KR102283338B1

KR102283338B1 - Transepidermal delivery system comprising reverse micell

Info

Publication number: KR102283338B1
Application number: KR1020190133886A
Authority: KR
Inventors: 김광년; 손주현; 조사랑
Original assignee: 주식회사 유나이티드엑티브
Priority date: 2018-10-26
Filing date: 2019-10-25
Publication date: 2021-07-29
Also published as: WO2020085857A1; WO2020085857A9; KR20200047430A

Abstract

본 발명은 역미셀(reverse micelle)을 포함하는 경피 전달 시스템을 이용하여 피부 활성물질을 지질층 사이로 통과시켜 피부에 효과적으로 전달할 수 있도록 한다. 또한, 산화되기 쉬운 활성물질, 난용성물질, 항산화물질, 수용성물질, 결정성물질 등의 안정성이 낮고, 피부투과가 어려운 생리활성물질을 화장품 제형에 용이하게 접목시킬 수 있으며, 용해성, 유화, 산화 안정성, 피부 내 효능 등을 향상시킬 수 있다. 또한, 합성물이 아닌 발효물로써 친환경적이고, 피부자극이 없는 천연유래의 경피 전달 시스템으로서 다양한 분야에 적용할 수 있다.The present invention uses a transdermal delivery system including a reverse micelle to pass a skin active material between lipid layers so that it can be effectively delivered to the skin. In addition, bioactive substances that are easily oxidized, poorly soluble substances, antioxidant substances, water-soluble substances, crystalline substances, etc., have low stability and are difficult to penetrate into the skin. Stability, efficacy in the skin, etc. can be improved. In addition, as a non-synthetic fermented product, it is eco-friendly and can be applied to various fields as a natural-derived transdermal delivery system without skin irritation.

Description

역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템{TRANSEPIDERMAL DELIVERY SYSTEM COMPRISING REVERSE MICELL}Transdermal delivery system comprising reverse micelles {TRANSEPIDERMAL DELIVERY SYSTEM COMPRISING REVERSE MICELL}

본 발명은 역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템에 관한 것이다.The present invention relates to a transdermal delivery system comprising reverse micelles.

본 출원은 2018.10.26자 한국 특허 출원 제2018-0129023호에 기초한 우선권의 이익을 주장하며, 해당 한국 특허 출원의 문헌에 개시된 모든 내용은 본 명세서의 일부로서 포함된다.This application claims the benefit of priority based on Korean Patent Application No. 2018-0129023 filed on October 26, 2018, and all contents disclosed in the literature of the Korean patent application are incorporated as a part of this specification.

인간의 피부는 크게 표피와 진피, 피하지방으로 나누어지고 다시 표피는 각질층, 투명층, 과립층, 유극층, 기저층으로 세분화되어 있다. 피부의 최외각층인 각질층은 죽은 케라틴세포 덩어리로 이루어져 있으며, 주로 단백질로 이루어져 있는 각질 세포로 구성되고, 각질 세포 간의 사이를 세라마이드, 콜레스테롤, 유리지방산 등의 지질이 채우고 있는 구조를 가진다. 이 지질층은 체내 수분이 증발되는 것을 방지하며, 외부 침입에 대해 신체를 보호하는 건강학적 기능과 동시에, 피부를 윤택하고 매끄럽게 보이게 하는 심미적 기능을 가지고 있다.Human skin is largely divided into epidermis, dermis, and subcutaneous fat, and the epidermis is further subdivided into stratum corneum, transparent layer, granular layer, stratum corneum, and basal layer. The stratum corneum, which is the outermost layer of the skin, is composed of a mass of dead keratinocytes, and is mainly composed of keratinocytes composed of protein, and has a structure in which lipids such as ceramide, cholesterol, and free fatty acid fill the spaces between the keratinocytes. This lipid layer prevents the evaporation of moisture from the body and has a health function to protect the body against external invasion, and an aesthetic function to make the skin look shiny and smooth.

피부 내 물질을 투과시키기 위한 경로는 intrapathway, interpathway, transcelluar pathway가 있다. 이중, 피부 내로의 물질 투과효율은 interpathway가 높다. 한편, 피부 각질층은 친수성 물질보다 소수성 물질이 흡수 및 투과되기 용이하다. There are intrapathway, interpathway, and transcelluar pathways for permeation of substances in the skin. Among them, the interpathway is high for the efficiency of material permeation into the skin. On the other hand, the stratum corneum of the skin is easier to absorb and permeate the hydrophobic material than the hydrophilic material.

약물의 피부 흡수에 영향을 미치는 요인은 크기, 모양, 표면 전하, 친유성, 투과 촉진제, 제형의 형태 그리고 각질층의 상태이다. 유효 성분을 피부에 자연스럽게 통과시키기 위해서는 소수성 혹은, 친수성과 소수성이 결합된 담체를 이용해야 하며 특히, 수용성 활성물질을 피부에 전달하기 위해 미셀(micelle) 혹은 리포좀(liposome)과 같은 형태의 담체를 이용하는 것이 일반적이다.Factors affecting the skin absorption of drugs are size, shape, surface charge, lipophilicity, penetration enhancer, form of formulation, and the state of the stratum corneum. In order to allow the active ingredient to pass through the skin naturally, hydrophobicity or a carrier combining hydrophilicity and hydrophobicity should be used. it is common

그러나 이러한 미셀 혹은 리포좀의 형태는 피부의 지질층을 통과시켜 유효물질을 흡수시키기에는 한계가 있다. 이는 피부의 최외각층인 각질층은 각질세포들로 쌓여있고, 그 사이 사이는 지질성분으로 이루어진 구조이기 때문에 구조적으로 친수성의 물질보다는 소수성의 물질이 각질세포 사이로 투과시키는 것이 용이하다.However, these micelles or liposomes have a limit in absorbing active substances through the lipid layer of the skin. This is because the stratum corneum, which is the outermost layer of the skin, is stacked with keratinocytes and the lipid component between them is structurally easier for a hydrophobic substance to permeate between the keratinocytes rather than a hydrophilic substance.

역미셀이란, 계면활성제의 활성에 의해 유기용매 안에 나노미터 사이즈(1~10 nm)의 둥근 형태의 입자가 분산되어 있는 것을 의미한다.Reverse micelles mean that nanometer-sized (1-10 nm) round particles are dispersed in an organic solvent by the activity of a surfactant.

한편, 역미셀계(reverse micelle system)는 비극성용매의 환경에서 계면활성제의 소수성 부분(tail)이 외부로 향하고, 친수성 부분(head)이 내부로 향하도록 자발적으로 배열되는 응집체이다. 이는 나노크기의 입자로 분산될 수 있다.On the other hand, the reverse micelle system is an aggregate that is spontaneously arranged so that the hydrophobic part (tail) of the surfactant faces outward and the hydrophilic part (head) faces inward in the environment of a non-polar solvent. It can be dispersed into nano-sized particles.

그러므로, 역미셀을 적용하여 피부로부터 유효성분을 효과적으로 침투시킬 수 있는 방법이 필요하다. 또한, 산화 및 분해에 취약한 활성물질을 포집함으로 써 안정성을 향상시키고자 하였다.Therefore, there is a need for a method that can effectively penetrate active ingredients from the skin by applying reverse micelles. In addition, it was attempted to improve stability by capturing active substances that are vulnerable to oxidation and decomposition.

상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은,The present invention in order to solve the above problems,

Candida bombicola UA-06(기탁번호: KCTC13855BP, 한국생명공학연구원) 미생물로부터 형성된 발효물; 및 Fermented product formed from Candida bombicola UA-06 (Accession No.: KCTC13855BP, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology); and

피부 활성물질을 포함하되,including skin active substances,

상기 발효물은 역미셀 구조를 형성하고, 상기 피부 활성물질은 상기 역미셀 구조 내에 포집된 형태인 것인, 역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템을 제공한다.The fermented product forms a reverse micelle structure, and the skin active material is entrapped in the reverse micelle structure.

일구현예에 따르면, 상기 발효물은 Candida bombicola UA-06 미생물을 활성화시키는 종균배양 단계; 및According to one embodiment, the fermented product is a seed culture step of activating Candida bombicola UA-06 microorganisms; and

상기 종균배양시킨 미생물 및 식물성 오일을 발효시키는 발효 단계를 포함하는 방법으로 제조될 수 있다.It may be prepared by a method comprising a fermentation step of fermenting the seed cultured microorganism and vegetable oil.

