KR20040004642A - 세포 표면 프로테아제에 의해 활성화되는 접합체 및 이의치료학적 용도 - Google Patents

세포 표면 프로테아제에 의해 활성화되는 접합체 및 이의치료학적 용도 Download PDF

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Abstract

MTSP 관련, 유로키나제형 플라스미노겐 활성화인자(uPA) 또는 엔도텔리아제 관련 질환을 포함하는 세포 표면 프로테아제 관련 질환의 하나 이상의 증상을 치료, 예방 또는 경감시키기 위한 접합체, 조성물 및 방법이 제공된다. 상기 조성물과 방법에서 사용하기 위한 접합체는 세포독성제를 포함하는 치료제를 함유하는 펩타이드성 접합체이다.

Description

세포 표면 프로테아제에 의해 활성화되는 접합체 및 이의 치료학적 용도{Conjugates activated by cell surface proteases and therapeutic uses thereof}
관련 출원
본원에서는 출원인(Edwin L. Madison, Joseph Edward Semple 및 George P. Vlasuk)에 의해 "CONJUGATES ACTIVATED BY CELL SURFACE PROTEASES AND THERAPEUTIC USES THEREOF"란 표제하에 2001년 5월 23일자로 출원된 미국 가출원 제60/293,267호에 대한 우선권의 잇점을 청구한다. 허용된다면, 상기 미국 가출원의 전문이 본원에 참조로서 인용된다.
발명의 분야
증식성 질환, 자가면역 질환, 감염 질환 및 염증 질환과 같은 각종 질환을 치료하기 위한 치료제의 국재화된 전달을 위한 접합체, 조성물 및 방법이 제공된다. 전구약물로서 작용하는 접합체는 치료제 및 세포 표면 프로테아제에 의해 절단되어 표적화된 세포 부근에서 치료제를 방출하는 펩타이드성 기질을 함유한다.
발명의 배경
암 및 기타 증식성 질환의 효과적 치료는 화학치료제의 투여, 전형적으로는 전신계적 투여를 수반한다. 전형적으로, 화학치료제는 활발하게 증식 및 성장하는세포가 당해 제제에 의해 표적화될 수 있도록 증식 또는 기타 대사 과정을 억제함으로써 작용하는 세포독성제이다. 그러나, 이러한 표적화제는 고도로 특이적이지 않으며, 흔히 부작용이 만연하다.
따라서, 약리학에서의 목표는 표적화된 세포 또는 조직에 대해 매우 특이적 활성으로 작용하는 특이적 제제의 디자인이다. 이러한 목표는 예를 들어, 종양성 질환을 포함하는 증식성 질환 및 바이러스 기원의 질환의 치료를 위한 제제로서 독성 용량 대 치료 용량의 비가 일반적으로 1에 가까우며 투여가 제한되어야 하는 제제의 디자인시에 중요하다. 이러한 목적을 달성하기 위한 수많은 접근법이 개발되었다. 이중에는 항체 및/또는 성장 인자와 같은 표적화제 및 특정 세포에 작용하는 치료제를 함유하는 접합체의 사용; 특정 유전자 및/또는 단백질로 표적화시키는 안티센스 기술의 사용; 예를 들어, 결실 유전자의 정확한 복사체 또는 약제학적 활성 화합물을 제공하기 위한 유전자 치료의 사용 및 세포내로 전달되지 않는 경우에는 비교적 비독성인 독소의 사용이 있다. 따라서, 큰 성공은 제한되어 왔다. 단지 제한된 수와 종류의 잠재적 표적화제가 있으며 이러한 제제들의 특이성은 최적이다.
따라서, 표적화된 세포 및 조직으로 치료제를 전달하기 위한 수단을 개발해야할 필요가 있다. 따라서, 본원의 목적은 특히 치료제의 표적화된 전달을 위한 방법 및 화합물을 제공하는 것이다.
발명의 요약
본원에서는 치료제의 표적화된 전달을 위한 화합물 및 방법이 제공된다. 당해 화합물은 세포 표면 프로테아제에 대한 펩타이드성 기질 또는 이의 가용성, 분비된 또는 방출된 형태 및 프로테아제에 의해 분해시 치료제가 되거나 표적화된 세포 또는 조직 또는 이의 부근에 의해 활성화될 수 있는 형태가 되는 제제를 함유하는 접합체이다. 상기 제제로는 치료제(예: 세포독성제), 약물, 치료학적 핵산 분자 및 진단제(예: 표지된 잔기 및 영상화제)가 포함된다. 세포 표면 프로테아제는 세포 표면에 위치하는 프로테아제이며, 예를 들어, MTSP 및 엔도텔리아제로서 명명되는 프로테아제를 포함하는 막-결합된 세린 프로테아제(SP)와 같은 막-결합된 프로테아제를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 또한, 수용체와의 특이적 결합 상호작용으로 인해 세포 표면에 위치하는 프로테아제가 고려된다. 이러한 프로테아제 중에는 유로키나제 플라스미노겐 활성화인자 수용체(u-PAR)에 결합된 유로키나제 플라스미노겐 활성화인자(u-PA; 참조: Hung (1984) Adv. Exp. Med. Biol.172:281-293; Cheng et al. (1989) Gene 69:357-363)가 포함된다. 당해 접합체는 세포독성제와 같은 치료제를 포함하는 표적화된 제제에 직접적으로 또는 링커를 통해 연결된 하나 또는 다수의 세포 표면 프로테아제에 대한 하나 이상의 기질을 함유한다. 본원에서 제공되는 접합체는 다음 성분들을 함유한다: (펩타이드성 기질)s,(링커)q및 (표적화된 제제)t[여기서, 하나 이상의 펩타이드성 기질 잔기는 링커(L)와 함께 또는 링커(L) 없이 하나 이상의 치료제에 연결되며, s는 1 이상이며 각각의 깆리은 동일하거나 상이하며 전형적으로 1 내지 6개, 일반적으로는 1, 2 또는 3개이며, q는 세포 표면 프로테아제(들)이 펩타이드성 기질(들)을 절단하고 활성 치료제를 방출하거나 세포, 조직 또는 주위 환경에 의해 활성 형태로 전환되는 형태인 제제를 방출하는 경우에 0 이상이며, q는 0 내지 t, 일반적으로 1 내지 4이며, t는 1 이상, 일반적으로는 1 또는 2이며, 각각의 표적화된 제제는 동일하거나 상이하며, 링커는 임의의 링커를 의미하며, 표적화된 제제는 임의의 제제, 전형적으로는 세포독성제와 같은 치료제, 핵산, 영상화제 또는 표지된 잔기와 같은 진단제, 또는 항종양제, 항암제, 항-혈관신생제, 아폽토시스촉진제(pro-apoptotic) 및 항유사분열제 또는 치료를 포함하나 이에 제한되지 않는 약물이다].
치료제로는 임의의 생물학적 활성 분자가 포함된다. 이들 제제로는 독소, 사이토킨 및 림포카인, 성장 인자, 핵산 분자(예: 안티센스 핵산, dsRNA 및 DNA 분자)가 포함된다. 치료제로는 세포독소와 같이 세포내에서 활성이거나 세포외 수요체의 활성 조절제와 같이 세포외에서 활성인 제제들이 포함된다. 접합체내에 있는 경우 치료제는 실질적으로 불활성이며, 절단되는 경우에는 활성 형태로 또는 표적화된 세포 또는 조직 또는 이의 환경에 의해 활성화될 수 있는 형태로 방출된다.
예시적 양태에서, 본원에서 제공되는 방법 및 조성물에서 사용하기 위한 접합체는 화학식 (펩타이드i)s-(링커)q-(치료제)t[여기서, 펩타이드i는 세포 표면 프로테아제에 대한 기질이며, s는 1 이상이거나, 1 내지 6 또는 1 또는 2이거나 1이고, 링커는 임의의 링커이고, q는 0 이상이거나 0 내지 4이거나 0 또는 1이고, 치료제는 예를 들어, 항종양제, 항혈관신생제, 항암제, 아폽토시스촉진제 및 항유사분열제를 포함하나 이에 제한되지 않는 세포독성제이고, t는 1 이상이거나 1 또는 2이다]의 화합물 또는 이의 유도체로서 표현될 수 있다. 이러한 접합체에서, 치료제는 임의로 링커 L을 통해 펩타이드성 기질의 C 말단 또는 N 말단에 공유적으로 결합된다.
특정 양태에서, 펩타이드i는 세포 표면 프로테아제에 대한 기질이므로, 실질적으로 불활성인 접합체는 프로테아제 작용시 당해 펩타이드성 기질 쇄의 한 지점에서 절단되어 시험관내 및/또는 생체내에서 치료학적 활성을 나타내는 화학식 (펩타이드a)s-(링커)q-(치료제)t의 화합물 또는 이의 유도체를 방출한다. 상기 접합체에서, 치료제는 예를 들어, 세포독성제이며, 펩타이드a는 P1-P1' 결합에서의 절단으로부터 생성되는 펩타이드i의 절단된 형태이다.
당해 접합체는 표적화된 제제를 특정 세포로 표적화시키고 전달시는데 사용할 수 있으므로, 세포-부착된 및 세포-국재화된 프로테아제를 포함하는 세포 표면 프로테아제를 발현하는 세포 또는 조직과 관련된 임의의 질환을 치료하는데 사용할 수 있다. 이러한 프로테아제가 발현되는 세포 또는 그 부근의 세포는 반드시 질환 또는 질환 진행과 관련되지는 않지만, 존재하여 표적화된 접합체를 절단하는 프로테아제를 제시하도록 작용할 수 있다.
세포-부착된 및 세포-국재화된 프로테아제를 포함하는 세포 표면 프로테아제를 발현하는 세포 또는 조직과 관련된 질환의 치료 방법. 상기 질환으로는 증식성 질환, 자가면역 질환, 감염 질환 및 염증 질환이 포함되나 이에 제한되지 않는다.예를 들어, 질환으로는 류마티스 관절염, 루푸스, 다발성 경화증, 건선, 당뇨병성 망막병증, 익상편 재발, 엑시머 레이저 수술과 녹내장 제거술 후 반흔, 안구 전방의 각종 장애를 포함하는 기타 안구 장애, 심혈관 장애, 재협착, 만성 염증 질환, 창상, 순환계 장애, 크레스트 증후군, 세균 감염, AIDS를 포함하는 바이러스 감염, 피부 질환 및 폐암, 결장암, 유방암, 난소암 및 전립선암을 포함하나 이에 제한되지 않는 고형 신생물 및 혈관 종양을 포함하는 암이 포함된다.
또한, 본원에서는 질환 치료용 접합체를 표적화시키는 프로테아제를 동정하는 방법이 제공된다. 당해 방법은 세포 표면 프로테아제 관련 질환 진행에 관여하는 세포 또는 세포 표면 프로테아제 관련 질환 진행에 관여하는 세포 부근의 세포를 동정하고 그 세포 상의 세포 표면 프로테아제를 동정함으로써 세포 표면 프로테아제 관련 질환을 동정하는 것을 포함한다. 이어서, 본원에서 제공하는 이러한 프로테아제를 표적으로 하는 접합체를 제조할 수 있다.
도면의 설명
도 1 내지 5는 본원에서 제공되는 예시적 접합체에 대한 시험관내 CT50(50% 절단되는데 소요되는 시간)(분)를 제공한다: A = 0.1 내지 25분; B = 25 내지 100분; C = 100 내지 250분; D = >250분.
도 1은 본원에서 제공되는 예시적 독소루비신 접합체 및 MTSP1에 의한 당해 접합체의 절단에 대한 시험관내 CT50(분)을 제시한 것이다.
도 2는 본원에서 제공되는 예시적 독소루비신 접합체 및 u-PA에 의한 당해접합체의 절단에 대한 시험관내 CT50(분)을 제시한 것이다.
도 3은 본원에서 제공되는 예시적 탁솔 접합체 및 MTSP1에 의한 당해 접합체의 절단에 대한 시험관내 CT50(분)을 제시한 것이다.
도 4는 본원에서 제공되는 예시적 탁솔 접합체 및 u-PA에 의한 당해 접합체의 절단에 대한 시험관내 CT50(분)을 제시한 것이다.
도 5는 본원에서 제공되는 예시적 독소루비신 및 탁솔 접합체 및 ET1(엔도텔리아제 1)에 의한 당해 접합체의 절단에 대한 시험관내 CT50(분)을 제시한 것이다.
양태의 상세한 설명
A. 정의
특별히 정의되지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 당해 분야의 숙련가에 의해 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원에서 인용되는 모든 특허, 특허 출원, 공개된 출원 및 공보 및 진뱅크 서열, 웹사이트 및 공개문헌은 달리 주지되지 않는 한 이의 전문을 참조로서 인용한다. 본원의 용어에 대한 정의가 여러개 존재하는 경우에는, 본 섹션에서의 정의가 널리 사용된다. URL 또는 기타 식별자 또는 주소를 참조하는 경우에는, 이러한 식별자는 변할 수 있고 인터넷 상의 특정 정보는 다른 것으로 바뀔 수 있지만, 이 인터넷을 검색함으로써 동등한 정보를 탐색할 수 있다는 사실을 이해야 한다. 이를 참조한 것은 이러한 정보가 입수 가능하고 대중적으로 널리 유포된 것이라는 사실을 입증해준다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 표적화된 제제는 표적화된 전달을 의도하는 임의의 제제이며 치료제 및 진단제 및 표적화된 전달을 의도하는 임의의 기타 제제들이 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 표적화된 전달이란 프로테아제를 발현하는 선택된 세포 또는 조직으로 전달시켜 표적화된 제제를 방출시키는 것을 의미한다. 이러한 전달은 이러한 선택된 세포 또는 조직으로만 한정될 필요는 없으나, 이를 포함해야 하며 일반적으로 이러한 선택된 세포 또는 조직으로 보다 높은 양을 전달한다. 전달은 세포 또는 조직내로의 도입 또는 세포 또는 조직에의 결합 또는 세포 또는 조직 부근에서의 방출을 포함한다. 예를 들어, 일부 경우에 종양은 프로테아제, 수용체, 조요소 또는 스트로마와 관련된 기질의 생산을 포함하며, 따라서 전달은 침입 세포 또는 표적화된 종양에서의 세포내에서 이와 같이 유도된 스트로마 활성, 예를 들어, 프로테아제, 수용체 및/또는 효소 조요소의 표적화를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 치료 지수는 LD50/ED50의 비이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 치료제는 임의의 약물 또는 표적화된 세포 또는 조직, 예를 들어, 종양 세포와 증식성, 통상적으로 바람직하지 않은 반응과 관련된 세포를 포함하는 증식 세포로 전달시키고자 하는 기타 제제이다. 치료제로는 항암제, 항혈관신생제, 아폽토시스촉진제, 항유사분열 성장 인자, 사이토킨(예: 종양 괴사 인자 및 인터류킨) 및 세포독성제 및 본원에서 기술하며 당해 분야의 숙련가에 공지된 기타 제제들이 포함된다. 치료제로는 내재화시 활성인 제제 및 특정 세포 표면 수용체(예: 세포외 시그날을 전달하는 G 단백질)의 활성 조절제와 같이 세포외적으로 작용하는 제제들이 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 불활성 치료제는 펩타이드에 접합됨으로써 입체형태적 변화 또는 크기 또는 입체 장애와 같은 기타 요소로 인해 어떠한 활성도 나타내지 않거나 방출된 활성 치료제에 비해 실질적으로 감소된 활성을 나타내는 치료제이다. 예를 들어, 접합된 독소루비신은 접합체로부터 세포로 진입할 수 있는 형태로 방출될 때까지는 세포에 대해 독성이 아니다. 접합체로부터 상기 제제가 절단될 경우, 이는 활성 형태이거나 효소적 또는 화학적 단계를 포함하는 한가지 또는 다수의 단계에 의해 세포내 또는 세포상에서 활성 형태로 추가로 처리되는 형태이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 활성 치료제는 접합체의 펩타이드성 기질 부분의 절단에 의해 상기 접합체로부터 절단된 치료제이다. 활성 치료제는 절단으로 인해 통상적으로는 세포로 진입함으로써 의도된 활성을 나타낼 수 있다. 접합된 경우 치료제는 치료제로서의 활성을 갖지 않거나 감소된 활성을 가지며 절단시에는 세포 주변으로 방출된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 항암제("항종양제 또는 항신생물제"와 상호교환적으로 사용된다)는 암 치료에서 사용되는 임의의 제제를 의미한다. 이들 항암제로는 단독으로 또는 기타 화합물과 배합하여 사용될 경우에 신생물, 종양 및 암과 연관된 임상 증상 또는 진단학적 마커를 경감, 감소, 개선 또는 예방하거나, 이러한 증상들의 완화 상태를 제공 또는 유지시킬 수 있고, 본원에서 제공되는 방법, 배합물 및 조성물에 사용될 수 있는 임의의 제제가 포함된다. 항신생물제의 비제한적 예로는 항혈관신생제, 알킬화제, 항대사물, 특정 천연 산물, 백금 배위 착물, 안트라센디온, 치환된 우레아, 메틸히드라진 유도체, 부신피질억제제, 특정 호르몬, 길항제 및 항암성 폴리사카라이드가 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 접합된 치료제와 관련하여 실질적으로 불활성이란, 제제의 치료 활성을 평가하는 표준 또는 분야에서 인정된 검정, 예를 들어, 시험관내 또는 생체내 검정에서 비접합된 치료제와 비교하여 1% 이상, 일반적으로 10, 20, 30, 50, 60, 70, 80 또는 90 또는 100% 불활성인 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 표적화된 세포 또는 조직은 접합체를 절단하는 세포 표면 프로테아제를 포함하는 세포 또는 조직을 의미한다. 상기 세포 또는 조직은 질환 진행에 참여함으로써 또는 단지 우연하게 질환과 관련될 수 있거나 질환 좌위들 또는 좌위에 존재할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 혈관신생(angiogenesis)은 광범위하게 종양과 연관된 신혈관형성(neovascularization)을 포함하지만 이에 제한되지는 않는 신규한 맥관계의 확립 및 유지(혈관신생)에 직접적으로 또는 간접적으로 관련된 전체 과정들을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 항혈관신생 치료 또는 항혈관신생제는 단독으로 또는 다른 치료 또는 화합물과 배합하여 사용하는 경우, 바람직하지 않고/않거나 조절되지 않는 혈관신생과 관련된 하나 이상의 임상적 증상 또는 진단학적 마커를 경감, 감소, 개선, 예방시키거나 이러한 증상들의 완화 상태를 제공 또는 유지시킬 수 있는, 임의의 치료학적 섭생 및 화합물을 의미한다. 따라서, 본원의 목적상 항혈관신생제는 맥관계의 확립 또는 유지를 억제하는 제제를 의미한다. 상기 제제는 항종양제, 및 당뇨병성 망막병증, 재발협착증, 과증식 질환 및 기타 질환과 같은 바람직하지 않은 혈관신생과 관련된 기타 질환의 치료를 위한 제제를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 항혈관신생성이 아닌 항종양제는 혈관신생을 억제함으로써 주로 작용하는 것이 아닌 항종양제를 의미한다. 항종양제가 혈관신생을 억제함으로써 주로 작용하는 것인지의 여부는 본원에서 제공되는 검정을 사용하거나 당해 분야의 숙련가에 익히 공지된 검정을 사용하여 결정할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 바람직하지 않고/않거나 조절되지 않는 혈관신생은 혈관신생 자극인자의 영향이 혈관신생 억제인자의 영향을 능가하는 병리학적 혈관신생을 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 결함성 혈관신생은 비정상적인 혈관신생을 초래하는 정상적인 혈관신생의 결함 또는 혈관신생의 부재 또는 실질적인 감소가 존재하는 질환과 관련된 병리학적 혈관신생을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 세포 표면 프로테아제는 세포 표면상이나 세포 표면에 위치하는 임의의 프로테아제 및/또는 수용체와의 특이적 결합 상호작용으로 인하여 세포 표면이나 그 부근에 위치하거나 세포 표면에 부착된 프로테아제이다. 수용체와의 특이적 결합 상호작용으로 인하여 세포 표면에 위치하는 예시적 프로테아제로는 유로키나제 플라스미노겐 활성화인자 수용체(u-PAR)에 결합된 유로키나제 플라스미노겐 활성화인자(u-PA)가 있다. 따라서, 본원에서 고려되는 세포 표면 프로테아제로는 세포 표면-부착된 프로테아제가 포함된다. 또한, 순환하거나 세포 내부에 있을 수 있는 이의 모든 형태가 포함된다. 세포 표면 프로테아제로서 분류되기 위해서는, 세포 주기의 일부 시점에서 세포의 표면상에 위치하는(즉, 트랜스막 프로테아제과 같이 표면 상에 위치하거나 수용체에 결합되어 있는) 이의 하나 이상의 형태로서 존재해야 한다. 세포 표면 프로테아제로는 트랜스막 세린 프로테아제(MTSP) 및 엔도텔리아제를 포함하나 이에 제한되지 않는 세린 프로테아제 및 유로키나제가 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 세린 프로테아제(SP)는 세린 잔기가 단백질 또는 펩티드의 가수분해에 관여하는 각종 프로테아제 계열을 의미한다. 상기 세린 잔기는 촉매시에 세린, 히스티딘 및 아스파르트산을 포함하는 촉매적 트리아드(triad) 메카니즘의 일부일 수 있거나 촉매시에 세린 및 라이신이 관여하는 하이드록실/ε-아민 또는 하이드록실/α-아민 촉매적 디아드 메카니즘의 일부일 수 있다. 사람 기원을 포함하는 포유동물의 SP가 특히 관심대상이다. 당해 분야의 숙련가는 일반적으로 폴리펩타이드의 비필수 영역에서의 단일 아미노산 치환이 실질적으로 생물학적 활성을 변경시키지 않는다는 것을 인지하고 있다[참조: Watson et al. Molecular Biology of the Gene, 4th Edition, 1987, The Bejacmin/Cummings Pub. co., p 224].
본원에서 사용되는 바와 같이, 세포 표면 프로테아제의 분비된, 가용성 및 방출된 형태가 고려된다. 이러한 형태들은 예를 들어, 단백질분해적 분해시 또는막 결합된 프로테아제의 세포외 부분의 제거시에 발견되는 형태 및 트랜스막 도메인을 함유하지 않는 스플라이스 변이체들을 포함한다.
본원에서 제시된 바와 같이, 세포 표면 프로테아제 및 세포와 부착된 프로테아제는 이러한 효소에 의해 절단시 활성화되는 접합체를 제공함으로써 이러한 세포 근처에 세포독성제와 같은 치료제를 농축시키는 수단을 제공하는데 이용할 수 있다. 이러한 접합체는 세포 표면 프로테아제 또는 세포-부착된 프로테아제의 작용시 세포독성제와 같은 치료제 또는 치료제로 전환될 수 있는 이의 유도체를 작용 부위에 국소적으로 방출시킨다. 상기 주지된 바와 같이, 기질은 질환의 부위(들) 또는 좌위 또는 좌위들에 존재하거나 이와 관련된 종양 세포 또는 내피 세포와 같은 세포의 표면에서 발현되거나 활성적인 표적화된 프로테아제의 기질이 되도록 디자인한다. 상기 프로테아제의 특이적 발현, 국재화 또는 활성화 또는 상기 프로테아제에 대한 수용체, 기질 또는 효소 조요소로 인해, 본원에서 제공되는 접합체의 투여로 치료제를 이러한 세포들로 표적화시킬 수 있다. 프로테아제와 접촉시 활성 치료제는 표적화된 세포에 바로 인접하여 방출된다. 예를 들어, 일부 MTSP의 특이적 프로필은 다음과 같다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "트랜스막 세린 프로테아제(MTSP)"는 본원에서 기술하는 바와 같은 공통의 구조적 특징을 공유하는 트랜스막 세린 프로테아제의 계열을 의미한다[참조: Hooper et al. (2001) J. Biol. Chem. 276: 857-860]. 따라서, 예를 들어, "MTSP"에 대한 인용은 MTSP1, MTSP3, MTSP4, MTSP6, MTSP7, MTSP9, MTSP10, MTSP12, MTSP20, MTSP22 및 MTSP25을 포함하지만 이에 제한되지 않는 MTSP 유전자에 의해 암호화된 모든 단백질, 또는 임의의 다른 공급원으로부터 수득되거나 합성적으로 제조되거나 동일한 활성을 나타내는 등가의 분자를 포함한다. 다른 MTSP는 코린, 엔테로펩티다제, 사람 기도 트립신-유형 프로테아제(HAT), MTSP1, TMPRSS2 및 TMPRSS4를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 본원에서 기술하는 MTSP를 사용하여 다른 MTSP를 동정할 수 있다. 전체 길이 분자 및 스플라스 변이체 및 소, 양, 염소, 돼지, 말, 영장류(침팬지 및 고릴라를 포함), 설치류, 개, 고양이 및 애완용 동물, 농장 및 동물원 동물과 같은 기타 관심대상의 동물로부터의 MTSP를 암호화하는 핵산 분자를 포함하여, 다른 MTSP를 암호화하는 핵산을 동정하는 방법은 당해 분야의 숙련가에 공지되어 있으며 본원에 기술되어 있다. 하기 서열목록에 기술된 핵산을 포함하는 본원에서 기술되는 핵산 분자는, 예를 들어, 상기 핵산 분자 또는 이에 기초한 선택된 프라이머 또는 프로브를 사용하여 적절한 라이브러리를 스크리닝함으로써 사람 공급원 또는 기타 종 기원의 전체 길이 MTSP 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 분자를 수득하는데 사용할 수 있다.
예시적인 MTSP 및/또는 이의 도메인의 암호화 핵산 분자 서열 및 암호화된 아미노산 서열은 서열 1 내지 45, 269 내지 170 및 272 내지 276에 나타낸다. 상기 용어는 또한 각각의 구성원의 활성을 실질적으로 변경시키지 않는 보존적 아미노산 치환체를 갖는 MTSP를 포함하며, 또한 이의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드를 포함한다. 따라서, 수득되는 폴리펩타이드가 변경되지 않은 폴리펩타이드의 단백질분해 활성의 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 보유하도록 하는 아미노산 치환을 갖는 MTSP가 포함되며, 또한 이의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 MTSP 및 단일 뉴클레오타이드 다형성(SNP)과 같은 대립유전자 변이체에 의해 암호화되는 MTSP가 포함된다. 비록 필수적인 것은 아니나 아미노산의 보존적 치환을 포함하는 적합한 치환은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어져 있으며 수득되는 분자의 촉매적 활성과 같은 생물학적 활성을 제거하지 않으면서 제조될 수 있다. MTSP는 사람 기원을 포함하는 포유동물과 같은 동물 기원의 MTSP이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "MTSP의 프로테아제 도메인"은 단백질분해 활성을 나타내며 키모트립신/트립신 계열 프로테아제 도메인과 상동성 및 구조적 특징을 공유하는, MTSP의 세포외 도메인을 의미한다. 따라서, 이는 표준 시험관내 검정으로 평가하는 경우 단백질분해 활성을 나타내는 도메인의 적어도 최소한의 일부분이다. 본원에서는 이러한 프로테아제 도메인과 이의 촉매적 활성 부분이 고려된다.
명시한 프로테아제 도메인을 갖는 예시적인 MTSP 폴리펩타이드는 프로테아제 활성을 보유하거나 나타내는 이의 보다 작은 일부분을 포함하여 서열 1 내지 45, 269 내지 270 및 272 내지 276에 제시한다. 프로테아제 도메인은 표면 루프에서의 삽입 및 결실을 포함하여, 크기 및 구성에서 다양하다. 이들은 활성 부위 트리아드, 1차 특이성 포켓(pocket), 옥시음이온 홀(oxyanion hole) 및/또는 세린 프로테아제 도메인의 다른 특성 중 하나 이상을 포함하여, 보존된 구조를 보유한다. 따라서, 본원의 목적상, 프로테아제 도메인은 본원에서 정의된 바와 같이 MTSP의 일부분이며, 다른 MTSP의 도메인에 상동이다. MTSP로는 MTSP1, MTSP3, MTSP4,MTSP6, MTSP7, MTSP9, MTSP10, MTSP12, MTSP20, MTSP22 및 MTSP25 (서열 1 내지 19, 42 내지 45, 269 내지 270 및 272-276; 또한 국제 PCT 출원 제WO 02/00860 (MTSP12 변이체를 제공하는 서열 38 및 97 참조); 코린(서열 28 및 29), 엔테로펩티다제(서열 30 및 31) 사람 기도 트립신-유형 프로테아제 (HAT)(서열 32 및 33), 헵신(서열 34 및 35), TMPRSS2 (서열 36 및 37) 및 TMPRSS4(서열 38 및 39)가 포함된다. 키모트립신(S1) 폴드[참조: 인터넷 접속가능한 MEROPS 데이터 베이스]의 보다 큰 부류의 효소에 관해서는, MTSP 프로테아제 도메인은 높은 수준의 아미노산 서열 동일성을 공유한다. 활성에 필요한 His, Asp 및 Ser 잔기가 보존된 모티프내에 존재한다. 절단에 의해 활성화되는 MTSP 프로테아제 도메인에서, 2개의 쇄 형태에서 제2 쇄의 N-말단을 생성하는 활성화 부위는 보존된 모티프를 가지며 용이하게 동정할 수 있다[참조: 예를 들어, 아미노산 801번 내지 806번, 서열 29; 아미노산 406번 내지 410번, 서열 31; 아미노산 186번 내지 190번, 서열 33; 아미노산 161번 내지 166번, 서열 35; 아미노산 255번 내지 259번, 서열 37; 아미노산 190번 내지 194번, 서열 39 및 당해 분야의 숙련가에 공지되어 있고/있거나 본원에서 기술하는 바와 같은 서열들).
예를 들어, MTSP10(참조: 서열 44 및 45)와 관련하여, 다음과 같은 디설파이드 결합이 있다: C488-C504, C587-C653; C619-C632; C643-C673(참조: 서열 44 및 45) (42번 내지 58번; 136번 내지 201번; 168번 내지 182번 및 191번 내지 220번을 포함하는 키모트림신). 디설파이드 결합은 프로테아제 도메인을 다른 도메인에 연결시키는Cys 잔기 C573-C296사이에 형성되어, 활성화 절단(서열 45의 잔기 R462및 I463사이)시에 수득되는 폴리펩타이드가 2개의 쇄 분자가 되도록 한다. C573(서열 45)는 일본쇄 형태의 프로테아제 도메인내의 유리 Cys이다. 주지된 바와 같이, 프로테아제는 이본쇄 분자로서 제공될 수도 있다. 일본쇄 및 이본쇄 형태는 단백질분해적으로 활성이다. 이본쇄 형태는 전형적으로는 C573과 프로테아제 도메인 외부의 Cys, 예를 들어, Cys296사이의 결합에 의해 생성된다. 활성화 절단시, 디설파이드 결합이 유지되어 이본쇄 폴리펩타이드가 생성된다. 쇄 "A"의 크기는 R462및 I463사이의 활성화 절단 전의 폴리펩타이드의 출발 길이의 함수이다. 프로테아제 도메인(서열 45의 잔기 463 내지 692) 또는 이의 촉매적 활성 단편을 포함하는 어떠한 길이의 폴리펩타이드라도 본원에서 고려된다. 이본쇄 형태는 C296부터 최대 C573을 포함하는 폴리펩타이드의 프로테아제 도메인을 적어도 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 이본쇄 형태의 프로테아제 도메인은 프로테아제 도메인을 폴리펩티드의 나머지 부분인 "A" 쇄에 연결시키는, 예를 들어, Cys573(MTSP의 경우 서열 45)와 같은 프로테아제 도메인 외부의 Cys 사이의 Cys 쌍형성이 이루어진 프로테아제의 일본쇄 형태로부터 형성되는 이본쇄 형태를 의미한다. 이본쇄 프로테아제 도메인 형태는 "폴리펩티드의 나머지 부분", 즉 "A" 쇄가 더 짧고 프로테아제 도메인 외부로부터의 Cys를 포함하는 임의의 형태를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, MTSP의 촉매적 활성 도메인은 프로테아제 도메인을 의미한다. MTSP의 프로테아제 도메인에 대한 인용은 일반적으로 단백질의 일본쇄를 의미한다. 이본쇄 형태 또는 두 형태 모두가 의도되는 경우 매우 구체화된다. 각각의 단백질의 지모겐 형태는 일본쇄 형태이며, 이는 활성화 절단에 의해 활성적인 이본쇄 또는 다중쇄 형태로 전환될 수 있다. 활성 형태는 생체내 또는 시험관내에서 활성인 형태를 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 활성화 절단은 프로테아제 도메인의 N-말단에서의 프로테아제의 절단(일반적으로 전체 길이 단백질내의 R과 I 또는 V 사이)을 지칭한다. 프로테아제 도메인의 외부 Cys와 프로테인 도메인내의 Cys(예를 들어, 서열 45의 Cys573) 간의 Cys-Cys 쌍형성으로 인해 절단되는 경우, 수득되는 폴리펩타이드는 2개의 쇄(MTSP의 프로테아제 도메인인 "A" 쇄 및 "B" 쇄)를 갖는다. 절단은 또 다른 프로테아제에 의해 또는 자가촉매적으로 초래될 수 있다. 본원에서 제공되는 접합체는 유리하게는 활성 세포 표면 프로테아제(또는 세포 부착된 프로테아제)에 의해 인식되는 부위를 함유하며, 이로써 프로테아제에 의해 절단되어 치료제의 활성 또는 불활성 전구약물 형태를 방출한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP1은,
서열 1 또는 40에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드,
서열 1 또는 40에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는폴리펩타이드,
서열 2 또는 41의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 2 또는 41에 제시한 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및/또는
서열 1 및 40에 제시한 MTSP1의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
MTSP1은 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP3은,
서열 3에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드,
서열 3에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 4의 아미노산 205번 내지 437번으로서 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 4에 제시한 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%,83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및/또는
서열 3 및 4에 제시한 MTSP3의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
MTSP3은 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP4는,
서열 5, 7 또는 9에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드,
서열 5, 7 또는 9에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 6, 8 또는 10 중 어느 하나에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 6, 8 또는 10에 제시한 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및/또는
서열 7 내지 10에 제시한 MTSP4의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
MTSP4는 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP6은,
서열 11에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드,
서열 11에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 12에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 12에 제시한 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및/또는
서열 12에 제시한 MTSP6의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
MTSP6은 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다. 본원에서 서열 12의 MTSP6이 특히 관심대상이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP7은,
서열 13에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드,
서열 13에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 13에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 14에 제시한 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및/또는
서열 13에 제시한 MTSP7의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
MTSP7은 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP9는,
서열 17 또는 서열 42에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드,
서열 17 또는 서열 42에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 18 또는 43에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 18 또는 270에 제시한 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및/또는
서열 17에 제시한 MTSP9의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
MTSP9는 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP10은,
서열 44에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드,
서열 44에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 45에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 45에 제시한 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및/또는
서열 44에 제시한 MTSP7의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
MTSP10은 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다.
본원에서는 스플라이스 변이체 및 MTSP를 암호화하는 핵산 및 이의 도메인, 유도체 및 유사체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 MTSP10이 제공된다. 지모겐 형태의 MTSP10의 활성화에 의해 생성되는 N-말단과 기능적으로 등가인 N-말단을 갖는 일본쇄 프로테아제 도메인이 또한 제공된다. MTSP10의 프로테아제 도메인의 절단 부위는 아미노산 R과 아미노산 I 사이(R↓llGGT)(잔기 462번 내지 467번, 서열 45)에 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP12는,
서열 19 및 20,
서열 19에 제시한 뉴클레오타이드 서열 또는 서열 20에 제시한 아미노산 서열을 암호화하는 뉴클레오타이드를 포함하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드,
서열 19에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 20에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 또는 이의 촉매적 활성 부분,
서열 20에 제시한 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및/또는
서열 20에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 MTSP12의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
특히, 서열 19 및 20에 제시한 프로테아제 도메인을 갖는 MTSP12 폴리펩타이드가 제공된다. 상기 폴리펩타이드는 일본쇄 또는 다중쇄 폴리펩타이드이다. 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP12의 프로테아제 도메인은
서열 20에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 또는 서열 271에제시한 아미노산 서열을 포함하지 않는 이의 촉매적 활성 부분,
서열 272에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 또는 이의 촉매적 활성 단편,
서열 6의 아미노산 237번 내지 456번을 함유하는 폴리펩타이드, 서열 20의 아미노산 538번 내지 765번을 함유하는 폴리펩타이드 및 서열 20의 아미노산 861번 내지 1087번을 함유하나 서열 271의 아미노산 서열을 포함하지 않는 폴리펩타이드,
(a) 내지 (c)의 임의의 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 20에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하나 서열 271에 제시한 아미노산 서열을 암호화하지 않는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 20에 제시한 아미노산 서열과 약 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
(a) 내지 (e)의 폴리펩타이드의 아미노산 서열과 약 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
상기 어느 하나의 MTSP12를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열의 스플라이스변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물, 또는 이의 촉매적 활성 부분을 포함한다.
프로테아제 활성을 유지하는 이의 보다 작은 부분이 또한 제공된다. MTSP12는 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다. MTSP12는 또한 국제 PCT 출원 제WO 02/00860호(서열 38 및 97 참조)를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP20은,
서열 273에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드,
서열 273에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 273에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 274에 제시한 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및/또는
서열 273에 제시한 서열을 포함하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 MTSP20의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
MTSP20은 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP22는,
서열 275에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드,
서열 275에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 276에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 276에 제시한 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및/또는
서열 275에 제시한 MTSP22의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
MTSP22는 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 MTSP25는,
서열 269에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 폴리펩타이드,
서열 269에 제시한 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 270에 제시한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 270에 제시한 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및/또는
서열 269에 제시한 MTSP25의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
MTSP25는 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 사람 단백질은 다른 포유동물에서 발견되는 변이체가 아닌 한 모든 대립유전자 변이체 및 보존적 변이체를 포함하는, 사람의 게놈내에 존재하는 핵산에 의해 암호화되는 단백질이다.
플라스민 또는 전립선 특이적 항원(PSA)(또는 세포 표면-부착된 프로테아제가 아닌 기타 프로테아제)에 의해 실질적으로 절단되지 않는다는 것은 접합체의 절단에 대한 표적화된 세포 표면 막 프로테아제, 또는 전립선 특이적 항원(PSA) 또는 플라스미노겐의 프로테아제 도메인(또는 이의 촉매적 활성 형태)의 촉매적 활성 부분의 활성을 (각 효소에 대한 최적 조건하에) 비교하는 시험관내 검정으로 비교할 경우에 상대적 활성이 2:1, 3:1, 4:1, 5:1, 10:1, 50:1 또는 100:1 이상보다 큰 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 활성은 비 Kcat/Km(여기서, kcat은 특정 효소의 촉매적 전환률이고, Km은 기질의 결합에 대한 미카엘리스 상수이다)를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "MTSP의 프로테아제 도메인 또는 촉매적 활성 부분을 암호화하는 핵산"은 인용된 일본쇄 프로테아제 도메인 또는 이의 활성 부분만을 암호화하며 연속적인 서열로서 MTSP의 다른 인접하는 부분을 암호화하지 않는 핵산을 의미하는 것으로 이해되어야 한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, CUB 도메인은 보체 성분 C1r/C1s에서 단백질-단백질 상호작용을 매개하며 발생 과정에 관여하는 다양한 단백질에서 이미 동정된 모티프이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 지모겐은 자가활성화를 포함하여 활성화인자의 작용에 의해 단백질분해적 촉매로 전환되는 촉매적으로 불활성인 단백질(즉, 통상적으로, 필수적인 것은 아니나 활성 형태의 1% 미만이다)이다. 불활성은 당해분야의 숙련가가 효소의 활성 형태인 것으로 고려하는 것들 보다 덜 활성인 것을 의미한다. 활성화된 형태에 대한 지모겐의 활성화의 비는 효소마다 다르다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "질환 또는 장애"는 예를 들어, 감염 또는 유전적 결함으로부터 기인하며 식별가능한 증상에 의해 특성화되는 유기체내의 병리학적 상태를 의미한다. 본원에서 치료하고자 하는 질환으로는 세포-국재화된 또는 세포-부착된 프로테아제를 포함하는 세포 표면 프로테아제가 질환 또는 질환 진행에 관여하는 표적화된 세포 또는 조직과 관련되는 모든 질환이다. 이러한 관련성은 프로테아제가 질환에 관여하거나 상기 질환과 연루된 세포와 우연하게 관련되기 때문일 수 있다. 이들 질환은 본원에서 세포 표면 프로테아제 관련 질환으로서 지칭된다. 따라서, 이들 질환을 치료하기 위해서, 예를 들어, 면역 질환 치료의 경우에는 면역 세포 및 바이러스 질환 치료의 경우에는 바이러스 감염된 세포와 같은 질환과 관련된 세포에서 발현되는 세포 표면 프로테아제를 동정한다. 접합체는 선택된 프로테아제 의해 절단되기 위해 본원에서 기술한 바와 같이 디자인한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 신생물(신생물형성)은 비정상적인 신규 성장을 의미하므로 양성 또는 악성일 수 있는 종양과 동일한 의미이다. 과형성과는 다르게, 신생물 증식은 초기 자극의 부재하에서도 지속된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 신생물 질환은 종양 발생, 성장, 전이 및 진행을 포함하는 암과 관련된 임의의 질환을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 암은 임의의 유형의 악성 종양에 의해 유발되는 질환에 대한 일반적인 용어이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 악성은 종양에 대해 적용되는 경우 성장 조절 및 위치 조절(positional control)을 상실하고 전이하는 능력을 갖는 원발성 종양을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 엔도텔리아제는 트랜스막 도메인을 가지며 내피 세포의 표면에서 발현되고 활성적이며 프로테아제 도메인, 특히 세포외 프로테아제 도메인을 가지며, 일반적으로는 세린 프로테아제인, 사람 단백질을 포함하는 포유동물 단백질을 의미한다[참조: 미국 출원 제09/717,473호 및 국제 PCT 출원 제WO 01/36604]. 따라서, 예를 들어, 엔도텔리아제에 대한 인용은 엔도텔리아제 유전자 패밀리에 의해 암호화된 모든 단백질, 또는 임의의 다른 공급원으로부터 수득되거나 합성적으로 제조되거나 동일한 활성을 나타내는 등가의 분자를 포함한다. 엔도텔리아제 유전자 패밀리는 내피 세포에서 발현되거나 활성적인 트랜스막 프로테아제이다. 이들 프로테아제는 세린 프로테아제를 포함한다. 이들은 엔도텔리아제 1 및 2와 서열 상동성을 나타내는 프로테아제 도메인을 포함한다. 엔도텔리아제 1 및 2는 예를 들어, 약 40% 또는 45% 동일성을 나타낸다. 서열 상동성은 동일성을 최대화시키도록 정렬된 경우에 서열의 길이에 따라서 약 25% 이상, 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 또는 보다 큰 잔기수의 서열 동일성을 의미한다. 서열 상동성은 또한 핵산의 암호화 서열이 적어도 중간 정도의 엄격성 조건하에 또는 보다 밀접하게 관련되는 단백질의 경우에는 고도의 엄격성 조건하에 본원에서 제공되는 핵산 분자 또는 동일한 단백질을 암호화하지만 유전자 코드의 축퇴성으로 인해 서열이 상이한 핵산 분자에 하이브리드화하는지를 결정함으로써 평가한다. 또한, "엔도텔리아제"는 수득되는 폴리펩타이드가 변경되지 않은 폴리펩타이드의 단백질분해 활성의 1%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%을 보유하도록 하는, 표 1에 제시된 아미노산 치환과 같은 아미노산 치환을 갖는 엔도텔리아제를 포함한다. 아미노산의 적합한 보존적 치환은 당해 분야의 숙련자에게 공지되어져 있으며 수득되는 분자의 생물학적 활성을 변화시키지 않으면서 일반적으로 수행될 수 있다. 주지된 바와 같이, 당해 분야의 숙련가는 일반적으로 폴리펩타이드의 비필수 영역내의 단일 아미노산 치환이 실질적으로 생물학적 활성을 변경시키지 않음을 인지하고 있다[참조: Watson et al. Molecular Biology of the Gene, 4th Edition, 1987, The Bejacmin/Cummings Pub. Co., p.224]. 또한, "엔도텔리아제"의 정의에는 엔도텔리아제의 촉매적 활성 단편 또는 분비된 형태가 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 엔도텔리아제 1은
서열 21에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 21에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 22에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 22에 제시된 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%,83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및 또는
서열 22에 제시된 폴리펩타이드를 함유하는 단백질을 암호화하는 핵산 분자의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드 중 하나 이상 또는 모두, 또는 임의의 배합물을 포함한다.
엔도텔리아제 1은 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 인용되는 모든 경우에 엔도텔리아제 2는
서열 23 또는 25에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 23 또는 25에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 낮은, 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
서열 24 또는 26에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
서열 24 또는 26에 제시된 아미노산 서열과 약 40%, 60%, 70%, 75%, 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%,96%, 97%, 98% 또는 99% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및 또는
서열 23 또는 25에 제시된 핵산 분자의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드의 하나 이상 또는 모두 또는 임의의 배합물을 포함한다.
엔도텔리아제 2는 동물, 특히 포유동물 기원일 수 있으며 사람, 설치류, 닭, 반추 동물 및 기타 동물을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 전체 길이 지모겐 또는 이본쇄 활성화된 형태, 또는 이본쇄 활성화된 형태 또는 일본쇄 형태일 수 있는 프로테아제 도메인을 포함하는 이의 임의의 도메인이 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 엔도텔리아제의 프로테아제 도메인은 프로테아제 활성을 나타내는 세포외 부분인 엔도텔리아제의 폴리펩타이드 부분을 의미한다. 프로테아제 도메인은 프로테아제 활성에 필요한 일반적으로 50 또는 100개 이상의 적어도 최소한의 아미노산 수를 포함한다. 프로테아제 활성은 예를 들어, 폴리펩타이드가 프로테아제로서 작용하는 능력을 시험함으로써 실험적으로 평가할 수 있다. 시험 화합물 대신에 공지된 기질을 사용한다는 점을 제외하고는, 실시예에서 기술된 검정과 같은 검정을 사용하여 프로테아제 활성을 평가할 수 있다. 추가로, 프로테아제, 특히 세린 프로테아제는 특이적인 구조 및 서열 또는 모티프를 갖기 때문에, 상기 프로테아제 도메인은 상기 구조 및 서열 또는 모티프로 용이하게 확인할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 엔도텔리아제의 프로테아제 도메인의 부분은 엔도텔리아제 내부에 위치하거나 엔도텔리아제의 세포외 도메인이며 세린 단백질분해 활성을 나타내는 엔도텔리아제의 프로테아제 도메인의 부분을 의미한다. 따라서, 표준 검정으로 평가된 바와 같은 단백질분해 활성을 나타내는 세포외 도메인의 적어도 최소한 부분이다. 엔도텔리아제의 예시적 프로테아제 도메인은 서열 22에 제시하며 서열 24 및 26의 아미노산 321번 내지 688번 및 321번 내지 562번으로서 각각 제시한다. 프로테아제 활성을 보유하는 이의 보다 작은 부분이 고려된다. 프로테아제 도메인은 표면 루프에서 삽입 및 결실을 포함하여, 크기 및 구성이 다양하다. 상기 도메인은 활성 부위 트리아드, 1차 특이성 포켓, 옥시음이온 홀 및/또는 프로테아제의 세린 프로테아제 도메인의 다른 특성과 같은 하나 이상의 구조적 특징을 포함하여, 보존된 구조를 나타낸다. 따라서, 본원의 목적상, 프로테아제 도메인은 본원에서 정의된 바와 같이 엔도텔리아제의 일부분이나, 키모트립신 또는 트립신의 프로테아제 도메인에 대한 구조직 특징 및 서열의 유사성 또는 상동성 보유라는 측면에서 상동이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 상동성이란 약 25% 이상, 40%, 60%, 80%, 90%, 95% 또는 98% 이상의 핵산 서열 동일성을 의미한다. 서열 동일성에 의해서, 보존된 아미노산의 수가 표준 정렬 알고리듬 프로그램에 의해 결정되며, 각각의 공급자에 의해 확립된 디폴트 갭 페널티와 함께 사용된다. 또한, 상동성은 적어도 낮은 엄격성 조건하에 하이브리드화하며 도메인을 암호화하는 임의의 핵산을 포함하는 보존된 핵산 서열에 의해 평가할 수 있다. 유사하게, 핵산 서열 정렬 프로그램은 시판 중이다(DNAStar "MegAlign" 프로그램(Madison, WI) 및 University of Wisconsin Genetics Computer 그룹(UWG)의 "Gap" 프로그램(Madison, WI). 실질적으로 상동인 핵산 분자는 전형적으로 중간 정도의 엄격성 또는 높은 엄격성 조건하에서 관심대상의 핵산의 전체 길이를 따라서 하이브리드화할 수 있다. 또한, 핵산 분자의 하이브리드화시에 코돈 대신에 축퇴 코돈을 함유하는 핵산 분자가 고려된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 폴리펩타이드가 필수적으로 프로테아제 도메인으로 이루어진다는 기술은 폴리펩타이드의 엔도텔리아제 부분만이 프로테아제 도메인 또는 이의 촉매적 활성 부분임을 의미한다. 폴리펩타이드는 임의로 추가의 비-엔도텔리아제 유래의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 도메인은 분자, 예를 들어, 단백질 또는 핵산의 일부분으로서 분자의 다른 부분과 기능적으로 및/또는 기능적으로 구별된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 프로테아제의 활성 형태는 단백질 또는 펩타이드의 가수분해를 촉매하는 효소를 의미한다. 프로테아제에 대한 인용은 활성 및 지모겐 또는 기타 활성이 덜한 형태를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 핵산은 DNA, RNA 및 펩타이드 핵산(PNA)을 포함하는 이의 유사체 및 이들의 혼합물을 포함한다. 핵산은 일본쇄 또는 이본쇄일 수 있다. 임의로 형광 또는 방사성 표지 같은 검출가능한 표지로 임의로 표지된 프로브 또는 프라이머를 언급하는 경우, 일본쇄 분자가 고려된다. 상기 분자는 전형적으로, 이의 표적이 통계학적으로 유일하게 되는 길이이며 라이브러리를 프로빙 또는 프라이밍하기 위한 낮은 복제수(전형적으로 5개 미만, 일반적으로는 3개 미만)의 분자이다. 일반적으로, 프로브 또는 프라이머는 관심대상의 유전자에 상보적이거나 동일한 14, 16 또는 30개 이상의 연속적인 서열을 함유한다. 프로브 및 프라이머는 10, 20, 30, 50, 100개 이상의 핵산 길이일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 엔도텔리아제의 단편 또는 일부분을 암호화하는 핵산은 엔도텔리아제 단백질의 상기 언급한 단편 또는 일부분만을 암호화하며 엔도텔리아제의 다른 연속적 부분은 연속적 서열로서 암호화하지 않는 핵산을 의미한다.
본원에 사용되는 바와 같이, 이종 핵산은 이를 발현시킨 세포에 의해서는 생체내에서 정상적으로 생성되지 않거나 또는 전사, 해독 또는 기타 조절 가능한 생화학적 과정에 영향을 미침으로써 내인성 핵산(예: DNA)의 발현을 변화시키는 매개체를 매개하거나 암호화하는 RNA(DNA인 경우) 또는 단백질(RNA인 경우)을 암호화하거나 이의 정상 좌위와 상이한 좌위에 위치하는 핵산이다. 이종 핵산은 일반적으로 이를 도입시킬 세포에 대해 내인성이 아니며, 또 다른 세포로부터 수득되었거나 합성적으로 생성된다. 일반적으로, 반드시 필수적인 것은 아니나, 상기 핵산은 이를 발현시키는 세포에 의해 정상적으로 생성되지 않는 단백질 및 RNA를 암호화한다.
이종 핵산(예: DNA)은 외래 핵산(예: DNA)으로서 지칭될 수도 있다. 당해 분야의 숙련가가 발현되는 세포와 이종이거나 또는 이에 대해 외래로서 인식 또는 간주하는 어떠한 핵산(예: DNA)도 본원에서 이종 핵산으로서 포함되며, 이종 핵산은 내재적으로 발현되기도 하는 외인적으로 첨가된 핵산을 포함한다. 이종 핵산의 예는 추적 가능한 마커 단백질, 예를 들어, 약물 내성을 부여하는 단백질을 암호화하는 핵산; 치료학적으로 유효한 물질, 예를 들어, 항암제, 효소 및 호르몬을 암호화하는 핵산; 및 기타 유형의 단백질, 예를 들어, 항체를 암호화하는 DNA와 같은 핵산 및 RNA, 예를 들어, RNA 간섭(RNAi) 또는 기타 이본쇄 RNA 및 안티센스 RNA와 같은 핵산을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이종 핵산에 의해 암호화된 항체는 상기 이종 핵산을 도입시킨 세포의 표면에서 분비 또는 발현될 수 있다.
예를 들어, 핵산은 접합체내의 치료제 또는 진단제와 같은 표적화된 제제일 수 있다. 핵산은 기능의 상실을 생성시킴으로써 표적화된 유전자의 발현을 억제하는데 이용하는 RNA 간섭(RNAi)[참조: Chuang et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97:4985]을 위한 dsRNA 사용을 포함한다. 포유동물, 씨. 엘레간스(C. elegans), 드로소필라(Drosophila) 및 식물을 포함하는 유기체, 및 사람에서 유전자를 침묵시키기 위한 RNAi의 사용과 관련된 방법은 공지되어 있다[참조: Fire et al. (1998) Nature 391:806-811 Fire (1999) Trends Genet. 15:358-363; Sharp (2001) Genes Dev. 15:485-490; Hammond, et al. (2001) Nature Rev. Genet.2:110-1119; Tuschl (2001) Chem. Biochem. 2:239-245; Hamilton et al. (1999) Science 286:950-952; Hammond et al. (2000) Nature 404:293-296; Zamore et al. (2000) Cell 101:25-33; Bernstein et al. (2001) Nature 409: 363-366; Elbashir et al. (2001) Genes Dev. 15:188-200; Elbashir et al. (2001) Nature 411:494-498; 국제 PCT 출원 제WO 01/29058호; 국제 PCT 출원 제WO 99/32619호]. 적절한 서열을 선택함으로써, dsRNA의 발현이 표적화된 유전자 생성물을 암호화하는 내인성 mRNA의 축적을 방해할 수 있다. 약 21개 이상의 뉴클레오타이드를 포함하고 표적화된 유전자 생성물을 암호화하는 핵산에 대해 선택적인(즉, 이의 표적이 고유한) 영역을 사용하여 RNAi를 제조한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 유전자 요법은 이종 핵산(예: DNA)을, 이러한 치료요법이 요망되는 질환 또는 장애를 앓는 포유동물, 특히 사람의 특정 세포, 즉 표적 세포 내로 전달하는 것을 포함한다. 상기 핵산 분자는 세포 표면 단백질 절단 부위를 통해 연결된 접합체내에 포함된다. 핵산(예: DNA)은 이종 핵산(예: DNA)이 발현되고 이에 의해 암호화된 치료학적 생성물이 생성되도록 하는 방식으로 선택된 표적 세포 내로 도입시킨다. 대안으로, 이종 핵산(예: DNA)은 치료학적 생성물을 암호화하는 DNA의 발현을 일부 방식으로 매개할 수 있거나, 치료학적 생성물의 발현을 직접적으로 또는 간접적으로 일부 방식으로 매개하는 생성물(예: 펩타이드 또는 RNA)을 암호화할 수 있다. 유전자 요법은 또한, 결함성 유전자를 대체시키거나 또는 핵산이 도입되는 세포 또는 포유동물에 의해 생성된 유전자 생성물을 보충하는 유전자 생성물을 암호화하는 핵산을 전달하는데 사용될 수도 있다. 도입된 핵산은 포유동물 숙주 내에서는 정상적으로 생성되지 않거나 또는 치료학적 유효량으로 또는 치료학적으로 유용한 시간에 생성되지 않는 치료학적 화합물, 예를 들어, 이의 성장 인자 억제제, 또는 종양 괴사 인자 또는 이의 억제제, 예를 들어, 이에 대한 수용체를 암호화할 수 있다. 치료학적 생성물을 암호화하는 상기 이종 핵산(예: DNA)은 생성물 또는 이의 발현을 증강 또는 변경시키기 위해, 질환에 걸린 숙주의 세포 내로 도입하기에 앞서 변형시킬 수 있다. 유전자 요법은 또한 유전자 발현의 억제제 또는 저해제 또는 기타 조절제의 전달을 포함할 수 있다.본원의 접합체는 유전자 요법용 핵산과 같은 생성물을 전달하는데 사용할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 유전자 요법을 위한 치료학적으로 유효한 생성물은 이종 핵산을 숙주내로 도입할 경우에 상기 이종 핵산, 전형적으로는 DNA에 의해 암호화되는 생성물로서, 발현되어 선천성 또는 후천성 질환의 증상들을 개선 또는 제거하거나 질환을 치유하는 생성물이다. 또한, RNAi 및 안티센스와 같은 생물학적 활성 핵산 분자가 포함된다.
본원에 사용되는 바와 같이, 안티센스 올리고뉴클레오티드와 관련하여, RNA의 적어도 일부분에 상보적인 서열이란, 일반적으로 중간 정도의 또는 높은 엄격성 조건하에 RNA와 하이브리드화하여, 안정한 이중체를 형성하기에 충분히 상보적인 서열을 의미하고, 이본쇄 SP 안티센스 핵산의 경우에는, 상기 이중체 DNA의 일본쇄(dsDNA)를 시험할 수 있거나 또는 삼중체 형성을 평가할 수 있다. 하이브리드화하는 능력은 상보성 정도 및 안티센스 핵산의 길이에 따라 좌우된다. 일반적으로, 하이브리드화하는 핵산 길이가 길수록, SP 암호화 RNA와의 염기 불일치가 보다 많아지고, 이는 안정한 이중체(또는 삼중체)를 여전히 형성하고 함유할 수 있다. 당해 분야의 숙련가는 하이브리드화된 복합체의 융점을 측정하는 표준 과정을 사용하여 허용될 수 있는 불일치 정도를 확인할 수 있다.
