KR102593288B1 - Composition and method for producing platicoside without glucose, apiose and xylose by enzyme liquid of aspergillus tubingensis - Google Patents

Composition and method for producing platicoside without glucose, apiose and xylose by enzyme liquid of aspergillus tubingensis Download PDF

Info

Publication number
KR102593288B1
KR102593288B1 KR1020200132886A KR20200132886A KR102593288B1 KR 102593288 B1 KR102593288 B1 KR 102593288B1 KR 1020200132886 A KR1020200132886 A KR 1020200132886A KR 20200132886 A KR20200132886 A KR 20200132886A KR 102593288 B1 KR102593288 B1 KR 102593288B1
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
platicoside
enzyme solution
diglu
producing
composition
Prior art date
Application number
KR1020200132886A
Other languages
Korean (ko)
Other versions
KR20220049351A (en
Inventor
오덕근
길태근
Original Assignee
건국대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 건국대학교 산학협력단 filed Critical 건국대학교 산학협력단
Priority to KR1020200132886A priority Critical patent/KR102593288B1/en
Publication of KR20220049351A publication Critical patent/KR20220049351A/en
Application granted granted Critical
Publication of KR102593288B1 publication Critical patent/KR102593288B1/en

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P33/00—Preparation of steroids
    • C12P33/20—Preparation of steroids containing heterocyclic rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
    • C12R2001/66—Aspergillus

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액을 포함하는 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물 및 제조방법에 관한 것이다. The present invention relates to a composition and production method for producing diglu-diapy-digyl-platicoside containing Aspergillus tubingensis strain enzyme solution.

Description

아스퍼질러스 튜빙엔시스 효소액을 이용한 글루코스, 아피오스 및 자일로스가 제거된 도라지 사포닌 제조용 조성물 및 제조방법{COMPOSITION AND METHOD FOR PRODUCING PLATICOSIDE WITHOUT GLUCOSE, APIOSE AND XYLOSE BY ENZYME LIQUID OF ASPERGILLUS TUBINGENSIS}Composition and manufacturing method for producing bellflower saponin with glucose, apiose and xylose removed using Aspergillus tubingensis enzyme solution {COMPOSITION AND METHOD FOR PRODUCING PLATICOSIDE WITHOUT GLUCOSE, APIOSE AND XYLOSE BY ENZYME LIQUID OF ASPERGILLUS TUBINGENSIS}

본 발명은 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 효소액을 이용한 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물 및 제조방법에 관한 것이다. The present invention relates to a composition and method for producing diglu-diapi-digyl-platicoside using Aspergillus tubingensis enzyme solution.

초롱꽃과에 속하는 다년생식물인 도라지는 2~3년 근을 식용이나 약용으로 사용한다. 한방에서는 길경이라고 불리며 주로 진해, 거담 등의 목적으로 사용되어 왔다. 도라지 뿌리에는 플라티코사이드라는 사포닌이 다량 함유되어 있는데, 여러 유효성분 중 약리작용이 뛰어나다고 알려져 있다. Bellflower root, a perennial plant belonging to the Campanula family, uses 2-3 year-old roots for edible or medicinal purposes. In Oriental medicine, it is called Gilgyeong and has been mainly used for purposes such as anti-inflammatory and expectorant. Bellflower root contains a large amount of saponin called platicoside, which is known to have excellent pharmacological effects among various active ingredients.

플라티코사이드의 기본적인 구조는 3번 탄소자리에 글루코오스 당 끼리의 결합, 24번 탄소자리에 아피오스, 자일로스, 람노오스, 아라비노피라노오스 등의 당들의 결합으로 이루어져 있다. 또한 24번 탄소의 잔기 종류에 따라 CH2OH일 때 플라티코다이제닌(platycodigenin) 계열, CH3일 때 폴리갈락산(polygalacic acid) 계열, COOH일 때 플라티콘산(platyconic acid) 계열로 나뉜다.The basic structure of platycosides consists of a bond between glucose sugars at carbon position 3 and sugars such as apiose, xylose, rhamnose, and arabinopyranose at carbon position 24. Also, depending on the type of residue at carbon 24, it is divided into the platycodigenin series when CH 2 OH, the polygalacic acid series when CH 3 , and the platyconic acid series when it is COOH.

도라지 사포닌에 달린 당들을 가수분해 할수록, 몸으로의 흡수가 용이하고 생리학적 활성이 증가하기 때문에 기존의 연구에서 곰팡이 효소나 상업용 효소를 이용하여 플라티코사이드의 당들을 가수분해 하는 연구가 진행되어 왔다. 밝혀진 결과로는 당 중에서 28번 탄소자리의 아피오스(apiose)와 자일로스(xylose)를 가수분해하거나 3번 탄소자리의 글루코오스(gluose)를 가수분해하는 연구가 진행되었으나, 3번 탄소자리의 글루코오스(glucose)와 28번 탄소자리의 아피오스(apiose) 및 자일로스(xylose)를 모두 가수분해하는 연구는 진행된바 없었다.The more the sugars attached to bellflower saponin are hydrolyzed, the easier it is to be absorbed into the body and the physiological activity increases. Therefore, existing research has been conducted to hydrolyze the sugars of platycosides using fungal enzymes or commercial enzymes. . As a result, research was conducted on hydrolyzing apiose and xylose at carbon position 28 among sugars and glucose at carbon position 3, but glucose at carbon position 3 No research has been conducted on hydrolyzing both glucose and apiose and xylose at carbon position 28.

본 발명은 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액을 포함하는 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물 등을 제공하고자 한다. The present invention seeks to provide a composition for producing diglu-diapi-digyl-platicoside containing Aspergillus tubingensis strain enzyme solution.

그러나, 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.However, the technical problem to be achieved by the present invention is not limited to the problems mentioned above, and other problems not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the description below.

본 발명은 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액을 포함하는 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물을 제공한다. The present invention provides a composition for producing diglu-diapi-digyl-platicoside containing Aspergillus tubingensis strain enzyme solution.

상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주는 KCTC 14166BP로 기탁될 수 있다. The Aspergillus tubingensis strain can be deposited as KCTC 14166BP.

상기 효소액은 상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주의 세포 외 효소액일 수 있다.The enzyme solution may be an extracellular enzyme solution of the Aspergillus tubingensis strain.

상기 효소액은 상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주를 탄소원으로서, 시트러스 펙틴(citrus pectin)을 5 g/L 내지 20 g/L의 농도로 포함하는 발현 배지에서 배양하여 수득할 수 있다. The enzyme solution can be obtained by culturing the Aspergillus tubingensis strain in an expression medium containing citrus pectin at a concentration of 5 g/L to 20 g/L as a carbon source.

상기 효소액은 상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주를 질소원으로서, 콘 스팁 솔리드(corn steep solid)를 1 g/L 내지 9 g/L의 농도로 포함하는 발현 배지에서 배양하여 수득할 수 있다. The enzyme solution can be obtained by culturing the Aspergillus tubingensis strain in an expression medium containing corn steep solid as a nitrogen source at a concentration of 1 g/L to 9 g/L. .

상기 발현 배지는 KH2PO4, MgSO4 .7H2O, CaCl2, FeSO4 .7H2O, ZnSO4 .7H2O, MnSO4 . H2O 및 CoCl2 .6H2O 를 추가로 포함할 수 있다. The expression medium is KH 2 PO 4 , MgSO 4 . 7H 2 O, CaCl 2 , FeSO 4 . 7H 2 O, ZnSO 4 . 7H 2 O, MnSO 4 . H 2 O and CoCl 2 . 6H 2 O may be additionally included.

상기 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드는 하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시될 수 있다:The diglu-diapi-dizyle-platicoside may be represented by the following formula (1) or formula (2):

[화학식 1][Formula 1]

, ,

[화학식 2][Formula 2]

. .

상기 조성물은 기질로서, 플라티코사이드 E(platycoside E) 또는 폴리갈락신 D3(polygalacin D3)을 포함할 수 있다. The composition may include platycoside E or polygalacin D 3 as a substrate.

본 발명의 일 구현예로, 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액을 기질에 처리하는 단계를 포함하는 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드의 제조방법을 제공한다. In one embodiment of the present invention, a method for producing diglu-diapi-digyl-platicoside is provided, which includes treating a substrate with an enzyme solution of Aspergillus tubingensis strain.

