KR20080053514A - Ｐ３８ 키나제 억제제로서의 피라졸-이소퀴놀린 우레아유도체 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 하기 화학식 I의 키나제 억제제 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다:
<화학식 I>
Figure 112008030013256-PCT00049
상기 식에서, R1, R2 및 X는 본원에 기재한 바와 같다.
키나제 억제제, 사이토킨 억제제, 감수성 신생물, 전이, 류마티스성 관절염, 인터루킨-1β, 종양 괴사 인자 α

Description

Ｐ３８ 키나제 억제제로서의 피라졸-이소퀴놀린 우레아 유도체 {PYRAZOLE-ISOQUINOLINE UREA DERIVATIVES AS P38 KINASE INHIBITORS}
p38 키나제는 세린/트레오닌 키나제 상과에 속하는 유사분열촉진인자-활성화 단백질 (MAP) 키나제이다. 상기 키나제는 열, UV광 및 삼투 스트레스 등과 같은 세포외 스트레스 뿐만이 아니라 지다당류 등과 같은 염증성 자극에 의해서도 활성화된다. 활성화되면, p38 키나제는 프로-염증성(pro-inflammatory) 사이토킨인 종양 괴사 인자 α (TNFα) 및 인터루킨-1β (IL-1β)의 생합성을 조절하는 세포내 단백질 기질을 인산화한다. 이들 사이토킨은 수많은 만성 염증 장애 ([Lee, et al., Ann. N.Y. Acad. Sci., 696, 149-170 (1993)], [Muller-Ladner, Curr. Opin. Rheumatol., 8, 210-220 (1996)]), 심혈관 및 중추 신경계 장애 [Salituro, et al., Current Medicinal Chemistry, 6, 807-823 (1999)] 및 자가면역 장애 [Pargellis, et al., Nature Structural Biology, 9(4), 268-272 (2002)]의 병리와 관련이 있다. 또한, 유사분열촉진인자-활성화 단백질 키나제-단백질 키나제 2 (또는 pMAPKAPK2)의 인산화 형태는 p38 MAPK 경로에서의 키나제이기도 하며, p38 MAPK에 의해 직접 활성화될 수 있다. MAPKAPK2의 마우스 넉아웃 연구는 사이토킨 생성 감소를 보여주었고, 이는 MAPKAPK2가 염증 반응의 핵심 조절자일 수 있으며 이것이 소염 요법에 있어서의 잠재적 표적일 수도 있음을 시사한다 (WO 2005120509).
수많은 우레아 화합물 (예를 들어 WO 9923091, WO 01012188, WO 04004720, WO 04037789, WO 99/32111, US 2004/0058961, EP 1609789, WO 03072569 및 WO 0043384)이 p38 키나제 억제제 또는 사이토킨 억제제로서 확인되었다. p38 키나제 억제제 또는 사이토킨 억제제는 고가로 생성될 수 있고, 생체이용률 및 흡수면에서의 문제가 있을 수 있어서 생체내 효과 및 치료 용도를 제한한다. 따라서, 신규한 소분자(small molecule) 사이토킨 저해 약물, 즉 개선된 효력 및 더 우수한 생체이용률로 p38 키나제를 억제할 수 있는 화합물이 요구된다.
본 발명은 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태의 치료에 유용한 p38 키나제의 신규 억제제를 제공한다.
발명의 요약
본 발명은 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다:
Figure 112008030013256-PCT00001
상기 식에서,
X는
Figure 112008030013256-PCT00002
로 구성된 군에서 선택되고,
R1은 C1-C4 알킬; C1-C4 알콕시, 메틸 및 트리플루오로메틸로 구성된 군에서 선택된 1개 또는 2개의 치환체로 임의로 치환된 C3-C4 시클로알킬; 또는 C1-C4 알킬할로이고,
R2는 C1-C4 알킬로 임의로 치환된 페닐; 또는 C1-C4 알킬로 임의로 치환된 피리디닐이며,
R3은 아미노; C1-C4 알킬; C1-C4 알콕시; C1-C4 알킬할로; 메틸, 트리플루오로메틸 또는 할로로부터 선택된 치환체로 임의로 치환된 C3-C4 시클로알킬; 또는 할로, C1-C4 알킬 및 C1-C4 알콕시로 구성된 군에서 선택된 제1 치환체로 임의로 치환되고 임의로는 할로로부터 선택된 제2 치환체로 추가로 치환된 페닐 또는 티에닐이다.
본 발명은 또한 p38 키나제를 억제하는 처치가 필요한 포유동물에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 p38 키나제를 억제하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 종양 괴사 인자 α (TNFα)의 생성을 저해하는 처치가 필요한 포유동물에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 종양 괴사 인자 α (TNFα)의 생성을 저해하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 인터루킨-1β (IL-1β)의 생성을 저해하는 처치가 필요한 포유동물에게 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 인터루킨-1β (IL-1β)의 생성을 저해하는 방법을 제공한다.
본 발명은 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태의 치료가 필요한 포유동물에게 사이토킨-저해량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태를 치료하는 방법을 추가로 제공한다.
본 발명은 또한 감수성 신생물의 성장을 억제하는 처치가 필요한 포유동물에게 p38 억제량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 감수성 신생물의 성장을 억제하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 전이를 억제하는 처치가 필요한 포유동물에게 p38 억제량의 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 전이를 억제하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 류마티스성 관절염의 치료가 필요한 포유동물에게 p38 억제량의 화학식 I의 화합물 그의 제약상 허용가능한 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 류마티스성 관절염을 치료하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 제제를 제공한다.
본 발명은 또한 p38 키나제 억제용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 p38 키나제를 억제하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, p38 키나제의 억제용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 종양 괴사 인자 α (TNFα) 생성의 저해용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 종양 괴사 인자 α (TNFα)의 생성을 저해하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 종양 괴사 인자 α (TNFα) 생성의 저해용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 인터루킨-1β (IL-1β) 생성의 저해용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 인터루킨-1β (IL-1β)의 생성을 저해하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 인터루킨-1β (IL-1β) 생성의 저해용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태 치료용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태를 치료하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 과도한 사이토킨 생성으로 인한 상태의 치료용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 감수성 신생물의 성장 억제용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 감수성 신생물의 성장을 억제하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 감수성 신생물의 성장 억제용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 전이 억제용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 전이를 억제하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 전이 억제용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한 류마티스성 관절염 치료용 약제의 제조에 있어서 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염의 용도를 제공한다. 추가로, 본 발명은 포유동물에서 류마티스성 관절염을 치료하는데 사용하기 위한 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제공한다. 추가로, 본 발명은 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염 및 1종 이상의 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는, 류마티스성 관절염의 치료용으로 제작된 제약 조성물을 제공한다.
용어 "p38 키나제"는 p38α 및/또는 p38β 키나제 이소형을 의미한다.
용어 "TNFα (IL-1β, 사이토킨)의 생성 저해"는 포유동물에서 TNFα, IL-1β 또는 또다른 사이토킨의 과도한 생체내 수준을 정상 수준 또는 정상에 준하는 수준으로 감소시키는 것을 의미한다. 이것은, 대식세포를 비롯한 모든 세포에 의해 TNFα, IL-1β 또는 또다른 사이토킨이 생체내 방출되는 것을 억제하거나, 포유동물에서 TNFα, IL-1β 또는 또다른 사이토킨의 과도한 생체내 수준을 정상 수준 또는 정상에 준하는 수준으로 게놈 수준에서 하향 조절하거나, TNFα, IL-1β 또는 또다른 사이토킨의 합성을 번역후 사건으로서 억제하거나, 또는 TNFα, IL-1β 또는 또다른 사이토킨을 번역 수준에서 하향 조절하여 달성될 수 있다.
당업자라면 본 발명의 화합물이 산 부가 염을 형성할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 모든 경우에서, 모든 화합물의 제약상 허용가능한 염은 해당 화합물의 명칭에 포함된다. 본 발명의 화합물은 아민이기 때문에 수많은 무기산 및 유기산 중 임의의 것과도 반응하여 제약상 허용가능한 산 부가 염을 형성한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "제약상 허용가능한 염"은 살아있는 유기체에게 실질적으로 비독성인 화학식 I의 화합물의 염을 지칭한다. 전형적인 제약상 허용가능한 염은 본 발명의 화합물과 제약상 허용가능한 유기산 또는 무기산과의 반응으로 제조된 그러한 염을 포함한다. 이러한 염은 당업자에게 공지된 문헌 [Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2-19 (1977)]에 기재된 제약상 허용가능한 염을 포함한다. 화학식 I의 화합물의 메실레이트 염이 가장 바람직하다.
화학식 I의 화합물은 p38 키나제의 억제제이다. 따라서, 본 발명은 또한 p38 키나제를 억제하는 처치가 필요한 포유동물에게 p38 키나제-억제량의 화학식 I의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 p38 키나제를 억제하는 방법을 제공한다. 화학식 I의 화합물의 투여로 치료될 포유동물은 인간인 것이 바람직하다.
본 발명의 화합물은 p38 키나제의 억제제로서 프로-염증성 사이토킨인 종양 괴사 인자 α (TNFα) 및 인터루킨-1β (IL-1β)의 생성 저해에 유용하기 때문에, 과도한 사이토킨 생성으로 인한 장애의 치료에도 유용하다. 따라서, 본 발명의 화합물은 습진, 아토피성 피부염, 류마티스성 관절염, 골관절염, 염증성 장 질환 및 독소 쇼크 증후군을 비롯한 염증 장애의 치료에 유용하다고 여겨진다. 본 발명의 화합물은 또한 심혈관 장애, 예를 들어 급성 심근 경색, 만성 심부전, 아테롬성동맥경화증, 바이러스성 심근염, 심장 동종이계이식 거부반응 및 패혈증-관련 심장 기능부전의 치료에도 유용하다고 여겨진다. 추가로, 본 발명의 화합물은 중추 신경계 장애, 예를 들어 수막염구균성 수막염, 알쯔하이머병, 파킨슨병 및 다발성 경화증의 치료에도 유용하다고 여겨진다. WO 99/32111, WO 9923091, WO 04004720, WO 03072569를 참조한다.
대부분의 충실성 종양은 악성 세포 및 간질 세포, 예를 들어 내피 세포의 증식을 통해 질량이 증가한다. 종양이 직경 2 내지 3 mm 초과로 성장하기 위해서는 혈관형성(angiogenesis)으로 알려진 과정을 통해 맥관구조를 형성해야 한다. 안지오스타틴 및 엔도스타틴에 의한 종양-유도된 혈관형성의 저해가 항-종양 활성을 일으킨다는 보고가 있었다 [O'Reilly, et al., Cell, 88, 277-285 (1997)]. 선택적인 p38 키나제 억제제인 SB22025는 혈관형성을 억제하는 것으로 나타났다 [J.R. Jackson, et al., J. Pharmacol. Exp. Therapeutics, 284, 687 (1998)]. 혈관형성은 대부분의 충실성 종양의 질량 증대에 있어서 중대한 과정이기 때문에, 이 과정을 억제하는 새로운 p38 키나제 억제제의 개발은 항-종양 요법에 있어서의 유망한 접근법을 대표한다. 항-종양 요법에 대한 이러한 접근법은 통상적인 화학요법의 독성 부작용 또는 약물 내성-유발 특성이 없을 수 있다 [Judah Folkman, Endogenous Inhibitors of Angiogenesis, The Harvey Lectures, Series 92, pages 65-82, Wiley-Liss Inc., (1998)].
따라서, 본 발명의 화합물은 p38 키나제의 억제제로서 감수성 신생물의 성장을 억제하는데에도 유용하다 [Schultz, R. M. Potential of p38 MAP kinase inhibitors in the treatment of cancer. In:E. Jucker (ed.), Progress in Drug Research, 60, 59-92, (2003)]. 감수성 신생물은 그의 생존, 성장 또는 전이를 p38 키나제에 의존하는 신생물로 정의된다. 감수성 신생물은 뇌, 요생식로, 림프계, 위, 후두 및 폐의 종양을 포함한다 (미국 특허 제5,717,100호). 본 명세서에서 사용된 바와 같이, 용어 "감수성 신생물"은 비-소세포 폐 암종 ([A. Greenberg, et al., Am. J. Respir. Cell Mol. Biol., 26, 558 (2002)), 유방 암종 [J. Chen, et al., J. Biol. Chem., 276, 47901 (2001)], [B. Salh, et al., Int. J. Cancer, 98, 148 (2002)] 및 [S. Xiong, et al., Cancer Res., 61, 1727 (2001)]), 위 암종 [Y.D. Jung, et al., Proc. Am. Assoc. Cancer Res., 43, 9 (2002)], 직장결장 암종 [S. Xiong, et al., Cancer Res., 61, 1727 (2001)] 및 악성 흑색종 [C. Denkert, et al., Clin. Exp. Metastasis, 19, 79 (2002)]을 비롯한 인간의 암을 포함하는 것이 바람직하다.
TNFα의 저해로 혈관형성을 억제하는 것은 또한 전이의 억제 또는 예방에도 유용하다고 교시된 바 있다 (미국 특허 제6,414,150호, 미국 특허 제6,335,336호). 추가로, TNFα의 저해는 모든 암 환자의 약 절반이 경험하는 소모 증후군(wasting syndrome)인 악액질의 치료 및 예방을 위해서도 사용된다 [T. Yoneda, et al., J. Clin. Invest., 87, 977 (1991)].
추가로, p38 키나제의 억제는 인플루엔자 [K. Kujime, et al., J. Immunology., 164, 3222-3228 (2000)], 리노바이러스 [S. Griego, et al., J. Immunology, 165, 5211-5220 (2000)] 및 HIV [L. Shapiro, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95, 7422-7426 (1998)]와 같은 특정 바이러스 상태의 치료에 효과적일 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C1-C4 알킬"은 1개 내지 4개 탄소 원자의 선형 또는 분지형의 1가 포화 지방족 쇄를 지칭하며, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸 및 tert-부틸 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C1-C4 알콕시"는 산소 원자에 부착된 1개 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 선형 또는 분지형 알킬쇄를 지칭한다. 전형적인 C1-C4 알콕시기는 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 이소프로폭시, 부톡시, tert-부톡시 등을 포함한다. 용어 "C1-C4 알콕시"는 그의 정의에 용어 "C1-C3 알콕시"를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "할로"는 본원에서 달리 명시하지 않는다면 염소, 브롬, 요오드 또는 불소 원자를 지칭한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C1-C4 알킬할로"는 최대 5개까지의 할로 원자로 치환된 C1-C4 알킬을 지칭한다. 전형적인 C1-C4 알킬할로기는 메틸할로, 트리플루오로메틸, 에틸할로, 비스플루오로메틸 에틸, 프로필할로, 이소프로필할로, 부틸할로, tert-부틸할로 등을 포함한다. 용어 "C1-C4 알킬할로"는 그의 정의에 용어 "C1-C3 알킬할로"를 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "C3-C4 시클로알킬"은 탄소 및 수소 원자를 포함하는 비-방향족 고리를 의미하고, 시클로프로필 및 시클로부틸을 포함한다.
본원에서 사용된 바와 같이, 용어 "1-메틸-1-시클로프로필"은 하기하는 잔기를 지칭한다:
Figure 112008030013256-PCT00003
.