아미노산 치환은 어떠한 SP 및 이의 프로테아제 도메인에서도 이루어지거나 발생할 수 있다. 아미노산 치환은 단백질분해 활성을 제거하지 않는, 하기 표 1에 제시한 바와 같은 보존적 치환을 포함한다. 본원에 기술하는 바와 같이, 단백질의 특성을 변화시키는 치환, 예를 들어, 절단 부위 또는 기타 부위의 제거가 또한 고려되며, 상기 치환은 일반적으로 비-보존적이지만, 당해 분야의 숙련가에 의해 용이하게 달성될 수 있다.
아미노산의 적합한 보존적 치환은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있고, 일반적으로, 수득되는 분자의 생물학적 활성, 예를 들어, 효소 활성을 변화시키지 않으면서 수행할 수 있다. 또한, SP의 촉매적 활성 단편, 특히 일본쇄 프로테아제 부분이 상기 정의 내에 포함된다. 보존적 아미노산 치환은 예를 들어, 다음과 같은 표 1에 제시된 것에 따라서 이루어진다:
Ala(A) Gly; Ser
Arg(R) Lys, Orn
Asn(N) Gln; His
Asp(D) Glu
Cys(C) Ser
Gln(Q) Asn
Glu(E) Asp
Gly(G) Ala; Pro
HIs(H) Asn; Gln
Ile(I) Leu; Val; Nle; Met
Leu(L) Ile; Val; Nle; Met;
Lys(K) Arg; Gln; Glu
Met(M) Leu; Tyr; Ile; Nle
Phe(F) Met; Leu; Tyr; Trp
Ser(S) Thr
Thr(T) Ser
Trp(W) Tyr; Phe
Tyr(Y) Trp; Phe
Val(V) Ile; Leu; Nle; Met
기타 치환이 또한 허용될 수 있으며, 실험적으로 또는 공지된 보존적 치환에 따라서 결정할 수 있다. 예를 들어, 서열내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 기능적 등가물로서 작용하여 침묵 변경을 초래하는 유사한 극성의 또 다른 아미노산으로 치환될 수 있다. 서열내의 아미노산에 대한 치환은 상기 아미노산이 속하는 부류의 다른 구성원 중에서 선택될 수 있다. 예를 들어, 비극성(소수성) 아미노산으로는 알라닌, 류신, 이소류신, 발린, 프로릴, 페닐알라닌, 트립토판 및 메티오닌이 포함된다. 극성 중성 아미노산으로는 글리신, 세린, 트레오닌, 시스테인, 티로신, 아스파라긴 및 글루타민이 포함된다. 양으로 하전된(염기성) 아미노산으로는 아르기닌, 라이신 및 히스티딘이 포함된다. 음으로 하전된(산성) 아미노산으로는 아르파르트산 및 글루탐산이 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에 나타난 다양한 아미노산 서열에서 발생되는 아미노산은 이의 익히 공지된 3 문자 또는 1 문자 약어에 따라 확인된다. 다양한 DNA 단편에서 발생되는 뉴클레오타이드는 당해 분야에서 통상적으로 사용되는 표준 단일-문자 명명법에 따라 명명된다. 다른 약어로는 호모아르기닌에 대한 hR 또는 hArg; 호모티로신에 대한 hY 또는 hTyr; 사이클로헥실아민에 대한 Cha; 4-아미노메틸페닐알라닌에 대한 Amf; 2-(4,6-디메틸피리미디닐)라이신에 대한 DPL; N'-(2-이미다졸릴)라이신에 대한 (이미다졸릴)K; 0-디메틸포스포티로신에 대한 Me2PO3-Y; O-메틸티로신에 대한 O-Me-Y; 테트라하이드로-3-이소퀴놀린 카복실산에 대한 TIC; 2-케토-3-아미노-5-메틸-헥산에 대한 MeL; 1,3-디아미노프로판에 대한 DAP; 트리플루오로아세트산에 대한 TFA; 아세트산에 대한 AA가 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 스플라이스 변이체는 하나 이상의 mRNA 유형을 초래하는 게놈성 DNA의 1차 전사체의 상이한 프로세싱에 의해 생성된 변이체를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에 기재된 뉴클레오타이드 서열에 기초하는 프로브 또는 프라이머는 10개 이상, 14개, 일반적으로 16개 또는 30개 이상 또는 100개의 연속적인 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 안티센스 폴리뉴클레오타이드는 mRNA 또는 이본쇄 DNA의 센스 쇄에 대해 상보적인 뉴클레오타이드 염기의 합성 서열을 의미한다. 적합한 조건하에서 센스 및 안티센스 폴리뉴클레오타이드의 혼합물은 두 분자의 결합 또는 하이브리드화를 초래한다. 이러한 폴리뉴클레오타이드가 mRNA에 결합(이와 하이브리드화)하는 경우, 단백질 합성(해독)의 억제가 일어난다. 이러한 폴리뉴클레오타이드가 이본쇄 DNA에 결합하는 경우, RNA 합성(전사)의 억제가 일어난다. 해독 및/또는 전사의 결과적인 억제는 센스 쇄에 의해 암호화되는 단백질의 합성 억제를 초래한다. 안티센스 핵산 분자는 전형적으로, 관심대상인 유전자를 암호화하는 핵산, 예를 들어, SP의 일본쇄 프로테아제 도메인을 암호화하는 핵산의 암호화 부분에 상보적인, 일반적으로 5개 이상의 연속적인 뉴클레오타이드, 흔히 14, 16 또는 30개 이상의 연속적인 뉴클레오타이드 또는 변형된 뉴클레오타이드인 표적 핵산에 특이적으로 결합하기 위한 충분한 수의 뉴클레오타이드를 함유한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 어레이(array)는 3개 이상의 구성원을 함유하는, 항체와 같은 요소의 집합을 의미한다. 주소지정가능한(addressable) 어레이는 전형적으로는 고체상 지지체 상에 위치시킴으로써 어레이의 구성원들이 확인가능한 어레이이다. 따라서, 일반적으로, 어레이의 구성원들은 고체상의 표면상에서 불연속적인 확인가능한 좌위에 고정될 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 항체는 항체의 특이적인 결합 능력을 보유하는 임의의 이의 유도체를 포함하여, 천연적이든 부분적 또는 전체적으로 합성되어 생산된 것이든 간에, 면역글로불린을 의미한다. 따라서, 항체는 면역글로불린 결합 도메인에 상동이거나 실질적으로 상동인 결합 도메인을 갖는 임의의 단백질을 포함한다. 항체는 IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE를 포함하여, 임의의 면역글로불린 청구물의 구성원을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 항체 단편은 전체 길이 항체의 특이적인 결합 능력의 적어도 일부를 보유하는, 전체 길이 보다 짧은 항체의 임의의 유도체를 의미한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab)2, 일본쇄 Fvs(scFV), FV, dsFV 디아보디(diabody) 및 Fd 단편을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 상기 단편은 이황화 브릿지에 의해 함께 결합된 다중 쇄를 포함할 수 있다. 항체 단편은 일반적으로 약 50개 이상의 아미노산 및 전형적으로는 200개 이상의 아미노산을 함유한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, Fv 항체 단편은 비공유결합적 상호작용으로 연결된 하나의 가변성 중쇄(VH) 및 하나의 가변성 경쇄로 이루어진다.
본원에서 사용되는 바와 같이, dsFV는 VH-VL쌍을 안정화시키는 유전공학적으로 조작된 분자내 이황화 결합을 갖는 Fv를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, F(ab)2단편은 pH 4.0 내지 4.5에서 펩신을 사용한 면역글로불린의 절단으로부터 기인하는 항체 단편이며, 이는 재조합적으로 발현되어 등가 단편을 생산할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, Fab 단편은 파파인을 사용한 면역글로불린의 절단으로부터 기인하는 항체 단편이며, 이는 재조합적으로 발현되어 등가 단편을 생산할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, scFV는 임의의 순서로 폴리펩타이드 링커에 의해 공유결합적으로 연결된 가변성 경쇄(VL) 및 가변성 중쇄(VH)를 함유하는 항체 단편을 의미한다. 상기 링커는 2개의 가변성 도메인이 실질적인 방해 없이 가교되는 길이이다. 예시적 링커는 용해도를 증가시키기 위해서 전체적으로 특정 Glu 또는 Lys 잔기가 분산되어 있는 (Gly-Ser)n잔기를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 사람화된 항체는 사람에의 투여가 면역 반응을 야기하지 않도록 사람의 아미노산 서열을 포함하도록 변형시킨 항체이다. 상기 항체를 제조하는 방법은 공지되어져 있다. 예를 들어, 이러한 항체를 제조하기 위해, 모노클로날 항체를 발현하는 하이브리도마 또는 기타 원핵 또는 진핵 세포, 예를 들어, 이. 콜라이 또는 CHO 세포를 재조합 핵산 기술로 변형시켜 비-가변성 영역의 아미노산 조성이 사람 항체에 기초하는 항체를 발현시킨다. 컴퓨터 프로그램을 상기 비-가변성 영역을 동정하도록 디자인한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 디아보디(diabody)는 이량체 scFV이며, 디아보디는 전형적으로 scFV 보다 더 짧은 펩타이드 링커를 가지며 이들은 일반적으로 이량체화된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 재조합 DNA 방법을 사용한 재조합 수단에 의한 제조는 클로닝된 DNA에 의해 암호화되는 단백질을 발현시키기 위해 분자 생물학의 익히 공지된 방법을 사용하는 것을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같이, 평가라는 용어는 샘플 내에 존재하는 SP 또는 이의 도메인의 활성에 대한 절대치를 수득하고, 또한 이러한 활성 수준의 지표인, 지수, 비율, 퍼센트, 가시값 또는 기타 값을 수득한다는 점에서 정량적 및 정성적으로 결정하는 것을 의미한다. 평가는 직접적 또는 간접적일 수 있으며, 실질적으로 검출된 화학 종은 물론 단백질분해 생성물 그 자체일 필요는 없지만, 예를 들어, 이의 유도체 또는 몇몇 추가 물질일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 생물학적 활성은 화합물, 조성물 또는 기타 혼합물을 생체내 투여시 야기되는 생리학적 반응 또는 화합물의 생체내 활성을 지칭한다. 따라서, 생물학적 활성은 상기 화합물, 조성물 및 혼합물의 치료 효과 및 약제학적 활성을 포함한다. 생물학적 활성은 이러한 활성을 시험 또는 사용하도록 디자인된 시험관내 시스템에서 관찰될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 배합물은 2개 또는 보다 많은 항목 사이에서의 임의의 연합을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 유체는 유동할 수 있는 임의의 조성물을 의미한다. 따라서, 유체는 반-고체, 페이스트, 용액, 수성 혼합물, 겔, 로션, 크림 및 다른 상기 조성물의 형태인 조성물을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 특정 질환을 치료하기 위한 화합물의 유효량은 질환과 관련된 증상을 개선시키거나, 특정 방식으로 감소시키기에 충분한 양을의미한다. 상기 양은 단일 투여량으로 투여될 수 있거나, 상기 양이 유효하게 되는 섭생에 따라서 투여될 수 있다. 상기 양은 질환을 치유할 수 있지만, 전형적으로는 상기 질환의 증상의 개선을 위해서 투여된다. 반복적인 투여가 증상의 바람직한 개선을 달성하는데 필요할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 2개의 핵산 서열을 인용하는 경우, 등가물(equivalent)은 2개의 해당 서열이 동일한 아미노산 서열 또는 등가의 단백질을 암호화한다는 것을 의미한다. 등가물이 2개의 단백질 또는 펩타이드를 인용하기 위해 사용되는 경우, 이는 2개의 단백질 또는 펩타이드가 상기 단백질 또는 펩타이드의 활성 또는 기능을 실질적으로 변화시키지 않는(즉, 약 1% 이상의 활성을 유지하는) 보존적 아미노산 치환(참조: 상기 표 1)만을 갖는 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 갖는다는 것을 의미한다. 등가물이 특성을 인용하는 경우, 상기 특성은 동일한 범위(예를 들어, 2개의 펩타이드가 동일한 유형의 효소적 활성의 상이한 정도를 나타낼 수 있다)으로 존재할 필요는 없지만, 상기 활성은 일반적으로는 실질적으로 동일하다. 상보성은 2개의 뉴클레오타이드 서열을 인용하는 경우, 2개의 뉴클레오타이드 서열이 대응하는 뉴클레오타이드 사이에서 전형적으로 25% 미만, 흔히 15% 미만 또는 심지어 5% 미만의 불일치 또는 불일치가 전혀 없이 하이브리드화할 수 있다는 것을 의미한다. 일반적으로, 상기 두 분자는 높은 엄격성 조건하에서 하이브리드화한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 바람직하지 않고/않거나 조절되지 않은 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는 방법은 바람직하지 않고/않거나 조절되지 않은 혈관신생과 관련된 질환 또는 장애의 증상이 개선, 감소, 경감 또는 예방되거나, 이러한 증상의 완화 상태가 제공 또는 유지되는 것을 의미한다. 이는 또한 병리학적 혈관신생의 특징이 치료에 의해 제거, 감소 또는 예방되는 것을 의미한다. 병리학적 혈관신생의 특징의 비-제한적 예로는 기저막 및 내피 세포의 근접 세포외 매트릭스의 조절되지 않은 분해; 내피 세포의 새로운 기능성 모세혈관 내로의 이동, 분할 및 조직화 및 상기 기능성 모세혈관의 유지가 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 작동적으로 연결된 또는 작동적으로 결합된은 DNA와 프로모터, 인해서, 전사 및 해독 종결 부위, 및 다른 시그날 서열과 같은 조절성 및 이펙터 서열의 기능적 상관관계를 의미한다. 예를 들어, DNA의 프로모터에 대한 작동적 연결은 상기 DNA의 전사가 상기 DNA를 특이적으로 인식하고, 이에 결합하여 전사시키는 RNA 폴리머라제에 의해 상기 프로모터로부터 개시되도록 하는 DNA와 프로모터 사이의 물리적 및 기능적 상관관계를 의미한다. 발현 및/또는 시험관내 전사를 최적화시키기 위해서, 전사 및 해독 수준에서, 발현을 방해하거나 감소시킬 수 있는 여분의 잠재적인 부적합한 대안적 해독 개시(즉, 출발) 코돈 또는 다른 서열을 제거하기 위해서 클론의 5' 비해독 부분을 제거, 첨가 또는 변형하는 것이 필요할 수 있다. 대안으로, 컨센서스 리보좀 결합 부위[참조: Kozak J. Biol. Chem. 266: 19867-19870 (1991)]가 출발 코돈의 5'에 밀접하게 삽입될 수 있으며 발현을 증강시킬 수 있다. 이러한 변형의 바람직함(또는 필요성)은 실험적으로 결정될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 프로모터 영역 또는 프로모터 요소는 이들이작동적으로 연결된 DNA 또는 RNA의 전사를 조절하는 DNA 또는 RNA의 분절을 의미한다. 프로모터 영역은 RNA 폴리머라제 인식, 결합 및 전사 개시에 충분한 특정 서열을 포함한다. 프로모터 영역의 상기 부분이 프로모터로서 지칭된다. 또한, 프로모터 영역은 RNA 폴리머라제의 상기 인식, 결합 및 전사 개시 활성을 조절하는 서열을 포함한다. 상기 서열들은 시스 작용성이거나 트랜스 작용성 인자에 반응성일 수 있다. 조절 특성에 따라서, 프로모터는 구성성이거나 조절성일 수 있다. 원핵생물에서 사용하고자 고려된 예시적인 프로모터로는 박테리오파아지 T7 및 T3 프로모터가 포함된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 샘플은 분석물 분석이 요망되는 분석물을 함유할 수 있는 모든 것을 의미한다. 상기 샘플은 생물학적 유체 또는 생물학적 조직 같은 생물학적 샘플일 수 있다. 생물학적 유체의 예는 뇨, 혈액, 혈장, 혈청, 타액, 정액, 변, 객담, 뇌척수액, 눈물, 점액 또는 양수 등을 포함한다. 생물학적 조직은 사람, 동물, 식물, 세균, 진균 또는 바이러스성 구조의 구조 물질 중 하나를 형성하는 세포내 물질과의 일반적으로 특정 종류의 세포의 응집체로서, 결합 조직, 상피 조직, 근육 조직 및 신경 조직을 포함한다. 생물학적 조직의 예는 또한, 기관, 종양, 림프절, 동맥 및 개개의 세포(들)을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 명시한 엄격성 조건하의 하이브리드화는 2개의 일본쇄 DNA 단편 사이에 형성된 하이브리드의 안정성을 기술하는데 사용되며 이러한 하이브리드가 세척된 다음, 당해 세척 단계의 엄격성 조건보다 덜 엄격하거나 동등한 조건하에 어닐링되는 이온 강도 및 온도의 조건을 의미한다. 전형적으로,높은, 중간 정도의 및 낮은 엄격성은 다음 조건 또는 이와 동등한 조건을 포함한다:
1) 높은 엄격성: 0.1 x SSPE, 0.1% SDS, 65℃
2) 중간 정도의 엄격성: 0.2 x SSPE 또는 SSC, 0.1% SDS, 50℃
3) 낮은 엄격성: 1.0 x SSPE 또는 SSC, 0.1% SDS, 50℃.
등가 조건은 수득되는 하이브리드에서 실질적으로 동일한 불일치율(%)을 위해 선택하는 조건을 의미한다. 포름아미드, 피콜(Ficoll) 및 덴하르트(Denhardt) 용액과 같은 성분의 첨가는 하이브리드화가 수행되는 조건 및 반응 속도와 같은 파라미터에 영향을 미친다. 따라서, 5 x SSC, 20% 포름아미드 속에서 42℃에서의 하이브리드화는 낮은 엄격성 조건하에 하이브리드화하는 상기 기술한 조건과 실질적으로 동일하다. SSPE, SSC 및 덴하르트 용액 및 탈이온화된 포름아미드의 제조에 대한 비결은 예를 들어, 문헌[참조: Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Chapter 3; Sambrook et al., vol.3, p.B.13; 또한 흔히 사용되는 실험실 용액을 기술하고 있는 다수의 카탈로그]에 기술되어 있다. 등가의 엄격성은 다른 완충액, 염 및 온도를 사용하여 달성될 수 있다는 것을 이해할 것이다.
실질적으로 동일한 또는 유사한이란 용어는 관련 분야의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이 내용에 따라 다르며 일반적으로 40%, 80%, 90% 95% 또는 95% 이상 동일성을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 생성물과 실질적으로 동일한은 관심대상의 특성이 충분히 변화되지 않아서 실질적으로 동일한 생성물이 상기 생성물을 대신하여 사용될 수 있는 정도로 충분히 유사한 것을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 표적 세포는 세포 표면 프로테아제를 발현하는 세포를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 제공되는 화합물을 포함하는 시험 물질은 세포 표면 단백질 또는 세포 표면-부착된 단백질 또는 이의 도메인과의 상호작용 또는 이에 대한 효과가 본원의 방법으로 측정되는, 화학적으로 정의된 화합물(예: 유기 분자, 무기 분자, 유기/무기 분자, 단백질, 펩타이드, 핵산, 올리고뉴클레오타이드, 지질, 폴리사카라이드, 사카라이드 또는 하이브리드, 특히 당단백질과 같은 분자 등) 또는 화합물들의 혼합물(예: 시험 화합물의 라이브러리, 천연 추출물 또는 배양 상청액 등)을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 치료제, 치료 섭생, 방사선보호제, 화학치료제란 용어들은 당해 분야의 숙련가에게 공지된 백신을 포함하는 통상적인 약물 및 약물 치료요법을 의미한다. 방사선치료제는 당해 분야에 공지되어져 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 벡터(또는 플라스미드)는 이의 발현 및/또는 복제를 위해서 세포내로 이종 DNA를 도입시키는데 사용되는 별개의 요소들이다. 상기 벡터는 전형적으로 에피좀으로서 유지되나, 게놈의 염색체내로 유전자 또는 이의 일부를 통합시키도록 디자인될 수 있다. 또한, 효모 인공 염색체 또는 포유동물 인공 염색체 같은 인공 염색체인 벡터가 고려된다. 이러한 비히클의 선택 및 사용은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다. 발현 벡터는 DNA 단편의 발현에영향을 미칠 수 있는 프로모터 영역 같은 조절성 서열에 작동적으로 연결된 이러한 DNA를 발현시킬 수 있는 벡터를 포함한다. 따라서, 발현 벡터는 적합한 숙주 세포내로 도입되는 경우 클로닝된 DNA의 발현을 초래하는 플라스미드, 파아지, 재조합 바이러스 또는 기타 벡터 같은 재조합 DNA 또는 RNA 작제물을 의미한다. 적절한 발현 벡터는 당해 분야의 숙련가에게 익히 공지되어져 있으며 진핵 세포 및/또는 원핵 세포내에서 복제가능한 벡터 및 에피좀으로서 유지되는 벡터 또는 숙주 세포 게놈내로 통합되는 백터를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 화학적으로 안정한은 화합물이 약제학적 사용을 위해 제형화되기에 충분히 안정한 것을 의미한다. 이러한 화학적 안정성은 당해 분야의 숙련가에 익히 공지되어 있으며 익히 공지된 통상의 방법을 사용하여 측정할 수 있다. 소정의 화합물이 약제학적 사용을 위해 제형화하기에 충분한지의 여부는 목적하는 제형의 유형과 투여경로, 치료하고자 하는 질환 및 약제학적 제형의 제조방법을 포함하지만 이에 제한되지 않은 다수의 요인에 따라 좌우된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 아미노산의 측쇄의 "기능적 등가물"은 천연 측쇄와 실질적으로 동일한 방식으로 기능하여 실질적으로 동일한 결과(예: 세포 표면 프로테아제에 대한 기질)를 초래하는 그룹 또는 잔기이다. 예를 들어, 아르기닌의 측쇄의 기능적 등가물은 호모아르기닌, 구아니디노아미노프로필, 구아니디노아미노에틸, (Me)2아르기닌 측쇄, (Et)2아르기닌 측쇄, (4-아미노메틸)페닐메틸, 4-아미디노페닐메틸, 4-구아니디노페닐메틸 또는 입체형태적으로 속박된 아르기닌 측쇄 유사체, 예를 들어,(여기서, x는 0 또는 1이다)[참조: Webb et al. (1991) J. Org. Chem. 56:3009], 또는 입체적으로 속박된 아르기닌 측쇄 유사체, 예를 들어,,,,또는(여기서, d는 0 내지 5 또는 1 내지 3의 정수이고, W는 N 또는 CH이거나 상기 그룹들의 일치환 또는 다치환된 N-알킬 유도체이며, 알킬은 특정 양태에서 메틸과 같은 저급 알킬이다)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 화합물의 약제학적으로 허용되는 유도체는 화합물의 염, 에스테르, 에놀 에테르, 에놀 에스테르, 산, 염기, 용매화물, 수화물 또는 전구약물을 포함한다. 이러한 유도체들은 당해 분야의 숙련가가 이러한 유도체화용으로 공지된 방법을 사용하여 용이하게 제조할 수 있다. 생성된 화합물은 실질적 독성 효과없이 동물 또는 사람에게 투여할 수 있으며, 약제학적으로 활성이거나 전구약물이다. 약제학적으로 허용되는 염은 N,N'-디벤질에틸렌디아민, 클로로프로카인, 클로린, 암모니아, 디에탄올아민 및 기타 하이드록시알킬아민, 에틸렌디아민, N-메틸글루카민, 프로카인, N-벤질펜에틸아민, 1-파라-클로로벤질-2-피롤리딘-1'-일메틸-벤즈이미다졸, 디에틸아민 및 기타 알킬아민, 피페라진 및 트리스(하이드록시-메틸)아미노메탄을 포함하나 이에 제한되지 않는 아민 염; 리튬, 칼륨및 나트륨을 포함하나 이에 제한되지 않는 알칼리 금속 염; 바륨, 칼슘 및 마그네슘을 포함하나 이에 제한되지 않는 알칼리 토금속 염; 아연을 포함하나 이에 제한되지 않는 전이 금속 염 및 인산수소나트륨 및 인산이나트륨을 포함하나 이에 제한되지 않는 기타 금속 염을 포함하나 이에 제한되지 않으며, 또한 하이드로클로라이드 및 설페이트를 포함하나 이에 제한되지 않는 무기산의 염 및 아세테이트, 락테이트, 말레이트, 타르트레이트, 시트레이트, 아스코르베이트, 석시네이트, 부티레이트, 발레레이트 및 푸마레이트를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 약제학적으로 허용되는 에스테르는 카복시산, 인산, 포스핀산, 설폰산, 설핀산 및 보론산을 포함하나 이에 제한되지 않는 산성 그룹의 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 사이클로알킬 및 헤테로사이클릴 에스테르를 포함하나 이에 제한되지 않는 유기산의 염을 포함한다. 약제학적으로 허용되는 에놀 에테르는 화학식 C=C(OR)(여기서, R은 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴이다)의 유도체를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 약제학적으로 허용되는 에놀 에스테는 화학식 C=C(OC(O)R)(여기서, R은 수소, 알킬, 알케닐, 알키닐, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 사이클로알킬 또는 헤테로사이클릴이다)의 유도체를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 약제학적으로 허용되는 용매화물 및 수화물은 화합물과 하나 이상의 용매 또는 물 분자, 일반적으로 1개 내지 약 100개, 전형적으로 1개 내지 약 10개, 예를 들어, 1개 내지 약 2개, 3개 또는 4개의 용매 또는 물 분자와의 착체이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 치료는 상태, 질환 또는 장애의 증상이 개선되거나 그밖에 유리하게 변화되는 임의의 수단을 의미한다. 치료는 또한 본원의 조성물의 임의의 약제학적 사용, 예를 들어, 암을 치료하기 위한 사용을 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 특정 약제학적 조성물의 투여에 의한 특정 질환의 증상의 개선은 영구적 또는 임시적이든지, 지속적 또는 일시적이든지의 여부와 관계없이 상기 조성물의 투여에 기인하거나 또는 이와 연관될 수 있는 모든 증상 저하를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 전구약물은 생체내 투여시 생물학적으로, 약제학적으로 또는 치료학적으로 활성 형태의 화합물로 대사되거나 또는 전환되는 화합물이다. 전구약물을 생산하기 위해서, 약제학적으로 활성인 화합물은 활성 화합물이 대사적 과정에 의해 재생되도록 변형된다. 상기 전구약물은 약물의 대사적 안정성 또는 수송 특성을 변화시키거나 부작용 또는 독성을 차폐하거나 약물의 풍미를 개선시키거나 약물의 다른 특징 또는 특성을 변화시키기 위해서 디자인될 수 있다. 생체내에서의 약동학적 과정 및 약제 대사에 대한 지식으로 인해, 당해 분야의 숙련가는 일단 약제학적 활성 화합물이 공지되면, 상기 화합물의 전구약물을 디자인할 수 있다[참조: Nogrady (1985) Medicinal Chemistry A Biochemical Approach, Oxford University Press, New York, pages 388-392].
본원에서 제공되는 접합체가 키랄 중심을 함유할 수 있음을 이해할 것이다. 상기 키랄 중심은 (R) 또는 (S) 배위일 수 있거나 이들의 혼합물일 수 있다. 따라서, 본원에서 제공되는 화합물은 에난티오머적으로 순수하거나 입체이성체 또는 부분입체이성체 혼합물일 수 있다. 아미노산 잔기의 경우, 상기 잔기는 L형 또는 D형일 수 있다. 천연 아미노산 잔기의 배위는 일반적으로 L형이다. 달리 명시하지 않는다면, 잔기는 L형이다. 본원에서 제공되는 화합물의 키랄 중심이 생체내에서 에피머화될 수 있음은 이해할 것이다. 따라서, 당해 분야의 숙련가는 생체내에서 에피머화되는 화합물의 경우에 (R) 형태인 화합물의 투여가 (S) 형태인 화합물의 투여와 동등함을 인식할 것이다.
본원에서 제공되는 접합체는 표적화된 세포 또는 조직 또는 이의 환경에서 활성 형태로 최종적으로 전환되는 불활성 형태인 치료제를 포함하기 때문에 전구약물이다. 표적화된 프로테아제에 노출시, 생물학적으로, 약제학적으로 또는 치료학적으로 활성 형태의 화합물 또는 생물학적으로, 약제학적으로 또는 치료학적으로 활성 형태의 화합물로 추가로 대사될 수 있는 유도체가 방출된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "실질적으로 순수한"이란 이러한 순도를 평가하기 위해서 당해 분야의 숙련가에 의해 사용되는 박층 크로마토그래피(TLC), 겔 전기영동 및 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 같은 표준 분석 방법으로 결정된 바와 같이 용이하게 검출가능한 불순물이 없는 것으로 보이는 정도로 충분히 균질한 것 또는 추가의 정제가 의도된 목적상 물질의 효소적 및 생물학적 활성과 같은 물리적 및 화학적 특성을 검출가능하게 변화시킬 수 없는 정도로 충분히 순수한 것을 의미한다. 실질적으로 화학적으로 순수한 화합물을 제조하기 위해서 화합물을 정제하는 방법은 당해 분야에 공지되어 있다. 그러나, 실질적으로 화학적으로 순수한 화합물은 입체이성체의 혼합물일 수 있다. 상기 경우에, 추가의 정제는 상기화합물의 특정 활성을 증가시킬 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 펩타이드성 기질은 펩타이드 모사체 및 펩타이드 결합 대용물을 포함하는 펩타이드와 같은 펩타이드 및 분자를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 프로테아제 기질의 특이적 하위부위: Pn...P3-P2-P1↓P1'-P2'-P3'...Pn'를 지칭하기 위해 통상의 용어[참조: Schecter et al. (1967) Biochem. Biophys. Res. Commun. 27:157-162]가 사용된다. 기질의 절단성 결합(즉, 절단 부위)은 화살표로 표시한다. 상기 결합의 N-말단 위치는 프라이밍되지 않은 위치를 의미한다. 이어서 하위부위는 절단성 결합으로부터 이의 거리에 기초하여 번호로 지정한다. 절단성 결합을 형성하는 아미노산(또는 아미노산 대용물)은 1번으로서 지정하고 인접 잔기들은 2번 등으로 지정하여 절단성 결합으로부터 번호를 매긴다. 따라서, 기질의 각 특이적 하위부위는 번호 및 프라이밍된 또는 프라이밍되지 않은 것과 같은 의미에 의해 고유하게 식별된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 펩타이드 결합의 대용물은 -C(O)NH-과 유사한 입체적 및/또는 전자적 특징을 지니는 2가 그룹이다. 펩타이드 결합 대용물은 알켄 등입체성계 (-CR=CR-), 특히 화학식 -CH=CH-의 (E)-알켄 등입체성계, 하이드록시에틸렌 등입체성계 (-CH(OH)CH2-), 엔아민 등입체성계 (-C(=CRR)NH-), 아미노알콜 등입체성계 (-CH(OH)CH2NH-), 디플루오로케톤 등입체성계 (-C(O)CF2-), 레트로인버소(retroinverso) 화합물 (-NHC(O)-), 2가 헤테로사이클릴 또는 헤테로아릴 그룹및 사이클로프로필 등입체성계, 예를 들어,를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 알킬, 알케닐 및 알키닐 탄소쇄는 명시하지 않는 한, 1개 내지 20개의 탄소, 일반적으로 1개 내지 16개의 탄소를 함유하고 직쇄 또는 측쇄이다. 탄소수 2 내지 20의 알케닐 탄소쇄는 전형적으로 1개 내지 8개의 이중 결합을 함유하고 탄소수 2 내지 16의 알케닐 탄소쇄는 전형적으로 1개 내지 5개의 이중 결합을 함유한다. 탄소수 2 내지 20의 알키닐 탄소쇄는 전형적으로 1개 내지 8개의 삼중 결합을 함유하고, 탄소수 2 내지 16의 알키닐 탄소쇄는 일반적으로 1개 내지 5개의 삼중 결합을 함유한다. 본원에서 예시적 알킬, 알케닐 및 알키닐 그룹은 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 이소부틸, n-부틸, 2급-부틸, 3급-부틸, 이소펜틸, 네오펜틸, 3급-펜틸 및 이소헥실을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 알킬, 알케닐 및 알키닐 그룹은 달리 명시하지 않는 한, 동일하거나 상이한 하나 이상의 그룹, 일반적으로 알킬 그룹에 의해 임의로 치환될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 저급 알킬, 저급 알케닐 및 저급 알키닐은 약 6개 미만의 탄소를 갖는 탄소쇄를 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "알크(엔)(인)일"은 하나 이상의 이중 결합 및 하나 이상의 삼중 결합을 함유하는 알킬 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "사이클로알킬"은 전형적으로 탄소수 3 내지10, 예를 들어, 3 내지 6의 포화 일환 또는 다환 환 시스템을 의미하고, 사이클로알케닐 및 사이클로알키닐은 각각 하나 이상의 이중 결합 및 하나 이상의 삼중 결합을 포함하는 일환 또는 다환 환 시스템을 의미한다. 사이클로알케닐 및 사이클로알키닐 그룹은 예를 들어, 3개 내지 10개의 탄소원자를 함유하며, 이때 사이클로알케닐 그룹은 일반적으로 4개 내지 7개의 탄소원자를 함유하며 사이클로알키닐 그룹은 예를 들어, 8개 내지 10개의 탄소원자를 함유한다. 사이클로알킬, 사이클로알케닐 및 사이클로알키닐 그룹의 환 시스템은 융합, 브릿지 또는 스피로-연결 방식으로 함께 결합될 수 있으며 하나 이상의 알킬 그룹 치환체에 의해 임의로 치환될 수 있는 1개의 환 또는 2개 이상의 환으로 이루어질 수 있다. "사이클로알크(엔)(인)일"은 하나 이상의 이중 결합 및 하나 이상의 삼중 결합을 함유하는 사이클로알킬 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "치환된 알킬," "치환된 알케닐," "치환된 알키닐," "치환된 사이클로알킬," "치환된 사이클로알케닐" 및 "치환된 사이클로알키닐"은 각각 하나 이상의 치환체, 특정 양태에서는 알킬, 할로, 할로알킬(예: 할로 저급 알킬), 슈도할로, 아릴, 아미노, 디알킬아미노, 니트로, 시아노, 아지도, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 알킬카보닐아미노, 알콕시카보닐아미노, 아미노이미노, 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 알킬옥시, 알킬티오, 아릴티오, 아르알킬옥시, 아르알킬티오, 카복시, 알킬카보닐, 알콕시카보닐, 옥소 및 사이클로알킬로부터 독립적으로 선택된 1개 내지 3개의 치환체로 치환된 알킬, 알케닐, 알키닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐 및 사이클로알키닐 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "아릴"은 6개 내지 19개의 탄소원자를 함유하는 사이클릭 그룹을 의미한다. 아릴 그룹은 플루오레닐, 치환된 플루오레닐, 페닐, 치환된 페닐, 나프틸 및 치환된 나프틸과 같은 그룹을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "아릴"은 또한 아릴옥시, 아릴티오, 아릴카보닐 및 아릴아미노를 포함하나 이에 제한되지 않는 아릴-함유 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "헤테로아릴"은 환 시스템내의 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 원자가 헤테로원자, 즉 탄소 이외의 원소, 예를 들어, 질소, 산소 및 황 원자인, 일반적으로 약 5원 내지 약 15원의 일환 또는 다환 방향족 환 시스템을 의미한다. 헤테로아릴 그룹은 임의로 벤젠 환에 융합될 수 있다. 예시적 헤테로아릴 그룹은, 예를 들어, 푸릴, 이미다졸릴, 피롤리디닐, 피리미디닐, 테트라졸릴, 티에닐, 피리딜, 피롤릴, N-메틸피롤릴, 퀴놀리닐 및 이소퀴놀리닐을 포함하나 이에 제한되지 않으며, 이의 예로서는 피리딜, 티에닐 및 퀴놀리닐이 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "헤테로아릴"은 또한 헤테로아릴옥시, 헤테로아릴티오, 헤테로아릴카보닐 및 헤테로아릴아미노를 포함하나 이에 제한되지 않는 헤테로아릴-함유 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "헤테로사이클릴"은 환 시스템내의 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 원자가 헤테로원자, 즉 탄소 이외의 원소, 예를 들어, 질소, 산소 및/또는 환 원자인, 3원 내지 10원, 예를 들어, 4원 내지 7원 또는5원 내지 6원의 일환 또는 다환 비방황족 환 시스템을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "치환된 아릴," "치환된 헤테로아릴" 및 "치환된 헤테로사이클릴"은 각각 알킬, 사이클로-알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 및 할로, 할로 알킬 및 알킬로부터 선택된 1개 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 치환체에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 1개 내지 2개의 이중 결합을 함유하는 알케닐, 1개 내지 2개의 삼중 결합을 함유하는 알키닐, 알크(엔)(인)일 그룹, 할로, 슈도할로, 시아노, 하이드록시, 할로알킬 및 폴리할로알킬(예: 할로 저급 알킬, 특히 트리플루오로메틸), 포르밀, 알킬카보닐, 및 할로, 할로 알킬 및 알킬로부터 선택되는 1개 이상, 일반적으로 1개 내지 3개의 치환체에 의해 임의로 치환된 아릴카보닐, 헤테로아릴카보닐, 카복시, 알콕시카보닐, 아릴옥시카보닐, 아미노이미노, 알콕시카보닐아미노, 아릴옥시카보닐아미노, 아미노카보닐, 알킬아미노카보닐, 디알킬아미노카보닐, 아릴아미노카보닐, 디아릴아미노카보닐, 아르알킬아미노카보닐, 알콕시, 아릴옥시, 퍼플루오로알콕시, 알케닐옥시, 알키닐옥시, 아릴알콕시, 아미노알킬, 알킬아미노알킬, 디알킬아미노알킬, 아릴아미노알킬, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 알킬아릴아미노, 알킬카보닐아미노, 아릴카보닐아미노, 아지도, 니트로, 머캅토, 알킬티오, 아릴티오, 퍼플루오로알킬티오, 티오시아노, 이소티오시아노, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 아릴설피닐, 아릴설포닐, 아미노설포닐, 알킬아미노설포닐, 디알킬아미노설포닐 및 아릴아미노설포닐로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 특정 양태에서는 1개 내지 3개의 치환체로 치환된 아릴, 헤테로아릴 및 헤테로사이클릴 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "아르알킬"은 알킬의 하나의 수소원자가 아릴 그룹으로 대체된 알킬 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "헤테로아르알킬"은 알킬의 하나의 수소원자가 헤테로아릴 그룹으로 대체된 알킬 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 알킬, 알콕시, 카보닐 등은 당해 분야의 숙련가에 의해 일반적으로 이해되고 있는 바와 같이 사용된다. 예를 들어, 본원에서 사용되는 바와 같이 알킬은 하나 이상의 탄소를 함유하는 포화 탄소쇄를 의미하며, 이때 상기 쇄는 직쇄 또는 측쇄일 수 있으며 사이클릭 부분을 포함하거나 사이클릭일 수 있다.
소정의 임의의 치환체의 수가 명시되지 않는다면(예를 들어, "할로알킬"), 하나 이상의 치환체가 존재할 수 있다. 예를 들어, "할로알킬"은 하나 이상의 동일하거나 상이한 할로겐을 포함할 수 있다. 또 다른 예로서, "C1-3알콕시페닐"은 1개, 2개 또는 3개의 탄소를 함유하는 동일하거나 상이한 알콕시 그룹 하나 이상을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "할로", "할로겐" 또는 "할라이드"는 F, Cl, Br 또는 I를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 슈도할라이드는 할라이드와 실질적으로 유사하게 거동하는 화합물이다. 이러한 화합물은 할라이드(X-, 여기서 X는 Cl 또는 Br과 같은 할로겐이다)와 동일한 방식으로 사용되고 처리될 수 있다. 슈도할라이드는 시아나이드, 시아네이트, 티오시아네이트, 셀레노시아네이트, 트리플루오로메톡시, 디플루오로메톡시, 디클로로메톡시 및 아지드를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "할로알킬"은 하나 이상의 수소원자가 할로겐으로 대체된 저급 알킬 라디칼을 의미한다. 이러한 그룹은 클로로메틸, 트리플루오로메틸 및 1-클로로-2-플루오로에틸 등을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "할로알콕시"는 RO-(여기서, R은 할로알킬 그룹이다)을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "설피닐" 또는 "티오닐"은 -S(O)-을 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "설포닐" 또는 "설푸릴"은 -S(O)2-을 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "설포"는 -S(O)2O-를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "카복시" 2가 라디칼, -C(O)O-를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "아미노카보닐"은 -C(O)NH2를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "알킬아미노카보닐"은 -C(O)NHR(여기서, R 수소 또는 저급 알킬과 같은 알킬이다)을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 사용되는 "디알킬아미노카보닐"은 -C(O)NR'R(여기서, R' 및 R은 독립적으로 수소 또는 알킬, 예를 들어, 저급 알킬로부터 선택된다)을 의미하고, "카복스아미드"는 화학식 -NR'COR의 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "디아릴아미노카보닐"은 -C(O)NRR'(여기서, R 및 R'은 독립적으로 수소 또는 저급 아릴과 같은 아릴, 예를 들어, 페닐로부터 선택된다)을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "아르알킬아미노카보닐"은 C(O)NRR'(여기서, R 및 R' 중 하나는 저급 아릴과 같은 아릴, 예를 들어, 페닐이고 R 및 R' 중 나머지 하나는 알킬, 예를 들어, 저급 알킬이다)을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "아릴아미노카보닐"은 -C(O)NHR(여기서, R은 저급 아릴과 같은 아릴, 예를 들어, 페닐이다)을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "하이드록시카보닐"은 -COOH를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "알콕시카보닐"은 -C(O)OR(여기서, R은 저급 알킬과 같은 알킬이다)을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "아릴옥시카보닐"은 -C(O)OR(여기서, R은 저급 아릴과 같은 아릴, 예를 들어, 페닐이다)을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "알콕시" 및 "알킬티오"는 RO- 및 RS-(여기서, R은 알킬, 예를 들어, 저급 알킬이다)을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "아릴옥시" 및 "아릴티오"는 RO- 및 RS-(여기서, R은 저급 아릴과 같은 아릴, 예를 들어, 페닐이다)을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "알킬렌"은 예를 들어, 탄소수 1 내지 약 20, 예를 들어, 1 내지 12의 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭, 예를 들어, 직쇄 또는 측쇄 2가 탄화수소 그룹이며, 예로는 저급 알킬렌이 있다. 알킬렌 그룹을 따라서 하나 이상의 산소, 황 또는 치환되거나 비치환된 질소원자가 임의로 삽입될 수 있으며, 이때 질소 치환체는 앞서 기술한 바와 같은 알킬이다. 예시적 알킬렌 그룹으로는 메틸렌 (-CH2-), 에틸렌 (-CH2CH2-), 프로필렌 (-(CH2)3-), 사이클로헥실렌 (-C6H10-), 메틸렌디옥시 (-O-CH2-O-) 및 에틸렌디옥시 (-O-(CH2)2-O-)을 포함한다. 용어 "저급 알킬렌"은 탄소수 1 내지 6의 알킬렌 그룹을 의미한다. 예시적 알킬렌 그룹으로는 저급 알킬렌, 예를 들어, 탄소수 1 내지 3의 알킬렌이 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "알케닐렌"은 예를 들어, 2개 내지 약 20개의 탄소원자, 일반적으로는 1개 내지 12개의 탄소원자를 가지며 하나 이상의 이중 결합을 갖는 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭, 전형적으로는 직쇄 또는 측쇄 2가 지방족 탄화수소 그룹을 의미하며, 예로는 저급 알케닐렌이 있다. 알케닐렌 그룹을 따라서 하나 이상의 산소, 황 또는 치환되거나 비치환된 질소원자가 임의로 삽입될 수 있으며, 이때 질소 치환체는 앞서 기술한 바와 같은 알킬이다. 예시적 알케닐렌 그룹은 -CH=CH-CH=CH- 및 -CH=CH-CH2-을 포함한다. 용어 "저급 알케닐렌"은 탄소수 2 내지 6의 알케닐렌 그룹을 의미한다. 예시적 알케닐렌 그룹은 저급 알케닐렌, 예를 들어, 탄소수 3 내지 4의 알케닐렌이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "알키닐렌"은 예를 들어, 2개 내지 20개, 일반적으로는 1개 내지 12개의 탄소원자와 하나 이상의 삼중 결합을 갖는 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭, 일반적으로는 직쇄 또는 측쇄 2가 지방족 탄화수소 그룹을 의미하며 예로는 저급 알키닐렌이 있다. 알키닐렌 그룹을 따라서 하나 이상의 산소, 황 또는 치환되거나 비치환된 질소원자가 임의로 삽입될 수 있으며, 이때 질소 치환체는 앞서 기술한 바와 같은 알킬이다. 예시적 알키닐렌 그룹은 -C≡C-C≡C-, -C≡C- 및 -C≡C-CH2-를 포함한다. 용어 "저급 알키닐렌"은 탄소수 2 내지 6의 알키닐렌 그룹을 의미한다. 예시적 알키닐렌 그룹은 탄소수 3 내지 4의 알키닐렌, 예를 들어, 탄소수 3 내지 4의 알키닐렌 그룹을 의미한다. 예시적 알크(엔)(인)일렌은 저급 알크(엔)(인)일, 예를 들어, 탄소수 4의 알크(엔)(인)일이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "알크(엔)(인)일렌"은 2개 내지 약 20개의 탄소원자 및 하나 이상의 삼중 결합 및 하나 이상의 이중결합을 가지며, 전형적으로는 예를 들어, 저급 알크(엔)(인)일렌과 같이 1개 내지 12개의 탄소원자를 갖는 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭, 일반적으로는 직쇄 또는 측쇄 2가 지방족 탄화수소 그룹을 의미한다. 알키닐렌 그룹을 따라서 하나 이상의 산소, 황 또는 치환되거나 비치환된 질소원자가 임의로 삽입될 수 있으며, 이때 질소 치환체는 앞서 기술한 바와 같은 알킬이다. 예시적 알크(엔)(인)일렌 그룹은 -C=C-(CH2)n-C≡C(여기서, n은 1 또는 2이다)을 포함한다. 용어 "저급 알크(엔)(인)일렌"은 탄소수 6 이하의 알크(엔)(인)일렌이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "사이클로알킬렌"은 일반적으로 탄소수 3 내지 10, 예를 들어 탄소수 3 내지 6의 2가 포화 일환 또는 다환 환 시스템을 의미하며, 사이클로알케닐렌 및 사이클로알키닐렌은 각각 하나 이상의 이중 결합 및 하나이상의 삼중 결합을 포함하는 2가 일환 또는 다환 환 시스템을 의미한다. 사이클로알케닐렌 및 사이클로알키닐렌 그룹은 3개 내지 10개의 탄소원자를 함유할 수 있으며, 예를 들어, 사이클로알케닐렌 그룹은 4개 내지 7개의 탄소원자를 함유하며 사이클로알키닐렌 그룹은 8개 내지 10개의 탄소원자를 함유한다. 사이클로알킬렌, 사이클로알케닐렌 및 사이클로알키닐렌 그룹의 환 시스템은 융합, 브릿지 또는 스피로-연결 방식으로 함께 결합될 수 있는 1개의 환 또는 2개 이상의 환으로 이루어질 수 있다. "사이클로알크(엔)(인)일렌"은 하나 이상의 이중 결합 및 하나 이상의 삼중 결합을 함유하는 사이클로알킬렌 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "치환된 알킬렌," "치환된 알케닐렌," "치환된 알키닐렌," "치환된 사이클로알킬렌," "치환된 사이클로알케닐렌," 및 "치환된 사이클로알키닐렌"은 각각 할로, 할로알킬(예: 할로 저급 알킬), 아릴, 하이드록시, 알콕시, 아릴옥시, 알킬옥시, 알킬티오, 아릴티오, 아르알킬옥시, 아르알킬티오, 카복시 알콕시카보닐, 옥소 및 사이클로알킬로부터 독립적으로 선택되는 하나 이상의 치환체, 특정 양태에서는 1개 내지 3개의 치환체로 치환된 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌, 사이클로알킬렌, 사이클로알케닐렌 및 사이클로알키닐렌 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "아릴렌"은 예를 들어, 5개 내지 약 20개, 예를 들어, 5개 내지 12개의 탄소원자 및 하나 이상의 방향족 환을 갖는 일환 또는 다환, 예를 들어, 일환 2가 방향족 그룹을 의미하며, 예로는 저급 아릴렌이 있다. 아릴렌 그룹 주위에 하나 이상의 산소, 황 또는 치환되거나 비치환된 질소원자가임의로 삽입될 수 있으며, 이때 질소 치환체는 앞서 기술한 바와 같은 알킬이다. 예시적 아릴렌 그룹은 1,2-, 1,3- 및 1,4-페닐렌을 포함한다. 용어 "저급 아릴렌"은 탄소수 5 내지 6의 아릴렌 그룹을 의미한다. 예시적 아릴레 그룹은 저급 아릴렌이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "헤테로아릴렌"은 환 시스템내의 하나 이상, 전형적으로는 예를 들어, 1개 내지 3개의 원자가 헤테로원자, 즉 탄소 이외의 원소, 예를 들어, 질소, 산소 및/또는 황 원자(들)인, 약 5원 내지 15원의 2가 일환 또는 다환 방향족 환 시스템을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "헤테로사이클릴렌"은 환 시스템내의 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 원자가 헤테로원자, 즉 탄소 이외의 원소, 예를 들어, 질소, 산소 및/또는 황 원자(들)인, 일반적으로 3원 내지 10원, 예를 들어, 4원 내지 7원 또는 5원 내지 6원의 2가 일환 또는 다환 비방향족 환 시스템이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "치환된 아릴렌," "치환된 헤테로아릴렌" 및 "치환된 헤테로사이클릴렌"은 각각 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 및 할로, 할로 알킬 및 알킬로부터 선택된 1개 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 치환체에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 1개 내지 2개의 이중결합을 함유하는 알케닐, 1개 내지 2개의 삼중 결합을 함유하는 알키닐, 알크(엔)(인)일 그룹, 할로, 슈도할로, 시아노, 하이드록시, 할로알킬 및 폴리할로알킬, 예를 들어, 할로 저급 알킬(예: 트리플루오로메틸), 포르밀, 알킬카보닐, 및 할로, 할로 알킬 및 알킬로부터 선택된 1개 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 치환체에 의해 임의로 치환된 아릴카보닐, 헤테로아릴카보닐, 카복시, 알콕시카보닐, 아릴옥시카보닐, 아미노카보닐, 알킬아미노카보닐, 디알킬아미노카보닐, 아릴아미노카보닐, 디아릴아미노카보닐, 아르알킬아미노카보닐, 알콕시, 아릴옥시, 퍼플루오로알콕시, 알케닐옥시, 알키닐옥시, 아릴알콕시, 아미노알킬, 알킬아미노알킬, 디알킬아미노알킬, 아릴아미노알킬, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 알킬아릴아미노, 알킬카보닐아미노, 아릴카보닐아미노, 아지도, 니트로, 머캅토, 알킬티오, 아릴티오, 퍼플루오로알킬티오, 티오시아노, 이소티오시아노, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 아릴설피닐, 아릴설포닐, 아미노설포닐, 알킬아미노설포닐, 디알킬아미노설포닐 및 아릴아미노설포닐으로부터 독립적으로 선택되는 1개 이상의 치환체, 특정 양태에서는 1개 내지 3개의 치환체로 치환된 아릴렌, 헤테로아릴렌 및 헤테로사이클릴렌 그룹을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "알킬리덴"은 또 다른 그룹의 한 원자에 결합하여 이중 결합을 형성하는 =CR'R"과 같은 2가 그룹을 의미한다. 예시적 알킬리덴 그룹은 메틸리덴 (=CH2) 및 에틸리덴 (=CHCH3)이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "아르알킬리덴"은 R' 또는 R"이 아릴 그룹인 알킬리덴 그룹을 의미한다. "사이클로알킬리덴" 그룹은 R'과 R"이 연결되어 카보사이클릭 환을 형성하는 그룹이다. "헤테로사이클릴리덴" 그룹은 R' 및 R" 중 하나 이상이 쇄내에 헤테로원자를 함유하고 R'과 R"이 연결되어 헤테로사이클릭 환을 형성하는 그룹이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "아미도"는 2가 그룹 -C(O)NH-을 의미한다."티오아미도"는 2가 그룹 -C(S)NH-을 의미한다. "옥시아미도"는 2가 그룹 -OC(O)NH-을 의미한다. "티아아미도"는 2가 그룹 -SC(O)NH-을 의미한다. "디티아아미도"는 2가 그룹 -SC(S)NH-을 의미한다. "우레이도"는 2가 그룹 -HNC(O)NH-을 의미한다. "티오우레이도"는 2가 그룹 -HNC(S)NH-을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "세미카바지드"는 -NHC(O)NHNH-를 의미한다. "카바제이트"는 2가 그룹 -OC(O)NHNH-을 의미한다. "이소티오카베제이트"는 2가 그룹 -SC(O)NHNH-을 의미한다. "티오카바제이트"는 2가 그룹 -OC(S)NHNH-을 의미한다. "설포닐히드라지드"는 그룹 -SO2NHNH-을 의미한다. "히드라지드"는 2가 그룹 -C(O)NHNH-을 의미한다. "아조"는 2가 그룹 -N=N-을 의미한다. "히드라지닐"은 2가 그룹 -NH-NH-을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "아미노산"은 라세미체이거나 D-배위 또는 L-배위 중 하나인 α-아미노산이다. 아미노산 명칭 앞의 "d"란 명칭(예: dAla, dSer, dVal 등)은 아미노산의 D-이성체를 의미한다. 아미노산 명칭 앞의 "dl"이란 명칭(예: dlPip)은 아미노산의 L-이성체와 D-이성체의 혼합물을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 페닐 또는 피리딜과 같은 임의의 특정 그룹이 명시되는 경우 이는 그룹이 비치환되거나 치환된 것을 의미한다. 예시적 치환체는 달리 명시하지 않는 한 할로, 할로 저급 알킬 및 저급 알킬이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 임의의 보호 그룹, 아미노산 및 기타 화합물에 대한 약어는 달리 언급이 없는 한, 이의 일반적인 용법, 승인된 약어, 또는 생화학 명명법에 관한 IUPAC-IUB 위원회[참조: (1972) Biochem. 11: 942-944]에 따른다.
본원에서 사용되는 바와 같이, HHT 및 CHT는 헥사하이드로티로실(사이클로헥실티로실 또는 p-하이드록시사이클로헥실알라닐로서 또한 공지됨)을 의미하고, CHA는 사이클로헥실알라닐이고, Pyr 및 피로Glu는 피로글루탐산을 의미하고, Pip는 피페콜린산이고, Sar는 사르코신이며, nLeu 및 Nle은 노르류신이고, nVal은 노르발린이고, Aib는 2-아미노이소부티르산이며, Quat는 (R)-Glu(α-(3-아미디노벤질))이고, Abu 및 But는 2-아미노부티르산이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, PEG는 지정된 수의 에틸렌옥시 서브유닛을 갖는 폴리에틸렌 글리콜 함유 치환체이다. 따라서, 용어 PEG(2)는을 나타내고, 용어 PEG(6)는을 나타낸다.
R1및 R2가 배합되어 -(CH2)h-를 형성하는 경우, 이와 같이 정의된 사이클릭 잔기 및 헤테로원자-함유 사이클릭 잔기는,,,,,,,,,를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "하이드록실화"는 이와 같이 기술되는 환 시스템의 치환가능한 탄소 상에서 하이드록실 잔기에 의한 치환을 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "폴리하이드록실화"는 이와 같이 기술되는 환 시스템의 2개 이상의 치환가능한 탄소 상에서 2개, 3개 또는 4개의 하이드록실 잔기에 의한 치환을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "(d)(2,3-디하이드록시프로피오닐)"은 구조를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "(2R,3S)-2,3,4-트리하이드록시부타노일"은 구조을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "퀴닐"은 구조또는 이의 부분입체이성체를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "글루로닐"은 구조또는 이의 부분입체이성체를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "코티니닐"은 구조또는 이의 부분입체이성체를 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "갈릴"은 구조을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "4-에톡시스쿠아릴"은 구조를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 1-메틸His 또는 (1Me)H는 구조을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 3-메틸His 또는 (3Me)H 구조를 나낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, Quat2는 구조를 나타내고, Quat3은 구조을 나타내며, Quat4는를 나타내고, Quat5는 구조을 나타낸다.
