KR20020091170A

KR20020091170A - Ｂ 세포 림프종의 치료를 위한 항-사이토카인 항체 또는길항제 및 항-ｃｄ２０의 조합된 사용

Info

Publication number: KR20020091170A
Application number: KR1020027013085A
Authority: KR
Inventors: 한나네이빌
Original assignee: 아이덱 파마슈티칼즈 코포레이션
Priority date: 2000-03-31
Filing date: 2001-04-02
Publication date: 2002-12-05
Also published as: NO20024682L; CN1441677A; AU8729101A; US20050180975A1; CN1981868A; AU2001287291B2; US6896885B2; NO20024682D0; ZA200207847B; WO2001074388A1; US20020012665A1; CA2404365A1; EP1283722A1; BR0109705A; MXPA02009626A; JP2004500412A

Abstract

본 발명에는, 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 투여하여, B 세포 활성을 지속시키는 역할을 하는 사이토카인의 활성을 억제하는 것을 포함하여 이루어지는, B 세포 림프종 및 백혈병을 포함하는 혈액학적 악성종양 또는 고형 비-혈액학적 종양의 조합 치료법이 기재되어 있다. 이러한 항체 및 길항제의 투여, 특히 항-IL10 항체 및 길항제의 투여하면, 혈액학적 악성종양 세포 또는 고형 종양 세포의 화학요법제 및 항-CD20 또는 항-CD22 항체에 대한 내성을 없애거나 줄이기에 특히 유용하다. 본 발명은 또한, RITUSAN

Description

Ｂ 세포 림프종의 치료를 위한 항-사이토카인 항체 또는 길항제 및 항-ＣＤ２０의 조합된 사용{COMBINED USE OF ANTI-CYTOKINE ANTIBODIES OR ANTAGONISTS AND ANTI-CD20 FOR THE TREATMENT OF B CELL LYMPHOMA}

척추동물(예를 들어, 인간, 유인원, 원숭이 등을 포함하는 영장류)의 면역계는, 척추동물-숙주를 침범하는 외래 미생물("항원")을 정확하고도 특이적으로 인식하고; 구체적으로는 이러한 외래 미생물에 결합하고; 및 이러한 외래 미생물을 제거/파괴하기 위하여 진화된 다수의 기관 및 세포 종으로 구성된다. 림프구 및 다른 종류의 세포는 면역계 및 외래 미생물의 제거 및 파괴에 중요하다. 림프구는 흉선, 비장 및 골수(성인)에서 생성되며, 인간(성인) 순환계에 존재하는 백혈구 세포 전체의 약 30%를 차지한다. 림프구는 T-세포 및 B-세포의 주된 두 종류가 있다. T 세포는 세포 매개 면역을 담당하고 B 세포는 항체 생성(체액면역)을 담당한다. 그러나, T 세포 및 B 세포는 전형적인 면역 반응에 있어 상호의존적으로 생각할 수 있으며, 항원 표현 세포(antigen presenting cell) 표면 상의 주요 조직적합성 착체("MHC") 당단백에 결합하는 T 세포 수용체가 항원 단편에 결합하는 경우에 T 세포가 활성화된다; 이러한 활성화로 인해, 사실상 항원에 대해 구별하며 항체("면역글로불린")를 생성하는 B 세포를 자극하는 생물학적 매개체("인터류킨" 또는 "사이토카인")가 방출된다.

숙주 내의 B 세포는 각각 그 표면상에 다른 항체를 발현한다- 따라서 하나의 B 세포는 하나의 항원에 특이적인 항체를 발현하고, 다른 B 세포는 다른 항원에 특이적인 항체를 발현한다. 따라서, B 세포는 상당히 다양하고, 이러한 다양성은 면역계에 있어 중요하다. 인간의 각 B 세포는 다수의 항체 분자(즉, 약 10⁷내지 10⁸)를 생성할 수 있다. 외래 항원이 중성화되면 이러한 항체 생성은 거의 일반적으로 중단된다(또는 실질적으로 감소된다). 그러나, 경우에 따라서는, 특정 B 세포 증식이 감소되지 않고 계속되는데, 이러한 증식으로 인해 "B 세포 림프종"로 불리는 암이 발생할 수 있다.

비-호지킨 림프종은 림프종의 한 종류로 B 림프구의 악성 성장을 특징으로 한다. 미국 암 협회(American Cancer Society)에 따르면, 약 54,000 건이 새로 진단되며, 이중 65%가 중- 또는 고-급의 림프종으로 분류된다. 중급 림프종으로 진단된 환자는 평균 생존 기간이 진단 후 2 내지 5년이며, 고-급 림프종으로 진단된 환자는 평균 생존 기간이 진단 후 6개월 내지 2년이다.

통상적인 치료법에는, 적당한 기증자가 있는 경우 및 골수를 채취시 너무 많은 종양 세포가 포함되어 있는 경우에 아마도 자가유래 또는 동종이계 골수 또는 간상부 세포 이식을 수반하여, 화학요법 및 방사선 치료가 포함된다. 환자는 대부분 통상적인 치료법에 반응하지만, 몇달 내에 재발하는 것이 일반적이다.

비-호지킨 림프종을 치료하기 위한 비교적 새로운 방법으로서, 환자를 악성 B 세포 표면 단백질에 대한 모노클로날 항체로 치료하였다. 이 항체에 독소 또는 방사선 표지를 붙여, 결합 후 세포를 죽일 수 있다. 이와 달리, 항체가 결합할 때 인간 항체 효과기 메커니즘이 일어나 세포 소멸 또는 세포 치사에 이르도록, 항체를 인간 불변 영역(human constant regions)으로 설계할 수 있다.

Ribuximab(IDEC 제약회사 제)는 B 세포 림프종, 특히 비-호지킨 림프종을 치료하기 위해 개발된 차세대 모노클로날 항체 중 하나이다. Ribuximab는 쥐의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 및 인간의 감마 I 중쇄 및 카파 경쇄 불변 영역을 갖는 유전학적으로 설계된 항-CD20 모노클로날 항체이다. Ribuximab은 보체를 고정하고 ADCC를 매개하는 면에서, 이의 쥐의 모체보다 더 효과적이고, 인간 보체의 존재하에 CDC를 매개한다. 이 항체는, B-세포선 FL-18, 라모스(Ramos) 및 라지(Raji)에서의 세포 성장을 억제하고, 디프테리아 독소, 리신, CDDP, 독소루비신 및 에토포사이드에 대한 화학저항성 인간 림프종 세포 선을 민감화하고, DHL-4 인간 B-세포 림프종 선에서 투여량-의존성 방식으로 세포소멸을 유도한다.

그러나, 많은 환자가 Ribuximab및 화학요법으로 치료가 어렵거나 재발한다. 따라서, 림프종 환자의 회복 가능성을 증가시키고 재발율을 감소시키기 위하여, Ribuximab치료법 또는 화학요법과 함께 조합이능한 림프종 치료법의 필요성이 여전히 남아있다.

많은 단체에서 다양한 종류의 암을 치료하기 위하여 사이토카인을 사용하도록 제안하였다. 예를 들어 왕 등(Wang et al)은, 사이토카인이 "종양 세포에 직접적인 세포 독성"임을 제시하였고, 인터류킨-1 알파(IL 1α)가 시험관 내에서 여러 인간 종양 세포에 대한 항-종양 약물의 항-종양 효과를 높였음을 밝혔다(int.J.Cancer(Nov. 27, 1996) 68(5): 583-587). 본비다 등(Bonvida et al.)등은 사이토카인이 "화학요법제의 효능 증강"에 가능성을 갖는 것으로 개시하고 있으며, 재조합 종양 괴사 인자 및 화학요법제 시스플라틴이 난소암 세포에 대한 상승 효과를 갖는 것을 밝혔다(Gynecol. Oncol.(Sept. 1990) 38(3): 333-339). 미합중국 특허 제 5,716,612호에는 IL-4가 암 치료시 화학요법제의 효과를 높이기 위하여 사용가능한 것으로 교시되어 있다.

그러나, 몇몇 단체는 사이토카인이 몇몇 암의 발달에 유해할 수 있다는 것을 또한 인식하였다. 예를 들어, 인터류킨-6(IL6)이 백혈병 세포의 세포소멸을 억제하는 능력이 몇몇 경우 알려져 있다(Yonish-Rouach et al. Wild type53 induces apoptosis of myeloid leukemic cells and is inhibited by interleukin-6, Nature 352:345-347(1991) 참조). IL6이 항-암 화학요법제에 대한 몇가지 백혈병 세포의 내성에 작용할 수 있으며, 시험관 내에서, 항-IL-6 항체는 시스플라틴-유도 세포소멸에 대한 시스플라틴-내성 K562 세포의 감도를 증가시킬 수 있다는 것이 최근 밝혀졌다(Dedoussis et al. Endogenous interleukin 6 conveys resistance to cis-diamminedichloroplatinum-mediated apoptosis of the K562 human leukemic cell line 참조).

IL10에도 B 세포에 대한 효력 상승 효과가 요구되었으며, B 세포 림프종으로부터 유도된 몇몇 세포 선에서 이의 생성이 상향조절되는 것으로 보고되었다(Cortes et al. Interleukin-10 in non-Hodgkin's lymphoma.Leuk Lymphoma26(3-4): 251-259(July, 1997) 참조). 그러나, IL10 수준 및 예후간의 상관관계에 대하여 NHL 환자 혈청을 시험하면, 엡스타인 바르 바이러스(Epstein Barr Virus)(EBV)의 게놈에 위치한, 동원 개방 해독 프레임 BCFR1으로부터 제조되는 바이러스 IL10 수준은 매우 중요하다. 사실, 비슷한 시기에, IL10이 EBV-감염 림프종 세포의 자가분비 성장 인자인 것으로 다른 단체에 의해 보고되었다(Beatty et al. Involvement of IL10 in the autonomous growth of EBV-transformed B cell lines. J. Immunol. 158(9): 4045-51(May 1, 1997) 참조). 이와 달리, 마크로파지에 의한 IL6 및 IL10 생성은 림프구 질환의 발병에 중요한 역할을 한다는 가설이 나왔다(미합중국 특허 5,639,600호 참조).

IL10이 IL6, IL2 및 TNF-알파와 함께 작용하여 비-호지킨 림프종 세포의 증식을 증가시킬 수 있는 것으로 또한 보고되었다(Voorzanger et al. Interleukin(IL)10 and IL6 are produced in vivo by non-Hodgkin's lymphoma cells and act as cooperative growth factors.Cancer Res.56(23): 5499-505(Dec. 1, 1996)). NHL 환자에게는 대조군과 비교하여, 어떤 단일 파라미터가 예후적 유의성이 있는 것으로 밝혀지지는 않았지만, 통계적으로 유의성 있는 높은 수준의 Il2, IL8, IL8, IL10, 가용성 IL2 수용체, 가용성 트란스페린 수용체 및 네오프테린이 또한 관찰되었다(Stasi et al. Clinical implications of cytokine and soluble receptor measurements in patients with newly diagnosed non-Hodgkin's lymphoma.Eur.J.Haemotol.54(1): 9-17(Jan., 1995) 참조).

그러나, 문헌에서, IL19과 같은 사이토카인이 질환 진행에 어떤 상관관계도 없으며, 이러한 사이토카인이 실제로 질환에 도움을 주기보다는 림프종을 없애는 데 도움을 줄 수 있다고 제안하는 많은 보고가 있었다. 예를 들어, 보네포익스 등(Bonnefoix et al.)은 열가지 사이토카인(IL2, IL3, IL4, IL6, IL10, IL13, G-CSF, GM-CSF, 인터페론 알파 및 인터페론 감마)에 대하여, 다양한 조직학적 서브타입의 B-비-호지킨 림프종 세포의 자발적 증식 반응을 조절하는 능력을 시험하여, 각 사이토카인이 시료에 따라 억제 또는 자극이 가능하며, 다른 조직학적 서브타입과 상관관계가 없다는 것을 밝혀냈다. 사실, 미합중국 특허 제 5,770,190호(본 명세서에 참조병합됨)에는 급성 백혈병 치료를 위하여 화학요법제와 함께 IL10을 투여하도록 제안되어 있다.

항-사이토카인 항체를 포함하는 치료 섭생을 고안하여, 이러한 항체가 다른 종류의 치료 약물에 대한 B 림프종 세포의 민감성을 증가시키기 위하여 사용될 수 있다면, 림프종 환자에게 도움이 될 것이다. 항-사이토카인 항체가, 화학요법제에 대한 림프종 환자의 B 림프종 세포의 내성을 없애거나 극복할 목적 및 치료 항체의 세포소멸 활성을 높일 목적으로 투여될 수 있다면 특히 도움이 될 것이다. 이러한 조합된 치료 섭생법은 림프종 환자가 이용가능한 치료법에 추가되어, 이러한 환자의 재발율을 감소시킬 수 있을 것이다.

본 발명은, B 림프종 및 백혈병 세포를 포함하는 혈액학적 악성종양 세포를 자극함으로써 표적화된 사이토카인이 질병의 과정에 효력을 나타내는, 항체 및 길항제와 같은 항-사이토카인제를 사용하여 B 세포 림프종 및 백혈병을 포함하는 혈액학적 악성종양을 치료하는 방법에 관한 것이다. 화학요법 및 치료 항체 투여와 같은 다른 공지된 치료법과 함께 항-사이토카인제를 사용하여 치료하면 상승 효과가 나타나는 것으로 밝혀졌다.

본 발명은 또한, B 세포 표적, 예를 들어 CD20에 대한 항체를 사용하는 치료와 함께 사이토카인 항체 또는 사이토카인 길항제를 투여함으로써, B 세포 침습을 특징으로 하는 고형 비-혈액학적(비-림프구양의) 종양, 예를 들어 결장직장암 또는 간암을 치료하는 방법을 포함한다.

본 발명의 목적은, 하나 이상의 화학요법제의 투여 전, 중 또는 후에, 혈액학적 악성종양으로 진단된 환자에게 항-사이토카인 항체 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 하나 이상의 화학요법제에 대한 혈액학적 악성종양 세포 또는 고형 비-혈액학적 종양 세포의 내성을 없애거나, 감소시키거나 극복하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 보다 구체적인 목적은, 혈액학적 악성종양으로 진단된 환자에게 항-사이토카인 항체 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 치료제에 의해 유도되는 세포소멸에 대한 혈액학적 악성 종양 세포의 내성을 없애거나, 감소시키거나 극복하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은, 화학 요법을 따르는 혈액학적 악성종양 재발 환자에게 항-사이토카인 항체 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 상기 환자의 치료 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은, 화학 요법으로 치료가 어려운 혈액학적 악성종양 환자에게 항-사이토카인 항체 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 상기 환자의 치료 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은, 치료 항체를 사용한 치료법을 따르는 혈액학적 악성종양 재발 환자에게 항-사이토카인 항체 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 상기 환자의 치료 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은, 치료 항체를 사용항 치료가 어려운 혈액학적 악성종양 재발 환자에게 항-사이토카인 항체 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 상기 환자의 치료 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은, 상기 환자에게 치료 유효량의 항-CD20 항체를 항-사이토카인 항체와 동시에 또는 어떤 순서이든 연속적으로 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, B 세포 림프종 환자의 치료 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은, 항-사이토카인 항체(예를 들어, 항-IL10 항체) 및 하나 이상의 B 세포 고갈(depleting) 항체(예를 들어, 항-CD20 항체)를 투여함으로써 B 세포가 전-종양 반응을 끌어내는 것을 특징으로 하는 고형 비-혈액학적(비-림프구양의) 종양의 치료 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 보다 구체적인 목적은, 항-사이토카인 항체, 바람직하게는 항-IL10 항체 및 B 세포 고갈 항체, 특히 고갈 항-CD20 항체를 투여하여, 소화계, 특히 결장직장 암 또는 간암을 포함하는 고형, 비-림프구양인 종양을 치료하는 방법을 제공하는 것이다.

제 1 실시형태에서, 본 발명은, B 세포 림프종 및 백혈병과 같은 혈액학적 악성종양, 또는 유방암, 난소암, 고환암 등과 같은 고형 비-혈액학적 종양 환자의 반응속도 및 반응 기간을 증가시키기 위하여, 화학요법 약물 및/또는 치료 항체와 조합하여, 항-사이토카인 항체 및 사이토카인 길항제, 특히 IL10에 대한 항체의 투여에 관한 것이다. 따라서, 본 발명은, B 세포 림프종 또는 백혈병과 같은 혈액학적 악성종양 환자에게, B세포 수용체에 대한 항체 및 어떤 사이토카인 작용을 방해하는 항체 또는 길항제를 투여함으로써, B 세포 림프종 또는 백혈병과 같은 혈액학적 악성 종양을 치료하는 방법에 관한 것이다. 특히, 본 발명은, 항-CD20, 항-CD22, 항-CD40, 항-CD23, 항-CD19, 항-CD37, 이하에 확인된 것과 같은 B 림프종의 세포소멸을 개시하는 B 세포 마커에 대한 항체, 및 예를 들어 항-IL10과 같은 세포소멸을 방해할 수 있는 사이토카인에 대한 항체 또는 이의 길항제의 투여에 관한 것이다. 항-사이토카인 치료법에 의하여 이익을 얻을 수도 있는 다른 치료법(즉 화학요법)을 포함하는 조합 치료 섭생법이 또한 포함된다. 이 방법은 특히 화학요법제 및 치료 항체에 내성을 갖는 세포임을 특징으로하는 항체B 림프종 또는 백혈병과 같은 혈액학적 악성종양 환자의 치료에 사용한다.

제 2 실시형태에서, 본 발명은, T 세포 특이 항체 치료, 특히 B 세포 고갈 항체 및 바람직하게는 CD20 항체 치료와 조합하여, 선택적으로 방사선요법 또는 화학요법과 조합하여, 사이토카인(예를 들어 IL10)에 대한 항체를 투여함으로써, B 세포가 전-종양 반응을 끌어내는 것을 특징으로 하는, B 세포 침습을 갖는(B 세포 기원은 아닌) 고형 비-혈액학적(비-림프구양의) 종양, 특히 암의 신규한 치료 방법을 제공한다. 이러한 고형 종양의 예로는 결장직장암, 간암, 유방암, 폐암, 전립선암, 위암, 두경부암, 난소암, 고환암, 식도암 등이 포함된다. 적당한 화학요법은 아래에 논의한다. 이들 암은 전암, 단계 I 및 II 암 및 진행된 암, 예를 들어 단계 II 후의 암을 포함할 수 있으며, 전이된 고형 종양이 포함된다.

제 1 실시형태에서, 본 발명은, B 세포 림프종으로 진단된 환자에게 항-사이토카인 항체 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, 하나 이상의 화학요법제에 대한, 예를 들어 B 림프종 및 백혈병 세포를 포함하는 혈액학적 악성종양 세포의 내성을 없애거나, 감소시키거나 극복하는 방법을 제공한다.

