KR101854203B1 - 신생혈관형성 억제 화합물, 그의 중간체 및 용도 - Google Patents

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Abstract

하기 화학식 I로 표시되는 신생혈관형성의 이상 증식 억제 화합물, 그의 용도 및 중간체를 개시한다. 상기 화합물은 신생혈관형성의 이상 증식에 대해 양호한 효과를 가지며, 상기 화합물의 활성은 VEGFR2를 억제시킴으로써 생성된다. 상기 화합물을 신생혈관형성의 이상 및 VEGFR2, FGFR2 등과 같은 단백질 키나제에 의해 야기되는 질병, 예를 들어 습성 황반변성, 염증, 악성 종양 등의 치료에 사용할 수 있다.

Description

신생혈관형성 억제 화합물, 그의 중간체 및 용도{ANTI-ANGIOGENESIS COMPOUND, INTERMEDIATE AND USE THEREOF}
본 발명은 신생혈관형성 억제제 및/또는 단백질 키나제 억제제 화합물 및 이들의 용도에 관한 것이다.
신생혈관형성(Angiogenesis)은 기존 혈관으로부터 새로운 혈관의 발아 과정이다. 이러한 과정은 혈관 내피세포의 이동 및 증식과 관련된다. 신생혈관형성은 다수의 중증 인간 질병, 예를 들어 악성 종양과 관련이 있다. 지금까지, 안부 신생혈관형성 질병은 나이-관련된 황반변성(age-related macular degeneration, AMD), 당뇨성 망막병증, 신생혈관성 녹내장 등을 포함하는 것으로 밝혀졌다. 이들 질병의 통상적인 특징은 안부 신생혈관형성의 이상 증식에 있다(Xiao Jin, et al., "Research Progress on the Clinical Application and Basic Mechanism of Anti-VEGF Drug", CHINA FOREIGN MEDICAL TREATMENT, 2012)
황반변성은 주로 2가지 유형, 즉 건성 및 습성으로 나뉘며, 여기에서 습성 황반변성(AMD)은 망막으로 들어가는 맥락막의 새로운 혈관 및 후속의 병적인 변화, 예를 들어 출혈, 삼출 및 부종을 특징으로 한다. 습성 황반변성은 빠른 시력 상실을 야기하게 되며, 이는 건성 황반변성보다 더 심하다. 현재, 습성 황반변성의 치료는 양호하게 진행되고 있다. 초기의 레이저-소작 지혈은 VEGF 길항물질로 대체되었지만, 나중에는 불충분한 효과로 인해 곧 광역학 요법으로 대체되었다. 광역학 요법은 개선된 효능을 갖지만, 여전히 만족스럽지 못하다. 최근에, 인간-유래된 VEGF 하위유형 단클론 항체 단편의 재조합체인 신규의 VEGF 길항물질 - 루센티스가 개발되었으며, 이는 신생혈관형성을 감소시킬 수 있었다. 상기 약제는 2006년에 습성 황반변성의 치료에 대해서 미국 FDA에 의해 승인되었고, 양호한 효능을 가지며; 한편으로, 상기 항-VEGF 약물은 또한 당뇨성 망막병증 및 신생혈관성 녹내장에도 치료 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다. 그러나, 루센티스는 상당히 고가의 항체 약물이기 때문에, 전세계 도처에서 대중화될 수는 없다. 따라서, 탁월한 효능을 갖고 저렴한 소분자 신생혈관형성 억제제 약제를 개발하기 위해 현재 국제 제약 산업에서 치열한 경쟁이 집중되고 있다.
또한 단백질 키나제는, 단백질 인산화를 촉매화하는 효소인 단백질 포스파키나제로서도 공지되어 있다. 단백질 키나제는 아데노신 3인산(adenosine triphosphoric acid, ATP) 중의 γ-인산을 단백질 분자의 아미노산 잔기로, 예를 들어 몇몇 세린, 쓰레오닌 또는 타이로신 잔기 중의 하이드록시로 전달할 수 있으며, 이에 의해 상기 단백질 및 효소의 형태 및 활성을 변화시킬 수 있다. 단백질 인산화는 다양한 신호 전달 경로에 중요하며, 중요한 세포내 생명 활동 과정의 대부분은 단백질 인산화 없이는 수행될 수 없다.
단백질 키나제는 5개의 부류, 즉 단백질 세린/쓰레오닌 키나제, 단백질 타이로신 키나제, 단백질 히스티딘 키나제, 단백질 트립토판 키나제 및 단백질 아스파틸/글루타모일 키나제로 나뉜다. 단백질 키나제는 세포 과정의 조절 및 유지에 중요한 역할을 한다. 악성 종양, 면역 질병, 심혈관 질병, 당뇨병, 감염성 질병, 관절염 및 다른 면역학적 장애, 신경계 질병, 예를 들어 노인성 치매, 알쯔하이머병(Alzheimer's disease, AD) 등을 포함한 다수의 질병 상태들에서 이상 키나제 활성이 관찰된다. 400개가 넘는 인간 질병이 단백질 키나제와 관련있는 것으로 밝혀졌다.
VEGFR(혈관 내피세포 성장인자 수용체) 계열 구성원들은 타이로신 키나제 수용체, 예를 들어 VEGFR1, VEGFR2 등이다. 이들 수용체는 악성 종양의 성장 및 전이뿐만 아니라 혈관 증식성 질병(예를 들어 황반변성 및 종양)과 같은 질병의 발생 과정에서 중요한 역할을 한다.
PDGFR(혈소판-유래된 성장인자 수용체) 계열 구성원들은 타이로신 키나제 수용체, 예를 들어 PDGRFα와 PDGRFβ, 및 콜로니-자극 인자-1 수용체, 줄기세포 성장인자 수용체 KIT 등이다. 이들 키나제는 종양의 발생 및 발달과 밀접한 관련이 있는 것으로 밝혀졌다. PDGFR의 이상 발현이 흑색종, 뇌수막종, 신경내분비 종양, 난소암, 전립선암, 폐암 및 췌장암에서 발견되었다. KIT의 이상 활성화는 다수 종양의 발생 및 발달의 직접적인 유도인자이다.
FGFR(섬유아세포 성장인자 수용체) 계열 구성원은 FGFR1, FGFR2 등을 포함하며, 이들은 암과 밀접한 관련이 있다. 예를 들어 FGFR2의 이상 활성화가 자궁내막암, 자궁경부암, 유방암, 폐암 및 위암에서 발견되었다. SRC 키나제 계열은 타이로신 단백질 키나제 활성을 갖는 단백질들을 포함한다. SRC 키나제 계열은 발암유전자 단백질로서 라우스 육종 바이러스에서 처음에 발견되었다. SRC의 억제는 암 또는 다른 질병들에 일부 치료 및 개선 효과를 갖는 것으로 밝혀졌다. p38 미토젠-활성화된 단백질 키나제(MAPK) 경로는 세포내 스트레스 반응 신호 경로이며, 이는 염증 반응과 밀접한 관련이 있다.
따라서, 신규의 단백질 키나제 억제제들을 개발할 필요가 여전히 존재한다.
본 발명의 목적은 신생혈관형성 억제제 및/또는 단백질 키나제 억제제, 그의 제조를 위한 중간체 및 그의 용도을 제공하는데 있다.
본 발명은 하기 화학식 I로 표시되는 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 전구약물을 제공하며, 여기에서 상기 화학식은 하기와 같다:
[화학식 I]
Figure 112015108758065-pct00001
상기 화학식 I에서, R1은 H, 아미노, 하이드록시 및 설피드릴 중에서 선택되고; R2는 H, 아미노, 하이드록시, 설피드릴(sulfydryl) 및 -(CH2)nNHR8 중에서 선택되고, 여기에서 n은 1 내지 5이고, R8은 H 또는 C1-3 알킬이고; R3은 H 및 C1-6 알킬 중에서 선택되고; R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, 할로겐, C1-6 알킬 및 할로겐 치환된 알킬 중에서 선택되고; R7은 H, C1-6 알킬 및 할로겐 중에서 선택되거나,
R2 및 R3은 이들을 연결하는 탄소 원자와 함께, 1 내지 2개의 헤테로원자를 갖는 치환되거나 비치환된 5- 또는 6-원 고리를 형성하고, 여기에서 상기 헤테로원자는 N, O 또는 S이며, 상기 치환체는 C1-6알킬이다.
