KR101896599B1 - 브로모도메인 억제제로서 유용한 테트라하이드로퀴놀린 유도체 - Google Patents

브로모도메인 억제제로서 유용한 테트라하이드로퀴놀린 유도체

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KR101896599B1
KR101896599B1 KR1020137030972A KR20137030972A KR101896599B1 KR 101896599 B1 KR101896599 B1 KR 101896599B1 KR 1020137030972 A KR1020137030972 A KR 1020137030972A KR 20137030972 A KR20137030972 A KR 20137030972A KR 101896599 B1 KR101896599 B1 KR 101896599B1
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도미니크 아만스
엠마누엘 허버트 데몬트
대런 재이슨 미첼
로버트 제이 왓슨
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글락소스미스클라인 엘엘씨
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Abstract

본 발명은 테트라하이드로퀴놀린(I) 유도체, 이러한 화합물을 함유하는 약학적 조성물 및 치료에서의 이의 용도에 관한 것이다:

Description

브로모도메인 억제제로서 유용한 테트라하이드로퀴놀린 유도체 {TETRAHYDROQUINOLINE DERIVATIVES USEFUL AS BROMODOMAIN INHIBITORS}
본 발명은 테트라하이드로퀴놀린 유도체, 이러한 화합물을 함유하는 약학적 조성물 및 치료에서의 이의 용도에 관한 것이다.
진핵생물 유기체의 유전체는 세포의 핵 내에서 고도로 유기체화되어 있다. 듀플렉스 DNA의 긴 가닥은 히스톤 단백질 (가장 일반적으로 히스톤 H2A, H2B H3 및 H4의 두 개의 카피 포함)의 십량체(octomer)에 둘러싸여 뉴클레오솜을 형성한다. 그 후 뉴클레오솜의 응집 및 폴딩에 의해 기본적인 유닛이 추가로 압박되어 고도로 축합된 염색질 구조가 형성된다. 다수의 상이한 축합 상태가 가능하며, 이러한 구조의 견고함은 세포 주기 동안 변화되고, 세포 분열 과정 동안 가장 치밀하다. 염색질 구조는 유전자 전사를 조절하는데 있어서 결정적인 역할을 하는데, 상기 유전자 전사는 고도로 축합된 염색질로부터 효율적으로 발생할 수 없다. 염색질 구조는 히스톤 단백질, 그 중에서도 특히 히스톤 H3 및 H4에 대한 일련의 전사후 변형에 의해, 그리고 가장 일반적으로 코어 뉴클레오솜 구조를 지나 연장되는 히스톤 테일 내에서 제어된다. 이러한 변형은 아세틸화, 메틸화, 포스포릴화, 유비퀴티닐화 및 SUMO일화를 포함한다. 이러한 후성적 표시는 특수한 효소에 의해 쓰여지고 지워지는데, 상기 효소는 히스톤 테일내 특수한 잔기 상에 태그를 배치함으로써 후성적 코드를 형성한 후 염색질 구조의 유전자 특이적 조절 및 이에 따라 전사를 허용하도록 세포에 의해 해석된다.
히스톤 아세틸화는 유전자 전사의 활성화와 가장 일반적으로 관련되는데 그 이유는 변형이 정전기를 변화시킴에 의해 DNA와 히스톤 십량체의 상호작용을 느슨하게 하기 때문이다. 이러한 물리적 변화 외에, 특수한 단백질은 히스톤 내에서 아세틸화된 리신 잔기에 결합하여 후성적 코드를 판독한다. 브로모도메인은 통상적으로는 히스톤과 관련되지만 히스톤에만 관련되지 않게 아세틸화된 리신 잔기에 결합하는 단백질 내 별개의 소형(~110개 아미노산) 도메인이다. 브로모도메인을 함유하는 것으로 공지된 약 50개 단백질의 패밀리가 존재하고, 이들은 세포 내에서 광범위한 기능을 지닌다.
브로모도메인 함유 단백질의 베트(BET) 패밀리는 근접한 두 개의 아세틸화된 리신 잔기에 결합할 수 있는 직렬(tandem) 브로모도메인을 함유하여 상호작용의 특이성을 증가시키는 4개의 단백질 (BRD2, BRD3, BRD4 및 BRD-t)을 포함한다. BRD2 및 BRD3은 활성으로 전사된 유전자를 따라 히스톤과 회합되고 전사 신장을 촉진하는데 관여할 수 있다고 보고된 한편 (Leroy et al, Mol. Cell. 2008 30(1):51-60), BRD4는 유도가능한 유전자에 대한 pTEF-β 복합체의 동원에 관여하여 RNA 중합효소의 포스포릴화 및 증가된 전사 발생을 초래하는 것으로 보인다 (Hargreaves et al, Cell, 2009 138(1): 129-145). 또한, BRD4 또는 BRD3은 NUT (고환에서의 핵 단백질)와 융합하여 상피 신생물의 고도로 악성 형태인 신규한 융합 종양유전자 BRD4-NUT 또는 BRD3-NUT를 형성하는 것이 보고되었다 (French et al . Cancer Research, 2003, 63, 304-307 and French et al . Journal of Clinical Oncology, 2004, 22 (20), 4135-4139). 데이터는, BRD-NUT 융합 단백질이 암발생의 원인이 된다고 제안한다 (Oncogene, 2008, 27, 2237-2242). BRD-t는 고환 및 난소에서 독특하게 발현된다. 모든 패밀리 구성원은 세포 주기의 양태를 제어하거나 실행하는데 일부 기능을 지니며, 세포 분열 동안 염색체와의 복합체로 남아 있는 것이 보고되었는데 - 이는 후성적 기억의 유지에서의 역할을 제안한다. 또한 몇몇 바이러스는 이러한 단백질을 이용하여 바이러스 복제 과정의 일부로서, 숙주 세포 염색질에 이들의 유전체를 구속시킨다 (You et al Cell, 2004 117(3):349-60).
일본 특허 출원 JP2008-156311호는 바이러스 감염/증식에 관해 유용성을 지니는 BRD2 브로모도메인 결합제로 일컬어지는 벤즈이미다졸 유도체를 기재한다.
특허 출원 WO2009084693호는 아세틸화된 히스톤과 브로모도메인 함유 단백질 사이의 결합을 억제하는 것으로 언급되고 항암제로서 유용한 것으로 언급되는 일련의 티에노트리아졸로디아제핀 유도체를 기재한다.
PCT 특허 출원 PCT/EP2010/06693 및 PCT/EP2010/066701는 둘 모두 아세틸화된 리신 잔기를 지닌 BET 패밀리 브로모도메인의 결합을 억제하는 일련의 테트라하이드로퀴놀린 유도체를 기재한다.
브로모도메인과 이의 동족체 아세틸화된 단백질의 결합을 억제하는 신규한 부류의 화합물, 보다 특히 BET 패밀리 브로모도메인과 아세틸화된 리신 잔기의 결합을 억제하는 소정 부류의 화합물이 밝혀졌다. 이러한 화합물을 이후 "브로모도메인 억제제"로서 지칭할 것이다.
발명의 개요
본 발명의 첫 번째 양태에서, 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염, 더욱 특히 이의 약학적으로 허용되는 염이 제공된다:
Figure 112013106202166-pct00001
본 발명의 두 번째 양태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물이 제공된다.
본 발명의 세 번째 양태에서, 치료에 사용되는, 특히 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환의 치료에 사용되는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 제공된다.
본 발명의 네 번째 양태에서, 치료적 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하여, 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환의 치료를 필요로 하는 피검체에서 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제공된다.
본 발명의 다섯 번째 양태에서, 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에서 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다.
발명의 상세한 설명
본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염에 관한 것이다:
Figure 112013106202166-pct00002
상기 식에서,
X 및 Y는 독립적으로 CH 또는 N이며, 단, X 및 Y 중 적어도 하나는 CH이어야 하고;
R1은 기 C(O)OR4(여기서, R4는 C1 - 4알킬 또는 C3 - 7사이클로알킬임)이거나;
R1은 페닐, 피리딜, 피라지닐 및 피리미디닐로부터 선택된 기이고, 상기 기들은 할로겐, C1 - 4알킬 및 CN로부터 선택된 하나 또는 두 개의 치환체에 의해 치환되거나 비치환되며,
R2는 C1 - 4알킬이고;
R3는 C1 - 4알킬이고;
R5 및 R6는 독립적으로 C1 - 4알킬이거나;
R5 및 R6는 이들이 결합되어 있는 N과 함께 결합하여 5 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고;
R7은 부재하거나 C1 - 4알킬이고;
m은 0, 1 또는 2이고;
n은 1 또는 2이다.
일 구체예에서, 본 발명은 고리 상의 2 및 4 위치에서의 치환체에 대한 테트라하이드로퀴놀린 고리에 거쳐 시스(cis) 상대 입체화학을 지닌 화학식(I)의 화합물을 제공한다. 일 구체예에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염은 (2S, 4R) 거울상이성질체이다.
일 구체예에서, X 및 Y은 둘 모두 CH이다. 추가의 구체예에서, X는 CH이고 Y는 N이다.
일 구체예에서, R1은 기 C(O)OR4(여기서, R4는 이소프로필임)이다.
추가의 구체예에서, R1은 할로겐, C1 - 4알킬 및 CN로부터 선택된 하나 또는 두 개의 치환체에 의해 치환되거나 비치환된, 페닐 또는 피리딜이다. 추가의 구체예에서, R1은 4-클로로페닐이거나 R1은 5-시아노피리딘-2-일이다.
일 구체예에서, R2는 메틸이다.
일 구체예에서, R3는 메틸이다.
일 구체예에서, m은 0이다.
일 구체예에서, n은 0이다. 추가의 구체예에서, n은 1이다.
일 구체예에서, R5 및 R6은 둘 모두 메틸이다.
R7이 C1 - 4알킬인 경우, 4차화된 암모늄 부분이 형성될 것임을 인지해야 할 것이다. 일 구체예에서, R7은 부재한다.
각각의 변수에 대한 구체예가 일반적으로 상기에서 각각의 변수에 대해 개별적으로 기재되었지만, 본 발명은 그것의 염을 포함하여 상기 본원에 기재된 구체예의 모든 조합을 포함하는 것으로 의도된다.
본 발명에 따른 특정 화합물은
2-(디메틸아미노)에틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트;
2-((4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조일)옥시)-N,N,N-트리메틸에탄아미늄;
3-((4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조일)옥시)-N,N,N-트리메틸프로판-1-아미늄;
3-(디메틸아미노)프로필 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트;
3-(디메틸아미노)프로필 6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코티네이트;
2-(디메틸아미노)에틸 6-((2R,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코티네이트;
3-(디메틸아미노)프로필 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트; 및
2-(디메틸아미노)에틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트,
또는 이들의 염이다.
다르게 명시되지 않는다면, 본 명세서 전반에서,
· 용어 "할로겐"은 불소, 염소 또는 브롬으로부터 선택된 기를 기술하는데 사용된다;
· 용어 "C1 - 4알킬" 및 "C1 - 6알킬"은 각각 1 내지 4개 또는 1 내지 6개의 탄소 원자를 함유하는 선형 또는 분지형 알킬기를 포함하는 기 또는 기의 일부를 기술하는데 사용된다. 이러한 기들의 적합한 예는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, n-부틸, 이소부틸, t-부틸, 펜틸 및 헥실을 포함한다;
· 용어 "C3 - 7사이클로알킬"은 적어도 세개 및 최대 7개의 탄소 원자를 함유하는 비-방향족 카보사이클릭 고리를 기술하는데 사용된다. C3 - 7사이클로알킬의 예는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실 및 사이클로헵틸을 포함한다.
· 용어 5 또는 6원 헤테로사이클릴은 O, N 및 S로부터 선택된 1, 2, 또는 3개의 헤테로원자를 포함하는 비방향족의 포화된 고리를 나타낸다. 이러한 기들의 예는 피롤리디닐, 모르폴리닐, 피페리디닐, 및 피페라지닐을 포함한다.
본 발명은 유리 염기 및 염으로서, 예를 들어 약학적으로 허용되는 염으로서 화학식 (I)의 화합물을 포함하는 것이 이해될 것이다. 일 구체예에서, 본 발명은 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염에 관한 것이다.
화학식 (I)의 화합물의 염은 약제에서의 이들의 잠재적인 용도로 인해 바람직하게는 약학적으로 허용된다. 적합한 약학적으로 허용되는 염은 산 부가염 또는 염기 부가염을 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 '약학적으로 허용되는 염'은 수혜자에게로의 투여시 (직접 또는 간접적으로) 제공이 가능할 수 있는, 본 발명의 화합물의 어떠한 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 의미한다. 적합한 염에 대한 검토를 위해, 문헌[Berge et al., J. Pharm. Sci., 66:1-19, (1977)]을 참고한다. 전형적으로, 약학적으로 허용되는 염은 적합한 요망되는 산 또는 염기를 이용하여 용이하게 제조될 수 있다. 생성된 염은 용액으로부터 침전될 수 있고 여과에 의해 수집되거나 용매의 증발에 의해 회수될 수 있다.
약학적으로 허용되는 염기 부가염은, 화학식 (I)의 화합물을 적합한 무기 또는 유기 염기 (예컨대, 트리에틸아민, 에탄올아민, 트리에탄올아민, 콜린, 아르기닌, 리신 또는 히스티딘)과 임의로 적합한 용매에서 반응시켜 대개, 예를 들어 결정화 및 여과에 의해 분리되는 염기 부가염을 제공함에 의해 형성될 수 있다. 약학적으로 허용되는 염기 염은 암모늄 염, 알칼리 금속염, 예컨대 소듐 및 포타슘의 염, 알칼리 토류 금속염, 예컨대 칼슘 및 마그네슘의 염, 및 일차, 이차 및 삼차 아민, 예컨대 이소프로필아민, 디에틸아민, 에탄올아민, 트리메틸아민, 디시클로헥실 아민 및 N-메틸-D-글루카민의 염을 포함하는 유기 염기와의 염을 포함한다.
약학적으로 허용되는 산 부가염은, 화학식 (I)의 화합물을 적합한 무기산 또는 유기산 (예컨대 브롬화수소산, 염산, 황산, 질산, 인산, 숙신산, 말레산, 아세트산, 프로피온산, 푸마르산, 시트르산, 타르타르산, 락트산, 벤조산, 살리실산, 글루탐산, 아스파르트산, p-톨루엔설폰산, 벤젠설폰산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 나프탈렌설폰산, 예컨대 2-나프탈렌설폰산, 또는 헥산산)과 유기 용매와 같은 임의로 적합한 용매에서 반응시켜 대개, 예를 들어 결정화 및 여과에 의해 분리되는 염을 제공함에 의해 형성될 수 있다. 화학식 (I)의 화합물의 약학적으로 허용되는 산 부가염은, 예를 들어 하이드로브로마이드, 하이드로클로라이드, 설페이트, 니트레이트, 포스페이트, 석시네이트, 말레에이트, 아세테이트, 프로피오네이트, 푸마레이트, 시트레이트, 타르트레이트, 락테이트, 벤조에이트, 살리실레이트, 글루타메이트, 아스파르테이트, p-톨루엔설포네이트, 벤젠설포네이트, 메탄설포네이트, 에탄설포네이트, 나프탈렌설포네이트 (예컨대, 2-나프탈렌설포네이트) 또는 헥사노에이트 염일 수 있거나, 이들을 포함할 수 있다.
예를 들어, 화학식 (I)의 화합물의 분리에 포르메이트, 옥살레이트 또는 트리플루오로아세테이트와 같은 약학적으로 허용되지 않는 그 밖의 염이 이용될 수 있고, 이들이 본 발명의 범위 내에 포함된다.
본 발명은 화학식 (I)의 화합물의 염의 모든 가능한 화학량론적 및 비-화학량론적 형태를 그 범위 내에 포함한다.
다수의 유기 화합물은 용매와 복합체를 형성할 수 있는데, 이러한 용매에서 화합물이 반응하거나 용매로부터 화합물이 침전되거나 결정화됨을 이해할 것이다. 이러한 복합체는 "용매화물"로서 알려져 있다. 예를 들어, 물과의 복합체는 "수화물"로서 알려져 있다. 물, 크실렌, N-메틸 피롤리돈, 메탄올 및 에탄올과 같이 높은 비등점을 지니고/거나 수소 결합을 형성할 수 있는 용매를 이용하여 용매화물을 형성할 수 있다. 용매화물을 확인하는 방법은 NMR 및 미세분석을 포함하나 이로 제한되지 않는다. 화학식 (I)의 화합물의 용매화물이 본 발명의 범위 내에 있다.
본 발명은 화학식 (I)의 화합물의 용매화물의 모든 가능한 화학량론적 및 비-화학량론적 형태를 그 범위 내에 포함한다.
화학식 (I)의 화합물은 결정형 또는 무정형일 수 있다. 더욱이, 화학식 (I)의 화합물의 결정형 중 일부는 본 발명의 범위 내에 포함된 다형태로 존재할 수 있다. 화학식 (I)의 화합물의 다형태는 X-선 분말 회절 (XRPD) 패턴, 적외선 (IR) 스펙트럼, 라만(Raman) 스펙트럼, 시차 주사 열량법 (DSC), 열중량 분석 (TGA) 및 고체 상태 핵자기 공명 (SSNMR)을 포함하나 이로 제한되지 않는 다수의 통상적인 분석 기법을 이용하여 특성화되고 구별될 수 있다.
본원에서 기재되는 화합물은 키랄 원자를 함유함으로써 광학 이성질체, 예를 들어, 거울상이성질체 또는 부분입체이성질체가 형성될 수 있다. 따라서, 본 발명은 실질적으로 다른 이성질체가 없는 것과 같이 분리된 개별 이성질체(즉, 순수)이든, 또는 혼합물(즉, 라세메이트 및 라세미 혼합물)이든 간에 화학식(I)의 화합물의 모든 이성질체를 포함한다. 실질적으로 다른 이성질체가 없는 것과 같이 분리된 개별 이성질체(즉, 순수)는 다른 이성질체가 10% 미만, 특히 약 1% 미만, 예를 들어, 약 0.1% 미만으로 존재하도록 분리될 수 있다.
