KR20060073929A - 질환 치료에 유용한 세미카르바지드 민감성 아민옥시다제(ｓｓａｏ) 및 ｖａｐ-1 매개 유착의 억제제 - Google Patents

질환 치료에 유용한 세미카르바지드 민감성 아민옥시다제(ｓｓａｏ) 및 ｖａｐ-1 매개 유착의 억제제 Download PDF

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에릭 얀준 왕
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Abstract

본 발명은 염증성 질환 및 면역 장해의 치료를 위한 조성물 및 조성물의 사용 방법을 제공한다. 세미카르바지드 민감성 아민 옥시다제(SSAO) 및/또는 혈관 유착 단백질 1(VAP-1)의 억제제인 알릴히드라진 화합물, 히드록실아민(아미노옥시) 화합물 및 기타 화합물이 개시되어 있다. 본 발명의 화합물은 염증 및 염증성 반응을 억제하고, 다발성 경화증을 비롯한 중증의 질환을 치료하는 데 있어 치료학적 용도를 가진다.
염증, 면역, 조성물, 세미카르바지드, 아민 옥시다제, 혈관 유착, 알릴히드라지드, 히드록실아민, 다발성 경화증

Description

질환 치료에 유용한 세미카르바지드 민감성 아민 옥시다제(ＳＳＡＯ) 및 ＶＡＰ-1 매개 유착의 억제제{INHIBITORS OF SEMICARBAZIDE-SENSITIVE AMINE OXIDASE (SSAO) AND VAP-1 MEDIATED ADHESION USEFUL FOR TREATMENT OF DISEASES}
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2003년 8월 8일 출원된 미국 가출원 제60/493,835호, 2003년 9월 12일 출원된 미국 가출원 제60/502,401호 및 2004년 5월 6일 출원된 미국 가출원 60/568,999호를 우선권으로서 주장한다. 이들 출원의 전체 개시 내용은 본 명세서에서 참고 인용한다.
기술 분야
본 발명은 염증, 염증성 질환 및 자가면역 장해의 치료를 위한, 혈관 유착 단백질-1(VAP-1)으로도 알려진, 세미카르바지드 민감성 아민 옥시다제(SSAO)를 억제하는 조성물 및 방법에 관한 것이다.
사람 혈관 유착 단백질-1(VAP-1)은 타입 2, 180 kD 단독이량체 내피 세포 유착 분자이다. VAP-1을 클로닝 및 서열화한 결과, VAP-1 cDNA 서열이 구리 함유 아민 옥시다제인, 기존의 단백질 세미카르바지드 민감성 아민 옥시다제(SSAO)의 서열과 동일한 것으로 밝혀졌다. 멤브레인 결합 VAP-1 유착 단백질과 가용성 SSAO 효소 간의 정확한 차이(있다면)는 아직 결정된 바 없는데, 한 가지 가설은 멤브레인 결합 VAP-1 분자의 단백질분해 개열이 가용성 SSAO 효소를 초래한다는 것이다. 멤브레인 결합 VAP-1 단백질과 가용성 SSAO 효소는 둘 다 아민 옥시다제 효소 활성을 가진다. 따라서, 멤브레인 결합 VAP-1은 아민 옥시다제 및 세포 유착 분자로서 기능할 수 있다.
세미카르바지드 민감성 아민 옥시다제는 효소군의 일원이며, 그 군은 일반적으로 세미카르바지드 민감성 아민 옥시다제(SSAO)라고 한다. SSAO는 대부분 1차 아민의 산화성 탈아민화를 촉매 작용하는 가용성 효소이다. 이 반응은 해당 알데히드의 형성과 H2O2 및 암모늄의 방출을 초래한다. 이러한 효소는 그 기질, 억제제, 공동인자, 세포 이하 국소화 및 기능에 관하여 모노아민 옥시다제 A 및 B(각각, MAO-A 및 MAO-B)와 상이하다. 현재까지, SSAO와 명확하게 관련된 생리학적 기능은 없으며, 심지어 생리학적 기질의 성질도 확립된 바 없다(Buffoni F. and Ignesti G. (2000) Mol. Genetics Metabl. 71: 559-564 참조). 그러나, 이들은 외래 및 내생 아민의 대사와 글루코스 이송의 조절에 연관되어 있다.
SSAO 분자는 종을 가로질러 고도로 보존되는데, 사람 단백질에 가장 가까운 상동체는 소 혈청 아민 옥시다제(약 85% 동일성)이다. 기질 특이성 및 조직 분포는 상이한 종 가운데 상당히 다르다. 사람의 경우, SSAO 특이적인 활성은 대부분의 조직에서 검출되지만, 차이가 현저하다(대동맥 및 폐에서 최고). 사람 및 설치류 혈장은 반추 동물과 비교하였을 때 매우 낮은 SSAO 활성을 가진다. 방혈 연구는 SSAO/VAP-1이 세포 및 혈청 SSAO 활성의 ~90%를 차지한다는 것을 시사한다(Jaakkola K. et al. (1999) Am. J. Pathol. 155: 1953).
멤브레인 결합 VAP-1은 림프성 기관의 고 내피 세포(EC), 간의 유동(類洞) EC 및 많은 다른 조직의 작은 세정맥 혈관경에서 주로 발현된다. 더욱이, SSAO/VAP-1은 배중심의 치사 세포에서도 발견되며, 지방 세포, 혈관 주위 세포 및 평활근 세포에 풍부하게 존재한다. 그러나, 모세 혈관, 대형 혈관의 EC, 내피 세포, 섬유아세포 및 백혈구에는 없다(Salmi M. et al. (2001) Trends Immunol. 22: 211). 임상 샘플의 연구로, SSAO/VAP-1이 염증, 예컨대 윤활막염, 알레르기 및 다른 피부 염증 및 염증성 장 질환(IBD)의 많은 부위에서의 혈관 조직에 대해 상향 조절되는 것으로 밝혀졌다. 그러나, 발현은 추가의 메카니즘에 의해 조절되는 것으로 보인다. 동물 연구는 반추 동물 SSAO/VAP-1이 염증의 도출시에만 유발됨을 가리킨다. 따라서, EC에서, SSAO/VAP-1은 세포내 과립구에 저장되고, 염증 부위에서만 장관 표면으로 전위된다.
건강한 성인의 혈청에서, SSAO/VAP-1의 가용 형태가 80 ng/㎖의 농도로 발견된다. 가용성 SSAO/VAP-1 레벨은 특정한 간 질환 및 당뇨병에서 증가하지만, 많은 다른 염증성 상태에서는 정상을 유지한다. 가용성 SSAO/VAP-1은 SSAO/VAP-1의 멤브레인 결합 형태의 근단 세포외 서열과 동일한 N-말단 아미노산 서열을 가진다. 또한, 가용성 분자의 상당한 부분이 유동 VAP-1의 단백질분해 개열에 의해 간에서 생성된다는 좋은 증거가 있다(Kurkijarvi R. et al. (2000) Gastroenterology 119: 1096).
SSAO/VAP-1은 EC에 대한 백혈구 아종 특이적인 유착을 조절한다. 셀렉틴, 케모카인, 면역글로불린 상과 분자 및 인테그린의 유발/활성화가 일어나는 부위에서 SSAO/VAP-1이 유착 캐스케이드에 수반된다는 것이 연구로 밝혀졌다. 적당한 관계에서, 그럼에도 불구하고, SSAO/VAP-1 기능의 비활성화는 전체 유출 과정에 독립적이고 유의적인 효과를 가진다. 최근의 연구에서, SSAO/VAP-1의 직접 유착 및 효소 기능이 유착 캐스케이드에 수반되는 것으로 밝혀졌다(Salmi M. et al. (2001) Immunity 14: 265). 이 연구에서, VAP-1의 SSAO 활성이, 백혈구의 표면에 발현하는 VAP-1 리간드상에 존재하는 아민 기질과의 직접 상호작용을 수반하는 신규 메카니즘에 의하여 내피 세포로의 백혈구 유착 경로에 직접 수반된다는 것을 제시하였다. 생리학적 박층 전단 하에서, 백혈구가 EC에 롤링하기 시작할 때 속박(셀렉틴의 그 리간드에의 결합에 의해 일어남) 후 SSAO/VAP-1가 먼저 활동하게 되는 것으로 보인다. 따라서, 항 VAP-1 모노클론 항체는 림프구 롤링의 ~50%를 억제하고, 단단하게 결합된 세포의 수를 유의적으로 감소시킨다. 또한, SSAO 억제제에 의한 VAP-1 효소 활성의 억제도 롤링 및 단단하게 결합된 백혈구의 수를 >40% 감소시킨다. 따라서, SSAO/VAP-1 효소 활성의 억제제는 염증 영역 내 백혈구 유착을 감소킴으로써 염증이 생긴 영역으로의 백혈구 왕래를 감소시키고, 결과적으로 염증 과정 자체를 감소시킨다.
증가된 SSAO 활성은 타입 I 및 타입 II 당뇨병 환자와 동물 모델의 혈장 및 섬, 뿐만 아니라 울혈성 심부전 후 및 죽상경화증 마우스 모델에서 발견되었다(Salmi M., et al. (2002) Am. J. Pathol. 161: 2255; Bono P., et al. (1999) Am. J. Pathol. 155: 1613; Boomsma F., et al. (1999) Diabetologia 42: 233; Gronvall-Nordquist J., et al. (2001) J. Diabetes Complications 15: 250; Ferre I., et al. (2002) Neurosci. Lett. 15; 321: 21; Conklin D.J., et al. (1998) Toxicological Sciences 46: 386; Yu P.H. and Deng Y.L. (1998) Atherosclerosis 140: 357; Vidrio H., et al. (2002) General Pharmacology 35: 195; Conklin D.J. (1999) Toxicology 138: 137). 류마티스양 관절염(RA) 환자의 염증이 일어난 관절과 IBD 환자의 고유판 및 페이어 반으로부터의 세정맥에서의 VAP-1 발현의 상향조절 이외에, VAP-1의 증가된 합성은 만성 피부 염증 및 간 질환에서도 발견되었다(Lalor P.F., et al. (2002) J. Immunol. 169: 983; Jaakkola K., et al. (2000) Am. J. Pathol. 157: 463; Salmi M. and Jalkanen S. (2001) J. Immunol. 166: 4650; Lalor P.F., et al. (2002) Immunol Cell Biol 80: 52; Salmi M., et al. (1997) J. Cin. Invest. 99: 2165; Kurkijarvi R., et al. (1998) J. Immunol. 1611549).
요약하면, SSAO/VAP-1은 단백질 아종 특이적인 유착을 조절하고, 림프구와 염증이 일어난 혈관 간의 상호작용을 중재하는 유도성 내피 효소이다. SSAO/VAP-1이 많은 염증성 상태에서의 그 상향조절 간의 강한 상관과 함께 효소 활성과 유착 활성을 가진다는 사실은 전술한 모든 질환 상태에 대한 잠재적인 치료학적 표적이 되게 한다.
발명의 개시
SSAO 억제제는 염증 및 자가면역 과정, 뿐만 아니라 순환 아민 기질 및/또는 SSAO의 산물의 증가된 레벨과 관련된 다른 병리학적 상태를 차단할 수 있다. 한 가지 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(여기서, 효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하는 화합물의 투여에 의한 염증성 반응의 억제 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 염증성 반응은 급성 염증성 반응이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 SSAO 억제제를 투여하거나, 또는 SSAO 억제제의 치료학적 유효 조합을 투여함으로써, 일반적으로 SSAO 및/또는 VAP-1의 1 이상의 비정상 레벨 또는 SSAO 및/또는 VAP-1의 비정상 활성(여기서, VAP-1의 비정상 활성은 그 결합 기능, 아민 옥시다제 기능 또는 둘 다에 영향을 줄 수 있음)으로 나타내는, SSAO 또는 VAP-1에 의해 적어도 부분적으로 매개되는 질환을 치료하는 것에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 SSAO 억제제를 투여하거나, 또는 SSAO 억제제의 치료학적 유효 조합을 투여함으로써 면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 SSAO 억제제를 투여하거나, 또는 SSAO 억제제의 치료학적 유효 조합을 투여함으로써 다발성 경화증(예컨대, 만성 다발성 경화증)을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 치료학적 유효량의 SSAO 억제제를 투여하거나, 또는 SSAO 억제제의치료학적 유효 조합을 투여함으로써 허혈성 질환(예컨대, 발작) 및/또는 그것의 후유증(예컨대, 염증성 반응)을 치료하는 방법에 관한 것이다. 투여된 SSAO 억제제는 가용성 SSAO의 SSAO 활성, 멤브레인 결합된 VAP-1의 SSAO 활성, 멤브레인 결합된 VAP-1에의 결합 또는 이들 활성의 임의의 둘, 또는 이들 활성의 셋 모두를 억제할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 본 발명에서 제공되는 화합물을 사용하여 시험관내에서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 본 발명에서 제공되는 화합물을 사용하여 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 가용성 SSAO 효소 활성(여기서, 효소 활성은 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하는 데 유용한 여러 가지 화합물에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(여기서, 효소 활성은 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 여러 가지 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 약 10, 약 100 또는 약 500의 MAO-A 및/또는 MAO-B와 비교하였을 때의 SSAO의 억제에 대한 특이성을 가진 SSAO 억제제를 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 약 10, 약 100 또는 약 500의 MAO-A 및/또는 MAO-B와 비교하였을 때의 SSAO의 억제에 대한 특이성을 가진 SSAO 억제제를 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 화학식 I, I-P, I-A, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 또는 III-C의 본 발명에서 제공되는 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I, I-P, I-A, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 또는 III-C의 본 발명에서 제공되는 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
한 가지 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 I의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염, 특히 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 I
Figure 112006009365160-PCT00001
상기 식에서,
R1은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴, C5-C14 치환 헤테로아릴, R4-(CH2)n- 및 R5-Y1CH2-로 구성된 군 중에서 선택되고;
n은 독립적으로 1 또는 2이며;
Y1은 독립적으로 S 또는 O이고;
R2는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, Cl, F 또는 CF3이며;
X는 독립적으로 O 또는 NR6 중에서 선택되고;
R3은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
R4는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되고;
R5는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
R6은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴이다.
또한, 화학식 I의 화합물의 대사물 및 프로드러그도 본 발명에 포함된다. 한 가지 바람직한 구체예에서, R1은 미치환 페닐이다. 다른 바람직한 구체예에서, R1은 치환 페닐이다. 다른 바람직한 구체예에서, R1은 1 개의 치환기를 가진 치환 페닐이다. 다른 바람직한 구체예에서, R1은 2 개의 치환기를 가진 치환 페닐이다. 다른 바람직한 구체예에서, R2는 H이다. 다른 바람직한 구체예에서, R2는 F이다. 다른 바람직한 구체예에서, X는 O이다. 다른 바람직한 구체예에서, X는 NR6이다. 다른 바람직한 구체예에서, R3은 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 바람직한 구체예에서, R6은 H 또는 C1-C4 알킬이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 I의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 I의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 I-P의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염, 특히 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 I-P
Figure 112006009365160-PCT00002
상기 식에서,
R1p는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴, C5-C14 치환 헤테로아릴, R4-(CH2)n- 및 R5-Y1CH2-로 구성된 군 중에서 선택되고;
n은 독립적으로 1 또는 2이며;
Y1은 독립적으로 S 또는 O이고;
R2는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, Cl, F 또는 CF3이며;
X는 독립적으로 O 또는 NR6 중에서 선택되고;
R3은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
R4는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되고;
R5는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
R6은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴이고;
단, R1p가 미치환 페닐이고, R2가 H이며, X가 NH인 경우, R3은 H가 아니다.
전술한 조건을 포함하여, 화학식 I의 화합물의 이 부분집합은 화학식 I의 부분집합 P의 화합물 또는 화학식 I-P의 화합물로 표시한다. 또한, 화학식 I의 화합물의 대사물 및 프로드러그도 본 발명에 포함된다. 한 가지 바람직한 구체예에서, R1p는 미치환 페닐이다. 다른 바람직한 구체예에서, R1p는 치환 페닐이다. 다른 바람직한 구체예에서, R1p는 1 개의 치환기를 가진 치환 페닐이다. 다른 바람직한 구체예에서, R1p는 2 개의 치환기를 가진 치환 페닐이다. 다른 바람직한 구체예에서, R2는 H이다. 다른 바람직한 구체예에서, X는 O이다. 다른 바람직한 구체예에서, X는 NR6이다. 다른 바람직한 구체예에서, R3은 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 바람직한 구체예에서, R6은 H 또는 C1-C4 알킬이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 I-P의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 I-P의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증을 억제 또는 감소시키거나, 또는 염증성 반응을 억제 또는 감소시키기 위하여 화학식 I-P의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I-P에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I-P에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
한 가지 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 I-A의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염, 특히 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 I-A
Figure 112006009365160-PCT00003
상기 식에서,
R1a는 치환 또는 미치환 페닐이고;
R2는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, Cl, F 또는 CF3이며;
X는 독립적으로 O 또는 NR6 중에서 선택되고;
R3은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
R6은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴이다.
화학식 I의 화합물의 이 부분집합은 화학식 I의 부분집합 A의 화합물 또는 화학식 I-A의 화합물로 표시한다. 또한, 화학식 I-A의 화합물의 대사물 및 프로드러그도 본 발명에 포함된다. 한 가지 구체예에서, R1a는 미치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R1a는 치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R1a는 1 개의 치환기를 가진 치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R1a는 2 개의 치환기를 가진 치환 페닐이다. 다른 구체예에서, X는 O이다. 다른 구체예에서, X는 NR6이다. 다른 구체예에서, R3은 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R6은 H 또는 C1-C4 알킬이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 I-A의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 I-A의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증을 억제 또는 감소시키거나, 또는 염증성 반응을 억제 또는 감소시키기 위하여 화학식 I-A의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I-A에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I-A에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 I-AP의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염, 특히 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 I-AP
Figure 112006009365160-PCT00004
상기 식에서,
R1ap는 치환 또는 미치환 페닐이고;
R2는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, Cl, F 또는 CF3이며;
X는 독립적으로 O 또는 NR6 중에서 선택되고;
R3은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
R6은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴이고;
단, R1ap가 미치환 페닐이고, R2가 H이며, X가 NH인 경우, R3은 H가 아니다.
전술한 조건을 포함하여, 화학식 I의 화합물의 이 부분집합은 화학식 I의 부분집합 AP의 화합물 또는 화학식 I-AP의 화합물로 표시한다. 또한, 화학식 I-AP의 화합물의 대사물 및 프로드러그도 본 발명에 포함된다. 한 가지 구체예에서, R1ap는 미치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R1ap는 치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R1ap는 1 개의 치환기를 가진 치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R1ap는 2 개의 치환기를 가진 치환 페닐이다. 다른 구체예에서, X는 O이다. 다른 구체예에서, X는 NR6이다. 다른 구체예에서, R3은 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R6은 H 또는 C1-C4 알킬이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 I-AP의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 I-AP의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증을 억제 또는 감소시키거나, 또는 염증성 반응을 억제 또는 감소시키기 위하여 화학식 I-AP의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I-AP에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I-AP에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
한 가지 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 I-B의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염, 특히 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 I-B
Figure 112006009365160-PCT00005
상기 식에서,
R2는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, Cl, F 또는 CF3이고;
R91 및 R92는 독립적으로 H, F, Br, Cl, I, C1-C4 알킬 및 C1-C4 알콕시 중에서 선택되며;
X는 독립적으로 O 또는 NR6 중에서 선택되고;
R3은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
R6은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴이다.
화학식 I의 화합물의 이 부분집합은 화학식 I의 부분집합 B의 화합물 또는 화학식 I-B의 화합물로 표시한다. 또한, 화학식 I-B의 화합물의 대사물 및 프로드러그도 본 발명에 포함된다. 한 가지 구체예에서, X는 O이다. 다른 바람직한 구체예에서, X는 NR6이다. 다른 바람직한 구체예에서, R3은 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 바람직한 구체예에서, R6은 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 바람직한 구체예에서, R91은 H이다. 다른 바람직한 구체예에서, R92는 H이다. 다른 바람직한 구체예에서, R91 및 R92는 둘 다 H이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 I-B의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 I-B의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증을 억제 또는 감소시키거나, 또는 염증성 반응을 억제 또는 감소시키기 위하여 화학식 I-B의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I-B에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I-B에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
한 가지 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 I-C의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염, 특히 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 I-C
Figure 112006009365160-PCT00006
상기 식에서,
R2는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, Cl, F 또는 CF3이고;
R91 및 R92는 독립적으로 H, F, Br, Cl, I, C1-C4 알킬 및 C1-C4 알콕시 중에서 선택되며;
X는 독립적으로 O 또는 NR6 중에서 선택되고;
R3은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
R6은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴이다.
화학식 I의 화합물의 이 부분집합은 화학식 I의 부분집합 C의 화합물 또는 화학식 I-C의 화합물로 표시한다. 또한, 화학식 I-C의 화합물의 대사물 및 프로드러그도 본 발명에 포함된다. 한 가지 구체예에서, X는 O이다. 다른 바람직한 구체예에서, X는 NR6이다. 다른 바람직한 구체예에서, R3은 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 바람직한 구체예에서, R6은 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 바람직한 구체예에서, R91은 H이다. 다른 바람직한 구체예에서, R92는 H이다. 다른 바람직한 구체예에서, R91 및 R92는 둘 다 H이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 I-C의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 I-C의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증을 억제 또는 감소시키거나, 또는 염증성 반응을 억제 또는 감소시키기 위하여 화학식 I-C의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I-C에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I-C에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 I, I-P, I-A, I-AP, I-B 및/또는 I-C의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 I, I-P, I-A, I-AP, I-B 및/또는 I-C의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증을 억제 또는 감소시키거나, 또는 염증성 반응을 억제 또는 감소시키기 위하여 화학식 I, I-P, I-A, I-AP, I-B 및/또는 I-C의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I, I-P, I-A, I-AP, I-B 및/또는 I-C에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 I, I-P, I-A, I-AP, I-B 및/또는 I-C에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 II의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염, 특히 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 II
Figure 112006009365160-PCT00007
상기 식에서,
R11 및 R12는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되고;
R13 및 R14는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택된다.
