KR20000027306A - 비형 간염치료용 약제 조성물 - Google Patents

비형 간염치료용 약제 조성물 Download PDF

Info

Publication number
KR20000027306A
KR20000027306A KR1019980045212A KR19980045212A KR20000027306A KR 20000027306 A KR20000027306 A KR 20000027306A KR 1019980045212 A KR1019980045212 A KR 1019980045212A KR 19980045212 A KR19980045212 A KR 19980045212A KR 20000027306 A KR20000027306 A KR 20000027306A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
formula
salvia
following formula
tanshinol
extract
Prior art date
Application number
KR1019980045212A
Other languages
English (en)
Inventor
윤성준
임문정
성희진
신동혁
장환봉
김종우
박상진
Original Assignee
황규언
동화약품공업 주식회사
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 황규언, 동화약품공업 주식회사 filed Critical 황규언
Priority to KR1019980045212A priority Critical patent/KR20000027306A/ko
Publication of KR20000027306A publication Critical patent/KR20000027306A/ko

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/34—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide
    • A61K31/343—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having five-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom, e.g. isosorbide condensed with a carbocyclic ring, e.g. coumaran, bufuralol, befunolol, clobenfurol, amiodarone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/53—Lamiaceae or Labiatae (Mint family), e.g. thyme, rosemary or lavender
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30—Extraction of the material
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
    • A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

본 발명은 B형 간염 치료용 약제 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 다음 화학식 1, 2, 3으로 표시되는 탄시놀B, 탄시논ⅡB, 프르체바퀴논A, 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge)추출물 또는 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge) 분획물이 유효성분으로 함유되어 있어 B형 간염 치료에 유용한 약제 조성물에 관한 것이다.