본원에서 사용되는 다른 약어들은 다음과 같다:
약어 의미
Aib 2-아미노이소부티릴
4,4-디메틸Thr 2-아미노-3-하이드록시-4-메틸펜타노일
Met(O2) 메티오니닐-S,S-디옥사이드
Ser(OMe) 세리닐의 O-메틸 에테르, 2-아미노-3-메톡시프로파노일로서 공지됨
hSer 호모세리닐, 2-아미노-4-하이드록시부타노일로서도 공지됨
(hS)Gly N-(2-하이드록시에틸)글리실
N,N-디메틸Gly N,N-디메틸글리실
β-Ala 3-아미노프로파노일
Cys(Me) S-메틸시스테이닐
t-부틸Gly 2-아미노-3,3-디메틸부타노일
F(Gn) 4-구아니디닐페닐알라닐
hCHA 호모사이클로헥실알라닐 또는 2-아미노-4-사이클로헥실부타노일
헥실Gly 2-아미노옥타노일
알릴Gly 2-아미노-4-펜테노일
Inact. 불활성
NT 시험되지 않음
MeOEtCO 3-메톡시프로파노일
3,4-메틸디옥시PhAc 3,4-메틸렌디옥시페닐아세틸
L-3-Ph락틸 L-2-하이드록시-3-페닐프로파노일
MeOEtOCO 2-메톡시에톡시카보닐
MeOCO 메톡시카보닐
MeO(EtO)2Ac 2-(2-메톡시에톡시)에톡시아세틸
2-피리딜Ac 2-피리딜아세틸
PhOAc 페녹시아세틸
MeOAc 메톡시아세틸
PhAc 페닐아세틸
MeOEtOAc 2-메톡시에톡시아세틸
HOOCButa 글루타릴
Z 벤질옥시카보닐
EtOCO 에톡시카보닐
βA 베타-알라닐 또는 3-아미노프로파노일
NapAc 1-나프틸아세틸
iBoc 이소부톡시카보닐
HOAc 하이드록시아세틸
MeSucc 3-메톡시카보닐프로파노일
Succ 석시닐
HCO 포르밀
4-(구안)Phg 4-구아니디닐페닐글리실
Dox 독소루비신
Tax 탁솔
dA(Chx) 또는 dCha d-사이클로헥실알라닐
dhF d-호모페닐알라닐
P(OH) 4-하이드록시프롤릴
B. 프로테아제 표적
본원에서 접합체는 세포 표면, 특히 종양 세포 및 종양발생 과정과 혈관신생 및 기타 증식 과정에 관여하는 세포에 위치하는 프로테아제를 표적화하도록 디자인한다. 하기에서 상세히 기술하는 접합체는 이러한 접합체내에 있는 경우 실질적으로 불활성인 치료제, 통상적으로는 세포독성제에 직접적으로 또는 링커를 통해 연결된, 선택된 표적화된 세포 표면 프로테아제에 대한 펩타이드성 기질을 함유한다. 치료제는 활성 형태로 또는 상기 치료제가 전달되는 표적화된 세포 또는 조직의 부근에서 활성화될 수 있는 형태로 방출된다. 그 결과, 활성 치료제가 표적화된 세포 또는 조직에 축적되거나 표적화된 세포내에 축척된다.
표적화된 프로테아제는, 질환 과정에 관여하는 세포 또는 조직에 위치하거나 질환 또는 질환 과정에 관여하는 세포 또는 조직의 부근에 우연히 존재하고 일반적으로 전부는 아니라도 해도 다수의 다른 세포 또는 조직에는 절대 위치하지 않거나 존재하지 않거나 이러한 세포 또는 조직에서 보다 낮은 수준, 일반적으로는 실질적으로 보다 낮은 수준에서 활성이거나 변경된 활성 또는 특이성을 나타내는 프로테아제를 동정함으로써 선택한다. 활성 프로테아제를 발현하는 표적화되지 않은 세포 또는 조직의 종류 및 수는 특정 프로테아제 및 치료하고자 하는 질환에 따라 다르다. 당해 분야의 숙련가는 질환, 표적화된 제제 및 부작용의 허용되는 수준에 기초하여 표적을 선택할 것이다. 그 목표는 표적화된 제제를 그 자체로 투여하는 경우와 비교하여 증강된 치료 지수를 달성하는 것이다.
표적화된 프로테아제는 질환 과정에 관여하거나 관여하지 않을 수 있으며, 이의 발현은 우연적일 수 있으며, 본원의 목적상 이의 특정 역활 또는 이의 결여는 중요한 것이 아니며, 실질적으로 표적화된 조직 또는 세포의 장소에서 상기 표적화된 프로테아제가 활성인지가 중요하다. 예를 들어, 본원에서 관심대상인 다수의 세포 표면 단백질은 종양 세포 또는 종양발생 과정에 관여하는 세포에서 발현되거나 활성이다. 당해 분야의 숙련가에게 조직 또는 세포 발현 프로필의 측정 또는 검출용으로 공지된 모든 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 수많은 조직으로부터의 RNA로 구성된 RNA 블롯[예: 다중 조질 발현(MTE) 어레이(공급원: CLONTECH, Palo Alto, CA)]를 관심대상의 프로테아제의 핵산 서열에 기초하는 프로브로 스크리닝하여 상기 프로테아제를 발현하는 세포를 동정할 수 있다. 또한, 발현을 시험하기 위해 노던 블롯 분석을 사용할 수 있다.
표적화된 프로테아제 중에는 II형 막-결합된 세린 프로테아제(MTSP; 참조: 2001년 2월 2일자로 출원된 미국 출원 제09/776,191호 및 국제 PCT 출원 제WO 01/57194호로서 공개된 국제 PCT 출원 제 PCT/US01/03471호; 국제 PCT 출원 제 PCT/US02/07903호; 또한, 미국 가특허 출원 제60/275,592호, 제60/278,166호, 제60/279,228호, 제60/291,001호, 제60/291,501 60/316,818호, 제60/302,939호, 제60/316,818호, 제60/328,529호, 제60/328,530호, 제 60/332,015호, 제60/328,939호, 및 대리인 사건번호 24745-P1624하에 2002년 5월 20일자로 출원된 가특허 출원; 미국 출원 제10/099,700호, 제10/104,271호, 제10/112,221호, 대리인 사건번호 24745-1616하에 2002년 5월 14일자로 출원된 출원) 및 엔도텔리아제로서 명명되는, 내피 세포에서 발견되는 프로테아제[참조: 2000년 11월 20일자로 출원된 미국 출원 제09/717,473호 및 국제 PCT 출원 제WO 01/36604로서 공개된 국제 PCT 출원 제PCT/US00/31803호; 또한, 서열 3 내지 26, 269 내지 270 및 272 내지 276]가 포함된다.
또한, 세포 표면 단백질과의 특이적 상호작용으로 인하여 세포 표면에 위치하는 프로테아제가 고려된다. 이러한 프로테아제의 예로는 유로키나제 플라스미노겐 활성화인자 수용체(u-PAR)에 결합된 유로키나제 플라스미노겐 활성화인자(u-PA)가 있다. 예시적 MTSP 및 엔도텔리아제의 핵산 서열 정보 및 발현 프로필은 다음과 같다(또한 실시예 6 참조).
1. MTSP
세포 표면 단백질분해는 각종 세포 기능을 매개하는 생물학적 활성 단백질을 생성시키기 위한 기작이다. 이들 막-부착된 단백질은 디스인테그린-유형 및 메탈로프로테이나제(ADAM) 및 막-유형 매트릭스 메탈로프로테이나제(MT-MMP)를 포함한다. MMP 이외에, 세린 프로테아제가 신생물성 질환 진행에 관련되어 왔다. 분비된 효소이거나 세포질내 저장 소기관에 격리되어 있는 대부분의 세린 프로테아제는 혈액 응고, 상처 치유, 소화, 면역 반응 및 종양 침입과 전이에서 역할을 수행한다.
트랜스막 세린 프로테아제(MTSP)는 종양의 병인학 및 병원성에 관여하는 것으로 보인다. 이들 효소는 특정 암성 및 종양 세포 및 기타 증식 장애 및 기타 질환 상태와 관련된 세포, 예를 들어, 염증 세포에서 발현되며 조직 특이적 또는 기관 특이적일 수 있다. 포유동물에서는, 계열 중 20가지 이상의 구성원이 공지되어 있다[참조: Hooper et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:857-860, 또한, 2001년 2월 2일자로 출원된 미국 출원 제09/776,191호 및 국제 PCT 출원 제PCT/US01/03471호;미국 가특허 출원 제60/275,592호 및 제60/278,166호; 및 서열 1 내지 37]. 이들은 코린[승인번호 제AF133845호 및 제AB013874호; 참조: Yan et al. (1999) J. Biol. Chem. 274: 14926-14938; Tomia et al. (1998) J. Biochem. 124: 784-789; Uan et al. (2000) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 97: 8525-8529]; 엔터펩티다제[또한 엔테로키나제로 명명됨; 사람 단백질에 대해서는 승인 번호 제U09860호; 참조: Kitamoto et al. (1995) Biochem. 27: 4562-4568; Yahagi et al. (1996) Biochem. Biophys. Res. Commun. 219: 806-812; Kitamoto et al. (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 91: 7588-7592; Matsushima et al. (1994) J. Biol. Chem. 269: 19976-19982]; 사람 기도 트립신-유형 프로테아제[HAT; 승인 번호 제AB002134호; 참조: Yamaoka et al. J. Biol. Chem. 273: 11894-11901]; MTSP1[또한 TADG-15 및 매트립타제로 명명됨; 참조: 서열 1 및 2; 승인 번호 제AF133086/AF118224호, 제AF4280022호; Takeuchi et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96: 11054-1161; Lin et al. (1999) J. Biol. Chem. 274: 18231-18236; Takeuchi et al. (2000) J. Biol. Chem. 275: 26333-26342; and Kim et al. (1999) Immunogenetics 49: 420-429]; 헵신[참조: 승인 번호 제M18930호, 제AF030065호, 제X70900호; Leytus et al. (1988) Biochem. 27: 11895-11901; Vu et al. (1997) J. Biol. Chem. 272: 31315-31320; and Farley et al. (1993) Biochem. Biophys. Acta 1173: 350-352; 및 미국 특허 제5,972,616호]; TMPRS2[참조: 승인 번호 제U75329호 및 제AF113596호; Paoloni-Giacobino et al. (1997) Genomics 44: 309-320; and Jacquinet et al. (2000) FEBS Lett. 468: 93-100]; 및TMPRSS4[참조: 승인 번호 제NM 016425호; Wallrapp et al. (2000) Cancer 60: 2602-2606]를 포함한다. 또한 공지된 MTSP3, MTSP4, MTSP6, MTSP7, MTSP9, MTSP10, MTSP12, MTSP20, MTSP22 및 MTSP25[참조: 서열 3 내지 26, 269 내지 270 및 272 내지 276; 또한 2001년 2월 2일자로 출원된 미국 출원 제09/776,191호 및 국제 PCT 출원 제WO 01/57194호로서 공개된 국제 PCT 출원 제PCT/US01/03471호; 국제 PCT 출원 제PCT/US02/07903호; 또한, 미국 가특허 출원 제60/275,592호, 제60/278,166호, 제60/279,228호, 제60/291,001호, 제60/291,501 60/316,818호, 제60/302,939호, 제60/316,818호, 제60/328,529호, 제60/328,530호, 제 60/332,015호, 제60/328,939호 및 대리인 사건번호 24745-P1624하에 2002년 5월 20일자로 출원된 가특허 출원; 미국 출원 제10/099,700호, 제10/104,271호, 제10/112,221호, 대리인 사건번호 24745-1616하에 2002년 5월 14일자로 출원된 출원).
트랜스막 세린 프로테아제를 포함하는 세린 프로테아제는 신생물 발생 및 진행에 관여하는 과정에 관련되어 왔다. 상기 프로테아제의 정확한 역할은 상세히 설명되지 못하고 있지만, 세린 프로테아제 및 이의 억제제는 종양 진행에 관여하는 암 세포 침입에서 분해 활성, 전이 확산, 및 종양의 신혈관형성을 포함하는 수많은 세포내 및 세포외 생리학적 과정의 조절에 관여한다. 프로테아제는 세포외 매트릭스(ECM)의 분해에 관여하여 조직 재형성에 기여하며, 암 침입 및 전이에 필요한 것으로 사료된다. 일부 프로테아제의 활성 및/또는 발현은 종양 진행 및 발생과 상호관련되는 것으로 제시되어 왔으며 또한 특정 세포 유형에서 활성인 것으로 제시되고 있다.
예를 들어, 상피 암 및 정상 조직[참조: Takeucuhi et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96:11054-61]에서 발현되는 막-유형 세린 프로테아제 MTSP1(또한 매트립타제로 지칭됨: 미국 특허 제 5,972,616호에서 서열 1 및 2; 및 진뱅크 승인번호 제AF118224호; (1999) J. Biol. Chem. 274:18231-18236; 미국 특허 제5,792,616호; 또한, Takeuchi (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96:11054-1161]가 동정되었다. 이는 유방암의 전이에서 역활을 하는 것으로 제안되었다. 이의 주요 절단 특이성은 Arg-Lys 잔기이다. 매트립타제는 또한 사람 위장관 및 전립선에서 높은 수준의 활성 및/또는 발현과 함께 다양한 상피 조직에서 발현된다.
간암 세포에서 동정된 세포 표면 세린 프로테아제인 헵신은 난소암에서 과발현된다[참조: Tanimoto et al. (1997) Cancer Res., 57(14): 2884-7]. 헵신 전사체는 암종 조직에서 풍부한 것으로 보이며 정상 난소를 포함하는 정상 성인 조직에서는 거의 발현되지 않는다. 헵신은 흔히 난소암에서 과발현되므로 난소암의 침입 과정과 성장 능력에서 후보 프로테아제일 수 있다고 제시되어 왔다.
정상 상피 세포-특이적 1(NES1)로 명명된 세린 프로테아제-유형 유전자[참조: Liu et al., Cancer Res., 56(14): 3371-9 (1996)]가 동정되었다. NES1 mRNA의 발현이 모든 정상 및 불멸화된 비종양성 상피 세포주에서 관찰되지만, 대부분의 사람 유방암 세포주는 이의 발현이 급격히 감소하거나 완전히 결여된 것으로 나타난다. 성장 인자 활성을 조절하는 것으로 공지된 폴리펩타이드에 대한 NES1의 구조적 유사성 및 유방 종양 발생과 NES1 발현의 역 상관관계는 종양발생의 억제에서이러한 프로테아제-유형 유전자 생성물에 대한 직접적인 또는 간접적인 역할을 제시해 준다.
예시적 MTSP
각각의 MTSP는 특징적 조직 발현 프로필을 가지며, MTSP는 특히, 종양에서만 발현되거나 활성화되지는 않으나, 특징적 종양 조직 발현 또는 활성화 프로필을 나타낸다. 일부 경우에, MTSP는 기질 또는 이에 대한 조요소 또는 MTSP의 기능적 활성을 변경시킬 수 있는 기타 요소의 변화로 인해 종양 세포에서 비종양 세포와 상이한 활성을 가질 수 있다. 따라서, 각각은 신생물성 질환을 앓지 않는 피험자 또는 피험자들과 비교하여 신생물성 질환을 앓는 피험자(즉, 포유동물, 특히 사람)에서의 활성 및/또는 발현 수준 또는 기능으로 인해 특정 종양에 대한 진단 마커로서 작용할 수 있다. 또한, 특정 조직에서 활성(및/또는 발현)의 검출은 신생물성 질환의 지표일 수 있다. 또한, 각각의 활성 및/또는 발현 프로필로 인하여 MTSP는 예를 들어, 이의 활성 조절제를 투여하거나 MTSP들 중 하나에 의해 특이적으로 활성화되는 전구약물을 투여함으로써 치료학적 표적으로 작용할 수 있다. 각각의 MTSP 또는 이중 어느 하나는 종양 세포에서 그 수준이 정상 세포와 상이한 활성 또는 발현 수준 또는 기질 특이성을 나타낼 수 있다. 이러한 종양 세포는 결장, 폐, 전립선, 유방, 식도, 췌장, 자궁경부, 자궁, 자궁내막 종양 및 기타 고형 종양과 혈중 및 림프관 종양을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 따라서, 본원에서 제공되는 접합체는 이러한 종양 및 신생물성 상태 중 어느 하나의 치료를 위한 기질 특이성을 선택함으로써 디자인할 수 있다.
조직 발현 프로필
몇가지 예시적 MTSP의 예시적 조직 및 유전자(실시예 8 참조) 프로필은 다음과 같다. 이들 프로필은 이들 MTSP의 발현 또는 활성화의 완전한 범위를 정의하기 위함이 아니지만, MTSP가 종양에서 발현되므로 종양 세포의 표면에서의 발현 또는 활성화 또는 기질 특이성이 본원의 방법에서 이용될 수 있으며 이들 MTSP 중 하나 이상에 의해 절단되는, 본원의 방법에 따라서 및 본원에서 예시하는 바와 같이 디자인된 접합체를 제조하고 신생물성 또는 기타 질환 또는 상태를 치료하기 위해 이용하거나 표면에서 이들 단백질을 발현하는 세포로 표적화시킬 수 있음을 입증한다.
MTSP1(매트립타제)
MTSP1(또한 매트립타제로 지칭됨)은 광범위한 스펩트럼의 절단 활성과 2가지 잠재적 조절 모듈을 갖는 트립신-유형 세린프로테아제이다. MTSP1는 세포외 매트릭스를 분해시키는 이의 능력과 이의 트립신-유형 활성에 기초하여 "매트립타제"로서 명명되었다. 유방암 세포(또는 T-47D 세포 조건화된 배지)로부터 분리되는 경우, MTSP1은 주로 복합체화되지 않은 형태로 존재하는 것으로 보고되어 왔다. MTSP1은 사람 모유로부터 분리되었으며, 사람 모유로부터 분리되는 경우 2가지의 복합체화된 형태, 즉 95kDa(주된 형태) 및 110kDa 중 하나로 존재하는 것으로 보고되었으며, 복합체화되지 않은 MTSP1은 검출되지 않았다[참조: Liu, et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:18237-18242]. MTSP1는 활성 상태인 경우 복합체화되지 않은 프로테아제로서 존재하는 것으로 제안되어 왔다. 모유에서, 매트립타제는 트립신-유형 세린 프로테아제에 대해 활성을 갖는 쿤츠(Kuntz)-유형 세린 프로테아제 억제제인 간세포 성장 인자 억제제-1(HAI-1)의 단편과의 복합체로 존재하는 것으로 보고되어 왔다.
매트립타제로서 명명되는 단백질을 암호화하는 핵산은 T-47D 사람 유방암 세포-조건화된 배지로부터 클로닝되었다[참조: Lin et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:18231-18236]. cDNA의 분석시, 전체 길이 프로테아제는 683개 아미노산을 가지며 3개의 주요 구조적 영역인, 카복실-말단 영역에 인접한 세린 프로테아제, 4 개의 직렬 저-밀도 지단백질 수용체 도메인 및 2개의 직렬 보체 하위성분 C1r 및 C1s(서열 1)를 함유하는 것으로 결정되었다. 암 세포에 의해 생성되는 추가의 세린프로테아제를 동정하기 위한 연구는 PC-3 세포를 이용하여 수행되었다. 트랜스막 프로테아제인 것으로 보고된, 저자에 의해 "MT-SP1"으로 명명된 세린 프로테아제가 클로닝되었다[참조: Takeuchi et al. (1999) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 96: 11054-11061]. MT-SP1을 암호화하는 cDNA의 해독된 서열내에는 처음에 동정된 매트립타제 서열이 포함된다는 것이 나중에 밝혀졌다. 처음에 메트립타제로 명명된 단백질을 암호화하는 핵산은 암호화 뉴클레오타이드 중 516개가 결여된 부분적 MTSP1 클론이다[참조: Takeuchi et al., J. Biol. Chem. 275:26333-26342 (2000)]. 상기 보고된 매트립타제 암호화 cDNA 서열이 가능한 개시 메티오닌을 암호화하기 때문에, 교대 스플라이싱은 MTSP1의 N-말단 영역이 결여된 단백질을 생성시킬 수 있을 것으로 제안되었다. 따라서, 본원에서 매트립타제는 MTSP1의 변이형이다.
MTSP1은 트립신-유형 프로테아제 활성을 나타내며 세포외 프로테아제 도메인을 갖는 II형 트랜스막 단백질이다. MTSP1의 기질 특이성에 대한 연구는 프로테아제-활성화된 수용체 2(IPAR2), 전-간세포 성장 인자(pro-hepatocyte growth factor; 전-HGF) 및 일본쇄 유로키나제-유형 플라스미노겐 활성화인자(sc-uPA)가 MTSP1의 거대 분자 기질임을 나타낸다. PAR2는 염증, 세포보호 및/또는 세포 부착에서 기능하는 반면, sc-uPA는 종양 세포 침입과 전이에서 기능한다. HGF는 성장 및 혈관신생촉진 인자로서 작용한다.
사람 MTSP1을 암호화하는 예시적 뉴클레오타이드 서열은 서열 1 및 2에 제시한다. 앞서 주지된 바와 같이, 서열 1은 MTSP1 암호화 핵산 서열을 제시한다. 이러한 서열은 보다 긴 형태이며 변이체 둘다에서 공통적인 프로테아제 도메인을 포함한다.
MTSP1은 유방, 전립선 및 결장 종양에서 발현된다. 따라서, MTSP1에 대한 기질을 갖는 접합체를 상기 종양의 치료용으로 사용할 수 있다.
MTSP3
MTSP3 전사체는 폐 암종(LX-1), 결장 선암종(CX-1), 결장 선암종(GI-112) 및 난소 암종(GI-102)에서 검출되었다. 어떠한 명백한 신호도 또 다른 형태의 폐 암종(GI-117), 유방 암종(GI-101), 췌장 선암종(GI-103) 및 전립선 선암종(PC3)에서 검출되지 않았다.
MTSP4
MTSP4 전사체, LDL 수용체 도메인의 일부를 암호화하는 DNA 단편 및 프로테아제 도메인은 76개 상이한 사람 조직(카탈로그 번호 7775-1; 사람 다중 조직발현(MTE) 어레이; 제조원: CLONTECH)으로 구성된 RNA 블롯을 프로빙하는데 사용되었다. 노던 겔 블롯 분석에서와 같이, 매우 강력한 신호가 간에서 관찰되었다. 다른 조직에서의 신호는 (감소되는 신호 수준으로) 다음과 같이 관찰되었다: 태아 간 > 심장 = 신장 = 부신 = 정소 = 태아 심장 및 신장 = 골격근 = 방광 = 태반 > 뇌 = 척수 = 결장 = 위장 = 비장 = 림프절 = 골수 = 기관 = 자궁 = 췌장 = 타액선 = 유선 = 폐. MTSP4는 또한 다음을 포함하는 수개의 종양 세포주에서 보다 덜 풍부하게 발현된다: Hela S3 = 백혈병 K-562 = 버킷트 림프종(Raji 및 Daudi) = 결장직장 선암종(SW480) > 폐 암종(A549) = 백혈병 MOLT-4 = 백혈병 HL-60. 누드 마우스에 이종이식된 수개의 사람 원발성 종양으로부터 제조된 cDNA 라이브러리(사람 종양 다중 조직 cDNA 패널, 카탈로그 번호 K1522-1, 제조원: CLONTECH)로부터의 MTSP4 전사체의 PCR은 MTSP4-특이적 프라이머를 사용하여 수행하였다. MTSP4 전사체는 유방 암종(GI-101), 폐 암종(LX-1), 결장 선암종(GI-112) 및 췌장 선암종(GI-103)에서 검출되었다. 어떠한 명백한 신호도 또 다른 형태의 폐 암종(GI-117), 결장 선암종(CX-1), 난소 암종(GI-102) 및 전립선 선암종(PC3)에서 검출되지 않았다. MTSP4 전사체는 또한 LNCaP 및 PC-3 전립선암 세포주 뿐만 아니라 HT-1080 사람 섬유육종 세포주에서 검출되었다.
MTSP6
MTSP6은 결장에서 높은 수준으로 발현된다. 이는 또한 위, 기도, 유선, 갑상선, 타액선, 뇌하수체 및 췌장에서 발현된다. 이는 다른 조직에서는 낮은 수준으로 발현된다(실시예 6 참조).
MTSP6은 또한 다음을 포함하는 수개의 종양 세포주에서 발현된다: HeLa S3 > 직장결장 선암종(SW480) > 백혈병 MOLT-4 > 백혈병 K-562. 마우스 이종이식 모델에서, MTSP6 전사체는 폐 암종(LX-1)에서 강하게 검출되었으며, 췌장 선암종(GI-103)에서 중간 정도로 검출되었으며, 난소 암종(GI-102)에서 약하게 검출되었고 결장 선암종(GI-112 및 CX-1), 유방 암종(GI-101), 폐 암종(GI-117) 및 전립선 선암종(PC3)에서 약하게 검출되었다. MTSP6 전사체는 또한 유방암 세포주 MDA-MB-231, 전립선암 세포주 PC-3에서 검출되었지만, HT-1080 사람 섬유육종 세포주에서는 검출되지 않았다. MTSP6은 또한 유선 암종 cDNA(제조원: Clontech)에서 발현된다. MTSP6는 또한 난소 종양 세포에서 과발현된다.
MTSP7
MTSP7 전사체는 폐 암종(A549 세포주), 백혈병 (K-562 세포주) 및 자궁경부 암종(HeLaS3 세포주)에서 검출되었다. MTSP7은 폐, 결장, 전립선, 유방, 자궁경부 종양 및 기타 종양에서 발현되는 것으로 사료된다.
MTSP9
MTSP9는 예를 들어, 식도 종양 조직, 폐 암종, 직장결장 암종, 림프종, 자궁경부 암종(HeLaS3) 및 백혈병 세포주 뿐만 아니라, 특정 종상 세포 및 조직에서 발현된다. MTSP9는 또한 유방, 전립선, 자궁경부 및 직장 암에 대한 마커일 수 있다.
MTSP9는 식도에서 고도로 발현되며 다수의 다른 조직에서는 낮은 수준으로 발현된다. MTSP9 전사체는 신장(성인 및 태아), 비장(성인 및 태아), 태반, 간(성인 및 태아), 흉선, 말초혈 백혈구, 폐(성인 및 태아), 췌장, 림프절, 골수, 기관, 자궁, 전립선, 정소, 난소 및 샘 기관(유선, 부신, 갑상선, 뇌하수체 및 타액선)에서 발견된다. MTSP9는 또한 식도 종양 조직 및 폐 암종에서 발현되며, 직장결장 암종, 림프종, 자궁경부 암종 (HeLaS3) 및 백혈병 세포주에서 낮은 수준으로 발현된다.
MTSP10
MTSP10은 예를 들어, 식도 종양 조직, 폐 암종, 전립선암, 췌장 및 유방 암 및 세포주 뿐만 아니라, 특정 세포 및 조직(예를 들어, 조직 특이적 발현 프로필에 대해 실시예 참조)에서 발현된다. 활성화된 MTSP10의 수준은 전립선암, 자궁암, 폐 식도암 또는 직장암 또는 백혈병 또는 기타 암의 진단지표일 수 있다. 피험자에서 세포상이나 세포 부근 또는 체액내의 MTSP10의 발현 및/또는 활성화는 유방암, 전립선암, 폐암, 결장암, 식도암 및 기타 암의 마커일 수 있다.
MTSP10 전사체는 췌장, 폐 및 신장에서 검출되었다. MTSP10 전사체는 또한 소장 마라톤-레디(Marathon-Ready) cDNA(제조원: Clontech)에서 검출되었다. MTSP10 전사체는 유방 암종(GI-101), 폐 암종(LX-1 및 GI-117), 난소 암종 (GI-102), 및 췌장 선암종(GI-103)에서 검출되었다. MTSP10 전사체는 전립선 선암종(PC3)에서 약하게 검출되었다. MTSP10 전사체는 또한 누드 마우스에서 성장한 CWR22R 전립선 종양에서 검출되었다. 어떠한 명백한 신호도 2가지 형태의 직장 선암종(GI-112 및 CX-1)에서 검출되지 않았다.
MTSP12
MTSP12 전사체는 췌장, 폐 및 신장에서 검출되었다. MTSP12 전사체는 또한 소장 마라톤-레디 cDNA(제조원: Clontech)에서 검출되었다. MTSP12 전사체는 유방 암종(GI-101), 폐 암종 (LX-1 및 GI-117), 난소 암종 (GI-102) 및 췌장 선암종 (GI-103)에서 검출되었다. MTSP12 전사체는 전립선 선암종(PC3)에서 약하게 검출되었다. MTSP12 전사체는 또한 누드 마우스에서 성장한 CWR22R 전립선 종양에서 검출되었다. 어떠한 명백한 신호도 2가지 형태의 결장 선암종(GI-112 및 CX-1)에서 검출되지 않았다.
MTSP20
MTSP20은 폐, 결장, 자궁경부 종양 및 백혈병 세포에서 발현된다. 이는 또한 유방, 난소, 췌장, 전립선 종양 및 기타 종양에서 발현될 수 있다. MTSP20 전사체는 간, 림프절, 소뇌, 췌장, 전립선, 자궁, 정소, 샘(부신, 갑상선 및 타액선), 흉선, 신장 및 비장에서 검출되었다. 낮은 전사체 수준은 폐, 태반, 방광, 난소, 소화계, 순환계 및 뇌의 다른 부분에서 발견되었다. MTSP20은 또한 폐 암종(A519), 직장결장 암종(SW480), 림프종(Raji 및 Daudi), 자궁경부 암종(HeLaS3) 및 백혈병 (HL-60, K-562 및 MOLT-4) 세포주를 포함하는 특정 종양 세포주에서 발현된다.
MTSP22
MTSP22는 자궁 조직, 흉선, 지방 조직 및 림프절에서 발현된다. 이는 또한 폐, 위, 자궁, 유방, 난소, 전립선 종양 및 기타 종양에서 발현될 수 있다. MTSP22 전사체는 몇몇 자궁 조직 샘플에서 검출되었으나, 이의 매치되는 종양 샘플에서는 검출되지 않았다. 42개의 자궁 샘플 중 하나에서, MTSP22는 종양 및 이의 전이성 조직에서 발현되나, 정상 조직 대응부에서는 발현되지 않는다. MTSP22는 또한 몇몇 위 종양 및 폐 종양에서 발현되나, 이의 정상 조직 대응부에서는 발현되지 않는다. MTSP22는 또한 췌장의 정상 조직 매치되는 cDNA 쌍에서 발현된다. MTSP22-암호화 cDNA는 흉선, 지방 조직 및 림프절에서 검출되었다.
MTSP25
MTSP25는 유방, 결장, 자궁, 난소, 신장, 전립선, 정소 암 조직에서 발현된다. 이는 또한 폐, 위, 전립선 종양 및 기타 종양에서 발현될 수 있다. MTSP25 전사체는 림프절에서 약하게 발현되었다. 암 프로필화 어레이 분석시, MTSP25는 전립선 샘플(정상 및 암 샘플)에서 고도로 발현된다. MTSP25는 신장 종양 샘플에서 고도로 발현되었으나, 이의 정상 조직 대응부에서는 발현되지 않았다. MTSP25는 또한 유방암 샘플에서 발현되었으나, 이의 정상 조직 대응부에서는 발현되지 않았다. MTSP25는 정상 자궁 샘플에서 발현되었으나, 이의 종양 샘플 대응부에서는 발현되지 않았다. MTSP25는 또한 난소암 샘플에서 발현되었다. 상기 3가지 샘플 가운데, MTSP25의 발현은 매치된 정상 조직 대응부 중 하나에서 또한 검출되었다. 또한, MTSP25 발현은 종양 샘플내에서 결장 cDNA 쌍에서 검출되었다.
PCR 분석은 MTSP25 cDNA가 정소 및 유선 선암종에서 강하게 검출되었고, 뇌, 태반, 폐, 비장, 전립선, 소장, 결장 및 백혈구에서 약하게 검출되었으며, 심장, 간 및 췌장에서 매우 약하게 검출되었음을 제시하였다.
2. 엔도텔리아제
엔도텔리아제는 종양 성장과 증식 및 기타 과증식 장애(예: 재협착, 반흔, 당뇨병성 망막병증, 안구 전방의 질환 및 장애)와 관련된 바람직하지 않은 혈관신생을 포함하는 다양한 증식 과정에 관여하는 세포, 특히 내피 세포, 특히 증식하는 내피 세포에서 발현되는 세포 표면 프로테아제 부류이다[참조: 2000년 11월 20일자로 출원된 미국 출원 제09/717,473호 및 국제 PCT 출원 제 PCT/US00/31803호].
증식성 질환
엔도텔리아제는 비정상적 혈관신생과 관련된 임의의 장애의 치료를 위한 치료제의 전달에 특히 유용한 표적이다. 내피 세포는 모(侮) 미세혈관으로부터 신규한 혈관의 생성인 혈관신생에서 중요한 역활을 한다. 혈관신생은 암의 전이 및 다양한 기타 장애의 병리학에서 큰 역활을 한다.
조절된 혈관신생 및 조질되지 않은 혈관신생은 유사한 방식으로 진행된다. 기저막으로 둘러싸여진 혈관주위 세포와 내피 세포는 모세혈관을 형성한다. 혈관신생은 내피 세포와 백혈구에 의해 방출된 효소에 의한 기저막의 미란(erosion)으로 시작된다. 이어서, 혈관의 구경(lumen)을 둘러싸고 있는 내피 세포가 이러한 기저막을 통하여 돌출된다. 혈관신생 자극기는 이러한 내피 세포가 이와 같이 미란된 기저막을 통하여 이동하도록 유도한다. 이동하는 세포는 모 혈관으로부터 뻗어 나온 "움(sprout)"을 형성시키며, 여기서 내피 세포가 유사분열되어 증식된다. 이러한 내피성 움은 서로 통합하여 새로운 혈관을 생성시키는 모세관 루프를 형성한다.
혈관신생, 조절제 및 관련 질환
혈관신생은 혈관신생 자극인자 및 억제인자 시스템에 의해 고도로 조절된다. 공지된 혈관신생 자극인자의 예로는 특정 성장 인자, 사이토킨, 단백질, 펩타이드, 탄수화물 및 지질이 포함된다[참조: Norrby (1997) APMIS 105:417-437); Polverini (1995) Crit. Rev. Oral. Biol. Med. 6:230-247]. 각종 내인성 및 외인성 혈관신생 억제인자가 당해 분야에 공지되어 있다[참조: Jackson et al. (1997) FASEB 11:457-465; Norrby (1997) APMIS 105:417-437); and O'Reilly (1997) Investigational New Drugs, 15:5-13].
혈관신생은 정상적인 태반, 배아, 태아 및 출생후 발육 및 성장에 필수적이나, 매우 특수한 제한된 상황을 제외하고는 대부분 성인기에서는 생리학적으로 일어나지 않는다. 예를 들어, 혈관신생은 통상적으로 상처 치유, 태아 및 배아 발달 및 황체, 자궁내막 및 태반의 형성시 관찰된다. 성인의 혈관신생은 흔히 질환 상태와 관련된다.
지속적으로 조절되지 않은 혈관신생은 다수의 질환 상태, 종양 전이 및 내피 세포의 비정상적 성장에서 나타나며 이러한 상태에서 보여지는 병리학적 손상을 뒷받침해준다. 조절되지 않은 혈관신생이 나타나는 다양한 병리학적 질환 상태를 통틀어서 혈관신생 의존성 또는 혈관신생 관련 질환으로 분류하였다.
혈관신생의 조절은 특정 질환 상태에서 변경되며, 다수의 경우에 이러한 질환과 관련된 병리학적 손상은 조절되지 않은 혈관신생과 관련된다[참조: 일반적으로, Norrby (1997) APMIS 105:417-437); and O'Reilly (1997) Investigational New Drugs 15:5-13]. 따라서, 혈관신생은 각종 질환, 예를 들어, 류마티스 관절염과같은 각종 염증 질환, 건선, 당뇨병성 망막병증, 익상편 재발, 엑시머 레이저 수술과 녹내장 제거술 후 반흔, 안구 전방의 각종 장애를 포함하는 특정 안구 장애, 만성 염증 질환, 상처 복구, 순환계 장애, 크레스트 증후군, 피부 질환[참조: 미국 특허 제5,593,990호, 제5,629,327호 및 제5,712,291호] 및 고형 신생물 및 혈관 종양을 포함는 명백한 암의 징후 또는 진행에 관여한다. 혈관신생은 고형 종양의 성장과 유지 및 이의 전이에 필수적이다. 이러한 활성의 억제, 제거 또는 조절은 상기 질환들의 병인에 영향을 미쳐야 하며 치료학적 중재점으로서 작용해야 한다. 질환 상태에 있어, 혈관신생의 방지는 신규한 미세혈관계의 침입에 의해 유발된 손상을 피할 수 있다. 혈관신생 과정의 조절을 목적으로 하는 치료요법은 이들 질환의 제거 또는 완화를 유도할 수 있다. 따라서, 혈관신생을 표적화시키고 비정상적 또는 조절되지 않은 혈관신생을 조절, 특히 억제하는 치료제를 개발해야할 필요가 있다.
따라서, 엔도텔리아제 기질을 함유하는 접합체를 류마티스 관절염, 건선, 당뇨병성 망막병증, 익상편 재발, 엑시머 레이저 수술과 녹내장 제거술 후 반흔, 안구 전방의 각종 장애를 포함하는 특정 안구 장애, 심혈관 장애, 자가면역 질환, 만성 염증 질환, 상처, 순환계 장애, 크레스트 증후군, 재협착, 건선 및 기타 피부 질환[참조: 미국 특허 제5,593,990호, 제5,629,327호 및 제5,712,291호] 및 고형 신생물 및 혈관 종양을 포함하는 명백한 암을 포함하나 이에 제한되지 않는 질환의 치료를 위한 치료제를 전달하는데 사용할 수 있다.
엔도텔리아제 1 및 2
엔도텔리아제의 예에는 엔도텔리아제 1 및 엔도텔리아제 2로 명명되는 2가지의 상이한 엔도텔리아제 및 변이형이 있다(서열 21 내지 27 참조). 계열의 다른 구성원은 본원에서 동정된 엔도텔리아제의 프로테아제 도메인과 40%, 60%, 80%, 90%, 95% 또는 98% 이상의 서열 동일성을 갖거나 높은 엄격성 조건하에 본원에서 제공된 엔도텔리아제의 프로테아제 도메인을 암호화하는 핵산의 전체 길이를 따라서 하이브리드화하고 내피 세포에서 발현되는 유전자를 프로빙하거나 이러한 유전자에 대해 라이브러리를 조사함으로써 동정할 수 있다.
대안으로 및 낮은 서열 동일성을 가질 수 있는 엔도텔리아제를 동정하는 방식으로서, 엔도텔리아제는 EST 또는 프로테아제와 유사한 서열을 갖는 기타 핵산 단편을 동정한 다음, 이러한 단편을 프로브로서 사용하여 전체 길이 프로테아제 또는 이의 프로테아제 도메인을 암호화하는 cDNA 클론을 동정 및 선택하고, 트랜스막 단백질의 특징을 갖는 것들을 동정한 다음, 유전자 발현 프로필을 측정하여 내피 세포의 표면에서 발현되는 것들을 동정하는 바와 같은 방법을 사용하여 동정할 수 있다. 프로테아제 활성을 가지며 트랜스막 도메인과 세포외 도메인을 포함하고 내피 세포에서 발현되는 암호화된 단백질이 엔도텔리아제이다. 내피 세포에서 발현되는 트랜스막 프로테아제를 암호화하는 단백질 또는 이러한 단백질을 암호화하는 유전자를 동정하기 위한 임의의 방법이 본원에서 고려된다.
엔도텔리아제 1
엔도텔리아제의 예로는 엔도텔리아제 1 및 엔도텔리아제 2가 있다. 이들은 내피 세포에서 발현된다. 전체 길이 엔도텔리아제 1의 예는 서열 42에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 엔도텔리아제이다[참조: 편평 세포 암종 및 전립선 종양에서 발현되는 DESC1로서 명명되는 유전자를 기술하는 국제 PCT 출원 제WO 00/5006호]. 주지된 바와 같이, 엔도텔리아제는 내피 세포에서 발현된다. 이의 프로테아제 도메인은 서열 22에 제시한다.
엔도텔리아제 1의 발현 프로필
엔도텔리아제 1의 조직 분포와 관련된 정보를 수득하기 위해서, 클론 H117의 DNA 삽입체를 76개 상이한 사람 조직(카탈로그 번호 7775-1; 사람 다중 조직 발현(MTE) 어레이; 제조원: CLONTECH, Palo Alto, CA)으로 구성된 RNA 블롯을 프로빙하는데 사용하였다. 현저한 발현은 식도에서 관찰되었으며, 낮은 발현 수준은 위, 타액선, 췌장, 전립선, 방광, 기관 및 자궁에서 관찰되었다. RNA 블롯(카탈로그 번호 7765-1 및 7782-1; 사람 근육 및 소화계 다중 조직 노던(MTN) 블롯; 제조원: CLONTECH, Palo Alto, CA)을 사용한 노던 분석은 발현이 식도로 제한됨을 확인시켰다. 2개의 전사체(약 1.7 및 2kb)가 식도에서 검출되었다. 엔도텔리아제 1은 또한 제대혈 내피 세포인 PC3 및 LnCAP 세포에서 발현된다.
엔도텔리아제 2 및 엔도텔리아제 2를 암호화하는 핵산
엔도텔리아제 2-S 및 엔도텔리아제 2-L로서 명명되는, 엔도텔리아제 2의 2개의 스플라이스 변이체가 본원에서 예시된다(서열 23 내지 26 참조). 엔도텔리아제 2-S를 암호화하는 핵산(서열 23)의 개방 판독 프레임(open reading frame)은 562개 아미노산 단백질(서열 24)로 전사되는 1,689bp로 구성되며, 엔도텔리아제 2-L의 ORF는 688개 아미노산 단백질(서열 26)로 전사되는 2,067bp(서열 25)로 구성된다.
엔도텔리아제 2-S의 프로테아제 도메인을 암호화하는 핵산은 242개 아미노산 단백질(서열 23 및 24의 아미노산 321번 내지 562번)로 전사되는 729bp로 구성되며, 엔도텔리아제 2-L의 프로테아제 도메인을 암호화하는 핵산은 368개 아미노산 단백질(서열 25 및 26의 아미노산 321번 내지 688번)로 전사되는 1,107bp로 구성된다.
엔도텔리아제-2 단백질
서열 22, 24, 26 및 27의 아미노산 서열을 포함하거나 상기 기술한 조건하에 이러한 서열에 하이브리드화되는 핵산에 의해 암호화되는 바와 같은 상기 주지된 엔도텔리아제 및/또는 이의 프로테아제 도메인의 어느 하나 및 모두는 본원의 방법에서 사용하기 위해 고려된다. 또한, 본원에서는 상기 표 1에 제시된 바와 같은 아미노산 서열 변화를 포함하고 프로테아제 활성을 보유하는 단백질이 고려된다.
정상 및 종양 조직에서 엔도텔리아제 2의 유전자 발현 프로필 및 전사체 크기
내피 세포에서의 발현 이외에, 엔도텔리아제 2는 태반, 췌장, 갑상선, 간 및 폐 조직에서 발현된다. 이는 또한 유선, 타액선, 신장, 기관, 식도, 맹장, 심장 및 태아 폐에서 낮은 수준으로 발현된다. 엔도텔리아제 2는 일부 종양 세포주 및 폐 종양 및 결장 종양을 포함하고 유방 암종, 폐 암종, 결장 선압종, 췌장 선암종(GI-103) 및 난소 암종을 포함하는 특정 종양 세포주에서도 발현된다. 이는 또한 전립선 및 섬유육종 세포주에서 검출된 바 있다.
C. 접합체
세포 표면상의 프로테아제, 특히 II형 막-결합된 세린 프로테아제 및 엔도텔리아제를 포함하는 세린 프로테아제에 대한 기질인 접합체가 제공된다. 세포-부착된 또는 세포-국재화된 프로테아제를 포함하는 임의의 세포 표면 프로테아제가 본원에서 고려된다. 일반적으로, 필수 조직에서 높은 수준으로 활성 형태로서 발현된 프로테아제는 이상적 표적 후보가 아니다. 당해 프로테아제는 비교적 제한된 수의 세포에서 발현되거나, 종양 세포 및 질환 상태에 관여하는 내피 세포 및 면역 세포와 같은 세포에서 높은 수준으로 발현되거나 이러한 질환 상태에 관여하는 세포 부근의 질환 상태에서 나타나는 프로테아제를 포함한다. 예를 들어, 내피 세포는 혈관신생에서의 이의 역활로 인하여 수많은 증식 장애에 관여하며, 면역 세포는 암 및 질병 및 염증 질환을 포함하는 다수의 질환 진행에 관여한다. 다른 세포 표면 프로테아제는 정상 세포보다는 특정 종양에서 높은 수준으로 발현된다. 이러한 프로테아제가 질환에서 역활을 하는지의 여부와 관계없이, 질환 상태에 관여하는 세포에서의 이의 보다 높은 발현은 본원에서 제공되는 접합체내의 치료제를 표적화를 위해 사용하기에 충분하다.
세포독성제와 같은 치료제를 함유하는 접합체는 세포-부착된 및 세포-국재화된 프로테아제를 포함하는 세포 표면 프로테아제에 의해 절단시 활성화된다. 이러한 프로테아제의 예로는 MTSP1, MTSP3, MTSP4, MTSP6, MTSP7, MTSP9, MTSP10, MTSP12, MTSP20, MTSP22, MTSP25, 유로키나제 및 엔도텔리아제를 포함하나 이에 제한되지 않는 MTSP가 있다. 따라서, 이러한 프로테아제들로 표적화된 접합체는 치료제가 투여될 때에는 불활성이며 표적화된 세포 또는 조직의 부근에서 최종적으로활성화되는 전구약물이다. 트랜스막 프로테아제와 같은 세포 표면 프로테아제가 의도하는 표적이지만, 방출된, 분비된 또는 가용성 형태 등의 어떠한 프로테아제라도 표적화될 수 있다.
따라서, 세포독성제와 같은 치료제, 표적화된 세포 표면 프로테아제에 대한 기질(즉, 펩타이드성 기질)인 펩타이드성 잔기 및 임의로 링커를 함유하는 접합체는 세포 표면 프로테아제가 작용하기 전에는 실질적으로 불활성이다. 접합체내의 치료제는 상기 접합체의 펩타이드성 기질이 세포 표면 프로테아제에 의해 절단되는 경우 활성화된다. 세포독성제와 같은 치료제는 유리 제제로서 방출되거나, 또는 접합체내에서 임의로 링커를 통해서 당해 제제가 연결되어 있었던 펩타이드성 기질(P1-P2-P3-등 (즉, N-말단) 또는 P1'-P2'-등 (즉 C-말단)의 일부에 커플링되어 방출된다. 이러한 형태의 세포독성제들은 프로테아제를 발현하는 세포의 부근에서 방출된다. 특정 양태에서, 활성화는, 세포독성제와 같은 치료제가 세포 표면 프로테아제의 작용 후에 세포 막을 통과하거나 세포 또는 조직과 상호작용하여 치료 활성을 나타낼 수 있기 때문에 달성된다. 다른 양태에서는, 임의의 잔류 펩타이드성 잔기 또는 아미노산이 치료제로부터 절단됨으로써 치료제가 활성이 될 수 있다. 접합체는 치료제가 접합되는 경우에 실질적으로 불활성이기 때문에 전구약물로서 작용한다. 표적화된 프로테아제에 의해 절단시, 치료제는 활성 형태로 또는 표적화된 세포 또는 조직 또는 주위 환경에 의해 활성화되는 형태로 방출된다.
하나의 예시적 양태에서, 표적화된 제제는 세포독성제이고 본원에서 제공되는 방법 및 조성물에서 사용하기 위한 접합체는 화학식 (펩타이드i)s-(링커)q-(세포독성제)t[여기서, 펩타이드i는 세포 세포 표면 프로테아제 또는 방출된, 분비된 또는 그 밖의 결합되지 않은 프로테아제에 대한 펩타이드성 기질이며, s는 1 이상이거나, 1 내지 6 또는 1 또는 2이거나 1이고, 링커는 임의의 링커이고, q는 0 이상이거나 0 내지 4이거나 0 또는 1이고, 세포독성제는 항혈관신생제를 포함하여 항종양제, 항암제 또는 항유사분열제이고, t는 1 이상이거나 1 또는 2이다]의 화합물 또는 이의 유도체이다. 상기 접합체에서, 세포독성제는 펩타이드성 기질의 C-말단 또는 N-말단에 임의로 링커를 통해서 공유적으로 결합된다. 세포독성제와 같은 치료제가 펩타이드성 기질의 C-말단에 결합되는 양태에서, N-말단은 임의로 캡핑된다. 본원에서 사용하기 위한 N-말단 캡은 아실, 설포닐 및 카바모일 그룹을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 치료제가 펩타이드성 기질의 N-말단에 결합되는 양태에서, C-말단은 카복스아미드 유도체이다.
특정 양태에서, 펩타이드i는 세포 표면 프로테아제 또는 가용성 MTSP에 대한 펩타이드성 기질이므로, 실질적으로 불활성인 접합체는 이러한 프로테아제의 작용시 P1-P1' 결합이 절단됨으로써 시험관내 및 생체내에서 세포독성 활성과 같은 치료학적 활성을 나타내는 화학식 (펩타이드a)s-(링커)q-(치료제)t의 화합물 또는 이의 유도체를 방출한다. 상기 화합물에서, 펩타이드a는 P1-P1' 결합에서의 절단으로부터 생성되는 펩타이드i의 절단된 형태이다.
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 방법 및 조성물에서 사용하기 위한 접합체는 세포 표면 프로테아제 또는 가용성 MTSP에 대한 펩타이드성 기질의 C-말단 및 N-말단에 임의로 링커1및 링커2를 통해 각각 연결된, 동일하거나 상이한 2개의 세포독성제와 같은 치료제를 지닌다. 상기 양태에서, 접합체는 화학식 (치료제1)x-(링커1)w-(펩타이드i)s-(링커2)q-(치료제2)t[여기서, 펩타이드i는 세포 표면 프로테아제 또는 가용성 MTSP에 대한 펩타이드성 기질이고, s는 1 이상이거나 1 내지 6이거나 1 또는 2이거나 1이고, 링커1및 링커2는 각각 독립적으로 임의의 링커이고 동일하거나 상이하고, q 및 w는 각각 독립적으로 0 이상이거나 0 내지 4이거나 0 또는 1이며, 치료제는 동일하거나 상이하게 항종양제, 항암제 또는 항유사분열제이며, t 및 x는 각각 독립적으로 1 이상이거나 1 또는 2이다]의 화합물 또는 이의 유도체이다.
이러한 양태에서, 펩타이드i는 세포 표면 프로테아제 또는 가용성 MTSP에 대한 펩타이드성 기질이므로, 실질적으로 불활성인 접합체는 이러한 프로테아제의 작용시 펩타이드성 쇄의 한 지점에서 절단되어 화학식 (치료제1)x-(링커1)w-(펩타이드a1)s및 (펩타이드a2)s-(링커2)q-(치료제2)t의 2개의 화합물 또는 이들의 유도체를 방출한다. 방출된 치료제들은 활성이거나 세포, 조직 또는 주위 환경에 의해 추가로 활성화된다. 이들 화합물에서, 펩타이드a1및 펩타이드a2는 P1-P1' 결합에서의 절단으로부터 생성되는 펩타이드i의 각각 N-말단 및 C-말단 절단된 부분이다.
하나의 양태에서, 본원에서 제공된 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체는 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 유도체이다.
Xn-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-(L)n-Z
상기 화학식에서,
Z는 치료제이고,
L은 링커이고,
l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
l은 0 또는 1이며, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는 1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에, m은 0 또는 1이고,
u, k 및 r은 다음과 같이 선택된다:
u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k 및 r은 0이고, u가 1인 경우에 k는 0또는 1이고, k가 0인 경우에 r은 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이고,
n은 0 또는 1이고,
Xn은 수소 또는 아실, 설포닐 또는 카바모일 캡이며,
P6 내지 P3'은 하기에서 정의하는 바와 같은 아미노산 잔기이다.
상기 양태에서, P6 내지 P3 잔기는 펩타이드 결합 또는 펩타이드 결합 대용물에 의해 연결된다. 따라서, 접합체의 P6 내지 P3' 부분은 본원에서 정의하는 바와 같은 펩타이드성 기질이다.
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체는 하기 화학식 II의 화합물 또는 이의 유도체이다.
Z-(L)n-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-Xc
상기 화학식에서,
Z는 치료제이고,
L은 링커이며,
l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
l은 0 또는 1이고, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는 1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에 m은 0 또는 1이고,
u, k 및 r은 다음과 같이 선택된다:
u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k 및 r은 0이고, u가 1인 경우에 k는 0 또는 1이고, k가 0인 경우에 r은 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이며,
n은 0 또는 1이고,
Xc는 결합된 아미노산 잔기의 카보닐 그룹과 함께 카복실산 또는 카복스아미드 그룹을 형성하고,
P6 내지 P3'는 하기에서 정의하는 바와 같은 아미노산 잔기이다.
상기 양태에서, P6 내지 P3' 잔기는 펩타이드 결합 또는 펩타이드 결합 대용물에 의해 연결된다. 따라서, 접합체의 P6 내지 P3' 부분은 본원에서 정의하는 바와 같은 펩타이드성 기질이다.
추가의 양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체는 하기 화학식 III의 화합물 또는 이의 유도체이다.
Z1-(L1)n-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-(L2)v-Z2
상기 화학식에서,
Z1및 Z2는 각각 치료제이고 동일하거나 상이하며,
L1및 L2는 각각 링커이며 동일하거나 상이하고,
l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
l은 0 또는 1이고, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는 1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에 m은 0 또는 1이고,
u, k 및 r은 다음과 같이 선택된다:
u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k 및 r은 0이고, u가 1인 경우에 k는 0 또는 1이고, k가 0인 경우에 r은 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이며,
n 및 v는 각각 독립적으로 0 또는 1이고,
P6 내지 P3'는 하기에서 정의하는 바와 같은 아미노산 잔기이다.
상기 양태에서, P6 내지 P3' 잔기는 펩타이드 결합 또는 펩타이드 결합 대용물에 의해 연결된다. 따라서, 접합체의 P6 내지 P3' 부분은 본원에서 정의하는 바와 같은 펩타이드성 기질이다.
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체는 하기 화학식 IV의 화합물 또는 이의 유도체이다.
Xn-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-(P4')s-(L)n-Z
상기 화학식에서,
Z는 치료제이고,
L은 링커이며,
l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
l은 0 또는 1이고, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는 1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에 m은 0 또는 1이고,
u, k, r 및 s는 다음과 같이 선택된다:
u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k, r 및 s는 0이고, u가 1인 경우에 k는 0 또는 1이고, k가 0인 경우에 r 및 s는 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이며, r이 0인 경우에 s는 0이고, r이 1인 경우에 s는 0 또는 1이고,
n은 0 또는 1이고,
Xn은 수소, 또는 아실, 설포닐 또는 카바모일 캡이며,
P6 내지 P4'는 하기에서 정의하는 바와 같은 아미노산 잔기이다.
상기 양태에서, P6 내지 P4' 잔기는 펩타이드 결합 또는 펩타이드 결합 대용물에 의해 연결된다. 따라서, 접합체의 P6 내지 P4' 부분은 본원에서 정의하는 바와 같은 펩타이드성 기질이다. 또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체는 하기 화학식 V의 화합물 또는 이의 유도체이다.
Z-(L)n-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-(P4')s-Xc
상기 화학식에서,
Z는 치료제이고,
L은 링커이며,
l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
l은 0 또는 1이고, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는 1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에 m은 0 또는 1이고,
u, k, r 및 s는 다음과 같이 선택된다:
u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k, r 및 s는 0이고, u가 1인 경우에 k는 0 또는 1이고, k가 0인 경우에 r 및 s는 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이며, r이 0인 경우에 s는 1이고, r이 1인 경우에 s는 0 또는 1이며,
n은 0 또는 1이고,
Xc는 결합된 아미노산 잔기의 카보닐 그룹과 함께 카복실산 또는 카복스아미드 그룹을 형성하고,
P6 내지 P4'는 하기에서 정의하는 바와 같은 아미노산 잔기이다.
상기 양태에서, P6 내지 P4' 잔기는 펩타이드 결합 또는 펩타이드 결합 대용물에 의해 연결된다. 따라서, 접합체의 P6 내지 P4' 부분은 본원에서 정의하는 바와 같은 펩타이드성 기질이다.
추가의 양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체는 하기 화학식 VI의 화합물 또는 이의 유도체이다.
Z1-(L1)n-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-(P4')s-(L2)v-Z2
상기 화학식에서,
Z1및 Z2는 각각 치료제이고 동일하거나 상이하며,
L1및 L2는 각각 링커이며 동일하거나 상이하고,
l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
l은 0 또는 1이고, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는 1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에 m은 0 또는 1이고,
u, k, r 및 s는 다음과 같이 선택된다:
u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k, r 및 s는 0이고, u가 1인 경우에 k는 0 또는 1이고, k가 0인 경우에 r 및 s는 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이며, r이 0인 경우에 s는 0이며, r이 1인 경우에 s는 0 또는 1이며,
n 및 v는 각각 독립적으로 0 또는 1이고,
P6 내지 P4'는 하기에서 정의하는 바와 같은 아미노산 잔기이다.
상기 양태에서, P6 내지 P4' 잔기는 펩타이드 결합 또는 펩타이드 결합 대용물에의해 연결된다. 따라서, 접합체의 P6 내지 P3' 부분은 본원에서 정의하는 바와 같은 펩타이드성 기질이다.
예시적 펩타이드성 기질, 치료제, 링커 및 화학식 I 내지 VI의 예시적 접합체는 하기에서 보다 상세히 기술한다. 본원에서는, 다양한 화학식 I 내지 VI에 대해 하기에서 언급하는 그룹의 모든 조합 및/또는 순열로부터 야기되는 접합체들을 본 발명의 범위내에 포함시키고자 한다.
