KR102602884B1 - Double layer compact disc chip and cell culture apparatus using the same - Google Patents

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KR102602884B1 KR1020210092776A KR20210092776A KR102602884B1 KR 102602884 B1 KR102602884 B1 KR 102602884B1 KR 1020210092776 A KR1020210092776 A KR 1020210092776A KR 20210092776 A KR20210092776 A KR 20210092776A KR 102602884 B1 KR102602884 B1 KR 102602884B1
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Abstract

본 발명은 이중층 구조의 세포 배양 칩 및 이를 이용한 세포 배양장치에 관한 것으로, 판형태로 이루어지고, 중심부에 제1주입구를 형성하고, 상기 제1주입구와 이격되어 상기 제1주입구를 중심으로 원주방향을 따라 복수의 제2주입구를 형성하는 커버; 상기 커버와 대응되는 판형태로 이루어지고, 중심부에 상기 제1주입구와 연결되어 주입유로를 형성하는 소통구를 구비하고, 상기 커버와 결합되어서 상기 제2주입구와 소통되고 상기 주입유로와 분리된 상층 수용공간을 형성하고, 상기 소통구를 중심으로 테두리 측에 방사형으로 마련되어서 상기 상층 수용공간과 연결된 홈 형태의 상층 마이크로웰을 형성하는 상층 레이어; 및 상기 상층 레이어와 대응되는 판형태로 이루어지고, 상기 상층 레이어와 결합되어서 상기 주입유로와 소통되는 하층 수용공간을 형성하고, 테두리 측에 상기 상층 마이크로웰과 대응되는 형태로 이루어져서 상기 하층 수용공간과 연결되는 하층 마이크로웰을 형성하는 하층 레이어;를 포함하여 이루어진다. The present invention relates to a cell culture chip with a double-layer structure and a cell culture device using the same, which is made in the form of a plate, has a first injection port at the center, is spaced apart from the first injection port, and moves in a circumferential direction around the first injection port. A cover forming a plurality of second injection ports along; It is made in the form of a plate corresponding to the cover, and has a communication port in the center connected to the first injection port to form an injection passage, and is coupled to the cover to communicate with the second injection port and an upper layer separated from the injection passage. An upper layer forming an accommodating space and forming an upper microwell in the form of a groove provided radially on an edge around the communication port and connected to the upper accommodating space; and is formed in a plate shape corresponding to the upper layer, is combined with the upper layer to form a lower receiving space communicating with the injection flow path, and has a shape corresponding to the upper microwell on the edge side, so as to form the lower receiving space and the upper layer. It includes a lower layer forming connected lower microwells.

Description

이중층 구조의 세포 배양 칩 및 이를 이용한 세포 배양장치{Double layer compact disc chip and cell culture apparatus using the same}Double layer compact disc chip and cell culture apparatus using the same}

본 발명은 이중층 구조의 세포 배양 칩 및 이를 이용한 세포 배양장치에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 원심력을 이용하여 3차원 구형의 세포 배양체를 균일하게 형성할 수 있고, 여러 종류의 세포를 다양한 조합으로 공생배양할 수 있고, 서로 다른 세포 배양체들 간의 상호작용을 유도할 수 있도록, 구조가 개선된 이중층 구조의 세포 배양 칩 및 이를 이용한 세포 배양장치에 관한 것이다. The present invention relates to a cell culture chip with a double-layer structure and a cell culture device using the same, and more specifically, to uniformly form three-dimensional spherical cell cultures using centrifugal force and to coexist with various types of cells in various combinations. It relates to a cell culture chip with an improved double-layer structure so that it can be cultured and induce interaction between different cell cultures, and a cell culture device using the same.

일반적으로 세포를 3차원으로 배양하는 것은 매우 어려우므로, 2차원적으로 배양하여 약물 스크리닝이나 각종 실험에 사용하고 있다. 2차원적 세포배양의 경우 실제 생체 내부와는 매우 다른 환경에 이루어지기 때문에, 실험에 쓰일 세포가 가지고 있는 세포 자체의 특성이나 세포의 조직 특이성을 잃어버리게 하고, 결과적으로 원하는 실험결과를 제대로 얻기 어렵게 한다.In general, it is very difficult to culture cells in three dimensions, so they are cultured in two dimensions and used for drug screening and various experiments. In the case of two-dimensional cell culture, because it is carried out in an environment that is very different from the actual inside of a living body, the characteristics of the cells themselves or the tissue specificity of the cells used in the experiment are lost, and as a result, it is difficult to properly obtain the desired experimental results. do.

한편, 3차원의 세포 배양체(스페로이드)는 세포들이 모여 3차원의 형태를 이루는 집합체를 의미하는 것으로, 실제 생체 내부와 거의 동일한 조건으로 실험결과를 얻을 수 있도록 한다. 따라서, 3차원의 세포 배양체는 신약개발 또는 줄기세포를 이용한 분화에 대한 연구에서 매우 중요한 역할을 담당하고 있다. Meanwhile, a three-dimensional cell culture (spheroid) refers to an aggregate of cells forming a three-dimensional shape, allowing experimental results to be obtained under conditions almost identical to those inside an actual living body. Therefore, three-dimensional cell cultures play a very important role in the development of new drugs or research on differentiation using stem cells.

이러한 3차원 세포 배양체를 형성하는 기술은 기본적으로 세포가 세포배양기의 외벽에 부착되는 것을 방지하는 것에 기반하고 있다. 이를 위한 대표적인 종래 기술로서, 현적배양(懸滴培養)(Hanging Drop Technique), 미세 세포포집 구조물을 이용한 방법, 비부착식 표면 고팅을 통한 세포 플로팅 기반의 방법(Liquid-Overlay Culture Method), 교반용 배양 플라스크(Spinner Culture Flask)를 이용한 방법, 마이크로웰(Microwell)을 활용한 세포배양방법 등이 사용되고 있다.The technology for forming these three-dimensional cell cultures is basically based on preventing cells from attaching to the outer wall of the cell culture medium. Representative conventional technologies for this include the hanging drop technique, a method using a microcell capture structure, a method based on cell floating through non-adherent surface coating (Liquid-Overlay Culture Method), and a method using agitating Methods using spinner culture flasks and cell culture methods using microwells are used.