하나의 구현예에서, R2는 H, 아미노 및 -(CH2)nNHR8 중에서 선택되고, 여기에서 n은 1 내지 3이고, R8은 H 또는 C1-2 알킬이고; R3은 H 및 C1-2 알킬 중에서 선택되고; R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 할로겐, C1-2 알킬 및 할로겐 치환된 알킬 중에서 선택되고; R7은 H 및 할로겐 중에서 선택되거나,
R2 및 R3은 이들을 연결하는 탄소 원자와 함께, 1개의 질소 원자를 갖는 치환되거나 비치환된 5- 또는 6-원 고리를 형성하고, 여기에서 상기 치환체는 C1-3 알킬이다.
또 다른 구현예에서, R2는 아미노 및 -(CH2)nNHR8 중에서 선택되거나, R2 및 R3은 이들을 연결하는 탄소 원자와 함께, 1개의 질소 원자를 갖는 치환되거나 비치환된 5- 또는 6-원 고리를 형성하고, 여기에서 상기 치환체는 C1-3 알킬이다.
또 다른 구현예에서, 상기 할로겐은 F 또는 Cl이다.
바람직한 구현 예에서, R1, R2 및 R3 중 하나 이상은 아미노이고, 나머지는 H이며; R4, R5 및 R6은 동일하고 F 및 Cl 중에서 선택되며; R7은 H이다.
바람직하게는, 상기 화합물은
Figure 112015108758065-pct00002
이다.
본 발명의 화합물의 제조 방법은 임의의 적합한 방법일 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본 발명의 화합물을 화학식 II로 표시되는 중간체 화합물로부터 제조할 수 있다.
따라서, 본 발명은 또한 화학식 I의 화합물을 제조하기 위한, 하기 화학식 II로 표시되는 중간체 화합물을 제공한다:
[화학식 II]
Figure 112015108758065-pct00003
상기 화학식 II에서, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, 할로겐, C1-6 알킬 및 할로겐 치환된 알킬 중에서 선택되고; R7은 H, C1-6 알킬 및 할로겐 중에서 선택된다.
또 다른 구현예에서, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 할로겐, C1-2 알킬 및 할로겐 치환된 알킬 중에서 선택되고; R7은 H 및 할로겐 중에서 선택된다.
또 다른 구현예에서, R4, R5 및 R6은 동일하며 F 및 Cl 중에서 선택되고; R7은 H이다.
화학식 II로 표시되는 중간체 화합물의 제조 방법은 하기의 단계들을 포함한다:
Figure 112015108758065-pct00004
상기 화학식 II에서, R4, R5, R6 및 R7은 상기와 동일한 정의를 갖는다.
바람직한 구현예에서, 화학식 I의 화합물의 제조 방법은 하기의 단계들을 포함한다:
Figure 112015108758065-pct00005
상기 식에서, R1, R2 및 R3은 상기와 동일한 정의를 갖는다.
바람직한 구현예에서, 상기 화합물의 제조 방법은
(1) 하기 화학식 7로 표시되는 중간체 화합물의 합성:
Figure 112015108758065-pct00006
상기 식에서, R4, R5 및 R6은 상기와 동일한 정의를 갖는다;
(2) 표적 화합물의 합성:
Figure 112015108758065-pct00007
상기 식에서, R1, R2 및 R3은 상기와 동일한 정의를 갖는다
의 반응 단계들을 포함한다.
본 발명은 또한 신생혈관형성의 이상 증식을 억제하기 위한 약제의 제조에서 상기 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 전구약물의 용도을 제공한다.
하나의 구현예에서, 상기 신생혈관형성의 이상 증식을 억제하기 위한 약제는 혈관 내피세포 성장인자 수용체 2(VEGFR2) 억제제이다.
또 다른 구현예에서, 상기 신생혈관형성의 이상 증식을 억제하기 위한 약제는 안부 신생혈관형성(ocular angiogenesis)에 대한 약제이다.
또 다른 구현예에서, 상기 신생혈관형성의 이상 증식을 억제하기 위한 약제는 맥락막 신생혈관형성(choroidal angiogenesis) 억제제이다.
또 다른 구현예에서, 상기 신생혈관형성의 이상 증식을 억제하기 위한 약제는 습성 황반변성(wet macular degeneration), 당뇨성 망막병증(diabetic retinopathy) 또는 신생혈관성 녹내장(neovascular glaucoma)을 치료하거나 예방하기 위한 약제이다.
또 다른 구현예에서, 상기 약제는 바람직하게는 안과용 제제이다.
또 다른 구현예에서, 상기 안과용 제제는 점안제, 눈 연고 또는 안과용 주사이다.
또 다른 구현예에서, 상기 안과용 주사는 유리체내 주사이다.
본 발명은 또한 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병의 치료를 위한 약제의 제조에서 상기 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 전구약물의 용도을 제공한다.
하나의 구현예에서, 상기 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병은 혈관 내피세포 성장인자 수용체 2(VEGFR2)의 이상에 의해 야기되는 질병이다.
또 다른 구현예에서, 상기 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병은 눈 신생혈관형성과 관련된 질병이다.
또 다른 구현예에서, 상기 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병은 맥락막 신생혈관형성과 관련된 질병이다.
또 다른 구현예에서, 상기 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병은 습성 황반변성, 당뇨성 망막병증 또는 신생혈관성 녹내장과 관련된 질병이다.
본 발명은 또한 신생혈관형성의 이상 증식을 억제하거나 또는 상기 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병을 치료하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 본 발명의 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 전구약물, 또는 하기에 개시하는 바와 같은 약학 조성물을 상기 억제 또는 치료가 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
하나의 구현예에서, 상기 신생혈관형성의 이상 증식의 억제는 눈 신생혈관형성의 이상 증식의 억제를 지칭하며; 상기 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병은 눈 신생혈관형성과 관련된 질병이다.
하나의 구현예에서, 상기 신생혈관형성의 이상 증식의 억제는 맥락막 신생혈관형성의 이상 증식의 억제를 지칭하며; 상기 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병은 맥락막 신생혈관형성과 관련된 질병이다.
또 다른 구현예에서, 상기 신생혈관형성의 이상 증식의 억제 또는 상기 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병의 치료 방법은 구체적으로 습성 황반변성, 당뇨성 망막병증 또는 신생혈관성 녹내장의 치료 또는 예방 방법을 지칭한다.
상기 투여는 눈 영역에 직접적인 국소 투여 또는 유리체내 또는 결막하 주사를 지칭한다.
본 발명은 또한 단백질 키나제 억제제 약제의 제조에서 상기 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 전구약물의 용도을 제공한다.
본 발명은 또한 이상 단백질 키나제에 의해 야기되는 질병의 치료를 위한 약제의 제조에서 상기 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 전구약물의 용도을 제공한다.
본 발명은 또한 상기 이상 단백질 키나제에 의해 야기되는 질병의 치료 방법을 제공하며, 상기 방법은 유효량의 본 발명의 화합물, 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 전구약물, 또는 하기에 개시하는 바와 같은 약학 조성물을 상기 치료가 필요한 환자에게 투여하는 것을 포함한다.
상기 단백질 키나제는 VEGFR2, PDGFR-β, KIT, AURORA-B, FGFR2, SRC, JAK2 또는 P38-α이고, 바람직하게는 VEGFR2, KIT 또는 PDGFR-β이다.
상기 이상 단백질 키나제에 의해 야기되는 질병은 염증 또는 악성 종양을 지칭한다.
본 발명은 또한 유효량의 상기 화합물 및 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 전구약물을 포함하는 약학 조성물을 제공한다. 하나의 구현예에서, 상기 조성물은 안과용 제제이다. 상기 안과용 제제는, 상기 본 발명에 제공된 화합물을 제외하고, 유사한 치료학적 용도를 갖는 다른 공지된 약제를 추가로 포함할 수 있다.
