KR20050045325A - 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법 - Google Patents

제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법 Download PDF

Info

Publication number
KR20050045325A
KR20050045325A KR1020030079362A KR20030079362A KR20050045325A KR 20050045325 A KR20050045325 A KR 20050045325A KR 1020030079362 A KR1020030079362 A KR 1020030079362A KR 20030079362 A KR20030079362 A KR 20030079362A KR 20050045325 A KR20050045325 A KR 20050045325A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
cord blood
umbilical cord
mesenchymal stem
stem cells
monocytes
Prior art date
Application number
KR1020030079362A
Other languages
English (en)
Other versions
KR100560340B1 (ko
Inventor
김성환
한훈
Original Assignee
(주)히스토스템
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)히스토스템 filed Critical (주)히스토스템
Priority to KR1020030079362A priority Critical patent/KR100560340B1/ko
Priority to AT04793573T priority patent/ATE471368T1/de
Priority to EP04793573A priority patent/EP1687414B1/en
Priority to CN200480033035XA priority patent/CN1878860B/zh
Priority to PCT/KR2004/002715 priority patent/WO2005045010A1/en
Priority to DE602004027754T priority patent/DE602004027754D1/de
Priority to US10/579,070 priority patent/US7704739B2/en
Publication of KR20050045325A publication Critical patent/KR20050045325A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR100560340B1 publication Critical patent/KR100560340B1/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
    • C12N5/0662—Stem cells
    • C12N5/0665—Blood-borne mesenchymal stem cells, e.g. from umbilical cord blood
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0634—Cells from the blood or the immune system
    • C12N5/0647—Haematopoietic stem cells; Uncommitted or multipotent progenitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/10—Growth factors
    • C12N2501/125—Stem cell factor [SCF], c-kit ligand [KL]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/22—Colony stimulating factors (G-CSF, GM-CSF)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2303—Interleukin-3 (IL-3)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/20—Cytokines; Chemokines
    • C12N2501/23—Interleukins [IL]
    • C12N2501/2306—Interleukin-6 (IL-6)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

본 발명은 세포 치료제로서 가장 이상적인 제대혈을 이용하여 중간엽 줄기세포를 분리 및 배양하는 방법에 관한 것으로, 출산 24 시간 이내의 순수 제대혈로, 1 유닛(unit) 당 부피가 45 ㎖ 이상인 제대혈에 항응고제를 가하고; 항응고제가 혼합된 제대혈을 aMEM(alpha-minimum essential medium) 배지로 희석하고 원심분리하여 단핵구를 수확하고; 그리고, 얻어진 단핵구를 Stem Cell Factor, GM-CSF(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor), G-CSF(granulocyte colony-stimulating factor), IL-3(interleukin-3) 및 IL-6(interleukin-6)이 포함된 aMEM 배지에 부유 배양하는 단계를 포함한다. 이 방법에 의하면, 세포수가 상대적으로 부족한 제대혈에서 중간엽 줄기세포를 효과적으로 분리 및 배양할 수 있으며, 이에 의해 버려지고 있는 제대혈을 이용하여 세포 치료제로서 각종 난치병을 치유하기 위한 중요한 수단으로 활용될 수 있다.