상술한 종래기술들은 3차원의 세포배양체를 형성할 수 있다는 장점을 가지나, 세포배양체의 균일성을 확보하기 어렵고 다양한 종류의 세포들을 공생배양할 수 없고, 공생배양된 복합 세포배양체들 간의 상호작용 유도가 불가능하며, 단일 세포배양체와 그 복합 세포배양체의 비교연구를 어렵게 하는 문제점을 가진다. The above-described prior technologies have the advantage of being able to form a three-dimensional cell culture, but it is difficult to ensure uniformity of the cell culture, cannot symbiotically culture various types of cells, and induce interaction between symbiotically cultured complex cell cultures. is impossible, and it has the problem of making comparative studies of single cell cultures and their composite cell cultures difficult.

종래기술로는 한국공개특허공보 제2015-0035957호가 있다.The prior art includes Korea Patent Publication No. 2015-0035957.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 원심력을 이용하여 3차원 구형의 세포 배양체를 균일하게 형성시킬 수 있도록 하고, 다양한 세포들을 서로 다른 조건에서 공생배양할 수 있도록 하며, 공생배양된 복합 세포 배양체들 간의 상호작용을 유도하고, 단독 배양된 단일 세포배양체와 복합 세포배양체 간의 비교연구를 가능하게 할 수 있도록 하는 이중층 구조의 세포 배양 칩 및 이를 이용한 세포 배양장치를 제공하고자 하는 것이다. The present invention was devised to solve the above problems. The purpose of the present invention is to enable the uniform formation of three-dimensional spherical cell cultures using centrifugal force and to enable symbiotic culture of various cells under different conditions. A cell culture chip with a double-layer structure and a cell culture device using the same are designed to induce interaction between symbiotically cultured complex cell cultures and enable comparative studies between singly cultured single cell cultures and complex cell cultures. This is what we want to provide.

본 발명의 해결과제는 이상에서 언급된 것들에 한정되지 않으며, 언급되지 아니한 다른 해결과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해되어 질 수 있을 것이다.The problems to be solved by the present invention are not limited to those mentioned above, and other problems not mentioned can be clearly understood by those skilled in the art from the description below.

상기 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩 및 이를 이용한 세포 배양장치는, 판형태로 이루어지고, 중심부에 제1주입구를 형성하고, 상기 제1주입구와 이격되어 상기 제1주입구를 중심으로 원주방향을 따라 복수의 제2주입구를 형성하는 커버; 상기 커버와 대응되는 판형태로 이루어지고, 중심부에 상기 제1주입구와 연결되어 주입유로를 형성하는 소통구를 구비하고, 상기 커버와 결합되어서 상기 제2주입구와 소통되고 상기 주입유로와 분리된 상층 수용공간을 형성하고, 상기 소통구를 중심으로 테두리 측에 방사형으로 마련되어서 상기 상층 수용공간과 연결된 홈 형태의 상층 마이크로웰을 형성하는 상층 레이어; 및 상기 상층 레이어와 대응되는 판형태로 이루어지고, 상기 상층 레이어와 결합되어서 상기 주입유로와 소통되는 하층 수용공간을 형성하고, 테두리 측에 상기 상층 마이크로웰과 대응되는 형태로 이루어져서 상기 하층 수용공간과 연결되는 하층 마이크로웰을 형성하는 하층 레이어;를 포함하여 이루어진다.In order to achieve the above object, a cell culture chip with a double-layer structure and a cell culture device using the same according to the present invention are made in the form of a plate, form a first injection port in the center, and are spaced apart from the first injection port. A cover forming a plurality of second injection holes along the circumferential direction centered on; It is made in the form of a plate corresponding to the cover, and has a communication port in the center connected to the first injection port to form an injection passage, and is coupled to the cover to communicate with the second injection port and an upper layer separated from the injection passage. An upper layer forming an accommodating space and forming an upper microwell in the form of a groove provided radially on an edge around the communication port and connected to the upper accommodating space; and is formed in a plate shape corresponding to the upper layer, is combined with the upper layer to form a lower receiving space communicating with the injection flow path, and has a shape corresponding to the upper microwell on the edge side, so as to form the lower receiving space and the upper layer. It includes a lower layer forming connected lower microwells.

상기 커버는, 상기 상층 수용공간에 일시적으로 수용된 세포가 회전에 따른 원심력에 의해 상기 상층 마이크로웰로 유입될 수 있도록, 상기 상층 마이크로웰과 마주하는 위치에 마련되고, 상기 상층 마이크로웰을 향하는 방향으로 경사져서 상기 세포를 가이드하는 하향 경사부를 더 포함하여 이루어지는 것이 바람직하다. The cover is provided at a position facing the upper microwell so that cells temporarily accommodated in the upper receiving space can flow into the upper microwell by centrifugal force due to rotation, and is oriented in a direction toward the upper microwell. It is preferable that it further includes a downwardly inclined portion that is inclined to guide the cells.

상기 하층 레이어의 하층 마이크로웰은, 상기 커버의 상기 하향 경사부와 대응되는 위치에 마련되고, 상기 하층 수용공간의 바닥면에서 상기 상측 마이크로웰을 향해 경사져서 상기 바닥면 보다 높게 형성된 상향 경사부에 형성될 수 있다. The lower microwell of the lower layer is provided at a position corresponding to the downwardly inclined portion of the cover, and is inclined toward the upper microwell from the bottom surface of the lower receiving space and is formed on an upwardly inclined portion formed higher than the bottom surface. can be formed.

상기 하층 레이어는, 상기 하층 수용공간의 중심부를 기준으로 원주방향을 따라 방사형으로 마련되어 상기 상층 레이어를 지지하는 지지체를 더 포함하여 이루어지는 것이 바람직하다. The lower layer preferably further includes a support provided radially along the circumferential direction based on the center of the lower receiving space to support the upper layer.

상기 상층 레이어는, 상기 상층 마이크로웰에 수용된 세포 배양체와 상기 하층 마이크로웰에 수용된 세포 배양체가 서로 상호작용할 수 있도록, 상기 하층 마이크로웰과 마주하는 부분에 복수의 공극을 형성할 수 있다. The upper layer may form a plurality of pores in a portion facing the lower microwell so that the cell culture accommodated in the upper microwell and the cell culture accommodated in the lower microwell can interact with each other.

본 발명에 의한 세포 배양장치는, 이중층 구조의 세포 배양 칩; 상기 이중층 구조의 세포 배양 칩과 연결되는 회전플레이트와, 내부에 공간을 형성하는 하우징과, 상기 하우징의 내부에 마련되고 상기 하우징의 바닥면에 대해 수평방향으로 회전축을 구비한 모터와, 일측이 상기 회전플레이트에 연결되고 타측이 상기 모터의 회전축과 교차되게 연결되어서 상기 회전플레이트에 회전력을 전달하는 동력전달축을 구비한 회전유닛;을 포함하여 이루어지는 것이 바람직하다. The cell culture device according to the present invention includes a cell culture chip with a double-layer structure; A rotating plate connected to the cell culture chip of the double-layer structure, a housing forming a space therein, a motor provided inside the housing and having a rotation axis in a horizontal direction with respect to the bottom surface of the housing, and one side of the It is preferable to include a rotation unit connected to the rotation plate and having a power transmission shaft whose other side is connected to cross the rotation axis of the motor and transmits rotational force to the rotation plate.