일구현예에 따르면, 상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물(yeast extract), 글리세린(glycerin), K₂HPO₄, KH₂PO₄, NH₄NO₃ 및 MgSO₄를 포함할 수 있다.According to one embodiment, the medium used in the seed culture step may include yeast extract, glycerin, K ₂ HPO ₄ , KH ₂ PO ₄ , NH ₄ NO ₃ and MgSO ₄ .

일구현예에 따르면, 상기 발효 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물(yeast extract), 글리세린(glycerin), K₂HPO₄, KH₂PO₄, NH₄NO₃, MgSO₄, 글루쿠로노락톤(glucuronolactone) 및 식물성 오일을 포함할 수 있다.According to one embodiment, the medium used in the fermentation step is yeast extract, glycerin, K ₂ HPO ₄ , KH ₂ PO ₄ , NH ₄ NO ₃ , MgSO ₄ , glucuronolactone ( glucuronolactone) and vegetable oils.

일구현예에 따르면, 상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물(yeast extract) 5 내지 30g/L, 글리세린(glycerin) 10 내지 40g/L, K₂HPO₄ 10 내지 50g/L, KH₂PO₄ 3 내지 15g/L, NH₄NO₃ 1 내지 10g/L 및 MgSO₄ 0.5 내지 5g/L를 포함하고,According to one embodiment, the medium used in the seed culture step is yeast extract 5 to 30 g/L, glycerin 10 to 40 g/L, K ₂ HPO ₄ 10 to 50 g/L, KH ₂ PO ₄ 3 to 15 g/L, NH ₄ NO ₃ 1 to 10 g/L and MgSO ₄ 0.5 to 5 g/L,

상기 발효 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물(yeast extract) 0.5 내지 3g/L, 글리세린(glycerin) 1 내지 20g/L, K₂HPO₄ 10 내지 50g/L, KH₂PO₄ 3 내지 15g/L, NH₄NO₃ 1 내지 10g/L, MgSO₄ 0.5 내지 5g/L, 글루쿠로노락톤(glucuronolactone) 40 내지 200g/L 및 식물성 오일 50 내지 1000g/L을 포함할 수 있다.The medium used in the fermentation step is 0.5 to 3 g/L of yeast extract, 1 to 20 g/L of glycerin, K ₂ HPO ₄ 10 to 50 g/L, KH ₂ PO ₄ 3 to 15 g/L, NH ₄ NO ₃ 1 to 10 g/L, MgSO ₄ 0.5 to 5 g/L, glucuronolactone 40 to 200 g/L, and vegetable oil 50 to 1000 g/L.

일구현예에 따르면, 상기 종균배양 단계는 15 내지 30℃, 100 내지 500rpm, 0.5 내지 2vvm, 호기 조건으로 진행되고,According to one embodiment, the seed culture step is carried out at 15 to 30 ℃, 100 to 500 rpm, 0.5 to 2vvm, aerobic conditions,

상기 발효 단계는 20 내지 35℃의 온도 및 50 내지 200rpm의 혼합 조건으로 진행될 수 있다.The fermentation step may be performed at a temperature of 20 to 35° C. and mixing conditions of 50 to 200 rpm.

일구현예에 따르면, 상기 종균발효 단계는 균의 지수생장 종말점 시점에서 종료시킬 수 있다.According to one embodiment, the seed fermentation step may be terminated at the endpoint of the exponential growth of the bacteria.

일구현예에 따르면, 상기 식물성 오일은 해바라기씨, 포도씨, 카놀라, 쌀눈, 올리브, 대두, 아르간, 현미, 들깨, 참깨, 아몬드, 땅콩, 옥수수, 홍삼, 아보카도, 마카다미아, 코코넛, 로즈힙, 비타민나무씨, 시어나무열매, 기름야자, 베르가모트열매, 동백씨, 홍화씨, 살구씨, 양귀비씨, 달맞이꽃씨, 피마자씨, 녹차씨, 메도우폼씨, 아마씨 및 햄프씨로 이루어지는 군으로부터 추출된 것일 수 있다.According to one embodiment, the vegetable oil is sunflower seed, grape seed, canola, rice germ, olive, soybean, argan, brown rice, perilla, sesame, almond, peanut, corn, red ginseng, avocado, macadamia, coconut, rosehip, vitamin tree seed , shea fruit, oil palm, bergamot fruit, camellia seed, safflower seed, apricot seed, poppy seed, evening primrose seed, castor seed, green tea seed, meadowfoam seed, flax seed and hemp seed.

일구현예에 따르면, 상기 발효 단계 후 정제공정 단계를 더 포함할 수 있고, 상기 정제 단계는 발효물을 정치시켜 상층과 하층을 분리하여 하층을 폐 기하고, MgSO₄를 첨가하여 교반 후 원심분리하여 미생물 및 수분을 제거하는 단계 및,According to one embodiment, it may further include a purification process step after the fermentation step, wherein the purification step leaves the fermentation product to separate the upper layer and the lower layer, discards the lower layer, _{and adds MgSO 4} and stirs and centrifugation. to remove microorganisms and moisture; and

친화크로마토그라피 컬럼에 규산마그네슘을 충진제로 사용하여 지방산 및 불순물이 제거된 오일을 회수하는 단계를 포함할 수 있다.Using magnesium silicate as a filler in the affinity chromatography column may include recovering the oil from which fatty acids and impurities are removed.

일구현예에 따르면, 상기 역미셀 내에 피부 활성물질이 포집된 형태를 형성할 수 있다.According to one embodiment, a form in which the skin active material is collected in the reverse micelle may be formed.

일구현예에 따르면, 상기 피부 활성물질은 비타민C, 비타민 B, 코직산, 이소플라본, 아미노산류, 펩타이드류, 아데노신, 단백질 분해효소 및 효소류, 알부틴, 히알루론산, 하이드로퀴논, 세라마이드, 코엔자임Q10, 테트라하이드로커큐미노이드, 안토시아닌, 콜라겐, 레티놀, 벌사상자추출물, 치자추출물, 강황추출물 및 병풀추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있다.According to one embodiment, the skin active material is vitamin C, vitamin B, kojic acid, isoflavones, amino acids, peptides, adenosine, proteolytic enzymes and enzymes, arbutin, hyaluronic acid, hydroquinone, ceramide, coenzyme Q10, It may include one or more selected from the group consisting of tetrahydrocurcuminoids, anthocyanins, collagen, retinol, bee saline extract, gardenia extract, turmeric extract and centella asiatica extract.

기타 본 발명에 따른 구현예들의 구체적인 사항은 이하의 상세한 설명에 포함되어 있다.The specific details of other embodiments according to the present invention are included in the detailed description below.

본 발명은 역미셀(reverse micelle)을 포함하는 경피 전달 시스템을 이용하여 피부 활성물질을 지질층에 통과시켜 피부에 효과적으로 전달할 수 있도록 한다. 또한, 산화되기 쉬운 활성물질, 난용성물질, 항산화물질, 수용성물질 등의 생리활성물질을 화장품 제형에 용이하게 접목시킬 수 있으며, 용해성, 유화, 산화 안정성, 피부 내 효능 등을 향상시킬 수 있다. 또한, 합성물이 아닌 발효물로써 친환경적이고, 피부세포에 대한 독성이 없으므로 인체 친화적인 경피 전달 시스템으로서 다양한 분야에 적용할 수 있다.The present invention uses a transdermal delivery system including a reverse micelle to pass a skin active material through a lipid layer so that it can be effectively delivered to the skin. In addition, physiologically active substances such as active substances that are easily oxidized, poorly soluble substances, antioxidants, and water-soluble substances can be easily grafted into cosmetic formulations, and solubility, emulsification, oxidative stability, and skin efficacy can be improved. In addition, as a fermented product rather than a synthetic product, it is eco-friendly and has no toxicity to skin cells, so it can be applied to various fields as a human-friendly transdermal delivery system.

도 1은 열 안정성 평가 결과를 나타내는 사진이다.
도 2 및 3은 역미셀의 입자 크기를 측정한 결과를 나타내는 그래프이다.
도 4는 역미셀을 관찰한 현미경 사진이다.
도 5 내지 7은 피부 투과량 측정 결과를 나타내는 그래프이다.1 is a photograph showing a thermal stability evaluation result.
2 and 3 are graphs showing the results of measuring the particle size of the reverse micelle.
4 is a photomicrograph of observing reverse micelles.
5 to 7 are graphs showing the measurement results of the amount of skin permeation.