특정 부류의 화학식 I의 화합물은 바람직한 p38 키나제 억제제이다. 하기 단락은 이러한 바람직한 부류를 기재한다:
a) X가
Figure 112008030013256-PCT00004
이다.
b) R1이 메틸, 트리플루오로메틸 또는 할로로부터 선택된 치환체로 임의로 치환된 C3-C4 시클로알킬이다.
c) R1이 1-메틸-1-시클로프로필이다.
d) R1이 2-플루오로-1,1-디메틸-에틸이다.
e) R1이 2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸이다.
f) R2가 메틸로 임의로 치환된 페닐이거나, 또는 메틸로 임의로 치환된 피리디닐이다.
g) R2가 4-톨릴이다.
h) R3이 C1-C4 알킬로 임의로 치환된 C3-C4 시클로알킬, 또는 메틸로 임의로 치환된 티에닐, 또는 할로, C1-C4 알킬 또는 C1-C4 알콕시로 구성된 군에서 선택된 제1 치환체로 임의로 치환되고 임의로는 할로 치환체로 추가로 치환된 페닐이다.
i) 화학식 I의 화합물이 유리 염기이다.
j) 화학식 I의 화합물이 염이다.
k) 화학식 I의 화합물이 메실레이트 염이다.
본 발명의 바람직한 실시양태는 단락 a) 내지 단락 k)의 모든 조합을 포함한다. 다른 바람직한 화학식 I의 화합물은, X가
Figure 112008030013256-PCT00005
이고, R1이 단락 c)에 기재된 바와 같으며, R2가 단락 g)에 기재된 바와 같은 화합물이다.
X가
Figure 112008030013256-PCT00006
이고, R1이 단락 c)에 기재된 바와 같으며, R2가 단락 g)에 기재된 바와 같으며, R3이 단락 h)에 기재된 바와 같은 화합물도 바람직하다.
X가
Figure 112008030013256-PCT00007
이고, R2가 4-위치에서 C1-C4 알킬로 치환된 페닐인 화합물이 특히 바람직하다.
X가
Figure 112008030013256-PCT00008
인 화합물이 가장 바람직하다.
하기 화합물 역시 가장 특별하게 바람직하다:
Figure 112008030013256-PCT00009
: 1-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아.
본 발명의 화합물은 다양한 절차로 제조될 수 있으며, 이러한 절차 중 일부는 하기 반응식에 예시되어 있다. 당업자는, 하기 반응식의 개개의 단계가 화학식 I의 화합물이 제공되도록 변형될 수 있다는 것을 알 것이다. 화학식 I의 화합물 생성에 요구되는 단계들의 특별한 순서는 합성되는 특정 화합물, 출발 화합물, 및 치환된 잔기의 상대적 불안정성(lability)에 따라 달라진다. 일부의 치환체는 명확성을 위해 하기 반응식에서 생략되어 있으며, 어떠한 방식으로도 반응식의 교시내용을 제한하려는 것이 아니다.
화학식 I의 화합물 및 그의 중간체는 하기 반응식에 예시된 것과 같이 제조될 수 있으며, 여기서 R1, R2 및 X는 앞서 정의한 바와 같다:
Figure 112008030013256-PCT00010
아민 (a)를 적절한 이소시아네이트 또는 카르바메이트, 예컨대 피라졸릴-2,2,2-트리클로로에틸 카르바메이트와 반응시켜 화학식 I의 화합물을 제공한다. 예를 들어, 적합한 용매, 예컨대 아세토니트릴 또는 디메틸술폭시드 (DMSO) 중 아민 (1 당량), 트리클로로에틸 카르바메이트 (1 당량) 및 적합한 염기, 예컨대 디이소프로필에틸아민 (2 당량) 또는 탄산칼륨의 용액을 가열한다. 이어서, 원하는 화합물을 단리할 수 있으며, 필요하고 원한다면 당업계 공지의 기술, 예컨대 크로마토그래피를 이용하여 정제하여 화학식 I의 화합물을 제공한다.
필요한 아민은 하기 반응식 2에서 예시되는 바와 같이 제조되며, 여기서 X는 앞서 정의한 바와 같다:
Figure 112008030013256-PCT00011
니트로 잔기 (b)는 표준 환원 조건하에서, 예를 들어 적합한 용매, 예컨대 저급 알칸올 또는 에틸 아세테이트 중에서 팔라듐 촉매의 존재하에 수소를 사용하여 환원되어 상응하는 아민 (a)을 제공한다. 이러한 환원 단계는 공지되어 있으며 당업계에 알려져 있다. 문헌 [Larock, R., "Comprehensive Organic Transformations," 412, VCH Publishing, Inc., New York, 1989]을 참조한다.
필요한 니트로 화합물은 하기 반응식 3에서 예시되는 바와 같이 제조되며, 여기서 R3은 앞서 정의한 바와 같고 X'는 C(O)R3 또는 적합한 보호기 PG이다:
Figure 112008030013256-PCT00012
적합한 유기 용매, 예컨대 THF 중 1-클로로-4-니트로-이소퀴놀린 (e)를 N-보호된 (PG) 히드록시피페리딘 및 수소화나트륨과 반응시켜서 상응하는 치환된 피페리딘 b(i)을 제공한다. 필요하거나 원한다면, 적합한 아미노 보호기 "Pg", 예컨대 tert-부톡시카르보닐 (BOC) 잔기가 이용될 수 있다. 이들 기를 도입하는 기술은 당업자에게 공지되어 있다. 당업자는 질소-보호기가 본 발명의 화합물 합성 중 임의의 편리한 시점에서 제거될 수 있다는 것을 알 것이다. 아미노-보호기를 제거하는 방법은 당업계에 공지되어 있다 (예를 들어 문헌 [T. W. Greene, "Protective Groups in Organic Synthesis," John Wiley and Sons, New York, N.Y., 1999] 참조).
별법으로, 1-클로로-4-니트로-이소퀴놀린 (e)을 극성 용매, 예컨대 아세토니트릴 중 탄산칼륨 중의 N-BOC 보호된 피페라진과 반응시켜서 상응하는 치환된 피페라진 b(ii)를 제공한다.
필요한 피라졸릴 카르바메이트는 하기 반응식에서와 같이 제조될 수 있으며, 여기서 R1 및 R2는 앞서 정의한 바와 같다:
Figure 112008030013256-PCT00013
3-아미노피라졸 (m)은 당업계에 공지된 조건을 통해 형성된다. 문헌 [Larock, R., "Comprehensive Organic Transformations," 79, VCH Publishing, Inc., New York, 1989]을 참조한다. 예를 들어, 적합한 유기 용매, 예컨대 에탄올 중 α-시아노케톤 (j) 및 적합한 히드라진 또는 히드라진 염 (k)을 승온에서 반응시키고, 표준 기술, 예컨대 실리카겔 컬럼상 크로마토그래피를 이용하여 정제할 수 있다.
2,2,2-트리클로로에틸 클로로포르메이트 (n)를 적합한 용매, 예컨대 THF 중에서 적절하게 치환된 3-아미노피라졸 (m) 및 염기, 예컨대 탄산나트륨과 반응시켜서 상응하는 2,2,2-트리클로로에틸 카르바메이트 (o)를 생성한다. 당업자는 상응하는 카르바메이트가 3-아미노피라졸을 다른 활성 탄산염과 반응시켜 제조될 수 있다는 것을 알 것이다.
화학식 I(i)의 화합물은 하기 반응식 5에서와 같이 제조될 수 있으며, 여기서 R1, R2, R3 및 PG는 앞서 정의한 바와 같다:
Figure 112008030013256-PCT00014
화학식 (f)의 화합물을 당업계에 공지된 조건하에 탈보호시킨다. 예를 들어, 보호기가 tert-부톡시 카르보닐인 경우에는 화학식 (f)의 화합물을 적합한 유기 용매 또는 용매 혼합물, 예컨대 디클로로메탄 중에 용해하고, 예를 들어 디옥산 중 염산 또는 트리플루오로아세트산과 같은 산으로 처리한다. N-보호된-피페리딘 치환된 우레아 (f)의 탈보호는 치환된 피페리딘 (g)를 제공하고, 이것을 유기산 및 유기 아민에 대한 표준 커플링 조건하에 커플링제, 예컨대 N-(3-디메틸아미노프로필)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (EDCI), 촉매량의 4-디메틸아미노피리딘 (DMAP) 및 1-히드록시벤조트리아졸 (HOBt)의 존재하에 치환된 카르복실산과 반응시켜 화학식 I(i)를 제공한다. 당업자는 화학식 I(i)의 예가 상이한 N-보호기, 예컨대 포르밀을 포함하는 다른 보호된 피페리딘으로 시작하여 제조될 수 있고, 이 경우에는 중간체 (g)를 형성하기 위해서 다른 탈보호 절차가 필요할 수 있다는 것을 알 것이다.
당업자는 화학식 I의 화합물의 모든 치환체가 화합물 합성에 이용되는 특정 반응 조건을 허용하는 것은 아님을 알 것이다. 이들 잔기는 합성 중 편리한 시점에 도입될 수도 있고, 또는 필요하거나 또는 원한다면 보호된 후에 탈보호될 수도 있다. 당업자는 보호기가 본 발명의 화합물 합성 중 임의의 편리한 시점에서 제거 될 수 있다는 것을 알 것이다. 질소 및 산소 보호기를 도입하고 제거하는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어 문헌 [Greene and Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sons, New York, (1999)]을 참조한다. 추가로, 당업자는 많은 상황에서 잔기가 도입되는 순서는 중요하지 않다는 것을 알 것이다. 화학식 I의 화합물 생성에 요구되는 단계들의 특별한 순서는 합성되는 특정 화합물, 출발 화합물, 및 치환된 잔기의 상대적 불안정성에 따라 달라진다.
하기하는 실시예 및 검정에 사용된 약어, 부호 및 용어는 다음과 같은 의미를 갖는다. AcOH = 아세트산, DCC = 디시클로헥실카르보디이미드, DIEA = N,N-디-이소프로필에틸아민, DMSO = 디메틸술폭시드, DMF = N,N-디메틸포름아미드, h = 시간(들), HOBt = 1-히드록시벤조트리아졸, LDA = 리튬 디이소프로필아미드, EDCI = 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드, EtOAc = 에틸 아세테이트, EtOH = 에탄올, MeOH = 메탄올, NaBH(OAc)3 = 트리아세톡시수소화붕소나트륨, TBAF = 테트라부틸 암모늄 플루오라이드, Tf2O = 트리플루오로메탄술폰산 무수물, THF = 테트라히드로푸란.
제조예 1
1- 트리플루오로메틸 - 시클로프로판카르복실산 메틸 에스테르
Figure 112008030013256-PCT00015
메탄올-헥산 (2.5 mL-22.5 mL) 중 1-트리플루오로메틸시클로프로판-1-카르복실산 (3.65 g, 23.7 mmol)의 용액에 헥산 중 2 M 디아조메탄 용액 (14.2 mL, 28.45 mmol)을 첨가하였다. 용매를 감압하에 제거하고 잔류물을 증류시켜 황색 오일을 수득하였다 (2.93 g, 73％ 수율).
제조예 2
3-(1- 메톡시 - 시클로프로필 )-3-옥소- 프로피오니트릴
Figure 112008030013256-PCT00016
THF 중 2 M LDA의 용액 (29.1 mL, 58.3 mmol)을 THF (30 mL) 중 1-메톡시-시클로프로판카르복실산 메틸 에스테르 (WO 2005/014577) (3.45 g, 26.5 mmol) 및 아세토니트릴 (2.17 g mL, 53.0 mmol)의 드라이아이스-아세톤 냉각된 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 후에 22℃에서 0.5 시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시켜 갈색 고체를 수득하였다. 여과하여 헥산으로 세척하였다. 2 N 염산을 첨가하고, 디에틸 에테르 (각각 50 mL씩)로 3회 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시켰다. 용매를 제거하여 적색 오일을 수득하였다 (3.55 g, 96％ 수율, ES+ (m/z) 140.1 [M+H]).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
제조예 화합물
제조예 3 4,4,5,5,5-펜타플루오로-3-옥소-펜탄니트릴
제조예 4 3-옥소-3-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-프로피오니트릴
제조예 5
3-히드록시-2- 히드록시메틸 -2- 메틸 -프로피온산 메틸 에스테르
Figure 112008030013256-PCT00017
MeOH (1 L, HPLC 등급 용매) 중 3-히드록시-2-히드록시메틸-2-메틸-프로피온산 (100 g)의 현탁액에 H2SO4 (4.5 g)를 첨가하고, 실온에서 약 70시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고 잔류물을 EtOAc (1 L)와 H2O (100 mL) 사이에 분배시켰다. 수성 층을 EtOAc로 재추출하고, 합한 유기 분획물을 MgSO4상에서 건조시켰다. 여과하고 감압하에 농축시켰다. 조 혼합물은 추가의 정제 없이 사용할 수 있다.
Figure 112008030013256-PCT00018
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
제조예 화합물
제조예 6 3,3-비스-히드록시메틸-펜탄산 에틸 에스테르
제조예 7
3-히드록시-2,2-디메틸-프로피온산 벤질 에스테르
수산화칼륨 (486.7 mmol, 32.1 g)을 DMF 300 mL 중 2,3-디히드록시-2-메틸-프로피온산 (423.2 mmol, 50 g)의 용액에 첨가하였다. 1시간 동안 100℃에서 교반하였다. 이어서, 브롬화벤질 (584.04 mmol, 69.46 mL)을 첨가하고, 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 냉각시키고 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기 층을 물로 세척하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 여러회 세척하였다. 유기 층을 합하여 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켰다.
Figure 112008030013256-PCT00019
제조예 8
5- 펜타플루오로에틸 -2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3- 일아민
Figure 112008030013256-PCT00020
에탄올 (20 mL) 중 4,4,5,5,5-펜타플루오로-3-옥소-펜탄니트릴 (4 g, 21.4 mmol) 및 p-톨릴-히드라진 (10 g, 64.1 mmol)의 혼합물을 밀폐된 튜브 장치에서 95℃로 15시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후에 용매를 감압하에 제거하여 갈색 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 에틸 아세테이트 및 헥산으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물을 수득하였다 (3.24 g, 52％ 수율, ES+ (m/z) 292.1 [M+H]).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
제조예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z
제조예 9 2-p-톨릴-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H- 피라졸-3-일아민 282.3 [M+H]
제조예 10
5-(1- 플루오로메틸 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3- 일아민
아세토니트릴 22 mL를 함유하는 물 274 mL 중 1-플루오로-시클로부탄카르복 실산 에틸 에스테르 (1.6 g, 8 mmol)의 용액에 AgF (4.5 당량, 4.56 g)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 밀폐된 튜브 중에서 80℃에서 20시간 동안 가열하면서 격렬하게 교반하였다. 혼합물이 냉각되도록 하고 셀라이트(Celite)를 통해 여과하였다. 용매를 감압하에 제거하여 1-플루오로메틸-시클로프로판카르복실산 에틸 에스테르 화합물을 오일로서 수득하였다 (0.81 g, 61％ 수율). ES+ (m/z) 147.1 [M+1].
i-Pr2NH (1.7 mL, 2.2 당량, 12.1 mmol) 및 n-BuLi (헥산 중 1.6 M, 7.5 mL, 2.2 당량, 12.1 mmol)를 THF 12 mL 중에서 -78℃에서 30분 동안 N2하에 교반한 후에 THF 7 mL 중 1-플루오로메틸-시클로프로판카르복실산 에틸 에스테르 (0.81 g, 5.5 mmol)의 용액을 상기 LDA 용액에 첨가하였다. 교반하고, 상기 혼합물이 -78℃에서 실온으로 가온되도록 한 후에 실온에서 5시간 동안 교반하였다. NH4Cl 포화 수용액 10 mL를 첨가하였다. AcOEt를 첨가하여 유기 층을 분리하고, 염화나트륨 포화 수용액으로 세척하여 Na2SO4상에서 건조시키고 용매를 제거하여 갈색 오일을 수득하였다 (0.42 g, 54％ 수율). 화합물을 EtOH 10 mL 중에 용해하고, p-톨릴히드라진 (0.47 g, 1 당량, 3 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 밀폐된 튜브 중에서 90℃에서 밤새 가열하였다. 이어서, 상기 혼합물이 냉각되도록 하고, 용매를 제거하여 잔류물을 수득하였다. 크로마토그래피 (헥산/AcOEt, 15％→80％)로 정제하여 표제 화합물을 오일로서 수득하였다 (0.336 g, 45％ 수율). ES+ (m/z): 246.1 [M+1].