하나의 구현예에서, 상기 안과용 제제는 점안제, 눈 연고 또는 안과용 주사이다.
또 다른 구현예에서, 상기 안과용 주사는 유리체내 또는 결막하 주사이다.
본 발명의 화합물의 염을 당해 분야에 공지된 방법에 의해, 예를 들어 상기 화합물을 산 또는 적합한 음이온교환체로 처리하여 염을 형성시킴으로써 제조할 수 있다. 본 발명의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염은 상기 화합물의 염기성 질소 원자와의 유기 또는 무기산 부가염일 수 있다.
바람직하게는, 적합한 무기산은 비제한적으로 할로겐산(예를 들어 염산), 황산 또는 인산을 포함한다.
바람직하게는, 적합한 유기산은 비제한적으로 카복실산, 인산, 설폰산 또는 아미노카복실산, 예를 들어 아세트산, 프로피온산, 옥탄산, 데칸산, 도데칸산, 하이드록시아세트산, 락트산, 퓨마르산, 숙신산, 아디프산, 피멜산, 수베르산, 아젤라산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아미노산, 예를 들어 글루탐산 또는 아스파트산, 말레산, 하이드록시산, 메틸 말레산, 사이클로헥산카복실산, 아다만탄카복실산, 벤조산, 살리실산, 4-아미노살리실산, 프탈산, 페닐아세트산, 만델산, 신남산, 메탄 또는 에탄 설폰산, 2-옥시에틸설폰산, 에탄-1,2-디설폰산, 페닐설폰산, 2-나프탈렌 설폰산, 1,5-나프탈렌 디설폰산, 2-톨루엔 설폰산, p-톨루엔 설폰산, 에틸황산, 도데실 황산, N-사이클로헥실 아미노 아세트산, N-메틸-N-에틸-N-프로필-설팜산, 또는 다른 유기산, 예를 들어 아스코르브산을 포함한다.
추가로, 또한 상기 염은 분리 또는 정제에 사용되는 약학적으로 허용되지 않는 염, 예를 들어 피크레이트 또는 퍼클로레이트일 수 있다. 그러나, 치료학적 용도에 사용되는 염은 오직 적합한 약학 제제 형태의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 유리 화합물만일 수 있다.
본 발명의 약학적으로 허용 가능한 전구약물은, 생체내에서 효소 또는 비-효소에 의해 전환 후 활성 성분을 유리시키고 효능을 발휘하는, 화학 구조 변형에 의해 수득되는 화합물을 지칭한다.
하나의 구현예에서, 본 발명은 또한 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 동위원소 표지된 화합물을 제공하며, 여기에서 상기 동위원소 표지된 화합물은, 본 발명의 화합물과 동일하지만, 상기 화합물 중의 하나 이상의 원자가 자연에서의 통상적인 경우에 비해 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 또 다른 원자로 치환된 화합물을 지칭한다. 상기 화합물내에 도입될 수 있는 동위원소는 H, C, N, O, S, 즉 2H, 3H, 13C, 14C, 15N, 17O, 18O 및 35S를 포함한다. 상기 동위원소 및/또는 다른 동위원소 원자, 및 이들의 입체이성체를 포함하는 화합물들뿐만 아니라, 이들 화합물 및 입체이성체의 약학적 염은 본 발명의 범위 내에 있음에 틀림 없다.
본 발명에 있어서, 중요 중간체 및 화합물의 분리 및 정제는 유기 화학에서의 통상적인 분리 및 정제 방법에 의해 수행되며, 여기에서 이들 방법의 예는 여과, 추출, 건조, 회전 건조, 및 다양한 종류의 크로마토그래피를 포함한다. 한편으로, 상기 중간체를 정제 없이 다음 반응에 도입시킬 수 있다.
본 발명의 화합물은 신생혈관형성의 이상 증식에 대해 양호한 효과를 가지며, 이러한 유형의 화합물들은 VEGFR2(KDR로도 지칭함)의 억제에 의해 활성을 생성한다. 상기 화합물들을 신생혈관형성의 이상 증식 및 단백질 키나제, 예를 들어 VEGFR2, FGFR2 등의 이상에 의해 야기되는 질병, 예를 들어 습성 황반변성, 염증, 악성 종양 등의 치료에 사용할 수 있다.
도 1은 화합물 2-1의 질량 스펙트럼이다.
도 2는 화합물 2-2의 질량 스펙트럼이다.
도 3은 화합물 2-2의 NMR 스펙트럼이다.
도 4는 화합물 2-3의 질량 스펙트럼이다.
도 5는 화합물 2-4의 질량 스펙트럼이다.
도 6은 화합물 2-5의 질량 스펙트럼이다.
도 7은 제브라 피시의 등뼈의 혈관 발생의 형광 현미경사진이고, 여기에서 도 7A는 상기 제브라 피시의 등뼈의 정상적인 혈관 발생의 형광 현미경사진(음성 대조군)을 도시하고; 도 7B는 1 uM 화합물 2-2로 처리후 제브라 피시의 등뼈의 억제된(100%) 혈관 발생의 형광 현미경사진을 도시한다.
도 8은 VEGFR2에 대한 본 발명의 화합물 2-1, 2-2 및 2-4(즉 도면에서 KDR2)의 시험관내 억제를 도시하는 결과 도면이다.
도 9는 맥락막 신생혈관형성의 억제에 대한 자이스(Zeiss) 형광 현미경사진이고, 여기에서 도 9A는 1 uM 농도 하의 화합물 2-2에 의한 맥락막 신생혈관형성의 명백한 억제에 대한 자이스 형광 현미경사진이고; 도 9B는 음성 대조군으로서 PBS를 사용하는 자이스 형광 현미경사진이다.
도 10은 본 발명 화합물들의 용량-효과 곡선이고, 여기에서 도 10A는 스타우로스포린의 양성 대조군에 관한 것이고; 도 10B는 화합물 2-1에 관한 것이며; 도 10C는 화합물 2-2에 관한 것이다.
도 11은 마우스의 눈 각막 신생혈관형성에 대한 화합물 2-2의 효과를 도시하는 사진이고, 여기에서 도 11A는 화합물 2-2로 처리한 마우스의 오른쪽 눈을 도시하고; 도 11B는 대조군으로서 PBS로 처리한 마우스의 왼쪽 눈을 도시한다.
도 12는 토끼의 눈 각막 신생혈관형성에 대한 화합물 2-2의 효과를 도시하는 사진이고, 여기에서 도 12A는 화합물 2-2로 처리한 눈을 도시하고; 도 12B는 대조군으로서 PBS로 처리한 눈을 도시하며; 도 12C는 화합물 2-1로 처리한 눈을 도시한다.
실시예 1: 중간체 화합물 7의 제조
Figure 112015108758065-pct00008
단계 1:
에틸 비닐 에테르(50 g, 0.69 mol)를 질소 분위기하에 0 ℃에서 염화 옥살릴(132.3 g, 1.04 mol)과 서서히 혼합시켰다. 상기 혼합물을 0 ℃에서 2시간 동안 교반하고, 이어서 실온으로 가열하고, 12시간 동안 유지시켰다. 과잉의 염화 옥살릴을 증류에 의해 제거하였다. 잔사를 120 ℃에서 30분 동안 가열하고 진공 증류에 의해 정제시켜, 밝은 황색 유성 물질로서 정제된 화합물 1(49 g, 수율: 53%)을 수득하였다.