이성질체의 분리는 당업자에게 알려진 통상적인 기법, 예를 들어 분별 결정화, 크로마토그래피 또는 HPLC에 의해 달성될 수 있다.
화학식 (I)의 특정 화합물은 여러 개의 토토머 형태 중 하나로 존재할 수 있다. 본 발명은 개별적인 토토머이든 이의 혼합물이든 간에 화학식 (I)의 화합물의 모든 토토머를 포함하는 것이 이해될 것이다.
본 발명의 범위 내에 화학식 (I)의 화합물 및 이의 염의 용매화물, 이성질체 및 다형태가 포함됨이 상기로부터 이해될 것이다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 염은 표준 화학을 포함하는 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 어떠한 앞서 정의된 변수는 다르게 명시되지 않는 한 이전에 정의된 의미를 계속 가질 것이다. 예시적인 일반적인 합성 방법이 하기에 개시되어 있고 이어서 화학식 (I)의 특정 화합물 또는 이의 염이 실시예에서 제조된다.
본 발명은 화학식(I)의 화합물 또는 이의 염을 제조하기 위한 방법으로서,
(a) 하기 화학식(II)의 화합물을 하기 화학식(III)의 화합물과 반응시킴을 포함하는 공정; 및
(b) 화학식(II)의 화합물 또는 이의 염을 하기 화학식(IV)의 화합물과 반응시킴을 포함하는 공정으로부터 선택된 공정을 포함하는 방법을 추가로 제공한다:
Figure 112013106202166-pct00003
Figure 112013106202166-pct00004
Figure 112013106202166-pct00005
상기 식에서,
R1, R2, R3, R5, R6, R7, X, Y, n 및 m은 화학식(I)에서 정의된 바와 같으며,
Hal은 할로겐이다.
공정 (a)
화학식(II)의 화합물과 화학식(III)의 화합물 간의 반응은 적합한 용매(예컨대, 디클로로메탄 또는 DMF) 중에서 적합한 활성화제(예컨대, 디사이클로헥실카보디이미드(DCC) 또는 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필) 카보디이미드(EDC)) 및 적합한 아실 전달 촉매(예컨대 4-디메틸아미노피리딘)의 존재 하에 수행될 수 있다.
화학식(II)의 화합물은 본원에서 기재된 방법 또는 이와 유사한 절차에 의해 제조될 수 있다. 화학식(III)의 화합물은 구입가능하다.
공정 (b)
공정 (b)에 대해, 적합한 Hal 기는 브로모이다. 화학식(II)의 화합물과 화학식(IV)의 화합물 간의 반응은 전형적으로 적합한 염기(예컨대 탄산칼륨)의 존재 하에 적합한 용매(예컨대 DMF) 중에서 수행된다.
화학식(II)의 화합물은 본원에서 기술된 방법 또는 이와 유사한 절차에 의해 제조될 수 있다. 화학식(IV)의 화합물은 구입가능하다.
당업자는 기재된 화합물의 하나 이상의 작용기를 보호하는 것이 유리할 수 있음을 이해할 것이다. 보호기의 예 및 이들의 제거 수단은 문헌[T. W. Greene 'Protective Groups in Organic Synthesis' (4th edition, J. Wiley and Sons, 2006)]에서 찾아볼 수 있다. 적합한 아민 보호기는 아실 (예컨대, 아세틸, 카바메이트 (예컨대, 2',2',2'-트리클로로에톡시카보닐, 벤질옥시카보닐 또는 t-부톡시카보닐) 및 아릴알킬 (예컨대, 벤질)을 포함하며, 이들은 적합한 경우 가수분해 (예컨대, 디옥산 중 염산 또는 디클로로메탄 중 트리플루오로아세트산과 같은 산 이용) 또는 환원에 의해 (예컨대, 벤질 또는 벤질옥시카보닐기의 수소화분해 또는 아세트산 중 아연을 이용한 2',2',2'-트리클로로에톡시카보닐기의 환원성 제거) 제거될 수 있다. 그 밖의 적합한 아민 보호기는 염기 촉매화된 가수분해에 의해 제거될 수 있는 트리플루오로아세틸 (-COCF3)을 포함한다.
상기 기재된 어떠한 경로에서, 다양한 기 및 부분가 분자 내로 도입되는 합성 단계의 정확한 순서는 다양할 수 있음이 인지될 것이다. 공정의 한 단계에서 도입된 기 또는 부분가 후속하는 변형 및 반응의 영향을 받지 않을 것임을 확실히 하고 그에 따라 합성 단계의 순서를 선택하는 것이 당업자의 기술 내에 있을 것이다.
화학식(II)의 특정 중간체 화합물은 신규한 것으로 여겨지며, 이에 따라 여전히 본 발명의 추가 양태를 형성한다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 염은 브로모도메인 억제제이므로, 브로모도메인 억제제가 처방된 질환 또는 질병의 치료에 잠재적인 유용성을 지닐 것으로 판단된다.
따라서 본 발명은 치료에 사용되는 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다. 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환의 치료에 이용될 수 있다.
따라서 본 발명은 브로모도메인 억제제가 처방된 어떠한 질환 또는 질병의 치료에 사용하기 위한 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 제공한다.
또한, 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환을 치료하기 위한 약제의 제조에서 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 용도가 제공된다.
또한, 치료적 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하여, 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환의 치료가 필요한 피검체에서 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환을 치료하는 방법이 제공된다.
일 구체예에서, 치료가 필요한 피검체는 포유동물, 특히 인간이다.
본원에서 사용된 용어 "유효량"은, 예를 들어 연구원 또는 임상의에 의해 탐구되는 조직, 시스템, 동물 또는 인간의 생물학적 또는 의학적 반응을 유도할 약물 또는 약학제의 양을 의미한다. 더욱이, 용어 "치료적 유효량"은 그러한 양을 투여받지 않은 상응하는 피검체에 비해 질환, 장애 또는 부작용의 개선된 치료, 치유, 예방 또는 경감을 초래하거나, 질환 또는 장애의 진행속도를 감소시키는 어떠한 양을 의미한다. 상기 용어는 또한 정상적인 생리학적 기능을 향상시키기에 효과적인 양을 그 범위 내에 포함한다.
브로모도메인 억제제는 전신 또는 조직 염증, 감염 또는 저산소증에 대한 염증 반응, 세포 활성화 및 증식, 지질 대사, 섬유증과 관련된 다양한 질병 또는 질환의 치료 및 바이러스 감염의 예방 및 치료에 유용한 것으로 여겨진다.
브로모도메인 억제제는 류마티스 관절염, 골관절염, 급성 통풍, 건선, 전신홍반루푸스, 다발성경화증, 염증성 창자병 (크론병 및 궤양대장염), 천식, 만성 폐쇄 기도병, 폐렴, 심근염, 심장막염, 근육염, 습진, 피부염(예컨대, 아토피성 피부염), 탈모증, 백반증, 수포성 피부 질환, 신장염, 맥관염, 죽상동맥경화증, 알츠하이머병, 우울증, 쇼그렌 증후군, 타액선염, 중심성 망막정맥폐쇄, 분지 망막정맥폐쇄, 어바인-가스 증후군(백내장후 및 수술후), 망막색소변성증, 평면부염, 산탁맥락망막병증, 망막앞막, 낭포황반부종, 중심와부근 모세혈관확장증, 견인성 황반변증, 유리체 황반견인 증후군, 망막박리, 시신경망막염, 특발성 황반부종, 망막염, 안구 건조(건성 각결막염), 봄철 각결막염, 아토피성 각결막염, 앞포도막염, 전체포도막염, 후포도막염, 포도막염 관련 황반부종, 공막염, 당뇨병성 망막증, 당뇨병성 황반 부종, 나이 관련 황반 이영양증, 간염, 췌장염, 원발쓸개관간경화증, 경화쓸개관염, 애디슨병, 뇌하수체염, 갑상샘염, 타입 I 당뇨병 및 이식 기관의 급성 거부반응과 같은 광범한 범위의 만성 자가면역 및/또는 염증 질환의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 급성 통풍, 거세포 동맥염, 루푸스 신장염을 포함하는 신장염, 사구체신염과 같은 기관 관련 맥관염, 거세포 동맥염을 포함하는 맥관염, 베게너 육아종, 결절다발동맥염, 베체트병, 가와사키병, 타카야수 동맥염, 괴저성 농피증, 및 기관 침범을 동반한 혈관염, 이식 기관의 급성 거부반응과 같은 광범한 범위의 급성 염증 질환의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 박테리아, 바이러스, 진균, 기생충 또는 이들의 독소로의 감염에 대한 염증 반응을 수반하는 질병 또는 질환, 예컨대 패혈증, 패혈증 증후군, 패혈 쇼크, 내독소혈증, 전신염증반응증후군 (SIRS), 다발성 장기 기능이상 증후군, 독소충격증후군, 급성 폐 손상, ARDS (성인 호흡곤란증후군), 급성 신부전, 전격간염, 화상, 급성 췌장염, 수술후 증후군, 사르코이드증, 헤르크스하이머 반응, 뇌염, 척수염, 수막염, 말라리아, 인플루엔자, 대상포진, 단순 포진 및 코로나바이러스와 같은 바이러스 감염과 관련된 SIRS의 예방 또는 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 심근경색증, 뇌혈관 허혈 (뇌졸중), 급성 관동맥 증후군, 신장 재관류 손상, 기관 이식, 관상동맥 우회술, 심폐우회술 및 폐, 신장, 간, 위창자 또는 말초 사지 색전증과 같은 허혈-재관류 손상과 관련된 질환의 예방 또는 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 고콜레스테롤혈증, 죽상동맥경화증 및 알츠하이머병과 같은 APO-A1의 조절을 통한 지질 대사의 장애의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 특발폐섬유증, 신장 섬유증, 외상후 협착, 켈로이드 흉터 형성, 공피증(국소피부경화증(morphea) 포함) 및 심장 섬유증과 같은 섬유증 질환의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 헤르페스 바이러스, 인간 파필로마 바이러스, 아데노바이러스, 폭스바이러스 및 그 밖의 DNA 바이러스와 같은 바이러스 감염의 예방 및 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 혈액학적 (예컨대 백혈병, 림프종, 다발성 골수종), 상피 암종(폐, 유방 및 결장 암종을 포함), 정중선 암종, 중간엽, 간, 신장 및 신경학적 종양을 포함하는 암의 치료에 유용할 수 있다.
브로모도메인 억제제는 피부 병인, 예컨대 비악성 흑색종(광선 각화증 및 기저 세포), 상피내 흑색종, 편평상피 세포 암종 및 피부성 T-세포 림프종의 치료에 유용할 수 있다.
일 구체예에서, 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환은 패혈증, 화상, 췌장염, 중증 외상(major trauma), 출혈 및 허혈과 같은 전신 염증 반응 증후군과 관련된 질병으로부터 선택된다. 이러한 구체예에서, 브로모도메인 억제제는 SIRS, 쇼크의 개시, 급성 폐 손상의 개시를 포함하는 다발성 장기 기능이상 증후군, ARDS, 급성 신장, 간, 심장 및 위창자 손상 및 사망의 빈도를 감소시키기 위해 진단 시점에 투여될 것이다. 또 다른 구체예에서, 브로모도메인 억제제는 패혈증, 출혈, 광범위 조직 손상, SIRS 또는 MODS(다발성 장기 부전)의 높은 위험과 관련된 수술 또는 그 밖의 절차 이전에 투여될 것이다. 특정 구체예에서, 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환은 패혈증, 패혈증 증후군, 패혈 쇼크 및/또는 내독소혈증이다. 또 다른 구체예에서, 브로모도메인 억제제는 급성 또는 만성 췌장염의 치료를 위해 처방된다. 또 다른 구체예에서, 브로모도메인 억제제는 화상의 치료를 위해 처방된다.
일 구체예에서, 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환은 단순 포진 감염 및 재활성화, 입술 발진, 대상 포진 감염 및 재활성화, 수두, 띠헤르페스, 인간 파필로마 바이러스, 인간 면역결핍 바이러스(HIV), 자궁 신생물, 급성 호흡기병을 포함하는 아데노바이러스 감염, 및 우두 및 천연두 및 아프리카 돼지열 바이러스와 같은 폭스바이러스 감염으로부터 선택된다. 특정한 일 구체예에서, 브로모도메인 억제제는 피부 또는 자궁 상피의 인간 파필로마 바이러스 감염의 치료를 위해 처방된다.
"브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환"이라는 용어는 상기 질병 상태 중 어느 것 또는 모두를 포함하는 것으로 의도된다.
일 구체예에서, 브로모도메인을 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염과 접촉시킴을 포함하여 브로모도메인을 억제하는 방법이 제공된다.
치료에 사용하기 위해, 화학식 (I)의 화합물 뿐만 아니라 이의 약학적으로 허용되는 염이 미가공 화학물질로서 투여될 수 있는 것이 가능하지만, 활성 성분을 약학적 조성물로서 제공하는 것이 일반적이다.
그러므로, 본 발명은 추가의 양태에서 화학식 (I)의 화합물 또는 약학적으로 허용되는 염 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 화학식(I)의 화합물 및 약학적으로 허용되는 염은 상기 기술된 바와 같다. 담체(들), 희석제(들) 또는 부형제(들)은 조성물의 다른 성분들과 상용가능하고, 이의 수혜자에 대해 유해하지 않다는 측면에서 허용가능해야 한다. 본 발명의 또 다른 양태에 따르면, 또한 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제와 혼합함을 포함하여 약학적 조성물을 제조하는 방법이 제공된다. 약학적 조성물은 본원에서 기술된 질환 중 어느 하나를 치료하는데 사용될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염은 약학적 조성물에서의 사용을 위한 것이므로, 이들은 각각 바람직하게는 실질적으로 순수한 형태로, 예를 들어, 60% 이상의 순도, 더욱 적합하게는 75% 이상의 순도, 바람직하게는 85% 이상의 순도, 특히 98% 이상의 순도(중량 기준의 경우 중량 %)로 제공됨이 용이하게 이해될 것이다.
약학적 조성물은 단위 투여량(unit dose) 당 소정량의 활성 성분을 함유하는 단위 용량 형태로 제시될 수 있다. 바람직한 단위 투여 조성물은 활성 성분의 1일 투여량 또는 서브 투여량(sub-dose), 또는 이의 적절한 분획을 함유하는 것들이다. 따라서, 그러한 단위 투여량은 1일 1회 초과로 투여될 수 있다. 바람직한 단위 투여 조성물은 본원에서 상기 언급된 바와 같이, 활성 성분의 1일 투여량 또는 서브 투여량 (1일 1회 초과의 투여의 경우), 또는 이의 적절한 분획을 함유하는 것들이다.
약학적 조성물은 어떠한 적절한 경로, 예를 들어, 경구(구강 또는 설하 포함), 직장, 흡입, 비강내, 국소(구강, 설하 또는 경피를 포함), 안구(국소, 안구내, 결막하, 공막상, 또는 테논하(sub-Tenon)), 질 또는 비경구(피하, 근육내, 정맥내 또는 피내) 경로에 의한 투여를 위해 구성될 수 있다. 그러한 조성물은 약학 분야에 알려진 어떠한 방법에 의해, 예를 들어, 활성 성분을 담체(들) 또는 부형제(들)와 회합시킴으로써 제조될 수 있다.
일 구체예에서, 약학적 조성물은 비경구 투여, 특히 정맥내 투여를 위해 구성된다.
일 구체예에서, 약학적 조성물은 경구 투여를 위해 구성된다.
일 구체예에서, 약학적 조성물은 국소 투여를 위해 구성된다.
피부 침투의 변형 및 폐색을 초래하여 브로모도메인 화합물의 전신 노출을 증가시키거나 감소시키는 바람직한 투여형은 카복시메틸셀룰로즈, 알기네이트, 젤라틴 또는 폴리비닐 피롤리돈의 약학적으로 허용가능한 형태를 포함하나, 이로 제한되지 않는다.
비경구 투여용으로 구성된 약학적 조성물은 조성물이 의도된 수혜자의 혈액과 등장성이 되도록 항산화제, 완충제, 세균발육저지제(bacteriostat) 및 용질을 함유할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 주사 용액; 및 현탁제 및 증점제를 포함할 수 있는 수성 및 비수성 멸균 현택액을 포함한다. 조성물은 단위 투여량 또는 다회 투여량 용기(container), 예를 들어 밀봉된 앰플 및 바이알로 제공될 수 있고, 사용 직전에 멸균 액체 담체, 예를 들어, 주입을 위한 물의 첨가만이 요구되는 냉동-건조(동결건조) 상태로 저장될 수 있다. 즉석 주사 용액 및 현탁액은 멸균 분말, 과립 및 정제(tablet)로부터 제조될 수 있다.
경구 투여용으로 구성된 약학적 조성물은 개별 단위, 예컨대, 캡슐 또는 정제; 분말 또는 과립; 수성 또는 비수성 액체 중의 용액 또는 현탁액; 식용 포움(foam) 또는 휘프(whip); 또는 수중유형 액체 에멀젼 또는 유중수형 액체 에멀젼으로 제공될 수 있다.
예를 들어, 정제 또는 캡슐 형태의 경구 투여의 경우, 활성 약물 성분은 경구용 비독성 약학적으로 허용되는 불활성 담체, 예컨대, 에탄올, 글리세롤 및 물 등과 조합될 수 있다. 정제 또는 캡슐 내에 혼입시키기에 적합한 분말은 적합한 미세 크기로 화합물을 감소시키고(예를 들어, 마이크론화(micronisation)에 의해), 유사하게 제조된 약학적 담체, 예컨대, 식용 탄수화물, 예를 들어, 전분 또는 만니톨과 혼합시킴으로써 제조될 수 있다. 풍미제, 보존제, 분산제, 착색제가 또한 제공될 수 있다.