종종, 혈액학적 악성 종양 환자의 B 세포의 이러한 내성은, 세포가 세포소멸 신호에 반응하지 못하도록 종양형성 B 세포를 하나 이상의 사이토카인으로 자극함으로써 조정된다. 이 때, 본 발명의 방법은, 예를 들어 세포소멸을 유도할 수 있는 약제인 치료요법제를 사용하여, 이러한 종양형성 B 세포의 세포소멸에 대한 내성을 없애거나, 감소시키거나 극복하는 방법으로 나타낼 수 있다. 또한, 항-CD19, 항-CD20, 항-CD22, 항-CD40, 및 항-CD28과 같은 B 세포 표면상의 표적 및 아래 확인되는 다른 B 세포 표적에 대한 치료 항체도 포함된다.

B 세포의 내성은, 환자가 치료제를 이용한 1차 치료를 따라 재발된 후에만 대개 명백하거나, 치료제를 이용하여 1차 치료하기 어려우므로, 본 발명의 방법은, 화학요법 또는 치료 항체를 이용한 치료를 따라 재발되거나 이로는 치료가 어려운 B 세포 림프종 또는 백혈병과 같은 혈액학적 악성종양 환자를 치료하는 것을 대부분 포함한다. 그러나, 본 발명의 항-사이토카인 항체 및 길항제는, 침프종으로 새로 진단된 환자에게, 다른 치료와 조합하거나 다른 치료 전에 사용하여, 재발 가능성을 감소시키거나 치료에 대한 반응 기간을 증가시킬 수도 있다.

본 발명의 방법은, 저급/소포 비-호지킨 림프종(NHL), 소형 림프구(SL) NHL, 중급/소포 NHL, 중급 광범성(diffuse) NHL, 고급 면역아세포 NHL, 고급 림프아세포 NHL, 고급 소형 비-분할(non-cleaved) 세포 NHL, 벌키(bulky) 질환 NHL 및 발덴스트룀-마크로글로불린혈증, 만성 백혈구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프아세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프아세포 백혈병, 림프구 백혈병, 단구성 백혈병, 골수성 백혈병 및 전골수구성 백혈병을 포함하는 광범위한 혈액학적 악성종양, 특히 B 세포 림프종 및 백혈병을 치료하기에 적당하며, 이에 제한되지 않는다. 이들 백혈병은 대개 분류 체계가 변하면 다른 명칭을 가지며, 다른 명칭으로 분류된 림프종 및 백혈병의 환자도 본 발명의 조합 치료 섭생법을 이용할 수 있다는 것은 당업자에게 명백하다.

예를 들어, 유럽 및 미국 병리학자가 제안한 최근 분류 체계를 개정 유럽 미국 림프종(Revised European American Lymphoma;REAL) 분류라 한다. 이 분류 체계에서는, 다른 말초 B-세포 신생물 중 멘틀(Mantle) 세포 림프종 및 변연(Marginal) 세포 림프종을 인식하고, 몇가지 부류를 세포학에 기초한 등급들(즉, 소형 세포, 혼합 소형 및 대형, 대형 세포)로 분리한다. 이들 분류된 림프종 모두 본 발명의 조합 치료법을 이용할 수 있는 것으로 이해해야 한다.

미합중국 국립 암 협회(NCI)는 REAL 부류의 몇가지를 임상적으로 더 유용한 "무통성" 또는 "공격성" 림프종으로 지정하여 차례로 나누었다. 무통성 림프종은,세포학 "등급"으로 나뉘는 소포 세포 림프종을 포함하며, 림프구성 림프종/만성 림프구성 림프종(CLL), 림프 플라즈마 세포모양의(lymphoplasmacytoid)/발덴스트룀 마크로글로불린혈증, 변연 구역(Marginal zone) 림프종 및 모양세포성 백혈병을 포함한다. 공격성 림프종은, 광범성 혼합 및 대형 세포 림프종, 버키트림프종/광범성 소형 비-분할 세포 림프종, 림프아세포 림프종, 멘틀 세포 림프종 및 AIDS-관련 림프종을 포함한다. 상기-사이토카인 항체 또는 길항제를 투여한 결과로, 치료에 반응하는 정도 또는 기간이 연장되는 것이 요구되는 전부이다. 그러나, 본 발명의 발명자는 놀랍게도 항-사이토카인 항체 및 길항제를 투여하면 상승 효과가 나타난다는 것을 알아내었으며, 이 방법은, 비-호지킨 림프종(NHL) 환자의 치료에 사용하는 것이 가장 바람직하다. 사이토카인의 효과 및 유해한 사이토카인은 환자 및 림프종의 종류가 다르면 달라질 수 있으며, 다양한 사이토카인이 B 림프종 세포의 내성에 미치는 효과는 화학요법 및 면역요법제가 다르면 달라질 수 있으므로, 환자에게 항-사이토카인 치료 전에, 각 환자의 각 사이토카인 수준을 시험하도록 제안된다.

제 2 실시형태에서, 본 발명은, 항-사이토카인 항체, 예를 들어 항-IL10 항체 및 B 세포 표적에 대한 항체, 바람직하게는 B 세포 고갈 활성을 갖는 항-CD20 항체를 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, B 세포가 단백질 반응을 끌어내는(종양성장 및/또는 전이를 촉진하는) 고형, 혈액학적 종양의 치료 방법을 제공한다. 그러나, 본 발명은 아래 확인된 다른 B 세포 표적에 대한 항체를 사용하는 것을 포함한다. 또한, 이 실시형태는 화학요법 및/또는 방사선요법을 추가로 사용하는 것을 더 포함한다.

다른 종류의 암 치료를 위하여 다양한 화학요법제가 사용되었는데, 본 발명의 방법은, 하나 이상, 아마도 수가지의 이러한 화학요법제에 대한 악성종양(예를 들어 림프종) 세포의 내성을 없애거나, 감소신키거나 극복할 것이다. 특히, 추가적인 항-사이토카인 치료를 이용할 수 있는 화학요법에는, CHOP, ICE, 미토잔트론(Mitrozantrone), 사이타라빈, DVP, ATRA, 이다루비신(Idarubicin), 호엘저(Hoelzer) 화학요법 섭생, La La 화학요법 섭생, ABVD, CEOP, 2-CdA, FLAG & IDA(연속적인 G-CSF 치료가 있거나 없다), VAD, M&P, C-Weekly, ABCM, MOPP, DHAP, 메토트렉세이트, 독소루비신, 다우노루비신, 타목시펜, 토레미펜(toremifene), 및 시스플라틴이 포함되나, 이에 제한되지 않는다. 다른 화학요법제는 아래의 바람직한 실시형태에 대한 부분에서 확인한다.

다른 사이토카인과 함께 또는 단독으로, 백혈병 및 림프종 질환을 포함하는 혈액학적 또는 비-혈액학적 악성종양에 유해 및 자극 작용을 하는 다양한 사이토카인이 있을 것으로 보인다. 따라서, 환자 및 질환에 따라, 하나 이상의 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 특정 환자에게 추가적 치료법으로 이용할 수 있다. 그러한 사이토카인에는 IL2, IL6, IL10 및 TNF-알파 가 포함되나 이에 제한되지 않는다. 다른 적당한 사이토카인은 아래에서 바람직한 실시형태를 통해 확인한다. 비-호지킨 림프종의 바람직한 항-사이토카인 치료는 항-IL10 치료를 포함하여 이루어진다.

본 기술분야에 공지되어 있으며, 본 발명의 목적을 위해 사용가능한 몇가지 항-IL10 항체가 있다. 미합중국 특허 제 5,871,725호에는, 래트 항-인간 항체 지정 19F1가 기재되어 있다. 다른 항-IL10 항체, 알파-IL10가 미합중국 특허 제 5,837,293호에 기재되어 있다. 항-IL10 항체가 또한 문헌(Tim R. Mosmann, et al., "Isolation of Monoclonal Antibodies Specific For IL-4, IL-5, IL-6, and a New Th2-Specific Cytokine(IL-10), Cytokine Synthesis Inhibitory Factor, By Using A solid Phase Radioimmunoadsorbent Assay," The Journal of Immunology,145(9): 2938-2945, Nov. 1, 1990)에 기재되어 있다. 길항제는, 예를 들어 수용체를 활성화하는 능력이 부족하고, IL-10 결합 또는 항체와 같은 IL-10 결합 분자를 차단하는, 수용체 결합에 대하여 경쟁하는 단백질 형태를 취할 수 있다. 항체라는 용어는 항체 전체 뿐 아니라 항체 단편, 즉 Fab, Fab₂및 Fv 단편을 포함하는 것으로 이해하여야 한다. 항체는, 다른 동물에 인간 IL-10으로 면역성을 줌으로써 분리한 후, 이 기술분야에서 공지된 방법으로 인간화하여, 환자에게 일단 투여되기만 하면 면역원성이 감소될 수 있다.

항-사이토카인 항체의 적당한 투여량은 표적화된 사이토카인, 개별 환자의 예비 혈철 프로파일의 결과, 치료하려는 림프종의 종류 및 질환의 단계에 따라 결정된다. 새로 진단된 저급 비-호지킨 림프종 치료시, 항-IL10 항체의 바람직한 투여량은 .001 mg 내지 100mg/kg, 바람직하게는 약 0.1 내지 100mg/kg, 가장 바람직하게는 약 0.4 내지 20mg/kg 체중이며, 항체가 다른 치료제와 동시에 투여되는지 이보다 이전에 투여되는지에 따라 결정된다. 바람직하게는, 항-사이토카인 항체는 화학요법제 또는 다른 치료와 동시에 또는 이보다 이전에, 일반적으로 화학요법제또는 다른 약제를 투여하기 약 1시간 전 내지 약 1달 전, 바람직하게는 하루 내지 7일 전에 투여된다.

개시된 방법을 실시하기 위한 키트도 본 발명에 포함된다. 본 발명에 따른 키트는, 약제학적으로 허용가능한 담체와 쉽게 혼합 또는 현탁될 수 있으며, 림프종 환자에게 통상적으로 주입되는 하나 이상의 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 포함하여 이루어진다. 상기 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 투여하기 전에 사이토카인 프로파일에 대하여 림프종 환자의 혈청을 시험하는 것이 바람직한 경우에는, 키트도 환자 혈청의 다양한 사이토카인의 상대적인 양을 시험하기 위한 물질 및 시약을 포함하거나, 선택적으로 포함하여 이루어질 수 있다.

혈액학적 악성종양 환자에게 치료 유효량의 치료 항체를 항-사이토카인 항체와 동시에 또는 어떤 순서이든 연속적으로 투여 투여하는 것을 포함하여 이루어지는, B 세포 림프종 및 백혈병과 같은 혈액학적 악성종양을 치료하기 위한 조합 치료법도 본 발명에 포함된다. 치료 항체는, 혈액학적 악성종양 세포, 예를 들어 종양형성 B 세포 표면 상의 수용체와 결합하는 항체로 정의되며, 이들이 항-CD20, 항-CD19, 항-CD22, 항-CD21, 항-CD23, 항-CD37 및 아래 확인된 다른 B 세포 표적과 결합하는 경우에, 이들의 파괴 또는 고갈을 조정한다. 이들은 종양형성 B 세포의 사이토카인-매개 증식을 차단한다는 점에서 단독으로 몇가지 유효한 효과를 가지며, 치료 항체를 항-사이토카인제와 함께 조합 투여하면, 두가지 형태의 치료법이 독립적으로 적용되었을 때의 첨가 효과보다 반응 기간 및/또는 정도가 더 우수하다는 점에서 상승 효과를 갖는다.

다음 이론으로 제한되기를 바라지는 않지만, 본 발명자의 생각으로는, 본 발명의 항-사이토카인제의 공동-투여에 따른 상승 효과는, 일반적으로 세포소멸을 억제하는 효과를 가질 수 있는 표적화된 사이토카인을 억제하는 것과 관련이 있다. 따라서, 본 발명의 항-사이토카인제를, 예를 들어 항-CD20, 항-CD22, 항-CD19, 항-CD21, 항-CD23 또는 항 CD40 항체와 같은 세포사멸을 유도함으로써 작용하는 약제와 결합시키면, 조합 투여를 통해 어느 한 약제 단독을 첨가한 효과보다 훨씬 뛰어난 상승 효과가 나타난다.

그럼에도 불구하고, 이는 본 발명의 항-사이토카인 항체 및 길항제를, 효능이 세포소멸을 통하여 촉진되지 않는 다른 항체 또는 치료제와의 조합 치료에 사용하는 것을 배제하지 않는다. 예를 들어, 방사성표지된 항체는 B 세포 표면에 결합하여 치사량의 방사능을 전달함으로써, 종양 세포의 파괴를 촉진한다. 이러한 항체 및 독소에 결합된 항체도 본 발명의 항-사이토카인제와 함께 사용할 수 있다. 바람직한 방사성표지 항체는 이트륨-[90](⁹⁰Y)로 표지된 항체이다. 특히 바람직한 방사성표지 항체는 제벨린(Zevelin)(IDEC 제약회사제)로,⁹⁰Y에 결합된 항-CD20 항체이다.

본 발명의 조합 치료법은 또한 하나 이상의 화학치료제 또는 섭생을 투여하는 것을 포함하여 이루어지며, 이러한 화학요법은 예를 들어, CHOP, ICE, 미토잔트론(Mitrozantrone), 사이타라빈, DVP, ATRA, 이다루비신(Idarubicin), 호엘저(Hoelzer) 화학요법 섭생, La La 화학요법 섭생, ABVD, CEOP, 2-CdA, FLAG &IDA(연속적인 G-CSF 치료가 있거나 없다), VAD, M&P, C-Weekly, ABCM, MOPP, DHAP, 독소루비신, 시스플라틴, 다우노루비신, 타목시펜, 토레미펜 및 메토트렉세이트와 아래 확인되는 부가적인 화학요법제가 포함된다. 비-호지킨 림프종 환자의 치료를 위한 바람직한 화학요법 섭생은 CHOP이다. 항-사이토카인 항체 또는 길항제는, 바람직하게는 B 세포 표적 항체, 예를 들어 항-CD20, CD22, CD19 또는 CD40, 및/또는 화학요법 전에 투여하여, 표적 사이토카인으로 인한 B 림프종 증식이 B 세포 치료제의 투여 전에 완화되도록 한다. 상기된 바와 같이, 치료 전 환자의 사이토카인 프로파일에 따라, 표적 사이토카인은 무엇보다도 IL2, IL6, IL10 또는 TNF-알파가 될 수 있으며, 바람직한 표적 사이토카인은 IL10이다.

상기된 바와 같이, 본 발명의 치료 항체는, 특히 B 세포 고갈 활성을 갖는, B 세포 표면에서 발현하는 분자를 표적으로 하는 모든 항체가 가능하다. 적당한 B 세포 표적은 아래에 나타낸다.

환자 및 질환 정도에 따라, 항-B 세포 표적 결합 항체, 예를 들어 Rituximab는 .01 내지 약 100mg/kg, 더 바람직하게는 약 .1 내지 50mg/kg, 가장 바람직하게는 약 .4 내지 20mg/kg 체중의 투여량 범위로 투여할 수 있다. 항-사이토카인제를 포함하는 조합 치료 섭생에서는, B 림프종의 증식 가능성이 감소하므로, 유효량이 보다 감소될 수 있다. 또한, 유효량은 선택된 항-사이토카인 치료법 및 상대적인 수준의 환자 혈청 사이토카인에 따라 결정된다.

본 발명의 조합 치료법은 또한 저급/소포 비-호지킨 림프종(MHL), 소형 림프구(SL) NHL, 중급/소포 NHL, 중급 광범성 NHL, 고급 면역아세포 NHL, 고급 림프아세포 NHL, 고급 소형 비-분할 세포 NHL, 벌키질환 NHL 및 발덴스트룀-마크로글로붙린혈증, 만성 백혈구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프아세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프아세포 백혈병, 림프구 백혈병, 단구성 백혈병, 골수성 백혈병 및 전골수구성 백혈병을 포함하는 광범위한 림프종을 치료하기에 적합하며, 이에 제한되지 않는다. 바람직한 표적 질환은, 비-호지킨 림프종(NHL), 및 특히 저급, 소포 NHL이다. 또한, 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 투여하기 전에 사이토카인 프로파일을 시험해야 하는 림프종 환자의 혈청에 유용하다.

이미 논의한 바와 같이, 본명세서에 제공되는 조합 치료법, 특히 항-사이토카인 항체, 예를 들어 항-IL10 및 항-B 세포 표적 항체, 예를 들어 항-CD20의 조합 사용은, 결장직장암, 간암, 및 다른 소화암, 유방암, 식도암, 두경부암, 폐암, 난소암, 전립선암 및 고환암을 포함하는 고형의 비-혈액학적(비-림프구양의) 암의 치료에 유용하다. 이들 암은 초기단계, 중기단계 또는 진행된단계, 예를 들어 전이된 암이 될 수 있다.

본 발명은 또한, 개시된 방법에 따라 치료 항체 및 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 투여하기 위한 키트를 포함한다. 키트는 한종 이상의 치료 항체 및 한종 이상의 항-사이토카인제를 포함하여 이루어질 수 있다. 키트는 또한 치료 항체 및 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 투여하기 전에 사이토카인 프로파일을 시험하기 위한 시약 및 물질을 포함하여 이루어질 수 있다.

언급한 바와 같이, 본 발명은 또한, 항-사이토카인 항체, 예를 들어 항-IL10 항체 및 B 세포 특이 항체, 바람직하게는 RITUXAN과 같은 실질적인 B 세포 고갈 활성을 갖는 항체를 투여함으로써 고형, 비-림프구양의 종양을 치료하는 것을 포함한다. 몇가지 고형 종양은 B 세포 침습을 명백히 갖는 것으로 보고되었다. 말하자면, B세포는 종양형성 상태를 촉진하거나 유지함에 다소 연관되어 있으며, 신체의 이러한 종양에 대한 면역 방어 체계를 방해할 수 있다. 이와 관련하여, WO 020864 Al(본 명세서에 참조 병합)(Biocrystal Inc.)에는 출원인과 같이 Rituxan을 포함하는 B 세포를 표적으로 하는 항체를 사용한 고형, 비-림프구양 종양의 치료에 대해 기재되어 있다. 여기에는, 이러한 치료를 통해, 진행된 결장직장 암, 폐암 및 간암 환자에게도 항-종양 반응이 현저한 것으로 보고되어 있다.

대조적으로, 본 발명은, 항-IL10과 같은 항-사이토카인 항체 및 항-CD20 항체와 같은 B 세포 고갈 항체를 사용하여 ,고형, 비-림프구양 종양을 치료하는, 개선된 조합 치료법을 제공한다.

이 조합 섭생은 고형 종양, 특히 암 세포 자체가 아닌, B 세포가 연관되어 있는 종양의 개선된 치료법을 제공할 것이다. 이 섭생에서, 사이토카인 항체, 예를 들어 항-사이토카인 항체 및 B 세포 고갈 항체, 예를 들어 Rituxan는, 단독으로나 함께 및 어떤 순서이든 투여된다.