단계 2:
메탄올(1 L) 중의 화합물 2(50 g, 0.365 mol)의 용액에, 염화 티오닐(66 ㎖, 0.91 mol)을 0 ℃에서 교반하에 첨가하였다. 이어서 상기 반응 혼합물을 40 ℃에서 밤새 교반하였다. 상기 반응을 TLC(석유 에테르/에틸 아세테이트(PE/EA) = 1:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 혼합물을 증발시키고, 잔사를 Na2CO3의 첨가에 의해 pH 8로 조절하고 에틸 아세테이트(EA)로 추출하였다. 유기상을 포화된 염수로 세척하고, 무수 황산 나트륨으로 건조시키고 농축시켜 갈색 고체로서 화합물 3(51.7 g, 수율: 93.8%)을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 3:
디클로로메탄(DCM, 100 ㎖) 중에 용해된 화합물 3(10 g, 66 mmol)의 용액에 DCM(40 ㎖) 중에 용해된 피리딘(9.06 g, 119 mmol) 및 화합물 1(15 g, 112 mmol)을 질소 분위기하에 0 ℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온으로 가열하고 2.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 TLC(PE/EA = 1:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 혼합물을 물로 세척하고 이어서 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조(crude) 생성물을 수득하였다. 상기 생성물을 크로마토그래피(DCM/메탄올 = 20:1로 용리시켰다)에 의해 정제시켜, 백색 고체로서 정제된 화합물 4(9.67 g, 수율: 59%)를 수득하였다.
단계 4:
175 ㎖ 농축된 H2SO4에 0 ℃에서 화합물 4(9.67 g, 0.039 mol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 TLC(PE/EA = 1:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 혼합물을 빙수에 부었다. 상기 침전물을 여과하고 디에틸 에테르(Et2O)로 세척하고, 에탄올로 재결정화시켜 베이지색 고체로서 화합물 5(2 g, 수율: 25%)를 수득하였다.
단계 5:
메탄올(MeOH, 20 ㎖) 중의 화합물 5(2.0 g, 9.85 mmol)의 용액에 2N NaOH(24.6 ㎖, 49.25 mmol)를 0 ℃에서 교반하에 적가하였다. 이어서 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 15:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 혼합물을 증발시키고, 잔사를 1N HCl을 첨가하여 pH 2로 산성화시켰다. 침전물이 형성되었으며 이를 여과에 의해 수거하고 건조시켜 백색 고체로서 정제된 화합물 6(0.8 g, 43%)을 수득하였다.
단계 6:
화합물 6(0.8 g, 4.22 mmol), 3-(트리플루오로메틸)아닐린(0.75 g, 4.64 mmol), HATU(C10H15F6N6OP, 1.92 g, 5.06 mmol) 및 N,N-디이소프로필에틸아민(DIPEA, 1.64 g, 12.66 mmol)을 DMF(10 ㎖) 중에서 혼합하고, 상기 혼합물을 질소 분위기하에 실온에서 밤새 교반하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 10;1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고, EA로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜, 황색 고체로서 정제된 화합물 7(0.85 g, 수율: 60.6%)을 수득하였다.
실시예 2: 화합물 2-1(본 발명에서 시리즈 2-1로도 지칭함)의 제조
Figure 112015108758065-pct00009
시리즈 2-1
화합물 8의 제조:
Figure 112015108758065-pct00010
화합물 8A(20 g, 0.15 mol) 및 디메틸아미노피리딘(DMAP, 1.9 g, 15.4 mmol)을 테트라하이드로퓨란(THF, 750 ㎖)에 첨가하고 교반하였다. 상기 용액에 디-3급-부틸 디카보네이트((Boc)2O, 75 g, 0.34 mol)를 적가하였다. 이어서 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 상기 반응을 TLC(PE/EA = 3:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 농축시키고 혼합물 용매 PE/EA(10:1, 200 ㎖) 중에 재현탁시키고, 여과하여 백색 고체로서 정제된 화합물 8(50 g, 100%)을 수득하였다.
화합물 9의 제조:
질소 분위기하에서, 화합물 7(30 ㎎, 0.09 mmol) 및 세슘 카보네이트(58.6 ㎎, 0.18 mmol)를 디메틸설폭사이드(DMSO, 1 ㎖) 중에서 혼합하고, 상기 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 이어서 화합물 8(32.8 ㎎, 0.009 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 18시간 동안 교반하고, TLC(DCM/메탄올 = 15:1)를 통해 모니터하였으며, 상기 반응은 완료되지 않았다. 상기 반응 혼합물을 80 ℃에서 추가로 5시간 동안 교반하고, 이어서 물로 희석하고 EA로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 TLC에 의해 정제하여 황색 고체로서 정제된 화합물 9(10 ㎎, 수율: 17.8%)를 수득하였다.
화합물 2-1의 제조:
화합물 9(10 ㎎, 0.019 mmol) 및 트리플루오로아세트산(TFA, 0.2 ㎖)의 혼합물을 질소 분위기하에 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 20:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 나트륨 카보네이트로 알칼리화하고, DCM으로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 TLC에 의해 정제시켜, 황색 고체로서 정제된 화합물 2-1(4.3 ㎎, 53.75%)을 수득하였다. 도 1은 그의 질량 스펙트럼을 도시한다.
실시예 3: 화합물 2-2(본 발명에서 시리즈 2-2로도 지칭함)의 제조
Figure 112015108758065-pct00011
시리즈 2-2
화합물 10의 제조:
Figure 112015108758065-pct00012
화합물 10B의 제조:
피리딘(200 ㎖) 중의 화합물 10A(5.0 g, 45 mmol)의 교반 용액에 (Boc)2O(14.7 g, 67.5 mmol)를 65 ℃에서 적가하였다. 이어서 상기 반응물을 85 ℃에서 4시간 동안 교반하였다. 상기 반응물을 TLC(DCM/메탄올 = 10:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 0 ℃로 냉각시키고, 농축된 HCl(100 ㎖)을 첨가하고, 이어서 물(50 ㎖)을 첨가하였다. EA로 추출한 후에, 유기상을 NaHCO3 용액 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 농축시켜 황색 유성 물질을 수득하였으며, 이를 Et2O에 현탁시키고, 고체를 여과에 의해 수거하여 백색 고체로서 화합물 10B(4.3 g, 수율 45.2%)를 수득하였다.
화합물 10C의 제조:
DCM(84 ㎖) 중의 화합물 10B(2.4 g, 11.4 mmol) 및 N,N-디메틸아닐린(6.6 ㎖)의 용액에 옥시염화 인(3.2 ㎖, 34.2 mmol)을 질소 분위기하에 0 ℃에서 적가하였다. 이어서 첨가를 완료한 후에 상기 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 TLC(PE/EA = 2:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 빙수에 붓고, 이어서 유기상으로부터 수상(water phase)을 분리시켰다. 상기 유기상을 NaHCO3 수용액 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜, 백색 고체로서 정제된 화합물 10C(1.8 g, 수율: 70%)를 수득하였다.
화합물 10의 제조:
화합물 10C(100 ㎎, 0.47 mmol) 및 DMAP(12 ㎎, 0.09 mmol)를 THF(1 ㎖)에 용해시켰다. 상기 혼합물에 (Boc)2O(124 ㎎, 0.57 mmol)를 실온에서 적가하였다. 이어서 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 상기 반응을 TLC(PE/EA = 1:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 TLC에 의해 정제시켜, 백색 고체로서 정제된 화합물 10(70 ㎎, 수율: 44.8%)을 수득하였다.
화합물 11의 제조:
화합물 7(50 ㎎, 0.15 mmol) 및 K2CO3(62.2 ㎎, 0.45 mmol)를 DMSO(3 ㎖)에 용해시키고, 질소 분위기하에 실온에서 0.5시간 동안 교반하고, 이어서 화합물 10(148.4 ㎎, 0.45 mmol)을 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 5시간 동안 교반하고, TLC(DCM/메탄올 = 20:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 TLC에 의해 정제시켜, 백색 고체로서 정제된 화합물 11(31 ㎎, 수율: 33%)을 수득하였다.
화합물 2-2의 제조:
화합물 11(25 ㎎, 0.04 mmol)을 TFA(0.2 ㎖)에 첨가하고, 질소 분위기하에 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 20:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 나트륨 카보네이트로 알칼리화하고, DCM으로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 TLC에 의해 정제시켜, 백색 고체로서 정제된 화합물 2-2(17 ㎎, 수율: 85.3%)를 수득하였다. 도 2 및 3은 그의 H1NMR 스펙트럼 및 질량 스펙트럼을 도시한다.