캡슐은 상기 기재된 분말 혼합물을 제조하고, 형성된 젤라틴 시스(sheath)를 충전시킴으로써 제조될 수 있다. 활택제(glidant) 및 윤활제, 예컨대, 콜로이드 실리카, 탈크, 마그네슘 스테아레이트, 칼슘 스테아레이트 또는 고형 폴리에틸렌 글리콜은 충전 작업 전에 분말 혼합물에 첨가될 수 있다. 붕해제(disintegrating) 또는 가용화제, 예컨대, 아가-아가, 칼슘 카보네이트 또는 소듐 카보네이트가 또한 캡슐이 섭취될 때 약제의 이용율(availability)을 개선시키기 위해 첨가될 수 있다.
더구나, 요망되거나 필요한 경우, 적합한 결합제(binder), 활택제, 윤활제, 감미제, 풍미제, 붕해제 및 착색제가 또한 혼합물 내에 혼입될 수 있다. 적합한 결합제에는 전분, 젤라틴, 천연 당, 예컨대, 글루코스 또는 베타-락토오스, 옥수수 감미료, 천연 및 합성 검, 예컨대, 아카시아, 트래거캔스 또는 소듐 알기네이트, 카복시메틸셀룰로스, 폴리에틸렌 글리콜 및 왁스 등이 있다. 이러한 투여 형태로 사용된 윤활제에는 소듐 올레에이트, 소듐 스테아레이트, 마그네슘 스테아레이트, 소듐 벤조에이트, 소듐 아세테이트 및 소듐 클로라이드 등이 있다. 붕해제로는 전분, 메틸 셀룰로스, 아가, 벤토나이트 및 잔탄 검 등이 있으나, 이로 제한되지 않는다. 정제는 예를 들어, 분말 혼합물을 제조하고, 과립화시키거나 슬러깅(slugging)시키고, 윤활제 및 붕해제를 첨가하고, 정제로 압착(pressing)시킴으로써 제형화된다. 분말 혼합물은 적합하게 빻아진(comminuted) 화합물을 상기 기재된 희석제 또는 염기와, 임의로, 결합제, 예컨대, 카복시메틸셀룰로스, 알기네이트, 젤라틴, 또는 폴리비닐 피롤리돈, 용해 지연제(retardant), 예컨대, 파라핀, 재흡수 촉진제(resorption accelerator), 예컨대, 4차 염 및/또는 흡수제, 예컨대, 벤토나이트, 카올린 또는 디칼슘 포스페이트와 혼합시킴으로써 제조된다. 분말 혼합물은 결합제, 예컨대, 시럽, 전분 페이스트, 아카디아 점액질(acadia mucilage) 또는 셀룰로스성 또는 폴리머성 물질의 용액으로 습윤시키고, 스크린(screen)에 통과시킴으로써 과립화될 수 있다. 과립화에 대한 대안으로서, 분말 혼합물은 정제 기계를 통해 작동될 수 있고, 결과물은 과립으로 파쇄된 불완전하게 형성된 슬러그이다. 과립은 스테아르산, 스테아레이트 염, 탈크 또는 미네랄 오일의 첨가에 의해 윤활되어 정제 형성 다이(die)에 고착하는 것을 예방할 수 있다. 이후, 윤활된 혼합물은 정제로 압착된다. 화학식(I)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염은 또한 자유 유동 불활성 담체와 함께 조합되고, 과립화 또는 슬러깅 단계를 거치지 않고 곧바로 정제로 압착될 수 있다. 쉘락(shellac)의 실링 코팅제(sealing coat), 당 또는 폴리머성 물질의 코팅 및 왁스의 폴리쉬 코팅(polish coating)으로 이루어진 투명하거나 불투명한 보호 코팅이 제공될 수 있다. 염료는 상이한 단위 투여량을 구별하기 위해 이러한 코팅에 첨가될 수 있다.
경구용 유체, 예컨대, 용액, 시럽 및 엘릭시르제(elixir)는 제시되는 양이 소정량의 화합물을 함유하도록 투여 단위 형태로 제조될 수 있다. 시럽은 적합하게 풍미가 가해진 수용액 중에 화합물을 용해시킴으로써 제조될 수 있지만, 엘릭시르제는 비독성 알코올성 비히클(vehicle)의 사용을 통해 제조된다. 현택액은 비독성 비히클 중에 화합물을 분산시킴으로써 제형화될 수 있다. 가용화제 및 유화제, 예컨대, 에톡실화 이소스테아릴 알코올 및 폴리옥시 에틸렌 소르비톨 에테르, 보존제 및 풍미 첨가제, 예컨대, 페퍼민트 오일 또는 천연 감미료 또는 사카린 또는 그 밖의 인공 감미료 등이 또한 첨가될 수 있다.
경구 투여용 투여 단위 조성물은 적절하게 마이크로캡슐화될 수 있다. 제형은 또한 예를 들어, 폴리머, 또는 왁스 등에 미립 물질을 코팅 또는 내장시킴으로써 방출을 연장 또는 지속시키도록 제조될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염은 또한 리포솜 전달 시스템, 예컨대, 소형 단일박막 소포체(unilamellar vesicle), 대형 단일박막 소포체 및 다중박막 소포체(multilamellar vesicle)의 형태로 투여될 수 있다. 리포솜은 다양한 인지질, 예컨대, 콜레스테롤, 스테아릴아민 또는 포스파티딜콜린으로부터 형성될 수 있다.
국소 투여용으로 구성된 약학적 조성물은 연고, 크림, 현탁액, 에멀젼, 로션, 분말, 용액, 페이스트, 젤, 스프레이, 포움, 에어로졸(aerosol) 또는 오일로 제형화될 수 있다. 이러한 약학적 조성물은 보존제, 약물 침투를 보조하기 위한 용매, 조용매, 연화제, 추진제, 점도 조절제(겔화제), 계면활성제 및 담체를 포함하나, 이로 제한되지 않는 통상적인 첨가제를 포함할 수 있다. 일 구체예에서, 조성물에 대해 0.01 내지 10 중량%, 또는 0.01 내지 1 중량%의 화학식(I)의 화합물, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 국소 투여용으로 구성된 약학적 조성물이 제공된다.
안구 또는 그 밖의 외부 조직, 예를 들어, 구강 및 피부의 치료의 경우, 조성물은 바람직하게는 국소용 용액, 현탁액, 에멀젼, 연고, 크림, 젤, 스프레이 또는 포움으로서 도포된다. 연고로 제형화될 경우, 활성 성분은 파라핀 또는 수혼화성 연고 기재와 함께 사용될 수 있다. 다르게는, 활성 성분은 수중유형 크림 기재 또는 유중수형 기재의 크림으로 제형화될 수 있다. 포움으로 제형화되는 경우, 활성제는 추진제, 계면활성제, 용매, 조용매, 및 점도 조절제로 제형화될 수 있다.
안구에 대한 국소 투여용으로 구성된 약학적 조성물은 활성 성분이 적합한 담체, 특히 수성 용매에 용해되거나 현탁되어 있는 점안액을 포함한다. 안구에 투여되어야 하는 조성물은 안과적으로 상용가능한 pH 및 삼투질 농도(osmolality)를 가질 것이다. 산, 예컨대, 아세트산, 붕산, 시트르산, 락트산, 인산 및 염산; 염기, 예컨대, 수산화나트륨, 소듐 포스페이트, 소듐 보레이트, 소듐 시트레이트, 소듐 아세테이트, 및 소듐 락테이트; 및 완충제, 예컨대 시트레이트/덱스트로즈, 중탄산나트륨 및 염화암모늄을 포함하는, 하나 이상의 안과적으로 허용되는 pH 조절제 및/또는 완충제가 본 발명의 조성물에 포함될 수 있다. 이러한 산, 염기, 및 완충제는 안과적으로 허용되는 범위 내에서 조성물의 pH를 유지하는데 필요한 양으로 포함될 수 있다. 하나 이상의 안과적으로 허용되는 염은 조성물의 삼투질 농도가 안과적으로 허용되는 범위가 되도록 하기에 충분한 양으로 조성물에 포함될 수 있다. 이러한 염은 나트륨, 칼륨 또는 암모늄 양이온 및 클로라이드, 시트레이트, 아스코르베이트, 보레이트, 포스페이트, 바이카보네이트, 설페이트, 티오설페이트 또는 바이설파이트 음이온을 지닌 것들을 포함한다.
안구 전달 장치는 다수의 규정된 방출 속도 및 지속된 투여 동역학 및 투과성을 지닌 하나 이상의 치료제의 제어 방출을 위해 설계될 수 있다. 제어 방출은 약물 확산, 침식, 용해 및 삼투를 증진시킬 폴리머 분자량, 폴리머 결정화도, 코폴리머 비, 가공 조건, 표면 피니쉬, 기하형태, 부형제 첨가 및 폴리머 코팅의, 생분해성/생부식성 폴리머(예를 들어, 폴리(에틸렌 비닐) 아세테이트 (EVA), 수퍼가수분해된(superhydrolyzed) PVA), 하이드록시알킬 셀룰로즈(HPC), 메틸셀룰로즈 (MC), 하이드록시프로필 메틸 셀룰로즈 (HPMC), 폴리카프롤락톤, 폴리(글리콜)산, 폴리(락트)산, 다가무수물의 상이한 선택 및 특성을 포함하는 폴리머 메트릭의 설계를 통해 얻어질 수 있다.
또한, 안구 전달을 위한 약학적 조성물은 상피내 겔화가능한 수성 조성물을 포함한다. 이러한 조성물은 안구 또는 눈물과의 접촉시 겔화를 촉진하는데 효과적인 농도로 겔화제를 포함한다. 적합한 겔화제는 열경화성 폴리머를 포함하나, 이로 제한되지 않는다. 본원에서 사용되는 용어 "상피내 겔화가능한"은 안구 또는 눈물과의 접촉시 겔을 형성하는 저 점도의 액체를 포함할 뿐만 아니라 안구 투여시 실질적으로 증가된 점도 또는 겔 강성을 나타내는 세미-유체(semi-fluid) 및 틱소트로프 겔(thixotropic gel)과 같은 보다 점성의 액체를 포함한다. 예를 들어, 안구 약물 전달에 사용하기 위한 폴리머의 예에 대한 교시를 위해 본원에서 참고로 포함되는 문헌(Ludwig (2005) Adv. Drug Deliv. Rev. 3;57: 1595-639)을 참조한다.
코 또는 흡입 투여용 투여 형태는 에어로졸, 용액, 현탁액, 겔 또는 건조 분말로 편리하게 제형화될 수 있다.
흡입 투여용으로 적합하고/거나 흡입 투여용으로 구성된 조성물의 경우, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 예를 들어, 마이크론화에 의해 얻어진 입도가 감소된 형태인 것이 바람직하다. 입도가 감소된(예를 들어, 마이크론화) 화합물 또는 염의 바람직한 입도는 약 0.5 내지 약 10마이크론(예를 들어, 레이저 회절을 사용하여 측정된 바와 같은)의 D50 값으로 명시된다.
예를 들어, 흡입 투여용의 에어로졸 제형은 약학적으로 허용되는 수성 또는 비수성 용매 중의 활성 물질의 용액 또는 미세 현탁액을 포함할 수 있다. 에어로졸 제형은 밀봉된 용기에 무균 형태로 1회 또는 다회 투여량으로 제공될 수 있고, 이것은 분무 장치(atomising device) 또는 흡입기(inhaler)로의 사용을 위해 카트리지(카트리지) 또는 리필(refill)의 형태를 취할 수 있다. 다르게는, 밀봉된 용기는 용기의 내용물이 소진되면 폐기의 목적으로 정량 밸브(metering valve)(정량식 흡입기(metered dose inhaler))가 장착된 1회 투여량 코용 흡입기 또는 에어로졸 디스펜서와 같은 일원화 분배 장치(unitary dispensing device)일 수 있다.
투여 형태가 에어로졸 디스펜서를 포함하는 경우, 바람직하게는 가압 하에 있는 적합한 분사제(propellant), 예컨대, 압축 공기, 이산화탄소 또는 유기 분사제, 예컨대, 하이드로플루오로카본(HFC)을 함유한다. 적합한 HFC 분사제는 1,1,1,2,3,3,3-헵타플루오로프로판 및 1,1,1,2-테트라플루오로에탄을 포함한다. 에어로졸 투여 형태는 또한 펌프-분무기(pump-atomiser)의 형태를 취할 수 있다. 가압 에어로졸은 활성 화합물의 용액 또는 현탁액을 함유할 수 있다. 이것은 현탁 제형의 분산 특징 및 균질성을 개선시키기 위해 추가 부형제, 예를 들어, 보조 용매 및/또는 계면활성제의 혼입을 필요로 할 수 있다. 용액 제형은 또한 에탄올과 같은 보조 용매의 첨가를 필요로 할 수 있다.
흡입 투여용으로 적합하고/거나 흡입 투여용으로 구성된 약학적 조성물의 경우, 약학적 조성물은 건조 분말 흡입가능한 조성물일 수 있다. 그러한 조성물은 분말 기재, 예컨대, 락토오스, 글루코스, 트레할로스, 만니톨 또는 전분, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염(바람직하게는, 입도가 감소된 형태, 예를 들어, 마이크론화 형태), 및 임의로 성능 개질제, 예컨대, L-류신 또는 또 다른 아미노산 및/또는 스테아르산의 금속 염, 예컨대, 마그네슘 또는 칼슘 스테아레이트를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 건조 분말 흡입가능한 조성물은 락토오스, 예를 들어, 락토오스 일수화물과 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염의 건조 분말 블렌드(blend)를 포함한다. 그러한 조성물은 예를 들어, GB 2242134 A호에 기재된 GlaxoSmithKline에 의해 판매되는 DISKUS® 장치와 같은 적합한 장치를 사용하여 환자에게 투여될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염은 유체 디스펜서, 예를 들어, 유체 디스펜서의 펌프 메카니즘에 사용자에 의해 가해진 힘의 적용시 유체 제형의 정량된 투여량이 분배되는 디스펜싱 노즐 또는 디스펜싱 오리피스(orifice)를 갖는 유체 디스펜서로부터의 전달을 위해 유체 제형으로서 제형화될 수 있다. 그러한 유체 디스펜서에는 일반적으로 다회 정량된 투여량의 유체 제형의 저장소가 제공되고, 투여량은 후속의 펌프 작동시 분배가능하다. 디스펜싱 노즐 또는 오리피스는 비강으로 유체 제형의 스프레이 분배를 위해 사용자의 콧구멍 내의 삽입을 위해 구성될 수 있다. 상기 언급된 유형의 유체 디스펜서는 WO-A-2005/044354호에 기재되고 예시된다.
치료적 유효량의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 예를 들어, 동물의 나이 및 체중, 정확하게는 치료를 요하는 질환 및 이의 중증도, 제형의 성질, 및 투여 경로를 포함하는 다수 인자에 좌우될 것이고, 근본적으로 주치의 또는 수의사의 재량에 좌우될 것이다. 약학적 조성물에서, 경구 또는 비경구 투여를 위한 각각의 투여 단위는 유리 염기로서 계산된 0.01 내지 3000mg, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 1000mg의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 함유하는 것이 바람직하다. 코 또는 흡입 투여를 위한 각각의 투여 단위는 유리 염기로서 계산하여, 0.001 내지 50mg, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 5mg의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 함유하는 것이 바람직하다.
약학적으로 허용되는 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 예를 들어, 유리 염기로서 계산하여, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 일당 0.01 mg 내지 3000 mg, 또는 일당 0.5 내지 1000 mg의 경구 또는 비경구 투여량, 또는 일당 0.001 내지 50 mg 또는 일당 0.01 내지 5mg의 비강 또는 흡입 투여량의 매일 투여량(성인 환자에 대해)으로 투여될 수 있다. 이러한 양은 일당 단일 투여량으로 또는 보다 일반적으로 전체 매일 투여량이 동일하도록 일당 소정 회수(예컨대, 2, 3, 4, 5 또는 6)의 서브-투여량으로 제시될 수 있다. 이의 염의 효과적인 양은 화학식(I)의 화합물 자체의 효과적인 양의 소정 비율로서 결정될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염은 단독으로 또는 다른 치료제와 병용하여 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명의 병용 요법(combination therapy)은 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염의 투여, 및 하나 이상의 다른 약학적 활성제의 사용을 포함한다. 바람직하게는, 본 발명에 따른 병용 요법은 하나 이상의 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상의 다른 약학적 활성제의 투여를 포함한다. 화학식 (I)의 화합물(들) 및 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 다른 약학적 활성제(들)는 단일 약학적 조성물에 함께 또는 따로 투여될 수 있고, 따로 투여될 경우, 이것은 동시에 또는 어떠한 순서로 순차적으로 일어날 수 있다. 화학식 (I)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 다른 약학적 활성제(들)의 양 및 상대적인 투여 타이밍(timing)은 요망되는 조합된 치료 효과를 달성하기 위해 선택될 것이다. 따라서, 추가의 양태에서, 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 하나 이상의 다른 약학적 활성제를 포함하는 조합 약학적 제품(combination pharmaceutical product)이 제공된다.
따라서, 일 양태에서, 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 및 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 약학적 조성물은 하나 이상의 그 밖의 치료제, 예를 들어, 항생제, 항바이러스제, 글루코코르티코스테로이드, 무스카린성 길항제, 베타-2 효능제, 및 비타민 D3 유사체로부터 선택된 치료제를 포함하거나 그러한 치료제와 조합하여 사용될 수 있다. 추가의 양태에서, 본 발명에 따른 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염은 암 치료에 적합한 추가의 치료제와 조합하여 사용될 수 있다.
화학식 (I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염이 일반적으로 흡입, 정맥내, 경구 또는 비내 경로에 의해 투여되는 다른 치료제와 함께 투여될 때, 생성된 약학적 조성물은 동일한 경로에 의해 투여될 수 있음이 이해될 것이다. 다르게는, 조성물의 개별 성분은 상이한 경로에 의해 투여될 수 있다.
본 발명의 일 구체예는 1개 또는 2개의 다른 치료제를 포함하는 조합물을 포함한다.