또한, 이 섭생은 방사선 요법, 예를 들어 외부 빔 조사, 신체 전부 조사, 방사선면역요법 또는 화학요법을 사용하는 것을 포함할 수 있다.

적당한 화학요법은 아래에서 확인된다. 방사선면역요법은, 고형 종양에 의해 발현되는 표적과 결합하는 방사성표지된 항체를 이용한 치료를 포함하여 이루어질 수 있다.

일반적으로, 항-사이토카인 항체는 B 세포 고갈 항체 전에 투여한다. 이 조합 치료법은 B 세포 침습을 갖는 어떤 고형 종양을 치료하기에 적합할 것으로 기대된다. 적당한 고형 종양의 예는 앞에서 확인되었다. 주목할만한 일례는 결장직장암이다.

이 실시형태에서, B 세포 고갈 항체 및 사이토카인은, 고형 종양 부위에 전달되도록 투여한다. 바람직하게는, 항체를 예를 들어 종양 근처의 정맥에 정맥 주사함으로써, 종양 부위 근처나 종양 부위에 직접 투입한다.

이 조합 섭생 세포는, 고형 종양, 예를 들어 폐 또는 결장직장 종양이 완화되거나 줄어들게 된다.

하기된 정의는, 바람직한 실시형태 및 본 발명의 범위를 더 기재하기 위하여 제공되는 것이다.

I 정의

"사이토카인 길항제"는, 사이토카인, 예를 들어 인터류킨 또는 인터페론 또는 다른 사이토카인의 발현 및/또는 활성을 억제하거나 차단하는 화합물이다.

본 명세서에서 "B 세포 표면 마커" 또는 "B 세포 표적" 또는 "B 세포 항원"은, 이에 결합하는 길항제를 사용하여 표적화 가능한 B 세포 표면 상에 발현되는 항원이다. 대표적인 B 세포 표면 마커에는, CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD53, CD72, CD73, CD74, CDw75, CDw76, CD77, CDw78, CD79a, CD79b,CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85 및 CD86 백혈구 표면 마커가 포함된다. 특히 중요한 B 세포 표면 마커는, 포유류의 다른 비-B 세포 조직과 비교하여 B 세포 상에서 우선적으로 발현되며, 전구체 B 세포 및 성숙한 B 세포 모두에서 발현될 수 있다. 일실시형태에서, 마커는 CD20 또는 CD19와 같은 것으로, B 세포 상에서 간상부 세포 단계로부터 플라즈마 세포로 최종 분화되기 직전의 시점까지 혈통 분화 전반에 걸쳐 발견된다. 바람직한 B 세포 표면 마커는 본 명세서에서 CD19 및 CD20이다.

"CD20" 항원은 -35kDa이고, 말초 혈액 또는 림프구양의 기관으로부터의 B 세포의 90% 이상의 표면 상에서 발견된다. CD 20은 초기 전-B세포 발달동안 발현되며, 플라즈마 세포 분화까지 남아있다. CD20은 정상 B 세포 및 악성종양 B 세포 상에서 모두 존재한다. 문헌상의 CD20의 다른 명칭으로는 "B-림프구-제한 항원" 및 "Bp35"가 포함된다. CD20 항원은 예를 들어 문헌(Clarket al.PNAS(USA) 82:1766(1985))에 기재되어 있다. "CD19" 항원은 예를 들어 HD237-CD19 또는 134 항원으로 확인된 -90kDa 항원을 의미한다(Kiesel et al. Leukemia Research11, 12:1119, (1987)). CD20과 유사하게, CD19는 세포 상에서 간상부 세포 단계로부터 플라즈마 세포로 최종 분화되기 직전의 시점까지 혈통 분화 전반에 걸쳐 발견된다. CD19에 대한 길항제의 결합으로 인해, CD19 항원의 내면화가 가능하다.

"혈액학적 악성종양"에는 혈류의 세포와 관련있는 어떤 악성종양이 포함된다. 이러한 예로는, 저급/소포 비-호지킨 림프종(HNL), 소형 림프구(SL) NHL, 중급/소포 NHL, 중급 광범성 NHL, 고급 면역아세포 NHL, 고급 림프아세포 NHL, 고급소형 비-분할 세포 NHL, 벌키질환 NHL 및 발덴스트룀-마크로글로붙린혈증, 만성 백혈구 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 급성 림프아세포 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프아세포 백혈병, 림프구 백혈병, 단구성 백혈병, 골수성 백혈병 및 전골수구성 백혈병을 포함하는 B 및 T 세포 림프종, 백혈병이 포함되며, 이에 제한되지 않는다. 당업자에게, 이들 림프종은 분류 체계가 변화됨에 따라 다른 명칭을 가지는 경우가 많으며(앞에서 설명), 다른 명칭으로 분류된 림프종 및 백혈병 환자도 본 발명의 조합 치료 섭생을 이용할 수 있다는 것은 명백하다.

고형, 비-혈액학적(비-림프구양의) 종양은, B 세포 침습을 갖는 비-혈액학적 악성종양, 즉 B세포가 "전종양(protumor)" 반응과 관련있는 경우를 의미한다. 이러한 고형 종양은, 일반적으로 직경 0.5mm 이상, 더 일반적으로 직경 1.0 mm 이상의 명백한 종양(palpable tumors)인 것을 특징으로 한다. 이들 예로는, 결장직장암, 간암, 유방암, 폐암, 두경부암, 위암, 고환암, 전립선암, 난소암, 자궁암 등이 포함된다. 이들 암은 초기 단계(전암), 중기(단계 I 및 II) 또는 진행된 상태일 수 있으며, 전이된 고형 종양이 포함된다. 이들 고형 종양은 바람직하게는 B 세포가 전종양 반응을 끌어내는 암으로, 즉 B 세포의 존재가 종양 발달, 유지 또는 전이와 관련이 있는 것이다.

B 세포 "길항제"는, B 세포 표면 마커에 결합시, 예를 들어 B 세포에 의한 체액 반응을 감소시키거나 억제함으로써, 포유류의 B 세포를 파괴하거나 고갈시키거나 및/또는 하나 이상의 B 세포 기능을 방해하는 분자이다. 길항제는, 길항제로 치료된 포유류에서 B 세포를 고갈시킬 수 있는 것(즉, 순환 B 세포 수준을 감소시킬 수 있는 것)이 바람직하다. 이러한 고갈은, 항체-의존성 세포 매개 세포독성(ADCC) 및/또는 보체 의존성 세포독성(CDC), B 세포 증식 억제 및/또는 B 세포 치사 유도(예를 들어, 세포소멸을 통해)와 같은 다양한 메카니즘을 통해 가능하다. 본 발명의 범위에 포함되는 길항제에는, B 세포 마커에 결합되고, 선택적으로 세포독성제와 결합되거나 이에 융합되는 항체, 합성 또는 자연 서열 펩티드 및 소형 분자 길항제가 포함된다. 바람직한 길항제에는 항체, 더 바람직하게는 B 세포 고갈 항체가 포함된다.

"항체-의존성 세포-매개 세포독성" 및 "ADCC"는, Fc 수용체(FcRs)를 발현하는 비특이 세포독성 세포(즉, 자연 킬러(Natural Killer(NK) 세포, 호중구, 마크로파지)가 표적 세포 상에 결합되어 있는 항체를 인식한 후, 표적세포를 용해하는 세포-매개 반응을 의미한다. ADCC, NK 세포를 매게하는 일차 세포는 FcyRIII만을 발현하며, 단구는 FcyRI, FcyRII 및 FcyRIII을 발현한다. 조혈 세포 상의 FcR 발현은 문헌(kinet,Annu. Rev. Immunol9:457-92(1991)) 464면의 표 3에 요약되어 있다. 중요 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위하여, 미합중국 특허 제 5,500,362호 또는 5,821,337호에 기재된 바와 같이 시험관내 ADCC 어세이를 실시할 수 있다. 이러한 어세이에 유용한 효과기 세포에는 말초혈액 단핵세포(PBMC) 및 자연킬러(NK)세포가 포함된다. 이와 달리, 또는 추가적으로, 중요 분자의 ADCC 활성을 생체내에서, 예를 들어 문헌(Clynes et al. PNAS(USA) 95:652-656(1998))에 기재된 것과 같은 동물모델에서 평가할 수 있다.

"인간 효과기 세포"는 하나 이상의 FcRs를 발현하여 효과기 작용을 하는 백혈구이다. 바람직하게는, 이 세포는 적어도 FcyRIII를 발현하며, ADCC 효과기 기능을 갖는다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예로는, 말초혈액 단핵 세포(PBMC), 자연킬러(NK) 세포, 단구, 세포독성 T 세포 및 호중구가 포함되며; PBMCs 및 NK 세포가 바람직하다.

"Fc 수용체" 또는 "FCR" 이라는 용어는 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 나타내기 위하여 사용한다.

바람직한 FcR은 자연 서열 인간 FcR이다. 또한, 바람직한 FcR는 IgG항체(감마 수용체)와 결합하는 FcR로, FcyRI, FcyRII 및 RcyRIII 하부 부류 수용체가 포함되며, 대립형질 변형체 및 이와 달리 이러한 수용체의 접합된 형태가 포함된다. FcyRII 수용체에는, FcyRIIA("활성화 수용체") 및 FcyRIIB("억제 수용체")가 포함되며, 이들은 본질적으로 세포질 도메인에서 상이한 유사 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcyRIIA 는 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-계 활성화 모티프(ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcyRIIB는 세포질 도메인에 면역수용체 티로신-계 억제 모티프(ITIM)를 함유한다. (Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234(1997) 참조). FcRs는 문헌(Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92(1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34(1994) and de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41(1995))에 기재되어 있다. 앞으로 확인될 것들을 포함한 다른 FcRs는 본 명세서에서 "FCR"이라는 용어에 포함된다. 이 용어는 또한, 어머니 IgGs가 태아로 전달되도록 하는 신생아 수용체, FcRn를 포함한다(Guyer et al., J. Immunol. 117:587(1976) and Kim et al., J. Immunol.24:249(1994)).

"보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재 하에 표적을 용해시키는 분자의 능력을 의미한다. 보체 활성 반응(pathway)은 동계 항원과 복합된 분자(예를 들어 항체)에, 보체 시스템(Clq)의 제 1 성분이 결합함으로써 개시된다. 보체 활성을 평가하기 위하여, CDC 어세이(예를 들어 Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163(1996)를 실시할 수 있다.

"성장 억제" 길항제는, 이 길항제가 결합하는 항원을 발현하는 세포의 증식을 억제하거나 감소시키는 길항제이다. 예를 들어, 이 길항제는 세포내 및/또는 시험관내에서 B 세포의 증식을 억제하거나 감소시킬 수 있다.

"세포소멸을 유도하는" 길항제는, 애넥신 V 결합, DNA의 단편화, 세포 수축, 내부원형질 세망조직, 세포 단편화, 및/또는 막 베지클(세포소멸체라 함) 형성과 같은 표준 세포소멸 어세이로 측정할 때 예를 들어 B 세포의 계획된 세포 사망을 유도하는 길항제이다.

"항체"라는 용어는 본 명세서에서 가장 광범위한 의미로 사용되며, 특히 원하는 생물학적 활성을 나타내기만 한다면, 손상되지 않은 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 둘 이상의 손상되지 않은 항체로 형성된 다중특이 항체(예를 들어 이특이(bispecific) 항체) 및 항체 단편이 포함된다.

"항체 단편"은 손상되지 않은 항체의 부분을 포함하여 이루어지며, 바람직하게는 이의 항원-결합 또는 가변영역을 포함하여 이루어진다. 항체 단편의 예로는, Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편; 다이어바디(diabodies); 선형 항체; 단일쇄 항체 분자; 및 항체 단편으로 형성된 다중특이 항체가 포함된다.

"자연 항체(native antibodies)"는 일반적으로 두개의 동일한 가벼운(L) 사슬 및 두개의 동일한 무거운(H) 사슬로 구성된 약 150,000 달톤의 헤테로테트라머 당단백이다. 각각의 경쇄는 하나의 공유 디설파이드 결합으로 중쇄에 결합되나, 디설파이드 결합의 수는 다른 면역글로불린 아이소타입의 중쇄에서 달라진다. 각각의 중쇄 및 경쇄는 또한 간격이 규칙적인 사슬내 디설파이드 다리를 갖는다. 각각의 중쇄는 한쪽 말단에 가변 도메인(VH)을 가지고, 다수의 불변 도메인이 이어져있다. 각각의 경쇄는 한쪽 말단(VL)에 가변 도메인 및 다른쪽 말단에 불변 도메인을 가지며; 경쇄의 불변도메인은 중쇄의 제 1 불변도메인과 정렬되어 있고, 경쇄의 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬되어 있다. 특정 아미노산 잔기가 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 간에 계면을 형성하는 것으로 생각된다.

"가변"이라는 용어는, 가변 도메인의 어떤 부분이, 항체간에 서열이 크게 다르고, 각 특정 항체의 특이성 및 결합이 이의 특정 항원에 대하여 이용된다는 사실을 의미한다. 그러나, 항체의 가변 도메인 전반에 걸쳐 가변성이 골고루 분배되어 있지 않다. 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 모두의 과가변 영역으로 불리는 세 부분에 집중되어 있다. 가변 도메인 중 더 많이 보존된 부분은 골격 영역(Framework regions)(FRs)으로 불린다. 자연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 주로 P-시트 구조를 갖는 네개의 FRs를 포함하여 이루어지고, 세개의 과가변 영역에 연결되어 있으며, 이는 루프연결을 형성하고, 경우에 따라 3-시트 구조부를 형성한다. 각 사슬의 과가변 영역은 근방에 FRs가 함께 있으며, 다른 사슬로부터의 과가변 영역과 함께 항체의 항원-결합 부위를 형성한다(Kabat el al., Sequences of Proteinsof Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Sevice, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991) 참조). 불변 도메인은 항원에 대한 항체의 결합과 직접적인 관련이 없으나, 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)에서의 항체 관여와 같은 다양한 효과기 작용을 한다.

항체의 파파민 소화로, "Fob" 단편이라 불리며 각각 단일 항원-결합 부위를 갖는 두개의 동일한 항원-결합 단편과, 그 명칭으로 쉽게 결정화하는 이의 능력을 알 수 있는 잔류 "Fc" 단편이 생성된다. 펩신 처리로 두개의 항원-결합 부위를 가지며 쉽게 항원과 가교결합할 수 있는 F(ab')2 단편을 얻는다.

"Fv"는 완전한 항원-인식 및 항원-결합 부위를 갖는 최소 항체 단편이다. 이 영역은, 단단하게 비공유 결합되어 있는 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인을 갖는 다이머로 구성된다. 이 구조에서, 각 가변 도메인의 세 과가변 영역은 상호작용을 통하여, VH-VL 다이머 표면 상의 항원-결합 부위를 형성한다. 집합적으로, 여섯개의 과가변 영역은 항체에 대한 항원 결합 특이성을 나타낸다. 그러나, 단일 가변 도메인(또는 항원에 특이적인 세개의 과가변 영역만을 포함하여 이루어지는 Fv의 반)조차도, 전체 결합 부위보다는 친화도가 낮을지라도, 항원을 인식하여 결합하는 능력을 가진다.

Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인 및 중쇄의 제 1 불변 도메인(CHI)을 포함한다. Fab' 단편은, 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하는 중쇄 CHI 도메인의 카르복시 말단에 몇몇 잔기가 첨가되어 Fab 단편과 다르다. Fab'-SH는 본 명세서에서, 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 하나 이상의유리 티올기를 갖는 Fab'를 나타낸다. F(ab')Z 항체 단편은 원래, 그 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편쌍들로 형성되었다. 항체 단편이 달리 화학적 커플링된 것도 알려져 있다.

어떤 척추동물 종의 항체(면역글로불린)의 "경쇄"는, 이들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 카파(x) 및 람다(k)로 불리는 두가지 명백히 다른 형태중 하나로 지정될 수 있다.

중쇄의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라, 항체는 다른 부류로 지정될 수 있다. 손상되지 않은 항체의 다섯가지 주 부류:IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM가 있으며, 이들 중 몇가지는 하부 부류(아이소타입), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA 및 IgA2로 더 세분될 수 있다. 다른 항체 부류에 대응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 a, 8, s, y, 및 R로 불린다. 다른 면역글로불린 부류의 서브유닛 구조 및 3차원 구조는 주지되어 있다.

"단일 사슬 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은, 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하여 이루어지며, 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬로 존재하는 것을 특징으로 한다. 바람직하게는, Fv 폴리펩티드는, scFv가 항원결합에 필요한 구조를 형성하도록 하는 폴리펩티드 링커를 VH 및 VL 도메인 사이에 더 포함하여 이루어진다. scFv를 검토하기 위해서는 문헌(Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore, eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315(1994))을 참조한다.

"다이어바디"라는 용어는, 두 개의 항원-결합 부위를 갖는 소형 항체 단편을의미하며, 이 단편은 동일한 폴리펩티드 사슬(VH-VL)에서 경쇄 가변 도메인(VL)에 연결되어 있는 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함하여 이루어진다. 너무 짧아서 동일한 사슬 상의 두 도메인 간에 쌍을 이루어주기 어려운 링커를 사용하여, 도메인이 다른 사슬의 상보 도메인과 쌍을 이루어, 두개의 항원 결합 부위를 형성하도록 한다. 다이어바디는 예를 들어, EP 404,097; WO 93/11161; 및 문헌(Hollinger et al., Proc. Nad. Acad. Sci. USA. 90:6444-6448(1993))에 더 자세히 기재되어 있다.

본 명세서에 사용되는 "모노클로날 항체"라는 용어는, 실질적으로 동종 항체 집단으로부터 얻어지는 항체를 의미하며, 즉 이 집단을 구성하는 개별 항체들은, 소량 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이를 제외하고는 동일하다. 모노클로날 항체는 단일 항원 부위에 대하여 고도로 특이적이다. 또한, 일반적으로 다른 결정요소(에피토프)에 대한 다른 항체를 포함하는 통상적인 (폴리클로날) 항체 제제와 달리, 각 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정요소에 대한 것이다. 모노클로날 항체는 특이성에 추가하여, 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않는, 하이브리도마 배양으로 합성된다는 점에서 유리하다. 한정구 "모노클로날"은, 실질적으로 동종 집단의 항체로부터 얻어지는 항체의 특징을 나타내며, 어떤 특정한 방법으로 항체를 제조해야 함을 의미하지 않는다. 예를들어, 본 발명에 따라 사용되는 모노클로날 항체는 먼저 문헌(Kohler et al., Nature, 256:495(1975))에 기재된 하이브리도마법으로 만들거나, 재조합 DNA 법을 사용하여 만들 수 있다(미합중국 특허 제 4,816,567호 참조). "모노클로날 항체"는 또한 예를 들어 문헌(Clackson et al., Nature, 352:624-628(1991) and Marks et al., J.Mol. Biol., 222:581-597(1991))에 기재된 방법을 사용하여 파지 항체 라이브러리로부터 분리할 수 있다.