본 발명은 다양한 변환을 가할 수 있고 여러 가지 실시예를 가질 수 있는 바, 특정 실시예를 도면에 예시하고 상세한 설명에 상세하게 설명하고자 한다. 그러나, 이는 본 발명을 특정한 실시 형태에 대해 한정하려는 것이 아니며, 본 발명의 사상 및 기술 범위에 포함되는 모든 변환, 균등물 내지 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략한다.Since the present invention can apply various transformations and can have various embodiments, specific embodiments are illustrated in the drawings and described in detail in the detailed description. However, this is not intended to limit the present invention to specific embodiments, and it should be understood to include all modifications, equivalents and substitutes included in the spirit and scope of the present invention. In describing the present invention, if it is determined that a detailed description of a related known technology may obscure the gist of the present invention, the detailed description thereof will be omitted.

천연유래의 계면활성제는 피부에 유용한 성분을 다량 함유하고 있으며, 그 중, 미생물을 이용하는 생물 계면활성제(bio-surfactant)는 많은 이점을 가진다.Naturally derived surfactants contain a large amount of ingredients useful for the skin, and among them, bio-surfactants using microorganisms have many advantages.

한편, 계면활성제는 일정 농도 이상일 때, 수상에서 중심에 소수기를 밀집시키는 미셀(micelle) 구조를 이루는 것이 일반적이다. 반대로, 유상에서는 저분자 친수기를 중심에 밀집시키는 역미셀(reverse micelle) 구조를 이룬다. 역미셀은 미셀보다 피부의 지질층을 통과하는데 더 효율적이기 때문에 세포간극을 통하여 수용성 활성물질을 피부세포에 안정적으로 전달하는 시스템으로 적용할 수 있다.On the other hand, when the surfactant is at a certain concentration or more, it is common to form a micelle structure in which hydrophobic groups are concentrated in the center of the aqueous phase. Conversely, in the oil phase, a reverse micelle structure is formed in which low molecular weight hydrophilic groups are concentrated in the center. Reverse micelles are more efficient at passing through the lipid layer of the skin than micelles, so they can be applied as a system for stably delivering water-soluble active substances to skin cells through the intercellular space.

그러므로 본 발명에서는 이러한 역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템을 제공하고자 한다.Therefore, it is an object of the present invention to provide a transdermal delivery system including such reverse micelles.

구체적으로 본 발명은,Specifically, the present invention

피부 활성물질을 포함하되,including skin active substances,

일구현예에 따르면, 상기 발효물은 Candida bombicola UA-06 미생물을 활성화시키는 종균배양 단계 및 상기 종균배양시킨 미생물 및 식물성 오일을 발효시키는 발효 단계를 포함할 수 있다.According to one embodiment, the fermented product may include a seed culture step of activating the Candida bombicola UA-06 microorganism and a fermentation step of fermenting the seed cultured microorganism and vegetable oil.

일구현예에 따르면, 상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물(yeast extract), 글리세린(glycerin), K₂HPO₄, KH₂PO₄, NH₄NO₃ 및 MgSO₄를 포함할 수 있다. 구체적으로 예를 들어, 이스트 추출물(yeast extract) 5 내지 30g/L, 예를 들어 10g/L, 글리세린(glycerin) 10 내지 40g/L, 예를 들어 20g/L, K₂HPO₄ 10 내지 50g/L, 예를 들어 25g/L, KH₂PO₄ 3 내지 15g/L, 예를 들어 7 g/L, NH₄NO₃ 1 내지 10, 예를 들어 3 g/L 및 MgSO₄ 0.5 내지 5g/L, 예를 들어 2g/L을 포함할 수 있다. 또한, 추가로 물을 포함할 수 있고, 구체적으로는 정제수가 바람직하며, 예를 들어 이온교환수지를 이용한 정제수를 사용할 수 있다.According to one embodiment, the medium used in the seed culture step may include yeast extract, glycerin, K ₂ HPO ₄ , KH ₂ PO ₄ , NH ₄ NO ₃ and MgSO ₄ . Specifically, for example, yeast extract (yeast extract) 5 to 30 g / L, for example 10 g / L, glycerin (glycerin) 10 to 40 g / L, for example 20 g / L, K ₂ HPO ₄ 10 to 50 g / L, eg 25 g/L, KH ₂ PO ₄ 3-15 g/L, eg 7 g/L, NH ₄ NO ₃ 1-10, eg 3 g/L and MgSO ₄ 0.5-5 g/L , for example, 2 g/L. In addition, it may further contain water, specifically, purified water is preferable, for example, purified water using an ion exchange resin may be used.

일구현예에 따르면, 상기 발효 단계에서 사용하는 배지는 이스트 추출물(yeast extract), 글리세린(glycerin), K₂HPO₄, KH₂PO₄, NH₄NO₃, MgSO₄, 글루쿠로노락톤(glucuronolactone) 및 식물성 오일을 포함할 수 있다. 구체적으로 예를 들어, 이스트 추출물(yeast extract) 0.5 내지 3g/L, 예를 들어 1g/L, 글리세린(glycerin) 1 내지 20g/L, 예를 들어 20g/L, K₂HPO₄ 10 내지 50g/L, 예를 들어 25g/L, KH₂PO₄ 3 내지 15g/L, 예를 들어 7g/L, NH₄NO₃ 1 내지 10, 예를 들어 3g/L, MgSO₄ 0.5 내지 5g/L, 예를 들어 2g/L, 글루쿠로노락톤(glucuronolactone) 40 내지 200g/L, 예를 들어 100g/L 및 식물성 오일 50 내지 1000g/L, 예를 들어 500g/L을 포함할 수 있다. 또한, 추가로 물을 포함할 수 있고, 구체적으로는 정제수가 바람직하며, 예를 들어 이온교환수지를 이용한 정제수를 사용할 수 있다.According to one embodiment, the medium used in the fermentation step is yeast extract, glycerin, K ₂ HPO ₄ , KH ₂ PO ₄ , NH ₄ NO ₃ , MgSO ₄ , glucuronolactone ( glucuronolactone) and vegetable oils. Specifically, for example, yeast extract (yeast extract) 0.5 to 3 g / L, for example 1 g / L, glycerin (glycerin) 1 to 20 g / L, for example 20 g / L, K ₂ HPO ₄ 10 to 50 g / L, eg 25 g/L, KH ₂ PO ₄ 3 to 15 g/L, eg 7 g/L, NH ₄ NO ₃ 1 to 10, eg 3 g/L, MgSO ₄ 0.5 to 5 g/L, eg For example, 2 g/L, glucuronolactone 40 to 200 g/L, for example 100 g/L, and vegetable oil 50 to 1000 g/L, for example 500 g/L. In addition, it may further contain water, specifically, purified water is preferable, for example, purified water using an ion exchange resin may be used.

구체적으로, 글루쿠로노락톤을 포함함으로써 글루쿠로노락톤-지방산 형태의 친수성이 증가된 유화제를 생성시킬 수 있으며, 그에 따라 발효유화제의 유화력을 증가시키거나 친수성 활성물질 포집력을 향상시킬 수 있다.Specifically, by including glucuronolactone, it is possible to produce an emulsifier with increased hydrophilicity in the form of glucuronolactone-fatty acid, thereby increasing the emulsifying power of the fermented emulsifier or improving the capturing power of hydrophilic active substances. there is.

일구현예에 따르면, 상기 종균배양 단계는 15 내지 30℃, 100 내지 500rpm, 0.5 내지 2vvm, 호기 조건으로 진행될 수 있다. 또한, 상기 발효 단계는 20 내지 35℃의 온도 및 50 내지 200rpm으로 50 내지 100시간, 예를 들어 3일 동안 진행될 수 있다.According to one embodiment, the seed culture step may be performed under 15 to 30 ℃, 100 to 500 rpm, 0.5 to 2vvm, aerobic conditions. In addition, the fermentation step may be carried out at a temperature of 20 to 35° C. and 50 to 200 rpm for 50 to 100 hours, for example, 3 days.

일구현예에 따르면, 상기 종균발효 단계는 균의 지수생장 종말점 시점에서 종료될 수 있다. 구체적으로 상기 지수생장 종말점은 40 내지 120시간일 수 있으며, 예를 들어 50 내지 100시간, 예를 들어 60시간이 되는 시점에서 종균발효를 종료시킬 수 있다.According to one embodiment, the seed fermentation step may be terminated at the endpoint of exponential growth of the bacteria. Specifically, the exponential growth endpoint may be 40 to 120 hours, for example, 50 to 100 hours, for example, the seed fermentation may be terminated at a time point of 60 hours.