제조예 11
5-(1- 메톡시 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3- 일아민
Figure 112008030013256-PCT00021
에탄올 (50 mL) 중 3-(1-메톡시-시클로프로필)-3-옥소-프로피오니트릴 (제조예 2, 3.55 g, 25.5 mmol) 및 p-톨릴히드라진 히드로클로라이드 (12.15 g, 76.5 mmol)의 혼합물을 밀폐된 튜브에서 90℃에서 18시간 동안 가열하였다. 용매를 제거한 후에 잔류물로 디클로로메탄 중 0→5％ 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물을 황색 고체로서 수득하였다 (3.29 g, 53％ 수율, ES+ (m/z) 244.2 [M+H]).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
제조예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z
제조예 12 2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일아민 283.2 [M+H]
제조예 13
[5-(1- 메톡시 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일] 카르밤산 2,2,2-
트리클로로 -에틸 에스테르
Figure 112008030013256-PCT00022
THF (30 mL) 중 5-(1-메톡시-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민 (제조예 11, 2.43 g, 10 mmol) 및 피리딘 (0.9 mL, 11 mmol)의 빙염(ice-salt) 냉각된 용액에 THF (10 mL) 중 2,2,2-트리클로로에틸클로로포르메이트 (2.12 g, 10 mmol)의 용액을 적가하였다. -15℃에서 0.5시간 동안 교반한 후에 22℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄 (50 mL)과 포화 수성 중탄산나트륨 (50 mL) 사이에 분배시켰다. 수성상을 단리하고 디클로로메탄 (각각 25 mL씩)으로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물로 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 백색 고체를 수득하였다 (3.73 g, 89％ 수율, ES+ (m/z) 418.1 [M+H]).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
제조예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z
제조예 14 [2-p-톨릴-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H- 피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로- 에틸 에스테르 458.2 [M+H]
제조예 15 [2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2- 트리클로로-에틸 에스테르 403.2 [M+H]
제조예 16 (5-펜타플루오로메틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)- 카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 466.1 [M+H]
제조예 17
1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)- 카르밤산
2,2,2- 트리클로로 -에틸 에스테르
THF (8 L) 중 5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민 ([Regan et al. J. Med. Chem. 2002, 45, 2994-3008], 400 g, 1.74 mol)의 용액에 탄산나트륨 포화 용액 (2.4 L)을 첨가하고, 상기 혼합물을 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 2,2,2-트리클로로에틸 클로로포르메이트 (406.77 g, 1.92 mol)를 적가하고, 상기 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (3×6.5 L)로 추출하여 무수 황산마그네슘상에서 건조시키고 용매를 증발시켰다. 고체를 최소량의 에틸 아세테이트 중에 용해하고, 과량의 헥산을 첨가하여 고체를 침전시켰다. 고체를 여과로 수집하고 건조시켜 표제 화합물을 회백색 고체로서 수득하였다 (586 g, 83％ 수율). (ES+): m/z 406.1 (M+H).
제조예 18
[5-(1- 메틸 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 카르밤산
2,2,2- 트리클로로 -에틸 에스테르
Figure 112008030013256-PCT00023
아세토니트릴 (87 mL, 1.6 mol)을 THF (700 mL) 중 수소화나트륨 (66 g, 1.6 mol)의 현탁액에 실온에서 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 이어서, 1-메틸-시클로프로판카르복실산 메틸 에스테르 (90.0 g, 0.78 mol)를 첨가하고, 백색 슬러리를 3시간 동안 환류시켰다. 상기 혼합물을 냉각시킨 후에 메탄올 (200 mL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 물 (500 mL)에 부었다. 상을 분리하고, 1.0 N HCl을 사용하여 pH 3 내지 4가 될 때까지 수성상의 pH를 감소시켰다. 수성상을 디에틸 에테르 (2×350 mL)로 추출하여 유기 층을 합하고 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 3-(1-메틸-시클로프로필)-3-옥소-프로피오니트릴을 황색 오일로서 수득하였다.
Figure 112008030013256-PCT00024
별법으로, 오버헤드(overhead) 교반기, 열전대, 환류 응축기 및 첨가 깔때기가 장착된 5 L의 3구 둥근 바닥 플라스크에 THF 중 칼륨 tert-부톡시드 (3.00 L, 3.00 mol)를 첨가하였다. 1-메틸-시클로프로판카르복실산 에틸 에스테르 (264.00 g, 2.06 mol)를 아세토니트릴 (123.00 g, 3.00 mol)과 혼합한 후에 첨가 깔때기를 통해 0.5시간에 걸쳐 상기 부톡시드 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 환류시까지 가열하였다. 2시간 동안 환류시킨 후에 메탄올 (96.00 g, 3.00 mL)을 첨가하여 40℃ 미만으로 냉각시켰다. 상기 혼합물을 10분 동안 교반한 후에 내용물을 물 (3.96 L, 219.81 mol) 및 MTBE (3.96 L, 33.32 mol)의 격렬하게 교반된 혼합물을 함유하는 12 L 분별 깔때기로 옮겼다. 층을 분리하고, 수성 층을 MTBE (3.96 L, 33.32 mol)로 추출하였다. 5 N HCl (610.00 mL, 3.05 mol)을 사용하여 수성 층의 pH를 12.5에서 3.5로 조정하였다. 수성 층을 MTBE (2×1.32 L, 11.11)로 추출하였 다. 유기 층을 합하고 황산나트륨상에서 건조시켜 (62.00 g, 436.49 mol) 여과하여 3-(1-메틸-시클로프로필)-3-옥소-프로피오니트릴을 수득하였다.
에탄올 (975 mL) 중 3-(1-메틸-시클로프로필)-3-옥소-프로피오니트릴 (60 g, 487.2 mmol) 및 p-톨릴-히드라진 히드로클로라이드 (78 g, 478.2 mmol)의 용액을 4시간 동안 환류 가열하였다. 용매를 증발시키고 남아있는 고체를 물 중에 용해하였다. 1.0 N 수산화나트륨 용액을 사용하여 용액의 pH를 pH 8로 증가시켰다. 침전물을 여과하여 5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112008030013256-PCT00025
2,2,2-트리클로로에틸 클로로포르메이트 (3.0 mL, 23 mmol)를 테트라히드로푸란 (105 mL) 및 포화 수성 탄산나트륨 (32 mL) 중 5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민 (4.75 g, 21 mmol)의 용액에 0℃에서 적가하였다. 상기 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 물에 붓고, 상을 분리하였다. 수성물을 에틸 아세테이트로 추출하였다.
후처리 A: 유기 층을 합하여 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 고체를 최소량의 에틸 아세테이트 중에 용해하고, 탁해질 때까지 교반하면서 헥산을 첨가하였다. 표제 화합물을 결정화하고 백색 고체로 여과하였다.
Figure 112008030013256-PCT00026
후처리 B: 에틸 아세테이트 용매를 이소프로필 알콜 (91.56 mol)로 바꾸었다. 상기 슬러리를 0℃ 미만에서 2시간 동안 교반하여 여과하고, 차가운 이소프로필 알콜 (13.08 mol)로 세척하고 40℃에서 감압하에 밤새 건조시켜 표제 화합물을 백색 결정질 고체로서 수득하였다.
제조예 19
[5-(2- 플루오로 -1- 플루오로메틸 -1- 메틸 -에틸)-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]-
카르밤산 2,2,2- 트리클로로 -에틸 에스테르
디클로로메탄 (400 mL) 및 2,6-루티딘 (80 mL) 중 3-히드록시-2-히드록시메틸-2-메틸-프로피온산 메틸 에스테르 (제조예 5, 32.5 g)의 차가운 용액 (-78℃)에 Tf2O (80 mL)를 적가하였다. 반응물이 실온에 이르게 하고, 약 2시간 동안 교반하였다. 디클로로메탄 (400 mL)으로 희석하고, HCl (3％ 수용액)로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4상에서 건조시켜 여과하고 농축시켰다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트 5％로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 2-메틸-2,3-비스-트리플루오로메탄술포닐옥시-프로피온산 메틸 에스테르를 무색의 오일로서 수득하였다.
Figure 112008030013256-PCT00027
1 M TBAF (132 mmol, 132 mL)를 0℃로 냉각시킨 무수 THF 500 mL 중 2-메틸-2,3-비스-트리플루오로메탄술포닐옥시-프로피온산 메틸 에스테르 (65.9 mmol, 26.3 g)의 용액에 첨가하였다. 밤새 교반하였다. 감압하에 농축시키고, 디클로로메탄을 첨가하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 유기 층을 합 하고 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 3-플루오로-2-플루오로메틸-2-메틸-프로피온산 메틸 에스테르를 수득하였다.
Figure 112008030013256-PCT00028
-78℃로 냉각시킨 무수 THF 100 mL 중 3-플루오로-2-플루오로메틸-2-메틸-프로피온산 메틸 에스테르 (28.2 mmol, 4.3 g)의 용액에 2.0 M LDA (62.0 mmol, 31 mL)를 첨가한 후에 무수 아세토니트릴 (56.4 mmol, 2.9 mL)을 첨가하였다. 2시간 동안 -78℃에서 교반하고, 상기 용액이 실온으로 밤새 가온되도록 하였다. 감압하에 농축시켜 디클로로메탄을 첨가하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨 및 수성 10％ HCl로 세척하였다. 유기 층을 합하고 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다.
에탄올 31 mL 중 p-톨릴히드라진 히드로클로라이드 (15.5 mmol, 2.5 g) 및 상기 수득된 잔류물 (15.5 mmol, 2.5 g)을 90℃에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시키고 잔류물을 물 중에 용해하였다. 10％ 수산화나트륨 용액을 첨가하고, 에틸 아세테이트 중에 추출하였다. 유기 층을 합하고 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민을 수득하였다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트를 용출액 (15％→50％)으로 하여 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. LCMS ES+ (m/z) 266 [M+H].
2,2,2-트리클로로에틸 클로로포르메이트 (8.1 mmol, 1.1 mL) 및 탄산나트륨 수용액 (4.8 mL)을 THF 37 mL 중 5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일아민 (7.3 mmol, 1.9 g)의 용액에 첨가하였다. 24시간 동안 교반하였다. 상기 용액을 물에 붓고, 에틸 아세테이트 중에 추출하였다. 유기 층을 합하여 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 [5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르를 수득하였다. LCMS ES+ (m/z) 440 [M+H].
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
제조예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z [M+H]
제조예 20 [5-(1,1-비스-플루오로메틸-프로필)-2-p-톨릴-2H- 피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 454
제조예 21 [5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3- 일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 424
제조예 22
4-(4-아미노-이소 퀴놀린 -1- 일옥시) -피페리딘-1-카르복실산 tert -부틸 에스테르
Figure 112008030013256-PCT00029
얼음/아세톤 조를 사용하여 황산 (900 mL)을 5℃로 냉각시킨 후에 1-아미노이소퀴놀린 (208.8 g, 1448 mmol)을 45분에 걸쳐 첨가하면서 상기 혼합물의 내부 온도는 20℃ 미만으로 유지시켰다. 짙은 색의 혼합물을 기계적으로 교반하며 질소하에 0℃로 냉각시킨 후에 45분에 걸쳐 KNO3 (149.4 g, 1477 mmol)로 조금씩 처리하 면서 반응 혼합물의 온도를 10℃ 미만으로 유지시켰다. 상기 혼합물을 2시간 동안 교반면서 15℃로 가온시켰다. 상기 혼합물을 물/얼음 (3 kg)에 부은 후에 추가의 물 (6 L)로 희석하였다. 상기 슬러리를 45분 동안 교반한 후에 여과하였다. 케이크를 물 (6×1.5 L)로 세척하였다. 금빛 물질을 밤새 공기로 부분적으로 건조시킨 후에 진공 오븐 (50℃ 내지 55℃, 약 10 torr, 질소 기류(bleed), 24시간)에 넣어 1-아미노-4-니트로이소퀴놀린 H2SO4를 수득하였다 (256.8 g, 62％ 수율). (ES+): m/z 190 (M++H).
수성 HCl (6 N, 2 L) 중 1-아미노-4-니트로이소퀴놀린 H2SO4 (120 g, 418 mmol)의 슬러리를 질소하에 35℃에서 기계적으로 교반하였다. 물 (300 mL) 중 NaNO2 (72.1 g, 1044 mmol)의 용액을 1 시간에 걸쳐 첨가하면서 슬러리를 50℃로 가온시켰다. 상기 혼합물을 30분 더 가열한 후에 실온으로 냉각되도록 하고 밤새 교반하였다. 상기 혼합물을 50℃로 가열한 후에 NaNO2의 용액 (물 150 mL 중 36 g)을 30분에 걸쳐 첨가하였다. 상기 혼합물을 2시간 동안 교반한 후에 60℃로 가열하고, 3시간에 걸쳐 실온으로 서서히 냉각되도록 하였다. 생성된 슬러리를 여과하여 케이크를 물 (3×600 mL)로 세척하였다. 부분적으로 공기 건조시켰다 (180 g). 상기 습윤 고체를 i-PrOH (1 L) 및 EtOH (1 L) 중에서 환류하에 슬러리화하고, THF (350 mL)를 첨가하여 완전히 용해되도록 하였다. 상기 용액에 물 (400 mL)을 첨가하고, 10℃로 3시간에 걸쳐 냉각시켰다. 여과하고 EtOH (2×300 mL)로 세척한 후 에 디에틸 에테르 (3×150 mL)로 세척하였다. 밤새 공기 건조시켜 1-히드록시-4-니트로이소퀴놀린을 밝은 갈색 고체로서 수득하였다 (62.62 g, 79％ 수율). (ES+): m/z 191 (M++H).