본 명세서에서 모노클로날 항체에는 구체적으로, 중쇄 및/또는 경쇄 중 일부가, 특정 종에서 유래하거나 특정 항체 부류 또는 하부부류에 속하는 항체의 해당 서열과 동일하거나 동종이고, 사슬(들)의 잔부가, 다른 종에서 유래하거나 다른 항체 부류 또는 하부부류에 속하는 항체의 해당 서열과 동일하거나 동종인 "키메릭(chimeric)" 항체(면역글로불린)와 이러한 항체의 단편이, 원하는 생물학적 활성을 보이기만 한다면, 포함된다(미합중국 특허 제 4,816,567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855(1984)). 본 명세서에서 중요 키메릭 항체에는, 비-인간 영장류(예를 들어, 비비, 뱅골원숭이, 시노몰구스 원숭이와 같은 구세계 원숭이)에서 유래한 가변 도메인 항원 결합 서열 및 인간 불변 영역 서열(미합중국 특허 제 5,693,780호)을 포함하여 이루어지는 "프라이메이타이즈(primatized)" 항체가 포함된다.

비-인간(예를 들어 쥐) 항체의 "인간화" 형태는, 비-인간 면역글로분린에서 유래한 최소 서열을 갖는 키메릭 항체이다. 대부분, 인간화된 항체는, 수령체의 과가변 영역으로부터의 잔기가, 원하는 특이성, 친화도 및 능력을 갖는 마우스, 래트, 토끼 또는 비인간 영장류와 같은 비-인간 종(도너 항체)의 과가변 영역으로부터의 잔기로 대체된 인간 면역글로불린(수령 항체)이다. 몇가지 예에서, 인간 면역글로불린의 골격 영역(FR) 잔기는 해당 비-인간 잔기로 대체된다. 또한, 인간화된 항체는, 수령 항체 또는 도너 항체에서 발결되지 않는 잔기를 포함하여 이루어질 수 있다. 이들 변형으로 더 개량된 항체 성능이 가능하다. 일반적으로, 인간화된 항체는, 하나 이상, 일반적으로 두 개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함하여 이루어지며, 과가변 루프의 모두 또는 실질적으로 모두는 비-인간 면역글로불린의 것에 상응하며, FRs의 모두 또는 실질적으로 모두는 인간 면역글로불린 서열의 것에 상응한다. 인간화된 항체는 선택적으로 또한 면역글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부, 일반적으로 인간 면역글로불린의 것을 포함하여 이루어진다. 더 상세하게는 문헌(Jones et al., Nature 321:522-525(1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329(1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol.2:593-596(1992))을 참조한다.

본 명세서에서 사용되는 "과가변 영역"이라는 용어는, 항원-결합을 가능하도록 하는 항체의 아미노산 잔기를 의미한다. 과가변 영역은, "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"으로부터의 아미노산 잔기(예를 들어 경쇄 가변 도메인의 잔기 24-34 (LI), 50-56(L2) 및 89-97(L3)와 중쇄 가변 도메인의 31-35(H1), 50-65(H2) 및 95-102(H3); Kabatet al., Sequence of Proteins of Immunological Interest,5th Ed. Public Health Service., National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) 및/또는 "과가변 루프"로부터의 이러한 잔기(예를 들어 경쇄 가변 도메인의 잔기 26-32(L1), 50-52(L2) 및 91-96(L3)와 중쇄 가변 도메인의 26-32(H1), 53-55(H2) 및 96-101(H3); Chothia and Lesk J. Mol.Biol.196:901-917(1987))를 포함하여 이루어진다. "골격" 또는 "FR" 잔기는, 본 명세서에 정의된 바와 같은 과가변 영역 잔기를 제외한 가변 도메인 잔기이다. 예를 들어 B 세포 표면 마커와같은 중요 항원과 "결합하는" 길항제는, 이 길항제가 항원 발현 세포를 표적으로 하는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도 및/또는 능력을 갖는, 항원과 결합할 수 있는 길항제이다.

CD 항원과 결합하는 항체의 예로는: "리툭시마브(Rituximab)"("RITUXAN")라 불리는 "C2B8"(미합중국 특허 제 5,736,137호, 본 명세서에 참조 병합); "Y2B8"로 지정된 이트륨-[90]-표지 2138 쥐 항체(미합중국 특허 제 5,736,137호, 본 명세서에 참조 병합); 선택적으로 1311로 표지되어 "131I-B1" 항체(BEXXARTM)를 생성하는 쥐의 IgG2a(미합중국 특허 제 5,595,721호); 쥐의 모노클로날 항체 "1F5"(Press et al. Blood69(2); 584-591(1987)); "키메릭 2H7" 항체(미합중국 특허 제 5,677,180호, 본 명세서에 참조 병합); 및 국제 백혈구 타이핑 워크샵에서 입수가능한 모노클로날 항체 L27, G28-2, 93-1133, B-Cl 또는 NU-B2(Valentineet al., In:Leukocyte Typing III(McMichael, Ed., p.440, Oxford University Press(1987)))가 포함된다. CD19 항원과 결합하는 항체의 예로는, 문헌(Hekman et al., Cancer Immunol. Immunother. 32:364-372(1991) 및 Vlasveldet al. Cancer Immunol. Immunother.40:37-47(1995); and the B4 antibody in Kieselet al. Leukemia Research11, 12:1119(1987))의 항-CD19 항체가 포함된다.

본 명세서에서 "리툭시마브" 또는 "RITUXAN"는, 미합중국 특허 제 5,736,137호(본 명세서에 참조 병합)에서 "C2B8"로 지정된 CD20 항원에 대한 유전적으로 설계된 키메릭 쥐/인간 모노클로날 항체를 의미한다. 이 항체는, 쥐의 경쇄 및 중쇄 가변 영역 서열과 인간 불변 영역 서열을 포함하는 IgG, 카파 면역글로불린이다. 리툭시마브는 약 8.OnM의 CD20 항원에 대한 결합 친화도를 갖는다.

"분리된" 길항제는, 자연 환경의 성분으로부터 확인 및 분리 및/또는 회수된 것이다. 자연 환경의 오염 성분은 길항제의 진단 또는 치료적 용도를 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬 및 다른 단백양 또는 비단백양 용질이 포함될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 길항제는 (1) 로리(Lowry) 법으로 측정시 길항제의 95 중량% 이상, 가장 바람직하게는 99 중량% 이상, (2) 스피닝 컵 배열순서분석기(sequenator)를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 15 잔기 이상을 얻기에 충분한 정도, (3) 코마시 블루 또는 바람직하게는 은 염색을 사용하여 환원 또는 비환원 조건하에 SDS-PAGE로 동종으로 정제된다. 길항제의 자연 환경 성분은 하나 이상 존재하지 않으므로, 분리된 길항제에는, 재조합체 세포 내 원위치의 길항제가 포함된다. 그러나, 통상적으로, 분리된 길항제는 하나 이상의 정제 단계로 제조한다. 치료 목적의 "포유류"는 인간, 가축 및 사육동물, 및 동물원, 스포츠용 또는 애완용 동물(예를 들어, 개, 말, 고양이, 소 등)을 포함하는 포유류로 분류되는 어떤 동물을 의미한다. 바람직하게는 포유류는 인간이다.

"치료"는 치료적 처치 및 예방 또는 방지 조치를 모두 의미한다. 치료가 필요한 경우로는, 질환 또는 질병에 이미 걸린 경우와, 질병 또는 질환이 예방되어야 하는 경우가 포함된다. 따라서, 포유류는 질병 또는 질환을 갖는 것으로 진단되었거나, 질병에 걸리기 쉽거나 쉽게 감염되는 경우가 가능하다.

"치료적 유효량"이라는 표현은, 당해 자가면역 질환을 방지, 호전 또는 치료하기에 유효한 길항제의 양을 의미한다. 본 명세서에서 부가 치료를 위하여 사용되는 "면역억제제"라는 용어는, 치료하려는 포유류의 면역 체계를 억제하거나 마스크하는 작용을 하는 물질을 의미한다. 여기에는, 사이토카인 제조를 억제하거나, 자가-항원 발현을 하향조정 또는 억제하거나, MHC 항원을 마스크하는 물질이 포함된다.

이러한 약제의 예로는, 2-아미노-6-아릴-5-치환된 피리미딘(미합중국 특허 제 4,665,077호, 본 명세서에 참조 병합 개시); 아자티오프린; 사이클로포스파미드; 브로모크립틴; 다나졸; 댑손; 글루타르알데하이드(이는 MHC 항원을 마스크하며, 미합중국 특허 제 4,120,649호에 기재되어 있다); MHC 항원 및 MHC 단편의 항-요오도타입 항체; 사이클로스포린 A; 예를 들어 프리드니손, 메틸프레드니손, 및 덱사메타손과 같은 글루코코르티소스테로이드 등의 스테로이드; 항-인터페론-y-(3, 또는 -a 항체, 항-종양괴사 인자-a 항체, 항-종양괴사 인자-(i 항체, 항-인터류킨-2 항체 및 항-IL-2 수용체 항체를 포함하는 사이토카인 또는 사이토카인 수용체 길항제; 항-CD 11a 및 항-CD18 항체를 포함하는 항-LFA-1 항체; 항-L3T4 항체; 이형 항-림프구 글로불린; pan-T 항체, 바람직하게는 항 CD3 또는 항-CD4/CD4a 항체; LFA-3- 결합 도메인을 포함하는 가용성 펩티드(WO 90/08187호, 7/26/90 공개); 스트렙토키나제; TGF-0; 스트렙토도나제; 숙주로부터의 RNA 또는 DNA; FK506; RS-61443; 데옥시스페르구알린; 라파마이신; T-세포 수용체(Cohen et al., 미합중국 특허 제 5,114,721호); T-세포 수용체 단편(Offner et al., Science 251:430-432(1991); WO 90/11294; Ianeway, Nature, 341:482(1989); 및 WO 91/01133); TLOB9와 같은 T 세포 수용체 항체(EP 340,109)가 포함된다.

본 명세서에 사용되는 "세포독성제"라는 용어는 세포의 기능을 억제 또는 방지하거나 및/또는 세포를 파괴하는 물질을 의미한다. 이 용어에는 방사성 동위원소(예를 들어, I¹³¹, Y⁹⁰, Ar²¹¹, P³², Re¹⁸⁸, Re¹⁸⁶, Sm¹⁵³, B²¹²등), 화학치료제 및 박테리아, 균류, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소 또는 저분자 독소와 같은 독소와, 이의 단편이 포함된다.

"화학요법제"는 암의 치료에 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 예로는, 티오테파 및 사이클로포스파미드(CYTOXANTM)와 같은 알킬화제; 부술판, 임프로술판 및 피포술판과 같은 알킬 술포네이트; 벤조도파, 카르보쿠온(carboquone), 메투레도파 및 우레도파와 같은 아지리딘; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포라미드, 트리에틸렌티오포스파오라미드 및 트리메틸로로멜라민을 포함하는 에틸렌이미드 및 메틸아멜라민; 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메크로레타민, 메클로레타민 옥사이드 하이드로클로라이드, 멜파란, 노벰비에힌(novembiehin), 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스터드와 같은 질소 머스터드; 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴과 같은 니트로스우레아; 아클라시노마이신, 악티노마이신, 우트라마이신(authramycin), 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 칼리케아마이신(calicheamicin), 카라바이신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모이나이신(chromoinycins), 닥티노마이신, 다우노루바이신(daunorubicin), 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-로르류신, 독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이담비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 튜베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신과 같은 항생물질; 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU)와 같은 항-대사산물; 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌과 같은 엽산 유사체; 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌과 같은 퓨린 유사체; 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모퍼, 사이타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록스우리딘(floxuridine), 5-FU와 같은 피리미딘 유사체; 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤과 같은 안드로겐; 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄과 같은 항-아드레날; 프롤린산과 같은 엽산 보충물; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코사이드; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘립티늄 아세테이트; 데토글루시드; 갈륨 나이트레이트; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸하이드라지드; 프로카르바진; PSK; 라족산; 시조프란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가사이토신; 아라비노사이드("Ara-C"); 사이클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀(TAXOLO, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ) 및 독세탁셀(TAXOTEW, Rh6ne-Poulenc Rorer,Antony, France); 클로람부실; 겜시타빈(gemcitabine); 6-티오구아닌; 메르캅토퓨린; 메토트렉세이트; 시스플라틴 및 카르보플라틴과 같은 플라티늄 유사체; 빈플라스틴; 플라티늄; 에토포사이드(VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈(navelbine); 노반트론; 테니포사이드; 다우노마이신; 아미노프테린; 크엘로다(xeloda); 이반드로네이트; CPT-11; 토포이소머라제 억제제 RF2000; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티놀산; 에스페라미신; 카페시타빈; 및 상기된 어떤 것의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체가 포함된다. 이러한 정의에는, 예를 들어 타목시펜, 랄록시펜, 아로마타제 억제 4(5)-이미다졸, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤, 및 토레미펜(Fareston)과 같은 항-에스트로겐; 및 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드, 및 고세렐린과 같은 항-안드로겐; 및 상기된 것 어떤 것의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체와 같은 종양에 대한 호르몬 작용을 조절 또는 억제하는 항-호르몬제도 포함된다.

"사이토카인"이라는 용어는, 한 세포 집단에 의해 배출되어 세포간 매개물로서 다른 세포 상에 작용하는 단백질에 대한 유전 용어이다. 이러한 사이토카인의 예로는 림포킨, 모노킨, 및 통상적인 폴리펩티드 호르몬이 있다. 사이토카인에는, 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소 성장 호르몬과 같은 성장 호르몬; 파라티로이드 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 프로렐락신; 소포 자극 호르몬(FSH), 루테인화 호르몬(LH)과 같은 티로이드 자극 호르몬(TSH); 간 성장 인자; 섬유아세포 성장 인자; 프롤락틴; 태반 락토겐; 종양 귀사 인자-a및 -o; 뮐러(mullerian)-억제 물질; 마우스 고나도트로핀-관련 펩티드; 인히빈; 악티빈; 혈관 내피 성장 인자; 인테그린;트롬보포이에틴(TPO); NGF-P와 같은 신경 성장 인자; 혈소판 성장 인자; TGF-a 및 TGF-0와 같은 형질전환 성장 인자(TGFs); 인슐린-유사 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴(EPO); 골유도 인자; 인터페론-a, -P 및 -y와 같은 인터페론; 마크로파지-CSF(M-CSF)와 같은 콜로니 자극 인자(CSFs); 과립구-마크로파지-CSF(GM-CSF); 및 과립구-CSF(GCSF); IL-1, IL-1a, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-15와 같은 인터류킨(ILs); TNF-a 또는 TNF-P와 같은 종양 괴사 인자; 및 LIF 및 키트 리간드(KL)를 포함하는 다른 폴리펩티드 인자가 포함된다. 본 명세서에 사용되는 사이토카인이라는 용어는 단백질을 자연 공급원 또는 재조합 세포 배양액 및 자연 서열 사이토카인과 생물학적으로 활성인 등가물이 포함한다.

본 출원의 "프로드러그(prodrug)"라는 용어는, 모약물에 비해 종양 세포에 대한 세포독성이 거의 없으며, 효소로 활성화되거나 활성이 더 큰 모형태(parent form)로 전환가능한, 약제학적 활성 물질의 전구체 또는 유도체 형체를 의미한다. 문헌(예를 들어, Wihnan, "Prodrugs in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast(1986) and Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery", Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp.247-267, Humana Press (1985))을 참조한다. 본 발명의 프로드러그에는 포스페이트-함유 프로드러그, 티오포스페이트-함유 프로드러그, 술페이트-함유 프로드러그, 펩티드-함유 프로드러그, D-아미노산-변형프로드러그, 글리코실화된 프로드러그, (3-락탐-함유 프로드러그, 선택적으로 치환된 페녹시아세트아미드-함유 프로드러그 또는 선택적으로 치환된 페닐아세트아미드-함유 프로드러그, 5 플루오로시토신 및 다른 활성이 더 큰 세포독성 유리 약물로 전환가능한 5-플루오로우리딘 프로드러그가 포함되며, 이에 제한되지 않는다. 본 발명에 사용하기 위한 프로드러그 형태로 유도체화될 수 있는 세포독성 약물의 예로는, 상기된 화학요법제가 포함되며, 이에 제한되지 않는다.

"리포좀"은, 포유류에 약물(본 명세서에 개시된 길항제 및 선택적으로 화학요법제 등)을 전달하기에 유용한, 다양한 형태의 지질, 인지질 및/또는 계면활성제로 구성되는 소형 베지클이다. 리포좀의 성분은 일반적으로, 생물 막의 지질 배열과 유사한 이중층 형태로 배열되어 있다. "패키지 삽입물"이라는 용어는, 시판 치료제품 패키지에 통상적으로 포함되어 있는 설명서를 나타내기 위하여 사용하며, 여기에는 이러한 치료제품의 사용과 관련있는 지시사항, 용도, 용량, 투여법, 금기사항 및/또는 유의사항에 대한 정보가 들어 있다.

II. 길항제의 생산

본 발명 용도의 제조방법 및 제조물품은 B 세포 표면표지 및/또는 사이토카인에 결합하는 길항제를 사용하거나 포함한다. 따라서, 그러한 길항제를 생성하는 방법을 설명하고자 한다. 길항제를 생산 또는 스크리닝하는데 사용되는 B 세포 표면표지 또는 사이토카인은 예를 들면 원하는 에피토프를 포함하는 항원 또는 그 일부의 가용성 형태일 수 있다. 선택적으로 또는 추가적으로, 그 세포표면에서 B 세포 표면표지를 발현하는 세포는 길항제를 생성하거나 스크리닝하는데 사용될 수 있다. 길항제를 생성하는데 유용한 다른 형태의 B 세포 표면표지는 당업자가 잘 알 것이다. 바람직하게는, B 세포 표면표지는 CD19 또는 CD20 항원이다. 바람직하게는, 사이토카인은 IL-10이다.

바람직한 길항제는 항체이지만, 항체가 아닌 길항제도 본 명세서에서 고려된다. 예를 들면, 길항제는 세포독성제(본 명세서에서 설명된 것과 같은)와 선택적으로 융합되거나 접합된 소형 분자 길항제를 포함할 수 있다. 소형분자의 라이브러리는 그 항원에 결합하는 소형분자를 확인하기 위하여 관심있는 B 세포 표면표지에 대해 스크리닝될 수 있다. 소형분자는 그 길항특성에 대해 추가로 스크리닝되거나 및/또는 세포독성제와 접합될 수 있다.

길항제는 또한 합리적 디자인에 의해 또는 파지 디스플레이에 의해 생성된 펩티드일 수도 있다(예를 들면 1998년 8월 13일에 공개된 WO98/35036을 참조). 일실시형태에서, 선택된 분자는 항체의 CDR에 기초하여 디자인된 "CDR 유사체" 또는 항체 유사체일 수 있다. 그러한 펩티드는 그 자체로 길항제일 수 있지만, 펩티드는 선택적으로 펩티드의 길항특성을 추가하거나 증진시키기 위하여 세포독성제에 융합될 수 있다.