상술한 바와 같은 구성을 가지는 본 발명에 의한 이중층 구조의 세포 배양 칩 및 이를 이용한 세포 배양장치는, 커버에 제1주입구 및 제2주입구를 형성하고, 상층 레이어의 소통구가 제1주입구와 연결되어 주입유로를 형성하고, 커버와 상층 레이어가 결합되어서 상층 수용공간 및 그 상층 수용공간과 연결된 상층 마이크로웰을 형성하고, 하층 레이어가 상층 레이어와 결합되어서 주입유로와 소통된 하층 수용공간을 형성하고, 그 하층 수용공간이 하층 마이크로웰과 연결됨으로써, 원심력을 이용하여 3차원 구형의 세포 배양체를 균일하게 형성시킬 수 있고, 다양한 세포들을 서로 다른 조건에서 공생배양할 수 있으며, 공생배양된 복합 세포 배양체들 간의 상호작용을 유도하고, 단독 배양된 단일 세포배양체와 복합 세포배양체 간의 비교연구를 가능하게 할 수 있게 하는 효과를 가진다. The double-layered cell culture chip and the cell culture device using the same according to the present invention having the configuration described above have a first inlet and a second inlet in the cover, and the communication port of the upper layer is connected to the first inlet. An injection flow path is formed, the cover and the upper layer are combined to form an upper receiving space and an upper microwell connected to the upper receiving space, and the lower layer is combined with the upper layer to form a lower receiving space communicated with the injection flow path, By connecting the lower layer accommodation space to the lower microwell, three-dimensional spherical cell cultures can be uniformly formed using centrifugal force, various cells can be symbiotically cultured under different conditions, and symbiotically cultured complex cell cultures can be formed. It has the effect of inducing interaction between cells and enabling comparative studies between single cell cultures cultured alone and complex cell cultures.

본 발명의 효과는 이상에서 언급된 것들에 한정되지 않으며, 언급되지 아니한 다른 효과들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해되어 질 수 있을 것이다.The effects of the present invention are not limited to those mentioned above, and other effects not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the description below.

도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩 및 이를 이용한 세포 배양장치를 설명하기 위한 사시도.
도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩의 분리 사시도.
도 3은 본 발명 일실시예에 채용된 상층 레이어를 보다 상세히 설명하기 위한 도면.
도 4는 본 발명 일실시예에 채용된 하층 레이어를 보다 상세히 설명하기 위한 도면.
도 5는 본 발명 일실시예의 단면도.
도 6은 본 발명 일실시예에 채용된 하향 경사부 및 상향 경사부에 의해 세포가 각각의 마이크로웰로 유입되는 과정을 설명하기 위해, 도 5의 Ⅵ부분을 상세히 도시한 부분 확대도.
도 7은 본 발명의 다른 실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩을 설명하기 위한 도면.
도 8은 본 발명의 일실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩을 이용한 세포 배양장치를 설명하기 위한 도면.Figure 1 is a perspective view illustrating a cell culture chip with a double-layer structure and a cell culture device using the same according to an embodiment of the present invention.
Figure 2 is an exploded perspective view of a cell culture chip with a double-layer structure according to an embodiment of the present invention.
Figure 3 is a diagram for explaining in more detail the upper layer employed in one embodiment of the present invention.
Figure 4 is a diagram for explaining in more detail the lower layer employed in one embodiment of the present invention.
Figure 5 is a cross-sectional view of one embodiment of the present invention.
FIG. 6 is an enlarged partial view illustrating part VI of FIG. 5 in detail to explain the process in which cells flow into each microwell by the downward slope and upward slope employed in one embodiment of the present invention.
Figure 7 is a diagram for explaining a cell culture chip with a double-layer structure according to another embodiment of the present invention.
Figure 8 is a diagram for explaining a cell culture device using a cell culture chip with a double-layer structure according to an embodiment of the present invention.

상술한 바와 같은 구성을 가지는 본 발명에 의한 이중층 구조의 세포 배양 칩 및 이를 이용한 세포 배양장치를 첨부된 도면을 참조하여 상세히 설명하기로 한다. 본 발명에 의한 세포 배양 칩은 이중층(Double layer) 구조로 이루어지고, 상기 세포 배양장치의 회전유닛에 연결되어 회전하면서 원심력으로 세포와 배양액을 각 층의 마이크로웰(microwell)에 수용시키고, 그 마이크로웰에서 3차원 구형의 세포 배양체(spheroid; 스페로이드)를 형성시킨다. The cell culture chip having a double-layer structure according to the present invention having the above-described configuration and the cell culture device using the same will be described in detail with reference to the attached drawings. The cell culture chip according to the present invention has a double layer structure, is connected to the rotation unit of the cell culture device, rotates, and centrifugal force accommodates cells and culture medium in the microwells of each layer, and the microwell A three-dimensional spherical cell culture (spheroid) is formed in the well.

도 1은 본 발명의 일실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩 및 이를 이용한 세포 배양장치를 설명하기 위한 사시도이고, 도 2는 본 발명의 일실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩의 분리 사시도이며, 도 3은 본 발명 일실시예에 채용된 상층 레이어를 보다 상세히 설명하기 위한 도면이고, 도 4는 본 발명 일실시예에 채용된 하층 레이어를 보다 상세히 설명하기 위한 도면이고, 도 5는 본 발명 일실시예의 단면도이며, 도 6은 본 발명 일실시예에 채용된 하향 경사부 및 상향 경사부에 의해 세포가 각각의 마이크로웰로 유입되는 과정을 설명하기 위해, 도 5의 Ⅵ부분을 상세히 도시한 부분 확대도이다. Figure 1 is a perspective view illustrating a cell culture chip with a double-layer structure and a cell culture device using the same according to an embodiment of the present invention, and Figure 2 is an exploded perspective view of a cell culture chip with a double-layer structure according to an embodiment of the present invention. , FIG. 3 is a diagram for explaining in more detail the upper layer employed in one embodiment of the present invention, FIG. 4 is a diagram for explaining in more detail the lower layer employed in one embodiment of the present invention, and FIG. 5 is a diagram for explaining in more detail the upper layer employed in one embodiment of the present invention. It is a cross-sectional view of one embodiment of the invention, and Figure 6 shows part VI of Figure 5 in detail to explain the process of cells flowing into each microwell by the downward slope and upward slope employed in one embodiment of the present invention. This is an enlarged view of a portion.