1. 펩타이드성 기질
접합체에서 사용하고자 고려되는 펩타이드성 기질은 표적화된 세포 표면 프로테아제 또는 이의 가용성, 분비된 또는 방출된 형태이며, 접합체내의 임의의 치료제가 실질적으로 불활성이 되도록 하기에 충분한 수의 아미노산 잔기를 함유한다. 예시적 양태에서, 치료제가 예를 들어, 독소루비신인 경우에, 접합체는 접합된 치료제가 세포 막을 통과할 수 없기 때문에 실질적으로 불활성이다. 특정 양태에서, 펩타이드성 기질은 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개 이상의 아미노산 잔기를 함유하며 9개 이하 또는 10개의 잔기를 함유할 수 있다. 보다 긴 펩타이드성 기질은 절단시 수득되는 치료제 또는 치료제-아미노산 또는 치료제-펩타이드성 잔기 접합체가 생체내 및 시험관내에서 목적하는 치료 효과를 나타내는 경우에 당해 접합체에서 사용될 수 있다.
따라서, 본원에서 제공되는 접합체에서 사용하기 위한 예시적 펩타이드성 기질은 하나 이상의 아미노산(P1), 2개의 아미노산(P1-P1'), 3개의 아미노산 (P2-P1-P1')을 지니며 전형적으로는 4개, 5개 또는 6개의 아미노산 잔기(P3-P2-P1-P1',P4-P3-P2-P1-P1' 또는 P4-P3-P2-P1-P1'-P2')를 함유하며, 여기서 P1-P1' 결합은 예를 들어, 수용체에 결합된 uPA, MTSP 및 엔도텔리아제를 포함하나 이에 제한되지 않는 세린 프로테아제와 같은 세포 표면 프로테아제를 포함하나 이에 제한되지 않는 세포 표면 프로테아제 또는 이의 가용성, 분비된 또는 방출된 형태의 절단 부위이다. 펩타이드성 기질은 임의로 P5, P6 또는 P3' 아미노산 잔기를 추가로 지니며, 특정 양태에서는 P7, P8, P9, P10, P4', P5', P6' 잔기를 지닌다. 따라서, 본원에서 제공되는 접합체에서 사용하기 위한 펩타이드성 기질은 펩타-, 헥사-, 헵타-, 옥타- 및 노나-펩타이드성 기질이며, 프로테아제에 의한 접합체의 절단시 수득되는 치료제 또는 치료제-아미노산 또는 치료제-펩타이드성 잔기 접합체가 생체내 및 시험관내에서 목적하는 치료 효과를 나타내는 경우에 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개 이상의 잔기를 함유할 수 있다.
펩타이드성 기질은 치료제(또는 이러한 치료제가 연결된 링커)에 C-말단 잔기(즉, P1', P2' 또는 P3') 또는 N-말단 잔기(즉, P6, P5 또는 P4) 또는 임의로 내부 잔기를 통해 접합된다. 펩타이드성 기질은 예를 들어, 직쇄일 수 있으나 환화될 수 있거나 환화된 부위를 포함할 수 있다.
접합이 펩타이드성 기질의 C-말단을 통해서 이루어진 양태에서, 펩타이드성 기질은 임의로 N-말단에 아실 또는 카바모일 캡과 같은 캡을 지닌다. 접합이 펩타이드성 기질의 N-말단을 통해서 이루어진 양태에서, 펩타이드성 기질은 C-말단에 카복스아미드 그룹과 같은 말단 그룹을 추가로 지닌다.
접합체는 다수의 펩타이드성 기질과 다수의 치료제를 함유할 수 있다. 예를들어, 동일하거나 상이한 2개의 치료제를 함유하는 접합체에서, 치료제(들) 또는 이에 연결된 링커에의 접합은 펩타이드성 기질의 C-말단 및 N-말단 잔기를 통한 것일 수 있다.
상기 기질의 선택에 대해 기술한 방법을 적합한 기질을 디자인하는데 사용할 수 있다. 또한, 기질은 기타 프로테아제의 공지된 특이성에 기초하여 디자인할 수 있다. 예를 들어, 트립신-유형 및 트립신 패밀리 구성원의 특이성이 가능한 기질을 디자인하는데 도움이 될 수 있다. 특정 세린 프로테아제에 대한 기질 선호도는 다음과 같이 요약된다[참조: Harris et al. (2000) PNAS 97(14):7754-7759].
프로테아제 예시적 P1 잔기(들) 예시적 P2 잔기(들) 예시적 P3 잔기(들)
키모트립신 Tyr, Phe, Trp -- --
트립신 Arg, Lys -- --
트롬빈 Arg, Lys Phe Thr, Trp
플라스민 Lys, Arg Trp, Tyr, Met Gln
그랜자임(granzyme) B Asp -- --
사람 호중구 엘라스타제 Ala, Val, Ile -- --
조직 플라스미노겐 인자 Arg Ser, Gly, Ala Met, Tyr
유로키나제 Arg Ser, Ala Thr, Ser
인자 Xa Arg Gly --
접합체의 제조를 위한 통상적 프로토콜은 (1) 표적화된 프로테아제를 동정하는 단계; (2) 발현 및 검정 개발 단계; (3) 예를 들어, 발색성 또는 형광성 기질을 시험하여 선택된 표적 프로테아제에 의해 절단된 기질을 동정하고, 기질 파지 표시법(phage display)을 사용하여 표적화된 프로테아제에 의해 절단된 펩타이드성 기질을 동정하고, 천연 단백질 또는 펩타이드 기질 또는 프로테아제의 천연 억제제를 사용하고 조합 라이브러리를 사용하여 표적화된 프로테아제에 의해 절단된 기질을 동정함으로써 기질을 선별하는 단계; (4) 동정된 기질을 함유하는 접합체를 합성하는 단계 및 (5) 시험관내 검정, 세포 배양 검정, 생물학적 검정 및 생체내 동물 모델(예를 들어, 실시예 10 참조)을 포함하나 이에 제한되지 않는, 상기 접합체의 생물학적 평가 단계를 포함할 수 있다.
접합체는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 임의의 방법을 사용하여 디자인할 수 있다. 다음은 예시적 프로토콜을 제공한다. 먼저, 일련의 시판되는 발색성 및 형광성 펩타이드성 기질을 관심대상의 프로테아제(예시적 발색성 및 형광성 기질의 목록 및 하기 표의 예시 참조)에 의한 절단에 대해 시험할 수 있다. 이들 기질의 펩타이드성 부분은 프로테아제의 프라이밍되지 않은 결합 부위를 점유하며, 리포터 그룹은 절단성 결합의 프라이밍된 측면에 위치한다. 이어서, 프로테아제 의해 효과적으로 절단되는 기질의 구조에 기초하여 효과적 접합체를 디자인할 수 있다.
이와 같이 효과적으로 절단되는 기질의 펩타이드성 부분은 접합체의 프라이밍되지 않은 영역으로서 사용할 수 있으며, Ser-치료제[예: 세포독성제(예: 독소루비신)], Ser-Leu-치료제 또는 Ser-Ser-Leu-치료제는 접합체의 프라이밍된 영역으로서 사용할 수 있다. 상기 접합체 전구약물들이 절단되면 Ser-치료제, Ser-Leu-치료제 또는 Ser-Ser-Leu-치료제 화합물을 방출한다. 또 다른 양태에서, 방출된 Ser-치료제 내의 Ser은 Ala, hSer, Abu, Thr, Met, nLeu 및 Val을 포함하나 이에 제한되지 않은 다른 아미노산으로 대체될 수 있다. 또 다른 양태에서, 예를 들어, 치료제가 독소루비신인 경우에, 상기 치료제에 접합된 아미노산 잔기는 친수성 측쇄를 지닌다. 상기 아미노산 잔기는 Leu, Abu, nLeu, nVal, CHA, hCHA, (헥실)Gly, (알릴)Gly, (프로파길)Gly 및 (사이클로프로필)Ala를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 또 다른 양태에서, 예를 들어, 치료제가 탁솔인 경우에, 치료제에 접합된 아미노산 잔기는 입체적으로 크기가 크지 않은 측쇄를 지닌다. 상기 아미노산은 Gly 및 Ala를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 수득되는 P1'-치료제, P1'-P2'-치료제 또는 P1'-P2'-P3'-치료제 화합물은 생체내에서 활성 치료제로 추가로 처리될 수 있다.
프로테아제 기질에 대한 접합체 전구약물을 디자인하기 위한 다른 접근법은 프로테아제에 대한 최적의 하위부위 점유를 밝히기 위해 기질 파지 표시법을 사용하는 것이다. 이어서, 수득되는 정보를 사용하여 접합체의 프라이밍되지 않은 펩타이드성 부분을 디자인할 수 있다. 상기 기술한 바와 같이, 접합체의 프라이밍된 영역은 Ser-치료제, Ser-Leu-치료제 또는 Ser-Ser-Leu-치료제로서 고정될 수 있다.
효과적 전구약물 접합체를 디자인하기 위한 세번째 접근법은 프로테아제 기질의 프라이밍되지 않은 영역에 대한 최적의 잔기를 결정하기 위한 조합 형광성 기질 라이브러리의 사용을 포함한다. 이어서, 이러한 선택된 서열을 접합체 전구약물의 프라이밍되지 않은 부분으로서 사용할 수 있고, Ser-치료제(예: 독소루비신), Ser-Leu-치료제 또는 Ser-Ser-Leu-치료제를 접합체의 프라이밍된 영역으로서 사용할 수 있다. 이러한 방법들이 본원에서 제공되는 접합체의 펩타이드성 기질 부분을 디자인하는데 사용되었다. 예를 들어, GSGR을 포함하는 서열(및 TGR, SGR 및 신장된 변이체 등과 같은 관련 서열)은 u-PA를 표적 프로테아제로서 사용한 기질 파지 표시법 실험에 기초하거나 이로부터 유래된다. (R/K)-X-S-R 및 X-(R/K)-S-R과 같은 다수의 매트립타제 접합체 및 본원에서 제공되는 관련 서열은조합 라이브러리로부터의 데이터에 기초한다. 다른 양태에서, VSAR, PGR(플라스미노겐의 P3-P1로부터 유래) 및 관련 서열을 포함하는 uPA와 같은 프로테아제 표적의 천연 기질 또는 천연 억제제내의 서열이 u-PA-표적화된 접합체의 디자인에 사용된다. 또 다른 양태에서, D-HHT-Gly-Arg과 같은 발색성 기질로부터의 서열 및 관련 서열이 ET-1-표적화된 접합체의 디자인에 사용된다.
발색성/형광성 기질
효소 기질 구조
MTSP1 스펙트로자임 t-PA CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-pNA.AcOH
MTSP1 S 2765 N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl
MTSP3 스펙트로자임 fXIIa H-D-CHT-Gly-Arg-pNA.2AcOH
MTSP4a Spec PL H-D-Nle-HHT-Lys-pNA.2AcOH
MTSP5 S 2765 N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl
MTSP6 스펙트로자임 t-PA CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-pNA.AcOH
MTSP7 S 2366 피로Glu-Pro-Arg-pNA.HCl
MTSP9 Pefachrome fVIIa CH3SO2-D-CHA-But-Arg-pNA
MTSP10 스펙트로자임 t-PA CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-pNA.AcOH
MTSP22 S 2366 피로Glu-Pro-Arg-pNA.HCl
ET-1 스펙트로자임 t-PA CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-pNA.AcOH
ET-2 S 2765 N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA.2HCl
u-PA S-2444 피로Glu-Gly-Arg-pNA.HCl
a커플링된 검정, Spec PL의 존재하에 플라스미노겐의 활성화
간략하게 언급하면, 커플링된 검정의 경우, 플라스미노겐 또는 트립시노겐과 같은 효소를 활성화시키는 프로테아제의 능력을 시험한다. 이러한 검정을 수행하기 위해, 프로테아제는 플라스미노겐 또는 트립시노겐과 같은 지모겐에 대한 표지된 공지된 기질, 예를 들어, lys-플라스미노겐 또는 Spec PL(플라스민에 대해)의 존재하에 상기 지모겐과 함께 배양한다. 프로테아제가 지모겐을 활성화시킨다면, 플라스민 및 트립신과 같은 활성화된 효소는 기질의 스펙트럼 특성을 변화시킴으로써 기질을 분해시킬 것이다.
예시적 펩타이드성 기질
하기 설명은 MTSP1(또는 매트립타제), 엔도텔리아제 1 및 유로키나제와 같은 프로테아제에 의한 절단에 대한 예시적 펩타이드 기질 및 잔기의 특성에 대한 일반적 논의를 제공한다. 유사한 방식으로, 기타 세포 표면 프로테아제 또는 이의 가용성, 분비된 또는 방출된 형태에 의한 절단에 대한 펩타이드성 기질은, 선택된 프로테아제에 대해 펩타이드성 기질을 동정한 다음, 이러한 펩타이드성 기질을 함유하는 접합체를 제조함으로써 유사하게 디자인할 수 있다.
a. P1 잔기
본원에서 제공되는 접합체에서 사용하기 위한 펩타이드성 기질의 P1 위치에서 사용하기 위한 아미노산 잔기는 Arg, Arg 대용물 및 Lys를 포함한다. Arg 대용물은 아르기닌의 천연 측쇄와 실질적으로 동일한 방식으로 기능하여 실질적으로 동일한 결과를 초래하는 그룹 또는 잔기를 지니는 비천연 아미노산(예를 들어, MTSP1, 유로키나제 또는 엔도텔리아제에 대한 기질내의 P1 잔기로서 작용함)을 포함한다. Arg 대용물은 호모아르기닌의 측쇄; 구아니디노아미노프로필; 구아니디노아미노에틸; (Me)2아르기닌 측쇄; (Et)2아르기닌 측쇄; (4-아미노메틸)페닐메틸; 4-아미디노페닐메틸; 4-구아니디노페닐메틸 중 어느 하나를 측쇄로서 지니는 α-아미노산을 포함하나 이에 제한되지 않거나, Arg 대용물은(여기서, z는 0또는 1이다)[참조: Webb et al. (1991) J. Org. Chem. 56:3009]과 같은 입체형태적으로 속박된 아르기닌 유사체이거나, 측쇄는,,,또는(여기서, d는 0 내지 5 또는 1 내지 3의 정수이며, W는 N 또는 CH이다)과 같은 입체형태적으로 속박된 아르기닌 측쇄 또는 상기 그룹들의 일치환 또는 이치환된 N-알킬 유도체(여기서, 알킬은 특정 양태에서 저급 알킬, 예를 들어, 메틸이다)이다.
본원의 특정 양태에서, P1 잔기는 Arg이다.
b. P2 잔기
본원에서 제공되는 접합체에서, P2 잔기는 Phe, Ser, Gly, Ala, Ser(OMe), hSer, 1-메틸His, 3-메틸His, His, nVal, nLeu, Abu, (hS)Gly, Thr, Aib, CHA 및 Tyr로부터 선택된다. 또 다른 양태에서, P2 잔기는 Phe, Ser, Gly 및 Ala로부터 선택된다. 본원의 특정 양태에서, P2 잔기는 Ser 또는 Ala이다. 또 다른 양태에서, P2 잔기는 Gly 또는 Ala이다.
c. P3 잔기
본원에서 제공되는 접합체의 P3 위치에서 사용하기 위한 아미노산 잔기는 Arg, Lys, Gln, Quat, Arg 대용물, Ser, Thr, hSer, dSer, Pro, (hS)Gly, Tyr,4,4-디메틸Thr, Asn, Met(O2), Quat2, Quat3, Quat4및 Quat5를 포함한다. 다른 양태에서, P3 잔기는 Arg, Lys, Gln, Quat 및 Arg 대용물로부터 선택된다. Arg 대용물은 P1에 대해 상기 기술한 것들을 포함한다.
특정 양태에서, P3 잔기는 Gln 또는 Ser이다.
d. P4 잔기
본원에서 제공된 조성물 및 방법에서 사용하기 위해 제공된 접합체에서, P4 잔기는 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe, Val, N,N-디메틸Gly, β-Ala, Cys(Me), Gln, t-부틸Gly 및 nVal로부터 선택된다. 다른 양태에서, P4 잔기는 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe 및 Val로부터 선택된다. 추가의 양태에서, P4 잔기는 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Phe 또는 Val로부터 선택된다. 본원의 특정 양태에서, P4 잔기는 Arg 또는 Gly이다.
e. P5 및 P6 잔기
본원의 특정 양태에서, 접합체에서 사용되는 펩타이드성 기질은 P5 및 임의로 P6 잔기를 함유한다. P5 잔기는 Ile, Arg 및 Arg 대용물을 포함한다. 다른 양태에서, P5 잔기는 Arg 및 Arg 대용물을 포함한다. Arg 대용물은 P1 잔기에 대해 상기 기술한 것들을 포함한다. P6 잔기는 예를 들어, Leu, Val 및 Arg를 포함한다. 또 다른 양태에서, P6 잔기는 예를 들어, Leu를 포함한다.
f. P1' 잔기
본원에서 제공된 접합체의 P1' 잔기는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met, 6-아미노헥사노일, Thr 또는 hSer이다. 다른 양태에서, 본원에서 제공된 접합체의 P1' 잔기는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 또는 6-아미노헥사노일이다. 또 다른 양태에서, P1' 잔기는 Ser, Ala, hSer, Abu, Thr, Met, nLeu 또는 Val이다. 또 다른 양태에서, P1' 잔기는 Gly 또는 Ala이다. 또 다른 양태에서, P1' 잔기는 Ser, Ala 또는 Gly이다. 또 다른 양태에서, P1' 잔기는 Leu, Abu, nLeu, nVal, CHA, hCHA, (헥실)Gly, (알릴)Gly, (프로파길)Gly 또는 (사이클로프로필)Ala이다. 본원의 특정 양태에서, P1' 잔기는 Ala, Ser, Gly, Ile 또는 d-Ile이다.
g. P2' 잔기
본원의 특정 양태에서, 본원에서 제공된 접합체는 P2' 잔기를 지닌다. 본원에서 사용하기 위한 P2' 잔기는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met, 6-아미노헥사노일, hCHA, CHA, 헥실Gly, 알릴Gly 및 Phe를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 양태에서, 본원에서 사용하기 위한 P2' 잔기는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 또 다른 양태에서, P2' 잔기는 Ser, hSer, Abu, nLeu, nVal, CHA, hCHA, (알릴)Gly 또는 (헥실)Gly이다. 또 다른 양태에서, P2' 잔기는 Gly 또는 Ala이다. 또 다른 양태에서, P2' 잔기는 Leu, Abu, nLeu, nVal, CHA, hCHA, (헥실)Gly, (알릴)Gly, (프로파길)Gly 또는 (사이클로프로필)Ala이다. 추가의 양태에서, P2' 잔기는 Ala, Gly, Ile 또는 d-Ile이다.
h. P3' 잔기
본원의 다른 양태에서, 본원에서 제공된 접합체에서 사용되는 펩타이드성 기질은 P3' 잔기를 포함한다. 본원에서 사용하기 위한 P3' 잔기는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met, 6-아미노헥사노일, CHA 및 알릴Gly을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 또 다른 양태에서, P2' 잔기는 Ser, hSer, Abu, nLeu, nVal, CHA, hCHA, (알릴)Gly 또는 (헥실)Gly이다. 또 다른 양태에서, 본원에서 사용하기 위한 P3' 잔기는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 또 다른 양태에서, P3' 잔기는 Gly 또는 Ala이다. 또 다른 양태에서, P3' 잔기는 Leu, Abu, nLeu, nVal, CHA, hCHA, (헥실)Gly, (알릴)Gly, (프로파길)Gly 또는 (사이클로프로필)Ala이다.
i. P4' 잔기
본원의 다른 양태에서, 본원에서 제공된 접합체에서 사용되는 펩타이드성 기질은 P4' 잔기를 포함한다. 본원에서 사용하기 위한 P4' 잔기는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met, 6-아미노헥사노일, CHA 및 알릴Gly을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 다른 양태에서, 본원에서 사용하기 위한 P4' 잔기는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 또 다른 양태에서, P4' 잔기는 Gly 또는 Ala이다. 또 다른 양태에서, P4' 잔기는 Leu, Abu, nLeu, nVal, CHA, hCHA, (헥실)Gly, (알릴)Gly, (프로파길)Gly 또는 (사이클로프로필)Ala이다. 또 다른 양태에서, P4' 잔기는 Leu이다.
j. 캡
1) X n (N-말단 캡)
치료제가 펩타이드성 기질의 C-말단에 접합되는(즉, 접합체가 화학식 I의 화합물인) 양태에서, 펩타이드성 기질의 N-말단은 임의로 아실, 설포닐 또는 카바모일 유도체로 캡핑된다. 캡은 특정 양태에서, 접합체의 친수성을 증가시키는 것을 선택한다. 펩타이드성 기질-치료제 접합체가 추가의 친수성을 요구하지 않을 정도로 충분히 친수성인 양태에서, 아실 그룹과 같은 비-친수성 N-말단 캡이 사용될 수 있다. 증가된 친수성이 바람직한 양태에서, N-말단 아미노산은 친수성 차단 그룹을 사용하여 변형시킨다. 이러한 차단 그룹은 친수성 작용기의 존재에 기초하여 선택한다. 이러한 말단 아미노 그룹의 차단은 온혈 동물의 혈장중에 존재하는 외인성 아미노 펩티다제의 작용에 의한 이러한 펩티딜 치료제의 효소적 분해를 감소 또는 제거할 수도 있다.
접합체의 친수성을 증가시킴으로써 접합체의 수용해도를 증가시키는 N-말단 차단 그룹은 하이드록실화된 알카노일, 폴리하이드록실화된 알카노일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리코실레이트, 당 및 크라운 에테르를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본원의 특정 양태에서, N-말단 차단 그룹은 N-말단 차단 그룹은 화학식 a 또는 b의 그룹 중 하나이다.
상기 화학식에서,
R1및 R2는 다음의 (i) 또는 (ii)로부터 선택된다:
(i) R1및 R2는 각각 독립적으로 a) 수소; b) 비치환되거나 치환된 아릴, 비치환되거나 치환된 헤테로사이클릴, C3-C10사이클로알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, 할로겐, C1-C6퍼플루오로알킬, R4O-, R3C(O)NR3-, (R3)2NC(O)-, (R3)2N-C(NR3)-, R4S(O)eNH-, -CN, -NO2, R3C(O)-, -N3, -N(R3)2, 또는 R4OC(O)NR3-; c) 비치환된 C1-C6알킬; d) 치환된 C1-C6알킬(여기서, 치환된 C1-C6알킬 상의 치환체는 비치환되거나 치환된 아릴, 비치환되거나 치환된 헤테로사이클릴, C3-C10사이클로알킬, C2-C6알케닐, C2-C6알키닐, R3O-, R4S(O)eNH-, R3C(O)NR3-, (R3)2NC(O)-, (R3)2N-C(NR3)-, -CN, R3C(O)-, -N3, -N(R3)2및 R4OC(O)-NR3-이거나,
(ii) R1과 R2는 함께 -(CH2)f-(여기서, 하나의 탄소원자는 -O-, -S(O)e-, -NC(O)-, -NH- 및 -N(COR4)-로부터 선택되는 잔기에 의해 임의로 치환된다)를 형성하고,
R3은 수소, 비치환되거나 치환된 아릴, 비치환되거나 치환된 헤테로사이클릴, C1-C6알킬 및 C3-C10사이클로알킬로부터 선택되고,
R4는 비치환되거나 치환된 아릴, 비치환되거나 치환된 헤테로사이클릴, C1-C6알킬 및 C3-C10사이클로알킬로부터 선택되며,
e는 0, 1 또는 2이고,
a는 1, 2, 3 또는 4이며,
b는 0 또는 I 내지 100의 정수이고,
c는 0 내지 10이고, 단 b가 0인 경우, c는 1 내지 10이며,
f는 3, 4 또는 5이다.
특정 양태에서, R1및 R2는 각각 독립적으로 수소, OH, C1-C6알킬, C1-C6알콕시, C1-C6아르알킬 또는 아릴이다. 이러한 양태에서, a는 1, 2, 3 또는 4이고, b는 0 또는 1 내지 100의 정수이며, c는 0 내지 10이고, 단 b가 0인 경우, c는 1 내지 10이다.
다른 양태에서, N-말단 캡(Xn)은 수소이거나 하기 화학식 i, ii, iii 또는 iv의 화합물이다.
상기 화학식에서,
R1및 R2는 각각 독립적으로 수소, C1-C6알킬 및 아릴이고,
a는 1, 2, 3 또는 4이며,
a'는 0, 1, 2 또는 3이고,
b는 0 또는 1 내지 14의 정수이며,
c는 0 또는 1이고, 단 b가 0인 경우, c는 1이다.
다른 양태에서, Xn은 R30O-C(O)-, R31R32N-C(O)-, R33(CH2)kC(O)- 또는 H-C(O)-[여기서, k는 1 내지 4의 정수이거나 1 또는 2이고, R30은 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬 또는 헤테로아르알킬이며, R31및 R32는 각각 독립적으로 수소, 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아르알킬 또는 헤테로아르알킬이며, R33은 수소, 하이드록시, 알킬, 알케닐, 알키닐, 알콕시, 아릴, 아릴옥시, 헤테로아릴, 헤테로아릴옥시, 아르알킬, 아르알콕시, 헤테로아르알킬 또는 헤테로아르알콕시이다]이다.
본원의 특정 양태에서, Xn은 수소, 아세틸, 하이드록시아세틸, 2,3-디하이드록시프로피오닐, 2,3,4-트리하이드록시부타노일, PEG(1), PEG(2), PEG(4), PEG(6), PEG(14), PEG(15), PEG(16), PEG(17), PEG(18) 또는 PEG(19)이다. 본원의 다른 양태에서, Xn은 수소, 아세틸, 하이드록시아세틸, 석시닐, 퀴닐, 갈릴, 4-이미다졸릴아세틸, 코티니닐, 3-포스포닐프로피오닐, 글루로닐, 4-포스포닐부티릴, 글루타릴, 에톡시스쿠아릴 또는 PEG(2)이다. 추가의 양태에서, Xn은 수소, 아세틸, -C(O)NH2, HOCH2CH2C(O)-, 디아미노프로파노일 또는 NH2-(CH2)5-C(O)-이다. 또 다른 양태에서, Xn은 수소, 아세틸, 석시닐, 글루타릴, PEG(2) 또는 말로닐이다. 또 다른 양태에서, Xn은 수소, 아세틸, 석시닐, 글루타릴, PEG(2), 말로닐, 메톡시카보닐, 페닐설포닐, 3-메톡시프로파노일, 에톡시카보닐, 이소부톡시카보닐, 벤질옥시카보닐, 3급-부톡시카보닐, 4-옥소펜타노일, 2-(2-메톡시에톡시)에톡시)아세틸, 3,4-메틸렌디옥시페닐아세틸, 2-피리딜아세틸, 페녹시아세틸, 페닐아세틸, 메톡시아세틸, 2-메톡시에톡시카보닐, 2-메톡시에톡시아세틸, 3-페닐-2-하이드록시프로파노일, 펜트-4-이노일, 1-나프틸아세틸, 하이드록시아세틸, 3-메톡시카보닐프로파노일 또는 포르밀이다.
본원의 특정 양태에서, N-말단 캡 (Xn)은 아세틸, 글루타릴 또는 관련 아실, 설포닐 또는 카바모일 유도체이다. 캡핑 그룹은 접합체의 접합체의 전반적 물리화학적 특성에 영향을 미치는 보다 큰 잔기를 통한 단순 N-아세틸 잔기를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 캡핑 그룹을 적절하게 선택하여 비교적 친수성 또는 소수성인 어떠한 분자라도 표적 부위로 전달되게 할 수 있다. 하나의 양태에서, Xn은 아세틸이다.
2) X c (C-말단 캡)
치료제가 펩타이드성 기질의 N-말단에 접합되는(즉, 접합체가 화학식 II의 화합물인) 양태에서, 펩타이드성 기질의 C-말단은 카복실산 또는 카복스아미드 유도체이다. 캡핑 그룹을 적절하게 선택하여 비교적 친수성 또는 소수성인 어떠한 분자라도 표적 부위로 전달되게 할 수 있다.
하나의 양태에서, Xc는 결합된 카보닐 그룹과 함께 화학식 -C(O)NRdRe[여기서, Rd및 Re는 다음의 (i) 또는 (ii)로부터 선택된다: (i) Rd및 Re는 각각 독립적으로 수소, C1-C6-알킬, -C1-C6-알킬-OH, -C1-C6-알킬-디-OH, -C1-C6-알킬-트리-OH 및(여기서, b는 0 또는 1 내지 100의 정수이고, c는 0 또는 1이고, 단 b가 0인 경우, c는 1이다)이거나, Rd및 Re중 하나 이상이 수소 또는 C1-C6-알킬이 아니거나, (ii) Rd과 Re는 함께 -CH2CH2OCH2CH2- 디라디칼을 형성한다]의 카복스아미드 유도체를 형성한다.
2. 링커
접합체는 펩타이드성 기질을 치료제에 공유적으로 결합시키는 링커(즉, 화학식 I, II 및 III의 L, L1또는 L2)를 임의로 함유한다. 상기 링커는 접합체내에서 펩타이드성 부분이 세포 표면 프로테아제에 대한 기질인 접합체가 되게 하고, 치료제가 이러한 접합체내에 있는 경우 실질적으로 불활성이며 활성 형태로 또는 세포, 조직 또는 표적화된 조직의 환경에 의해 실질적으로 활성화되는 형태로 방출되도록 하는 어떠한 것이라도 될 수 있다.
예를 들어, 상기 링커는 탄수화물, 펩타이드, 디아민, 아릴아민 및/또는 탄화수소 코어 구조의 링커를 포함할 수 있다. 링커는 바람직하게는 합성에 의해 수득가능하며 자가-안정성 생성물을 제공하며, 접합체 활성을 방해하는 어떠한 고유의 생물학적 활성도 지니지 않는다. 이들은 용해도의 증가 또는 세포내에서 절단된 치료제를 수송하는데 보조하는 작용과 같은 바람직한 특성을 추가시킬 수 있다. 특정 양태에서, 일부 링커는 시험관내 및 생체내에서 효소적으로 절단될 수 있으며, 활성 치료제 또는 활성화가능한 치료제를 방출하는 단편일 수 있다. 치료제가 독소루비신인 양태에서, 링커는 예를 들어, 아미노당 다우노사민과 같은 당 및/또는 펩타이드이다.
하나의 양태에서, 본원에서 사용하기 위한 링커는, 치료제 상의 아민 잔기가 링커 단위와 연결되어 아미드 결합을 형성하고 펩타이드성 기질의 아미노 말단이 당해 링커 단위의 나머지 말단과 연결되어 역시 아미드 결합을 형성하도록 하는 비스카보닐 알킬 디라디칼을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 반대로, 치료제 상의 카보닐 잔기가 당해 링커 단위의 아민 중 하나에 공유적으로 결합되고 당해 링커 단위의 나머지 아민은 펩타이드성 기질의 C-말단에 공유적으로 결합되도록 하는 디아미노알킬 디라디칼 링커 단위도 유용할 수 있다. 세포 표면 프로테아제의 존재하에 있지 않을 경우에는 생리학적 환경에서 안정하지만, 세포 표면 프로테아제 단백질분해적 절단 부위의 절단될 경우에 절단가능한 이러한 기타 링커가 본원에서 사용하고자 의도된다. 추가로, 세포 표면 프로테아제 단백질분해적 절단 부위의 절단시에 치료제에 결합된 상태를 유지하지만 이러한 절단 후 치료제의 치료 활성을 변형되지 않은 치료제와 비교하여 현저하게 저하시키지 않는 링커 단위를 사용할 수 있다.
다른 양태에서, 링커는 사이클릭 알킬 잔기를 함유하는 디아민이며, 특정 양태에서 디아민은 비사이클로알킬렌 잔기를 함유한다. 이러한 디아민 링커의 예로는 1,4-비스(아미노메틸)사이클로헥산, 1,4-비스(아미노메틸)-사이클로헵탄, 1,3-비스(아미노메틸)사이클로펜탄, 1-아미노-4-(아미노-메틸)사이클로헥산, 1,4-디아미노사이클로헥산 및 1,4-비스(아미노메틸)-비스사이클로[2.2.2]옥탄이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
기타 링커로는 1,3-디아미노프로판을 포함하나 이에 제한되지 않는 1,ω-디아미노알칸, 및 옥살산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 아디프산 및 피발산을 포함하나 이에 제한되지 않는 1,ω-디카보닐알칸이 포함된다.
본원에서 제공되는 접합체에서 사용하기 위한 추가의 링커로는 화학식,,및[여기서, A는 NH 또는 O이고, D는 N(H 또는 알킬) 또는 O이고, R25는 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 또는 할로, 할로 알킬 및 알킬로부터 선택된 1개 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 치환체에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 1개 내지 2개의 이중 결합을 함유하는 알케닐, 1개 내지 2개의 삼중 결합을 함유하는 알키닐, 알크(엔)(인)일 그룹, 할로, 슈도할로, 시아노, 하이드록시, 할로알킬 및 폴리할로알킬(예: 할로 저급 알킬, 특히 트리플루오로메틸), 포르밀, 알킬카보닐, 또는 예를 들어 할로, 할로 알킬 및 알킬로부터 선택된 1개 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 치환체에 의해 임의로 치환된 아릴카보닐, 헤테로아릴카보닐, 카복시, 알콕시카보닐, 아릴옥시카보닐, 아미노이미노, 알콕시카보닐아미노, 아릴옥시카보닐아미노, 아미노카보닐, 알킬아미노카보닐, 디알킬아미노카보닐, 아릴아미노카보닐, 디아릴아미노카보닐, 아르알킬아미노카보닐, 알콕시, 아릴옥시, 퍼플루오로알콕시, 알케닐옥시, 알키닐옥시, 아릴알콕시, 아미노알킬, 알킬아미노알킬, 디알킬아미노알킬, 아릴아미노알킬, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 알킬아릴아미노, 알킬카보닐아미노, 아릴카보닐아미노, 아지도, 니트로, 머캅토, 알킬티오, 아릴티오, 퍼플루오로알킬티오, 티오시아노, 이소티오시아노, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 아릴설피닐, 아릴설포닐, 아미노설포닐, 알킬아미노설포닐, 디알킬아미노설포닐, 또는 아릴아미노설포닐이고, y는 1 내지 3의 정수이다]의 링커와 같은 자가-제거 링커가 포함된다.
3. 치료제
접합체는 각종 생물학적 반응을 변형시키는 것을 목적으로 한다. 따라서, 치료제는 단백질 및 폴리펩타이드, 소형 분자 및 목적하는 생물학적 활성을 지니거나 강화시키는 기타 분자를 포함하는 임의의 제제이다. 이러한 분자로는 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소, 시가(shiga) 독소, 디프테리아 독소 및 기타 독소와 같은 독소 및 이의 독성 부분 및/또는 서브유닛 또는 쇄를 포함하나 이에 제한되지않는 세포독성제; 종양 괴사 인자, α-인터페론, γ-인터페론, 신경 성장 인자, 혈소판 유래의 성장 인자, 조직 플라스미노겐 활성화인자를 포함하나 이에 제한되지 않는 단백질; 또는 예를 들어, 림포카인, 인터류킨-I(IL-1), 인터류킨-2(IL-2), 인터류킨-6(IL-6), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GMCSF), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 에리트로포이에틴(EPO), 전응고인자(procoagulant; 예: 조직 인자 및 조직 인자 변이체), 아폽토시스촉진제(예: FAS-리간드), 섬유아세포 성장 인자(FGF), 신경 성장 인자 및 기타 성장 인자와 같은 생물학적 반응 조절인자가 포함된다. 각각은 세포로 진입할 수 있거나 또는 세포의 부근에 있을 경우 치료 효과를 발휘할 수 있는 형태여야 한다.
따라서, 치료제로는 항암제, 항혈관신생제, 아폽토시스촉진제, 항암제 및 항유사분열제가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 이들은 프로테아제에 대한 기질인 펩타이드성 기질과 같은 기질에 임의로 링커를 통해 접합된다.
상기 치료제들 중에는 일반적으로 아킬화제, 독소, 항증식제 및 튜불린 결합제를 포함하나 이에 제한되지 않는 세포독성제가 있다. 본원에서 사용하기 위한 세포독성제 부류로는 예를 들어, 안트라사이클린계 약물, 빈카(vinca) 약물, 미토마이신, 블레오마이신, 세포독성 뉴클로시드, 프테리딘계 약물, 디이넨, 마이탄시노이드, 에포틸론, 탁산 및 포도필로톡신이 포함된다.
상기 부류의 예시적 구성원으로는 예를 들어, 독소루비신, 카르미노마이신, 다우노루비신, 아미노프테린, 메토트렉세이트, 메토프테린, 디클로로-메토트렉세이트, 미토마이신 C, 포르피로마이신, 5-플루오로우라실, 6-머캅토푸린, 시토신 아라비노시드, 포도필로톡신 또는 포도필로톡신 유도체(예: 에토포시드 또는 에토포시드 포스페이트), 멜팔란, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 류소시딘, 빈데신, 류로신, 마이탄시놀, 에포틸론 A 또는 B, 탁소테레 및 탁솔 등이 포함된다. 기타 이러한 치료제로는 에스트라무스틴, 시스플라틴, 콤브레타스타틴 및 유사체 및 사이클로포스파미드가 포함된다. 당해 분야의 숙련가는 이러한 화합물들의 반응을 당해 접합체의 제조 목적상 편리하게 만들기 위해 목적하는 치료제를 화학적으로 변형시킬 수 있다.
특정 치료제로는 다음의 약물이 포함된다. 당해 분야의 숙련가는 이러한 구조식이 단지 예시적이며 이러한 화합물 또는 이의 유도체 또는 유사체가 당해 분야에서 일반명 또는 상용명을 가짐을 이해할 것이다.
a. 화학식 1의 메토트렉세이트 그룹:
상기 화학식에서,
R12는 아미노 또는 하이드록시이고,
R7은 수소 또는 메틸이며,
R8은 수소, 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도이고,
R9는 하이드록시 또는 카복실산의 염을 완성시키는 잔기이다.
b. 화학식 2의 미토마이신 그룹:
상기 화학식에서,
R10은 수소 또는 메틸이다.
c. 화학식 3의 블레오마이신 그룹:
상기 화학식에서,
R11은 하이드록시, 아미노, C1-C3알킬아미노, 디(C1-C3알킬)아미노, C4-C6폴리메틸렌 아미노, -NHCH2CH2CH2CH2NH-C(NH)NH2또는 -NHCH2CH2CH2S+(CH3)2이다.
d. 화학식 4의 멜팔란:
e. 화학식 5의 머캅토푸린:
f. 화학식 6의 시토신 아라비노시드:
g. 화학식 7의 포도필로톡신:
상기 화학식에서,
R13은 수소 또는 메틸이고,
R14는 메틸 또는 티에틸 또는 이의 포스페이트 염이다.
h. 화학식 8의 빈카 알칼로이드 약물 그룹:
상기 화학식에서,
R17및 R18이 독립적으로 존재할 경우, R15는 H, CH3또는 CHO이고, R18은 H이며, R16및 R17중 하나는 에틸이고, 나머지 하나는 H 또는 OH이며,
R17과 R18이 이들이 결합된 탄소와 함께 존재하는 경우 이들은 옥시란 환을 형성하며, 이 경우에 R16은 에틸이고,
R19는 수소, (C1-C3알킬)-CO 또는 클로로치환된 (C1-C3알킬)-CO이다.
치료제가 빈카 알칼로이드 빈블라스틴인, 본원에서 제공되는 접합체는 하기 화학식의 화합물 또는 약제학적으로 허용되는 이의 유도체를 포함한다.
상기 화학식에서,
펩타이드성 기질은 화학식 I 및 II에 대해 기술한 바와 같으며,
L은 -NH-(CH2)u-T-(CH2)u-NH-와 같은 링커이고,
Xn은 a) 수소, b) -(C=O)R1a, c), d),e), f) 에톡시스쿠아레이트; 및 g) 코티니닐이고,
R1및 R2은 독립적으로 수소, OH, C1-C6알킬, C1-C6알콕시, C1-C6아르알킬 및 아릴이며,
R1a는 C1-C6-알킬, 하이드록실화된 C3-C8-사이클로알킬, 폴리하이드록실화된 C3-C8-사이클로알킬, 하이드록실화된 아릴, 폴리하이드록실화된 아릴 또는 아릴이고,
R19는 수소, (C1-C3알킬)-CO 또는 클로로치환된 (C1-C3알킬)-CO이며,
T는 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 또는 비사이클로[2.2.2]옥타닐로부터 선택되고,
a는 1, 2, 3 또는 4이며,
b는 0 또는 1 내지 100의 정수이고,
c는 0 또는 1이고, 단 b가 0인 경우 c는 1이며,
g는 1, 2 또는 3이고,
u는 0, 1, 2 또는 3이다.
i. 화학식 9의 디플루오로뉴클레오시드
상기 화학식에서,
R21은 화학식 또는중 하나의 염기이며,
R22는 수소, 메틸, 브로모, 플루오로, 클로로 또는 요오도이고,
R23은 -OH 또는 -NH2이며,
R24는 수소, 브로모, 클로로 또는 요오도이다.
j. 화학식 10의 에스트라무스틴:
k. 화학식 11의 사이클로포스파미드:
l. 화학식 12의 안트라사이클린 항생제:
상기 화학식에서,
Ra는 -CH3, -CH20H, -CH2OCO(CH2)3CH3또는 -CH2OCOCH(OC2H5)2이고,
Rb는 -OCH3, -OH 또는 -H이며,
Rc는 -NH2, -NHCOCF3, 4-모르폴리닐, 3-시아노-4-모르폴리닐, 1-피페리디닐, 4-메톡시-1-피페리디닐, 벤질아민, 디벤질아민, 시아노메틸아민 또는 1-시아노-2-메톡시에틸 아민이고,
R5는 -OH -OTHP 또는 -H이며,
R6은 -OH 또는 -H이고, 단 R5가 -OH 또는 -OTHP인 경우 R6은 -OH가 아니다.
하기 표 2는 다수의 안트라사이클린 약물 및 이의 일반명 또는 상용명을 제공한다.
화합물 Ra Rb Rc R5 R6
독소루비신a CH3 OCH3 NH2 OH H
독소루비신b CH2OH OCH3 NH2 OH H
데토루비신 CH2OCOCH(OC2H5)2 OCH3 NH2 OH H
카르미노마이신 CH3 OH NH2 OH H
이다루비신 CH3 H NH2 OH H
에피루비신 CH2OH OCH3 NH2 OH OH
에소루비신 CH2OH OCH3 NH2 H H
THP CH2OH OCH3 NH2 OTHP H
AD-32 CH2OCO(CH2)3CH3 OCH3 NHCOCF3 OH H
a다우노루비신은 다우노마이신의 대안적 명칭이다.b독소루비신은 아드리아마이신의 대안적 명칭이다.
하나의 양태에서, 치료제가 독소루비신인 경우 이는 독소루비신의 아미노글리코시드 잔기의 아미노 그룹을 통해 펩타이드성 그룹에 접합된다.
m. 마이탄시놀
n. 에포틸론 A 또는 B
A
B
o. 탁솔
상기 화학식에서,
R은 PhC(O) 또는 t-BuOC(O)이다.
하나의 양태에서, 치료제가 탁솔(R = C(O)Ph)인 경우, 펩타이드성 기질은 탁솔의 사이클로헥산 잔기의 2차 하이드록실 그룹에 접합된다.
p. 리보솜-불활성화 단백질
리신, 아브린 및 사포린을 포함하는 리보솜-불활성화 단백질(RIP)은 진핵성 리보솜을 촉매적으로 불활성화시키는 식물 단백질이다. RIP는 단백질 합성의 단백질 신장 단계를 방해함으로써 리보솜을 불활성화시킨다. 예를 들어, RIP 사포린(이후에는 SAP로 또한 지칭함)은 랫트 28S 리보솜 RNA(rRNA)내의 위치 4324에서 아데닌의 n-글리코시드 결합을 절단함으로써 60S 리보솜을 효소적으로 불활성화시키는 것으로 제시되어 왔다. 독소 아브린 및 리신과 같은 일부 RIP는 2개의 성분 쇄, 즉 세포 표면 수용체에의 결합 및 분자의 내재화를 매개하는 세포-결합 쇄 및 단백질 합성 억제 활성과 관련되는 효소적으로 활성인 쇄를 함유한다. 이러한 RIP는 II형 RIP이다. 사포린과 같은 다른 RIP는 일본쇄이며 I형 RIP로 명명된다. 이러한 RIP는 세포-결합 쇄가 결실되어 있기 때문에 2개의 쇄를 갖는 RIP에 비해서전체 세포에 대해 덜 독성이다. 1개의 쇄가 결합과 내재화를 매개하는 성장 인자와 같은 제제에 추가로 접합되지 않는다면, 일반적으로 이본쇄 RIP가 본원의 접합체용으로 사용된다.
구조적으로 관련된 몇몇 RIP는 식물 사포나리아 오피시날리스(Saponaria officinalis; 비누풀)의 종자와 잎으로부터 분리되었다. 이중에서, SAP-6이 가장 활성이고 풍부하며 전체 종자 단백질의 7%에 상당한다. 사포린은 매우 안정하며 등전점이 높고 탄수화물을 함유하지 않으며 나트륨 도데실 설페이트(SDS)와 같은 변성제와 각종 프로테아제에 내성이다. 종자로부터의 몇몇 사포린-6 이소형의 아미노산 서열은 공지되어 있으며 서로 수개의 아미노산 잔기가 상이한 사포린 RIP 계열인 것으로 보여진다. 사포린은 I형 RIP이기 때문에 세포-결합 쇄를 지니지 않는다. 따라서, 전체 세포에 대한 이의 독성은 리신 및 아브린과 같은 다른 독소에 비해서 매우 낮다. 그러나, 진핵 세포에 의해 내재화되는 경우에 사포린의 독성은 리신 A 쇄에 비해 100배 내지 1000배 더 강하다.
4. 예시적 접합체
본원에서 제공되는 접합체는 표적화된 세포 표면 프로테아제 또는 이의 가용성, 분비된 또는 방출된 형태에 대한 적합한 펩타이드성 기질을 동정하고, 상기 펩타이드성 기질(들)과 치료제와의 접합체를 형성시킴으로써 제조한다. 예를 들어, MTSP1, 엔도텔리아제1 및 유로키나제에 의한 절단용으로 디자인된 펩타이드성 기질을 함유하는 예시적 접합체를 기술한다. 질환 또는 기타 관심대상의 상태에 관여하는 세포 또는 질환 또는 기타 관심대상의 상태에 관여하거나 이와 관련된 세포또는 조직의 부근에 존재하는 세포내에 존재하거나 이러한 세포들에 부착된 세포-부착된 및 세포-국재화된 프로테아제 또는 이의 가용성, 분비된 또는 방출된 형태의 세포 표면 프로테아제를 포함하는 세포 표면 프로테아제를 동정하는 경우 이러한 프로테아제에 대한 적합한 펩타이드성 기질을 실험적으로 디자인한 다음, 본원에서 예시하는 치료제에 접합시킬 수 있음을 이해할 것이다.
특정 양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체로는 다음이 포함된다:
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 46);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 47);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 48);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 49);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 50);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 51);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 52);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 53);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 54);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 55);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 56);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 57);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 58);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 59);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 60) 및
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 61).
본원의 추가의 양태에서, 접합체는 다음과 같다:
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 62);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 63);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 64) 및
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 65).
본원의 다른 양태에서, 접합체는 다음과 같다:
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 66);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 67);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 68);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 69);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 70);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 71);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 72);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 73);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 74);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 75);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 76) 및
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 77).
또 다른 양태에서, 본원에서 사용하기 위한 접합체로는 다음이 포함된다:
피로Glu-Pro-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 78);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 79);
N-p-토실-Gly-Pro-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 80);
벤조일-Val-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 81);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 82);
N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 83) (Z = 벤질옥시카보닐);
피로Glu-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 84);
H-D-Ile-Pro-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 85);
Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 86) (Cbo = 카보벤족시);
H-D-Pro-Phe-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 87);
H-D-Val-Leu-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 88);
Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 89) (Bz = 벤조일);
Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 90);
벤조일-Pro-Phe-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 91);
H-D-Phe-Pip-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 92);
H-D-Val-Leu-Lys-Ala-Ala-(치료제) (서열 93);
H-D-Nle-HHT-Lys-Ala-Ala-(치료제) (서열 94);
Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 95);
H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 96);
Boc-Gln-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 97);
Z-Arg-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 98);
H-D-HHT-Ala-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 99);
H-D-CHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 100);
MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 101);
δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 102) 및
CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 103).
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체로는 다음이 포함된다:
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 104);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 105);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 106);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(치료제) (서열 107);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(치료제) (서열 108);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Gly-Gly-(치료제) (서열 109);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(치료제) (서열 110);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ile-(치료제) (서열 111) 및
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ile-(치료제) (서열 112).
특정 양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체로는 다음이 포함된다:
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 113);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 114);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 115);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 116);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 117);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 118);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 119);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 120);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 121);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 122);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 123);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 124);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 125);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 126);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 127) 및
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 128).
추가의 양태에서, 접합체는 다음과 같다:
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 129);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (SEQ ID NO: 130);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (SEQ ID NO: 131) 및
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 132).
다른 양태에서, 접합체는 다음과 같다:
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 133);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 134);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 135);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 136);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 137);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 138);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 139);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 140);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 141);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 142);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 143) 및
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 144).
다른 양태에서, 본원에서 사용하기 위한 접합체는 다음을 포함한다.
피로Glu-Pro-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 145);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 146);
N-p-토실-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 147);
벤조일-Val-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 148);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 149);
N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 150) (Z = 벤질옥시카보닐);
피로Glu-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 151);
H-D-Ile-Pro-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 152);
Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 153) (Cbo = 카보벤족시);
H-D-Pro-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 154);
H-D-Val-Leu-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 155);
Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 156) (Bz = 벤조일);
Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 157);
벤조일-Pro-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 158);
H-D-Phe-Pip-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 159);
H-D-Val-Leu-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 160);
H-D-Nle-HHT-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 161);
Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 162);
H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 163);
Boc-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 164);
Z-Arg-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 165);
H-D-HHT-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 166);
H-D-CHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 167);
MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 168);
δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 169) 및
CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 170).
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체로는 다음이 포함된다:
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 171);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 172);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 173);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 174);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 175);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 176);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 177);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 178) 및
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 179).
다른 양태에서, 본원에서 제공되는 접합체로는 다음이 포함된다:
Ac-Arg-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 180);
Ac-Arg-Gln-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 181);
Ac-Arg-Gln-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 182);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 183);
Ac-Arg-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 184);
Ac-Arg-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 185);
Ac-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 186);
Ac-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 187);
Ac-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 188);
Ac-Gln-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 189) 및
Ac-Gln-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 190).
추가의 양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체로는 다음이 포함된다:
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 191);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 192);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 193);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 194);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 195);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 196);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 197);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 198);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 199);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 200);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 201);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 202);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 203);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 204);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 205) 및
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 206).
추가의 양태에서, 접합체는 다음과 같다:
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 207);
Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 208);
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 209) 및
Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 210).
다른 양태에서, 접합체는 다음과 같다:
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 211);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 212);
Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 213);
Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 214);
Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 215);
Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 216);
Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 217);
Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 218);
Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 219);
Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 220);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 221) 및
Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 222).
다른 양태에서, 본원에서 사용하기 위한 접합체로는 다음이 포함된다:
피로Glu-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 223);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 224);
N-p-토실-Gly-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 225);
벤조일-Val-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 226);
CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 227);
N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 228) (Z = 벤질옥시카보닐);
피로Glu-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 229);
H-D-Ile-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 230);
Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 231) (Cbo = 카보벤족시);
H-D-Pro-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 232);
H-D-Val-Leu-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 233);
Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 234) (Bz = 벤조일);
Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 235);
벤조일-Pro-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 236);
H-D-Phe-Pip-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 237);
H-D-Val-Leu-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 238);
H-D-Nle-HHT-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 239);
Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 240);
H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 241);
Boc-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 242);
Z-Arg-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 243);
H-D-HHT-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 244);
H-D-CHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 245);
MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 246);
δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 247) 및
CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 248).
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에서 사용하기 위한 접합체로는 다음이 포함된다:
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 249);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 250);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 251);
Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 252);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 253);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 254);
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 255);
Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 256) 및
Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 257).
다른 양태에서, 본원에서 제공되는 접합체로는 다음이 포함된다:
Ac-Arg-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 258);
Ac-Arg-Gln-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 259);
Ac-Arg-Gln-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 260);
Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 261);
Ac-Arg-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 262);
Ac-Arg-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 263);
Ac-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 264);
Ac-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 265);
Ac-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 266);
Ac-Gln-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 267) 및
Ac-Gln-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 268).
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 접합체로는 다음이 포함된다:
Ac-Gly-dSer-Ala-Arg-Ser-Ala-(치료제) (서열 569);
Ac-Arg-Gly-dSer-Ala-Arg-Ser-Ala-(치료제) (서열 570);
Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ala-(치료제) (서열 571);
Ac-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ala-(치료제) (서열 572);
Ac-Leu-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ala-(치료제) (서열 573);
Ac-Leu-Arg-Gly-dSer-Ala-Arg-Ser-Ala-(치료제) (서열 574);
Ac-Cys(Me)-Pro-Gly-Arg-Val-Val-(치료제) (서열 575);
Ac-Arg-Cys(Me)-Pro-Gly-Arg-Val-Val-(치료제) (서열 577);
Ac-Arg-Arg-Cys(Me)-Pro-Gly-Arg-Val-Val-(치료제) (서열 578);
Ac-Val-Ser-Ala-Arg-Met-Ala-(치료제) (서열 579);
Ac-Ile-Val-Ser-Ala-Arg-Met-Ala-(치료제) (서열 580);
Ac-Val-Ile-Val-Ser-Ala-Arg-Met-Ala-(치료제) (서열 581);
Ac-Val-Ile-Val-Ser-Ala-Arg-nLeu-Ala-(치료제) (서열 582);
Ac-Val-Ser-Ala-Arg-nLeu-Ala-(치료제) (서열 583);
Ac-Ile-Val-Ser-Ala-Arg-nLeu-Ala-(치료제) (서열 584);
Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 585);
Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 586);
Ac-Gly-Ser-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 587);
Ac-Ser-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 588);
Ac-Ser-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 589);
Ac-Ser-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 590);
Ac-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 591);
Ac-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 592);
Ac-Arg-Gly-Ser-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 593);
Ac-Leu-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 594);
Ac-Leu-Arg-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 595) 및
Ac-Leu-Arg-Gly-Ser-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 596).
