은 특정 치료 과정에서 증가되거나 감소될 수 있다는 것은 자명하다. 복용량 변화는 본원에서 설명한 진단 측정법의 결과로부터 나오며, 명백하게 된다.
따라서, 본 발명의 일 실시 상태에서, 복용 요법은 1, 8, 15, 및 22일의 치료기간에 최소한 하나의 항-CD40 항체의 치료적 유효 복용량의 최초 투여를 포함한다. 본 발명의 또 다른 실시 상태에서, 복용 요법은 치료기간 내에 매일 또는 주당 1, 3, 5, 및 7일에 최소한 하나의 항-CD40 항체의 치료적 유효 복용량의 최초 투여를 하는 복용 요법; 치료기간 내에 주당 1 및 3-4일에 최소한 하나의 항-CD40 항체의 치료적 유효 복용량의 최초 투여를 포함하는 복용 요법; 및 바람직하게는 치료기간 내에 주당 1일에 최소한 하나의 항-CD40 항체의 치료적 유효 복용량의 최초 투여하는 것을 포함하는 복용 요법을 포함한다. 치료기간은 1 주, 2 주, 3 주, 1 개월, 2 개월, 3 개월, 6 개월, 또는 1 년의 기간을 포함할 수 있다. 치료기간은 1 주, 2 주, 1 개월, 3 개월, 6 개월, 또는 1 년으로 각각 연속되거나 또는 분리될 수 있다.
본 발명의 다른 실시 상태에서, 항-CD40 항체의 초기 치료적 유효 복용량은 본원에서 정의된 바와 같이, 고 복용량 범위(즉, 약 20 mg/kg 내지 약 50 mg/kg)에 해당하는 후속 복용량을 가진 저 복용량 범위(즉, 약 0.003 mg/kg 내지 약 20 mg/kg)가 될 수 있다.
본 발명의 다른 실시 상태에서, 항-CD40 항체의 초기 치료적 유효 복용량은 본원에서 정의된 바와 같이, 저 복용량 범위(즉, 약 0.003 mg/kg 내지 약 20 mg/kg)에 해당하는 후속 복용량을 가진 높은 복용량 범위(즉, 약 20 mg/kg 내지 약 50 mg/kg)가 될 수 있다. 따라서, 본 발명의 일 실시 상태에서, 항-CD40 항체 요법은 항체의 "부하 용량"을 치료가 필요한 대상체에 투여함으로써 개시된다. "부하 용량"은 대상체에 투여되는 항-CD40 항체의 초기 복용량을 의미하며, 투여되는 항체 복용량은 고 복용량 범위(즉, 약 20 mg/kg 내지 약 50 mg/kg)에 포함된다. "부하 용량"은 단일 투여로서 투여될 수 있으며, 예를 들면, 항체가 정맥 투여되는 경우 단일 주입이며, 또는 다중 투여인 경우, 예를 들면, 완전한 "부하 용량"이 약 24-시간 기간 내에 투여되는 한 항체가 정맥 투여되는 경우 다중 주입이다. "부하 용량"의 투여 후, 대상체에 하나 또는 그 이상의 추가적인 항-CD40 항체의 치료적 유효 복용량이 투여된다. 후속적인 치료적 유효 복용량은 예를 들면, 주간 투여 계획에 따라, 또는 매 2주 마다 1회, 매 3주 마다 1회, 또는 매 4주 마다 1회로 투여될 수 있다. 본 발명의 이러한 실시 상태에서, 후속적인 치료적 유효 복용량은 일반적으로 저 복용량 범위(즉, 0.003 mg/kg 내지 약 20 mg/kg) 내에 있다.
다른 실시 상태에서는, 본 발명의 일 실시 상태에서, "부하 용량"에 따르는, 항-CD40 항체의 후속적인 치료적 유효 복용량은 "유지 계획"에 따라 투여될 수 있 으며, 항체의 치료적 유효 복용량은 1 개월마다 1회, 매 6주마다 1회, 매 2개월마다 1회, 매 10주마다 1회, 매 3개월마다 1회, 매 14주마다 1회, 매 4개월마다 1회, 매 18주마다 1회, 매 5개월마다 1회, 매 22주마다 1회, 매 6개월마다 1회, 매 7개월마다 1회, 매 8개월마다 1회, 매 9개월마다 1회, 매 10개월마다 1회, 매 11개월마다 1회, 또는 매 12개월마다 1회로 투여된다. 본 발명의 이러한 실시 상태에서, 항-CD40 항체의 치료적 유효 복용량은 저 복용량 범위(즉, 0.003 mg/kg 내지 약 20 mg/kg) 내에 있으며, 특히 후속적인 복용량은 더 빈번한 간격으로, 예를 들면, 매 2주마다 1회 내지 매 1개월마다 1회로 투여되거나, 또는 고 복용량 범위(즉, 약 20 mg/kg 내지 약 50 mg/kg)에 있는 경우, 특히 후속적인 복용량이 덜 빈번한 간격으로 투여되며, 예를 들면, 후속적인 복용량은 약 1개월 내지 약 12 개월로 분리되어 투여된다.
본 발명의 방법에 사용되는 본원에서 설명된 약학적 조성물 내에 존재하는 항-CD40 항체는 천연이거나 또는 재조합 기법에 의하여 획득할 수 있으며, 포유류 공급원 예컨대, 마우스, 레트, 토끼, 영장류, 돼지, 및 인간을 포함하는 모든 공급원으로부터의 것이 될 수 있다. 바람직하게는 이러한 폴리펩타이드는 인간 공급원으로부터 유도된 것이며, 더 바람직하게는 하이브리도마 세포주의 재조합, 인간 단백질이다.
본 발명의 방법에 유용한 약학적 조성물은 본원에서 설명한 바와 같이 본 발명의 길항제 항-CD40 항체의 생물학적 활성 변이체를 포함할 수 있다.
치료적 활성 성분으로서 전술한 결합 특성을 보유한 항-CD40 항체를 포함하 는 모든 약학적 조성물은 본 발명의 방법에 사용될 수 있다. 따라서 하나 또는 그 이상의 항-CD40 항체를 포함하는 액체, 동결건조, 또는 분무-건조된 조성물은 본 발명의 방법에 따라 대상체에 후속적인 투여를 위하여 수성 또는 비수성 용액 또는 현탁액으로 제조될 수 있다. 각각의 이러한 조성물은 치료적 또는 예방적 활성 성분으로서 최소한 하나의 항-CD40 항체를 포함하게 된다. "치료적 또는 예방적 활성 성분"은 약학적 조성물이 대상체에 투여되는 경우 대상체 내의 질병 또는 상태의 치료, 예방, 또는 진단에 관한 소망하는 치료적 또는 예방적 반응을 발생시키기 위하여 항-CD40 항체가 조성물에 특이적으로 혼입되는 것을 의미한다. 바람직하게는, 약학적 조성물은 제조 및 저장시 단백질 안정성 및 생물학적 활성의 손실에 관한 문제를 최소화하기 위하여 적합한 안정화제, 충전제, 또는 이들 모두를 포함할 수 있다.
제형(Formulants)에는 본 발명의 항-CD40 항체를 포함한 약학적 조성물이 첨가될 수 있다. 이러한 제형에는 오일, 고분자, 비타민, 탄수화물, 아민산, 염, 완충액, 알부민, 계면활성제, 또는 충전제를 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 바람직하게는 탄수화물은 당 또는 당 알콜 예컨대, 단당류, 다당류, 또는 다당류, 또는 수용성 글루칸을 포함한다. 당류 또는 글루칸은 푸룩토오스, 글루코스, 만노스, 소르보스, 자일로스, 말토오스, 슈크로오스, 덱스트란, 플루란, 덱스트린, α 및 β 시클로덱스트린, 가용성 녹말, 히드록시에틸 녹말, 및 카르복시메틸셀룰로오스, 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다. "당 알콜"은 히드록실기를 포함하 는 C4 내지 C8 탄화수소로 정의되며, 갈락티톨, 이노시톨, 만니톨, 자일리톨, 소르비톨, 글리세롤, 및 아라비톨을 포함한다. 이러한 당 또는 당 알콜은 개별적으로 또는 조합하여 사용될 수 있다. 당 또는 당 알콜 농도는 1.0% 내지 7% w/v., 더 바람직하게는 2.0% 내지 6.0% w/v이다. 바람직하게는 아미노산은 좌선성(L) 형태의 카르니틴, 알기닌, 및 베타인을 포함한다; 그러나, 다른 아미노산이 첨가될 수도 있다. 바람직한 고분자 평균분자량이 2,000 내지 3,000인 폴리비닐피롤리돈(PVP), 또는 평균분자량이 3,000 내지 5,000인 폴리에틸렌 글리콜(PEG)를 포함한다. 제형에 첨가할 수 있는 계면활성제는EP 270,799 및 268,110에 나타나 있다.
추가적으로, 항체는 이들의 순환 반감기를 증가시키기 위하여, 예를 들면, 고분자에 공유 컨쥬게이션함으로써 화학적으로 개질될 수 있다. 바람직한 고분자, 및 이들을 펩타이드에 결합시키는 방법은 미국 등록 특허 번호 4,766,106; 4,179,337; 4,495,285; 및 4,609,546에 나타나 있으며; 이들은 일체성을 지니며 참고자료로서 본원에 포함되어 있다. 바람직한 고분자는 폴리옥시에틸화 폴리올 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG)이다. PEG는 실온에서 수용성이며 일반 화학식: R(O--CH2--CH2)n O--R이며, R은 수소, 또는 보호기 예컨대, 알킬 또는 알카놀기가 될 수 있다. 바람직하게는, 보호기는 1 내지 8 탄소를 가지며, 더 바람직하게는 이는 메틸이다. 약어 n은 양의 정수이며, 바람직하게는 1 내지 1,000, 더 바람직하게는 2 내지 500이다. PEG는 평균분자량이 바람직하게는 1,000 내지 40,000, 더 바람직하게는 2,000 내지 20,000, 가장 바람직하게는 3,000 내지 12,000이다. 바람직하게는, PEG 는 최소한 하나의 히드록시기, 더 바람직하게는 말단 히드록시기를 보유한다. 이 히드록시기는 바람직하게는 활성화되어 유리 아미노기와 억제제 상에서 반응한다. 그러나, 반응기의 종류와 양은 공유 컨쥬게이션된 본 발명의 PEG/항체를 달성하기 위하여 변화할 수 있다는 사실을 이해하여야 한다.
수용성 폴리옥시에틸화 폴리올은 또한 본 발명에 유용하다. 이들은 폴리옥시에틸화 소르비톨, 폴리옥시에틸화 글루코스, 폴리옥시에틸화 글리세롤 (POG), 등을 포함한다. POG가 바람직하다. 그 이유는 폴리옥시에틸화 글리세롤의 글리세롤 골격이 모노-, 디-, 트리글리세라이드 내의 예를 들면, 동물 및 인간에서 자연 발생하는 동일한 골격이기 때문이다. 따라서, 이러한 가지화(branching)는 신체 내에서 외래 약제로서 보여질 필요는 없다. POG는 PEG와 동일한 범위의 분자량을 가지는 것이 바람직하다. POG의 구조는 Knauf et al. (1988) J Bio. Chem. 263:15064-15070에 나타나 있으며, POG/IL-2 컨쥬게이션에 관한 논의는 미국 등록 특허 번호 4,766,106에서 찾을 수 있다, 이들 모두는 일체성을 가지고 참고자료로서 본원에 포함되어 있다.
순환 반감기를 증가시키는 또 다른 약물 전달 시스템은 리포좀이다. 리포좀 전달 시스템의 제조 방법은 Gabizon et al. (1982) Cancer Research 42:4734; Cafiso (1981) Biochem Biophys Acta 649:129; 및 Szoka (1980) Ann. Rev. Biophys. Eng. 9:467에 소개되어 있다. 다른 약물 전달 시스템도 공지되어 있으며, 예컨대, Poznansky et al. (1980) Drug Delivery Systems (R.L. Miano, ed., Oxford, N. Y.) pp. 253-315; Poznansky (1984) Pharm Revs 36:277에 설명되어 있 다.
약학적 조성물에 혼입되는 제형은 항-CD40 항체의 안정성을 제공하여야한다. 즉, 항-CD40 항체는 이들의 물리적 및/또는 화학적 안정성 및 소망하는 생물학적 활성, 즉, 본원에서 정의한 하나 또는 그 이상의 길항제 활성을 보유하여야 하며, 여기에는 T 세포에 의하여 자극받은 정상 인간 말초 B 세포에 의한 면역글로블린 분비의 억제; Jurkat T 세포에 의하여 자극받은 정상 인간 말초 B 세포의 생존 및/또는 증식의 억제; CD40L-발현 세포 또는 가용성 CD40 리간드 (sCD40L)에의하여 자극받은 정상 인간 말초 B 세포의 생존 및/또는 증식의 억제; sCD40L 또는 고체-상 CD40L에 의하여 자극받은 모든 세포 내의 "생존" 항-세포자멸 세포내 신호의 억제; sCD40L 또는 고체-상 CD40L와 결찰되는 모든 세포 내의 CD40 신호 전달의 억제; 및 본원에서 언급한 인간 악성 B 세포의 증식의 억제를 포함하나 이에 한정되지 않는다.