화학식 II의 화합물의 대사물 및 프로드러그도 본 발명에 포함된다. 한 가지 구체예에서, R11은 H이다. 다른 구체예에서, R12는 미치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R13은 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R14는 H 또는 C1-C4 알킬이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 II의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 II의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증을 억제 또는 감소시키거나, 또는 염증성 반응을 억제 또는 감소시키기 위하여 화학식 II의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 II에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 II에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 III의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염, 특히 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 III
Figure 112006009365160-PCT00008
상기 식에서,
R27은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴, C5-C14 치환 헤테로아릴, R23-(CH2)n- 및 R24-Y2-(CH2)-로 구성된 군 중에서 선택되고;
R22는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
n은 독립적으로 1 또는 2이고;
n3은 독립적으로 0, 1 또는 2이며;
Y2는 독립적으로 S 또는 O이고;
R23 및 R24는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택된다.
화학식 III의 화합물의 대사물 및 프로드러그도 본 발명에 포함된다. 한 가지 구체예에서, R27은 미치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R27은 치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R22는 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R22는 H가 아니다. 다른 구체예에서, R22는 C1-C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R22는 메틸 또는 에틸이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 III의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 III의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증을 억제 또는 감소시키거나, 또는 염증성 반응을 억제 또는 감소시키기 위하여 화학식 III의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 III에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 III에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 III-A의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염, 특히 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 III-A
Figure 112006009365160-PCT00009
상기 식에서,
R21은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴, C5-C14 치환 헤테로아릴, R23-(CH2)n- 및 R24-Y2-(CH2)-로 구성된 군 중에서 선택되고;
R22는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
n은 독립적으로 1 또는 2이고;
Y2는 독립적으로 S 또는 O이며;
R23 및 R24는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택된다.
화학식 III-A의 화합물의 대사물 및 프로드러그도 본 발명에 포함된다. 한 가지 구체예에서, R21은 미치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R21은 치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R22는 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R22는 H가 아니다. 다른 구체예에서, R22는 C1-C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R22는 메틸 또는 에틸이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 III-A의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 III-A의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증을 억제 또는 감소시키거나, 또는 염증성 반응을 억제 또는 감소시키기 위하여 화학식 III-A의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 III-A에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 III-A에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 III-B의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염, 특히 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 III-B
Figure 112006009365160-PCT00010
상기 식에서,
R25는 독립적으로 C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴로 구성된 군 중에서 선택되고;
R22는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택된다.
화학식 III-B의 화합물의 대사물 및 프로드러그도 본 발명에 포함된다. 한 가지 구체예에서, R25는 미치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R25는 치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R22는 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R22는 H가 아니다. 다른 구체예에서, R22는 C1-C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R22는 메틸 또는 에틸이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 III-B의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 III-B의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증을 억제 또는 감소시키거나, 또는 염증성 반응을 억제 또는 감소시키기 위하여 화학식 III-B의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 III-B에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 III-B에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 하기 화학식 III-C의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염, 특히 약학적으로 허용 가능한 염에 관한 것이다:
화학식 III-C
Figure 112006009365160-PCT00011
상기 식에서,
R26은 독립적으로 C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴로 구성된 군 중에서 선택되고;
R22는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택된다.
화학식 III-C의 화합물의 대사물 및 프로드러그도 본 발명에 포함된다. 한 가지 구체예에서, R26은 미치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R26은 치환 페닐이다. 다른 구체예에서, R22는 H 또는 C1-C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R22는 H가 아니다. 다른 구체예에서, R22는 C1-C4 알킬이다. 다른 구체예에서, R22는 메틸 또는 에틸이다.
다른 구체예에서, 본 발명은 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 이들 둘 다에 기인함)을 억제하고/하거나 VAP-1 단백질로의 결합을 억제하기 위하여 화학식 III-C의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 시험관내 환경으로 공급함으로써 시험관내에서 SAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 또한, 이 화합물은 SSAO 활성을 억제하거나 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하기에 충분한 양으로 화합물을 유기체에 투여함으로써 생체내에서, 즉 살아있는 유기체, 예컨대 척추 동물, 포유류 또는 사람에게서 SSAO 활성을 억제하거나, 또는 VAP-1으로의 결합을 억제하는 방법에 사용할 수 있다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하기 위하여 화학식 III-C의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증을 억제 또는 감소시키거나, 또는 염증성 반응을 억제 또는 감소시키기 위하여 화학식 III-C의 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 III-C에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 염증을 치료하는 방법에 관한 것이다. 다른 구체예에서, 본 발명은 화학식 III-C에 기재된 1 이상의 화합물을 치료학적 유효량으로, 또는 염증을 치료하기에 충분한 양으로 투여함으로써 면역 또는 자가면역 장해를 치료하는 방법에 관한 것이다.
다른 구체예에서, 본 발명의 화학식 I, I-P, I-A, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 및/또는 III-C의 화합물 중 1 이상에 의해 치료하고자 하는 염증 질환 또는 면역 장해는 다발성 경화증(예컨대, 만성 다발성 경화증); 윤활막염; 전신 염증성 패혈증; 염증성 장 질환; 크론병; 궤양성 결장염; 알츠하이머병; 혈관 치매; 죽상 경화증; 류마티스양 관절염; 소아성 류마티스양 관절염; 폐 염증 상태; 천식; 피부 염증 상태 및 질환; 접촉 피부염; 간 염증 및 자가면역 상태; 자가면역 간염; 원발 담관성 간경화; 경화 담관염; 자가면역 담관염; 알콜성 간 질환; 타입 I 당뇨병 및/또는 그 합병증; 타입 II 당뇨병 및/또는 그 합병증; 죽상 경화증; 만성 심부전; 울혈성 심부전; 허혈 질환, 예컨대 발작 및/또는 그 합병증; 및 심근 경색 및/또는 그 합병증으로 구성된 군 중에서 선택된다. 다른 구체예에서, 본 발명에 의해 치료하고자 하는 염증 질환 또는 면역 장해는 다발성 경화증(예컨대, 만성 다발성 경화증)이다. 다른 구체예에서, 본 발명에 의해 치료하고자 하는 염증 질환 또는 면역 장해는 발작으로부터 초래되는 염증 합병증이다.
전술한 바와 같은 화학식 I, I-P, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 또는 III-C의 화합물은 치료학적 유효량으로 단독 투여될 수 있다. 전술한 바와 같은 화학식 I, I-P, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 또는 III-C의 화합물은 치료학적 유효량으로 화학식 I, I-P, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 또는 III-C의 1 이상의 추가 화합물과 함께 투여될 수 있다. 병용 투여시, 화합물은 화합물을 단독 투여할 때 효과적인 양으로 투여할 수 있다. 대안으로, 병용 투여시, 화합물 일부 또는 전부는 화합물을 단독 투여할 때 치료학적으로 효과적이지 않지만, 조합시 치료학적으로 효과적인 양으로 투여할 수 있다. 화학식 I, I-P, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 또는 III-C의 1 이상의 화합물은 화학식 I, I-P, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 또는 III-C에 포함되지 않는 다른 화합물과도 함께 투여할 수 있으며; 그 화합물은 단일 약물로서 사용할 때 치료학적으로 효과적인 양 또는 단일 약물로서 치료학적으로 효과적이지 않지만 조합시 치료학적으로 효과적인 양으로 투여할 수 있다. 또한, 화학식 I, I-P, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 및/또는 III-C의 화합물을 비롯하여 본 명세서에 개시된 1 이상의 화합물의 치료학적 유효량 또는 본 명세서에 개시된 2 이상의 화합물의 치료학적 유효 조합 및 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학적으로 허용 가능한 조성물; 및 그것의 사람 단위 투약이 제공된다.
전술한 바와 같은 화학식 I, I-P, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 및/또는 III-C의 화합물은 단리된 약학 조성물로서 제조되고, 비히클 또는 다른 단리된 화합물과 함께 단리된 약학 조성물로서 투여될 수 있다. 즉, 전술한 바와 같은 화학식 I, I-P, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 및/또는 III-C의 화합물은 다른 화합물로부터 단리될 수 있다(예컨대, 실험실 스크리닝 어세이에서 발견된 화합물은 실험실 밖에서 정제되거나, 또는 단일 화합물로서 새로 합성될 수 있다). 순도는 90%, 95%, 99% 또는 화합물의 약학적 용도에 요구되는 순도 백분율일 수 있다. 그 다음, 단리된 화합물은 약학적으로 허용 가능한 비히클과 조합할 수 있거나, 또는 화학식 I, I-P, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 및/또는 III-C의의 1 이상의 단리된 화합물과 다른 치료학적 물질과 조합할 수 있다. 전술한 바와 같은 화학식 I, I-P, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 및/또는 III-C의 화합물은 약학적 사람 단위 투약 제제로 경구 투여될 수 있다.
다른 구체예에서, 본 발명은 치료용을 위한 화학식 I의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 면역 또는 자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 다발성 경화증 또는 만성 다발성 경화증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 허혈 질환(예컨대, 발작) 또는 허혈 질환의 후유증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I의 화합물을 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 치료용을 위한 화학식 I-P의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-P의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 면역 또는 자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-P의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 다발성 경화증 또는 만성 다발성 경화증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-P의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 허혈 질환(예컨대, 발작) 또는 허혈 질환의 후유증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-P의 화합물을 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 치료용을 위한 화학식 I-A의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-A의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 면역 또는 자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-A의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 다발성 경화증 또는 만성 다발성 경화증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-A의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 허혈 질환(예컨대, 발작) 또는 허혈 질환의 후유증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-A의 화합물을 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 치료용을 위한 화학식 I-AP의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-AP의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 면역 또는 자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-AP의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 다발성 경화증 또는 만성 다발성 경화증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-AP의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 허혈 질환(예컨대, 발작) 또는 허혈 질환의 후유증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-AP의 화합물을 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 치료용을 위한 화학식 I-B의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-B의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 면역 또는 자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-B의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 다발성 경화증 또는 만성 다발성 경화증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-B의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 허혈 질환(예컨대, 발작) 또는 허혈 질환의 후유증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-B의 화합물을 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 치료용을 위한 화학식 I-C의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-C의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 면역 또는 자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-C의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 다발성 경화증 또는 만성 다발성 경화증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-C의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 허혈 질환(예컨대, 발작) 또는 허혈 질환의 후유증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 I-C의 화합물을 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 치료용을 위한 화학식 II의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 II의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 면역 또는 자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 II의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 다발성 경화증 또는 만성 다발성 경화증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 II의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 허혈 질환(예컨대, 발작) 또는 허혈 질환의 후유증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 II의 화합물을 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 치료용을 위한 화학식 III의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 면역 또는 자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 다발성 경화증 또는 만성 다발성 경화증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 허혈 질환(예컨대, 발작) 또는 허혈 질환의 후유증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III의 화합물을 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 치료용을 위한 화학식 III-A의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-A의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 면역 또는 자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-A의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 다발성 경화증 또는 만성 다발성 경화증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-A의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 허혈 질환(예컨대, 발작) 또는 허혈 질환의 후유증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-A의 화합물을 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 치료용을 위한 화학식 III-B의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-B의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 면역 또는 자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-B의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 다발성 경화증 또는 만성 다발성 경화증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-B의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 허혈 질환(예컨대, 발작) 또는 허혈 질환의 후유증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-B의 화합물을 포함한다.
다른 구체예에서, 본 발명은 치료용을 위한 화학식 III-C의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 염증 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-C의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 면역 또는 자가면역 질환의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-C의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 다발성 경화증 또는 만성 다발성 경화증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-C의 화합물을 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명은 허혈 질환(예컨대, 발작) 또는 허혈 질환의 후유증의 치료용 약제의 제조를 위한 화학식 III-C의 화합물을 포함한다.
도 1a는 인산염 완충 염수(PBS) 콘트롤 및 메토트렉세이트에 대비한, 관절염 스코어에 의해 평가한 바와 같은 모노클론 항체 유도 관절염 질환 발달에 대한 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진)의 효과를 도시한다.
도 1b는 PBS 콘트롤 및 메토트렉세이트에 대비한, 발톱 측정에 의해 평가한 바와 같은 모노클론 항체 유도 관절염 질환 발달에 대한 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진)의 효과를 도시한다.
도 1c는 PBS 콘트롤 및 메토트렉세이트에 대비한, 발병률(%)에 의해 평가한 바와 같은 모노클론 항체 유도 관절염 질환 발달에 대한 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진)의 효과를 도시한다.
도 2a는 비히클 콘트롤 및 메토트렉세이트에 대비한, 임상 중증도에 의해 평가한 바와 같은 실험 자가면역 뇌염(EAE) 발달에 대한 실시예 18의 알릴아민(AA) 화합물(모페길린)의 효과를 도시한다.
도 2b는 비히클 콘트롤 및 메토트렉세이트에 대비한, 발병률(%)에 의해 평가한 바와 같은 EAE 발달에 대한 실시예 18의 알릴아민(AA) 화합물(모페길린)의 효과를 도시한다.
도 2c는 비히클 콘트롤 및 메토트렉세이트에 대비한, 체중에 의해 평가한 바와 같은 EAE 발달에 대한 실시예 18의 알릴아민(AA) 화합물(모페길린)의 효과를 도시한다.
도 3a는 비히클 콘트롤에 대비한, 발병률(%)에 의해 평가한 바와 같은 EAE 발달에 대한 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진)의 효과를 도시한다.
도 3b는 비히클 콘트롤에 대비한, 임상 중증도에 의해 평가한 바와 같은 EAE 발달에 대한 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진)의 효과를 도시한다.
도 4a는 유도된 발톱 염증에 대한 PBS에 대비한 실시예 2 및 8의 화합물의 효과를 도시한다. 이 도면에서 다양한 삼각형, 사각형 및 다이아몬드 기호는 개별 테스트 동물을 나타낸다.
도 4b는 유도된 발톱 염증에 대한 인산염 완충 염수에 대비한 실시예 2 및 8의 화합물의 효과를 도시한다. 이 도면 중의 기호는 개별 마우스를 나타낸다.
도 5a 및 5b는 마우스 및 래트의 경구 이용 가능성 연구를 도시한다. 도 5a는 마우스의 경구 이용 가능성 연구를 도시하고; 도 5b는 래트의 경구 이용 가능성 연구를 도시한다. 화합물은 인산염 완충 염수(PBS) 중의 50 mg/kg의 농도로 경구 급식에 의해 마우스 및 래트에게 투여하였다. 혈장을 도면에 지시된 시간에서 수집 하고, 실시예 14에 기재된 SSAO 색도계 어레이를 사용하여 억제제의 농도를 결정하였다.
도 6은 SSAO 활성의 생체내 억제를 도시한다. 처치 4 시간 후 래트 대동맥 및 폐 내 SSAO 활성에 대한 실시예 8의 화합물의 단일 경구 투약 투여의 투약 반응 효과(평균 S.E.M.). ED50 값: 대동맥 - 5 mg/kg; 폐 - 0.72 mg/kg; n = 5.
도 7은 말초혈 단핵 세포(PBMC)와 고 내피 세포(HEC) 간의 결합에 대한 SSAO/VAP-1의 차단 효과를 도시한다. 도 7a는 모의 감염 고 내피 세포로의 PBMC 유착에 대한 치료에 사용된 다양한 화합물의 효과를 도시하는 대조 실험이다. 도 7b는 VAP-1으로 감염된 고 내피 세포로의 PBMC 유착에 대한 치료에 사용되는 다양한 화합물의 효과를 나태는 대조 실험이며, 비처치된 콘트롤은 비교용에 포함된다(VNT). MNT: 모의 감염 세포, 처치안됨; VNT: VAP-1 감염된 세포, 처치안됨; VAP-1: 항-VAP1 항체로 처치된 세포; Ex2: 실시예 2의 화합물로 처치된 세포; Ex8: 실시예 8의 화합물로 처치된 세포; Semic: 세미카르바지드로 처치된 세포; Clog: 클로르길린으로 처치된 세포; Parg: 파르길린으로 처치된 세포. IC100 값: 세미카르바지드(SSAO) - 500 μM; 클로르길린(MAO-A) - 250 μM; 파르길린(MAO-B) - 200 μM; 실시예 2의 화합물 - 150 nM; 실시예 8의 화합물 - 250 nM; n = 6.
도 8은 마우스 발톱 샘플로부터의 18S rRNA 및 TNFα의 RT-PCR 증폭을 나타낸다. 도 8a: 대표적인 동물의 발톱 및 발가락으로부터의 cDNA의 RT-PCR 증폭. 도 8b: 세 개의 상이한 군으로부터의 모든 동물에서 유래한 우측 뒷다리 발톱을 제거 하고, 총 RNA를 단리하였으며, 도 17에 기재된 바와 같은 정성 RT-PCR 연구에 사용하였다. TNF 및 18S 밴드로부터의 밀도계 유닛(DU)을 각각의 샘플에 대해 결정하고, 그 비를 평균내었다(±SD). "화합물 2"는 실시예 2의 화합물을 말한다.
도 9는 만성 다발성 경화증의 모델에서 (2-페닐알릴)히드라진 투여의 개선 효과를 도시한다. 도 9a는 (2-페닐알릴)히드라진으로 처치한 마우스에 대한 PBS(인산염 완충 염수)로 처치된 마우스의 평균 임상 스코어를 도시한다. 도 9b는 (2-페닐알릴)히드라진으로 처치한 마우스에 대한 PBS(인산염 완충 염수)로 처치된 마우스의 질환 발병률(%)을 도시한다. 도 9c는 (2-페닐알릴)히드라진으로 처치한 마우스에 대한 PBS(인산염 완충 염수)로 처치된 마우스의 만성 질환을 가진 마우스의 백분율을 도시한다. 도 9d는 (2-페닐알릴)히드라진으로 처치한 마우스에 대한 PBS(인산염 완충 염수)로 처치된 마우스의 총 재발 수를 도시한다.
도 10은 치료학적 투여 후 발톱 부종의 감소에 대한 SSAO 억제 효과를 도시한다. 동물은 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진, 30 mg/kg, 경구), 인도메타신(3 mg/kg, 경구) 또는 PBS를 카라기난 주사(화살표) 1 시간 후에 수용하였다. 발톱 부피는 지정된 시간에서 기록하고, 주사 전 부피의 백분율로서 표시하였다. N = 8 동물/군; *p < 0.05.
도 11은 SSOA 억제제가 발톱 부피(도 11a) 및 발톱 삼출물 내 PEG2 레벨(도 11b)을 감소시키는 것을 나타내는 데이터를 도시한다. 군 당 8 마리 동물은 (경구 투여에 의하여) PBS, 인도메타신(3 mg/kg) 또는 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진, 50 mg/kg)을 0.5% 카라기난을 오른쪽 뒷발바닥에 주사하기 1 시간 전에 수 용하였다. 또한, 덱사메타손(3 mg/kg)을 카라기난 주사 1 시간 전에 복강내 투여하였다. 카라기난 주사 3 시간 후, 동물을 희생하고, 그 발톱 삼출물을 수집하였으며, PGE2 레벨을 ELISA에 의해 결정하였다. 별표는 다음 p 값을 가리킨다: * p < 0.005, ** p < 0.01.
도 12는 SSAO/VAP-1 억제가 생존을 연장시키고, 질환 징후를 감소시키며, 설치류 결장염 모델에서 조직학적 스코어를 개선한다는 것을 가리키는 데이터를 도시한다. 옥사졸론 유발 결장염은 사람 궤양성 결장염과 유사한 마우스 모델이다. 마우스는 3% 옥사졸론으로 표본화(presentize)하고(제0일), 5 일 후, 1% 옥사졸론으로 장내 챌린지하였다(제5일). 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진, 10 mg/kg, 1일 2회, 복강내) 또는 PBS(1일 2회, 복강내)로의 처치는 제0일에 개시하였다. EtOH 군 내 동물을 3% 옥사졸론으로 표본화한 후, 제5일에 50% EtOH(비히클)를 장내 투여하였다. 도 12a는 생존에 대한 효과를 도시하는 한편, 도 12b는 체중에 대한 효과를 도시한다. 도 12a에서, n = 10, p < 0.05; 사각형은 EtOH 군을 가리키고, 삼각형은 PBS 군을 가리키며, 원은 실시예 2의 화합물을 수용하는 군을 가리킨다.
도 13은 1% 옥사졸론의 장내 투여(제7일) 2 일 후 옥사졸론 유발 결장염을 가진 마우스의 결장염의 조직학적 평가를 도시한다. 콜론을 고정하고, H/E로 염색하였다. 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진, 20 mg/kg/일) 또는 PBS 처리를 제0일에 개시하였다. N = 10 동물/처치군. 데이터는 섹션 2로부터의 스코어에 대한 것이다. 비쌍 t 테스트를 GraphPad Prism 소프트웨어(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)를 사용하여 계산하였다. 이중 별표 **는 p < 0.01을 가리킨다.
도 14는 SSAO 억제제가 치료제 투여 후 생존을 연장시킨다는 것을 보여준다. 마우스를 3% 옥사졸론으로 표본화하고(제0일), 5 일 후에 1% 옥사졸론으로 장내 챌린지하였다(제5일). 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진, 10 mg/kg, 1일 2회, 복강내) 또는 PBS(1일 2회, 복강내) 처치는 제6일에 개시하였다. N = 10, p < 0.05; 사각형은 PBS를 수용한 동물에 대한 데이터 점을 가리키고; 다이아몬드는 실시예 2의 화합물을 수용한 동물에 대한 데이터 점을 가리킨다.
도 15는 SSAO 억제제의 경구 투여가 LPS 유발 시토킨 생성 및 치사율을 감소시킨다는 것을 보여준다. 군 당 8 마리 암컷 마우스에게 5 mg/kg LPS를 복강내 주사하였다. 비히클(PBS) 및 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진, 50 mg/kg)을 LPS 투여 1 시간 전에 경구 투약하였다. 덱사메타손(3 mg/kg)을 동시에 복강내 주사하였다. LPS 주사 후 1, 2, 4 및 8 시간째에 채혈하고, 순환 TNF-α 및 IL-6 레벨을 ELISA(R&D 시스템스)에 의해 측정하였다. 별표 *는 p < 0.01을 가리킨다. PBS 데이터는 투명 박스로 표시되어 있고, 실시예 2의 화합물에 대한 데이터는 회색 음영 박스로 표시되어 있으며, 덱사메타손에 대한 데이터는 흑색 박스로 표시되어 있다.