실시예 4: 화합물 2-3(본 발명에서 시리즈 2-3으로도 지칭함)의 제조
Figure 112015108758065-pct00013
시리즈 2-3
화합물 12B의 제조:
화합물 12A(50 g, 0.47 ㎖)를 질소 분위기하에 0 ℃에서 DCM(600 ㎖) 중에서 교반하였다. 용해 후에, TEA(94 g, 0.93 mol)를 첨가하고, 이어서 에틸 브로모아세테이트(94 g, 0.56 mol)를 적가하였다. 생성된 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 상기 반응을 TLC(PE/EA = 1:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 여과하고, 여액을 농축시키고 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜(PE/EA = 20:1 내지 10:1 내지 5:1로 용리시키고 정제하였다) 황색 유성 물질로서 정제된 화합물 12B(46 g, 수율: 51%)를 수득하였다.
화합물 12C의 제조:
화합물 12B(38 g, 196.65 mmol) 및 TEA(29.9 g, 295 mmol)를 가열하고 95 ℃에서 톨루엔(800 ㎖) 중에서 교반하고, 이어서 에틸 4-브로모부티레이트(72.9 g, 373.65 mmol)를 적가하였다. 이어서 상기 반응 혼합물을 밤새 가열 환류시켰다. 상기 반응을 TLC(PE/EA = 5:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 농축시키고 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜(PE/EA = 20:1 내지 5:1로 용리시켰다) 황색 유성 물질로서 정제된 화합물 12C(32 g, 수율: 53%)를 수득하였다.
화합물 12D의 제조:
톨루엔(300 ㎖) 중의 화합물 12C(32 g, 104.3 mmol)의 용액에 칼륨 3급-부톡사이드(51.2 g, 456.3 mmol)를 0 ℃에서 첨가하였다. 이어서 상기 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 TLC(PE/EA = 5:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 2N HCl의 첨가에 의해 pH = 6으로 조절하고, 이어서 EA로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 농축시켜 어두운 황색 유성 물질(17 g, 수율: 62.5%)로서 조 화합물 12D를 수득하였으며, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
화합물 12E의 제조:
나트륨 메톡사이드(MeONa, 11 g, 161.65 mmol)를 메탄올(280 ㎖)에 용해시키고, 5 ℃로 냉각시키고, 이어서 포름아미딘 아세테이트(3.0 g, 29.15 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 0.5시간 동안 교반하고, 이어서 화합물 12D(17 g, 65.1 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 40 ℃에서 밤새 교반하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 10:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 증발시켜 용매의 대부분을 제거하였다. 잔사를 EA로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜, 밝은 황색 고체로서 정제된 화합물 12E(2.5 g, 수율: 16%)를 수득하였다.
화합물 12F의 제조:
화합물 12E(2.5 g, 10.4 mmol), 10% Pd/C(0.5 g) 및 (Boc)2O(2.7 g, 12.4 mmol)를 MeOH(40 ㎖) 중에서 혼합하고, 수소 분위기(0.5 MPa의 압력으로)하에서 밤새 교반하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 10:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 여과하고 여액을 농축시켜 황색 고체로서 정제된 화합물 12F(2.6 g, 100%)를 수득하였다.
화합물 12의 제조:
화합물 12F(1.6 g, 6.3 mmol), 트리페닐포스핀(3.33 g, 12.6 mmol) 및 테트라클로로메탄(2.93 g, 18.9 mmol)을 1,2-디클로로에탄(1,2-DCE, 64 ㎖) 중에서 혼합하고, 1시간 동안 70 ℃로 가열하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 10:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응 혼합물을 농축시키고 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜, 밝은 황색 고체로서 정제된 화합물 12(1.38 g, 수율: 81%)를 수득하였다.
화합물 13의 제조:
화합물 7(50 ㎎, 0.15 mmol) 및 K2CO3(62.2 ㎎, 0.45 mmol)를 DMSO(2 ㎖)에 용해시키고, 질소 분위기하에 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 이어서 화합물 12(121.4 ㎎, 0.45 mmol)를 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 1.5시간 동안 교반하고, TLC(DCM/메탄올 = 20:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 TLC에 의해 정제시켜, 백색 고체로서 정제된 화합물 13(10 ㎎, 수율: 12.2%)을 수득하였다.
화합물 2-3의 제조:
화합물 13(10 ㎎, 0.018 mmol) 및 TFA(0.1 ㎖)를 혼합하고 질소 분위기하에 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 10:1)을 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 나트륨 카보네이트로 알칼리화하고, DCM으로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 TLC에 의해 정제시켜, 백색 고체로서 정제된 화합물 2-3(3 ㎎, 수율: 35.7%)을 수득하였다. 도 4는 그의 질량 스펙트럼을 도시한다.
실시예 5: 화합물 2-4(본 발명에서 또한 KDR2로도 지칭함)의 제조
Figure 112015108758065-pct00014
단계 1:
에틸 비닐 에테르(50 g, 0.69 mol)를 질소 분위기하에 0 ℃에서 염화 옥살릴(132.3 g, 1.04 mol)과 서서히 혼합시켰다. 상기 혼합물을 0 ℃에서 2시간 동안 교반하고, 실온으로 가열하고, 12시간 동안 유지시켰다. 과잉의 염화 옥살릴을 증류에 의해 제거하였다. 잔사를 120 ℃에서 30분 동안 가열하고 진공 증류에 의해 정제시켜, 밝은 황색 유성 물질로서 정제된 화합물 1(49 g, 수율: 53%)을 수득하였다.
단계 2:
메탄올(1 L) 중의 화합물 2(50 g, 0.365 mol)의 용액에, 염화 티오닐(66 ㎖, 0.91 mol)을 0 ℃에서 교반하에 첨가하였다. 이어서 상기 반응 혼합물을 40 ℃에서 밤새 교반하였다. 상기 반응을 TLC(PE/EA = 1:1)를 통해 모니터하였다. 상기 혼합물을 증발시켰다. 잔사를 Na2CO3의 첨가에 의해 pH 8로 조절하고 EA로 추출하였다. 유기상을 포화된 염수로 세척하고, 무수 황산 나트륨으로 건조시키고 농축시켜 갈색 고체로서 화합물 3(51.7 g, 수율: 93.8%)을 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다.
단계 3:
화합물 3(10 g, 66 mmol)을 DCM 100 ㎖에 용해시켰다. DCM(40 ㎖) 중의 피리딘(9.06 g, 119 mmol) 및 화합물 1(15 g, 112 mmol)의 용액을 질소 분위기하에 0 ℃에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 실온으로 가열하고 2.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 TLC(PE/EA = 1:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 혼합물을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 크로마토그래피(DCM/메탄올 = 20:1로 용리시켰다)에 의해 정제시켜, 백색 고체로서 정제된 화합물 4(9.67 g, 수율: 59%)를 수득하였다.
단계 4:
175 ㎖ 농축된 H2SO4에 0 ℃에서 화합물 4(9.67 g, 0.039 mol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 TLC(PE/EA = 1:1)를 통해 모니터하였다. 상기 혼합물을 빙수에 부었다. 상기 침전물을 여과하고 Et2O로 세척하고, 고체를 에탄올로 재결정화시켜 베이지색 고체로서 화합물 5(2 g, 수율: 25%)를 수득하였다.
단계 5:
3 ㎖ DMSO 중의 화합물 5(0.504 g, 2.48 mmol)의 용액에 칼륨 카보네이트(0.686, 4.97 mmol)를 첨가하였다. 0.5시간 후에, 화합물 6(0.768 g, 2.98 mmol)을 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 질소 분위기하에서 밤새 100 ℃로 가열하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 10:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고 EtOAc로 추출하였다. 유기상을 포화된 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 크로마토그래피(PE/EA = 5:1 내지 2:1로 용리시킴)에 의해 정제시켜, 밝은 황색 고체로서 정제된 화합물 7(0.683 g, 수율: 65%)을 수득하였다.
단계 6:
THF(10 ㎖) 중의 화합물 7(0.683 g, 1.6 mmol)의 용액에 2N 수산화 리튬(1.6 ㎖, 3.2 mmol)를 0 ℃에서 적가하였다. 상기 혼합물을 실온으로 가열하고 밤새 교반하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 10:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 증발시켜 THF를 제거하고, 잔사를 물로 희석하고 EA로 추출하여 불순물을 제거하였다. 수상을 산성화하고 2N HCl을 첨가하여 pH 3으로 조절하였다. 백색 침전물을 여과에 의해 수거하고, 건조시켜 백색 고체로서 정제된 화합물 8(400 ㎎, 수율: 61%)을 수득하였다.