단백질 안정성을 모니터링하는 방법은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있다. 예를 들면, Jones (1993) Adv. Drug Delivery Rev. 10:29-90; Lee, ed. (1991) Peptide and Protein Drug Delivery (Marcel Dekker, Inc., New York, New York)를 참조하며; 본원에서 개시된 안정성 측정법을 참조한다. 일반적으로, 단백질 안정성은 선택된 온도에서 특정 기간동안 측정된다. 본 발명의 바람직한 실시 상태에서, 안정한 항체 약학적 제형은 실온에서(약 25℃) 최소한 1 개월, 최소한 3 개월, 또는 최소한 6 개월간 저장되는 경우 항-CD40 항체의 안정성을 제공하며, 및/또는 약 2-8℃에서 최소한 6 개월, 최소한 9 개월, 최소한 12 개월, 최소한 18 개월, 최소 한 24 개월 저장시 안정하다.
단백질 예컨대, 항체가 약학적 조성물로 제형화되는 경우에, 약학적 조성물 내의 침전, 응집, 및/또는 변성의 시각적 신호(즉, 변색 또는 투명도의 상실) 또는 측정가능한 신호 (예를 들면, 크기-배제 크로마토그래피(SEC) 또는 UV 광 산란을 사용) 을 나타내지 않는 경우, 주어진 시점에서의 이들의 물리적 안정성을 보유하도록 고려되었다. 화학적 안정성에 관하여, 단백질 예컨대, 항체가 약학적 조성물로 제형화되는 경우에, 화학적 안정성의 측정은 단백질(즉, 항체)이 이 약학적 조성물 내에서 대상 생물학적 활성을 보유한다는 것을 나타내는 경우, 주어진 시점에서의 이들의 화학적 안정성을 보유하도록 고려되었다. 화학적 안정성의 변화를 모니터링하는 방법은 당해 기술 분야에 잘 알려져 있으며, 예를 들면, SDS-PAGE, SEC, 및/또는 매트릭스-보조 레이저 탈착 이온화/비행 시간 질량 분석법를 사용하는 클리핑(clipping); 예를 들면, 이온-교환 크로마토그래피를 사용하는 분자 전하의 변화(예를 들면, 탈아미노화)에 관련된 분해의 결과로서 단백질의 화학적으로 변형된 형태의 검출 방법을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 예를 들면, 이 방법은 본원에서 개시하였다.
약학적 조성물이 제형화되는 경우 항-CD40 항체가 주어진 시점에서 소망하는 생물학적 활성을 보유하도록 고려된다. 그 시간에서의 소망하는 생물학적 활성은 그 시간 내에 나타나는 소망하는 생물학적 활성의 약 30% 이내, 바람직하게는 약 20% 이내인 경우, 약학적 조성물은 소망하는 생물학적 활성에 대한 적합한 분석에서 측정된바 대로 제조된다. 항-CD40 항체의 소망하는 생물학적 활성을 측정하는 측정법은 본원의 실시예에서 설명된 바와 같이 수행될 수 있다. 문헌 Schultze et al. (1998) Proc. Natl. Acad. ScL USA 92:8200-8204; Denton et al. (1998) Pediatr. Transplant. 2:6-15; Evans et al. (200O) J Immunol. 164:688-697; Noelle (1998) Agents Actions Suppl. 49:17-22; Lederman et al. (1996) Curr. Opin. Hematol. 3:77-86; Coligan et al. (1991) Current Protocols in Immunology 13:12; Kwekkeboom et al. (1993) Immunology 79:439-444; 및 미국 등록 특허 번호 5,674,492 및 5,847,082에 설명된 측정법을 참조하며; 본원에서 참고자료로서 포함된다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 항-CD40 항체는 액체 약학적 제형으로 제형화된다. 항-CD40 항체는 공지의 모든 방법을 사용하여 제조될 수 있으며, 본 명세서에 개시된 방법을 포함한다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 항-CD40 항체는 CHO 세포주 내에서 재조합적으로 생산되었다.
항-CD40 항체가 이들의 제형화 이전에 저장되는 경우, 이는 동결될 수 있으며, 예를 들면, ≤ -20도℃, 그 다음 추가의 제형화를 위하여 실온에서 해동된다. 액체 약학적 제형은 항-CD40 항체의 치료적 유효량을 포함한다. 제형 내에 존재하는 이들의 항체의 양은 투여 경로 및 소망하는 투여 부피를 고려한다.
이 방식에 있어서, 액체 약학적 조성물은 항-CD40 항체를 약 0.1 mg/ml 내지 약 50.0 mg/ml, 약 0.5 mg/ml 내지 약 40.0 mg/ml, 약 1.0 mg/ml 내지 약 30.0 mg/ml, 약 5.0 mg/ml 내지 약 25.0 mg/ml, 약 5.0 mg/ml 내지 약 20.0 mg/ml, 또는 약 15.0 mg/ml 내지 약 25.0 mg/ml의 농도로 포함한다. 본 발명의 일 실시 상태에 서, 액체 약학적 조성물은 약 0.1 mg/ml 내지 약 5.0 mg/ml, 약 5.0 mg/ml 내지 약 10.0 mg/ml, 약 10.0 mg/ml 내지 약 15.0 mg/ml, 약 15.0 mg/ml 내지 약 20.0 mg/ml, 약 20.0 mg/ml 내지 약 25.0 mg/ml, 약 25.0 mg/ml 내지 약 30.0 mg/ml, 약 30.0 mg/ml 내지 약 35.0 mg/ml, 약 35.0 mg/ml 내지 약 40.0 mg/ml, 약 40.0 mg/ml 내지 약 45.0 mg/ml, 또는 약 45.0 mg/ml 내지 약 50.0 mg/ml의 농도로 항-CD40 항체를 포함한다. 본 발명의 다른 실시 상태에서, 액체 약학적 조성물은 약 15.0 mg/ml, 약 16.0 mg/ml, 약 17.0 mg/ml, 약 18.0 mg/ml, 약 19.0 mg/ml, 약 20.0 mg/ml, 약 21.0 mg/ml, 약 22.0 mg/ml, 약 23.0 mg/ml, 약 24.0 mg/ml, 또는 약 25.0 mg/ml의 농도로 항-CD40 항체를 포함한다. 액체 약학적 조성물은 항-CD40 항체 및 약 pH 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0를 포함하며, 다른 이러한 값은 약 pH 5.0 내지 약 pH 7.0의 범위 내에 있는 약 pH 5.0 내지 약 pH 7.0의 범위로 제형의 pH를 유지하도록 하는 완충액을 포함한다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 완충액은 제형의 pH를 약 pH 5.0 내지 약 pH 6.5, 약 pH 5.0 내지 약 pH 6.0, 약 pH 5.0 내지 약 pH 5.5, 약 pH 5.5 내지 약 7.0, 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.5, 또는 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.0로 유지시킨다.
전술한 바와 같이 항체의 물리화학적 안정성 및 소망하는 생물학적 활성을 보유하는 한도에서 약 pH 5.0 내지 약 pH 7.0 범위의 액체 항-CD40 항체 제형의 pH를 유지시키는 모든 적합한 완충액은 제형화에 사용될 수 있다. 적합한 완충액은 종래의 산 및 이들의 염을 포함하나 이에 한정되지 않으며, 여기서, 짝이온은, 예 를 들면, 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 또는 마그네슘이 될 수 있다. 약학적 액체 제형의 완충제로 사용될 수 있는 종래의 산 및 이들의 염의 예는, 숙신산 또는 숙신산염, 시트르산 또는 시트르산염, 아세트산 또는 아세트산염, 타르타르산 또는 타르타르산염, 인산 또는 인산염, 글루콘산 또는 글루콘산염, 글루탐산 또는 글루타메이트, 아스파르트산 또는 아스파르트산염, 말레산 또는 말레산염, 및 말산 또는 말산염 완충액을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 제형 내의 완충액 농도는 약 1 mM 내지 약 50 mM가 될 수 있고, 약 1 mM, 2 mM, 5 mM, 8 mM, 10 mM, 15 mM, 20 mM, 25 mM, 30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM, 50 mM, 또는 약 1 mM 내지 약 50 mM의 범위 내의 다른 값을 포함한다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 제형 내의 완충액 농도는 약 5 mM 내지 약 15 mM이고, 약 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 10 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, 15 mM, 또는 약 5 mM 내지 약 15 mM의 범위 내의 다른 값을 포함한다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 액체 약학적 제형은 항-CD40 항체의 치료적 유효량 및 제형의 pH를 약 pH 5.0 내지 약 pH 7.0, 바람직하게는 약 pH 5.0 내지 약 pH 6.5로 유지시키는 농도의 숙신산염 완충액 또는 시트르산염 완충액을 포함한다. "숙신산염 완충액" 또는 "시트르산염 완충액"은 숙신산의 염 또는 시트르산의 염응 각각을 포함하는 완충액을 의미한다. 본 발명의 바람직한 실시 상태에서, 숙신산염 또는 시트르산염 짝이온은 나트륨 양이온이고, 따라서 완충액은 각각 나트륨 숙신산염 또는 나트륨 시트르산염이다. 그러나, 모든 양이온이 효과적이라고 기대된다. 다른 가능한 숙신산염 또는 시트르산염 양이온은, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 및 마그네 슘을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 전술한 바와 같이, 제형 내의 숙신산염 또는 시트르산염 완충액 농도는 약 1 mM 내지 약 50 mM일 수 있으며, 약 1 mM, 2 mM, 5 mM, 8 mM, 10 mM, 15 mM, 20 mM, 25 mM, 30 mM, 35 mM, 40 mM, 45 mM, 50 mM, 또는 약 1 mM 내지 약 50 mM 범위의 다른 값을 포함한다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 제형 내의 완충액 농도는 약 5 mM 내지 약 15 mM이며, 약 5 mM, 6 mM, 7 mM, 8 mM, 9 mM, 10 mM, 11 mM, 12 mM, 13 mM, 14 mM, 또는 약 15 mM이다. 본 발명의 다른 실시 상태에서, 액체 약학적 제형은 약 0.1 mg/ml 내지 약 50.0 mg/ml, 또는 약 5.0 mg/ml 내지 약 25.0 mg/ml의 농도의 항-CD40 항체, 및 약 1 mM 내지 약 20 mM, 약 5 mM 내지 약 15 mM, 바람직하게는 약 10 mM의 농도의 숙신산염 또는 시트르산염 완충액, 예를 들면, 나트륨 숙신산염 또는 나트륨 시트르산염 완충액을 포함한다.
근접 등장성인 액체 약학적 제형이 바람직한 경우, 항-CD40 항체 및 완충액을 포함하는 액체 약학적 제형은 제형에 근접 등장성을 부여하기에 충분한 등장제의 양을 추가로 포함할 수 있다. "근접 등장성"은 수성 제형이 약 240 mmol/kg 내지 약 360 mmol/kg, 바람직하게는 약 240 내지 약 340 mmol/kg, 더 바람직하게는 약 250 내지 약 330 mmol/kg, 더 더욱 바람직하게는 약 260 내지 약 320 mmol/kg, 그보다 더 바람직하게는 약 270 내지 약 310 mmol/kg의 삼투질농도(osmolarity)를 지니는 것을 의미한다. 용액의 등장성을 결정하는 방법은 당해 기술 분야의 숙련자에게 공지되어 있다. 예를 들면, 문헌 Setnikar et al. (1959) J Am. Pharm. Assoc. 48:628를 참조한다.