도 16은 암컷 마우스에 300 mg/kg D-갈락토사민과 함께 복강내 투여된 LPS(2 mg/kg)을 수용시킨 실험 결과를 보여준다. 실시예 2의 화합물((2-페닐알릴)히드라진)은 챌린지 시간에 30 mg/kg의 경구 급식에 의해 전달하거나(1X), 또는 LPS 주사 후 0 및 8 시간째에 2 회 투여하였다(2X). 첫번째 14 시간 동안의 생존 데이터를 제공한다. 생존율은 PBS로 처치된 마우스의 경우 40%이고, 실시예 2의 화합물로 1회 또는 2회 처치된 마우스의 경우 각각 60% 및 80%였다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 SSAO 효소 활성의 저해(여기서, 효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 둘 다에 기인한다) 및/또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질로의 결합의 저해에 유용한 여러 가지 화합물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 SSAO 효소 활성의 저해(여기서, 효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질에 기인하거나, 또는 둘 다에 기인한다) 및/또는 멤브레인 결합된 VAP-1 단백질로의 결합의 저해를 위하여 여러 가지 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 염증 또는 면역 장해를 치료하고, 염증 및/또는 염증성 반응을 감소 또는 억제하기 위하여 여러 가지 화합물을 사용하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 사용하기 위한 화합물은 하기 실시예 14의 프로토콜에 의하여 SSAO 억제 활성에 대해 분석할 수 있다. SSAO 대 모노아민 옥시다제의 기질 특이성은 부분적으로 중첩된다. 따라서, 모노아민 옥시다제에 대하여 SSAO를 특이적으로 억제하는 화합물을 사용하는 것이 바람직하다. SSAO 억제 활성 대 MAO-A 및 MAO-B 억제 활성에 대한 화합물의 특이성은 하기 실시예 15의 프로토콜에 의해 분석할 수 있다. 본 발명에 사용하기 위한 화합물은 약 < 1 μM, 보다 바람직하게는 약 100 nM, 보다 더 바람직하게는 약 10 nM의 SSAO에 대한 억제 활성(IC50)을 갖는다. 또 한, 바람직하게는, 본 발명에 사용하기 위한 화합물은 약 10, 보다 바람직하게는 약 100, 보다 더 바람직하게는 약 500의 SSAO 대 MAO-A에 대한 특이성을 갖는다(여기서, SSAO 대 MAO-A에 대한 특이성은 MAO-A에 대한 화합물의 IC50 대 SSAO에 대한 동일 화합물의 IC50의 비로 정의되는데; 즉, MAO-A에 대해 10 μM의 IC50 및 SSAO에 대해 20 nM의 IC50을 가진 화합물은 SSAO 대 MAO-A에 대하여 500의 특이성을 가진다). 또한, 본 발명에 사용되는 화합물은 약 10, 보다 바람직하게는 약 100, 보다 더 바람직하게는 약 500의 SSAO 대 MAO-B에 대한 특이성을 가진다(여기서, SSAO 대 MAO-B에 대한 특이성은 MAO-B에 대한 화합물의 IC50 대 SSAO에 대한 동일 화합물의 IC50의 비로 정의된다). 하기 표 1은 본 발명에 사용되는 몇 가지 화합물에 대한 실험값을 제공한다.
용어 "VAP-1 단백질로의 결합 억제"는, 예를 들면 표면 상에서 SSAO/VAP-1 단백질을 발현하는 세포와 SSAO/VAP-1 단백질의 결합 파트너 간의 결합의 억제(부분 내지 완전 억제를 포함할 수 있음)를 가리키는 것을 의미한다. 그러한 결합은, 예를 들면 표면 상에서 SSAO/VAP-1 단백질을 발현하는 세포가 SSAO/VAP-1 단백질의 결합 파트너를 발현하는 다른 세포, 예컨대 고 내피 세포(HEC)와 상호작용할 때 일어난다. 따라서, "VAP-1 단백질로의 결합 억제"는 표면 상에서 SSAO/VAP-1 단백질을 발현하는 세포와, SSAO/VAP-1 단백질의 결합 파트너를 발현하는 다른 세포 간의 유착의 억제를 포함한다. 그러한 유착 추이는, 예를 들면 세포 롤링을 포함한다. 이 개시 내용(실시예를 포함함)이 명백히 가리키는 바와 같이, 그러한 억제는 시험관내 또는 생체내에서 일어날 수 있다.
본 발명은 본 명세서에 기재된 화합물의 모든 염, 뿐만 아니라 그러한 화합물의 염을 사용하는 방법을 포함한다. 또한, 본 발명은 본 명세서에서 거론된 화합물의 임의의 염의 모든 순수(비염) 화합물, 뿐만 아니라, 본 명세서에서 거론된 화합물의 임의의 염의 다른 염을 포함한다. 한 가지 구체예에서, 본 발명의 염은 약학적으로 허용 가능한 염을 포함한다. 약학적으로 허용 가능한 염은 유리 화합물의 생물학적 활성을 보유하고, 생물학적이 아니거나, 달리 바람직하지 않은 염이다. 염기성 화합물의 소정의 염은 화합물을 산으로 처리함으로써 당업자에게 공지된 방법에 의하여 제조할 수 있다. 무기산의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, 염산, 브롬산, 황산, 질산 및 인산이 있다. 유기산의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, 포름산, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 피루브산, 옥살산, 말레산, 신남산, 만델산, 술폰산 및 살리실산이 있다. 아미노산과의 염기성 화합물의 염, 예컨대 아스파르트산염 및 글루탐산염도 제조할 수 있다. 산성 화합물의 소정의 염은 화합물을 염기로 처리함으로써 당업자에게 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 산 화합물의 무기염의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, 알칼리 금속 및 알칼리토 금속, 예컨대 나트륨염, 칼륨염, 마그네슘염 및 칼슘염; 암모늄염; 및 알루미늄염이 있다. 산 화합물의 유기염의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, 프로카인, 디벤질아민, N-에틸피페리딘, N,N'-디벤질에틸렌디아민 및 트리에틸아민염이 있다. 아미노산과의 산성 화합물의 염, 예컨대 리신염도 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 화합물의 모든 입체 이성질체, 예컨대 부분 입체 이성질체 및 거울상 입체 이성질체, 뿐만 아니라 입체 이성질체의 혼합물, 예컨대 한정하는 것은 아니지만, 라세미 혼합물도 포함한다. 입체 화학이 화학 구조 또는 화학명에 명백하게 나타나 있지 않다면, 그 화학 구조 또는 화학명은 도시된 화합물의 모든 가능한 입체 이성질체를 포함하는 것으로 한다. 또한, 일반식 I, I-P, I-A, I-AP, I-B 및 I-C가 묘사된 시스-트랜스 이성질체 중 단지 하나만으로 도시되어 있지만(R1 및 R2는 서로에 대하여 시스로 도시됨), 도식은 R1 및 R2가 시스 위치에 있는 것뿐만 아니라, R1 및 R2가 트랜스 위치에 있는 양 화합물을 포함하는 것으로 한다(즉, 단지 하나의 이성질체가 도시되어 있지만, 단일 도면은 E 및 Z 이성질체 둘 다를 나타내는 데 사용된다).
용어 "알킬"은 탄소 원자의 수가 특정되거나, 그 수가 특정되지 않았다면, 12 개 이하의 탄소 원자를 가진 직쇄, 분지쇄, 고리기 및 이들의 조합을 포함하는 포화 지방족기를 의미한다. "직쇄 알킬" 또는 "선형 알킬"기는 고리 또는 분지쇄가 없는 알킬기를 의미하며, 통상적으로 "n-알킬"기로 표시된다. 알킬기의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, 부틸, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, t-부틸, 펜틸, n-펜틸, 헥실, 헵틸, 옥틸, 노닐, 데실, 운데실, 도데실, 네오펜틸, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실 및 아다만틸과 같은 기가 있다. 시클로알킬기는, 한정하는 것은 아니지만, 시클로헵틸과 같은 기를 비롯한 한 개의 고리 또는, 한정하는 것은 아니지만, 아다만틸 또는 노르보르 닐과 같은 기를 비롯한 다중 융합 고리로 구성될 수 있다.
"치환 알킬"은, 한정하는 것은 아니지만, 할로겐(플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도), 알콕시, 아실옥시, 아미노, 히드록시, 메르캅토, 카르복시, 벤질옥시, 페닐, 벤질, 시아노, 니트로, 티오알콕시, 카르복시알데히드, 카르보알콕시 및 카르복사미드와 같은 기를 비롯한 1 이상의 치환기, 또는 본 발명의 목적을 위하여 필요에 따라서 보호기로 적당하게 차단될 수 있는 작용기로 치환된 알킬기를 의미한다. 치환 알킬기의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, -CF3, -CF2-CF3 및 다른 퍼플루오로 및 퍼할로기; -CH2-OH; -CH2CH2CH(NH2)CH3 등이 있다.
용어 "알켄일"은 탄소 원자의 수가 특정되거나, 또는 그 수가 특정되지 않은 경우, 12 개 이하의 탄소 원자를 가지며, 1 이상의 이중 결합(-C=C-)을 함유하는 직쇄(선형), 분지쇄, 고리기 및 이들의 조합을 비롯한 불포화 지방족기를 의미한다. 알켄일기의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, -CH2-CH=CH-CH3; 및 -CH2-CH2-시클로헥센일이 있으며, 여기서 에틸기는 임의의 가능한 탄소 원자가에서 시클로헥센일 부분에 결합될 수 있다. 용어 "알킨일"은 탄소 원자의 수가 특정되거나, 또는 그 수가 특정되지 않은 경우, 12 개 이하의 탄소 원자를 가지며, 1 이상의 삼중 결합(-C≡C-)을 함유하는 직쇄(선형), 분지쇄, 고리기 및 이들의 조합을 비롯한 불포화 지방족기를 의미한다. "탄화수소쇄" 또는 "히드로카르빌"은 직쇄, 분지쇄 또는 고리 알킬, 알켄일 또는 알킨일 및 이들의 조합을 포함한다. "치환 알켄일", "치환 알킨일" 및 "치환 탄화수소쇄" 또는 "치환 히드로카르빌"은, 한정하는 것은 아니지 만, 할로겐, 알콕시, 아실옥시, 아미노, 히드록시, 메르캅토, 카르복시, 벤질옥시, 페닐, 벤질, 시아노, 니트로, 티오알콕시, 카르복시알데히드, 카르보알콕시 및 카르복사미드와 같은 기, 또는 본 발명의 목적을 위하여 필요에 따라서 보호기로 적당하게 차단될 수 있는 작용기로 치환된 각각의 기를 의미한다.
"아릴" 또는 "Ar"은 단일 고리(예컨대, 한정하는 것은 아니지만, 페닐과 같은 기) 또는 2 이상의 축합 고리(예컨대, 한정하는 것은 아니지만, 나프틸 또는 안트릴과 같은 기)를 가진 방향족 탄소환기를 의미하고, 미치환 및 치환 아릴기를 포함한다. 달리 특정하지 않는 한, 아릴은 고리 부분에 6 내지 12 개의 탄소 원자를 함유한다. 아릴에 대한 바람직한 고리는 고리 부분에 6 내지 10 개의 탄소 원자이다. "치환 아릴"은, 한정하는 것은 아니지만, 알킬, 알켄일, 알킨일, 탄화수소쇄, 할로겐, 알콕시, 아실옥시, 아미노, 히드록시, 메르캅토, 카르복시, 벤질옥시, 페닐, 벤질, 시아노, 니트로, 티오알콕시, 카르복시알데히드, 카르보알콕시 및 카르복사미드와 같은 기, 또는 본 발명의 목적을 위하여 필요에 따라서 보호기로 적당하게 차단될 수 있는 작용기를 비롯한 1 이상의 치환기로 치환된 아릴을 의미한다. "아랄킬"은 알킬 치환 아릴기를 의미하는데, 여기서 임의의 아릴이 알킬에 부착될 수 있으며; 알킬 부분은 1 내지 6 개의 탄소 원자의 직쇄 또는 분지쇄이고, 바람직하게는 1 내지 3 개의 탄소 원자를 함유한다.아랄킬기가 치환기로서 표시된 경우, 아랄킬기는 그 알킬 부분 또는 아릴 부분 상의 임의의 가능한 원자가에서 분자의 나머지에 연결될 수 있는데; 예를 들면, 톨릴 아랄킬기는 방향족 고리 부분 상의 5 개의 수소 중 임의의 것을 분자의 나머지로 대체하거나, 또는 메틸 부분 상의 알파 수소 중 하나를 분자의 나머지로 대체함으로써 연결될 수 있다. 아랄킬기는 알킬 부분에 의해 분자의 나머지에 연결되는 것이 바람직하다.
바람직한 아릴기는 치환 또는 치환되지 않을 수 있는 페닐이다. 치환 페닐기에 대한 바람직한 치환기는 저급 알킬(-C1-C4 알킬) 또는 할로겐(염소(-Cl), 브롬(-Br), 요오드(-I) 또는 불소(-F); 페닐기에 대한 바람직한 할로겐 치환기는 염소 및 불소이다), 히드록시(-OH) 또는 저급 알콕시(-C1-C4 알콕시), 예컨대 메톡시, 에톡시, 프로폭시(프로폭시)(n-프로폭시 또는 i-프로폭시) 및 부톡시(n-부톡시, i-부톡시, sec-부톡시 또는 tert-부톡시)이며, 바람직한 알콕시 치환기는 메톡시이다. 치환 페닐기는 1 또는 2 개의 치환기를 갖는 것이 바람직하고, 1 개의 치환기를 갖는 것이 보다 바람직하다.
"헤테로알킬", "헤테로알켄일" 및 "헤테로알킨일"은 기 내에 주쇄, 분지쇄 또는 고리쇄의 일부로서 1 이상의 이종 원자를 함유하고, 특정된 탄소 원자의 수(또는 그 수가 특정되지 않은 경우, 12 개 이하의 탄소 원자를 가짐)를 함유하는 알킬, 알켄일 및 알킨일기를 각각 의미한다. 이종 원자로는, 한정하는 것은 아니지만, N, S, O 및 P가 있으며; N 및 O가 바람직하다. 헤테로알킬, 헤테로알켄일 및 헤테로알킨일기는 이종 원자(원자가가 이용 가능한 경우) 또는 탄소 원자에서 분자의 나머지에 결합될 수 있다. 헤테로알킬기의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, -O-CH3, -CH2-O-CH3, -CH2-CH2-O-CH3, -S-CH2-CH2-CH3, -CH2-CH(CH3)-S-CH3, -CH2-CH2-NH-CH2-CH2-, 1-에틸-6-프로필피페리디노 및 모르폴리노와 같은 기가 있다. "헤테로 아릴" 또는 "HetAr"은 단일 고리(예컨대, 한정하는 것은 아니지만, 피리딜, 이미다졸일, 티오펜 또는 푸릴) 또는 2 이상의 축합 고리(예컨대, 한정하는 것은 아니지만, 인돌리진일 또는 벤조티에닐)를 갖고, 한정하는 것은 아니지만, 고리 내에 N, O, P 또는 S와 같은 이종 원자를 비롯한 1 이상의 이종 원자를 가진 방향족 탄소환기이다. 달리 특정하지 않는 한, 헤테로알킬, 헤테로알켄일, 헤테로알킨일 및 헤테로아릴기는 1 내지 5 개의 이종 원자 및 1 내지 12 개의 이종 원자를 가진다. "치환 헤테로알킬", "치환 헤테로알켄일", "치환 헤테로알킨일" 및 "치환 헤테로아릴"기는, 한정하는 것은 아니지만, 알킬, 알켄일, 알킨일, 벤질, 탄화수소쇄, 할로겐, 알콕시, 아실옥시, 아미노, 히드록실, 메르캅토, 카르복시, 벤질옥시, 페닐, 벤질, 시아노, 니트로, 티오알콕시, 카르복시알데히드, 카르보알콕시 및 카르복사미드와 같은 기, 또는 본 발명의 목적을 위하여 필요에 따라서 보호기로 적당하게 차단될 수 있는 작용기를 비롯한 1 이상의 치환기로 치환된 헤테로알킬, 헤테로알켄일, 헤테로알킨일, 헤테로아릴기를 의미한다. 그러한 치환 헤테로알킬기의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, 질소 또는 탄소에서 페닐 도는 벤질기로 치환되고, 탄소 도는 질소 상의 임의의 가능한 원자가에 의해 분자의 나머지에 부착된 피페라진, -NH-SO2-페닐, -NH(-C=O)O-알킬, -NH-(C=O)O-알킬-아릴 및 -NH-(C=O)-알킬이 있다. 화학적으로 가능하다면, 기의 이종 원자(들) 및/또는 탄소 원자는 치환될 수 있다. 또한, 이종 원자(들)는 화학적으로 가능하다면, 산화된 형태일 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "알콕시"는 산소 원자에 연결되고, 탄소 원자 의 수가 특정되거나, 그 수가 특정되지 않은 경우, 12 개 이하의 탄소 원자를 가진 알킬, 알켄일, 알킨일 또는 탄화수소쇄를 의미한다. 알콕시기의 예로는, 한정하는 것은 아니지만, 메톡시, 에톡시, 프로폭시(프로폭시)(n-프로폭시 또는 i-프로폭시) 및 부톡시(n-부톡시, i-부톡시, sec-부톡시 또는 tert-부톡시)와 같은 기가 있다. 상기 문장에 연결된 기들은 바람직한 알콕시기이고; 특히 바람직한 알콕시 치환기는 메톡시이다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "할로" 및 "할로겐"은 VIIa족 원소(1990 IUPAC 주기율표의 17족 원소, IUPAC 무기 화학 명명법, 권장안 1990)를 의미하고, Cl, Br, F 및 I 치환기를 포함한다. 바람직한 할로겐 치환기는 Cl 및 F이다.
"보호기"는 다음 특징: 1) 소정의 작용기와 선택적으로 반응하여 양호한 수율로 보호가 요망되는 계획된 반응에 안정한 보호된 기질을 제공하고; 2) 보호된 기질로부터 선택적으로 제거 가능하여 소정의 작용기를 얻으며; 3) 그러한 계획된 반응에 존재하거나 발생된 다른 작용기(들)와 상용성인 시약에 의해 양호한 수율로 제거 가능한 화학기를 의미한다. 적당한 보호기의 예는 문헌(Greene, et al., (1991) Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd Ed., John Wiley & Sons, Inc., New York)에서 찾아볼 수 있다. 아미노 보호기로는, 한정하는 것은 아니지만, 메시틸렌술포닐(Mts), 벤질옥시카르보닐(CBz 또는 Z), t-부틸옥시카르보닐(Boc), t-부틸디메틸실릴(TBS 또는 TBDMS), 9-플루오렌일메틸옥시카르보닐(Fmoc), 토실, 벤젠술포닐, 2-피리딜 술포닐 또는 적당한 광분해성 보호기, 예컨대 6-니트로베라트릴옥시 카르보닐(Nvoc), 니트로피페로닐, 피렌일메톡시카르보닐, 니트로벤 질, 디메틸 디메톡시벤질, 5-브로모-7-니트로인돌린일 등이 있다. 히드록시 보호기로는, 한정하는 것은 아니지만, Fmoc, TBS, 광분해성 보호기(예컨대, 니트로베라트릴 옥시메틸 에테르(Nvom)), Mom(메톡시 메틸 에테르) 및 Mem(메톡시 에톡시 메틸 에테르), NPEOC(4-니트로페네틸옥시카르보닐) 및 NPEOM(4-니트로페네틸옥시메틸옥시카르보닐)이 있다.
일반 합성법
본 명세서에 기재된 화학식의 화합물은 다양한 방법에 의해 제조할 수 있다. 화학식 I의 화합물은 출발 물질로서 1,2-치환 프로펜을 사용하여 용이하게 제조된다(하기 실시예 1 내지 10 참조). 프로펜의 메틸기는, 예를 들면 브롬화에 의해 양호한 이탈기(LG)로 유도체화하여 3-브로모-1,2-치환 프로펜을 얻을 수 있다.
Figure 112006009365160-PCT00012
N-보호된 히드록실아민 화합물, HON(R3)(PG)(식 중, PG는 보호기(예컨대, N-Boc 히드록실아민(t-부틸 N-히드록시카르바메이트)이다) 또는 모노-보호된 히드라진 화합물 H(R6)N-N(R3)(PG)(예컨대, N-Boc 히드라진(t-부틸 카르바제이트))와 반응시키면, 각각 X = O 또는 NR6인 화학식 I의 화합물을 얻는다.
Figure 112006009365160-PCT00013
화학식 I의 특정한 화합물(예컨대, 화학식 I-B 또는 화학식 I-C의 화합물)은 시판 벤젠아세트산(페닐아세트산, 알파-롤릴산; 알드리치; 하기 반응식에서 n=0에 해당함) 또는 3-페닐프로피온산(히드로신남산; 알드리치; 하기 반응식에서 n=1에 해당함)으로부터 출발하여 하기 반응 경로에 의해 용이하게 제조된다. 화학식 I-B 및 화학식 I-C의 다른 화합물은 페닐 치환 페닐아세트산 또는 페닐 치환 3-페닐프로피온산을 사용하여 합성될 수 있다.
산은 문헌(Hin, B. et al., J. Org. Chem. 67: 7365-7368 (2002); 7367-7368 페이지에서 벤젠아세트산, 6b로부터 8b의 제조 절차 참조)에 기재된 절차에 따라서 (2-벤질)아크릴산 메틸 에스테르 또는 (2-페네틸)아크릴산 메틸 에스테르로 전환시킨다. 간단히 말하면, 염화메틸렌 중의 디시클로헥실카르보디이미드(DCC)를 벤젠아세트산 또는 3-페닐프로피온산, 멜드럼 산(2,2-디메틸-1,3-디옥산-4,6-디온) 및 디메틸아미노피리딘의 용액에 가하고, 0℃에서 밤새도록 반응시킨다. 용액을 여과하고, 세척하며, 건조시키고, 산성화한 다음, NaBH4를 가하고, 반응을 0℃에서 밤새도록 진행시킨다. 그 다음, 멜드럼 산 중간체를 무수 메탄올 중의 디메틸 메틸렌임모늄 요오다이드로 65℃에서 밤새도록 교반시킨다. 반응 혼합물을 농축시키고, 디에틸 에테르에 용해시키며, 세척하고, 건조시키며, 농축시켜서 (2-벤질)아크릴산 메틸 에테르 또는 (2-페네틸)아크릴산 메틸 에스테르를 얻는다.