상기 처리는 40~65℃ 및 pH 3.5~6.0 조건에서 2 시간 내지 12 시간 동안 수행될 수 있다. The treatment may be performed for 2 to 12 hours at 40 to 65°C and pH 3.5 to 6.0.

본 발명의 다른 구현예로, 플라티코사이드 내 글루코오스(glucose), 아피오스(apiose) 및 자일로스(xylose) 가수분해 활성을 가지는 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주(KCTC 14166BP)를 제공한다. In another embodiment of the present invention, an Aspergillus tubingensis strain (KCTC 14166BP) is provided, which has the activity of hydrolyzing glucose, apiose and xylose in platycosides. .

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 신규 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드를 제공한다. In another embodiment of the present invention, a novel diglu-diapi-dizyle-platicoside represented by Formula 1 or Formula 2 is provided.

본 발명에 따르면, 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액을 이용한 것을 특징으로 하는바, 플라티코사이드 내 글루코오스(glucose), 아피오스(apiose), 및 자일로스(xylose) 최적 가수분해를 통해 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드를 높은 수율 및 생산성으로 제조할 수 있다. 특히, 상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주를 배양하는 발현 배지 내 탄소원으로서, 시트러스 펙틴(citrus pectin)을, 질소원으로서, 콘 스팁 솔리드(corn steep solid)를 최적 농도로 포함시키고, 최적 온도 및 pH 조건에서 기질에 처리함으로써, 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드의 수율 및 생산성을 보다 높일 수 있다. According to the present invention, Aspergillus tubingensis strain enzyme solution is used, through optimal hydrolysis of glucose, apiose, and xylose in platycoside. Diglu-diapy-digyl-platicoside can be produced with high yield and productivity. In particular, the expression medium for culturing the Aspergillus tubingensis strain contains citrus pectin as a carbon source and corn steep solid as a nitrogen source at an optimal concentration, and at an optimal temperature. And by treating the substrate under pH conditions, the yield and productivity of diglu-diapy-digyl-platicoside can be further increased.

특히, 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주는 식품에 이용가능한 안전한 곰팡이인바, 상기와 같은 방법으로 제조된 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드는 식품용으로 유용하게 활용될 수 있는 이점을 가진다. In particular, the Aspergillus tubingensis strain is a safe fungus that can be used in food, and Diglu-diapy-dizyle-platicoside prepared by the above method can be usefully used for food. It has an advantage.

도 1(a)는 발현 배지의 탄소원을 다양하게 하여 세포 외 효소액을 배양한 다음, 기질로서, 플라티코사이드 E에 각각 처리한 경우, 그 글리코시다아제 활성을 나타낸 그래프이고, 도 1(b)는 발현 배지의 탄소원 농도를 다양하게 하여 세포 외 효소액을 배양한 다음, 기질로서, 플라티코사이드 E에 처리한 경우, 그 글리코시다아제 활성을 나타낸 그래프이다.
도 2(a)는 발현 배지의 질소원을 다양하게 하여 세포 외 효소액을 배양한 다음, 기질로서, 플라티코사이드 E에 각각 처리한 경우, 그 글리코시다아제 활성을 나타낸 그래프이고, 도 2(b)는 발현 배지의 질소원 농도를 다양하게 하여 세포 외 효소액을 배양한 다음, 기질로서, 플라티코사이드 E에 처리한 경우, 그 글리코시다아제 활성을 나타낸 그래프이다.
도 3(a)는 최적화된 발현 배지를 통해 배양된 세포 외 효소액의 온도의 변화에 따른 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성을 나타낸 그래프이고, 도 3(b)는 최적화된 발현 배지를 통해 배양된 세포 외 효소액의 pH의 변화에 따른 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성을 나타낸 그래프이다.
도 4(a) 내지 (b)는 최적화된 발현 배지를 통해 세포 외 효소액을 배양한 다음, 기질로서, 플라티코사이드 E 및 폴리갈락신 D3에 각각 처리한 경우, 그 전환 정도를 시간별로 나타낸 그래프이다.
도 5(a) 내지 (b)는 이온화 질량 분석(LC-MS, LCQ Deca XP plus ion trap mass spectrometer, ThermoScientific)을 통해 디글루-디아피-디자일-플라티코딘 D 및 디글루-디아피-디자일-폴리갈락신 D의 구조를 각각 나타낸 그래프이다.
도 6은 플리티코사이드가 어떠한 중간 물질을 거쳐 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드로 전환되는지를 나타낸 그림이다.Figure 1(a) is a graph showing the glycosidase activity when extracellular enzyme solution was cultured with various carbon sources of the expression medium and then treated with platycoside E as a substrate, and Figure 1(b) is a graph showing the glycosidase activity when extracellular enzyme solution was cultured by varying the carbon source concentration of the expression medium and then treated with platycoside E as a substrate.
Figure 2(a) is a graph showing the glycosidase activity when extracellular enzyme solution was cultured with various nitrogen sources in the expression medium and then treated with platycoside E as a substrate, and Figure 2(b) is a graph showing the glycosidase activity when the extracellular enzyme solution was cultured by varying the nitrogen source concentration of the expression medium and then treated with platycoside E as a substrate.
Figure 3(a) is a graph showing the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution according to the change in temperature of the extracellular enzyme solution cultured through the optimized expression medium, and Figure 3(b) is a graph showing the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution cultured through the optimized expression medium. This is a graph showing the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution according to the change in pH of the extracellular enzyme solution.
Figures 4(a) to (b) show the degree of conversion over time when the extracellular enzyme solution was cultured through an optimized expression medium and then treated with platycoside E and polygalaxin D 3 as substrates, respectively. It's a graph.
Figures 5(a) to (b) show Diglu-diapy-dizyle-platicodin D and Diglu-diapi through ionization mass spectrometry (LC-MS, LCQ Deca XP plus ion trap mass spectrometer, ThermoScientific). This is a graph showing the structure of -Desyl-Polygalaxin D.
Figure 6 is a diagram showing through which intermediate substances pliticoside is converted to diglu-diapi-digyl-platicoside.

본 발명자들은 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 효소액을 이용한 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드를 제조하는 방법을 연구하던 중, 탄소원 및 질소원이 최적화된 발현 배지를 통해 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주를 배양하여 세포 외 효소액을 수득한 후, 최적 온도 및 pH 조건에서 기질에 처리함으로써, 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드의 수율 및 생산성을 보다 높일 수 있음을 확인하고, 본 발명을 완성하였다. While researching a method for producing diglu-diapi-dizyle-platicoside using Aspergillus tubingensis enzyme solution, the present inventors discovered Aspergillus tubing through an expression medium with optimized carbon and nitrogen sources. By cultivating Aspergillus tubingensis strain to obtain an extracellular enzyme solution and then treating it with a substrate under optimal temperature and pH conditions, the yield and productivity of diglu-diapi-digyl-platicoside can be increased. After confirmation, the present invention was completed.

본 명세서 내 "디글루-디아피-디자일-플라티코사이드(deglu-deapi-dexyl-platycoside)"라 함은 글루코스(glucose), 아피오스(apiose) 및 자일로스(xylose)가 제거된 도라지 사포닌을 의미하는 것으로, 플라티코사이드 내 글루코오스(glucose), 아피오스(apiose) 및 자일로스(xylose)가 가수분해된 상태일 수 있다. 특히, 플라티코사이드의 3번 위치의 글루코오스와 28번 위치의 아피오스 및 자일로스가 가수분해된 상태일 수 있고, 디글루-디아피-디자일-플라티코딘 D(deglu-deapi-dexyl-platycodin D) 또는 디글루-디아피-디자일-폴리갈락신 D(deglu-deapi-dexyl-polygalacin D)일 수 있으며, 이들은 거담, 진해, 항염, 항산화 작용 등 다양한 생리 활성을 가진다. 신규 화합물로서, 디글루-디아피-디자일-플라티코딘 D(deglu-deapi-dexyl-platycodin D)는 하기 화학식 1로 표시되고, 디글루-디아피-디자일-폴리갈락신 D(deglu-deapi-dexyl-polygalacin D)는 하기 화학식 2로 표시된다:In the present specification, “deglu-deapi-dexyl-platycoside” refers to bellflower saponin from which glucose, apiose and xylose have been removed. This means that glucose, apiose, and xylose in platycoside may be in a hydrolyzed state. In particular, the glucose at position 3 and the apiose and xylose at position 28 of the platicoside may be in a hydrolyzed state, and deglu-deapi-dexyl-platicodin D (deglu-deapi-dexyl- It may be platycodin D) or deglu-deapi-dexyl-polygalacin D, and they have various physiological activities such as expectorant, antitussive, anti-inflammatory, and antioxidant effects. As a new compound, deglu-deapi-dexyl-platycodin D (deglu-deapi-dexyl-platycodin D) is represented by the following formula 1, and deglu-diapi-dexyl-polygalaxin D (deglu -deapi-dexyl-polygalacin D) is represented by the following formula 2:

[화학식 1][Formula 1]

, ,

[화학식 2][Formula 2]

. .