일구현예에 따르면, 상기 식물성 오일은 해바라기씨, 포도씨, 카놀라(canola), 쌀눈, 올리브(olive), 대두, 아르간(argan), 현미, 들깨, 참깨, 아몬드(almond), 땅콩, 옥수수, 홍삼, 아보카도(avocado), 마카다미아(macadamia), 코코넛(coconut), 로즈힙(rose hip), 시어나무(shea tree)열매, 기름야자(african oil palm), 베르가모트(bergamot)열매, 비타민나무씨, 동백씨, 홍화씨, 살구씨, 양귀비씨, 달맞이꽃씨, 피마자씨, 호호바씨, 녹차씨, 메도우폼씨(meadowfoam seed), 아마씨 및 햄프씨(hemp seed) 등의 식용 가능 또는 인체 친화적인 오일로 이루어지는 군으로부터 추출된 하나 이상을 사용할 수 있다.According to one embodiment, the vegetable oil is sunflower seed, grape seed, canola (canola), rice germ, olive (olive), soybean, argan (argan), brown rice, perilla, sesame, almond (almond), peanut, corn, red ginseng , avocado, macadamia, coconut, rose hip, shea tree fruit, african oil palm, bergamot fruit, vitamin tree seed, camellia seed From the group consisting of edible or human-friendly oils such as safflower seeds, apricot seeds, poppy seeds, evening primrose seeds, castor seeds, jojoba seeds, green tea seeds, meadowfoam seeds, flax seeds and hemp seeds More than one extracted may be used.

일구현예에 따르면, 상기 발효 단계 후 정제공정 단계를 더 포함할 수 있다. 구체적으로, 수분 및 미생물의 제거를 위하여, 오일발효 후 발효물을 정치시켜 상층에 위치하는 소수성 부분(발효물)과 하층에 위치하는 친수성 부분(배지 및 불순물)을 분리하여 하층을 폐기하고, MgSO₄를 첨가하여 교반한 후 원심분리기를 이용하여 잔존 불순물 및 미생물을 제거할 수 있다.According to one embodiment, it may further include a purification process step after the fermentation step. Specifically, for the removal of moisture and microorganisms, the fermented product is left standing after oil fermentation to separate the hydrophobic portion (fermented product) located in the upper layer and the hydrophilic portion (medium and impurities) located in the lower layer to discard the lower layer, and MgSO ₄ can be added and stirred to remove residual impurities and microorganisms using a centrifuge.

또한, 상기 발효 후 발효물의 지방산 및 불순물의 정제를 위하여, 크로마토그라피(chromatography) 방법을 사용할 수 있다. 구체적으로, 친화크로마토그라피 컬럼(affinity chromatography column)에 규산마그네슘(magnesium silicate)을 충진제로 사용하여 지방산 및 불순물 등을 흡착, 여과시킬 수 있다. 단, 발효물은 50~60℃까지 가온시켜 사용한다.In addition, in order to purify the fatty acids and impurities of the fermented product after the fermentation, a chromatography method may be used. Specifically, by using magnesium silicate as a filler in an affinity chromatography column, fatty acids and impurities can be adsorbed and filtered. However, the fermented product is heated to 50~60℃ before use.

본 발명이 포함하는 발효물은 역미셀을 포함하는 것으로, 역미셀은 친수성 용해물 존재 하에 극성기가 안쪽으로 배향되고, 소수기가 바깥쪽 비극성 용매측으로 배향되며, 거의 구상의 배향성 집단을 이루는 분자 집단을 의미한다.The fermented product included in the present invention includes reverse micelles, in which, in the presence of a hydrophilic lysate, polar groups are oriented inward, hydrophobic groups are oriented toward the outside non-polar solvent side, and a molecular population forming a nearly spherical orientation group. it means.

일구현예에 따르면, 역미셀 내에 피부 활성물질이 포집된 형태를 형성할 수 있다. 구체적으로 예를 들면, 상기 피부 활성물질은 비타민C, 비타민 B, 코직산, 이소플라본, 아미노산류, 펩타이드류, 아데노신, 단백질 분해효소 및 효소류, 알부틴, 히알루론산, 하이드로퀴논, 세라마이드, 코엔자임Q10, 테트라하이드로커큐미노이드, 안토시아닌, 콜라겐, 레티놀, 벌사상자추출물, 치자추출물, 강황추출물 및 병풀추출물 등 친수성의 생리활성물질 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함할 수 있다.According to one embodiment, a form in which the skin active material is captured in the reverse micelle may be formed. Specifically, for example, the skin active material is vitamin C, vitamin B, kojic acid, isoflavones, amino acids, peptides, adenosine, proteolytic enzymes and enzymes, arbutin, hyaluronic acid, hydroquinone, ceramide, coenzyme Q10, It may include one or more selected from the group of hydrophilic physiologically active substances such as tetrahydrocurcuminoids, anthocyanins, collagen, retinol, bee saline extract, gardenia extract, turmeric extract and centella asiatica extract.

발효물의 계면장력은 낮을수록 분자의 응집력이 낮음을 의미하며, 분자의 응집력이 낮으면 다른 상과 혼합될 수 있는 유화능력이 향상될 수 있으므로, 일구현예에 따르면, 본 발명의 조성물은 계면장력이 30 dyne/cm 이하, 예를 들어 10 내지 30dyne/cm, 예를 들어 20 내지 30 dyne/cm일 수 있다.The lower the interfacial tension of the fermented product, the lower the cohesive force of the molecules, and the lower the cohesive force of the molecules, the better the emulsification ability to be mixed with other phases. This 30 dyne/cm or less, for example, 10 to 30 dyne/cm, for example, may be 20 to 30 dyne/cm.

본 발명에 따른 경피 전달 시스템은 역미셀을 포함함으로써 피부 활성물질, 약물 등을 피부 각질층에 예를 들어, 인터패스웨이(interpathway)법을 통하여 효과적으로 침투시킬수 있으므로 경피 흡수율을 향상시켜 피부학적 효능을 향상시킬 수 있다. 또한 산화되기 쉬운 물질, 수용성 물질, 결정성 물질 및 난용성 물질을 역미셀로 포집시킴으로써 안정화된 제형을 제조할 수 있으므로 화장품 및 의약품에 용이하게 사용할 수 있다.The transdermal delivery system according to the present invention can effectively penetrate the skin active substances, drugs, etc. into the stratum corneum of the skin, for example, through the interpathway method by including the reverse micelles, thereby improving the transdermal absorption rate and improving the dermatological efficacy. can do it In addition, since a stabilized formulation can be prepared by collecting oxidized substances, water-soluble substances, crystalline substances, and poorly soluble substances with reverse micelles, it can be easily used in cosmetics and pharmaceuticals.

또한, 역미셀을 포함하는 전달 시스템을 활용하면 피부 활성물질, 약물 등을 경피, 모낭 등의 경로를 통하여 용이하게 흡수시킬 수 있으므로, 화장료, 약제학적 조성물 등 다양한 분야에 적용할 수 있다.In addition, if a delivery system including reverse micelles is used, skin active substances, drugs, etc. can be easily absorbed through the transdermal route, hair follicles, etc., and thus can be applied to various fields such as cosmetics and pharmaceutical compositions.

이하, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있도록 본 발명의 실시예에 대하여 상세히 설명한다. 그러나 본 발명은 여러 가지 상이한 형태로 구현될 수 있으며 여기에서 설명하는 실시예에 한정되지 않는다.Hereinafter, embodiments of the present invention will be described in detail so that those of ordinary skill in the art can easily carry out the present invention. However, the present invention may be embodied in many different forms and is not limited to the embodiments described herein.

제조예manufacturing example

Candida bombicola UA 06(기탁번호: KCTC13855BP, 한국생명공학연구원) 균체 수득 Obtained Candida bombicola UA 06 (Accession No.: KCTC13855BP, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology).

Candida bombicola UA 06을 이스트 추출물(yeast extract) 10 g/L, 글리세린(glycerin) 20 g/L, K₂HPO₄ 25 g/L, KH₂PO₄ 7 g/L, NH₄NO₃ 3 g/L, MgSO₄ 2 g/L 및 증류수 933 g/L로 구성된 배지에 접종하여 20℃, 300rpm, 1NL/min(1vvm)의 호기적인 조건에서 배양을 진행하였다. 배양은 분광광도계(Epoch2, BioTek)로 600nm에서 흡광도를 측정하여 균의 지수생장 종말점인 60시간 시점에서 종료하였다. 배양액을 원심분리(16,000g, 30분)하여 균체를 침전시키고 인산 버퍼로 수 회 세척하여 균체를 수득하였다. Candida bombicola UA 06 with yeast extract 10 g/L, glycerin 20 g/L, K ₂ HPO ₄ 25 g/L, KH ₂ PO ₄ 7 g/L, NH ₄ NO ₃ 3 g/ L, MgSO ₄ Inoculated in a medium consisting of 2 g / L and distilled water 933 g / L 20 ℃, 300 rpm, and cultured under aerobic conditions of 1 NL / min (1 vvm). The culture was terminated at 60 hours, the end point of exponential growth, by measuring absorbance at 600 nm with a spectrophotometer (Epoch2, BioTek). The culture solution was centrifuged (16,000 g, 30 minutes) to precipitate the cells and washed several times with a phosphate buffer to obtain the cells.