치료 성분의 활성 및/또는 안정성 및/또는 물리적 특성, 예컨대 용해성을 최적화시키기 위해, 다른 치료 성분(들)은 적절하게 염의 형태, 예를 들어, 알칼리 금속 또는 아민 염 또는 산 부가염, 또는 전구약물, 또는 에스테르, 예를 들어, 저급 알킬 에스테르, 또는 용매화물, 예를 들어, 수화물로 사용될 수 있음이 당업자에게 명백할 것이다. 또한, 적절한 경우, 치료 성분은 광학적으로 순수한 형태로 사용될 수 있음이 명백할 것이다.
상기 언급된 조합물은 약학적 조성물의 형태로 사용하기 위해 편리하게 제공될 수 있고, 이에 따라 약학적으로 허용되는 희석제 또는 담체와 함께 상기 명시된 조합물을 포함하는 약학적 조성물은 본 발명의 추가 양태를 나타낸다.
화학식 (I)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염은 하기 기재된 방법에 의해 또는 유사한 방법에 의해 제조될 수 있다. 따라서, 하기 중간체 및 실시예는 화학식 (I)의 화합물 및 이의 약학적으로 허용되는 염의 제조를 예시하기 위해 제공된 것이고, 어떠한 방식으로 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 간주되지 않는다.
일반적인 실험 세목
언급된 모든 온도는 ℃이다.
하기 화합물의 명칭은 화합물 명명 프로그램 "ACD Name Pro 6.02" 또는 Chem Draw Ultra 12.0을 사용하여 얻어진 것이다.
약어
AcOH는 아세트산을 나타낸다.
BINAP는 2,2'-비스(디페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸을 나타낸다.
BOC는 3차-부톡시카보닐을 나타낸다.
CV는 컬럼 부피를 나타낸다.
DCM는 디클로로메탄을 나타낸다.
1,2-DCE는 1,2-디클로로에탄을 나타낸다.
DCC는 디사이클로헥실카보디이미드를 나타낸다.
DIPEA는 디이소프로필에틸아민을 나타낸다.
DMAP는 4-디메틸아미노피리딘을 나타낸다.
DMSO는 디메틸설폭사이드를 나타낸다.
DMF는 N,N-디메틸포름아미드를 나타낸다.
에테르(Ether)는 디에틸 에테르를 나타낸다.
Et20는 디에틸 에테르를 나타낸다.
EtOAc는 에틸 아세테이트를 나타낸다.
FMOC는 9-플루오레닐메톡시카보닐을 나타낸다.
HATU는 0-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트를 나타낸다.
HPLC는 고성능 액체 크로마토그래피를 나타낸다.
IPA는 프로판-2-올을 나타낸다.
i-Pr20는 디-이소프로필 에테르를 나타낸다.
LiAlH4는 리튬 알루미늄 하이드라이드를 나타낸다.
MDAP는 질량에 의한 자동분취형의 분취용 질량에 의한 HPLC를 나타낸다.
MeCN는 아세토니트릴을 나타낸다.
MeOH는 메탄올을 나타낸다.
MgS04는 황산마그네슘을 나타낸다.
Mp는 융점을 나타낸다.
r.t.는 실온을 나타낸다.
Rt는 체류 시간을 나타낸다.
Na2S04는 황산나트륨을 나타낸다.
TMEDA는 테트라메틸에틸렌디아민을 나타낸다.
TFA는 트리플루오로아세트산을 나타낸다.
THF는 테트라하이드로푸란을 나타낸다.
TLC는 박막 크로마토그래피를 나타낸다.
LC / MS 방법론(특정 중간체 및 참조 화합물에 대해 사용됨)
본원에 언급되는 LC/MS 방법 A 내지 F의 실험 세부 사항은 하기와 같다:
1 ml/분의 유속으로 0-1.5분 1-97% B, 1.5-1.9분 97% B, 1.9-2.0분 100% B의 용리 구배를 이용하여 암모니아 용액에 의해 pH 10으로 조절되는 수중 10 mM 중탄산암모늄(용매 A) 및 아세토니트릴(용매 B)로 용리되는 Acquity UPLC BEH C18 컬럼 (50mm x 2.1 mm i.d. 1.7㎛ 패킹 직경) 상에서 40℃에서 LC/MS (방법 A)를 수행하였다. UV 검출은 210nm 내지 350nm의 파장으로부터의 적산(summed) 신호였다. 질량 스펙트럼을 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무(Alternate-scan Positive and Negative Electrospray)를 이용하는 Waters ZQ Mass Spectrometer로 기록하였다. 이온화 데이터는 가장 가까운 정수로 어림잡았다.
1 ml/분의 유속으로 0-1.5분 3-100% B, 1.5-1.9분 100% B, 1.9-2.0분 3% B의 용리 구배를 이용하여 수중 0.1 % v/v 포름산 용액(용매 A) 및 아세토니트릴 중 0.1 % v/v 포름산 용액(용매 B)으로 용리되는 Acquity UPLC BEH C18 컬럼 (50mm x 2.1 mm i.d. 1.7㎛ 패킹 직경) 상에서 40℃에서 LC/MS (방법 B)를 수행하였다. UV 검출은 210nm 내지 350nm의 파장으로부터의 적산 신호였다. 질량 스펙트럼을 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무를 이용하는 Waters ZQ Mass Spectrometer로 기록하였다. 이온화 데이터는 가장 가까운 정수로 어림잡았다.
1 ml/분의 유속으로 0-1.5분 3-100% B, 1.5-1.9분 100% B, 1.9-2.0분 3% B의 용리 구배를 이용하여 수중 0.1 % v/v 트리플루오로아세트산 용액(용매 A) 및 아세토니트릴 중 0.1 % v/v 트리플루오로아세트산 용액(용매 B)으로 용리되는 Acquity UPLC BEH C18 컬럼 (50mm x 2.1 mm i.d. 1.7㎛ 패킹 직경) 상에서 40℃에서 LC/MS (방법 C)를 수행하였다. UV 검출은 210nm 내지 350nm의 파장으로부터의 적산 신호였다. 질량 스펙트럼을 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무를 이용하는 Waters ZQ Mass Spectrometer로 기록하였다. 이온화 데이터는 가장 가까운 정수로 어림잡았다.
3mL/분의 유량으로 0-0.7분 0%B, 0.7-4.2분 0→100%B, 4.2-5.3분 100%B, 5.3-5.5분 100→0%B의 용리 구배를 이용하여 수중 0.1% HCO2H 및 0.01 M 암모늄 아세테이트(용매 A), 및 수중 95% 아세토니트릴 및 0.05% HCO2H(용매 B)로 용리되는 Supelcosil LCABZ+PLUS 컬럼(3μm, 3.3cm × 4.6mm ID) 상에서 LC/MS(방법 D)를 실시하였다. 전기분무 양성 이온화([M+H]+ 및 [M+NH4]+ 분자 이온을 제공하는 ES+ve) 또는 전기분무 음성 이온화([M-H]- 분자 이온을 제공하는 ES-ve) 방식을 이용하는 Fisons VG Platform 질량 분광기 상에서 질량 스펙트럼(MS)을 기록하였다. 이러한 장치로부터의 분석 데이터는 하기 형식으로 주어진다: [M+H]+ 또는 [M-H]-.
5mL/분의 유량으로 0-4분 0-100% B, 4-5분 100% B의 용리 구배를 이용하여 수중 0.01 M 암모늄 아세테이트(용매 A) 및 100% 아세토니트릴 (용매 B)로 용리되는 Chromolith Performance RP 18 컬럼 (100 x 4.6 mm id) 상에서 LC/MS(방법 E)를 실시하였다. 대기압 화학 양성 이온화(atmospheric pressure chemical positive ionisation) [MH+ 분자 이온을 제공하는 AP+ve] 또는 대기압 화학 음성 이온화 [(M-H)- 분자 이온을 제공하는 AP-ve] 방식을 이용하는 마이크로질량(micromass) Platform-LC 질량 분광기 상에서 질량 스펙트럼(MS)을 기록하였다. 이러한 장치로부터의 분석 데이터는 하기 형식으로 주어진다: [M+H]+ 또는 [M-H]-.
3ml/분의 유량으로 0-0.1분 3%B, 0.1-4.2분 3-100% B, 4.2-4.8분 100% B, 4.8-4.9분 100-3%B, 4.9-5.0분 3% B의 용리 구배를 사용하여, 수중 트리플루오로아세트산의 0.1% v/v 용액(용매 A) 및 아세토니트릴 중 트리플루오로아세트산의 0.1% v/v 용액(용매 B)으로 용리하는 Sunfire C18 컬럼(30mm × 4.6mm i.d. 3.5μm 패킹 직경) 상에서 섭씨 30도로 LC/MS(방법 F)를 실시하였다. UV 검출은 210nm 내지 350nm의 파장으로부터의 평균 신호였고, 양성 전기분무 이온화를 이용하여 질량 분광기 상에서 질량 스펙트럼을 기록하였다. 이온화 데이터는 가장 가까운 정수로 어림잡았다.
1 ml/분의 유속으로 0-1.5분 1-97% B, 1.5-1.9분 97% B, 1.9-2.0분 97 내지 100% B의 용리 구배를 이용하여 수중 0.1 % v/v 포름산 용액(용매 A) 및 아세토니트릴 중 0.1 % v/v 포름산 용액(용매 B)의 용리 구배로 용리되는 Acquity UPLC BEH C18 컬럼 (50mm x 2.1 mm i.d. 1.7㎛ 패킹 직경) 상에서 40℃에서 LC/MS (방법 G)를 수행하였다. UV 검출은 210nm 내지 350nm의 파장으로부터의 적산 신호였다. 질량 스펙트럼을 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무를 이용하는 Waters ZQ Mass Spectrometer로 기록하였다. 이온화 데이터는 가장 가까운 정수로 어림잡았다.
LC/HRMS: 1.3mL/분의 유량으로 0-0.5분 5% B, 0.5-3.75분 5→100% B, 3.75-4.5 100% B, 4.5-5 100→5% B, 5-5.5 5% B의 용리 구배를 이용하여, 수중 0.01M 암모늄 아세테이트(용매 A) 및 100% 아세토니트릴(용매 B)로 용리하는 Uptisphere-hsc 컬럼(3μm 33 × 3mm id) 상에서 분석용 HPLC를 실시하였다. 전기분무 양성 이온화(MH+ 분자 이온을 제공하는 ES+ve) 또는 전기분무 음성 이온화((M-H)- 분자 이온을 제공하는 ES-ve) 방식을 이용하는 마이크로질량 LCT 질량 분광기 상에서 질량 스펙트럼(MS)을 기록하였다.
TLC(박막 크로마토그래피)는 실리카 겔 60 F254로 코팅된 Merck에서 판매되는 TLC 플레이트의 사용을 언급한다.
"질량에 의한 자동분취형"/"분취용 질량에 의한 HPLC"를 Waters 600 구배 펌프, Water 2767 인젝트/콜렉터, Waters 시약 매니저(Reagent manager), Gilson Aspec-폐기물 콜렉터(waste collector), Gilson 115 포스-프랙션(post-fraction) UV 검출기 및 컴퓨터 시스템을 포함하는 Waters FractionLynx 시스템과 같은 시스템에서 수행하였다. 사용된 컬럼은 전형적으로 Supelco LCABZ++ 컬럼이며, 이의 치수는 20mm 내부 직경 x 100mm 길이이다. 고정상 입자 크기는 5㎛이다. 유속은 적합한 용리 구배를 이용하여 수중 0.1 % 포름산 또는 트리플루오로아세트산(용매 A) 및 아세토니트릴 중 0.1 % 포름산 또는 트리플루오로아세트산(용매 B)에 의해 20mL/분을 사용하였다. 전기분무 양성 및 음성 방식, 대체 스캔을 이용하는 Micromass ZQ 질량 분광기로 질량 스펙트럼을 기록하였다. 사용된 소프트웨어는 MassLynx 4.0이거나 동등한 대체 시스템을 사용하였다.
LCMS 방법론
방법 포르메이트(포름산 개질화제 )
LC 조건
40℃에서 Acquity UPLC BEH C18 컬럼 (50mm x 2.1 mm, i.d. 1.7㎛ 패킹 직경)으로 UPLC 분석을 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 수중 0.1 % v/v 포름산 용액
B = 아세토니트릴 중 0.1 % v/v 포름산 용액
사용된 구배 다음과 같았다:
Figure 112013106202166-pct00006
UV 검출은 210nm 내지 350nm 파장으로부터의 적산 신호였다.
MS 조건
MS: Waters ZQ
이온화 방식: 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무(lonisation mode Alternate-scan positive and negative electrospray)
스캔 범위: 100 내지 1000 AMU
스캔 시간: 0.27초
내부 스캔 지연: 0.10초
방법 HpH ( 중탄산암모늄 개질화제 )
LC 조건
40℃에서 Acquity UPLC BEH C18 컬럼 (50mm x 2.1 mm, i.d. 1.7㎛ 패킹 직경)으로 UPLC 분석을 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 암모니아 용액을 사용하여 pH 10으로 조절된 수중 10mM 탄산수소암모늄
B = 아세토니트릴
사용된 구배는 다음과 같았다:
Figure 112013106202166-pct00007
UV 검출은 210nm 내지 350nm 파장으로부터의 적산 신호였다.
MS 조건
MS : Waters ZQ
이온화 방식: 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무
스캔 범위: 100 내지 1000 AMU
스캔 시간: 0.27초
내부 스캔 지연: 0.10초
MDAP 방법론
포르메이트 방법(포름산 개질화제 )
LC 조건
주위 온도에서 Sunfire C18 컬럼 (100mm x 19mm, i.d 5㎛ 패킹 직경) 또는 Sunfire C18 컬럼 (150mm x 30mm, i.d. 5㎛ 패킹 직경)으로 HPLC 분석을 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 수중 0.1 % v/v 포름산 용액
B = 아세토니트릴 중 0.1 % v/v 포름산 용액
20ml/분(100mm x 19mm, i.d 5㎛ 패킹 직경) 또는 40ml/분(100mm x 30mm, i.d. 5㎛ 패킹 직경)의 유속으로 15분 또는 25분(연장된 실시)에 걸쳐 소정 구배로 실시함.
UV 검출은 210nm 내지 350nm 파장로부터의 적산 신호였다.
MS 조건
MS: Waters ZQ
이온화 방식: 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무
스캔 범위: 100 내지 1000 AMU
스캔 시간: 0.50초
내부 스캔 지연: 0.20초
HpH 방법(중탄산암모늄 개질화제)
LC 조건
주위 온도에서 Xbridge C18 컬럼 (100mm x 19mm, i.d 5㎛ 패킹 직경) 또는 Xbridge C18 컬럼 (100mm x 30mm, i.d. 5㎛ 패킹 직경)으로 HPLC 분석을 수행하였다.
사용된 용매는 다음과 같았다:
A = 암모니아 용액을 사용하여 pH 10으로 조절된 수중 10mM 중탄산암모늄
B = 아세토니트릴
20ml/분(100mm x 19mm, i.d 5㎛ 패킹 직경) 또는 40ml/분(150mm x 30mm, i.d. 5㎛ 패킹 직경)의 유속으로 15분 또는 25분(연장된 실시)에 걸쳐 소정 구배로 실시함.
UV 검출은 210nm 내지 350nm 파장의 적산 신호였다.
MS 조건
MS: Waters ZQ
이온화 방식: 대체-스캔 양성 및 음성 전기분무
스캔 범위: 100 내지 1000 AMU
스캔 시간: 0.50초
내부 스캔 지연: 0.20초
중간체 1
1-((2S,4R)-4-아미노-6-브로모-2-메틸-3,4-디하이드로퀴놀린-1(2H)-일)에타논
Figure 112013106202166-pct00008
DCM (480 mL) 중의 염화알루미늄 (41.2 g, 309 mmol)의 현탁액을 0℃에서 질소 하에 캐뉼라를 통해 DCM(80 ml) 중의 이소프로필 ((2S,4R)-1-아세틸-6-브로모-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-4-일)카바메이트 (30 g, 81 mmol)의 용액을 처리하고, 형성된 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반하였다. 이후, 반응 혼합물을 캐뉼라를 통해 트리에틸아민 (136 mL, 975 mmol) 및 메탄올 (48 mL)의 혼합물로 서서히 처리하였다. 이에 따라 형성된 케이크를 에틸 아세테이트 (800 mL) 중에서 교반하고, 여과에 의해 분리하고, 이어서 DCM (800 mL)과 포화된 NaHC03 수용액 (800 mL) 사이에 분배시켰다. 소듐 포타슘 타르트레이트(300 g)을 첨가하고, 형성된 혼합물을 2 h 동안 격렬하게 교반하였다. 층을 분리시키고, DCM 층을 소결 깔때기를 통해 여과시켰다. 여액을 건조시키고(MgS04), 진공 하에 농축시켜 1-((2S,4R)-4-아미노-6-브로모-2-메틸-3,4-디하이드로퀴놀린-1(2H)-일)에타논 (19.6 g, 69.2 mmol, 85 % 수율)의 제 1 수득물을 황색 포움으로서 얻었다. 수성 상을 DCM (800 mL)로 추가로 처리하고, 2상 혼합물을 밤새 교반하였다. 이후, 층을 분리시키고, 유기 층을 MgS04 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 1-((2S,4R)-4-아미노-6-브로모-2-메틸-3,4-디하이드로퀴놀린-1(2H)-일)에타논 (3.4 g, 12.01 mmol, 14.78 % 수율)의 제 2 수득물을 얻었다. LCMS (HpH, 2분), Rt=0.77분, MH+ = 283 (1 Br).