디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물Composition for producing diglu-diapi-dizyle-platicoside

본 발명은 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액을 포함하는 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물을 제공한다. The present invention provides a composition for producing diglu-diapi-digyl-platicoside containing Aspergillus tubingensis strain enzyme solution.

상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주는 식품에 이용가능한 안전한 곰팡이로서, 누룩곰팡이속에 속한다. Aspergillus tubingensis 균주는 Aspergillus tubingensis 균주(KCTC 14166BP)인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. The Aspergillus tubingensis strain is a safe mold that can be used in food and belongs to the Aspergillus genus. The Aspergillus tubingensis strain is preferably Aspergillus tubingensis strain (KCTC 14166BP), but is not limited thereto.

구체적으로, 상기 균주(KCTC 14166BP)는 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 중에서도, 플라티코사이드 내 글루코오스(glucose), 아피오스(apiose) 및 자일로스(xylose) 가수분해 활성이 우수한 특징을 가진다..Specifically, the strain (KCTC 14166BP) has excellent hydrolytic activity for glucose, apiose and xylose in platycosides among Aspergillus tubingensis . .

상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주로부터 배양액을 수득하기 위해서는, 상기 균주를 평판배양하여 포자를 수득하는 단계; 상기 포자를 성장 배지에서 배양하여 균사를 활성화시키는 단계; 및 상기 성장 배지를 제거한 후, 상기 활성화된 균사를 발현 배지로 옮겨 배양하여 배양액을 수득하는 단계를 포함한다. In order to obtain a culture medium from the Aspergillus tubingensis strain, culturing the strain on a plate to obtain spores; Activating the hyphae by culturing the spores in a growth medium; And after removing the growth medium, transferring the activated hyphae to the expression medium and culturing them to obtain a culture medium.

추가적으로, 상기 배양액으로부터 세포 외 효소액을 수득하기 위해서는, 상기 배양액을 여과하는 단계; 상기 여과액을 회수하여 메탄올을 첨가 및 혼합하여 효소 침전액을 수득하는 단계; 원심분리기를 이용하여 상등액을 제거하는 단계; 및 센트리콘을 이용하여 남은 염을 추가 제거 및 농축하는 단계를 포함한다. Additionally, in order to obtain an extracellular enzyme solution from the culture medium, the steps include filtering the culture medium; recovering the filtrate, adding and mixing methanol to obtain an enzyme precipitate; Removing the supernatant using a centrifuge; and further removing and concentrating the remaining salt using centricon.

즉, 상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액은 발현 배지를 통해 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주를 배양함으로써 수득될 수 있는데, 본 발명에서는 상기 발현 배지를 최적화시킨 것을 특징으로 한다. That is, the Aspergillus tubingensis strain enzyme solution can be obtained by culturing the Aspergillus tubingensis strain through an expression medium, and the present invention is characterized by optimizing the expression medium. .

상기 발현 배지는 탄소원으로서, 시트러스 펙틴(citrus pectin)를 포함하는 것이 바람직한바, 기질로서 플라티코사이드의 최적 가수분해를 통해 최종적으로 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드를 높은 생산성 및 수율로 제조할 수 있다.The expression medium preferably contains citrus pectin as a carbon source, and ultimately diglu-diapi-digyl-platicoside is produced with high productivity and yield through optimal hydrolysis of platycoside as a substrate. It can be manufactured with

이때, 시트러스 펙틴(citrus pectin)은 다양한 다당체가 함유되어 있고 항암과 해독작용에 좋아 의료 및 식품산업 등에 이용하기에 적합한 합성물로써 여러 산업분야에서 다양하고 폭넓게 사용되고 있다. At this time, citrus pectin contains various polysaccharides and is good for anti-cancer and detoxification properties, so it is a compound suitable for use in the medical and food industries, and is widely used in various industrial fields.

상기 발현 배지 내 탄소원으로서, 시트러스 펙틴(citrus pectin)의 농도는 5 g/L 내지 20 g/L일 수 있고, 5 g/L 내지 10 g/L인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.As a carbon source in the expression medium, the concentration of citrus pectin may be 5 g/L to 20 g/L, and is preferably 5 g/L to 10 g/L, but is not limited thereto.

반면, 탄소원으로서, 아라빅 검(arabig gum), 셀룰로오스(cellulose), 시트러스 펙틴(citrus pectin), 쌀 속겨(rice bran), 사탕무 슬러지(sugar beet sludge) 및 밀기울(wheat bran)을 사용한 경우에는 기질로서 플라티코사이드의 최적 가수분해를 통해 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드를 효과적으로 전환하지 하는데 한계가 있다. On the other hand, when arabic gum, cellulose, citrus pectin, rice bran, sugar beet sludge, and wheat bran were used as carbon sources, the substrate As such, there are limitations in effectively converting diglu-diapy-digyl-platicoside through optimal hydrolysis of platicoside.

또한, 상기 발현 배지는 질소원으로서, 콘 스팁 솔리드(corn steep solid)를 포함하는 것이 바람직하고, 이의 농도는 1 g/L 내지 9 g/L일 수 있고, 3 g/L 내지 5 g/L인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다.In addition, the expression medium preferably contains corn steep solid as a nitrogen source, the concentration of which may be 1 g/L to 9 g/L, and 3 g/L to 5 g/L. This is preferable, but is not limited to this.

마찬가지로, 질소원으로서, 질산 암모늄(ammonium nitrate), 황산 암모늄(ammonium sulfate), 콘 스팁 솔리드(corn steep solid), 펩톤(peptone), 요소(urea), 효모 추출물(yeast extract), 중량비로서, 펩톤(2): 황산 암모늄(8), 중량비로서, 펩톤(4): 황산 암모늄(6), 및 중량비로서, 펩톤(6): 황산 암모늄(4) 및 중량비로서, 펩톤(8): 황산 암모늄(2)을 사용한 경우에는 기질로서 플라티코사이드의 최적 가수분해를 통해 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드를 효과적으로 전환하지 하는데 한계가 있다. Likewise, as a nitrogen source, ammonium nitrate, ammonium sulfate, corn steep solid, peptone, urea, yeast extract, and as a weight ratio, peptone ( 2): Ammonium sulfate (8), in weight ratio, peptone (4): ammonium sulfate (6), and in weight ratio, peptone (6): ammonium sulfate (4), and in weight ratio, peptone (8): ammonium sulfate (2). ), there are limitations in effectively converting diglu-diapy-digyl-platicoside through optimal hydrolysis of platycoside as a substrate.

그밖에, 상기 발현 배지는 KH2PO4, MgSO4·7H2O, CaCl2, FeSO4·7H2O, ZnSO4·7H2O, MnSO4·H2O 및 CoCl2·6H2O 를 추가로 포함할 수 있는데, 구체적으로, KH2PO4 1~3 g/L, MgSO4·7H2O 0.1~1.0 g/L, CaCl2 0.1~1.0 g/L, FeSO4·7H2O 1.0~10.0 mg/L, ZnSO4·7H2O 0.5~5.0 mg/L, MnSO4·H2O 0.5~5.0 mg/L 및 CoCl2·6H2O 1.0~10.0 mg/L 를 추가로 포함할 수 있다.In addition, the expression medium adds KH 2 PO 4 , MgSO 4 ·7H 2 O, CaCl 2 , FeSO 4 ·7H 2 O, ZnSO 4 ·7H 2 O, MnSO 4 ·H 2 O and CoCl 2 ·6H 2 O It may include, specifically, KH 2 PO 4 1-3 g/L, MgSO 4 ·7H 2 O 0.1-1.0 g/L, CaCl 2 0.1-1.0 g/L, FeSO 4 ·7H 2 O 1.0~ It may additionally include 10.0 mg/L, ZnSO 4 ·7H 2 O 0.5~5.0 mg/L, MnSO 4 ·H 2 O 0.5~5.0 mg/L, and CoCl 2 ·6H 2 O 1.0~10.0 mg/L. .