본 발명에 따라 사용되는 항체 길항제의 생산을 위한 예시적인 기술에 대해 다음에 설명한다.

(i) 폴리클로날 항체

폴리클로날 항체는 관련 항원 및 보조제를 피하(sc) 또는 복강 내(ip) 다중 주입함으로써 동물에서 생성되는 것이 바람직하다. 관련 항원을 예를 들면 키홀 림펫 헤모시아닌, 혈청알부민, 소 타이로글로불린, 또는 예를 들면, 말레이미도벤조일 술포숙신이미드 에스테르(시스테인 잔기를 통해 결합), N-하이드록시숙신이미드(리신 잔기를 통해 결합), 글루타르알데하이드, 숙신산 무수물, SOC12, 또는 R1N=C=NR(R과 R1은 다른 알킬기이다)과 같은 이작용성 또는 유도제를 사용하는 콩 트립신 저해제와 같은 면역화된 종에서 면역원성인 단백질에 접합시키는 것이 유용할 수 있다. 동물들을 100pg 또는 5wg의 단백질 또는 접합체(각각 래빗 또는 마우스에 대한 것임)를 3부피의 프룬드 완전보조제와 조합하고 다중 부위에서 용액을 내피에 주입함으로써 항원, 면역원성 접합체, 또는 유도체에 대해 면역화한다. 1개월 후 프룬드 완전 보조제 중의 펩티드 또는 접합체를 원래 양의 1/5 내지 1/10을 동물의 다중 부위에서 피하주입함으로써 추가자극한다. 7 내지 14일 후, 동물의 혈액을 채취하고 혈청을 항체 역가에 대하여 분석한다. 역가안정상태가 될 때까지 동물을 추가자극한다. 다른 가교결합제를 통하거나 및/또는 다른 단백질에 접합된, 동일한 항원의 접합체로 동물을 추가자극하는 것이 바람직하다. 접합체는 단백질융합으로서 재조합 세포배양 중에서 만들어질 수도 있다. 또한, 면역반응을 증진시키기 위하여 명반과 같은 응집제를 사용하는 것도 적합하다.

(ii) 모노클로날 항체

모노클로날 항체는, 집단을 구성하는 개별항체가 소량으로 존재할 수도 있는 가능한 자연발생 돌연변이를 제외하고는 동일한, 실질적으로 동종인 항체의 집단으로부터 얻어진다. 따라서 수식어 "모노클로날"은 분리성 항체의 혼합물이 아닌 항체의 특성을 나타낸다. 예를 들면, 모노클로날 항체는 문헌[Kohleret al.,Nature, 256:495 (1975)]에 최초로 기재된 하이브리도마법을 사용하여 만들거나 재조합 DNA 법(미국특허 제4,816,567호)에 의해 만들 수 있다.

하이브리도마법에서, 마우스 또는 햄스터와 같은 다른 적절한 숙주동물을 상기 설명한 바와 면역화하여 면역화에 사용된 단백질에 특이적으로 결합할 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 알아낸다. 선택적으로, 림프구는 시험관 내에서 면역화될 수 있다. 그 다음에 림프구를 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 융합제를 사용하여 골수종 세포와 융합하여 하이브리도마세포를 형성한다[Goding,Monoclonal Antibodies: Principles and Prctice,pp. 59-103(Academic Press, 1986)].

따라서 제조된 하이브리도마 세포는 미융합 어버이 골수종 세포의 성장 또는 생존을 저해하는 하나 이상의 물질을 함유하는 것이 바람직한 적합한 배양배지에 접종하여 성장시킨다. 예를 들면, 어버이 골수종 세포가 효소 하이폭산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)가 결여되어 있다면, 하이브리도마용 배양배지는 일반적으로 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방지하는 물질인 하이폭산틴, 아미놉테린 및 티미딘을 포함할 것이다(HAT 배지).

바람직한 골수종 세포는 효과적으로 융합하여, 선택된 항체-생산세포에 의한 안정한 고수준의 항체 생산을 지지하고, HAT 배지와 같은 배지에 민감한 것이다. 이들 중, 바람직한 골수종 세포주는 SICDC(Salk Institute Cell Distribution Center, Sandiego, California USA)에서 입수할 수 있는 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양에서 유래된 것, 및 ATCC(American Type Culture Collection, Rockville,Maryland USA)에서 입수할 수 있는 SP-2 또는 X63-Ag8-653 세포와 같은, 쥐의 골수종 세포이다. 인간 골수종 및 마우스 인간 헤테로골수종 세포주도 인간 모노클로날 항체의 생산에 대해 기재되어 있다[Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeuret al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp.51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)].

하이브리도마 세포가 성장하는 배양배지를 항원에 대한 모노클로날 항체의 생산에 대해 분석한다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생산된 모노클로날 항체의 결합 특이성을 면역침전법에 의해 또는 RIA(radioimmunoassay) 또는 ELISA(enzyme-linked immunoabsorbent assay)와 같은 생체 내 결합분석법에 의해 확인한다. 모노클로날 항체의 결합 친화력은 예를 들면 스캐차드 분석[Scatchard analysis of Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980)]에 의해 확인할 수 있다.

원하는 특이성, 친화력, 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포를 확인한 후, 클론을 한계 희석 방법에 의해 서브클로닝하고 표준방법[Goding,Monoclonal Antibodies: Principles and Prctice,pp. 59-103(Academic Press, 1986)]에 의해 성장시킬 수 있다. 이러한 목적에 적합한 배양배지에는 예를 들면, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지가 포함된다. 또한, 하이브리도마 세포는 동물 내의 복수종양으로서 생체 내에서 성장할 수 있다.

서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체는 예를 들면 단백질 A-세파로오즈, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화 크로마토그래피와 같은 통상적인 면역글로불린 정제방법에 의해 배양배지, 복수액, 또는 혈청으로부터 적합하게 분리된다.

모노클로날 항체를 암호화하는 DNA는 통상적인 방법을 사용하여 (예를 들면, 쥐 항체의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 탐침을 사용함으로써) 쉽게 분리하여 서열확인한다. 하이브리도마 세포는 그러한 DNA의 바람직한 공급원의 역할을 한다. 일단 분리되면, DNA를 발현 벡터 내에 위치시킨 후, 대장균 세포, 유인원 COS 세포, CHO(Chinese Hamster Ovart)세포, 또는 그렇지 않으면 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주세포 속으로 트랜스펙션시켜, 재조합 숙주세포 내에서 모노클로날 항체를 합성한다. 항체를 암호화하는 DNA의 박테리아에서의 재조합 발현에 대한 재조사 논문에는 문헌[Skerraet al., Curr. Opinion in Immunol.,5:256-262 (1993) 및 Phickthun,Immunol. Revs.,130:151-188 (1992)]이 포함된다.

다른 실시형태에서, 항체 또는 항체 단편은 문헌[McCaffertyet al., Nature,348:552-554 (1990)]에 기재된 기술을 사용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 분리된다. 문헌[Clacksonet al., Nature,352:624-628 (1991) 및 Markset al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)]에는 파지 라이브러리를 사용하여 각각 쥐 및 사람 항체를 분리하는 것이 기재되어 있다. 이어지는 간행물에 사슬 재편성에 의한 고친화력(nM 범위) 인간항체의 생산[Markset al., BioTechnology,10:779-783 (1992)]뿐 아니라 매우 큰 파지 라이브러리를 구성하기 위한 방법으로서 조합 감염 및 생체 내 재조합[Waterhouseet al., Nuc. Acids. Res.,21:2265-2266 (1993)]이 기재되어 있다. 따라서, 이들 기술은 모노클로날 항체의 분리를 위한 전통적인 모노클로날 항체 하이브리도마 기술에 대한 대안으로 사용할 수 있다.

또한 DNA는 동종 쥐 서열 대신 인간 중쇄 및 경쇄 불변도메인에 대한 암호화 서열을 치환함으로써[미국특허 제4,816,567호; Morrisonet al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)], 또는 비면역글로불린 폴리펩티드에 대한 암호화서열 모두 또는 일부를 면역글로불린 암호화서열에 공유적으로 결합함으로써 변형시킬 수 있다. 일반적으로 그러한 비면역글로불린 폴리펩티드는 항체의 불변 도메인에 치환되거나, 항체의 한 항원-결합부위의 가변도메인에 치환되어 한 항원에 대한 특이성을 가지는 한 항원-조합 부위와 다른 항원에 대한 특이성을 가지는 다른 항원 조합 부위를 포함하는 키메라 이가 항체를 생성한다.

(iii) 인간화된 항체

비인간 항체를 인간화시키는 방법이 당해 기술분야에서 설명되어 있다. 바람직하게는, 인간화된 항체는 비인간인 공급원으로부터 그 속으로 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 가진다. 이들 비인간 아미노산 잔기는 흔히 "수입(import)"잔기라고 하는데, 이들은 일반적으로 "수입" 가변 도메인으로부터 얻어진다. 인간화는 대응하는 인간항체의 서열 대신 과가변 영역 서열을 사용함으로써, 윈터 등(Winter and co-workers)의 방법[Joneset al., Nature, 321:522-525 (1986); Riechmannet al., Nature,332:323-327 (1988); Verhoeyenet al., Science,239:1534-1536 (1988)]에 따라 행해질 수 있다. 따라서, 그러한 "인간화된" 항체는 실질적으로 더 적은 완전한 인간 가변도메인이 비인간종의 대응하는 서열로 치환된키메라 항체(미국특허 제4,816,567호)이다. 실제, 인간화된 항체는 일반적으로 일부 과가변영역 잔기 및 가능한 일부 FR 잔기가 설치류 항체 내의 유사한 부위의 잔기에 의해 치환된 인간항체이다.

인간화된 항체를 만드는데 사용되는, 경쇄 및 중쇄 모두의, 인간 가변 도메인을 선택하는 것은 항원성을 감소시키는데 매우 중요하다. 소위 "최적(best-fit)" 방법에 따르면, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열을 공지의 인간 가변 도메인 서열의 전체 라이브러리에 대해 스크리닝한다. 그리고 나서 설치류의 것에 가장 가까운 인간서열을 인간 골격영역(FR)으로 한다[Simset al., J. Immunol,151:2296 (1993); Chothiaet al., J. Mol. Biol,196:901 (1987)]. 다른 방법에서는 경쇄 또는 중쇄의 특정 서브그룹의 모든 인간 항체의 컨센서스(consensus) 서열로부터 유래된 특정 골격영역을 사용한다. 동일한 골격이 여러 가지 다른 인간화된 항체에 대해 사용할 수 있다[Carteret al., Proc. Nad. Acad.Sci. USA, 89:4285 (1992); Prestaet al., J. Immunol,151:2623 (1993)].

항체가 항원에 대한 높은 친화력 및 다른 바람직한 생물학적 특성을 보유하도록 인간화하는 것이 또한 중요하다. 이러한 목적을 달성하기 위하여, 바람직한 방법에 따르면, 인간화된 항체는 어버이 서열 및 어버이 및 인간화된 서열의 3차원 모델을 사용한 다양한 개념적 인간화된 산물의 분석방법에 의해 제조된다. 3차원적 면역글로불린 모델은 일반적으로 이용되고 당업자에게 공지되어 있다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 가능한 3차원 형상 구조를 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램을 이용할 수 있다. 이들 디스플레이를 조사하면 후보 면역글로불린 서열의 기능에서잔기의 가능한 역할을 분석할 수 있다, 즉, 후보 면역글로불린이 그 항원에 결합하는 능력에 영향을 미치는 잔기를 분석할 수 있다. 이러한 방식으로, FR 잔기는 수혜자로부터 선택되어 조합될 수 있고, 표적항원에 대한 증가된 친화력과 같은 원하는 항체특성이 달성되도록 서열을 들여올 수 있다. 일반적으로, 과가변영역 잔기는 항원결합에 영향을 미치는데 직접적이고 가장 실질적으로 관련된다.

(iv) 인간항체

인간화에 대한 대안으로서, 인간항체가 생성될 수 있다. 예를 들면, 면역화에 따라 내생적 면역글로불린 생산없이 인간항체의 전체 레퍼토리를 생산할 수 있는 유전자도입동물(예를 들면, 마우스)을 현재 생산할 수 있다. 예를 들면, 키메라 및 배아 돌연변이 마우스에서 항체 중쇄 결합영역(JH) 유전자의 동질접합성 결실이 내생적 항체 생산을 완전히 저해한다는 것이 설명되어 있다. 그러한 배아 돌연변이 마우스에서 인간 배아 면역글로불린 유전자 배열을 전이시키면 항원 면역성검사에 의해 인간 항체가 생산될 것이다[예를 들면, Jakobovitset al., Proc. Mad. Acad. Sci. USA,90:2551 (1993); Jakobovitset al., Nature,362:255-258 (1993); Bruggermannet al., Year in Immuno.,7:33 (1993); 및 미국특허 제5,591,669호, 제5,589,369호 및 제5,545,807호 참조]. 선택적으로, 비면역화 공여자로부터의 면역글로불린 가변(V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 시험관 내에서 인간항체 및 항체 단편을 생산하는데 파지 디스플레이 기술[McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990)]을 사용할 수 있다. 이 기술에 따르면, 항체 V 도메인 유전자는 M13 또는 fd와 같은 필라멘트성 박테리오파지의 주요 또는 소수 코트 단백질 유전자 중하나 속으로 골격 내 클로닝되어, 파지 입자의 표면에서 작용성 항체 단편으로 디스플레이된다. 필라멘트성 입자는 파지 게놈의 단일가닥 DNA 카피를 포함하기 때문에, 항체의 작용적 특성에 근거하여 선택하면 이들 특성을 나타내는 항체를 암호화하는 유전자도 선택된다. 따라서, 파지는 B 세포의 특성 중 일부를 닮는다. 파지 디스플레이는 다양한 형식으로 행해질 수 있다[예를 들면, Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J.,Current Opinion in structural Biology3:564-571 (1993) 참조]. V-유전자 단편의 여러가지 공급원이 파지 디스플레이에 사용될 수 있다. 문헌[Clacksonet al., Nature,352:624-628 (1991)]에서는 면역화된 마우스의 비장에서 유래된 V 유전자의 소형 무작위 조합 라이브러리로부터 다양한 배열의 항-옥사졸론 항체를 분리하였다. 비면역화 인간 공여자로부터의 V 유전자의 레퍼토리가 구성될 수 있고, 다양한 배열의 항원에 대한 항체를 문헌[Markset al., J. Mol. Biol.222:581-597 (1991), 또는 Griffithet al., EMBO J.12:725-734 (1993)]에 기재된 기술에 따라 분리할 수 있다(또한 미국특허 제5,565,332호 및 제5,573,905 참조). 인간 항체는 시험관 내에서 활성화된 B 세포에 의해 생성될 수도 있다(미국특허 제5,567,610호 및 제5,229,275호 참조).

(v) 항체 단편

항체단편을 생산하기 위한 다양한 기술이 개발되어 있다. 전통적으로, 이들 단편은 완전한 항체의 단백질분해를 통해 얻어진다[예를 들면, Morimotoet al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods24:107-117 (1992) 및 Brennanet al., Science,229:81 (1985) 참조]. 그러나, 이들 단편은 현재 재조합 숙주세포에 의해 직접적으로 생산될 수 있다. 예를 들면, 항체 단편은 상기 설명한 항체 파지 라이브러리로부터 분리될 수 있다. 선택적으로, Fab'-Sli 단편은 대장균으로부터 직접 회수되고 화학적으로 결합되어 F(ab')2 단편을 형성할 수 있다[Carteret al., Bio/Technology10:163-167 (1992)]. 다른 접근방법에 따르면, F(ab')2 단편은 재조합 숙주세포 배양물로부터 직접적으로 분리될 수 있다. 항체 단편을 생산하기 위한 다른 기술은 당업자가 잘 알 것이다. 다른 실시형태에서, 선택된 항체는 단일쇄 Fv 단편(scFv)이다[WO 93/16185; 미국특허 제5,571,894; 및 미국특허 제5,587,458호 참조]. 항체 단편은 예를 들면, 미국특허 제5,641,870호에 기재된 바와 같은, "선형 항체"일 수도 있다. 그러한 선형 항체 단편은 단일특이적 또는 이특이적일 수 있다.

(vi) 이특이적 항체 (bispecific antibodies)

이특이적 항체는 둘 이상의 다른 에피토프에 대한 결합특이성을 가지는 항체이다. 예시적인 이특이적 항체는 B 세포 표면표지의 두 개의 다른 에피토프에 결합할 수 있다. 다른 그러한 항체는 제1 B 세포 표면표지에 결합하고 제2 B 세포 표면표지에 추가로 결합할 수 있다. 선택적으로, 항-B 세포 표지결합 암(arm)은 B 세포에 대한 세포방어메카니즘을 집중시키기 위하여 T-세포 수용체 분자(예를 들면 CD2 또는 CD3)와 같은 백혈구 상의 유발분자, 또는 FcyRI(CD64), FcyRII(CD32) 및 FcyRIII(CD16)와 같은 IgG(FcyR)에 대한 Fc 수용체에 결합하는 암과 결합될 수 있다. 이특이적 항체는 세포독성제를 B 세포에 편재시키는데 사용될 수도 있다. 이들 항체는 B 세포 표지-결합 암과 세포독성제(예를 들면, 사포린, 항-인터페론 a, 빈카 알칼로이드, 리신 A 사슬, 메토트렉세이트 또는 방사선 동위원소 합텐)에 결합하는 암을 가진다. 이특이적 항체는 전장 항체 또는 항체단편(예를 들면, F(ab')2 이특이적 항체)으로 제조될 수 있다.

이특이적 항체를 만드는 방법은 당해 기술분야에서 공지되어 있다. 전장 이특이적 항체의 전통적인 생산방법은 두개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍의 공동발현에 기초하며, 이때 이들 두 사슬은 다른 특이성을 가진다[Millsteinet al., Nature,305:537-539 (1983)]. 면역글로불린 중쇄 및 경쇄가 무작위로 분류되기 때문에, 이들 하이브리도마(quadromas)는 10가지 다른 항체분자의 잠재적인 혼합물을 생산하고, 이들 중 오직 하나만이 정확한 이특이적 구조를 가진다. 보통 친화 크로마토그래피에 의해 행해지는 정확한 분자의 정제는 다소 성가지고, 생산수율이 낮다. 유사한 절차가 문헌[WO 93/08829, 및 Trauneckeret al., EMBO J,10:3655-3659 (1991)]에 개시되어 있다.