Description

제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법{METHOD OF ISOLATING AND CULTURING MESENCHYMAL STEM CELL DERIVED FROM UMBILICAL CORD BLOOD}
본 발명은 세포 치료제로서 가장 이상적인 제대혈을 이용하여 중간엽 줄기세포를 분리 및 배양하는 방법에 관한 것이다.
중간엽 줄기세포는 뼈, 연골, 지방, 신경, 근육 등으로 분화할 수 있는 원시 세포를 의미하는 것으로, 이들은 골수에 많이 포함되어 있는 것으로 알려져 있다. 실제로 골수로부터 중간엽 줄기세포를 분리하여 연구하거나 여러 질병에 대한 임상시험으로 많이 이용하고 있는 실정이다.
골수에서 중간엽 줄기세포를 얻는 것은 쉬운 일이지만, 골수의 획득이 용이하지 않고, 타인 간 줄기세포 이식시 면역 거부 반응 문제를 해결하는 것이 현실적으로 어려운 것으로 알려져 있다.
한편, 제대(탯줄)혈은 골수에 비해 획득이 용이할 뿐 아니라, 많은 제대혈 유닛(units)을 확보할 경우 환자의 조직적합성 유전자와 일치 또는 가장 유사한 제대혈 줄기세포를 사용할 수 있으므로 면역거부 반응도 해결할 수 있다는 장점이 있다. 그러나, 골수에 비해 제대혈에서 중간엽 줄기세포를 얻는 일이 매우 어렵기 때문에 연구 및 임상적으로 적용하기가 어렵다는 문제가 있다.
종래에는 제대혈에 포함되어 있는 얼마 안되는 중간엽 줄기세포를 분리하기 위한 방법으로서, 밀도구배 원심분리 방법을 사용하여 백혈구 층을 분리한 후 세포 배양하는 방법이 주로 사용되었다. 그러나 밀도구배 원심분리 과정에서 세포를 잃어버리기 쉽기 때문에 제대혈 내 얼마 안 되는 중간엽 줄기세포 배양은 더욱 어려운 일이 되고 있다.
종래의 중간엽 줄기세포 분리 및 배양 방법으로는 미국특허 제5,197,985호 및 제5,486,359호 등이 있는데, 여기에서는 사람의 골수로부터 중간엽 줄기세포를 분리 및 정제, 배양하는데 있어서 중간엽 줄기세포의 증식 방법을 개시하고 있다. 즉, 미국특허 제5,197,985호에서는 사람 골수-유래의 중간엽 줄기세포를 골 형성 세포로 분화시키는 방법으로서, 분화 없이 중간엽 세포 성장을 촉진하고 배양시 기질 표면으로 중간엽 줄기세포만의 선택적 흡착을 허용하는 인자를 포함하는 배지에 골수 시료를 첨가하는 것에 의해 골수 시료로부터 분리, 정제 및 배양 전개된 사람 골수-유래의 중간엽 줄기세포를 다공성 담체에 도입하고, 사람 간질 줄기세포를 골세포로 분화시키는데 필요한 인자를 포함하는 환경으로 이식하는 단계를 포함하는 방법을 개시하고 있는데, 여기에서 다공성 담체는 수산화인회석(hydroxyapatite)과 인산3칼슘(tricalcium phosphate)을 포함하는 것이고, 배지는 우태혈청(FBS; fetal bovine serum)을 포함하는 BGJ b 배지이거나 F-12 영양소 혼합물을 포함하는 것을 사용하고 있다. 또한 미국특허 제5,486,359호에서는 하나 이상의 조직 타입(예를 들어 뼈, 연골, 근육 또는 골수 기질)으로 분화할 수 있는 분리된 사람 중간엽 줄기세포, 사람 중간엽 줄기세포를 분리, 정제 및 배양 전개하는 방법, 그리고 이러한 세포의 특성과 용도, 특히 시약, 진단 및 치료적 용도에 대하여 개시하고 있다. 여기에서 중간엽 줄기세포는 골수에서 유래되고 배지는 우태혈청을 포함하는 BGJ b 배지에서 배양하는 것으로 되어 있다.
본 발명은 중간엽 줄기세포 배양에 있어서의 위와 같은 종래의 문제점을 해결하기 위한 것으로, 제대혈 유래 중간엽 줄기세포를 밀도구배 원심분리 동안 잃어버리는 일 없이 얻을 수 있는, 재현성 있는 중간엽 줄기세포 분리 및 배양 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명에서는,
출산 24 시간 이내의 순수 제대혈로, 1 유닛(unit) 당 부피가 45 ㎖ 이상인 제대혈에 항응고제를 가하고;