Figure 112006009365160-PCT00014
그 다음, 상기 도시된 생성물, (2-벤질)아크릴산 메틸 에스테르(n=0) 또는 (2-페네틸)아크릴산 메틸 에스테르(n=1) 화합물을 DIBAL 환원시켜서 에스테르를 알콜(2-페네틸-2-프로펜-1-올(n=0) 또는 2-(3-페닐프로필)-2-프로펜-1-올(n=1))로 환원시킨다:
Figure 112006009365160-PCT00015
그 다음, 알콜은 N-(Boc-아미노)프탈이미드(N'-Boc-N,N-프탈로일히드라진; 스위스에 소재하는 플루카에서 구입 가능함)를 사용하여 미츠노부 반응시켜서(Brosse et al., Journal of Organic Chemistry, 65(14), 4370-4374 (2000) 참조; 또한, 하기 실시예 10 참조; 또한, Hughes, D.L., Org. Reac. 42: 335-656 (1992) 및 Mitsunobu, O. et al., J. Am. Chem. Soc. 94: 679 (1972) 참조) 하기 생성물을 얻는다:
Figure 112006009365160-PCT00016
이어서, 보호기를 제거하여:
Figure 112006009365160-PCT00017
(2-페네틸알릴)히드라진(n=0) 및 [2-(3-페닐프로필)알릴]히드라진(n=1)을 얻는다.
화학식 II의 화합물은 몇 가지 방법에 의하여 용이하게 제조된다. 한 가지 그러한 방법은 출발 물질로서 1,1-이치환 에틸렌 옥시드를 사용하는데, 이는 화학식 HON(R14)PG의 화합물과 반응하며, 식 중, PG는 보호기이고, R14는 화학식 II에 기재된 바와 같다(하기 실시예 11 및 12 참조).
Figure 112006009365160-PCT00018
그 다음, 히드록실 산소를 더 유도체화할 수 있으며, 보호기를 합성 말기에 제거한다.
화학식 III의 화합물은 다양한 방법에 의해 용이하게 제조된다. 한 가지 그러한 방법(하기 실시예 13 참조)은 시안화벤질(페닐아세토니트릴) 출발 물질을 이 용한다. 페닐 고리는 임의로 치환될 수 있다. 알킬, 시클로알킬, 아릴(치환 또는 미치환) 또는 헤테로아릴(치환 또는 미치환)과 같은 다른 기, 예컨대 2-피리딜아세토니트릴을 사용할 수 있다. 시안화벤질은 입체 장애의 강염기, 예컨대 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드로 처리한 후, 양호한 이탈기, 예컨대 1,2-디브로모에탄으로 1번 및 2번 위치에서 치환된 에틸 화합물을 첨가한다. 이로써 1-페닐, 1-시아노 시클로프로판 화합물이 얻어진다.
Figure 112006009365160-PCT00019
그 다음, 시아노기는 당업계에 공지된 방법에 의하여(예컨대, 리틈 알루미늄 수소화물의 첨가에 의하여) 환원될 수 있다.
Figure 112006009365160-PCT00020
이와 같이 생성된 아미노기는 매우 다양한 시약, 예컨대 브롬화알킬, 알데히드 또는 케톤과 반응시킨 후, 환원하고, 아실 화합물과 반응시킨 후, 환원시키는 등에 의해 R22기를 질소에 도입할 수 있다.
그 중에서도 특히, 화학식 III-B 및 화학식 III-C의 화합물의 제조에 유용 한, 화학식 III의 화합물의 합성을 위한 다른 경로는 하기 반응식(여기서, Ar은 아릴기, 예컨대 C6-C10 치환 또는 미치환 아릴기를 나타낸다)에 도시되어 있다. 시클로프로판카르보니트릴(시안화 시클로프로필; 알드리치)를 염기(예컨대, 리튬 디이소프로필아미드, LDA)와 반응시킨 후, 치환 브롬화알킬과 반응시키고; 그 후, 니트릴기를 아미노기로 환원시킨다:
Figure 112006009365160-PCT00021
예를 들면, (2-브로모에틸)벤젠을 염기, 이어서 시클로프로판카르보니트릴과 반응시키면, 중간체 (1-페네틸)시클로프로판카르보니트릴이 얻어지고, 이를 (1-페네틸시클로프로필)메틸아민으로 환훤시키며; 브롬화벤질(α-브로모톨루엔)을 염기, 이어서 시클로프로판카르보니트릴과 반응시키면, 중간체 1-벤질시클로프로판카르보니트릴이 얻어지고, 이를 (1-벤질시클로프로필)메틸아민으로 환원시킨다.
사용 방법
본 명세서에서 논의된 화합물은 다양한 방식으로 사용할 수 있다. 한 가지 그러한 용도는 염증, 염증성 질환, 염증 반응 및 특정한 다른 질환의 치료이며, 하기 "질환 치료"에서 보다 상세하게 설명될 것이다. 다른 용도로는 생체내 및 시험관내에서 SSAO 효소 활성 및/또는 VAP-1 결합 활성 또는 VAP-1 아민 옥시다제 활성 을 억제하는 것이 있다. 화합물의 시험관내 용도의 예로는 어세이, 예컨대 통상의 어세이 또는 고 처리량 스크리닝 어세이 용도가 있다.
질환 치료
본 명세서에 논의된 화합물은 염증 및 염증 상태 치료와 면역 및 자가면역 장해의 치료에 유용하다. 또한, 화합물은 염증 또는 면역 장해에 의해 유발되거나 이를 특징으로 하는 다양한 질환 중 하나 이상을 치료하는 데 유용하다. 따라서, 화합물은 염증에 의해 유발되는 질환을 치료하는 데 사용할 수 있고, 또한, 염증을 유발하는 질환을 치료하는 데에도 사용할 수 있다. 본 명세서에서 논의되는 화합물로 질환을 "치료하는" 것은 질환 또는 질환의 1 이상의 증상을 예방, 감소 또는 제거하거나, 질환 또는 질환의 1 이상의 증상의 진행을 지연시키거나, 질환 또는 질환의 1 이상의 증상의 중증도를 감소시키기 위하여 추가의 치료제 유무 하에 본 명세서에서 논의된 1 이상의 화합물을 투여하는 것으로 정의한다. 본 명세서에서 논의되는 화합물의 "치료 용도"는 상기 정의된 바와 같이, 질환을 치료하기 위하여 본 명세서에서 논의되는 1 이상의 화합물을 사용하는 것으로 정의된다. 화합물의 "치료학적 유효량"은 피험자에게 투여시 질환 또는 질환의 1 이상의 증상을 예방, 감소 또는 제거하거나, 질환 또는 질환의 1 이상의 증상의 진행을 지연시키거나, 질환 또는 질환의 1 이상의 증상의 중증도를 감소시키는 데 충분한 화합물의 양이다. "치료학적 유효량"은 1 이상의 투여로 제공될 수 있다.
본 발명의 화합물 및 방법으로 치료될 수 있는 피험자는 척추 동물, 바람직하게는 포유류, 보다 바람직하게는 사람을 포함한다.
본 발명의 화합물 및 방법으로 치료할 수 있는 질환으로는 염증, 염증성 반응, 염증성 질환 및 면역 장해가 있다. 염증성 질환은 면역 장해에 의해 유발될 수 있고, 면역 장해는 종종 염증을 수반하며, 따라서 염증과 면역 질환은 둘 다 본 발명의 화합물 및 방법에 의해 동시에 치료될 수 있다. 본 발명의 화합물 및 방법으로 치료될 수 있는 질환으로는, 한정하는 것은 아니지만, 다발성 경화증(예컨대, 만성 다발성 경화증); 윤활막염; 전신 염증성 패혈증; 염증성 장 질환; 크론병; 궤양성 결장염; 알츠하이머병; 죽상 경화증; 류마티스양 관절염; 소아성 류마티스양 관절염; 폐 염증 상태; 천식; 피부 염증 상태 및 질환; 접촉 피부염; 간 염증 및 자가면역 상태; 자가면역 간염; 원발 담관성 간경화; 경화 담관염; 자가면역 담관염; 알콜성 간 질환; 타입 I 당뇨병 및/또는 그 합병증; 타입 II 당뇨병 및/또는 그 합병증; 죽상 경화증; 허혈 질환, 예컨대 발작 및/또는 그 합병증; 및 심근 경색 및/또는 그 합병증이 있다. 다른 구체예에서, 본 발며에 의해 치료하고자 하는 염증성 질환 또는 면역 장해는 다발성 경화증이다. 다른 구체예에서, 본 발명에 의해 치료하고자 하는 염증성 질환 또는 면역 장해는 만성 다발성 경화증이다. 다른 구체예에서, 본 발명에 의해 치료하고자 하는 염증성 질환 또는 면역 장해는 발작으로부터 유래하는 염증 합병증이다.
투여 방식
본 발명에 사용하기 위해 기재된 화합물은, 한정하는 것은 아니지만, 본 명세서에 개시된 것을 비롯하여, 당업계에 공지된 임의의 경로에 의해 포유류, 바람직하게는 사람 피험자에게 투여될 수 있다. 투여 방법으로는, 한정하는 것은 아니 지만, 정맥내, 경구, 동맥내, 근육내, 국소, 흡입(예컨대, 미스트 또는 분무), 비점막 경유, 피하, 경피, 복강내, 위장내 및 특정하거나 감염된 기간으로 직겁 투여가 있다. 경구 투여가 바람직한 투여 경로이다. 본 발명에서 사용하기 위해 기재된 화합물은 정제, 알약, 분말 혼합물, 캡슐, 과립, 주사제, 크림, 용액, 좌제, 에멀션, 분산제, 음식 프레믹스 형태 및 다른 적당한 형태로 투여될 수 있다. 또한, 화합물은 리포솜 제제로 투여될 수 있다. 또한, 화합물은 프로드러그로서 투여될 수 있으며, 여기서, 프로드러그는 치료되는 피험자에게서 치료학적으로 유효한 형태로 변형하게 된다. 추가의 투여 방법은 당업계에 공지되어 있다.
본 발명의 화합물은 약 0.1 ㎍/kg 내지 약 300 mg/kg의 투약 범위 내, 또는 약 1.0 ㎍/kg 내지 약 40 mg/kg 체중 내, 또는 약 1.0 ㎍/kg 내지 약 20 mg/kg 체중 내, 바람직하게는 약 1.0 ㎍/kg 내지 약 10 mg/kg 체중의 유효량으로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물은 단일 1일 투여량으로 투여될 수 있거나, 총 1일 투여량이 1일 2회, 3회 또는 4회의 분할 투여량으로 투여될 수 있다.
본 명세서에 기재된 화합물을 함유하는 약학 제형은 비독성 약학 유기 담체 또는 비독성 약학 무기 담체와 용이하게 혼합된다. 통상의 약학적으로 허용 가능한 담체의 예로는 만니톨, 우레아, 덱스트란, 락토스, 감자 및 옥수수 전분, 스테아르산마그네슘, 탈크, 식물유, 폴리알킬렌 글리콜, 에틸렌 셀룰로스, 폴리(비닐피롤리돈), 탄산칼슘, 에틸 올레에이트, 이소프로필 미리스테이트, 벤질 벤조에이트, 탄산나트륨, 젤라틴, 탄산칼륨, 실리크산 및 다른 통용되는 허용 가능한 담체가 있다. 또한, 약학 제형은 비독성 보조 물질, 예컨대 유화제, 보존제 또는 습윤제 등 을 함유할 수 있다. 적당한 담체는 지나친 부작용을 유발하지 않고, 화합물(들)을 체내에서 그 약리학적 활성을 유지시킬 수 있는 것이다. 비경구 및 비경구가 아닌 약물 전달을 위한 제제는 당업계에 공지되어 있으며, 문헌(Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 20th Edition, Lippincott, Williams & Wilkins (2000))에 설명되어 있다. 고형, 예컨대 정제, 캡슐 및 분말은 통상의 정제 및 캡슐 충전 기계를 사용하여 제조할 수 있으며, 당업계에 널리 알려져 있다. 고체 제형, 예컨대 단위 투여 제공 형태의 경구 투여를 위한 정제 및 캡슐은 당업계에 공지된 임의의 수의 추가 비활성 성분, 예컨대 부형제; 건조제; 착색제; 결합제, 예를 들면 시럽, 아카시아, 젤라틴, 소르비톨, 트라가칸트 또는 폴리비닐피롤리돈; 충전제, 예를 들면 락토스, 당, 옥수수 전분, 인산칼슘, 소르비톨 또는 글리신; 정제 윤활제, 예를 들면 스테아르산마그네슘, 탈크, 폴리에틸렌 글리콜 또는 실리카; 붕괴제, 예를 들면 감자 전분; 또는 허용 가능한 습윤제, 예컨대 나트륨 라우릴 술페이트와 같은 추가의 비활성 성분을 함유할 수 있다. 정제는 표준 약학 실시에 널리 알려진 방법에 따라서 코팅될 수 있다. 섭취를 위한 액체 형태는 공지된 액체 담체, 예를 들면 수성 및 비수성 담체, 예컨대 멸균수, 멸균 염수, 현탁액, 수중유 및/또는 유중수 에멀션 등을 사용하여 제조할 수 있다. 또한, 액체 제제는 임의의 수의 추가 비활성 성분, 예컨대 착색제, 향미제, 감미제, 점도 조절제, 보존제, 안정화제 등을 함유할 수 있다. 비경구 투여의 경우, 본 발명에 사용되는 화합물은 추가 계면활성제 또는 보조제 유무 하에 생리학적으로 허용 가능한 희석제 또는 멸균 액체, 예컨대 물, 염수 또는 오일 중의 화합물의 용액 또는 현탁액의 주사용 투 약으로서 투여될 수 있다. 담체 오일의 예시적인 리스트는 동물유 및 식물유(예컨대, 낙화생유, 대두유), 성규 유도 오일(예컨대, 광물유) 및 합성 오일을 포함한다. 일반적으로, 주사용 단위 투약의 경우, 멸균 액체, 예컨대 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 관련 당 용액과, 에탄올 및 글리콜 용액, 예컨대 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜이 바람직한 액체 담체이다.
선택된 약학적 단위 투약은 혈액, 조직, 기관 또는 신체의 다른 표적된 영역에 약물의 규정된 최종 농도를 제공하도록 제조되고 투여되는 것이 바람직하다. 본 발명의 화합물의 최적의 유효 농도는 실험적으로 결정될 수 있으며, 질환, 투여 경로, 질환 진행 및 건강, 환자 전신 또는 신체 일부에 따른다. 그러한 결정은 당업자의 기술 내에 있다. 본 발명에 사용하기 위한 화합물은 단독 할성 성분으로서 투여될 수 있거나, 또는 다른 활성 성분과 조합하여 투여될 수 있다.
키트
또한, 본 발명은 염증성 질환, 자가면역 질환, 다발성 경화증(예컨대, 만성 다발성 경화증); 윤활막염, 전신 염증성 패혈증; 염증성 장 질환; 크론병; 궤양성 결장염; 알츠하이머병; 죽상 경화증; 류마티스양 관절염; 소아성 류마티스양 관절염; 폐 염증성 상태; 천식; 피부 염증성 상태 및 질환; 접촉 피부염; 간 염증 및 자가면역 상태; 자가면역 간염; 원발 담관성 간경화; 경화 담관염; 자가면역 담관염; 알콜성 간 질환; 타입 I 당뇨병 및/또는 그 합병증; 타입 II 당뇨병 및/또는 그 합병증; 죽상 경화증; 허혈 질환, 예컨대 발작 및/또는 그 합병증; 및 심근 경색 및/또는 그 합병증과 같은 질환 치료; 또는 SSAO 효소 활성(효소 활성은 가용성 SSAO 효소 또는 멤브레인 결합 VAP-1 단백질에 기인하거나, 그 둘 다에 기인함) 억제 및/또는 VAP-1 단백질로의 결합 억제에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품 및 키트를 제공한다. 제조 물품은 라벨을 가진 용기를 포함한다. 적당한 용기의 예로는 병, 바이알 및 시험관이 있다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로 형성될 수 있다. 용기는 질환 치료 또는 SSAO 또는 VAP-1 효소 활성 또는 VAP-1 단백질로의 결합 억제에 유효한 활성제를 가진 조성물을 담지한다. 조성물 내 활성제는 화학식 I, I-P, I-A, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 및/또는 III-C의 화합물 중 1 이상이다. 용기 상의 라벨은 조성물이 염증 또는 자가면역 질환과 같은 질환 치료 또는 SSAO 또는 VAP-1 효소 활성 또는 VAP-1 단백질로의 결합 억제에 사용된다는 것을 가리키며, 또한 전술한 것과 같은 생체내 또는 시험관내 사용을 위한 지시를 가리킬 수 있다.
또한, 본 발명은 화학식 I, I-P, I-A, I-AP, I-B, I-C, II, III, III-A, III-B 및/또는 III-C의 화합물 중 임의의 1 이상을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 키트는 전술한 용기를 포함한다. 다른 구체예에서, 본 발명의 키트는 전술한 용기 및 완충제를 포함하는 제2 용기를 포함한다. 이는 상업 및 사용자 관점으로부터 요망되는 다른 물질, 예컨대 다른 완충제, 희석제, 충전제, 바늘, 주사기 및 패키지 삽입물과, 본 발명에 기재된 임의의 방법(자가면역 또는 염증 질환 치료 방법 및 SSAO 또는 VAP-1 효소 활성 또는 VAP-1 단백질로의 결합 억제 방법)을 수행하기 위한 지시서를 더 포함할 수 있다.
다른 양태에서, 키트는 예를 들면, 자가면역 또는 염증성 질환, 예컨대 다발 성 경화증 또는 허혈성 질환(예컨대 발작) 및 그 후유증을 가진 개체를 치료하기 위하여 본 명세서에 기재된 방법 중 임의의 것에 사용할 수 있다.
확인된 인용 문헌으로 본 명세서에서 참조하는 모든 공보, 특허, 특허 출원 및 공개된 특허 출원의 개시 내용은 본 명세서에서 그 전체를 참고 인용한다.
본 발명은 하기 비한정하는 실시예에 의해 더 잘 이해될 것이다. 본 명세서에서 사용되는 용어 "실시예 X의 화합물"은 실시예의 표제 화합물을 의미하며; 예를 들면, 실시예 8의 화합물은 N-[2-(4'-플루오로페닐)알릴]히드라진 염산염을 의미하는 한편, 실시예 10의 화합물은 (E)-1-플루오로-2-페닐-3-히드라지노프로펜 염산염을 의미한다. 화합물들은 통상적으로 염으로서 기재하지만, 개시 내용은 화합물의 비염 형태, 뿐만 아니라 화합물의 임의의 다른 염을 명백히 포함하며; 예컨대, N-[2-(4'-플루오로페닐)알릴]히드라진 염산염은 비염 화합물 N-[2-(4'-플로오로페닐)알릴]히드라진의 개시도 포함한다.
실시예 1
O-(2-페닐알릴)히드록실아민 염산염
α-메틸스티렌(17.73 g, 150 mmol)과 N-브로모숙신이미드(17.80 g, 100 mmol)의 혼합물을, 환류 콘덴서 및 자기 교반기가 장착된 플라스크 중에서 CCl4(20 ㎖)에 용해시켰다. 혼합물이 환류될 때까지 가열하였다. 반응을 완화시켜서 3 시간 동안 완만한 환류를 유지시킨 다음, 실온으로 냉각시켰다. 침전된 숙신이미드를 여 과 분리하였다. 침전물을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 100% 헥산)에 의해 정제하였다. 생성물 α-브로모메틸스티렌을 오일로서 얻었다(13.0 g, 66%).
MeOH(20 ㎖) 중의 HONHBoc(5.99 g, 45.0 mmol) 및 NaOH(1.8 g, 45.0 mmol)의 용액을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 이 혼합물에 MeOH (5 ㎖) 중의 α-브로모메틸스티렌(5.91 g, 30.0 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 밤새도록 완만한 환류를 유지시켰다. 생성물을 진공 농축시켰다. 잔류물을 H2O로 희석한 다음, EtOAc(3 x 20 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 건조시키고(MgSO4), 여과하였다. 여액을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 10% EtOAc/헥산)에 의해 정제하였다. N-tert-부틸옥시카르보닐-O-(2-페닐알릴)히드록실아민(4.0 g)을 백색 고형물로서 얻었다. 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.25-7.58(m, 5H), 7.65(s, lH), 5.42(s, 1H), 4.79(s, 2H), 1.52(s, 9H).
Figure 112006009365160-PCT00022
에테르(5 ㎖) 중의 N-tert-부틸옥시카르보닐-O-(2-페닐알릴)히드록실아민(2.0 g, 8.0 mmol)의 용액에 에테르 중의 1 M HCl(20 ㎖, 20mmol)을 가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 3 시간 동안 실온에서 교반하였다. 침전물을 여과 수집하고, 에테르(3 x 20 ㎖)로 세척한 다음, 진공 건조시켰다. O-(2-페닐알릴)히드록실아민 염산염을 얻었다(0.80 g, 67%). mp 101-102℃. 1H NMR(D20, 300 MHz) δ 7.25-7.52(m, 5H), 5.75(s, 1H), 5.45(s, 1H), 4.89(s, 2H).
Figure 112006009365160-PCT00023
실시예 2
2-(페닐알릴)히드라진 염산염
"실시예 2의 화합물"은 (2-페닐-2-프로펜일)히드라진(CAS 등록 번호 65814-30-4)을 말하며, 또한 (2-페닐알릴)히드라진이라 불리우는데, 이는 이 실시예의 생성물이다(이 실시예의 최종 구조체 참조). MeOH(15 ㎖) 중의 NH2NHBoc(3.96 g, 30 mmol)와 Et3N(3.04 g, 30 mmol)의 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 이 혼합물에 α-브로모메틸스티렌(2.96 g, 15 mmol)을 가하였다. 생성된 혼합물을 완만하게 환류하고, TLC에 의해 모니터하였다. 약 3 시간 동안 환류한 후, TLC는 반응이 종결되었음을 가리켰다. 반응 생성물을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 10% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 3-(N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-페닐 프로펜(1.34 g, 39%)을 백색 고형물로서 얻었다. 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.26-7.55(m, 5H), 5.50(s, 1H), 5.30(s, 1H), 3.90(s, 2H), 1.52(s, 9H).
Figure 112006009365160-PCT00024
에테르(5 ㎖) 중의 3-(N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-페닐 프로펜(1.0 g, 4 mmol)의 용액을 에테르 중의 1 M HCl(20 ㎖, 20 mmol) 용액을 가하였다. 용액을 N2 하에 실온에서 5 시간 동안 교반하였다. TLC는 반응이 종결되지 않은 것으로 나타났다. 따라서, 혼합물을 진공 농축시켰다. 잔류물을 무수 MeOH(3 ㎖)에 용해시켰다. 이 용액에 에테르 중의 1 M HCl(20 ㎖, 20 mmol) 용액을 가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. TLC는 반응이 종결된 것으로 나타났다. 형성된 고형물을 여과 수집하고, 에테르로 세척한 다음, 진공 건조시켰다. 백색 결정 고형물을 얻었다(0.36 g, 48%). mp: 153-154.5℃. 1 H NMR(D2O, 300 MHz) δ 7.25-7.42(m, 5), 5.60(s, 1H), 5.40(s, 1H), 4.05(s, 2H). 이 화합물은 실시예 2의 화합물, 바로 아래에 도시된 (2-페닐-2-프로펜일)히드라진(또한, (2-페닐알릴)히드라진이라고도 함)로 표시한다.
