KR102459759B1 - 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제 - Google Patents

중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제 Download PDF

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Abstract

본 발명은 생물 의학 분야에 관한 것이고, 특히 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제에 관한 것이다. 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제는 성분 GLP-1, 부갑상샘 호르몬, 아세트아미노펜, 라파마이신, 이카리인, 트라메티닙, EPO 및 VEGF 로 이루어졌다. 본 발명에 따른 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제는 각 성분이 모두 안전하고 독성이 없으며 유도 분화에 필요한 단계가 적고 시간이 짧으며 유도 효율이 높다.

Description

중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제
본 발명은 생물 의학 분야에 관한 것이고, 특히 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제에 관한 것이다.
당뇨병(diabetes mellitus, DM)은 당질 대사 작용이 문란한 것을 주요 특징으로 하는 내분비 대사성 질환이다. 세계보건기구 및 국제당뇨병협회가 공개한 자료에 따르면, 2030년 전세계 당뇨병 환자는 3.7억에 달할 것이라고 예측하였다. 현재 중국 DM 환자는 이미 4500 만명을 넘어섰고 인도에 이어 두 번째이다. 그 병인이 다르긴 하지만 모두 도세포 수량 및 기능 문제로 표현되고, 최종적으로 모두 인슐린으로 치료해야 한다. 인슐린의 응용으로 인해, 특히 최근 몇년 동안 인슐린 제형 및 투여 도경 등 방면에서 모두 일부 진전이 있었다고는 하지만 실제 사용에서 외인성 인슐린은 인체가 자체적으로 분비하는 인슐린처럼 혈당을 완벽하게 제어하고 혈당을 정상으로 일정하게 유지할 수 없다는 것이 증명되었다. 세포 대체 요법은 당뇨병의 중요한 치료 방법으로서, 생리적 방식에 더 근접하는 효과적인 방법이고 혈당에 대한 지속적인 모니터링 및 정밀한 조절이 가능하다. 근년래, 간문맥으로 도세포를 이식하는 것을 통해 당뇨병을 치료하는 것도 일부 효과가 있었으나, 도세포 이식은 공여자 부족 및 심각한 면역 배척 반응 등 두가지 난제에 직면하고 있다.
줄기세포는 자아 갱신 및 다방향 분화 기능을 구비하는 세포로서, 일정한 조건에서 기능성을 구비하는 도세포로 분화할 수 있기에 도세포의 새로운 래원으로 될 수 있다. 현재 줄기세포를 분화시켜 도세포를 얻는 방식에는 1. 배아 줄기세포 분화; 2. 랑게르한스섬 줄기세포 또는 랑게르한스섬 전구체 세포 분화; 3.성체 줄기세포 분화 등 3가지가 있다. 배아 줄기세포는 논리적 쟁의가 있고 랑게르한스섬 줄기세포를 얻기 아주 어렵기에, 성체 줄기세포 래원이 광범위하고 논리적 쟁의가 없기에 도세포 래원으로 사용할 수 있다.
현재 줄기세포 유도 방식에는 주로 체외 유도, 유전자 변형, 단백질 형질 도입 및 조직 마이크로 환경 유도가 있고, 그중 체외 유도는 상이한 자극인자의 조합을 사용하여 줄기세포를 표적 세포로 유도 분화시킨다. 각 실험실의 유도 분화 조건은 서로 다르고, 유도 분화 매커니즘도 아직 명확하지 않으며, 유도 분화 효율이 낮고, 랑게르한스섬 분비 능력은 겨우 정상적인 랑게르한스섬의 1% 정도이며, 유도 과정이 복잡하고 유도 시간이 길며 얻은 세포 수량이 적고 기능이 차하다.
본 발명의 목적은 선행기술에 존재하는 상기 문제를 해결하고, 각 성분이 모두 안전하고 독성이 없으며 유도 분화에 필요한 단계가 적고 시간이 짧으며 유도 효율이 높은 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제를 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해, 본 발명이 사용하는 과제의 해결 수단에서 성분 GLP-1, 부갑상샘 호르몬, 아세트아미노펜, 라파마이신, 이카리인, 트라메티닙, EPO 및 VEGF 로 이루어진다.