한편, 상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 효소액은 전술한 바와 같이, 상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주의 세포 외 효소액일 수 있다. Meanwhile, the Aspergillus tubingensis enzyme solution may be an extracellular enzyme solution of the Aspergillus tubingensis strain, as described above.

한편, 상기 조성물은 기질에 처리하기 위한 것으로, 상기 기질은 플라티코사이드 E(platycoside E) 또는 폴리갈락신 D3(polygalacin D3)를 포함하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. Meanwhile, the composition is intended for treating a substrate, and the substrate preferably includes platycoside E or polygalacin D 3 , but is not limited thereto.

디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조방법Diglu-diapy-digyl-platicoside production method

본 발명은 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액을 기질에 처리하는 단계를 포함하는 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드의 제조방법을 제공한다.The present invention provides a method for producing diglu-diapi-dizyle-platicoside comprising the step of treating a substrate with Aspergillus tubingensis strain enzyme solution.

상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액에 대해서는 전술한바 있으므로, 중복 설명을 생략하기로 한다. Since the Aspergillus tubingensis strain enzyme solution has been described above, redundant description will be omitted.

또한, 상기 기질은 플라티코사이드 E(platycoside E) 또는 폴리갈락신 D3(polygalacin D3)를 포함하는 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. Additionally, the substrate preferably includes platycoside E or polygalacin D 3 , but is not limited thereto.

또한, 상기 처리는 40~65

Figure 112020108644986-pat00005
및 pH 3.5~6.0 조건에서 2 시간 내지 12 시간 동안 수행될 수 있다. 구체적으로, 상기 처리를 위한 온도 조건은 55~60
Figure 112020108644986-pat00006
인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 상기 처리를 위한 pH 조건은 pH 4.5~5.0인 것이 바람직하나, 이에 한정되지 않는다. 이러한 pH 조건을 유지하기 위해서 반응용매로 완충용액을 사용할 수 있다. 또한, 즉, 이러한 pH 및 온도 조건을 유지함으로써, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성이 높으면서도, 오랜 시간 반응에도 세포 외 효소액의 안정성을 유지할 수 있다. 따라서, 기질로서 플라티코사이드의 최적 가수분해를 통해 최종적으로 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드를 높은 수율 및 생산성으로 제조할 수 있다.Additionally, the above processing is performed between 40 and 65
Figure 112020108644986-pat00005
and may be performed for 2 to 12 hours under conditions of pH 3.5 to 6.0. Specifically, the temperature conditions for the above treatment are 55 to 60
Figure 112020108644986-pat00006
It is preferable, but is not limited to this. In addition, the pH conditions for the above treatment are preferably pH 4.5 to 5.0, but are not limited thereto. To maintain these pH conditions, a buffer solution can be used as a reaction solvent. In addition, by maintaining these pH and temperature conditions, the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution can be high and the stability of the extracellular enzyme solution can be maintained even for a long time reaction. Therefore, through optimal hydrolysis of platycoside as a substrate, diglu-diapy-digyl-platycoside can be finally produced with high yield and productivity.

그밖에, 본 발명은 플라티코사이드 내 글루코오스(glucose), 아피오스(apiose) 및 자일로스(xylose) 가수분해 활성을 가지는 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주(KCTC 14166BP)를 제공한다. In addition, the present invention provides an Aspergillus tubingensis strain (KCTC 14166BP) that has the activity of hydrolyzing glucose, apiose and xylose in platycosides.

상기 균주(KCTC 14166BP)는 플라티코사이드 내 글루코오스(glucose), 아피오스(apiose) 및 자일로스(xylose) 가수분해 활성을 가지는 것으로, 특히, 플라티코사이드의 3번 위치의 글루코오스와 28번 위치의 아피오스 및 자일로스를 쉽게 가수분해시킬 수 있다. 그밖의 특징에 대해서는 전술한바 있으므로, 중복 설명을 생략하기로 한다. The strain (KCTC 14166BP) has the activity of hydrolyzing glucose, apiose and xylose in platycoside, especially glucose at position 3 and 28 of platycoside. Apios and xylose can be easily hydrolyzed. Since other features have been described above, redundant description will be omitted.

또한, 본 발명은 신규 화합물로서, 하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는 신규 디아피-플라티코사이드를 제공한다:In addition, the present invention provides, as a new compound, a new diapy-platicoside represented by the following formula (1) or formula (2):

[화학식 1][Formula 1]

, ,

[화학식 2][Formula 2]

. .

상기한 바와 같이, 본 발명에 따르면, 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액을 이용한 것을 특징으로 하는바, 플라티코사이드 내 글루코오스(glucose), 아피오스(apiose), 및 자일로스(xylose) 최적 가수분해를 통해 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드를 높은 수율 및 생산성으로 제조할 수 있다. 특히, 상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주를 배양하는 발현 배지 내 탄소원으로서, 시트러스 펙틴(citrus pectin)을, 질소원으로서, 콘 스팁 솔리드(corn steep solid)를 최적 농도로 포함시키고, 최적 온도 및 pH 조건에서 기질에 처리함으로써, 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드의 수율 및 생산성을 보다 높일 수 있다. As described above, according to the present invention, Aspergillus tubingensis ( Aspergillus tubingensis ) strain enzyme solution is used, and glucose, apiose, and xylose in platycosides are used. Through optimal hydrolysis, diglu-diapy-digyl-platicoside can be produced with high yield and productivity. In particular, the expression medium for culturing the Aspergillus tubingensis strain contains citrus pectin as a carbon source and corn steep solid as a nitrogen source at an optimal concentration, and at an optimal temperature. And by treating the substrate under pH conditions, the yield and productivity of diglu-diapy-digyl-platicoside can be further increased.

특히, 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주는 식품에 이용가능한 안전한 곰팡이인바, 상기와 같은 방법으로 제조된 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드는 식품용으로 유용하게 활용될 수 있는 이점을 가진다. In particular, the Aspergillus tubingensis strain is a safe fungus that can be used in food, and Diglu-diapy-dizyle-platicoside prepared by the above method can be usefully used for food. It has an advantage.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.Below, preferred embodiments are presented to aid understanding of the present invention. However, the following examples are provided only to make the present invention easier to understand, and the content of the present invention is not limited by the following examples.

실시예 1: 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) KU509 균주 분리 및 동정Example 1: Isolation and identification of Aspergillus tubingensis KU509 strain

신규 균주를 분리하기 위해, 메주를 시료로 사용하였다. 메주를 10 배 희석법을 사용하여 포테이토 덱스트로오즈 한천배지(Potato dextrose agar 42-19 2020-04-23 medium, PDA)에 도말하고 여러 차례 획선 도말하고 배양한 후 콜로니 형태를 관찰 하여 신규 균주를 분리하였다. 분리된 신규 균주의 동정을 위해 genomic DNA를 얻었으며, β-tubulin 유전자를 다음과 같은 PCR 프라이머로 중합효소 연쇄반응(PCR, polymerase chain reaction)을 통한 증폭 및 시퀀싱하였다: To isolate the new strain, meju was used as a sample. Meju was spread on potato dextrose agar 42-19 2020-04-23 medium (PDA) using a 10-fold dilution method, streaked several times, cultured, and then observed colony morphology to isolate new strains. did. To identify the new isolated strain, genomic DNA was obtained, and the β-tubulin gene was amplified and sequenced through polymerase chain reaction (PCR) using the following PCR primers:

정방향 : 5'-GGT AAC CAA ATC GGT GCT GCT TTC-3' Forward: 5'-GGT AAC CAA ATC GGT GCT GCT TTC-3'

역방향 : 5'-ACC CTC AGT GTA GTG ACC CTT GGC-3'Reverse: 5'-ACC CTC AGT GTA GTG ACC CTT GGC-3'

시퀀싱하여 얻은 β-tubulin 유전자의 염기서열은 서열번호 1로 나타내었다. 이때, 아스퍼질러스 튜빙엔시스 (Aspergillus tubingensis) KU-509 균주는 2020년 4월 7일자로 한국생명공학연구원 생물자원센터(KCTC: Korean Collection for Type Cultures)에 기탁하여 수탁번호 KCTC 14166BP를 부여받았다.The base sequence of the β-tubulin gene obtained by sequencing is shown as SEQ ID NO: 1. At this time, Aspergillus tubingensis KU-509 strain was deposited at the Korean Collection for Type Cultures (KCTC) of the Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology on April 7, 2020, and was given accession number KCTC 14166BP.