POCl3 (180 mL) 중 1-히드록시-4-니트로이소퀴놀린 (62.2 g, 327 mmol)의 슬러리를 질소하에 기계적으로 교반하고 100℃ 내지 105℃로 1시간 동안 가열하여 균질한 짙은 갈색 용액을 생성하였다. 응축기를 단거리(short-path) 증류 헤드로 바꾸고, 잉여 POCl3를 감압하에 (약 10 내지 30 torr) 제거하여 포트(pot) 온도가 55℃가 되었다. 상기 혼합물에 1,2-디클로로에탄 (150 mL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 70℃로 가온시켜 균질한 용액을 수득하였다. 상기 용액을 15℃로 냉각시킨 후에 i-PrOH (450 mL)를 5분에 걸쳐 첨가하여 33℃로 발열이 일어났다. 상기 슬러리를 3.5시간 동안 15℃에서 교반한 후에 여과하고 i-PrOH (3×100 mL)로 세척하였다. 생성된 고체를 밤새 공기 건조하여 1-클로로-4-니트로이소퀴놀린을 황갈색 고체로서 수득하였다 (52.08, 76％ 수율). (ES+): m/z 209/211 (M++H).
NaH (광유 중 60％, 미세척, 6.23 g, 156 mmol)를, 실온에서 질소 유동하에 교반시킨 THF (350 mL) 중 1-클로로-4-니트로이소퀴놀린 (26.0 g, 125 mmol) 및 1-tert-부톡시카르보닐-4-히드록시피페리딘 (27.6 g, 137 mmol)의 용액에 조금씩 첨가하였다. 짙은 적색빛 혼합물을 40℃에서 1.5시간 동안 교반한 후에 55℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. NaH (1.3 g)를 더 첨가하고, 생성된 혼합물을 55℃에서 2시간 동안 교반한 후에 실온으로 밤새 냉각시켰다. 헥산 (75 mL) 및 이후에는 물 (600 mL)을 서서히 첨가하였다. 수성 HCl (1 N)을 사용하여 반응 혼합물을 pH 7로 조정한 후에 층을 분리하였다. 수성 층을 버리고, 유기 층에 헥산 (200 mL)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 감압하에 50 내지 100 mL의 부피로 부분적으로 농축시켰다. 디에틸 에테르 (150 mL) 및 헥산 (250 mL)을 첨가한 후에 생성된 슬러리를 여과하였다. 케이크를 디에틸 에테르/헥산 (1:1)으로 세척하고 공기 건조시켜서, 4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 황갈색 고체로서 수득하였다 (33.84 g, 73％ 수율). (ES+): m/z 374 (M++H).
THF (300 mL) 및 에탄올 (300 mL) 중 4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (33.5 g, 89.7 mmol)의 슬러리에 10％ Pd/C (1.80 g, 1.69 mmol)를 에탄올 (25 mL) 중의 슬러리로 첨가하였다. 상기 혼합물을 수소 대기 (25 내지 40 psi)하의 파르(Parr) 진탕기에 실온에서 8시간 동안 넣어 두었다. 혼합물을 규조토 패드를 통해 여과하고, 여액이 무색이 될 때까지 에탄올로 세척하였다. 여액을 감압하에 농축시켜 짙은 오일을 수득하였다. 잔류물로 1％ MeOH/디클로로메탄 및 이후에는 2.5％ MeOH/디클로로메탄으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 표제 화합물을 오렌지색 유리로서 수득하였다 (30.3 g, 98％ 수율). (ES+): m/z 344 (M++H).
제조예 23
[4-(4-아미노-이소 퀴놀린 -1- 일옥시) -피페리딘-1- 일 ]-(1-메틸-시클로 프로필 )-메타논
Figure 112008030013256-PCT00030
오버헤드 교반기, 열전대, 질소 도입구/배출구 및 첨가 깔때기가 장착된 수조 중 22 L의 3구 둥근 바닥 플라스크에 이소퀴놀린 (500.00 g, 3.75 mol) 및 에틸 아세테이트 (7.60 L, 77.62 mol)를 첨가하였다. 교반하여 용해하였다. 퍼아세트산 (1.25 L, 5.94 mol)을 0.5시간에 걸쳐 실온에서 적가하였다. 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 플라스크를 빙수조에서 냉각시킨 후에 디메틸 술피드 (525.00 mL, 7.14 mol)를 45분에 걸쳐 적가하여 반응물을 켄칭(quenching)시켰다. 밤새 교반하면서 실온으로 가온시켰다. 반응 혼합물을 과산화물에 대하여 시험하였다.
2개 로트(lot)의 반응 혼합물을 합하였다. 반응 혼합물을 50 L 분별 깔때기에 옮기고 물 (2.00 L, 111.02 mol) 및 디클로로메탄 (12.00 L, 187.21 mol)을 첨가하였다. 탄산나트륨 (2.07 kg, 19.53 mol)을 조금씩 첨가한 후에 층을 분리하였다. 수성 층을 디클로로메탄 (3×4 L)으로 추출하여 유기 층을 합하고 황산나트륨상에서 건조시켰다. 여과하고 용매를 감압하에 제거하여 조 물질을 짙은 적색 오일/액체로서 수득하였다.
에틸 아세테이트 (8.00 L, 81.76 mol)를 조 물질인 짙은 적색 오일/액체에 첨가한 후에 에틸 아세테이트 6.8 L가 제거될 때까지 감압하에 교반하였다. 침전된 고체를 여과하여 차가운 에틸 아세테이트 (750.00 mL, 7.66 mol)로 세척한 후에 헵탄 (800.00 mL, 5.46 mol)으로 세척하였다. 고체를 건조시켜 이소퀴놀린-2-옥시드 714.20 g (64％)을 미세 모래형 고체로서 수득하였다.
별법의 후처리로서, 헵탄 세척 이전에 여액으로부터 용매 1 L를 제거하였다. 여액이 밤새 방치되도록 하였다. 고체를 여과하고 차가운 에틸 아세테이트 (500.00 mL, 5.11 mol)로 세척한 후에 헵탄 (500.00 mL, 3.41 mol)으로 세척하였다. 고체를 건조시켜 이소퀴놀린-2-옥시드 110.10 g (10％)을 미세 모래형 고체로서 수득하였다 - 수확물 #2 (총 수율 74％).
N2 도입구, 증류 헤드 및 열전대가 장착된 22 L 플라스크에 이소퀴놀린 2-옥시드 (4.82 mol, 699.1 g) 및 아세트산 무수물 (73.95 mol, 6.99 L)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 완만한 환류시까지 가열하고, 휘발성 물질을 증류로 제거하였다. 증류액을 2시간 동안 계속 가열하고 수집하였다 (전체 반응 부피의 약 절반이 줄어듦). 반응 혼합물을 50℃로 냉각시켰다. 메탄올 (2 L)을 적가하고, 상기 반응물이 70℃로 가온되도록 하였다. 상기 반응 혼합물을 밤새 실온에서 교반하였다. 이소퀴놀린-1-올이 상기 용액으로부터 결정화되었고, 이것을 여과하여 단리하고 감압하에 50℃에서 건조시켰다. 수득량 = 246.7 g (35％).
5 L 플라스크에 이소퀴놀린-1-올 (2.35 mol, 341.0 g) 및 물과 아세트산의 1:4 혼합물 1705 mL를 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃로 가열하였다. 물과 아세트산의 1:4 혼합물 1705 mL 중 질산의 용액 (7.04 mol, 443.0 mL)을 3시간에 걸쳐 적가하였다. 질산을 첨가하는 동안에 반응 온도를 68℃ 내지 70℃ 사이로 유지시 켰다. 3시간 후에 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 상기 반응 혼합물에 물 (5564 mL)을 첨가한 후에 여과하였다. 케이크를 물 (1 L)로 헹구고 진공하에 50℃에서 건조시켰다. 수득량 = 196.8 g (44％).
N2 도입구, 응축기 및 열전대가 장착된 2 L 플라스크에 1-히드록시-4-니트로이소퀴놀린 (880.3 mmol, 167.4 g) 및 POCl3 (4.95 mol, 460 mL)을 첨가하였다. 생성된 슬러리를 100℃로 대략 1 시간 동안 가열하였다. 회전 증발기를 이용하여 반응 혼합물을 건조해질 때까지 농축시켰다. 잔류물을 1,2-디클로로에탄 (402 mL) 중에 슬러리화하고, 15℃로 냉각시켰다. i-PrOH (1015 mL)를 적가하면서 포트 온도를 30℃ 미만으로 유지시켰다. 상기 반응 혼합물을 2시간 동안 20℃에서 교반하고 1시간 동안 10℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 케이크를 이소프로필 알콜 (100 mL)로 헹구었다. 감압하에 50℃에서 건조시켰다. 수득량 = 118.5 g (65％).
3 L의 3구 둥근 바닥 플라스크에 1-메틸-시클로프로판카르복실산 에틸 에스테르 (405.0 g, 3.16 mol), 5 N 수산화나트륨 (1.0 L, 5.00 mol) 및 메탄올 (400.0 mL, 9.88 mol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 50℃ 내지 60℃ 사이에서 5시간 동안 가열한 후에 주변 온도로 밤새 냉각되도록 하였다. 유기 용매를 제거하고, 염기성 용액을 MTBE (2×500 mL)로 추출하였다. 진한 HCl 600 mL를 사용하여 상기 수용액의 pH를 pH 1로 조정하고, MTBE (4×500 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하여 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 황산마그네슘상에서 건조시켜 여과하고 용매를 감압하에 제거하였다. 잔류물이 고체화되도록 한 후에 헵탄 100 mL를 첨가하고, 생성된 슬러리를 0℃ 내지 5℃에서 교반하였다. 슬러리를 여과한 후에 생성된 고체를 감압하에 건조시켰다. 여액을 농축시키고 빙조에서 냉각시켜 추가의 백색 고체 물질을 수득하였다. 합하여 1-메틸-시클로프로판카르복실산 265 g (84％)을 백색 고체로서 회수하였다.
오버헤드 교반기가 장착된 5 L의 3구 둥근 바닥 플라스크에 1-메틸-시클로프로판카르복실산 (260.0 g, 2.60 mol), 2-부탄온 (2.5 L, 27.92 mol) 및 N-메틸모르폴린 (325.0 mL, 2.95 mol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 0℃에서 교반하고, 2-클로로-4,6-디메톡시-[1,3,5]트리아진 (510.0 g, 2.86 mol)을 30분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 0℃에서 15분 동안 계속 교반한 후에 주변 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 생성된 N-메틸 모르폴린 히드로클로라이드 염을 여과하고, 2-부탄온 200 mL씩으로 2회 헹구었다. 여액을 농축시키고, 잔류물을 THF 1500 mL 중에 용해하여 용액 A를 수득하였다.
5 L의 3구 둥근 바닥 플라스크에 물 2 L 중 탄산칼륨 (550.0 g, 3.94 mol)을 충전하였다. 4-히드록시피페리딘 (275.0 g, 2.66 mol)을 첨가하여 용액 B를 수득하였다.
용액 B를 빙수조에서 냉각시켜 용액 A를 적가하였다. 냉각조를 치우고, 상기 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 유기 용매를 감압하에 제거하였다. 남아있는 염기성 수용액을 디클로로메탄 2 L씩으로 6회 추출하였다. 유기 층을 합하여 포화 수성 염화나트륨 1.5 L 및 진한 HCl 200 mL의 혼합물로 세척하였 다. 산성 수용액을 디클로로메탄 1 L씩으로 3회 추출하였다. 유기 층을 합하고 황산마그네슘 500 g 및 탄산칼륨 100 g상에서 밤새 건조시켰다. 상기 건조 시약을 여과해 내고, 용매가 약 500 mL 남을 때까지 용매를 제거하였다. 헵탄 1 L를 첨가하고, 결정화가 일어날 때까지 용매를 제거하였다. 고체를 여과하고, 헵탄으로 철저하게 세척하고 감압하에 건조시켜 (4-히드록시-피페리딘-1-일)-(1-메틸-시클로프로필)-메타논 330 g (69％)을 백색 결정질 고체로서 수득하였다.
오버헤드 교반기, 첨가 깔때기 및 열전대가 장착된 5 L 모르톤(Morton) 플라스크에 수소화나트륨 (38.40 g, 960.09 mol) 및 THF (1.54 L, 18.92 mol)를 첨가하였다. 수분 동안 교반한 후에 (4-히드록시-피페리딘-1-일)-(1-메틸-시클로프로필)-메타논 (149.00 g, 813.09 mol)을 첨가하였다. 0.5 시간 동안 교반하였다. THF (1.54 L, 18.92 mol) 중 1-클로로-4-니트로-이소퀴놀린 (154.00 g, 738.24 mol)을 1시간에 걸쳐 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 2시간 동안 실온에서 교반한 후에 40℃에서 6시간 동안 교반한 다음, 밤새 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물에 물 (500 mL, 27.78 mol)을 적가하였다. 물 (2.5 L, 138.89 mol) 및 MTBE (3.08 L, 25.92 mol)의 격렬하게 교반된 혼합물에 부어 반응 혼합물을 켄칭시켰다. 층을 분리하고, 유기 층을 물 (3.08 L, 170.97 mol)로 세척하여 황산나트륨상에서 건조시켰다 (142.00 g, 999.70 mol). 건조 시약을 여과해 내어 여액 #1을 수득하였다.
상기 절차를 반복하여 여액 #2를 수득하였다. 여액 #1 및 여액 #2를 합하였다. 용매를 감압하에 (약 150 mm) 제거하고, 증기 온도 20℃ 내지 28℃의 증류액 을 약 1.5 L가 남을 때까지 수집하였다. 증류 플라스크에 이소프로필 알콜 (4.62 L, 60.43 mol)을 첨가하고, 감압하에 (약 120 mm) 다시 증류하여 증기 온도 35℃ 내지 44℃의 증류액을 약 1 L가 남을 때까지 수집하였다. 남아있는 슬러리를 얼음 중에서 밤새 냉각시켰다. 고체를 여과하고 차가운 이소프로필 알콜 (300.00 mL, 3.92 mol)로 헹군 후에 헵탄 100 mL씩으로 3회 (300.00 mL, 2.05 mol) 헹구었다. 고체를 40℃에서 감압하에 밤새 건조시켜 (1-메틸-시클로프로필)-[4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-일]-메타논 368 g (72％ - 합산)을 오렌지색 고체로 수득하였다.
3 갤런 오토클레이브에 (1-메틸-시클로프로필)-[4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-일]-메타논 (368.0 g, 1.04 mol), THF (4.42 L, 54.32 mol) 및 탄소상 5％ Pd (건조, 40.50 g, 19.03 mol)를 충전하였다. 오토클레이브를 밀폐시키고 수소를 50 psi로 도입하였다. 내용물을 1000 rpm으로 실온에서 수소 50 psi하에 4.5시간 동안 교반하였다. 여과하고 추가의 THF (2.0 L, 24.58 mol)로 헹구었다. 상기 여액을 탄소 (20 내지 40 메쉬, 42.00 g)로 처리하고 40℃로 1시간 동안 가열하였다. 추가의 탄소 (60 메쉬, 47.00 g)를 첨가하고, 1시간 동안 계속 가열하였다. 마이크로 섬유지 및 하이플로 수퍼 셀(Hyflo Super Cel)® 층를 통해 탄소를 여과하고, 최소량의 THF로 헹구었다. 용매를 제거하여 [4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-일]-(1-메틸-시클로프로필)-메타논 348 g (103％)을 짙은 오렌지-적색 오일/발포체로서 수득하였다.