Description

비형 간염 치료용 약제 조성물
본 발명은 B형간염치료용 약제 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 다음 화학식 1로 표시되는 탄시놀B, 다음 화학식 2로 표시되는 탄시논2B, 다음 화학식 3으로 표시되는 프르체바퀴논A, 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge, Labiatae)추출물 또는 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge, Labiatae) 분획물이 유효성분으로 함유되어 있어 B형 간염 치료에 유용한 약제 조성물에 관한 것이다.
화학식 1
화학식 2
화학식 3
B형 간염 바이러스(Hepatitis B Virus, 이하 "HBV"라함)는 전 세계적으로 약 3억 정도의 인구가 감염되어 있는 간염의 주된 병원체로서 사람에 침입하여 급성 또는 만성 간염을 일으킬 뿐만 아니라 간경화 또는 간암으로의 이행에도 관여하는 것으로 잘 알려져 있다. 이러한 HBV에 대해서는 간질환과의 관련성 및 바이러스의 분자 생물학적 특징등으로 인하여 많은 연구가 진행되었다.
그러나 지금까지 B형 간염에 대한 예방 백신만 개발되었을 뿐 뚜렷한 치료제는 아직 개발된 것이 없는 실정이다. 한동안은 주로 AIDS(Acquired Immune Deficiency Syndrome)치료제로 개발되어 오던 핵산계(Nucleosides)화합물들의 일부가 HBV억제제로 유효하다고 보고된 바 있었으나(J. Org. Chem., 1992, Vol 57, 2217)이러한 핵산계 화합물들은 고가의 치료비 부담과 핵산계 화합물의 본질적인 부작용 및 독성문제 때문에 바람직한 B형 간염 치료제로 개발하는 데 한계가 있는 것으로 보고 되고 있다.
따라서 독성 및 부작용이 적으면서 새로운 작용 및 골격구조를 갖는 B형 간염치료제의 신물질 개발이 절실히 요구되고 있다. 또한 이러한 신물질은 민간요법으로 옛부터 적용되어 온 천연물에서 발견될 가능성과 확률이 매우 높기 때문에 천연물, 특히 생약으로부터 신약을 창출하려는 연구가 활발히 진행되고 있다.
본 발명자들은 B형 간염 바이러스 중합효소의 역전사 효소(HBV-RT)활성에 대한 저해를 이용한 분석시스템(assay-system)으로 200여종의 생약을 스크리닝 하였고 이 중 단삼이 높은 저해효과가 있는 것을 알 수 있었다.
단삼은 중국산의 다년초로서 약용자원으로 재배하고 있으며, 뿌리는 적색이고 혈액순환, 허혈, 항균, 소염 및 항암작용 등이 있는 것으로 알려져 있다(중약대사전). 단삼의 주성분은 테르페노이드(terpenoid)계 화합물이며, 이들 성분이 항암 및 항균 등 다양한 생리활성 및 약리작용을 하고 있음이 알려져 있다.
그러나 단삼에 다량 함유된 테르페노이드계 화합물의 B형 간염 바이러스에 대한 생리활성은 현재까지 밝혀진 바가 없다.
이에 본 발명의 발명자들은 단삼의 테르페노이드계 화합물의 생리활성 연구를 수행하던 중, 단삼의 메탄올 추출물 및 메틸렌클로라이드 추출물과 각 추출물에 대한 메틸렌클로라이드 분획물이 B형 간염 바이러스 중합효소의 역전사효소(HBV-RT) 활성에 대한 저해 활성이 강력함을 발견하였고, 또한 일련의 용매추출법과 칼럼크로마토그래피를 이용하여 활성추적분획법(bioassay-directed fractionation)으로 활성을 가진 물질을 추적한 결과 B형 간염 바이러스 중합효소의 역전사효소 활성에 저해활성이 강력한 테르페노이드계 화합물인 상기 화학식 1, 2 및 3으로 각각 표시되는 탄시놀B, 탄시논ⅡB 및 프르체바퀴논A를 단리하게 되었다.
상기 화학식 1, 2 및 3으로 각각 표시되는 탄시놀B(Tanshinol B), 탄시논ⅡB(Tanshinone ⅡB) 및 프르체바퀴논A(Przewaquinone A)는 테르페노이드(terpenoid)계열의 화합물로서 공지된 물질(참고문헌은 실시예난에 기재하였음)이나, 이들의 B형 간염바이러스 중합효소 활성에 대한 저해활성이 있음은 아직 밝혀지지 않았다.