실시예 2: 발현 배지 내 탄소원 및 이의 농도에 따른, 세포외 효소액의 글리코시다아제 활성 확인Example 2: Confirmation of glycosidase activity of extracellular enzyme solution according to carbon source and its concentration in expression medium

본 발명에서는 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 효소액을 이용하여 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드를 제조함에 있어서, 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주의 발현 배지를 최적화하였다. In the present invention, in producing diglu-diapi-digyl-platicoside using Aspergillus tubingensis enzyme solution, the expression medium for Aspergillus tubingensis strain was optimized.

구체적으로, 소 혈청 알부민(bovine serum albumin)을 기반으로 한 브래드포드(Bradford) 방법을 이용하여 효소 단백질의 양을 측정하였고, 파라-니트로페놀 효소 분석(para-nitrophenol enzyme assay) 방법을 이용하여 글리코시다아제 활성을 측정하였다. 구체적으로, 파라-니트로페놀 효소 분석 방법은 파라-니트롤페닐 글루코오스(para-nitrophenyl glucose, pNP-glu) 1 mM을 기질로 하여 효소와 반응하고 난 후, Na2CO3를 첨가하여 반응 종결을 시켜 파라-니트롤페놀(para-nitrolphenol, 염기조건에서 노란색으로 발색반응을 일으킴)이 얼마나 생성되는지 450 nm의 흡광도에서 흡광값을 측정하여 글리코시다아제 활성을 확인하였다. Specifically, the amount of enzyme protein was measured using the Bradford method based on bovine serum albumin, and the glycoprotein content was measured using the para-nitrophenol enzyme assay method. Sidase activity was measured. Specifically, the para-nitrophenol enzyme analysis method uses 1 mM para-nitrophenyl glucose ( p NP-glu) as a substrate to react with the enzyme, and then adds Na 2 CO 3 to terminate the reaction. Glycosidase activity was confirmed by measuring the absorbance value at 450 nm to determine how much para-nitrolphenol (which causes a yellow color reaction under basic conditions) is produced.

먼저, 실시예 1에서 분리 및 동정한 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주(KCTC 14166BP)를 포테이토 덱스트로오즈 한천배지(Potato dextrose agar medium, PDA)에서 26℃에서 7일간 평판배양하였다. 평판배양된 접시(plate)내의 포자를 거즈에 걸러 회수하고 4 ㎖의 액상 포테이토 덱스트로오즈 배지(Potato dextrose medium, PDB)에 포자 농도가 1.0 X 106 spores/mL 농도로 희석한 포자액을 1 ㎖ 접종하고, 26℃ 및 150 rpm으로 24시간 동안 성장배양하였다. 성장배양으로 만들어진 성장배양액 내의 균사를 탄소원 및 질소원이 제외된 발현 배지로 세척하여 균사만 100㎖의 발현 배지에 옮긴 후, 26℃ 및 150 rpm으로 7일간 배양하였다. First, the Aspergillus tubingensis strain (KCTC 14166BP) isolated and identified in Example 1 was plate-cultured on potato dextrose agar medium (PDA) at 26°C for 7 days. The spores in the cultured plate were collected by filtering through gauze, and the spore solution was diluted to a spore concentration of 1.0 ㎖ was inoculated and grown and cultured at 26°C and 150 rpm for 24 hours. The mycelia in the growth culture medium prepared by the growth culture were washed with expression medium excluding carbon and nitrogen sources, and only the mycelia were transferred to 100 ml of expression medium, and then cultured at 26°C and 150 rpm for 7 days.

이때, 발현 배지의 조성은 탄소원 10 g/L, 질소원 3 g/L, KH2PO4 2 g/L, MgSO47H2O 0.3 g/L, CaCl2 0.3 g/L, FeSO4.7H2O 5.0 mg/L, ZnSO4.7H2O 1.4 mg/L, MnSO4·H2O 1.3 mg/L 및 CoCl2·6H2O 3.7 mg/L 이다. 탄소원으로서, 아라빅 검(arabig gum)(덕산종합과학), 셀룰로오스(cellulose)(대정화금㈜), 시트러스 펙틴(citrus pectin)(나우푸드), 쌀 속겨(rice bran)(심즈펫), 사탕무 슬러지(sugar beet sludge)(홀리메드캠) 및 밀기울(wheat bran)(심즈펫)으로 총 6가지를 사용하였고, 질소원으로서, 콘 스팁 솔리드(시그마 알드리치)를 사용하였다. At this time, the composition of the expression medium was 10 g/L carbon source, 3 g/L nitrogen source, KH 2 PO 4 2 g/L, MgSO 4 7H 2 O 0.3 g/L, CaCl 2 0.3 g/L, FeSO 4.7H 2 O 5.0 mg/L, ZnSO 4.7H 2 O 1.4 mg/L, MnSO 4· H 2 O 1.3 mg/L, and CoCl 2 ·6H 2 O 3.7 mg/L. As a carbon source, arabic gum (Deoksan General Science), cellulose (Daejeong Chemical Co., Ltd.), citrus pectin (Now Foods), rice bran (Sims Pet), sugar beet A total of 6 types of sludge (sugar beet sludge) (Holy Med Cam) and wheat bran (Sims Pet) were used, and as a nitrogen source, corn tip solid (Sigma Aldrich) was used.

그 다음, 효소액에 메탄올을 첨가하여 4℃ 에서 3시간 동안 효소를 침전하였고, 원심분리기(5000 X g)를 이용하여 4℃에서 20 분 동안 상등액을 제거하였으며, 200 mM의 맥킬바인(Mcilvaine) 완충용액으로 풀어준 후, 10 kDa 센트리콘으로 최대 농축하여 세포 외 효소액을 수득하였다.Next, methanol was added to the enzyme solution to precipitate the enzyme at 4°C for 3 hours, and the supernatant was removed using a centrifuge (5000 After being dissolved in solution, the extracellular enzyme solution was obtained by maximum concentration with 10 kDa centricon.

그 다음, 세포 외 효소액 1.0 mg/ml 및 기질로서 플라티코사이드 E(Ambo Institute) 0.4 mg/ml가 함유된 완충용액을 60℃ 및 pH 5.0에서 12 시간 동안 반응시켜, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성을 측정하였다. Next, a buffer solution containing 1.0 mg/ml of the extracellular enzyme solution and 0.4 mg/ml of Platicoside E (Ambo Institute) as a substrate was reacted at 60°C and pH 5.0 for 12 hours, and the glycosidase of the extracellular enzyme solution was reacted at 60°C and pH 5.0 for 12 hours. Activity was measured.

그 결과, 도 1(a)에 나타난 바와 같이, 발현 배지 내 탄소원으로서, 시트러스 펙틴(citrus pectin)을 사용한 경우, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성이 높은 것으로 확인된다. 다만, 탄소원으로서, 아라빅 검(arabic gum), 사탕무 슬러지(sugar beet sludge) 및 밀기울(wheat bran)을 사용한 경우에는, 세포외 효소액의 글리코시다아제 활성이 크게 저하되는 것으로 확인된다. As a result, as shown in Figure 1(a), when citrus pectin was used as a carbon source in the expression medium, the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution was confirmed to be high. However, when arabic gum, sugar beet sludge, and wheat bran were used as carbon sources, it was confirmed that the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution was significantly reduced.