오일의 발효Fermentation of oil

오일 발효를 위하여 이스트 추출물(yeast extract) 1.0 g/L, 글리세린(glycerin) 20 g/L, K₂HPO₄ 25 g/L, KH₂PO₄ 7 g/L, NH₄NO₃ 3 g/L, MgSO₄ 2 g/L, 글루쿠로노락톤(glucuronolactone) 100 g/L, 식물성오일 500 g/L 및 증류수 333 g/L 로 구성된 발효액을 5 L 발효조에 25℃, 100rpm 조건으로 발효액을 혼합 제조하였다. 상기 발효액의 온도가 25℃일 때, 균체 2.5 g/L를 투입하고, 3일 동안 발효를 진행하였다. 식물성 오일로는 해바라기씨유를 사용하였다.For oil fermentation, yeast extract 1.0 g/L, glycerin 20 g/L, K ₂ HPO ₄ 25 g/L, KH ₂ PO ₄ 7 g/L, NH ₄ NO ₃ 3 g/L , MgSO ₄ 2 g/L, glucuronolactone 100 g/L, vegetable oil 500 g/L, and distilled water 333 g/L. In a 5 L fermenter, the fermentation broth is mixed at 25°C and 100rpm. prepared. When the temperature of the fermentation broth was 25° C., 2.5 g/L of the cells was added, and fermentation was performed for 3 days. As vegetable oil, sunflower seed oil was used.

정제refine

발효 3일 후, 발효물에 대하여 잔존하는 효소활성을 90℃ 고온으로 활성 상실시킨 후, 1N HCl로 pH를 4 내지 5로 조정하고, 발효물을 6 내지 12시간 정치하여 수층(미생물 및 배지)과 유층(역미셀 형성 발효 유화물)을 분리하여 수층을 제거하였다. 발효물에 남아있는 수분을 제거하기 위하여 MgSO₄를 20 g/L 첨가하고, 50℃, 300rpm 조건으로 2시간 교반하여 원심분리 후 투명한 유층(역미셀 형성 발효 유화물)을 수득하였다. 또한, 상기 발효 유화물의 지방산 및 불순물을 규산마그네슘이 충진된 컬럼으로 정제 후, 잔존하는 작은 입자의 MgSO₄를 완전히 제거하기 위하여 0.45 ㎛ 필터로 감압여과시켜 역미셀을 포함하는 발효물을 수득하였다.After 3 days of fermentation, the remaining enzyme activity with respect to the fermented product was lost at a high temperature of 90° C., the pH was adjusted to 4 to 5 with 1N HCl, and the fermented product was left standing for 6 to 12 hours to obtain an aqueous layer (microorganism and medium) The water layer was removed by separating the oil layer (reverse micellar formation ferment emulsion). In order to remove the moisture remaining in the fermented product, _{20 g/L of MgSO 4} was added, and the mixture was stirred at 50° C. and 300 rpm for 2 hours to obtain a transparent oil layer (reverse micelle-forming fermentation emulsion) after centrifugation. In addition, the fatty acids and impurities of the fermentation emulsion were purified by a column filled with magnesium silicate, and then filtered under reduced pressure with a 0.45 μm filter to completely remove the _{remaining small particles of MgSO 4 to obtain a fermented product containing reverse micelles.}

실시예 1 내지 11 및 비교예 1Examples 1 to 11 and Comparative Example 1

제조예에 따른 역미셀을 포함하는 발효물을 표 1에 따른 각각의 실시예 및 비교예의 발효액 배지 조성으로 배양하였다. 실시예에 기재된 식물성 오일 외에, 해바라기씨, 포도씨, 카놀라, 쌀눈, 올리브, 대두, 아르간, 현미, 들깨, 참깨, 아몬드, 땅콩, 옥수수, 홍삼, 아보카도, 마카다미아, 코코넛, 로즈힙, 비타민나무씨, 시어나무열매, 기름야자, 베르가모트열매, 동백씨, 홍화씨, 살구씨, 양귀비씨, 달맞이꽃씨, 호호바씨, 피마자씨, 녹차씨, 메도우폼씨, 아마씨, 햄프씨 등의 식용 가능 또는 인체 친화적인 오일이라면 본 발명의 범위에 포함될 수 있다.Fermented products including reverse micelles according to Preparation Example were cultured in the fermentation broth medium composition of each Example and Comparative Example according to Table 1. In addition to the vegetable oils described in the Examples, sunflower seeds, grape seeds, canola, rice germ, olive, soybean, argan, brown rice, perilla, sesame, almond, peanut, corn, red ginseng, avocado, macadamia, coconut, rosehip, vitamin tree seed, shea Edible or human-friendly oils such as tree fruit, oil palm, bergamot fruit, camellia seed, safflower seed, apricot seed, poppy seed, evening primrose seed, jojoba seed, castor seed, green tea seed, meadowfoam seed, flax seed, hemp seed, etc. may be included within the scope of the present invention.

실시예 12 내지 29:Examples 12-29:

표 2 및 3과 같은 조성으로 역미셀을 포함하는 경피전달 조성물을 제조하였다.A transdermal delivery composition including reverse micelles was prepared with the composition shown in Tables 2 and 3.

실시예 1과 같은 배지 조성을 선택하였으며, 실시예 1에 따른 역미셀 형성 유화제가 포함된 발효오일은 피부전달 매개체이므로 캐리어 오일(Carrier Oil)로 지칭하였다. 포집 방법은 활성물질과 용매를 혼합 및 용해시킨 후 70℃로 가온한 캐리어 오일에 투입하여 투명하게 될 때까지 교반하였다. 그리고 30℃까지 냉각한 후, 투명도를 확인함으로써 완성하였다.The same medium composition as in Example 1 was selected, and the fermented oil containing the reverse micelle-forming emulsifier according to Example 1 was referred to as a carrier oil because it was a skin delivery medium. In the collection method, after mixing and dissolving the active material and the solvent, it was added to a carrier oil heated to 70° C. and stirred until it became transparent. And after cooling to 30 degreeC, it was completed by confirming transparency.

실험예 1: 온도별 안정성 평가Experimental Example 1: Stability evaluation by temperature

활성물질을 포집시킨 조성물에 대한 시간 및 온도 조건의 변화에 따른 안정성을 평가하기 위하여, 실시예 12 내지 29에 따른 조성물에 대하여 상온(15~25℃), 저온(-5℃), 고온(50℃), 순환(-5 내지 40℃)조건에서 1개월, 3개월의 시간이 경과함에 따른 안정도를 관찰하였다.In order to evaluate the stability according to the change of time and temperature conditions for the composition in which the active material is captured, room temperature (15-25 ° C.), low temperature (-5 ° C.), high temperature (50 ℃) and circulation (-5 to 40 ℃) conditions, the stability as time elapsed for 1 month and 3 months was observed.

평가는 색상, 침전(투명도)을 확인함으로써, 활성성분의 안정적 포집 여부, 물질의 변성여부를 판단하는 것으로 실시하였다. 안정적으로 포집되지 않을 시에는, 성상이 불투명해지고, 활성물질의 침전이 발생하게 된다.The evaluation was conducted by checking color and precipitation (transparency) to determine whether the active ingredient was stably captured and whether the material was denatured. When it is not stably collected, the appearance becomes opaque, and precipitation of the active material occurs.

가혹조건에서의 평가 결과는 표 4에, 일반조건에서의 평가 결과는 표 5에 나타내었다. 순환 조건은 12시간 동안 온도를 -5 내지 40℃로 변화시킨 것을 한 사이클로 하였다. 또한, 일반조건에서는 3개월, 가혹조건에서는 1개월 동안 안정도를 관찰하였다.The evaluation results under severe conditions are shown in Table 4, and the evaluation results under normal conditions are shown in Table 5. Cycling conditions were one cycle in which the temperature was changed from -5 to 40° C. for 12 hours. In addition, stability was observed for 3 months under normal conditions and 1 month under severe conditions.