중간체 2
6-(((2S,4R)-1-아세틸-6-브로모-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-4-일)아미노)니코티노니트릴
Figure 112013106202166-pct00009
1-((2S,4R)-4-아미노-6-브로모-2-메틸-3,4-디하이드로퀴놀린-1(2H)-일)에타논 (제법에 대해서는 중간체 1을 참조하라)(2.28 g, 8.05 mmol)과 6-클로로니코티노니트릴 (2.231 g, 16.10 mmol)의 혼합물에 NMP (20 mL)를 첨가하고, 혼합물 DIPEA (4.22 mL, 24.16 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 2개의 플라스크 간에 나누고, 각각의 플라스크를 질소로 플러싱하고, 밀봉하고, 마이크로파 조사 하에 200℃에서 2 h 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 합하고, 물과 EtOAc 사이에서 분배하였다. 수성 층을 EtOAc (x4)로 추출하고, 합한 유기 층을 물(x3)로 세척한 후, 염수로 세척하고, 건조시키고(MgS04), 여과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 갈색 고형 잔류물을 크로마토그래피(헥산 중 EtOAc 구배)에 정제하여 6-(((2S,4R)-1-아세틸-6-브로모-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-4-일)아미노)니코티노니트릴(1.940 g, 5.04 mmol, 62.5 % 수율)을 연황색 포움으로서 얻었다. LCMS (HpH, 2분), Rt=1.02분, MH+ = 386 (1 Br).
중간체 3
메틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트
Figure 112013106202166-pct00010
6-(((2S,4R)-1-아세틸-6-브로모-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-4-일)아미노)니코티노니트릴(제법에 대해서는 중간체 2를 참조하라)(1000 mg, 2.60 mmol), (4-(메톡시카보닐)페닐)보론산 (561 mg, 3.11 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (300 mg, 0.260 mmol) 및 탄산칼륨 (1076 mg, 7.79 mmol)로 충전된 플라스크에 DME (20 mL) 및 물 (4.0 mL)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 100℃에서 질소 하에 1h 동안 교반한 후, 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc과 물 사이에서 분배시키고, 층을 분리시켰다. 유기 상을 건조시키고(MgS04), 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 크로마토그래피 (10 g 컬럼, MeOH/DCM 구배)에 의해 정제하여 메틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 (1002 mg, 2.275 mmol, 88 % 수율)를 오렌지색 포움으로서 얻었다. LCMS (HpH, 2분), Rt=1.09분, MH+ = 441.
중간체 4
4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조산
Figure 112013106202166-pct00011
메탄올 (15 mL) 중의 메틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 (제법에 대해서는 중간체 3을 참조하라) (1.0 g, 2.270 mmol)의 용액을 실온에서 수산화나트륨 수용액 (2N, 2.27 mL, 4.54 mmol)로 처리하고, 형성된 혼합물을 이 온도에서 24 h 동안 교반하였다. MeOH의 벌크(bulk)를 진공 하에 증발시키고, 수성 잔류물을 아세트산 (0.39 mL, 6.81 mmol)으로 처리하여 침전물을 얻었으며, 이를 여과에 의해 분리하고, 진공 하에 40℃에서 건조시켜 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조산 (820 mg, 1.923 mmol, 85 % 수율)을 황색 고형물로서 얻었다. LCMS (HpH, 2분), Rt=0.64분, MH+ = 427.
중간체 5
6-(((2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-4-일)아미노)니코티노니트릴
Figure 112013106202166-pct00012
6-(((2S,4R)-1-아세틸-6-브로모-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-4-일)아미노)니코티노니트릴(제법에 대해서는 중간체 2를 참조하라) (847 mg, 2.199 mmol), 비스(피나콜레이토)디보론(1228 mg, 4.84 mmol), PdCl2(dppf) (161 mg, 0.220 mmol) 및 칼륨 아세테이트 (324 mg, 3.30 mmol)로 충전된 플라스크에 DMSO (7 mL)를 첨가하고, 혼합물을 질소 하에 탈기시키고, 질소 하에 1h 동안 80℃에서 교반하였다. 비스(피나콜레이토)디보론 (1 g), PdCl2(dppf) (100 mg) 및 칼륨 아세테이트 (150 mg)의 추가 부분을 첨가하고, 혼합물을 45 분 동안 교반하였다. 비스(피나콜레이토)디보론 (1 g), PdCl2(dppf) (100 mg) 및 칼륨 아세테이트 (150 mg)의 추가의 부분을 첨가하고, 혼합물을 45분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc 및 물로 처리하였다. 2상 혼합물을 Celite™ 패드(10 g)를 통해 여과시키고, 층을 분리시켰다. 수성 층을 EtOAc (x2)로 추출하고, 합한 유기 층을 물 (x4)로 세척한 후 염수로 세척하고, 건조시키고(MgS04), 진공 하에 농축시켰다. 크로마토그래피 [50 g 컬럼, EtOAc/헥산 구배]에 의해 잔류물을 정제하여 6-(((2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-4-일)아미노)니코티노니트릴 (800 mg, 1.850 mmol, 84 % 수율)을 적색 검으로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=1.08분, MH+ = 433.
중간체 6
메틸 6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코티네이트
Figure 112013106202166-pct00013
6-(((2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-4-일)아미노)니코티노니트릴(제법에 대해서는 중간체 5를 참조하라) (800 mg, 1.850 mmol), 메틸 6-브로모니코티네이트 (440 mg, 2.036 mmol), 탄산칼륨 (767 mg, 5.55 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (214 mg, 0.185 mmol)으로 충전된 플라스크에 톨루엔 (8 mL) 및 에탄올 (8 mL)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 90℃에서 질소 하에 3 h 동안 교반하였으며, 이 시점에서 탄산칼륨 (384 mg), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (107 mg) 및 메틸 6-브로모니코티네이트 (220 mg)의 부분들을 첨가하고, 반응 혼합물 5 h 동안 계속해서 교반하였다. 이후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc과 물 사이에서 분배시켰다. 상을 분리시키고, 수성 층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고(MgS04), 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피 [25 g 컬럼, EtOAc / 헥산 구배]에 의해 정제하여 에틸 6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코티네이트 (600 mg, 1.317 mmol, 71.2 % 수율)를 백색 포움으로서 얻었다. LCMS (HpH, 2분), Rt=1.07분, MH+ = 456.
중간체 7
6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코틴산
에탄올 (10 mL) 중의 메틸 6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코티네이트 (제법에 대해서는 중간체 6을 참조하라) (580 mg, 1.273 mmol)의 용액을 수산화리튬 수용액 (1 N, 2.55 mL, 2.55 mmol)로 처리하고, 형성된 혼합물을 2 h 동안 교반하였다. 에탄올의 벌크를 진공 하에 증발시키고, 잔류물을 물 (ca. 5 mL)로 희석하였다. 탁한 혼합물을 아세트산 (0.146 mL, 2.55 mmol)으로 처리하고, 형성된 침전물을 여과에 의해 분리시키고, Et20로 세척하고, 60℃에서 16 h 동안 건조시켜 6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코틴산 (410 mg, 0.959 mmol, 75 % 수율)을 연황색 고형물로서 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LCMS (HpH, 2분), Rt=0.63분, MH+ = 428.
중간체 8
에틸 2-(4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)페닐) 아세테이트
Figure 112013106202166-pct00015
톨루엔 (10 mL) 및 에탄올 (10.0 mL) 중의 6-(((2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-4-일)아미노)니코티노니트릴 (제법에 대해서는 중간체 5를 참조하라) (1.67 g, 3.86 mmol), 에틸 2-(4-브로모페닐)아세테이트 (1.127 g, 4.64 mmol) 및 탄산칼륨 (1.602 g, 11.59 mmol)의 용액에 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (0.446 g, 0.386 mmol)을 질소 하에 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 1h 동안 가열한 후, EtOAc과 물 사이에서 분배시켰다. 층을 분리시키고, 수성 상을 EtOAc (x3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고(MgS04), 여과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/헥산 구배 (10 내지 80%)로 용리되는 실리카 겔 (25g) 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 에틸 2-(4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)페닐)아세테이트 (752 mg, 42%)를 점성의 무색 오일로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=1.10분, MH+ = 469.
중간체 9
2-(4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)페닐)아세트산, 리튬 염
Figure 112013106202166-pct00016
메탄올 (5 mL) 중의 에틸 2-(4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)페닐)아세테이트 (제법에 대해서는 중간체 8을 참조하라) (300 mg, 0.640 mmol)의 용액에 수산화리튬 용액 (0.768 mL, 0.768 mmol)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 40℃에서 2 h 동안 교반하였으며, 이때 이를 진공 하에 농축시켜 2-(4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)페닐)아세트산의 미정제 리튬 카복실레이트(286 mg, 100%)를 백색 고형물로서 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 사용하였다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=1.10분, MH+ = 433.
중간체 10
3-(4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)페닐)프로판산
Figure 112013106202166-pct00017
톨루엔 (6 mL) 및 에탄올 (6 mL) 중의 6-(((2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-4-일)아미노)니코티노니트릴 (제법에 대해서는 중간체 5를 참조하라) (382 mg, 0.884 mmol) 및 3-(4-브로모페닐)프로판산 (243 mg, 1.060 mmol)의 용액에 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (102 mg, 0.088 mmol) 및 탄산칼륨 (366 mg, 2.65 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 형성된 혼합물을 80℃에서 2 h 동안 교반한 후, 물과 EtOAc 사이에서 분배하였다. 층을 분리시키고, 수성 상을 EtOAc (x3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고(MgS04), 여과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 미정제 잔류물을 헥산 (10-70%) 중의 EtOAc로 용리되는 실리카 겔 (25g) 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 3-(4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)페닐)프로판산 (209 mg, 52%)을 백색 고형물로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=0.91 분, MH+ = 455.
중간체 11
1-메틸에틸 (2E)-2-부테노일 카바메이트
Figure 112013106202166-pct00018
이소프로필 카바메이트 (30 g, 291 mmol, TCI로부터 입수가능)를 3L Lara 용기에 충전하고, 무수 테트라하이드로푸란 (THF) (150 ml)을 첨가하였다. (2E)-2-부테노일 클로라이드(31.2 ml, 326 mmol, Aldrich로부터 입수가능)를 질소 하에 첨가하고, 쟈켓(jacket)을 -30℃로 냉각시켰다. 용액 온도가 -17℃에 이르면, 반응 온도를 -10℃ 내지 -18℃로 유지하면서 리튬 3차-부톡사이드 (1 M, 655 mL, 655 mmol)를 2h에 걸쳐 연동 펌프(peristaltic pump)에 의해 첨가하였다. 첨가가 완료되면, 혼합물을 30 분 동안 교반하고, 0℃가 되게 하였다. 디에틸 에테르 (450ml) 및 염산 (1M, 375 mL)를 첨가하고, 혼합물을 격렬하게 교반하면서 20℃가 되게 하였다. 교반을 멈추고, 층을 분리되게 하고, 수성층을 유출시켰다. 염수 (375 mL)을 첨가하고, 혼합물을 격렬하게 교반하였다. 교반을 멈추고, 층을 분리되게 하고, 수성 층을 유출시켰다. 유기 층을 건조시키고(MgS04), 여과시키고, 갈색 오일 (60g)로 증발시켰다. 이를 실리카 컬럼 (40+M Biotage)에 적용하고, DCM/에틸 아세테이트(1:1 내지 0:1, 10CV)로 용리시켰다. 생성물 함유 분획을 증발 건조시키고, Redisep Isco 실리카 컬럼 (1500g) 상에 로딩하고, 헥산 중 에틸 아세테이트 (0-40%) 구배로 용리되게 하였다. 등명한, 생성물 함유 분획을 오프-화이트 고형물(15.41 g)로 증발시켰다. LCMS (방법 C): Rt = 0.68, MH+ = 172
중간체 12
1-메틸에틸 {(3S)-3-[(4-브로모페닐)아미노]부타노일}카바메이트
Figure 112013106202166-pct00019
1-메틸에틸 (2E)-2-부테노일카바메이트 (제법에 대해서는 중간체 11을 참조하라)(9.38 g, 54.8 mmol)를 질소 하에 톨루엔 (281 mL) 중에서 교반하고, (R-BINAP)디트리플레이트비스(아세토니트릴)팔라듐(II) (중간체 24, 3.35 g, 3.01 mmol)을 첨가하였다. 촉매가 검과 같은 볼(gummy ball)을 형성하였으며, 용액이 불투명한 황색 혼합물로 변하였고, 20분 동안 교반하였다. 4-브로모아닐린 (14.14 g, 82 mmol)을 첨가하자, 용액이 등명한 밝은 갈색으로 변하였고, 검과 같은 촉매가 추가로 용해되었다. 혼합물을 16 h 동안 교반하였다. 유사하게, 1-메틸에틸 (2E)-2-부테노일카바메이트 (중간체 11 , 8.51 g, 49.7 mmol)의 제 2 배치(batch)를 질소 하에 톨루엔 (255 mL) 중에서 교반하고, (R-BINAP)디트리플레이트비스(아세토니트릴)팔라듐(II) (3.04 g, 2.73 mmol)을 첨가하였다. 촉매가 검과 같은 볼을형성하고, 용액이 불투명한 황색 변하였으며, 20분 동안 교반하였다. 4-브로모아닐린 (12.83 g, 74.6 mmol)을 첨가하자, 용액이 등명한 연갈색으로 변하였고, 검과 같은 촉매가 추가로 용해되었다. 혼합물을 16 h 동안 교반하였다. 두 개의 반응 혼합물을 합하고, 1.5 kg Isco 실리카 Redisep 컬럼에 로딩하였다. 컬럼을 DCM/MeOH (0%->0.5%, 19 CV)로 용리되게 하였다. 등명한, 생성물 함유 분획을 연갈색 오일로 증발시켰다. 혼합물을 진공 오븐에서 밤새 40℃에서 건조시켜 백색 고형물(24.2 g, 67% 전체)을 얻었다.
LCMS (방법 C): Rt = 0.91 , MH+ = 343. ee = 92%.
중간체 13
1-메틸에틸 [(2S,4R)-6-브로모-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-4-퀴놀리닐]카바메이트
Figure 112013106202166-pct00020
1-메틸에틸 {(3S)-3-[(4-브로모페닐)아미노]부타노일}카바메이트 (제법에 대해서는 중간체 12를 참조하라)(17.9 g, 52.2 mmol)를 에탄올 (150 mL) 중에 흡수시키고, C02/아세톤 배쓰에서 -10℃ (내부 온도) 아래로 냉각시켰다. 온도를 -5℃ 미만으로 유지시키면서, NaBH4 (1.381 g, 36.5 mmol)을 첨가한 후 물 (25 mL) 중의 마그네슘 클로라이드 헥사하이드레이트 (11.35 g, 55.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 < 0℃에서 1h 동안 교반되게 한 후, 실온으로 가온시키고, 1h 동안 교반하였다. 형성된 농후한 현탁액을 시트르산 (25.05 g, 130 mmol), HCl (수중 1 M, 205 mL, 205 mmol) 및 DCM (205 mL)의 혼합물에 부었다. 2상 혼합물을 실온에서 1h 동안 교반하였다. 층을 분리시키고, 유기 층을 Na2S04로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 생성물을 연갈색 고형물(14.1 g)로서 얻었다. LCMS (방법 B): Rt = 1.13, MH+ = 327
중간체 14
1-메틸에틸 [(2S,4R)-1-아세틸-6-브로모-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-4-퀴놀리닐]카바메이트
Figure 112013106202166-pct00021
1-메틸에틸 [(2S,4R)-6-브로모-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-4-퀴놀리닐]카바메이트 (제법에 대해서는 중간체 13을 참조하라)(14.1 g, 43.1 mmol)를 질소 하에 실온에서 DCM (400 mL) 중에 흡수시켰다. 피리딘 (10.46 mL, 129 mmol), 다음에 아세틸 클로라이드 (4.60 mL, 64.6 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 16 h 동안 교반한 후, EtOAc (2000 mL) 및 포화된 NaHC03 수용액 (800 mL) 사이에서 분배시켰다. 층을 분리시키고, 유기 상을 물, 다음에 염수 (각각 1500 mL)로 세척한 후, Na2S04로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 자주색 고형물을 얻었다. 미정제 생성물을 최소량의 DCM 중에 흡수시키고, 330g Companion XL 컬럼에 적용하고, 헥산 중 12-63% 에틸 아세테이트의 구배로 용리시켜 생성물을 오프-화이트 고형물(12.37 g)로서 얻었다.
LCMS (방법 B): Rt = 1.03, MH+ = 369
[알파]D = +281.1025° (T = 20.7℃, 10mm 셀, c=0.508g/100ml, 에탄올).
중간체 15
에틸 4-[(2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-4-({[(1-메틸에틸)옥시]카보닐}아미노)-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐]벤조에이트
Figure 112013106202166-pct00022
1-메틸에틸 [(2S,4R)-1-아세틸-6-브로모-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-4-퀴놀리닐]카바메이트 (제법에 대해서는 중간체 14를 참조하라), (39.0 g, 106 mmol), {4-[(에틸옥시)카보닐]페닐}보론산 (22.5 g, 116 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (1.83 g, 1.58 mmol)를 DME (430 mL) 중에서 혼합하고, 형성된 혼합물을 수성 Na2C03 (2N, 210 mL, 420 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 질소로 수회 켄칭하면서 하우스(house) 진공 하에 탈기시키고, 105℃에서 질소 하에 대략 6 h 동안 교반한 후, 실온으로 냉각되게 하였다. 혼합물을 EtOAc과 물 사이에서 분배시키고, 층을 분리시켰다. 수성 상을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기 상을 염수로 세척하였다. 이후, 유기 상을 70 g 실리카 카트리지를 통해 여과시키고, 카트리지를 EtOAc로 세척하였다. 합한 여액과 세척물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 Et20로 분쇄한 후, 여과시켰다. 수득된 고형물을 공기-건조시켜 에틸 4-[(2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-4-({[(1-메틸에틸)옥시]카보닐}아미노)-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐]벤조에이트 (35.2 g, 80.2 mmol, 76%)를 회색 고형물로서 얻었다. 여액을 진공 하에 농축시키고, 얻어진 잔류물을 Et20 (대략 30 mL)로 분쇄하였다. 형성된 고형물을 여과에 의해 분리하고, 공기-건조시켜 에틸 4-[(2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-4-({[(1-메틸에틸)옥시]카보닐}아미노)-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐]벤조에이트를 회색 고형물(5.96 g, 13.5 mmol, 13%)로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), 체류 시간 1.16 분, MH+ = 439
중간체 16
에틸 4-[(2S,4R)-1-아세틸-4-아미노-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐
Figure 112013106202166-pct00023
에틸 4-[(2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-4-({[(1-메틸에틸)옥시]카보닐}아미노)-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐]벤조에이트 (제법에 대해서는 중간체 15를 참조하라) (8.90 g, 20.30 mmol)를 얼음/물 배쓰로 냉각된 DCM (160 mL) 중의 염화알루미늄 (10.3 g, 77 mmol)의 현탁액에 첨가하였다. 첨가 후 온도를 0℃에서 대략 6℃로 상승시켰다. 형성된 혼합물을 대략 0℃에서 20분 동안 교반한 후, 메탄올 (18 mL) 및 트리에틸아민 (34 mL, 245 mmol)의 용액으로 30초에 걸쳐 처리하였다. 형성된 혼합물을 0℃에서 ~30분 동안 교반한 후, EtOAc 및 포화된 NaHC03 수용액 사이에서 분배시켰다.
