KR20070090005A - 스크라레올 또는 그 유도체를 포함하는 조성물 및 이의용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올(sclareol) 또는 그 유도체를 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명의 조성물은 스크라레올 또는 그 유도체의 개선된 효능, 안정성 및 생리활성 특성을 제공한다.

당단백질, 스크라레올, 스크라레올라이드

Description

스크라레올 또는 그 유도체를 포함하는 조성물 및 이의 용도{COMPOSITIONS COMPRISING SCLAREOL OR DERIVATIVES THEREOF AND USES THEROF}

본 발명은 스크라레올(sclareol) 또는 그 유도체를 포함하는 조성 및 사이클릭 아데노신 모노포스페이트(cAMP)의 활성을 증가시키는 방법에 관한 것이다.

미국 인구의 약 40%가 비만으로 고생하는 것으로 보고되고 있다.(Glazer , Arch, Intern . Med . 2001, 161:1814-1824). 비만은 심장혈관 질환, 호흡기 질환, 수명성 무호흡, 픽-위치안(Pick-Wichian) 증후군, 진성 당뇨병 및 폐고혈압과 같은 많은 질병에 관련이 있었다.

체중 감량 계획이 효과적이기 위해서는 지방을 태우는 능력이 증가시켜 지방을 소모하고 저장된 지방을 사용하여야 한다. 체중 감량 이외에, 지방을 태우는 향상된 능력은 보디빌더, 운동가 등 및 제지방량(lean body mass)을 희망하는 개인들에게 중요하다.

사이클릭 아데노신 모노포스페이트(cAMP, 고리형 아데노신 1인산염)은 세포 표면으로부터 세포 내 단백질로 신호(signal)를 전달하는 중요한 제2 전달자이다. cAMP는 세포 내 다양한 단백질 키나아제(kinase)를 활성화하여 자신의 영향을 끼치는 것으로 생각된다. 세포 내 cAMP의 농도 상승은 다수의 신진대사 과정에 관여하 는 것으로 보고되고 있다.

예를 들어, cAMP의 농도 상승은 글리코겐의 분해를 가속하며, 글루코오스의 주요 저장 형태인 글리코겐의 합성을 저해하는 역할을 한다. 게다가, 지방세포(즉, 지방 저장세포)에서, cAMP의 농도의 증가는 단백질 키나아제에 의존하는 cAMP를 활성화하며, 교대로, 효소 리파아제를 활성화한다. 리파아제는 트리아실글리세롤을 지방산으로 가수분해하며, 지방분해(lipolysis)로 알려져 있다. 더욱이, cAMP의 농도 상승은 에스트로겐, 프로게스테론, 및 테스토스테론과 같은 호르몬의 합성을 증가시키는 것으로 보고되고 있다.

그러므로, cAMP의 세포 내 농도를 증가시킬 수 있는 조성물은 체중 감량을 유도하고, 지방분해 및/또는 리비도(libido)를 증가시키는데 유리하다.

스크라레올의 유도체인 스크라레올라이드(sclareolide)는 사이클릭 AMP 활성을 증가시키는데 효과적인 것으로 보고되고 있다. 현재, 스크라레올라이드를 함유하는 여러 개의 제품이 있다. 이들 제품은 예를 들어 제나드린(Xenadrine) 40을 포함하며 사이토딘 사(Cytodyne LLC.)의 HOT-ROX^TM으로부터 이용가능하다.

불행하게도, 스크라레올라이드를 함유하는 현재 이용가능한 제품은 많은 이점을 제공하지 않는다. 한가지 이유는 현재 이용가능한 제품중의 스크라레올라이드의 함량 및 품질(예를 들어, 효능, 안정성 및 생물활성)이 부적합하다는 것이다.

스크라레올은 전형적으로 클라리 세이지(Clary Sage) 식물(Salvia sclarea)로부터 얻을 수 있다. 따라서,스크라레올 및 그 유도체(스크라레올라이드)의 이용 가능성은 또한 제한되어 있다.