다른 접근방법에 따르면, 원하는 결합특이성을 가진 항체 가변 도메인(항체-항원 조합 부위)은 면역글로불린 불변 도메인 서열에 융합된다. 융합은 경첩, CH2 및 CH3 영역의 적어도 일부를 포함하는, 면역글로불린 중쇄 불변도메인을 사용하는 것이 바람직하다. 하나 이상의 융합에 존재하는, 경쇄 결합에 필요한 부위를 포함하는 제1 중쇄 불변영역(CHI)을 가지는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합을 암호화하는 DNA, 및 필요하다면 면역글로불린 경쇄를 별도의 발현 벡터 속에 삽입하고, 적합한 숙주 유기체에 공통 트랜스펙션한다. 이것은 구성에 사용되는 3 폴리펩티드 사슬의 동일하지 않은 비율이 최적 수율을 제공하는 실시예에서 3 폴리펩티드 단편의 상호비율을 조절하는데 큰 융통성을 제공한다. 그러나, 동일한 비율의 2 이상의 폴리펩티드 사슬이 높은 수율로 발현되는 경우 또는 비율이 그다지 중요하지 않은 경우에는 한 발현벡터 내에 둘 또는 모든 3 폴리펩티드 사슬에 대한 암호화서열을 삽입할 수도 있다.

이 접근방법의 바람직한 실시형태에서, 이특이적 항체는 한 암의 제1결합 특이성을 가지는 하이브리드 면역글로불린 중쇄, 및 다른 암의 하이브리드 면역글로불린 중쇄 경쇄 쌍(제2결합특이성을 부여함)으로 구성된다. 이러한 비대칭 구조는 이특이적 분자의 1/2에서만 면역글로불린 경쇄가 존재하여 분리가 용이하기 때문에, 원하지 않는 면역글로불린 사슬 조합으로부터 원하는 이특이적 화합물을 분리하는 것을 촉진하는 것으로 밝혀졌다. 이러한 접근방법은 WO 94/04690에 개시되어 있다. 이특이적 항체를 생성하는 보다 상세한 내용에 대해서는 문헌[예를 들면, Sureshet al., Methods in Enzymology,121:210 (1986)]을 참조하기 바란다.

미국특허 제5,731,168호에 기재된 다른 접근방법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자 사이의 계면을 조작하여 재조합 세포 배양물로부터 회수되는 헤테로다이머의 백분율을 최대화할 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 CH3 도메인의 적어도 일부를 포함한다. 이 방법에서, 제1항체분자의 계면의 하나 이상의 소형 아미노산 측쇄는 더 큰 측쇄(예를 들면, 티로신 또는 트립토판)로 대체된다. 큰 측쇄와 동일하거나 유사한 크기의 상보적 "공동"은 큰 아미노산 측쇄를 더 작은 것(예를 들면, 알라닌 또는 트레오닌)으로 대체함으로써 제2항체 분자의 계면에서 만들어진다. 이것은 호모다이머와 같은 다른 원하지 않는 최종산물에 대한 헤테로다이머의수율을 증가시키는 메카니즘을 제공한다.

이특이적 항체에는 가교결합 또는 "헤테로접합" 항체가 포함된다. 예를 들면, 헤테로접합체 내의 항체 중 하나는 아비딘에 결합되고, 다른 것은 바이오틴에 결합될 수 있다. 그러한 항체는 예를 들면 원하지 않는 세포에 대한 면역시스템 세포를 표적으로 하고(미국특허 제4,676,980호), 및 HIV감염을 치료하기 위해(WO 91/00360, WO 92/200373, 및 EP 03089) 제안되었다. 헤테로접합 항체는 임의의 편리한 가교결합방법을 사용하여 만들 수 있다. 적합한 가교결합제는 당해 기술분야에서 공지되어 있고, 다수의 가교결합기술과 함께 미국특허 제4,676,980호에 개시되어 있다.

항체 단편으로부터 이특이적 항체를 생성하는 기술도 문헌에 기재되어 있다. 예를 들면, 이특이적 항체는 화학결합을 이용하여 제조할 수 있다. 문헌[Brenannet al., Science,229:81(1985)]에는 완전한 항체가 단백질 분해되어 F(ab')2 단편을 생성하는 방법이 기재되어 있다. 이들 단편은 디티올 착물형성제 나트륨 아르세나이트의 존재 하에서 환원되어 인접 디티올을 안정화시키고 분자간 다이설파이드 형성을 방지한다. 그리고 나서, 생성된 Fab' 단편은 티오니트로벤조에이트(TNB) 유도체로 전환된다. 그리고 나서, Fab'-TNB 유도체 중 하나는 멜캅토에틸아민으로 환원되어 Fab'-티올로 재전환되고 동몰량의 다른 Fab'-TNB 유도체와 혼합되어 이특이적 항체를 형성한다. 생산된 이특이적 항체는 효소의 선택적 고정화를 위한 작용인자로서 사용될 수 있다.

최근 기술의 진보로, 화학적으로 결합되어 이특이적 항체를 형성할 수 있는Fab'-SH 단편을 대장균으로부터 직접 회수하는 것이 촉진되었다. 문헌[Shalaby et al., J. Exp. Med., 175:217-225(1992)]에는 완전히 인간화된 이특이적 항체 F(ab')2 분자의 생산이 기재되어 있다. 각 Fab' 단편은 대장균으로부터 별도로 분비되고 시험관 내에서 화학결합되어 이특이적 항체를 형성한다. 따라서 형성된 이특이적 항체는 인간 유방종양 표적에 대한 인간 세포독성 림프구의 용해활성을 유발할 뿐 아니라 ErbB2 수용체와 정상적인 인간 T 세포를 과발현하는 세포에 결합할 수 있었다.

재조합 세포배양물로부터 이특이적 항체 단편을 직접적으로 만들고 분리하기 위한 다양한 기술도 설명되어 있다. 예를 들면, 이특이적 항체는 류신 지퍼를 사용하여 생산될 수 있다[Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)]. Fos와 Jun 단백질로부터의 류신 지퍼 펩티드는 유전자 융합에 의해 2개의 다른 항체의 Fab' 부분에 결합되었다. 항체 호모다이머는 경첩영역에서 환원되어 모노머를 형성한 후 재산화되어 항체 헤테로다이머를 형성한다. 이 방법은 항체 호모다이머를 생산하는 데에도 이용될 수 있다. 문헌[Hollingeret al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA.90:6444-6448 (1993)]에 기재된 "다이어바디" 기술은 이특이적 항체 단편을 만드는 대안적 메카니즘을 제공하였다. 단편들은 너무 짧아서 동일한 사슬 상의 두개의 도메인 사이에 쌍을 형성할 수 없는 결합제에 의해 경쇄 가변도메인(VL)에 연결된 중쇄 가변 도메인(VH)을 포함한다.

따라서, 한 단편의 VH 및 VL 도메인은 다른 단편의 상보적 VL 및 VH 도메인과 쌍을 형성하게 되어, 두개의 항원-결합 부위를 형성하다. 단일쇄 Fv(sFv) 다이머를 사용하여 이특이적 항체 단편을 만드는 다른 방법도 보고되어 있다[Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994) 참조]. 2 이상의 가수를 가지는 항체도 고려된다. 예를 들면, 삼특이적 항체도 제조될 수 있다(Tuttet al. J. Immunol.147:60 (1991)].

III. 길항제의 접합체 및 다른 변형

본 명세서의 제조방법에 사용되거나 제조물품에 포함되는 길항제는 선택적으로 세포독성제와 접합된다. 그러한 길항제-세포독성제 접합체의 생성에 유용한 화학요법제는 상기 설명하였다.

길항제와 칼리치아마이신, 마이탄신(미국특허 제5,208,020호), 트리코텐, 및 CC1065와 같은 하나 이상의 소형 분자 독소의 접합체도 본 명세서에서 고려된다. 본 발명의 일실시형태에서, 길항제는 하나 이상의 마이탄신 분자에 접합된다(예를 들면 길항제 분자 당 약 1 내지 약 10 마이탄신 분자). 예를 들면, 마이탄신은 May-SH3로 환원될 수 있는 May-SS-Me로 전환되어 변형된 길항제와 반응하여 마이탄시노이드-길항제 접합체를 생성할 수 있다[Chariet al. Cancer Research52:127-131 (1992)].

선택적으로, 길항제는 하나 이상의 칼리치아마이신 분자에 접합된다. 칼리치아마니신 족의 항생제는 서브-피코몰 농도에서 이중가닥 DNA 단선을 생산할 수 있다. 사용될 수 있는 칼리치아마이신의 구조적 유사체에는 'yJ1, a21, a31, N-아세틸-yl', PSAG 및 011이 포함되지만 이에 한정되는 것은 아니다[Hinmanet al. Cancer Research53:3336-3342 (1993) 및 Lodeet al. Cancer Research58:2925-2928 (1998)].

사용될 수 있는 효소학적으로 활성인 독소 및 그 단편에는 디프테리아 A 사슬, 디프테리아 독소의 비결합 활성단편, 엑소톡신 A 사슬(슈도모나스 아에루기노사 유래), 리신 A 사슬, 아브린 A 사슬, 모데신 A 사슬, 알파-사르신, 41 유리테스포르디(euritesfordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피토라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII, 및 PAP-S), 모모르디카 차란티아 저해제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스 저해제, 젤로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센이 포함된다[예를 들면, 1993년 10월 28일에 공개된 WO 93/21232 참조].

본 발명은 또한 핵분해 활성을 가진 화합물(예를 들면, 데옥시리보뉴클레아제(DNase)와 같은 DNA 엔도뉴클레아제 또는 리보뉴클레아제)과 접합된 길항제도 고려한다. 다양한 방사성 동위원소를 방사성접합된 길항제를 생산하는데 이용할 수 있다. 그 예에는 Ate", 113', 1125, Y90, Re 186, Re 188, Sm153, Bi212, P32 및 Lu의 방사성 동위원소가 포함된다. 길항제와 세포독성제의 접합체는 N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티올)프로피오네이트(SPDP), 숙신이미딜-4-(N-말레이미도메틸) 사이클로헥산-1-카복실레이트, 이미노티올레인(IT), (디메틸 아디피미데이트 HCL과 같은) 이미도에스테르의 이작용성 유도체, (디숙신이미딜 수버레이트와 같은) 활성 에스테르, (글루타르알데하이드와 같은) 알데하이드, (비스(p-아지도벤조일)헥산디아민과 같은) 비스 아지도 화합물, (비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민과 같은) 비스-디아조늄 유도체, (톨리엔 2,6-디이소시아네이트와 같은) 디이소시아네이트) 및 (1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠과 같은) 비스-활성 플루오르 화합물과 같은 다양한 이작용성 단백질 결합제를 사용하여 만들어질 수 있다. 예를 들면, 리신 면역독소는 문헌[Vitettaet al. Science238:1098 (1987)]에 기재된 바와 같이 제조할 수 있다. 탄소-14-표지 1-이소티오시아나토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 길항제에 대한 방사성 뉴클레오티드의 접합을 위한 예시적인 킬레이트화제이다[WO 94/11026 참조]. 결합제는 세포 내에서 세포독성 약물의 배출을 촉진하는 "분해성 결합제"일 수 있다. 예를 들면, 산-불안정 결합제, 펩티다제-민감성 결합제, 디메틸 결합제 또는 디설파이드-함유 결합제[Chariet al. Cancer Research52:127-131 (1992)]가 사용될 수 있다. 선택적으로, 길항제와 세포독성제를 포함하는 융합단백질이 예를 들면 재조합 기술이나 펩티드 합성에 의해 만들어질 수 있다.

또다른 실시형태에서, 길항제는 종양 전표적화에 이용하기 위한 (스트렙타비딘과 같은) "수용체"에 접합될 수 있고, 길항제-수용체 접합체는 환자에게 투여된 후 클리어링제를 사용하여 순환시켜 미결합 접합체를 제거한 후 세포독성제(예를 들면, 방사성 뉴클레오티드)에 접합된 "리간드"(예를 들면, 아비딘)를 투여한다. 본 발명의 길항제는 약물전구체(예를 들면, 펩티딜 화학요법제, WO 81/01145 차조)를 활성 항암 약물로 전환하는 약물전구체-활성화 효소와 접합될 수도 있다(예를 들면, WO 88/07378 및 미국특허 제4,975,278호 참조).

그러한 접합체의 효소 성분은 약물전구체를 보다 활성적, 세포독성 형태로 전환하는 방식으로 약물전구체에 작용할 수 있는 효소를 포함한다. 본 발명의 방법에 유용한 효소에는 포스페이트-함유 약물전구체를 유리약물로 전환하는데 유용한 알칼라인 포스파타제; 약물전구체를 함유하는 설페이트를 유리약물로 전환하는데 유용한 아릴설파타제; 비독성 5-플루오로사이토신을 항암약물인 5-플루오로우라실로 전환하는데 유용한 사이토신 디아미나제; 펩티드-함유 약물전구체를 유리 약물로 전환하는데 유용한, 세라티아 프로테아제, 서모라이신, 서브틸리신, 카복시펩티다제 및 (카텝신 B 및 L과 같은) 카텝신과 같은 프로테아제; D-아미노산 치환체를 함유하는 약물전구체를 전환하는데 유용한 D-알라닐카복시펩티다제; 글리코실화된 약물전구체를 유리약물로 전환하는데 유용한 1i-갈락토시다제와 뉴라미니다제와 같은 탄수화물분해효소; (3-락탐으로 유도된 약물을 유리약물로 전환하는데 유용한 (3-락타마제; 및 각각 페녹시아세틸 또는 페닐아세틸그룹으로 그 아민 질소에서 유도된 약물을 유리약물로 전환하는데 유용한 페니실린 V 아미다제 또는 페니실린 G 아미다제와 같은 페니실린 아미다제가 포함된다. 선택적으로, 당해 기술분야에서 "애브자임(abzyme)"으로도 알려진 효소적 활성을 가진 항체를 본 발명의 약물전구체를 유리 활성약물로 전환하는데 사용할 수 있다[Massey,Nature328:457-458 (1987)]. 길항제-애브자임 접합체는 애브자임을 종양세포 집단으로 전달하기 위하여 본 명세서에서 설명된 바와 같이 제조할 수 있다.

본 발명의 효소는 상기 헤테로이작용성 가교결합제를 사용하는 것과 같은 당해 기술분야에서 공지된 기술에 의해 길항제에 공유결합될 수 있다. 선택적으로, 본 발명의 효소의 적어도 기능적 활성 부분에 결합된 본 발명의 길항제의 적어도 항원결합영역을 포함하는 융합단백질을 당해 기술분야에서 공지된 재조합 DNA 기술을 사용하여 구성할 수 있다[예를 들면, Neubergeret al., Nature,312:604-608 (1984) 참조].

길항제의 다른 변형도 본 명세서에서 고려된다. 예를 들면, 길항제는 예를 들면, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시알킬렌과 같은 다양한 비단백질성 중합체, 또는 폴리에틸렌 글리콜과 폴리프로필렌 글리콜의 코폴리머 중 하나에 결합될 수 있다. 본 명세서에 개시된 길항제는 리포좀으로 조성될 수도 있다. 길항제를 함유하는 리포좀은 문헌[Epsteinet al., Proc. Mad. Acad Sci. USA,82:3688 (1985); Hwanget al., Proc. Natl Acad Sci.USA, 77:4030 (1980); 미국특허 제4,485,045호 및 제4,544,545호; 및 1997년10월 23일에 공개된 WO 97/38731]에 기재된 바와 같은, 당해 기술분야에서 공지된 방법에 의해 제조할 수 있다. 순환시간이 증진된 리포좀은 미국특허 제5,013,556호에 개시되어 있다.

특히 유용한 리포좀은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유래 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용하여 역상 증발법에 의해 생성할 수 있다. 리포좀은 원하는 직경을 가진 리포좀을 생산하기 위하여 정해진 구멍크기의 필터를 통해 압출한다. 본 발명의 항체의 Fab' 단편은 원하는 디설파이드 교환반응을 통해 문헌[Martinet al., J. Biol. Chem.257:286-288 (1982)]에 기재된 바와 같이 리포좀에 접합될 수 있다. 선택적으로 리포좀 내에 화학요법제를 포함시킬 수 있다[Gabizonet al. J. National Cancer Inst. 81(19)1484(1989) 참조]. 본 명세서에 기재된 단백질 또는 펩티드 길항제의 아미노산서열 변형도 고려된다. 예를 들면, 길항제의 결합친화력 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선하는것이 바람직할 수 있다.

길항제의 아미노산서열 변형체는 길항제 핵산 속에 적합한 뉴클레오타이드 변화를 도입하거나, 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 그러한 변형에는 예를 들면, 길항제의 아미노산서열 내 잔기의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환이 포함된다. 최종 구조체가 원하는 특성을 갖는다면, 최종구조체에서 나타나는 결실, 삽입 및 치환의 어떠한 조합도 만들어질 수 있다. 또한 아미노산 변화는 글리코실레이션 부위의 수 또는 위치를 변화시키는 것과 같은 길항제의 번역 후 가공을 변화시킬 수 있다.

돌연변이유발에 바람직한 위치인 길항제의 특정 잔기 또는 영역을 확인하는데 유용한 방법은 문헌[Cunningham and WellsScience, 244:1081-1085(1989)]에 기재된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"이라 불린다. 여기서, 잔기 또는 표적 잔기의 그룹을 확인하고(예를 들면, arg, asp, his, lys 및 glu와 같은 하전된 잔기), 아미노산과 항원의 상호작용에 영향을 미치는 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(가장 바람직하게는 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체한다. 그리고 나서, 치환에 대한 작용적 감수성을 나타내는 이들 아미노산 위치를 치환 부위에서 또는 치환부위에 대해서 추가 또는 다른 변형체를 도입하여 정제한다. 따라서, 아미노산서열 변형을 도입하는 부위는 미리 정해져 있지만, 돌연변이 자체의 특성은 미리 정해질 필요가 없다. 예를 들면, 주어진 부위에서 돌연변위의 수행을 분석하기 위하여, 표적코돈 또는 영역에서 스캐닝 또는 무작위 돌연변이유발을 행하고 발현된 길항제 변형체를 원하는 활성에 대해 스크리닝한다.

아미노산서열 삽입에는 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열 내 삽입뿐 아니라, 하나의 잔기에서 백 이상의 잔기를 포함하는 폴리펩티드까지의 길이를 가진 아미노- 및/또는 카복시-말단 융합이 포함된다. 말단 삽입의 예에는 N-말단 메티오닐 잔기를 가진 길항제 또는 세포독성 폴리펩티드에 융합된 길항제가 포함된다. 길항제 분자의 다른 삽입변형체에는 효소의 길항제의 N- 또는 C-말단, 또는 길항제의 혈청반감기를 증가시키는 폴리펩티드에 대한 융합이 포함된다.

다른 형태의 변형체는 아미노산 치환 변형체이다. 이들 변형체는 다른 잔기로 대체된 길항제 분자 내에 하나 이상의 아미노산 잔기를 가진다. 항체 길항제의 치환 돌연변이유발에 대해 가장 관심있는 부위에는 과가변영역이 포함되지만, FR 변형도 고려된다.