당해 기술 분야의 숙련자는 약학적 조성물 내에 등장성의 제공에 유용한 다 양한 약학적으로 허용가능한 용질을 잘 알고 있다. 등장제는 체액과 동등한 수준으로 본 발명의 액체 약학적 제형의 삼투압을 조절할 수 있는 모든 시약이 될 수 있다. 생리학적으로 허용가능한 등장제를 사용하는 것이 바람직하다. 따라서, 치료적 유효량의 항-CD40 항체 및 완충액을 포함하는 액체 약학적 제형은 등장성을 제공하기 위하여 사용될 수 있는 성분, 예를 들면, 염화 나트륨; 아미노산 예컨대, 알라닌, 발린, 및 글리신; 글루코스, 덱스트로스, 푸룩토오스, 슈크로오스, 말토오스, 만니톨, 트레할로스, 글리세롤, 소르비톨, 및 자일리톨을 포함하나 이에 한정되지 않는 당 및 당 알콜(폴리올); 아세트산, 다른 유기산 또는 이들의 염, 및 상대적으로 소량의 시트르산염 또는 인산염을 추가로 포함할 수 있다. 당해 기술 분야의 숙련자는 액체 제형의 강직성을 제공하기에 적합한 추가적 약제를 인식하고 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시 상태에서, 항-CD40 항체 및 완충액을 포함하는 액체 약학적 제형은 등장제로서 염화 나트륨을 추가로 포함할 수 있다. 제형 내의 염화 나트륨 농도는 강직성에 대한 다른 성분의 기여도에 따라 달라질 것이다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 염화 나트륨의 농도는 약 50 niM 내지 약 300 mM, 약 50 mM 내지 약 250 mM, 약 50 mM 내지 약 200 mM, 약 50 mM 내지 약 175 mM, 약 50 mM 내지 약 150 mM, 약 75 mM 내지 약 175 mM, 약 75 mM 내지 약 150 mM, 약 100 mM 내지 약 175 mM, 약 100 mM 내지 약 200 mM, 약 100 mM 내지 약 150 mM, 약 125 mM 내지 약 175 mM, 약 125 mM 내지 약 150 mM, 약 130 mM 내지 약 170 mM, 약 130 mM 내지 약 160 mM, 약 135 mM 내지 약 155 mM, 약 140 mM 내지 약 155 mM, 또는 약 145 mM 내지 약 155 mM이다. 본 발명의 일 실시 상태에서, 염화 나트륨의 농도는 약 150 mM이다. 본 발명의 또 다른 실시 상태에서, 염화 나트륨의 농도는 약 150 mM이다, 완충액은 약 5 mM 내지 약 15 mM의 농도의 나트륨 숙신산염 또는 나트륨 시트르산염 완충액이며, 액체 약학적 제형은 항-CD40 항체의 치료적 유효량 및 pH가 약 pH 5.0 내지 약 pH 7.0, 약 pH 5.0 내지 약 pH 6.0, 또는 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.5인 제형을 포함한다. 본 발명의 다른 실시 상태에서, 액체 약학적 제형은 약 0.1 mg/ml 내지 약 50.0 mg/ml 또는 약 5.0 mg/ml 내지 약 25.0 mg/ml, 약 150 mM 염화 나트륨의 농도로 항-CD40 항체를 포함하며, 약 10 mM 나트륨 숙신산염 또는 나트륨 시트르산염을 약 pH 5.5의 pH로 포함한다.
본 발명의 액체 약학적 제형의 처리과정에서 냉동 해동 또는 기계적 전단에 기한 단백질 분해는 용액-공기 접면에서의 표면 장력을 낮추기 위하여 계면활성제를 제형에 편입시킴으로써 억제될 수 있다. 따라서, 본 발명의 일 실시 상태에서, 액체 약학적 제형은 치료적 유효량의 항-CD40 항체, 완충액을 포함하며, 계면활성제를 추가적으로 포함한다. 본 발명의 다른 실시 상태에서, 액체 약학적 제형은 항-CD40 항체, 완충액, 등장제를 포함하며, 계면활성제를 추가로 포함한다.
사용되는 전형적인 계면활성제는 비이온성 계면활성제이며, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 예컨대, 폴리소르베이트 80 (Tween 80) 및 폴리소르베이트 20 (Tween 20); 폴리옥시프로필렌-폴리옥시에틸렌 에스테르 예컨대, 플루로닉 F68; 폴리옥시에틸렌 알콜 예컨대, 브리지(Brij) 35; 시메티콘; 폴리에틸렌 글리콜 예컨대, PEG400; 라이소포스파티딜콜린; 및 폴리옥시에틸렌-p-t-옥틸페놀 예컨대, 트리톤 X-100을 포함한다. 계면활성제 또는 에멀젼화제에 의한 전통적인 약제의 안정화 는, 예를 들면, 문헌 Levine et al. (1991) J Parenteral Sci. Technol. 45(3):160-165에서 설명하였으며, 본원에서 참고자료로서 포함되어 있다. 본 발명의 실시에 사용되는 바람직한 계면활성제는 폴리소르베이트 80이다. 계면활성제가 포함되는 경우, 일반적으로 약 0.001 % 내지 약 1.0% (w/v), 약 0.001% 내지 약 0.5%, 약 0.001% 내지 약 0.4%, 약 0.001% 내지 약 0.3%, 약 0.001% 내지 약 0.2%, 약 0.005% 내지 약 0.5%, 약 0.005% 내지 약 0.2%, 약 0.01% 내지 약 0.5%, 약 0.01% 내지 약 0.2%, 약 0.03% 내지 약 0.5%, 약 0.03% 내지 약 0.3%, 약 0.05% 내지 약 0.5%, 또는 약 0.05% 내지 약 0.2%의 양으로 포함된다.
따라서, 본 발명의 일 실시 상태에서, 액체 약학적 제형은 치료적 유효량의 항-CD40 항체를 포함하며, 완충액은 약 1 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 25 mM, 또는 약 5 mM 내지 약 15 mM의 농도의 나트륨 숙신산염 또는 나트륨 시트르산염 완충액이다; 제형은 약 pH 5.0 내지 약 pH 7.0, 약 pH 5.0 내지 약 pH 6.0, 또는 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.5를 지니고; 제형은 계면활성제, 예를 들면, 폴리소르베이트 80를 약 0.001% 내지 약 1.0% 또는 약 0.001% 내지 약 0.5%의 양으로 포함한다. 이러한 제형은 선택적으로 등장제, 예컨대, 염화 나트륨을 약 50 mM 내지 약 300 mM, 약 50 mM 내지 약 200 mM, 또는 약 50 mM 내지 약 150 mM의 농도로 포함할 수 있다. 본 발명의 다른 실시 상태에서, 액체 약학적 제형은 항-CD40 항체를 약 0.1 mg/ml 내지 약 50.0 mg/ml 또는 약 5.0 mg/ml 내지 약 25.0 mg/ml의 농도로 포함하며, 약 20.0 mg/ml을 포함한다; 약 50 mM 내지 약 200 mM의 농도의 염화 나트륨을 포함하며, 약 150 mM 염화 나트륨을 포함하고; 나트륨 숙신산염 또는 나트륨 시트르산염을 약 5 mM 내지 약 20 mM의 농도로 포함하며, 약 10 mM 나트륨 숙신산염 또는 나트륨 시트르산염을 포함한다; 염화 나트륨의 농도는 약 50 mM 내지 약 200 mM이며, 약 150 mM를 포함하며; 선택적으로 계면활성제, 예를 들면, 폴리소르베이트 80를, 약 0.001% 내지 약 1.0%를 포함하며 약 0.001% 내지 약 0.5%를 포함한다; 이 경우 액체 약학적 제형은 약 pH 5.0 내지 약 pH 7.0, 약 pH 5.0 내지 약 pH 6.0, 약 pH 5.0 내지 약 pH 5.5, 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.5, 또는 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.0의 pH를 지닌다.
액체 약학적 제형은 필수적으로 전술한 어떠한 보존제 및 다른 담체, 부형제, 또는 안정화제도 결핍될 수 있다. 다른 실시 상태에서는, 제형은 하나 또는 그 이상의 보존제, 예를 들면, 항박테리아제, 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 물리화학적 항-CD40 항체의 안정성에 악영향을 미치지 않는 전술한 안정화제를 포함할 수 있다. 허용가능한 담체, 부형제, 및 안정화제의 예는, 추가적 완충제, 보조용매, 계면활성제, 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제, 킬레이트제 예컨대, EDTA, 금속 복합체(예를 들면, Zn-단백질 복합체), 및 생분해성 고분자 예컨대, 폴리에스테르를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 제형에 대한 철저한 논의를 거쳐, 약학적으로 허용가능한 담체, 안정화제, 및 이소몰라이트(isomolytes)의 선택은 문헌 Remington's Pharmaceutical Sciences(18th ed.; Mack Publishing Company, Eaton, Pennsylvania, 1990)에서 찾을 수 있으며, 이는 본원에서 참고자료로서 포함되어 있다.
본원에서 사용된 "담체"는 사용되는 복용량 및 농도로 이들에 노출되는 세포 또는 포유류에 비독성인 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제, 또는 안정화제를 포함한다. 생리학적으로 허용가능한 담체는 일반적으로 수성 pH 완충용액이다. 생리학적으로 허용가능한 담체의 예는 완충액 예컨대, 인산염, 시트르산염, 숙신산염, 및 다른 유기산; 아스코르브산을 포함하는 항산화제; 저분자량(약 10 개의 잔기 이하) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대, 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로블린; 친수성 고분자 예컨대, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산 예컨대, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 알기닌 또는 라이신; 단당류, 이당류, 및 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; 킬레이트제 예컨대, EDTA; 당 알콜 예컨대, 만니톨 또는 소르비톨; 염-형성 반대이온 예컨대, 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제 예컨대, TWEEN, 폴리에틸렌 글리콜 (PEG), 및 플루로닉을 포함한다.
하나 또는 그 이상의 추가의 치료제와 "조합하여" 투여는 어떠한 순서로 동시(concurrent) 및 연속 투여를 포함한다.
본원에서 설명한 액체 약학적 제형 또는 다른 약학적 조성물의 제조 후, 이들은 분해를 방지하기 위하여 동결건조될 수 있다. 액체 조성물의 동결건조 방법은 당해 기술 분야의 숙련자에게 공지되어 있다. 사용 직전, 조성물이 부가적 성분을 포함하는 멸균 희석액 (링거 용액, 증류수, 또는 멸균 식염수, 예를 들면)으로 재구성될 수 있다. 재구성시, 조성물은 당해 기술 분야의 숙련자에게 공지된 방법을 사용하여 대상체에 투여하는 것이 바람직하다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 항-CD40 항체는 염증성 및/또는 자가면역 질환에 대한 최소한 하나의 다른 공지의 요법과 조합하여 투여될 수 있다. 이러한 요법 은 수술 또는 외과적 절차(예컨대 비장절제술, 림프절절제술, 갑상선절제술, 혈장분리반출술, 백혈구이동, 세포, 조직, 또는 기관 이식, 창자 시술, 장기 관류, 등), 방사선 요법, 스테로이드 요법 및 비스테로이드 요법 등의 요법, 호르몬 요법, 사이토카인 요법, 피부치료제 요법 (예를 들어, 알러지, 접촉 피부염, 및 건선 등의 피부 상태 치료를 위한 국소제제), 면역억제 요법, 및 기타 항-염증성 단클론 항체 요법, 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본 발명의 방법이 결합 치료요법을 포함하는 경우, 이러한 요법은 동시에, 즉 길항제 항-CD40 항체 또는 이들의 항원-결합 절편이 동시에 또는 동시간대 내에 다른 암 요법으로서 투여된다(즉, 요법은 동시에 수행되나, 항-CD40 항체는 정확하게 동시에 다른 암 요법으로서 투여되지 않는다). 다른 실시 상태에서는, 본 발명의 길항제 항-CD40 항체 또는 이들의 항원-결합 절편은 또한 다른 요법에 선행하여 또는 후속으로 투여될 수 있다. 다른 요법의 순차 투여는 완화 또는 재발의 가능성을 감소시키기 위하여 치료된 환자가 제1 과정 요법에 반응하는지 여부와 무관하게 수행될 수 있다.
이러한 방식에서, 항-CD40 항체는 수술, 장기 관류, 방사선 요법, 스테로이드 요법, 비스테로이드 요법, 항생제 요법, 항진균 요법, 호르몬 요법, 사이토카인 요법, 피부치료제 요법 (예를 들어, 알러지, 접촉 피부염, 및 건선 등의 피부 상태 치료를 위한 국소제제), 면역억제 요법, 기타 항-염증성 단클론 항체 요법, 이들의 조합, 등을 포함하나 이에 한정되지 않는 최소한 하나의 다른 요법과 함께 투여될 수 있다. 따라서, 결합 요법이 항-CD40 항체가 일 예로서 스테로이드 등의 다른 치료제의 투여와 조합하여 투여하는 것을 포함하는 경우, 본 발명의 방법은 별도의 제형 또는 단일 약학적 제형을 사용하는 공동 투여 및 순차적인 연속투여를 포괄한다.
항-CD40 항체와 조합하여 투여될 수 있는 면역억제제의 예에는 메토트렉세이트, 시클로포스파미드, 미조리빈, 클로람부실, 시클로스포린, 예를 들어, 에어로졸형 시클로스포린 (미국 특허 출원 번호 US20020006901, 본원에 일체성을 지니며 포함되었음), 타크롤리무스 (FK506; ProGraf™), 미코페놀레이트 모페틸, 및 아자티오프린 (6-머캅토퓨린), 시롤리무스(라파마이신), 데옥시스퍼구아린, 레프루노미드 및 이들의 말로논니트릴로아미드 유사체를 포함되나 이에 한정되지 않으며; 및 면역억제 단백질을 포함한다.