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 접합체는 다음 중에서 선택된다:
Ac-R-Q-G-R-S-L-(치료제) (서열 491);
Ac-R-Q-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 492);
Ac-R-Q-G-R-S-nL-(치료제) (서열 493);
Ac-R-Q-G-R-S-nV-(치료제) (서열 494);
Ac-R-Q-G-R-S-F-(치료제) (서열 495);
Ac-R-Q-G-R-A-L-(치료제) (서열 496);
Ac-R-Q-G-R-A-L-(치료제) (서열 497);
Ac-R-Q-G-R-A-nL-(치료제) (서열 498);
Ac-R-Q-G-R-A-nL-(치료제) (서열 499);
Ac-R-Q-G-R-A-nV-(치료제) (서열 500);
Ac-R-Q-G-R-A-Cha-(치료제) (서열 501);
Ac-R-Q-G-R-A-F-(치료제) (서열 502);
Ac-R-N-G-R-S-L-(치료제) (서열 503);
Ac-R-N-G-R-A-nL-(치료제) (서열 504);
Ac-R-Q-A-R-S-L-(치료제) (서열 505);
Ac-R-Q-A-R-S-nL-(치료제) (서열 506);
Ac-R-Q-A-R-S-nV-(치료제) (서열 507);
Ac-R-Q-A-A-S-Cha-(치료제) (서열 508);
Ac-R-Q-A-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 509);
Ac-R-Q-A-R-T-nL-(치료제) (서열 510);
Ac-R-Q-A-R-A-L-(치료제) (서열 511);
Ac-R-Q-A-R-A-nL-(치료제) (서열 512);
Ac-R-Q-A-R-A-nV-(치료제) (서열 513);
Ac-R-Q-A-R-A-Cha-(치료제) (서열 514);
Ac-R-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 515);
Ac-R-Q-S-R-A-(치료제) (서열 516);
Ac-R-Q-S-R-A-nL-(치료제) (서열 517);
Ac-R-Q-S-R-A-L-(치료제) (서열 518);
Ac-R-Q-S-R-A-nV-(치료제) (서열 519);
Ac-R-Q-S-R-A-Cha-(치료제) (서열 520);
Ac-R-Q-S-R-S-S-L-(치료제) (서열 521);
Ac-R-Q-S-R-S-L-(치료제) (서열 522);
Ac-R-Q-S-R-S-nL-(치료제) (서열 523);
Ac-R-Q-S-R-S-nL-(치료제) (서열 524);
Ac-R-Q-S-R-S-nV-(치료제) (서열 525);
Ac-R-Q-S-R-S-알릴G-(치료제) (서열 526);
Ac-R-Q-S-R-S-Cha-(치료제) (서열 527);
Ac-R-Q-S-R-T-nL-(치료제) (서열 528);
Ac-R-Q-T-R-S-S-L-(치료제) (서열 529);
Ac-R-Q-T-R-S-L-(치료제) (서열 530);
Ac-R-N-S-R-S-nL-(치료제) (서열 531);
Ac-R-Q-F-R-S-L-(치료제) (서열 532);
Ac-R-Q-F-R-S-nL-(치료제) (서열 534);
Ac-R-Q-F-R-S-nV-(치료제) (서열 535);
Ac-R-Q-F-R-S-nL-(치료제) (서열 536);
Ac-R-Q-F-R-S-Cha-(치료제) (서열 537);
Ac-R-Q-F-R-A-L-(치료제) (서열 538);
Ac-R-Q-F-R-A-nL-(치료제) (서열 539);
Ac-R-Q-F-R-A-nV-(치료제) (서열 540);
Ac-R-Q-F-R-A-Cha-(치료제) (서열 541);
Ac-Q-S-R-S-S-nL-(치료제) (서열 542);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(치료제) (서열 483);
MeOCO-Quat3-G-R-S-L-(치료제) (서열 484);
MeOCO-Quat-G-R-S-L-(치료제) (서열 485);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(치료제) (서열 486);
MeOCO-Quat5-G-R-S-L-(치료제) (서열 487);
MeOCO-Quat2-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 488);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(치료제) (서열 489);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(치료제) (서열 490);
Ac-Q-G-R-S-L-(치료제) (서열 445);
Ac-Q-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 446);
Ac-Q-G-R-A-S-L-(치료제) (서열 447);
Ac-N-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 448);
Ac-Q-G-R-S-S-nL-(치료제) (서열 449);
Ac-Q-G-R-S-S-nV-(치료제) (서열 450);
Ac-Q-G-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 451);
Ac-Q-G-R-S-S-알릴G-(치료제) (서열 452);
Ac-Q-G-R-S-S-알릴G-(치료제) (서열 453);
Ac-Q-A-R-S-L-(치료제) (서열 454);
Ac-Q-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 455);
Ac-Q-S-R-S-L-(치료제) (서열 456);
Ac-Q-S-R-S-S-nV-(치료제) (서열 457);
Ac-Q-S-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 458);
Ac-Q-S-R-S-S-L-(치료제) (서열 459);
Ac-Q-T-R-S-S-L-(치료제) (서열 460);
Ac-Q-Aib-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 461);
Ac-Q-Aib -R-S-S-L-(치료제) (서열 462);
Ac-Q-Abu-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 463);
Ac-Q-Abu-R-S-S-L-(치료제) (서열 464);
Ac-Q-Cha-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 465);
Ac-Q-F-R-S-L-(치료제) (서열 466);
Ac-Q-F-R-S-S-L-(치료제) (서열 467);
Ac-Q-Y-R-S-S-L-(치료제) (서열 468);
Ac-R-G-R-S-L-(치료제) (서열 469);
Ac-R-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 470);
Ac-R-G-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 471);
Ac-R-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 472);
Ac-R-A-R-S-L-(치료제) (서열 473);
Ac-R-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 474);
Ac-R-S-R-S-L-(치료제) (서열 475);
Ac-R-S-R-S-S-L-(치료제) (서열 476);
Ac-R-S-R-S-Cha-(치료제) (서열 477);
Ac-R-S-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 478);
Ac-R-F-R-S-L-(치료제) (서열 479);
Ac-R-F-R-S-Cha-(치료제) (서열 480);
Ac-Y-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 481);
Ac-M(O2)-S-R-S-L-(치료제) (서열 482);
Ac-R-R-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 105);
Ac-R-R-Q-S-R-I-(치료제) (서열 610);
Ac-R-R-Q-S-R-S-S-L-(치료제) (서열 543);
Ac-R-R-Q-S-R-S-L-(치료제) (서열 544);
Ac-R-G-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 545);
Ac-R-G-S-G-R--S-nL-(치료제) (서열 546);
Ac-R-G-S-G-R-A-nL-(치료제) (서열 547);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 548);
Ac-I-V-S-G-R-A-S-L-(치료제) (서열 549);
Ac-R-R-Q-S-R-A-(치료제) (서열 108);
Ac-R-R-Q-S-R-I-(치료제) (서열 111);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 106);
Ac-L-R-R-Q-S-R-G-G-(치료제) (서열 109);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-(치료제) (서열 110);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(치료제) (서열 112);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(치료제) (서열 611);
Ac-L-R-R-Q-S-R-S-S-L-(치료제) (서열 550) 및
Ac-L-R-R-Q-S-R-S-L-(치료제) (서열 551).
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 접합체는 다음 중에서 선택된다:
Ac-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 362);
Ac-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 363);
Ac-S-G-R-S-S-S-L-(치료제) (서열 364);
Ac-S-G-R-S-nL-(치료제) (서열 365);
Ac-S-G-R-S-nV-(치료제) (서열 366); 이성체 1
Ac-S-G-R-S-nV-(치료제) (서열 367); 이성체 2
Ac-S-G-R-S-G(헥스)-(치료제) (서열 368);
Ac-S-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 369);
Ac-S-G-R-S-hCha-(치료제) (서열 370);
Ac-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 371);
Ac-S-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 372);
Ac-S-S-R-S-nL-(치료제) (서열 373);
Ac-T-G-R-S-Abu-(치료제) (서열 374);
Ac-T-G-R-S-L-(치료제) (서열 375);
Ac-T-G-R-S-nV-(치료제) (서열 376);
Ac-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 377);
Ac-T-G-R-S-G(헥스)-(치료제) (서열 378);
Ac-T-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 379);
Ac-T-G-R-S-hCha-(치료제) (서열 380);
Ac-T-G-R-T-Abu-(치료제) (서열 381);
Ac-T-G-R-hS-nL-(치료제) (서열 382);
Ac-T-G-R-Abu-nL-(치료제) (서열 383);
Ac-T-G-R-Abu-nV-(치료제) (서열 384);
Ac-T-G-F(Gn)-S-nL-(치료제) (서열 385);
Ac-T-G-F(Gn)-S-Cha-(치료제) (서열 386);
Ac-T-G-F(Gn)-Abu-nV-(치료제) (서열 387);
Ac-T-G-K(alloc)-S-nL-(치료제) (서열 388);
Ac-T-G-K-S-nL-(치료제) (서열 389);
Ac-T-G-hR-S-nL-(치료제) (서열 390);
Ac-(hS)G-G-R-S-nL-(치료제) (서열 391);
MeOCO-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 392);
PhSO2-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 393);
MeOEtCO-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 394);
MeO(EtO)2Ac-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 395);
4-옥소-펜타노일-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 396);
3,4-메틸디옥시PhAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 397);
2-피리딜Ac-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 398);
PhOAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 399);
L-3-Ph락틸-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 400);
MeOAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 401);
PhAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 402);
MeOEtOCO-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 403);
MeOEtOAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 404);
HOOCButa-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 405);
Z-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 406);
EtOCO-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 407);
βA-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 408);
펜트-4-이노일-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 409);
NapAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 410);
iBoc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 411);
HOAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 412);
MeSucc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 413);
N,N-디MeGly-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 414);
Succ-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 415);
HCO-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 416);
Ac-T-A-R-S-nL-(치료제) (서열 417);
Ac-T-A-F(Gn)-S-nL-(치료제) (서열 418);
Ac-T-A-R-Abu-nV-(치료제) (서열 419);
Ac-T-A-R-S-Abu-(치료제) (서열 420);
Ac-T-A-R-T-Abu-(치료제) (서열 421);
Ac-T-S(O-Me)-R-S-nL-(치료제) (서열 422);
Ac-T-hS-R-S-nL-(치료제) (서열 423);
Ac-T-(1-Me)H-R-S-nL-(치료제) (서열 424);
Ac-T-(3-Me)H-R-S-nL-(치료제) (서열 425);
Ac-T-H-R-S-nL-(치료제) (서열 426);
Ac-T-Sar-R-S-nL-(치료제) (서열 427);
Ac-T-nV-R-S-nL-(치료제) (서열 428);
Ac-T-nL-R-S-nL-(치료제) (서열 429);
Ac-T-A-R-S-Cha-(치료제) (서열 430);
Ac-T-Abu-R-S-nL-(치료제) (서열 431);
Ac-4,4디MeThr-G-R-S-nL-(치료제) (서열 432);
Ac-hS-G-R-S-nL-(치료제) (서열 433);
Ac-hS-G-R-hS-Cha-(치료제) (서열 434);
Ac-hS-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 435);
Ac-hS-G-R-T-Cha-(치료제) (서열 436);
Ac-hS-A-R-S-Cha-(치료제) (서열 437);
Ac-N-G-R-S-nL-(치료제) (서열 438);
Ac-Y-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 439);
Ac-Y-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 440);
Ac-Q-G-R-S-S-nL-(치료제) (서열 441);
Ac-Q-G-R-S-S-nV-(치료제) (서열 442);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-A-(치료제) (서열 573);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 342);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 343);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-S-nL-(치료제) (서열 344);
Ac-L-R-G-S-G-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 345);
Ac-L-R-G-dS-A-R-S-A-(치료제) (서열 574);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 346 );
Ac-L-R-G-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 347);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 348);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-nV-(치료제) (서열 349);
Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-nL-(치료제) (서열 350);
Ac-V-I-V-S-G-R-A-L-(치료제) (서열 351);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 352);
Ac-V-I-V-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 353);
Ac-V-I-V-S-A-R-M-A-(치료제) (서열 354);
Ac-V-I-V-S-A-R-nL-A-(치료제) (서열 355);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-nL-(치료제) (서열 356);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-Cha-(치료제) (서열 357);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-Cha-(치료제) (서열 358);
Ac-V-I-V-S-A-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 359);
Ac-R-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(치료제) (서열 360);
Ac-R-R-nV-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 361);
Ac-R-G-dS-A-R-S-A-(치료제) (서열 309);
Ac-R-G-S-G-R-S-A-(치료제) (서열 310);
Ac-R-G-S-G-R-A-L-(치료제) (서열 311);
Ac-R-G-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 312);
Ac-R-G-S-G-R--S-nL-(치료제) (서열 313);
Ac-R-G-S-G-R-A-nL-(치료제) (서열 314);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 315);
Ac-R-G-S-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 316);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 317);
Ac-R-G-S-A-R-S-Cha-(치료제) (서열 318);
Ac-R-G-S-A-R-S-S-(치료제) (서열 319);
Ac-R-G-S-A-R-S-nV-(치료제) (서열 320);
Ac-R-G-S-A-R-S-S-nV -(치료제) (서열 321);
Ac-R-G-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 322);
Ac-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(치료제) (서열 323);
Ac-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(치료제) (서열 324);
Ac-R-C(Me)-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 325);
Ac-R-L-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 326);
Ac-R-V-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 327);
Ac-R-V-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 328);
Ac-R-nL-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 329);
Ac-R-G(tBu)-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 330);
Ac-R-L-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 331);
Ac-R-V-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 332);
Ac-R-nL-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 333);
Ac-I-V-S-G-R-A-L-(치료제) (서열 334);
Ac-I-V-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 335);
Ac-I-V-S-G-R-A-S-L-(치료제) (서열 336);
Ac-I-V-S-A-R-M-A-(치료제) (서열 337);
Ac-I-V-S-A-R-nL-A-(치료제) (서열 338);
Ac-I-V-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 339);
Ac-I-V-S-A-R-S-nL-(치료제) (서열 340);
Ac-I-V-S-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 341);
Ac-G-S-G-R-S-A-(치료제) (서열 585);
Ac-G-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 277);
Ac-G-S-G-R-A-L-(치료제) (서열 278);
Ac-G-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 279);
Ac-G-S-G-R-L-(치료제) (서열 280);
Ac-G-S-G-(4-구안)Phg-S-L-(치료제) (서열 281);
Ac-G-S-G-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 282);
Ac-G-S-G-R-A-S-L-(치료제) (서열 283);
Ac-G-S-G-R-S-nL-(치료제) (서열 284);
Ac-G-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 285);
Succ-bA-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 286);
Ac-G-T-G-R-S-hCha-(치료제) (서열 287);
Ac-G-hS-G-R-S-nL-(치료제) (서열 288);
Ac-G-dS-A-R-S-A-(치료제) (서열 289);
Ac-G-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 290);
Ac-G-S-A-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 291);
Ac-G-S-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 292);
Ac-G-S-A-R-A-S-L-(치료제) (서열 293);
Ac-V-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 294);
Ac-V-S-G-R-A-L-(치료제) (서열 295);
Ac-V-S-G-R-A-S-L-(치료제) (서열 296);
Ac-V-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 297);
Ac-V-S-A-R-M-A-(치료제) (서열 298);
Ac-V-S-A-R-nL-A-(치료제) (서열 299);
Ac-V-S-A-R-S-nL-(치료제) (서열 300);
Ac-V-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 301);
Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(치료제) (서열 302);
Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(치료제) (서열 303);
Ac-C(Me)-P-G-R-A-L-(치료제) (서열 304);
Ac-C(Me)-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 305);
Ac-C(Me)-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 306);
Ac-C(Me)-P-A-R-A-S-L-(치료제) (서열 307)및
Ac-G(tBu)-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 308).
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 접합체는 다음 중에서 선택된다.
Ac-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 552);
Ac-Q-S-R-S-A-(치료제) (서열 553);
Ac-Q-S-R-S-G-(치료제) (서열 554);
Ac-R-S-R-A-A-(치료제) (서열 555);
Ac-R-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 556);
Ac-R-Q-S-R-S-A-(치료제) (서열 557) 및
Ac-R-Q-S-R-S-A-A-(치료제) (서열 558).
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 접합체는 다음 중에서 선택된다:
Ac-R-G-S-G-R-S-A-(치료제) (서열 559);
Ac-S-G-R-A-A-(치료제) (서열 560);
Ac-S-G-R-S-A-(치료제) (서열 561);
Ac-S-G-R-S-S-A-(치료제) (서열 562);
Ac-S-G-R-A-S-A-(치료제) (서열 563);
Ac-S-G-R-S-G-(치료제) (서열 564);
Ac-S-G-R-S-S-G-(치료제) (서열 565);
Ac-S-G-R-S-G-A-(치료제) (서열 566);
Ac-S-G-R-S-G-G-(치료제) (서열 567) 및
Ac-G-T-G-R-S-G-G-(치료제) (서열 568).
또 다른 양태에서, 본원에서 제공되는 접합체는 다음 중에서 선택된다:
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 597);
MeSO2-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(치료제) (서열 598);
Ac-R-A-R-S-L-(치료제) (서열 599);
Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(치료제) (서열 600);
Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-S-L-(치료제) (서열 601);
Ac-Q-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 602);
MeOCO-dhF-P(OH)-R-S-S-L-(치료제) (서열 603);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(치료제) (서열 604);
Ac-dCha-P(OH)-R-S-S-L-(치료제) (서열 605);
Ac-dCha-Abu-R-S-S-A-(치료제) (서열 606);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(치료제) (서열 607);
MeOCO-Quat3-G-R-S-L-(치료제) (서열 608) 및
MeOCO-Quat-G-R-S-L-(치료제) (서열 609).
상기 펩타이드성 부분을 함유하는 접합체를 Ac(캡핑 그룹 Xn에 대한 설명 참조) 대신에 다른 캡핑 그룹을 사용하여 제조할 수 있음이 또한 이해할 것이다. 상기 접합체에서 사용하기 위한 치료제로는 예를 들어, 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소, 시가 독소, 디프테리아 독소 및 기타 독소와 같은 독소 및 이의 독성 부분을 포함하나 이에 제한되지 않는 세포독성제; 종양 괴사 인자, 인터페론(예: α-인터페론 및 감마-인터페론), 전응고인자(예: 조직 인자 및 조직 인자 변이체), 신경 성장 인자, 혈소판 유래의 성장 인자, 조직 플라스미노겐 활성화인자와 같은 단백질; 예를 들어, 림포카인, 인터류킨-I(IL-1), 인터류킨-2(IL-2), 인터류킨-6(IL-6), 과립구 대식세포 콜로니 자극 인자(GMCSF), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 섬유아세포 성장 인자(FGF) 및 기타 성장 인자와 같은 생물학적 반응 조절인자, 메토트렉세이트 약물 그룹, 안트라사이클린계 약물, 빈카 알칼로이드 약물, 미토마이신, 블레오마이신, 시토신 아라비노시드와 디플루오로뉴클레오시드를 포함하는 세포독성 뉴클레오시드, 프테리딘계 약물, 디이넨, 탁산 및 포도필로톡신이 포함된다. 이러한 모든 접합체는 본 발명의 범주내에 있으며 본원에서 기술하는 바와 같이 제조하고 사용할 수 있다.
따라서, 본원에서 제공되는 접합체로는, 치료제가 예를 들어, 독소루비신, 카르미노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 이다루비신, 에피루비신, 에소루비신, THP, AD-32, 아미노프테린, 메토트렉세이트, 메토프테린, 디클로로메토트렉세이트, 미토마이신 C, 포르피로마이신, 5-플루오로우라실, 6-머캅토푸린, 시토신 아라비노시드, 포도필로톡신 또는 포도필로톡신 유도체(예: 에토포시드 또는 에토포시드 포스페이트), 멜팔란, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 류로시딘, 빈데신, 류로신, 탁솔, 에스트라무스틴, 시스플라틴, 콤브레타스타틴 및 유사체, 및 사이클로포스파미드인 본원에서 기술하는 접합체가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 하나의 양태에서, 치료제는 독소루비신이다. 다른 양태에서, 치료제는 탁솔이다.
상기 접합체에 상응하는 어떠한 접합체 또는 P1' 및/또는 P2' 잔기가 Ala 대신에 Ile인 어떠한 접합체라도 본 발명의 범주내에 있으며 본원에서 기술하는 바와 같이 제조하고 사용할 수 있다.
P 그룹의 상기 정의에서 제시한 것으로부터 아미노산을 교환 및 선택함으로써 형성된 모든 펩타이드 기질이 고려된다.
D. 접합체의 제조
본원에서 제공되는 접합체의 펩타이드성 기질은 고체상 기술과 같은 통상의 펩타이드 합성 기술을 사용하여 이의 성분 아미노산으로부터 합성한다. 이어서, 상기 펩타이드성 기질은 역상 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)에 의해 정제한다.
펩타이드 산은 이의 성분 Fmoc-아미노산으로부터 제조할 수 있다. 펩타이드의 표준 합성 방법은 예를 들어, 논문[참조: Synthesis Notes Section, NovaBiochem Catalog 2002/3, Schroeder et al., "The Peptides", Vol. 1, Academic Press 1965; Bodansky et al., "Peptide Synthesis", Interscience Publishers, 1966; McOmie (ed.) "Protective 그룹 in Organic Chemistry", Plenum Press, 1973, Barany et al., "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology" 2, Chapter 1, Academic Press, 1990, 및 Stewart et al., "Solid Phase Peptide Synthesis", Second Edition, Pierce Chemical Company, 1994]에 기술되어 있다. 상기 참조문헌의 내용은 본원에서 참조로 인용된다.
본원에서 제공되는 접합체의 약제학적으로 허용되는 염은 예를 들어, 비독성 무기산 또는 유기산으로부터 형성된, 접합체의 통상적인 비독성 염을 포함한다. 예를 들어, 이러한 통상적 비독성 염으로는 무기산(예: 염산, 브로모수소산, 황산, 설팜산, 인산 및 질산 등)으로부터 유래된 염 및 유기산(예: 아세트산, 프로피온산, 석신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 파모산, 말레산, 하이드록시말레산, 페닐-아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 설파닐산, 2-아세톡시-벤조산, 푸마르산, 톨루엔설폰산, 메탄설폰산, 에탄디설폰산, 옥살산, 이세티온산 및 트리플루오로아세트산 등)으로부터 유래된 염이 포함된다.
세포 표면 프로테아제 절단 부위를 함유하는 펩타이드성 잔기와 치료제를 함유하는, 본원에서 제공되는 접합체는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 기술을 사용하여 유사하게 합성할 수 있다. 예를 들어, 치료제 상의 유리 아민 잔기를 카복실 말단에서 펩타이드성 기질에 공유적으로 연결시켜 아미드 결합이 형성되도록 할 수 있다. 유사하게, 아미드 결합은 펩타이드성 기질의 아민 잔기와 치료제의 카복실 잔기를 공유적으로 커플링시켜 형성시킬 수 있다. 이러한 목적상, 배합하여 또는 단독으로 사용되는 2-(1H-벤조트리아졸-1-일)-1,3,3-테트라메틸-우로늄 헥사플루오로포스페이트(HBTU로서 공지됨) 및 1 -하이드록시벤조트리아졸 수화물(HOBT로서 공지됨), 디사이클로헥실-카보디이미드(DCC), N-에틸-N-(3-디메틸아미노프로필)-카보디이미드(EDC), 디페닐-포스포릴아지드(DPPA) 및 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스-(디메틸아미노)-포스포늄 헥사플루오로포스페이트(BOP) 등과 같은 시약을 사용할 수 있다.
추가로, 당해 접합체는 세포 표면 프로테아제 절단 부위와 치료제 사이의 비-펩티딜 결합에 의해 형성시킬 수 있다. 예를 들어, 치료제를 이러한 치료제 상의 하이드록실 잔기를 통해 펩타이드성 기질의 카복실 말단에 공유적으로 연결시켜 에스테르 연결을 형성시킬 수 있다. 이러한 목적상, HBTU과 HOBT의 배합물, BOP와 이미다졸의 배합물 및 DCC과 DMAP의 배합물 등을 사용할 수 있다. 또한, 니트로-페닐 에스테르 등을 형성시켜 카복실산을 활성화시키고 DBU(1,8-디아자비사이클로[5,4,O]운데크-7-엔)의 존재하에 반응시킬 수 있다.
당해 접합체는 펩타이드성 기질을 링커 단위를 통해 치료제에 결합시킴으로써 형성시킬 수도 있다. 이러한 링커 단위로는 예를 들어, 치료제 상의 아민 잔기가 링커 단위와 연결되어 아미드 결합을 형성하고 펩타이드성 기질의 아미노 말단이 당해 링커 단위의 나머지 말단과 연결되어 역시 아미드 결합을 형성하도록 하는 비스카보닐 알킬 디라디칼이 포함된다. 반대로, 치료제 상의 카보닐 잔기가 당해 링커 단위의 아민 중 하나에 공유적으로 결합되고 당해 링커 단위의 나머지 아민은 펩타이드성 기질의 C-말단에 공유적으로 결합되도록 하는 디아미노알킬 디라디칼 링커 단위도 유용할 수 있다. 세포 표면 프로테아제 또는 이의 가용성, 분비된 또는 방출된 형태의 존재하에 있지 않을 경우에는 생리학적 환경에 대해 안정하지만, 세포 표면 프로테아제 단백질분해적 절단 부위의 절단시에는 절단가능한 이러한 기타 링커가 의도된다. 추가로, 세포 표면 프로테아제 단백질분해적 절단 부위의 절단시에 치료제에 결합된 상태를 유지하지만, 이러한 절단후 치료제의 치료 활성을 변형되지 않은 치료제와 비교하여 현저하게 저하시키지 않는 링커 단위를 사용할 수 있다.
당해 분야의 숙련가는 본원에서 제공되는 접합체의 합성시에 출발 화합물 및 중간체 상의 각종 반응성 작용기들을 보호해야할 필요성이 있을 수 있는 한편, 목적하는 반응은 분자의 다른 부분에 대해 일어남을 이해하고 있다. 목적하는 반응이 완료된 후 또는 임의의 바람직한 시점에서, 통상적으로 이러한 보호 그룹은 예를 들어, 가수분해 또는 가수소분해 수단에 의해 제거할 수 있다. 이러한 보호 및탈보호 단계는 유기 화학에서 통상적이다. 당해 분야의 숙련가는 본원에서 제공되는 접합체를 제조할 경우에 유용할 수 있는 보호 그룹의 교시에 대해 문헌[참조: Protective Groups in Organic Chemistry, McOmie, ed., Plenum Press, NY, NY (1973); and, Protective Groups in Organic Synthesis, Greene, ed., John Wiley & Sons, NY, NY (1991)]을 참고한다.
단지 예시로서, 유용한 아미노-보호 그룹으로는 예를 들어, C1-C10알카노일 그룹(예: 포르밀, 아세틸, 디클로로아세틸, 프로피오닐, 헥사노일, 3,3-디에틸헥사노일 및 γ-클로로부티릴 등); C1-C10알콕시카보닐 및 C5-C15아릴옥시카보닐 그룹(예: 3급-부톡시카보닐, 벤질옥시카보닐, 알릴옥시카보닐, 4-니트로벤질옥시카보닐, 플루오레닐메틸옥시카보닐 및 신나모일옥시카보닐); 할로(C1-C10)-알콕시카보닐(예: 2,2,2-트리클로로에톡시-카보닐); 및 C1-C15아릴알킬 및 알케닐 그룹(예: 벤질, 펜에틸, 알릴 및 트리틸 등)이 포함된다. 통사적으로 사용되는 다른 아미노-보호 그룹으로는 메틸 또는 에틸 아세토아세테이트와 같은 β-케토-에스테를ㄹ 사용하여 제조한 엔아민 형태의 것들이 있다.
유용한 카복시-보호 그룹으로는 예를 들어, C1-C10알킬 그룹(예: 메틸, 3급-부틸, 데실); 할로 C1-C10알킬(예: 2,2,2-트리클로로에틸 및 2-요오도에틸); C5-C15아릴알킬(예: 벤질, 4-메톡시벤질, 4-니트로벤질, 트리페닐메틸, 디페닐-메틸); C1-C10알카노일옥시메틸(예: 아세톡시-메틸 및 프로피온옥시메틸 등); 및 펜아실, 4-할로펜아실, 알릴, 디메틸알릴, 트리-(C1-C3알킬)실릴(예: 트리메틸실릴), β-p-톨루엔설포닐에틸, β-p-니트로페닐-티오에틸, 2,4,6-트리메틸벤질, β-메틸티오에틸, 프탈이미도메틸, 2,4-디니트로-페닐설페닐, 2-니트로벤즈히드릴과 같은 그룹 및 관련 그룹이 포함될 수 있다.
유사하게, 유용한 하이드록시 보호 그룹으로는 예를 들어, 포르밀 그룹, 클로로아세틸 그룹, 벤질 그룹, 벤즈히드릴 그룹, 트리틸 그룹, 4-니트로벤질 그룹, 트리메틸실릴 그룹, 펜아실 그룹, 3급-부틸 그룹, 메톡시메틸 그룹, 테트라하이드로피라닐 그룹 및 3급-부틸디메틸실릴 그룹 등이 포함될 수 있다.
안트라사이클린 항생제 독소루비신과 배합된 펩타이드성 기질의 양태와 관련하여, 다음 반응식들은 본원에서 제공되는 접합체의 합성을 기술한다.
반응식 VI는 본원에서 제공되는, 펩타이드성 기질과 빈카 알카로이드 세포독성제 빈블라스틴의 접합체(여기서, 빈블라스틴의 결합은 펩타이드성 기질의 C-말단에 위치한다)의 제조를 설명한다. 1,3-디아미노프로판 링커의 사용은 단지 실례이며, 빈블라스틴의 카보닐과 펩타이드성 기질의 C-말단 사이의 다른 링커 단위도 고려된다(예: (CH2)u-T-(CH2)u). 아실 아지드 출발 물질은 빈블라스틴을 히드라진과 반응(60-65℃, MeOH)시킨 다음, HCl/DMF/이소아밀 니트라이트와 반응시켜 제조한다. 또한, 반응식 VI는 C4-하이드록시 잔기를 링커 단위의 첨가 후에 재아세틸화시키는, 접합체의 합성법을 설명한다. 데스아세틸 빈블라스틴 접합체가 또한 효과적이며 반응식 VI에서 제시한, 링커의 1차 아민을 보호시키고 중간체를 아세트산무수물과 반응시킨 다음, 아민을 탈보호시키는 단계를 제거함으로서 제조할 수 있는 것으로 공지되어 있다[참조: 국제 특허 공보 제WO 98/10651호].
다른 위치에 있는 펩타이드성 기질과 빈블라스틴의 작용 그룹의 접합체는 당해 분야의 숙련가라면 용이하게 달성할 수 있으며, 세포 표면 프로테아제, 또는 이의 가용성, 분비된 또는 방출된 형태에 대한 기질인 접합체를 제공하는 것으로 또한 예상된다.
반응식 VII는 펩타이드성 기질이 빈카 알칼로이드 세포독성제 빈블라스틴과 배합된, 본원에서 제공되는 조성물과 방법에서 사용되는 특정 접합체의 제조를 설명한다. 빈블라스틴에 대한 상기 펩타이드성 기질의 N-말단의 결합이 설명된다[참조: S.P. Kandukuri et al. (1985) J. Med. Chem. 28:1079-1088].
본원에서 제공되는 조성물과 방법에서 사용되는 펩타이드성 기질의 N-말단이 세포독성제(예: 빈블라스틴)와 같은 하나의 치료제와 배합되는 한편, 동시에 C-말단이 동일하거나 상이한 또 다른 세포독성제, 예를 들어, 독소루비신에 결합된 접합체를 제조할 수 있음이 또한 이해된다. 반응식 VIII는 이러한 다중세포독성제 접합체의 합성을 설명한다. 이러한 다중세포독성제 접합체는 하나의 세포독성제만을 함유하는 접합체에 비해 많은 잇점을 제공할 수 있다.
데스아세틸빈블라스틴과 배합된 펩타이드성 기질의 양태와 관련해서, 다음 반응식 IX 및 X는 본원에서 제공되는 접합체의 합성을 설명한다.
반응식 IX는 본원에서 제공되는 펩타이드성 기질과 빈카 알칼로이드 세포독성제 빈블라스틴을 함유하는 본원에서 제공되는 접합체(여기서, 4-데스아세틸빈블라스틴의 산소의 결합은 펩타이드성 기질의 C-말단에 위치한다)의 제조를 설명한다. 이러한 접합체를 형성시키는데 다른 반응 순서가 유용할 수 있지만, 먼저 단일 아미노산을 4-산소에 결합시키고 후속적으로 나머지 펩타이드성 기질 서열을 상기 아미노산에 결합시키는 것이 전형적 방법인 것으로 공지되어 있다[참조: 국제특허공보 제WO 99/28345호]. 또한, 3,4-디하이드로-3-하이드록시-4-옥소-1,2,3-벤조트리아진(ODHBT)을 최종 커플링 단계에서 HOA 대신에 사용할 수 있음이 공지되어 있다.
반응식 X는 하이드록시 알카노일 산이 본원에서 제공되는 펩타이드성 기질과 빈카 약물 사이의 링커로서 사용되는, 상기 펩타이드성 기질의 접합체의 제조를 설명한다.
본원에서 제공되는 탁솔 접합체는 하기에서 제공되는 일반적 방법에 의해 제조할 수 있다. 7-Ala-탁솔 및 7-Gly-탁솔의 제조는 문헌[참조: Mathew et al. (1992) J. Med. Chem. 35:145-151]에 기재되어 있다.
E. 약제학적 조성물의 제형화 및 투여
본원에서 제공되는 접합체 및 조성물은 세포 표면 프로테아제, 특히 세린 프로테아제, 또는 이의 세포 표면 프로테아제의 가용성, 분비된 또는 방출된 형태를 다른 세포에 비해서 보다 높은 수준으로 표면에서 발현하는 세포 또는 조직을 표적화시킴으로써 치료될 수 있는 임의의 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 치료, 예방 또는 경감시키기 위해 사용된다. 이러한 질환 또는 장애로는 과증식성 질환(예: 암), 비정상적 또는 과도한 혈관신생과 관련된 모든 질병, 자가면역 질환, 염증 질병 및 세포-부착된 및 세포-국재화된 프로테아제를 포함하는 적절한 세포 표면 프로테아제가 동정될 수 있는 모든 기타 질병이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
본원에서 제공되는 약제학적 조성물은 바람직하지 않고/않거나 조절되지 않은 혈관신생 또는 신혈관형성과 관련된 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 예방, 치료 또는 경감시키는데 유용한 본원에서 제공되는 하나 이상의 접합체의 치료학적 유효량을 함유한다. 이러한 질환 또는 장애로는 폐암, 결장암, 식도암, 유방암, 난소암 및 전립선암을 포함하는 고형 신생물; 혈관섬유종, 혈관지방종, 죽상경화증, 재협착/재관류 손상, 동정맥 기형, 혈관종증 및 혈관 협착, 혈관 혈종을 동반한 연골형성이상, 유전성 출혈성 모세혈관확장 및 폰 히펠-린다우(Von Hippel-Lindau) 증후군을 포함하나 이에 제한되지 않는 혈관 기형 및 심혈관계 장애; 진성당뇨병, 혈우병 관절, 염증 장 질환, 치유불능 골절, 신속히 진행되는 치주염, 건선, 유년성 치주염, 류마티스 관절염, 정맥울혈성 궤양, 과립-화상, 비대 흉터, 경화증, 방사선골괴사증, 수술후 유착, 화농육아종 및 전신성 경화증을 포함하나 이에 제한되지 않는 만성 염증 질환 및 비정상적 상처 치유; 레이노(Raynaud) 현상을 포함하나 이에 제한되지 않는 순환계 장애; 석회증, 식도 운동이상증, 수지경화증 및 모세혈관활장증을 포함하나 이에 제한되지 않는 크레스트 증후군; 전신성 혈관염, 피부경화증, 괴사성 농피증, 혈관병증, 정맥 동맥 궤양, 스터지-웨버(Sturge-Weber) 증후군, 포도색 병변, 청색고무 포말모반 증후군, 클리펠 트레노니(Klippel-Trenaunay-Weber) 증후군 및 오슬러-웨버-렌두(Osler-Weber-Rendu) 증후군을 포함하나 이에 제한되지 않는 피부 질환; 및 안구 신생혈관 질환에 의해 유발되는 실명, 각막 이식편 신혈관형성, 안구내 황반변성, 신생혈관녹내장, 트라코마, 당뇨병성 망막병증, 근시변성, 미숙아 망막병증, 후수정체섬유증식증 및 각막 신혈관형성을 포함하나 이에 제한되지 않는 안구 장애를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
조성물은 본원에서 제공되는 하나 이상의 접합체를 함유한다. 상기 접합체는 예를 들어, 경구 투여용 액제, 현탁제, 정제, 분산성 정제, 환제, 캡슐제, 산제, 서방성 제형 또는 엘릭서제 또는 비경구 투여용 멸균 액제 또는 현탁제 뿐만 아니라, 경피 팻치 제제 및 무수 분말 흡입제와 같은 적합한 약제학적 제제로 제형화할 수 있다. 통상적으로, 상기 기술한 접합체는 당해 분야에 익히 공지된 기술 및 과정을 사용하여 약제학적 조성물로 제형화한다[참조: Ansel (1985) Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms, Fourth Edition, p. 126)]. 유효 농도는 동물 모델, 시험관내 모델 또는 시험 피험자를 사용하여 실험적으로 결정할 수 있다.
조성물에서, 유효 농도의 하나 이상의 접합체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 염은 적합한 약제학적 담체 또는 비히클과 혼합된다. 상기 접합체는 상기 기술한 바와 같이 제형화기에 앞서 상응하는 염, 에스테르, 에놀 에테르 또는 에스테르, 산, 염기, 용매화물 또는 수화물로서 유도체화시킬 수 있다. 조성물중 접합체의 농도는 투여시, 바람직하지 않고/않거나 조절되지 않은 혈관신생 또는 신혈관형성과 관련된 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 치료, 예방 또는 경감시키는 양을 전달하기에 유효하다. 이러한 질환 또는 장애로는 고형 신생물; 혈관섬유종,혈관지방종, 죽상경화증, 재협착/재관류 손상, 동정맥 기형, 혈관종증 및 혈관 협착, 혈관 혈종을 동반한 연골형성이상, 유전성 출혈성 모세혈관확장 및 폰 히펠-린다우 증후군을 포함하나 이에 제한되지 않는 혈관 기형 및 심혈관 장애; 진성 당뇨병, 혈우병 관절, 염증 장 질환, 상처불능 골격, 신속히 진행되는 치주염, 유년성 치주염, 건선, 류마티스 관절염, 정맥울혈 궤양, 과립-화상, 비대 흉터, 간 경화증, 방사선골괴사, 수술후 협착, 화농육아종 및 전신성 경화증을 포함하나 이에 제한되지 않는 만성 염증 질환 및 비정상적 상처 치유; 레이노 현상을 포함하나 이에 제한되지 않는 순환계 장애; 석회증, 식도 운동이상증, 수지경화증 및 모세혈관확장증을 포함하나 이에 제한되지 않는 크레스트 증후군; 전신성 혈관염, 피부경화증, 괴사성 농피증, 혈관병증, 정맥 동맥 궤양, 스터지-웨버 증후군, 포도색 병변, 청색고무 포말모반 증후군, 클리펠 트레노니 웨버 증후군 및 오슬러-웨버-렌두 증후군을 포함하나 이에 제한되지 않는 피부 질환; 및 안구 신생혈관 질환, 각막 이식편 신혈관형성, 안구내 황반변성, 신생혈관녹내장, 트라코마, 당뇨병성 망막병증, 근시변성, 미숙아 망막병증, 후수정체섬유증식증 및 각막 신혈관형성에 의해 유발되는 실명을 포함하나 이에 제한되지 않는 안구 장애를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본원의 접합체는 국소, 국부, 정맥내 및 전신계적 적용에 적합한 약제학적 조성물로 제형화할 수 있다. 유효 농도의 하나 이상의 접합체를 적합한 약제학적 담체 또는 비히클과 혼합한다. 유효 농도 또는 양의 접합체는 투여시, 증상을 완화시키거나 질환을 경감시키거나 질환을 치료하는 양의 전달을 요한다. 전형적으로, 조성물은 단일 투여량 투여용으로 제형화한다. 치료학적 유효 농도 및 양은 상기 기술한 바와 같은 공지된 시험관내 및 생체내 시스템에서 접합체를 시험함으로써 실험적으로 결정할 수 있으며, 이어서 사람 또는 기타 동물에 대한 투여량을 이로부터 추정할 수 있다.
접합체(들)를 비히클과 혼합하거나 접합체에 비히클을 첨가할 경우, 수득되는 혼합물은 용액, 현탁액, 유액 또는 기타 조성물일 수 있다. 수득되는 혼합물의 형태는 의도하는 투여방식 및 선택된 담체 또는 비히클 중의 접합체의 용해도를 포함하는 수많은 요인들에 따라서 좌우된다. 유효 농도는 치료될 질환, 장애 또는 상태의 증상을 경감시키기에 충분하며, 종양용 마우스 이종이식 모델 또는 래빗트 안구 모델로부터의 데이터와 같은 시험관내 및/또는 생체내 데이터에 기초하여 실험적으로 결정할 수 있다. 필요에 따라, 접합체의 약제학적으로 허용되는 염 또는 기타 유도체를 제조할 수 있다.
본원에서 제공되는 접합체를 투여하기에 적합한 약제학적 담체 또는 비히클은 특정 투여방식에 적합한, 당해 분야의 숙련가에게 공지된 임의의 담체를 포함한다. 또한, 접합체는 조서물중 단독의 약제학적 활성 성분으로서 제형화하거나 기타 활성 성분과 배합할 수 있다.
접합체는 예를 들어, 경구, 비경구, 정맥내, 진피내, 피하 또는 국소 투여에 적절한 경로에 의해 액체, 반액체 또는 고체 형태로 투여할 수 있으며, 각각의 투여경로에 적합한 방식으로 제형화한다. 예시적 투역방식은 치료될 징후에 따라 좌우된다. 피부 및 안구 징후는 전형적으로 국소 치료될 수 있는 반면에, 종양 및혈관 증식 장애는 통사적으로 전신계적, 진피내 및 근육내 투여방식에 의해 치료할 수 있다.
접합체는 치료될 환자에 대한 바람직하지 않은 부작용의 부재하에 치료학적으로 유용한 효과를 발휘하기에 충분한 양으로 약제학적으로 허용되는 담체 중에 포함된다. 부작용의 수와 정도는 접합체가 투여되는 조건에 따라 좌우됨을 이해할 것이다. 예를 들어, 종양과 같은 생명에 위협적인 질환을 치료하는 경우에는 허용되는 특정 독성 및 바람직하지 않은 부작용은 이 보다 중증도가 덜한 질환을 치료하는 경우에는 허용되지 않을 수 있다.
조성물중 접합체의 농도는 접합체의 흡수율, 불활성화율, 배출율, 투여 스케쥴, 투여되는 양 뿐만 아니라 당해 분야의 숙련가에게 공지된 기타 요인들에 따라 좌우된다.
전형적으로, 치료학적 유효량은 활성 성분의 혈청 농도 약 0.1 ng/ml 내지 약 50 내지 100㎍/ml를 생성해야 한다. 약제학적 조성물은 통상적으로 체표면적 및/또는 체중에 따라서 조정된 바와 같이 선택된 접합체에 따라서 접합체 약 0.01mg 내지 약 100 내지 2000mg의 투여량을 제공해야 한다. 통상적으로, 정맥내 또는 전신계적 치료의 경우, 약 0.05 내지 0.5mg/kg의 1일 투여량이 충분할 것이다. 안구 장애에 대한 국소 적용은 단일 투여량 투여당 약 1ng 내지 100㎍, 일반적으로 약 1㎍ 내지 약 10㎍을 제공해야 한다. 투여되는 양이 선택되는 접합체, 치료되는 징후 및 허용될 수 있는 가능한 부작용의 함수임이 이해될 것이다. 투여량은 각각의 장애용으로 인정된 모델을 사용하여 실험적으로 결정할 수 있다.
통상적으로, 조성물은 단일 투여량 투여용으로 제형화한다. 조성물을 제형화하기 위해, 중량분율의 접합체를 치료하고자 하는 상태가 완화 또는 경감되도록 하는 유효 농도로 선택된 비히클 속에 용해, 현탁, 분산 또는 혼합한다. 본원에서 제공되는 접합체의 투여에 적합한 약제학적 담체 또는 비히클은 특정 투여방식에 적합한, 당해 분야의 숙련가에 공지된 임의의 담체를 포함한다.
또한, 접합체는 조성물중 유일한 활성 성분으로서 제형화되거나 또는 기타 활성 성분과 배합될 수 있다. 조직-표적화된 리포좀, 특히 종양-표적화된 리포좀을 포함하는 리포좀 현탁액이 또한 약제학적으로 허용되는 담체로서 적합할 수 있다. 이들은 당해 분야의 숙련가에게에게 공지된 방법에 따라서 제조할 수 있다. 예를 들어, 리포좀 제형은 미국 특허 제4,522,811호에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다. 간략하게 언급하면, 다중박막 소포(MLV)와 같은 리포좀은 난 포스파티딜 콜린 및 뇌 포스파티딜 세린(7:3 몰비)을 플라스크의 내부에서 건조시켜 형성시킬 수 있다. 본원에서 제공되는, 2가 양이온이 결여된 포스페이트 완충 식염수(PBS) 중의 접합체의 용액을 첨가하고, 지질 막이 분산될 때까지 플라스크를 진탕시킨다. 수득되는 소포를 세척하여 비캡슐화된 접합체를 제거하고, 원심분리시켜 펠릿화시킨 다음, PBS 속에 재현탁시킨다.
접합체는 치료될 환자에 대한 바람직하지 않은 부작용의 부재하에 치료학적으로 유효한 효과를 발휘하기에 충분한 양으로 약제학적으로 허용되는 담체 중에 포함된다. 치료학적 유효 농도를 본원에서 기술하는 시험관내 및 생체내 시스템에서 접합체를 시험함으로써 실험적으로 결정하고[참조: 실시예 3 및 4], 이어서 사람 또는 기타 동물에 대한 투여량을 이로부터 추정할 수 있다.
약제학적 조성물 중의 접합체의 농도는 접합체의 흡수율, 불활성화율과 배출율, 접합체의 물리화학적 특징, 투여 스케쥴 및 투여되는 양 뿐만 아니라 당해 분야의 숙련가에게 공지된 기타 요인들에 따라 좌우된다. 예를 들어, 전달되는 양은 본원에서 기술하는 바와 같은 바람직하지 않고/않거나 조절되지 않은 혈관신생 또는 신혈관형성과 관련된 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 경감시키기에 충분하다.
통상적으로, 치료학적 유효량은 활성 성분의 혈청 농도 약 0.1ng/ml 내지 약 50 내지 100㎍/ml를 생성해야 한다. 약제학적 조성물은 통상적으로 접합체 약 0.01mg/체중 kg/일 내지 약 2000mg/체중 kg/일의 투여량을 제공해야 한다. 약제학적 투여 단위 형태는 투여 단위 형태당 필수 활성 성분 또는 필수 성분의 배합물 약 1mg 내지 약 1000mg 및 일반적으로 약 10mg 내지 약 500mg을 제공하도록 제조한다.
접합체는 한번에 투여할 수 있거나 시간 간격을 두고 투여되는 다수의 보다 작은 투여량으로 분할될 수 있다. 정확한 투여량과 투여 기간은 치료하고자 하는 질환의 함수이며, 공지된 시험 프로토콜을 사용하거나 생체내 또는 시험관내 시험 데이터로부터 추정함으로써 실험적으로 결정할 수 있다는 것이 이해될 것이다. 농도 및 투여량 값이 경감시키고자 하는 상태의 중증도에 따라 다를 수도 있음이 주지될 것이다. 임의의 특정 피험자의 경우, 특수한 투여량 섭생을 개개인의 필요성과 조성물을 투여하거나 이러한 조성물 투여를 관리하는 사람의 전문적인 판단에따라서 일정 시간에 걸쳐 조절해야 하고, 본원에 제시된 농도 범위는 단지 예시적이고, 청구된 조성물 및 이를 함유하는 조합물의 범위 또는 용도가 제한되지 않는다는 것이 추가로 이해될 것이다.
예시적인 약제학적으로 허용되는 유도체는 산, 염기, 에놀 에테르 및 에스테르, 염, 에스테르, 수화물, 용매화물 및 접합체 형태를 포함한다. 유도체는 이의 약동학적 특성이 상응하는 천연 접합체에 비해 우수한 것을 선택한다.
따라서, 약제학적 조성물을 형성시키기 위해서, 본원에서 기술하는 접합체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 유도체의 유효 농도 또는 양을 전신계적, 국소 또는 국부 투여에 적합한 약제학적 담체 또는 비히클과 혼합한다. 접합체는 본원에서 기술하는 바와 같은 바람직하지 않고/않거나 조절되지 않은 혈관신생 또는 신혈관형성과 관련된 질환 또는 장애의 하나 이상의 증상을 경감시키거나 이러한 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하기에 유효한 양으로 포함된다. 조성물중 접합체의 농도는 접합체의 흡수율, 불활성화율, 배출율, 투여 스케쥴, 투여되는 양, 특정 제형 뿐만 아니라, 당해 분야의 숙련가에게 공지된 기타 요인에 따라 좌우된다.
조성물은 경구, 비경구, 직장내, 국소 및 국부 투여를 포함하는 적합한 경로에 의해 투여될 것이다. 경구 투여의 경우, 캡슐 및 정제가 일반적으로 사용된다. 조성물은 액체, 반액체 또는 고체 형태로 존재하며, 각각의 투여 경로에 적합한 방식으로 제형화한다. 예시적 투여방식은 비경구 및 경구 투여방식이다.
비경구, 진피내, 피하 또는 국소 적용에 사용되는 액제 또는 현탁제는 다음의 성분 중 어느 하나를 포함할 수 있다: 멸균 희석제, 예를 들어, 주사용수, 식염용액, 고정유, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 기타 합성 용매; 항미생물제, 예를 들어, 벤질 알코올 및 메틸 파라벤; 항산화제, 예를 들어, 아스코르브산 및 중아황산나트륨; 킬레이트제, 예를 들어, 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA); 완충제, 예를 들어, 아세테이트, 시트레이트 및 포스페이트; 및 삼투압 조정제, 예를 들어, 염화나트륨 또는 덱스트로즈. 비경구 제제는 앰풀, 1회용 주사기, 또는 유리, 플라스틱 또는 기타 적합한 재료로 만든 1회분 또는 수 회분 용량의 바이알에 봉입시킬 수 있다.
접합체가 불충분한 용해도를 나타내는 경우에는, 접합체를 가용화시키는 방법이 사용될 수 있다. 이러한 방법은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있으며, 조용매(예: 디메틸설폭사이드(DMSO))를 사용하는 방법, 계면활성제(예: Tween®)를 사용하는 방법 또는 수성 중탄산나트륨에 용해시키는 방법을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 접합체의 유도체를 유효한 약제학적 조성물을 제형화하는데 사용할 수도 있다.
접합체(들)의 혼합 또는 부가시에, 수득되는 혼합물은 용액, 현탁액 또는 유액 등일 수 있다. 생성된 혼합물의 형태는 의도하는 투여방식, 및 선택된 담체 또는 비히클 중의 화합물의 용해도를 포함하는 수많은 요인들에 따라 좌우된다. 유효 농도는 치료될 질환, 장애 또는 상태의 증상을 경감시키기에 충분하며 실험적으로 결정될 수 있다.
약제학적 조성물은 적합한 양의 적합체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 유도체를 함유하는 단위 투여 형태, 예를 들어, 정제, 캡슐제, 환제, 산제, 입제, 멸균성 비경구 액제 또는 현탁제, 및 경구용 액제 또는 현탁제, 및 유-수 유제 형태로 사람 및 동물에게 투여하기 위해 제공된다. 접합체 및 이의 유도체는 전형적으로 단위 투여 형태 또는 다중-투여 형태로 제형화되어 투여된다. 본원에서 사용되는 바와 같은 단위-투여 형태는 사람 및 동물 환자에게 적합한 물리적으로 별개의 단위이며 당해 분야에 공지된 바와 같이 개별적으로 포장된 것을 의미한다. 각각의 단위 투여량은 필요한 약제학적 담체, 비히클 또는 희석제와 혼합된, 바람직한 치료 효과를 제공하기에 충분한 치료학적으로 활성인 화합물의 예정된 양을 함유한다. 단위 투여 형태의 예는 앰풀 및 주사기 및 개별적으로 포장된 정제 또는 캡슐제를 포함한다. 단위-투여 형태는 이의 분획으로서 또는 다수로 투여할 수 있다. 다중-투여 형태는 분리된 단위-투여 형태로 투여하기 위한 단일 용기내에 포장된 다수의 동일한 단위-투여 형태이다. 다중-투여 형태의 예는 정제 또는 캡슐제의 바이알, 병 또는 파인트 또는 갤런 단위의 병들을 포함한다. 따라서, 다중 투여 형태는 포장시에 분리되지 않은 다수의 단위-투여 형태이다.
조성물은 접합체와 함께 다음을 함유할 수 있다: 희석제, 예를 들어, 락토오스, 슈크로오스, 인산이칼슘 또는 카복시메틸셀룰로오스; 윤활제, 예를 들어, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트 및 활석; 결합제, 예를 들어, 전분, 천연 고무(고무 아카시아 젤라틴), 글루코오스, 당밀, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로오스 및 이의 유도체, 포비돈, 크로스포비돈 및 당해 분야의 숙련가에게 공지된 다른 결합제. 약제학적으로 투여가능한 액체 조성물은 예를 들어, 상기 정의된 접합체 및임의로 약제학적 보조제를 담체, 예를 들어, 물, 염수, 수성 덱스트로오스, 글리세롤, 글리콜 및 에탄올 등 속에 용해, 분산 또는 혼합하여 용액 또는 현탁액을 형성시켜 제조할 수 있다. 바람직한 경우, 투여하고자 하는 약제학적 조성물은 습윤제, 유화제 또는 용해제 및 pH 완충제 등, 예를 들어, 아세테이트, 나트륨 시트레이트, 사이클로덱스트린 유도체, 솔비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 나트륨 아세테이트, 트리에탄올아민 올레에이트, 및 다른 제제 같은 비독성 보조 물질을 소량으로 함유할 수 있다. 상기 투여 형태를 제조하기 위한 실제 방법은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어져 있고 명백할 것이다[참조: 예를 들어, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 15th Edition, 1975]. 투여하고자 하는 조성물 또는 제형은 어떠한 경우라도 치료하는 환자의 증상을 경감시키기에 충분한 양으로 접합체를 함유할 것이다.
0.005 내지 100%의 범위의 활성 성분과 비-독성 담체로 이루어진 나머지 부분을 함유하는 투여 형태 또는 조성물이 제조될 수 있다. 경구 투여의 경우, 약제학적으로 허용되는 비독성 조성물은 통상적으로 사용되는 임의의 부형제, 예를 들어, 약제용 만니톨, 락토오스, 전분, 마그네슘 스테아레이트, 활석, 셀룰로오스 유도체, 나트륨 크로스카멜로오스, 글루코오스, 슈크로오스, 마그네슘 카보네이트 또는 나트륨 사카린을 혼입시켜 형성시킨다. 이러한 조성물은 액제, 현탁제, 정제, 캡슐제, 산제, 및 임플란트(implant) 및 미세캡슐화된 전달 시스템을 포함하나 이에 제한되지 않는 서방성 제형 및 생분해성 생적합성 중합체(예: 콜라겐, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리무수물, 폴리글리콜산, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산등)을 포함한다. 이들 조성물의 제조방법은 당해 분야의 숙련가에게 공지되어 있다. 의도되는 조성물은 0.1% 내지 85%, 예를 들어, 75% 내지 95%와 같은 0.001% 내지 100%의 활성 성분을 함유할 수 있다.
접합체 또는 약제학적으로 허용되는 유도체는 상기 접합체가 체내로부터 신속히 제거되는 것을 방지하는 담체를 사용하여 서방성 제형 또는 피복제로서 제조할 수 있다. 조성물은 목적하는 특성의 조합을 수득하기 위해 다른 접합체들을 포함할 수 있다. 본원에서 제공되는 접합체 또는 본원에서 기술하는 바와 같은 약제학적으로 허용되는 이의 유도체는 치료 또는 예방 목적상, 바람직하지 않고/않거나 조절되지 않은 혈관신생 또는 신혈관형성과 관련된 상기한 질환 또는 장애를 의미하는 질환 또는 의학적 상태 중 하나 이상을 치료하는데 유용한, 전반적 분야에 공지된 또 다른 약리학적 제제와 함께 유리하게 투여될 수도 있다. 이러한 배합 치료요법이 본원에서 제공되는 조성물과 치료방법의 추가의 양상을 구성함을 이해할 것이다.
1. 경구 투여용 조성물
경구용 약제학적 투여 형태는 고체, 겔 또는 액체이다. 고체 투여 형태는 정제, 캡슐제, 입제 및 혼합 산제이다. 경구 정제의 유형으로는 장용 피복되거나 당 피복되거나 피막될 수 있는 압착된 저작성 로젠지제 및 정제가 포함된다. 캡슐제는 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐제일 수 있으며, 입제 및 산제는 당해 분야의 숙련가에게 공지된 기타 성분과 함께 비-발포성 또는 발포성 형태로 제공될 수 있다.
특정 양태에서, 제형은 고체 투여 형태, 예를 들어, 캡슐제 또는 정제이다.정제, 환제, 캡슐제, 트로키제 및 기타 투여 형태는 예를 들어, 다음 성분들 중 어느 하나 또는 유사한 성질의 화합물을 함유할 수 있다: 결합제; 희석제; 붕해제; 윤활제; 활주제; 감미제 및 풍미제.
결합제의 예로는 미정질 셀룰로오스, 트라가칸트 고무, 글루코오스 용액, 아카시아 고무, 젤라틴 용액, 슈크로오스 및 전분 페이스트가 포함된다. 윤활제로는 활석, 전분, 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트, 석송(lycopodium) 및 스테아르산이 포함된다. 희석제로는 예를 들어, 락토오스, 슈크로오스, 전분, 카올린, 염, 만니톨 및 인산이칼슘이 포함된다. 활주제로는 콜로이드성 이산화규소가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 붕해제로는 크로스카멜로오스 나트륨, 나트륨 전분 글리콜레이트, 알긴산, 옥수수 전분, 감자 전분, 벤토나이트, 메틸셀룰로오스, 아가 및 카복시메틸셀룰로오스가 포함된다. 착색제로는 예를 들어, 임의의 승인된 수용성 FD & C 염료, 이들의 혼합물; 및 알루미나 수화물상에서 현탁된 수불용성 FD & C 염료가 포함된다. 감미제로는 슈클로오스, 락토오스, 만니톨 및 인공 감미제(예: 사카린) 및 임의의 수의 분부 건조된 풍미가 포함된다. 풍미제로는 과일과 같은 식물로부터 추출된 천연 풍미 및 상쾌한 감각을 부여하는 접합체(페파민트를 포함하나 이에 제한되지 않다)의 합성 블렌드 및 메틸 살리실레이트가 포함된다. 습윤제로는 프로필렌 글리콜 모스테아레이트, 솔비탄 모노올레이트, 디에틸렌 글리콜 모노라우레이트 및 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르가 포함된다. 장용 피복제로는 지방산, 지방, 왁스, 쉘락, 암모니아화 쉘락 및 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트가 포함된다. 피막제로는 하이드록시에틸셀룰로오스, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스,폴리에틸렌 글리콜 4000 및 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트가 포함된다.
경구 투여가 바람직한 경우, 접합체는 이를 위의 산성 환경으로부터 보호하는 조성물로서 제공될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 위속에서 이의 본래형태를 유지하고 장에서 접합체를 방출하는 장용 피복물로서 제형화할 수 있다. 조성물은 또한 제산제 또는 기타 성분과 배합하여 제형화할 수 있다.
투여 단위 형태가 캡슐인 경우, 이는 상기 유형의 물질 이외에 지방 오일과 같은 액체 담체를 함유할 수 있다. 또한, 투여 단위 형태는 투여 단위의 물리적 형태를 변형시키는 다양한 기타 물질, 예를 들어, 당 피복제 및 기타 장용 피복제를 함유할 수 있다. 접합체는 또한 엘릭서, 현탁액, 시럽, 웨이퍼, 스프링클(sprinkle) 또는 츄잉 검 등의 성분으로서 투여할 수도 있다. 시럽은 접합체 이외에 감미제로서의 슈크로오스 및 특정 보존제, 염료 및 착색제 및 풍미를 함유할 수 있다.
접합체는 또한 목적하는 작용을 손상시키기지 않는 기타 활성 성분 또는 목적하는 작용을 보충하는 물질, 예를 들어, 제산제, H2 차단제 및 이뇨제와 함께 혼합할 수 있다. 보다 고농도, 약 98중량% 이하의 접합체가 포함될 수 있다.