그러므로, 보다 큰 효능, 증가된 안정성 및 생물활성을 갖는 스크라레올 또는 그 유도체의 새로운 조성물이 요구되었다. 그래서, 상술한 바와 같은 유익한 효과를 얻기 위해 보다 적은 함량의 스크라레올 또는 그 유도체가 필요하다.

발명의 요약

본 발명은 당단백질 매트릭스(glycoprotein matrix)에 의해 결합된 스크라레올 또는 그 유도체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 하나의 실시태양에서, 유도체는 스크라레올라이드이다. 다른 실시태양에서, 조성물은 미생물을 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 미생물은 당단백질 매트릭스를 생성한다.

바람직한 실시태양에서, 미생물은 사카로마이세스 세르비지에(Saccaromyces cervisiae)와 같은 효모를 포함한다. 다른 실시태양에서, 미생물은 락토바실러스 아시도필러스(Lactobacillus Acidophilus), 박테리움 비피더스(Bacterium bifido) 또는 이들의 결합체를 포함하는 락토바실러스와 같은 박테리아를 포함한다. 또 다른 실시태양에서, 미생물은 효모 및 박테리아를 포함한다.

본 발명의 하나의 관점에서, 조성물은 또한, 안정제 및/또는 첨가제를 포함한다.

본 발명은 또한, 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올 및 그 유도체를 포함하는 영양 보충제에 관한 것이다.

본 발명의 또 다른 관점에서, 본 발명은 또한 숙주(host)에서 사이클릭 아데노신 모노포스페이트(cAMP) 활성을 증가시키는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올 및 그 유도체를 포함하는 효과적인 함량의 조성물을 숙주에 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 다른 관점에서, 체중 감량을 필요로 하는 숙주의 체중감량을 유도하는 방법이 제공된다. 상기 방법은 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올 및 그 유도체를 포함하는 효과적인 함량의 조성물을 숙주에 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 또 다른 관점에서, 리비도 증가를 필요로 하는 숙주의 리비도를 증가시키는 방법이 제공된다. 상기 방법은 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올 및 그 유도체를 포함하는 효과적인 함량의 조성물을 숙주에 투여하는 것을 포함한다.

본 발명의 다른 추가적인 관점에서, 지방분해를 필요로 하는 지방분해의 증가방법이 제공된다. 상기 방법은 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올 및 그 유도체를 포함하는 효과적인 함량의 조성물을 숙주에 투여하는 것을 포함한다.

발명의 상세한 설명

본 발명에 따라서, 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올 및 그 유도체를 포함하는 조성물이 제공된다. 본 발명의 조성물은 스크라레올 및 그 유도체의 개선된 효능, 안정성 및 생물활성을 제공한다.

스크라레올

스크라레올은 하기 화학식 I에 나타낸 일반식을 갖는 생물활성 디다핀(diterpine)이다.

화학식 I

스크라레올은 전형적으로 클라리 세이지 식물(Salvia sclarea L)로부터 얻을 수 있다. 통상적으로 스크라레올은 클라리 세이지 식물의 꽃 머리에서 수득할 수 있다. 스크라레올을 수득하는데 기술분야에서 알려진 스크라레올을 함유하는 어떠한 식물원 유기체도 사용될 수 있다.

스크라레올은 기술분야의 당업자에게 공지된 방법에 의해 유기체로부터 수득할 수 있다. 전형적으로 스크라레올은 용매 추출에 의해 얻어진다. 예를 들어 미국 특허 제3,060,172호는 클라리 세이지로부터 스크라레올을 분리하는 공정이 기술하고 있다. 미국 특허 제5,945,546호를 참고하시오. 미국 특허 제3,060,172호 및 5,945,546호는 참고를 위해 본원에 포함하였다.

스크라레올 추출용 용매는 극성 용매와 같은 어떠한 용매가 사용될 수 있다. 극성 용매의 예는 물이다.