항-CD40 항체와 조합하여 투여될 수 있는 적합한 항-염증제의 예는 코르티코스테로이드 예컨대, 예를 들어, 클로베타솔, 할로베타솔, 하이드로코르티손, 트리암시놀론, 베타메타손, 플루오시놀, 프루오시노나이드, 프레드니손, 프레드니솔론, 메틸프레드니솔론; 비스테로이드계 항-염증제(N상기s) 예를 들어, 설파살라진, 메살라민을 함유한 의약(5-ASA제로 알려짐), 셀레콕시브, 디클로페낙, 에토돌락, 펜프로펜, 플루르비프로펜, 이부프로펜, 케토프로펜, 메클로파메이트, 멜록시캄, 나부메톤, 나프록센, 옥사프로진, 피록시캄, 로페콕시브, 살리실레이트, 술린닥, 및 톨메틴; Enbrel ® (가용성 TNF 수용체), 항염증성 항체 예컨대 아달리무맙 (HUMIRA®, a TNF-α 길항제) 및 인플릭시맙 (Remicade®, a TNF-α 길항제), 등을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
이식 거부반응 및 이식 대 숙주 질환은 초급성(체액성), 급성(T 세포 매개), 또는 만성(미지의 병인), 또는 이들의 조합일 수 있다. 따라서, 본 발명의 항-CD40 항체는 일 실시 상태에서 간, 신장, 췌장, 췌장 섬 세포, 소장, 폐, 심장, 각막, 피부, 혈관, 뼈, 이종유래 또는 동종유래 골수, 등을 포함하나 이에 한정되지 않는 모든 조직의 초급성, 급성, 및/또는 만성 이식 거부반응에 관계된 거부반응 및/또는 증상을 예방 및/또는 개선시키기 위하여 사용된다. 이식 조직은 모든 공여자로부터 획득할 수 있으며, 수용자 숙주 내로 이식되고, 따라서 이식 절차는 동물 조직을 인간에 이식(예컨대, 이종이식), 한 인간의 조직을 다른 인간으로 이식(예컨대, 동종이식), 및/또는 인체의 일부 조직을 다른 조직으로 이식(예컨대, 자가이식)을 포함할 수 있다. 본 발명의 항체 치료는 이식 후유증, 예컨대 발열, 식용부진, 비정상적 혈류, 백혈구감소, 이식 기관/조직의 백혈구 침윤, 및 기회감염 등을 감소시킬 수 있다.
일 실시 상태에서, 본 발명의 항-CD40 항체는 이식 거부반응, 류마티스 관절염, 또는 다발성 경화증의 치료에 사용되는 경우, 항체는 본원에 설명된 적합한 면역억제제와 조합하여 사용할 수 있다.
따라서, 본 발명은 FcγRJIIa-158F에 대하여 이형접합 또는 동형접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료용 의약의 제조시 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량의 용도를 제공하며, 여기서 상기 의약은 최소한 하나의 다른 요법의 치료와 조화한다.
"조화된"은 항-CD40 항체를 포함하는 의약이 최소한 하나의 다른 요법으로 대상체의 치료 전, 도중 또는 치료 후에 사용될 수 있다는 것을 의미한다.
본 발명은 또한 CD40-발현 세포에 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환의 인간 환자를 치료하는 의약의 제조시 항-CD40 항체의 용도를 제공하며, 상기 인간 환자는 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)이며, 최소한 하나의 다른 종양치료로 선치료 되었다.
"선치료된" 또는 "선치료"는 항-CD40 항체를 포함하는 의약의 투여 전에 하나 또는 그 이상의 다른 요법을 받았음을 의미한다(즉, 최소한 하나의 다른 요법으로 치료한 적이 있음). "선치료된" 또는 "선치료"는 항-CD40 항체를 포함하는 의약의 치료 개시 전에 최소한 하나의 다른 요법으로 2 년 이내, 18 개월 이내, 1 년 이내, 6 개월 이내, 2 개월 이내, 6 주 이내, 1 개월 이내, 4 주 이내, 3주 이내, 2 주 이내, 1 주 이내, 6일 이내, 5일 이내, 4일 이내, 3일 이내, 2일, 또는 심지어 1일 이내 치료된 대상체를 포함한다. 대상체가 사전 요법, 또는 사전 요법들에 의한 선치료의 반응자일 필요는 없다. 따라서, 길항제 항-CD40 항체를 포함하는 의약을 투여받은 대상체는 사전 요법, 또는 다중 요법으로 구성된 하나 또는 그 이상의 사전 암 요법에 반응했을 수도 있거나, 또는 반응하지 않았을 수도 있다(즉, 질환이 내성임). 대상체가 항-CD40 항체를 포함하는 의약의 투여 전에 선치료 받을 수 있는 다른 요법의 예는 본원에서 설명한 염증 질환 및 자가면역 질환의 요법을 포함하나 이에 한정되지 않는다.
항-CD40 항체와 본원에서 설명한 하나 또는 그 이상의 다른 의약의 사용과의 조화라는 의미로서의 "치료"는 본원에서 CD40-발현 세포에 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환, 그러한 질병의 증상 또는, 그러한 질병에 대한 성향을 치료, 치유, 경감, 완화, 변경, 치료, 개선, 개량, 또는 영향을 미칠 목적으로, CD40-발현 세포에 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환, 그러한 질병의 증상, 또는 그러한 질병에 대한 성향을 보유한 환자, 또는 환자로부터 분리된 조직 또는 세포주에 대하여 항-CD40 항체 또는 다른 암 요법의 도포 또는 투여로 정의된다.
본 발명의 일 실시 상태에서, 조합 요법이 단독으로 투여되는 개별 치료에 비하여 치료 효능을 시너지적으로 개선하는 것을 제공한다. 용어 "시너지"는 각각의 개별적인 활성제의 개별 효과의 합보다 더 큰 2 또는 그 이상 활성제의 조합 효과를 설명하기 위하여 사용된다. 따라서, 2 또는 그 이상 약제의 결합 효과가 활성 또는 진행의 "시너지적 억제"를 나타내는 경우, 활성 또는 진행의 억제가 각 개별적인 활성제의 억제 효과의 합보다 크다는 것을 의미한다. 용어 "시너지적 치료 효과"는 2 또는 그 이상의 요법의 조합으로 관찰되는 치료 효과를 말하며, 여기서, 치료 효과(다수의 변수에 의하여 측정된 바에 의함)는 개별적인 요법에 의하여 관찰되는 개별 치료 효과의 합보다 크다.
본 발명의 다양한 특징과 실시 상태는 실시예에 의하여 더 상세하게 설명될 것이다. 이러한 세부적인 변경은 본 발명의 범위를 벗어나지 않는 상태에서 만들어질 수 있음은 명백하다.
실험
이하의 실험에 사용되는 항-CD40 항체는 CHIR-12.12이다. CHIR-12.12 항체의 생산, 서열 및 특성은 공개 국제 특허 출원 WO 2005/044854, WO 2005/044304, WO 2005/044305, WO 2005/044306, WO 2005/044855, WO 2005/044307, 및 WO 2005/044294에 상세하게 설명되어 있다. CHIR-12.12 항체를 발현하는 하이브리도마주 153.8E2.D10.D6.12.12(CMCC#12056)는 아메리칸 타입 컬쳐 걸렉션 [ATCC; 10801 University Blvd., Manassas, Virginia 20110-2209 (USA)]에 특허 기탁 번호 PTA-5543로 기탁되었다.
다음의 실시예 다수는 암 세포주 및 암 환자 세포에 결합하는 CHIR-12.12를 기초로 한다. 그러나, 다음의 모든 실시예는 염증 질환 및/또는 자가면역 질환을 치료하기위한 CHIR-12.12의 용도에 직접 관련되어 있으며, 이는 항-CD40 항체를 사용하는 염증 질환 및/또는 자가면역 질환의 치료에 동일하게 관련있는 CHIR-12.12 항체의 특성을 나타내기 때문이다.
실시예 1: 세포주 내의 ADCC 의 분석
CHIR-12.12 및 리툭시맙에 대하여 림프종 세포주(Daudi, Narnalwa), 다발골수종 세포주 (ARH77, IM-9), B-ALL 세포주 (CCRF-SB), 및 B-CLL 세포주 (EHEB)를 포함하는, CD40 및 CD20 항원을 모두 발현하는 다양한 악성 B-세포주에 대한 이들의 상대적 ADCC 활성을 비교하였다.
CHIR-12.12와 리툭시맙에 대하여 각각 최대 백분율 용해 및 ED50로 측정된 ADCC 효과 및 역가를 비교하였다. 이러한 실험 결과는 도 1A-IF에 나타내었다. 모든 표적 세포주에 있어서, CHIR-12.12는 리툭시맙 보다 더 강력하고, 효험이 있는 ADCC의 매개자이다. 6 세포주의 시험에 있어서, 세포당 세포 표면 CD20 분자의 수 는 CD40 보다 2.6 내지 30.8 배 높았다. 이러한 데이터는 CD40 분자가 CD20보다 적게 현시됨에도, 악성 B-세포주가 리툭시맙보다 CHIR-12.12에 의하여 더 효과적으로 용해된다는 사실을 나타낸다.
실시예 2: CLL 환자 세포 내의 ADCC 의 분석
8 환자의 생체외 1차 CLL 세포에 대한 CHIR-12.12 및 리툭시맙의 상대적 ADCC 활성을 비교하였다. 모든 환자의 CLL에 대하여 CHIR-12.12는 리툭시맙보다 더 큰 ADCC를 나타내었다(도 2A-D 및 도 3). 결과를 도 3에 요약하였다. CHIR-12.12는 리툭시맙보다 더 강력하였다.
항체-의존성 세포 세포독성( ADCC ) 실험 설계
표적 세포: CLL 환자 세포, 5000/웰. 작동 세포: 정제된 정상 인간 NK 세포, 50,000/웰. E:T 비율: 10. Abs 농도: 0.00001, 0.0001, 0.001, 0.01, 0.1, 1 및 10 ㎍/㎖. 배양 시간: 4 시간. 배양 배지: RPMI (w/o Phenol red) + 10% FBS + 1% P/S. 배양기: 96-웰 원형 하부 플레이트. 판독: 485nm 여기/535 nm 방출의 임의 형광 유닛(AFU)에 의하여 측정된 칼세인 AM 방출. 계산식: % 특이적 용해 = 100 x (AFU 시험 -AFU 자발적 방출 1) / (AFU 최대 방출 2 -AFU 자발). 음성 대조구: 항체 또는 NK cell의 부재하의 표적 세포에 의하여 방출된 칼세인. 양성 대조구: 세정제(1% NP40)에 의하여 용해된 표적 세포에 의하여 방출된 칼세인.
도 2 및 3에 나타낸 결과는 CHIR-12.12는 CLL 환자 세포에 대하여 리툭시맙보다 더 많이 ADCC를 매개하였다는 것을 보여준다. ADCC 차이의 크기는 표적 세포 또는 NK 공여자 세포인지 여부에 따라 다르게 되나, 모든 환자 시료에 대해서 관찰 되었다. 단일 환자의 CLL 세포를 두 명의 다른 NK 공여자에 대하여 시험하는 경우, ADCC 차이의 크가가 동일하지 않았음에도, CHIR-12.12는 두 NK 공여자 세포에 대하여 리툭시맙 보다 ADCC를 더 매개하였다(도 4). 이러한 우월한 ADCC의 기계적 기초에는 표적 항원(CD20 및 CD40)의 상대적 발현 수준, 항체의 내재화 정도, 및 NK 세포 상의 FcγIIIa 수용체에 대한 항체 친화도를 포함할 수 있다. 따라서 CHIR-12.12 및 리툭시맙의 ADCC 활성에 대한 이러한 인자의 영향이 조사되었다.
실시예 3: 세포-표면 CD40 및 CD20 분자의 정량화
CLL 세포 상의 CD20 및 CD40 양적 밀도(실시예 3) 및 항체 내재화의 정도(실시예 4)를 전술한 ADCC 활성의 차이의 잠재적인 원인에 대하여 조사하였다. 세포 표면 상의CD40 분자보다 CD20의 수가 1.3 내지 14 배 많기 때문에, CHIR-12.12의 더 큰 ADCC 활성 및 효능은 세포 표면 CD40 분자의 높은 밀도에 의존하지 않는다(도 5 및 도6).
방법
비-특이적 결합 부위를 차단하기 위하여 세포를 1 ㎎/㎖의 인간 IgG1으로 염색 완충액 (PBS, 1% BSA, 0.1% Na 아지드 함유) 내에서 선배양하였다. 이들을 30 분간 4℃(얼음)에서 배양하였다. 그 다음 FITC-컨쥬게이트된 인간 IgG1 아이소타입 대조구, FITC-컨쥬게이트된 CHIR-12.12, 또는 FITC-컨쥬게이트된 리툭시맙을 100, 10, 1, 0.1 ㎍/㎖로 첨가하였으며, 세포를 30 분간 4℃(얼음)에서 배양하였다. 세포를 염색 완충액 (PBS+l%FBS+0.1% 아지드화 나트륨)으로 세척하고 FACS 캘리버에 의하여 분석하였다.