항응고제가 혼합된 제대혈을 aMEM(alpha-minimum essential medium) 배지로 희석하고 원심분리하여 단핵구를 수확하고; 그리고,
얻어진 단핵구를 Stem Cell Factor, GM-CSF(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor), G-CSF(granulocyte colony-stimulating factor), IL-3(interleukin-3) 및 IL-6(interleukin-6)이 포함된 aMEM 배지에 부유 배양하는 단계를 포함하는, 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법을 제공한다.
본 발명은 산모로부터 출산 후 채취한 24 시간 이내의 제대혈 유닛으로부터 중간엽 줄기세포를 분리 및 배양하는 재현성 있는 방법을 제공한다. 즉, 세포수가 상대적으로 부족한 제대혈로부터 중간엽 줄기세포를 분리 및 배양하는 최적 조건을 찾아냄으로써 제대혈을 이용한 난치병 치료에 기여하고자 하였다.
이를 위하여 본 발명에서는, 제대혈을 2 배 용량의 aMEM 배지로 희석하고 원심분리하여 단핵구 층을 수확한 후, 세포성장인자인 Stem Cell Factor, GM-CSF, G-CSF, IL-3 및 IL-6을 첨가한 aMEM 배지에서 배양하는 것에 의해, 원시 중간엽 줄기세포의 확보와 배양 성공율을 종전 방법의 10% 이하로부터 약 90% 정도로 높일 수 있도록 하였다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명에 따른 제대혈로부터 중간엽 줄기세포를 분리 및 배양하는 방법을 구체적으로 설명한다. 단, 이들 실시예는 본 발명의 예시일 뿐, 본 발명의 범위가 이들만으로 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양
제대혈에서 단핵구를 분리하기 위해, aMEM(alpha-minimum essential medium, Jeil Biotech Services, Korea)으로 제대혈을 2 배 용량으로 희석한 후 50 ㎖ 팔콘 튜브(falcon tube)에 옮겨 실온에서 10 분간 300xg로 원심분리하였다. 분리된 buffy coat 층을 수확하여 다시 2 배 용량의 aMEM으로 희석한 후 Ficoll-Hypaque에 중첩하고 실온에서 30 분간 300xg로 원심분리를 시행하였다.
혈액으로부터 단핵구를 분리하는 데는 Ficoll(슈크로스의 중합체)과 Hypaque (디트리조에이트 나트륨; sodium ditrizoate)의 중합체인 Ficoll-Hypaque가 주로 이용된다. Ficoll-Hypaque의 비중은 1.077 g/㎖로, 단핵구는 이보다 가벼우나 적혈구는 이보다 무겁기 때문에 비중차에 의한 분리가 가능하다. 즉, 혈액을 Ficoll-Hypaque 위에 올려서 원심분리하면 단핵구는 Ficoll-Hypaque 위에 모이게 된다.
이와 같은 밀도구배 원심분리 방법으로 얻어진 단핵구를 다시 첨가물이 섞이지 않은 세척용 aMEM에 넣어 10 분간 200xg로 원심분리한 후, 팔콘 튜브 바닥에 가라앉은 세포를 제외하고 aMEM을 버려 세척하였다. 한번 더 aMEM을 넣어 10 분간 200xg로 원심분리한 후 팔콘 튜브 바닥에 가라앉은 세포를 제외하고 aMEM을 버려 1 회 더 세척하였다.
다음에, 항생제(1000 U/㎖ 페니실린 G, 1000 ㎍/㎖ 황산 스트렙토마이신, Gibco-BRL)와 항진균제(0.25 ㎍/㎖ 암포테리신 B), 그리고 2 mM의 글루타민 (Glutamine, Sigma)이 포함된 aMEM 배지에 20% 우태혈청(FBS; fetal bovine serum, Jeil Biotech Services)과 함께 세포성장인자로서 Stem Cell Factor(50 ng/㎖), GM-CSF(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor; 10 ng/㎖), G-CSF(granulocyte colony-stimulating factor; 10 ng/㎖), IL-3(interleukin-3; 10 ng/㎖) 및 IL-6(interleukin-6; 10 ng/㎖)을 첨가하고, 세포수 1×106/㎠의 농도로 부유시켰다.