상기 유도제의 각 성분의 질량 농도비는 GLP-1 20-40 mg/L, 부갑상샘 호르몬 6-12 mg/L, 아세트아미노펜 2-8 mg/L, 라파마이신 2-8 mg/L, 이카리인 2-8 mg/L, 트라메티닙 0.3-0.6 mg/L, EPO 2-4 μg/L, VEGF 2-4 μg/L이다.
바람직하게, 상기 유도제의 각 성분의 질량 농도비는 GLP-1 30 mg/L, 부갑상샘 호르몬 9 mg/L, 아세트아미노펜 5 mg/L, 라파마이신 5 mg/L, 이카리인 5 mg/L, 트라메티닙 0.4 mg/L, EPO 3 μg/L, VEGF 3 μg/L이다.
본 발명에 따른 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제는 아래 장점이 있다.
1. 유전자 트랜스펙션이 필요없기에 유전자 변화 및 암 위험이 없다.
2. 유도 단계가 적다. 현재 문헌에 보도된 방법은 주로 2 단계 또는 3 단계이지만, 본 발명의 유도제를 사용하면 1단계만 필요하다.
3. 유도 시간이 짧다. 현재 문헌에 따르면 일반적으로 유도에 10일 이상 소요되지만, 본 발명의 유도제를 사용하면 5일만 필요하다.
4. 본 발명의 유도제를 사용하여 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도시키는 유도 분화 효율이 높다.
5. 본 발명의 유도제는 각 성분이 모두 안전하고 독성이 없다.
6. 중간엽 줄기세포가 도세포로 유도 분화된 후. 이식 후 배척이 없고 논리적 문제가 없으며 안전성이 높고 임상 응용 전망이 좋다.
도 1은 디티존 염색 반응이고 본 발명의 유도군은 디티존 염색 후 붉은 색을 나타낸다.
실시예 1
본 실시예의 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제는 아래 질량 농도비의 성분으로 이루어진다. GLP-1 30 mg/L, 부갑상샘 호르몬 9 mg/L, 아세트아미노펜 5 mg/L, 라파마이신 5 mg/L, 이카리인 5 mg/L, 트라메티닙 0.4 mg/L, EPO 3 μg/L, VEGF 3 μg/L. 상기 성분을 질량 농도비에 따라 순차적으로 인간 중간엽 줄기세포 무혈청 배지(또는 DMEM + 10% FBS 또는 시중의 다른 유형의 중간엽 줄기세포 배지)에 넣고, 균일하게 혼합하며 여과하여 제균 처리하면 된다.
본 발명의 유도제의 각 성분은 모두 시중에서 구매 가능한 제품이다. 인간 중간엽 줄기세포 무혈청 배지는 브랜드 LONZA, 품목 번호 00190632; GLP-1(글루카곤유사펩티드1)는 브랜드 Sigma, 품목 번호 scp0153; 부갑상샘 호르몬은 브랜드 Sigma, 품목 번호 P7036; 아세트아미노펜, 상하이 Yiji실업유한회사, 품목 번호 　Y903952; 라파마이신은 브랜드 TargetMol　, 품목 번호 T1537; 이카리인은 상하이 weijing 바이오, 품목 번호 489-32-7; 트라메티닙은 브랜드 meilun 바이오, 품목 번호 MB5401; EPO는 브랜드 PeproTech , 품목 번호 CYT-201; VEGF는 브랜드 PeproTech, 품목 번호 96-100-20-2 이다.
실시예 2
본 실시예의 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제는 아래 질량 농도비의 성분으로 이루어진다. GLP-1 20 mg/L, 부갑상샘 호르몬 6 mg/L, 아세트아미노펜 2 mg/L, 라파마이신 2 mg/L, 이카리인 2 mg/L, 트라메티닙 0.3 mg/L, EPO 2 μg/L, VEGF 2 μg/L. 상기 성분을 질량 농도비에 따라 순차적으로 인간 중간엽 줄기세포 무혈청 배지(또는 DMEM + 10% FBS)에 넣고, 균일하게 혼합하며 여과하여 제균 처리하면 된다.
실시예 3
본 실시예의 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제는 아래 질량 농도비의 성분으로 이루어진다. GLP-1 40 mg/L, 부갑상샘 호르몬 12 mg/L, 아세트아미노펜 8 mg/L, 라파마이신 8 mg/L, 이카리인 8 mg/L, 트라메티닙 0.6 mg/L, EPO 4 μg/L, VEGF 4 μg/L. 상기 성분을 질량 농도비에 따라 순차적으로 인간 중간엽 줄기세포 무혈청 배지(또는 DMEM + 10% FBS)에 넣고, 균일하게 혼합하며 여과하여 제균 처리하면 된다.
실시예 4
인간 탯줄 유래 중간엽 줄기세포를 예로 들어 본 발명의 유도제 효과를 설명한다.
1. 인간 탯줄 유래 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화한다