기하 평균 형광 강도가 FACS에 의하여 측정되었다. 등량 가용성 형광 염색체 분자 (MESF)는 그 다음 조정된 FITC 비드에 의하여 설정된 표준 곡선에 기초하여 계산된다.
실시예 4: CH12 .12는 세포주 상의 CD40 에 결합에 의한 내제화를 유도하지 않는다
다우디, 림프종 세포주, 및 ARH77, MM 세포주가 내재화에 있어서 CHIR-12.12 결합 효과를 평가하기 위하여 사용된다. 세포는 인간 IgG1 (대조 항체)로 배양되거나 또는 1 ㎍/㎖의 CHIR-12.12로 얼음(0.1% 아지드화 나트륨 첨가, 내재화 방지) 또는 37℃ (아지드화 나트륨 미첨가)로 3 시간 동안 배양된다. 냉각 염색 완충액 (PBS + 1% BSA + 0.1% 아지드화 나트륨)로 세척 후, 세포는 염소 항-인간 IgG-FITC로 30 분간 얼음 속에서 염색된다. 기하 평균 형광 강도 (MFI)는 FACS 캘리버에 의하여 기록되었다. 아지드화 나트륨의 존재하에 얼음에서 또는 아지드화 나트륨의 부재하에 37℃에서 CHIR-12.12으로 배양된 세포 간에 MFI의 차이가 없다는 사실이 관찰되었다(도 7). 이러한 데이터는 CD40의 결합에 있어서, CHIR-12.12는 내재화되지 않으며 세포 표면상에 계속하여 현시된다는 사실을 보여준다.
실시예 5: CLL 환자 세포에 결합 후 CHIR -12.12 및 리툭시맙의 내재화: FACS 및 공초점 현미경
FACS 방법론
세포는 huIgGl, CHIR-12.12, 또는 리툭시맙과 함께 10 ㎍/㎖로 3 시간 동안 4O℃(0.1% Na 아지드 첨가) 또는 37℃(Na 아지드 미첨가)에서 배양되었다. 세포는 염색 완충액(PBS + 1% FBS + 0.1% Na 아지드)로 세척되고, FITC-염소-항-인간 IgG가 첨가되었으며, 그 다음 세포는 cells were incubated for 30 분 동안 4O℃로 배양되었고, FACS 캘리버로 분석되었다.
공초점 현미경 방법론
세포는 알렉사(Alexa) 488 또는 FITC 컨쥬게이트된 CHIR-12.12, 리툭시맙, 및 IgG1 10 ㎍/㎖로 3 시간 동안 40℃(0.1% Na 아지드 첨가) 또는 37℃(Na 아지드 미첨가)하여 배양하였다. 세포를 그 뒤 세척하고, 2% 포름알데히드, 5 min RT로 고정시켰다. 그 다음 세포를 세척한 뒤, 폴리-L-라이신 피복 슬라이드에 놓고, 탑재, 밀봉하고 공초점 영상화로 분석하였다.
결과
이러한 실험 결과를 도 8(FACS) 및 도 9 및 10(공초점 현미경)에 나타내었다. 이러한 실험의 결과를 도 11에 요약하였다. 흐름 세포측정법 및 공초첨 현미경에 의하여 수행되는, 1차 CLL 세포를 사용한 이러한 항체 내재화 연구는 37℃에서의 CD40에 결합에 있어서, CHIR-12.12가 3 시간 후에도 세포 표면상에 균일하게 분포되어 있다는 사실을 보여준다. 이와 대조하면, 37℃에서 결합 후, 리툭시맙은 캡으로 재분포되거나 내재화되었다. 이러한 데이터는 CHIR-12.12의 강력한 ADCC 활성은 작동 세포의 최적 상호작용을 허용하면서 표적 세포의 표면상에 균일하게 현시될 수 있는 능력과 관련 있을 수 있다는 사실을 알려준다. 이러한 결과는 CHIR-12.12가 생체 내 CLL 세포에 대한 ADCC의 강력한 매개에 효과적이라는 사실을 알려준다.
실시예 6: Rituxan ® 및 CHIR -12.12에 의한 Fc γ RIIIa 결합의 Biacore 분석
CHIR-12.12 및 리툭시맙에 대한 FcγRIIIa aa158F 및 aa158V 대립유전자의 친화도를 표준 Biacore® 분석으로 비교하였다. CHIR-12.12는 리툭시맙과 비교하여 4.6 배 높은 친화도로 aa158F 대립유전자와 결합한다(각각, KQ가 2.8 μM 대 13 μM). 이러한 실험 결과를 다음의 표에 요약하였다:
KD( nM )
CHIR-12.12 리툭시맙
FcγRIIIa 158V 492 466
FcγRIIIa 158V 2800 13000
실시예 7: NK 작동 세포에 의한 ADCC 에 대한 Fc γ RIIIa 다형성 효과
항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)은 다수의 시판용 및 시험용 단클론 항체의 주요 활성 기작이다. 소포 비-호지킨 림프종 (NHL)의 치료제로 시판되고 다른 B-세포 악성종양에도 활성이 있는 리툭시맙(Rituxan®)은 이들의 1차 활성 기작 중의 하나로서 ADCC가 있다고 알려져 있다. 주목할 만한 것은, NHL 내의 리툭시맙의 임상적 활성은 FcγRIIIa 유전형과 관련되어 있음을 보여준다. V/V 또는 V/F의 FcγRIIIa 158aa 다형성을 보유한 환자는 F/F인 환자들보다 리툭시맙에 더 반응한다(예를 들면, Cartron et al. Blood (2002), 99(3): 754-758 또는 Dall'Ozzo et al. Cancer Res. (2004) 64:4664-4669).
이러한 실험에서, 다양한 FcγRIIIa aa158 다형성을 발현하는 다수의 인간 공여자로부터 정제된 NK 작동 세포는 표적 세포로서 인간 림프종 다우디 세포주를 사용하여 평가되었다(도 12 및 13). 이러한 도면에 나타난 바와 같이, CHIR-12.12은 세 유전형 모두의 NK 세포에 의하여 강력한 ADCC를 유도한다. 다우디 세포주의 용해에 대한 CHIR-12.12 ED50S는 각각 F/F, V/F 및 V/V에 대하여 4, 2, 및 0.4 pM이다(도 13). 다우디 세포주의 용해에 대한 리툭시맙 ED50S는 각각 F/F, V/F, 및 V/V에 대하여 53, 21, 및 9 pM이다(도 13).
다양한 FcγRIIIa aa158 다형성을 발현하는 다수의 인간 공여자로부터 정제된 NK 작동 세포는 표적 세포로서 CLL 세포주를 사용하여 평가되었다(도 14). CHIR-12.12가 시험된 모든 CLL 환자 세포에 대하여 리툭시맙 보다 ADCC의 매개자가 더 강력하다는 것을 발견하였다(도 14). 이러한 데이터는 CHIR-12.12가 심지어 aa158 V/F 또는 F/F 유전형의 NK 세포와 함께 리툭시맙보다 더 강력한 ADCC 억제제이라는 사실을 의미한다.
이러한 발견은 CHIR-12.12는 V/V인 것보다 F/F 또는 V/F의 FcγRIIIa 158aa 다형성을 보유한 NK 세포를 이용한 ADCC 분석에서 현저하게 덜 강력할 것이 기대되었기 때문에 놀라운 것이다. 또한, NHL 내의 리툭시맙의 임상적 활성은 FcγRIIIa 유전형과 관련 있는 것으로 나타났다. V/V 또는 V/F의 FcγRIIIa 158aa 다형성을 보유한 환자는 F/F인 환자들보다 리툭시맙에 더 반응성이 있다. 리툭시맙은 또한 B 세포의 표면상에서 발현되는 항원에 결합하는 IgG1 단클론 항체이며, 따라서 CHIR-12.12가 FcγRIIIa-158 V 다형성에 대한 동일한 선호를 나타낸다고 기대되어 왔다. 대신에, CHIR-12.12는 세 유전형 모두의 NK 세포로 강력한 ADCC를 유도한다고 밝혀졌다.
본 원에서 설명된 본 발명의 많은 변경 및 다른 실시 상태는 본 발명이 전술한 상세한 설명 및 관련 도면에 제시된 본 발명의 장점을 보유하도록 당해 기술 분야의 숙련자가 고안하게 된다. 따라서, 본 발명은 특정 실시 상태에 한정되는 것이 아니며, 변경 및 다른 실시 상태는 첨부한 청구의 범위 내에 포함되도록 의도된다. 특정 용어가 사용되었더라도, 이는 포괄적이고 설명적으로 사용된 것이며 제한하기 위한 것이 아님을 이해하여야 한다.
본원에 인용된 모든 문헌 및 특허 출원은 각 개별 문헌 또는 특허 출원이 개별적으로 및 명확하게 참고자료로서 포함되었다고 적시하는 것과 동일한 정도로 참고자료로서 전부 포함되어 있다.
출원인 또는 대리인 파일번호 PP028162.0002(319129) 국제출원번호 PCT/US2006
기탁 미생물 또는 기타 생물학적 물질에 관한 지시서 (PCT 규칙 13bis)
A. 이하의 지시는 본 명세서 18 페이지 25 줄에 언급된 기탁 미생물 또는 기타 생물학 적 물질에 관한 것이다
B. 기탁 확인 별지에 추가의 기탁이 확인됨 □
기탁 기관 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션
기탁 기관의 주소 미국 버지니아주 20110-2209, 마나사스 유니버시티 블러버드 10801
기탁일자 2003. 9. 17 승인 번호 PTA-5543
C. 추가시시사항(필요시 기재) 별지에 본 정보가 계속됨 □
48 페이지, 13 줄; 79 페이지, 20-23 줄
D. 지시가 된 지정 국가
E. 별지 제공 지시
하기의 지시는 국제사무국에 제출된다
SEQUENCE LISTING <110> Aukerman, Sharon Lea Luqman, Mohammad <120> Uses of Anti-CD40 Antibodies <130> PP028185.0002(319124) <150> 60/732,580 <151> 2005-11-01 <160> 9 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 720 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Coding sequence for light chain of 12.12 human anti-CD40 antibody <221> CDS <222> (1)...(720) <400> 1 atg gcg ctc cct gct cag ctc ctg ggg ctg cta atg ctc tgg gtc tct 48 Met Ala Leu Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Met Leu Trp Val Ser 1 5 10 15 gga tcc agt ggg gat att gtg atg act cag tct cca ctc tcc ctg acc 96 Gly Ser Ser Gly Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Thr 20 25 30 gtc acc cct gga gag ccg gcc tcc atc tcc tgc agg tcc agt cag agc 144 Val Thr Pro Gly Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser 35 40 45 ctc ctg tat agt aat gga tac aac tat ttg gat tgg tac ctg cag aag 192 Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys 50 55 60 cca ggg cag tct cca cag gtc ctg atc tct ttg ggt tct aat cgg gcc 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75 80 Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 85 90 95 Thr Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr 100 105 110 Cys Met Gln Ala Arg Gln Thr Pro Phe Thr Phe Gly Pro Gly Thr Lys 115 120 125 Val Asp Ile Arg Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro 130 135 140 Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu 145 150 155 160 Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 165 170 175 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp 180 185 190 Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln 210 215 220 Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 3 <211> 2016 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Coding sequence for heavy chain of 12.12 human anti-CD40 antibody (with introns) <400> 3 atg gag ttt ggg ctg agc tgg gtt ttc ctt gtt gct att tta aga ggt 48 gtc cag tgt cag gtg cag ttg gtg gag tct ggg gga ggc gtg gtc cag 96 cct ggg agg tcc ctg aga ctc tcc tgt gca gcc tct gga ttc acc ttc 144 agt agc tat ggc atg cac tgg gtc cgc cag gct cca ggc aag ggg ctg 192 gag tgg gtg gca gtt ata tca tat gag gaa agt aat aga tac cat gca 240 gac tcc gtg aag ggc cga ttc acc atc tcc aga gac aat tcc aag atc 288 acg ctg tat ctg caa atg aac agc ctc aga act gag gac acg gct gtg 336 tat tac tgt gcg aga gat ggg ggt ata gca gca cct ggg cct gac tac 384 tgg ggc cag gga acc ctg gtc acc gtc tcc tca gca agt acc aag ggc 432 cca tcc gtc ttc ccc ctg gcg ccc gct agc aag agc acc tct ggg ggc 480 aca gcg gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac tac ttc ccc gaa ccg gtg 528 acg gtg tcg tgg aac tca ggc gcc ctg acc agc ggc gtg cac acc ttc 576 ccg gct gtc cta cag tcc tca gga ctc tac tcc ctc agc agc gtg gtg 624 acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag acc tac atc tgc aac gtg 672 aat cac aag ccc agc aac acc aag gtg gac aag aga gtt ggt gag agg 720 cca gca cag gga ggg agg gtg tct gct gga agc cag gct cag cgc tcc 768 tgc ctg gac gca tcc cgg cta tgc agt ccc agt cca ggg cag caa ggc 816 agg ccc cgt ctg cct ctt cac ccg gag gcc tct gcc cgc ccc act cat 864 gct cag gga gag ggt ctt ctg gct ttt tcc cca ggc tct ggg cag gca 912 cag gct agg tgc ccc taa ccc agg ccc tgc aca caa agg ggc agg tgc 960 tgg gct cag acc tgc caa gag cca tat ccg gga gga ccc tgc ccc tga 1008 cct aag ccc acc cca aag gcc aaa ctc tcc act ccc tca gct cgg aca 1056 cct tct ctc ctc cca gat tcc agt aac tcc caa tct tct ctc tgc aga 1104 gcc caa atc ttg tga caa aac tca cac atg ccc acc gtg ccc agg taa 1152 gcc agc cca ggc ctc gcc ctc cag ctc aag gcg gga cag gtg ccc tag 1200 agt agc ctg cat cca ggg aca ggc ccc agc cgg gtg ctg aca cgt cca 1248 cct cca tct ctt cct cag cac ctg aac tcc tgg ggg gac cgt cag tct 1296 tcc tct tcc ccc caa aac cca agg aca ccc tca tga tct ccc gga ccc 1344 ctg agg tca cat gcg tgg tgg tgg acg tga gcc acg aag acc ctg agg 1392 tca agt tca act ggt acg tgg acg gcg tgg agg tgc ata atg cca aga 1440 caa agc cgc ggg agg agc agt aca aca gca cgt acc gtg tgg tca gcg 1488 tcc tca ccg tcc tgc acc agg act ggc tga atg gca agg agt aca agt 1536 gca agg tct cca aca aag ccc tcc cag ccc cca tcg aga aaa cca tct 1584 cca aag cca aag gtg gga ccc gtg ggg tgc gag ggc cac atg gac aga 1632 ggc cgg ctc ggc cca ccc tct gcc ctg aga gtg acc gct gta cca acc 1680 tct gtc cct aca ggg cag ccc cga gaa cca cag gtg tac acc ctg ccc 1728 cca tcc cgg gag gag atg acc aag aac cag gtc agc ctg acc tgc ctg 1776 gtc aaa ggc ttc tat ccc agc gac atc gcc gtg gag tgg gag agc aat 1824 ggg cag ccg gag aac aac tac aag acc acg cct ccc gtg ctg gac tcc 1872 gac ggc tcc ttc ttc ctc tat agc aag ctc acc gtg gac aag agc agg 1920 tgg cag cag ggg aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg 1968 cac aac cac tac acg cag aag agc ctc tcc ctg tct