본원 명세서에 사용된 용어 "스크라레올"은 스크라레올 및 스크라레올의 유도체를 말한다. 스크라레올 유도체의 예로는 스크라레올라이드가 있다. 스크라레올라이드는 하기의 화학식 II의 일반식을 갖는다.

화학식 II

스크라레올라이드는 해당기술분야에 공지된 어떤 방법으로 제조될 수 있다. 예를 들어, 스크라레올라이드는 전형적으로 화학적 산화에 이은 스크라레올의 락톤화반응(lactonization) 또는 효모 균주를 이용한 스크라레올의 생물전환 (biotransformation)에 의해 제조될 수 있다. 스크라레올라이드의 제조방법의 예시는 Schneider et al의 미국 특허 제5,525,728호, Gerke et al의 미국 특허 제5,247,100호 및 Gerke et al의 독일 특허출원 DE 제3,942,358호에 기술된 방법을 포함한다.

간단히 말해서, 이들 공정은 루테늄 촉매 및 산화단계를 사용하여 스크라레올을 비정제 스크라레올라이드 생성물로 전환한다. 스크라레올을 스크라레올라이드로 전환시키는 흔히 사용되는 다른 예시적인 방법은 Farbood et al의 미국 특허 제4,970,163호 및 제5,212,078호에 기술된 생물전환 및 발효 방법을 포함한다. 상기 기술한 방법으로 제조된 스크라레올라이드는 보통 습식 또는 건식 케이크 형태로 제공되며, 약 90% 내지 98%의 순도를 갖는다. 스크라레올로부터 스크라레올라이드의 제조방법을 설명한 상기 특허들의 명세서는 전부 참고를 위해 본원에 포함하였다.

당단백질 매트릭스

스크라레올은 당단백질 매트릭스에 의해 결합된다. 당단백질 매트릭스는 서로 결합된 다수의 당단백질 분자로 구성된 분자 네트워크이다. 당단백질은 탄수화물 기 및 단순한 단백질로 구성된다.

당단백질 중의 탄수화물은 단당류, 이당류, 올리고당, 또는 다당류와 같은 적당한 탄수화물일 수 있다. 올리고당이 바람직하다. 당단백질의 단백질은 어떤 작당한 폴리펩티드일 수 있다. 당단백질 매트릭스중의 단백질에 대한 탄수화물의 비율은 다양할 수 있는데 예를 들어 중량비로 99:1 내지 1:99일 수 있다. 약 1:1의 비율이 바람직하다.

조성물

본 발명의 조성물은 하나 이상의 스크라레올에 결합된 당단백질 매트릭스를 포함한다. 당단백질 및 스크라레올은 예를 들어, 화학 반응, 및/또는 2차 화학결합 즉, 반데르발스의 힘에 의해 서로 물리적 및/또는 화학적으로 결합될 수 있다. 이론적으로 결합되지 않는 것은 당단백질 매트릭스가 약한 공유결합에 의해 스크라레올에 결합되는 것으로 생각된다.

본 발명의 조성물은 필수적으로 특정%의 스크라레올을 함유할 수 있다. 예를 들어, 스크라레올의 비율(%)은 조성물의 0.1 내지 99중량%이며 스크라레올 및 숙주중의 소망하는 결과에 따라 달라진다. 바람직한 실시태양에서, 조성물은 약 2 내지 50중량%의 조성물을 함유한다.

스크라레올에 대한 당단백질의 비율 또한 다양하다. 스크라레올에 대한 당단백질 매트릭스의 비율은 조성물 중의 모든 또는 대부분의 스크라레올이 당단백질 매트릭스에 의해 결합되도록 하는 것이 바람직하다. 실질적으로 모든 스크라레올이 결합될 수 있도록 높은 비율의 당단백질 매트릭스가 사용될 수 있다.

본 발명은 또한 당단백질이 전체 함량의 스크라레올을 결합하는 것이 불충분한 조성물도 고려하였다. 이러한 경우, 스크라레올에 대한 당단백질 매트릭스의 비율은 적어질 수 있다.