그 결과, 비타민, 아미노산, 펩타이드, 식물추출물, 항균제, 항산화제, 효소 등을 나노입자로 포집시킴으로써 안정적인 조성물을 제조할 수 있다.As a result, it is possible to prepare a stable composition by collecting vitamins, amino acids, peptides, plant extracts, antibacterial agents, antioxidants, enzymes, etc. into nanoparticles.

실험예 2: 열 안정성시험Experimental Example 2: Thermal stability test

실시예를 이용하여, 역미셀을 형성하여 활성물질을 포집시킨 조성물에 대한 열안정성을 평가하였다. 시험방법으로는 실시예 1, 12, 13, 16을 유리용기에 150g 칭량하여 수조에서 90~100℃로 1시간 30분 동안 가열하였다. 이후 가열 전, 가열 후 1일 경과하였을 때 색상 및 취를 비교하였다. 그 결과, 모든 시료에서 가열 전후의 색상 및 취 변화는 나타나지 않았다. 또한, 캐리어 오일인 실시예 1을 동일하게 실험하여 활성물질이 포집된 조성물과 비교하여, 그 결과를 도 1에 나타내었다.Using the examples, the thermal stability of the composition in which the active material was captured by forming reverse micelles was evaluated. As a test method, 150 g of Examples 1, 12, 13, and 16 were weighed in a glass container and heated in a water bath at 90 to 100° C. for 1 hour and 30 minutes. Thereafter, color and odor were compared before heating and when 1 day after heating had elapsed. As a result, color and odor changes before and after heating were not observed in all samples. In addition, Example 1, which is a carrier oil, was similarly tested and compared with the composition in which the active material was collected, and the results are shown in FIG. 1 .

실험예 3: 역미셀 입자 사이즈 측정Experimental Example 3: Reverse micelle particle size measurement

실시에 13 및 19에 따른 조성물의 역미셀 입자를 입도분석기(Particle size analyzer,ELSZ-1000, Otsuka Electronics)를 이용하여 측정하였다. 그 결과는 도 2 및 3에 나타내었으며, 평균적으로 1.4 ~ 2.2 nm 수준의 입자 사이즈가 분포하고 있는 것이 확인되었다.Reverse micellar particles of the compositions according to Examples 13 and 19 were measured using a particle size analyzer (ELSZ-1000, Otsuka Electronics). The results are shown in FIGS. 2 and 3, and it was confirmed that the average particle size of 1.4 to 2.2 nm was distributed.

실험예 4: 역미셀(reverse micelle) 관찰Experimental Example 4: Reverse micelle observation

실시예 12의 활성물질 포집 여부를 확인하기 위해 투과전자현미경(JEM-F200, JEOL)을 이용하여 역미셀(reverse micelle)형성을 관찰하였다. 시료를 carbon으로 코팅된 Cu grid 위에 한 방울 떨어뜨려 상온에서 6시간 동안 건조시켜 전처리하고 현미경으로 관찰하였다.Reverse micelle formation was observed using a transmission electron microscope (JEM-F200, JEOL) to confirm whether the active material of Example 12 was captured. The sample was pretreated by dropping a drop on a Cu grid coated with carbon, drying it at room temperature for 6 hours, and observed under a microscope.

현미경 사진은 도 4에 나타내었다. 오일 상에서 활성물질이 나노 사이즈로 포집되어 둥근 형태의 역미셀(reverse micelle)이 형성된 것을 확인할 수 있다.The micrograph is shown in FIG. 4 . It can be seen that the active material in the oil phase is collected in a nano size to form a round reverse micelle.

실험예 5: 피부투과시험Experimental Example 5: Skin penetration test

상기 실시예 및 비교예에 따른 조성물의 피부 투과 평가를 위하여 인공피부(Strat-M)를 사용하였다. 공여관(donor chamber)을 덮어 클램프로 고정시킨 후 수용상을 프란츠 확산 셀(franz diffusion cell)에 채우고, 32℃로 유지시켰다. 상기 제조된 실시예와 비교예를 각각 0.5 ml씩 도포하여 투과시험을 진행하였다. 투과시험으로 시간 별로 수용상을 5.0ml채취하고, 분석하였다. 그리고, 새로운 수용상으로 보충하였다. 단, 수용상은 활성물질의 용해도가 높은 용매를 사용하였다.Artificial skin (Strat-M) was used for skin permeation evaluation of the compositions according to Examples and Comparative Examples. After the donor chamber was covered and clamped, the aqueous phase was filled in a Franz diffusion cell and maintained at 32°C. The permeation test was performed by applying 0.5 ml of each of the prepared Examples and Comparative Examples. In the permeation test, 5.0 ml of the aqueous phase was collected and analyzed by time. Then, it was supplemented with a new aqueous phase. However, as the aqueous phase, a solvent having high solubility of the active substance was used.

피부 누적 투과량을 분석하기 위하여 HPLC법으로 측정하였다.In order to analyze the cumulative skin permeation amount, it was measured by HPLC method.

실시예 12(테트라하이드로커큐민, tetrahydrocurcumin, THC)의 HPLC 분석 조건은 표 6과 같고, Waters Alliance2690 liquid chromatograph system (Waters, USA)과 Waters 2420 detector(Waters, USA)를 이용하였다. 컬럼은 5C18-AR-II(4.6 mm I.D.x 150 mm), 4.5um(Cosmosil, Japan)을 사용하였다. 비교예 1은 테트라하이드로커큐민(Tetrahydrocurcumin, THC)을 실시예 12와 동일한 농도로 디프로필렌글라이콜(Dipropylene glycol)에 용해시킨 것이다. 결과는 도 5에 나타내었다.HPLC analysis conditions of Example 12 (tetrahydrocurcumin, tetrahydrocurcumin, THC) are shown in Table 6, and Waters Alliance2690 liquid chromatograph system (Waters, USA) and Waters 2420 detector (Waters, USA) were used. As a column, 5C18-AR-II (4.6 mm I.D. x 150 mm), 4.5 μm (Cosmosil, Japan) was used. In Comparative Example 1, tetrahydrocurcumin (THC) was dissolved in dipropylene glycol at the same concentration as in Example 12. The results are shown in FIG. 5 .

도 5에 나타난 바와 같이, 실시예 12의 피부 누적 투과량은 비교예 1(대조군)과 비교하였을 때 4.6배 증가함을 확인하였다.As shown in FIG. 5 , it was confirmed that the cumulative skin permeation amount of Example 12 increased by 4.6 times compared to Comparative Example 1 (control group).

또한, 실시예 13(아스코르브산, Ascorbic acid)의 HPLC 분석을 실시하였으며, 조건은 표 7와 같고, Waters Alliance2690 liquid chromatograph system(Waters, USA)와 UV detector를 이용하였다. 컬럼은 5C18-AR-II(4.6mm I.D.x150mm), 4.5 um(Cosmosil, Japan)을 사용하였다. 비교예 2는 아스코르브산(Ascorbic acid)을 실시예 13과 동일한 농도로 디프로필렌글라이콜(Dipropylene glycol)에 용해시킨 것이다. 결과는 도 6에 나타내었다.In addition, HPLC analysis of Example 13 (ascorbic acid, Ascorbic acid) was performed, conditions are as shown in Table 7, and a Waters Alliance2690 liquid chromatograph system (Waters, USA) and a UV detector were used. As a column, 5C18-AR-II (4.6mm I.D.x150mm), 4.5 um (Cosmosil, Japan) was used. In Comparative Example 2, ascorbic acid was dissolved in dipropylene glycol at the same concentration as in Example 13. The results are shown in FIG. 6 .

도 6에 나타난 바와 같이, 실시예 13의 피부 누적 투과량 비교예 2(대조군)과 비교하였을 때, 비교예 2에서는 투과되는 아스코르브산이 검출되지 않았으며, 실시예 13의 누적 투과량은 54 ㎍/cm²로 확인되었다.As shown in FIG. 6 , ascorbic acid was not detected in Comparative Example 2, and the cumulative permeation amount of Example 13 was 54 μg/cm ² was confirmed as

또한, 실시예 15(아데노신, adenosine)의 HPLC 분석 조건은 표 8과 같고, Waters Alliance2690 liquid chromatograph system (Waters, USA)와 UV detector를 이용하였다. 컬럼은 5C18-AR-II(4.6mm I.D.x150mm), 4.5 um(Cosmosil, Japan)을 사용하였으며, 그 결과는 도 7에 나타내었다. 비교예 3은 아데노신을 실시예 15와 동일한 농도로 디프로필렌글라이콜(Dipropylene glycol)에 용해시킨 것이다. 결과는 도 6에 나타내었다.In addition, the HPLC analysis conditions of Example 15 (adenosine, adenosine) are shown in Table 8, and a Waters Alliance2690 liquid chromatograph system (Waters, USA) and a UV detector were used. As a column, 5C18-AR-II (4.6 mm I.D. x 150 mm), 4.5 um (Cosmosil, Japan) was used, and the results are shown in FIG. 7 . Comparative Example 3 is obtained by dissolving adenosine in dipropylene glycol at the same concentration as in Example 15. The results are shown in FIG. 6 .