ccg ggt aaa tga 2016 <210> 4 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of 12.12 human anti-CD40 antibody <400> 4 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Arg Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 20 25 30 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Glu Glu Ser Asn Arg Tyr His Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ile 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Gly Ile Ala Ala Pro Gly Pro Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135 140 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ala Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 145 150 155 160 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 210 215 220 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys 225 230 235 240 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 275 280 285 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 290 295 300 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 305 310 315 320 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 325 330 335 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 355 360 365 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 370 375 380 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 385 390 395 400 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 435 440 445 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 450 455 460 Leu Ser Pro Gly Lys 465 <210> 5 <211> 469 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Heavy chain of variant of 12.12 human anti-CD40 antibody <400> 5 Met Glu Phe Gly Leu Ser Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Arg Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln 20 25 30 Pro Gly Arg Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Tyr Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ala Val Ile Ser Tyr Glu Glu Ser Asn Arg Tyr His Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Ile 85 90 95 Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Thr Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Asp Gly Gly Ile Ala Ala Pro Gly Pro Asp Tyr 115 120 125 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 130 135 140 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 145 150 155 160 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 165 170 175 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 180 185 190 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 195 200 205 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 210 215 220 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys 225 230 235 240 Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu 245 250 255 Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr 260 265 270 Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val 275 280 285 Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val 290 295 300 Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser 305 310 315 320 Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu 325 330 335 Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala 340 345 350 Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro 355 360 365 Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln 370 375 380 Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala 385 390 395 400 Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr 405 410 415 Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu 420 425 430 Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser 435 440 445 Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser 450 455 460 Leu Ser Pro Gly Lys 465 <210> 6 <211> 612 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)...(612) <221> misc_feature <222> (0)...(0) <223> Coding sequence for short isoform of human CD40 <400> 6 atg gtt cgt ctg cct ctg cag tgc gtc ctc tgg ggc tgc ttg ctg acc 48 Met Val Arg Leu Pro Leu Gln Cys Val Leu Trp Gly Cys Leu Leu Thr 1 5 10 15 gct gtc cat cca gaa cca ccc act gca tgc aga gaa aaa cag tac cta 96 Ala Val His Pro Glu Pro Pro Thr Ala Cys Arg Glu Lys Gln Tyr Leu 20 25 30 ata aac agt cag tgc tgt tct ttg tgc cag cca gga cag aaa ctg gtg 144 Ile Asn Ser Gln Cys Cys Ser Leu Cys Gln Pro Gly Gln Lys Leu Val 35 40 45 agt gac tgc aca gag ttc act gaa acg gaa tgc ctt cct tgc ggt gaa 192 Ser Asp Cys Thr Glu Phe Thr Glu Thr Glu Cys Leu Pro Cys Gly Glu 50 55 60 agc gaa ttc cta gac acc tgg aac aga gag aca cac tgc cac cag cac 240 Ser Glu Phe Leu Asp Thr Trp Asn Arg Glu Thr His Cys His Gln His 65 70 75 80 aaa tac tgc gac ccc aac cta ggg ctt cgg gtc cag cag aag ggc acc 288 Lys Tyr Cys Asp Pro Asn Leu Gly Leu Arg Val Gln Gln Lys Gly Thr 85 90 95 tca gaa aca gac acc atc tgc acc tgt gaa gaa ggc tgg cac tgt acg 336 Ser Glu Thr Asp Thr Ile Cys Thr Cys Glu Glu Gly Trp His Cys Thr 100 105 110 agt gag gcc tgt gag agc tgt gtc ctg cac cgc tca tgc tcg ccc ggc 384 Ser Glu Ala Cys Glu Ser Cys Val Leu His Arg Ser Cys Ser Pro Gly 115 120 125 ttt ggg gtc aag cag att gct aca ggg gtt tct gat acc atc tgc gag 432 Phe Gly Val Lys Gln Ile Ala Thr Gly Val Ser Asp Thr Ile Cys Glu 130 135 140 ccc tgc cca gtc ggc ttc ttc tcc aat gtg tca tct gct ttc gaa aaa 480 Pro Cys Pro Val Gly Phe Phe Ser Asn Val Ser Ser Ala Phe Glu Lys 145 150 155 160 tgt cac cct tgg aca agg tcc cca gga tcg gct gag agc cct ggt ggt 528 Cys His Pro Trp Thr Arg Ser Pro Gly Ser Ala Glu Ser Pro Gly Gly 165 170 175 gat ccc cat cat ctt cgg gat cct gtt tgc cat cct ctt ggt gct ggt 576 Asp Pro His His Leu Arg Asp Pro Val Cys His Pro Leu Gly Ala Gly 180 185 190 ctt tat caa aaa ggt ggc caa gaa gcc aac caa taa 612 Leu Tyr Gln Lys Gly Gly Gln Glu Ala Asn Gln * 195 200 <210> 7 <211> 203 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 7 Met Val Arg Leu Pro Leu Gln Cys Val Leu Trp Gly Cys Leu Leu Thr 1 5 10 15 Ala Val His Pro Glu Pro Pro Thr Ala Cys Arg Glu Lys Gln Tyr Leu 20 25 30 Ile Asn Ser Gln Cys Cys Ser Leu Cys Gln Pro Gly Gln Lys Leu Val 35 40 45 Ser Asp Cys Thr Glu Phe Thr Glu Thr Glu Cys Leu Pro Cys Gly Glu 50 55 60 Ser Glu Phe Leu Asp Thr Trp Asn Arg Glu Thr His Cys His Gln His 65 70 75 80 Lys Tyr Cys Asp Pro Asn Leu Gly Leu Arg Val Gln Gln Lys Gly Thr 85 90 95 Ser Glu Thr Asp Thr Ile Cys Thr Cys Glu Glu Gly Trp His Cys Thr 100 105 110 Ser Glu Ala Cys Glu Ser Cys Val Leu His Arg Ser Cys Ser Pro Gly 115 120 125 Phe Gly Val Lys Gln Ile Ala Thr Gly Val Ser Asp Thr Ile Cys Glu 130 135 140 Pro Cys Pro Val Gly Phe Phe Ser Asn Val Ser Ser Ala Phe Glu Lys 145 150 155 160 Cys His Pro Trp Thr Arg Ser Pro Gly Ser Ala Glu Ser Pro Gly Gly 165 170 175 Asp Pro His His Leu Arg Asp Pro Val Cys His Pro Leu Gly Ala Gly 180 185 190 Leu Tyr Gln Lys Gly Gly Gln Glu Ala Asn Gln 195 200 <210> 8 <211> 834 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (1)...(834) <221> misc_feature <222> (0)...(0) <223> Coding sequence for long isoform of human CD40 <400> 8 atg gtt cgt ctg cct ctg cag tgc gtc ctc tgg ggc tgc ttg ctg acc 48 Met Val Arg Leu Pro Leu Gln Cys Val Leu Trp Gly Cys Leu Leu Thr 1 5 10 15 gct gtc cat cca gaa cca ccc act gca tgc aga gaa aaa cag tac cta 96 Ala Val His Pro Glu Pro Pro Thr Ala Cys Arg Glu Lys Gln Tyr Leu 20 25 30 ata aac agt cag tgc tgt tct ttg tgc cag cca gga cag aaa ctg gtg 144 Ile Asn Ser Gln Cys Cys Ser Leu Cys Gln Pro Gly Gln Lys Leu Val 35 40 45 agt gac tgc aca gag ttc act gaa acg gaa tgc ctt cct tgc ggt gaa 192 Ser Asp Cys Thr Glu Phe Thr Glu Thr Glu Cys Leu Pro Cys Gly Glu 50 55 60 agc gaa ttc cta gac acc tgg aac aga gag aca cac tgc cac cag cac 240 Ser Glu Phe Leu Asp Thr Trp Asn Arg Glu Thr His Cys His Gln His 65 70 75 80 aaa tac tgc gac ccc aac cta ggg ctt cgg gtc cag cag aag ggc acc 288 Lys Tyr Cys Asp Pro Asn Leu Gly Leu Arg Val Gln Gln Lys Gly Thr 85 90 95 tca gaa aca gac acc atc tgc acc tgt gaa gaa ggc tgg cac tgt acg 336 Ser Glu Thr Asp Thr Ile Cys Thr Cys Glu Glu Gly Trp His Cys Thr 100 105 110 agt gag gcc tgt gag agc tgt gtc ctg cac cgc tca tgc tcg ccc ggc 384 Ser Glu Ala Cys Glu Ser Cys Val Leu His Arg Ser Cys Ser Pro Gly 115 120 125 ttt ggg gtc aag cag att gct aca ggg gtt tct gat acc atc tgc gag 432 Phe Gly Val Lys Gln Ile Ala Thr Gly Val Ser Asp Thr Ile Cys Glu 130 135 140 ccc tgc cca gtc ggc ttc ttc tcc aat gtg tca tct gct ttc gaa aaa 480 Pro Cys Pro Val Gly Phe Phe Ser Asn Val Ser Ser Ala Phe Glu Lys 145 150 155 160 tgt cac cct tgg aca agc tgt gag acc aaa gac ctg gtt gtg caa cag 528 Cys His Pro Trp Thr Ser Cys Glu Thr Lys Asp Leu Val Val Gln Gln 165 170 175 gca ggc aca aac aag act gat gtt gtc tgt ggt ccc cag gat cgg ctg 576 Ala Gly Thr Asn Lys Thr Asp Val Val Cys Gly Pro Gln Asp Arg Leu 180 185 190 aga gcc ctg gtg gtg atc ccc atc atc ttc ggg atc ctg ttt gcc atc 624 Arg Ala Leu Val Val Ile Pro Ile Ile Phe Gly Ile Leu Phe Ala Ile 195 200 205 ctc ttg gtg ctg gtc ttt atc aaa aag gtg gcc aag aag cca acc aat 672 Leu Leu Val Leu Val Phe Ile Lys Lys Val Ala Lys Lys Pro Thr Asn 210 215 220 aag gcc ccc cac ccc aag cag gaa ccc cag gag atc aat ttt ccc gac 720 Lys Ala Pro His Pro Lys Gln Glu Pro Gln Glu Ile Asn Phe Pro Asp 225 230 235 240 gat ctt cct ggc tcc aac act gct gct cca gtg cag gag act tta cat 768 Asp Leu Pro Gly Ser Asn Thr