이들 도면에 도시된 바와 같이, 본 발명의 일실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩은 커버(100), 상층 레이어(200) 및 하층 레이어(300)를 포함하여 이루어진다. As shown in these figures, the cell culture chip with a double-layer structure according to an embodiment of the present invention includes a cover 100, an upper layer 200, and a lower layer 300.

상기 커버(100)는 이중층 구조의 세포 배양 칩에서 최상부에 배치되고 상층 레이어(200)와 결합하여 상층 수용공간(220)을 형성시킨다. 상기 커버(100)는 원판형태로 이루어지고 중심부에 제1주입구(110)를 형성하고, 상기 제1주입구(110)와 이격되어 상기 제1주입구(110)를 중심으로 원주방향을 따라 복수의 제2주입구(120)를 형성한다. The cover 100 is placed at the top of the double-layered cell culture chip and is combined with the upper layer 200 to form the upper receiving space 220. The cover 100 is made in the shape of a disk and forms a first injection port 110 in the center, and is spaced apart from the first injection port 110 and includes a plurality of injection ports along the circumferential direction centered on the first injection port 110. 2 Forms an injection inlet (120).

상기 커버(100)의 제2주입구(120)는 상기 제1주입구(110)의 주위를 둘러쌓는 형태로 이루어지고, 상기 상층 수용공간(220)과 소통되어 그 상층 수용공간(220)으로 세포 및 세포배양액을 유입시킨다. 또한 상기 커버(100)의 제1주입구(110)는, 커버(100)의 중심부에 형성되어서, 상층 레이어(200) 및 하층 레이어(300)의 결합에 의해 형성된 하층 수용공간(310)과 소통되고 그 하층 수용공간(310)으로 세포 및 세포 배양액을 유입시킨다. The second inlet 120 of the cover 100 is formed to surround the first inlet 110, and communicates with the upper receiving space 220 to allow cells and Introduce cell culture medium. In addition, the first injection port 110 of the cover 100 is formed in the center of the cover 100 and communicates with the lower receiving space 310 formed by combining the upper layer 200 and the lower layer 300. Cells and cell culture fluid are introduced into the lower receiving space 310.

상기 상층 레이어(200)는 커버(100)와 대응되는 원판형태로 이루어지고 그 커버(100)의 저면에 결합된다. 상기 상층 레이어(200)는 중심부에 제1주입구(110)와 연결되는 소통구(210)를 형성함으로써, 상기 커버(100)와의 결합 시 그 중심부에 주입유로(P)를 형성시킨다. 또한 상기 상층 레이어(200)는 커버(100)와 결합되어서 상기 제2주입구(120)와 소통되고 주입유로(P)와 분리된 별개의 상층 수용공간(220)형성하고, 테두리 측에 그 상층 수용공간(220)과 연결된 상층 마이크로웰(230)을 형성한다. The upper layer 200 is formed in a disk shape corresponding to the cover 100 and is coupled to the bottom of the cover 100. The upper layer 200 forms a communication port 210 connected to the first injection port 110 at its center, thereby forming an injection passage P at its center when combined with the cover 100. In addition, the upper layer 200 is combined with the cover 100 to form a separate upper receiving space 220 that communicates with the second injection port 120 and is separated from the injection passage (P), and receives the upper layer on the edge side. An upper microwell 230 connected to the space 220 is formed.

상기 상층 레이어(200)의 상층 마이크로웰(230)은, 상기 소통구(210)를 중심으로 그 상층 레이어(200)의 테두리 측에 방사형으로 마련되고, 상기 소통구(210)를 향해 개방된 홈 형태로 이루어짐으로써, 세포 배양 칩의 회전 시 제2주입구(120)를 통해 상층 수용공간(220)에 유입된 세포와 세포배양액을 내부로 유입시키고 3차원 구형의 세포 배양체를 형성시킬 수 있게 한다. The upper microwell 230 of the upper layer 200 is provided radially on the edge of the upper layer 200 with the communication port 210 as the center, and the groove is open toward the communication port 210. By being shaped, when the cell culture chip is rotated, the cells and cell culture medium introduced into the upper receiving space 220 through the second inlet 120 can be introduced into the inside and a three-dimensional spherical cell culture can be formed.

상기 상층 레이어(200)의 상층 마이크로웰(230)은, 상기 소통구(210)를 향해 개방된 부분으로 갈수 록 직경이 점진적으로 넓어짐으로써, 상층 수용공간(220)에 일시적으로 수용된 세포 및 세포배양액이 원심력에 의해 내부로 원활하게 유입될 수 있게 한다. 상기 상층 마이크로웰(230)은 동일한 형태를 가지며 방사상으로 배치되고 평균 직경이 600㎛이며 약 50개로 이루어지는 것이 바람직하다. The upper microwell 230 of the upper layer 200 gradually widens in diameter as it moves towards the part that is open toward the communication port 210, so that the cells and cell culture medium temporarily accommodated in the upper receiving space 220 This centrifugal force allows it to flow smoothly into the interior. The upper microwells 230 preferably have the same shape, are radially arranged, have an average diameter of 600 μm, and are comprised of about 50 microwells.

상기 상층 레이어(200)와 커버(100)는 PDMS(polydimethylsiloxane)소재로 투명하게 이루어짐으로써, 상층 마이크로웰(230) 내부에 수용된 세포 배양체의 형상을 현미경으로 관찰할 수 있게 한다. 아울러, 상기 상층 레이어(200)와 커버(100)는, 플라즈마 본딩에 의해 서로 접합되는 것이 바람직하며, 그 접합 위치를 결정하기 위해 위치결정돌기 및 위치결정홈을 각각 구비할 수 있다. The upper layer 200 and the cover 100 are transparently made of polydimethylsiloxane (PDMS) material, allowing the shape of the cell culture contained within the upper microwell 230 to be observed under a microscope. In addition, the upper layer 200 and the cover 100 are preferably bonded to each other by plasma bonding, and may each be provided with positioning protrusions and positioning grooves to determine the bonding position.