에틸 4-[(2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-4-({[(1-메틸에틸)옥시]카보닐}아미노)-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐]벤조에이트 (제법에 대해서는 중간체 15를 참조하라) (0.89 g, 2.030 mmol), 염화알루미늄 (1.03 g, 7.72 mmol), 트리에틸아민 (3.4 mL, 24.53 mmol), DCM (16 mL) 및 MeOH (1.3mL)을 사용하여 동일한 반응을 병행하여 수행하였다. 둘 반응의 생성물을 이 단계에서 합하고, 형성된 혼합물을 실온에서 대략 10분 동안 교반하였다(전체 부피: 대략 1 L). 혼합물을 Celite™를 통해 여과시키고, 불용성 잔류물을 EtOAc 및 포화된 NaHC03 수용액으로 세척하고, 층을 분리시켰다. 수성 상을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고(소수성 프릿), 진공 하에 농축시켜 에틸 4-[(2S,4R)-1-아세틸-4-아미노-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐]벤조에이트 (6.6 g, 84% - 병행 실험의 부가를 허용함)를 크림색 고형물로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), 체류 시간 0.73 분, [M-NH2]+ = 336
중간체 17
에틸 4-{(2S,4R)-1-아세틸-4-[(4-클로로페닐)아미노]-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐}벤조에이트
Figure 112013106202166-pct00024
에틸 4-[(2S,4R)-1-아세틸-4-아미노-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐]벤조에이트 (제법에 대해서는 중간체 16을 참조하라) (6.6 g, 18.73 mmol), 1-브로모-4-클로로벤젠 (3.94 g, 20.60 mmol), 비스(디벤질리덴아세톤)팔라듐 (0) (690 mg, 1.2 mmol) 및 [2'-(디사이클로헥실포스파닐)-2-바이페닐일]디메틸아민 (Dave-phos) (590 mg, 1.499 mmol))를 톨루엔 (120 mL) 중에서 혼합하고, 형성된 혼합물을 소듐 t-부톡사이드 (2.52 g, 26.2 mmol)로 처리하였다. 반응물을 질소로 수회 켄칭시키면서 하우스 진공 하에 탈기시키고, 질소 하에 16h 동안 70℃에서 가열한 후, 실온으로 냉각되게 하고, 여과시켰다. 불용성 잔류물을 톨루엔으로 세척한 다음 Et20로 세척하였다. 합한 여액과 세척물을 물 (x2)로 세척한 후, 염산 (2N, x2)으로 추출하여, 오렌지색 오일의 침전물을 형성시켰으며, 이를 수성의 산성 상으로 수거하였다. 산성 추출물을 Et20로 세척하고, 합한 유기 상을 염수로 세척하고, 건조시키고(소수성 프릿), 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc/헥산 구배 (5-45%)로 용리되는 실리카 카트리지(330g) 상의 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 건조되게 감소시켜 연황색 포움을 얻었다. 상기 포움을 EtOAc (50 mL) 중에 용해시키고, 작용성 티오우레아 실리카(0.56 g, 팔라듐 스캐빈져)로 처리하였다. 혼합물을 실온에서 (공기 대기) ~20분 동안 교반한 후, 실온에서 16 h 동안 방치하였다. 혼합물을 여과시키고, 불용성 잔류물을 EtOAc로 세척하였다. 합한 여액과 세척물을 진공 하에 농축시켜 에틸 4-{(2S,4R)-1-아세틸-4-[(4-클로로페닐)아미노]-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐}벤조에이트 (3.7 g, 8.0 mmol, 32%)를 황색 오일로서 얻었다.
중간체 18
4-{(2S,4R)-1-아세틸-4-[(4-클로로페닐)아미노]-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐}벤조산
Figure 112013106202166-pct00025
에틸 4-{(2S,4R)-1-아세틸-4-[(4-클로로페닐)아미노]-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐}벤조에이트(제법에 대해서는 중간체 17을 참조하라) (5.41 g, 11.69 mmol)를 에탄올 (100 mL) 중에 용해시키고, 용액을 NaOH 수용액 (2M, 50 mL, 100 mmol)으로 처리하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 (공기 대기) 대략 2 h 동안 교반한 후, 대부분의 에탄올을 진공 하에 제거하였다. 형성된 황색 용액을 물로 희석하였다(오일성 황색 침전물의 형성을 초래함). 이후, 수성 상을 DCM (이는 이전에 형성된 침전물을 용해시키지 않았다)로 2회 세척한 후, 염산 (2N)에 의해 pH 1로 산성화시키고, EtOAc (x2)로 추출하였다. 합한 EtOAc 상을 염수로 세척하고, 건조시키고(소수성 프릿), 진공 하에 농축시켰다. 잔류 황색 포움을 대략 1H에 걸쳐 Et20로 분쇄하였다. 형성된 고형물을 여과에 의해 분리시키고, Et20로 세척하고, 공기-건조시켜 4-{(2S,4R)-1-아세틸-4-[(4-클로로페닐)아미노]-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐}벤조산 (4.41 g, 10.1 mmol, 87%)을 크림색 고형물로서 얻었다. LCMS (HpH), 체류 시간 1.08 분, [M-H]- = 433
중간체 19
메틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트
Figure 112013106202166-pct00026
DME (50 mL) 및 물 (10.0 mL) 중의 이소프로필 ((2S,4R)-1-아세틸-6-브로모-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-4-일)카바메이트 (5 g, 13.54 mmol) 및 메틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)벤조에이트 (3.90 g, 14.89 mmol)의 용액에 팔라듐 테트라키스(트리페닐포스핀) (1.565 g, 1.354 mmol) 및 탄산칼륨 (5.61 g, 40.6 mmol)을 연속해서 첨가하였다. 형성된 혼합물을 100℃에서 1h 동안 교반하였으며, 이때 이를 실온으로 냉각시키고 Celite™를 통해 여과시켰다. 여액을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc과 물 사이에서 분배시켰다. 수성 상을 (EtOAc (x3)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgS04 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 미정제 화합물을 헥산 (5-60%) 중 EtOAc로 용리되는 실리카 겔 카트리지 (50g) 상의 플래쉬 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 메틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 (4.64 g, 81 %)를 백색 검으로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=1.09분, MH+ = 425.
중간체 20
리튬 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트
Figure 112013106202166-pct00027
메탄올 (20 mL) 중의 메틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 (제법에 대해서는 중간체 19를 참조하라)(1.63 g, 3.84 mmol)의 용액에 수산화리튬 (4.61 mL, 4.61 mmol)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 40℃에서 6 h 동안 교반하였으며, 이때 이를 감압 하에 농축시켜 리튬 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 (1.65 g, 100%)를 얻었으며, 이를 정제하지 않고 다음 단계에 직접 사용하였다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=0.87, MH+ = 411.
중간체 21
4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조산
Figure 112013106202166-pct00028
리튬 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 (1.05 g, 2.52 mmol) (제법에 대해서는 중간체 20을 참조하라)를 EtOAc과 염산 (2M) 사이에서 분배시켰다. 상을 분리시키고, 수성 상을 EtOAc (x3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgS04 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켜 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조산 (898 mg, 87%)을 백색 고형물로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=0.87, MH+ = 411.
중간체 22
에틸 2-(4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)페닐)아세테이트
Figure 112013106202166-pct00029
에틸 (4-브로모페닐)아세테이트 (0.174 mL, 1.000 mmol), 1-메틸에틸 [(2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1,2,3,4-테트라하이드로-4-퀴놀리닐]카바메이트 (416 mg, 1 mmol), 탄산칼륨 (415 mg, 3.00 mmol) 및 PdCl2(dppf) (73.2 mg, 0.100 mmol)로 충전된 플라스크에 1,4-디옥산 (6 mL) 및 물 (2.0 mL)을 첨가하고, 플라스크를 질소로 플러싱하였다. 형성된 혼합물을 마이크로파 조사 하에 120℃에서 30분 동안 교반한 후, 실온으로 냉각시켰다. 디옥산의 벌크를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 EtOAc과 물 사이에서 분배시켰다. 층을 분리시키고, 수성 상을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgS04 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 크로마토그래피 [(25g 컬럼, MeOH/DCM)]에 의해 정제하여 에틸 2-(4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)페닐)아세테이트 (270 mg, 59.7 % 수율)를 얻었다. 상기 화합물을 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. LCMS (HpH, 2분), Rt=1.16, MH+ = 453.
중간체 23
2-(4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)페닐)아세트산
Figure 112013106202166-pct00030
메탄올 (6 mL) 및 물 (2.0 mL) 중의 에틸 {4-[(2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-4-({[(1-메틸에틸)옥시]카보닐}아미노)-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐]페닐}아세테이트 (제법에 대해서는 중간체 22를 참조하라)(270 mg, 0.597 mmol)의 용액에 실온에서 수산화나트륨 수용액(2N, 0.597 mL, 1.193 mmol)을 첨가하고, 형성된 혼합물을 6 h 동안 교반하였다. 수산화나트륨 수용액 (2N, 0.5 mL)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 방치하였다. 메탄올의 벌크를 진공 하에 제거하고, 형성된 잔류물을 물과 Et20 사이에서 분배시키고, 층을 분리시켰다. 수성 층을 염산 (2N, 2 mL)으로 산성화시키고, EtOAc로 2회 추출하였다. 합한 유기 상을 MgS04 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 {4-[(2S,4R)-1-아세틸-2-메틸-4-({[(1-메틸에틸)옥시]카보닐}아미노)-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐]페닐}아세트산 (200 mg, 0.471 mmol, 79 % 수율)을 갈색 포움으로서 얻었다. 상기 화합물을 추가의 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. LCMS (HpH, 2분), Rt=0.65, MH+ = 425.
중간체 24
(R-BINAP)디트리플레이트비스(아세토니트릴)팔라듐(II)
Figure 112013106202166-pct00031
R-(+)-BINAP (6.08 g, 9.76 mmol, Avocado로부터 입수가능)을 DCM (626 ml) 중에서 교반하고, 디클로로비스(아세토니트릴)팔라듐 (II) (2.5g, 9.64 mmol, Aldrich로부터 입수가능)을 첨가하였다. 혼합물을 질소 하에 30분 동안 교반하자, 현탁액이 용액이 되지 않았고, 보다 많은 DCM (100ml)을 첨가하였다. 혼합물을 추가의 30분 동안 교반하였으며, 아세토니트릴 (250 ml) 중에 용해된 실버 트리플레이트(5.00 g, 19.47 mmol, Aldrich로부터 입수가능)를 첨가하였다. 혼합물이 오렌지색의 탁한 현탁액으로부터 황색 현탁액으로 변하였다. 혼합물을 1h 동안 교반하고, Celite™ 통해 여과시키고, 오렌지색 고형물로 증발시켰다. 잔류물을 진공(대략 14mbar) 하에 실온에서 주말에 걸쳐 건조시켜 요망하는 생성물 (10.69g)을 얻었다.
1H NMR (400 MHz, MeCN-d3) δ ppm 2.0 (s, 6 H), 6.7 (d, 2H), 6.9 (br m, 4H), 7.1 (br t, 2H), 7.2 (t, 2H), 7.5 - 7.9 (m, 22H)
실시예 1
2-(디메틸아미노)에틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 하이드로클로라이드
Figure 112013106202166-pct00032
4-{(2S,4R)-1-아세틸-4-[(4-클로로페닐)아미노]-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐}벤조산 (제법에 대해서는 중간체 18을 참조하라)(100 mg, 0.230 mmol)을 DCM (1 mL) 중에 현탁시켰다. DMAP (33.7 mg, 0.276 mmol) 및 DCC (52.2 mg, 0.253 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 5분 동안 교반하여 등명한 황색 용액을 생성시켰다. DCM (0.5 mL) 중의 2-(디메틸아미노)에탄올 (20.5 mg, 0.230 mmol)을 이어서 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 DCM (8.5ml)로 희석하고, NaOH (2N), 물 및 염수 (각각 10ml) 세척한 후, Na2SO4로 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켜 오프-화이트의 반 고형물을 얻었다. 미정제 생성물을 최소량의 DCM(용해성을 보조하기 위해 몇 방울의 MeOH로) 중에 용해시키고, 25g 카트리지에 적용하였다. 카트리지를 진공 하에 40℃에서 1h 동안 건조시킨 후, 2CV에 대해 메탄올/DCM 중 1% 2M NH3로, 그 다음에 10CV에 대해 DCM 중 메탄올 중 1-5% 2M NH3로 용리시킨 후, 5CV에 대해 5%에서 유지시켰다. 적합한 분획을 진공 하에 농축시켜 유리 아민 생성물 (18.8 mg)을 등명한 오일로서 얻었다. 후자를 최소량의 DCM에 흡수시키고, Et20 중의 HCl(1 N, 0.19 mL, 0.190 mmol)을 첨가하고, 용매를 질소 스트림 하에 증발시켰다. 소량의 Et20를 첨가하고(~1 mL), 질소 하에 증발시켜 2-(디메틸아미노)에틸 4-{(2S,4R)-1-아세틸-4-[(4-클로로페닐)아미노]-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐}벤조에이트 하이드로클로라이드 (76.7 mg, 0.135 mmol, 58.6 % 수율)를 백색 고형물로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=0.91 분, MH+ = 506.
1H NMR (DMSO-d6): δ 1.16 (3H, d), 1.30 (1H, m), 2.21 (3H, s), 2.65-2.74 (7H, m), 3.24 (2H, m), 4.36 (1H, m), 4.56 (2H, m), 4.76 (1H, m), 6.38 (1H, d), 6.80 (2H, d), 7.19 (2H, d), 7.52 (1H, s), 7.54 (1H, d), 7.72 (1H, dd), 7.77 (2H, d), 8.13 (2H, d), 9.92 (1H, bs).
실시예 2
2-((4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조일)옥시)-N,N,N-트리메틸에탄아미늄, 포르메이트
Figure 112013106202166-pct00033
DMF (5 mL) 중의 4-{(2S,4R)-1-아세틸-4-[(4-클로로페닐)아미노]-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐}벤조산(제법에 대해서는 중간체 18을 참조하라) (200 mg, 0.460 mmol)의 용액에 K2C03 (95 mg, 0.690 mmol) 및 (2-브로모에틸)트리메틸암모늄 브로마이드 (170 mg, 0.690 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였으며, 이때 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH/DMSO 혼합물에 용해시키고, MDAP (포르메이트)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 2-((4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조일)옥시)-N,N,N-트리메틸에탄아미늄, 포르메이트 (133 mg, 51 %)를 오프-화이트 고형물로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=0.89분, MH+ = 520.
실시예 3
((4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조일)옥시)-N,N,N-트리메틸프로판-1-아미늄, 포르메이트
Figure 112013106202166-pct00034
4-{(2S,4R)-1-아세틸-4-[(4-클로로페닐)아미노]-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐}벤조산 (제법에 대해서는 중간체 18을 참조하라)(150 mg, 0.345 mmol)을 DMF (3 mL) 중에 용해시키고, K2C03 (47.7 mg, 0.345 mmol)를 첨가한 다음, 3-브로모-N,N,N-트리메틸-1-프로판아미늄, 브로마이드 (90 mg, 0.345 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였으며, 이때 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, MDAP (포르메이트)에 의해 정제하여 3-{[(4-{(2S,4R)-1-아세틸-4-[(4-클로로페닐)아미노]-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐}페닐)카보닐]옥시}-N,N,N-트리메틸-1-프로판아미늄, 포르메이트 (41 mg, 0.064 mmol, 19 % 수율)를 황색 오일로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=0.86분, MH+ = 534.
실시예 4
3-(디메틸아미노)프로필 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트
Figure 112013106202166-pct00035
DMF (10 mL) 중의 4-{(2S,4R)-1-아세틸-4-[(4-클로로페닐)아미노]-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로-6-퀴놀리닐}벤조산 (제법에 대해서는 중간체 18을 참조하라)(250 mg, 0.575 mmol)의 용액에 3-(디메틸아미노)-1-프로판올 (71.2 mg, 0.690 mmol), EDC (220 mg, 1.150 mmol) 및 DMAP (7.0 mg, 0.057 mmol)를 연속해서 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였으며, 이후 진공 하에 농축시키고, 1:1 MeOH/DMSO 혼합물 중에 용해시키고, MDAP (HpH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 3-(디메틸아미노)프로필 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 (41 mg, 17%)를 점성의 무색 오일로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=0.94분, MH+ = 520.
실시예 5
3-(디메틸아미노)프로필 6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코티네이트
Figure 112013106202166-pct00036
DMF (5 mL) 중의 6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코틴산 (제법에 대해서는 중간체 7을 참조하라)(100 mg, 0.234 mmol)의 용액에 3-(디메틸아미노)-1-프로판올 (121 mg, 1.170 mmol), EDC (90 mg, 0.468 mmol) 및 DMAP (2.86 mg, 0.023 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였으며, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 1:1 MeOH/DMSO 혼합물 중에 용해시키고, MDAP (HpH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 3-(디메틸아미노)프로필 6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코티네이트 (23 mg, 19%)를 무색 오일로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=0.70분, MH+ = 513.