본 발명의 목적은 B형 간염바이러스 중합효소 활성에 대한 저해활성을 갖는 상기 화학식 1, 2, 3으로 표시되는 탄시놀B, 탄시논ⅡB, 프르체바퀴논 A, 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge) 추출물 또는 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge) 분획물이 유효성분으로 함유되어 있어 B형 간염 치료제로서 유용한 약제 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 다음 화학식 1, 2, 3으로 각각 표시되는 탄시놀B, 탄시논ⅡB, 프르체바퀴논A 또는 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge) 추출물 또는 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge) 분획물이 유효성분으로 함유되어 있는 약제조성물을 그 특징으로 한다.
또한, 본 발명은 단삼을 용매추출하고 농축한 다음, 용매분획하고 칼럼크로마토그래피를 수행하여 상기 화학식 1, 2, 3으로 표시되는 탄시놀B, 탄시논ⅡB, 프르체바퀴논A를 분리 회수하는 방법을 또다른 특징으로 한다.
이와 같은 본 발명을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.
세절한 단삼에 물, 유기용매 또는 이들의 혼합용매를 추출용매로 사용하여 단삼추출물을 얻는다. 이때 바람직하기는 물 또는 메탄올을 사용한다.
또한 상기 메탄올 추출물을 헥산과 메틸렌클로라이드로 분획하여 단삼 분획물을 얻는다. 이때 분획용매로는 다양한 유기용매가 사용될 수 있으나,헥산으로 분획한 후 메틸렌클로라이드로 분획하였을 때의 분획율이 가장 우수하였다.
또한, 상기 단삼 추출물을 농축하여 얻은 농축액을 용매분획한 다음 칼럼크로마토그래피를 수행하고 재결정하여 상기 화학식 1, 2, 3으로 표시되는 탄시놀B, 탄시논ⅡB, 프르체바퀴논A를 얻는다. 즉, 농축액을 헥산, 메틸렌클로라이드, 아세트산에칠, 부탄올 및 물로 용매분획한 다음, 추출물 및 분획물의 B형 간염 바이러스 중합효소의 역전사효소(HBV-RT)활성에 대한 저해효과를 분석하고, 활성이 있는 분획을 실리카겔, 세파덱스 및/또는 RP-18등을 이용하여 칼럼크로마토그래피로 정제하며, 이를 다시 분취용 고성능 액체크로마토그래피(prep HPLC)로 분리, 정제하면 고순도의 탄시놀B, 탄시논ⅡB, 프르체바퀴논A를 얻을 수 있다.
상기와 같은 방법으로 얻은 탄시놀B, 탄시논ⅡB, 프르체바퀴논A, 단삼 추출물 또는 단삼 분획물은 각각 또는 서로 혼합한 상태로 통상의 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께 배합하여 정제, 캡슐제, 트로키제, 액제 등의 경구투여용 제제; 주사용 액제 또는 주사시에 주사용 증류수로 제조하여 사용할 수 있는, 즉시 사용형 주사용 건조 분말등의 주사용 제제; 에어로졸제, 액제 등의 국소투여용 제제 등의 약제학적 분야에서 통상적인 제제로 제제화할 수 있다.
본 발명에서 사용될 수 있는 담체로는 약제학적 분야에서 통상적으로 사용하는 담체, 예를 들어 경구투여용 제제의 경우에는 결합제, 활택제, 붕해제, 부형제, 가용화제, 분산제, 안정화제, 현탁화제, 색소 및 향료 등이 있으며; 주사제의 경우에는 보존제, 무통화제, 가용화제 및 안정화제 등이 있고; 국소투여용 제제의 경우에는 기제, 부형제, 윤활제 및 보존제 등이 있다. 또한, 경구투여시에는 약제가 위산에 의해 분해되는 것을 방지하기 위하여 제산제를 병용하거나, 정제 등의 경구투여용 고형제제를 장용피로 피복시킨 제제로 제형화하여 투여할 수도 있다.
이렇게 제조된 약제학적 제제는 경구 투여하거나, 정맥내, 피하, 비강내 또는 복강내 등에 비경구 투여할 수 있다.