또한, 도 1(b)에 나타난 바와 같이, 발현 배지 내 탄소원으로서, 시트러스 펙틴(citrus pectin)이 5 g/L 내지 10 g/L (특히, 10 g/L)인 경우, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성이 크게 향상되는 것으로 확인된다. In addition, as shown in Figure 1(b), when citrus pectin is 5 g/L to 10 g/L (particularly 10 g/L) as a carbon source in the expression medium, the glycolysis of the extracellular enzyme solution It was confirmed that sidase activity was greatly improved.

실시예 3: 발현 배지 내 질소원 및 이의 농도에 따른, 세포외 효소액의 글리코시다아제 활성 확인Example 3: Confirmation of glycosidase activity of extracellular enzyme solution according to nitrogen source and its concentration in expression medium

앞에 서술한 바와 동일한 배양 과정을 거쳐, 중복 설명을 생략하고, 발현 배지의 조성은 탄소원 10 g/L, 질소원 3 g/L, KH2PO4 2 g/L, MgSO47H2O 0.3 g/L, CaCl2 0.3 g/L, FeSO4.7H2O 5.0 mg/L, ZnSO4.7H2O 1.4 mg/L, MnSO4·H2O 1.3 mg/L 및 CoCl2·6H2O 3.7 mg/L 이다. 탄소원으로서, 시트러스 펙틴(citrus pectin)(시그마알드리치)을 사용하였고, 질소원으로서, 질산 암모늄(ammonium nitrate)(덕산과학), 황산 암모늄(ammonium sulfate)(덕산과학), 콘 스팁 솔리드(corn steep solid)(시그마 알드리치), 펩톤(peptone)(기산바이오), 요소(urea)(덕산과학) 및 효모 추출물(yeast extract)(기산바이오)로 총 6가지를 사용하였다. Through the same culture process as described above, without redundant explanation, the composition of the expression medium was 10 g/L of carbon source, 3 g/L of nitrogen source, 2 g/L of KH 2 PO 4 , 0.3 g/L of MgSO 4 7H 2 O. L, CaCl 2 0.3 g/L, FeSO 4 .7H 2 O 5.0 mg/L, ZnSO 4 .7H 2 O 1.4 mg/L, MnSO 4· H 2 O 1.3 mg/L and CoCl 2 6H 2 O 3.7 mg /L. As a carbon source, citrus pectin (Sigma-Aldrich) was used, and as a nitrogen source, ammonium nitrate (Deoksan Science), ammonium sulfate (Deoksan Science), and corn steep solid were used. A total of 6 types were used: (Sigma Aldrich), peptone (Kisan Bio), urea (Duksan Science), and yeast extract (Kisan Bio).

앞에 서술한 바와 동일한 과정으로 세포 외 효소액을 수득하였고, 세포 외 효소액 1.0 mg/ml 및 기질로서 플라티코사이드 E(Ambo Institute) 0.4 mg/ml가 함유된 완충용액을 60℃ 및 pH 5.0에서 12 시간 동안 반응시켜, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성을 측정하였다. Extracellular enzyme solution was obtained through the same process as described above, and a buffer solution containing 1.0 mg/ml of extracellular enzyme solution and 0.4 mg/ml of Platicoside E (Ambo Institute) as a substrate was incubated at 60°C and pH 5.0 for 12 hours. After reacting for a while, the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution was measured.

그 결과, 도 2(a)에 나타난 바와 같이, 발현 배지 내 질소원으로서, 콘 스팁 솔리드(corn steep solid)을 사용한 경우, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성이 높은 것으로 확인된다. 다만, 질소원으로서, 질산 암모늄(ammonium nitrate), 황산 암모늄(ammonium sulfate), 요소(urea) 및 효모 추출물(yeast extract)을 사용한 경우에는, 세포외 효소액의 글리코시다아제 활성이 크게 저하되는 것으로 확인된다. As a result, as shown in Figure 2(a), when corn steep solid was used as a nitrogen source in the expression medium, the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution was confirmed to be high. However, when ammonium nitrate, ammonium sulfate, urea, and yeast extract were used as nitrogen sources, it was confirmed that the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution was significantly reduced. .

또한, 도 2(b)에 나타난 바와 같이, 발현 배지 내 탄소원으로서, 시트러스 펙틴(citrus pectin)이 3 g/L 내지 5 g/L (특히, 3 g/L)인 경우, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성이 크게 향상되는 것으로 확인된다. In addition, as shown in Figure 2(b), when citrus pectin is 3 g/L to 5 g/L (particularly 3 g/L) as a carbon source in the expression medium, the glycolysis of the extracellular enzyme solution It was confirmed that sidase activity was greatly improved.

따라서, 최적화된 발현 배지의 조성은 탄소원으로서, 시트러스 펙틴(citrus pectin) 10 g/L, 질소원으로서, 콘 스팁 솔리드(corn steep solid) 3 g/L, KH2PO4 2 g/L, MgSO47H2O 0.3 g/L, CaCl2 0.3 g/L, FeSO4.7H2O 5.0 mg/L, ZnSO4.7H2O 1.4 mg/L, MnSO4·H2O 1.3 mg/L 및 CoCl2·6H2O 3.7 mg/L 이다.Therefore, the composition of the optimized expression medium is citrus pectin 10 g/L as a carbon source, corn steep solid 3 g/L, KH 2 PO 4 2 g/L, and MgSO 4 as a nitrogen source. 7H 2 O 0.3 g/L, CaCl 2 0.3 g/L, FeSO 4 .7H 2 O 5.0 mg/L, ZnSO 4 .7H 2 O 1.4 mg/L, MnSO 4 · H 2 O 1.3 mg/L and CoCl 2 ·6H 2 O is 3.7 mg/L.

실시예 4: 세포 외 효소액의 온도 및 pH 변화에 따른, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성 및 안정성 확인Example 4: Confirmation of glycosidase activity and stability of extracellular enzyme solution according to changes in temperature and pH of the extracellular enzyme solution

본 발명에서는 최적화된 발현 배지를 통해 배양된 세포 외 효소액의 온도 및 pH 변화에 따른, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성을 확인하였다. In the present invention, the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution cultured in an optimized expression medium was confirmed according to changes in temperature and pH of the extracellular enzyme solution.

(1) 세포 외 효소액에 대한 온도 효과 확인(1) Confirmation of temperature effect on extracellular enzyme solution

세포 외 효소액에 대한 온도 효과를 확인하기 위해서, 세포 외 효소액 1 mg/ml 및 기질로서 플라티코사이드 E(Ambo Institute) 0.4 mg/mL가 함유된 완충용액(pH 5.0)을 40℃ 내지 65℃의 범위에서 12시간 동안 반응시켜 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성을 확인하였다. To determine the effect of temperature on the extracellular enzyme solution, a buffer solution (pH 5.0) containing 1 mg/ml of extracellular enzyme solution and 0.4 mg/mL of Platicoside E (Ambo Institute) as a substrate was incubated at 40°C to 65°C. The glycosidase activity of the extracellular enzyme solution was confirmed by reacting for 12 hours.

그 결과, 도 3(a)에 나타난 바와 같이, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성이 높은 온도는 55~60℃(특히, 60℃)인 것으로 확인되나, 60℃ 초과의 온도에서 세포 외 효소액의 안정성이 크게 저하되는 문제점이 있는 것으로 확인된다. 따라서, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성이 높으면서도, 오랜 시간 반응에도 세포 외 효소액의 안정성을 유지하는 온도인 55~60℃가 최적 온도인 것으로 확인된다. As a result, as shown in Figure 3(a), it was confirmed that the temperature at which the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution is high is 55 to 60°C (particularly, 60°C), but at a temperature exceeding 60°C, the temperature of the extracellular enzyme solution is It is confirmed that there is a problem in which stability is greatly reduced. Therefore, it was confirmed that the optimal temperature is 55 to 60°C, which is the temperature at which the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution is high and the stability of the extracellular enzyme solution is maintained even during long-term reaction.