Figure 112006009365160-PCT00025
실시예 3
N-[2-(4'-클로로페닐)-알릴]-히드라진 염산염
MeOH(40 ㎖) 중의 tert-부틸 카르바제이트(6.61 g, 50 mmol)과 Et3N(5.06 g, 50 mmol)의 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 이 교반 혼합물에 4-클로로-α-브로모메틸스티렌(문헌(Tetrahedron Lett. Yamanaka, M. et al. 2002,43, 2403-2406)에 기재된 절차에 따라 제조함)(6.95 g, 30 mmol)을 가하였다. 생성된 혼합물을 환류 가열하고, TLC에 의해 모니터하였다. TLC는 3 시간 동안의 환류 후 반응이 종결된 것으로 나타났다. 혼합물을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 5 % EtOAc/헥산)에 의해 정제하였다. 3-(N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'-클로로페닐)프로펜을 백색 고형물로서 얻었다(2.70 g, 20%). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.42(d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.29(d, J = 8.4 Hz, 2H), 5.45(s, 1H), 5.28(s, 1H), 3.85(s, 2H), 1.45(s, 9H).
Figure 112006009365160-PCT00026
MeOH(4 ㎖) 중의 3-(N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'-클로로페닐)프로펜(0.78 g, 2.76 mmol)의 용액에 에테르 중의 HCl(2 M. 5.0 ㎖, 10 mmol) 용액을 가하였다. 용액을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 농축시켰다. 생성된 고형물을 에테르로 세척하여 2-(4'-클로로페닐)-알릴 히드라진 염산염을 백색 고형물로서 얻었다(0.61 g, 100%). Mp: 124-126℃. 1H NMR(D20, 300 MHz) δ 7.40(d, J = 9 Hz, 2H), 7.35(d, J = 9 Hz, 2H), 5.65(s, 1H), 5.43(s, 1H), 4.06(s, 2H).
Figure 112006009365160-PCT00027
실시예 4
N-[2-(4'-클로로페닐)-알릴]-N-메틸-히드라진 염산염
DMF(10 ㎖) 중의 3-(N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'-클로로페닐)프로펜(실시예 3 참조)(1.00 g, 3.54 mmol)과 N,N-디이소프로필에틸아민(0.91 g, 7.08 mmol)의 혼합물을 N2 하에 실온에서 20 분 동안 교반한 후, MeI(1.00 g, 7.08 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 그 다음, 이것을 진공 농축시켰다. 진류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 5 % EtOAc/ 헥산)에 의해 정제하였다. 3-(N-메틸-N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'-클로로페닐)프로펜을 백색 고형물로서 얻었다(0.82 g, 78%). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.48(d, J = 9 Hz, 2H), 7.26(d, J = 9 Hz, 2H), 5.45(s, 1H), 5.23(s, 1H), 3.73(br s, 2H), 2.60(s, 3H), 1.40(s, 9H).
Figure 112006009365160-PCT00028
MeOH(5 ㎖) 중의 3-(N-메틸-N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'- 클로로페닐)프로펜(0.82 g, 2.76 mmol)의 혼합물에 에테르 중의 HCl(2 M, 5 ㎖, 10 mmol) 용액을 가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 그 다음, 이것을 진공 농축시켰다. 잔류물을 에테르로 세척하였다. 형성된 고형물을 여과 수집하였다. N-[2-(4'-클로로페닐)알릴]-N-메틸히드라진 염산염을 백색 고형물로서 얻었다(0.6 g, 94%). Mp: 132-134℃. 1H NMR(D20, 300 MHz) δ 7.27-7.52(m, 4H), 5.70(s, 1H), 5.50(s, 1H), 4.09(s, 2H), 2.76(s, 3H).
Figure 112006009365160-PCT00029
실시예 5
N-[2-(4'-클로로페닐)-알릴]-N-에틸히드라진 염산염
DMF(10 ㎖) 중의 3-(N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'-클로로페닐)프로펜(실시예 3 참조)(0.42 g, 1.49 mmol)과 N,N-디이소프로필에틸아민(0.38 g, 2.97 mmol)의 혼합물을 N2 하에 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 이 교반 혼합물에 EtI(0.46 g, 2.97 mmol)를 가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 4 일 동안 교반하였다. 그 다음, 이것을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 5 % EtOAc/헥산)에 의해 정제하였다. 3-(N-에틸-N'-tert-부틸옥시카 르보닐히드라지노)-2-(4'-클로로페닐)프로펜을 오일로서 얻었다(0.38 g, 83%). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.26-7.52(m, 4H), 5.45(s, 1H), 5.25(s, 1H), 3.77(br s, 2H), 2.80(br s, 2H), 1.38(s, 9H), 1.04(t, J = 6.3 Hz, 3H).
Figure 112006009365160-PCT00030
MeOH(3 ㎖) 중의 3-(N-에틸-N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'- 클로로페닐)프로펜(0.38, 1.221)의 혼합물에 에테르 중의 HCl(2 M, 4 ㎖, 8 mmol) 용액을 가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 그 다음, 이것을 진공 농축시켰다. 잔류물을 에테르로 세척하였다. 생성된 고형물을 여과 수집하였다. N-[2-(4'-클로로페닐)알릴]-N-에틸히드라진 염산염을 백색 고형물로서 얻었다(0.27, 90%). Mp: 150-151℃. 1H NMR(D20, 300 MHz) δ 7.25-7.46(m, 4H), 5.68(s, 1H), 5.50(s, 1H), 4.11(s, 2H), 3.07(q, J = 7.2 Hz, 2H), 1.12(t, J = 7.2 Hz, 3H).
Figure 112006009365160-PCT00031
실시예 6
N-[2-(4'-클로로페닐)알릴]-N,N'-디메틸히드라진 염산염
DMF(10 ㎖) 중의 3-(N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'-클로로페닐)프로펜(실시예 3 참조)(0.42 g, 1.49 mmol)의 혼합물에 수소화나트륨(0.11 g, 4.47 mmol)을 가하였다. 혼합물을 N2 하에 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 그 다음, MeI(0.63 g, 4.47 mmol)를 한번에 가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 이것을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 5% EtOAc/헥산)에 의해 정제하였다. 3-(N,N'-디메틸-N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'-클로로페닐)프로펜을 무색 오일로 얻었다(0.29 g, 63%). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.46(d, J = 8.7, 2H), 7.26(d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.43(s, 1H), 5.22(s, 1H), 3.75(br s, 2H), 2.73(s, 3H), 2.59(br s, 3H), 1.43(s, 9H).
Figure 112006009365160-PCT00032
MeOH(3 ㎖) 중의 3-(N,N'-디메틸-N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'-클로로페닐)프로펜(0.29 g, 0.93 mmol)의 혼합물에 에테르 중의 HCl(2 M, 4 ㎖, 8 mmol) 용액을 가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 그 다음, 이것을 진공 농축시켰다. 잔류물을 에테르로 세척하였다. 형성된 고 형물을 여과 수집하였다. N-[2-(4'-클로로페닐)알릴]-N,N'-디메틸히드라진 염산염을 백색 고형물로서 얻었다(0.17 g, 74%). Mp: 108-110℃. 1H NMR(D20, 300 MHz) δ 7.27-7.56(m, 4H), 5.60(s, 1H), 5.42(s, 1H), 3.93(s, 2H), 2.70(s, 3H), 2.58(s, 3H).
Figure 112006009365160-PCT00033
실시예 7
N-[2-(4'-플루오로페닐)알릴]-N'-메틸히드라진 염산염
CH2Cl2/THF(4:1, 50 ㎖) 중의 4-플루오로-α-메틸스티렌(13.62 g, 100 mmol)과 NBS(21.36 g, 120 mmol)의 혼합물에 Yb(OTf)3(3.1 g, 5 mmol) 및 5 mol% TMSCI(0.54 g)를 가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2 시간 동안 교반하였다. TLC는 출발 물질이 사라진 것으로 나타났다. 반응 혼합물을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 100% 헥산)에 의해 정제하여 4-플루오로-α-브로모메틸스티렌을 오일로서 얻었다(13.54 g, 63%). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.47(br s, 2H), 7.37(br s, 2H), 5.50(s, 1H), 5.47(s, 1H), 4.36(s, 2H).
Figure 112006009365160-PCT00034
DMF(40 ㎖) 중의 디-tert-부틸히드라조디포르메이트(9.29 g, 40 mmol)와 NaH(0.96 g, 40 mmol)의 혼합물에 4-플루오로-α-브로모메틸스티렌(6.45 g, 30 mmol)을 가하였다. 생성된 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 교반하고, TLC에 의해 모니터하였다. TLC가 반응 혼합물이 종결되었음을 나타낼 때, 이것을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 0-5% EtOAc/헥산)에 의해 정제하였다. 3-(N,N'-디-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'-플루오로페닐)프로펜을 오일로서 얻었다(8.33 g, 83%). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.42(br s, 2H), 7.01(br s, 2H), 5.42(br s, 1H), 5.17(s, 1H), 4.50(s, 2H), 1.43(s, 18 H).
Figure 112006009365160-PCT00035
DMF(30 ㎖) 중의 3-(N,N'-디-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'-플루오로페닐)프로펜(1.0 g, 2.73 mmol)과 NaH(0.11 g, 4.55 mmol)의 혼합물을 N2 하에 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 이 혼합물에 MeI(0.65 g, 4.55 mmol)를 적가하였 다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 이것을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 0-5% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여, 오일을 얻었다(1.12 g). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.48(br s, 2H), 7.03(br s, 2H), 5.49(s, 1H), 5.20(s, 1H), 4.10(br s, 2H), 2.75(s, 3H), 1.45(s, 18H).
Figure 112006009365160-PCT00036
MeOH(4.0 ㎖) 중의 3-(N,N'-디-tert-부틸옥시카르보닐-N'-메틸히드라지노)-2-(4'-플루오로페닐)프로펜(1.12 g, 2.94 mmol)의 혼합물에 에테르 중의 HCl(2 M, 6.0 ㎖, 12 mmol) 용액을 가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 용매 및 과량의 HCl을 진공 제거하였다. 잔류물을 에테르로 수회 세척한 다음, 건조시켜서 N-[2-(4'-플루오로페닐)알릴]-N'-메틸히드라진 염산염을 백색 고형물로서 얻었다(0.56 g, 88%). Mp: 128-129℃. 1H NMR(D2O, 300 MHz) δ 7.41(br s, 2H), 7.03(br s, 2H), 5.50(s, 1H), 5.29(s, 1H), 3.95(s, 2H), 2.67(s, 3H).
Figure 112006009365160-PCT00037
실시예 8
N-[2-(4'-플루오로페닐)-알릴]히드라진 염산염
MeOH(40 ㎖) 중의 tert-부틸 카르바제이트(6.61 g, 50 mmol)와 Et3N(5.06 g, 50 mmol)의 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 이 교반 혼합물에 4-플루오로-α-브로모메틸스티렌(실시예 7 참조)(6.45 g, 30 mmol)을 가하였다. 생성된 혼합물을 환류 가열하고, TLC에 의해 모니터하였다. TLC는 3 시간 동안 환류한 후 반응이 종결되었음을 보여주었다. 혼합물을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 5-10% EtOAc/헥산)에 의해 정제하였다. 3-(N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-(4'-플루오로페닐)프로펜을 백색 고형물로서 얻었다(1.9 g, 24%). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.42-7.52(m, 2H), 7.02(t, J = 8.4 Hz, 2H), 5.43(s, 1H), 5.27(s, 1H), 3.87(s, 2H), 1.47(s, 9H).
Figure 112006009365160-PCT00038
MeOH(4.0 ㎖) 중의 3-(N'-tert-부틸카르보닐히드라지노)-2-(4'-플루오로페닐프로판(0.8 g, 3.0 mmol)과 에테르 중의 HCl(2.0 M, 5.0 ㎖, 10 mmol)의 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 이것을 진공 농축시켰다. 백색 고형물의 잔류물을 에테르로 수회 세척하고, 여과 수집한 다음, 건조시켰다. N-[2-(4'-플루오 로페닐)알릴]히드라진 염산염을 백색 고형물로서 얻었다(0.55 g, 83%). Mp: 149-150℃. 1H NMR(D2O, 300 MHz) δ 7.35-7.46(m, 2H), 7.05(t, J = 8.4 Hz, 2H), 5.58(s, 1H), 4.04(s, 2H).
Figure 112006009365160-PCT00039
실시예 9
(2-메틸알릴) 히드라진 염산염
MeOH(25 ㎖) 중의 tert-부틸 카르바제이트(1.72 g, 13 mmol)와 Et3N(1.81 ㎖, 13 mmol)의 혼합물을 실온에서 20 분 동안 교반하였다. 이 교반 혼합물에 3-브로모-2-메틸프로펜(1.26 ㎖, 12.5 mmol)을 가하였다. 생성된 혼합물을 환류 가열하고, TLC에 의해 모니터하였다. TLC는 3 시간 동안 환류 후 반응이 완결되었음을 보여주었다. 혼합물을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 20% EtOAc/헥산) 상에서 정제하여3-(N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-메틸-프로펜을 오일로서 얻었다(0.7g, 30%). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 4.92(br s, 2H), 3.43(s, 2H), 1.78(s, 3H), 1.46(s, 9H).
Figure 112006009365160-PCT00040
MeOH(5 ㎖) 중의 3-(N'-tert-부틸옥시카르보닐히드라지노)-2-메틸프로펜(0. 7 g, 3.76 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중의 HCl(4 M, 3.8 ㎖, 15.2 mmol) 용액을 가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 그 다음, 이것을 진공 농축시켜서 고형물을 얻었다. 고형물을 에테르와 EtOAc로 세척한 다음, 건조시켰다. 백색 고형물(0.4 g, 87%)을 얻었다. 1H NMR(D20, 300 MHz) 85.05(s, 1H), 4.95(s, 1H), 3.53(s, 2H), 1.65(s, 3H).
Figure 112006009365160-PCT00041
실시예 10
(E)-l-플루오로-2-페닐-3-히드라지노프로펜 염산염
THF(120 ㎖) 중의 (E)-2-페닐-3-플루오로알릴 알콜(문헌(J. Med. Chem. McDonald, I.A. et al. (1985), 28, 186-193)에 기재된 절차를 사용하여 합성함)(1.1 g, 7.47 mmol), N-tert-부틸옥시카르보닐아미노프탈이미드(문헌(J. Org. Chem. Brosse, N. et al. (2000), 65, 4370-4374에 기재된 절차에 따라 제조함)(1.95 g, 7.47 mmol) 및 PPh3(2.94 g, 11.22 mmol)의 냉각 용액에 DEAD(1.8 ㎖, 11.09 mmol)를 한번에 가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 그 다음, 이것을 진공 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc 중에서 분쇄하고, 여과하였다. 여액을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 10% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 오일을 얻었다(1.3 g, 44%). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.71-7.95(m, 5H), 7.15-7.55(m, 4H), 6.81(2d, J = 81.3 Hz, 1H), 4.64, 4.55(2s, 2H), 1.44, 1.30(2s, 9H).
Figure 112006009365160-PCT00042
THF(50 ㎖) 중의 N-[(E)-2-페닐-3-플루오로알릴]-N-tert-부틸옥시카르보닐아미노프탈이미드(1.3 g, 3.28 mmol), H2NNHMe(0.26 ㎖, 4.72 mmol)의 혼합물을 N2 하에 실온에서 24 시간 동안 교반한 다음, 진공 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 세척하였다. 백색 고형물이 형성되었다. 이것을 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여액을 농축시켜서 반고체를 얻었(0.90 g). lH NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.21-7.53(m, 5H), 6.78(d, J = 83.1 Hz, 1H), 4.26(s, 2H), 1.40(s, 9H). 이것을 더 이상의 정제없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
Figure 112006009365160-PCT00043
MeOH(5 ㎖) 중의 1-[(E)-2-페닐-3-플루오로알릴]-1-tert-부틸옥시카르보닐히드라진(0.98 g, 3.27 mmol)과 1,4-디옥산 중의 4 M HCl(4.0 ㎖, 16 mmol)의 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 혼합물을 진공 농축시켰다. 잔류물을 에테르로 수회 세척하였다. 형성된 고형물을 여과 수집하고, 건조시켜서 (E)-1-플루오로-2-페닐-3-히드라지노프로펜 염산염을 백색 고형물로서 얻었다(0.35 g, 53%). Mp: 139-141℃. 1H NMR(D2O, 300 MHz) δ 7.22-7.47(m, 5H), 6.96(d, J = 81.0 Hz, 1H), 3.89(s, 2H).
Figure 112006009365160-PCT00044
실시예 11
2-아미노옥실-l-페닐-에탄올 염산염
MeOH(15 ㎖) 중의 HONHBoc(5.59 g, 42 mmol)와 NaOH(1.7 g, 42 mmol)의 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 그 다음, 이 교반 용액에 MeOH(3 ㎖) 중의 산화스티렌(2.52 g, 21 mmol) 용액을 적가하였다. 생성된 혼합물을 가열하여 완만한 환류를 유지시키고, TLC에 의해 모니터하였다. 3 시간 동안 환류시킨 후, TLC는 반응이 종결된 것으로 나타났다. 반응 생성물을 진공 농축시켰다. 잔류물을 H2O로 희석하고, EtOAc(3 x 20 ㎖)로 세척하였다. 합한 유기층을 건조시킨 다음(MgS04), 여과하였다. 여액을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 15% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여, 2-(N-tert-부틸옥시카르보닐아미노옥실)-1-페닐에탄올을 얻었다(0.95 g, 18%). mp 97-99℃. 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.25-7.35(m, 5H), 4.99(dd, J= 9.9, 2.4 Hz, 1H), 3.95(dd, J = 11.7, 9.0 Hz, 1H), 3.77(dd, J= 11.7, 9.9 Hz, 1H), 1.52(s, 9H).
Figure 112006009365160-PCT00045
에테르(5 ㎖) 중의 2-(N-tert-부틸옥시카르보닐아미노옥실)-1-페닐에탄올(100 mg, 0.395 mmol)의 용액에 에테르 중의 1 M HCl(2.0 ㎖, 2 mmol) 용액을 가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 3 시간 동안 실온에서 교반하였다. 고형물이 형성되어 침전되었다. 고형물을 여과 수집하고, 에테르로 세척한 다음, 진공 건조시켜서 2-아미노옥실-1-페닐에탄올을 백색 결정 고형물로서 얻었다(40 mg, 53%). Mp 131-132℃. 1H NMR(D20, 300 MHz) δ 7.30(m, 5H), 4.99(t, J= 5.7 Hz, 1H), 4.10(d, J = 5.4 Hz, 2H).
Figure 112006009365160-PCT00046
실시예 12
2-아미노옥시-1-(3',4'-디메톡시페닐)에탄올 염산염
THF(20 ㎖) 중의 NaH(0.25 g, 10.42 mmol)의 냉각 용액에 DMSO(20 ㎖) 중의 요오드화 트리메틸술포늄(2.08 g, 10 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 N2 하에 10 분 동안 교반한 후, THF(5 ㎖) 중의 3,4-디메톡시벤즈알데히드(1.66 g, 10.00 mmol)를 가하였다. 생성된 반응 혼합물을 0℃에서 N2 하에 30 분 동안 교반한 다음, 이것을 점차 실온으로 가온하고, 실온에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙수에 부었다. 혼합물을 헥산(3 x 30 ㎖)으로 세척하였다. 합한 유기층을 H20, 염수로 세척한 다음, 건조시키고(MgS04), 여과시켰다. 여액을 진공 농축시켜서 2-(3',4'-디메톡시페닐)옥시란을 오일로서 얻었다(1.56 g, 87%). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 2.75-2.83(m, 1H), 3.08-3.17(m, 1H), 3.76-3.85(m, 1H), 3.87(br s, 6H), 6.51(s, 1H), 6.75-6.91(m, 2H).
Figure 112006009365160-PCT00047
MeOH(20 ㎖) 중의 HONHBoc(2.31 g, 17.35 mmol)와 NaOH(0.69 g, 17.25 mmol)의 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반한 다음, 이 교반 용액에 MeOH(3 ㎖) 중의 2-(3,4-디메톡시페닐)옥시란(1.56 g, 8.67 mmol)의 용액을 적가하였다. 생성된 혼합물을 완만하게 환류하고, TLC에 의해 모니터하였다. 3 시간 동안 환류한 후, TLC는 반응이 종결되었음을 보여주었다. 반응 혼합물을 진공 농축시켰다. 잔류물을 H2O(50 ㎖)로 세척하고, EtOAc(3 x 20 ㎖)로 추출하였다. 합한 유기층을 건조시킨 다음(MgSO4), 여과하였다. 여액을 진공 농축시켰다. 잔류물을 컬럼 크로마토그래피(실리카 겔, 20-40% EtOAc/헥산)에 의해 정제하여, 2-(N-tert-부틸옥시카르보닐아미노옥실)-1-(3',4'-디메톡시페닐)에탄올(0.4 g, 15%)을 얻었다. 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.51(s, 1H), 7.01(s, 1H), 6.81-6.95(m, 2H), 4.99(d, J = 3.0 Hz, 1H), 3.97(s, 3H), 3.75(s, 3H), 3.70-3.95(m, 2H), 1.52(s, 9H).
Figure 112006009365160-PCT00048
CH2CH2(2 ㎖) 중의 2-(N-tert-부틸옥시카르보닐아미노옥실)-1-(3',4'-디메톡시페닐)에탄올(80 mg, 0.26 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중의 4 M HCl(1.5 ㎖, 6.0 mmol)의 용액을 가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 실온에서 밤새도록 교반하였다. 고형물이 형성되어 침전하였다. 고형물을 여과 수집하고, 에테르로 세척한 다음, 진공 건조시켜서 2-아미노옥시-1-(3',4'-디메톡시페닐)에탄올을 백색 결정 고형물로서 얻었다(50 mg, 55%). mp 100-101℃. 1H NMR(D2O, 300 MHz) δ 6.93(s, 1H), 6.85-6.91(m, 2H), 4.87(t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.05(d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.70(s, 3H), 3.68(s, 3H).