실시예 6
2-(디메틸아미노)에틸 6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코티네이트
Figure 112013106202166-pct00037
DMF (5 mL) 중의 6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코틴산 (제법에 대해서는 중간체 7을 참조하라)(54 mg, 0.126 mmol)의 용액에 K2C03 (26.2 mg, 0.189 mmol) 및 2-브로모-N,N-디메틸에탄아민 (28.8 mg, 0.189 mmol)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 3 h 동안 교반하고, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔류물을 1:1 MeOH/DMSO 혼합물 중에 용해시키고, MDAP (포르메이트)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 2-(디메틸아미노)에틸 6-((2R,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코티네이트 (16.5 mg, 24%)를 점성의 무색 오일로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=0.69분, MH+ = 499.
실시예 7
3-(디메틸아미노)프로필 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐) 메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트
Figure 112013106202166-pct00038
DMF (3 mL) 중의 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조산 (제법에 대해서는 중간체 21을 참조하라)(164 mg, 0.400 mmol) 및 3-(디메틸아미노)프로판-1-올 (206 mg, 1.998 mmol)의 용액에 N-((에틸이미노)메틸렌)-N,N-디메틸프로판-1,3-디아민 하이드로클로라이드 (153 mg, 0.799 mmol) 및 N,N-디메틸피리딘-4-아민 (4.88 mg, 0.040 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 2h 동안 교반하고, 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc를 첨가하였다. 층을 분리시키고, 수성 상을 EtOAc (x3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgS04 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH/DMSO 혼합물 중에 용해시키고, MDAP (HpH)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 감압 하에 농축시켜 3-(디메틸아미노)프로필 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 (29.3 mg,15%)를 점성의 무색 오일로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=0.75분, MH+ = 476.
실시예 8
2-(디메틸아미노)에틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐) 메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트
Figure 112013106202166-pct00039
DMF (5 mL) 중의 리튬 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 (제법에 대해서는 중간체 20을 참조하라)(246 mg, 0.591 mmol) 및 2-브로모-N,N-디메틸에탄아민 (135 mg, 0.886 mmol)의 용액에 탄산칼륨 (122 mg, 0.886 mmol)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 실온에서 2h 동안 교반하고, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 1:1 MeOH/DMSO 혼합물 중에 용해시키고, MDAP (포르메이트)에 의해 정제하였다. 적합한 분획을 합하고, 진공 하에 농축시켜 2-(디메틸아미노)에틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 (14.5 mg, 5%)를 점성의 무색 오일로서 얻었다. LCMS (포르메이트, 2분), Rt=0.72분, MH+ = 482.
참조 화합물
참조 화합물 A : 2-메틸-6-(메틸옥시)-4H-3,1-벤족사진-4-온
Figure 112013106202166-pct00040
5-메톡시안트라닐산(Lancaster) (41.8 g, 0.25 mol)의 용액을 3.5h 동안 아세트산 무수물 (230 mL) 중에서 환류시킨 후, 감압 하에 농축시켰다. 이후, 미정제 화합물을 톨루엔의 존재 하에 2회 농축시킨 후, 여과시키고, 에테르로 2회 세척하여 표제 화합물 (33.7 g, 71 % 수율)을 갈색 고형물로서 얻었다. LC/MS (방법 D): m/z 192 [M+H]+, Rt 1.69 분.
참조 화합물 B: [2-아미노-5-(메틸옥시)페닐](4-클로로페닐)메타논
Figure 112013106202166-pct00041
톨루엔/에테르(2/1) 혼합물 (760 mL) 중의 2-메틸-6-(메틸옥시)-4H-3,1-벤족사진-4-온 (제법에 대해서는 참조 화합물 A를 참조하라) (40.0 g, 0.21 mol)의 용액에 0℃에서 4-클로로페닐마그네슘 브로마이드 (170 mL, Et20 중 1M, 0.17 mol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온되게 하고, 1h 동안 교반한 후, 1 N HCl (200 mL)로 켄칭시켰다. 수성 층을 EtOAc (3 x 150 mL)로 추출하고, 합한 유기 물질을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na2S04 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 이후, 미정제 화합물을 EtOH (400 mL) 중에 용해시키고, 6N HCl (160 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 2 h 동안 환류시킨 후, 부피가 1/3이 되도록 농축시켰다. 형성된 고형물을 여과시키고, 에테르로 2회 세척한 후, EtOAc 중에 현탁시키고, 1 N NaOH로 중화시켰다. 수성 층을 EtOAc (3 x 150 mL)로 추출하고, 합한 유기 물질을 염수 (150 mL)로 세척하고, Na2S04 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 표제 화합물을 황색 고형물 (39 g, 88 % 수율)로서 얻었다.
LC/MS (방법 D): m/z 262 [M+H]+, Rt 2.57 분.
참조 화합물 C: 메틸 N1-[2-[(4-클로로페닐)카보닐]-4-(메틸옥시)페닐]-N2-{[(9H-플루오렌-9-일메틸)옥시]카보닐}-L-α-아스파라기네이트
Figure 112013106202166-pct00042
메틸 N-{[(9H-플루오렌-9-일메틸)옥시]카보닐}-L-α-아스파르틸 클로라이드 {Int. J. Peptide Protein Res. 1992, 40, 13-18) (93 g, 0.24 mol)를 CHCl3 (270 mL) 중에 용해시키고, [2-아미노-5-(메틸옥시)페닐](4-클로로페닐)메타논 (제법에 대해서는 참조 화합물 B를 참조하라) (53 g, 0.2 mol)을 첨가하였다. 형성된 혼합물을 60℃에서 1h 동안 교반한 후, 냉각시키고, 부피가 60%가 되도록 농축시켰다. 에테르를 0℃에서 첨가하고, 형성된 침전물을 여과시키고, 폐기하였다. 여액을 감압 하에 농축시키고, 추가의 정제 없이 사용하였다.
참조 화합물 D: 메틸 [(3S)-5-(4-클로로페닐)-7-(메틸옥시)-2-옥소-2,3-디하이드로-1H-1,4-벤조디아제프-3-일]아세테이트
Figure 112013106202166-pct00043
DCM (500 mL) 중의 메틸 N 1-[2-[(4-클로로페닐)카보닐]-4-(메틸옥시)페닐]-N2-{[(9H-플루오렌-9-일메틸)옥시]카보닐}-L-α-아스파라기네이트 (제법에 대해서는 참조 화합물 C를 참조하라)(0.2 mol 추정)의 용액에 Et3N (500 mL, 3.65 mol)를 첨가하고, 형성된 혼합물을 24h 동안 환류시킨 후, 농축시켰다. 형성된 미정제 아민을 1,2-DCE (1.5 L) 중에 용해시키고, AcOH (104 mL, 1.8 mol)를 조심스럽게 첨가하였다. 이후, 반응 혼합물을 60℃에서 2h 동안 교반한 후, 진공 하에 농축시키고, DCM 중에 용해시켰다. 유기 층을 1 N HCl로 세척하고, 수성 층을 DCM (x3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 및 염수로 2회 세척하고, Na2S04 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 고형물을 MeCN 중에 재결정화시켜 표제 화합물 (51 g)을 연황색 고형물로 얻었다. 여액을 농축시키고, MeCN 중에서 재결정화시켜 또 다른 10g의 요망하는 생성물을 얻을 수 있었다. Rf = 0.34 (DCM/MeOH : 95/5).
C19H18 35ClN204에 대한 HRMS (M+H)+ 이론치 373.0955; 실측치 373.0957.
참조 화합물 E: 메틸 [(3S)-5-(4-클로로페닐)-7-(메틸옥시)-2-티옥소-2,3-디하이드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일]아세테이트
Figure 112013106202166-pct00044
1,2-DCE (700 mL) 중의 P4S10 (36.1 g, 81.1 mmol) 및 Na2C03(8.6 g, 81.1 mmol)의 현탁액을 실온에서 2 h 동안 교반한 후 메틸 [(3S)-5-(4-클로로페닐)- 7-(메틸옥시)-2-옥소-2,3-디하이드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일]아세테이트(제법에 대해서는 참조 화합물 D를 참조하라) (16.8 g, 45.1 mmol)를 첨가하였다. 형성된 혼합물을 70℃에서 2 h 동안 교반한 후, 냉각시키고, 여과시켰다. 고형물을 DCM로 2회 세척하고, 포화된 NaHC03 및 염수로 여과시켰다. 유기 층을 Na2S04 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 실리카 겔 (DCM/MeOH: 99/1) 상의 플래쉬-크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 (17.2 g, 98% 수율)을 황색 빛깔의 고형물로서 얻었다. LC/MS (방법 D): m/z 389 [M(35Cl)+H]+, Rt 2.64 분
C19H18 35ClN203S에 대한 HRMS (M+H)+ 이론치 389.0727; 실측치 389.0714.
참조 화합물 F: 메틸 [(3S)-2-[(1Z)-2-아세틸하이드라지노]-5-(4-클로로페닐)-7-(메틸옥시)-3H-1,4-벤조디아제핀-3-일]아세테이트
Figure 112013106202166-pct00045
THF (300 mL) 중의 메틸 [(3S)-5-(4-클로로페닐)-7-(메틸옥시)-2-티옥소-2,3-디하이드로-1H-1,4-벤조디아제핀-3-일]아세테이트 (제법에 대해서는 참조 화합물 E를 참조하라)(9.0 g, 23.2 mmol)의 현탁액에 0℃에서 하이드라진 일수화물 (3.4 mL, 69.6 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 5h 동안 5℃ 내지 15℃에서 교반한 후, 0℃에서 냉각시켰다. 이후, Et3N (9.7 mL, 69.6 mmol)을 서서히 첨가하고, 아세틸 클로라이드 (7.95 mL, 69.6 mmol)를 적가하였다. 이후, 혼합물을 16h 동안 실온으로 가온되게 한 후, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 생성물을 DCM 중에 용해시키고, 물로 세척하였다. 유기 층을 Na2S04 상에서 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켜 미정제 표제 화합물 (9.7 g, 98% 수율)을 얻었으며, 이를 추가의 정제 없이 사용하였다. Rf = 0.49 (DCM/MeOH : 90/10).
참조 화합물 G: 메틸 [(4S)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(메틸옥시)-4H-[1,2,4]트리아졸로[4,3-α][1,4]벤조디아제핀-4-일]아세테이트
Figure 112013106202166-pct00046
미정제 메틸 [(3S)-2-[(1 Z)-2-아세틸하이드라지노]-5-(4-클로로페닐)-7-(메틸옥시)-3H-1,4-벤조디아제핀-3-일]아세테이트 (제법에 대해서는 참조 화합물 F를 참조하라)(9.7 g 추정)를 THF (100 ml) 중에 현탁시키고, AcOH (60 mL)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 2일 동안 교반한 후, 감압 하에 농축시켰다. 미정제 고형물을 i-Pr20 중에서 분쇄하고, 여과시켜 표제 화합물 (8.7 g, 3 단계에 대해 91 %)을 오프-화이트 고형물로서 얻었다.
C21H20ClN4O3에 대한 HRMS (M+H)+ 이론치 411.1229; 실측치 411.1245.
참조 화합물 H: [(4S)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(메틸옥시)-4H-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a][1,4]벤조디아제핀-4-일]아세트산
Figure 112013106202166-pct00047
THF (130 mL) 중의 메틸 [(4S)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(메틸옥시)-4H-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a][1,4]벤조디아제핀-4-일]아세테이트(제법에 대해서는 참조 화합물 G를 참조하라)(7.4 g, 18.1 mmol)의 용액에 실온에서 1N NaOH (36.2 mL, 36.2 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 이 온도에서 5h 동안 교반한 후, 1 N HCl (36.2 mL)로 켄칭시키고, 진공 하에 농축시켰다. 이후, 물을 첨가하고, 수성 층을 DCM (x3)로 추출하고, 합한 유기 층을 Na2S04 상에서 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 표제 화합물 (7 g, 98% 수율)을 연황색 고형물로서 얻었다.
LC/MS (방법 D): m/z 397 [M+H]+
참조 화합물 I: 1,1-디메틸에틸 [5-({[(4S)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(메틸옥시)-4H-[1,2,4]트리아졸로[4,3-α][1,4]벤조디아제핀-4-일]아세틸}아미노)펜틸]카바메이트
Figure 112013106202166-pct00048
[(4S)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(메틸옥시)-4H-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a][1,4]벤조디아제핀-4-일]아세트산 (제법에 대해서는 참조 화합물 H를 참조하라) (1.0g, 2.5mmol), HATU (1.9g, 5mmol) 및 DIPEA (0.88ml, 5mmol)의 혼합물을 80분 동안 실온에서 교반하고, 이것에 1,1-디메틸에틸 (4-아미노부틸)카바메이트 (1.05ml, 5.0mmol, Aldrich로부터 입수가능)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2h 동안 교반한 후, 이를 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄 중에 흡수시키고, 1 N HCl로 세척하였다. 수성 층을 디클로로메탄으로 2회 추출하였다. 유기 층을 1 N 수산화나트륨으로 세척한 후, 포화된 염화나트륨 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄/ 메탄올 95/5을 사용하는 실리카 상의 플래쉬-크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물을 황색 고형물 (1.2g)로서 얻었다. LC/MS (방법 D): rt = 3.04 분.
참조 화합물 J: N-(5-아미노펜틸)-2-[(4S)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(메틸옥시)-4H-[1,2,4]트리아졸로[4,3-α][1,4]벤조디아제핀-4-일]아세트아미드 트리플루오로아세테이트
Figure 112013106202166-pct00049
디클로로메탄 (3 ml) 중의 1,1-디메틸에틸 [5-({[(4S)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(메틸옥시)-4H-[1,2,4]트리아졸로[4,3-a][1,4]벤조디아제핀-4-일]아세틸}아미노)펜틸]카바메이트 (제법에 대해서는 참조 화합물 I를 참조하라) (0.2 g, 0.34 mmol)의 용액에 0℃에서 트리플루오로아세트산 (0.053 ml, 0.68 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 3h 동안 0℃ 내지 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시켜서 표제 화합물을 흡습성 황색 오일(200mg)로서 얻었다.
LC/MS (방법 D): rt = 2.33분.
C25H29ClN602에 대한 HRMS (M+H)+ 이론치 481.2119; 실측치 481.2162.
참조 화합물 K: Alexa Fluor 488-N-(5-아미노펜틸)-2-[(4S)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(메틸옥시)-4H-[1,2,4]트리아졸[4,3-α][1,4]벤조디아제핀-4-일]아세트아미드의 5-이성질체와 6-이성질체의 혼합물
Figure 112013106202166-pct00050
N-(5-아미노펜틸)-2-[(4S)-6-(4-클로로페닐)-1-메틸-8-(메틸옥시)-4H- [1,2,4]트리아졸로[4,3-a][1,4]벤조디아제핀-4-일]아세트아미드 트리플루오로아세테이트 (제법에 대해서는 참조 화합물 J를 참조하라) (7.65 mg, 0.013 mmol)를 N,N-디메틸포름아미드 (DMF) (300 ㎕) 중에 용해시키고, Eppendorf 원심분리 관에서 Alexa Fluor 488 카복실산 석신이미딜 에스테르(5 mg, 7.77μmol, 5 이성질체와 6 이성질체의 혼합물, Invitrogen로부터 입수가능, 제품 번호 A-20100)를 첨가하였다. 휘니그 염기(Hunig's base)(7.0 ㎕, 0.040 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 밤새 보텍스(vortex) 혼합하였다. 18h 후, 반응 혼합물을 증발 건조시키고, 잔류물을 DMSO/물 (50%, <1 ml 전체) 중에 재용해시키고, 분석용 Phenomenex Jupiter C18 컬럼에 적용하고, 150분에 걸쳐 10ml/분의 유속으로 95% A: 5% B 내지 100% B (A = 수중 0.1 % 트리플루오로아세트산, B= 0.1 % TFA/90% 아세토니트릴/10% 물)의 구배로 용리시켰다. 불순한 분획을 합하고, 동일한 시스템을 사용하여 재정제하였다. 분획을 합하고, 증발시켜 표제 생성물(2.8mg)을 기재된 2 개의 레지오이성질체의 혼합물로서 얻었다. LC/MS (방법 F):, MH+ = 999, rt = 1.88분.
생물학적 시험 방법
형광 이방성 결합 검정(fluorescence anisotropy binding assay)
브로모도메인 BRD2, BRD3 및 BRD4에 대한 화학식 (I)의 화합물의 결합을 형광 이방성 결합 검정을 이용하여 평가할 수 있다.
시험 화합물의 부재 하에 형광성 리간드가 상당히(>50%) 결합되고, 충분한 농도의 강한 억제제의 존재 하에 결합되지 않은 형광성 리간드의 이방성이 결합 값으로부터 측정가능하게 상이해지는 조건 하에 열역학적 평형에 도달하도록 브로모도메인 단백질, 형광성 리간드(상기 참조 화합물 K 참조) 및 가변 농도의 시험 화합물을 함께 인큐베이션하였다.
각각의 플레이트 상의 16개의 높은 대조군 웰(control well) 및 16개의 낮은 대조군 웰의 평균으로 모든 데이터를 표준화시켰다. 이후, 하기 형태의 4개의 파라미터 커브 피트(curve fit)에 적용시켰다:
y = a + (( b - a) / ( 1 + ( 10 ^ × / 10 ^ c ) ^ d )
상기 식에서, 'a'는 최소값이고, 'b'는 힐 슬로프(hill slope)이고, 'c'는 pIC50이고, 'd'는 최대값이다.
재조합 인간 브로모도메인(BRD2 (1-473), BRD3 (1-435) 및 BRD4 (1-477))을 N-말단에 6개의 His 태그를 지니는 이.콜라이(E. coli) 세포(pET15b 벡터에서)에서 발현시켰다. His-태깅된 브로모도메인을 0.1mg/ml의 라이소자임 및 음파 처리(sonication)를 이용하여 이.콜라이(E.coli) 세포로부터 추출하였다. 이후, 브로모도메인을 20 Cv에 걸쳐 선형 10-500mM 이미다졸 구배로 용리하는 HisTRAP HP 컬럼 상의 친화성 크로마토그래피에 의해 정제하였다. Superdex 200 prep 그레이드의 크기 배제 컬럼에 의해 추가 정제를 완료하였다. 정제된 단백질을 -80℃에서 20mM HEPES pH 7.5 및 100mM NaCl 중에 저장하였다.