상기 하층 레이어(300)는 상기 상층 레이어(200)와 대응되는 형태로 이루어지고, 그 상층 레이어(200)의 저면에 결합되어서, 상기 주입유로(P)와 소통되는 하층 수용공간(310)을 형성한다. 또한 상기 하층 레이어(300)는 상기 상층 마이크로웰(230)과 대응되는 위치에, 그 상층 마이크로웰(230)과 대응되는 형태로 이루어져서 상기 하층 수용공간(310)과 연결되는 하층 마이크로웰(320)을 형성한다. The lower layer 300 has a shape corresponding to the upper layer 200 and is coupled to the bottom of the upper layer 200 to form a lower receiving space 310 that communicates with the injection passage (P). do. In addition, the lower layer 300 is located at a position corresponding to the upper microwell 230 and has a shape corresponding to the upper microwell 230, so that the lower layer microwell 320 is connected to the lower receiving space 310. forms.

상기 하층 레이어(300)의 하층 마이크로웰(320)은 상기 제1주입구(110) 및 주입유로(P)를 통해 하층 수용공간(310)으로 유입된 세포 및 세포배양액을, 회전에 따른 원심력에 의해 내부로 원활하게 유입될 수 있게 한다. 또한 상기 하층 레이어(300)는 커버(100) 및 상층 레이어(200)와 동일한 소재로 투명하게 이루어짐으로써, 상층 마이크로웰(230)과 하층 마이크로웰(320)에 수용된 각각의 세포 배양체를 현미경으로 관찰할 수 있게 한다. The lower microwell 320 of the lower layer 300 collects cells and cell culture fluid introduced into the lower receiving space 310 through the first injection port 110 and the injection passage (P) by centrifugal force due to rotation. Allows smooth flow inside. In addition, the lower layer 300 is transparently made of the same material as the cover 100 and the upper layer 200, so that each cell culture contained in the upper microwell 230 and the lower microwell 320 can be observed under a microscope. make it possible

여기서, 상기 상층 마이크로웰(230)과 하층 마이크로웰(320)에 수용된 세포는 각각 동일하거나 서로 다른 종류의 단일 세포일 수 있다. 한편, 상기 상층 마이크로웰(230)에 수용된 세포는, 서로 다른 종류의 세포들로 이루어져 복합 세포배양체로 형성될 수 있다. 아울러 상기 하층 마이크로웰(320)에 수용된 세포는, 상층 마이크로웰(230)에 수용된 세포들과 다르며 서로 이종의 세포들로 이루어져 다른 복합 세포배양체로 형성될 수도 있다. Here, the cells accommodated in the upper microwell 230 and the lower microwell 320 may be the same or different types of single cells. Meanwhile, the cells accommodated in the upper microwell 230 may be composed of different types of cells to form a complex cell culture. In addition, the cells accommodated in the lower microwell 320 are different from the cells accommodated in the upper microwell 230 and may be composed of heterogeneous cells to form a different complex cell culture.

이러한 구성들을 포함한 본 발명의 일실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩은, 커버(100)에 제1주입구(110) 및 제2주입구(120)를 형성하고, 상층 레이어(200)의 소통구(210)가 제1주입구(110)와 연결되어 주입유로(P)를 형성하고, 커버(100)와 상층 레이어(200)가 결합되어서 상층 수용공간(220) 및 그 상층 수용공간(220)과 연결된 상층 마이크로웰(230)을 형성하고, 하층 레이어(300)가 상층 레이어(200)와 결합되어서 주입유로(P)와 소통된 하층 수용공간(310)을 형성하고, 그 하층 수용공간(310)이 하층 마이크로웰(320)과 연결됨으로써, 원심력을 이용하여 3차원 구형의 세포 배양체를 균일하게 형성시킬 수 있고, 다양한 세포들을 서로 다른 조건에서 공생배양(co-culture)할 수 있으며, 공생배양된 복합 세포 배양체들 간의 상호작용을 유도하고, 단독 배양된 단일 세포배양체와 복합 세포배양체 간의 비교연구를 가능하게 할 수 있게 하는 효과를 가진다. The cell culture chip with a double-layer structure according to an embodiment of the present invention including these configurations forms a first inlet 110 and a second inlet 120 in the cover 100, and a communication port in the upper layer 200. (210) is connected to the first injection port 110 to form an injection passage (P), and the cover 100 and the upper layer 200 are combined to form an upper receiving space 220 and the upper receiving space 220. A connected upper microwell 230 is formed, and the lower layer 300 is combined with the upper layer 200 to form a lower receiving space 310 in communication with the injection passage P. By being connected to this lower layer microwell 320, a three-dimensional spherical cell culture can be uniformly formed using centrifugal force, various cells can be co-cultured under different conditions, and the co-cultured cells can be co-cultured. It has the effect of inducing interaction between complex cell cultures and enabling comparative studies between single cell cultures cultured alone and complex cell cultures.

예를 들어, 상기 상층 레이어(200)에는 서로 다르거나 동일한 제1 및 제2 세포를 주입하여 공생배양 세포 배양체를 형성시키고, 상기 하층 레이어(300)에는 서로 다르거나 동일한 제3 및 제4 세포를 주입하여 공생배양 세포 배양체를 형성시킬 수 있음으로써, 본 실시예는 매우 많은 조합의 공생배양조건을 만들수 있고 체내의 현상을 거의 모든 조건에서 모사할 수 있다. For example, different or identical first and second cells are injected into the upper layer 200 to form a symbiotic culture cell culture, and different or identical third and fourth cells are injected into the lower layer 300. By being able to form a symbiotic culture cell culture by injection, this embodiment can create a very large number of combinations of symbiotic culture conditions and simulate phenomena in the body under almost all conditions.

한편, 본 실시예에 채용된 커버(100)는 하향 경사부(130)를 더 포함하여 이루어지는 것이 바람직하다. 상기 커버(100)의 하향 경사부(130)는 상층 레이어(200)의 상층 마이크로웰(230)과 마주하는 위치에 형성되고, 그 상층 마이크로웰(230)을 향하는 방향으로 경사져서 세포(C)를 가이드함으로써, 상기 상층 레이어(200)의 상층 수용공간(220)에 일시적으로 수용된 세포(C)가 세포 배양 칩의 회전에 따른 원심력에 의해 상층 마이크웰(230)로 원활하게 유입될 수 있게 한다. Meanwhile, the cover 100 employed in this embodiment preferably further includes a downwardly inclined portion 130. The downwardly inclined portion 130 of the cover 100 is formed at a position facing the upper microwell 230 of the upper layer 200, and is inclined in a direction toward the upper microwell 230 to form cells (C). By guiding, the cells (C) temporarily accommodated in the upper receiving space 220 of the upper layer 200 can be smoothly introduced into the upper microwell 230 by the centrifugal force caused by the rotation of the cell culture chip. .