도 7에 나타난 바와 같이, 실시예 15의 피부 투과율은 비교예 3(대조군)과 비교하였을 때 16배 증가함을 확인할 수 있다.As shown in FIG. 7 , it can be seen that the skin permeability of Example 15 is increased by 16 times compared to Comparative Example 3 (control group).

상기와 같은 결과로 역미셀을 형성하는 유화제가 포함된 발효 오일(캐리어 오일)은 피부에 유효한 활성물질을 나노 사이즈로 포집시키기 때문에, 물질의 안정성을 향상시키며, 이를 피부에 적용하였을 때 화장품에 주로 이용되는 용매보다 피부 흡수율이 높고, 빠르게 작용하는 것을 확인할 수 있다. 이는 피부 투과에 있어서 주로 각질층에 대한 제한을 받지만, 캐리어 오일은 각질층을 구성하는 세포간 지질(라멜라 층)을 통하여 활성물질을 경피(eideraml)내로 용이하고, 효과적으로 전달할 수 있다.As a result of the above results, the fermented oil (carrier oil) containing the emulsifier that forms reverse micelles improves the stability of the material because it captures active substances effective for the skin in a nano size, and when applied to the skin, it is mainly used in cosmetics. It can be seen that the skin absorption rate is higher than that of the solvent used, and it acts quickly. Although this is mainly limited to the stratum corneum in skin penetration, the carrier oil can easily and effectively deliver the active substance into the eideraml through the intercellular lipid (lamellar layer) constituting the stratum corneum.

실험예 6: 피부자극시험Experimental Example 6: Skin irritation test

본 실험은 실시예 13에 대한 피부 안전성 평가를 목적으로 피부 일차 자극평가를 실시하였다. 평가기관은 (주)대한피부과학연구소로부터 의뢰하여 진행하였다. 피험자 31명을 선정하여 등 부위에 24시간 첩포한 후 첩포 제거 30분, 24시간, 48시간에 각각 일차 피부자극 유무를 피부과 전문의가 판정하였다. 피부 반응 판정은 국제접촉피부염학회(ICDRG)기준 및 미국화장품협회(PCPC)의 피부 반응 평가 기준에 의거하여 평가(표 9)하였고, 피험자들의 피부 반응 점수를 이용하여 다음과 같이 자극지수를 계산하였다.In this experiment, the primary skin irritation evaluation was performed for the purpose of skin safety evaluation for Example 13. The evaluation institution was commissioned by the Korea Dermatological Research Institute. Thirty-one subjects were selected and applied on the back for 24 hours, and then at 30 minutes, 24 hours, and 48 hours after the patch was removed, the dermatologist judged the presence or absence of primary skin irritation, respectively. The skin reaction was evaluated based on the International Contact Dermatitis Association (ICDRG) standard and the skin reaction evaluation standard of the American Cosmetics Association (PCPC) (Table 9), and the irritation index was calculated as follows using the skin reaction scores of the subjects. .

평균 자극 지수를 산출한 후 Draize Dermal Classification System 및 EPA(Environmental Protection Agency) Standard Procedure Dermal Classification System을 응용한 다음 피부 자극 결과 판정표에 따라 자극성의 정도를 판정하였다(표 10).After calculating the average irritation index, the Draize Dermal Classification System and the EPA (Environmental Protection Agency) Standard Procedure Dermal Classification System were applied, and the degree of irritation was determined according to the skin irritation result judgment table (Table 10).

표 9 및 10의 기준에 따른 결과를 표 11에 나타내었다.Table 11 shows the results according to the standards of Tables 9 and 10.

*첩포 제거 후 30분에 측정*Measured 30 minutes after patch removal

표 11에 나타난 바와 같이, 실시예 13이 무자극 물질로 판정되었다.As shown in Table 11, Example 13 was judged as a non-irritant material.

실시예 30: 크림 제형 1Example 30: Cream Formulation 1

하기 표 12의 조성에 따라 실시예 13을 포함하는 크림제형을 제조하였다. 구체적으로, 하기 표 10의 A상의 카보머를 분산한 후 B상을 투입하여 70℃로 가열하여 교반한다. 그리고, C상을 A+B상 용기에 투입하고, 호모믹서로 3500 rpm에서 5분간 혼합하였다. D상을 투입하여 호모믹서로 3500 rpm에서 5분간 혼합하여 중화시키고, 냉각 및 탈포시켰다.A cream formulation including Example 13 was prepared according to the composition of Table 12 below. Specifically, after dispersing the carbomer of the A phase of Table 10, the B phase is added, and the mixture is heated to 70° C. and stirred. Then, the C phase was put into the A + B phase container, and mixed with a homomixer at 3500 rpm for 5 minutes. Phase D was added, mixed with a homomixer at 3500 rpm for 5 minutes, neutralized, cooled and defoamed.

실시예 31: 천연 페이스오일 제형Example 31: Natural Face Oil Formulation

하기 표 13의 조성에 따라 실시예 13을 포함하는 천연페이스오일 제형을 제조하였다. 구체적으로, 하기 표 11의 A상의 순서대로 투입하여 아지믹서로 교반한 후 A상에 B상을 투입하여 교반하였다. 이후 투명도를 확인하여 완성하였다.A natural face oil formulation including Example 13 was prepared according to the composition of Table 13 below. Specifically, it was added in the order of phase A in Table 11 and stirred with an azimixer, and then phase B was added to phase A and stirred. After that, the transparency was confirmed and completed.

상기와 같은 결과로부터 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명은 역미셀(reverse micelle)을 형성함으로써 유효 활성물질을 나노 사이즈로 포집시킴으로써, 피부 투과율을 증가시키고, 피부학적 효능을 향상시킬 수 있다.As can be seen from the above results, the present invention can increase the skin permeability and improve the dermatological efficacy by collecting the effective active material in a nano size by forming a reverse micelle.

실시예 32: 크림 제형 2Example 32: Cream Formulation 2

하기 표 14의 조성에 따라 실시예 27을 포함하는 크림제형을 제조하였다. 구체적으로, 하기 표 12의 A상의 카보머를 분산한 후 B상을 투입하여 70℃로 가열하여 호모믹서로 3000 rpm에서 1분간 혼합하였다. 그리고, C상을 A+B상 용기에 투입하고, 호모믹서로 3000 rpm에서 1분간 혼합하였다. 순서대로, D상을 A+B+C상 용기에 투입하고, 호모믹서로 3000 rpm에서 10분간 혼합하여 유화시킨다. E상을 투입하여 호모믹서로 3000 rpm에서 3분간 혼합 후 F상을 투입하여 호모믹싱하였다. 마지막으로 G상으로 중화시키고, 냉각 및 탈모하여 완성하였다.A cream formulation including Example 27 was prepared according to the composition of Table 14 below. Specifically, after dispersing the carbomer of phase A in Table 12, the phase B was added, heated to 70° C., and mixed for 1 minute at 3000 rpm with a homomixer. Then, the C phase was put into the A + B phase container and mixed for 1 minute at 3000 rpm with a homomixer. In order, the D phase is put into the A + B + C phase container, and the mixture is emulsified by mixing at 3000 rpm for 10 minutes with a homomixer. Phase E was added and mixed with a homomixer at 3000 rpm for 3 minutes, then phase F was added and homomixed. Finally, it was neutralized to phase G, cooled and depilated to complete.

따라서, 쉽게 산화되거나, 열에 의하여 변성되는 물질, 난용성 물질 등을 본 발명에 따라 포접시킴으로써 피부 침투성을 향상시킬 수 있으며, 화장품 제형에 안정적이고 용이하게 적용시킬 수 있다.Therefore, skin permeability can be improved by inclusion of easily oxidized, heat-denatured substances, poorly soluble substances, etc. according to the present invention, and can be applied stably and easily to cosmetic formulations.