Figure 112008030013256-PCT00031
제조예 24
[4-(4-아미노-이소퀴놀린-1- 일옥시 )-피페리딘-1-일]-(2- 플루오로 - 페닐 ) 메타논
Figure 112008030013256-PCT00032
DCM (100 mL) 중 4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (9.68 g, 25.9 mmol, 0℃)의 차가운 용액에 TFA (80 mL)를 첨가하였다. 22℃에서 2시간 동안 교반한 후에 용매를 감압하에 제거하였다. 잔류물을 DCM 중에 용해하고, pH 약 14가 될 때까지 1 N 수산화나트륨을 처리하였다. 수성상을 단리하고 DCM으로 2회 추출하였다. 유기상을 합하여 무수 황산나트륨으로 건조시켰다. 용매를 제거하여 (4-니트로-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘을 수득하였다 (7.06 g, 99％ 수율, ES+ (m/z) 274.3 [M+H]).
THF (100 mL) 중 4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘 (4.0 g, 14.6 mmol), 2-플루오로벤조산 (2.45 g, 17.5 mmol), DCC (3.6 g, 17.5 mmol) 및 HOBt (2.37 g, 17.5 mmol)의 반응 혼합물을 22℃에서 밤새 교반하였다. 이어서, 여과하고 농축시켰다. 잔류물로 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 (2-플루오로-페닐)-[4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-일]-메타논을 황색 고체로서 수득하였다 (6.82 g, 92％ 수율, ES+ (m/z) 396.3 [M+H]).
메탄올 (250 mL) 중 (2-플루오로-페닐)-[4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-일]-메타논 (5.85 g, 14.8 mmol) 및 탄소상 팔라듐 (10％, 2.9 g)의 현탁액을 수소하에 밤새 교반하였다. 촉매를 여과로 제거하였다. 여액을 농축시켜 옅은 황색 고체를 수득하였다 (4.7 g, 87％ 수율, ES+ (m/z) 366.3 [M+H]).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
제조예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z [M+H]
제조예 25 [4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-일]-(1-메틸-시클로프로필)메타논 326.3
제조예 26
4-니트로-1-피페라진-1-일-이소퀴놀린
Figure 112008030013256-PCT00033
아세토니트릴 (100 mL) 중 1-클로로-4-니트로-이소퀴놀린 (2.5 g, 12 mmol)의 슬러리를 고체 피페라진 (5.2 g, 60 mmol)으로 처리하였다. 생성된 황색 혼합물을 밤새 60℃에서 가열하였다. 주변 온도로 냉각시킨 후에 반응 혼합물을 에틸 아세테이트와 중탄산나트륨 포화 수용액 사이에 분배시켰다. MeOH, 디클로로메탄 및 에틸 아세테이트를 첨가하고, 전체 혼합물을 여과하여 밝은 황색 고체를 수득하였다 (2.15 g, 69％, LCMS ES+ (m/z) 259 [M+H]).
제조예 27
시클로프로필 -[4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]- 메타논
Figure 112008030013256-PCT00034
디클로로메탄 (20 mL) 중 4-니트로-1-피페라진-1-일-이소퀴놀린 (제조예 26, 517 mg, 2 mmol), 시클로프로판카르복실산 (258 mg, 3 mmol) 및 촉매량의 DMAP (24 mg, 0.2 mmol)의 용액 또는 슬러리를 EDCI (575 mg, 3 mmol)로 처리하였다. 생성된 혼합물을 주변 온도에서 밤새 교반한 후에 중탄산나트륨 포화 수용액으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨상에서 건조시키고 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 디클로로메탄 중 0→2％ 2 M 암모니아-메탄올의 구배 및 헥산 중 0→70％ 에틸 아세테이트의 구배를 사용한 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여, 2회의 정제 후에는 황색 고체를 수득하였다 (513 mg, 79％ 수율, LCMS ES+ (m/z) 327 [M+H]).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
제조예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z
제조예 28 (1-메틸-시클로프로필)-[4-(4-니트로- 이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]-메타논. 76％ 수율 341 [M+H]
제조예 29 (2,6-디플루오로-페닐)-[4-(4-니트로- 이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]-메타논. 50％ 수율 399.1 [M+H]
제조예 30 2,2-디메틸-1-[4-(4-니트로-이소퀴놀린-1- 일)-피페라진-1-일]-프로판-1-온. 66％ 수율 343.2 [M+H]
제조예 3
1[4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]- 시클로프로필 - 메타논
Figure 112008030013256-PCT00035
파르 진탕기에서 에틸 아세테이트 (50 mL) 중 시클로프로필-[4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]-메타논 (제조예 27, 513 mg, 1.57 mmol) 및 탄소상 5％ 팔라듐 (91 mg)의 슬러리를 주변 온도에서 60 psi의 수소 대기에 적용시켰다. 8시간 후에는 반응 혼합물을 여과하고 감압하에 농축시켜 갈색 발포체를 수득하였다 (정량적 수율, LCMS ES+ (m/z) 297 [M+H]).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
제조예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z
제조예 32 1-[4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1- 일]-2,2-디메틸-프로판-1-온 (반응 시간 24시간) 313 [M+H]
제조예 33 [4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]-(2,6- 디플루오로-페닐)-메타논 (반응 시간 24시간) 369 [M+H]
제조예 34 [4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1- 일]-(1-메틸-시클로프로필)-메타논 311 [M+H]
제조예 35
[4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]-(2- 플루오로 - 페닐 )- 메타논
Figure 112008030013256-PCT00036
디클로로메탄 (300 mL) 중 피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (10 g, 53.7 mmol)의 용액에 트리에틸 아민 (15.1 mL, 107.4 mmol) 및 2-플루오로벤조 일 클로라이드 (6.4 mL, 53.7 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, 물 (200 mL)을 첨가하고, 유기 층을 분리하여 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 용매를 감압하에 증발시켜 4-(2-플루오로-벤조일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 17.3 g을 수득하였다. ES+ (m/z) 309 [M+H].
디클로로메탄 (100 mL) 중 4-(2-플루오로-벤조일)-피페라진-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (16.3 g, 53 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 4 M HCl의 용액 (40 mL, 159 mmol)을 첨가하고, 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 생성된 백색 현탁액에 Et2O를 첨가하고, 용매를 감압하에 증발시켜 (2-플루오로-페닐)-피페라진-1-일-메타논 히드로클로라이드 12.6 g을 수득하였다. ES+ (m/z) 209 [M+H].
(2-플루오로-페닐)-피페라진-1-일-메타논 (3.16 g, 12.9 mmol) 및 K2CO3 (8.9 g, 64.5 mmol)을 아세토니트릴 (100 mL) 중 1-클로로-4-니트로이소퀴놀린 (2.85 g, 13.7 mmol)에 첨가하고, 24시간 동안 교반하였다. 불용성 고체를 여과하고, 케이크를 AcOEt로 세척하였다. 용매를 감압하에 증발시키고, 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 헥산:AcOEt 20％→90％로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 (2-플루오로-페닐)-[4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]-메타논 3.72 g을 고체로서 수득하였다. LCMS ES+ (m/z) 381.2 [M+H].
THF:H2O의 1:1 혼합물 170 mL 중 (2-플루오로-페닐)-[4-(4-니트로-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]-메타논 (3 g, 7.89 mmol)에 Na2S2O4 (6.87g, 39.4 mmol)를 첨가한 후에 32％ NH4OH (15 mL)를 첨가하고, 90분 동안 교반하였다. 물로 희석하고, AcOEt로 여러회 추출하였다. 유기물질을 합하여 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고 Na2SO4상에서 건조시키고 감압하에 증발시켜 표제 화합물 1.8 g을 고체로서 수득하였다. LCMS ES+ (m/z) 351.2 [M+H].
제조예 36
1-[5-(1- 메틸 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]-3-[1-(피페리딘-4- 일옥시 )-
이소퀴놀린-4-일]- 우레아 디히드로클로라이드
Figure 112008030013256-PCT00037
[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 18, 3.20 g, 7.94 mmol 및 2.0 당량) 및 4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (제조예 22, 1.37 g, 3.97 mmol, 1.0 당량)를 무수 DMSO 7 mL 중에 용해하고 디이소프로필에틸 아민 (DIPEA, 1.36 mL, 7.94 mmol, 2.0 당량)을 첨가하여 밀폐된 튜브에서 가열하면서 20시간 동안 80℃에서 교반하였다. 상기 용액을 디클로로메탄 및 빙수의 1:1 v/v 혼합물에 부었다. 수성상을 디클로로메탄 (2×50 mL)으로 추출하고, 합한 유기 층을 물 (2×50 mL) 및 수성 염화나트륨 (100 mL)으로 세척하였다. 유기 용액을 황산나트륨상에서 건조시켜 감압하에 증발시켰다. 잔류물로 헥산 중 15％→80 ％ EtOAc로 구배 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-(4-{3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레이도}-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 1.40 g을 순수한 발포형 크림색 고체로서 수득하였다. 59％ 수율. ES+ (m/z) 597.4 [M+H].
디옥산 중 4 M HCl (2.4 mL, 9.36 mmol)을 디클로로메탄 (20 mL) 중 4-(4-{3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레이도}-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.4 g, 2.34 mmol)에 실온에서 첨가하고 밤새 교반하였다. 용매를 감압하에 증발시켜 표제 화합물 (1.3 g)을 백색 고체로서 수득하였다 (정량적). ES+ (m/z): 497.4 (M+H).
제조예 37
1-[5-(2- 플루오로 -1- 플루오로메틸 -1- 메틸 -에틸)-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]-3-[1-
(피페리딘-4- 일옥시 )-이소퀴놀린-4-일]- 우레아 히드로클로라이드
[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 27, 2.7 mmol, 1.2 g) 및 DIPEA (2.9 mmol, 0.5 mL)를 DMSO 4 mL 중 4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (제조예 22, 2.9 mmol, 1.0 g)의 용액에 첨가하고, 85℃에서 밤새 교반하였다. 냉각시켜 물을 첨가하고 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 합하고 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트로 구배 (15→70％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-(4-{3-[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레이도}-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 수득하였다. LCMS ES+ (m/z) 635 [M+H].
4-(4-{3-[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레이도}-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (1.1 mmol, 0.6 g)를 교반하고, 디클로로메탄 5 mL 및 디옥산 중 4.0 M 염화수소 (5.3 mmol, 1.3 mL) 중에 실온에서 밤새 용해하였다. 감압하에 농축시켰다. 형성된 백색 고체를 디에틸 에테르로 연화처리(trituration)하였다. LCMS ES+ (m/z) 535 [M+H].
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
제조예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z [M+H]
제조예 38 1-[5-(1,1-비스-플루오로메틸-프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-[1-(피페리딘-4-일옥시)-이소퀴놀린-4-일]- 우레아 히드로클로라이드 549
제조예 39 1-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-[1-(피페리딘-4-일옥시)-이소퀴놀린-4-일]- 우레아 히드로클로라이드 517
제조예 40
1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-[1(피페리딘-4- 일옥시 )-
이소퀴놀린-4-일]- 우레아
Figure 112008030013256-PCT00038
DMSO (5 mL) 중 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 17, 589 mg, 1.456 mmol) 및 4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (제조예 22, 500 mg, 1.456 mmol)의 용액을 통해 질소 기체를 5분 동안 버블링(bubbling)하였다. 다음으로, N,N-디이소프로필에틸아민 (507 ㎕, 2.912 mmol)을 첨가하였다. 60℃에서 6시간 동안 교반한 후에 실온으로 밤새 냉각시켰다. 반응 혼합물을 CH2Cl2 200 mL와 증류수 100 mL 사이에 분배시켰다. 물 (1×100 mL)로 세척한 후에 수성 층을 합하여 CH2Cl2 (3×50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 포화 수성 염화나트륨 (2×100 mL)으로 세척하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물로 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 4-{4-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-이소퀴놀린-1-일옥시}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르를 갈색 고체로서 수득하였다. LCMS ES+ (m/z) 599.5 [M+H]
디클로로메탄 (50 mL) 중 4-{4-[3-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-우레이도]-이소퀴놀린-1-일옥시}-피페리딘-1-카르복실산 tert-부틸 에스테르 (820 mg, 1.37 mmol)의 차가운 용액에 트리플루오로아세트산 (15 mL)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 22℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후에 잔류물을 NaCl (50 mL)로 포화된 1 N 수산화나트륨으로 처리하고, 디클로로메탄 (각각 50 mL씩)으로 5회 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시켰다. 상기 혼합물을 여과하고, 잔류물로 디클로로메탄 및 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 백색 고체를 수득하였다 (515 mg, 75％ 수율, LCMS ES+ (m/z) 499.5 [M+H]).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
제조예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z
제조예 41 1-(5-펜타플루오로에틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[1- (피페리딘-4-일옥시)-이소퀴놀린-4-일]-우레아 561.3 [M+H]
제조예 42 1-[1-(피페리딘-4-일옥시)-이소퀴놀린-4-일]-3-2-p- 톨릴-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H-피라졸- 3-일]-우레아 551.4 [M+H]
실시예 1
1-[1-(4- 시클로프로판카르보닐 -피페라진-1-일)-이소퀴놀린-4-일]-3-[5-(1- 메틸 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 우레아
Figure 112008030013256-PCT00039
DMSO 4 mL 중 [4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]-시클로프로필-메타논 (제조예 29, 214 mg, 0.722 mmol), [5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 18, 290 mg, 0.722 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.264 mL)의 용액을 60℃에서 5시간 동안 가열하였다. 생성된 혼합물을 주변 온도로 냉각시켜 물을 첨가하였다. 침전물을 여과하여 물로 헹군 후에 펜탄으로 헹구고, 60℃의 진공 오븐에서 건조시켰다. 잔류물로 디클로로메탄 중 2 M 암모니아-메탄올로 구배 (0→2％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 생성물 206 mg을 수득하였다 (LCMS에 의한 순도, 93％).
소량의 디클로로메탄 및 MeOH 중에 용해하여 디클로로메탄 중 2 M 메탄술폰산 1 당량으로 처리하고 질소 스트림하에 농축시켰다. 생성된 고체를 수 mL의 DMSO/MeOH/물로 연화처리하고 여과하여 상기 유리 염기 145 mg을 수득하였다 (LCMS ES+ (m/z) 550 [M+H]).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로, 아세토니트릴 중 수성 10 mM 중탄산암모늄의 구배를 사용하는 크테라(Xterra) 30×75 mm 5 미크론 MS C18 컬럼에서 역상으로 추가로 정제한 후에 하기 화합물을 제조하였다:
실시예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z [M+H]
실시예 2 1-{1-[4-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페라진-1-일]- 이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 564
실시예 3
1-{1-[4-(2,6- 디플루오로 - 벤조일 )-피페라진-1-일]-이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1- 메틸 -
시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 우레아
DMSO 5 mL 중 [4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]-(2,6-디플루오로-페닐)-메타논 (제조예 32, 대략 0.88 mmol), [5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 18, 362 mg, 0.9 mmol) 및 디이소프로필에틸아민 (0.314 mL)의 용액을 60℃에서 밤새 가열하였다. 생성된 혼합물을 주변 온도로 냉각시키고 상 분리를 보조하는 포화 수성 염화나트륨을 사용하여 물과 에틸 아세테이트 사이에 분배시켰다. 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하고, 합한 유기 층을 황산나트륨상에서 건조시켰다. 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 디클로로메탄 중 2 M 암모니아-메탄올로 구배 (0→2％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. 소량의 디클로로메탄 및 MeOH 중에 용해하고 디클로로메탄 중 2 M 메탄술폰산 1 당량으로 처리하여 질소 스트림하에 농축시켰다. 아세토니트릴 중 수성 10 mM 중탄산암모늄의 구배를 사용하는 크테라 30×75 mm 5 미크론 MS C18 컬럼에서 역상으로 추가로 정제하여 상기 유리 염기 73 mg을 수득하였다. LCMS ES+ (m/z) 622 [M+H].