(2) 세포 외 효소액에 대한 pH 효과 확인(2) Confirmation of pH effect on extracellular enzyme solution

세포 외 효소액에 대한 pH 효과를 확인하기 위하여, 세포 외 효소액 1 mg/ml 및 기질로서 플라티코사이드 E(Ambo Institute) 0.4 mg/mL가 함유된 완충용액(50℃)을 pH 3.5 내지 6.0의 범위에서 12시간 동안 반응시켜 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성을 확인하였다. To confirm the pH effect on the extracellular enzyme solution, a buffer solution (50°C) containing 1 mg/ml of the extracellular enzyme solution and 0.4 mg/mL of Platicoside E (Ambo Institute) as a substrate was mixed at a pH in the range of 3.5 to 6.0. The glycosidase activity of the extracellular enzyme solution was confirmed by reacting for 12 hours.

그 결과, 도 3(b)에 나타난 바와 같이, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성 및 안정성이 모두 높은 pH는 모두 4.5~5.0인 것으로 확인된다. pH가 5.0을 초과하는 경우, 세포 외 효소액의 글리코시다아제 활성이 크게 저하되는 양상을 보였고, 오랜 시간 반응에 있어 세포 외 효소액의 안정성 역시 저하되는 양상을 보였다. As a result, as shown in Figure 3(b), the pH at which both the glycosidase activity and stability of the extracellular enzyme solution are high is confirmed to be 4.5 to 5.0. When the pH exceeded 5.0, the glycosidase activity of the extracellular enzyme solution showed a significant decrease, and the stability of the extracellular enzyme solution also showed a decrease during long-term reactions.

실시예 5: 세포 외 효소액을 이용한 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드의 제조Example 5: Preparation of diglu-diapi-digyl-platicoside using extracellular enzyme solution

본 발명에서는 최적화된 발현 배지를 통해 배양된 세포 외 효소액을 이용하여 디아피-플라티코사이드를 제조하였다(도 6 참고).In the present invention, diapi-platicoside was prepared using extracellular enzyme solution cultured in an optimized expression medium (see Figure 6).

먼저, 세포 외 효소액 2.0 mg/ml를 기질로서, 플라티코사이드 E(Ambo Institute) 1.0 mg/ml을 60℃ 및 pH 5.0에서 12시간 동안 반응시켰다. First, 2.0 mg/ml of extracellular enzyme solution was used as a substrate and 1.0 mg/ml of Platicoside E (Ambo Institute) was reacted at 60°C and pH 5.0 for 12 hours.

그 결과, 도 4(a)에 나타난 바와 같이, 플라티코사이드 E는 12시간 만에 디글루-디아피-디자일-플라티코딘 D 0.33 mg/ml로 전환됨을 확인하였다. 이때, 디글루-디아피-디자일-플라티코딘 D는 신규 화합물로서, 그 구조는 이온화 질량 분석(LC-MS, LCQ Deca XP plus ion trap mass spectrometer)을 통해 확인된다(도 5(a) 참고). As a result, as shown in Figure 4(a), it was confirmed that Platicoside E was converted to Diglu-Diapi-Dizyle-Platicodin D 0.33 mg/ml in 12 hours. At this time, diglu-diapy-dizyle-platicodin D is a new compound, and its structure is confirmed through ionization mass spectrometry (LC-MS, LCQ Deca XP plus ion trap mass spectrometer) (Figure 5(a) reference).

한편, 세포 외 효소액 2.0 mg/ml를 기질로서, 폴리갈락신 D3(Ambo Institute) 1.0 mg/ml을 60℃ 및 pH 5.0에서 12시간 동안 반응시켰다. Meanwhile, 2.0 mg/ml of extracellular enzyme solution was used as a substrate and 1.0 mg/ml of polygalaxin D 3 (Ambo Institute) was reacted at 60°C and pH 5.0 for 12 hours.

그 결과, 도 4(b)에 나타난 바와 같이, 폴리갈락신 D3는 10시간 만에 디글루-디아피-디자일-폴리갈락신 D 0.35 mg/ml로 전환됨을 확인하였다. 이때, 디글루-디아피-디자일-폴리갈락신 D는 신규 화합물로서, 그 구조는 이온화 질량 분석(LC-MS, LCQ Deca XP plus ion trap mass spectrometer)을 통해 확인된다(도 5(b) 참고). As a result, as shown in Figure 4(b), it was confirmed that polygalaxin D 3 was converted to diglu-diapi-dizyle-polygalaxin D 0.35 mg/ml in 10 hours. At this time, diglu-diapi-dizyle-polygalaxin D is a new compound, and its structure is confirmed through ionization mass spectrometry (LC-MS, LCQ Deca XP plus ion trap mass spectrometer) (Figure 5(b) reference).

이는 세포 외 효소액이 도라지 뿌리 추출물에 함유된 플라티코사이드의 3번 위치의 글루코오스와 28번 위치의 아피오스 및 자일로스를 모두 가수분해시킨 결과로 볼 수 있다. This can be seen as the result of the extracellular enzyme solution hydrolyzing both glucose at position 3 and apiose and xylose at position 28 of the platycoside contained in the bellflower root extract.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다. The description of the present invention described above is for illustrative purposes, and those skilled in the art will understand that the present invention can be easily modified into other specific forms without changing the technical idea or essential features of the present invention. will be. Therefore, the embodiments described above should be understood in all respects as illustrative and not restrictive.

한국생명공학연구원Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology KCTC14166BPKCTC14166BP 2020040720200407

<110> Konkuk University Industrial Cooperation Corp <120> COMPOSITION AND METHOD FOR PRODUCING PLATICOSIDE WITHOUT GLUCOSE, APIOSE AND XYLOSE BY ENZYME LIQUID OF ASPERGILLUS TUBINGENSIS <130> 2020-I379 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 629 <212> DNA <213> Aspergillus tubingensis <400> 1 tccgtaggtg aacctgcgga aggatcatta attatgttaa agcgccttac ctcttagggt 60 ttcctctggg gtaagtgatt gcttctacac tgtgaaaatt tggctgagag actcagactg 120 gtcatgggta gacctatctg gggtttgatc gatgccactc ctggtttcag gagcaccctt 180 cataataaac ctagaaattc agtattataa agtttaataa aaaacaactt ttaacaatgg 240 atctcttggt tctcgcatcg atgaagaacg tagcaaagtg cgataactag tgtgaattgc 300 atattcagtg aatcatcgag tctttgaacg cagcttgcac tctatggttt ttctatagag 360 tacgcctgct tcagtatcat cacaaaccca cacataacat ttgtttatgt ggtaatgggt 420 cgcatcgctg ttttattaca gtgagcacct aaaatgtgtg tgattttctg tctggcttgc 480 taggcaggaa tattacgctg gtctcaggat ctttttcttt ggttcgccca ggaagtaaag 540 tacaagagta taatccagca actttcaaac tatgatctga agtcaggtgg gattacccgc 600 tgaacttaag catatcaata agcggagga 629 <110> Konkuk University Industrial Cooperation Corp <120> COMPOSITION AND METHOD FOR PRODUCING PLATICOSIDE WITHOUT GLUCOSE, APIOSE AND XYLOSE BY ENZYME LIQUID OF ASPERGILLUS TUBINGENSIS <130> 2020-I379 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 629 <212> DNA <213> Aspergillus tubingensis <400> 1 tccgtaggtg aacctgcgga aggatcatta attatgttaa agcgccttac ctcttagggt 60 ttcctctggg gtaagtgatt gcttctacac tgtgaaaatt tggctgagag actcagactg 120 gtcatgggta gacctatctg gggtttgatc gatgccactc ctggtttcag gagcaccctt 180 cataataaac ctagaaattc agtattataa agtttaataa aaaacaactt ttaacaatgg 240 atctcttggt tctcgcatcg atgaagaacg tagcaaagtg cgataactag tgtgaattgc 300 atattcagtg aatcatcgag tctttgaacg cagcttgcac tctatggttt ttctatagag 360 tacgcctgct tcagtatcat cacaaaccca cacataacat ttgtttatgt ggtaatgggt 420 cgcatcgctg ttttattaca gtgagcacct aaaatgtgtg tgattttctg tctggcttgc 480 taggcaggaa tattacgctg gtctcaggat ctttttcttt ggttcgccca ggaagtaaag 540 tacaagagta taatccagca actttcaaac tatgatctga agtcaggtgg gattacccgc 600 tgaacttaag catatcaata agcggagga 629