바람직한 실시태양에서, 당단백질 매트릭스의 소스는 미생물이며, 본 발명의 바람직한 조성물은 미생물을 포함한다. 조성물의 제조공정의 마지막 단계에서, 이들 미생물은 통상적으로 비활성이다.

당단백질 매트릭스는 스크라레올의 존재하에 미생물을 발효시켜 스크라레올에 결합될 수 있다. 본원에서 사용한 발효는 미생물이 아미노산 및 탄수화물과 같은 원료를 대사하여 당단백질을 생성하는 공정이다.

미생물은 세포 내 및 세포 외로 당단백질을 생산한다. 세포 내 당단백질은 주로 미생물의 세포질에 위치하며, 미생물의 물리적 구조의 일부가 된다. 당단백질을 생산하는 미생물로부터 나온 당단백질은 주로 세포 외에 존재하며, 스크라레올에 결합이 가능하다. 세포 내 당단백질은 또한 당단백질 생성 후에 미생물의 파열에 의하여 스크라레올에 결합할 수 있다.

당단백질 매트릭스를 생산하는 미생물은 효모 및 일부 박테리아를 포함하나, 이에 한정하지 않는다. 바람직한 효모는 사카로마이세스 세르비지에이다. 당단백질을 생산하는 박테리아는 락토바실러스 속(genus)내의 박테리아를 포함한다. 예를 들어 이러한 박테리아는 락토바실러스 아시도필러스, 락토바실러스 불가리쿠스, 락토바실러스 카오카시커스, 및 박테리움 비피더스을 포함하나 이에 한정하지 않는다. 바람직한 박테리아는 락토바실러스 아시도필러스 또는 박테리움 비피더스이다.

하나 이상의 미생물이 당단백질을 생산하는 경우, 미생물의 결합하여 사용할 수 있다. 미생물을 결합하여 사용하는 경우, 한가지 형태의 미생물의 성장은 다른 미생물의 성장을 방해하지 말아야 한다. 예를 들어 당단백질을 생산하는 여러 형태의 다른 효모가 사용될 수 있다. 이러한 결합은 락토바실러스 아시도필러스와 같은 여러 형태의 박테리아가 당단백질을 생산하므로 특히 유리하다. 예를 들어, 하나의 실시태양에서 미생물은 락토바실러스 아시도필러스 및 박테리움 비피더스의 결합을 포함한다.

화합물과 당단백질 매트릭스의 결합방법은 파마켐 랩스(PharmaChen labs)에 양도된 미국 특허출원 제09/757,222호 및 09/962,917호에 기술되어 있다. 이들 상기에 언급된 특허출원서에 기재된 방법은 스크라레올에 당단백질 매트릭스를 결합을 위해 수정될 수 있다. 미국 특허출원 제09/757,222호 및 09/962,917호는 참고를 위해 본원에 포함되었다.

안정제 및 첨가제

본 발명의 조성물은 안정제 및/또는 첨가제를 포함할 수 있다. 안정제 및 첨가제는 예를 들어, 약학적으로 허용가능한 완충제, 부형제(excipient), 희석제, 계면활성제, 보조제, 향료 등을 포함할 수 있다. 이러한 첨가제의 함량은 해당 기술분야의 숙련자가 결정할 수 있다.

첨가제는 기술분야의 숙련자에게 공지된 어떤 첨가제일 수 있다. 첨가제는 당단백질을 생산하는 미생물의 생전능력을 증진하거나, 활성성분에 결합되는 당단백질의 수율을 증가시키기 위해 첨가될 수 있다. 예를 들어, 미생물의 생존력을 증가시키기 위해 염(salts)이 첨가될 수 있다. 이러한 염으로는 탄산칼슘, 황산암모늄, 황산마그네슘을 포함하나 이에 한정하지 않는다. 탄산칼슘이 바람직하다. 미생물 용액에 첨가되는 염의 함량은 기술분야에 공지되었듯이 미생물의 생존력을 증대시키는데 원하는 결과를 얻기에 충분한 양이어야 한다. 미생물 용액에 첨가되는 염의 바람직한 범위는 사카로마이세스 세르비지에와 같은 미생물 375g당 약 25 내지 약 150g의 염이다. 미생물 375g당 약 40g의 염이 가장 바람직하다.