상기한 것과 실질적으로 유사한 절차를 이용하여 하기하는 화합물의 유리 염기를 제조하였다. 이어서, DCM 1 mL 중에 0.13 g을 용해하고, DCM 중 1 N 메탄술폰산의 용액 (1 당량)을 첨가하였다. 용매를 감압하에 증발시켜 하기하는 화합물 0.15 g을 수득하였다.
실시예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z [M+H]
실시예 4 1-{1-[4-(2-플루오로-벤조일)-피페라진-1-일]- 이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 604
실시예 5
1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{1-[1-(1- 메틸 - 시클로프로판카르보닐 )-피페리딘-4- 일옥시 ]-이소퀴놀린-4-일}- 우레아
DMSO (2 mL) 중 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 17, 203 mg, 0.5 mmol) 및 [4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-일]-(1-메틸-시클로프로필)메타논 (163 mg, 0.5 mmol)의 용액을 통해 질소 기체를 5분 동안 버블링하였다. 다음으로, N,N-디이소프로필에틸아민 (200 ㎕, 1.1 mmol)을 첨가하였다. 60℃에서 밤새 교반한 후에 반응 혼합물을 디클로로메탄 (15 mL)과 포화 중탄산나트륨 (50 mL) 사이에 분배시켰다. 수성상을 단리하고 디클로로메탄 (각각 15 mL씩)으로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물을 실리카겔 크로마토그래피에서 헥산 및 에틸 아세테이트로 정제하여 백색 고체를 수득하였다 (226 mg, 78％ 수율, ES+ (m/z) 581.3 [M+H]).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물의 유리 염기를 제조하였다. 이어서, DCM 1 mL 중에 용해하고, DCM 중 1 N 메탄술폰산 (1 당량)의 용액을 첨가하였다. 용매를 감압하에 증발시켜 하기하는 화합물을 수득하였다.
실시예 화합물 MS ( ES +): m/z [M+H]
실시예 6 1-{1-[4-(2,2-디메틸-프로피오닐)-피페라진-1-일]- 이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 566
실시예 7 1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3- 일]-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4- 일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트 582.3
실시예 8 1-{1-[1-(2-플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메톡시-시클로프로필)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 635.0
실시예 9 1-[5-(1-메톡시-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3- 일]-3-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4- 일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트 595.3
실시예 10 1-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-3-{1-[1-(3-메틸- 티오펜-2-카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린- 4-일}-우레아 메실레이트 634.0
실시예 11
1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{1-[4-(2,2-디메틸- 프로피오닐 )-
피페라진-1-일]-이소퀴놀린-4-일}- 우레아 메실레이트
아세토니트릴 18 mL 중에 용해시킨 1-[4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일)-피페라진-1-일]-2,2-디메틸-프로판-1-온 (제조예 3, 0.9 mmol, 0.3 g)을 교반하였다. 탄산칼륨 (0.99 mmol, 0.1 g) 및 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 17, 0.9 mmol, 0.4 g)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, DMF 1 mL를 첨가하고, 60℃에서 24시간 동안 교반하였다. 냉각시켜 물을 첨가하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 합하여 포화 수성 염화나트륨으로 세척하고, 황산나트륨상에서 건조시켜 여과하고 감압하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트로 구배 (5％→20％) 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. 수득된 오일에 디클로로메탄을 첨가하고, 형성된 침전물을 여과하여 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{1-[4-(2,2-디메틸-프로피오닐)-피페라진-1-일]-이소퀴놀린-4-일}-우레아를 수득하였다. ES+ (m/z) 568 [M+H].
1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{1-[4-(2,2-디메틸-프로피오닐)-피페라진-1-일]-이소퀴놀린-4-일}-우레아를 실온에서 교반하였다. 디클로로메탄 중 1 N 메탄술폰산 용액을 첨가하여 표제 화합물이 형성되었다. LCMS ES+ (m/z) 568 [M+H].
실시예 12
1-{1-[1-(1- 메틸 - 시클로프로판카르보닐 )-피페리딘-4- 일옥시 ]-이소퀴놀린-4-
일}-3-[5-(1- 메틸 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 우레아 메실레이트
Figure 112008030013256-PCT00040
N2하의 플라스크에 EDCI (0.147 g, 0.77 mmol), HOBt (0.10 g, 0.77 mmol), 1-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-[1-(피페리딘-4-일옥시)-이소퀴놀린-4-일]-우레아 디히드로클로라이드 (제조예 3, 0.16 g, 0.64 mmol) 및 1-메틸-1-시클로프로필 카르복실산 (1.1 당량)을 넣었다. 디클로로메탄 (5 mL)을 첨가한 후에 DIPEA (0.22 mL, 1.28 mmol)를 첨가하고, 실온에서 밤새 교반하였다. 용매를 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물로 헥산:AcOEt 50％→100％로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 1-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아를 유리 염기로서 수득하였다. ES+ (m/z) 579.3 (M+H).
1-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 0.3 g을 디클로로메탄 1 mL 중에 용해하고, 디클로로메탄 중 1 N 메탄술폰산 용액 321 ㎕를 첨가하였다. 용매를 감압하에 증발시켜 표제 화합물 0.357 g을 백색 고체로서 수득하였다 (정량적). ES+ (m/z) 579.3 (M+H).
상기한 제조예와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
실시예 화합물 MS ( ES +): m/z [M+H]
실시예 13 1-{1-[1-(2-플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 619.3
실시예 14 1-[1-(1-시클로프로판카르보닐-피페리딘-4-일옥시- 이소퀴놀린-4-일]-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 565.3
실시예 15 1-{1-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 637.3
실시예 16 1-{1-[1-(2-메틸-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 615.4
실시예 17 1-{1-[1-(2-클로로-6-플루오로-벤조일)-피페리딘-4- 일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 653.3
실시예 18 1-{1-[1-(2-메톡시-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴- 2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 631.3
실시예 19 1-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-{1-[1-(1-트리플루오로메틸-시클로프로판카르보닐)- 피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트 634.3
실시예 20 1-{1-[1-(3-플루오로-2-플루오로메틸-2-메틸-프로피오닐)- 피페리딘-4-일옥시-[이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸- 시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 618.4
실시예 21 1-[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H- 피라졸-3-일]-3-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)- 피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트 617
실시예 22 1-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3- 일]-3-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4- 일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트 599
실시예 23
4-{4-[3-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)- 우레이도 ]-이소퀴놀린-1
- 일옥시 }-피페라진-1- 카르복실산 아미드
Figure 112008030013256-PCT00041
DMSO (1 mL) 중 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[1(피페리딘-4-일옥시)-이소퀴놀린-4-일]-우레아 (제조예 39, 100 mg, 0.2 mmol) 및 카르밤산 페닐 에스테르 (32.9 mg, 0.24 mmol)의 용액을 통해 질소 기체를 5분 동안 버블링하였다. 다음으로, N,N-디이소프로필에틸아민 (200 ㎕, 1.1 mmol)을 첨가하였다. 85℃에서 밤새 교반한 후에 반응 혼합물을 에틸 아세테이트 (15 mL)와 포화 중탄산나트륨 (50 mL) 사이에 분배시켰다. 수성상을 단리하고 에틸 아세테이트 (각각 15 mL씩)로 2회 추출하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고 농축시켰다. 잔류물로 헥산 및 에틸 아세테이트로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 백색 고체를 수득하였다 (40 mg, 37％ 수율, ES+ (m/z) 542.3 [M+H]).
실시예 24
1-(5- tert -부틸-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일)-3-{1-[1-(2- 플루오로 - 벤조일 )-
피페리딘-4- 일옥시 ]-이소퀴놀린-4-일}- 우레아 메실레이트
THF (3 mL) 중 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[1(피페리딘-4-일옥시)-이소퀴놀린-4-일]-우레아 (제조예 39, 110 mg, 0.221 mmol), 2-플루오로벤조산 (37.1 mg, 0.265 mmol), HOBt (35.8 mg, 0.265 mmol) 및 DCC (54.6 mg, 0.265 mmol)의 반응 혼합물을 22℃에서 18시간 동안 교반하였다. 상기 혼합물을 여과하고, 여액을 CH2Cl2 (100 mL)를 함유하는 분별 깔때기에 부었다. 1 N NaOH (2×20 mL)로 세척하고 수성 층을 합하여 CH2Cl2 (2×50 mL)로 추출한 후에 합한 유기 층을 포화 수성 염화나트륨 (1×50 mL)으로 세척하였다. 합한 유기상을 황산나트륨상에서 건조시키고, 상기 혼합물을 여과하여 잔류물로 디클로로메탄 및 메탄올로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 백색 고체를 수득하였다 (109.8 mg, 80％ 수율, ES+ (m/z) 621.5 [M+H]).
1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{3-클로로-1-(2-플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일)}-우레아 0.107 g을 디클로로메탄 (2 mL) 및 메탄올 (2 mL) 중에 용해하고, 메탄 술폰산 (16.56 mg, 0.1723 mmol)을 첨가하였다. 용매를 감압하에 증발시켜 표제 화합물을 백색 고체로서 수득하였다 (119.7 mg, 97％, ES+ (m/z) 621.5 [M+H-MsOH]).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
실시예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z [M+H]
실시예 25 1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3-일]-3- {1-[1-(3-메틸-티오펜-2-카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트 624.0
실시예 26 1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3- 일]-3-{1-[1-(2-클로로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트 638.0
실시예 27 1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3- 일]-3-{1-[1-(2-플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트 622.3
실시예 28 1-[5-tert-부틸-2-(6-메틸-피리딘-3-일)-2H-피라졸-3- 일]-3-{1-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트 640.3
실시예 29 1-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필) -2H-피라졸-3-일]-3-{1-[1-(3-메틸-티오펜-2-카르보닐)- 피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트 676.0
실시예 30 1-{1-[1-(2-클로로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린- 4-일}-3-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 690.0
실시예 31 1-{1-[1-(2-플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린- 4-일}-3-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 674.0
실시예 32 1-{1-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-3-[2-(6-메틸-피리딘-3-일)-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 692.0
실시예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z [M+H] (유리 염기 MW 검출)
실시예 33 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-{1-[1-(3-메틸- 티오펜-2-카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}- 우레아 메실레이트 623.5
실시예 34 1-(5-tert-부틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)-3-[1-(1- 시클로프로판카르보닐-피페리딘-4-일옥시)-이소퀴놀린-4-일]- 우레아 메실레이트 567.5
실시예 35 1-{1-[1-(2-플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린- 4-일}-3-(5-펜타플루오로에틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일)- 우레아 메실레이트 683.0
실시예 36 1-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-3-(5-펜타플루오로에틸-2-p-톨릴-2H-피라졸-3- 일)-우레아 메실레이트 643.0
실시예 37 1-{1-[1-(2-플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4- 일}-3-[2-p-톨릴-5-(1-트리플루오로메틸-시클로프로필)-2H- 피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 673.0
실시예 38 1-{1-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-3-[2-p-톨릴-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일] 우레아 메실레이트 691.0
실시예 39 1-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-3-[2-p-톨릴-5-(1-트리플루오로메틸- 시클로프로필)-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 633.3
실시예 40
1-{1-[1-(2,6- 디플루오로 - 벤조일 )-피페리딘-4- 일옥시 ]-이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(2-
플루오로 -1- 플루오로메틸 -1- 메틸 -에틸)-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 우레아
1-[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-[1-(피페리딘-4-일옥시)-이소퀴놀린-4-일]-우레아 히드로클로라이드 (제조예 37, 0.6 mmol, 0.3 g), 2,6-디플루오로벤조일 클로라이드 (0.6 mmol, 0.07 mL) 및 트리에틸아민 (1.7 mmol, 0.2 mL)을 디클로로메탄 5 mL 중에서 실온에서 밤새 교반하였다. 약간의 물을 첨가하고, 디클로로메탄 중에 추출하였다. 유기 층을 포화 수성 염화나트륨으로 세척하였다. 무수 황산나트륨상에서 건조시켜 감압하에 농축시켰다. 잔류물로 헥산/에틸 아세테이트를 용출액 (30％→70％)으로 하여 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하였다. LCMS ES+ (m/z) 675 [M+H].
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
실시예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z [M+H]
실시예 41 1-[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H- 피라졸-3-일]-3-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)- 피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-우레아 617
실시예 42 1-[5-(1,1-비스-플루오로메틸-프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3- 일]-3-{1-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-우레아 689
실시예 43 1-{1-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 657
실시예 44 1-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3- 일]-3-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4- 일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-우레아 599
실시예 45
1-{1-[1-(2,6- 디플루오로 - 벤조일 )-피페리딘-4- 일옥시 ]-이소퀴놀린-4-일}-3-[5-
(2- 플루오로 -1- 플루오로메틸 -1- 메틸 -에틸)-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]-
우레아 메실레이트
1-{1-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 0.13 g (0.19 mmol)을 디클로로메탄 (2 mL) 중에 용해하고, 디클로로메탄 중 1 N 메탄술폰산의 용액 0.19 mL를 첨가하였다. 용매를 감압하에 증발시켜 표제 화합물 0.09 g을 백색 고체로서 수득하였다. ES+ (m/z) 675 (M+H).
상기한 절차와 실질적으로 유사한 방식으로 하기 화합물을 제조하였다:
실시예 화합물 데이타 MS ( ES +): m/z [M+H]
실시예 46 1-[5-(1,1-비스-플루오로메틸-프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3- 일]-3-{1-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트 689
실시예 47 1-{1-[1-(2,6-디플루오로-벤조일)-피페리딘-4-일옥시]- 이소퀴놀린 4-일}-3-[5-(2-플루오로-1,1-디메틸-에틸)-2-p- 톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 메실레이트 657
실시예 48
1-{1-[1-(1- 메틸 - 시클로프로판카르보닐 )-피페리딘-4- 일옥시 ]-이소퀴놀린-4-
일}-3-[5-(1- 메틸 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]- 우레아 메실레이트
오버헤드 교반기, 열전대 및 환류 응축기가 장착된 12 L 모르톤 플라스크에 [4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-일]-(1-메틸-시클로프로필)-메타논 (제조예 23, 331.00 g, 1.02 mol), THF (3.97 L, 48.79 mol), [5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-카르밤산 2,2,2-트리클로로-에틸 에스테르 (제조예 18, 410.00 g, 1.02 mol) 및 DIPE (159.00 g, 1.22 mol)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 22시간 동안 환류시켰다. 상기 반응물을 50℃ 미만으로 냉각시키고, 탄소 (다르코(Darco) G-60, 33.00 g, 2.75 mol)로 처리하였다. 슬러리를 30분 동안 43℃ 내지 50℃에서 교반한 후에 마이크로 섬유지 및 하이플로 수퍼 셀® (27.00 g)에서 여과하였다. 여액을 넣고, 침전되는 동안에 주변 온도에서 냉각시켰다. 생성된 슬러리를 얼음 중에서 팩킹(packing)하고 밤새 교반하였다. 고체를 여과하여 THF (300.00 mL, 3.69 mol)로 세척하고, 감압하에 40℃에서 건조시켰다. 잔류물로 1:3 아세톤/DCM으로 용출시킨 후에 DCM 중 30％ 아세톤으로 용출시키는 실리카겔 크로마토그래피를 실시하여 1-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아 401 g (68％)을 백색 고체로서 수득하였다.