Claims (12)

수탁번호 KCTC 14166BP로 기탁된 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액을 포함하는 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물.
A composition for producing diglu-diapi-digyl-platicoside containing Aspergillus tubingensis strain enzyme solution deposited with accession number KCTC 14166BP.
 삭제delete 제1항에 있어서,
상기 효소액은 상기 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주의 세포 외 효소액인, 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물.
According to paragraph 1,
The enzyme solution is an extracellular enzyme solution of the Aspergillus tubingensis strain, a composition for producing diglu-diapi-digyl-platicoside.
 제1항에 있어서,
상기 효소액은 탄소원으로서, 시트러스 펙틴(citrus pectin)을 5 g/L 내지 20 g/L의 농도로 포함하는 발현 배지에서 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주를 배양하여 수득한 것인, 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물.
According to paragraph 1,
The enzyme solution is obtained by culturing Aspergillus tubingensis strain in an expression medium containing citrus pectin at a concentration of 5 g/L to 20 g/L as a carbon source, Diglu -Composition for producing DIAP-DiXyl-Platicoside.
 제1항에 있어서,
상기 효소액은 질소원으로서, 콘 스팁 솔리드(corn steep solid)를 1 g/L 내지 9 g/L의 농도로 포함하는 발현 배지에서 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주를 배양하여 수득한 것인, 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물.
According to paragraph 1,
The enzyme solution is obtained by cultivating Aspergillus tubingensis strain in an expression medium containing corn steep solid at a concentration of 1 g/L to 9 g/L as a nitrogen source, Composition for producing diglu-diapi-dizyle-platicoside.
 제4항 또는 제5항에 있어서,
상기 발현 배지는 KH2PO4, MgSO4 .7H2O, CaCl2, FeSO4 .7H2O, ZnSO4 .7H2O, MnSO4 . H2O 및 CoCl2 .6H2O 를 추가로 포함하는, 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물.
According to clause 4 or 5,
The expression medium is KH 2 PO 4 , MgSO 4 . 7H 2 O, CaCl 2 , FeSO 4 . 7H 2 O, ZnSO 4 . 7H 2 O, MnSO 4 . H 2 O and CoCl 2 . A composition for producing diglu-diapi-dizyle-platicoside, further comprising 6H 2 O.
 제1항에 있어서,
상기 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드는 하기 화학식 1 또는 화학식 2로 표시되는, 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물:
[화학식 1]
,
[화학식 2]
.
According to paragraph 1,
The diglu-diapi-dizyle-platicoside is a composition for producing diglu-diapy-dizyle-platicoside, represented by the following formula (1) or formula (2):
[Formula 1]
,
[Formula 2]
.
 제1항에 있어서,
상기 조성물은 기질로서, 플라티코사이드 E(platycoside E) 또는 폴리갈락신 D3(polygalacin D3)을 포함하는, 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드 제조용 조성물.
According to paragraph 1,
The composition is a composition for producing diglu-diapi-digyl-platycoside, comprising platycoside E or polygalacin D 3 as a substrate.
 수탁번호 KCTC 14166BP로 기탁된 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주 효소액을 기질에 처리하는 단계를 포함하는 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드의 제조방법.
A method for producing diglu-diapi-digyl-platicoside comprising the step of treating an enzyme solution of Aspergillus tubingensis strain deposited with accession number KCTC 14166BP to a substrate.
 제9항에 있어서,
상기 처리는 40~65℃ 및 pH 3.5~6.0 조건에서 2 시간 내지 12 시간 동안 수행되는 것인, 디글루-디아피-디자일-플라티코사이드의 제조방법.
According to clause 9,
The treatment is carried out for 2 to 12 hours at 40 to 65°C and pH 3.5 to 6.0.
 플라티코사이드 내 글루코오스(glucose), 아피오스(apiose) 및 자일로스(xylose) 가수분해 활성을 가지는 아스퍼질러스 튜빙엔시스(Aspergillus tubingensis) 균주(KCTC 14166BP).
Aspergillus tubingensis strain (KCTC 14166BP) with activity to hydrolyze glucose, apiose and xylose in platycoside.
 삭제delete
KR1020200132886A 2020-10-14 2020-10-14 Composition and method for producing platicoside without glucose, apiose and xylose by enzyme liquid of aspergillus tubingensis KR102593288B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020200132886A KR102593288B1 (en) 2020-10-14 2020-10-14 Composition and method for producing platicoside without glucose, apiose and xylose by enzyme liquid of aspergillus tubingensis

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020200132886A KR102593288B1 (en) 2020-10-14 2020-10-14 Composition and method for producing platicoside without glucose, apiose and xylose by enzyme liquid of aspergillus tubingensis

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20220049351A KR20220049351A (en) 2022-04-21
KR102593288B1 true KR102593288B1 (en) 2023-10-24

Family

ID=81437362

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020200132886A KR102593288B1 (en) 2020-10-14 2020-10-14 Composition and method for producing platicoside without glucose, apiose and xylose by enzyme liquid of aspergillus tubingensis

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102593288B1 (en)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115404172B (en) * 2022-09-14 2024-03-05 广西科技大学 Aspergillus tubingensis strain Yw-4 and application thereof

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Kim 등, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, No. 51, 페이지 202-209 (2009.08.12.)*

Also Published As

Publication number Publication date
KR20220049351A (en) 2022-04-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN114214251A (en) Bacillus subtilis for producing D-psicose and culture method and application thereof
CN108587926B (en) Aspergillus niger, preparation method of alpha-L-rhamnosidase thereof, plasmid vector and recombinant bacterium
CN103992953B (en) Dongxiang wild rice endophytic fungus for converting glycyrrhizic acid to generate glycyrrhetinic acid glycoside
KR102593288B1 (en) Composition and method for producing platicoside without glucose, apiose and xylose by enzyme liquid of aspergillus tubingensis
CN101855973B (en) Fungus strain irpex iacteus for producing laccase, and culturing method and application thereof
CN110438015B (en) Immature bitter orange endophytic fungus for producing hesperidinase and method for producing hesperidinase by fermenting immature bitter orange endophytic fungus
KR20210058416A (en) Novel Aspergillus tubingensis C2-2 isolated from Nu-ruk producing ginsenoside compound K biotransformation enzyme and use thereof
JP2021514679A (en) Recombinant oxalate decarboxylase expressed by filamentous fungal host cells
Heng et al. Effects of different parameters on cellulase production by Trichoderma harzianum TF2 using solid‐state fermentation (SSF)
Ruma et al. Production and Optimization of Extra Cellular L-asparaginase by Fusarium solani Isolated from Withania sominifera
KR102519211B1 (en) Composition and method for producing deapi-platicoside enzyme liquid of rhizopus oryzae
CN102807958A (en) Bacterial strain capable of secreting cellulase as well as cellulase extraction method and application thereof
KR20050025059A (en) Novel candida tropicalis cj-fid(kctc 10457bp) and manufacturing method of xylitol thereby
KR102306158B1 (en) Composition and method for producing ginsenoside compound k using enzyme liquid of aspergillus oryzae
KR102440206B1 (en) Composition and method for producing ginsenoside compound k using enzyme liquid of aspergillus tubingensis
JP6916801B2 (en) Production method of sesaminol or sesaminol glycoside
KR20090111119A (en) Composition for producing ginsenoside compound K and preparation method of ginsenoside compound K using thermostable beta-galactosidase
US7846699B2 (en) Process for gibberellic acid production with “Fusarium moniliforme” strains
KR102458031B1 (en) Composition and method for producing ginsenoside compound k using enzyme liquid of aspergillus niger
TWI752463B (en) Oligosaccharide oxidase, preparing method thereof and method of conversion into chito-oligochitosan acid
CN114134057B (en) Saccharomyces cerevisiae SWGCJM001 and culture method and application thereof
CN117089465B (en) Aspergillus wart and application thereof
CN114015673B (en) Lipase Sv-lip5 and application thereof in hydrolysis of astaxanthin ester
CN114717166B (en) Streptomyces alogerus BC1 and application thereof
CN113969299B (en) Method for synthesizing uridine through biotransformation

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal
E902 Notification of reason for refusal
E701 Decision to grant or registration of patent right
GRNT Written decision to grant