5 일간 배양한 세포 군집에서 부유세포를 제거하고, 부착세포가 확보된 후에는 20% 우태혈청 및 항생제가 포함된 aMEM을 배양액으로 하여 2 일 간격으로 세척과정 없이 완전 교환하여 25 일간 배양하였다.
도 1은 본 발명의 방법에 따른 제대혈 중간엽 줄기세포주 배양 과정을 보여주는 사진으로, 도 1a, 1b, 1c, 1d 및 1e는 각각 5 일, 7 일, 10 일, 15 일 및 25 일 배양한 결과이다(배율 100X). 여기에서 보듯이, 제대혈에서 분리한 단핵 세포를 배양하면, 5 일 후에는 플라스크 바닥에서 붙어 자라는 세포가 관찰되며, 7 일째가 되면 세포들이 군집을 형성하여 여러 형태를 가진 세포로 자라난다. 배양 10 일 후에는 단핵세포에서 방추형 세포로의 분화가 이루어지고, 이 방추형 세포들이 세포 분열 및 증식을 통해 배양 25 일 후에는 완전한 중간엽 줄기세포로 배양이 완료된다.
실시예 2: 배양된 중간엽 줄기세포의 세포 표면항원 특성
이와 같은 과정을 통해 분리 및 배양된 방추형 중간엽 줄기세포의 세포 표면항원 특성을 알아보기 위해 세포 표면항원을 FACS로 분석하고 그 결과를 다음 표 1에 나타내었다. FACS(fluorescence activated cell sorting; 유세포 분리기)는 관심있는 세포 표면에 발광 면역항원 표지자를 붙여 그 특성을 분석하거나, 목적에 따라 특정 항원 표지자를 가진 세포들만을 분리할 수도 있다.
표지자 반응
CD14 -
CD34 -
CD45 -
SH2 +
SH3 +
CD29 +
CD44 +
CD90 +
CD166 (+)
표 1에서 보면, 본 발명에 따라 분리 및 배양된 줄기세포의 경우, 조혈 줄기세포의 특징적 표지자인 CD34, CD45, CD14는 음성반응을 보였고, 중간엽 줄기세포의 특징적인 표지자인 SH2, SH3, CD29, CD44는 양성반응을 나타내었으며, CD166은 약한 양성반응이 확인되었다. 이는 본 발명에 따라 분리 및 배양된 세포가 중간엽 줄기세포임을 보여주는 것으로 해석된다.
실시예 3: 중간엽 줄기세포 배양 성공율 비교
제대혈 50 유닛을 가지고 종래의 방법과 본 발명의 방법에 따라 배양하고 그 성공율을 비교하여 다음 표 2에 나타내었다.
구체적으로, 종래의 방법에서는 사용할 제대혈의 양과 출산 후 채취까지의 시간에 대한 기준이 없이 줄기세포 배양에 사용하였다. 또한, 종래의 방법에서는 배양액에 세포성장인자가 포함되지 않았으며, 이 점을 제외하고 분리 과정은 본 발명에 따른 방법과 거의 비슷하게 진행되었다.
종래의 방법 본 발명의 방법
중간엽 줄기세포 획득 유닛 수 1 49
배양 성공률(%) 2 98
위 표 2에서 보듯이, 중간엽 줄기세포 배양 성공률을 비교한 결과, 종래의 방법에서는 2%의 성공률을 보인 반면, 본 발명의 방법에 따르면 98%라는 높은 성공률을 보여주는 것을 알 수 있다.
이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명에 따르면 세포수가 상대적으로 부족한 제대혈에서 중간엽 줄기세포를 효과적으로 분리 및 배양할 수 있으며, 이에 따르면 버려지고 있는 제대혈이 세포 치료제로서 각종 난치병을 치유하기 위한 중요한 수단으로 활용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 방법에 따른 제대혈 중간엽 줄기세포주 배양 과정을 보여주는 사진으로, 도 1a, 1b, 1c, 1d 및 1e는 각각 5 일, 7 일, 10 일, 15 일 및 25 일 배양한 결과이다(배율 100X).