Figure 112006009365160-PCT00049
실시예 13
2-페닐-2-시클로프로필 에틸아민
THF(200 ㎖) 중의 2-페닐아세토니트릴(5.85 g, 50 mmol)의 냉각 용액에 칼륨 비스(트리메틸실릴)아미드(29.92 g, 150 mmol)를 가하였다. 생성된 혼합물을 N2 하에 0℃에서 30 분 동안 교반하였다. 생성된 혼합물에 THF(30 ㎖) 중의 1,2-디브로모에탄(10.33 g, 55 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 N2 하에 0℃에서 교반하고, 실온으로 점차 가온하였다. 그 다음, 이것을 실온에서 밤새도록 교반하였다. 이것을 진공 농축시켰다. 1-페닐-1-시클로프로판카르보니트릴을 증류에 의해 얻었다(3.6 g, 50%). 1H NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 7.27-7.38(m, 5H), 1.69-1.76(m, 2H), 1.37-1.44(m, 2H).
Figure 112006009365160-PCT00050
1-페닐-1-시클로프로판카르보니트릴(1.0 g, 6.98 mmol)을 에테르(25 ㎖) 중의 리튬 알루미늄 수소화물(0.27 g, 6.98 mmol)의 교반 현탁액에 가하였다. 생성된 현탁액을 2 시간 동안 환류한 다음, 외부 빙욕을 적용함으로써 0℃로 냉각시켰다. 과량의 수화물은 H2O를 신중하게 첨가하여 켄칭(quenching)하였다. 생성된 혼합물을 여과하였다. 고형물을 에테르로 세척하고, 여과하였다. 여액을 건조시키고(MgSO4), 여과하였다. 여액을 진공 농축시켜서 2-시클로프로필-2-페닐에틸아민을 얻었다. 1H NMR(DMSO-d6,300 MHz) δ 7.28(m, 4H), 7.17(m, 1H), 2.70(s, 2H), 1.45(br s, 2H), 0.78(dd, J = 6.2, 3.8H, 2H), 0.67(dd, J = 6.2, 3.8Hz, 2H).
Figure 112006009365160-PCT00051
실시예 14
SSAO 활성의시험관내 억제
SSAO 활성은 모노아민 옥시다제 및 관련 효소에 대해 본질적으로 기재된 커 플링된 색도계 방법을 사용하여 측정하였다(Holt A. et al. (1997) Anal. Biochem. 244: 384). 소 혈청 아민 옥시다제(PAO)를 워딩턴 바이오케미컬(미국 뉴저지주 레이크우드 소재)로부터 구입하고, 활성 측정을 위한 SSAO의 공급원으로서 사용하였다. 0.2 M 인산칼륨 완충액, pH 7.6으로 희석시킨 억제제의 소정량을 필요에 따라 각각의 웰에 가하였다. 억제제의 양은 각각의 분석에서 다르지만, 일반적으로 최종 농도는 10 nM 내지 10 μM이었다. 잠재 억제제의 효과를 연구하기 위하여, 억제제 용액 50 ㎕를 30 분 동안 37℃에서 0.2 M 인산칼륨 완충액, pH 7.6 130 ㎕의 총 부피로 PAO 0.4 mU로 예비항온처리하였다. 그다음, 20 ㎕ 10 mM 벤질아민 기질을 첨가하여 어세이를 시작하고, 20 분 동안 37℃에서 항온처리하였다. 그 다음, 750 nM 바닐산(시그마 # V-2250), 400 nM 4-아미노안티피린(시그마 # A-4328) 및 12 U/㎖ 양고추냉이(시그마 # P-8250)를 함유하는 새로 제조된 발색성 용액 50 ㎕의 시약을 200 ㎕의 최종 반응 부피로 가하여 시간당 0.5 OD A490의 변화를 유발하였다. 이는 어세이의 선형 반응 범위 내에 있다. 플레이트를 1 시간 동안 37℃에서 항온처리하고, SSAO 활성을 반영하는 흡광도 증가를, 마이크로플레이트 분광광도계(Power Wave 40, 바이오테크 인스트러먼트)를 사용하여 490 nm에서 측정하였다. 억제는 백그라운드 흡광도에 대해 보정한 후 콘트롤과 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 계산된 IC50과 비교한 억제율(%)로 제공하였다.
또한, SSAO 활성을 기재된 바와 같이 측정하였다(Lizcano JM. et al. (1998) Biochem J. 331: 69). 간단히, 래트 폐 호모게네이트는 새로 제거된 조직을 작은 조각으로 자르고, 이들을 PBS 중에서 철저하게 세척함으로써 제조하였다. 그 다음, 조직을 10 mM 인산칼륨 완충액(pH 7.8) 중에서 1:10(w/v)으로 균질화하고, 1000 g으로 4℃에서 10 분 동안 원심분리하였으며, 상청액을 사용할 때까지 동결시켰다. 100 ul 중의 폐 호모게네이트의 SSAO 활성은 기질로서 20 uM 14C-벤질아민을 사용하여 방사화학적으로 결정하였다. 반응은 37℃에서 50 mM 인산칼륨 완충액(pH 7.2) 300 ul의 최종 부피로 수행하였다. 방사활성 표지된 생성물을 액상 신틸레이션 계수 전에 0.6%(w/v) 2,5-디페닐옥스다졸(PPO)을 함유하는 톨루엔/에틸 아세테이트(1:1, v/v)로 추출하였다. 이 방법을 사용하여 실시예 2 및 8의 화합물의 억제 활성도 50%까지의 사람 혈청의 존재 하에 테스트하였다. 혈청 존재 하에서 두 화합물의 SSAO IC50 값의 변화는 없었다.
실시예 15
SSAO/VAP-1의 SSAO 활성 대 MAO-A 및 MAO-B 활성의 억제 비교
상이한 SSAO 억제제의 특이성은 시험관내에서 MAO-A 및 MAO-B 활성을 억제하는 능력을 측정함으로써 테스트하였다. 재조합 사람 MAO-A 및 사람 MAO-B 효소를 BD 바이오사이언스(미국 매사츄세츠주 소재)에서 입수하였다. MAO 활성은 SSAO에 대해서와 유사한 방식으로 측정하였으나, 단, 억제제 또는 기질로 예비항온처리를 수행하였다. 0.2 M 인산칼륨 완충액, pH 7.6으로 희석한 소정량의 억제제를 각각의 웰에 필요에 따라 가하였다. 억제제의 양은 각각의 웰에서 달랐지만, 최종 농도는 대체로 50 nM 내지 1 mM이었다. 콘트롤에는 억제제가 없었다. 그 다음, 다음 제제 를 0.2 M 인산칼륨 완충액, pH 7.6 중에서 200 ㎕의 최종 반응 부피로 가하였다: 0.04 mg/㎖의 MAO-A 또는 0.07 mg/㎖ MAO-B 효소, 15 ㎕의 10 mM 티라민 기질(MAO-A의 경우) 또는 15 ㎕ 100 mM 벤질아민 기질(MAO-B의 경우) 및 50 ㎕의 새로 제조된 발색성 용액(상기와 같음). 플레이트를 60 분 동안 37℃에서 항온처리하였다. MAO 활성을 반영하는 흡광도 증가는 마이크로플레이트 분광광도계(Power Wave 40, 바이오테크 인스트러먼트)를 사용하여 490 nm에서 측정하였다. 억제는 백그라운드 흡광도에 대해 보정한 후 콘트롤과 GraphPad Prism 소프트웨어를 사용하여 계산된 IC50과 비교한 억제율(%)로 제공하였다. 각각 0.5 및 10 μM의 클로르길린 및 파르길린(각각, MAO-A 및 -B의 억제제)을 MAO 억제를 위한 양성 콘트롤로서 일부 웰에 가하였다. MAO 활성에 대하여 SSAO 활성을 억제하는 상기 실시예의 화합물의 능력을 표 1에 나타낸다. 결과는 본 발명에 기재된 화합물이 SSAO 활성의 특이적인 억제제인 것으로 나타났다. 그러므로, 본 발명에 기재된 화합물은 SSAO/VAP-1의 SSAO 활성이 역할을 담당하는 질환 및 상태, 즉 SSAO/VAP-1 매개 질환 및 상태의 치료에서 치료 용도를 갖는 것으로 예상된다.
실시예 1 내지 12의 효능 및 특이성
실시예 화합물 SSAO 억제 활성 IC50(μM) MAO-A 억제 활성 IC50(μM) MAO-B 억제 활성 IC50(μM) MAO-A에 대한 SSAO의 특이성 MAO-B에 대한 SSAO의 특이성
1 0.029 900 125 31,000 4,300
2 0.035 225 100 6,400 2,900
3 0.050 1 24.5 20 490
4 0.65 260 175 400 269
5 0.95 690 155 726 163
6 4.7 300 2.8 64 0.60
7 2.61 620 210 230 80
8 0.032 2.2 81 69 2,500
9 0.055 350 20 6,300 360
10 0.065 2.8 0.65 43 10
11 0.050 250 450 5000 9000
12 0.090 3,6000 8,200 400,000 90,000
실시예 16
급성 독성 연구
실시예 8 및 10의 화합물, 뿐만 아니라 실시예 18에 기재된 알릴아민 화합물인 모페길린에 대한 복강내(i.p.) 및 정맥내(i.v.) LD50 값을 마우스에게서 결정하였다. 6 주령 C57Bl/6 암컷 마우스를 5 개의 군으로 나누고, PBS에 용해시킨 화합물의 단일 복강내 또는 정맥내 주사(100 ul 중의 10 내지 100 mg/kg 정맥내; 200 ul 중의 30 내지 500 mg/kg 복강내)를 투여하였다. 대조군은 동일 부피의 PBS를 복강내 또는 정맥내 투여하였다. 외관 및 외적 행동을 매일 기록하고, 체중을 화합물 투여 전(제1일) 및 제3일, 제5일 및 제7일에 측정하였다. 7 일 후, 동물을 안락사시키고, 간, 비장 및 신장을 평량하였다. 급성 독성 연구의 결과를 표 2에 요약한다.
모페길린 및 실시예 8 및 10의 화합물에 대한 복강내 및 정맥내 LD50(mg/kg)* 값
투여 방식 모페길린 실시예 8 실시예 10
복강내 200 350 250
정맥내 70 >100 >100
* 수치는 LD50 제7일 값을 나타낸다.
모페길린에 대한 급성 독성 효과는 진전(40 mg/kg 정맥내; 100 mg/kg 복강내) 및 만성 경련 및 가뿐 숨쉬기(100 mg/kg 정맥내; 200 mg/kg 복강내)를 포함한다. 실시예 8 및 10의 화합물 100 mg/kg을 정맥내 수용한 마우스에게서는 진전만이 나타난 반면에, 경련 및 가뿐 숨쉬기는 양 화합물에 대하여 약 300 mg/kg 이상의 투여량에서만 관찰되었다(표 2 참조; 실시예 10의 화합물에 대하여 약 250 mg/kg 이상, 실시예 8의 화합물에 대하여 약 350 mg/kg 이상). 모든 사망은 약물 투여 후 24 시간 이내에 일어났다. 부검에서는 임의의 심한 병변은 밝혀지지 않았다. 체중, 뿐만 아니라 절대 및 체중 정규화 기관 중량은 임의의 화합물에 대하여 대조군과 유의적으로 상이하지 않았다(편차 분석 후 더넷 테스트에 의하여 p > 0.05). 따라서, 테스트된 화합물 중 어느것에 대해서도 사망 원인의 징후는 없었다. 그러나, 진정, 경련 및 가뿐 숨쉬기를 유발하는 데 요하는 실시예 8 및 10의 화합물의 훨씬 더 많은 레벨로 지적되는 바와 같이, 본 발명의 화합물은 모페길린보다 유의적으로 덜 독성이다.
실시예 17
마우스의 콜라겐 유발 관절염의 억제
마우스의 콜라겐 유발 관절염(CIA)은 사람의 류마티스양 관절염(RA)에 대한 실험 모델로서 널리 사용된다. CIA는 타입 II 콜라겐 및 보체의 특정 영역에 대한 자가항체에 의해 매개된다. 이 연구에 사용되는 쥐과 CIA 모델은 항체 매개 CIA라고 하며, 상이한 항-타입 II 콜라겐 모노클론 항체의 조합의 정맥내 주사에 의해 유발될 수 있다(Terato K., et al. (1995). Autoimmunity 22: 137). 몇 가지 화합물이 항-α1β1 및 항-α2β2 인테그린 모노클론 항체를 비롯하여 이 모델에서 염증을 성공적으로 차단하는 데 사용되었다(de Fougerolles A.R. (2000) J. Clin. Invest. 105: 721).
이 실시예에서, 아트로겐-콜라겐 유발 관절염 항체 키트를 케미콘 인터내셔널(미국 캘리포니아주 소재)에서 구입하고, 제조자 프로토콜을 사용하여 관절염을 유발하였다. 마우스에게 제0일에 4 항-콜라겐 타입 II 모노클론 항체의 칵테일(각각 0.5 mg)로 정맥내 주사한 후, 제2일에 25 ㎍ 리포다당류(LPS)를 복강내 주사하였다. 마우스에게서 부은 손목, 발목 및 발가락이 LPS 주사 후 3 내지 4 일째에 생겼으며, 질환 발병률은 제7일까지 90%였다. 각 사지 내 관절염의 중증도는 다음과 같이 12 일 동안 스코어를 매겼다: 0 = 정상; 1 = 발목 또는 손목의 약한 홍반, 약간 부음; 3 = 일부 발가락, 발목 및 바톱의 심한 홍반 및 부음; 4 = 최대한으로 염증이 일어난 사지. 동물을 6 마리의 3 군으로 나누었다: 비히클군, 메토트렉세이트(MTX) 처치군 및 화합물 처치군. 비히클군 내 동물은 인산염 완충 염수(PBS)로 1일 2회 12 일 동안(제0일부터 시작함) 복강내 주사하였다. MTX(3 mg/kg)을 제0일에 시작하여 복강내 투여하였으며, 실험 기간 동안 매일 다른 날(월요일, 수요일, 금요일) 계속하였다. 실시예 2의 화합물(20 mg/kg/투여량, 복강내, 1일 2회)의 투여는 제0일에 개시하여 제11일까지 계속하였다. 결과는 도 1a, 1b 및 1c에 나타낸다. 실시예 2의 화합물 20 mg/kg의 1일 2회 투여는 이 모델에서 최종 관절염 및 발톱 붓기를 명백히 감소시켰다.
두 세트의 데이터(관절염 스코어 및 발톱 붓기) 각각에 대하여, 반복된 측정 분석을 수행하여 치료 효과에 접근하였다. 관절염 스코어에 대하여, 유의적인 전체 치료 효과가 있었다(p = 0.0165). 치료 효과에 관하여 실시예 2의 화합물과 MTX 간에는 유의적인 차이가 없었다(p = 0.3348). 그러나, 실시예 2의 화합물은 PBS 비히클과 비교하였을 때, 유의적인 치료 효과를 나타내었다(p = 0.0046). 붓기에 대해서, 유의적인 전체 치료 효과가 있었다(p = 0.0294). 치료 효과에 관하여 실시예 2의 화합물과 MTX 간에는 유의적인 차이는 없었다(p = 0.0294). 그러나, 실시예 2의 호합물은 PBS와 비교하였을 때 유의적인 치료 효과를 나타내었다(p = 0.0060).
추적 연구는 혈청 및 감염된 조직 내 시토킨 레벨을 관찰하는 것을 수반한다. 순환계 시토킨은 ELISA에 의해 측정하기가 용이한 반면에, 발톱, 결장 및 척수의 레벨 결정은 수월하지가 않다. 상대적 RT-PCR을 사용하였다. 이 실험을 수행하기 위하여, 암비온(미국) 제품의 키트를 사용하였는데, 이는 내부 콘트롤로서 18S 리보솜 RNA(rRNA)를 사용한다. rRNA 프라이머 이외에, 이 키트는 분석하고자 하는 상이한 시토킨의 증폭을 위한 특이적인 프라이머도 제공한다. 표준으로서 18S를 사용하는 이점은 특이적인 유전자에 대한 mRNA와는 반대로, 이것이 조직 및 치료 상태의 넓은 범위에 걸쳐서 정적 레벨로 발현한다는 것이다. 또한, 분석하고자 하는 각각의 조직에 대해서, 증폭 절차는 관심대상의 유전자 및 rRNA가 선형 범위에 있도록 최적화해야 한다. 연구 말미에서, 동물을 안락사시키고, 우측 뒷 발톱을 적출하였으며, 동결시켰다. 총 RNA는 제조자의 지시에 따라서 50 내지 100 mg 조직 당 트리졸 시약(인비트로겐, 미국) 1 ㎖를 사용하여 분리하였다. 총 RNA 5 ㎍을, 암비온 TNF-알파(마우스) 유전자 특이적인 상대 RT-PCR 키트(카탈로그 # 5439)를 구비한 프로토콜에 따른 제1 표준 cDNA 합성에 사용하였으며, 2 ㎕를 정량 RT-PCR 반응에서 주형으로서 사용하였다. PCR 순환 조건은 다음과 같다: 2 분 동안 94℃에서 고온 출발, 이어서 45 초 동안 94℃에서 변성, 50℃에서 45 초 어닐링 및 72℃에서 45 초 연장의 27 주기, 및 7 분 동안 72℃에서 1회 최종 연장. 각각의 PCR 반응으로부터의 10 ㎕ 분액을 6% 아크릴아미드/TBE 겔(인비트로겐, 미국)에서 수행하고, 브롬화 에티듐으로 염색하였다. 도 8a는 이들 실험 중 하나의 결과를 나타내며, 여기서 한 마리의 단일 동물의 발가락, 발바닥 및 발목으로부터의 RNA를, rRNA 및 마우스 TNFα에 대한 프라이머를 사용하여 증폭하였다(이 동물의 발톱은 상이한 레벨의 관절염 스코어를 가졌다). 상이한 밴드의 정성적 농도계 분석(Gel Doc 2000 겔 문서화 시스템 및 Quantity One 4.3.1 소프트웨어, 바이오라드, 미국)으로, 샘플 간의 상대 TNFα:rRNA 비율을 비교하였다. 도 8b는 결과가 총 RNA를 도 1에 도시된 실험으로부터 모든 동물의 우측 뒷발톱으로부터 분리하였을 때 얻어지고, 18S와 TNFα 레벨 간의 상대 비율을 결정하는 데 사용하였음을 보여준다.
데이터는 편차 분석 후 더넷 테스트에 의하여 GraphPad Prism 소프트웨어(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)로 분석하였다. 이들 결과는 실시예 2의 화합물(도 1의 실험에 사용됨)이 CIA를 가진 마우스의 발톱에서 TNFα mRNA의 레벨을 감소시킬 수 있었음을 보여준다.
실시예 18A
SSAO 억제제 - 모페길린(알릴아민 화합물)에 의한 마우스의 실험실 자가면역 뇌척수염의 억제
SSAO/VAP-1은 뇌 및 척수를 비롯한 염증이 일어난 조직/기관의 내피 상에서 발현된다. 림프구 경내피 이동을 지지하는 그 능력은 다발성 경화증 및 알츠하이머병과 같은 염증성 질환에서의 SSAO/VAP-1의 중요한 조직적 기능일 수 있다. 중추신경계(CNS)의 염증성 질환을 치료하기 위한 SSAO 억제제 사용의 분석은 C57BL/6 마우스의 실험실 자가면역 뇌척수염 모델(EAE)의 사용을 통하여 수행하였다. 설치류의 EAE는 잘 특성화되어 있으며, 사람의 다발성 경화증의 재생 가능한 동물 모델이다(Benson J.M. et al. (2000) J. Clin. Invest. 106: 1031). 다발성 경화증은 수초 탈락 및 축삭 손실 부위의 두꺼운 정맥주위 염증성 침윤을 특징으로 하는 CNS의 만성 면역 매개 질환이다. 동물 모델로서, EAE는 보조제의 존재 하에 뇌염 유발성 수초 항원으로 면역화함으로써 마우스에 도입될 수 있다. EAE의 발병기전은 수초 항원의 T 세포로의 제공, 활성화된 T 세포의 CNS로의 이동 및 동일 항원의 인식시 염증 및/또는 수초 탈락의 발전을 포함한다.
림프구를 CNS로 보충하는 주요 조절인자로서의 SSAO/VAP-1의 역할을 조사하기 위하여, 모페길린, 알릴아민 및 SSAO 억제제를 EAE 모델에서 평가하였다.
Figure 112006009365160-PCT00052
30 마리 암컷 C57BL/6 마우스에게 제0일에 완전 프로인트 보조제(CFA) 중의 수초 희소돌기아교세포 글리코단백질 35-55(MOG 펩티드 35-55)로 피하 면역화한 후, 백일해 독소를 복강내 주사하였다(한 백일해 독소 주사는 제0일에, 제2 백일해 독소 주사는 제2일에 함). 10 마리 마우스의 군은 면역화한 지 1일 후에 모두 출발하여 알릴아민 화합물 모페길린(AA, 10 mg/kg/투여량 18일 연속 1일 2회), 메토트렉세이트(2.5 mg/kg/일, 제18일까지 하루 건너 투여(월요일, 수요일, 금요일)) 또는 비히클 콘트롤(18일 연속 1일 2회)을 수용하고, 모두 복강내 투여하였다. 그 다음, 동물을 다음과 같이 스코어링 시스템의 0 내지 5 스케일에 따라서 체중, 마비 징후 및 사망에 대해 모니터하였다: 1 = 늘어진 꼬리 또는 강직된 꼬리로 뒤뚱거리며 걸음; 2 = 늘어진 꼬리로 뒤뚱거리며 걸음(운동실조); 2.5 = 부분 다리 마비를 가진 운동실조; 3 = 한 다리의 완전 마비; 3.5 = 한 다리의 완전 마비와 제2 다리의 부분 마비; 4 = 두 다리의 완전 마비; 4.5 = 빈사 상태; 5 = 사망. 결과는 도 2a, 도 2b 및 도 2c에 도시되어 있다. 투여 기간(제18일까지) 동안 80% 발명률 및 중간 임상 중증도를 나타낸 비히클 처치군과 비교하였을 때, 모페길린 처치된 마우스는 마우스의 50%가 감염된 질환 중증도의 통계학적으로 유의적인 감소를 나타내었다(치료 효과를 평가하기 위한 반복 측정 분석에 의해 p = 0.04. 보정일에 해당하는 간격을 가진 적당한 다항 변환을 적용하여 시간 효과를 테스트하였다). AA와 비히클 처치군 간의 통계학적으로 유의적인 질환 중증도 차이는 화합물 투여를 중지한 후에도 게속되었고, 연구(d25) 말미까지 관찰되었다.