정제에 포함되는 약제학적으로 허용되는 담체는 결합제, 윤활제, 희석제, 붕해제, 착색제, 풍미제 및 습윤제이다. 장용 피복된 정제는 장용 피복으로 인해 위산의 작용에 내성을 가지며 중성 또는 알칼리성 장 속에서 용해되거나 붕해된다. 당 피복된 정제는 약제학적으로 허용되는 물질의 상이한 층들이 적용된 압착된 정제이다. 피막된 정제는 중합체 또는 기타 적합한 피복제로 피복된 압착된 정제이다. 다중 압착된 정제는 이미 언급한 약제학적으로 허용되는 물질을 사용하여 1회 이상의 압착 주기에 의해 제조된 압착된 정제이다. 착색제도 상기한 투여 형태에서 사용할 수 있다. 풍미제 및 감미제는 압착된 정제, 당 피복된 정제, 다중 압착된 및 저작성 정제에서 사용된다. 풍미제 및 감미제는 저작성 정제 및 로젠지제를 형성시킬 경우에 특히 유용하다.
액체 경구 투여 형태로는 수성 액제, 유제, 현탁제, 액제 및/또는 비-발포성 과립으로부터 재구성된 현탁제 및 발포성 과립으로부터 재구성된 발포성 제제가 포함된다. 수성 액제로는 예를 들어, 엘릭서제 및 시럽제가 포함된다. 유제는 수중유 또는 유중수이다.
엘릭서제는 감미된 투명한 하이드로알콜성 제제이다. 엘릭서제에서 사용되는 약제학적으로 허용되는 담체로는 용매가 포함된다. 시럽제는 당, 예를 들어, 슈크로오스의 농축된 수용액이며 보존제를 함유할 수 있다. 유제는 하나의 액제가 또 다른 액체 전체에 소형 구체 형태로 분산되어 있는 2상 시스템이다. 유제에서 사용되는 약제학적으로 허용되는 담체는 비수성 액체, 유화제 및 보존제이다. 현탁제는 약제학적으로 허용되는 현탁화제 및 보존제를 사용한다. 액체 또는 경구 투여 형태로 재구성될 비-발포성 입제에서 사용되는 약제학적으로 허용되는 물질로는 희석제, 감미제 및 습윤제가 포함된다. 액체 또는 경구 투여 형태로 재구성될 발포성 입제에서 사용되는 약제학적으로 허용되는 물질로는 유기산 및 이산화탄소원이 포함된다. 착색제 및 풍미제는 상기 모든 투여 형태에서 사용된다.
용매로는 글리세린, 솔비톨, 에틸 알콜 및 시럽이 포함된다. 보존제의 예로는 글리세린, 메틸 및 프로필파라벤, 벤조산, 나트륨 벤조에이트 및 알콜이 포함된다. 유제에서 사용되는 비수성 액체의 예로는 광유 및 면실유가 포함된다. 유화제의 예로는 젤라틴, 아카시아, 트라가칸트, 벤토나이트 및 계면활성제(예: 폴리옥시에틸렌 솔비탄 모노올레이트)가 포함된다. 현탁화제의 예로는 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 펙틴, 트라가칸트, Veegum 및 아카시아가 포함된다. 희석제로는 락토오스 및 슈크로오스가 포함된다. 감미제로는 슈크로오스, 시럽, 글리세린 및 인공 감미제(사카린)이 포함된다. 습윤제로는 프로필렌 글리콜 모노스테아레이트, 솔비탄 모노올레이트, 디에틸렌 글리콜 모노라우레이트 및 폴리옥시에틸렌 라우릴 에테르가 포함된다. 유기산으로는 시트르산 및 타르타르산이 포함된다. 이산화탄소원으로는 중탄산나트륨 및 탄산나트륨이 포함된다. 착색제로는 임의의 승인된 수용성 FD & C 염료 및 이의 혼합물이 포함된다. 풍미제로는 과일과 같은 식물로부터 추출된 천연 풍미 및 상쾌한 미감을 부여하는 접합체의 합성 블렌드가 포함된다.
고체 투여 형태의 경우, 예를 들어, 프로필렌 카보네이트, 식물성 오일 또는 트리글리세라이드 중의 용액 또는 현탁액, 예를 들어, 제형을 젤라틴 캡슐 내에 봉입시킬 수 있다. 이러한 용액 및 이의 제조와 캡슐화는 미국 특허 제4,328,245호; 제4,409,239호; 및 제4,410,545호에 기재되어 있다. 액체 투여 형태의 경우, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 중의 액제를 투여용으로 용이하게 측정되는 충분량의 약제학적으로 허용되는 액체 담체, 예를 들어, 물로 희석시킬 수 있다.
또한, 액체 또는 반고체 경구 제형은 접합체 또는 이의 유도체를 식물성 오일, 글리콜, 트리글리세라이드, 프로필렌 글리콜 에스테르(예: 프로필렌 카보네이트) 및 기타 담체 속에 용해 또는 분산시키고 이들 용액 또는 현탁액을 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐 외피에 봉입시켜 제조할 수 있다. 다른 유용한 제형으로는 미국 특허 제28,819 및 제4,358,603호에 제시된 제형이 포함된다. 간략하게 언급하면, 이러한 제형으로는 본원에서 제공되는 접합체, 1,2-디메톡시메탄, 디글림, 트리글림, 테트라글림, 폴리에틸렌 글리콜-350-디메틸 에테르, 폴리에틸렌 글리콜-550-디메틸 에테르, 폴리에틸렌 글리콜-750-디메틸 에테르(여기서, 350, 550 및 750은 폴리에틸렌 글리콜의 대략적 평균 분자량을 의미한다)를 포함하나 이에 제한되지 않는 디알킬화된 모노- 또는 폴리-알킬렌 글리콜 및 하나 이상의 항산화제(예: 부틸화된 하이드록시톨엔(BHT), 부틸화된 하이드록시아니솔(BHA), 프로필 갈레이트, 비타민 E, 하이드로퀴논, 하이드록시쿠마린, 에탄올아민, 레시틴, 세팔린, 아스코르브산, 말산, 솔비톨, 인산, 티오디프로피온산 및 이의 에스테르 및 디티오카바메이트)를 함유하는 제형이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
다른 제형으로는 약제학적으로 허용되는 아세탈을 포함하는 수성 알콜성 용액이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 이러한 제형에서 사용되는 알콜은 하나 이상의 하이드록실 그룹을 갖는 임의의 약제학적으로 허용되는 수혼화성 용매로서, 프로필렌 글리콜 및 에탄올을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 아세탈로는 저급 알킬 알데히드의 디(저급 알킬) 아세탈, 예를 들어, 아세트알데히드 디에틸 아세탈이 포함되나 이에 제한되지 않는다.
모든 양태에서, 제형의 정제 및 캡슐제는 접합체의 용해를 개질시키거나 유지시키기 위해 당해 분야의 숙련가에게 공지된 바와 같이 피복시킬 수 있다. 따라서, 예를 들어, 정제 및 캡슐제는 장내에서 소화가능한 통상적인 피복제, 예를 들어, 페닐살리실레이트, 왁스 및 셀룰로오스 아세테이트 프탈레이트로 피복시킬 수 있다.
2. 주사제, 액제 및 유제
일반적으로 피하, 근육내 또는 정맥내 주사를 특징으로 하는 비경구 투여가 또한 본원에서 고려된다. 주사제는 액체 용액 또는 현탁액과 같은 통상의 형태, 주사 전에 액체속에 용해 또는 현탁시키기에 적합한 고체 형태 또는 유액으로서 제조할 수 있다. 적합한 부형제는 예를 들어, 물, 식염수, 덱스트로오스, 글리세롤 또는 에탄올이다. 또한, 경우에 따라, 투여하고자 하는 약제학적 조성물은 습윤제 또는 유화제, pH 완충제, 안정화제, 용해도 증강제 및 기타 제제, 예를 들어, 나트륨 아세테이트, 나트륨 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레이트 및 사이클로덱스트린와 같은 소량의 비독성 보조 물질을 또한 함유할 수 있다. 일정한 투여량 수준이 유지되도록 하는 지효성 또는 서방성 시스템의 이식[참조: 미국 특허 제3,710,795호]도 본원에서 고려된다. 간략하게 언급하면, 본원에서 제공되는 접합체는 체액중에서 불용성이고 외부 중합체성 막(예: 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 에틸렌/프로필렌 공중합체, 에틸렌/에틸 아세테이트 공중합체, 에틸렌/비닐아세테이트 공중합체, 실리콘 고무, 폴리디메틸 실록산, 네오프렌 고무, 염소화된 폴리에틸렌, 폴리비닐클로라이드, 비닐 아세테이트, 비닐리덴 클로라이드, 에틸렌 및 프로필렌과의 비닐클로라이드 공중합체, 이오노머 폴리에틸렌 테레프탈레이트, 부틸고무 에피클로로히드린 고무, 에틸렌/비닐 알콜 공중합체, 에틸렌/비닐 아세테이트/비닐 알콜 삼원공중합체 및 에틸렌/비닐옥시에탄올 공중합체)으로 둘러싸인 고체 내부 매트릭스, 예를 들어, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리부틸메타크릴레이트, 가소화된 또는 비가소화된 폴리비닐클로라이드, 가소화된 나일론, 가소화된 폴리에틸렌테레프탈레이트, 천연 고무, 폴리이소프렌, 폴리이소부틸렌, 폴리부타디엔, 폴리에틸렌, 에틸렌-비닐아세테이트 공중합체, 실리콘 고무, 폴리디메틸실록산, 실리콘 카보네이트 공중합체, 친수성 중합체(예: 아크릴산과 메타크릴산의 에스테르의 하이드로겔) 콜라겐, 가교된 폴리비닐알콜 및 가교된 부분적으로 가수분해된 폴리비닐 아세테이트 속에 분산된다. 접합체는 방출 속도 조절 단계에서 외부 중합체성 막 전체에 분산된다. 이러한 비경구 조성물중에 함유된 중합체의 비율은 이의 특수한 성질 뿐만 아니라 접합체의 활성과 환자의 필요성에 따라 크게 좌우된다.
조성물의 비경구 투여는 정맥내, 피하 및 근육내 투여를 포함한다. 비경구 투여용 제제는 피하용 정제, 즉시 주사가능한 멸균 현탁제, 사용 직전에 비히클과 즉시 배합할 수 있는 멸균 불용성 생성물 및 멸균 유제를 포함하여 즉시 주사가능한 멸균 용액, 사용 직전에 용매와 즉시 배합될 수 있는 멸균 무수 수용성 생성물, 예를 들어, 동결건조된 분말을 포함한다.
정맥내 투여되는 경우, 적합한 담체는 생리식염수 또는 포스페이트 완충 식염수(PBS) 및 증점제와 가용화제(예: 글루코오스, 폴리에틸렌 글리콜 및 폴리프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물)를 함유하는 용액을 포함한다.
비경구 제제에서 사용되는 약제학적으로 허용되는 담체는 수성 비히클, 비수성 비히클, 항미생물제, 등장제, 완충제, 항산화제, 국소 마취제, 현탁화제 및 분산제, 유화제, 금속이온 봉쇄제 또는 킬레이트제 및 기타 약제학적으로 허용되는 물질을 포함한다.
수성 비히클의 예는 나크륨 클로라이드 주사액, 링거 주사액, 등장성 덱스트로오스 주사액, 멸균수 주사액, 덱스트로즈 및 락테이트 링거 주사액을 포함한다. 비수성 비경구 비히클은 식물 기원의 고정유, 면실유, 옥수수유, 참기름 및 땅콩유를 포함한다. 정균성 또는 정진균성 농도의 항미생물제가 다중 투여량 용기에 포장된 비경구 제제에 첨가되어야 하며, 항미생물제는 페놀 또는 크레졸, 수은, 베질 알콜, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-하이드록시벤조산 에스테르, 티메로살, 벤잘코늄 클로라이드 및 벤제토늄 클로라이드를 포함한다. 완충제는 포스페이트 및 시트레이트를 포함한다. 항산화제는 중황산나트륨을 포함한다. 국소 마취제는 프로카인 하이드로클로라이드를 포함한다. 현탁화제 및 분산제는 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀루로오스 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 유화제는 폴리솔베이트 80(Tween®80)을 포함한다. 금속이온 봉쇄제 또는 킬레이트제는 EDTA를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 담체는 또한 수혼화성 비히클용으로 경우 에틸 알콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜을 포함하며, pH 조절용으로 수산화나트륨, 염산, 시트르산 또는 락트산을 포함한다.
접합체의 농도는 주사가 목적하는 약리학적 효과를 생성시키는 유효량을 제공하는 정도로 조정한다. 정확한 투여량은 당해 분야에 공지되어 있는 바와 같이 환자 또는 동물연령, 체중 및 상태에 따라 좌우된다.
단위 투여량 비경구 제제는 앰풀, 바이알 또는 바늘이 부착된 주사기내에 포장한다. 모든 비경구 투여용 제제는 당해 분야에 공지되어 있고 실행되는 바와 같이 멸균성이어야 한다.
실례로서, 접합체를 함유하는 멸균 수용액의 정맥내 또는 동맥내 주입은 효과적 투여방식이다. 또 다른 양태는 목적하는 약리학적 효과를 생성하기 필요에 따라 주사되는 접합체를 함유하는 멸균 수용액 또는 유성 용액 또는 현탁액이다.
주사제는 국소 및 전신계적 투여용으로 디자인한다. 전형적으로, 치료학적 유효량은 치료될 조직(들)에 대해 접합체 약 0.1%w/w 내지 약 90%w/w 이상, 일반적으로 1%w/w 이상의 농도를 함유하도록 제형화한다. 접합체는 한번에 투여할 수 있거나 시간 간격을 두고 투여되는 다수의 보다 작은 투여량으로 분할될 수 있다. 정확한 투여량과 치료 기간은 치료하고자 하는 조직의 함수이며, 공지된 시험 프로토콜을 사용하거나 생체내 또는 시험관내 시험 데이터로부터 추정함으로써 실험적으로 결정할 수 있다는 것이 이해될 것이다. 농도 및 투여량 값이 경감시키고자 하는 상태의 중증도에 따라 다를 수도 있음이 주지될 것이다. 임의의 특정 피험자의 경우, 특수한 투여량 섭생은 개개인의 필요성과 제형을 투여하거나 이러한 제형의 투여를 관리하는 사람의 전문적인 판단에 따라서 일정 시간에 걸쳐 조절해야 하고, 본원에 제시된 농도 범위는 단지 예시적이고, 청구된 제형의 범위 또는 실행을 제한하고자 함이 아니라는 것이 추가로 이해될 것이다.
접합체를 미분형 또는 기타 적합한 형태로 현탁시킬 수 있거나 유도체화시켜 보다 안정한 생성물을 제조할 수 있다. 수득되는 혼합물의 형태는 의도하는 투여 방식 및 선택된 담체 또는 비히클 중의 접합체의 용해도를 포함하는 수 많은 요인들에 따라 좌우된다. 유효 농도는 상태의 증상을 경감시키기에 충분하며 실험적으로 결정될 수 있다.
3. 동결건조된 분말
본원에서 관심대상은 용액, 유액 및 기타 혼합물로서 투여하기 위해 재구성할 수 있는 동결건조된 분말이다. 동결건조된 분말은 재구성하여 고체 또는 겔로서 제형화할 수 있다.
멸균 동결건조된 분말은 본원에서 제공되는 접합체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 유도체를 적합한 용매속에 용해시켜 제조한다. 상기 용매는 분말 또는 이러한 분말로부터 제조된 재구성된 용액의 안정성 또는 기타 약리학적 성분을 개선시키는 부형제를 함유할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는 덱스트로오스, 솔비탈, 프럭토오스, 옥수수 시럽, 자일리톨, 글리세린, 글루코오스, 슈크로오스 또는 기타 안정한 제제를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 상기 용매는 또한 시트레이트, 인산나트륨 또는 인산칼륨 같은 완충제 또는 당해 분야의 숙련가에게 공지된, 전형적으로 약 중성 pH의 기타 완충제를 함유할 수 있다. 후속적으로 용액을 멸균 여과시킨 다음, 당해 분야의 숙련가에게 공지된 표준 조건하에 동결건조시켜 목적하는 제형을 제조한다. 일반적으로, 수득되는 용액은 동결건조용 바이알내로 배분할 수 있다. 각각의 바이알은 단일 투여량(예를 들어, 10 내지 1000mg, 예를 들어, 100 내지 500mg) 또는 다중 투여량의 접합체를 함유할 수 있다. 동결건조된 분말은 약 4℃ 내지 실온과 같은 적절한 조건하에 저장할 수 있다.
이러한 동결건조된 분말을 주사용수로 재구성하여 비경구 투여용 제형을 수득한다. 재구성을 위해서는, 일반적으로 멸균수 또는 기타 적합한 담체 ml당 동결건조된 분말 약 1 내지 50mg, 예를 들어, 5 내지 35mg 또는 약 9 내지 30mg을 첨가한다. 정확한 양은 서택된 접합체, 의도하는 피험자 및 기타 실험적으로 측정가능한 파라메터에 따라 좌우된다. 따라서, 양은 실험적으로 결정될 수 있다.
4. 국소 투여
국소용 혼합물은 국소 및 전신계적 투여에 대해기술한 바와 같이 제조한다. 수득되는 혼합물은 용액, 현탁액 또는 유액 등일 수 있으며, 크림제, 겔제, 연고제, 유제, 액제, 엘릭서제, 로션제, 현탁제, 팅크제, 페이스트제, foam, 에어로졸제, 관주제, 스프레이제, 좌제, 붕대, 경피 팻치 또는 국소 투여에 적합한 임의의 기타 제형으로 제형화할 수 있다.
접합체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 유도체는 흡입에 의한 국소 적용을 위한 에어로졸제로서 제형화할 수 있다[참조: 염증 질환, 특히 천식 치료용으로 유용한 스테로이드의 전달을 위한 에어로졸제를 기술하는 미국 특허 제4,044,126호, 제4,414,209호, 및 제4,364,923호]. 기도에 투여하기 위한 이들 제형은 단독의 또는 락토오스와 같은 불활성 담체와 배합된, 분무기용 에어로졸 또는 용액 형태 또는 취입기용 미분 분말일 수 있다. 이러한 경우에, 제형의 입자는 직경이 전형적으로 50μ 미만, 일반적으로 10μ 미만일 수 있다.
접합체는 국부 또는 국소 적용, 예를 들어, 피부 및 점막(예: 안구)에의 적용을 위해 겔제, 크림제 및 로션제 형태로서 제형화할 수 있으며, 안구에의 적용 또는 조내(槽內) 또는 척수내 적용을 위해 제형화할 수 있다. 국소 투여는 경피 전달 및 안구나 점막에의 투여 또는 흡입 치료요법용으로 고려된다. 단독의 또는 기타 약제학적으로 허용되는 부형제와 배합된 접합체의 비액(nasal solution)을 사용할 수도 있다.
이러한 액제, 특히 안구용으로 의도되는 액제는 적절한 염을 사용하여 pH 약 5 내지 7의 0.01% 내지 10% 등장액으로서 제형화할 수 있다.
5. 기타 투여경로용 조성물
국소 적용, 경피 팻치 및 직장내 투여와 같은 기타 투여경로가 본원에서 또한 고려된다.
예를 들어, 직장내 투여를 위한 약제학적 투여 형태는 전신계적 효과를 위한 직장 좌제, 캡슐제 및 정제이다. 본원에서 사용되는 직장 좌제는 체온에서 용융되거나 연화되어 하나 이상의 접합체를 방출하는, 직장내로 삽입하기 위한 고형체이다. 직장 좌제에서 사용되는 약제학적으로 허용되는 물질은 기재 또는 비히클 및 융점을 상승시키는 제제이다. 기재의 예는 코코아 버터(테오브로마 오일), 글리세린-젤라틴, 카보왁스(폴리옥시에틸렌 글리콜) 및 지방산의 모노-, 디- 및 트리글리세라이드의 적절한 혼합물을 포함한다. 좌제의 융점을 상승시키는 제제는 경랍 및 왁스를 포함한다. 직장 좌제는 압착 방법 또는 성형에 의해 제조할 수 있다. 직장 좌제의 전형적 중량은 약 2 내지 3gm이다.
직장 투여용 정제 및 캡슐제는 동일한 약제학적으로 허용되는 물질을 사용하여 경구 투여용 제형과 동일한 방법으로 제조한다.
6. 제품
접합체 또는 약제학적으로 허용되는 유도체는 포장 재료, 증식성 질환 또는 장애과 관련된 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 경감에 사용되는 본원에서 제공되는 접합체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 유도체 및 상기 유도체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 유도체가 증식성 질환 또는 장애과 관련된 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 경감용으로 사용됨을 나타내는 표지를 함유하는 제품으로서 포장될 수 있다.
본원에서 제공되는 제품은 포장 재료를 함유한다. 약제학적 생성물을 포장하는데 사용되는 포장재료는 당해 분야의 숙련가에게 익히 공지되어 있다[참조: 미국 특허 제5,323,907호, 제5,052,558호 및 제5,033,252호]. 약제학적 포장 재료의 예는 투명 포장, 병, 튜브, 흡입기, 펌프, 백, 바이알, 용기, 주사기, 병 및 선택된 제형 및 의도하는 투여방식과 치료에 적합한 포장 재료를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 본원에서 제공되는 접합체 및 조성물의 광범위한 제형화는 세포 표면 프로테아제, 이의 가용성, 분비된 또는 방출된 형태가 관련되는 임의의 장애를 위한 각종 치료와 마찬가지로 고려된다.
F. 접합체 활성의 평가
표준 생리학적, 약리학적 및 생화학적 과정은 세포 표면 프로테아제 또는 이의 가용성, 분비된 또는 방출된 형태의 작용시 치료학적 활성을 지니는 접합체를동정하기 위해 접합체를 시험하는데 이용할 수 있다. 접합체의 치료학적 활성, 예를 들어, 세포독성을 평가하는데 사용될 수 있는 시험관내 및 생체내 검정은 시험하고자 하는 치료제에 따라 좌우될 것이다.
예시적 검정은 세포독성 접합체와 관련하여 하기에서 간략하게 논의된다(실시예 참조). 검정되는 특정 활성은 접합된 치료제에 따라 좌우될 것이다.
1. 시험관내 검정
본원에서 제공되는 접합체의 치료학적 활성, 예를 들어, 세포독성은 비접합된 치료제의 치료학적 활성, 예를 들어, 세포독성을 평가하는데 통상적으로 사용되는 어떠한 검정으로도 평가할 수 있다. 이러한 수많은 검정이 공지되어 있으며, 예를 들어, 검정은 표적화된 세포 표면 프로테아제를 발현하는 세포를 이용하여 치료제의 치료학적 활성을 평가할 수 있다. 예를 들어, 세포독성은 세포 생존율을 측정하거나, 표지된 뉴클레오타이드 또는 기타 표지를 혼입시킴으로써 세포 증식을 측정함으로써 평가할 수 있다. 일반적으로, 활성은 표적화된 프로테아제를 발현하지 않는 세포와 비교한다.
예를 들어, 세포는 표적화된 MTSP 또는 엔도텔리아제를 발현하는 어떠한 세포라도 될 수 있다. 이러한 세포는 상기 논의한 바와 같은 조직 발현 프로필을 측정하여 세포 표면 프로테아제를 발현하는 것으로 공지된 세포를 선택하거나 각종 세포주를 표적화된 프로테아제의 공지된 기질의 존재 및 부재하에 프로테아제에 대한 표지된, 예를 들어, 발색성 기질의 존재하에서의 표적화된 프로테아제 또는 프로테아제 활성에 대한 항체로 스크리닝함으로써 수득할 수 있다.
또한, 프로테아제를 암호화하는 핵산을 프로테아제를 발현하지 않는 세포주에 도입시켜 상기 세포주에서 이를 발현시킴으로써 관심대상의 프로테아제를 발현하는 세포주를 제조할 수 있다. 수득되는 재조합 세포는 세포독성 검정에서 사용할 수 있다.
2. 생체내 검정
치료학적 활성을 평가하기 위한 수많은 동물 모델이 공지되어 있다. 어떠한 적합한 생체내 모델이라도 사용할 수 있다. 실례로는 마우스 이종이식 모델 및 병아리 배아 모델이 있다.
병아리 배아 모델
CAM 모델[병아리 배아 융모요막 모델; Ossowski (1998), J. Cell Biol., 107: 2437-2445]은 시험 화합물의 억제 활성을 평가하기 위한 또 다른 방법을 제공한다. CAM 모델에서, 종양 세포는 CAM을 함유하는 융모요막을 통하여 침입하는데, 몇몇 세린 프로테아제 억제제의 존재하에서의 종양 세포는 이러한 막을 통한 침입이 저하되었거나 전혀 이루어지지 않았다. 따라서, CAM 검정은 각종 농도의 시험 화합물의 존재 및 부재하에 CAM 및 종양 세포를 사용하여 수행한다. 종양 세포의 침입성은 상기 화합물의 억제 활성의 지표를 제공하는 조건하에 측정한다. 억제 활성을 갖는 화합물은 보다 낮은 종양 침입과 상관관계가 있다.
따라서, CAM 검정은 각종 농도의 시험 화합물의 존재 및 부재하에 CAM 및 종양 세포를 사용하여 수행한다. 활성 갖는 화합물은 종양 침입 및/또는 종양 성장의 변화와 상관관계가 있다.
예를 들어, 세포독성제와 같은 치료제를 방출시키는 세포 표면 프로테아제의 활성 또는 접합체의 활성을 상기 모델을 사용하여 평가할 수 있다. 치료제가 화합물로부터 방출되고 상기 치료제가 억제제인 경우, 종양 침입이 보다 낮아지고 종양의 크기가 감소될 것이다. 치료제가 접합체내에서 불활성인 경우, 종양 침입에 영향을 미치지 않을 것이다.
CAM 모델은 또한 혈관신생에 대한 표준 검정(즉, 신생 혈관의 형성에 대한 효과)[참조: Brooks et al.(1999) Methods in Molecular Biology, 129: 257-269]에서 사용된다. 상기 모델에 따라서, 염기성 섬유아세포 성장 인자(bFGF) 같은 혈관신생 유도제를 함유하는 필터 디스크를 CAM 상에 위치시킨다. 상기 사이토킨의 CAM내로의 확산으로 국부적인 혈관신생이 유도되며, 이는 필터 디스크 바로 아래에서 CAM내 혈관 분지점의 수를 계수하는 것과 같은 수가지 방식으로 측정할 수 있다. 동정된 화합물이 사이토킨-유도된 혈관신생을 억제하는 능력은 상기 모델을 사용하여 시험할 수 있다. 시험 화합물은 혈관신생 유도제를 함유하는 필터 디스크에 첨가되어 직접적으로 상기 막 상에 위치되거나 전신계적으로 투여될 수 있다. 시험 화합물의 존재 및/또는 부재하에서 신생 혈관 형성의 정도를 상기 모델을 사용하여 비교할 수 있다. 시험 화합물의 존재하에서 보다 적은 신생 혈관 형성은 항-혈관신생 활성의 지표일 것이다.
이는 (1) 접합체내의 치료제의 활성을 평가하고, (2) 특정 세포 표면 프로테아제가 치료제를 접합체로부터 방출시키는 능력을 평가하기 위해 본원의 접합체와 함께 사용하기 위해 채택할 수 있다.
마우스 이종이식 모델
생체내 활성은 익히 공지된 항종양 활성용 마우스 이종이식 모델과 같은 인정된 동물 모델을 사용하여 평가할 수 있다[참조: Beitz et al. (1992) Cancer Research 52:227-230; Houghton et al. (1982) Cancer Res. 42:535-539; Bogden et al. (1981) Cancer (Philadelphia) 48:10-20; Hoogenhout et al. (1983) Int. J. Radiat. Oncol., Biol. Phys. 9:871-879; Stastny et al. (1993) Cancer Res. 53:5740-5744]. 생체내 마우스 고형 종양 이종이식 모델은 종양 세포 성장 및/또는 자발적 전이를 억제하는 제제의 능력을 시험하기 위한 검정에서 사용된다. 예를 들어, 접합체를 표적화된 세포 표면 프로테아제를 발현하는 임의의 종양 아형, 예를 들어, 난소 종양에 대한 항종양 활성에 대해서 마우스 종양 이종이식 모델에서 평가한다. 누드 마우스에게 접합체를 1회 이상, 예를 들어, 4회 정맥내 주사한다. 투여 물질은 시험 물질을 적절한 용적의 예를 들어, PBS/0.1%/BSA와 혼합하여 목적하는 투여량을 달성함으로써 제조한다. 실험 기간 동안 1일째를 종양 세포를 마우스내로 주입한 날로 지정하여, 예를 들어, 5일째, 12일째, 19일째 및 26일째에 마우스에게 꼬리정맥내로 IV 주사(250 내지 300㎕)한다. 투여량은 고정시키거나 체중의 차이에 따라 정규화시킨다. 종양 용적을 선택된 기간 동안 주 2회 측정한다.
8주령 내지 12주령의 흉선이 없는 암컷 Balb/c nu/nu 마우스(공급원: Roger Williams Hospital Animal Facility, Providence, RI)가 적합한 마우스이다. 이들 마우스는 무균 환경에서 유지시키고 투여 전날에 체중이 약 25 내지 30g 범위인 것을 선택한다. 동물을 격리실에서 유지시키고 무균 조건하에 길들인다. 음식과 물은 임의로 공급한다. 적절한 종양 세포는 예를 들어, 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection, Rockville, MD)에서 입수할 수 있고, 10% 태아 송아지 혈청이 보충된 개질된 이글 배지에서 성장시킬 수 있다. 선택된 특정일, 예를 들어, 시험 물질을 주사하기 5일 전에 마우스에게 우측 후부 옆구리내로 종양 세포를 피하 주사한다.
캘리퍼스를 사용하여 각 종양의 면적을 측정한다. 최대 및 최소 넓이의 측정(mm)을 실험기간 동안 선택된 간격, 예를 들어, 주 2회 간격으로 시험 물질을 주사하기 전에 수행한다. 종양 용적(mm3)은 예를 들어, 다음식을 사용하여 계산할 수 있다:
용적=[(넓이)2(길이)]/2
G. 표적에 대한 프로테아제를 동정하는 방법
질환 치료를 위한 접합체를 표적화시키는 프로테아제를 동정하는 방법이 또한 제공된다. 상기 방법은 질환 과정에 관여하는 세포 또는 질환 과정에 관여하는 세포 부근의 세포를 동정함으로써 세포 표면 프로테아제 관련 질환을 동정하는 것과 관련된다. 예를 들어, 질환이 특정 종양과 관련되는 경우, 특정 종양 또는 이의 부근에 위치하는 세포상에서 제시되는 종양이 동정된다. 이어서, 표적화를 위한 세포상의 세포 표면 프로테아제 및 이에 대한 기질이 동정된다. 이어서, 본원에서 제공되는 바와 같은 프로테아제를 표적화시키는 접합체를 제조할 수 있다.
하기 실시예는 단지 예시적 목적을 위해 포함되며 본 발명의 범주를 제한하기 위함이 아니다.
실시예 1
펩타이드-독소루비신 접합체를 제조하기 위한 일반적 과정
단계 A: Wang 수지상에서 펩타이드의 제조
펩타이드는 미리부가된 Wang 수지(0.25mmol)상에서 ABI 431A 펩타이드 합성기(제조원: Perseptive Biosystems)를 사용하여 자동적으로 제조한다. ABI 431A는 HOBT, HBTU, DIEA 활성화를 사용한다. N-아세틸(또는 다른 아미드) 캡핑된 펩타이드의 합성은 상기 ABI 431A에서 최종 커플링 단계 동안 AcOH(또는 다른 대표적 카복실산)의 사용을 포함한다. 다음 시약들을 사용하여 수동적으로 결합시킨 다른 N-말단 캡: 카바메이트 및 설폰아미드의 경우, 펩타이드는 DMF(3mL) 속에서 ROCOCl 또는 RSO2Cl 및 DIEA(각각 4당량, 1시간)로 캡핑시킨다.
단계 B: Wang 수지로부터 펩타이드의 절단
Wang 수지로부터의 펩타이드의 절단은 상기 수지를 2mL TFA/H2O(95:5)와 함께 45분 동안 진탕시키는 것을 포함한다. 상기 수지를 여과시켜 제거하고, 여액을 추가의 시간 동안 정치시킨다. 용액을 잔사로 농축시킨다. 조 펩타이드를 분석용 HPLC(시스템 A)에 의해 분석한다. 조 펩타이드의 전형적 순도는 80% 내지 95%의 범위이다. 펩타이드를 적절한 구배(전형적으로 10 내지 30%)를 사용하여 분취용HPLC(시스템 B)에 의해 정제한다. 이어서, 순수한 분획을 동결건조시켜 목적하는 펩타이드를 백색 고체로서 수득한다. 전형적 수율은 20 내지 50%이고 순도는 96 내지 99%이다.
분석용 HPLC 조건(시스템 A)
컬럼: Chromolith RP-18e 4.6mm x 100mm(제조원: EM science)
구배: 6분에 걸쳐 A 중 5 내지 50% B
유속: 4mL/분
용매 A: 수중 0.1% TFA
용매 B: 아세토니트릴중 0.1% TFA
파장: 210 nm, 280 nm
분취용 HPLC 조건 (시스템 B)
컬럼: Ultro 120 5 C18Q 150 x 20(제조원: Peeke Scientific)
구배: 40분에 걸쳐 A중 0 내지 20% B, 또는 10 내지 30% B 또는 20 내지 40% B
유속: 18mL/분
용매 A: 수중 0.1% TFA
용매 B: 아세토니트릴
파장: 214 nm
단계 C: 독소루비신에 대한 펩타이드 산의 커플링
펩타이드 산(0.052mmol, 1.2당량), 독소루비신하이드로클로라이드(0.043mmol, 25 mg)과 HATU(0.0604mmol, 22.9mg, 1.4당량)의 혼합물에 DMF(1 mL)에 이어서 2,6-루티딘(0.17mmol, 20㎕, 4당량)을 첨가한다. 혼합물을 균질한 용액이 수득될 때까지 혼합한다. 4시간 내지 24시간 후(HPLC 시스템 A에 의해 모니터링), 반응물을 물(9 mL)로 희석시키고 분취용 HPLC(시스템 D)에 의해 직접적으로 정제한다. 이어서, 순수한 분획을 동결건조시켜 목적하는 펩타이드 독소루비신 접합체를 모우립(fluffy) 적색 고체로서 수득한다. 최종 접합체의 양을 분석용 HPLC(시스템 C) 및 질량 분광분석법에 의해 확인한다. 전형적 수율은 10 내지 30%이며 순도는 95 내지 99%이다. (주의: 펩타이드 산이 히스티딘 잔기를 함유하는 경우 염기로서 DIEA가 대용되며 펩타이드 산이 염기로서 대체되는 경우 반응 시간은 1간으로 단축된다)
펩타이드 독소루비신 접합체의 플루오레닐메틸에스테르의 탈보호: 유리 카복실산이 상기 접합체내에 존재하는 경우, 플루오레닐 메틸 에스테르를 사용하여, 펩타이드 산의 C-말단이 독소루비신에 커플링되는 동안에 카복실산을 보호시킨 다음, 플루오레닐메틸 그룹을 1시간 동안 DMF 중의 10% 모르폴린을 사용하여 제거한다.
분석용 HPLC 조건(시스템 C)
컬럼: Chromolith RP-18e 4.6mm x 100mm(제조원: EM science)
구배: 6분에 걸쳐서 A 중 5 내지 50% B
유속: 4mL/분
용매 A: 수중 0.1% TFA
용매 B: 아세토니트릴 중 0.1% TFA
파장: 210 nm, 280 nm
체류시간(분)의 예
독소루비신 4.05
Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-nLeu-Dox 4.34
MeOCO-Thr-Gly-Arg-Ser-nLeu-Dox 4.39
PhSO2-Thr-Gly-Arg-Ser-nLeu-Dox 4.83
N,N-디메틸글리신-Thr-Gly-Arg-Ser-nLeu-Dox 4.27
Ac-Thr-Gly-Arg-Ser-nLeu-Dox 4.32
분취용 HPLC 조건(시스템 D)
컬럼: Ultro 120 5 C18Q 150 x 20 mm(제조원: Peeke Scientific)
구배: 40분에 걸쳐 A중 10 내지 30% B
유속: 18mL/분
용매 A: 수중 0.1% 아세트산
용매 B: 아세토니트릴
파장: 214 nm
실시예 2
Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-nLeu-Dox의 제조
단계 A: Ac-Gly-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-nLeu-Wang 수지의 수동합성
질소 교반기와 진공 보조된 배수구가 장착된 25mL 소결 펩타이드 합성 용기내에서, Fmoc-nL-Wang 수지(nova-biochem, 3.3g, 0.9mmol/g, 3mmol)를 DMF를 사용하여 30분 동안 예비팽윤시킨다. 이어서, 상기 펩타이드를 다음 Fmoc 아미노산과 함께 하기 4단계 과정을 총 5회 반복하여 신장시킨다: Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Arg(Pbf)-OH, Fmoc-Gly-OH, Fmoc-Ser(tBu)-OH, Fmoc-Gly-OH.
반복 커플링 과정
1. 수지를 DMF(100 mL) 중의 20% 피페리딘과 5분 동안 혼합한 다음, 배출시킨다(3회 반복).
2. 수지를 DMF (100 mL)와 30초 동안 교반한 다음, 배출시킨다(3회 반복).
3. Fmoc-아미노산 (12 mmol), HOBT (12 mmol, 4당량, 1.622g), TBTU (11.7 mmol, 3.9당량, 3.757g), DMF (10 mL)과 NMP (90 mL)의 혼합물에 DIEA(12 mmol, 4 당량, 2.10mL)을 첨가한다. 5분 동안 교반하여 예비활성화시킨 후, 용액을 합성 용기에 첨가한다. 닌히드린 시험에 의해 반응이 완료되었는지 검사한 다음, 배출시킨다(닌히드린 시험이 청색을 나타내는 경우, 이중 커플링(단계 3 반복)을 수행한다.
4. 수지를 DMF(100mL)와 30초 동안 교반한 다음, 배출시킨다(3회 반복)
신장된 수지(Fmoc-Gly-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-nLeu-Wang 수지)를 상기 단계 1 및 2에 도입시켜 Fmoc 그룹을 제거한다. 아세트산 무수물(15mmol, 5당량, 1.42mL), DIEA (15 mmol, 5당량, 2.62 mL), DMF (10 mL) 및 NMP (90 mL)의용액을 반응 용기에 첨가한다. 1시간 후, 수지를 DMF(100 mL, 3회), CH2Cl2(100 mL, 3회) 및 MeOH (100 mL, 3회)로 세척한다. 수지를 진공하에 15시간 동안 건조시킨다.
단계 B: Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-nLeu-OH의 제조
Ac-Gly-Ser(tBu)-Gly-Arg(Pbf)-Ser(tBu)-nLeu-Wang 수지(3mmol)를 함유하는 상기 합성 용기에 TFA/H2O (95:5, 50mL)를 첨가한다. 45분 동안 약하게 교반한 후, 절단 용액을 수집하고 여액을 추가로 90분 동안 정치시킨다. 상기 용액을 잔사로 농축시킨다. 조 펩타이드를 분석용 HPLC(시스템 A, RT=1.73, 순도 = 90%)에 의해 분석한다. 잔사를 물(50mL) 및 헥산(10 mL) 속에 용해시키고 혼합한다. 헥산 층을 제거하고 수성 층을 질소로 버블링시켜 잔류하는 모든 헥산을 증발시킨다. 조 펩타이드를 분취용 HPLC(시스템 E)에 의해 정제한다. 이어서, 순수한 분획을 동결건조시켜 Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-nLeu-OH (1.04g, 1.68mmol, 56%)를 백색 고체로서 수득한다. 순도를 분석용 HPLC (시스템 A, RT=1.73분, 97% 순도)에 의해 평가하고 구성을 질량 분광분석법(617.9에서 관찰된 이온)에 의해 평가한다.
분취용 HPLC 조건 (시스템 E)
컬럼: Waters Delta-Pak 반경 압축 컬럼, 15um, 100A
구배: 40분에 걸쳐 A 중 5 내지 15% B
유속: 80mL/분
용매 A: 수중 0.1% 아세트산
용매 B: 아세토니트릴
파장: 214 nm
단계 C: Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-nLeu-Dox의 제조
Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-nLeu-OH(1.68mmol, 1.04g, 1.1당량), 독소루비신 하이드로클로라이드(1.53mmol, 887.8 mg)과 HATU (1.76mmol, 669.6mg, 1.15당량)의 혼합물에 DMF(40mL)에 이어서 2,6-루티딘(6.12 mmol, 709㎕, 4당량)을 첨가한다. 용액을 18시간 동안 교반한다. 반응물을 물(100 mL)로 희석시키고 아세트산(400㎕)으로 산성화시킨 다음, 분취용 HPLC(시스템 E)에 의해 3개의 뱃치로 즉시 정제한다. 각각의 적색 분획을 분석용 HPLC(시스템 F)에 의해 분석한다. 이어서, 순도가 95% 이상인 분획을 합한다. 아세토니트릴을 진공하에 제거하고 잔류 용액을 동결건조시켜 Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-nLeu-Dox(0.682mmol, 780mg, 45%)을 모우립 적색 고체로서 수득한다. 순도를 분석용 HPLC(시스템 F, RT=3.51분, 95% 순도)에 의해 평가하고 구성을 질량 분광분석법(1143.5에서 관찰된 이온)에 의해 평가한다.
분석용 HPLC 조건 (시스템 F)
컬럼: Chromolith RP-18e 4.6 mm x 100mm(제조원: EM science)
구배: 6분에 걸쳐서 A중 20 내지 40% B
유속: 4mL/분
용매 A: 수중 0.1% TFA
용매 B: 아세토니트릴 중 0.1% TFA
파장: 210 nm, 280 nm
분취용 HPLC 조건 (시스템 E)
컬럼: Waters Delta-Pak 반경 압축 컬럼, 15um, 100A
구배: 40분에 걸쳐 A 중 15 내지 25% B
유속: 80mL/분
용매 A: 수중 0.1% 아세토니트릴
용매 B: 아세토니트릴
파장: 214nm
실시예 3
펩타이드-탁솔 접합체를 제조하기 위한 일반적 과정
단계 A: Wang 수지상에서 펩타이드의 제조
실시예 1의 단계 A 참조.
단계 B: Wang 수지로부터 펩타이드의 절단
실시예 1의 단계 B 참조.
단계 C: 7-Gly-탁솔 또는 7-Ala-탁솔에 대한 펩타이드산의 커플링
펩타이드산(0.0121mmol, 1.1당량), 7-Gly-탁솔 또는 7-Ala-탁솔(0.011 mmol)과 HATU (0.0154 mmol, 5.9mg, 1.4당량)의 혼합물에 DMF(0.3mL)에 이어서 2,6-루티딘(0.044 mmol, 5.1㎕, 4당량)을 첨가한다. 상기 혼합물을 균질한 용액이 수득될 때까지 혼합한다. 4시간 내지 24시간 후(HPLC 시스템 H에 의해 모니터링), 반응물을 물(9 mL)로 희석시키고 분취용 HPLC(시스템 I)에 의해 직접적으로 정제한다. 이어서, 순수한 분획을 동결건조시켜 목적하는 펩타이드 탁솔 접합체를 모우립 백색 고체로서 수득한다. 최종 접합체의 양을 분석용 HPLC (시스템 H) 및 질량 분광분석법에 의해 확인한다. 전형적 수율은 30 내지 50%이고 순도는 96 내지 99%이다.
분석용 HPLC 조건 (시스템 H)
컬럼: Chromolith RP-18e 4.6 mm x 100mm(제조원: EM science)
구배: 6분에 걸쳐서 A 중 5 내지 90% B
유속: 4mL/분
용매 A: 수중 0.1% TFA
용매 B: 아세토니트릴 중 0.1% TFA
파장: 210nm, 280nm
체류시간(분)의 예
Ac-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-탁솔 2.86
Ac-Gln-Ser-Arg-Ser-Ala-Ala-탁솔 2.79
Ac-Ser-Gly-Arg-Ala-Ser-Ala-탁솔 2.87
Ac-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-탁솔 2.80
Ac-Ser-Gly-Arg-Ser-Ser-Ala-탁솔 2.81
분취용 HPLC 조건 (시스템 I)
컬럼: Ultro 120 5 C18Q 150 x 20 mm(제조원: Peeke Scientific)
구배: 40분에 걸쳐서 A중 20 내지 45% B
유속: 18mL/분
용매 A: 수중 0.1% TFA
용매 B: 아세토니트릴
파장: 214 nm
실시예 4
N-Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-DOX의 제조
단계 A: N-Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-OH
다음 일반적 과정을 사용하여, N-아세틸 펩타이드성 기질 N-Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-OH를 펩타이드 합성 플라스크내에서 합성한다. 시판되는 Fmoc-Ala-Wang 수지(0.35g, 0.84mmol, Nova)를 20% 피페리딘으로 표준 Fmoc-탈보호시키기 시작한 다음, 순차적 반복 커플링-Fmoc 탈보호 전략을 수행한다. 각각의 커플링은 각각 3배 과량(2.52 mmol)의 Fmoc-Ala, Fmoc-Arg(Boc)2, Fmoc-Ser(tBu), Fmoc-Gln(Trt) 및 Fmoc-Arg(Boc)2을 사용한다. 커플링은 DMF 용매 속에서 PyBOP (2.52mmol) 및 DIEA (2.52 mmol)을 사용하여 달성한다. 각각의 커플링 주기 동안, Fmoc 보호 그룹을 DMF 중 20% 피페리딘을 사용하여 제거한다. N-말단 Fmoc 그룹을 제거한 후, 아세트산 무수물(1.43 mmol, 1.7당량), DMAP (0.25 mmol, 0.3당량) 및 DIEA (1.26 mmole, 1.5당량)로 캡핑시켜 수지-결합된 N-아세틸 중간체를 수득한다. 보호된 펩타이드 수지를 메틸렌 클로라이드 중 50% TFA로 30분 동안 처리하여 Wang 수지를 절단시킨 다음, Boc, Trt 및 t-Bu 보호 그룹 메틸렌 클로라이드 중 70% TFA로 제거한다. 용매와 기타 휘발성 부산물을 감압하에 증발시키고, 조 생성물을 물속에 용해시키고 동결건조시켜 표제 화합물을 거의 무색인 무정형 고체로서 수득한다. 질량 스펙트럼 분석으로 목적하는 분자량을 확인한다. HPLC 분석은 생성물의 순도가 약 95%임을 나타낸다. 펩타이드 카복실산 중간체는 경우에 따라 분쇄시키거나 분취용 HPLC를 사용하여 추가로 정제할 수 있다.
단계 B: N-Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-DOX
단계 A로부터의 중간체(20 mg, 0.027 mmol)를 무수 DMF(0.8 mL) 속에 용해시키고 질소 대기하에 실온에서 교반한다. 상기 용액에 독소루비신 하이드로클로라이드 (15.6mg, 0.027mmol), EDC (6.8 mg, 0.035 mmol), HOAt (4.8 mg, 0.035 mmol) 및 2,6-루티딘(7.3㎕, 0.06 mmol)를 첨가한다. 분석용 HPLC (시스템 J, 하기 참조)에 의해 모니터링한 바와 같이 커플링이 완료될 때까지 지속적으로 교반한다. 용액을 여과하고, 조 생성물을 C18 RP-HPLC(A=0.1% AcOH/H2O; B=CH3CN, 60분에 걸쳐서 구배 용출액 100% 내지 60% A)에 의해 정제한다. 균질한 생성물 분획(HPLC에의해 평가, 시스템 J)을 모으고 동결건조시켜 표제 생성물을 담적색 고체로서 수득한다.
HPLC 조건, 시스템 J:
컬럼: Phenomenex 15cm #00F-3033-E0, C18
용출: 20분에 걸쳐서 구배 95:5(A:B) 내지 25:75 (A:B).
A=0.1% TFA/H2O, B=0.1%TFA/아세토니트릴
유속: 1mL/분.
파장: 210 nm, 280 nm
체류 시간: 독소루비신 = 8.89분.
N-Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-Dox = 8.4분.
물리적 특성:
분자식: C55H78N14O20
분자량: 1255.3
저분해능 질량 스펙트럼: 628.2(M+2/2)
표 2는 추가의 펩타이드성 기질-독소루비신 접합체에 대한 데이터를 기재한 것이다. 이들 접합체는 실시예 4에서 기술한 일반적 과정으로 제조한 적절한 아미노산 전구체로부터 제조한 것이다.
표 2
펩타이드성 기질-DOX 접합체 질량 스펙트럼 HPLC-체류 시간(분)
아세틸-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-DOX 471.2(M+3/3) 8.23
아세틸-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-DOX 509.2(M+3/3) 8.60
실시예 5
MTSP1의 재조합 프로테아제 도메인에 의한 독소루비신/펩타이드성 기질 접합체의 50% 절단까지 소요되는 시간의 측정
각 펩타이드성 기질 접합체에 대한 1mM 모액을 이중 증류수 속에서 제조한다. 이어서, 100㎕ 접합체를 29.2 mM Tris(pH 8.4), 29.2mM 이미다졸, 217 mM NaCl 중의 MTSP1의 재조합적으로 생성된 활성 일본쇄 프로테아제 도메인(서열 2의 잔기 615번 내지 855번, 서열 1의 뉴클레오타이드 1865번 내지 2582번에 의해 암호화됨)과 혼합하는 절단 반응을 수행한다. 최종 용적은 200㎕이다. 상기 반응물들을 37℃에서 수조내에 항온처리한다. 2분 내지 128분 범위의 시간에서, 샘플 20㎕ 를 분취하고, 트리플루오로아세트산을 첨가하여 효소적 활성을 0.33%로 중단시킨다. 각 샘플내의 가수분해된 양을 역상 HPLC에 의해 측정한다. 이어서, 생성물 피크 아래의 면적을 기질과 생성물 피크 아래의 면적의 합으로 나누어 가수분해 %를 계산한다. 비가수분해된 기질 %를 반응 시간의 로그에 대해 플롯화하고, 이 플롯을 프리즘 소프트웨어(제조원: Graphpad Inc., San Diego, CA)를 사용하여 시그모이드 곡선으로 피팅(fitting)하여 각 기질의 50%가 절단되는 시간을 측정한다.
본원에서 제공되는 특정 접합체에 대한 결과는 도 1에 도시한다(조건: 12 mM트리스(하이드록시메틸)아미노메탄(pH 8.0), 25 mM NaCl, 0.5 mM CaCl2속에서 37℃에서 1nM MTSP과 100㎕ 접합체; 반응물은 0.33% 트리플루오로아세트산으로 냉각시킨다).
실시예 6
접합체의 세포독성의 시험관내 검정
접합체의 세포독성을 또한 시험하여 상기 접합체가 전구약물로서 작용하는지를 확인할 수 있다. 접합체는 알라마 블루(Alamar Blue) 검정을 사용하여 변형되지 않은 세포독성제에 의해 치사되는 것으로 공지된 세포주에 대해 시험한다. MTSP1 또는 엔도텔리아제와 같은 세포 표면 프로테아제를 발현하는 LNCaP 세포(공급원: The American Type Culture Collection, Rockville, Maryland)를 1 x 104개 세포/웰(0.1 mL/웰)의 밀도로 96웰 플레이트에 도말한다. 배지만을 함유하는 플레이트를 대조군으로서 사용한다. 세포를 37℃에서 3일 동안 배양하고 알라마 블루 20㎕를 상기 검정 웰(들)에 첨가한다. 7시간 동안 배양한 후, 세포 치사를 570 및 600nm에서 EL-310 플레이트 판독기를 사용하여 측정한다. 세포 치사 수치는 배지 대조군에 대한 세포수의 감소율(%)로서 표현한다.
실시예 7
접합체의 생체내 효능
종양 세포를 트립신으로 처리하고, 성장 배지에 재현탁시키고 200×g에서 6분 동안 원심분리한다. 세포를 혈청 비함유 α-MEM에 재현탁시키고 계수한다. 이어서, 목적하는 수의 세포를 함유하는 상기 용액의 적절한 용적을 원뿔형 원심관으로 옮기고, 상기한 바와 같이 원심분리하고 적절한 용적의 α-MEM-매트리겔의 차가운 1:1 혼합물에 재현탁시킨다. 현탁액을 동물에게 접종시킬 때까지 빙상에서 보관한다.
10주령의 수컷 누드 마우스를 사용한다. 마우스는 개별적으로 칭량하고, 각 그룹내의 개개의 마우스 간에 체중 차이가 2g 이하가 되게 하여 그룹(n= 그룹당 10)으로 분류한다. 1일째에, 마우스에게 종양 세포주를 피하 접종한다. 각 마우스에게 예를 들어, 빙냉 매트리겔과 α-MEM의 60% 용액 중의 0.5 x 106내지 108종양 세포/mL의 0.5mL를 접종한다. 이어서, 24시간 후, 접합체를 주사하기 시작한다. 비히클-처리된 마우스에게 수중 5% 덱스트로즈를 주사한다. 18일째 내지 2달 이상째와 같은 예정된 시간의 말기에, 마우스를 희생시키고 종양 크기 및 질량 또는 기타 파라메터를 측정한다. 접합체-처리된 마우스에 대한 종양 크기 및 질량 또는 기타 파라메터를 비히클-처리된 마우스와 비교하여 접합체의 효능을 측정한다.
마우스에게 종양 세포를 접종한 후 다음의 3가지 프로토콜 중 하나의 프로토콜하에 처리한다.
프로토콜 A
세포를 접종한지 1일 후에 동물에게 시험 접합체, 변형되지 않은 세포독성제 또는 비히클 대조군(멸균수) 7.2 또는 17.9μmol/kg를 포함하는 1 내지100μmol/kg 또는 3 내지 50μmol/kg 또는 5 내지 25μmol/kg 또는 7 내지 22μmol/kg를 투여한다. 접합체와 세포독성제의 투여량은 초기에는 최대 비치사량이나, 나중에는 보다 낮은 수준으로 적정할 수 있다. 동일한 투여량을 5일 동안 24시간 간격으로 투여한다. 5.5주 또는 다른 적합한 간격의 말기에, 마우스를 치사시키고 나타난 모든 종양의 중량을 측정한다. 동물의 체중은 검정의 초기와 말기에 측정한다.
프로토콜 B
세포 접종 후 14일 내지 15일째에, 동물에게 시험 접합체, 변형되지 않은 세포독성제 또는 비히클 대조군(멸균수) 7.2 또는 17.9μmol/kg를 포함하는 1 내지 100μmol/kg 또는 3 내지 50μmol/kg 또는 5 내지 25μmol/kg 또는 7 내지 22μmol/kg를 투여한다. 접합체와 세포독성제의 투여량은 초기에는 최대 비치사량이나, 나중에는 보다 낮은 수준으로 적정할 수 있다. 동일한 투여량을 5일 동안 24시간 간격으로 투여한다. 5.5주 또는 다른 적합한 간격의 말기에, 마우스를 치사시키고 나타난 모든 종양의 중량을 측정한다. 동물의 체중은 검정의 초기와 말기에 측정한다.
프로토콜 C
세포를 접종한지 1일 후에 동물에게 시험 접합체, 변형되지 않은 세포독성제 또는 비히클 대조군(멸균수) 7.2 또는 17.9μmol/kg를 포함하는 1 내지 100μmol/kg 또는 3 내지 50μmol/kg 또는 5 내지 25μmol/kg 또는 7 내지 22μmol/kg를 복강내 투여한다. 접합체와 세포독성제의 투여량은 초기에는 최대비치사량이나, 나중에는 보다 낮은 수준으로 적정할 수 있다. 동일한 투여량을 5주 동안 7일 간격으로 투여한다. 5.5주 또는 다른 적합한 간격의 말기에, 마우스를 치사시키고 나타난 모든 종양의 중량을 측정한다. 동물의 체중은 검정의 초기와 말기에 측정한다.
실시예 8
예시적 MTSP의 유전자 발현 프로필 및 도메인 구성
정상 조직, 암 세포 및 암 조직에서 MTSP1의 유전자 발현 프로필
MTSP1의 조직 분포 및 유전자 발현 수준에 관한 정보를 수득하기 위해서, 암호화 핵산을 함유하는 피치아 파스토리스(Pichia pastoris) 발현 벡터 pPIC9K-MTSP1로부터의 DNA 삽입체를 사용하여 76개 상이한 사람 조직(카탈로그 번호 7775-1; 사람 다중 조직 발현(MTE) 어레이; 제조원: CLONTECH, Palo Alto, CA)으로부터의 RNA를 함유하는 블롯을 프로빙하였다. 현저한 발현은 결장(상행결장, 횡행결장 및 하행결장), 직장, 기관, 식도 및 십이지장에서 관찰되었다. 중간 정도 수준의 발현은 공장, 회장, 회맹부, 위, 전립선, 뇌하수체, 맹장, 신장, 폐, 태반, 췌장, 갑상선, 타액선, 유선, 태아 신장 및 태아 폐에서 관찰되었다. 낮은 수준의 발현은 비장, 흉선, 말초혈 백혈구, 림프절, 골수, 방광, 자궁, 간, 부신, 태아 심장, 태아 간, 태아 비장 및 태아 흉선에서 나타났다. 상당량의 MTSP1 전사체는 또한 결장직장 선암종 세포주(SW480), 버킷트 림프종 세포주(Daudi) 및 백혈병 세포주(HL-60)에서 검출되었다. 흉선이 없는 누드 마우스에 이종이식된 수개의 사람 원발성 종양에서 MTSP1 전사체의 RT-PCR은 유전자-특이적 프라이머를 사용하여수행하였다. MTSP1 전사체의 높은 수준이 결장 선암종(CX-1) 및 췌장 선암종(GI-103)에서 검출되었다. 중간 정도의 수준이 또 다른 결장 선암종(GI-112), 난소 암종(GI-102), 폐 암종(LX-1), 및 유방 암종(GI-101)에서 관찰되었다. 또 다른 폐 암종(GI-117)은 보다 낮은 수준의 MTSP1 전사체를 발현하였다. 유사한 RT-PCR을 수행하여 PC-3 및 LNCaP 세포주에서 MTSP1 전사체의 존재를 검출하였다. 세포주는 둘다 상당량의 MTSP1 전사체를 발현하였다. MTSP1은 또한 난소암의 마커이다.