Claims (3)

  1. 출산 24 시간 이내의 순수 제대혈로, 1 유닛(unit) 당 부피가 45 ㎖ 이상인 제대혈에 항응고제를 가하고;
    항응고제가 혼합된 제대혈을 aMEM(alpha-minimum essential medium) 배지로 희석하고 원심분리하여 단핵구를 수확하고; 그리고,
    얻어진 단핵구를 Stem Cell Factor, GM-CSF(granulocyte-macrophage colony-stimulating factor), G-CSF(granulocyte colony-stimulating factor), IL-3(interleukin-3) 및 IL-6(interleukin-6)이 포함된 aMEM 배지에 부유 배양하는 단계를 포함하는, 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법.
  2. 제 1 항에 있어서, 제대혈을 2 배 용량의 aMEM 배지로 희석한 후 Ficoll-Hypaque에 중첩하고 원심분리하여 단핵구를 수확하는 것을 특징으로 하는 방법.
  3. 제 1 항에 있어서, 단핵구를 배양하는 aMEM 배지에 항생제, 항진균제, 글루타민 및 우태혈청이 더욱 포함되는 것을 특징으로 하는 방법.
KR1020030079362A 2003-11-11 2003-11-11 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법 KR100560340B1 (ko)

Priority Applications (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020030079362A KR100560340B1 (ko) 2003-11-11 2003-11-11 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법
AT04793573T ATE471368T1 (de) 2003-11-11 2004-10-25 Verfahren zur isolierung und kultivierung aus nabelschnurblut gewonnener mesenchymaler stammzellen
EP04793573A EP1687414B1 (en) 2003-11-11 2004-10-25 Method of isolating and culturing mesenchymal stem cell derived from umbilical cord blood
CN200480033035XA CN1878860B (zh) 2003-11-11 2004-10-25 分离和培养来自脐带血的间充质干细胞的方法
PCT/KR2004/002715 WO2005045010A1 (en) 2003-11-11 2004-10-25 Method of isolating and culturing mesenchymal stem cell derived from umbilical cord blood
DE602004027754T DE602004027754D1 (de) 2003-11-11 2004-10-25 Verfahren zur isolierung und kultivierung aus nabelschnurblut gewonnener mesenchymaler stammzellen
US10/579,070 US7704739B2 (en) 2003-11-11 2004-10-25 Method of isolating and culturing mesenchymal stem cell derived from umbilical cord blood

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020030079362A KR100560340B1 (ko) 2003-11-11 2003-11-11 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20050045325A true KR20050045325A (ko) 2005-05-17
KR100560340B1 KR100560340B1 (ko) 2006-03-14

Family

ID=36642516

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020030079362A KR100560340B1 (ko) 2003-11-11 2003-11-11 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법

Country Status (7)

Country Link
US (1) US7704739B2 (ko)
EP (1) EP1687414B1 (ko)
KR (1) KR100560340B1 (ko)
CN (1) CN1878860B (ko)
AT (1) ATE471368T1 (ko)
DE (1) DE602004027754D1 (ko)
WO (1) WO2005045010A1 (ko)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100679950B1 (ko) * 2005-05-18 2007-02-08 한훈 제대혈 유래 줄기세포와 만니톨을 이용한근위축성측삭경화증 환자의 세포치료용 조성물
KR100791487B1 (ko) * 2006-05-29 2008-01-03 연세대학교 산학협력단 제대혈로부터 간엽줄기세포의 분리 및 배양 방법
KR100888924B1 (ko) * 2007-06-04 2009-03-16 주식회사 제이비줄기세포연구소 인간 제대혈 유래 중간엽 줄기세포와 섬유아세포 분별방법
CN102154200A (zh) * 2010-12-13 2011-08-17 中国人民解放军第三○二医院 临床治疗用脐带间充质干细胞的制备和保存