본 발명의 조성물은 생체 적합성에 맞도록 제조될 수 있다. 스크라레올 조성물이 섭취될 때, 당단백질 매트릭스를 생산하는데 사용되는 미생물은 포유동물 특히 사람이 소비하기에 적합하여야 한다. 이러한 미생물의 예로는 락토바실러스 아시도필러스 및 사카로마이세스 세르비지에를 포함한다.

투약 및 투여

스크라레올을 함유하는 당단백질 매트릭스 조성물은 국소적으로 또는 전신(온몸)에 투여될 수 있다. 전신 투여는 장내 또는 장관외(비경구) 투여일 수 있다. 장내 투여가 바람직하다. 예를 들어, 조성물은 경구로 쉽게 투여될 수 있다. 액체 또는 고형분(예, 정제, 젤라틴 캡슐) 제형이 사용될 수 있다. 제제는 약학적으로 허용가능한 부형제(excipient), 보조제, 희석제, 또는 담체를 포함할 수 있다. 조성물은 기술분야의 숙련자가 알고 있는 적당한 약학적 담체 또는 부형제와 함께 정맥내 투여될 수 있다.

바람직한 실시태양에서, 청구된 본 발명의 조성물은 영양 보충제의 형태로 제형화된다. 영양 보충제는 전형적으로 경구투여된다. 보충제는 액체 또는 고형분(예, 정제, 젤라틴 캡슐) 제형이 사용될 수 있다.

청구된 조성물의 효과적인 함량은 사이클릭 아데노신 모노포스페이트(cAMP)의 활성을 증가시키는데 효과적인 함량이다. 사이클릭 아데노신 모노포스페이트의 증가는 예를 들어 체중감량 유도, 리비도 증가 및/또는 지방 분해 증가를 가져온다. 효과적인 함량은 임상전 및 임상시험 동안 임상의 및 내과의사에게 잘 알려진 방법으로 결정한다.

전형적으로, 스크라레올라이드의 투여량은 약 30 내지 75mg/1회분이다. 일반적으로, 당단백질 매트릭스에 결합된 스크라레올라이드의 투여량은 스크라레올라이드 단독 투여보다 적을 것이다. 그러므로, 당단백질 매트릭스에 결합된 스크라레올라이드의 적당한 투여량은 약 5 내지 50mg/1회분이다.

숙주

바람직한 실시태양에서 숙주는 사람이다. 포유동물로는 사람뿐만 아니라 개 및 고양이와 같은 애완동물, 래트, 마우스와 같은 실험용 동물, 및 말과 소와 같은 농장 동물을 포함한다. 사람이 가장 바람직하다.

사이클릭 아데노신 모노포스페이트(cAMP) 증가가 필요한 숙주란 예를 들어, cAMP 활성의 증가가 숙주의 건강이나 웰빙(well-being)에 이로운 조건에 있는 숙주이다. cAMP 활성의 증가로 이익을 갖는 숙주 조건의 예로는 체중 감량이 필요한 숙주, 지방 분해 증가가 필요한 숙주, 리비도 증가가 필요한 숙주, 및 지방 생성(adipogenesis) 억제가 필요한 숙주를 포함하나 이에 한정하지 않는다.

체중 감량이 필요한 숙주는 예를 들어, 숙주의 체중이 건강에 이롭지 않은 어떤 균주이다. 체중 감량이 필요한 숙주의 다른 예로는 예를 들어, 체중 과다로 인한 자신의 외모에 불행한 숙주이다. 체중 감량이 필요한 숙주의 몇몇 예로는 진성 당뇨병 및 과체중으로 고생하는 개인들로 이에 제한하지 않는다.