예상대로, 체중 손실은 비히클 콘트롤 마우스의 임상 중증도로 보정하고, 모페길린 처치군도 투약 기간 동안 마우스의 체중 손실을 방지하였다(p = 0.04). 또한, EAE 발달에 대한 모페길린의 억제 효과는 최종 처치 후 적어도 1주 이상 동안 계속 관찰하였다(d19-25). MTX 처치된 마우스는 처치 기간(d0-18) 동안 유사한 억제 효과를 나타내었다. 그러나, 발병률과 중증도 증가가 MTX 처치 중지 직후 관찰되었다(도 2a). 투약 기간 동안 또는 이후에 MTX 및 모페길린으로 처치된 군들 간에는 통계학적으로 유의적인 차이는 없었다(임상 중증도 및 체중 각각에 대하여 p = 0.8 및 p = 0.38).
정확하게 동일한 프로토콜을, 실시예 2의 화합물을 사용하는 별개의 실험에서 수행하였으나, 다만 이 시점에서 MTX 군은 생략하였다. 도 3에 나타낸 결과는 이 화합물이 질환의 발달 및 중증도에 대해 치료 효과를 가졌다는 것을 가리킨다. 이들 데이터는 본 발명의 화합물이 사람의 다발성 경화증 치료에 대한 후보임을 시사한다.
실시예 18B
VAP-1/SSAO 억제제에 의한 마우스의 실험실 자가면역 뇌척수염의 재발 억제
CNS의 염증성 질환을 치료하기 위한 VAP-1/SSAO 억제제 사용의 분석은 SJL/J 마우스의 재발 실험실 자가면역 뇌척수염 모델(EAE) 사용을 통하여 수행하였다. 마우스의 재발 EAE는 잘 특성화되어 있으며, 사람의 다발성 경화증의 재생 가능한 동물 모델이다(Brown & McFarlin 1981 Lab. Invest. 45: 278-284; McRae et al 1992 J. Neuroimmunol. 38: 229-240). 다발성 경화증은 수초 탈락 및 축삭 손실 부위의 두꺼운 정맥주의 염증 침윤을 특징으로 하는 CNS의 만성 면역 매개 질환이다. 동물 모델로서, 만성 재발 EAE는 보조제 존재 하에 뇌염 유발 수초 항원으로 면역화함으로써 마우스에 도입될 수 있다. EAE의 발병기작은 수초 항원의 T 세포로의 제공, 활성화된 T 세포의 CNS로의 이동 및 동일 항원의 인식시 염증 및/또는 수초 탈락의 발달을 포함한다.
혈관 유착 단백질-1(VAP-1)은 뇌 및 척수를 비롯한 염증이 일어난 조직/기관의 내피 상에 발현하는 아민 옥시다제 및 유착 수용체이다. 림프구 경내피 이동을 지지하는 그 능력은 다발성 경화증 및 알츠하이머병과 같은 염증성 장해에서의 VAP-1의 중요한 조직적 기능일 수 있다.
CNS로의 림프구 보충의 주요 조절인자로서의 VAP-1의 역할을 조사하기 위하여, VAP-1/SSAO 억제제를 만성 재발 EAE 모델에서 평가하였다. 20 마리의 7 내지 8 주령 암컷 SJL/J 마우스를 완전 프로인트 보조제(CFA) 중의 마우스 PLP 펩티드 139-151 50 ㎍으로 피하 면역화한 후, 200 ng 백일해 독소를 2회 복강내 주사하였다. 10 마리의 마우스 군은 비히클 콘트롤(PBS, 0.1 ㎖) 또는 10 mg/kg의 (2-페닐알릴)히드라진을, 면역화한 지 1 일 후부터 모두 출발하여 53 일 동안 복강내 수용하였다. (2-페닐알릴)히드라진은 다음 화합물이다:
Figure 112006009365160-PCT00053
그 다음, 동물은 다음과 같은 스코어링 시스템의 0 내지 5 스케일에 따라서 마비 징후에 대하여 모니터하였다:
0.5 부분 꼬리 약화;
1 늘어진 꼬리 또는 꼬리가 경직되어 뒤뚱거리는 걸음;
1.5 부분 꼬리 약화로 뒤뚱거리는 걸음;
2 늘어진 꼬리로 뒤뚱거리는 걸음(운동실조);
2.5 부분 다리 마비의 운동실조;
3 한 다리의 완전 마비;
3.5 한 다리의 완전 마비와 제2 다리의 부분 마비;
4 두 다리의 완전 마비;
4.5 빈사 상태;
5 사망
결과는 평균 임상 스코어(도 9a), % 발병률(임의의 마비를 가진 마우스의 수/10 마리 마우스)(도 9b), 만성 질환을 가진 % 마우스(1 이상의 재발을 가진 마우스)(도 9c) 및 재발의 누적 총 수(도 9d)로 나타낸다. 임상 스코어에 대한 p 값은 반복 측정 방법에 의해 분석하였으며, 재발의 누적 수와 만성 질환을 가진 마우스의 퍼센트에 대한 p 값은 일반화 선형 모델에 의해 산출되며, 주요 효과는 처치군((2-페닐알릴)히드라진 대 완충제) 및 보정일이다.
도 9a, 도 9b, 도 9c 및 도 9d에 도시된 바와 같이, 양 군의 면역화 후 2 주째에 마우스의 90 내지 100%에게서 중간 내지 심한 마비가 발생하지만, 만성 질환의 발병를은 완충제를 수용한 콘트롤 마우스에서보다 (2-페닐알릴)히드라진으로 처치된 군에서 유의적으로 더 낮았다(p < 0.0001). 전체 임상 중증도(p < 0.005) 및 재발의 누적수(p < 0.0001)의 유사한 통계학적으로 유의적인 감소도 완충제를 수용한 콘트롤 군과 비교하였을 때 (2-페닐알릴)히드라진 처치된 마우스에 대하여 관찰되었다. 함께 취한 결과는 만성 EAE의 발달에 대한 SSAO/VAP-1 억제제의 경감 효과를 가리킨다.
실시예 19
카라기난 유발 래트 발톱 부종의 억제
카라기난 유발 발톱 부종은 다양한 치료제의 항염증 효과의 평가에 포괄적으로 사용되어 왔으며, 급성 염증을 경감하는 화합물의 효능을 평가하기 위한 유용한 실험 시스템이다(Whiteley PE and Dalrymple SA, 1998. Models of inflammation: carrageenan-induced paw edema in the rat, in Current Protocls in Pharmacology. Enna S.J., Williams M., Ferkany J.W., Kenaki T., Porsolt R.E. and Sullivan J.P., eds., pp 5.4.1-5.4.3, John Wiley & Sons, New York). 부종의 완전 발달은 호중성 의존성이다(Salvemini D. et al. (1996) Br. J. Pharmacol. 118: 829).
암컷 스프라그 돌리 래트를 사용하고, 본 발명의 화합물을 카라기난 노출 15 분 전에 100 mg/kg으로 복강내 주사하였다. 콘트롤 군에게 등부피의 비히클(PBS)을 주사하였다. 발톱의 부종은 우측 발바닥에 27-G 바늘로 염수 중의 카라기난(타입 IV 람다, 시그마)의 0.5% 용액 50 ㎕를 피하 주사함으로써 전술한 바와 같이 유도하였다(Whiteley P.E. and Dalrymple S.A. (1998) Models of inflammation: carrageenan-induced paw edema in the rat, in Current Protocls in Pharmacology. Enna S.J., Williams M., Ferkany J.W., Kenaki T., Porsolt R.E. and Sullivan J.P., eds., pp 5.4.1-5.4.3, John Wiley & Sons, New York 참조). 각 동물의 테스트된 발의 크기는 부종의 유발 전 및 카라기난 유발 후 60, 120 및 180 분째에 용적 측정하였다.
실시예 2 및 8의 화합물을 사용한 실험 결과는 도 4에 나타낸다. 양 경우에서, 100 mg/kg 투여량은 테스트된 모든 시점에서 발톱 붓기를 명백하고 유의적으로 감소시켰다. 데이터는 편차 분석 후 더넷 테스트에 의하여 GraphPad Prism 소프트웨어(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)로 분석하였다(p < 0.05).
이 모델을 사용한 추가 실험을 수행하여 SSAO 억제제가 치료 모드로 사용될 때(즉, 카라기난 주사 후) 유의적인 효능을 나타내는 지 확인하였다. 간단히, SSAO 억제제(30 mg/kg), 인도메타신(3 mg/kg) 및 PBS를 카라기난 주사 1 시간 후 래트에게 경구 투여하였다. 한 가지 대표적인 실험 결과는 도 10에 나타낸다. 데이터는 테스트된 SSAO 억제제가 치료 방식으로 도포될 때 인도메타신으로 관찰된 것에 필적하는 레벨로 발톱 부종을 감소시킬 수 있다는 것을 보여준다.
염증성 반응에서의 SSAO 억제 역할을 더 조사하기 위하여, 프로스타글란딘 E2(PGE2) 레벨에 대한 SSAO 억제 효과를 평가하는 연구를 수행하였다. 동물을 각각 8 마리 래트의 4 개 치료군으로 나누었다. 3 개의 군에게는 카라기난 주사 1 시간 전에 실시예 2의 화합물 50 mg/kg; 3 mg/kg 인도메타신; 또는 PBS를 각각 경구 투여하였다. 네번째 군에게는 발톱 염증 1 시간 전에 덱사메타손 3 mg/kg을 복강내 수용하였다. 카라기난 주사 3 시간 후, 래트를 CO2로 질식시키고, 그 뒷다리 발톱을 제거하였다. 발톱을 스캘펄로 찢고, 마이크로피펫으로 폴리프로필렌 1.5 ㎖ 튜브의 바닥에 현수하였으며, 원심분리하여 염증성 유체를 발현하였다. 각각의 발톱으로부터 수집한 용적을 결정하고, 유체는 시판 키트(R&D 시스템스, 미국 미네소타주 미네아폴리스 소재)를 사용하여 제조자의 지시에 따라서 PGE2 생산용 ELISA에 의해 분석하였다. 발바닥으로 카라기난을 주사하면, 5 내지 10 배의 PG 증가를 유발한다. 예상한 바와 같이, 덱사메타손은 붓기를 방지하는 데 보다 효과적인 반면에, 인도메타신은 PGE2 레벨에 대해 더 큰 영향을 가졌다(도 11 참조). 실시예 2의 화합물은 덱사메타손 처치된 동물에서 관찰된 것에 상당하는 레벨로 PGE2 생산을 유의적으로 감소시킬 수 있다. 데이터는 편차 분석 후 더넷 테스트에 의해 GraphPad Prism 소프트웨어(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)로 분석하였다.
실시예 20
화학 유발 결장염의 억제
2,4,6-트리니트로벤젠 술폰산(TNBS) 유발 결장염 및 덱스트란 나트륨 술페이트(DSS) 유발 결장염은 크론병에 관련된 결장염의 TH1 매개 마우스 모델이다. 다양한 메카니즘을 통하여 작용하는 화합물이 이러한 모델에서 효과적인 것으로 설명되고 있으며, 많은 화합물 중에서 프레드니솔론, 항 IL-16, 항-ICAM 및 항-인테그린을 예로 들 수 있다(Strober W. et al (2002) Annu. Rev. Immunol. 20: 495). 옥사졸론 유발 결장염은 궤양성 결장염을 매우 닮은 TH2 매개 과정이며, 항-IL4 요법에 반응성이다(Boirivant M. et al. (1998) J. Ex. Med. 188: 1929).
TNBS 결장염은 기재된 바와 같이 유발된다(Fuss I.J. et al. (2002) J. Immunol. 168: 900). 간단히, 50% ETOH 중의 TNBS(pH 1.5 내지 2, 시그마) 2.5 mg/마우스를, 항문 경계에 4 cm 근접하여 삽입된 3.5 F 카테터를 통하여 마취된 SJL/J 수컷 마우스에게 장내 투여한다. TNBS 주사된 마우스를 세 개의 처치군으로 나누고, PBS; 프레드니솔론(5 mg/kg) 및 본 발명의 화합물(예컨대, 20 mg/kg)로 1일 2회 복강내 주사한다. 주사는 제0일(TNBS 주사일)에 개시하고, 제7일까지 계속한다.
옥사졸론 결장염을 기재된 바와 같이 유발한다(Fuss I.J. et al. (2002) J. Immunol. 168: 900). 간단히, 마우스는 제0일에 100% EtOH(150 ㎕) 중의 3% 옥사졸론(4-에톡시메틸렌-2-페닐-2-옥사졸린-5-온, 시그마)의 피부 단자 도포에 의해 예비감작하고, 이어서 50% EtOH(100 ㎕) 중의 1% 옥사졸론을 제5일에 항문 경계에 4 cm 근접하여 삽입된 3.5 F 카테터를 통하여 마취된 SJL/J 수컷 마우스로 장내 투여한다. 마우스를 세 개의 처치군으로 나누고, PBS 및 본 발명의 화합물로 1일 2회 복강내 주사한다. 주사는 제0일에 개시하고, 제7일까지 또는 연구 말기까지 계속한다.
또한, 결장염은 기재된 바와같이 7 일 동안 5%(중량/부피) DSS(ICN 바이오메디컬스 인코포레이티드, 미국 오하이오주 소재)로 Balb/c 마우스를 급식함으로써 유도한다(Okayasu I. et al. (1990) Gastroenterology 98: 694). 마우스를 세 개의 처치군으로 나누고, PBS, 프레드니솔론(5 mg/kg) 및 본 발명의 화합물(예컨대, 20 mg/kg)로 1일 2회 복강내 주사한다. 주사는 제0일(DSS 급식 첫날)에 개시하고, 제7일까지 계속한다.
질환 진행은 체중, 분변 굳기, 변 중의 혈액 존재, 결장 조직 섹션의 조직학적 분석을 모니터하고, 몇 가지 시토킨의 레벨을 모니터함으로써 모든 모델에서 평가한다.
실시예 20A
옥사졸론 유발 결장염의 억제
옥사졸론 유발 결장염에 대한 실시예 20의 프로토콜을 사용하여 연구를 수행하였다. 주사는 제0일에 개시하고, 연구 말미까지 계속하였다. 질환 진행은 생존 래트 및 체중을 모니터하고, 뿐만 아니라 결장염의 현미경 증거(즉, 직장 탈수, 결장 크기, 결장 중량)에 의하여 12 일 동안 평가하였다(장내 투여 6 일 후). (2-페닐알릴)히드라진을, 피부 예비감작일(제0일)에 시작하여 1일 2회 10 mg/kg을 복강내 투여하였다. 결과는 (2-페닐알릴)히드라진이 비히클군과 비교하였을 때 래트 생존율 및 체중을 유의적으로 개선하였음을 보여준다(도 12a 및 12b 참조). 카플란-마이어 생존 곡선 및 비쌍 t 테스트는 GraphPad Prism 소프트웨어(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)를 사용하여 산출하였다.
전술한 프로토콜 후, 체중 강하에 의해 측정한 바와 같은 질환 중증도는 제7일(장내 챌린지 2 일 후)에 최대였으며, 이는 또한 동물이 죽기 시작한 날이다. 따라서, 유사 연구로부터의 동물을 초기 감작 7 일 후 희생시키고, 그 대장을 제거하여 1% 포르말린에 고정시켰다. 조직 가공 및 분석은 일정한 실험실(병변학회, 미국 메릴랜드주 프레데릭 소재)에서 맹검 실행하였다. 간단히, 파라핀 삽입 후, 5 ㎛ 섹션을 절단하고, 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하였다. 세 개의 단면을 항문으로부터 1 cm(섹션 1), 3 cm(섹션 2) 및 6 cm(섹션 3)에서 각각의 동물로부터 취하였다. 궤양, 염증(점막, 점막하조직, 장막 및 외부 점막층에서) 및 내피 손상(예컨대, 점막 및 점막하조직 농양, 점막하조직 섬유증, 샘 왜곡 및 점막하조직 부종/출혈)을, 0 - 부재; 1 - 최소; 2 - 약간; 3 - 중간; 4- 현자로 반정성적으로 등급화하였다. 도 13은 (2-페닐알릴)히드라진이 궤양, 염증 및 손상률에 대해 유의적인 효과를 가졌음을 보여준다(각각, 도 13a, 도 13b 및 도 13c 참조). 다른 연구에서, 투약은 장내 챌린지 1 일 후(제6일) 개시하여 질환 유발 후 SSAO 억제제의 투여가 생존율에 영향을 미치는 지를 결정하였다. 한 가지 대표적인 실험의 데이터를 도 14에 나타낸다. 질환 개시 후 (2-페닐알릴)히드라진의 투여는 생존율에 유의적인 영향을 가졌다. 카플란-마이어 생존 곡선은 GraphPad Prism 소프트웨어(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)를 사용하여 산출하였다.
실시예 21
콘카나발린 A 유발 간 손상의 억제
본 발명의 화합물의 투여에 의한 염증 방지는 간 손상의 콘카나발린 A(Con A) 쥐과 모델로 평가하였다. Con A는 T 림프구를 활성화시키고, 마우스에게서 T 세포 매개 간 손상을 유발한다. 종양 괴사 인자 알파는 이 실험 모델에게서 중요한 매개제이다. T 세포 매개 간 손상은 면역 세포, 현저하게는 CD4+ T 림프구를 간 조직으로 이동시키는 것을 수반한다. Balb/c 마우스는 기재된 바와 같이 200 ㎕ 피로겐 무함유 염수 중에 정맥된 투여된 10 mg/kg 콘카나발린 A로 접종한다. Con A 투여 전에 동물을 처치군으로 분리하고, PBS 및 본 발명의 화합물의 상이한 농도(예컨대, 20 mg/kg)로 복강내 주사한다. 간 손상은 트랜스아미나제 및 알칼라인 포스파타제와 같은 간 효소의 혈청 레벨, 간 조직학 및 혈장과 간 조직 내 상이한 염증성 시토킨의 레벨을 결정함으로써 평가된다.
실시예 22
건선의 SCID 마우스 모델의 피부 염증의 억제
이식된 건선 플라크를 가진 SCID 사람 피부 키메라의 최근 확립은 건선에 수반되는 분자 복잡성을 연구하기 위한 새로운 전망을 열었다. 또한, 이 모델은 다양한 핵심 생물학적 추이, 예컨대 세포 증식, 표적 조직 내 T 세포의 귀소, 염증 및 염증성 반응에 수반되는 시토킨/케모킨 캐스케이드를 조사하기 위한 독특한 기회를 제공한다. SCID 마우스 모델를 사용하여 건선 및 다른 염증성 질환에 대한 몇 가지 화합물의 효능을 평가하였다(Boehncke W.H. et al. (1999) Arch Dermatol Res. 291(2-3): 104).
이식은 전술한 바와 같이 행한다(Boehncke W.H. et al. (1999) Arch Dermatol Res. 291(2-3): 104). 사람 전체 두께 이종이식편을 6 내지 8 주령 C.B17 SCID 마우스(찰스 리버)의 등에 이식한다. 수술 절차를 위하여, 마우스는 100 mg/kg 케타민 및 5 mg/kg 크실라진의 복강내 주사에 의해 마취시킨다. 직경이 1 cm인 전체 두께 피부의 방추형 시편을, 마우스의 제모된 중앙 등 부분의 해당 절개 전체 두께 결함부에 그라프트하고, 6-0 비외상 모노필라멘트 봉합에 의해 고정한다. 멸균 석유 젤리 침지된 거즈를 도포한 후, 그라프트는 인접 측면 피부를 사용하여 이식된 부위 상의 피부 파우치를 봉합함으로써 상처로부터 보호한다. 봉합 및 묶은 파우치는 이들이 2 내지 3 주 후에 자발적으로 풀릴 때까지 적소에 남긴다. 그라프트는 용인 및 치유를 위하여 2 주 허용한다. 그 후, 매일 복강내 주사를 이식 후 제15일 내지 제42일 사이에 수행한다. 마우스에게 비히클(PBS), 덱사메타손(0.2 mg/kg 체중) 또는 본 발명의 화합물(예컨대, 20 mg/kg 체중)을 200 ㎕의 최종 부피로 주사한다. 마우스를 제42일에 희생하고, 주변 마우스 피부를 절제한 후, 그라프트를 포르말린 삽입한다. 그 후, 통상의 헤마톡실린 및 에오신 염색을 수행하고, 그라프트를 정량적(상피 분화, 염증 침윤) 및 정성적(상피 두께)인 그 병리학적 변화에 관하여 분석한다.
실시예 23
알츠하이머병의 마우스 모델에서의 본 발명의 화합물의 효과
알츠하이머병(AD)은 임상적으로 잠행성 발명의 치매를 특징으로 하고, 병리학적으로 수많은 신경 플라크 및 신경섬유 매듭의 존재를 특징으로 한다. 플라크는 아밀로이드 전구체 단백질(APP)의 진행으로부터 유도되는 β-아밀로이드(Aβ) 펩티드 단편으로 주로 구성된다. 매듭은 미세관 관련 단백질 타우로 구성된 쌍을 이룬 나선 필라멘트로 구성된다. APP에 병원성 돌연변이를 보유하는 트랜스게닉 마우스는 대략 1 년생으로부터 대뇌 피질 및 해마 내 Aβ의 현저한 상승 및 Aβ 퇴적을 나타낸다(Hsiao K. et al. (1996) Science 274: 99). 돌연변이체 PS-1 트랜스게닉 마우스는 비정상적인 병리학적 변화를 나타내지 않지만, Aβ42/43 펩티드의 미묘한 상승을 나타낸다(Duff K, et al. (1996) Nature 383: 710). 이러한 마우스(PS/APP) 간의 교배로부터 유도된 트랜스게닉 마우스는 APP 단일 트랜스게닉 마우스와 비교하였을 때 가시적인 퇴적물로 Aβ의 현저하게 가속된 축적을 나타낸다(Holcomb L. et al. (1998) Nat Med 4:97). 또한, 최근의 연구는 이러한 마우스에게서, 염증성 반응은 Aβ 퇴적에 수반될 수 있음을 보여준다(Matsuoka Y. et al. (2001) Am. J. Pathol. 158(4): 1345).
그러므로, PS/APP 마우스는 AD의 아밀로이드 표현형의 연구에서 상당한 용도를 가지며, 알츠하이머 환자를 치료하는 본 발명의 화합물의 효능을 평가하기 위한 연구에 사용된다. 마우스에게 비히클(예컨대, PBS) 또는 본 발명의 화합물(예컨대, 10 내지 20 mg/kg)을 주사하고, 기억력 결함, 샘플 조직의 조직학적 특성 및 질환 진행의 다른 지시인자의 분석에 의해 평가한다.