단계 7:
DMF(3 ㎖) 중의 화합물 8(100 ㎎, 0.24 mmol) 및 화합물 9(47 ㎎, 0.29 mmol)의 용액에, HATU(139 ㎎, 0.37 mmol) 및 DIPEA(95 ㎎, 0.73 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 질소 분위기하에서 40 ℃로 가열하고 밤새 교반하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 10;1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 EA로 희석하고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 예비-TLC에 의해 정제시켜, 밝은 황색 고체로서 화합물 10(60 ㎎, 수율: 45%)을 수득하였다.
단계 8:
화합물 10(10 ㎎, 0.018 mmol) 및 TFA(0.1 ㎖)의 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 10:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, TFA를 증발시키고 잔사를 Na2CO3 수용액에 의해 알칼리화하고 DCM으로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 예비-TLC에 의해 정제시켜, 황색 고체로서 정제된 화합물 2-4(5 ㎎, 수율: 62%)를 수득하였다. 도 5는 그의 구조 확인 데이터를 도시한다.
실시예 5: 화합물 2-5(본 발명에서 시리즈 2-5로도 지칭함)의 제조
Figure 112015108758065-pct00015
시리즈 2-5
Figure 112015108758065-pct00016
화합물 14C의 제조:
화합물 14A(100 g, 0.716 mol) 및 에탄올(1.0 L)을 기계적 교반기 및 염화 칼슘 튜브가 장착된 3 L 플라스크에 로딩하였다. 상기 혼합물을 20분 동안 교반하고, 이어서 트리에틸아민(TEA, 72.5 g, 0.716 mol)을 적하하였다. 생성된 혼합물을 10분 동안 교반하고, 이어서 에틸 아크릴레이트(61.6 g, 0.716 mol)를 상기 혼합물에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 실온에서 17시간 동안 교반하였다. (Boc)2O(234.5 g, 1.08 mol)를 실온에서 적가하였다. 이어서 상기 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 농축시켜 에탄올의 대부분을 제거하였다. 잔사를 물(3 L)에 용해시키고 Et2O(1 L x 3)로 추출하고, 이어서 물, 염화 암모늄(500 ㎖ x 3) 용액 및 염수(500 ㎖ x 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 농축시켜 황색 유성 물질로서 조 화합물 14C(300 g, 92%)를 수득하고, 이를 추가의 정제 없이 다음 단계에 바로 사용하였다.
화합물 14D의 제조:
나트륨(27.6 g, 0.765 mol)을 절대 에탄올(1.5 L)에 조금씩 첨가하였다. 상기 고체가 완전히 사라졌을 때, 화합물 14C(300 g, 1.04 mol)를 상기 용액에 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 밤새 환류시키고, 출발 물질이 완전히 소모될 때까지 TCL(PE/EA = 4:1)로 모니터하였다. 상기 반응 혼합물을 증발시켜 용매의 대부분을 제거하였다. 잔사를 물(1 L)에 용해시키고 시트르산으로 pH 6으로 산성화시켰다. 상기 혼합물을 EA(1 L x 3)로 추출하였다. 상기 추출액들을 합하고, 염수(1 L x 3)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 증발시켜, 갈색 유성 물질로서 화합물 14D(169 g, 63.4%)를 수득하였다. 조 생성물을 추가의 정제 없이 다음 단계에 바로 사용하였다.
화합물 14E의 제조:
MeONa(2.6 g, 48.58 mmol)를 MeOH(50 ㎖)에 용해시켰다. 상기 반응 혼합물을 5 ℃로 냉각시키고 포름아미딘 아세테이트(3.0 g, 29.15 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 0.5시간 동안 교반하고, 이어서 화합물 14D(5.0 g, 19.43 mmol)를 첨가하였다. 상기 반응 혼합물을 밤새 교반 환류시켰다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 10:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 증발시켜 용매의 대부분을 제거하였다. 잔사를 EA로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 실리카겔 크로마토그래피에 의해 정제시켜, 밝은 황색 고체로서 정제된 화합물 14E(680 ㎎, 수율: 14.7%)를 수득하였다.
화합물 14의 제조:
DCM(4 ㎖) 중의 화합물 14E(100 ㎎, 0.42 mmol) 및 N,N-디메틸아닐린(0.28 ㎖)의 용액에 옥시염화 인(174 ㎎, 1.26 mmol)을 질소 분위기 및 교반 조건하에 0 ℃에서 첨가하였다. 첨가를 완료한 후에, 상기 반응 혼합물을 빙수에 붓고, 여기에 고체 나트륨 카보네이트를 첨가하고, DCM으로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 TLC에 의해 정제시켜, 백색 고체로서 정제된 화합물 14(60 ㎎, 55.6%)를 수득하였다.
화합물 15의 제조:
화합물 7(50 ㎎, 0.15 mmol) 및 K2CO3(62.2 ㎎, 0.45 mmol)를 DMSO(2 ㎖)에 용해시키고, 질소 분위기하에 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 이어서 화합물 14(115.4 ㎎, 0.45 mmol)를 첨가하고 추가로 1.5시간 동안 교반하였다. TLC(DCM/메탄올 = 20:1)는 상기 반응의 완료를 가리켰다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 물로 희석하고 EA로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 TLC에 의해 정제시켜, 백색 고체로서 정제된 화합물 15(14 ㎎, 수율: 16.7%)를 수득하였다.
화합물 2-5의 제조:
화합물 15(14 ㎎, 0.025 mmol) 및 TFA(0.2 ㎖)의 혼합물을 질소 분위기 하에 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 상기 반응을 TLC(DCM/메탄올 = 10:1)를 통해 모니터하였다. 상기 반응이 완료된 후에, 상기 반응 혼합물을 나트륨 카보네이트로 알칼리화하고, DCM으로 추출하였다. 유기상을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고 농축시켜, 조 생성물을 수득하였다. 상기 조 생성물을 TLC에 의해 정제시켜, 백색 고체로서 정제된 화합물 2-5(2.7 ㎎, 수율: 24.5%)를 수득하였다. 도 6은 그의 질량 스펙트럼을 나타낸다.
본 발명의 이로운 효과들을 하기 시험 실시예들을 통해 구체적으로 예시한다.
시험 실시예 1: 다니오 레리오(Danio Rerio)의 혈관 발생에 대한 억제 시험
제브라 피시로도 지칭하는 다니오 레리오는 잉어과의 다니오 경골어류이며, 그의 유전자는 인간 유전자와 85%까지 유사성을 갖는다. 암컷 피시는 200 내지 300개의 알을 산란할 수 있으며, 수정 및 배아 발달 과정을 시험관 내에서 수행한다. 상기 알은 24시간 이내에 성장할 수 있으며, 배아는 투명하고, 이는 신체내 기관 및 조직의 변화를 관찰하기에 적합하다. 이러한 특성들이 상기 다니오 레리오를 국제 표준화 기구가 승인한 5개의 실험 동물 중 하나가 되게 하였다. 현재, 상기 다니오 레리오는 인간 질병 연구, 특히 심혈관계 연구에 널리 사용하고 있다. 상기 다니오 레리오를 신생혈관형성에 대한 소분자 화합물의 영향을 선별하는데 사용할 수 있다.