포유동물의 체중이 숙주의 신장 및 신체 골격에 따른 이상적인 체중보다 많이 나가는 경우 숙주는 과체중인 것으로 고려된다. 숙주의 이상적인 체중은 기술분야의 숙련자에게 공지되어 있다. 숙주의 체중이 그들의 이상적인 체중보다 약 10% 이상, 바람직하게는 약 30% 이상, 더욱 바람직하게는 약 60% 이상, 및 가장 바람직하게는 약 100% 이상인 경우 체중 감량이 필요한 것으로 생각된다.

숙주 예를 들어, 사람은 자신의 체중이 신체의 과잉으로 축적된 지방의 결과로 골격 및 육체적 요구조건의 한계를 넘어 증가하는 경우에 비만인 것으로 간주된다. 비만은 과식 또는 의학적 질환(조건)과 같은 많은 다른 힘의 결과이다. 비만을 일으킬 수 있는 의학적 질환은 예를 들어 낮은 대사율이다.

고도비만(Morbid obesity)은 개인의 체중이 이상체중보다 2배, 3배 또는 4배인 경우 발생하며, 소위 심각한 삶을 위협하는 질환과 관련이 있다.

지방분해 증가가 필요한 숙주는 예를 들어, 지질(lipids)의 가수분해를 원하는 숙주 즉, 저장된 체지방을 연소시키기를 원하는 숙주이다. 지방 분해의 증가를 필요로 하는 숙주의 다른 예로는 숙주의 건강에 최적이지 않은 체지방을 가지고 있는 숙주 또는 제지방량의 증가를 원하는 숙주이다. 지방 분해의 증가를 필요로 하는 숙주의 몇몇 예로는 과체중이거나 보디빌더와 같은 운동가이다.

숙주의 체지방의 함량이 숙주의 신장 및 신체 골격에 따른 이상적인 체지방보다 크면 체지방의 함량은 최적이지 않은 것으로 고려된다. 숙주의 체지방이 신체의 축적된 과잉의 지방으로 인해 골격 및 신체 요구조건의 한계치 이상이면 숙주, 예를 들어 사람의 체지방은 최적이지 않은 것으로 생각된다.

숙주의 이상적인 체지방은 기술분야의 숙련자에게 공지되어 있다. 숙주의 체지방이 숙주의 이상적인 체지방보다 약 10% 이상, 바람직하게는 약 30% 이상, 더욱 바람직하게는 약 60% 이상, 및 가장 바람직하게는 약 100% 이상인 경우 지방 분해가 필요한 것으로 생각된다. 예를 들어, 사람에 있어, 최적의 체지방 함량은 20-29세의 남성의 경우 약 15% 내지 약 19%이며, 20-29세의 여성의 경우 약 19% 내지 약 23%이다.

지방 생성의 억제가 필요한 숙주는 예를 들어 지방의 생성 또는 축적 어제를 바라는 숙주이다. 지방의 생성은 예를 들어, 탄수화물이나 단백질이 지방으로 전환하는 것을 포함한다. 지방 생성의 억제가 필요한 숙주의 다른 예로는 예를 들어, 숙주의 건강에 최적하지 않은 체지방 함량을 갖는 숙주이다. 지방 생성의 억제가 필요한 숙주의 몇몇 예로는 과체중 또는 운동가인 숙주를 포함하나 이에 한정하지 않는다.

리비도 증가가 필요한 숙주는 예를 들어 억제되거나 감소된 리비도를 갖는 숙주이다. 리비도 증가가 필요한 숙주의 다른 예로는 예를 들어, 숙주의 정신적인 웰빙에 이롭지 않은 라바도 농도를 갖거나 리비도 증가를 원하는 숙주이다. 리비도 증가가 필요한 숙주의 몇몇 예로는 리비도를 감소 또는 억제하는 항우울제와 같은 약제가 필요한 숙주, 및 낮은 농도의 호르몬이 필요한 숙주이며, 이에 한정하지 않는다.