Ala Ala Pro Val Gln Glu Thr Leu His 245 250 255 gga tgc caa ccg gtc acc cag gag gat ggc aaa gag agt cgc atc tca 816 Gly Cys Gln Pro Val Thr Gln Glu Asp Gly Lys Glu Ser Arg Ile Ser 260 265 270 gtg cag gag aga cag tga 834 Val Gln Glu Arg Gln * 275 <210> 9 <211> 277 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 9 Met Val Arg Leu Pro Leu Gln Cys Val Leu Trp Gly Cys Leu Leu Thr 1 5 10 15 Ala Val His Pro Glu Pro Pro Thr Ala Cys Arg Glu Lys Gln Tyr Leu 20 25 30 Ile Asn Ser Gln Cys Cys Ser Leu Cys Gln Pro Gly Gln Lys Leu Val 35 40 45 Ser Asp Cys Thr Glu Phe Thr Glu Thr Glu Cys Leu Pro Cys Gly Glu 50 55 60 Ser Glu Phe Leu Asp Thr Trp Asn Arg Glu Thr His Cys His Gln His 65 70 75 80 Lys Tyr Cys Asp Pro Asn Leu Gly Leu Arg Val Gln Gln Lys Gly Thr 85 90 95 Ser Glu Thr Asp Thr Ile Cys Thr Cys Glu Glu Gly Trp His Cys Thr 100 105 110 Ser Glu Ala Cys Glu Ser Cys Val Leu His Arg Ser Cys Ser Pro Gly 115 120 125 Phe Gly Val Lys Gln Ile Ala Thr Gly Val Ser Asp Thr Ile Cys Glu 130 135 140 Pro Cys Pro Val Gly Phe Phe Ser Asn Val Ser Ser Ala Phe Glu Lys 145 150 155 160 Cys His Pro Trp Thr Ser Cys Glu Thr Lys Asp Leu Val Val Gln Gln 165 170 175 Ala Gly Thr Asn Lys Thr Asp Val Val Cys Gly Pro Gln Asp Arg Leu 180 185 190 Arg Ala Leu Val Val Ile Pro Ile Ile Phe Gly Ile Leu Phe Ala Ile 195 200 205 Leu Leu Val Leu Val Phe Ile Lys Lys Val Ala Lys Lys Pro Thr Asn 210 215 220 Lys Ala Pro His Pro Lys Gln Glu Pro Gln Glu Ile Asn Phe Pro Asp 225 230 235 240 Asp Leu Pro Gly Ser Asn Thr Ala Ala Pro Val Gln Glu Thr Leu His 245 250 255 Gly Cys Gln Pro Val Thr Gln Glu Asp Gly Lys Glu Ser Arg Ile Ser 260 265 270 Val Gln Glu Arg Gln 275

Claims (53)

  1. 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 인간 환자는 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)이며, 상기 인간 환자에 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 전신성 홍반성 루푸스 (SLE), 원판상 루푸스, 루푸스 신장염, 사르코이드증, 연소성 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군, 강직척추염, 및 통풍관절염을 포함하는 염증성 관절염, 기관 또는 조직 이식의 거부반응, 초급성, 급성, 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 대 숙주 질환, 다발성 경화증, 고 IgE 증후군, 결절다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 창자병, 크론씨병, 만성소화장애증 (글루텐님감성 창자병증), 자가면역 간염, 악성 빈혈, 자가면역 용혈 빈혈, 건선, 공피증, 중증근무력증, 자가면역 혈소판감소자색반증, 자가면역 감상선염, 그레이브스병, 하시모토 감상선염, 면역복합체병, 만성 피로 면역 조절불능 증후군(CFIDS), 다발성근육염 및 피부근육염, 한랭글로블린혈증, 혈전용해, 심근병증, 보통 천포창, 간질성 폐섬유증, 타입 I 및 타입 II 당뇨병, 타입 1, 2, 3, 및 4 지연과민, 알러지 또는 비알러지성 질환, 치료성 단백질에 대한 원치않는/의도하지않는 면역반응, 천식, 초그-스트라우스 증후군 (알러지성 육아종증), 아토피 피부염, 일러지성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE-매개 알러지, 죽상동맥경화증, 맥관염, 특발성 염증 근병증, 용혈증, 알츠하이머병, 및 만성 염증성 말이집탈락성 다발신경증, 폐 이식 거부반응을 포함하나 이에 한정되지 않는 폐렴, 천식, 사르코이드증, 폐기종, 낭성 섬유증, 특발성 폐섬유증, 만성 기관지염, 알러지성 비염 및 과민성 폐렴, 호산구성 폐렴 등의 알러지성 폐 질환, 골수 및/또는 폐이식 또는 다른 원인에 기인한 폐쇄성 세기관지염, 이식 죽상동맥경화증/이식 정맥경화증, 콜라겐, 관상, 및 류마티스 관절염에서 기인하는 폐섬유증 및 홍반성 루푸스 등의 자가면역 질환으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 CD20-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환인 것을 특징으로 하는 방법.
  4. 제3항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 류마티스 관절염, 건선, 전신성 홍반성 루푸스, 크론씨병, 중증근무력증, 특발성 혈소판감소성 자반증, 또는 쇼그렌 증후군인 것을 특징으로 하는 방법.
  5. 제3항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 다발성 경화증, 이식 거부반응, 이식 대 숙주 질환, 알츠하이머병, 또는 당뇨병인 것을 특징으로 하는 방법.
  6. 제3항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 CD40 및 CD20를 둘 다 발현하는 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환인 것을 특징으로 하는 방법.
  7. 제6항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 류마티스 관절염, 건선, 전신성 홍반성 루푸스, 크론씨병, 중증근무력증, 특발성 혈소판감소성 자반증, 또는 쇼그렌 증후군인 것을 특징으로 하는 방법.
  8. 제6항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 다발성 경화증, 이식 거부반응, 이식 대 숙주 질환, 알츠하이머병, 또는 당뇨병인 것을 특징으로 하는 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 비경구 투여 경로에 의하여 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 정맥내 또는 피하적으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
  11. FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자 내의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료용 의 약의 제조에 있어서 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량의 용도.
  12. 제11항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 전신성 홍반성 루푸스 (SLE), 원판상 루푸스, 루푸스 신장염, 사르코이드증, 연소성 관절염, 류마티스 관절염, 건선 관절염, 라이터 증후군, 강직척추염, 및 통풍관절염을 포함하는 염증성 관절염, 기관 또는 조직 이식의 거부반응, 초급성, 급성, 또는 만성 거부반응 및/또는 이식 대 숙주 질환, 다발성 경화증, 고 IgE 증후군, 결절다발동맥염, 원발성 담즙성 간경변, 염증성 창자병, 크론씨병, 만성소화장애증 (글루텐님감성 창자병증), 자가면역 간염, 악성 빈혈, 자가면역 용혈 빈혈, 건선, 공피증, 중증근무력증, 자가면역 혈소판감소자색반증, 자가면역 감상선염, 그레이브스병, 하시모토 감상선염, 면역복합체병, 만성 피로 면역 조절불능 증후군 (CFIDS), 다발성근육염 및 피부근육염, 한랭글로블린혈증, 혈전용해, 심근병증, 보통 천포창, 간질성 폐섬유증, 타입 I 및 타입 II 당뇨병, 타입 1, 2, 3, 및 4 지연과민, 알러지 또는 비알러지성 질환, 치료성 단백질에 대한 원치않는/의도하지않는 면역반응, 천식, 초그-스트라우스 증후군 (알러지성 육아종증), 아토피 피부염, 일러지성 및 자극성 접촉 피부염, 두드러기, IgE-매개 알러지, 죽상동맥경화증, 맥관염, 특발성 염증 근병증, 용혈증, 알츠하이머병, 및 만성 염증성 말이집탈락성 다발신경증, 폐 이식 거부반응을 포함하나 이에 한정되지 않는 폐렴, 천식, 사르코이드증, 폐기종, 낭성 섬유증, 특발성 폐섬유증, 만성 기관지염, 알러지성 비염 및 과민성 폐렴, 호산구성 폐렴 등의 알러지성 폐 질환, 골수 및/또는 폐이식 또는 다른 원인에 기인한 폐 쇄성 세기관지염, 이식 죽상동맥경화증/이식 정맥경화증, 및 콜라겐, 관상, 및 류마티스 관절염에 기인한 폐 섬유증 및 홍반성 루푸스 등의 자가면역 질환로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 용도.
  13. 제11항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 CD20-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환인 것을 특징으로 하는 용도.
  14. 제13항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 류마티스 관절염, 건선, 전신성 홍반성 루푸스, 크론씨병, 중증근무력증, 특발성 혈소판감소성 자반증, 또는 쇼그렌 증후군인 것을 특징으로 하는 용도.
  15. 제13항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 다발성 경화증, 이식 거부반응, 이식 대 숙주 질환, 알츠하이머병, 또는 당뇨병인 것을 특징으로 하는 용도.
  16. 제13항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 CD40 및 CD20를 둘 다 발현하는 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환인 것을 특징으로 하는 용도.
  17. 제16항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 류마티스 관절염, 건선, 전신성 홍반성 루푸스, 크론씨병, 중증근무력증, 특발성 혈소판감소성 자반증, 또는 쇼그렌 증후군인 것을 특징으로 하는 용도.
  18. 제16항에 있어서, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 다발성 경화증, 이식 거부반응, 이식 대 숙주 질환, 알츠하이머병, 또는 당뇨병인 것을 특징으로 하는 용도.
  19. 제11항 내지 제18항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 의약은 비경구 투여 경로에 의한 투여용으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 용도.
  20. 제19항에 있어서, 상기 의약은 정맥내 또는 피하적 투여용으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 용도.
  21. 인간 환자에게 항-CD40 항체의 유효량을 투여하는 단계를 포함하는, FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자에서 B 세포에 의한 항체 생산을 억제하는 방법.
  22. 제21항에 있어서, 상기 인간 환자는 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유하는 것을 특징으로 하는 방법.
  23. FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 인간 환자 내의 B 세포에 의한 항체 생산의 억제용 의약의 제조에 있어서 항-CD40 항체의 유효량의 용도.
  24. 전술한 청구항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 인간 단클론 항체인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  25. 제24항에 있어서, 상기 인간 항-CD40 단클론 항체는 인간 IgG1 중쇄 불변 영역을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  26. 제1항 내지 제25항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 IgG1은 SEQ ID NO:4 또는 SEQ ID NO:5에 인용된 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  27. 전술한 청구항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 현저한 작용제 활성이 없는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  28. 전술한 청구항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 CD40-발현 세포 상의 CD40-CD40L 신호의 길항제인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  29. 전술한 청구항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는:
    a) 단클론 항체 CHIR-12.12;
    b) 하이브리도마 세포주 12.12에의해 생산된 단클론 항체;
    c) SEQ ID NO:2에 나타낸 서열, SEQ ID NO:4에 나타낸 서열, SEQ ID NO:5에 나타낸 서열, SEQ ID NO:2 및 SEQ ID NO:4에 나타낸 두 서열 모두, 및 SEQ ID NO:2 및 SEQ ID NO:5에 나타낸 두 서열 모두로 구성되는 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하는 단클론 항체;
    d) SEQ ID NO:1에 나타낸 서열, SEQ ID NO:3에 나타낸 서열, 및 SEQ ID NO:1 및 SEQ ID NO:3에 나타낸 두 서열 모두로 구성되는 군으로부터 선택된 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산 분자에 의하여 암호화하는 아미노산 서열을 보유한 단클론 항체;
    e) 하이브리도마 세포주 12.12에의해 생산된 단클론 항체와 결합가능한 에피토프에 결합하는 단클론 항체;
    f) SEQ ID NO:7 또는 SEQ ID NO:9에 나타낸 인간 CD40 서열의 잔기 82-87를 포함하는 에피토프에 결합하는 단클론 항체;
    g) SEQ ID NO:7 또는 SEQ ID NO:9에 나타낸 인간 CD40 서열의 잔기 82-89를 포함하는 에피토프에 결합하는 단클론 항체;
    h) 경쟁적 결합 분석에서 단클론 항체 CHIR-12.12와 경쟁하는 단클론 항체;
    i) 전술한 항목 a)의 단클론 항체 또는 전술한 항목 c)-h) 중의 하나의 단클론 항체로서, 재조합적으로 생산된 것인 단클론 항체; 및
    j) 전술한 항목 a)-i) 중의 하나의 단클론 항체의 항원-결합 절편인 단클론 항체로서, 상기 절편이 인간 CD40 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 능력을 보유하는 단클론 항체
    로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  30. 제29항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 단클론 항체 CHIR-12.12인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  31. 제29항에 있어서, 상기 항원-결합 절편은 Fab 절편, F(ab')2 절편, Fv 절편, 및 단일-사슬 Fv 절편으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  32. 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성인 항-CD40 항체로 치료가능한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 방법으로서:
    a) CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 단계; 및
    b) 상기 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형(V/V, V/F 또는 F/F)을 결정하는 단계;
    를 포함하며, 상기 인간 환자가 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 경우, 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환은 항-CD40 항체로 치료가능한 것인 방법.