본 발명에 따른 유효성분의 인체 투여량은 체내에서 활성성분의 흡수도, 불활성화율 및 배설속도, 환자의 연령, 성별 및 상태, 치료할 질병의 중증정도 등에 따라 적절히 선택되나, 일반적으로 성인에게 1일에 15∼1500㎎ 정도를 투여하되 추출물 또는 분획물의 경우에는 300∼1000㎎, 화학식 1, 2 또는 3으로 표시되는 화합물인 경우에는 20∼300㎎ 정도를 투여하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 단삼 추출물을 단위투여형 약제로 제조할 때 각각의 단위투여형 제제는 전술한 유효용량 범위를 고려하여 본 발명의 활성물질을 5∼500㎎의 함량이 되도록 제조한다. 바람직하게는 추출물 또는 분획물의 경우 75∼350㎎, 화학식 1, 2, 또는 3으로 표시되는 화합물인 경우 20 ∼200㎎을 함유하도록 제형화하는 것이 좋다. 이렇게 제형화된 단위투여형 제제는 필요에 따라 약제의 투여를 감시하거나 관찰하는 전문가의 판단과 개인의 요구에 따라 전문화된 투약법을 사용하거나 일정한 시간 간격으로 수회 투여할 수 있으며, 바람직하게는 하루에 1회 내지 3회 투여할 수 있다.
또한, 본 발명에서는 화학식 1, 2, 3으로 표시되는 탄시놀B, 탄시논ⅡB, 프르체바퀴논A와 단삼 추출물 및 단삼 분획물 각각의 B형 간염 치료활성을 조사하기 위하여, 대장균에서 B형 간염 바이러스의 재조합 중합효소 단백질을 발현시켜 분리하고, 이 단백질을 이용하여 in vitro에서 B형 간염바이러스 중합효소의 역전사효소 활성을 측정(대한민국 특허출원 제 94-3918호 및 제96-33998호)하는 방법을 검색에 사용하였다. 이 측정법의 기본 원리는 효소면역학적 방법(ELISA)과 동일하며, 비오틴(biotin)-, DIG-로 수식된 뉴클레오티드를 기질에 포함시켜 반응시킨 다음, 중합된 기질을 과산화효소가 붙어있는 항-DIG항체로 인식하는 방법을 이용하였으며, 대조군과는 저해율이 높고 낮음으로 구별될 수 있다.
상기 방법으로 화학식 1, 2, 3으로 표시되는 탄시놀B, 탄시논ⅡB, 프르체바퀴논A와 단삼 추출물 및 단삼 분획물 각각의 HBV-RT활성에 대한 저해활성을 측정한 결과, 특히 화학식 2로 표시되는 탄시논ⅡB의 활성이 가장 우수함을 알수있었다.
이와같은 본 발명을 다음의 실시예에 의하여 구체적으로 설명하고자 하나, 본 발명이 이에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1 : 단삼으로부터 활성물질의 분리정제
식물 분류학적으로 검정된 꿀풀과(Labiatae)의 단삼을 상업적으로 입수하였다. 잘게 썰어 말린 단삼 3kg을 냉각기가 달린 추출기를 사용하여 메탄올을 추출용매로 하여 5회 추출하였다. 메탄올 추출액을 온시에 여과한 후 여액을 40℃이하에서 감압 농축하여 거의 완전 농축시켰다. 이 농축액을 물에 현탁시킨 다음 현탁액을 헥산, 메틸렌클로라이드, 아세트산에칠 및 부탄올을 이용하여 순차적으로 용매 분획하였다. 분획물중 메틸렌클로라이드 분획물에서 높은 활성을 나타냈으므로, 이 분획물을 실리카겔을 이용하여 칼럼크로마토그라피(Column Chromatography, C.C)를 실시하여 19개로 분획하였다. 용출용매는 헥산과 아세트산에칠을 사용하여 농도구배로 실시하였다(헥산:아세트산에칠 =10:0→0:10). 이중 8번 및 9번 분획을 혼합하고 MPLC (Medium Pressure Liquid Chromatography)를 이용하여 9개로 분획하였다. 용출용매는 메틸렌클로라이드와 메탄올을 사용하여 농도구배로 실시하였다(메틸렌클로라이드: 메탄올=100:1 →0:100). 이중에서 4번 분획에서 활성을 나타내었고 이 분획을 prep HPLC를 이용하여 활성물질의 분리정제를 시도한 결과 활성이 강한, 화학식 1로 표시되는 탄시놀B, 화학식 2로 표시되는 탄시논ⅡB 및 화학식 3으로 표시되는 프르체바퀴논A 들을 얻을 수 있었다.
실시예 2 : 화학식 1 (탄시놀B)의 구조결정
상기 실시예 1에서 얻은 탄시놀B에 대하여 400MHz(1H)와 100MHz (13C)의 NMR 스펙트럼을 측정하였고 각 피크의 화학이동값(chemical shift)을 용매인 DMSO의 화학이동값(2.49 ppm, 39.9 ppm)에 대한 상대값으로 나타내었다.1H-NMR 및13C-NMR 스펙트럼 데이터는 다음 표 1 및 표 2에 나타내었다.
실시예 1에서 얻은 탄시놀B의 전체적인 구조는 공지의 탄시놀B[Shi Yong Ryu et al., Planta Med., vol 63, (1997), 44]의 분석결과,1H-NMR,13C-NMR 및 2차원 NMR인 COSY, HMQC 및 HMBC 실험에 의해서 결정하였다. 또한 LC-MS(ESI, positive mode)로 실험한 결과 [M+H]+인 297 m/z 의 피크가 확인되어 화학식 1의 분자량은 296 임이 확인되었다.