실시예 1: 당단백질에 결합된 스크라레올 또는 스크라레올라이드의 제조

본 방법은 첫 번째 용기에 스크라레올 또는 스크라레올라이드 수용액을 제조하는 것을 도입하였다. 두 번째 용기에 활성 효모액을 제조하였다. 활성 베이카 효모인 사카로마이세스 세르비지에를 물에 첨가하여 수용액을 제조하였다. 이어서, 말토스(맥아당)과 검 아카시아를 첨가하였다.

이어서, 스크라레올 또는 스크라레올라이드를 함유하는 첫 번째 용기를 매우 서서히 활성 효모액에 접종하여 생발효액을 제조하였다. 혼합물을 4 내지 6시간 발효하였다. 효모성장을 촉진하기 위해, 식물 단백질 및 탄수화물을 첨가하였다. 이 어서 파파인(papain)과 같은 단백질 분해효소(proteolytic enzyme)를 첨가하였다.

락토바실러스 아시도필러스를 첨가하여 생발효액을 수득하고, 약 2시간 발효하였다. 이어서 용액을 160-170℉에서 3시간 가열하여 활성 발효를 중단하였다.

이어서, 발효된 미네랄 용액을 전단펌프(Charles Ross & Sons Corp.)에서 약 1-2시간 균질화한 후, 약 4시간 동안 분무건조(NIRO, Nicholas Engineers Research Corp.)하였다. 최종 생성물은 스크라레올-당단백질 매트릭스 착체 또는 스크라레올라이드-당단백질 매트릭스 착체를 함유하는 분말이다.

실시예 2: 지방분해시 스크라레올라이드 + GPM의 효과

인간의 피하 지방전구세포(preadipocyte)를 지방흡입술을 시행하는 환자로부터 수득하였다. 환자의 특성은 아래에 나타낸 바와 같다.

성별: 여자

B.M.I.: 27.25(평균)

나이: 43(평균)

사람의 피하 지방전구세포를 로트 번호 SL0028로 명시하였다.

지방전구세포를 96-웰 플레이트에서 평판 배양하고 화합물(예: 스크라레올라이드 또는 스크라레올라이드+GPM)이 없는 상태에서 약 2주간 분화하였다. 분석하는 날 배지를 제거하고, 세포를 크렙스-링거 완충액(Krebs-Ringer buffer, KRB)으로 다음의 방법으로 부드럽게 세척하였다. 웰에서 120㎕의 배지를 제거한 후, 200㎕/well의 KRB를 첨가하였다. 웰중이 KRB를 제거하고, 다른 분할액인 200㎕/well의 KRB를 첨가하였다. 웰을 한번에 1열로 세척하여 세포에 습기가 남아있도록 하고, 플레이트에 부착하였다.

다음에, 모든 KRB를 제거하고, 세포를 150㎕/well의 대조군 또는 150㎕/well의 시험 화합물(1% BSA가 있는 KRB에 재현탁)을 1) 10㎕/ml에서 스크라레올라이드 또는 2) 7.5㎕/ml에서 스크라레올라이드+GPM로 처리하고 37℃에서 5시간 배양하였다. 분석을 3회 실시하였다.

시험이 끝나갈 즈음, 조건에 맞는 100㎕/well의 배지를 분석 플레이트에서 제거한 후, 대응하는 새로운 프레이트의 웰에 가하였다. 새로운 플레이트에 100㎕/well의 글리세롤 분석시약을 첨가하였다. 이어서, 새로운 플레이트를 25℃에서 15분간 배양하였다.

새로운 플레이트의 각 웰에 대한 광학밀도를 540nm에서 측정하였다. 광학밀도를 아래 표에 나타내었다.

	스크라레올라이드 농도	대조군에서 지방분해 증가율(%)
스크라레올라이드	10㎍/ml	55%
스크라레올라이드+GPM	7.5㎍/ml	137%

상기 표에 나타낸 바와 같이, 스크라레올라이드 및 스크라레올라이드+GPM은 대조군에서 지방 분해가 크게 증가하였다.