3 계대 인간 탯줄 유래 중간엽 줄기세포를 0.125%～0.01％ Trypsin-EDTA 용액으로 소화시키고 세포를 수집하며, 세포 현탁액을 제조하고, 세포 계수판으로 생존 세포 밀도를 세며, 밀도를 1×104/cm2로 조절하고, 폴리라이신으로 처리한 덮개 유리가 미리 놓여진 24 웰 플레이트에 접종하여 세포 커버슬립(coverslip)을 제조한다. 세포가 80% 융합될 때까지 기다리고 생장이 왕성할 때 유도 분화를 진행하며 그룹화 상황은 표 1과 같다.
유도 조별
구분 유도 조건
대조군(Blank control) 인간 중간엽 줄기세포 무혈청 배지
유도군 1(통상적인 방법) 통상적인 유도 분화 배지: 니코틴아미드 1.2g/L, 타우린 0.50 g/L, GLP-1 30.5 mg/L; 인간 중간엽 줄기세포 무혈청 배지.
유도군 2(본 발명) 실시예 1 중 본 발명의 유도 분화 배지
2. 유도 후 도세포의 감정
(1) 디티존 염색 반응: 상기 3개 그룹을 취하여 각각 5 일 동안 유도시킨 후 얻은 도세포(유도군 1은 10 일 동안 유도 분화해야 함)를 원래 배지를 제거하고 PBS로 2회 세척하며, 각각 2ml PBS 및 50ul 디티존 작업액에 넣고 37℃에서 10분 동안 배양한 후 염색액을 제거하고 PBS로 2회 세척하며 세포 착색 상황을 관찰하고 사진을 찍는다. 도면에 도시된 바와 같이, 2개의 유도군은 디티존 염색 후 붉은 색(도 1)의 양성 반응을 나타내고 대조군은 음성이다.
(2) 화학 발광 면역 분석법으로 인슐린 수준을 측정한다. 상기 3개 그룹을 취하여 각각 5일 동안 유도시킨 후(유도군 1은 10 일 동안 유도 분화해야 함), 세포 배양 상청액에서 인슐린 함량을 측정하고, 유도군 2의 세포 분비 인슐린 농도 518.7 mU/L는 유도군 1의 세포 분비 인슐린 농도 212.1mU/L보다 훨씬 높으며, 대조군에서 검출된 인슐린 농도는 0으로 본 발명의 유도제가 유도 효율을 현저히 높일 수 있음을 설명한다.
(3) ELISA 키트를 이용하여, 본 발명의 유도제로 유도하여 얻은 섬 모양 세포가 도세포 기능을 구비하는지의 여부를 측정한다. 이 측정 과정은 직접 Mercodia 사가 제공한 “C-peptide ELISA assays” 표준 과정에 따라 조작한다. 최종 결과는 C-펩티드가 검출되었고, 이는 본 발명의 유도제로 유도 분화하여 얻은 섬 모양 세포가 인슐린을 분비할 수 있음을 설명한다.
(4) 포도당 자극 실험: 100 개의 본 발명의 유도제로 5 일 동안 유도 분화한 도세포 클러스터(50 ~ 150 um)를 선택하여 1.5 ml 원심분리관에 넣고, PBS로 2회 세척하며, 1 ml 무당 DMEM에 넣고 3~6h 동안 사전 배양한 다음, 5.6 mmol/L 포도당, 16.7 mmol/L 포도당을 함유하는 DMEM 300ul에서 순차적으로 2h 배양하고 상청액을 수집하며, ELISA 법으로 상청액 중 상이한 농도의 포도당 자극에 의한 인슐린 분비량을 측정한다. 대조군 세포 상청액에서는 인슐린이 거의 검출되지 않았고, 유도된 도세포 클러스터는 5.6 mmol/L 포도당의 자극에 의해 소량의 인슐린을 분비하였고, 16.7 mmol/L 포도당으로 2h 배양 후, 인슐린 분비량이 현저히 높아졌는 바(P<0.001) 저당 조건에서의 약 2배이다. 이 결과로부터 유도 후 세포 클러스터가 포도당 자극에 민감하고 그 인슐린 분비량은 외부 환경에 의해 조절 제어가 가능하다는 것을 알 수 있다.
(5) 체내 이식 실험: 우선 당뇨병 래트 모델을 준비한다. 암컷, 수컷 상관없이 체중이 약 180 ~ 200 g인 성년 Wistar 래트를 선택한다. 70 mg/kg 사용량으로 각 래트의 복강에 스트렙토조신을 주사한다. 0.1 M 구연산 완충액(PH = 4.5)을 이용하여 스트렙토조신 분말을 액체로 제조하여 사용하고, 조제하여 바로 사용한다. 래트 혈당이 높아지고(≥16.7 mmol/L) 1주 동안 안정되면, 당뇨병 모델이 구축된 것을 표명한다. 무균 조건에서 당뇨병 래트 신낭포 또는 간문맥의 작은 가지에 300 개의 본 발명의 유도제로 유도하여 얻은 섬 모양 세포 클러스터(50 ~ 150 um)를 주입한다. 시술 후, 혈당 상황을 정기적으로 관찰 및 측정한다. 결과 당뇨병 래트는 세포 주입 3일 후 혈당이 평균 7.3 mmol/L 강하되었다. 이는 본 발명의 유도제로 유도 분화하여 얻은 도세포 클러스터가 현저한 혈당 강하 작용이 있다는 것을 표명한다.