아울러, 상기 하층 레이어(300)는 상향 경사부(330)를 더 포함하여 이루어질 수 있다. 상기 상향 경사부(330)는 하층 레이어(300)의 하층 마이크로웰(320)이 형성되는 부분으로서, 상기 커버(100)의 하향 경사부(130)와 대응되는 위치에 마련되고, 하층 수용공간(310)의 바닥면에서 상기 상층 마이크로웰(230)을 향해 경사져서 상기 바닥면 보다 높게 형성됨으로써, 상기 하층 마이크로웰(320)을 상기 상층 마이크로웰(230)과 인접한 위치에 위치되게 한다. In addition, the lower layer 300 may further include an upwardly inclined portion 330. The upwardly inclined portion 330 is a portion where the lower microwell 320 of the lower layer 300 is formed, and is provided at a position corresponding to the downwardly inclined portion 130 of the cover 100, and the lower layer receiving space ( The bottom surface of the 310 is inclined toward the upper microwell 230 and is formed higher than the bottom surface, thereby allowing the lower microwell 320 to be located adjacent to the upper microwell 230.

본 실시예는 상기 커버(100)의 하향 경사부(130)와 상기 하층 레이어(300)의 상향 경사부(330)에 의해, 상층 마이크로웰(230)과 하층 마이크로웰(320)을 서로 인접하게 형성시킬 수 있고, 세포의 마이크로웰 측 이동을 효과적으로 구현시킬 수 있다. In this embodiment, the upper layer microwell 230 and the lower layer microwell 320 are adjacent to each other by the downwardly inclined portion 130 of the cover 100 and the upwardly inclined portion 330 of the lower layer 300. It can be formed, and the movement of cells toward the microwell can be effectively realized.

나아가 상기 제1주입구(110), 제2주입구(120), 상층 수용공간(220), 상층 마이크로웰(230), 하층 수용공간(310) 및 하층 마이크로웰(320)의 표면에는 세포가 붙지 않도록 방지하는 표면코팅층(미도시)이 형성될 수 있다. 이때, 상기 표면코팅층은 플루로닉 코팅(Pluronic Coating) 또는 아가로스 코팅(Agarose Coating)에 의해 형성될 수 있다.Furthermore, cells are prevented from sticking to the surfaces of the first injection port 110, the second injection port 120, the upper receiving space 220, the upper microwell 230, the lower receiving space 310, and the lower microwell 320. A surface coating layer (not shown) that prevents damage may be formed. At this time, the surface coating layer may be formed by Pluronic Coating or Agarose Coating.

상술한 바와 같이, 본 발명의 일 실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩은 회전에 의한 원심력을 통해 방사상으로 배치된 마이크로웰(230, 320) 측으로 세포 배양액 및 이에 포함된 세포를 유입시키고, 지속적인 회전에 의해 상기 마이크로웰에 과중력 조건이 가해지도록 함으로써, 별도의 첨가물질 없이도 세포 응집력을 강화시켜, 3차원 세포 스페로이드 형성의 효율을 증가시킬 수 있다.As described above, the cell culture chip with a double-layer structure according to an embodiment of the present invention flows the cell culture medium and the cells contained therein into the radially arranged microwells 230 and 320 through centrifugal force caused by rotation, and continuously By applying excessive gravity conditions to the microwell by rotation, cell cohesion can be strengthened without the use of additional additives, thereby increasing the efficiency of forming three-dimensional cell spheroids.

또한, 상기 상층 및 하층 마이크로웰(230, 320)을 동일한 크기로 방사상으로 복수개 구비하여 원심력을 가함으로써, 세포가 균일하게 분포될 수 있도록 하여, 균일한 크기의 3차원 세포 스페로이드를 형성할 수 있다. 아울러, 본 발명의 일 실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩은, 세포 배양액에 포함된 세포의 개수 조절 및 순차적인 세포 배양액 주입기술을 활용하면, 다양한 형태의 다세포 스페로이드를 빠른 시간 안에 형성시킬 수 있으며, 제1주입구와 제2주입구를 통한 각층 별 세포 배양액의 지속적인 공급이 가능하므로, 장기간의 지속적인 배양(long-term culture)이 가능하다.In addition, a plurality of the upper and lower layer microwells 230 and 320 are provided radially with the same size and centrifugal force is applied, so that cells can be uniformly distributed, forming a three-dimensional cell spheroid of uniform size. there is. In addition, the cell culture chip with a double-layer structure according to an embodiment of the present invention can form multicellular spheroids of various shapes in a short time by controlling the number of cells contained in the cell culture and utilizing sequential cell culture injection technology. Since the continuous supply of cell culture medium for each layer is possible through the first and second injection ports, long-term continuous culture is possible.

한편 상기 하층 레이어(300)는 지지체(340)를 더 포함하여 이루어지는 것이 바람직하다. 상기 지지체(340)는 상기 하층 수용공간(310)의 중심부를 기준으로 원주방향을 따라 방사형으로 마련되어 상기 상층 레이어(200)를 지지한다. 또한, 상기 지지체(340)는 상기 상층 레이어(200)와 결합된 하층 레이어(300)에서 하층 수용공간(310)이 확보될 수 있게 한다. Meanwhile, the lower layer 300 preferably further includes a support 340. The support body 340 is provided radially along the circumferential direction based on the center of the lower layer receiving space 310 to support the upper layer 200. In addition, the support 340 ensures the lower receiving space 310 in the lower layer 300 combined with the upper layer 200.

이상 본 발명의 일실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩을 설명하였다. 이하에서는 도 7을 참조하여 본 발명의 다른 실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩을 설명하기로 한다. The cell culture chip with a double-layer structure according to an embodiment of the present invention has been described above. Hereinafter, a cell culture chip with a double-layer structure according to another embodiment of the present invention will be described with reference to FIG. 7.

도 7은 본 발명의 다른 실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩을 설명하기 위한 도면이다.Figure 7 is a diagram for explaining a cell culture chip with a double-layer structure according to another embodiment of the present invention.

도 7에 도시된 바와 같이, 본 실시예는 앞서 설명한 실시예와 대부분의 구성이 유사하나, 상층 레이어(200)의 구조에 있어서 차이점이 있다. 상기 상층 레이어(200)는 복수의 공극(240)을 포함하여 이루어질 수 있다. As shown in FIG. 7, this embodiment is similar in most configurations to the previously described embodiment, but there is a difference in the structure of the upper layer 200. The upper layer 200 may include a plurality of voids 240.