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080152629A1 (en) * 2000-12-06 2008-06-26 James Edinger Placental stem cell populations
US7311905B2 (en) * 2002-02-13 2007-12-25 Anthrogenesis Corporation Embryonic-like stem cells derived from post-partum mammalian placenta, and uses and methods of treatment using said cells
WO2004069172A2 (en) 2003-01-30 2004-08-19 The Government of the United States of America as represented by the Department of Veterans Affairs Multilineage-inducible cells and uses thereof
ATE470199T1 (de) * 2003-04-24 2010-06-15 Koninkl Philips Electronics Nv Eingriffsfreie links-herzkammervolumenbestimmung
KR100534215B1 (ko) * 2003-11-11 2005-12-08 (주)히스토스템 냉동 보관된 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법
KR100668371B1 (ko) * 2004-12-30 2007-01-12 한훈 제대혈 유래 줄기세포를 이용한 대머리 치료
ES2336230T3 (es) * 2005-08-26 2010-04-09 Seoul National University Industry Foundation Celulas madre multipotentes aisladas de la sangre del cordon umbilical y el agente terapeutico celular que comprende las mismas para tratamiento de la enfermedad isquemica.
PE20070771A1 (es) * 2005-10-13 2007-08-11 Anthrogenesis Corp Inmunomodulacion mediante el uso de celulas madres de la placenta
KR100697326B1 (ko) * 2005-12-02 2007-03-20 재단법인서울대학교산학협력재단 Ｏｃｔ４ 발현능을 가지는 제대혈 유래 다분화능 성체줄기세포 및 그의 제조방법
ES2708933T3 (es) 2005-12-29 2019-04-12 Celularity Inc Poblaciones de células madre placentarias
KR100812544B1 (ko) * 2006-10-19 2008-03-13 재단법인서울대학교산학협력재단 제대혈 유래 다분화능 줄기세포 및 이를 함유하는 허혈성괴사질환 치료용 세포치료제
US20100068194A1 (en) * 2006-10-24 2010-03-18 Dong-Ku Kim Composition for in vivo transplantation for treatment of human cervical cancer comprising mononuclear cells derived from umbilical cord blood
RS52921B (en) 2007-02-12 2014-02-28 Anthrogenesis Corporation TREATMENT OF INFLAMMATORY DISEASES USING PLACENTAL CELL CELLS
ES2530995T3 (es) 2007-09-28 2015-03-09 Anthrogenesis Corp Supresión de tumor usando perfusato placentario humano y células asesinas naturales intermediarias que provienen de placenta humana
KR101077042B1 (ko) * 2008-03-28 2011-10-26 경희대학교 산학협력단 중배엽 줄기세포의 증식을 촉진하기 위한 ｃｄ45+ 세포 또는 ｃｄ45+ 세포 배양액의 용도
NZ591292A (en) 2008-08-20 2012-10-26 Anthrogenesis Corp Improved cell composition and methods of making the same
EP2329012B1 (en) * 2008-08-20 2020-05-20 Celularity, Inc. Treatment of stroke using isolated placental cells
CA2734446C (en) 2008-08-22 2017-06-20 Anthrogenesis Corporation Methods and compositions for treatment of bone defects with placental cell populations
JP5869342B2 (ja) 2008-11-19 2016-02-24 アンスロジェネシス コーポレーション 羊膜由来接着細胞
EP3284818B1 (en) 2010-01-26 2022-03-09 Celularity Inc. Treatment of bone-related cancers using placental stem cells
TW202011974A (zh) 2010-04-07 2020-04-01 美商安瑟吉納西斯公司 利用胎盤幹細胞之血管新生
TW201138792A (en) 2010-04-08 2011-11-16 Anthrogenesis Corp Treatment of sarcoidosis using placental stem cells
WO2012009422A1 (en) 2010-07-13 2012-01-19 Anthrogenesis Corporation Methods of generating natural killer cells
AR093183A1 (es) 2010-12-31 2015-05-27 Anthrogenesis Corp Aumento de la potencia de celulas madre de placenta usando moleculas de arn moduladoras
TWI602570B (zh) 2011-06-01 2017-10-21 安瑟吉納西斯公司 使用胎盤幹細胞之疼痛治療
CN102559590B (zh) * 2012-01-16 2013-11-06 遵义医学院附属医院 用两种培养基序贯培养人脐带血间充质干细胞的方法
US8940294B2 (en) 2012-03-02 2015-01-27 Tissuetech, Inc. Methods of isolating and culturing stem cells
CN102876630B (zh) * 2012-11-05 2015-02-18 东南大学 一种高效分离和扩增人脐带血间充质干细胞的方法
WO2014123879A1 (en) 2013-02-05 2014-08-14 Anthrogenesis Corporation Natural killer cells from placenta
CN103451151B (zh) * 2013-06-19 2016-01-20 武汉道培胎盘干细胞生物技术有限公司 一种培养人脐带间充质干细胞的方法
CN103555663B (zh) * 2013-11-19 2015-07-22 武汉道培胎盘干细胞生物技术有限公司 一种培养人羊膜间充质干细胞的方法
KR101642776B1 (ko) * 2014-04-09 2016-07-29 대한민국 줄기세포를 포함하는 항생 조성물
RU2644650C2 (ru) 2014-12-01 2018-02-13 Общество с ограниченной ответственностью "Т-Хелпер Клеточные Технологии" Материал стволовых клеток и способ его получения
RU2708329C2 (ru) 2016-05-31 2019-12-05 Общество с ограниченной ответственностью "Т-Хелпер Клеточные Технологии" Материал стволовых клеток, композиции и способы применения
CN111643526A (zh) * 2020-07-14 2020-09-11 贵州金元泰生物科技有限公司 一种用于延缓卵巢衰老及防治老年痴呆和抑郁的间充质干细胞制剂