실험 방법: 본 실험은 신생혈관형성에 대한 화합물들의 영향을 선별하는데 일반적으로 사용하는 동물 모델로서 FLK1-GFP 트랜스제닉 다니오 레리오를 사용한다. 혈관이 형광 현미경(Suk-Won Jin, 2005, Development)하에서 생체내에서 관찰될 수 있다. 상기 출생후 FLK1-GFP 트랜스제닉 다니오 레리오의 선택된 배아를 배양 접시에 놓고 배양기에서 28 ℃에서 3 내지 5일 동안 배양하였다. 본 발명의 화합물 및 파조파니브(130B, 양성 대조군)를, 3 내지 5일 동안 배양한 다니오 레리오의 배양 용액에 표 1에 나타낸 농도로 직접 첨가하였으며; 40 uM DMSO를 음성 대조군으로서 사용하였다. 24시간 후에 척추 혈관의 발생 상태를 검사하고 형광 현미경을 사용하여 사진을 촬영하였다. 척추 혈관의 발생에 대한 상기 화합물들의 억제율에 대해서는 표 1을 참조한다. 여기에서 상기 음성 대조군의 혈관 발생 상태를 0%로 설정하였으며, 혈관 발생이 완전히 없는 상태를 100%로 설정하였다. 도 7A 및 7B는 각각 40 uM DMSO로 처리한 음성 대조군의 다니오 레리오의 형광 현미경사진, 및 1 uM 화합물 2-2로 처리한 다니오 레리오의 형광 현미경사진을 도시하며, 여기에서 상기 음성 대조군의 다니오 레리오의 척추 혈관 발생은 정상인 반면, 화합물 2-2로 처리한 다니오 레리오의 척추 혈관 발생은 100% 억제됨을 알 수 있다.
표 1은 FLK1-GFP 트랜스제닉 다니오 레리오의 혈관 발생에 대한 본 발명 화합물의 억제 효과 나타낸다.
Figure 112015108758065-pct00017
표 1 및 도 7로부터, 본 발명의 화합물 2-1, 2-2, 2-3, 2-4 및 2-5가 모두 상기 다니오 레리오의 혈관 발생에 대해 억제 효과를 가지며, 여기에서 화합물 2-1 및 2-2가 명백하게 더 바람직한 활성을 갖는 것을 알 수 있다.
시험 실시예 2: VEGFR2에 대한 본 발명 화합물들의 시험관내 억제 시험
VEGFR2 키나제에 대한 본 발명 화합물들의 억제를 검출하는 실험 방법은 하기와 같다:
1) 1차 배양된 인간 제대 정맥 내피세포(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs) P3-P5를 6 웰 플레이트에, 웰당 2 x 105 세포로 옮겼다;
2) 본 발명의 화합물 2-1, 2-2 및 2-4(농도는 각각의 화합물에 대해서 10 nM, 100 nM 및 1 μM이다)를, 상기 세포가 70 내지 80%까지 성장했을 때 첨가하고 30분간 배양하였으며, VEGF는 대조군이었다;
3) 50 ng/㎖ VEGF(셀 시그널링 캄파니(Cell Signaling company, US))를 첨가하고, 10분간 자극하였다;
4) 비-변성 용해 완충제를 첨가하여 상기 반응을 종료시키고, 세포 용해 완충제를 수거하여 단백질 정량분석을 수행하였다;
5) SDS-PAGE 전기영동, 나이트로셀룰로스 멤브레인으로의 이동, 상기 멤브레인을 절단하고 포스페이트 트윈 완충제, 5% 탈지유로부터 제형화된 TTBS 완충제(트리스-완충된 염수 0.01% 트윈 20, 셀 시그널링 캄파니, US, pH 8.0) 중에서 2시간 동안 밀봉시켰다;
6) 상기 멤브레인을 세척하고, 항-인산화된 VEGFR2 항체(1:1000 희석, 셀 시그널링 캄파니, US)를 사용하여 밤새 4 ℃에서 밀봉시켰다;
7) 멤브레인 세척 후 둘째 날에, 양고추냉이 퍼옥시다제 표시된 염소 항-토끼 2차 항체(셀 시그널링 캄파니, US)를 실온에서 1시간 동안 상기 멤브레인과 배양시켰다;
8) 멤브레인 세척 후 화학발광 키트(밀리포어 캄파니(Millipore company))로 전개시키고, 사진을 촬영하였다.
상기 시험 결과를 도 8에 나타내었다. 도 8로부터, 화합물 2-1, 2-2 및 2-4가 모두 VEGFR2를 억제할 수 있으며, 여기에서 화합물 2-2가 더 양호한 효과를 갖는 것을 알 수 있다.
시험 실시예 3: 맥락막 신생혈관형성에 대한 본 발명 화합물들의 억제 효과
마우스는 c57/BL(잭스 랩(Jax Lab, US))이고, 실험을 레이저-유도된 맥락막 신생혈관형성(CNV) 동물 모델상에서 수행한다. 상기 모델은 습성 황반변성의 CNV 발생에 대한 약제의 영향을 연구하는데 널리 사용되는 동물 모델이다. 상기 마우스는 모두 2 내지 3개월 되었으며, 애버틴으로 마취시켰고; 1% 트로피카미드(알콘(Alcon))로 동공산대를 생성시켰으며; 모든 눈에 대해 IRIDEX 오큐라이트(OcuLight) GL532nm 레이저 광응고화(IRIDEX) 및 세극등 전달 시스템을 사용하여 4개의 광응고 화상 점을 만들었으며, 매개변수들은 하기와 같았다: 전력 120 mW, 반점 크기 75 ㎛, 및 지속기간 0.1 초. c57/BL 마우스(망막마다 4개의 레이저 점)를 레이저 광응고화시켜 CNV 발생을 유도하였다. 브루크 막의 균열을 나타내는 기포로서 관찰된 레이저 점들만을 연구 대상으로 간주하였다. 레이저 실행 직후 주사한다: 오른쪽 눈에 1 uM 화합물 2-2를 주사하고, 왼쪽 눈에 대조군으로서 상기 약제와 동일한 부피를 갖는 PBS를 주사하였다. 주사후 5일째에 상기 동물을 죽이고 안구를 수득한다. 전안부, 유리체 및 망막을 제거한 후, 이소렉틴으로 맥락막 및 한편으로 눈의 편평한 슬라이드를 준비하였다. 자이스 형광 현미경 시스템에 의해 사진을 촬영하고 CNV 면적을 측정하였다. 결과를 도 9A 및 9B에 나타낸다.
도 9로부터, 화합물 2-2(1 uM)가 맥락막 신생혈관형성을 명백히 억제할 수 있으며, 따라서 습성 황반변성을 효과적으로 치료하거나 경감시킬 수 있는 것을 알 수 있다.
결론: 상기 시험 실시예들로부터, 본 발명의 화합물들이 신생혈관형성의 이상 증식에 대해 양호한 효과를 가지며, 이러한 유형의 화합물들은 VEGFR2를 억제함으로써 활성을 생성시킴을 알 수 있다. 상기 유형의 화합물들을 신생혈관형성의 이상에 의해 야기되는 질병, 예를 들어 습성 황반변성 등의 치료에 사용할 수 있다.
시험 실시예 4: 키나제에 대한 본 발명 화합물들의 영향
1) 억제 투여량 효과에 대한 연구
화합물 2-1 및 2-2를 각각 100% DMSO 용매에 용해시키고, 3개 그룹의 농도로 희석하였으며, DMSO는 모든 시험 화합물에서 1% 농도이다. 상기 화합물들의 최고 농도는 50 uM이었다. 비선택성 단백질 키나제의 활성 억제제, 스타우로스포린(시그마 캄파니, US)을 기준으로서 사용하였으며, 그의 최고 농도는 1 uM이다. 상세한 시험 조건에 대해서 표 2를 참조하고, 시험 결과에 대해서 표 3를 참조하고, IC50 값 계산 결과에 대해서 표 4 및 도 10을 참조하면 된다. 도 10A는 양성 대조군의 결과를 도시하고, 도 10B는 화합물 2-1 그룹의 결과를 도시하고, 도 10C는 화합물 2-2 그룹의 결과를 도시한다.
대상 공급처 [효소], nM [ATP], μM 배양 시간, hr
VEGFR2 인비트로젠(Invitrogen) 0.25 80 3
PDGFR-β 업스테이트
(Upstate)		 1 30 3
표 3은 KDR 및 PDGFR-β에 대한 상이한 농도를 갖는 화합물들의 억제 활성을 나타낸다.