브로모도메인 BRD2에 대한 프로토콜: 50mM HEPES pH7.4, 150mm NaCl 및 0.5mM CHAPS의 완충제 조성물 중에 BRD2 75nM, 형광 리간드 5nM의 최종 농도를 지니도록 모든 성분을 용해시켰다. 10 ㎕의 상기 반응 혼합물을 마이크로 멀티드롭을 이용하여 Greiner 384 웰 블랙 저용적 미세역가 플레이트에서 50nl의 다양한 농도의 시험 화합물 또는 DMSO 비히클(1% 최종)을 함유하는 웰에 첨가하고, 암실에서 60분 동안 실온에서 평형화시켰다. 형광 이방성을 Envision에서 읽었다(λex= 485nm, λEM = 530nm; 다이크로익(Dichroic)-505nM).
브로모도메인 BRD3 에 대한 프로토콜: 50mM HEPES pH7.4, 150mm NaCl 및 0.5mM CHAPS의 완충제 조성물 중에 BRD3 75nM, 형광 리간드 5nM의 최종 농도를 지니도록 모든 성분을 용해시켰다. 10 ㎕의 상기 반응 혼합물을 마이크로 멀티드롭을 이용하여 Greiner 384 웰 블랙 저용적 미세역가 플레이트에서 100nl의 다양한 농도의 시험 화합물 또는 DMSO 비히클(1% 최종)을 함유하는 웰에 첨가하고, 암실에서 60분 동안 실온에서 평형화시켰다. 형광 이방성을 Envision에서 읽었다(λex= 485nm, λEM = 530nm; 다이크로익-505nM).
브로모도메인 BRD4 에 대한 프로토콜: 50mM HEPES pH7.4, 150mm NaCl 및 0.5mM CHAPS의 완충제 조성물 중에 BRD4 75nM, 형광 리간드 5nM의 최종 농도를 지니도록 모든 성분을 용해시켰다. 10 ㎕의 상기 반응 혼합물을 마이크로 멀티드롭을 이용하여 Greiner 384 웰 블랙 저용적 미세역가 플레이트에서 100nl의 다양한 농도의 시험 화합물 또는 DMSO 비히클(1% 최종)을 함유하는 웰에 첨가하고, 암실에서 60분 동안 실온에서 평형화시켰다. 형광 이방성을 Envision에서 읽었다(λex= 485nm, λEM = 530nm; 다이크로익-505nM).
시간 분해 형광 공명 에너지 전이( Time Resolved Fluorescence Resonance Energy Transfer )( TR - FRET ) 검정
화학식(I)의 화합물의 브로모도메인 BRD2, BRD3 및 BRD4에 대한 결합을 아세틸화된 히스톤 펩티드의 브로모도메인 단백질에 대한 결합을 측정하는 시간 분해 형광 공명 에너지 전이 결합 검정을 사용하여 평가하였다.
브로모도메인 단백질, 히스톤 펩티드 및 가변 농도의 시험 화합물을 열역학적 평형에 이르도록 함께 인큐베이션하였다. 이러한 검정은 시험 화합물의 부재 하에 브로모도메인 및 펩티드가 상당히 결합되고(~30%), 충분한 농도의 효능있는 억제제의 존재 하에 이러한 상호작용이 방해되어 형광 공명 에너지 전이에서 측정가능한 저하를 유도하도록 구성된다.
히스톤 펩티드:
H-Ser-Gly-Arg-Gly-Lys(Ac)-Gly-Gly-Lys(Ac)-Gly-Leu-Gly-Lys(Ac)-Gly-Gly-Ala-Lys(Ac)-Arg-His-Gly-Ser-Gly-Ser-Lys(Biotin)-OH. 3TFA
사전로딩된 Wang 수지를 사용하고 표준 Fmoc 합성 프로토콜을 이용하는 고체상 합성기 상에서 보호된 펩티드를 모았다. C-말단 리신을 비오텐의 집합 및 결합의 말기에 그것의 선택적 제거를 허용하는 과산(hyper acid)-불안정성기에 의해 보호하였다. 3h 동안 실온에서 트리플루오로아세트산 (TFA), 트리이소프로필실란 및 물 (95:2.5:2.5)의 혼합물에 의해 수지로부터 분해시킨 후 미정제 펩티드를 얻었으며, 이후 0.1% TFA-완충된 물/아세토니트릴 구배를 사용하는 C18 역상 컬럼을 사용하여 정제하였다. 형성된 분획을 분석하고, 분석용 HPLC에 의해 > 95% 순수하고, 올바른 mw(MALDiTOF 질량 분광학에 의해)를 제공하는 분획을 푸울링(pooling) 하고, 동결 건조시켰다. 최종 물질을 HPLC에 의해 분석하여 순도를 확인하였다.
단백질 생성: 재조합 인간 브로모도메인(BRD2 (1-473), BRD3 (1-435) 및 BRD4 (1-477))을 N-말단에 6개의 His 태그를 지니는 이.콜라이(E. coli) 세포(pET15b 벡터에서)에서 발현시켰다. His-태깅된 브로모도메인을 음파 처리를 이용하여 이.콜라이(E. coli) 세포로부터 추출하고, 니켈 세파로즈 6FF 컬럼을 사용하여 정제하고, 단백질을 세척한 후, 50mM Tris-Hcl pH 8.0, 300mM NaCl, 1 mM β-머캅토에탄올 및 20mM 이미다졸로 용리시켰다. 이후, 브로모도메인을 20 컬럼 부피초과로 선형 0-500mM 염화나트륨으로 용리하는 HisTRAP HP 컬럼 상의 친화성 크로마토그래피에 의해 추가의 정제를 수행하였다. Superdex 200 prep 그레이드의 크기 배제 컬럼에 의해 최종 정제를 완료하였다. 정제된 단백질을 -80℃에서 20mM HEPES pH 7.5 및 100mM NaCl 중에 저장하였다. 단백질 실체를 펩티드 질량 지문법(peptide mass fingerprinting)에 의해 확인하고, 예상된 분자량을 질량 분광법에 의해 확인하였다.
브로모도메인 BRD2, 3 및 4 검정에 대한 프로토콜: 모든 검정 성분을 50mM HEPES pH7.4, 50mm NaCl 및 0.5mM CHAPS의 완충제 조성물 중에 용해시켰다. 브로모도메인 단백질의 최종 농도는 100nM였고, 히스톤 펩티드는 300nM였으며, 이들 성분을 예비혼합하고, 암실에서 1시간 동안 평형화시켰다. 8 ㎕의 상기 반응 혼합물을 Greiner 384 웰 블랙 저용적 미세역가 플레이트에서 100nl의 다양한 농도의 시험 화합물 또는 DMSO 비히클(0.5% 최종)을 함유하는 모든 웰에 첨가하고, 암실에서 60분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 항-6his XL665 표지된 항체 및 유로퓸 크립테이트(europium cryptate)로 표지된 스트렙타비딘을 함유하는 2㎕의 검출 혼합물을 모든 웰에 첨가하고, 적어도 30분의 추가의 암실 인큐베이션을 수행하였다. 이후 플레이트를 Envision 플레이트리더 상에서 읽었다(λex= 317nm, 도너 λΕΜ = 615nm; 억셉터 λΕΜ = 665nm; 다이크로익 LANCE 듀얼(Dichroic LANCE dual)). 둘 모두의 방출 파장에서 시간 분해 형광 강도를 측정하고, 억셉터/도너의 비를 계산하고 데이터 분석에 사용하였다. 각각의 플레이트 상의 16개의 높은 대조군 웰 및 16개의 낮은 대조군 웰의 평균으로 모든 데이터를 표준화시켰다. 이후, 하기 형태의 4개의 파라미터 커브 피트)에 적용시켰다:
y = a + (( b - a) / ( 1 + ( 10 ^ × / 10 ^ c ) ^ d )
상기 식에서, 'a'는 최소값이고, 'b'는 힐 슬로프이고, 'c'는 pIC50이고, 'd'는 최대값이다.
실시예 1 내지 8이 각각의 상기 검정되어 시험되었고, 6.3 - 7.2 범위의 pIC50를 갖는 것으로 밝혀졌다.
전혈 ( whole blood ) 검정으로부터 LPS 유도된 IL -6 분비의 측정
박테리아의 지질다당류(LPS)와 같은 톨(toll)-유사 수용체의 효능제에 의한 단핵구 세포의 활성화는 IL-6을 포함하는 주요 염증성 매개물질의 생성을 유발한다. 그러한 경로는 많은 자가면역 및 염증 질병의 병태생리학(pathophysiology)의 중심이 되는 것으로 널리 간주된다.
시험하려는 화합물을 희석시켜 소정 범위의 적절한 농도를 제공하고, 1㎕의 희석 스토크(stock)를 96 플레이트의 웰에 첨가하였다. 전혈(130㎕)의 첨가 후, 플레이트를 37도(degree)(5% CO2)에서 30분 동안 인큐베이션시킨 후, 10㎕의 2.8ug/ml LPS를 첨가하고, 완전한 RPMI 1640(최종 농도 = 200ng/ml)에 희석시켜 웰 당 140㎕의 총 부피를 얻었다. 37도에서 24시간 동안 추가 인큐베이션시킨 후, 140㎕의 PBS를 각각의 웰에 첨가하였다. 플레이트를 밀봉하고, 10분 동안 셰이킹(shaking)한 후, 원심분리하였다(2500rpm×10분). 100㎕의 상청액을 제거하고, IL-6 수준을 즉시 또는 -20도에서 저장 후 면역검정(전형적으로 MesoScale Discovery 기법)에 의해 검정하였다. 각각의 화합물에 대한 농도 반응 곡선을 데이터로부터 생성시키고, IC50 값을 계산하였다.
실시예 1, 2, 3, 5, 6, 7 및 8을 상기 검정에서 시험하였으며, 5.5 내지 6.7 범위의 pIC50를 갖는 것으로 나타났다.
이러한 데이터는 상기 전혈 검정에서 시험된 브로모도메인 억제제가 주요 염증성 매개물질 IL-6의 생성을 억제하였음을 입증한다.
생체내 마우스 내독소혈증 모델
동물에게 투여된 높은 용량의 내독소 (박테리아 지질다당류)는 강한 염증성 반응, 심혈관계 기능의 조절 장애, 장기 부전 및 궁극적으로 사망에 이르게 하는 것을 포함하는 극심한 쇼크 증후군을 생성한다. 이러한 반응 패턴은 인간 패혈증 및 패혈 쇼크와 매우 유사하고, 여기서 상당한 박테리아 염증에 대한 신체의 반응은 유사하게 생명을 위협할 수 있다.
본 발명에 사용하기 위한 화합물을 시험하기 위하여, 8마리의 Balb/c 수컷 마우스 군에게 치사량의 15mg/kg의 LPS를 복강내 주사로 주입하였다. 90분 후, 동물들에게 비히클(발열원이 제거된 물(apyrogen water) 중의 20% 시클로덱스트린 1% 에탄올) 또는 화합물(10mg/kg)을 정맥내 투여하였다. 4일 째에 동물들의 생존을 모니터링하였다.
종양학 세포 성장 검정
인간 세포주(n = 33(15 개의 헴 세포주(heme cell line), 14개의 유방 세포주, 및 4 개의 그 밖의 세포주를 포함))를 10% 우태아 혈청을 함유하는 RPMI-1640에서 배양하고, 웰당 1000개의 생존 세포를 48㎕의 배지 중의 384-웰 블랙 평면 바닥 폴리스티렌 플레이트(Greiner #781086)에서 플레이팅하였다. 모든 플레이트를 5% C02, 37℃에서 밤새 두었다. 다음날, 하나의 플레이트를 0과 같은 시간(TO) 측정을 위해 CellTiter-Glo (CTG, Promega #G7573)로 수거하고, 화합물 (14.7 uM로부터 7 pM로의 20 포인트 적정)을 나머지 플레이트에 첨가하였다. 모든 웰 내 DMSO의 최종 농도는 0.15%였다. 세포를 72시간 또는 지시된 시간 동안 인큐베이션시키고, 웰 내 세포 배양 부피에 해당하는 부피를 사용하여 CellTiter-Glo 시제로 디벨로핑(developing)하였다. 플레이트를 대략 2분 동안 셰이킹하고, 화학발광 신호를 Analyst GT (Molecular Devices) 또는 EnVision Plate Reader (Perkin Elmer)로 읽었다.
결과가 TO의 퍼센트로서 표현되며, 화합물 농도에 대해 플로팅된다. TO 값을 100%로 표준화하고, 화합물 첨가 시간에서 세포의 수를 나타내고, 농도 반응 데이터를 XLfit 소프트웨어(모델 205)를 사용하여 4 개의 파라미터 커브 피트로 피팅하였다. 세포 성장을 50% 억제한 농도(gIC50)는 '성장 윈도우(growth window)'의 중간점(TO와 DMSO 대조군 사이)이다. 농도 반응 곡선의 피트로부터 결정된 Ymin 값(%)으로부터 TO 값 (100%)을 공제함으로써 Ymin - TO 값을 결정한다. 세포를 지니지 않은 웰로부터의 값을 바탕 보정(background correction)을 위해 모든 샘플로부터 공제하였다.
각각의 개별 공보가 충분히 설명된 대로 상세하게 그리고 개별적으로 본원에 참조로 통합된다고 지시된 바와 같이, 본 명세서에 인용된 특허 및 특허 출원을 비제한적으로 포함하는 모든 공보는 본원에 참조로 통합된다.

Claims (26)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 이의 염:
    Figure 112013106202166-pct00051

    상기 식에서,
    X 및 Y는 독립적으로 CH 또는 N이며, 단, X 및 Y 중 적어도 하나는 CH이어야 하고;
    R1은 기 C(O)OR4(여기서, R4는 C1 - 4알킬 또는 C3 - 7사이클로알킬임)이거나;
    R1은 페닐, 피리딜, 피라지닐 및 피리미디닐로부터 선택된 기이고, 상기 기들은 할로겐, C1 - 4알킬 및 CN로부터 선택된 하나 또는 두 개의 치환체에 의해 치환되거나 비치환되며,
    R2는 C1 - 4알킬이고;
    R3는 C1 - 4알킬이고;
    R5 및 R6는 독립적으로 C1 - 4알킬이거나;
    R5 및 R6는 이들이 결합되어 있는 N과 함께 결합하여 5 또는 6원 헤테로사이클릴을 형성하고;
    R7은 부재하거나 C1 - 4알킬이고;
    m은 0, 1 또는 2이고;
    n은 1 또는 2이다.
  2. 제 1항에 있어서, X 및 Y가 둘 모두 CH인, 화합물 또는 이의 염.
  3. 제 1항에 있어서, X가 CH이고, Y가 N인, 화합물 또는 이의 염.
  4. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 기 C(O)OR4(여기서, R4는 이소프로필임)인, 화합물 또는 이의 염.
  5. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, R1이 할로겐, C1 - 4알킬 및 CN로부터 선택된 하나 또는 두 개의 치환체에 의해 치환되거나 비치환된, 페닐 또는 피리딜인, 화합물 또는 이의 염.
  6. 제 5항에 있어서, R1이 4-클로로페닐 또는 5-시아노피리딘-2-일인, 화합물 또는 이의 염.
  7. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, R2가 메틸인, 화합물 또는 이의 염.
  8. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, R3가 메틸인, 화합물 또는 이의 염.
  9. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, m이 0인, 화합물 또는 이의 염.
  10. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, R5 및 R6이 둘 모두 메틸인, 화합물 또는 이의 염.
  11. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, R7이 부재하는, 화합물 또는 이의 염.
  12. 제 1항 내지 제 3항 중 어느 한 항에 있어서, 화학식(I)의 화합물이(2S,4R) 거울상이성질체인, 화합물 또는 이의 염.
  13. 2-(디메틸아미노)에틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트 또는 이의 염인 화합물.
  14. 2-((4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조일)옥시)-N,N,N-트리메틸에탄아미늄;
    3-((4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조일)옥시)-N,N,N-트리메틸프로판-1-아미늄;
    3-(디메틸아미노)프로필 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((4-클로로페닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트;
    3-(디메틸아미노)프로필 6-((2S,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코티네이트;
    2-(디메틸아미노)에틸 6-((2R,4R)-1-아세틸-4-((5-시아노피리딘-2-일)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)니코티네이트;
    3-(디메틸아미노)프로필 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트; 및
    2-(디메틸아미노)에틸 4-((2S,4R)-1-아세틸-4-((이소프로폭시카보닐)아미노)-2-메틸-1,2,3,4-테트라하이드로퀴놀린-6-일)벤조에이트,
    또는 이들의 염으로부터 선택되는 화합물.
  15. 제 1항 내지 제 3항, 및 제 14항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  16. 질병 또는 질환을 치료하기 위한 약학적 조성물로서, 상기 질병 또는 질환이 암이고, 제 15항에서 정의된 바와 같은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 및 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체, 희석제 또는 부형제를 포함하는 약학적 조성물.
  17. 질병 또는 질환을 치료하기 위한 조합 약학적 제품(combination pharmaceutical product)으로서, 상기 질병 또는 질환이 암이고, 제 15항에서 정의된 바와 같은 화학식(I)의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염을 포함하는 조합 약학적 제품.
  18. 치료에서 사용하기 위한 제 15항에서 정의된 바와 같은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  19. 브로모도메인 억제제가 처방된 질병 또는 질환의 치료에 사용하기 위한 제 15항에서 정의된 바와 같은 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  20. 제 19항에 있어서, 질병 또는 질환이 만성 자가면역 또는 염증성 질환인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  21. 제 19항에 있어서, 질병 또는 질환이 암인, 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염.
  22. 삭제
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