이상의 설명은 본 발명의 기술 사상을 예시적으로 설명한 것에 불과한 것으로서, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성에서 벗어나지 않는 범위에서 다양한 수정 및 변형이 가능하다. 또한, 본 발명에 개시된 실시 예들은 본 발명의 기술 사상을 한정하기 위한 것이 아니라 설명하기 위한 것이고, 이러한 실시 예에 의하여 본 발명의 기술 사상의 범위가 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 보호 범위는 아래의 청구범위에 의하여 해석되어야 하며, 그와 동등한 범위 내에 있는 모든 기술 사상은 본 발명의 권리범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것이다.The above description is merely illustrative of the technical idea of the present invention, and various modifications and variations are possible without departing from the essential characteristics of the present invention by those skilled in the art to which the present invention pertains. In addition, the embodiments disclosed in the present invention are not intended to limit the technical spirit of the present invention, but to explain, and the scope of the technical spirit of the present invention is not limited by these embodiments. The protection scope of the present invention should be construed by the following claims, and all technical ideas within the equivalent range should be construed as being included in the scope of the present invention.

Claims

Candida bombicola UA-06(기탁번호: KCTC13855BP, 한국생명공학연구원) 미생물로부터 형성된 발효물; 및
피부 활성물질을 포함하되,
상기 발효물은 역미셀 구조를 형성하고, 상기 피부 활성물질은 상기 역미셀 구조 내에 포집된 형태이며,
상기 발효물이 Candida bombicola UA-06 미생물을 활성화하는 종균배양 단계; 및
종균배양한 미생물 및 식물성 오일을 발효하는 발효 단계를 포함하는 방법으로 제조되고,
상기 발효 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물, 글리세린, K₂HPO₄, KH₂PO₄, NH₄NO₃, MgSO₄, 글루쿠로노락톤 및 식물성 오일을 포함하는, 역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템. Fermented product formed from Candida bombicola UA-06 (Accession No.: KCTC13855BP, Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology); and
including skin active substances,
The fermented product forms a reverse micelle structure, and the skin active material is trapped in the reverse micelle structure,
a seed culture step in which the fermented product activates the C andida bombicola UA-06 microorganism; and
It is prepared by a method comprising a fermentation step of fermenting the seed cultured microorganism and vegetable oil,
Transdermal delivery including reverse micelles, wherein the medium used in the fermentation step includes yeast extract, glycerin, K ₂ HPO ₄ , KH ₂ PO ₄ , NH ₄ NO ₃ , MgSO _{4 , glucuronolactone and vegetable oil} system.

삭제delete

제1항에 있어서,
상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물(yeast extract), 글리세린(glycerin), K₂HPO₄, KH₂PO₄, NH₄NO₃ 및 MgSO₄를 포함하는 것인, 역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템.According to claim 1,
Transdermal containing reverse micelles, wherein the medium used in the seed culture step includes yeast extract, glycerin, K ₂ HPO ₄ , KH ₂ PO ₄ , NH ₄ NO ₃ and MgSO _{4 .} delivery system.

삭제delete

제1항에 있어서,
상기 종균배양 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물(yeast extract) 5 내지 30g/L, 글리세린(glycerin) 10 내지 40g/L, K₂HPO₄ 10 내지 50g/L, KH₂PO₄ 3 내지 15g/L, NH₄NO₃ 1 내지 10g/L 및 MgSO₄ 0.5 내지 5g/L를 포함하고,
상기 발효 단계에서 사용하는 배지가 이스트 추출물(yeast extract) 0.5 내지 3g/L, 글리세린(glycerin) 1 내지 20g/L, K₂HPO₄ 10 내지 50g/L, KH₂PO₄ 3 내지 15g/L, NH₄NO₃ 1 내지 10g/L, MgSO₄ 0.5 내지 5g/L, 글루쿠로노락톤(glucuronolactone) 40 내지 200g/L 및 식물성 오일 50 내지 1000g/L을 포함하는 것인, 역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템.According to claim 1,
The medium used in the seed culture step is yeast extract 5 to 30 g/L, glycerin 10 to 40 g/L, K ₂ HPO ₄ 10 to 50 g/L, KH ₂ PO ₄ 3 to 15 g/L , NH ₄ NO ₃ 1 to 10 g/L and MgSO ₄ 0.5 to 5 g/L,
The medium used in the fermentation step is yeast extract 0.5 to 3 g/L, glycerin 1 to 20 g/L, K ₂ HPO ₄ 10 to 50 g/L, KH ₂ PO ₄ 3 to 15 g/L, NH ₄ NO ₃ 1 to 10 g/L, MgSO ₄ 0.5 to 5 g/L, glucuronolactone 40 to 200 g/L and vegetable oil 50 to 1000 g/L, including reverse micelles Transdermal delivery system.

제1항에 있어서,
상기 종균배양 단계가 15 내지 30℃, 100 내지 500rpm, 0.5 내지 2vvm, 호기 조건으로 진행되고,
상기 발효 단계가 20 내지 35℃의 온도 및 50 내지 200rpm의 혼합 조건으로 진행되는 것인, 역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템.According to claim 1,
The seed culture step is carried out at 15 to 30 ° C, 100 to 500 rpm, 0.5 to 2 vvm, aerobic conditions,
A transdermal delivery system comprising reverse micelles, wherein the fermentation step is performed at a temperature of 20 to 35° C. and a mixing condition of 50 to 200 rpm.

제1항에 있어서,
상기 발효 단계가 균의 지수생장 종말점 시점에서 종료하는 것인, 역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템.According to claim 1,
The transdermal delivery system comprising reverse micelles, wherein the fermentation step is terminated at the exponential growth endpoint of the bacteria.

제1항에 있어서,
상기 식물성 오일이 해바라기씨, 포도씨, 카놀라, 쌀눈, 올리브, 대두, 아르간, 현미, 들깨, 참깨, 아몬드, 땅콩, 옥수수, 홍삼, 아보카도, 마카다미아, 코코넛, 로즈힙, 비타민나무씨, 시어나무열매, 기름야자, 베르가모트열매, 동백씨, 홍화씨, 살구씨, 양귀비씨, 달맞이꽃씨, 피마자씨, 녹차씨, 메도우폼씨, 아마씨 및 햄프씨로 이루어지는 군으로부터 추출된 것인, 역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템.According to claim 1,
The vegetable oil is sunflower seed, grape seed, canola, rice germ, olive, soybean, argan, brown rice, perilla, sesame, almond, peanut, corn, red ginseng, avocado, macadamia, coconut, rosehip, vitamin tree seed, shea fruit, oil Transdermal delivery system comprising reverse micelles, extracted from the group consisting of palm, bergamot fruit, camellia seed, safflower seed, apricot seed, poppy seed, evening primrose seed, castor seed, green tea seed, meadowfoam seed, flax seed and hemp seed .

제1항에 있어서,
상기 발효 단계 후 정제 단계를 더 포함할 수 있고,
상기 정제 단계가 발효물을 정치시켜 상층과 하층을 분리하여 하층을 폐 기하고, MgSO₄를 첨가하여 교반 후 원심분리하여 미생물 및 수분을 제거하는 단계 및,
친화크로마토그라피 컬럼에 규산마그네슘을 충진제로 사용하여 지방산 및 불순물이 제거된 오일을 회수하는 단계를 포함하는 것인, 역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템.According to claim 1,
It may further include a purification step after the fermentation step,
The purification step is a step of separating the upper and lower layers by allowing the fermented product to stand, discarding the lower layer _{, adding MgSO 4} , stirring and centrifuging to remove microorganisms and moisture;
A transdermal delivery system comprising reverse micelles, comprising the step of recovering an oil from which fatty acids and impurities have been removed by using magnesium silicate as a filler in an affinity chromatography column.

제1항에 있어서,
상기 피부 활성물질이 비타민C, 비타민 B, 코직산, 이소플라본, 아미노산류, 펩타이드류, 아데노신, 단백질 분해효소 및 효소류, 알부틴, 히알루론산, 하이드로퀴논, 세라마이드, 코엔자임Q10, 테트라하이드로커큐미노이드, 안토시아닌, 콜라겐, 레티놀, 벌사상자추출물, 치자추출물, 강황추출물 및 병풀추출물로 이루어지는 군으로부터 선택되는 하나 이상을 포함하는 것인, 역미셀을 포함하는 경피 전달 시스템.According to claim 1,
The skin active material is vitamin C, vitamin B, kojic acid, isoflavones, amino acids, peptides, adenosine, proteolytic enzymes and enzymes, arbutin, hyaluronic acid, hydroquinone, ceramide, coenzyme Q10, tetrahydrocurcuminoid, Anthocyanin, collagen, retinol, bee parasite extract, gardenia extract, turmeric extract, and a transdermal delivery system comprising at least one selected from the group consisting of centella asiatica extract.