Claims (3)

  1. 성분 GLP-1, 부갑상샘 호르몬, 아세트아미노펜, 라파마이신, 이카리인, 트라메티닙, EPO 및 VEGF 로 이루어진 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제.
  2. 제1항에 있어서,
    각 성분의 질량 농도비는 GLP-1 20-40 mg/L, 부갑상샘 호르몬 6-12 mg/L, 아세트아미노펜 2-8 mg/L, 라파마이신 2-8 mg/L, 이카리인 2-8 mg/L, 트라메티닙 0.3-0.6 mg/L, EPO 2-4 μg/L, VEGF 2-4 μg/L인 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제.
  3. 제2항에 있어서,
    각 성분의 질량 농도비는 GLP-1 30 mg/L, 부갑상샘 호르몬 9 mg/L, 아세트아미노펜 5 mg/L, 라파마이신 5 mg/L, 이카리인 5 mg/L, 트라메티닙 0.4 mg/L, EPO 3 μg/L, VEGF 3 μg/L인 것을 특징으로 하는 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제.
KR1020207038051A 2020-01-13 2020-05-25 중간엽 줄기세포를 도세포로 유도 분화하는 유도제 KR102459759B1 (ko)

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN116574670B (zh) * 2023-05-12 2024-01-02 中科中銮生物科技(广东)有限公司 一种诱导间充质干细胞向胰岛样细胞分化的方法及其用途

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104845932A (zh) 2015-04-29 2015-08-19 天津中医药大学 淫羊藿苷的新用途

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CZ2004696A3 (cs) * 2001-11-09 2005-02-16 Artecel Sciences, Inc. Endokrinní pankreatická diferenciace buněk stromatu odvozených z adipózní tkáně a její použití
KR101089591B1 (ko) * 2001-12-07 2011-12-05 제론 코포레이션 인간 배아 줄기세포 유래의 섬세포
US20050208029A1 (en) * 2002-04-17 2005-09-22 Akihiro Umezawa Method of forming pancreatic beta cells from mesenchymal cells
DE60326002D1 (de) * 2002-10-22 2009-03-12 Waratah Pharmaceuticals Inc Behandlung von diabetes.
WO2005086860A2 (en) * 2004-03-09 2005-09-22 Gang Xu Methods for generating insulin-producing cells
US20060153894A1 (en) * 2004-06-30 2006-07-13 Ragae Ghabrial Multi-compartment delivery system
US20110172826A1 (en) * 2005-12-14 2011-07-14 Amodei Dario G Device including altered microorganisms, and methods and systems of use
CN107574142B (zh) * 2007-11-27 2021-07-06 生命扫描有限公司 人胚胎干细胞的分化
TWI434931B (zh) * 2010-12-03 2014-04-21 Yung Kai Lin 細胞培養基之營養添加劑
ITMI20110780A1 (it) * 2011-05-06 2012-11-07 Euroclone Spa Terreno di coltura per differenziare cellule staminali in cellule beta
CN103756954A (zh) * 2014-01-22 2014-04-30 青岛中天干细胞工程有限公司 一种将人脂肪间充质干细胞诱导成胰岛素分泌细胞的诱导剂、诱导培养基及方法
KR101690872B1 (ko) * 2014-08-19 2016-12-29 이화여자대학교 산학협력단 편도 유래 중간엽 줄기세포로부터 인슐린 분비 세포의 분화 방법
CN105062970B (zh) * 2015-08-25 2017-12-29 青岛瑞思科生物科技有限公司 一种将间充质干细胞诱导成神经细胞的诱导剂及诱导分化完全培养基
CN105132369B (zh) * 2015-08-25 2018-06-26 青岛瑞思科生物科技有限公司 一种将间充质干细胞转化为睾酮分泌细胞的诱导剂及诱导培养基
CN106190965A (zh) * 2016-07-19 2016-12-07 袁肇斌 一种骨髓间充质干细胞体外培养液及培养扩增方法
CN107372464B (zh) * 2017-08-21 2020-11-03 成都康景生物科技有限公司 一种维持间充质干细胞活性的运输保存液与制备方法
CN108865989A (zh) * 2018-07-23 2018-11-23 吉林济惠生物科技有限公司 一种脐带间充质干细胞的培养基

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104845932A (zh) 2015-04-29 2015-08-19 天津中医药大学 淫羊藿苷的新用途

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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TOXICOLOGY AND APPLIED PHARMACOLOGY, VOL. 104, P.225_234 (1990)

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