이 물질의 HMQC 및 HMBC에서 관찰된 모든 결과들은 화학식 1에 표시된 구조와 잘 일치하였다.
탄시놀B의1H 신호 지정 및1H-1H 상관관계
H H의 화학적 이동(δ) COSY
1 3.02, 3.14 H1, H2
2 1.66, 1.88 H1, H2, H3
3 1.79 H2
6 7.95 H7
7 7.63 H6
15 7.72 H17
17 2.16 H15
18 1.39 -
19 5.15 -
탄시놀B의13C 신호지정 및13C-1H 상관관계
C C의 화학적이동(δ) HMQC HMBC
1 28.74 H1 H3
2 19.55 H2 H3
3 37.62 H3 H18
4 68.95 H3, H6, H18, H19
5 148.34 H1, H3, H7, H18, H19
6 133.49 H6
7 119.93 H7
8 127.58 H6
9 125.92 H7
10 142.30 H1, H6
11 182.28
12 174.83
13 120.10 H17
14 160.36 H7, H15
15 142.41 H15 H17
16 119.66 H15, H17
17 8.55 H17
18 31.34 H18 H3, H19
실시예 3 : 화학식 2(탄시논ⅡB)의 구조결정
상기 실시예 1에서 얻은 탄시논ⅡB에 대하여 400 MHz(1H)와 100 MHz(13C)의 NMR 스펙트럼을 측정하였고 각 피크의 화학이동값을 용매인 DMSO의 화학이동값(2.49 ppm, 39.9 ppm)에 대한 상대값으로 나타내었다. 측정된1H-NMR 및13C-NMR 스펙트럼 데이터는 다음 표 3 및 표 4 에 나타내었다.
실시예 1에서 얻은 탄시논ⅡB의 전체적인 구조는 공지의 탄시논ⅡB [Takiura, K. et al., Chem. Pharm. Bull., vol 10, (1962), 112]의 분석결과,1H-NMR,13C-NMR 및 2차원 NMR인 COSY, HMQC 및 HMBC 실험에 의해서 결정하였다.13C NMR에서 C11 과 C12의 피크는 나타나지 않았으나, LC-MS(ESI, positive mode)로 실험한 결과 [M+H]+인 311 m/z 의 피크가 나타나 화학식 2의 분자량은 310 임이 확인되었다.
이 물질의 HMQC 및 HMBC에서 관찰된 모든 결과들은 화학식 2에 표시된 구조와 잘 일치하였다.
탄시논ⅡB의1H 신호 지정 및1H-1H 상관관계
H H의 화학적 이동(δ) COSY
1 3.05 H2
2 1.64, 1.72 H1, H2, H3
3 1.39, 1.89 H-2, H3
6 7.76 H7
7 7.56 H6
15 7.71 H17
17 2.16 H15
18 1.18
19 3.36, 3.51 H19, H20
20 4.82 H19
탄시논ⅡB의13C 신호지정 및13C-1H 상관관계
C C의 화학적 이동(δ) HMQC HMBC
1 29.8 H1
2 18.1 H2 H1
3 31.5 H3 H1, H18, H19
4 39.3 H6, H18
5 146.5 H1, H7, H18, H19
6 134.7 H6
7 119.1 H7 H6
8 126.4 H6
9 126.2 H1, H7
10 143.9 H1, H6
13 119.7 H15, H17
14 160.8 H7, H15
15 142.8 H15 H17
16 119.7 H15, H17
17 9.5 H17
18 25.8 H18 H19
19 69.6 H19 H18
* C11, C12는 검출되지 않음.
실시예 4 : 화학식 3(프르체바퀴논A)의 구조결정
상기 실시예 1에서 얻은 프르체바퀴논A에 대하여 400 MHz(1H)와 100 MHz(13C)의 NMR 스펙트럼을 측정하였고 각 피크의 화학이동값을 용매인 DMSO의 화학이동값(2.49 ppm, 39.9 ppm)에 대한 상대값으로 나타내었다.1H-NMR 및13C-NMR 스펙트럼 데이터는 다음 표 5 및 표 6에 각각 나타내었다.