보존성 치환은 "바람직한 치환"이라는 표제 하에 표 1에서 나타낸다. 그러한 치환이 생물학적 활성에서의 변화를 일으킨다면, 그 다음에 표 1에서 "예시적인 치환"으로 명명되거나 아미노산 분류를 참조하여 하기 추가로 설명하는 바와 같은 보다 실질적인 변화가 도입될 수 있고 산물을 스크리닝한다.

원 잔기	예시적 치환	바람직한 치환
Ala(A)	val; leu; ile	val
Arg(R)	lys; gln; asn	lys
Asn(N)	gln; his; asp, lys; arg	gln
Asp(D)	glu; asn	glu
Cys(C)	ser; ala	ser
Gln(Q)	asn; glu	asn
Glu(E)	asp; gln	asp
Gly(G)	ala	ala
His(H)	asn; gln; lys; arg	arg
Ile(I)	leu; val; met, ala; phe; norleucine	ICU
Lea(L)	norleucine; ile; val; met; ala; phe	ile
Lys(K)	arg; gln; asn	arg
Met(M)	leu; phe; ile	leu
Phe(F)	leu; val; ile; ala; tyr	tyr
Pro(P)	ala	ala
Ser(S)	thr	thr
Thr(T)	ser	ser
TIP(W)	tyr; phe	tyr
Tyr(Y)	trp; phe; thr; ser	phe
Val(V)	ile; leu; met; phe; ala; norleucine	ICU

길항제의 생물학적 특성에서 실질적인 변형은 (a) 예를 들면, 시트 또는 나선형 구조와 같은, 치환 영역에서의 폴리펩티드 골격의 구조, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성, 또는 (c) 측쇄의 크기를 유지하는데 대한 그 효과가 상당히 다른 치환을 선택함으로써 달성된다. 천연발생 잔기는 공통 측쇄특성에 근거하여 그룹으로 나누어진다:

(1) 소수성 : norleucine, met, ala, val, leu, ile;

(2) 중성 친수성 : cys, ser, thr;

(3) 산성 : asp, glu;

(4) 염기성 : asn, gln, his, lys, arg;

(5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기 : gly, pro; 및

(6) 방향성 : trp, tyr, phe.

비보존성 치환은 이들 분류 중 하나의 요소를 다른 분류로 교환하는 것을 필요로 할 것이다.

길항제의 적절한 구조를 유지하는데 관련되지 않은 임의의 시스테인 잔기는 분자의 산화안정성을 개선하고 비정상적인 가교결합을 방지하기 위하여, 일반적으로 세린으로, 치환될 수 있다. 반대로, 그 안정성을 개선하기 위하여 길항제에 시스테인 결합이 첨가될 수도 있다(특히 길항제가 Fv 단편과 같은 항체단편인 경우).

특히 바람직한 치환 변형체의 형태에는 어버이 항체의 하나 이상의 과가변영역 잔기를 치환하는 것이 포함된다. 일반적으로, 추가 개발을 위해 선택된 생성된 변형체는 그들이 생성되는 어버이 항체에 비해 생물학적 특성이 개선되었을 것이다. 그러한 치환변형체를 생성하는 편리한 방법은 파지 디스플레이를 사용한 친화 성숙이다. 간단하게 말하면, 각 부위에서 모든 가능한 아미노 치환을 생성하기 위하여 여러 개의 과가변 영역 부위(예를 들면, 6-7부위)가 돌연변이된다. 따라서 생성된 항체 변형체는 각 입자 내에 조립된 M13의 유전자 III 산물에 대한 융합으로서 필라멘트성 파지입자로부터 1가인 형식으로 디스플레이된다. 그 다음에, 파지-디스플레이 변형체를 본 명세서에서 개시된 바와 같이 그 생물학적 활성(예를 들면, 결합 친화력)에 대해 스크리닝한다. 변형을 위한 후보 과가변영역 부위를 확인하기 위하여, 알라닌 스캐닝 돌연변이유발을 행하여 항원결합에 상당히 기여하는 과가변영역 잔기를 확인할 수 있다. 선택적으로, 또는 추가적으로, 항체와 항원 사이의 접촉점을 확인하기 위하여 항원-항체 복합체의 결정구조를 분석하는 것이 유용할 수 있다. 그러한 접촉잔기와 인접하는 잔기는 본 명세서에서 자세히 설명된 기술에 따른 치환을 위한 후보이다. 일단 그러한 변형체가 생성되면, 변형체의 패널을 본 명세서에서 설명한 바와 같이 스크리닝하고 하나 이상의 관련분석법에서 우수한 특성을 가진 항체를 추가개발을 위해 선택할 수 있다.

길항제의 아미노산 변형체의 다른 형태는 길항제의 원 글리코실레이션 패턴을 변형시킨다. 변형시킨다는 것은 길항제에서 발견되는 하나 이상의 탄수화물 잔기를 결실시키거나, 및/또는 길항제에 존재하지 않는 하나 이상의 글리코실레이션 부위를 추가하는 것을 의미한다.

폴리펩티드의 글리코실레이션은 일반적으로 N-결합 또는 O-결합이다. N-결합은 아스파라긴 잔기의 측쇄에 탄수화물 잔기가 부착하는 것을 말한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌(X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산이다)은 아스파라긴 측쇄에 탄수화물 잔기가 효소적으로 부착하기 위한 인식 서열이다. 따라서, 폴리펩티드 내에 이들 트리펩티드 서열 중 어느 것이 존재하면 잠재적인 글리코실레이션 부위를 만든다. O-결합 글리코실레이션은 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시리신도 사용될 수 있지만, 가장 흔하게는 세린 또는 트레오닌인, 하이드록시아미노산에 N-아세틸갈락토사민, 갈락토오즈, 또는 자일로오즈 중 하나가 부착하는 것을 말한다. 길항제에 글리코실레이션 부위를 추가하는 것은 (N-결합 글리코실레이션 부위에 대한) 하나 이상의 상기 트리펩티드 서열을 포함하도록 아미노산 서열을 변형시킴으로써 쉽게 달성된다. 이러한 변형은 (O-결합 글리코실레이션 부위에 대한) 원 길항제의 서열에 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 추가 또는 치환함으로써 이루어질 수도 있다.

길항제의 아미노산 서열 변형체를 암호화하는 핵산 분자는 당해 기술분야에서 공지된 다양한 방법으로 제조된다. 이들 방법에는 (천연발생 아미노산 서열 변형체의 경우) 천연공급원으로부터의 분리 또는 올리고뉴클레오티드-매개(또는 부위 지정) 돌연변이유발, PCR 돌연변이유발, 및 길항제의 이미 제조된 변형체 또는 비변형체 판의 카세트 돌연변이유발이 포함되지만 이에 한정되는 것은 아니다.

길항제의 항원-의존성 세포-매개 세포독성(ADCC) 및/또는 보체 의존성 세포독성(CDC)을 증진시키기 위한 것과 같은 효과기 작용과 관련하여 본 발명의 길항제를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 이것은 항체 길항제의 Fc 영역 내에 하나 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 달성될 수 있다. 선택적으로 또는 추가적으로, 시스테인 잔기를 Fc 영역에 도입할 수 있고, 그것에 의하여 이 영역 내에 사슬간 디설파이드 결합이 형성될 수 있다. 따라서 생성된 호모다이머 항체는 개선된 내재화 능력 및/또는 증가된 보체-매개 세포 사멸 및 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC)을 가질 수 있다[Caronet al., J. Exp Med.176:1191-1195 (1992) 및 Shopes, B.J. Immunol.148:2918-2922 (1992) 참조]. 증진된 항종양 활성을 가진 호모다이머 항체는 문헌[Wolffet al. Cancer Research53:2560-2565 (1993)]에 기재된 바와 같은 헤테로이작용성 가교결합제를 사용하여 제조될 수도 있다. 선택적으로, 항체를 이중 Fc 영역을 가지도록 조작할 수 있고 그것에 의해 보체 용해성 및 ADCC 능력을 증진시킬 수 있다[Stevensonet al. Anti-Cancer Drug Design3:219-230 (1989)].

길항제의 혈청반감기를 증가시키기 위하여, 예를 들면 미국특허 제5,739,277호에 기재된 바와 같이, 길항제 (특히 항체 단편) 속에 구조(salvage) 수용체 결합에피토프를 삽입할 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은, "구조 수용체 결합 에피토프"는 IgG 분자의 생체 내 혈청반감기를 증가시키는 IgG 분자(예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)의 Fc 영역의 에피토프를 말한다.

IV. 약제학적 조성

본 발명에 따라 사용되는 길항제의 치료적 조성은 원하는 정도의 순도를 가지는 길항제 또는 길항제들을 선택적인 약제학으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합함으로써[Remington's Pharmaceutical Sciences16th edition, Osol, A. Ed. (1980)] 동결건조된 조성 또는 수용액의 형태로 저장하도록 제조한다. 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이고, 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산과 같은 완충액; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; (옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤제토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질알콜; 메틸 또는 프로필 파라벤과 같은 알킬 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 사이클로헥사놀; 3-펜타놀; 및 m-크레졸과 같은) 방부제; (약 10잔기 이하의) 저분자량 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린과 같은 단백질; 폴리비닐피롤리돈과 같은 친수성 폴리머; 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신과 같은 아미노산; 단당류, 이당류, 및 글루코즈, 만노즈, 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트화제; 슈크로즈, 만니톨, 트레할로즈 또는 소르비톨과 같은 당; 나트륨과 같은 염형성 카운터이온; 금속 착체(예를 들면, Zn-단백질 착체); 및/또는 TWEENTM, PLURONICSTM 또는폴리에틸렌 글리콜(PEG)과 같은 비이온성 계면활성제를 포함한다.

예시적인 항-CD20 항체 조성은 인용에 의해 명백하게 삽입된 WO 98/56418에 기재되어 있다. 이 공개문헌에는 2-8℃에서 2년의 최소 저장수명을 가지는 pH 5.0의 40mg/㎖ rituximab, 25Mm 아세테이트, 150mM 트레할로즈, 0.9% 벤질알콜, 0.02% 폴리소르베이트 20을 포함하는 액상 다중투여 조성이 기재되어 있다. 관심있는 다른 항-CD20 조성은 pH 6.5로 9.0mg/㎖ 염화나트륨 중의 10mg/㎖ rituximab, 7.35mg/㎖ 나트륨 시트레이트 디하이드레이트, 0.7mg/㎖ 폴리소르베이트 80, 및 주사용 멸균수를 포함한다. 피하투여에 적합한 동결건조된 조성이 WO 97/04801에 기재되어 있다. 그러한 동결건조된 조성은 적합한 희석제를 사용하여 높은 단백질농도로 재구성될 수 있고 재구성된 조성은 본 명세서에서 치료되는 포유동물에 피하 투여될 수 있다.

본 명세서에서의 조성은 치료되는 특정 징후에 필요한, 바람직하게는 서로 악영향을 미치지 않는 상보적 활성을 가지는 하나 이상의 활성화합물 zi.를 포함할 수도 있다. 예를 들면, 세포독성제, 화학요법제, 사이토카인 또는 면역억제제(예를 들면, 사이클로스포린과 같이 T 세포에 작용하는 것 또는 LFA-1과 결합하는 것과 같이 T세포와 결합하는 항체)를 더 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 그러한 다른 약제의 유효량은 조성 내에 존재하는 길항제의 양, 질병 또는 질환 또는 치료의 형태 및 상기 다른 인자에 따라 결정된다. 이들은 일반적으로 동일한 투여량으로 및 지금까지 사용된 바와 같은 투여경로로 또는 지금까지 사용된 투여량의 약 1 내지 99%로 사용된다.

활성성분은 콜로이드성 약물 운반시스템(예를 들면, 리포좀, 알부민, 마이크로스피어, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노캡슐) 중에서 또는 마크로에멀젼 중에서, 각각 하이드록시메틸셀룰로오즈 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리(메틸메타크릴레이트) 마이크로캡슐과 같은 예를 들면, 코아세르베이션 기술 또는 계면중합에 의해 제조된 마이크로캡슐 내에 포획될 수도 있다. 그러한 기술은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.

지속-배출 제제도 제조될 수 있다. 지속-배출 제제의 적합한 예에는 길항제를 함유하는 고형 소수성 폴리머의 반투과성 매트릭스가 포함되며, 이 매트릭스는 막과 같은 구체화된 물품, 또는 마이크로캡슐의 형태이다. 지속-배출 매트릭스의 예에는 폴리에스테르, 하이드로겔(예를 들면, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드(미국특허 제3,773,919호), L-글루탐산과 에틸-L-글루타메이트의 코폴리머, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, LUPRON DEPOTTM(락트산 글리콜산 코폴리머 및 류프롤리드 아세테이트로 구성된 주사용 마이크로스피어)와 같은 분해성 락트산-글리콜산 코폴리머, 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산이 포함된다.

생체 내 투여에 사용되는 조성은 멸균되어야 한다. 멸균여과 막을 통해 여과함으로써 쉽게 멸균할 수 있다.

V. 길항제를 사용한 치료

B 세포 표면항원에 결합하는 길항제를 포함하는 조성물 및 예를 들면 항체와 같은 사이토카인 길항제를 함유하는 조성물(양자는 동일한 조성물일 수 있다)이 조성되고, 투여되고, 우수한 의료관례와 일치하는 방식으로 투여될 것이다. 바람직하게는, 항-사이토카인은 항-IL10 항체를 포함할 것이고 B 세포 길항제는 B 세포 고갈 항체, 바람직하게는 Rituxan과 같은 항-CD20항체를 포함할 것이다. 여기서 고려할 인자에는 치료되는 특정 질병 또는 질환, 치료되는 특정 포유동물, 개별 환자의 임상적 상태, 질병 또는 질환의 원인, 약제의 전달부위, 투여방법, 투여계획, 및 의료관례에 공지된 다른 인자들이 포함된다. 투여되는 길항제의 치료적 유효량은 그러한 고려사항들에 의해 결정될 것이다.

일반적인 주장과 같이, 투여당 비경구 투여되는 길항제의 치료적 유효량은 1일 당 환자 체중 1㎏당 약 0.1 내지 20㎎일 것이며, 사용되는 길항제의 일반적인 초기범위는 약 2 내지 10㎎/㎏일 것이다.

바람직한 길항제는 항체, 예를 들면, 세포독성제에 접합되지 않은 RITUXAN과 같은 항체이다. 미접합 항체에 대한 적합한 투여량은 예를 들면 약 20㎎/㎡ 내지 약 1000㎎/㎡이다. 일실시형태에서, 항체의 투여량은 RITUXAN에 대해 현재 권해지는 것과 다르다. 예를 들면, 투여량이 약 20㎎/㎡ 내지 약 250㎎/㎡의 범위 내, 예를 들면 약 50㎎/㎡ 내지 약 200㎎/㎡인 경우와 같이, 실질적으로 375㎎/㎡ 이하의 항체의 1 이상의 투여량을 환자에게 투여할 수 있다.

또한, 어떤 사람은 항체를 1 이상의 초기 투여량으로 투여한 후 1 이상의 계속된 투여량으로 투여할 수 있고, 이때 계속된 투여량에서 항체의 ㎎/㎡ 투여량은 초기투여량에서 항체의 ㎎/㎡ 투여량을 초과한다. 예를 들면, 초기 투여량이 약 20㎎/㎡ 내지 약 250㎎/㎡의 범위 내(예를 들면 약 50㎎/㎡ 내지 약 200㎎/㎡)이고 계속된 투여량이 약 250㎎/㎡ 내지 약 1000㎎/㎡일 수 있다.

그러나, 상기한 바와 같이, 길항제의 이러한 제안된 양은 상당한 치료적 재량에 따른다. 적합한 투여 및 계획을 선택함에 있어서 중요한 인자는 상기 나타낸 바와 같이, 얻어지는 결과이다.

예를 들면, 진행중인 및 급성 질환을 치료하기 위해서는 초기에 비교적 높은 투여량이 필요할 수 있다. 가장 효능있는 결과를 얻기 위하여, 질병 또는 질환에 따라, 길항제는 제1증상, 진단, 외관, 또는 질병 또는 질환의 가능한 발생 또는 질병 또는 질환의 완화에 가깝게 투여된다.

길항제는 비경구, 피하, 복강 내, 폐 내, 및 비강 내, 및 국부적 면역억제치료를 위해 필요하다면 병변 내 투여를 포함하는 적합한 수단에 의해 투여된다. 비경구주입에는 근육 내, 정맥 내, 동맥 내, 복강 내 또는 피하투여가 포함된다.

또한, 길항제는 예를 들면 감퇴하는 투여량의 길항제의 사용하여 펄스 주입에 의해 투여되는 것이 바람직할 수 있다. 바람직하게는 투약은 투여가 단기간인지 만성인지 여부에 일부 의존하여, 주입, 가장 바람직하게는 정맥 내 또는 피하주입에 의해 이루어진다.

세포독성제, 화학요법제, 면역억제제 및/또는 사이토카인과 같은 다른 화합물을 본 명세서의 길항제와 함께 투여할 수 있다. 조합투여에는 독립된 조성 또는단일 약제학적 조성을 사용한 공동투여, 및 양(또는 모든) 활성제가 동시에 그들의 생물학적 활성을 발휘하는 시간이 있는 것이 바람직한 임의 순서의 연속 투여가 포함된다.

환자에게 단백질 길항제를 투여하는 것 외에도, 본 출원은 유전자치료에 의해 길항제를 투여하는 것도 고려한다. 길항제를 암호화하는 핵산의 그러한 투여는 "치료적 유효량의 길항제를 투여한다"는 표현에 포함된다. 세포 내 항체를 생성하기 위한 유전자 치료의 사용과 관련해서는 예를 들면, 1996년 3월 14일에 공개된 WO 96/07321을 참조한다.

환자의 세포 속으로 핵산을 넣기 위한 두가지 주된 접근방법이 있다; 생체 내 및 생체 외. 생체 내 전달을 위하여, 핵산은 일반적으로 길항제가 필요한 부위에서, 직접 환자에게 주입된다. 생체 외 치료를 위해서는, 환자의 세포를 제거하고, 핵산을 이들 분리된 세포 속으로 도입하고 변형된 세포를 직접 또는 예를 들면 환자에게 이식되는 다공성 막 내에 캡슐화되어 환자에게 투여된다[미국특허 제4,892,538호 및 제5,283,187호 참조]. 핵산을 생육가능 세포에 도입하는데 이용할 수 있는 기술은 다양하다. 기술은 핵산이 의도된 숙주의 세포 속으로 시험관 내 또는 생체 내에서 배양된 세포 속으로 전이되는지 여부에 따라 다양하다. 핵산을 시험관 내에서 포유동물 세포 속으로 전이하는데 적합한 기술에는 리포좀, 일렉트로포레이션, 미세주입, 세포융합, DEAE-덱스트란, 칼슘 포스페이트 침전법 등의 사용이 포함된다. 유전자의 생체 외 전달을 위해 흔히 사용되는 벡터는 레트로바이러스이다.