Figure 112008030013256-PCT00042
오버헤드 교반기가 장착된 5 L 플라스크에 유리 염기 (400.00 g, 6.91 mol) 및 디클로로메탄 (3.00 L, 46.80 mol)을 충전하였다. 메탄술폰산 (72.00 g, 7.49 mol)을 실온에서 적가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반하였다. 여과하고 용매를 감압하에 제거하였다. 디에틸 에테르 (4 L)를 첨가하고 밤새 교반하였다. 여과하고 감압하에 건조시켜 표제 화합물 467.8 g을 수득하였다.
Figure 112008030013256-PCT00043
실시예 49
1-[5-(1- 플루오로메틸 - 시클로프로필 )-2-p- 톨릴 -2H- 피라졸 -3-일]-3-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-우레아 메실레이트
Figure 112008030013256-PCT00044
DCM 1 mL 중에 용해된 5-(1-플루오로메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일아민 (160.00 mg, 652.26 μmol)을 DCM 중 1,1'-카르보닐디이미다졸 (158.65 mg, 978.39 μmol)의 용액에 서서히 첨가하였다. 상기 혼합물을 40℃에서 7시간 동안 교반하였다. 이어서, DCM 1 mL 중 [4-(4-아미노-이소퀴놀린-1-일옥시)-피페리딘-1-일]-(1-메틸-시클로프로필)-메타논 (제조예 23, 212.25 mg, 652.26 μmol, 1.00 당량)의 용액을 첨가하였다. 상기 혼합물을 밤새 교반하였다. 용매를 N2하에 증발시켰다. 처음에는 NH4CO3/MeOH (100:0→0:100)를 사용한 HLB 카트리지 (6 g)로 정제한 후에 마지막에는 HPLC (크로마실(Kromasil) C18 컬럼 (100×21.2 mm, 5 μM (하이-크롬(Hi-Chrom), 이동상은 물 (용매 A) 및 아세토니트릴 (용매 B)이었고, 둘다 0.05％ 트리플루오로아세트산 (TFA)을 함유함. 구배 방식: 40％ B로 2분, 40％→60％ B로 6분, 마지막에는 95％ B로 2분. 유속: 25 mL/분)으로 정제하여 1-[5-(1-플루오로메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-우레아를 고체로서 수득하였다 (19 mg, 5％ 수율). ES+ (m/z): 597 [M+1].
디클로로메탄 0.5 mL 중 1-[5-(1-플루오로메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-3-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-우레아 (18.00 mg, 30.17 μmol)의 용액에 1 M 메탄술폰산 (30.17 μmol, 30.17 ㎕)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 질소하에 증발시켜 표제 화합물을 고체로서 수득하였다 (20 mg, 96％ 수율). ES+ (m/z):597.4 [M+1].
p38 키나제의 억제
표준 용액 제조
1 M Tris-HCl (pH 7.5) 2.5 mL, 1 M 디티오트레이톨 0.1 mL, 1 M 염화마그네슘 1.0 mL 및 1％ Triton X-100 300 ㎕를 합하고 물을 사용하여 100 mL로 희석하여 키나제 완충액을 제조하였다. 상기 키나제 완충액 84 mL를 DMSO 16 mL와 합하여 16％ DMSO 용액을 제조하였다.
10 mM 수성 ATP 102.6 ㎕, 33P-ATP 25 ㎕ 및 4 mM 수성 표피 성장 인자 펩티드 661-681 (바이오몰(Biomol), 카탈로그 번호 P-121) 163.5 ㎕를 키나제 완충액 5 mL 중에 첨가하여 200 μM ATP 용액을 제조하였다.
농축 효소 용액 (250 ng p38 효소/㎕ 키나제 완충액) 9.5 ㎕를 키나제 완충액 1536 ㎕ 중에 용해시켜 p38 키나제 효소 용액을 제조하였다.
샘플 제조
코스타(Costar) 96웰 미량역가 플레이트에서 디메틸술폭시드 중 각 시험 화합물 및 대조군 화합물의 10 mM 스톡(stock) 용액 2 ㎕를 상기 16％ DMSO 용액 248 ㎕ 중에 용해시켜 이들 각 화합물의 80 μM 용액을 제조하였다. 상기 플레이트를 테칸 제네시스(Tecan Genesis) 자동화 액체 핸들러(handler)에 넣어 1:3 계열 희석을 행하였다.
검정
벡크만(Beckman) 멀티메크(Multimek) 96웰 자동화 액체 핸들러를 사용하여 계열 희석된 화합물 10 ㎕를 검정 플레이트에 넣었다. 타이터테크(Titertek) 멀티드랍(Multidrop) 8-채널 액체 핸들러를 사용하여 200 μM ATP 용액 20 ㎕를 첨가하였다. p38 키나제 효소 용액 10 ㎕를 상기 멀티메크를 사용하여 검정 플레이트로 옮겼다. 상기 혼합물을 40분 동안 30℃에서 반응하도록 한 후에 새로 제조한 5％ 빙초산 60 ㎕를 멀티드랍으로 첨가하여 반응을 정지시켰다. 상기 용액 80 ㎕를 멀티메크로 "MAPH" 플레이트에 옮겼다. 상기 플레이트를 30분 동안 실온에 두었다가 새로 제조한 0.5％ 빙초산 (1×300 ㎕, 2×200 ㎕)을 사용하여 타이터테크 MAP 추출기에서 세척/흡인하였다. 상기 플레이트를 블럿팅하고 멀티드랍을 사용하여 마이크로신트(MicroScint)-20 섬광액 (패커드 바이오사이언스(Packard Bioscience)) 100 ㎕를 첨가하였다. 플레이트가 30분 동안 방치되도록 하고 PE/Wallac 마이크로베타 트릴룩스(Microbeta Trilux) 섬광 계수기에서 33P-동위원소에 대하여 계수하였다.
실시예 12에 예시된 화합물을 처음에는 10가지 농도 (20 μM 내지 1 nM, 1:3 계열 희석 사용)에서 시험하였다. IC50 값이 25 nM 미만인 화합물은 2 μM의 출발 농도 내지 0.1 nM (1:3 계열 희석)에서 다시 시험하였다. 각 화합물에 대한 IC50 값을 비-선형 회귀법으로 계산하였다 (IDBS 액티비티베이스(ActivityBase) 소프트웨어). 실시예 12를 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, 이것이 p38 키나제 효소를 34 nM의 IC50으로 억제함이 밝혀졌다.
p- MAPKAPK2 의 시험관내 억제
RAW 264.7 세포 (뮤린(murine) 단핵/대식세포주 ATCC)를 RPMI-1640 배지 및 10％ 소 태아 혈청 (FBS)을 함유하는 96웰 플레이트에 50,000개 세포/웰의 밀도로 접종하고, 48시간 동안 상기 세포가 가라앉아 웰의 바닥에 부착되도록 하였다. 전면성장에 도달한 후, 세포에 여러가지 화합물의 10가지 계열 희석물을 2시간 동안 처리하였다. 대조군 화합물은 언제나 포함시켰다. 2시간 후, 아니소마이신 (100 ㎍/mL)을 첨가하고, 세포를 30분 동안 37℃에서 5％ CO2 대기하에 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 고정시키고 과산화수소로 처리하여 내인성 퍼옥시다제를 제거하였다. 마지막으로, 플레이트를 FBS로 블러킹하여 세척하고, 항-포스포-MAPKAPK2 (Thr334, 셀 시그날링(Cell Signaling), 카탈로그 번호 3041) 항체 및 ahP-접합된 2차 항체를 사용하여 ELISA 검정을 수행하였다. 상기 반응은, 신속한 역학적 광 출력 및 높은 신호 강도를 생성하는 고감도 화학발광 기질 ahP인 FEMTO (피어스(Pierce))로 검출하였다. 실시예 12에 예시된 화합물을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, p-MAPKAPK2 효소 생성을 7 nM의 IC50으로 억제하는 것이 밝혀졌다.
예시된 화합물들을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, 이것들이 200 nM 이하의 IC50 값을 갖는 것이 밝혀졌다. 하기하는 화합물을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, 이것이 하기하는 활성을 갖는 것이 밝혀졌다:
실시예 IC 50 ( nM )
1 44
3 25
9 101
23 125
TNF α의 시험관내 억제
마우스 복막 대식세포
티오글리콜레이트 브로쓰 1 mL (증류수 1.0 L 중 효모 추출물 5.0 g , 카시톤 또는 트립티카제 15.0 g, 덱스트로스 5.0 g, 염화나트륨 2.5 g, L-시스틴 0.75 g, 나트륨 티오글리콜레이트 0.5 g, 레스아주린 1.0 mg 및 한천 0.75 g)를 Balb/C 암컷 마우스의 복강에 주사하였다. 주사후 제4일 또는 제5일에 상기 마우스를 희생시킨 다음, RPMI-1640 배지 (바이오위택커(BioWhittaker)) 4 mL를 i.p. 주사하고 복막 대식세포를 시린지로 빼내었다.
사이토킨 생성
마우스 복막 대식세포를 혈구계로 계수하고, 96웰 플레이트에서 10％ 소 태아 혈청을 함유하는 RPMI-1640 배지 중에 5×105개 세포/웰이 되도록 조정하였다. 96웰 플레이트에 200 ㎕/웰을 플레이팅하고, 3시간 이상 동안 상기 세포가 가라앉아 웰의 바닥에 부착되도록 하였다. 시험 화합물 또는 표준 p38 키나제 억제제를 일련의 8가지 농도로 1시간 동안 37℃에서 사전 처리하였다 (20 ㎕/웰). 상기 세포에 50 ng/mL 지다당류 (LPS) 및 10 U/mL 인터페론-γ의 혼합물을 18시간 동안 37℃에서 처리하였다 (20 ㎕/웰). 상기 조건화 배지를 수거하고, 루미넥스(Luminex) 검출 절차를 이용하여 TNFα 생성에 대하여 검정하였다.
TNF α/ 루미넥스 검출 검정
(바이오- 라드 ( Bio - Rad ) 바이오- 플렉스 ( Bio - Plex ) 키트
- 카탈로그 번호 171- G12221 )
동결건조시켜 사전 혼합된 TNFα 표준물 (1개의 표준 튜브/2개의 96웰 플레이트)을 멸균수 50 ㎕로 재구성하였다 (500,000 pg/mL). 샘플을 5초 동안 볼텍싱하여 빙상에서 30분 동안 인큐베이션하고, 사용 전에 5초 동안 볼텍싱하였다. 12개의 1.5 mL 튜브 세트에 #1에서 #12까지로 표시하고, 하기에 표시한 세포 배지의 양을 적절한 튜브에 첨가하였다 (표준 농도는 다음과 같았다: 50,000, 25,000, 12,500, 6,250, 3,125, 1,562.5, 781.3, 390.6, 195.3, 97.7, 48.8 및 24.4 pg/mL). 사전 혼합된 항-사이토킨 접합된 비드를 30초 동안 격렬하게 볼텍싱 (25×)하였다. 항-사이토킨 접합된 비드를 1× 바이오-플렉스 검정 완충제를 사용하여 1× 농도로 희석하였다. 매 플레이트마다 사전 혼합된 비드 240 ㎕를 바이오-플렉스 검정 완충제 5760 ㎕에 첨가하였다. 밀리포어(Millipore) 96웰 필터 플레이트를 블러킹 완충제 100 ㎕/웰로 블러킹하였다. 블러킹 완충제를 밀리포어 여과 시스템을 사용하여 여과한 후에 타월로 건조시켰다. 필터 플레이트에서 바이오-플렉스 검정 완충제 100 ㎕/웰로 2회 세척을 행하고 타월로 건조시켰다. 1× 항-사이토킨 접합된 비드를 15초 동안 볼텍싱하고 각 웰에 50 ㎕씩 첨가하였다. 이것을 여과하고 타월로 건조시켰다. 플레이트에서 바이오-플렉스 세척 완충제 100 ㎕/웰로 2회 세척을 행하였다. 다시, 이것을 여과하고 타월로 건조시켰다. 각 샘플 웰에 샘플 또는 표준물 50 ㎕씩을 첨가하였다. 이것을 빛이 차단된 진탕기에서 60초 동안 6으로 설정하여 실온에서 인큐베이션한 후에 3으로 설정하여 30분 동안 인큐베이션하고, 이후에는 냉장고에 밤새 넣어 두었다. 바이오-플렉스 세척 완충제로 3회 세척을 행하였다. 여과하여 타월로 건조시켰다. 매 플레이트마다 사이토킨 검출 항체를 제조 (사용 전 약 10분)하고, 사전 혼합된 사이토킨 검출 항체 스톡 60 ㎕를 바이오-플렉스 검출 항체 희석제 5940 ㎕에 첨가하였다.
사이토킨 검출 항체 50 ㎕를 첨가하고, 이것을 빛이 차단된 진탕기에서 60초 동안 6으로 설정하여 실온에서 인큐베이션한 후에 3으로 설정하여 30분 동안 인큐베이션하였다. 바이오-플렉스 세척 완충제로 3회 세척을 행하였다. 여과하여 타월로 건조시켰다. 매 플레이트마다 스트렙트-PE(Strept-PE)를 제조 (사용 전 약 10분)하고, 바이오-플렉스 검정 완충제 5940 ㎕에 60 ㎕를 첨가하였다. 각 웰에 스트렙타비딘-PE 50 ㎕씩을 첨가하고, 이것을 빛이 차단된 진탕기에서 60초 동안 6으로 설정하여 실온에서 인큐베이션한 후에 3으로 설정하여 10분 동안 인큐베이션하였다. 바이오-플렉스 세척 완충제로 3회 세척을 행하였다. 이것을 여과하였다. 비드를 바이오-플렉스 검정 완충제 100 ㎕/웰 중에 재현탁하였다. 표준물 및 샘플을 루미넥스 기기에서 판독하였다. 이어서, 4-파라미터 로지스트 회귀 방법 (바이오-플렉스 매니저 2.0, 바이오-라드)을 이용하여 2벌로 생성된 12-점 표준 곡선을 기초로 하여 상기 강도 판독치를 pg/mL 단위로 전환시키고 IC50을 계산하였다.
실시예 12에 예시된 화합물을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, 이것은 TNFα를 9 nM 미만의 IC50으로 시험관내 저해하였다.