실시예 1에서 얻은 프르체바퀴논A의 전체적인 구조는 공지의 프르체바퀴논A[Yang, B. et al., Yaoxue Xuebao., vol 16, (1981), 837]의 분석결과,1H-NMR,13C-NMR 및 2차원 NMR인 COSY, HMQC, HMBC 와 C/MS 실험에 의해서 결정하였다.1H NMR에서 1.27 ppm에서 메틸기의 피크가 단일선(singlet)으로 나타나고, 4.57 ppm에서 OH기가 붙은 메틸렌기의 피크가 단일선으로 나타났다. GC/MS(EI) 실험을 행하여 [M+] 인 294 m/z가 확인되었으며, 윌리275 라이브러리(Wiely275 library)로 검색한 결과와도 잘 일치하였다
프르체바퀴논A의 신호 지정 및1H-1H 상관관계
H H의 화학적 이동(δ) COSY
1 3.05 H2
2 1.68 H2, H3
3 1.59 H2
6 7.81 H7
7 7.59 H6
15 7.75 H17
17 4.57 H15, H20
18 1.27 -
19 1.27 -
20 5.24 H17
프르체바퀴논A의13C 신호지정 및13C-1H 상관관계
C C의 화학적 이동(δ) HMQC HMBC
1 28.1 H1 H3
2 19.8 H2 H1,H3
3 32.8 H3 H18, H19
4 39.1 H18, H19
5 149.4 H7, H18, H19
6 131.7 H6
7 120.3 H7
8 128.6 H6
9 126.8 H1, H7
10 141.8 H1, H6
11 184.6
12 176.9
13 114.4 H15, H17
14 159.8 H7, H15
15 143.2 H15 H17
16 121.4 H15, H17
17 61.6 H17 H20
18 27.6 H18 H19
19 31.9 H19 H18
실시예 5 : HBV 중합효소의 역전사효소 활성에 대한 in vitro 저해활성 테 스트
본 발명에서는 대장균에서 HBV의 재조합 중합효소 단백질을 발현시켜 분리하고, 그의 효소활성을 측정[대한민국 특허출원 제 94-3918호 및 제 96 -33998호]하는 방법 즉, 이 효소 단백질을 이용하여 in vitro에서 B형 간염 바이러스 중합효소의 역전사효소 활성을 측정하는 방법을 사용하였다. 기본적인 원리는 효소면역학적 방법(ELISA)과 동일하며, 비오틴-(biotin), DIG-으로 수식된 뉴클레오티드를 기질에 포함시켜 반응시킨 다음, 중합된 기질을 과산화효소가 붙어있는 항-DIG항체로 인식하는 방법을 이용하였다.
HBV 중합효소 20㎕, 반응 혼합물 20㎕ 및 시료 20㎕를 섞어서 14~30℃에서 18~24시간 반응시키고, 시료를 넣지 않은 대조실험의 결과와 비교하여 HBV 중합효소의 역전사효소 저해활성을 확인하였다.
각 시료의 저해활성 결과는 다음 표 7에 나타내었다.
B형 간염 바이러스 중합효소의 역전사효소(HBV-RT) 활성에 대한 저해효과
화학식 HBV-RT 활성 저해효과 (%)
0.1㎍/㎖ 1㎍/㎖ 10㎍/㎖
1 5 58 76
2 35 63 81
3 31 43 76
실험예 : 급성독성실험
탄시놀Ⅱ, 탄시논ⅡB, 프르체바퀴논A, 단삼 추출물 및 단삼 분획물 각각에 대하여 독성 실험을 행하였다. 각 실험물질을 0.5% Na-CMC에 현탁시키고, 이를 마우스(군당 5마리)에 각각 투여한 후 14일 동안 관찰하여 사망율을 측정하였다. 이때 탄시놀B, 탄시논ⅡB 및 프르체바퀴논A는 각각 1 g/kg, 500 mg/kg, 250 mg/kg, 125 mg/kg 및 62.5mg/kg의 5단계로 투여하였고, 단삼 추출물과 단삼 분획물은 각각 2 g/kg, 1 g/kg, 500 mg/kg, 250 mg/kg, 125 mg/kg의 5단계로 투여하였다. 그 결과, 탄시놀B, 탄시논ⅡB, 및 프르체바퀴논A의 50% 치사량(LD50)은 1 g/kg이었고,단삼 추출물과 단삼 분획물의 50% 치사량(LD50)은 2g/kg이었다.
상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 화학식 1, 2, 3으로 각각 표시되는 탄시놀B, 탄시논ⅡB, 프르체바퀴논A와 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge)추출물 및 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge) 분획물은 B형 간염 바이러스 중합효소의 역전사효소 활성에 대한 저해능이 우수하므로 B형 간염 치료용 약제 조성물의 유효성분으로 유용하다.