실시예 24
타입 I 진성 당뇨병의 쥐과 모델에서의 본 발명의 화합물의 효과
전구염증성 시토킨이 타입 1 당뇨병의 전개에서 중요한 역할을 담당한다는 것은 널리 받아들여지고 있다. 따라서, 본 발명의 화합물은 이 질환을 가진 환자를 치료하는 데 사용될 수 있다. 스트렙토조토신(STZ)의 다중 저 투약에 의해 유발된 당뇨병을 가진 마우스는 타입 1 당뇨병에 대한 동물 모델로서 사용될 수 있다. STZ는 C57BL/6J 마우스에게 당뇨병을 유발하는 데 사용된다. 간단히, STZ(40 mg/kg) 또는 시트르산염 완충제(비히클)를 기재된 바와 같이 5 일 연속적으로 1일 1회 복강내 제공한다(Carlsson P.O. et al. (2000) Endocrinology. 141(8): 2752). 화합물 투여(즉, 10 mg/kg, 1일 2회)는 STZ 주사 5 일 전에 시작하고, 2 주 동안 계속한다. 다른 널리 사용되는 모델은 자가면역 타입 1 당뇨병의 NOD 마우스 모델이다(Wong F.S. and Janeway C.A. Jr. (1999) Curr Opin Immunol. 11(6): 643). 암컷 NOD 마우스를, 제10주 내지 제25주 동안 본 발명의 화합물의 일일 주사로 처치하였다. 당뇨병 NOD 암컷으로부터의 비장세포의 입양 전달 후 NOD-scid/scid 암컷의 췌도염 및 당뇨병의 발달을 방지하는 본 발명의 화합물의 효과도 평가한다. STZ 및 NOD 모델에 대하여, 당뇨병 발병률은 혈중 글루코스 레벨의 모니터링을 비롯하여 몇 가지 방식으로 모니터한다. 인슐린 분비는 실험 마우스로부터 분리한 췌장 섬으로 평가한다. 시토킨 생성은 마우스 혈청으로 측정한다. 섬 아폽토시스는 정량적으로 평가한다.
실시예 25
기도 염증의 모델에서 본 발명의 화합물의 효과
SSAO 억제제와 같은 항염증 화합물은 천식 및 만성 폐쇄 폐 질환과 같은 기도 염증 상태에 유리한 효과를 가질 수 있다. 본 명세서에 기재된 설치류 모델이 효능 연구에 광범위하게 사용되고 있다. 또한, 급성 폐 염증의 다른 쥐과 모델도 본 발명의 화합물을 테스트하는 데 사용될 수 있다.
기도 염증을 방지하는 SSAO 억제제 효과의 평가에 대하여, 감작된 래트의 세 개의 군을 연구한다. 동물에게 7 일 동안 1일 2회 비히클 염수, 본 발명의 화합물 또는 양성 콘트롤(예컨대, 프레드니손)의 복강내 투여 후 OVA(난백 알부민)으로 챌린지한다. 그 주의 마지막에 기재된 바와 같이 알레르겐 유발 기도 반응의 측정을 위하여 동물을 마취시킨다(Martin J.G. et al. (2002) J. Immunol. 169(7): 3963). 동물에게 폴리에틸렌 튜브를 기관내에 삽입하고, 가열 패드 상에 배치하여 장 온도를 36℃로 유지시킨다. 기류는 플렉시글라스 박스(~250 ㎖) 내에 기관내 튜브의 끝을 배치함으로써 측정한다. 동물을 5 분 동안 OVA(5% w/v) 에어로솔로 챌린지한다. 1회용 분무기를 0.15 ㎖/분의 출력으로 사용한다. 기류는 챌린지 후 30 분 동안 5 분마다, 그리고 총 8 시간 동안 15 분 간격으로 측정한다. 그 다음, 동물을 기관지치조 세척 체액(BAL)을 위해 희생하였다. BAL을 염수 5 ㎖의 5 회 점적으로 챌린지한 지 8 시간 후에 수행한다. 총 세포 계수와 세포 생활력은 조직세포계 및 트리판 블루 염색을 사용하여 평가한다. 슬라이드는 시토스핀을 사용하여 제조하고, 분화 세포 계수는 메이-그륀발트-김사 염색으로 평가하고, 친에오신 계수는 면역 세포 화학에 의해 평가한다.
실시예 26
쥐과의 경구 생체 이용 가능성 연구
마우스 및 래트의 경구 생체 이용 가능성 연구를 수행하였다. 간단히, C57Bl/6 암컷 마우스와 스프라그 돌리 암컷 마우스를 경구 섭취에 의해 본 발명의 상이한 화합물들을 50 mg/kg 투여하였다. 동물은 화합물 투여 후 상이한 시간격으로 출혈시키고, 혈장 내 억제제의 레벨을, 실시예 14에 기재된 색도계 분석을 사용하여 결정하였다. 대표적인 실험 결과는 도 5에 나타내며, 이는 본 발명의 화합물이 경구적으로 생체 이용 가능하다는 것을 보여준다(도 5a는 마우스의 결과를 나타내고, 도 5b는 래트의 결과를 나타낸다). 따라서, 이러한 데이터는 본 명세서에 기재된 소형 분자 SSAO 억제제가 경구 투여된 약물을 전개시킬 수 있다는 것을 가리킨다. 동일한 연구를, 실시예 2, 8 및 10에 기재된 본 발명의 화합물의 상이한 투여량의 정맥내 및 복강내 투여 후에 수행하였다. 결과는 이들 화합물이 상기 투여 형태 후에도 즉시 생체 이용 가능하다는 것을 보여준다.
실시예 27
SSAO/VAP-1 억제제의 생체내 투여 후 투약 반응 효과
SSAO의 생체내 억제는 래트 동맥 및 폐에서 팽가하였는데, 두 조직에서 SSAO 활성이 가장 높다. 6 주령 암컷 스프라그 돌리 래트에게 경구 섭취에 의하여 2.5 ㎖/kg PBS 중의 실시예 8의 화합물 0, 0.1, 1, 10 및 40 mg/kg을 투여하였다. 화합물 투여 4 시간 후, 동물을 안락사시키고, 그 동맥 및 폐를 제거하였으며, 액체 질소로 동결시켰다. 조직을 0.1 M 인산칼륨 pH 7.8 완충액(동맥에 대하여 30 ㎖/g, 폐에 대하여 20 ㎖/g)에 균질화시키고, 15 분 동안 1000 x g로 원심분리하였다. 상청액을 수집하고, 문헌(Lizcno J.M. et al. (1998) Biochem. J. 331: 69)에 기재된 프로토콜에 따른 방사성 분석에 사용하였다. 효소 반응은 실온에서 30 분 동안 20 ㎕의 0.4 mM 14C-표지된 벤질아민 기질(6 mCi/mmol 비활성, 파마시아)으로 조직 호모게네이트 200 ㎕ 분액을 배양함으로써 개시하였다. 어세이는 2 M 시트르산 100 ㎕를 첨가함으로써 중지시키고, 어세이 부피는 0.6%(w/v) 2,5-디페닐옥스다졸(PPO)를 함유하는 5 ㎖ 톨루엔:에틸 아세테이트(1:1)로 추출하였으며, 유기층의 분액을 액체 신틸레이션에 의해 계수하였다. SSAO와 MAO-B는 둘 다 벤질아민에 대해 활성이기 때문에, 콘트롤 샘플은 MAO-B와 SSAO 활성이 확인될 수 있도록 동시에 실행될 필요가 있었다. SSAO는 MAO-B 결정을 위해 세미카르바지드 0, 10, 50 및 500 μM로 억제하였고, MAO-B는 SSAO 결정을 위해 파르길린 0, 5 및 100 μM로 억제하였다. 이들 억제제는 벤질아민 첨가 전에 조직 상청액에 가하였다. 동맥 및 폐는 주로 SSAO 활성을 가졌으며, 이들 결과는 공개된 데이터에 따른다. 도 6은 실시예 8의 화합물에 대한 생체내 ED50 값이 폐 및 동맥 각각에 대하여 0.72 mg/kg 및 5 mg/kg이었음을 나타낸다.
실시예 28
SSAO/VAP-1 억제제에 의한 시험관내 유착의 차단
이 실시예의 연구는 내피 세포로 트랜스펙션된 SSAO/VAP-1이 유착 기능을 유지하는 지 여부 및 새로 분리된 사람 PBMC의 이들 셀로의 유착에서 임의의 역할을 하는 지 여부를 결정하기 위하여 수행하였다. 더욱이, 이 연구는 SSAO/VAP-1의 차단이 이들 두 세포 유형 간의 유착 레벨에 영향을 주는 지 여부도 결정하도록 설계되었다. 유착 어세이는 제조자의 지시에 관하여 형광 염료 Calcein-AM(몰레큘라 프로브스, 미국 오레건주 소재)을 사용하여 수행하였다. 간단히, 래트 림프절 고 내피 세포(HEC; 분리 및 배양은 문헌(Ager, A. (1987) J. Cell Sci. 87: 133)에 기재되어 있다)를 96 웰 플레이트(2,000 세포/웰)에 밤새도록 플레이팅하였다. PBMC(말초혈 단핵 세포)(1 x 107)를 1 시간 동안 37℃에서 10 μM Calcein-AM 1 ㎖로 표지하고, RPMI로 3 회 세척하였으며, 전체 길이 사람 SSAO/VAP-1으로 트랜스펙션되거나 의사 트랜스펙션된 HEC 세포의 단층을 함유하는 96 웰 플레이트에 가하였다(60,000 PBMC를, 웰 당 2,000 HEC 세포를 함유하도록 플레이팅하였다). 유착은 3 시간 동안 37℃에서 수행하였다. 비유착 세포는 RPMI로 3 회 세척함으로써 제거하고, 형광은 485 nm의 여기 파장 및 530 nm의 방출 파장에서 형광 플레이트 판독기로 측정하였다. 몇 개의 콘트롤, 예컨대 HEC 세포 및 PBMC(표지 및 비표지) 단독을 포함시켰다. 모든 실험에서, SSAO/VAP-1 발현은 PBMC의 HEC 세포로의 유착을 2 내지 5 배 증가시켰다. 이들 결과는 다른 문헌에서 발행된 데이터와 일치한다(Smith et al. J. Exp Med (1998) 188: 17; Salmi et al. Circ Res (2000) 86: 1245).
다음 실험은 효소 촉매 부위를 차단하는 것이 SSAO/VAP-1의 유착 기능에 어떤 영향을 주는 지 여부 및 본 발명에 따른 억제제가 유착 억제 효과를 매개하는 지 여부를 조사하기 위하여 설계되었다. 문헌상의 결과는 세미카르바지드로 SSAO 효소 활성을 차단하면, 심장 내피 단층 상의 얇은 박층 아래에서 롤링하는 림프구를 억제하였음을 시사한다(Salmi et al. Immunity (2001) 14: 265). 이들 연구는 전술한 바와 같은 유착 어세이를 사용하여 반복하여 본 발명의 억제제를 평가하였다. 사용된 유착 차단제는 항-사람 VAP-1 모노클론 항체(세로테크, 영국 옥스포드 소재), 뉴라미다제(시알리다제, SSAO/VAP-1이 시알로글리코단백질이기 때문; 시그마) 및 래트 유착 분자에 대한 몇 가지 기능 차단 항체(CD31-PECAM, CD54-ICAM-1, CD92P-P 셀렉틴)를 포함하였다. 콘트롤은 SSAO 억제제 세미카르바지드(시그마), MAO-A 및 MAO-B 억제제(각각, 클로르길린 및 파르길린; 시그마) 및 마우스 IgG1 및 IgG2 동기준 표본 코트롤(BD, 미국)을 포함하였다. 항체(10 ㎍/㎖) 및 뉴라미다제(5 mU)를 30 분 동안 37℃에서 HEC로 항온처리하고, 과량의 항체를 세척한 후, 표지된 PBMC를 첨가하였다. 소형 분자 억제제를 IC100 농도에서 동일한 방식으로 예비 항온처리하였지만, 상청액에 존재하는 양을 세척하지 않아서 유착 단계 중에 IC100 농도를 보전하였다.
도 7은 한 가지 대표적인 실험(n = 6 복제물)의 결과를 나타낸다. 도 7b는 항-VAP-1, 실시예 2의 화합물, 실시예 2의 화합물 및 어느정도 세미카르바지드가 의사 트랜스펙션된 세포에서 관찰되는 것과 밀접한 레벨로 SSAO/VAP-1 트랜스펙션된 HEC에 유착된 PBMC를 감소시켰음을 가리키는 데이터를 나타낸다(의사 트랜스펙션된 세포에 대해 테스트된 동일 화합물에 대한 데이터는 도 7a에 도시되어 있다). 여기서, 항-VAP-1 항체 결과는 림프구의 VAP-1 트랜스펙션된 HEC 세포로의 유착에 대한 항 VAP-1 mAb 효과에 관한 문헌상의 데이터와 일치한다(Salmi et al. Circ Res (2000) 86: 1245). 클로르길린(MAO-A 억제제) 및 파르길린(MAO-B 억제제)는 효과가 없었다. 흥미롭게도, VAP-1 발현은 항-CD54, CD31 및 CD62P 항체의 상대적 차단 효과를 감소시키는 것으로 보인다.
요약하면, 이들 결과는 SSAO 효소 기능을 억제하는 본 발명의 화합물이 PBMC의 시험관내 SSAO/VAP-1 발현 HEC로의 결합을 감소시킨다는 것을 보여주는데, 즉, 본 발명의 SSAO 억제제는 PBMC의 시험관내 SSAO/VAP-1 발현 HEC로의 ㅠ착을 억제할 수 있었다.
실시예 29
지질 다당질(LPS) 유발 내독소혈증의 억제
패혈증에서, 모든 기관의 내피 세포를 고 레벨의 LPS 및 염증성 시토킨에 노출시키면, 유착 분자와 케모킨의 상향 조절이 초래되는데, 이는 백혈구의 속박, 롤링 및 이전 증가를 가져온다(Pawlinski R. et al. (2004) Blood 103: 1342). LPS 유발 내독소혈증은 전신 염증의 잘 특성화된 모델이며, 따라서 이러한 염증 메카니즘에서 SSAO 억제의 추정 역할을 조사하는 데 사용될 수있다. 패혈증은 LPS 5 mg/kg을 복강내 투여함으로써 C57Bl/6J 암컷 마우스에서 유발하였다. LPS 주사 60 분 전에, 비히클(PBS) 200 ㎕ 또는 (2-페닐알릴)히드라진 50 mg/kg을 동물에게 경구 투여하였다. 덱사메타손은 질환 유발 1 시간 전에 3 mg/kg의 농도로 복강내 투여하였다. 마취된 동물의 안와후총에서 채혈하고, 혈청을 수집하였으며, 시토킨 측정시까지 동결시켰다. IL-1β, TNF-α 및 IL-6 농도는 시판 키트(R&D 시스템스, 미국 미네소타주 미네아폴리스 소재)를 사용하여, 제조자의 지시에 따라 ELISA에 의해 측정하였다. 도 15는 이 모델에서 (2-페닐알릴)히드라진이 순환 TNF-α 및 IL-6의 레벨을 감소시켰음을 보여준다. 데이터는 편차 분석 후 더넷 테스트에 의해 GraphPad Prism 소프트웨어(미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)로 분석하였다. 도 16은 SSAO가 LPS 쇼크 후 동물의 생존율에 영향을 줄 수 있는 지 여부를 조사하도록 설계된 연구의 결과를 보여준다. 300 mg/kg D-갈락토사민(GalN, 시그마)과 함께 PBS에 용해시킨 2 mg/kg LPS를 복강내 주사에 의해 마우스에게 투여하였다. 지시된 시점에서, 상이한 치료군으로부터의 동물에게 200 ㎕의 비히클(PBS) 또는 30 mg/kg (2-페닐알릴)히드라진을 경구 투여에 의해 수용하였다. 데이터는 SSAO 억제가 LPS 쇼크 후 마우스의 생존을 연장시킴을 보여준다.
식별 항목에 의하여 본 명세서에서 언급된 모든 문헌, 특허, 특허 출원 및 공개된 특허 출원의 개시 내용은 본 명세서에서 그 전체를 참고 인용한다.
상기 발명이 명확한 이해를 목적으로 예시 및 실시예에 의해 상세하게 설명하였지만, 약간의 변형과 수정이 실시될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 그러므로, 상세한 설명 및 실시예가 본 발명의 범주를 한정하는 것으로 해석해서는 안된다.

Claims (45)

  1. 하기 화학식 I-P의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염:
    화학식 I-P
    Figure 112006009365160-PCT00054
    상기 식에서,
    R1p는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴, C5-C14 치환 헤테로아릴, R4-(CH2)n- 및 R5-Y1CH2-로 구성된 군 중에서 선택되고;
    n은 독립적으로 1 또는 2이며;
    Y1은 독립적으로 S 또는 O이고;
    R2는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, Cl, F 또는 CF3이며;
    X는 독립적으로 O 또는 NR6 중에서 선택되고;
    R3은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄 킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
    R4는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되고;
    R5는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
    R6은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴이고;
    단, R1p가 미치환 페닐이고, R2가 H이며, X가 NH인 경우, R3은 H가 아니다.
  2. 제1항에 있어서, R1p는 미치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  3. 제1항에 있어서, R1p는 치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, R2는 H인 것을 특징으로 하는 화 합물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, X는 O인 것을 특징으로 하는 화합물.
  6. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, X는 NR6인 것을 특징으로 하는 화합물.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  8. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R6은 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  9. 하기 화학식 I-AP의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염:
    화학식 I-AP
    Figure 112006009365160-PCT00055
    상기 식에서,
    R1ap는 치환 또는 미치환 페닐이고;
    R2는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, Cl, F 또는 CF3이며;
    X는 독립적으로 O 또는 NR6 중에서 선택되고;
    R3은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
    R6은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴이고;
    단, R1ap가 미치환 페닐이고, R2가 H이며, X가 NH인 경우, R3은 H가 아니다.
  10. 제9항에 있어서, R1ap는 미치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  11. 제9항에 있어서, R1ap는 치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  12. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, X는 O인 것을 특징으로 하는 화합물.
  13. 제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, X는 NR6인 것을 특징으로 하는 화합물.
  14. 제9항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, R3은 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  15. 제9항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, R6은 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  16. 하기 화학식 I-B의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염:
    화학식 I-B
    Figure 112006009365160-PCT00056
    상기 식에서,
    R2는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, Cl, F 또는 CF3이고;
    R91 및 R92는 독립적으로 H, F, Br, Cl, I, C1-C4 알킬 및 C1-C4 알콕시 중에서 선택되며;
    X는 독립적으로 O 또는 NR6 중에서 선택되고;
    R3은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
    R6은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴이다.
  17. 제16항에 있어서, X는 NR6이 것을 특징으로 하는 화합물.
  18. 제16항 또는 제17항에 있어서, R3은 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  19. 제16항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, R6은 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  20. 제16항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, R91 및 R92는 둘 다 H인 것을 특징으로 하는 화합물.
  21. 하기 화학식 I-C의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염:
    화학식 I-C
    Figure 112006009365160-PCT00057
    상기 식에서,
    R2는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, Cl, F 또는 CF3이고;
    R91 및 R92는 독립적으로 H, F, Br, Cl, I, C1-C4 알킬 및 C1-C4 알콕시 중에서 선택되며;
    X는 독립적으로 O 또는 NR6 중에서 선택되고;
    R3은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
    R6은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴이다.
  22. 제21항에 있어서, X는 NR6인 것을 특징으로 하는 화합물.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, R3은 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, R6은 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  25. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, R91 및 R92는 둘 다 H인 것을 특징으로 하는 화합물.
  26. 하기 화학식 III의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염:
    화학식 III
    Figure 112006009365160-PCT00058
    상기 식에서,
    R27은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴, C5-C14 치환 헤테로아릴, R23-(CH2)n- 및 R24-Y2-(CH2)-로 구성된 군 중에서 선택되고;
    R22는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
    n은 독립적으로 1 또는 2이고;
    n3은 독립적으로 0, 1 또는 2이며;
    Y2는 독립적으로 S 또는 O이고;
    R23 및 R24는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택된다.
  27. 제26항에 있어서, R27은 미치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  28. 제26항에 있어서, R27은 치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  29. 제26항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, R22는 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  30. 하기 화학식 III-A의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염:
    화학식 III-A
    Figure 112006009365160-PCT00059
    상기 식에서,
    R21은 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴, C5-C14 치환 헤테로아릴, R23-(CH2)n- 및 R24-Y2-(CH2)-로 구성된 군 중에서 선택되고;
    R22는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택되며;
    n은 독립적으로 1 또는 2이고;
    Y2는 독립적으로 S 또는 O이며;
    R23 및 R24는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택된다.
  31. 제30항에 있어서, R27은 미치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  32. 제30항에 있어서, R27은 치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  33. 제30항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, R22는 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  34. 하기 화학식 III-B의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염:
    화학식 III-B
    Figure 112006009365160-PCT00060
    상기 식에서,
    R25는 독립적으로 C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴로 구성된 군 중에서 선택되고;
    R22는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택된다.
  35. 제34항에 있어서, R27은 미치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  36. 제34항에 있어서, R27은 치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  37. 제34항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, R22는 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  38. 하기 화학식 III-C의 화합물, 이것의 모든 입체 이성질체, 이것의 모든 E/Z(시스/트랜스) 이성질체, 이것의 모든 용매화물 및 수화물 이것의 모든 결정 및 비결정 형태 및 이것의 모든 염:
    화학식 III-C
    Figure 112006009365160-PCT00061
    상기 식에서,
    R26은 독립적으로 C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴로 구성된 군 중에서 선택되고;
    R22는 독립적으로 H, C1-C4 알킬, C3-C8 시클로알킬, C6-C10 아릴, C6-C14 아랄킬, C4-C9 헤테로아릴, C6-C14 치환 아릴 및 C5-C14 치환 헤테로아릴 중에서 선택된다.
  39. 제38항에 있어서, R27은 미치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  40. 제38항에 있어서, R27은 치환 페닐인 것을 특징으로 하는 화합물.
  41. 제38항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, R22는 H 또는 C1-C4 알킬인 것을 특징으로 하는 화합물.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 치료에 사용하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  43. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 염증 또는 염증성 질환의 치료에 사용하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  44. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 면역 또는 자가면역 장해의 치료에 사용하는 것을 특징으로 하는 화합물.
  45. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 다발성 경화증의 치료에 사용하는 것을 특징으로 하는 화합물.
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