놀랍게도, 스크라레올라이드+GPM(저농도의 스크라레올라이드를 함유)로부터 관찰된 지방 분해는 스크라레올라이드를 단독으로 사용한 지방 분해보다 실질적으로 컸다.

Claims (26)

1. 당단백질 매트릭스(glycoprotein matrix)에 의해 결합된 스크라레올(sclareol) 또는 그 유도체를 포함하는 조성물.
2. 제 1 항에 있어서, 상기 유도체는 스크라레올라이드(sclareolide)인 것을 특징으로 하는 조성물.
3. 제 1 항에 있어서, 미생물을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
4. 제 1 항에 있어서, 상기 당단백질 매트릭스는 미생물을 스크라레올 또는 그 유도체와 발효시켜 수득하는 것을 특징으로 하는 조성물.
5. 제 4 항에 있어서, 상기 미생물은 효모를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
6. 제 4 항에 있어서, 상기 미생물은 박테리아를 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
7. 제 4 항에 있어서, 상기 미생물은 효모 및 박테리아를 포함하는 것을 특징으 로 하는 조성물.
8. 제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 영양 보충제인 것을 특징으로 하는 조성물.
9. 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올 또는 그 유도체를 포함하는 효과적인 함량의 조성물을 숙주(host)에 투여하는 것을 포함하는 필요로 하는 숙주의 사이클릭 아데노신 모노포스페이트(cAMP)의 활성을 증가시키는 방법.
10. 제 9 항에 있어서, 상기 유도체는 스크라레올라이드인 것을 특징으로 하는 조성물.
11. 제 9 항에 있어서, 미생물을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
12. 제 9 항에 있어서, 상기 당단백질 매트릭스는 미생물을 스크라레올 또는 그 유도체와 발효시켜 수득하는 것을 특징으로 하는 조성물.
13. 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올 또는 그 유도체를 포함하는 효과적인 함량의 조성물을 숙주에 투여하는 것을 포함하는 필요로 하는 숙주의 체중감량을 유도하는 방법.
14. 제 13 항에 있어서, 상기 유도체는 스크라레올라이드인 것을 특징으로 하는 조성물.
15. 제 13 항에 있어서, 미생물을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
16. 제 13 항에 있어서, 상기 당단백질 매트릭스는 미생물을 스크라레올 또는 그 유도체와 발효시켜 수득하는 것을 특징으로 하는 조성물.
17. 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올 또는 그 유도체를 포함하는 효과적인 함량의 조성물을 숙주에 투여하는 것을 포함하는 숙주의 리비도(libido)를 증가시키는 방법.
18. 제 17 항에 있어서, 상기 유도체는 스크라레올라이드인 것을 특징으로 하는 조성물.
19. 제 17 항에 있어서, 상기 당단백질 매트릭스는 미생물을 스크라레올 또는 그 유도체와 발효시켜 수득하는 것을 특징으로 하는 조성물.
20. 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올 또는 그 유도체를 포함하는 효 과적인 함량의 조성물을 숙주에 투여하는 것을 포함하는 숙주의 지방분해(lipolysis)를 증가시키는 방법.
21. 제 20 항에 있어서, 상기 유도체는 스크라레올라이드인 것을 특징으로 하는 조성물.
22. 제 20 항에 있어서, 상기 당단백질 매트릭스는 미생물을 스크라레올 또는 그 유도체와 발효시켜 수득하는 것을 특징으로 하는 조성물.
23. 당단백질 매트릭스에 의해 결합된 스크라레올 또는 그 유도체를 포함하는 효과적인 함량의 조성물을 숙주에 투여하는 것을 포함하는 숙주의 지방 생성(adipogenesis)을 억제시키는 방법.
24. 제 23 항에 있어서, 상기 유도체는 스크라레올라이드인 것을 특징으로 하는 조성물.
25. 제 23 항에 있어서, 미생물을 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 조성물.
26. 제 23 항에 있어서, 상기 당단백질 매트릭스는 미생물을 스크라레올 또는 그 유도체와 발효시켜 수득하는 것을 특징으로 하는 조성물.