상기 복수의 공극(240)은 상층 레이어(200)의 상층 마이크로웰(230)에 형성되어서, 상기 상층 마이크로웰(230)과 하층 마이크로웰(320)을 서로 소통시킨다. 상기 공극(240)은 상층 레이어(200)의 제조 공정에서 형성시킬 수 있고, 다공성의 PDMS(polydimethylsiloxane)를 이용해 상층 레이어 제조 시 형성될 수도 있다. The plurality of pores 240 are formed in the upper microwell 230 of the upper layer 200, so that the upper microwell 230 and the lower microwell 320 communicate with each other. The voids 240 may be formed during the manufacturing process of the upper layer 200, or may be formed during the manufacturing of the upper layer using porous polydimethylsiloxane (PDMS).

이와 같이 본 실시예는 상층 레이어(200)에 공극(200)을 형성함으로써, 상층 마이크로웰(230)과 하층 마이크로웰(320)에서 배양되는 세포 배양체에서 뿜어져 나오는 물질들(cytokine 등)의 물질교환을 유도할 수 있고, 서로 다른 세포 배양체들이 서로 상호작용을 하면서 한종류의 세포를 단독으로 배양했을 때와 어떻게 다른 결과를 나타내는지 실험을 할 수 있게 한다. In this way, in this embodiment, by forming the pores 200 in the upper layer 200, the substances (cytokines, etc.) emitted from the cell cultures cultured in the upper microwell 230 and the lower microwell 320 Exchange can be induced and experiments can be conducted to see how different cell cultures interact with each other and produce different results compared to when one type of cell is cultured alone.

이상 본 발명의 일실시예 및 다른 실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩을 설명하였다. 이하에서는 상기 이중층 구조의 세포 배양 칩을 이용한 세포 배양장치를 설명하기로 한다. The cell culture chip with a double-layer structure according to one and other embodiments of the present invention has been described above. Hereinafter, a cell culture device using the cell culture chip with the double-layer structure will be described.

도 8은 본 발명의 일실시예에 따른 이중층 구조의 세포 배양 칩을 이용한 세포 배양장치를 설명하기 위한 도면이다. Figure 8 is a diagram for explaining a cell culture device using a cell culture chip with a double-layer structure according to an embodiment of the present invention.

도 8에 도시된 바와 같이 상기 세포 배양장치는 세포 배양 칩(10)과 연결되고, 그 세포 배양 칩을 회전시키는 회전유닛(20)을 포함하여 이루어진다. As shown in FIG. 8, the cell culture device is connected to a cell culture chip 10 and includes a rotation unit 20 that rotates the cell culture chip.

상기 회전유닛(20)은 회전플레이트(21), 하우징(22), 모터(23) 및 동력전달축(24)을 포함하여 이루어진다. The rotation unit 20 includes a rotation plate 21, a housing 22, a motor 23, and a power transmission shaft 24.

상기 회전유닛(20)의 회전플레이트(21)는 하우징(22)의 외부에 노출되어서 상기 세포 배양 칩(10)을 수용하기 위한 홈을 형성하고, 그 홈에 세포 배양칩을 수용함으로써 상기 세포 배양칩(10)과 연결된다. 또한 상기 회전유닛(20)은 홀더(도면부호 미도시)와 결합됨으로써, 상기 세포 배양 칩(10)이 수용된 홈을 외부와 차단한다.(도 1 참조)The rotation plate 21 of the rotation unit 20 is exposed to the outside of the housing 22 to form a groove for accommodating the cell culture chip 10, and the cell culture chip is accommodated in the groove to perform cell culture. Connected to chip 10. In addition, the rotation unit 20 is combined with a holder (not shown) to block the groove in which the cell culture chip 10 is accommodated from the outside (see FIG. 1).

또한, 회전플레이트(21)는 모터(23)로부터 동력을 전달받은 동력전달축(24)과 동력적으로 연결되어서 회전하면서 상기 세포 배양 칩에 원심력이 생성될 수 있게 한다. In addition, the rotation plate 21 is dynamically connected to the power transmission shaft 24 that receives power from the motor 23 and rotates to generate centrifugal force in the cell culture chip.

상기 하우징(22)은 내부에 공간을 형성하고, 회전플레이트(21)의 외부 노출을 위한 노출공을 상측에 형성한다. 상기 하우징(22)의 공간에는 모터(23)와 동력전달축(24)이 수용된다. 상기 모터(23)는, 하우징의 공간에 설치되고 상기 하우징(22)의 바닥면에 대해 수평방향으로 배치된 회전축(a)과 연결된다. The housing 22 forms a space inside, and an exposure hole for exposing the rotating plate 21 to the outside is formed on the upper side. A motor 23 and a power transmission shaft 24 are accommodated in the space of the housing 22. The motor 23 is installed in the space of the housing and is connected to a rotation axis (a) disposed in a horizontal direction with respect to the bottom surface of the housing 22.

상기 회전축(a)은 모터로부터 동력을 전달받아, 상기 수평방향에서 회전하고 상기 동력전달축(24)에 동력을 전달한다. 여기서 상기 회전축(a)과 동력전달축(24)은 베벨기어 형태로 서로 연결될 수 있다. The rotation shaft (a) receives power from the motor, rotates in the horizontal direction, and transmits power to the power transmission shaft (24). Here, the rotation shaft (a) and the power transmission shaft 24 may be connected to each other in the form of a bevel gear.

상기 동력전달축(24)은 일측이 상기 회전플레이트(21)에 연결되고 타측이 상기 모터(23)의 회전축(a)과 교차되게 연결되어서 상기 회전플레이트(21)에 회전력을 전달함으로써, 상기 세포 배양장치의 높이를 낮출 수 있고 세포 배양을 위한 인큐베이터 내부에 원활하게 배치시킬 수 있게 한다. One side of the power transmission shaft 24 is connected to the rotation plate 21 and the other side is connected to cross the rotation axis (a) of the motor 23 to transmit rotational force to the rotation plate 21, so that the cell The height of the culture device can be lowered and it can be smoothly placed inside an incubator for cell culture.

이상, 본 발명에 대한 바람직한 실시예를 설명하였으나 본 발명은, 위에서 설명된 실시예들에 한정되지 않고 청구범위에 기재된 바에 의해 정의되며 본 발명이 속하는 기술분야에서 다양한 변형과 개발을 할 수 있음은 자명하다. Although the preferred embodiments of the present invention have been described above, the present invention is not limited to the embodiments described above, but is defined by the claims, and various modifications and developments can be made in the technical field to which the present invention pertains. Self-explanatory.