Claims (9)

  1. 다음 화학식 1로 표시되는 탄시놀B가 유효성분으로 함유된 것임을 특징으로 하는 B형 간염 치료용 약제 조성물.
    화학식 1
  2. 다음 화학식 2로 표시되는 탄시논ⅡB가 유효성분으로 함유된 것임을 특징으로 하는 B형 간염 치료용 약제 조성물.
    화학식 2
  3. 다음 화학식 3으로 표시되는 프르체바퀴논A가 유효성분으로 함유된 것임을 특징으로 하는 B형 간염 치료용 약제 조성물.
    화학식 3
  4. 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge)추출물이 유효성분으로 함유된 것임을 특징으로 하는 B형 간염 치료용 약제 조성물.
  5. 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge)분획물이 유효성분으로 함유된 것임을 특징으로 하는 B형 간염 치료용 약제 조성물.
  6. 단삼(Salvia miltiorrhiza Bunge)을 용매추출하고 농축한 다음, 용매분획 및 칼럼크로마토그래피를 수행하여 분리 및 정제하는 것을 특징으로 하는 다음 화학식 1, 2 또는 3으로 각각 표시되는 탄시놀B, 탄시논ⅡB 또는 프르체바퀴논A의 분리 회수방법.
    화학식 1
    화학식 2
    화학식 3
  7. 제 6 항에 있어서, 상기 추출용매로는 메탄올 또는 메틸렌클로라이드를 사용하는 것을 특징으로 하는 탄시놀B, 탄시논ⅡB 또는 프르체바퀴논A의 분리 회수방법.
  8. 제 6 항에 있어서, 상기 분획용매로는 메탄올과 메틸렌클로라이드를 사용하는 것을 특징으로 하는 탄시놀B, 탄시논ⅡB 또는 프르체바퀴논A의 분리 회수방법.
  9. 제 6 항에 있어서, 상기 칼럼크로마토그래피는 실리카겔, 세파덱스 및/ 또는 RP-18을 이용하여 수행하는 것을 특징으로 하는 탄시놀B, 탄시논ⅡB 또는 프르체바퀴논A의 분리 회수 방법.
KR1019980045212A 1998-10-28 1998-10-28 비형 간염치료용 약제 조성물 KR20000027306A (ko)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019980045212A KR20000027306A (ko) 1998-10-28 1998-10-28 비형 간염치료용 약제 조성물