TNF α의 생체내 억제
화합물을 암컷 Balb/c 마우스 (투여량 당 6 마리 마우스)에게 p.o. 투여하였다 (30, 10, 3 및 1 mg/kg). 4가지 투여량으로 화합물을 투여하고 1시간이 지난 후에 (P.O., 부피: 마우스 1 마리 당 0.1 mL, 비히클: 물 중 1％ NaCMC/0.25％ Tween-80), 마우스에게 LPS를 400 ㎍/kg로 IP-주사하였다. LPS 시험투여(challenge) 후 1.5시간이 지난 후에 마우스를 이소플루란으로 마취시키고, 심장 천자로 채혈하였다. 혈장 중 TNFα-수준을 알앤디 시스템즈(R＆D Systems)의 ELISA 키트로 측정하였고, 투여량-반응 ED50을 결정하였다.
실시예 12에 예시된 화합물을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, 이것은 TNFα를 1.0 mg/kg의 TMED50으로 생체내 저해하였다. 역치 최소 유효 투여량 (Threshold Minimum Effective Dose, TMED) 50은, 50％ 이상의 억제가 달성되고 통계적으로 대조군/위약과는 상이한 투여량이다.
경구 노출
화합물을 수컷 피셔(Fischer) 344 래트에서의 경구 노출에 대하여 스크리닝하였다. 동물들을 밤새 굶기고, Tween 80 (0.25％ v/v) 및 소포제 (0.1％ w/v)를 함유하는 나트륨 카르복시메틸셀룰로스 중의 현탁액 (1％ w/v)으로 제조한 시험 화합물을 투여하였다. 투여용 현탁액은 1 mg/mL로 제조되었고, 1 mL/kg로 가바즈 투여되었다. 상기 투여량 투여 후 0.5시간 내지 7시간 사이에 혈액 샘플을 취하고, 원심분리로 혈장을 준비하였다. 혈장 샘플을 온라인 고상 추출 및 LC/MS/MS로 분석하였다.
실시예 12에 예시된 화합물을 본질적으로 상기한 바와 같이 시험하였고, Cmax는 9390 ng/mL이었고 AUC(0 내지 7시간)은 36800 ng.h/mL이었다.
관절내 LPS 유도된 TNF α에 대한 효과
래트 발목에 LPS를 관절내 주사하여 TNFα 합성을 유도하였고, 이것은 활막 세정액 중에서 측정할 수 있다. 높은 수준의 TNFα가 2시간 이내에 검출가능하였다. 관절은 관절염이 발병하는 부위이기 때문에, 이 모델은 경구 투여된 화합물이 활막에서의 염증 반응에 효과가 있는지 여부를 신속하게 결정할 수 있다.
6마리의 암컷 루이스(Lewis) 래트 (150 g 내지 200 g)를 각 처치군으로 분류하였다. 상기 동물에게 비히클 (1％ Na카르복시메틸셀룰로스-0.25％ Tween 80) 또는 시험 화합물 (1 mg/kg, 3 mg/kg, 10 mg/kg 및 30 mg/kg)을 경구 투여하였다. 1시간 후, LPS 10 ㎕ (10 ㎍)를 각 래트의 오른쪽 발목에 관절내 투여하였고, 왼쪽 발목에는 염수 10 ㎕를 투여하였다. 2시간 후, 각 발목을 염수 100 ㎕로 세정하였다. 세정액을 수집하여 -80℃에서 보관하였다.
- 제1군: 비히클 (1％ NaCMC-0.25％ Tween 80, 1 mL, PO)
- 제2군: 시험 화합물 (1 mg/kg, 1 mL, PO)
- 제3군: 시험 화합물 (3 mg/kg, 1 mL, PO)
- 제4군: 시험 화합물 (10 mg/kg, 1 mL, PO)
- 제5군: 시험 화합물 (30 mg/kg, 1 mL, PO)
TNFα는 시판되는 ELISA 키트 (알앤디, RTA00)로 측정하였다. 실시예 12에 예시된 화합물로 처치하면 활막 세정액 중에서 측정한 바와 같이 TNFα 합성의 투여량-반응 억제가 나타났고, TMED50 = 2.54 mg/kg이었다.
유동세포계측법에 의한, 아니소마이신 -자극된 마우스의
생체외 포스포 - MAPKAPK2 억제 검정
8 내지 10주령의 암컷 Balb/c 마우스를 타코닉 인크.(Taconic Inc.)에서 구입하고, 0.2 mL 부피의 화합물을 30, 10, 3, 1 mg/kg의 농도로 po 투여하였다. 2시간 후 또는 달리 명시한 시간 간격으로 심장 천자를 수행하여 채혈하여 EDTA-함유 튜브에 수집하였다. 혈액 100 ㎕를 37℃에서 10분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 전혈을 FITC-접합된 래트 항-마우스 Ly-6G mAb (1:250) 및 APC-접합된 래트 항-마우스 CD11b mAb (1:100)와 혼합하고, 10 ㎍/mL 아니소마이신으로 자극하였다. 세포 표면 항원 염색 및 아니소마이신 자극 2가지 모두를 37℃에서 15분 동안 수행한 후에 용균/고정(Lyse/Fix) 완충제 (비디 바이오사이언시스(BD Biosciences), 카탈로그 번호 558049)를 10분 동안 실온에서 처치하였다. 용균시킨 혈액 샘플을 600×g에서 8분 동안 실온에서 회전시키면서 PBS 4 mL로 1회의 추가 세척을 행하였다. 투과화 배지 B (칼타그(Caltag), 카탈로그 번호 GAS002S-5) 중의 희석된 항-포스포-MAPKAPK-2 (Thr334) 항체 (1:100 희석) (셀 시그날링, 카탈로그 번호 3041) 및 마우스 BD Fc 블럭 (1:100 희석) (비디 바이오사이언시스, 553141) 200 ㎕를 혈액 세포에 첨가하여 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후에는 염색/세척 완충제 3 mL를 첨가하고, 세포를 상기한 바와 같이 회전시키면서 염색/세척 완충제 3 mL로 추가 세척을 행하였다. 이어서, 벡크만 콜터(Coulter) F500을 사용하여 세포로 유동세포계측 검정을 실시하였다. 게이팅된(gated) CD11b+Ly6G-세포에서 포스포노-MapKap-K2 염색의 평균 형광을 측정하였다. 데이타 분석은 JMP 프로그램으로 수행하였다. 실시예 12에 예시된 화합물로 처치하여 p-MAPKAPK2 합성의 투여량-반응 억제가 달성되었고, TMED50 = 2.20 mg/kg이었다.
래트 콜라겐은 관절염 효능 모델을 유도함
암컷 루이스 래트 (약 190 g, 찰스 리버 랩스(Charles River Labs))를 동일 부피의 아쥬반트 (수산화알루미늄)으로 에멀젼화한 소 제II형 콜라겐 (2 mg/mL)으로 면역화하였다. 상기 래트를 꼬리 아래쪽 근처 등에서 상기 에멀젼 대략 0.3 mg으로 피내 면역화하였다. 7일 후에는 동일 프로토콜에 따라 모든 동물을 재면역화하였다. 제1 면역화 후 12일 내지 14일이 지난 후에 상기 래트에서는 관절염 (한쪽 발목 또는 양쪽 발목의 종창(swelling) 및 발적을 특징으로 함)이 발병하기 시작했다. 관절염의 첫번째 징후에서 래트를 5개 처치군으로 균등하게 분배하고, 각 래트에게 14일 동안 bid 투여하여 처치를 시작하였다.
처치군:
- 제1군: 비히클 (1％ Na카르복시메틸셀룰로스 + 0.25％ Tween 80) 1 mL, PO, bid×14일
- 제2군: 시험 화합물, 5 mg/kg, 1 mL, PO, bid×14
- 제3군: 시험 화합물, 15 mg/kg, 1 mL, PO, bid×14
- 제4군: 시험 화합물, 30 mg/kg, 1 mL, PO, bid×14
- 제5군: 프레드니솔론 10 mg/kg, 1 mL, PO, qd×14
칼리퍼스를 사용하여 발목 직경을 1주에 5일 측정하여 기록하였다. 데이타는 복합 염증 스코어 및 수행한 통계적 분석으로 생성된 곡선하면적 (AUC)으로 나타냈다.
본 발명의 화합물은 경구 투여하는 것이 바람직하다. 그러나, 경구 투여가 유일한 경로이거나 심지어는 유일한 바람직한 경로인 것은 아니다. 예를 들어, 경구 의약을 복용하는 것을 잘 잊거나 경구 의약을 복용하는 것이 까다로운 환자에게는 경피 투여가 매우 바람직할 수도 있고, 편의성의 측면이나 경구 투여와 관련된 잠재적인 합병증을 피하기 위해서는 정맥내 경로가 바람직할 수도 있다. 화학식 I의 화합물은 특별한 상황에서는 경피, 근육내, 비내 또는 직장내 경로로 투여될 수도 있다. 투여 경로는 임의의 방식으로 달라질 수 있으며, 약물의 물성, 환자 및 돌보는 사람의 편의 및 다른 관련 환경에 따른 제약이 있다 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, Mack Publishing Co. (1990)].
제약 조성물은 제약 업계에 공지된 방식으로 제조된다. 담체 또는 부형제는 활성 성분을 위한 비히클 또는 매질로 기능할 수 있는 고체, 반고체 또는 액체 물질일 수 있다. 적합한 담체 또는 부형제는 당업계에 공지되어 있다. 제약 조성물은 경구, 흡입, 비경구 또는 국소 사용에 적합할 수 있고, 환자에게 정제, 캡슐제, 에어로졸제, 흡입제, 좌제, 용액제, 현탁액제 등의 형태로 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물은 예를 들어 불활성 희석제 또는 캡슐제를 사용하거나 또는 정제로 압축되어 경구 투여될 수 있다. 경구 치료 투여 목적을 위해, 화합물을 부형제와 함께 혼입시키고, 정제, 트로케제, 캡슐제, 엘릭시르제, 현탁액제, 시럽제, 웨이퍼제, 츄잉 검제 등의 형태로 사용할 수 있다. 이들 제제는 활성 성분인 본 발명의 화합물을 4％ 이상 함유해야 하지만, 이것은 특정 형태에 따라 달라질 수 있고, 편리하게는 단위의 4 중량％ 내지 약 70 중량％일 수 있다. 조성물에 존재하는 화합물의 양은 적합한 투여량이 달성되는 양이다. 본 발명의 바람직한 조성물 및 제제는 당업자에게 잘 공지된 방법으로 결정될 수 있다.
정제, 환제, 캡슐제, 트로케제 등은 하기하는 아쥬반트 중 1종 이상을 함유할 수도 있다: 결합제, 예컨대 포비돈, 히드록시프로필 셀룰로스, 미세결정질 셀룰로스 또는 젤라틴; 부형제 또는 희석제, 예컨대 전분, 락토스, 미세결정질 셀룰로스 또는 인산이칼슘; 붕해제, 예컨대 크로스카르멜로스, 크로스포비돈, 글리콜산나트륨 전분, 옥수수 전분 등; 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산, 활석 또는 수소화된 식물성 오일; 활택제, 예컨대 콜로이드상 이산화규소; 습윤제, 예컨대 나트륨 라우릴 술페이트 및 폴리소르베이트 80; 및 감미제, 예컨대 수크로스, 아스파르탐 또는 사카린 (첨가될 수 있음); 또는 향미제, 예컨대 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향미제. 투여량 단위 형태가 캡슐제인 경우에는 상기 유형의 물질 이외에도 액상 담체, 예컨대 폴리에틸렌 글리콜 또는 지방 오일을 함유할 수 있다. 다른 투여량 단위 형태는 투여량 단위의 물리적 형태를 개질하는 기타 각종 물질을 예를 들어 코팅물로서 함유할 수 있다. 따라서, 정제 또는 환제를 당, 히드록시프로필 메틸셀룰로스, 폴리메타크릴레이트 또는 다른 코팅제로 코팅할 수 있다. 시럽제는 본 발명의 화합물 이외에도 감미제로서의 수크로스 및 특정 보존제, 염료 및 착색제 및 향미제를 함유할 수 있다. 이러한 각종 조성물 제조에 사용되는 물질은 제약상 순수하고 사용되는 양에서 비독성이어야 한다. 바람직한 제제는 10％ N-메틸피롤리돈을 화학식 I의 화합물의 원하는 투여량에 가한 후에 20％ 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린, 5％ 메틸셀룰로스, 0.5％ 소포제 및 0.01 N HCl (w/w ％)의 용액을 가하여 제조된다.
화학식 I의 화합물은 광범위한 투여량 범위에 걸쳐 일반적으로 유효하다. 예를 들어, 1일 투여량은 통상적으로 체중 1 kg 당 약 0.0001 mg 내지 약 30 mg의 범위 내에 속한다. 일부 예에서는 상기 범위의 하한 미만의 투여량 수준이 보다 더 적절할 수 있지만, 다른 경우에는 훨씬 더 많은 투여량이 어떠한 유해한 부작용도 야기하지 않으며 사용될 수 있고, 따라서 상기 투여량 범위는 어떠한 방식으로도 본 발명의 범위를 제한하려는 것이 아니다. 실제 투여되는 화합물의 양은 치료될 상태, 선택된 투여 경로, 투여되는 실제 화합물(들), 개개의 환자의 연령, 체중 및 반응, 및 환자 증상의 중증도를 비롯한 관련 상황을 확인하여 의사에 의해 결정된다는 것을 이해할 것이다.

Claims (7)

  1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염:
    <화학식 I>
    Figure 112008030013256-PCT00045
    상기 식에서,
    X는
    Figure 112008030013256-PCT00046
    로 구성된 군에서 선택되고,
    R1은 C1-C4 알킬; C1-C4 알콕시, 메틸 및 트리플루오로메틸로 구성된 군에서 선택된 1개 또는 2개의 치환체로 임의로 치환된 C3-C4 시클로알킬; 또는 C1-C4 알킬할로이고,
    R2는 C1-C4 알킬로 임의로 치환된 페닐; 또는 C1-C4 알킬로 임의로 치환된 피리디닐이며,
    R3은 아미노; C1-C4 알킬; C1-C4 알콕시; C1-C4 알킬할로; 메틸, 트리플루오로메틸 또는 할로로부터 선택된 치환체로 임의로 치환된 C3-C4 시클로알킬; 또는 할 로, C1-C4 알킬 및 C1-C4 알콕시로 구성된 군에서 선택된 제1 치환체로 임의로 치환되고 임의로는 할로로부터 선택된 제2 치환체로 추가로 치환된 페닐 또는 티에닐이다.
  2. 제1항에 있어서, X가
    Figure 112008030013256-PCT00047
    인 화합물.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, R2가 4-톨릴인 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 1-메틸-1-시클로프로필, 2-플루오로-1,1-디메틸-에틸, 또는 2-플루오로-1-플루오로메틸-1-메틸-에틸인 화합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, R3이 1-메틸-1-시클로프로필인 화합물.
  6. 1-{1-[1-(1-메틸-시클로프로판카르보닐)-피페리딘-4-일옥시]-이소퀴놀린-4-일}-3-[5-(1-메틸-시클로프로필)-2-p-톨릴-2H-피라졸-3-일]-우레아인 하기 화학식 의 화합물 또는 그의 제약상 허용가능한 염.
    Figure 112008030013256-PCT00048
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항의 화합물 및 제약상 허용가능한 부형제, 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 제제.
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