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5197985A (en) * 1990-11-16 1993-03-30 Caplan Arnold I Method for enhancing the implantation and differentiation of marrow-derived mesenchymal cells
US5486359A (en) 1990-11-16 1996-01-23 Osiris Therapeutics, Inc. Human mesenchymal stem cells
US6335195B1 (en) * 1997-01-28 2002-01-01 Maret Corporation Method for promoting hematopoietic and mesenchymal cell proliferation and differentiation
CN1564864A (zh) * 2001-08-07 2005-01-12 麒麟麦酒株式会社 造血干细胞的制备方法

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100679950B1 (ko) * 2005-05-18 2007-02-08 한훈 제대혈 유래 줄기세포와 만니톨을 이용한근위축성측삭경화증 환자의 세포치료용 조성물
KR100791487B1 (ko) * 2006-05-29 2008-01-03 연세대학교 산학협력단 제대혈로부터 간엽줄기세포의 분리 및 배양 방법
KR100888924B1 (ko) * 2007-06-04 2009-03-16 주식회사 제이비줄기세포연구소 인간 제대혈 유래 중간엽 줄기세포와 섬유아세포 분별방법
CN102154200A (zh) * 2010-12-13 2011-08-17 中国人民解放军第三○二医院 临床治疗用脐带间充质干细胞的制备和保存
CN102154200B (zh) * 2010-12-13 2012-10-03 中国人民解放军第三○二医院 临床治疗用脐带间充质干细胞的制备和保存

Also Published As

Publication number Publication date
WO2005045010A1 (en) 2005-05-19
EP1687414B1 (en) 2010-06-16
EP1687414A1 (en) 2006-08-09
DE602004027754D1 (de) 2010-07-29
US7704739B2 (en) 2010-04-27
EP1687414A4 (en) 2007-09-12
ATE471368T1 (de) 2010-07-15
US20070092967A1 (en) 2007-04-26
CN1878860A (zh) 2006-12-13
KR100560340B1 (ko) 2006-03-14
CN1878860B (zh) 2012-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100560340B1 (ko) 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법
US5965436A (en) Method of isolating mesenchymal stem cells associated with isolated megakaryocytes by isolating megakaryocytes
KR100534215B1 (ko) 냉동 보관된 제대혈로부터 중간엽 줄기세포의 분리 및 배양 방법
WO1998020731A9 (en) Msc-megakaryocyte precursor composition and method of isolating mscs associated with isolated megakaryocytes by isolating megakaryocytes
EP2308964B1 (en) Culturing method of mesenchymal stem cell
KR20030069115A (ko) 제대혈 유래 간엽줄기세포ㆍ전구세포의 분리배양방법 및간엽조직으로의 분화유도방법
EP2881462B1 (en) Method for obtaining monocytes or nk cells
KR20080042761A (ko) 렙틴을 이용한 줄기세포 증식방법
CN112251406A (zh) 一种nk细胞活化阶段的外泌体分选方法
CN112708596A (zh) 一种间充质干细胞体外抑制淋巴细胞增殖抑制的检测方法
CN110055219B (zh) 一种利用非动员外周血制备异质性造血干祖细胞的方法
JPH10136978A (ja) 造血幹細胞の培養方法
WO2010140162A2 (en) A process for preparing stem cell based formulations
CN114517178B (zh) Trolox在延缓间充质干细胞衰老中的应用
CN116640727B (zh) 一种提高细胞活力的营养液及其制备方法、应用
KR102258393B1 (ko) 고효능 줄기세포를 제조하기 위한 s-i-s 배양방법
KR20070113694A (ko) 조혈모세포 생착 촉진용 조성물
CN114350608A (zh) 一种诱导t细胞重编程为类nk细胞的组合物及其应用
CN115521906A (zh) 一种制备高品质人源牙髓干细胞的方法
CN117126809A (zh) 体外诱导nk细胞扩增试剂盒及体外诱导nk细胞扩增方法
KR20100109542A (ko) 생착능이 증가된 조혈줄기세포의 제조방법

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
N231 Notification of change of applicant
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant
FPAY Annual fee payment

Payment date: 20130308

Year of fee payment: 8

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20140306

Year of fee payment: 9

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20150227

Year of fee payment: 10

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20160304

Year of fee payment: 11

FPAY Annual fee payment

Payment date: 20190227

Year of fee payment: 14