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1019980045212A KR20000027306A (ko) 1998-10-28 1998-10-28 비형 간염치료용 약제 조성물

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20000027306A true KR20000027306A (ko) 2000-05-15

Family

ID=19555639

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1019980045212A KR20000027306A (ko) 1998-10-28 1998-10-28 비형 간염치료용 약제 조성물

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20000027306A (ko)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100388764B1 (ko) * 2000-10-31 2003-06-25 주식회사 내비켐 탱자나무 추출물을 함유하는 비형 간염 치료제
KR100687246B1 (ko) * 2005-06-15 2007-02-26 원광대학교산학협력단 탄시논ⅰ을 함유하는 간질환 치료 및 예방을 위한 조성물
US8029832B2 (en) 2003-12-30 2011-10-04 Md Bioalpha Co., Ltd. Obesity and metabolic syndrome treatment with tanshinone derivatives which increase metabolic activity

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS59163319A (ja) * 1983-03-07 1984-09-14 Sawai Seiyaku Kk 抗真菌剤
JPS63267798A (ja) * 1987-04-24 1988-11-04 Akira Yagi 虚血性疾患治療剤

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS59163319A (ja) * 1983-03-07 1984-09-14 Sawai Seiyaku Kk 抗真菌剤
JPS63267798A (ja) * 1987-04-24 1988-11-04 Akira Yagi 虚血性疾患治療剤

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Free Radic Biol Med. 20(6), 801-806, Cao EH *
Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi, 13(9), 533-535, 516-517, Xiong LL *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR100388764B1 (ko) * 2000-10-31 2003-06-25 주식회사 내비켐 탱자나무 추출물을 함유하는 비형 간염 치료제
US8029832B2 (en) 2003-12-30 2011-10-04 Md Bioalpha Co., Ltd. Obesity and metabolic syndrome treatment with tanshinone derivatives which increase metabolic activity
KR100687246B1 (ko) * 2005-06-15 2007-02-26 원광대학교산학협력단 탄시논ⅰ을 함유하는 간질환 치료 및 예방을 위한 조성물

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100720151B1 (ko) 항바이러스 활성을 갖는 플라보노이드 화합물
US9072770B2 (en) Aqueous extracts of Anoectochilus spp. kinsenoside and pharmaceutical compositions useful for hepatoprotection
WO2019083321A2 (ko) 항산화, 항염 또는 파골세포 분화 억제용 조성물
KR20130042990A (ko) 인제난 타입의 디테르펜 화합물 및 이를 포함하는 바이러스 감염 질환의 치료 또는 예방용 약학적 조성물
KR100988877B1 (ko) 작약 추출물을 유효성분으로 하는 ｂ형 간염 치료제 조성물
EP2627341B1 (en) Coriolus versicolor extracts, methods of preparation and uses thereof
JP3128823B2 (ja) 制癌化合物およびその製造法
KR20000027306A (ko) 비형 간염치료용 약제 조성물
WO2013062247A2 (ko) 포볼 타입의 디테르펜 화합물 및 이를 포함하는 바이러스 감염 질환의 치료 또는 예방용 약학적 조성물
KR20100097517A (ko) 쑥속（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ　ｓｐｅｃｉｅｓ）식물의 추출물로부터 원심향류분배 크로마토그래피를 이용한 고농도 유파티린(Ｅｕｐａｔｉｌｉｎ) 및 자세오시딘（Ｊａｃｅｏｓｉｄｉｎｅ）을 대량으로 분리 및생산하는 방법
US11147848B2 (en) Extracts and isolated compounds from Cakile arabica for treatment of ulcer
CN111253352B (zh) 一种从中药斑叶兰中提取分离的化合物及其制备方法和应用
KR100633096B1 (ko) 데커신 또는 데커시놀 안젤레이트를 함유하는 혈관이완제
CN103113196B (zh) 一种连钱草酚及其制备方法和应用
US10912740B2 (en) Treating hepatitis C with cannabidiol
KR100278361B1 (ko) 골다공증 예방 및 치료용 약제 조성물
Sun et al. Suppressive effects of metabolites from Alternaria brassicaea on the hepatitis B surface antigen
KR100659771B1 (ko) 한국산 겨우살이 유기추출물로부터 항암 화합물 베루틴과베투린 산의 정제 및 이 추출물의 제조방법
KR100458003B1 (ko) 방울비짜루(남옥대)로부터 분리한 신규 항암활성 화합물 및 그 정제방법
KR20240044077A (ko) 바다대나무로부터 화합물을 분리하는 방법
KR20040079265A (ko) 데커신 또는 데커시놀 안젤레이트를 함유하는 혈관질환예방 또는 치료용 혈관이완제
KR100490682B1 (ko) 한국산 겨우살이로부터 에피오레아놀린산의 분리방법
KR100602683B1 (ko) 아실-코에이：콜레스테롤 전이효소 저해활성을 갖는프탈레이트계 화합물
CN106316855B (zh) 一种丹酚酸化合物v、其制备方法和用途
KR101457520B1 (ko) 새빨간검둥이 추출물 또는 이로부터 분리된 폴리브로모카테콜을 함유하는 항바이러스 활성을 갖는 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
E601 Decision to refuse application