현재 바람직한 생체 내 핵산 전이기술에는 바이러스 벡터(아데노바이러스, 단순포진 I 바이러스 또는 아데노관련 바이러스) 및 지질계 시스템(지질매개 유전자 전이에 유용한 지질은 DOTMA, DOPE 및 DC-Chol이다)을 사용한 트랜스펙션이 포함된다. 일부 상황에서, 핵산에 세포표면 막단백질 또는 표적세포에 특이적인 항체 또는 표적세포 상 수용체에 대한 리간드 등과 같은 표적세포를 표적화하는 약제를 제공하는 것이 바람직하다. 리포좀이 사용되는 경우, 엔도사이토시스와 관련된 세포표면 막단백질에 결합하는 단백질은 예를 들면 특정 세포형태를 자극하는 캡시드 단백질 또는 그 단편, 순환과정에서 내재화되는 단백질에 대한 항체, 및 세포 내 편재를 표적화하고 세포 내 반감기를 증진시키는 단백질의 표적화 및/또는 흡수를 촉진하는데 사용될 수 있다. 수용체-매개 엔도사이토시스의 기술은 문헌[Wuet al. J. Biol. Chem.262:4429-4432 (1987); 및 Wagneret al., Proc. Nad. Acad. Sci.USA 87:3410-3414 (1990)]에 기재되어 있다. 현재 공지된 유전자 표시 및 유전자 치료 프로토콜을 검토하기 위해서는 문헌[Andersonet al., Science256:808-813(1992)]을 참조한다. 또한 WO 93/25673 및 본 명세서에 인용된 참조문헌들도 참조한다.

VI. 제조물품

본 발명의 다른 실시형태에서, 상기 질병 또는 질환의 치료에 유용한 물질을 포함하는 제조물품이 제공된다. 제조물품은 용기 및 라벨 또는 용기와 관련되거나 용기 상의 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기에는 예를 들면 병, 바이알, 주사기 등이 포함된다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 물질로 형성될 수있다. 용기는 선택된 질병 또는 질환의 치료에 효과적인 조성물을 유지 또는 포함하고 멸균 진입 포트를 가질 수 있다(예를 들면, 용기는 정맥 용액 백 또는 피하 주사바늘에 의해 구멍을 뚫을 수 있는 마개를 가진 바이알일 수 있다). 조성물 내의 하나 이상의 활성제는 B 세포 표면표지에 결합하는 길항제이다. 바람직하게는 CD20 및 항-IL10 항체와 같은 항-사이토카인 항체이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 조성물이 본 명세서에서 나열된 것과 같은 자가면역 질환에 걸리거나 걸리기 쉬운 환자를 치료하는데 사용되는 것을 나타낸다. 제조물품은 주사용 세균발육저지수(BWFI), 포스페이트-완충 염수, 링거용액 및 덱스트로즈 용액과 같은 약제학적으로 허용가능한 희석완충액을 포함하는 제2용기를 더 포함할 수 있다. 다른 완충액, 희석액, 필터, 바늘 및 주사기를 포함하여, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 더 포함할 수 있다.

본 발명의 보다 상세한 내용은 하기 비제한적 실시예에 의해 설명한다. 본 명세서 내의 모든 인용문헌의 개시내용은 명백히 인용에 의해 삽입된다.

(실시예 1)

비호지킨 림프종의 치료

비호지킨 림프종 환자에게 4주 동안 50㎎/㎡ IV의 투여량으로 항-IL10 항체를 정맥 내 투여한다. 그 다음에, 환자에게 하기 투여 계획에 따라 RITUXAN을 정맥 내 투여한다:

(A) 1일에 50㎎/㎡ IV

8, 15 & 22일에 150㎎/㎡ IV

(B) 1일에 150㎎/㎡ IV

8, 15 & 22일에 375㎎/㎡ IV

(C) 1, 8, 15 & 22일에 375㎎/㎡ IV

이 동일한 환자에 미국특허 제5,736,137호에 기재된 방법에 따라 CHOP 화학치료를 한다.

치료 후, 환자를 림프종 상태, 즉 종양의 수 및 크기에 대한 효과를 평가하기 위하여 조사한다.

(실시예 2)

진행된 단계에서 고형 종양의 치료

B 세포 관련으로 특징지워지는 진행된 결장직장암 환자를 실시예 1에서와 동일한 투여량의 항-IL10 항체 및 RITUXAN으로 동시에 치료한다.

치료 후 환자를 평가하여 그러한 치료가 종양 수축, 더 낮은 종양항원 발현 또는 다른 질환 예후평가수단에 근거하여, 항종양반응을 일으키는지 확인한다.

Claims

하나 이상의 화학요법제를 투여하기 전, 동시 또는 후에 혈액 악성종양 또는 고형, 비혈액 종양으로 진단된 환자에게 항-사이토카인 항체 또는 그 단편 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 하나 이상의 화학요법제에 대한 혈액 악성종양 세포 또는 고형 비혈액 종양 세포의 내성을 피하거나, 감소시키거나 극복하는 방법.
제1항에 있어서,

상기 혈액세포가 B 세포 림프종 또는 백혈병세포를 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제2항에 있어서,

상기 B 세포 림프종이 저급/소포성 비호지킨 림프종(NHL), 소형 림프구성(SL) NHL, 중급/소포성 NHL, 중급/확산 NHL, 고급 면역아세포성 NHL, 고급 림프아세포성 NHL, 고급 소형 비분해 세포 NHL, 거대 질환 NHL 및 월덴스트롬 마크로글로불린혈증으로 구성된 그룹에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
제3항에 있어서,

상기 B 세포 림프종이 저급/소포성 비호지킨 림프종(NHL)인 것을 특징으로하는 방법.
제2항에 있어서,

상기 백혈병세포가 급성 림프아세포성 백혈병, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 림프아세포성 백혈병, 림프구성 백혈병, 단핵구성 백혈병, 골수성 백혈병 및 전골수성 백혈병으로 구성된 그룹에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서,

상기 하나 이상의 화학요법제가 CHOP, ICE, 미토잔트론, 사이타라빈, DVP, ATRA, 이다루비신, 호울저 화학치료법, La La 화학치료법, ABVD, CEOP, 2-CdA, 이어서 G-CSF 치료를 하거나 하지 않는 FLAG & IDA, VAD, M & P, C-위클리, ABCM, MOPP, DHAP, 다우노루비신, 독소루비신, 타목시펜, 토레미펜, 메토트렉세이트 및 시스플라틴으로 구성된 그룹에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서,

상기 사이토카인이 IL2, IL6, IL10 및 TNF-α로 구성된 그룹에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
제7항에 있어서,

상기 사이토카인이 IL10인 것을 특징으로 하는 방법.
제8항에 있어서,

상기 항-IL10 항체가 인간화된 또는 인간 모노클로날 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
제9항에 있어서,

상기 항-IL10 항체가 체중 1㎏ 당 0.01 내지 1000㎎의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제10항에 있어서,

상기 항체의 투여량이 체중 1㎏ 당 0.1 내지 50㎎인 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서,

상기 항-사이토카인 항체가 상기 화학요법제와 동시에 및/또는 전에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제12항에 있어서,

상기 항-사이토카인 항체가 상기 화학요법제와 동시에 또는 약 1시간 내지30일 전에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항에 있어서,

상기 항-사이토카인 항체 또는 그 단편 또는 길항제를 투여하기 전에 상기 림프종환자의 혈청을 사이토카인 프로파일에 대해 테스트하는 것을 특징으로 하는 방법.
제1항의 방법에 따른 항체 또는 길항제를 투여하기 위한 키트.
제14항의 방법에 따른 사이토카인 프로파일을 테스트하기 위한 키트.
제16항의 방법에 따른 항체 또는 길항제를 투여하고 사이토카인 프로파일을 테스트하기 위한 키트.
혈액 악성종양으로 진단된 환자에게 항-사이토카인 항체 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 치료제에 대한 혈액 악성종양 세포의 내성을 피하거나, 감소시키거나 극복하는 방법.
혈액 악성종양으로 진단된 환자에게 항-사이토카인 항체 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 치료제에 의해 유도된 세포자멸사에 대한 혈액악성종양 세포의 내성을 피하거나, 감소시키거나 극복하는 방법.
제18항에 있어서,

상기 악성종양이 B 세포 림프종 또는 백혈병인 것을 특징으로 하는 방법.
제19항에 있어서,

상기 악성종양이 B 세포 림프종 또는 백혈병인 것을 특징으로 하는 방법.
환자에게 항-사이토카인 항체 또는 그 단편 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 화학요법 후 재발된 혈액 악성종양 환자를 치료하는 방법.
환자에게 항-사이토카인 항체 또는 그 단편 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 화학요법 후 난치성이 된 혈액 악성종양 환자를 치료하는 방법.
제21항에 있어서,

상기 악성종양이 B 세포 림프종 또는 백혈병인 것을 특징으로 하는 방법.
환자에게 항-사이토카인 항체 또는 단편 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 치료용 항체 또는 단편으로 치료한 후 재발된 혈액 악성종양 환자를 치료하는 방법.
제23항에 있어서,

상기 치료용 항체가 항-CD20, 항-CD19, 항-CD22, 항-CD37, 항-CD40, 또는 항-CD28 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
환자에게 항-사이토카인 항체 또는 단편 또는 사이토카인 길항제를 투여하는 단계를 포함하는, 치료용 항체로 치료한 후 난치성이 된 혈액 악성종양 환자를 치료하는 방법.
제25항에 있어서,

상기 악성종양이 B 세포 림프종 또는 백혈병인 것을 특징으로 하는 방법.
환자에게 치료적 유효량의 B 세포 고갈항체를 항-사이토카인 항체 또는 단편과 동시에 또는 어떤 순서로 연속적으로 투여하는 단계를 포함하는, B 세포 림프종 환자를 치료하는 방법.
제29항에 있어서,

상기 B 세포 고갈항체가 CD19, CD20, CD22, CD23, CD27, CD37, CD53, CD72, CD73, CD74, CDω78, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85 및 CD86으로 구성된 그룹에서 선택된 B 세포 항원에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제21항에 있어서,

상기 B 세포 고갈항체가 CD20에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제29항에 있어서,

상기 B 세포 고갈항체가 CD22에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제29항에 있어서,

상기 방법이 하나 이상의 화학요법제를 투여하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제33항에 있어서,

상기 하나 이상의 화학요법제가 CHOP, ICE, 미토잔트론, 사이타라빈, DVP, ATRA, 이다루비신, 호울저 화학치료법, La La 화학치료법, ABVD, CEOP, 2-CdA, 이어서 G-CSF 치료를 하거나 하지 않는 FLAG & IDA, VAD, M & P, C-위클리, ABCM, MOPP, DHAP, 다우노루비신, 독소루비신, 메토트렉세이트 및 시스플라틴으로 구성된 그룹에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
제33항에 있어서,

상기 항-사이토카인 항체 또는 길항제가 상기 항-CD20 항체 및 상기 하나 이상의 화학요법제 전에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제29항에 있어서,

상기 항-사이토카인 항체 또는 길항제가 상기 항-CD20 항체 전에 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제29항에 있어서,

상기 사이토카인이 IL2, IL6, IL10 및 TNF-α로 구성된 그룹에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
제37항에 있어서,

상기 사이토카인이 IL10인 것을 특징으로 하는 방법.
제29항에 있어서,

상기 항-CD20 항체가 키메라, 인간화된 또는 인간 항-CD20 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
제39항에 있어서,

상기 항-CD20 항체가 키메라 항-CD20 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
제40항에 있어서,

상기 키메라 항-CD20 항체가 Rituximab인 것을 특징으로 하는 방법.
제41항에 있어서,

상기 Rituximab이 체중 1㎏ 당 0.4 내지 20㎎의 투여량으로 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제33항에 있어서,

상기 하나 이상의 화학요법제가 CHOP 화학치료법의 일부인 것을 특징으로 하는 방법.
제29항에 있어서,

상기 B 세포 림프종이 저급/소포성 비호지킨 림프종(NHL), 소형 림프구성(SL) NHL, 중급/소포성 NHL, 중급/확산 NHL, 고급 면역아세포성 NHL, 고급 림프아세포성 NHL, 고급 소형 비분해 세포 NHL, 거대 질환 NHL 및 월덴스트롬 마크로글로불린혈증으로 구성된 그룹에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
제44항에 있어서,

상기 B 세포 림프종이 비호지킨 림프종(NHL)인 것을 특징으로 하는 방법.
제45항에 있어서,

상기 B 세포 림프종이 저급, 소포성 NHL인 것을 특징으로 하는 방법.
제29항에 있어서,

상기 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 투여하기 전에 상기 림프종환자의 혈청을 사이토카인 프로파일에 대해 테스트하는 것을 특징으로 하는 방법.
제29항의 방법에 따른 항-CD20 항체 및 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 투여하기 위한 키트.
사이토카인 프로파일을 테스트하고 제42항의 방법에 따른 항-CD20 항체 및 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 투여하기 위한 키트.
치료적 유효량의 사이토카인에 특이적인 항체와 B 세포에 의해 발현되는 항원에 결합하는 B 세포 고갈 항체를 그러한 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 B 세포가 관련된 종양을 치료하는 방법.
제50항의 방법에 따른 항-CD20 항체 및 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 투여하기 위한 키트.
제50항에 있어서,

상기 항-사이토카인 항체가 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 콜로니자극인자로 구성된 그룹에서 선택된 사이토카인에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제51항에 있어서,

상기 항-사이토카인 항체가 인터페론, 인터루킨, 종양괴사인자 및 콜로니자극인자로 구성된 그룹에서 선택된 사이토카인에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제50항에 있어서,

상기 항-사이토카인 항체가 IL-10에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제51항에 있어서,

상기 항-사이토카인 항체가 IL-10에 특이적으로 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
제50항에 있어서,

상기 B 세포 항원이 CD19, CD20, CD22, CD23, CD27, CD37, CD53, CD72, CD73, CD74, CDω78, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85 및 CD86으로 구성된 그룹에서 선택된 것임을 특징으로 하는 방법.
제51항의 방법에 따른 항-CD20 항체 및 항-사이토카인 항체 또는 길항제를 투여하기 위한 키트.
제56항에 있어서,

상기 B 세포 항원이 CD20인 것을 특징으로 하는 방법.
제58항에 있어서,

상기 항-CD20 항체가 인간, 인간화된 또는 키메라 항-CD20 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
제59항에 있어서,

상기 항체가 ADCC 및/또는 CDC활성을 가지는 것을 특징으로 하는 방법.
제59항에 있어서,

상기 항-CD20 항체가 B 세포의 세포자멸사를 유도하는 것을 특징으로 하는 방법.
제59항에 있어서,

상기 항-CD20 항체가 ATCC 69119에 의해 생산된 키메라 항-CD20 항체인 Rituxan인 것을 특징으로 하는 방법.
제51항에 있어서,

상기 환자가 간암, 두경부암, 유방암, 전립선암, 고환암, 난소암, 폐암, 식도암, 기관암, 신장암, 방광암, 결장직장암으로 구성된 그룹에서 선택된 암과 관련된 고형 비림프성 종양을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제50항에 있어서,

상기 B 세포 림프종이 저급/소포성 비호지킨 림프종(NHL), 소형 림프구성(SL) NHL, 중급/소포성 NHL, 중급/확산 NHL, 고급 면역아세포성 NHL, 고급 림프아세포성 NHL, 고급 소형 비분해 세포 NHL, 거대 질환 NHL 및 월덴스트롬 마크로글로불린혈증으로 구성된 그룹에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 방법.
제50항에 있어서,

상기 항체가 정맥 내, 근육 내, 종양 내 또는 복강 내 투여에 의해 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제51항에 있어서,

상기 항체가 정맥 내, 근육 내, 종양 내 또는 복강 내 투여에 의해 투여되는 것을 특징으로 하는 방법.
제51항에 있어서,

상기 고형 종양이 전암, 초기단계(단계 I 또는 II 고형암), 진행된 암(단계 II 암 이후) 또는 전이된 암을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
제51항에 있어서,

상기 환자가 결장직장암 또는 폐암환자인 것을 특징으로 하는 방법.
치료적 유효량의 IL-10에 특이적인 항체 및 고갈 항-CD20 항체를 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하는 단계를 포함하는 B 세포가 관련된 결장직장암 또는 폐암을 치료하는 방법.
제69항에 있어서,

상기 고갈 항-CD20 항체가 인간, 인간화된 또는 키메라 항체인 것을 특징으로 하는 방법.
제70항에 있어서,

상기 항체가 ATCC 69119에 의해 생산된 키메라 항-CD20 항체인 Rituxan인 것을 특징으로 하는 방법.
항-IL10 항체를 투여하는 단계를 포함하는 치료를 필요로 하는 B 세포 림프종 환자를 치료하는 방법.
하나 이상의 항-IL10 항체를 투여하는 단계를 포함하는 치료를 필요로 하는 비호지킨 림프종 환자를 치료하는 방법.
항-IL10 항체 및 하나 이상의 B 세포 고갈 항체를 투여하는 단계를 포함하는 치료를 필요로 하는 B 세포 림프종 환자를 치료하는 방법.
제63항에 있어서,

상기 B 세포 고갈 항체가 CD19, CD20, CD22, CD23, CD27, CD37, CD53, CD72, CD73, CD74, CDω78, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85 및 CD86으로 구성된 그룹에서 선택된 B 세포 항원에 결합하는 것을 특징으로 하는 방법.
항-IL10 항체 및 B 세포 고갈 항-CD20 항체 또는 항-CD20 항체를 투여하는 단계를 포함하는 치료를 필요로 하는 B 세포 림프종 환자를 치료하는 방법.
항-IL10 항체 및 B 세포 고갈 항-CD20 항체를 투여하는 단계를 포함하는 치료를 필요로 하는 B 세포 림프종 환자를 치료하는 방법.
항-IL10 항체 및 B 세포 고갈 항체를 투여하는 단계를 포함하는 치료를 필요로 하는 비호지킨 림프종 환자를 치료하는 방법.
항-IL10 항체 및 B 세포 고갈 항-CD20 항체를 투여하는 단계를 포함하는 치료를 필요로 하는 비호지킨 림프종 환자를 치료하는 방법.
항-IL10 항체 및 B 세포 고갈 항-CD22 항체를 투여하는 단계를 포함하는 치료를 필요로 하는 비호지킨 림프종 환자를 치료하는 방법.
제77항에 있어서,

상기 항체가 Rituxan인 것을 특징으로 하는 방법.
제79항에 있어서,

상기 항체가 Rituxan인 것을 특징으로 하는 방법.
치료적 유효량의 항-IL10 항체, B 세포 고갈 항-CD20 항체 및 화학요법을 투여하는 단계를 포함하는 B 세포 림프종 환자를 치료하기 위한 조합치료법.
제83항에 있어서,

상기 항 CD20 항체가 Rituxan인 것을 특징으로 하는 방법.
제83항에 있어서,

상기 환자가 B 세포 고갈항체로 이미 치료한 후 재발된 것을 특징으로 하는 방법.
제85항에 있어서,

상기 항체가 Rituxan인 것을 특징으로 하는 방법.