정상 및 종양 조직에서 세린 프로테아제 MTSP3의 유전자 발현 프로필
MTSP3의 조직 분포에 관한 정보를 수득하기 위해서, MTSP3 프로테아제 도메인을 암호화하는 DNA 삽입체를 사용하여 76개의 상이한 사람 조직(카탈로그 번호 7775-1; 사람 다중 조직 발현(MTE) 어레이; 제조원: CLONTECH, Palo Alto, CA)으로 구성된 RNA 블롯을 프로빙하였다. 감소된 신호 수준으로 관찰된 발현 패턴은 다음과 같았다: 기관 = 결장(하행결장) = 식도 > 결장(상행결장) > 결장(횡행결장) = 직장 > 회장 > 십이지장 > 공장 > 방광 > 회맹부 > 위 > 신장 > 맹장. 이는 또한 태아 신장 및 2개의 종양 세포주인 HeLa S3 및 백혈병 K-562에서 덜 풍부하게 발현된다. RNA 블롯(카탈로그 번호 7780-1, 7765-1 및 7782-1; 사람 12-레인, 사람 근육 및 사람 소화계 다중 조직 노던(MTN) 블롯; 제조원: CLONTECH)을 사용한 노던 분석은 상기 발현이 결장에서 가장 풍부하게 검출되고 식도, 소장, 방광 및 신장에서 중간 정도로 검출되며 위장 및 직장에서 보다 덜 풍부하게 검출되었다는 것을 확인시켰다. 약 2.2kb의 단일 전사체가 검출되었다.
마우스에 이종이식된 수개의 사람 원발성 종양에서 MTSP3 전사체의 증폭은유전자-특이적 프라이머를 사용하여 수행하였다. MTSP3 전사체는 폐 암종(LX-1), 결장 선암종(CX-1), 결장 선암종(GI-112) 및 난소 암종(GI-102)에서 검출되었다. 어떠한 명백한 신호도 또 다른 형태의 폐 암종(GI-117), 유방 암종(GI-101), 췌장 선암종(GI-103) 및 전립선 선암종(PC3)에서는 검출되지 않았다.
정상 및 종양 조직에서 MTSP4의 유전자 발현 프로필
MTSP4 전사체의 유전자 발현 프로필에 관한 정보를 수득하기 위해서, LDL 수용체 도메인의 일부 및 프로테아제 도메인을 암호화하는 DNA 단편을 사용하여 76개의 상이한 사람 조직(카탈로그 번호 7775-1; 사람 다중 조직 발현(MTE) 배열; 제조원: Clontech)으로 구성된 RNA 블롯을 프로빙하였다. 노던 겔 블롯 분석에서와 같이, 매우 강력한 신호가 간에서 관찰되었다. 다른 조직에서의 신호는 (감소되는 신호 수준으로) 다음과 같이 관찰되었다: 간 > 심장 = 신장 = 부신 = 정소 = 태아 심장 및 신장 = 골격근 = 방광 = 태반 > 뇌 = 척수 = 결장 = 위장 = 비장 = 림프절 = 골수 = 기관 = 자궁 = 췌장 = 타액선 = 유선 = 폐. MTSP4는 또한 다음을 포함하는 수개의 종양 세포주에서 보다 덜 풍부하게 발현된다: HeLa S3 = 백혈병 K-562 = 버킷트 림프종(Raji 및 Daudi) = 결장직장 선암종(SW480) > 폐 암종(A549) = 백혈병 MOLT-4 = 백혈병 HL-60. 누드 마우스에 이종이식된 수개의 사람 원발성 종양으로부터 제조된 cDNA 라이브러리(사람 종양 다중 조직 cDNA 패널, 카탈로그 번호 K1522-1, 제조원: CLONTECH)로부터의 MTSP4 전사체의 PCR은 MTSP4-특이적 프라이머를 사용하여 수행하였다. MTSP4 전사체는 유방 암종(GI-101), 폐 암종(LX-1), 결장 선암종(GI-112) 및 췌장 선암종(GI-103)에서 검출되었다. 어떠한 명백한 신호도 또 다른 형태의 폐 암종(GI-117), 결장 선암종(CX-1), 난소 암종(GI-102) 및 전립선 선암종(PC3)에서 검출되지 않았다. MTSP4 전사체는 또한 LNCaP 및 PC-3 전립선암 세포주 뿐만 아니라 HT-1080 사람 섬유육종 세포주에서 검출되었다.
정상 및 종양 조직에서 MTSP6의 유전자 발현 프로필
MTSP6 전사체의 유전자 발현 프로필에 관한 정보를 수득하기 위해서, 프라이머 Ch17-NSP-3 및 NSP-4AS를 사용한 PCR 반응으로부터 수득한 495bp DNA 단편을 사용하여 76개의 상이한 사람 조직(카탈로그 번호 7775-1; 사람 다중 조직 발현(MTE) 어레이, 제조원: CLONTECH)으로 구성된 RNA 블롯을 프로빙하였다. 가장 강력한 신호는 십이지장에서 관찰되었다. 다른 조직에서의 신호는 (감소되는 신호 수준으로) 다음과 같이 관찰되었다: 위 > 기관 = 유선 = 갑상선 =타액선 = 뇌하수체 = 췌장 > 신장 > 폐 > 공장 = 회장 = 회맹부 = 맹장 = 태아 신장 > 태아 폐. 매우 약한 신호는 또한 수개의 다른 조직에서 관찰될 수 있다. MTSP6은 또한 다음을 포함하는 수개의 종양 세포주에서 발현된다: HeLa S3 > 결장직장 선암종 (SW480) > 백혈병 MOLT-4 > 백혈병 K-562. 누드 마우스에 이종이식된 수개의 사람 원발성 종양으로부터 제조된 cDNA 라이브러리(사람 종양 다중 조직 cDNA 패널, 카탈로그 번호 K1522-1, 제조원: CLONTECH)로부터의 MTSP6 전사체의 PCR 분석은 MTSP6-특이적 프라이머(Ch17-NSP-3 및 Ch17-NSP2AS)를 사용하여 수행하였다. MTSP6 전사체는 폐 암종(LX-1)에서 강력하게 검출되었으며 췌장 선암종(GI-103)에서 중간 정도로 검출되었으며 난소 암종(GI-102)에서 약하게 검출되었으며 결장 선암종(GI-112 및 CX-1), 유방 암종 (GI-101), 폐 암종 (GI-117) 및 전립선 선암종(PC3)에서 매우 약하게 검출되었다. MTSP6 전사체는 또한 유방암 세포주 MDA-MB-231, 전립선 암 세포주 PC-3에서 검출되었지만, HT-1080 사람 섬유육종 세포주에서는 검출되지 않았다. MTSP6는 또한 유선 암종 cDNA(제조원: Clontech)에서 발현된다.
정상, 종양 조직 및 세포주에서 MTSP9의 유전자 발현 프로필
MTSP9 전사체의 유전자 발현 프로필을 수득하기 위해서, 사람 췌장으로부터 수득한 MTSP9 cDNA 단편을 사용하여, 76개의 상이한 사람 조직(사람 다중 조직 발현(MTE) 어레이, 제조원: Clontech, Palo Alto, CA; 카탈로그 번호 7775-1)으로부터 추출된 RNA로 구성된 도트 블롯을 프로빙하였다. 상기 분석의 결과는 MTSP9가 식도에서 고도로 발현되며 다수의 다른 조직에서 낮은 수준으로 발현됨을 나타낸다. MTSP9 전사체는 신장(성인 및 태아), 비장(성인 및 태아), 태반, 간(성인 및 태아), 흉선, 말초혈 백혈구, 폐 (성인 및 태아), 췌장, 림프절, 골수, 기관, 자궁, 전립선, 식도, 정소, 난소 및 샘 기관(유선, 부신, 갑상선, 뇌하수체 및 타액선)에서 발견된다. MTSP9는 또한 식도 종양 조직 및 폐 암종(A549 세포주)에서 발현되며, 직장결장 암종(SW480), 림프종(Raji 및 Daudi), 자궁경부 암종(HeLaS3) 및 백혈병(HL-60, K-562 및 MOLT-4) 세포주에서 낮은 수준으로 발현된다.
정상 및 종양 조직에서 MTSP10의 유전자 발현 프로필
MTSP10 전사체의 유전자 발현 프로필에 관한 정보를 수득하기 위해서, PCR 분석을 수개의 사람 성인 조직(Clontech, 카탈로그 번호 K1420-1) cDNA 패널로부터 제조된 cDNA 상에서 MTSP10-특이적 프라이머를 사용하여 수행하였다. MTSP10 전사체는 췌장, 폐 및 신장에서 검출되었다. MTSP10 전사체는 또한 소장 마라톤-레디 cDNA(제조원: Clontech)에서 검출되었다. 누드 마우스에 이식된 수개의 사람 원발성 종양으로부터 제조된 cDNA 라이브러리(사람 종양 다중 조직 cDNA 패널, 카탈로그 번호 K1522-1, CLONTECH)부터의 MTSP10 전사체의 PCR을 수행한다. MTSP10 전사체는 유방 암종(GI-101), 폐 암종(LX-1 및 GI-117), 난소 암종(GI-102) 및 췌장 선암종(GI-103)에서 검출되었다. MTSP10 전사체는 전립선 선암종(PC3)에서 약하게 검출될 수 있다. 어떠한 명백한 신호도 2가지 형태의 결장 선암종(GI-112 및 CX-1)에서 검출되지 않았다. MTSP10 전사체는 또한 누드 마우스에서 성장한 CWR22R 전립선 종양에서 검출되었다.
정상 및 종양 조직에서 MTSP12의 도메인 구성 및 유전자 발현 프로필
MTSP12PD1, -PD2 및 -PD3의 도메인 구성 및 다른 세린 프로테아제에 대한 상동성
전사된 MTSP12PD1, -PD2 및 -PD3 뉴클레오타이드 서열의 서열 및 단백질 도메인 분석은 이들 3가지 세린 프로테아제가 연속하여 있음을 나타낸다. 서열 순서는 다음과 같다: MTSP12-PD1은 MTSP12-PD2 다음의 N 말단에서 발견되며, MTSP12-PD3는 C 말단에 위치한다. MTSP12-PD1 및 -PD2는 프로테아제 활성화 절단 부위(MTSP12-PD1 및 -PD2에 대해 각각 ...R236 ↓I237VGGMEAS... 및 ...R537↓V538VGGFGAA...이고, 여기서 |는 프로테아제 활성화 절단 부위를 나타낸다) 및 촉매적 도메인의 3가지의 고도로 보존된 영역내의 촉매적 트리아드 잔기(MTSP12-PD1내의 His277, Asp326및 Ser421; MTSP12-PD2내의 His578, Asp626및 Ser721)의 존재를 특징으로 하는 트립신-유형 세린 프로테아제 도메인(MTSP12-PD1 및 -PD2의 경우 각각 aa 236번 내지 aa 465번 및 aa 537번 내지 aa 765번)을 함유한다. MTSP12-PD3은 세린 프로테아제 도메인(aa 861번 내지 aa 1087번)을 함유하며, 상기 세린 프로테아제 도메인은 프로테아제 활성화 절단 부위(...R860↓I861VGGSAAG...)를 가지며 촉매적 His902및 Asp949를 갖지만, 세린 프로테아제에서 발견된 보존된 촉매적 세린 대신에 Ala1043를 갖는다. 몇몇 도메인은 MTSP12-PD1 세린 프로테아제 도메인의 상부에서 발견되며, 이러한 도메인들은 트랜스막 도메인(aa 28번 내지 aa 50번), SEA(성개 정자 단백질-엔테로키나제-아그린;sea urchin sperm protein-enterokinase-agrin) 도메인(aa 51번 내지 aa 170번) 및 LDLa(저밀도 지단백질 수용체 부류a) 도메인(aa 187번 내지 aa 225번)을 포함한다. 5개의 가능한 N-연결된 글리코실화 부위(N116SS, N581HT, N672AT, N697FS 및 N820ST)가 있다. MTSP12-PD1의 프로테아제 도메인에서는, 일본쇄 형태의 프로테아제 도메인내에 쌍을 이루지 않은 시스테인(C346)이 있으며 후속적인 다음의 Cys 쌍이 주지된다: C262-C278; C360-C427; C417-C446; C392-C406. MTSP12-PD2의 프로테아제 도메인에서는, 일본쇄 형태의 프로테아제 도메인내의 쌍을 이루지 않은 시스테인(C646)이 있으며 후속적인 다음의 Cys 쌍이 주지된다: C563-C579; C660-C727; C692-C706; C717-C746. MTSP12-PD3의 프로테아제 도메인에서는, 일본쇄 형태의 프로테아제 도메인내의 쌍을 이루지 않은 시스테인(C969)이 있으며, 후속적인 다음의 Cys 쌍이 주지된다: C887-C903; C983-C1049; C1014-C1028; C1039-C1068.
공개된 데이타베이스에 축적된 공지된 세린 프로테아제 대한 각각의 MTSP12-PD1, MTSP12-PD2 및 MTSP12-PD3 단백질 서열의 정렬(blastp; http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST)은 매트립타제와 45%, 45% 및 48% 동일성, DESC1/엔도텔리아제 1과 44%, 43% 및 41% 동일성, 프로스타민(AB030036)과 44%, 43% 및 48% 동일성, 스피네신(TMPRSS5; NM_030770)과 43%, 39% 및 39% 동일성 및 마라프신(NM_031948)과 40%, 38% 및 38% 동일성을 나타낸다. 클론은 뉴클레오타이드 및 암호화된 단백질 수준에서 국제 PCT 출원 제WO 02/00860호(이 문헌의 서열 38 및 97 참조)에 기술된 클론 및 암호화된 단백질과 약 93%의 상동성을 갖는다. 그러나, 상기 PCT 출원에 기술된 암호화된 단백질은 서열 20의 아미노산 Leu373 및 Val374 사이의 서열 271에 제시된 서열 뿐만 아니라 서열 20의 아미노산 Ala48및 Phe49사이의 추가로 신장된 아미노산 서열을 가지며 서열 20의 아미노산 91번 내지 124번이 결여되어 있다.
MTSP12의 유전자 및 조직 발현 프로필
MTSP12PD1, -PD2 및 -PD3 전사체의 조직 분포 프로필에 관한 정보를 수득하기 위해서, 3개의 cDNA 프로브를 제조하였다. 데이터는 MTSP12PD1, -PD2 및 -PD3 전사체가 76개의 조직 및 세포주 대부분에서 낮은 수준으로 발현되지만, 림프절 및정소에서는 높은 수준으로 발현됨을 나타낸다.
MTSP12PD1, -PD2 및 -PD3의 발현 프로필을 정상 사람 및 매치된 종양 조직의 범위에서 비교하기 위해서, 각 환자로부터의 68쌍의 cDNA 샘플로 구성된 매치된 종양/정상 발현 어레이(카탈로그 번호 7840-1; http://www.clontech.com)을 사용하였다. 결과는 MTSP12PD1, -PD2 및 -PD3 전사체가 유방, 자궁, 결장, 난소, 폐, 신장 및 직장을 포함하는 다수의 조직에서 낮은 수준으로 발현되지만, 매치되는 모든 조직에서는 상이하게 발현되지 않음을 나타낸다. 이는 또한 HeLa(자궁경부 암종), Daudi(버킷트 림프종), K562(만성 골수 백혈병), HL-60 (전골수구 백혈병), G361(흑색종), A549 (폐 암종), MOLT-4 (림프모구 백혈병), SW480(결장직장 선암종) 및 Raji(버킷트 림프종)을 포함하는 몇몇 종양 세포주에서 낮은 수준으로 발현된다.
정상 유방, 정상 정소, 정상 전립선, 전립선암 세포주 및 유방암 세포주로부터 제조된 몇몇 SMARTTM5'-RACE cDNA 라이브러리(카탈로그 번호 K1811-1; http://www.clontech.com)를 두 셋트의 유전자-특이적 프라이머를 사용하여 RT-PCR에 의해 MTSP12PD1, -PD2 및 -PD3 전사체의 존재에 대해 분석하였다. MTSP12-PD2 및 -PD3 전사체는 정상 전립선, PC-3, LNCaP, 정상 유방, MDA-MB-231, MDA-MB-361, MDA-MB-453 및 DU4475에서 검출되었지만, 보다 높은 수준은 정상 유방 및 MDA-MB-231에서 관찰되었다. MTSP12-PD1 전사체는 동일한 조직 및 세포주에서 검출되었으나, 예외적으로 보다 높은 수준은 정상 유방, MDA-MB-231 및 DU4475에서 관찰되었다.
정상, 종양 조직 및 세포주에서 MTSP20의 유전자 발현 프로필
MTSP20 전사체의 유전자 발현 프로필에 관한 정보를 수득하기 위해서, 사람 폐 조직으로부터 수득한 MTSP20 cDNA 단편을 사용하여, 76개의 상이한 사람 조직(사람 다중 조직 발현(MTE) 어레이; Clontech, Palo Alto, CA; 카탈로그 번호 7775-1)으로부터 추출한 RNA로 구성된 도트 블롯을 프로빙하였다. 결과는 MTSP20를 암호화하는 RNA가 각종 조직에서 발현됨을 나타낸다. MTSP20 전사체는 간, 림프절, 소뇌, 췌장, 전립선, 자궁, 정소, 샘(부신, 갑상선 및 타액선), 흉선, 신장 및 비장에서 발견된다. 낮은 수준의 전사체는 폐, 태반, 방광, 난소, 소화계, 순환계 및 뇌의 다른 부분에서 발견될 수 있다. MTSP20는 또한 폐 암종 (A519), 결장직장 암종(SW480), 림프종(Raji 및 Daudi), 자궁경부 암종(HeLaS3) 및 백혈병(HL-60, K-562 및 MOLT-4) 세포주를 포함하는 특정 종양 세포주에서 발현된다.
정상, 종양 조직 및 세포주에서 MTSP22의 유전자 발현 프로필
MTSP22는 자궁 조직, 흉선, 지방 조직 및 림프절에서 발현된다. 이는 또한 폐, 위, 자궁, 유방, 난소, 전립선 종양 및 기타 종양에서 발현될 수 있다. MTSP22 전사체의 유전자 발현 프로필에 관한 정보를 수득하기 위해, 전체 세린 프로테아제 도메인을 암호화하는 cDNA 단편을 사용하여, 72개의 상이한 사람 조직(사람 다중 조직 발현(MTE) 어레이; 제조원: Clontech, Palo Alto, CA; 카탈로그 번호 7776-1)으로부터 추출된 RNA로 구성된 도트 블롯 뿐만 아니라, 각 환자로부터의 241개의 종양 및 상응하는 정상 조직(암 프로필화 어레이, 제조원: Clontech, 카탈로그 번호 7841-1)으로부터의 정규화된 cDNA로 구성된 도트 블롯을 프로빙하였다.MTE 분석의 결과는 MTSP22 전사체가 주로 식도에서 발현됨을 나타낸다. 암 프로필화 어레이 분석시에, MTSP22는 42개의 정상 자궁 조직 샘플 중 3개에서 고도로 발현되지만, 매치되는 종양 샘플에서는 발현되지 않는다. 42개의 자궁 샘플 중 하나에서, MTSP22는 종양 및 이의 전이성 조직에서 발현되지만, 정상 조직 대응부에서는 발현되지 않는다. MTSP22는 또한 17개의 위 조직 중 2개와 21개의 폐 종양 중 2개에서 발현되지만, 이의 정상 조직 대응부에서는 발현되지 않는다. MTSP22는 또한 단지 췌장의 정상 조직 매치된 cDNA 쌍에서 발현된다. 또한, PCR 분석을 시판되는 수개의 사람 성인 조직(시판원: Clontech, 카탈로그 번호 K1420-1 및 K1420-2) 및 원발성 종양(시판원: Clontech, 카탈로그 번호 K1522-1)으로부터의 cDNA 패널 뿐만 아니라, 수개의 마라톤-레디 cDNA(시판원: Clontech)을 사용하여 수행하였다.
MTSP22 cDNA는 흉선, 지방 조직 및 림프절에서 검출되었다. MTSP22 세린 프로테아제 도메인 및 기타 프로테아제에 대한 상동성.
전사된 MTSP22 프로테아제 도메인 서열의 서열 분석은 MTSP22가 도메인의 아미노 말단의 프로테아제 활성화 절단 부위 및 고도로 보존된 영역내의 촉매적 트리아드 잔기(히스티딘, 아스파르테이트 및 세린)의 존재를 특징으로 하는 트립신-유형 세린 프로테아제 도메인을 함유함을 제시하였다. MTSP22 단백질 서열과 엔도텔리아제 1의 단백질 서열(세린 프로테아제 DESC1 단백질의 서열과 동일함; 진뱅크 승인번호 AF064819)의 정렬은 두 단백질이 이의 프로테아제 도메인에서 50%의 서열 동일성을 공유함을 나타낸다.
정상, 종양 조직 및 세포주에서 MTSP25의 유전자 발현 프로필
MTSP25는 유방, 결장, 자궁, 난소, 신장, 전립선, 정소 암 조직에서 발현된다. 이는 또한 폐, 위, 전립선 종양 및 기타 종양에서 발현될 수 있다. MTSP25 전사체의 유전자 발현 프로필에 관한 정보를 수득하기 위해, MTSP25 프로테아제 도메인 서열을 함유하는 369bp DNA 단편(PCR 반응으로부터 수득함)을 사용하여, 72개의 상이한 사람 조직(사람 다중 조직 발현(MTE) 어레이; 제조원: Clontech, Palo Alto, CA; 카탈로그 번호 7776-1)으로부터 추출된 RNA로 구성된 도트 블롯 뿐만 아니라, 각 환자로부터의 241개의 종양 및 상응하는 정상 조직(암 프로필화 어레이, 제조원: Clontech, 카탈로그 번호 7841-1)으로부터의 정규화된 cDNA로 구성된 도트 블롯을 프로빙하였다. MTE 분석의 결과는 MTSP25 전사체가 림프절에서 약하게 발현됨을 나타낸다. 암 프로필화 어레이 분석시, MTSP25는 모든 4개의 전립선 샘플(정상 및 암 샘플)에서 고도로 발현된다. 20개의 신장 cDNA 쌍 중 하나에서, MTSP25는 종양 샘플에서 고도로 발현되지만, 이의 정상 조직 대응부에서는 발현되지 않는다. MTSP25는 또한 50개의 유방암 샘플 중 하나에서 발현되지만, 이의 정상 조직 대응부에서는 발현되지 않는다.
MTSP25는 또한 42개의 정상 자궁 샘플 중 3개에서 발현되지만, 이의 종양 대응부에서는 발현되지 않는다. MTSP25 발현은 14개의 난소암 샘플 중 3개에서도 검출된다. 상기 3개의 샘플 중에서, MTSP25의 발현은 매치되는 정상 조직 대응부 중 하나에서도 검출되었다. MTSP25 발현은 또한 34개의 결장 cDNA 쌍내의 5개의 종양 샘플에서 검출되었다.
또한, PCR 분석을 시판되는 수개의 사람 성인 조직(시판원: Clontech, 카탈로그 번호 K1420-1 및 K1420-2) 및 원발성 종양(시판원: Clontech, 카탈로그 번호 K1522-1)으로부터의 cDNA 패널 뿐만 아니라, 수개의 마라톤-레디 cDNA(시판원: Clontech)를 사용하여 수행하였다. MTSP25 cDNA는 정소 및 유선 선암종에서 강력하게 검출되었으며, 뇌, 태반, 폐, 비장, 전립선, 소장, 결장 및 백혈구에서 약하게 검출되었고, 심장, 간 및 췌장에서 매우 약하게 검출되었다.
실시예 9
실시예 1 내지 4의 과정에 따라서, 상이한 Fmoc-아미노산 빌딩 블록을 사용하는 바와 같은 통상적이고 약간만 변형시킨 과정에 의해 제조한 접합체는 다음을 포함한다:
Ac-R-Q-G-R-S-L-(Dox) (서열 491);
Ac-R-Q-G-R-S-S-L-(Dox) (서열 492);
Ac-R-Q-G-R-S-nL-(Dox) (서열 493);
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Ac-R-Q-G-R-S-F-(Dox) (서열 495);
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Ac-R-Q-G-R-A-nL-(Dox) (서열 498);
Ac-R-Q-G-R-A-nL-(Dox) (서열 499);
Ac-R-Q-G-R-A-nV-(Dox) (서열 500);
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Ac-R-Q-A-R-S-nL-(Dox) (서열 506);
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Ac-R-Q-S-R-S-알릴G-(Dox) (서열 527);
Ac-R-Q-S-R-S-Cha-(Dox) (서열 528);
Ac-R-Q-S-R-T-nL-(Dox) (서열 529);
Ac-R-Q-T-R-S-S-L-(Dox) (서열 530);
Ac-R-Q-T-R-S-L-(Dox) (서열 531);
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Ac-Q-S-R-S-S-nL-(Dox) (서열 542);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-NH2 (서열 483);
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MeOCO-Quat-G-R-S-L-NH2 (서열 485);
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MeOCO-Quat2-G-R-S-S-L-NH2 (서열 488);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(Dox) (서열 489);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(Dox) (서열 490);
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Ac-Q-S-R-S-L-(Dox) (서열 456);
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Ac-Q-S-R-S-S-L-(Dox) (서열 459);
Ac-Q-T-R-S-S-L-(Dox) (서열 460);
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Ac-Q-Aib -R-S-S-L-(Dox) (서열 462);
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Ac-R-G-R-S-L-(Dox) (서열 469);
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Ac-R-G-R-S-S-Cha-(Dox) (서열 471);
Ac-R-G-R-S-Cha-(Dox) (서열 472);
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Ac-R-S-R-S-S-Cha-(Dox) (서열 478);
Ac-R-F-R-S-L-(Dox) (서열 479);
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Ac-M(O2)-S-R-S-L-(Dox) (서열 482);
Ac-R-R-Q-S-R-A-A-(Dox) (서열 105);
Ac-R-R-Q-S-R-I-(Dox) (서열 610);
Ac-R-R-Q-S-R-S-S-L-(Dox) (서열 543);
Ac-R-R-Q-S-R-S-L-(Dox) (서열 544);
Ac-R-G-S-G-R-S-L-(Dox) (서열 545);
Ac-R-G-S-G-R--S-nL-(Dox) (서열 546);
Ac-R-G-S-G-R-A-nL-(Dox) (서열 547);
Ac-R-G-S-G-R-S-S-L-(Dox) (서열 548);
Ac-I-V-S-G-R-A-S-L-(Dox) (서열 549);
Ac-R-R-Q-S-R-A-(Dox) (서열 108);
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Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(Dox) (서열 106);
Ac-L-R-R-Q-S-R-G-G-(Dox) (서열 109);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-(Dox) (서열 110);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(Dox) (서열 112);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(Dox) (서열 611);
Ac-L-R-R-Q-S-R-S-S-L-(Dox) (서열 550);
Ac-L-R-R-Q-S-R-S-L-(Dox) (서열 551);
Ac-S-G-R-S-L-(Dox) (서열 362);
Ac-S-G-R-S-S-L-(Dox) (서열 363);
Ac-S-G-R-S-S-S-L-(Dox) (서열 364);
Ac-S-G-R-S-nL-(Dox) (서열 365);
Ac-S-G-R-S-nV-(Dox) (서열 366); 이성체 1
Ac-S-G-R-S-nV-(Dox) (서열 367); 이성체 2
Ac-S-G-R-S-G(헥실)-(Dox) (서열 368);
Ac-S-G-R-S-Cha-(Dox) (서열 369);
Ac-S-G-R-S-hCha-(Dox) (서열 370);
Ac-S-A-R-S-L-(Dox) (서열 371);
Ac-S-A-R-S-S-L-(Dox) (서열 372);
Ac-S-S-R-S-nL-(Dox) (서열 373);
Ac-T-G-R-S-Abu-(Dox) (서열 374);
Ac-T-G-R-S-L-(Dox) (서열 375);
Ac-T-G-R-S-nV-(Dox) (서열 376);
Ac-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 377);
Ac-T-G-R-S-G(헥실)-(Dox) (서열 378);
Ac-T-G-R-S-Cha-(Dox) (서열 379);
Ac-T-G-R-S-hCha-(Dox) (서열 380);
Ac-T-G-R-T-Abu-(Dox) (서열 381);
Ac-T-G-R-hS-nL-(Dox) (서열 382);
Ac-T-G-R-Abu-nL-(Dox) (서열 383);
Ac-T-G-R-Abu-nV-(Dox) (서열 384);
Ac-T-G-F(Gn)-S-nL-(Dox) (서열 385);
Ac-T-G-F(Gn)-S-Cha-(Dox) (서열 386);
Ac-T-G-F(Gn)-Abu-nV-(Dox) (서열 387);
Ac-T-G-K(alloc)-S-nL-(Dox) (서열 388);
Ac-T-G-K-S-nL-(Dox) (서열 389);
Ac-T-G-hR-S-nL-(Dox) (서열 390);
Ac-(hS)G-G-R-S-nL-(Dox) (서열 391);
MeOCO-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 392);
PhSO2-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 393);
MeOEtCO-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 394);
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4-옥소-펜타노일-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 396);
3,4-메틸디옥시PhAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 397);
2-피리딜Ac-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 398);
PhOAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 399);
L-3-Ph락틸-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 400);
MeOAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 401);
PhAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 402);
MeOEtOCO-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 403);
MeOEtOAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 404);
HOOCButa-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 405);
Z-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 406);
EtOCO-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 407);
βA-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 408);
펜트-4-이노일-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 409);
NapAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 410);
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HOAc-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 412);
MeSucc-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 413);
N,N-디MeGly-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 414);
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Ac-T-S(O-Me)-R-S-nL-(Dox) (서열 422);
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Ac-T-(1-Me)H-R-S-nL-(Dox) (서열 424);
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Ac-T-H-R-S-nL-(Dox) (서열 426);
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Ac-T-nL-R-S-nL-(Dox) (서열 429);
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Ac-R-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(Dox) (서열 360);
Ac-R-R-nV-P-A-R-S-L-(Dox) (서열 361);
Ac-R-G-dS-A-R-S-A-(Dox) (서열 309);
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Ac-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(Dox) (서열 323);
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Ac-R-C(Me)-P-G-R-S-L-(Dox) (서열 325);
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Ac-R-G(tBu)-P-A-R-S-L-(Dox) (서열 330);
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Ac-I-V-S-A-R-S-nL-(Dox) (서열 340);
Ac-I-V-S-A-R-S-S-L-(Dox) (서열 341);
Ac-G-S-G-R-S-A-(Dox) (서열 585);
Ac-G-S-G-R-S-L-(Dox) (서열 277);
Ac-G-S-G-R-A-L-(Dox) (서열 278);
Ac-G-S-G-R-S-S-L-(Dox) (서열 279);
Ac-G-S-G-R-L-(Dox) (서열 280);
Ac-G-S-G-(4-구안)Phg-S-L-NH2 (서열 281);
Ac-G-S-G-R-S-S-Cha-(Dox) (서열 282);
Ac-G-S-G-R-A-S-L-(Dox) (서열 283);
Ac-G-S-G-R-S-nL-(Dox) (서열 284);
Ac-G-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 285);
Succ-bA-T-G-R-S-nL-(Dox) (서열 286);
Ac-G-T-G-R-S-hCha-(Dox) (서열 287);
Ac-G-hS-G-R-S-nL-(Dox) (서열 288);
Ac-G-dS-A-R-S-A-(Dox) (서열 289);
Ac-G-S-A-R-S-L-(Dox) (서열 290);
Ac-G-S-A-R-S-S-Cha-(Dox) (서열 291);
Ac-G-S-A-R-S-S-L-(Dox) (서열 292);
Ac-G-S-A-R-A-S-L-(Dox) (서열 293);
Ac-V-S-G-R-S-L-(Dox) (서열 294);
Ac-V-S-G-R-A-L-(Dox) (서열 295);
Ac-V-S-G-R-A-S-L-(Dox) (서열 296);
Ac-V-S-G-R-S-S-L-(Dox) (서열 297);
Ac-V-S-A-R-M-A-(Dox) (서열 298);
Ac-V-S-A-R-nL-A-(Dox) (서열 299);
Ac-V-S-A-R-S-nL-(Dox) (서열 300);
Ac-V-S-A-R-S-L-(Dox) (서열 301);
Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(Dox) (서열 302);
Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(Dox) (서열 303);
Ac-C(Me)-P-G-R-A-L-(Dox) (서열 304);
Ac-C(Me)-P-G-R-S-L-(Dox) (서열 305);
Ac-C(Me)-P-A-R-S-L-(Dox) (서열 306);
Ac-C(Me)-P-A-R-A-S-L-(Dox) (서열 307);
Ac-G(tBu)-P-G-R-S-L-(Dox) (서열 308);
Ac-Q-S-R-A-A-(탁솔) (서열 552);
Ac-Q-S-R-S-A-(탁솔) (서열 553);
Ac-Q-S-R-S-G-(탁솔) (서열 554);
Ac-R-S-R-A-A-(탁솔) (서열 555);
Ac-R-Q-S-R-A-A-(탁솔) (서열 556);
Ac-R-Q-S-R-S-A-(탁솔) (서열 557);
Ac-R-Q-S-R-S-A-A-(탁솔) (서열 558);
Ac-R-G-S-G-R-S-A-(탁솔) (서열 559);
Ac-S-G-R-A-A-(탁솔) (서열 560);
Ac-S-G-R-S-A-(탁솔) (서열 561);
Ac-S-G-R-S-S-A-(탁솔) (서열 562);
Ac-S-G-R-A-S-A-(탁솔) (서열 563);
Ac-S-G-R-S-G-(탁솔) (서열 564);
Ac-S-G-R-S-S-G-(탁솔) (서열 565);
Ac-S-G-R-S-G-A-(탁솔) (서열 566);
Ac-S-G-R-S-G-G-(탁솔) (서열567);
Ac-G-T-G-R-S-G-G-(탁솔) (서열 568);
Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(Dox) (서열 597);
MeSO2-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(Dox) (서열 598);
Ac-R-A-R-S-L-(Dox) (서열 599);
Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(Dox) (서열 600);
Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-S-L-(Dox) (서열 601);
Ac-Q-G-R-S-S-L-(Dox) (서열 602);
MeOCO-dhF-P(OH)-R-S-S-L-(Dox) (서열 603);
MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(Dox) (서열 604);
As-dCha-P(OH)-R-S-S-L-(Dox) (서열 605);
Ac-dCha-Abu-R-S-S-A-(탁솔) (서열 606);
MeOCO-Quat2-G-R-S-L-NH2 (서열 607);
MeOCO-Quat3-G-R-S-L-NH2 (서열 608) 및
MeOCO-Quat-G-R-S-L-NH2 (서열 609).
실시예 10
종양 비보유 및 종양 보유 마우스에서 독소루비신 및 류신-독소루비신으로 대사되는 용량의 접합체 및 분획의 약력학적 연구
8주령 내지 12주령의 종양 비보유 또는 종양 보유 누드 마우스를 시험 접합체의 약동학적 연구용으로 사용하였다. 이식용 종양 세포는 다음 3가지 프로토콜 중 하나를 사용하여 제조하였다:
프로토콜 A 조직 배양물로부터 수집한 종양 세포
종양 세포를 트립신으로 처리하고, 성장 배지에 재현탁시키고 200×g에서 6분 동안 원심분리한다. 세포를 혈청 비함유 배지에 재현탁시키고 계수한다. 이어서, 목적하는 수의 세포를 함유하는 상기 용액의 적절한 용적을 원뿔형 원심관으로 옮기고, 상기한 바와 같이 원심분리하고 적절한 용적의 페놀 비함유 배지중 세포: 매트리겔의 차가운 1:1 혼합물에 재현탁시킨다. 각 마우스에게 1×106내지 1×107종양 세포를 함유하는 0.2 내지 0.5mL을 피하 또는 동소(同所) 접종한다.
프로토콜 B 종양 세포 현탁
확립된 종양(200 내지 1000mm3)를 마우스로부터 절개하고 칭량하고 종양 세포 성장 배지에서 세정한다. 종양을 스틸 세포 분리체(dissocation sieve)를 통해 통과시킨다. 세포를 성장 배지와 함께 체를 통해 세정한다. 상기 세포를 200×g에서 6분 동안 원심분리하고, 적절한 용적의 세포:매트리겔의 차가운 1:1 혼합물에 재현탁시킨다. 각 마우스에게 종양 세포 0.2 내지 0.5mL를 피하 또는 동소 접종시킨다.
프로토콜 C 종양 단편
또는, 약 800mm3의 종양을 마우스로부터 절개하고, 종양 세포 성장 배지에서 세정하고 1 내지 2mm3단편으로 절단한다. 각 단편을 투관침을 사용하여 피하 또는 동소 접종시킨다.
약동학적 연구
종양 비보유 또는 종양 보유 마우스를 개별적으로 칭량하고 그룹으로 분류한다. 마우스에게 시험 접합체 30umole/kg, 25umole/kg 또는 21.5umole/kg를 포함하는 1 내지 100umle/kg를 투여한다. 당해 화합물을 투여한지 5분 후 내지 24시간 후 사이의 일정한 시점에서, 마우스를 희생시킨다. 혈액을 EDTA, AEBSF, 아프로티닌, 류펩틴(Leupeptin), 베스타틴, 펩스타닌 A 또는 E64와 같은 억제제를 함유하는 주사기로 수집하고, 헤파린이 첨가된 혈액 수집 시험관내로 옮긴다. 혈장을 원심분리하여 제조한다. 종양을 수집하고 액체 질소에서 분쇄시킨다. 수득되는 종양분말을 -80℃에서 저장한다. 상기 종양 분말 및 혈장을 추출하고, 모(侮) 시험 접합체 및 류신-독소루비신(또는 노르류신-독소루비신 등) 및 독소루비신을 포함하는 이의 생성물에 대해 분석한다.
독소의 종양 세포로의 전달을 고찰하고 모 접합체 및 혈장중 독소(dox 및 노르-leu dox) 수준을 고찰한다.
결과
예를 들어, 시험 접합체(21.5umole/kg의 Ac-Gly-Ser-Gly-Arg-Ser-nLeu-Dox (실시예 2 참조))를 종양 비보유 및 종양 보유(TB) 마우스에게 복강내(IP) 또는 정맥내(IV) 투여한다. 투여한지 1시간 후, 혈장 및 종양 조직을 마우스로부터 수집한다. 시험 접합체 및 이의 생성물의 농도를 비교한다. 결과는 상기 접합체가 종양내로 진입하지 않으며, 독소(노르leu 및 dox)가 1회 (IP 및 IV) 주사 후 1시간째에 종양에서 μM 농도임을 제시한다. dox 및 노르-leu dox의 수준은 종양에 비해 혈장에서 보다 낮았다.
추출, 크로마토그래피 LC/MS 조건
혈장: 혈장 샘플을 아세토니트릴 단백질 침전을 사용하여 제조한다. 빙상 혈장 0.1mL 또는 0.05mL 용적에 표준 화합물 5 내지 20㎕ 용적을 첨가하여 표준 곡선을 작도한다. 표준 곡선은 그 범위가 표준 화합물 10ng/mL 내지 1ug/mL 또는 100 ng/mL 내지 4ug/mL이다. 표준 첨가 직후, 아세토니트릴을 첨가하여 단백질을 침전시킨다. 빙상에서 동결된 혈장 샘플을 해동시켜 연구용 혈장 샘플을 제조한다. 분취액을 아세토니트릴에 직접 첨가한다.
샘플 침전 후, 샘플을 와류 혼합을 사용하여 혼합한다. 침전물을 원심분리를 사용하여 펠릿화시킨다. 상청액을 진공 원심분리를 사용하여 건조시킨다. 샘플을 30% 아세토니트릴 - 70%(0.01M 암모늄 아세테이트와 0.1% 포름산) 0.15mL로 재구성한다. 샘플 0.01mL을 LC-MS 분석을 위해 주입한다. HPLC 조건은 30 x 2.1 mm Zorbax SB C18 HPLC 컬럼에서 0.3mL/분에서 1분에 걸쳐 20% 아세토니트릴 - 80% (10 mM 암모늄 아세테이트와 0.1% 포름산) 내지 50% 아세토니트릴 - 50%(10mM 암모늄 아세테이트와 0.1% 포름산)의 선형 구배이다. 검출은 전자분무 이온화를 사용하는 3중 4극자 질량 분광분석계(triple quad mass spectroscopy)에 의해 제공된다. 독소루비신을 m/z 전이 544.1 - 396.8를 사용하여 모니터링한다. 류신-독소루비신을 657.2 - 242.8을 사용하여 모니터링한다. 예시적 모 접합체를 1555.9 -1555.9를 사용하여 모니터링한다. 주사 LC-MS 및 형광 검출을 사용하여 혈장내에서 독소루비신 또는 류신-독소루비신(또는 노르류신-독소루비신 등) 이외의 절단 생성물을 동정한다.
종양: 마우스로부터 절개한 직후, 분석용 종양을 칭량하고, 액체 질소를 함유하는 모르타르내로 넣는다. 드라이 아이스 베드내에 위치한 모르타르를 사용하여, 종양을 미세 분말로 분쇄시키고, 필요에 따라 추가의 액체 질소를 첨가하여 해동을 방지한다. 균질한 종양 분말이 달성되면, 잔류 액체 질소를 비등 제거한다. 종양 분말을 미리 냉각시킨 15mL들이 원심관으로 옮기고 드라이 아이스 위에 놓는다. 샘플을 분석할 때까지 -70℃에서 보관한다. 종양 분말을 빙상에서 해동시키키고, 종양 1g/암모늄 아세테이트 용액 mL의 농도로 0.01M 암모늄 아세테이트와 와류 혼합하여 슬러리를 형성시킨다. 종양 슬러리 0.1mL의 분취액을 아세토니트릴 0.5mL으로 침전시킨다. 상청액을 침전된 고체로부터 분리한 다음, 진공 원심분리를 사용하여 증발시킨다. 독소루비신, 류신-독소루비신(또는 노르류신-독소루비신 등)의 정량화는 측정된 양의 표준 화합물(독소루비신, 류신-독소루비신 등)을 대조 종양 슬러리와 혼합하여 작도한 표준 곡선을 참조로하여 달성한다. 전형적 표준 곡선은 그 범위가 종양 슬리리 분취액당 화합물 1ng 내지 200ng이다. 비공지된 샘플 및 표준 샘플을 가공하고 건조시킨 후, 잔사를 30% 아세토니트릴 - 70%(0.01M 암모늄 아세테이트 + 0.1% 포름산)으로 재구성한다. 용액 10㎕을 액체 크로마토그래피-질량 분광분석 시스템내로 주입한다. HPLC 조건은 30 x 2.1 mm Zorbax SB C18 HPLC 컬럼에서 0.3mL/분에서 1분에 걸쳐 20% 아세토니트릴 - 80% (10 mM 암모늄 아세테이트와 0.1% 포름산) 내지 50% 아세토니트릴 - 50%(10mM 암모늄 아세테이트와 0.1% 포름산)의 선형 구배이다. 검출은 전자분무 이온화를 사용한 3중 4극자 질량 분광분석계에 의해 제공된다. 독소루비신은 m/z 전이 544.1 - 396.8를 사용하여 모니터링한다. 류신-독소루비신은 657.2 - 242.8을 사용하여 모니터링한다.
당해 분야의 숙련가에게 있어서 변형은 명백할 것이 때문에, 본 발명은 첨부된 특허청구범위의 범위에 의해서만 제한되어야 한다는 것을 의미한다.

Claims (148)

  1. 치료제, 및 임의로 링커를 통해 당해 치료제에 연결되어 있으며 세포 표면 프로테아제 또는 이의 가용성, 방출된 또는 분비된 형태에 의해 단백질분해적으로 절단되어 당해 치료제를 유리시키는 펩타이드성 기질을 포함하는, 플라스민 또는 전립선 특이적 항원(PSA)에 의해 실질적으로 절단되지 않는 접합체.
  2. 제1항에 있어서, 유리된 치료제가 활성인 접합체.
  3. 제1항에 있어서, 절단이 활성을 위해 추가의 처리를 요하는 형태의 치료제를 유리시키는 접합체.
  4. 제1항에 있어서, 성분 (펩타이드성 기질)s, (링커)q및 (치료제)t[여기서, 하나 이상의 펩타이드성 기질 잔기는 링커와 함께 또는 링커없이 하나 이상의 치료제에 연결되며, s는 1 내지 6이고, q는 0 내지 t이며, t는 1 내지 6이다]을 포함하고, 펩타이드성 기질(들)을 절단하는 세포 표면 프로테아제가 치료제의 세포로의 전달을 초래하는 접합체.
  5. 제1항에 있어서, 펩타이드성 기질이 하나 이상의 아미노산을 포함하고, 접합체의 단백질분해적 절단시 수득되는 치료제가 활성이거나 추가로 처리되는 경우에 활성인 형태인 접합체.
  6. 제1항에 있어서, 세포 표면 프로테아제가 세린 프로테아제인 접합체.
  7. 제1항에 있어서, 세포 표면 프로테아제가 II형 트랜스막 세린 프로테아제(transmembrane serine protease: MTSP) 또는 엔도텔리아제(endotheliase)인 접합체.
  8. 제1항에 있어서, 세포 표면 프로테아제가 엔도텔리아제 1, 엔도텔리아제 2, MTSP1, MTSP3, MTSP4, MTSP6, MTSP7, MTSP9, MTSP10, MTSP12, MTSP20, MTSP22, MTSP25, 코린, 엔테로키나제, 사람 기도 트립신-유형 프로테아제(HAT), TMPRSS2, 헵신, 유로키나제-유형 플라스미노겐 활성화인자(uPA) 및 TMPRSS4로부터 선택되는 접합체.
  9. 제1항에 있어서, 세포 표면 프로테아제가
    서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 270, 272, 274 및 276 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드,
    서열 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 28, 30, 32, 34, 36,38, 40, 42, 44, 269, 273 및 275 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열에 고도의 엄격성 조건하에 하이브리드화하는 뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화되는 폴리펩타이드,
    서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 270, 272, 274 및 276에 제시된 아미노산 서열과 약 40% 이상의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드 및
    서열 2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 270, 272, 274 및 276 중 어느 하나에 제시된 뉴클레오타이드 서열의 스플라이스 변이체에 의해 암호화되는 폴리펩타이드로 이루어진 그룹으로부터 선택된 폴리펩타이드를 포함하는 접합체.
  10. 제1항에 있어서, 치료제가 독소, 소형 유기분자, 핵산, 단백질 치료제, 사이토킨 또는 성장 인자인 접합체.
  11. 제1항에 있어서, 치료제가 항암제인 접합체.
  12. 제1항에 있어서, 치료제가 항혈관신생제인 접합체.
  13. 제1항에 있어서, 치료제가 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소, 시가(shiga) 독소, 디프테리아 독소, 종양 괴사 인자, α-인터페론, γ-인터페론, 신경 성장 인자, 조직 인자 및 조직 인자 변이체, FAS-리간드, 혈소판 유래의 성장 인자, 조직 플라스미노겐 활성화인자, 인터류킨-1(IL-1), 인터류킨-2(IL-2), 인터류킨-6(IL-6), 과립구 대식세포 콜로니 자극인자(GMCSF), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 에리트로포이에틴(EPO), 신경 성장 인자, 섬유아세포 성장 인자(FGF) 및 상피 성장 인자로부터 선택되는 접합체.
  14. 제1항에 있어서, 치료제가 알킬화제, 독소, 항증식제, 아폽토시스촉진제(pro-apoptotic agent), 전응고인자(procoagulant), 세포독성 뉴클레오시드 및 튜불린 결합제로부터 선택되는 접합체.
  15. 제1항에 있어서, 치료제가 다음 부류의 약물 또는 약제학적으로 허용되는 이들의 유도체 중에서 선택되는 접합체:
    a) 안트라사이클린계 약물,
    b) 빈카 알칼로이드 약물,
    c) 미토마이신,
    d) 블레오마이신,
    e) 세포독성 뉴클레오시드,
    f) 프테린계 약물,
    g) 디이넨,
    h) 에스트라무스틴,
    i) 사이클로포스파미드,
    j) 탁산,
    k) 포도필로톡신,
    l) 마이탄사노이드,
    m) 에포틸론, 및
    n) 콤브레타스타틴 및 유사체.
  16. 제1항에 있어서, 치료제가 다음 약물 또는 약제학적으로 허용되는 이들의 유도체 중에서 선택되는 접합체:
    a) 독소루비신,
    b) 카르미노마이신,
    c) 다우노루비신,
    d) 아미노프테린,
    e) 메토트렉세이트,
    f) 메토프테린,
    g) 디클로로메토트렉세이트,
    h) 미토마이신 C,
    i) 포르피로마이신,
    j) 5-플루오로우라실,
    k) 6-머캅토푸린,
    l) 시토신 아라비노시드,
    m) 포도필로톡신,
    n) 에토포시드,
    o) 에토포시드 포스페이트,
    p) 멜팔란,
    q) 빈블라스틴,
    r) 빈크리스틴,
    s) 류로시딘,
    t) 빈데신,
    u) 에스트라무스틴,
    v) 시스플라틴,
    w) 사이클로포스파미드,
    x) 탁솔,
    y) 류로신,
    z) 4-데스아세틸빈블라스틴,
    aa) 에포틸론 B,
    bb) 탁소테레,
    cc) 마이탄사놀,
    dd) 에포틸론 A 및
    ee) 콤브레타스타틴 및 유사체.
  17. 제1항에 있어서, 치료제와 펩타이드성 기질 사이에 링커를 추가로 포함하는 접합체.
  18. 제17항에 있어서, 링커가 탄수화물, 펩타이드 및/또는 탄화수소 코어를 포함하는 접합체.
  19. 제17항에 있어서, 링커가, 치료제 상의 아민 잔기가 링커 단위와 연결되어 아미드 결합을 형성하고 펩타이드성 기질의 아미노 말단이 당해 링커 단위의 나머지 말단과 연결되어 역시 아미드 결합을 형성하도록 하는 비스카보닐 알킬 디라디칼 또는 치료제 상의 카보닐 잔기가 당해 링커 단위의 아민 중 하나에 공유적으로 결합되고 당해 링커 단위의 나머지 아민은 펩타이드성 기질의 C-말단에 공유적으로 결합되도록 하는 디아미노알킬 디라디칼 링커 단위를 포함하거나, 화학식,및[여기서, A는 NH 또는 O이고, D는 N(H 또는 알킬) 또는 O이며, R25는 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 또는 할로, 할로 알킬 및 알킬로부터 선택되는 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 치환체에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 1개 내지 2개의 이중결합을 함유하는 알케닐, 1개 내지 2개의 삼중결합을 함유하는 알키닐, 알크(엔)(인)일 그룹, 할로, 슈도할로, 시아노, 하이드록시, 할로알킬 및 폴리할로알킬(예: 트리플루오로메틸을 포함하는 할로 저급 알킬), 포르밀, 알킬카보닐, 또는 예를 들어, 할로, 할로 알킬 및 알킬로부터 선택되는 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 치환체에 의해 임의로 치환된 아릴카보닐, 헤테로아릴카보닐, 카복시, 알콕시카보닐, 아릴옥시카보닐, 아미노이미노, 알콕시카보닐아미노, 아릴옥시카보닐아미노, 아미노카보닐, 알킬아미노카보닐, 디알킬아미노카보닐, 아릴아미노카보닐, 디아릴아미노카보닐, 아르알킬아미노카보닐, 알콕시, 아릴옥시, 퍼플루오로알콕시, 알케닐옥시, 알키닐옥시, 아릴알콕시, 아미노알킬, 알킬아미노알킬, 디알킬아미노알킬, 아릴아미노알킬, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 알킬아릴아미노, 알킬카보닐아미노, 아릴카보닐아미노, 아지도, 니트로, 머캅토, 알킬티오, 아릴티오, 퍼플루오로알킬티오, 티오시아노, 이소티오시아노, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 아릴설피닐, 아릴설포닐, 아미노설포닐, 알킬아미노설포닐, 디알킬아미노설포닐, 또는 아릴아미노설포닐이고, y는 1 내지 3의 정수이다]의 자가-제거 링커인 접합체.
  20. 제17항에 있어서, 링커가 사이클릭 알킬렌 잔기를 포함하는 디아민인 접합체.
  21. 제17항에 있어서, 디아민이 비사이클로알킬렌 잔기를 함유하는 접합체.
  22. 제17항에 있어서, 링커가 1,4-비스(아미노메틸)사이클로헥산, 1,4-비스(아미노메틸)사이클로헵탄, 1,3-비스(아미노메틸)사이클로펜탄, 1-아미노-4-(아미노메틸)사이클로헥산, 1,4-디아미노사이클로헥산 및 1,4-비스(아미노메틸)비사이클로[2.2.2]옥탄으로부터 선택되는 접합체.
  23. 제17항에 있어서, 링커가 1,ω-디아미노알칸인 접합체.
  24. 제17항에 있어서, 링커가 1,3-디아미노프로판인 접합체.
  25. 제17항에 있어서, 링커가 1,ω-디카보닐알칸인 접합체.
  26. 제25항에 있어서, 링커가 옥살산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 아디프산 및 피발산으로부터 선택되는 접합체.
  27. 제1항에 있어서, 펩타이드성 기질이 임의의 아미노산인 P1을 포함하는 접합체.
  28. 제27항에 있어서, P1이 천연 아미노산인 접합체.
  29. 제27항에 있어서, P1이 방향족 측쇄, 분지된 측쇄 또는 분지된 방향족 측쇄를 갖는 아미노산인 접합체.
  30. 제1항에 있어서, 펩타이드성 기질이 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr 중에서 선택되는 P1을 포함하는 접합체.
  31. 제1항에 있어서, 펩타이드성 기질이 세포 표면 프로테아제에 의한 절단 부위인 P1-P1' 결합[여기서, P1은 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr으로부터 선택되고, P1'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 또는 6-아미노헥사노일이다]을 포함하는 접합체.
  32. 제1항에 있어서, 펩타이드성 기질이 Arg, Lys 또는 Arg 대용물인 P1을 포함하는 접합체.
  33. 제1항에 있어서, Phe, Ser, Gly 및 Ala로부터 선택되는 P2 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  34. 제1항에 있어서, Arg, Lys, Gln, Ser, Quat 및 Arg 대용물로부터 선택되는 P3 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  35. 제1항에 있어서, Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe 및 Val로부터 선택되는 P4 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  36. 제1항에 있어서, Arg 및 Arg 대용물로부터 선택되는 P5 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  37. 제1항에 있어서, Leu, Ile 및 Val로부터 선택되는 P6 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  38. 제1항에 있어서, Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되는 P2' 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  39. 제1항에 있어서, Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되는 P3' 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  40. 제1항에 있어서, 펩타이드성 기질이 화학식 P4-P3-P2-P1-P1'의 5량체[여기서, P1은 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr으로부터 선택되고, P2는 Phe, Ser, Gly 및 Ala으로부터 선택되고, P3은 Arg, Lys, Gln, Quat 및 Arg 대용물로부터 선택되며, P4는 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe 및 Val으로부터 선택되고, P1'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 또는 6-아미노헥사노일이다]를 포함하는 접합체.
  41. 제40항에 있어서, 펩타이드성 기질이 임의로, 하나 이상의 P5 또는 P2' 아미노산 잔기[여기서, P5는 Arg 또는 Arg 대용물이고, P2'는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택된다]를 추가로 포함하는 접합체.
  42. 제41항에 있어서, 펩타이드성 기질이 P5 아미노산 잔기를 포함하는 경우에 펩타이드성 기질이 임의로 Leu, Ile 및 Val로부터 선택되는 P6 아미노산 잔기를 추가로 포함하고, 펩타이드성 기질이 P2' 아미노산 잔기를 포함하는 경우에 펩타이드성 기질이 임의로 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되는 P3' 아미노산 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  43. 제1항에 있어서, 치료제가 직접적으로 또는 링커를 통해 펩타이드성 기질의 C-말단에 접합되는 접합체.
  44. 제1항에 있어서, 펩타이드성 기질이 N-말단에 캡을 포함하는 접합체.
  45. 제1항에 있어서, 캡이 친수성 차단 그룹인 접합체.
  46. 제1항에 있어서, 캡이 아실, 설포닐 또는 카보닐 유도체인 접합체.
  47. 제45항에 있어서, 차단 그룹이 하이드록실화된 알카노일, 폴리하이드록실화된 알카노일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리코실레이트, 당 및 크라운 에테르로부터 선택되는 접합체.
  48. 제43항에 있어서, 화학식 I의 화합물 또는 이의 유도체인 접합체.
    화학식 I
    Xn-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-(L)n-Z
    상기 화학식에서,
    Z는 치료제이고,
    L은 링커이고,
    l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
    l은 0 또는 1이며, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는 1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에, m은 0 또는 1이고,
    u, k 및 r은 다음과 같이 선택된다:
    u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k 및 r은 0이고, u가 1인 경우에 k는 0 또는 1이고, k가 0인 경우에 r은 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이고,
    n은 0 또는 1이고,
    Xn은 수소 또는 아실, 설포닐 또는 카바모일 캡이며,
    P1은 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr로부터 선택되고,
    P1'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 또는 6-아미노헥사노일이며,
    P2는 Phe, Ser, Gly 및 Ala로부터 선택되고,
    P3은 Arg, Lys, Gln, Ser, Quat 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P4는 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe 및 Val로부터 선택되고,
    P5는 Arg 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P6은 Leu, Ile 및 Val로부터 선택되고,
    P2'는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되며,
    P3'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택된다.