  33. 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성인 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 치료를 위한 항체 요법을 선택하는 방법으로서:
    a) 리툭시맙(Rituxan®)의 치료에 내성이며, CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하는 단계; 및
    b) 상기 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형(V/V, V/F 또는 F/F)을 결정하는 단계;
    를 포함하며, 상기 인간 환자가 FcγRIIIa-158F에 대한 이종접합 또는 동종접합(유전형 V/F 또는 F/F)인 경우, 항-CD40 항체가 상기 염증 질환 또는 자가면역 질환의 치료를 위하여 선택되는 것인 방법.
  34. 전술한 청구항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 인간 환자는 염증 질환 또는 자가면역 질환에 대한 요법에 내성인 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  35. 제34항에 있어서, 상기 인간 환자는 항-CD20 단클론 항체 요법에 내성인 것을 특징으로 하는 방법.
  36. 제35항에 있어서, 상기 인간 환자는 항-CD20 단클론 항체 요법에 저항성인 것을 특징으로 하는 방법.
  37. 제35항에 있어서, 상기 인간 환자는 항-CD20 단클론 항체 요법에 비반응성인 것을 특징으로 하는 방법.
  38. 제35항 내지 제37항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD20 단클론 항체는 리툭시맙(Rituxin®)인 것을 특징으로 하는 방법.
  39. 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위한 시약을 포함하는, 항-CD40 항체로 치료가능한 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자를 확인하기 위한 키트.
  40. 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기 위한 시약을 포함하는, CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 보유한 인간 환자의 치료를 위한 항체 요법을 선택하기 위한 키트.
  41. 제39항 또는 제40항에 있어서, 10 또는 그 이상인 뉴클레오타이드 길이이며, 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형을 결정하기에 적합한 서열을 보유한 최소한 하나의 프로브를 포함하는 마이크로어레이(microarray)를 포함하는 것을 특징으로 하는 키트.
  42. 제39항 또는 제40항에 있어서, FcγRIIIa의 아미노산 158을 암호화하는 게놈 영역의 폴리머라아제-촉매 증폭시, 프라이머로서 사용하기에 적합한 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 것을 특징으로 하는 것을 특징으로 하는 키트.
  43. 제39항 또는 제40항에 있어서, 인간 환자의 FcγRIIIa-158 유전형 결정에 적합한 하나 또는 그 이상의 제한 효소를 포함하는 키트.
  44. 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 인간 환자에 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 포함하며, 투여 후, 항-CD40 항체가 CD40-발현세포에 의하여 현저하게 내재화되지 않는 방법.
  45. 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 인간 환자에 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량을 투여하는 단계를 포함하며, 투여 후, 항-CD40 항체가 CD40-발현 세포의 표면상에 실질적으로 균일하게 분포된 상태로 있는 방법.
  46. 인간 환자의 CD40-발현 세포와 관련된 염증 질환 또는 자가면역 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 인간 환자에 항-CD40 항체를 투여하는 단계를 포함하며, 투여 후, 항-CD40 항체의 치료적 또는 예방적 유효량이 상기 인간 환자 내의 CD40-발 현 세포의 표면에 제시되는 방법.
  47. 제1항 내지 제31항 또는 제44항 내지 제46항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 방법 또는 용도는 인간 환자의 FcγRIIIa-발현 자연살상(NK) 세포에 의한 CD40-발현 세포의 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)을 야기하는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  48. 제1항 내지 제31항 또는 제44항 내지 제46항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 항체-의존성 세포 세포독성(ADCC)의 분석에서 리툭시맙(Rituxin®)보다 더 강력하며, 이 경우 분석은 관련 항체의 존재하에, 분리된 인간 자연살상(NK) 세포와 함께 CD40-발현 세포 및 CD20-발현 세포를 배양하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  49. 제1항 내지 제31항 또는 제44항 내지 제46항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 전신성 홍반성 루푸스 (SLE), 다발성 경화증, 염증 및 죽상동맥경화증, 이식, 또는 알츠하이머병 모델에서 리툭시맙(Rituxin®)보다 더 강력한 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  50. 제1항 내지 제31항 또는 제44항 내지 제46항 중의 어느 한 항에 있어서, 상 기 항-CD40 항체는 최소한 약 10-6 M 내지 최소한 약 10-12 M의 친화도(KD)로 인간 CD40에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  51. 제1항 내지 제31항 또는 제44항 내지 제46항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 최소한 약 0.5 μM의 친화도(KD)로 인간 FcγRIIIa-158V에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  52. 제1항 내지 제31항 또는 제44항 내지 제46항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 최소한 약 12 μM의 친화도(KD)로 인간 FcγRIIIa-158F에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
  53. 제1항 내지 제31항 또는 제44항 내지 제46항 중의 어느 한 항에 있어서, 상기 항-CD40 항체는 최소한 약 0.5 μM의 친화도(KD)로 인간 FcγRIIIa-158V에 결합하며, 최소한 약 12 μM의 친화도(KD)로 인간 FcγRIIIa-158F에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법 또는 용도.
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Families Citing this family (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE10303974A1 (de) 2003-01-31 2004-08-05 Abbott Gmbh & Co. Kg Amyloid-β(1-42)-Oligomere, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
ES2400660T3 (es) 2005-11-01 2013-04-11 Novartis Ag Usos de anticuerpos anti-CD40
AU2006319358B2 (en) 2005-11-30 2012-01-19 AbbVie Deutschland GmbH & Co. KG Anti-Abeta globulomer antibodies, antigen-binding moieties thereof, corresponding hybridomas, nucleic acids, vectors, host cells, methods of producing said antibodies, compositions comprising said antibodies, uses of said antibodies and methods of using said antibodies
KR101439828B1 (ko) 2005-11-30 2014-09-17 애브비 인코포레이티드 아밀로이드 베타 단백질에 대한 모노클로날 항체 및 이의 용도
US8455626B2 (en) 2006-11-30 2013-06-04 Abbott Laboratories Aβ conformer selective anti-aβ globulomer monoclonal antibodies
WO2008104386A2 (en) 2007-02-27 2008-09-04 Abbott Gmbh & Co. Kg Method for the treatment of amyloidoses
EP2077281A1 (en) * 2008-01-02 2009-07-08 Bergen Teknologioverforing AS Anti-CD20 antibodies or fragments thereof for the treatment of chronic fatigue syndrome
EP2373339B1 (en) 2009-01-06 2017-04-19 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) A b cell depleting agent for the treatment of atherosclerosis
US9752191B2 (en) 2009-07-09 2017-09-05 The Scripps Research Institute Gene expression profiles associated with chronic allograft nephropathy
CA2796339C (en) 2010-04-15 2020-03-31 Abbott Laboratories Amyloid-beta binding proteins
RU2509573C2 (ru) * 2010-07-27 2014-03-20 Олег Ильич Эпштейн Лекарственное средство для лечения рассеянного склероза и способ лечения рассеянного склероза
EP3533803B1 (en) 2010-08-14 2021-10-27 AbbVie Inc. Anti-amyloid-beta antibodies
AR083847A1 (es) 2010-11-15 2013-03-27 Novartis Ag Variantes de fc (fragmento constante) silenciosas de los anticuerpos anti-cd40
WO2012075111A1 (en) 2010-11-30 2012-06-07 Novartis Ag Uses of anti-cd40 antibodies in combination therapy for b cell-related cancers
PT2683406T (pt) 2011-03-11 2019-07-08 Beth Israel Deaconess Medical Ct Inc Anticorpos anti-cd40 e utilização dos mesmos
EP3508500A1 (en) 2011-04-29 2019-07-10 Apexigen, Inc. Anti-cd40 antibodies and methods of use
WO2012174535A1 (en) * 2011-06-17 2012-12-20 Constitution Medical, Inc. Solutions for histoprocessing of biological samples
US20140004131A1 (en) 2012-05-04 2014-01-02 Novartis Ag Antibody formulation
CN104918957B (zh) 2012-10-30 2018-11-16 埃派斯进有限公司 抗-cd40抗体及其使用方法
JP6903432B2 (ja) 2014-03-12 2021-07-14 イエダ リサーチ アンド ディベロップメント カンパニー リミテッド Ｃｎｓの疾患および傷害を処置するために全身性調節性ｔ細胞のレベルまたは活性を低下させること
US10618963B2 (en) 2014-03-12 2020-04-14 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
US10519237B2 (en) 2014-03-12 2019-12-31 Yeda Research And Development Co. Ltd Reducing systemic regulatory T cell levels or activity for treatment of disease and injury of the CNS
CN108025068A (zh) * 2014-03-12 2018-05-11 耶达研究与开发有限公司 降低***性调节性t细胞水平或活性来治疗cns的疾病和损伤
US10443100B2 (en) 2014-05-22 2019-10-15 The Scripps Research Institute Gene expression profiles associated with sub-clinical kidney transplant rejection
US11104951B2 (en) 2014-05-22 2021-08-31 The Scripps Research Institute Molecular signatures for distinguishing liver transplant rejections or injuries
US9888673B2 (en) 2014-12-10 2018-02-13 Regents Of The University Of Minnesota Genetically modified cells, tissues, and organs for treating disease
HUE048284T2 (hu) 2015-05-29 2020-07-28 Abbvie Inc Anti-CD40 antitestek és alkalmazásuk
CN116063481A (zh) 2015-09-04 2023-05-05 普里玛托普医疗股份有限公司 人源化抗-cd40抗体及其用途
CN109069622A (zh) * 2015-09-30 2018-12-21 詹森生物科技公司 特异性结合人cd40的拮抗性抗体和使用方法
TWI784957B (zh) 2016-06-20 2022-12-01 英商克馬伯有限公司 免疫細胞介素
CN111344304B (zh) * 2017-06-01 2023-09-01 Pb免疫治疗公司 新型抗cd40抗体及其用途
EP3806848A2 (en) 2018-06-15 2021-04-21 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Increasing immune activity through modulation of postcellular signaling factors
MA55805A (fr) 2019-05-03 2022-03-09 Flagship Pioneering Innovations V Inc Métodes de modulation de l'activité immunitaire
JP2023509359A (ja) 2019-12-17 2023-03-08 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド 鉄依存性細胞分解の誘導物質との併用抗癌療法
JP2023532339A (ja) 2020-06-29 2023-07-27 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド サノトランスミッションを促進するためにエンジニアリングされたウイルス及び癌の処置におけるそれらの使用
JP2024512669A (ja) 2021-03-31 2024-03-19 フラグシップ パイオニアリング イノベーションズ ブイ，インコーポレーテッド タノトランスミッションポリペプチド及び癌の処置におけるそれらの使用
WO2023278641A1 (en) 2021-06-29 2023-01-05 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Immune cells engineered to promote thanotransmission and uses thereof
WO2024077191A1 (en) 2022-10-05 2024-04-11 Flagship Pioneering Innovations V, Inc. Nucleic acid molecules encoding trif and additionalpolypeptides and their use in treating cancer

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5874082A (en) * 1992-07-09 1999-02-23 Chiron Corporation Humanized anti-CD40 monoclonal antibodies and fragments capable of blocking B cell proliferation
KR960704576A (ko) * 1993-10-01 1996-10-09 크리스토퍼 엘. 와이트 CD40에 대한 항체(Antibodies to CD40)
US6946129B1 (en) * 1999-06-08 2005-09-20 Seattle Genetics, Inc. Recombinant anti-CD40 antibody and uses thereof
US7063845B2 (en) * 2000-04-28 2006-06-20 Gemini Science, Inc. Human anti-CD40 antibodies
DK1436427T3 (da) * 2001-10-19 2008-12-08 Chru Tours Fremgangsmåde og sammensætning til at vurdere antistofbehandlingsrespons
EP2243491A1 (en) * 2003-11-04 2010-10-27 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Use of antagonist anti-CD40 monoclonal antibodies for treatment of chronic lymphocytic leukemia
PL1684805T3 (pl) * 2003-11-04 2010-12-31 Novartis Vaccines & Diagnostics Inc Sposoby leczenia szpiczaka mnogiego z zastosowaniem antagonistycznych monoklonalnych przeciwciał przeciwko CD40
PL1680141T3 (pl) * 2003-11-04 2011-04-29 Novartis Vaccines & Diagnostics Inc Sposoby leczenia guzów litych wykazujących ekspresję antygenu powierzchniowego CD40
JP4810431B2 (ja) * 2003-11-04 2011-11-09 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド Ｂ細胞に関連する癌に対する治療方法
ATE447412T1 (de) * 2003-11-04 2009-11-15 Novartis Vaccines & Diagnostic Antagonist-anti-cd40-monoklonale antikörper und anwendungsverfahren
US20070231813A1 (en) * 2004-06-01 2007-10-04 Centre Hospitalier Regional Et Universitaire De Tours Fcgr3a Gebotype and Methods for Evaluating Treatment Response to Non-Depleting Antibodies
US20080057070A1 (en) * 2004-11-04 2008-03-06 Chiron Corporation Antagonist Anti-Cd40 Monoclonal Antibodies and Methods for Their Use

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