C: 세포 10: 세포 배양 칩
20: 회전유닛 21: 회전플레이트
22: 하우징 23: 모터
24: 동력전달축 a: 회전축
100: 커버 110: 제1주입구
120: 제2주입구 130: 하향 경사부
200: 상층 레이어 210: 소통구
P: 주입유로 220: 상층 수용공간
230: 상층 마이크로웰 240: 공극
300: 하층 레이어 310: 하층 수용공간
320: 하층 마이크로웰 330: 상향 경사부
340: 지지체C: Cell 10: Cell culture chip
20: Rotation unit 21: Rotation plate
22: housing 23: motor
24: Power transmission shaft a: Rotation shaft
100: Cover 110: First injection port
120: second inlet 130: downward slope
200: upper layer 210: communication outlet
P: Injection passage 220: Upper storage space
230: upper microwell 240: void
300: lower layer 310: lower layer accommodation space
320: lower microwell 330: upward slope
340: support

Claims (6)

판형태로 이루어지고, 중심부에 제1주입구를 형성하고, 상기 제1주입구와 이격되어 상기 제1주입구를 중심으로 원주방향을 따라 복수의 제2주입구를 형성하는 커버; 상기 커버와 대응되는 판형태로 이루어지고, 중심부에 상기 제1주입구와 연결되어 주입유로를 형성하는 소통구를 구비하고, 상기 커버와 결합되어서 상기 제2주입구와 소통되고 상기 주입유로와 분리된 상층 수용공간을 형성하고, 상기 소통구를 중심으로 테두리 측에 방사형으로 마련되어서 상기 상층 수용공간과 연결된 홈 형태의 상층 마이크로웰을 형성하는 상층 레이어; 및 상기 상층 레이어와 대응되는 판형태로 이루어지고, 상기 상층 레이어와 결합되어서 상기 주입유로와 소통되는 하층 수용공간을 형성하고, 테두리 측에 상기 상층 마이크로웰과 대응되는 형태로 이루어져서 상기 하층 수용공간과 연결되는 하층 마이크로웰을 형성하는 하층 레이어;를 포함하고,
상기 하층 레이어는, 상기 하층 수용공간의 중심부를 기준으로 원주방향을 따라 방사형으로 마련되어 상기 상층 레이어를 지지하는 지지체를 포함하여 이루어지는 이중층 구조의 세포 배양 칩.
A cover formed in the form of a plate, forming a first injection port at the center, and spaced apart from the first injection port to form a plurality of second injection ports along a circumferential direction centered on the first injection port; It is made in the form of a plate corresponding to the cover, and has a communication port in the center connected to the first injection port to form an injection passage, and is coupled to the cover to communicate with the second injection port and an upper layer separated from the injection passage. An upper layer forming an accommodating space and forming an upper microwell in the form of a groove provided radially on an edge around the communication port and connected to the upper accommodating space; and is formed in a plate shape corresponding to the upper layer, is combined with the upper layer to form a lower receiving space communicating with the injection flow path, and has a shape corresponding to the upper microwell on the edge side, so as to form the lower receiving space and the upper layer. It includes a lower layer forming connected lower microwells,
The lower layer is a cell culture chip with a double-layer structure including a support that is provided radially along the circumferential direction based on the center of the lower receiving space and supports the upper layer.
 제1항에 있어서,
상기 커버는,
상기 상층 수용공간에 일시적으로 수용된 세포가 회전에 따른 원심력에 의해 상기 상층 마이크로웰로 유입될 수 있도록, 상기 상층 마이크로웰과 마주하는 위치에 마련되고, 상기 상층 마이크로웰을 향하는 방향으로 경사져서 상기 세포를 가이드하는 하향 경사부를 더 포함하여 이루어지는 것을 특징으로 하는 이중층 구조의 세포 배양 칩.
According to paragraph 1,
The cover is,
It is provided at a position facing the upper microwell so that cells temporarily accommodated in the upper receiving space can flow into the upper microwell by centrifugal force due to rotation, and is inclined in a direction toward the upper microwell to allow the cells to flow into the upper microwell. A cell culture chip with a double-layer structure, characterized in that it further includes a downward slope that guides.
 제2항에 있어서,
상기 하층 레이어의 하층 마이크로웰은,
상기 커버의 상기 하향 경사부와 대응되는 위치에 마련되고, 상기 하층 수용공간의 바닥면에서 상기 상층 마이크로웰을 향해 경사져서 상기 바닥면 보다 높게 형성된 상향 경사부에 형성되는 것을 특징으로 하는 이중층 구조의 세포 배양 칩.According to paragraph 2,
The lower microwell of the lower layer is,
A double-layer structure, which is provided at a position corresponding to the downwardly inclined portion of the cover, and is formed on an upwardly inclined portion that is inclined from the bottom surface of the lower layer receiving space toward the upper microwell and is formed higher than the bottom surface. Cell culture chip. 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 상층 레이어는,
상기 상층 마이크로웰에 수용된 세포 배양체와 상기 하층 마이크로웰에 수용된 세포 배양체가 서로 상호작용할 수 있도록, 상기 하층 마이크로웰과 마주하는 부분에 복수의 공극을 형성하는 것을 특징으로 하는 이중층 구조의 세포 배양 칩.
According to paragraph 1,
The upper layer is,
A cell culture chip with a double-layer structure, characterized in that a plurality of pores are formed in a portion facing the lower microwell so that the cell culture accommodated in the upper microwell and the cell culture accommodated in the lower microwell can interact with each other.
 제1항의 이중층 구조의 세포 배양 칩;
상기 이중층 구조의 세포 배양 칩과 연결되는 회전플레이트와, 내부에 공간을 형성하는 하우징과, 상기 하우징의 내부에 마련되고 상기 하우징의 바닥면에 대해 수평방향으로 회전축을 구비한 모터와, 일측이 상기 회전플레이트에 연결되고 타측이 상기 모터의 회전축과 교차되게 연결되어서 상기 회전플레이트에 회전력을 전달하는 동력전달축을 구비한 회전유닛;을 포함하여 이루어지는 세포 배양장치.A cell culture chip having a double-layer structure according to claim 1;
A rotating plate connected to the cell culture chip of the double-layer structure, a housing forming a space therein, a motor provided inside the housing and having a rotation axis in a horizontal direction with respect to the bottom surface of the housing, and one side of the A cell culture device comprising: a rotation unit connected to a rotation plate and having a power transmission shaft whose other side is connected to cross the rotation axis of the motor to transmit rotational force to the rotation plate.
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