  49. 제48항에 있어서, P1이 Arg, Lys 또는 Arg 대용물인 접합체.
  50. 제1항에 있어서, 치료제가 직접적으로 또는 링커를 통해 펩타이드성 기질의 N-말단에 접합되는 접합체.
  51. 제50항에 있어서, 펩타이드성 기질의 C-말단이 카복실산 또는 카복스아미드 유도체인 접합체.
  52. 제50항에 있어서, 화학식 II의 화합물 또는 이의 유도체인 접합체.
    화학식 II
    Z-(L)n-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-Xc
    상기 화학식에서,
    Z는 치료제이고,
    L은 링커이며,
    l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
    l은 0 또는 1이고, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는 1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에 m은 0 또는 1이고,
    u, k 및 r은 다음과 같이 선택된다:
    u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k 및 r은 0이고, u가 1인 경우에 k는 0 또는 1이고, k가 0인 경우에 r은 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이며,
    n은 0 또는 1이고,
    Xc는 결합된 아미노산 잔기의 카보닐 그룹과 함께 카복실산 또는 카복스아미드 그룹을 형성하고,
    P1은 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr로부터 선택되고,
    P1'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 또는 6-아미노헥사노일이며,
    P2는 Phe, Ser, Gly 및 Ala로부터 선택되고,
    P3은 Arg, Lys, Gln, Ser, Quat 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P4는 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe 및 Val로부터 선택되고,
    P5는 Arg 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P6은 Leu, Ile 및 Val로부터 선택되고,
    P2'는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되며,
    P3'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택된다.
  53. 제52항에 있어서, P1이 Arg, Lys 또는 Arg 대용물인 접합체.
  54. 제1항에 있어서, 제1 치료제가 임의로 제1 링커를 통해 펩타이드성 기질의 N-말단에 결합되고, 제1 치료제와 동일하거나 상이한 제2 치료제가 임의로 제1 링커와 동일하거나 상이한 제2 링커를 통해 펩타이드성 기질의 C-말단에 결합되는 접합체.
  55. 제54항에 있어서, 화학식 III의 화합물 또는 이의 유도체인 접합체.
    화학식 III
    Z1-(L1)n-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-(L2)v-Z2
    상기 화학식에서,
    Z1및 Z2는 각각 치료제이고 동일하거나 상이하며,
    L1및 L2는 각각 링커이며 동일하거나 상이하고,
    l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
    l은 0 또는 1이고, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는 1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에 m은 0 또는 1이고,
    u, k 및 r은 다음과 같이 선택된다:
    u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k 및 r은 0이고, u가 1인 경우에 k는 0 또는 1이고, k가 0인 경우에 r은 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이며,
    n 및 v는 각각 독립적으로 0 또는 1이고,
    P1은 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr로부터 선택되고,
    P1'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 또는 6-아미노헥사노일이며,
    P2는 Phe, Ser, Gly 및 Ala로부터 선택되고,
    P3은 Arg, Lys, Gln, Ser, Quat 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P4는 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe 및 Val로부터 선택되고,
    P5는 Arg 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P6은 Leu, Ile 및 Val로부터 선택되고,
    P2'는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되며,
    P3'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택된다.
  56. 제55항에 있어서, P1이 Arg, Lys 또는 Arg 대용물인 접합체.
  57. 제1항 내지 제57항 중의 어느 한 항에 있어서,
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 46);
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 47);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 48);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 49);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 50);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 51);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 52);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 53);
    Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 54);
    Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 55);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 56);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 57);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 58);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 59);
    Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 60);
    Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 61);
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 62);
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 63);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 64);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 65);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 66);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 67);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ile-Ile-(치료제) (서열 68);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 69);
    Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 70);
    Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 71);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 72);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 73);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ile-Ile-(치료제) (서열 74);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 75);
    Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 76) 및
    Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 77)
    피로Glu-Pro-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 78);
    CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 79);
    N-p-토실-Gly-Pro-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 80);
    벤조일-Val-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 81);
    CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 82);
    N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제)(여기서, Z는 벤질옥시카보닐이다) (서열 83);
    피로Glu-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 84);
    H-D-Ile-Pro-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 85);
    Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제)(여기서, Cbo는 카보벤족시이다) (서열 86);
    H-D-Pro-Phe-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 87);
    H-D-Val-Leu-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 88);
    Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제)(여기서, Bz는 벤조일이다) (서열 89);
    Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 90);
    Bz-Pro-Phe-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 91);
    H-D-Phe-Pip-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 92);
    H-D-Val-Leu-Lys-Ala-Ala-(치료제) (서열 93);
    H-D-Nle-HHT-Lys-Ala-Ala-(치료제) (서열 94);
    Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 95);
    H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 96);
    Boc-Gln-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 97);
    Z-Arg-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 98);
    H-D-HHT-Ala-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 99);
    H-D-CHT-Gly-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 100);
    MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 101);
    δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 102);
    CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 103);
    Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 104);
    Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 105);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ala-(치료제) (서열 106);
    Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(치료제) (서열 107);
    Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(치료제) (서열 108);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Gly-Gly-(치료제) (서열 109);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-(치료제) (서열 110);
    Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ile-(치료제) (서열 111);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ala-Ile-(치료제) (서열 112);
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 113);
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 114);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 115);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 116);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 117);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 118);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 119);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 120);
    Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 121);
    Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 122);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 123);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 124);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 125);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 126);
    Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 127);
    Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 128);
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 129);
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 130);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 131);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 132);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 133);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 134);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 135);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 136);
    Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 137);
    Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 138);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 139);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 140);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 141);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 142);
    Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 143);
    Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 144);
    피로Glu-Pro-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 145);
    CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 146);
    N-p-토실-Gly-Pro-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 147);
    벤조일-Val-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 148);
    CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 149);
    N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 150) (Z = 벤질옥시카보닐);
    피로Glu-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 151);
    H-D-Ile-Pro-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 152);
    Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 153) (Cbo = 카보벤족시);
    H-D-Pro-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 154);
    H-D-Val-Leu-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 155);
    Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 156) (Bz = 벤조일);
    Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 157);
    벤조일-Pro-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 158);
    H-D-Phe-Pip-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 159);
    H-D-Val-Leu-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 160);
    H-D-Nle-HHT-Lys-Ser-Leu-(치료제) (서열 161);
    Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 162);
    H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 163);
    Boc-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 164);
    Z-Arg-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 165);
    H-D-HHT-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 166);
    H-D-CHT-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 167);
    MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 168);
    δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 169);
    CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 170);
    Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 171);
    Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 172);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 173);
    Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 174);
    Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 175);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 176);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 177);
    Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 178);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 179);
    Ac-Arg-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 180);
    Ac-Arg-Gln-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 181);
    Ac-Arg-Gln-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 182);
    Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 183);
    Ac-Arg-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 184);
    Ac-Arg-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 185);
    Ac-Arg-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 186);
    Ac-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 187);
    Ac-Gln-Gly-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 188);
    Ac-Gln-Ala-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 189);
    Ac-Gln-Phe-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 190).
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 191);
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 192);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 193);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 194);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 195);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 196);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 197);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 198);
    Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 199);
    Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 200);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 201);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 202);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 203);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 204);
    Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 205);
    Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 206);
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 207);
    Ac-Leu-Arg-Ala-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 208);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 209);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Quat-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 210);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 211);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 212);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 213);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 214);
    Ac-Arg-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 215);
    Ac-Ser-Lys-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 216);
    Ac-Leu-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 217);
    Ac-Arg-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 218);
    Ac-Pro-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 219);
    Ac-Leu-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 220);
    Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 221);
    Ac-Ser-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 222);
    피로Glu-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 223);
    CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 224);
    N-p-토실-Gly-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 225);
    벤조일-Val-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 226);
    CH3SO2-D-HHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 227);
    N-α-Z-D-Arg-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 228)(Z = 벤질옥시카보닐);
    피로Glu-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 229);
    H-D-Ile-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 230);
    Cbo-L-(γ)Glu(α-t-BuO)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 231)(Cbo = 카보벤족시);
    H-D-Pro-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 232);
    H-D-Val-Leu-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 233);
    Bz-Ile-Glu(γ-OH)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 234)(Bz = 벤조일);
    Bz-Ile-Glu(γ-OMe)-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 235);
    벤조일-Pro-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 236);
    H-D-Phe-Pip-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 237);
    H-D-Val-Leu-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 238);
    H-D-Nle-HHT-Lys-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 239);
    Pyr-Arg-Thr-Lys-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 240);
    H-Arg-Gln-Arg-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 241);
    Boc-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 242);
    Z-Arg-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 243);
    H-D-HHT-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 244);
    H-D-CHT-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 245);
    MeSO2-dPhe-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 246);
    δ-Z-D-Lys-Pro-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 247);
    CH3SO2-D-CHA-But-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 248);
    Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 249);
    Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 250);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 251);
    Ac-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 252);
    Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Leu-(치료제) (서열 253);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 254);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 255);
    Ac-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Leu-(치료제) (서열 256);
    Ac-Leu-Arg-Arg-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 257);
    Ac-Arg-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 258);
    Ac-Arg-Gln-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 259);
    Ac-Arg-Gln-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 260);
    Ac-Arg-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 261);
    Ac-Arg-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 262);
    Ac-Arg-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 263);
    Ac-Arg-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 264);
    Ac-Gln-Ser-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 265);
    Ac-Gln-Gly-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 266);
    Ac-Gln-Ala-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 267) 및
    Ac-Gln-Phe-Arg-Ser-Ser-Leu-(치료제) (서열 268)로부터 선택되는 접합체.
  58. 제35항에 있어서, P4가 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Phe 및 Val로부터 선택되는 접합체.
  59. 제35항에 있어서, P2, P3 및/또는 P4가 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, GLu, Phe 및 Val로부터 선택되는 접합체.
  60. 제35항에 있어서, P2, P3 및/또는 P4가 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Tyr, Glu, Leu, Phe 및 Val로부터 선택되고, P1이 임의의 아미노산인 접합체.
  61. 제60항에 있어서, P1이 천연 아미노산인 접합체.
  62. 제60항에 있어서, P1이 방향족 측쇄, 분지된 측쇄 또는 분지된 방향족 측쇄를 갖는 아미노산인 접합체.
  63. 제60항에 있어서, P1이 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr로부터 선택되는 접합체.
  64. 제60항에 있어서, P1이 Arg, Lys 또는 Arg 대용물인 접합체.
  65. 제1항에 있어서, 프로테아제가 이에 대한 수용체와의 특이적 결합 상호작용으로 인해 세포 표면에 위치하는 접합체.
  66. 제65항에 있어서, 세포 표면 프로테아제가 유로키나제 플라스미노겐 활성화인자 수용체(u-PAR)에 결합된 유로키나제 플라스미노겐 활성화인자(u-PA)인 접합체.
  67. 제1항에 있어서, 화학식 P6-P5-P4-P3-P2-P1-P1'-P2'-P3'의 펩타이드성 기질[여기서, P1, P2, P3, P4, P5, P6, P1' 및 P2'은 각각 도 1 및 2에 제시된 잔기로부터 선택되고, P6, P5, P4, P2' 및 P3'은 선택적이다]을 포함하는 접합체.
  68. 제67항에 있어서,
    P6이 임의로 L, V 또는 R로부터 선택되며,
    P5가 임의로 R, I 또는 L로부터 선택되며,
    P4가 임의로 G, C 또는 V로부터 선택되며,
    P3이 S, dS, P, A 또는 G로부터 선택되고,
    P2가 A 또는 G로부터 선택되며,
    P1이 R이고,
    P1'이 S, V, M 또는 nL이며,
    P2'가 임의로 S, L, A 또는 V로부터 선택되고,
    P3'이 임의로 L인 접합체.
  69. 치료제 독소루비신(Dox) 또는 탁솔(Tax)이 임의로 임의의 치료제로 대체되는, 도 1 내지 도 5에 제시된 접합체로부터 선택되는 접합체.
  70. 제65항에 있어서, 치료제가 독소, 소형 유기 분자, 핵산, 단백질 치료제, 사이토킨 또는 성장 인자인 접합체.
  71. 제65항에 있어서, 치료제가 항암제인 접합체.
  72. 제65항에 있어서, 치료제가 항혈관신생제인 접합체.
  73. 제65항에 있어서, 치료제가 아브린, 리신 A, 슈도모나스 외독소, 시가 독소, 디프테리아 독소, 종양 괴사 인자, α-인터페론, γ-인터페론, 신경 성장 인자, 조직 인자 및 조직 인자 변이체, FAS-리간드, 혈소판 유래의 성장 인자, 조직 플라스미노겐 활성화인자, 인터류킨-1(IL-1), 인터류킨-2(IL-2), 인터류킨-6 (IL-6), 과립구 대식세포 콜로니 자극인자(GMCSF), 과립구 콜로니 자극 인자(G-CSF), 에리트로포이에틴(EPO), 신경 성장 인자, 섬유아세포 성장 인자(FGF) 및 상피 성장 인자로부터 선택되는 접합체.
  74. 제65항에 있어서, 치료제가 알킬화제, 독소, 항증식제, 아폽토시스촉진제, 전응고인자, 세포독성 뉴클레오시드 및 튜블린 결합제로부터 선택되는 접합체.
  75. 제65항에 있어서, 치료제가 다음 부류의 약물 또는 약제학적으로 허용되는 이들의 유도체 중에서 선택되는 접합체:
    a) 안트라사이클린계 약물,
    b) 빈카 알칼로이드 약물,
    c) 미토마이신,
    d) 블레오마이신,
    e) 세포독성 뉴클레오시드,
    f) 프테린계 약물.
    g) 디이넨,
    h) 에스트라무스틴,
    i) 사이클로포스파미드,
    j) 탁산,
    k) 포도필로톡신,
    l) 마이탄사노이드,
    m) 에포틸론 및
    n) 콤브레타스타틴 및 유사체.
  76. 제65항에 있어서, 치료제가 다음 약물 또는 약제학적으로 허용되는 이들의 유도체 중에서 선택되는 접합체.
    a) 독소루비신,
    b) 카르미노마이신,
    c) 다우노루비신,
    d) 아미노프테린,
    e) 메토트렉세이트,
    f) 메토프테린,
    g) 디클로로메토트렉세이트,
    h) 미토마이신 C,
    i) 포르피로마이신,
    j) 5-플루오로우라실,
    k) 6-머캅토푸린,
    l) 시토신 아라비노시드,
    m) 포도필로톡신,
    n) 에토포시드,
    o) 에토포시드 포스페이트,
    p) 멜팔란,
    q) 빈블라스틴,
    r) 빈크리스틴,
    s) 류로시딘,
    t) 빈데신,
    u) 에스트라무스틴,
    v) 시스플라틴,
    w) 사이클로포스파미드,
    x) 탁솔,
    y) 류로신,
    z) 4-데스아세틸빈블라스틴,
    aa) 에포틸론 B,
    bb) 탁소테레,
    cc) 마이탄사놀,
    dd) 에포틸론 A 및
    ee) 콤브레타스타틴 및 유사체.
  77. 제65항에 있어서, 치료제와 펩타이드성 기질 사이에 링커를 추가로 포함하는 접합체.
  78. 제65항에 있어서, 링커가 탄수화물, 펩타이드 및/또는 탄화수소 코어를 포함하는 접합체.
  79. 제77항에 있어서, 링커가, 치료제 상의 아민 잔기가 링커 단위와 연결되어 아미드 결합을 형성하고 펩타이드성 기질의 아미노 말단이 당해 링커 단위의 나머지 말단과 연결되어 역시 아미드 결합을 형성하도록 하는 비스카보닐 알킬 디라디칼 또는 치료제 상의 카보닐 잔기가 당해 링커 단위의 아민 중 하나에 공유적으로 결합되고 당해 링커 단위의 나머지 아민이 펩타이드성 기질의 C-말단에 공유적으로 결합되도록 하는 디아미노알킬 디라디칼 링커 단위를 포함하거나, 화학식,및[여기서, A는 NH 또는 O이고, D는 N(H 또는 알킬) 또는 O이며, R25는 H, 알킬, 사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 아릴, 또는 할로, 할로 알킬 및 알킬로부터 선택되는 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 치환체에 의해 임의로 치환된 헤테로아릴, 아르알킬, 헤테로아르알킬, 1개 내지 2개의 이중결합을 함유하는 알케닐, 1개 내지 2개의 삼중결합을 함유하는 알키닐, 알크(엔)(인)일 그룹, 할로, 슈도할로, 시아노, 하이드록시, 할로알킬 및 폴리할로알킬(예: 트리플루오로메틸을 포함하는 할로 저급 알킬), 포르밀, 알킬카보닐, 또는 예를 들어, 할로, 할로 알킬 및 알킬로부터 선택되는 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 3개의 치환체에 의해 임의로 치환된 아릴카보닐, 헤테로아릴카보닐, 카복시, 알콕시카보닐, 아릴옥시카보닐, 아미노이미노, 알콕시카보닐아미노, 아릴옥시카보닐아미노, 아미노카보닐, 알킬아미노카보닐, 디알킬아미노카보닐, 아릴아미노카보닐, 디아릴아미노카보닐, 아르알킬아미노카보닐, 알콕시,아릴옥시, 퍼플루오로알콕시, 알케닐옥시, 알키닐옥시, 아릴알콕시, 아미노알킬, 알킬아미노알킬, 디알킬아미노알킬, 아릴아미노알킬, 아미노, 알킬아미노, 디알킬아미노, 아릴아미노, 알킬아릴아미노, 알킬카보닐아미노, 아릴카보닐아미노, 아지도, 니트로, 머캅토, 알킬티오, 아릴티오, 퍼플루오로알킬티오, 티오시아노, 이소티오시아노, 알킬설피닐, 알킬설포닐, 아릴설피닐, 아릴설포닐, 아미노설포닐, 알킬아미노설포닐, 디알킬아미노설포닐, 또는 아릴아미노설포닐이고, y는 1 내지 3의 정수이다]의 자가-제거 링커인 접합체.
  80. 제77항에 있어서, 링커가 사이클릭 알킬렌 잔기를 포함하는 디아민인 접합체.
  81. 제77항에 있어서, 디아민이 비사이클로알킬렌 잔기를 함유하는 접합체.
  82. 제77항에 있어서, 링커가 1,4-비스(아미노메틸)사이클로헥산, 1,4-비스(아미노메틸)사이클로헵탄, 1,3-비스(아미노메틸)사이클로펜탄, 1-아미노-4-(아미노메틸)사이클로헥산, 1,4-디아미노사이클로헥산 및 1,4-비스(아미노메틸)비사이클로[2.2.2]옥탄으로부터 선택되는 접합체.
  83. 제77항에 있어서, 링커가 1,ω-디아미노알칸인 접합체.
  84. 제77항에 있어서, 링커가 1,3-디아미노프로판인 접합체.
  85. 제77항에 있어서, 링커가 1,ω-디카보닐알칸인 접합체.
  86. 제77항에 있어서, 링커가 옥살산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 아디프산 및 피발산으로부터 선택되는 접합체.
  87. 제1항 내지 제30항 중의 어느 한 항에 있어서, 펩타이드성 기질이 세포 표면 프로테아제에 의한 절단 부위인 P1-P1' 결합[여기서, P1은 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr으로부터 선택되고, P1'은 Gly, Ser, hSer, Thr, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 또는 6-아미노헥사노일이다]을 포함하는 접합체.
  88. 제1항 내지 제32항 중의 어느 한 항에 있어서, Phe, Ser, Gly, Ala, Ser(OMe), hSer, 1-메틸His, 3-메틸His, His, nVal, nLeu, Abu, (hS)Gly, Thr, Aib, CHA 및 Tyr로부터 선택되는 P2 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  89. 제1항 내지 제33항 중의 어느 한 항에 있어서, Arg, Lys, Gln, Quat, Arg 대용물, Ser, Thr, hSer, dSer, Pro, (hS)Gly, Tyr, 4,4-디메틸Thr, Asn, Met(O2),Quat2, Quat3, Quat4및 Quat5로부터 선택되는 P3 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  90. 제1항 내지 제34항 중의 어느 한 항에 있어서, Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe, Val, N,N-디메틸Gly, β-Ala, Cys(Me), Gln, t-부틸Gly 및 nVal로부터 선택되는 P4 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  91. 제1항 내지 제35항 중의 어느 한 항에 있어서, Ile, Arg 및 Arg 대용물로부터 선택되는 P5 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  92. 제1항 내지 제36항 중의 어느 한 항에 있어서, Val, Leu, Ile 및 Val로부터 선택되는 P6 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  93. 제1항 내지 제37항 중의 어느 한 항에 있어서, Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met, 6-아미노헥사노일, hCHA, CHA, 헥실Gly, 알릴Gly 및 Phe로부터 선택되는 P2' 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  94. 제1항 내지 제38항 중의 어느 한 항에 있어서, Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met, 6-아미노헥사노일, CHA 및 알릴Gly로부터 선택되는 P3' 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  95. 제1항 내지 제39항 중의 어느 한 항에 있어서, Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met, 6-아미노헥사노일, CHA 및 알릴Gly로부터 선택되는 P4' 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  96. 제1항 내지 제39항 중의 어느 한 항에 있어서, P4'가 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일인 접합체.
  97. 제1항 내지 제39항 중의 어느 한 항에 있어서, P4'가 Leu인 접합체.
  98. 제1항 내지 제39항 중의 어느 한 항에 있어서, 펩타이드성 기질이 화학식 P4-P3-P2-P1-P1'의 5량체[여기서, P1은 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr로부터 선택되고, P2는 Phe, Ser, Gly, Ala, Ser(OMe), hSer, 1-메틸His, 3-메틸His, His, nVal, nLeu, Abu, (hS)Gly, Thr, Aib, CHA 및 Tyr로부터 선택되고, P3은 Arg, Lys, Gln, Quat, Arg 대용물, Ser, Thr, hSer, dSer, Pro, (hS)Gly, Tyr, 4,4-디메틸Thr, Asn, Met(O2), Quat2, Quat3, Quat4및 Quat5로부터 선택되며, P4는 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe, Val, N,N-디메틸Gly, β-Ala, Cys(Me), Gln, t-부틸Gly 및 nVal로부터 선택되고, P1'은 Gly, Ser, hSer, Thr, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 또는 6-아미노헥사노일이다]를 포함하는 접합체.
  99. 제40항에 있어서, 펩타이드성 기질이 임의로, 하나 이상의 P5 또는 P2' 아미노산 잔기[여기서, P5는 Ile, Arg 또는 Arg 대용물이고, P2'는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택된다]를 추가로 포함하는 접합체.
  100. 제41항에 있어서, 펩타이드성 기질이 P5 아미노산 잔기를 포함하는 경우 펩타이드성 기질이 임의로 Arg, Leu, Ile 및 Val로부터 선택되는 P6 아미노산 잔기를 추가로 포함하고, 펩타이드성 기질이 P2' 아미노산 잔기를 포함하는 경우 펩타이드성 기질이 임의로 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met, 6-아미노헥사노일, CHA 및 알릴Gly로부터 선택되는 P3' 아미노산 잔기를 추가로 포함하고, 펩타이드성 기질이 P3' 아미노산 잔기를 포함하는 경우 펩타이드성 기질이 임의로 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met, 6-아미노헥사노일, CHA 및 알릴Gly로부터 선택되는 P4' 아미노산 잔기를 추가로 포함하는 접합체.
  101. 제43항 내지 제47항 중의 어느 한 항에 있어서, 화학식 IV의 화합물 또는 이의 유도체인 접합체.
    화학식 IV
    Xn-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-(P4')s-(L)n-Z
    상기 화학식에서,
    Z는 치료제이고,
    L은 링커이며,
    l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
    l은 0 또는 1이고, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는 1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에 m은 0 또는 1이고,
    u, k, r 및 s는 다음과 같이 선택된다:
    u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k, r 및 s는 0이고, u가 1인 경우에 k는 0 또는 1이고, k가 0인 경우에 r 및 s는 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이며, r이 0인 경우에 s는 0이고, r이 1인 경우에 s는 0 또는 1이고,
    n은 0 또는 1이고,
    Xn은 수소, 또는 아실, 설포닐 또는 카바모일 캡이며,
    P1은 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr로부터 선택되고,
    P1'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 또는 6-아미노헥사노일이며,
    P2는 Phe, Ser, Gly 및 Ala로부터 선택되고,
    P3은 Arg, Lys, Gln, Ser, Quat 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P4는 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe 및 Val로부터 선택되고,
    P5는 Arg 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P6은 Leu, Ile 및 Val로부터 선택되고,
    P2'는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되며,
    P3'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되고,
    P4'는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택된다.
  102. 제50항 또는 제51항에 있어서, 화학식 V의 화합물 또는 이의 유도체인 접합체.
    화학식 V
    Z-(L)n-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-(P4')s-Xc
    상기 화학식에서,
    Z는 치료제이고,
    L은 링커이며,
    l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
    l은 0 또는 1이고, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는 1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에 m은 0 또는 1이고,
    u, k, r 및 s는 다음과 같이 선택된다:
    u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k, r 및 s는 0이고, u가 1인 경우에 k는 0 또는 1이고, k가 0인 경우에 r 및 s는 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이며, r이 0인 경우에 s는 1이고, r이 1인 경우에 s는 0 또는 1이며,
    n은 0 또는 1이고,
    Xc는 결합된 아미노산 잔기의 카보닐 그룹과 함께 카복실산 또는 카복스아미드 그룹을 형성하고,
    P1은 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr로부터 선택되고,
    P1'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 또는 6-아미노헥사노일이며,
    P2는 Phe, Ser, Gly 및 Ala로부터 선택되고,
    P3은 Arg, Lys, Gln, Ser, Quat 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P4는 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe 및 Val로부터 선택되고,
    P5는 Arg 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P6은 Leu, Ile 및 Val로부터 선택되고,
    P2'는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되며,
    P3'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되고,
    P4'는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택된다.
  103. 제54항에 있어서, 화학식 VI의 화합물 또는 이의 유도체인 접합체.
    화학식 VI
    Z1-(L1)n-(P6)m-(P5)p-(P4)i-(P3)j-(P2)l-P1-(P1')u-(P2')k-(P3')r-(P4')s-(L2)v-Z2
    상기 화학식에서,
    Z1및 Z2는 각각 치료제이고 동일하거나 상이하며,
    L1및 L2는 각각 링커이며 동일하거나 상이하고,
    l, j, i, p 및 m은 다음과 같이 선택된다:
    l은 0 또는 1이고, l이 0인 경우에 j, i, p 및 m은 0이고, l이 1인 경우에 j는 0 또는 1이고, j가 0인 경우에 i, p 및 m은 0이고, j가 1인 경우에 i는 0 또는1이고, i가 0인 경우에 p 및 m은 0이고, i가 1인 경우에 p는 0 또는 1이고, p가 0인 경우에 m은 0이고, p가 1인 경우에 m은 0 또는 1이고,
    u, k, r 및 s는 다음과 같이 선택된다:
    u는 0 또는 1이고, u가 0인 경우에 k, r 및 s는 0이고, u가 1인 경우에 k는 0 또는 1이고, k가 0인 경우에 r 및 s는 0이고, k가 1인 경우에 r은 0 또는 1이며, r이 0인 경우에 s는 0이며, r이 1인 경우에 s는 0 또는 1이며,
    n 및 v는 각각 독립적으로 0 또는 1이고,
    P1은 Arg, Lys, Tyr, Phe, Trp, Ala, Val, Ile 및 Thr로부터 선택되고,
    P1'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 또는 6-아미노헥사노일이며,
    P2는 Phe, Ser, Gly 및 Ala로부터 선택되고,
    P3은 Arg, Lys, Gln, Ser, Quat 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P4는 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe 및 Val로부터 선택되고,
    P5는 Arg 및 Arg 대용물로부터 선택되며,
    P6은 Leu, Ile 및 Val로부터 선택되고,
    P2'는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, d-Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되며,
    P3'은 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택되고,
    P4'는 Gly, Ser, Ala, Leu, Ile, nLeu, Val, nVal, Aib, Abu, Met 및 6-아미노헥사노일로부터 선택된다.
  104. 제1항 내지 제49항 중의 어느 한 항에 있어서,
    Ac-R-Q-G-R-S-L-(치료제) (서열 491);
    Ac-R-Q-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 492);
    Ac-R-Q-G-R-S-nL-(치료제) (서열 493);
    Ac-R-Q-G-R-S-nV-(치료제) (서열 494);
    Ac-R-Q-G-R-S-F-(치료제) (서열 495);
    Ac-R-Q-G-R-A-L-(치료제) (서열 496);
    Ac-R-Q-G-R-A-L-(치료제) (서열 497);
    Ac-R-Q-G-R-A-nL-(치료제) (서열 498);
    Ac-R-Q-G-R-A-nL-(치료제) (서열 499);
    Ac-R-Q-G-R-A-nV-(치료제) (서열 500);
    Ac-R-Q-G-R-A-Cha-(치료제) (서열 501);
    Ac-R-Q-G-R-A-F-(치료제) (서열 502);
    Ac-R-N-G-R-S-L-(치료제) (서열 503);
    Ac-R-N-G-R-A-nL-(치료제) (서열 504);
    Ac-R-Q-A-R-S-L-(치료제) (서열 505);
    Ac-R-Q-A-R-S-nL-(치료제) (서열 506);
    Ac-R-Q-A-R-S-nV-(치료제) (서열 507);
    Ac-R-Q-A-A-S-Cha-(치료제) (서열 508);
    Ac-R-Q-A-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 509);
    Ac-R-Q-A-R-T-nL-(치료제) (서열 510);
    Ac-R-Q-A-R-A-L-(치료제) (서열 511);
    Ac-R-Q-A-R-A-nL-(치료제) (서열 512);
    Ac-R-Q-A-R-A-nV-(치료제) (서열 513);
    Ac-R-Q-A-R-A-Cha-(치료제) (서열 514);
    Ac-R-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 515);
    Ac-R-Q-S-R-A-(치료제) (서열 516);
    Ac-R-Q-S-R-A-nL-(치료제) (서열 517);
    Ac-R-Q-S-R-A-L-(치료제) (서열 518);
    Ac-R-Q-S-R-A-nV-(치료제) (서열 519);
    Ac-R-Q-S-R-A-Cha-(치료제) (서열 520);
    Ac-R-Q-S-R-S-S-L-(치료제) (서열 521);
    Ac-R-Q-S-R-S-L-(치료제) (서열 522);
    Ac-R-Q-S-R-S-nL-(치료제) (서열 523);
    Ac-R-Q-S-R-S-nL-(치료제) (서열 524);
    Ac-R-Q-S-R-S-nV-(치료제) (서열 525);
    Ac-R-Q-S-R-S-알릴G-(치료제) (서열 526);
    Ac-R-Q-S-R-S-Cha-(치료제) (서열 527);
    Ac-R-Q-S-R-T-nL-(치료제) (서열 528);
    Ac-R-Q-T-R-S-S-L-(치료제) (서열 529);
    Ac-R-Q-T-R-S-L-(치료제) (서열 530);
    Ac-R-N-S-R-S-nL-(치료제) (서열 531);
    Ac-R-Q-F-R-S-L-(치료제) (서열 532);
    Ac-R-Q-F-R-S-nL-(치료제) (서열 534);
    Ac-R-Q-F-R-S-nV-(치료제) (서열 535);
    Ac-R-Q-F-R-S-nL-(치료제) (서열 536);
    Ac-R-Q-F-R-S-Cha-(치료제) (서열 537);
    Ac-R-Q-F-R-A-L-(치료제) (서열 538);
    Ac-R-Q-F-R-A-nL-(치료제) (서열 539);
    Ac-R-Q-F-R-A-nV-(치료제) (서열 540);
    Ac-R-Q-F-R-A-Cha-(치료제) (서열 541);
    Ac-Q-S-R-S-S-nL-(치료제) (서열 542);
    MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(치료제) (서열 483);
    MeOCO-Quat3-G-R-S-L-(치료제) (서열 484);
    MeOCO-Quat-G-R-S-L-(치료제) (서열 485);
    MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(치료제) (서열 486);
    MeOCO-Quat5-G-R-S-L-(치료제) (서열 487);
    MeOCO-Quat2-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 488);
    MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(치료제) (서열 489);
    MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(치료제) (서열 490);
    Ac-Q-G-R-S-L-(치료제) (서열 445);
    Ac-Q-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 446);
    Ac-Q-G-R-A-S-L-(치료제) (서열 447);
    Ac-N-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 448);
    Ac-Q-G-R-S-S-nL-(치료제) (서열 449);
    Ac-Q-G-R-S-S-nV-(치료제) (서열 450);
    Ac-Q-G-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 451);
    Ac-Q-G-R-S-S-알릴G-(치료제) (서열 452);
    Ac-Q-G-R-S-S-알릴G-(치료제) (서열 453);
    Ac-Q-A-R-S-L-(치료제) (서열 454);
    Ac-Q-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 455);
    Ac-Q-S-R-S-L-(치료제) (서열 456);
    Ac-Q-S-R-S-S-nV-(치료제) (서열 457);
    Ac-Q-S-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 458);
    Ac-Q-S-R-S-S-L-(치료제) (서열 459);
    Ac-Q-T-R-S-S-L-(치료제) (서열 460);
    Ac-Q-Aib-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 461);
    Ac-Q-Aib -R-S-S-L-(치료제) (서열 462);
    Ac-Q-Abu-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 463);
    Ac-Q-Abu-R-S-S-L-(치료제) (서열 464);
    Ac-Q-Cha-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 465);
    Ac-Q-F-R-S-L-(치료제) (서열 466);
    Ac-Q-F-R-S-S-L-(치료제) (서열 467);
    Ac-Q-Y-R-S-S-L-(치료제) (서열 468);
    Ac-R-G-R-S-L-(치료제) (서열 469);
    Ac-R-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 470);
    Ac-R-G-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 471);
    Ac-R-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 472);
    Ac-R-A-R-S-L-(치료제) (서열 473);
    Ac-R-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 474);
    Ac-R-S-R-S-L-(치료제) (서열 475);
    Ac-R-S-R-S-S-L-(치료제) (서열 476);
    Ac-R-S-R-S-Cha-(치료제) (서열 477);
    Ac-R-S-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 478);
    Ac-R-F-R-S-L-(치료제) (서열 479);
    Ac-R-F-R-S-Cha-(치료제) (서열 480);
    Ac-Y-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 481);
    Ac-M(O2)-S-R-S-L-(치료제) (서열 482);
    Ac-R-R-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 105);
    Ac-R-R-Q-S-R-I-(치료제) (서열 610);
    Ac-R-R-Q-S-R-S-S-L-(치료제) (서열 543);
    Ac-R-R-Q-S-R-S-L-(치료제) (서열 544);
    Ac-R-G-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 545);
    Ac-R-G-S-G-R--S-nL-(치료제) (서열 546);
    Ac-R-G-S-G-R-A-nL-(치료제) (서열 547);
    Ac-R-G-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 548);
    Ac-I-V-S-G-R-A-S-L-(치료제) (서열 549);
    Ac-R-R-Q-S-R-A-(치료제) (서열 108);
    Ac-R-R-Q-S-R-I-(치료제) (서열 111);
    Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 106);
    Ac-L-R-R-Q-S-R-G-G-(치료제) (서열 109);
    Ac-L-R-R-Q-S-R-A-(치료제) (서열 110);
    Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(치료제) (서열 112);
    Ac-L-R-R-Q-S-R-A-I-(치료제) (서열 611);
    Ac-L-R-R-Q-S-R-S-S-L-(치료제) (서열 550);
    Ac-L-R-R-Q-S-R-S-L-(치료제) (서열 551);
    Ac-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 362);
    Ac-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 363);
    Ac-S-G-R-S-S-S-L-(치료제) (서열 364);
    Ac-S-G-R-S-nL-(치료제) (서열 365);
    Ac-S-G-R-S-nV-(치료제) (서열 366); 이성체 1
    Ac-S-G-R-S-nV-(치료제) (서열 367); 이성체 2
    Ac-S-G-R-S-G(헥스)-(치료제) (서열 368);
    Ac-S-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 369);
    Ac-S-G-R-S-hCha-(치료제) (서열 370);
    Ac-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 371);
    Ac-S-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 372);
    Ac-S-S-R-S-nL-(치료제) (서열 373);
    Ac-T-G-R-S-Abu-(치료제) (서열 374);
    Ac-T-G-R-S-L-(치료제) (서열 375);
    Ac-T-G-R-S-nV-(치료제) (서열 376);
    Ac-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 377);
    Ac-T-G-R-S-G(헥스)-(치료제) (서열 378);
    Ac-T-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 379);
    Ac-T-G-R-S-hCha-(치료제) (서열 380);
    Ac-T-G-R-T-Abu-(치료제) (서열 381);
    Ac-T-G-R-hS-nL-(치료제) (서열 382);
    Ac-T-G-R-Abu-nL-(치료제) (서열 383);
    Ac-T-G-R-Abu-nV-(치료제) (서열 384);
    Ac-T-G-F(Gn)-S-nL-(치료제) (서열 385);
    Ac-T-G-F(Gn)-S-Cha-(치료제) (서열 386);
    Ac-T-G-F(Gn)-Abu-nV-(치료제) (서열 387);
    Ac-T-G-K(alloc)-S-nL-(치료제) (서열 388);
    Ac-T-G-K-S-nL-(치료제) (서열 389);
    Ac-T-G-hR-S-nL-(치료제) (서열 390);
    Ac-(hS)G-G-R-S-nL-(치료제) (서열 391);
    MeOCO-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 392);
    PhSO2-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 393);
    MeOEtCO-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 394);
    MeO(EtO)2Ac-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 395);
    4-옥소-펜타노일-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 396);
    3,4-메틸디옥시PhAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 397);
    2-피리딜Ac-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 398);
    PhOAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 399);
    L-3-Ph락틸-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 400);
    MeOAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 401);
    PhAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 402);
    MeOEtOCO-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 403);
    MeOEtOAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 404);
    HOOCButa-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 405);
    Z-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 406);
    EtOCO-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 407);
    βA-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 408);
    펜트-4-이노일-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 409);
    NapAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 410);
    iBoc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 411);
    HOAc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 412);
    MeSucc-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 413);
    N,N-디MeGly-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 414);
    Succ-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 415);
    HCO-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 416);
    Ac-T-A-R-S-nL-(치료제) (서열 417);
    Ac-T-A-F(Gn)-S-nL-(치료제) (서열 418);
    Ac-T-A-R-Abu-nV-(치료제) (서열 419);
    Ac-T-A-R-S-Abu-(치료제) (서열 420);
    Ac-T-A-R-T-Abu-(치료제) (서열 421);
    Ac-T-S(O-Me)-R-S-nL-(치료제) (서열 422);
    Ac-T-hS-R-S-nL-(치료제) (서열 423);
    Ac-T-(1-Me)H-R-S-nL-(치료제) (서열 424);
    Ac-T-(3-Me)H-R-S-nL-(치료제) (서열 425);
    Ac-T-H-R-S-nL-(치료제) (서열 426);
    Ac-T-Sar-R-S-nL-(치료제) (서열 427);
    Ac-T-nV-R-S-nL-(치료제) (서열 428);
    Ac-T-nL-R-S-nL-(치료제) (서열 429);
    Ac-T-A-R-S-Cha-(치료제) (서열 430);
    Ac-T-Abu-R-S-nL-(치료제) (서열 431);
    Ac-4,4디MeThr-G-R-S-nL-(치료제) (서열 432);
    Ac-hS-G-R-S-nL-(치료제) (서열 433);
    Ac-hS-G-R-hS-Cha-(치료제) (서열 434);
    Ac-hS-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 435);
    Ac-hS-G-R-T-Cha-(치료제) (서열 436);
    Ac-hS-A-R-S-Cha-(치료제) (서열 437);
    Ac-N-G-R-S-nL-(치료제) (서열 438);
    Ac-Y-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 439);
    Ac-Y-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 440);
    Ac-Q-G-R-S-S-nL-(치료제) (서열 441);
    Ac-Q-G-R-S-S-nV-(치료제) (서열 442);
    Ac-L-R-G-S-G-R-S-A-(치료제) (서열 573);
    Ac-L-R-G-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 342);
    Ac-L-R-G-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 343);
    Ac-L-R-G-S-G-R-S-S-nL-(치료제) (서열 344);
    Ac-L-R-G-S-G-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 345);
    Ac-L-R-G-dS-A-R-S-A-(치료제) (서열 574);
    Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 346 );
    Ac-L-R-G-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 347);
    Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 348);
    Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-nV-(치료제) (서열 349);
    Ac-L-R-G-S-A-R-S-S-nL-(치료제) (서열 350);
    Ac-V-I-V-S-G-R-A-L-(치료제) (서열 351);
    Ac-V-I-V-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 352);
    Ac-V-I-V-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 353);
    Ac-V-I-V-S-A-R-M-A-(치료제) (서열 354);
    Ac-V-I-V-S-A-R-nL-A-(치료제) (서열 355);
    Ac-V-I-V-S-A-R-S-nL-(치료제) (서열 356);
    Ac-V-I-V-S-A-R-S-Cha-(치료제) (서열 357);
    Ac-V-I-V-S-A-R-S-Cha-(치료제) (서열 358);
    Ac-V-I-V-S-A-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 359);
    Ac-R-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(치료제) (서열 360);
    Ac-R-R-nV-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 361);
    Ac-R-G-dS-A-R-S-A-(치료제) (서열 309);
    Ac-R-G-S-G-R-S-A-(치료제) (서열 310);
    Ac-R-G-S-G-R-A-L-(치료제) (서열 311);
    Ac-R-G-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 312);
    Ac-R-G-S-G-R--S-nL-(치료제) (서열 313);
    Ac-R-G-S-G-R-A-nL-(치료제) (서열 314);
    Ac-R-G-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 315);
    Ac-R-G-S-G-R-S-Cha-(치료제) (서열 316);
    Ac-R-G-S-G-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 317);
    Ac-R-G-S-A-R-S-Cha-(치료제) (서열 318);
    Ac-R-G-S-A-R-S-S-(치료제) (서열 319);
    Ac-R-G-S-A-R-S-nV-(치료제) (서열 320);
    Ac-R-G-S-A-R-S-S-nV -(치료제) (서열 321);
    Ac-R-G-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 322);
    Ac-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(치료제) (서열 323);
    Ac-R-(Me)C-P-G-R-V-V-(치료제) (서열 324);
    Ac-R-C(Me)-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 325);
    Ac-R-L-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 326);
    Ac-R-V-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 327);
    Ac-R-V-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 328);
    Ac-R-nL-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 329);
    Ac-R-G(tBu)-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 330);
    Ac-R-L-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 331);
    Ac-R-V-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 332);
    Ac-R-nL-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 333);
    Ac-I-V-S-G-R-A-L-(치료제) (서열 334);
    Ac-I-V-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 335);
    Ac-I-V-S-G-R-A-S-L-(치료제) (서열 336);
    Ac-I-V-S-A-R-M-A-(치료제) (서열 337);
    Ac-I-V-S-A-R-nL-A-(치료제) (서열 338);
    Ac-I-V-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 339);
    Ac-I-V-S-A-R-S-nL-(치료제) (서열 340);
    Ac-I-V-S-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 341);
    Ac-G-S-G-R-S-A-(치료제) (서열 585);
    Ac-G-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 277);
    Ac-G-S-G-R-A-L-(치료제) (서열 278);
    Ac-G-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 279);
    Ac-G-S-G-R-L-(치료제) (서열 280);
    Ac-G-S-G-(4-구안)Phg-S-L-(치료제) (서열 281);
    Ac-G-S-G-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 282);
    Ac-G-S-G-R-A-S-L-(치료제) (서열 283);
    Ac-G-S-G-R-S-nL-(치료제) (서열 284);
    Ac-G-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 285);
    Succ-bA-T-G-R-S-nL-(치료제) (서열 286);
    Ac-G-T-G-R-S-hCha-(치료제) (서열 287);
    Ac-G-hS-G-R-S-nL-(치료제) (서열 288);
    Ac-G-dS-A-R-S-A-(치료제) (서열 289);
    Ac-G-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 290);
    Ac-G-S-A-R-S-S-Cha-(치료제) (서열 291);
    Ac-G-S-A-R-S-S-L-(치료제) (서열 292);
    Ac-G-S-A-R-A-S-L-(치료제) (서열 293);
    Ac-V-S-G-R-S-L-(치료제) (서열 294);
    Ac-V-S-G-R-A-L-(치료제) (서열 295);
    Ac-V-S-G-R-A-S-L-(치료제) (서열 296);
    Ac-V-S-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 297);
    Ac-V-S-A-R-M-A-(치료제) (서열 298);
    Ac-V-S-A-R-nL-A-(치료제) (서열 299);
    Ac-V-S-A-R-S-nL-(치료제) (서열 300);
    Ac-V-S-A-R-S-L-(치료제) (서열 301);
    Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(치료제) (서열 302);
    Ac-(Me)C-P-G-R-V-V-(치료제) (서열 303);
    Ac-C(Me)-P-G-R-A-L-(치료제) (서열 304);
    Ac-C(Me)-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 305);
    Ac-C(Me)-P-A-R-S-L-(치료제) (서열 306);
    Ac-C(Me)-P-A-R-A-S-L-(치료제) (서열 307);
    Ac-G(tBu)-P-G-R-S-L-(치료제) (서열 308);
    Ac-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 552);
    Ac-Q-S-R-S-A-(치료제) (서열 553);
    Ac-Q-S-R-S-G-(치료제) (서열 554);
    Ac-R-S-R-A-A-(치료제) (서열 555);
    Ac-R-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 556);
    Ac-R-Q-S-R-S-A-(치료제) (서열 557);
    Ac-R-Q-S-R-S-A-A-(치료제) (서열 558);
    Ac-R-G-S-G-R-S-A-(치료제) (서열 559);
    Ac-S-G-R-A-A-(치료제) (서열 560);
    Ac-S-G-R-S-A-(치료제) (서열 561);
    Ac-S-G-R-S-S-A-(치료제) (서열 562);
    Ac-S-G-R-A-S-A-(치료제) (서열 563);
    Ac-S-G-R-S-G-(치료제) (서열 564);
    Ac-S-G-R-S-S-G-(치료제) (서열 565);
    Ac-S-G-R-S-G-A-(치료제) (서열 566);
    Ac-S-G-R-S-G-G-(치료제) (서열 567);
    Ac-G-T-G-R-S-G-G-(치료제) (서열 568);
    Ac-G-S-G-R-S-G-G-(치료제) (서열 243)
    Ac-L-R-R-Q-S-R-A-A-(치료제) (서열 597);
    MeSO2-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(치료제) (서열 598);
    Ac-R-A-R-S-L-(치료제) (서열 599);
    Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-L-(치료제) (서열 600);
    Ac-dA(Chx)-Abu-R-S-S-L-(치료제) (서열 601);
    Ac-Q-G-R-S-S-L-(치료제) (서열 602);
    MeOCO-dhF-P(OH)-R-S-S-L-(치료제) (서열 603);
    MeOCO-Quat4-G-R-S-L-(치료제) (서열 604);
    Ac-dCha-P(OH)-R-S-S-L-(치료제) (서열 605);
    Ac-dCha-Abu-R-S-S-A-(치료제) (서열 606);
    MeOCO-Quat2-G-R-S-L-(치료제) (서열 607);
    MeOCO-Quat3-G-R-S-L-(치료제) (서열 608) 및
    MeOCO-Quat-G-R-S-L-(치료제) (서열 609)로부터 선택되는 접합체.
  105. 제35항 내지 제56항 중의 어느 한 항에 있어서, P4가 Pro, Arg, Ser, Ala, Lys, Gly, nLeu, Leu, Tyr, Glu, Phe, Val, N,N-디메틸Gly, β-Ala, Cys(Me), Gln, t-부틸Gly 및 nVal로부터 선택되는 접합체.
  106. 제1항 또는 제66항에 있어서, 화학식 P6-P5-P4-P3-P2-P1-P1'-P2'-P3'-P4'의 펩타이드성 기질[여기서, P1, P2, P3, P4, P5, P6, P1' 및 P2'은 각각 도 1 및 2에 제시된 잔기로부터 선택되고, P6, P5, P4, P2', P3' 및 P4'는 선택적이다]을 포함하는 접합체.
  107. 제67항에 있어서,
    P6이 임의로 L, V 또는 R로부터 선택되며,
    P5가 임의로 R, I 또는 L로부터 선택되며,
    P4가 임의로 G, C 또는 V로부터 선택되며,
    P3이 S, dS, P, A 또는 G로부터 선택되고,
    P2가 A 또는 G로부터 선택되며,
    P1이 R이고,
    P1'이 S, V, M 또는 nL이며,
    P2'가 임의로 S, L, A 또는 V로부터 선택되고,
    P3'이 임의로 L이며,
    P4'가 임의로 L인 접합체.
  108. 치료제, 및 세포 표면 프로테아제 또는 이의 가용성, 방출된 또는 분비된 형태에 의해 단백질분해적으로 절단되어 당해 치료제를 유리시키는 펩타이드성 링커를 통해 당해 치료제에 연결된 핵산 기질을 포함하는, 플라스민 또는 전립선 특이적 항원(PSA)에 의해 실질적으로 절단되지 않는 접합체.
  109. 제108항에 있어서, 핵산이 DNA인 접합체.
  110. 제108항에 있어서, 핵산이 RNA인 접합체.
  111. 제108항에 있어서, 핵산이 이본쇄 RNA인 접합체.
  112. 제67항에 있어서,
    P6이 임의로 L, V 또는 R로부터 선택되고,
    P5가 R, I 또는 L로부터 선택되며,
    P4가 임의로 G, C 또는 V로부터 선택되고,
    P3이 S, dS, P, A 또는 G로부터 선택되며,
    P2가 A 또는 G로부터 선택되고,
    P1이 R이며,
    P1'이 T, Abu, hS, nV 또는 A이고,
    P2'가 임의로 S, L, A 또는 V로부터 선택되며,
    P3'이 임의로 L, nL, nV, G(헥실), G(알릴), CHA, hCHA 또는 Abu이고,
    P4'가 임의로 L, nL, nV, G(헥실), G(알릴), CHA, hCHA 또는 Abu인 접합체.
  113. 제67항에 있어서,
    P6이 임의로 L, V 및 R로부터 선택되고,
    P5가 임의로 R, I 및 L로부터 선택되며,
    P4가 임의로 G, C 및 V로부터 선택되고,
    P3이 S, dS, P, A 또는 G로부터 선택되며,
    P2가 A 또는 G로부터 선택되고,
    P1이 R이며,
    P1'이 S, G 또는 A이고,
    P2'가 임의로 G 또는 A로부터 선택되며,
    P3'이 임의로 L, nL, nV, G(헥실), G(알릴), CHA, hCHA 또는 Abu이고,
    P4'가 임의로 L, nL, nV, G(헥실), G(알릴), CHA, hCHA 또는 Abu인 접합체.
  114. 제1항 내지 제113항 중의 어느 한 항에 있어서, 치료제가 탁솔인 접합체.
  115. 제1항 내지 제113항 중의 어느 한 항에 있어서, 치료제가 독소루비신인 접합체.
  116. 제1항 내지 제113항 중의 어느 한 항에 따르는 접합체를 세포 표면 프로테아제 관련 질환을 앓는 환자에게 투여함을 포함하여, 세포 표면 프로테아제 관련 질환을 치료하는 방법.
  117. 제116항에 있어서, 질환이 자가면역 질환, 염증 질환, 감염 질환 및 내분비 질환으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  118. 제116항에 있어서, 질환이 증식성 질환인 방법.
  119. 치료제, 및 임의로 링커를 통해 당해 치료제에 연결되어 있으며 세포 표면 프로테아제 또는 이의 가용성, 방출된 또는 분비된 형태에 의해 단백질분해적으로 절단되어 당해 치료제를 유리시키는 펩타이드성 기질을 포함하는 접합체를 세포 표면 프로테아제 관련 장애의 증상을 나타내는 환자에게 투여함을 포함하여, 세포 표면 관련 질환을 치료하는 방법.
  120. 제119항에 있어서, 질환이 자가면역 질환, 염증 질환, 감염 질환 및 내분비 질환으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 방법.
  121. 제119항에 있어서, 질환이 증식성 질환인 방법.
  122. 제114항 내지 제119항 중의 어느 한 항에 있어서, 환자가 포유동물인 방법.
  123. 제120항에 있어서, 포유동물이 사람인 방법.
  124. 제118항 또는 제121항에 있어서, 질환이 암인 방법.
  125. 제118항 또는 제121항에 있어서, 질환이 안구 장애, 심혈관 장애, 만성 염증 질환, 상처, 순환계 장애, 피부 질환 및 암으로부터 선택되는 방법.
  126. 제118항 또는 제121항에 있어서, 질환이 류마티스 관절염, 건선, 당뇨병성 망막병증, 익상편 재발, 엑시머 레이저 수술로 인한 반흔, 녹내장 제거 수술로 인한 반흔, 안구 전방의 황반 변성, 크레스트 증후군, 고형 신생물 및 혈관 종양으로부터 선택되는 방법.
  127. 제118항 또는 제121항에 있어서, 질환이 폐암, 결장암, 췌장암, 식도암, 유방암, 난소암, 전립선암, 흑색종 및 카포시(Kaposi) 육종으로부터 선택되는 방법.
  128. 제116항 내지 제127항 중의 어느 한 항에 있어서, 치료제가 탁솔인 방법.
  129. 제116항 내지 제127항 중의 어느 한 항에 있어서, 치료제가 독소루비신인 방법.
  130. 제1항 내지 제113항 중의 어느 한 항에 따르는 접합체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 유도체를 약제학적으로 허용되는 담체중에 포함하는 약제학적 조성물.
  131. 제130항에 있어서, 단일 투여량 투여용으로 제형화되는 약제학적 조성물.
  132. 포장 재료, 세포 표면 프로테아제 관련 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 경감을 위해 사용되는, 포장 재료내에 함유된 제1항 내지 제113항 중의 어느 한 항에 따르는 접합체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 유도체 및 당해 접합체 또는 약제학적으로 허용되는 이의 유도체가 세포 표면 프로테아제 관련 질환 또는 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 치료, 예방 또는 경감을 위해 사용됨을 나타내는 표지를 포함하는 제품.
  133. 제1항 내지 제113항 중의 어느 한 항에 있어서, 세포 표면 프로테아제 관련 질환의 치료용으로 사용되는 접합체.
  134. 제133항에 있어서, 질환이 증식성 질환인 접합체.
  135. 제134항에 있어서, 증식성 질환이 암인 접합체.
  136. 제134항에 있어서, 증식성 질환이 안구 질환, 심혈관 질환, 만성 염증 질환, 상처, 순환계 질환, 피부 질환 및 암으로부터 선택되는 접합체.
  137. 제134항에 있어서, 증식성 질환이 류마티스 관절염, 건선, 당뇨병성 망막병증, 익상편 재발, 엑시머 레이저 수술로 인한 반흔, 녹내장 제거 수술로 인한 반흔, 안구 전방의 황반 변성, 크레스트 증후군, 고형 신생물 및 혈관 종양으로부터 선택되는 접합체.
  138. 제134항에 있어서, 증식성 질환이 폐암, 결장암, 췌장암, 식도암, 유방암, 난소암, 전립선암, 흑색종 및 카포시 육종으로부터 선택되는 접합체.
  139. 세포 표면 프로테아제 관련 질환 치료용 의약을 제조하기 위한 제1항 내지 제113항 중의 어느 한 항에 따르는 접합체의 용도.
  140. 제139항에 있어서, 질환이 증식성 질환인 용도.
  141. 제140항에 있어서, 증식성 질환이 암인 용도.
  142. 제140항에 있어서, 증식성 질환이 안구 질환, 심혈관 질환, 만성 염증 질환, 상처, 순환계 질환, 피부 질환 및 암으로부터 선택되는 용도.
  143. 제140항에 있어서, 증식성 질환이 류마티스 관절염, 건선, 당뇨병성 망막병증, 익상편 재발, 엑시머 레이저 수술로 인한 반흔, 녹내장 제거 수술로 인한 반흔, 안구 전방의 황반 변성, 크레스트 증후군, 고형 신생물 및 혈관 종양으로부터 선택되는 용도.
  144. 제140항에 있어서, 증식성 질환이 폐암, 결장암, 췌장암, 식도암, 유방암, 난소암, 전립선암, 흑색종 및 카포시 육종으로부터 선택되는 용도.
  145. (a) 펩타이드성 기질을 합성하는 단계,
    (b) 임의로, 펩타이드성 기질을 N-말단 또는 C-말단에서 캡핑시키는 단계,
    (c) 임의로, 펩타이드성 기질의 캡핑되지 말단을 링커에 연결시키는 단계,
    (d) 펩타이드성 기질을 임의로 링커를 통해 치료제에 커플링시켜 접합체를 형성시키는 단계 및
    (e) 임의로, 접합체가 보호되어 있는 경우 이를 탈보호시키는 단계를 포함하는, 제1항 내지 제113항 중의 어느 한 항에 따르는 접합체의 제조방법.
  146. 제145항에 있어서, 단계(a) 전에 프로테아제에 대한 펩타이드성 기질을 동정하는 단계를 포함하는 방법.
  147. (a) 질환을 선택하는 단계,
    (b) 질환 과정에 관여하는 세포 또는 질환 과정에 관여하는 세포 부근의 세포를 동정하는 단계 및
    (c) 당해 세포상의 세포 표면 프로테아제를 동정하는 단계를 포함하여, 프로테아제를 동정하여 질환 치료용 접합체를 표적화시키는 방법.
  148. 제147항에 있어서, 프로테아제를 표적화시키는 접합체를 제조함을 추가로 포함하는 방법.
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