Figure 112015108758065-pct00018
KDR 및 PDGFR-β에 대한 억제 활성(IC50)
화합물 IC50 (μM) 95% 신뢰도 비 Hill
KDR PDGFR-β KDR PDGFR-β KDR PDGFR-β
스타우로스포린 0.00942 0.000439 0.00121 0.0000206 1.002392 1.88
2-1 0.0277 1.94 0.00208 0.427 1.06611 1.09
2-2 0.00731 0.15 0.000624 0.0145 1.175183 0.92
상기 결과로부터, 본 발명의 화합물 2-1 및 2-2가 KDR 및 PDGFR-β에 대해 양호한 억제 활성을 가지며, 여기에서 화합물 2-2의 효과가 양성 대조군인 스타우로스포린의 경우보다 더 양호함을 알 수 있다.
2) 억제 특이성에 대한 연구
본 실험에서, 22개 키나제에 대한 활성 억제 시험을 화합물 2-1 및 2-2에 대해 2회 반복하여 수행하였으며, 여기에서 시험 농도는 5000 nM이다. 상기 시험하려는 화합물을 먼저 100% DMSO에 용해시켰으며, 상기 용해 농도는 최종 시험 농도의 100배이고, 따라서 모든 최종 시험에서 시험하려는 용액 중의 DMSO의 농도는 1%이다. SB-202191을 P38-α에 대한 대조군으로서 사용하였고, 워트만닌(Wortmannin)을 PI3K-α에 대한 대조군으로서 사용하였으며, 비선택성 단백질 키나제의 활성 억제제, 스타우로스포린을 다른 단백질 키나제들에 대한 대조군으로서 사용하였고, 시험시 농도는 10 uM이다.
표 5는 특정한 시험 방법 및 시약들을 나타낸다.
Figure 112015108758065-pct00019
표 6은 키나제들에 대한 화합물 2-1의 2개 시험의 평균 억제율을 나타낸다.
Figure 112015108758065-pct00020
표 7은 키나제들에 대한 화합물 2-2의 2개 시험의 평균 억제율을 나타낸다.
Figure 112015108758065-pct00021
상기 시험 결과로부터, 화합물 2-1 및 2-2는 모두 단백질 키나제 KDE를 선택적이고 효율적으로 억제할 수 있으며, 화합물 2-1의 억제율이 97%를 초과하고, 화합물 2-2의 억제율은 100%에 달함을 알 수 있다. 추가로, 이들 화합물은 또한 염증, 종양 등과 같은 질병과 관련된 다수의 다른 단백질 키나제들에 대해 일정한 억제 효과를 가지며, 여기에서 화합물 2-1은 KIT에 대해 약 72%의 억제율을, PDGFR-β에 대해서는 약 71%의 억제율을 가지며; 추가로 어느 정도, 화합물 2-1은 AURORA-B(약 31%의 억제율을 가짐), FGFR2(약 36%), SRC(약 21%) 및 JAK2(약 21%)를 또한 억제하고, 다른 키나제들의 억제율은 대부분 5% 미만이다. 화합물 2-2는 FGFR2에 대해 61% 이상, PDGFR-β에 대해 약 97%, KIT에 대해 약 92%, P38-α에 대해 약 80%, SRC에 대해 약 65%의 억제율을 가지나, 나머지 키나제들의 억제율의 대부분은 5% 미만이다.
기존의 연구 개발된 소분자 키나제 억제제들과 비교하여, 본 발명의 화합물들은 KDR에 대해 보다 더 특이적이고 효율적인 억제 효과를 가지며, 단백질 키나제들, 예를 들어, 종양 및 염증과 밀접한 관련이 있는 FGFR2, PDGFR-β 등에 대해 일정한 억제 효과를 갖는 것도 알 수 있다. 이는 화합물 2-1 및 2-2가 모두, 다수의 이상 활성화된 단백질 키나제들, 예를 들어 KDR, FGFR2 등과 관련된 종양, 염증 및 황반변성과 같은 질병에 대해 잠재적인 치료 활성을 갖는 것을 나타낸다.
시험 실시예 5: 각막 신생혈관형성에 대한 억제 효과의 연구
각막 염증, 다양한 화학 화상, 부상, 수술 상처 등은 병적인 신생혈관형성을 야기할 것이며, 각막 신생혈관형성은 다양한 시력 손상을 야기할 것이다. 화학적 각막 손상 동물 모델은 질병에 대한 약역학적 연구에 널리 사용되는 모델이다.
A: 마우스 각막 화학 화상 모델
본 시험은 2 내지 3개월 된 총 5마리의 마우스를 시험하였다. 상기 마우스들은 c57/BL(잭스 랩, US)이었다. 각막의 중심에, 75% 질산은 및 25% 질산칼륨의 용액을 갖는 막대를 사용하여 화학 화상 모델링을 유도하였다. 0.02 ㎖의 화합물 2-2(100 uM의 농도)를 상기 화학 화상 직후에 오른쪽 눈에 결막하 주사하고, 이어서 0.2 ㎖의 화합물 2-2를 하루에 2회 점적하였으며(100 uM의 농도); PBS를 대조군으로서 왼쪽 눈에 사용하고, 상기 왼쪽 눈을 상기 오른쪽 눈과 동일하게 처리하였다. 비교를 위해서 7일 후에 상기 각막을 사진 촬영하였다. 상기 결과에 대해서 도 11을 참조하며, 여기에서 도 11은 화합물 2-2로 처리한 결과를 도시하고, 도 11B는 음성 대조군으로서 PBS로 처리한 결과를 도시한다.
도 11로부터, 화합물 2-2에 의한 처리가 신생혈관형성 및 출혈을 명백하게 감소시키는 것을 알 수 있다.
B: 토끼 각막 화학 화상 모델
본 시험은 5 내지 6개월 된 총 5마리의 흰 토끼를 시험하였다. 마취 후에, 각막의 중심에서, 오른쪽 눈을 0.1M NaOH로 적신 6 ㎜ 직경의 둥근 여과지로 처리하고, 3분 동안 화학 화상 모델링을 유도하였다. 0.1 ㎖의 100 uM 화합물 2-2를 상기 화학 화상 직후에 오른쪽 눈에 결막하 주사하고, 이어서 0.5 ㎖의 100 uM 화합물 2-2를 하루에 2회 점적하고; PBS를 상기 화학 모델링 후 대조군으로서 왼쪽 눈에 사용하고, 상기 왼쪽 눈을 상기 오른쪽 눈과 동일하게 처리하였다. 비교를 위해서 7일 후에 상기 각막을 사진 촬영하였다. 상기 결과에 대해서 도 12 를 참조하며, 여기에서 도 12A는 화합물 2-2로 처리한 결과를 도시하고, 도 12B는 음성 대조군으로서 PBS로 처리한 결과를 도시하고, 도 12C는 화합물 2-1로 처리한 결과를 도시한다.
도 12로부터, 화합물 2-1 및 2-2에 의한 처리가 모두 각막 신생혈관형성을 명백하게 감소시키는 것을 알 수 있다.
요약하면, 본 발명의 화합물들은 신생혈관형성의 이상 증식에 대해 양호한 효과를 가지며, 상기 유형의 화합물들은 VEGFR2(KDR로도 지칭함)를 억제함으로써 활성을 생성시킨다. 이러한 유형의 화합물들을 신생혈관형성의 이상 증식 및 단백질 키나제, 예를 들어 VEGFR2, FGFR2 등의 이상에 의해 야기되는 질병들, 예를 들어 습성 황반변성, 염증, 악성 종양 등의 치료에 사용할 수 있다.

Claims (21)

  1. 하기 화학식 I로 표시되는 화합물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:
    화학식 I
    Figure 112017026545532-pct00022

    (상기 화학식 I에서, R1은 H, 아미노, 하이드록시 및 설피드릴 중에서 선택되고; R2는 H, 아미노, 하이드록시, 설피드릴 및 -(CH2)nNHR8 중에서 선택되고, 여기에서 n은 1 내지 5이고, R8은 H 또는 C1-3 알킬이고; R3은 H 및 C1-6 알킬 중에서 선택되고; R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, 할로겐, C1-6 알킬 및 할로겐 치환된 C1-6 알킬 중에서 선택되고; R7은 H, C1-6 알킬 및 할로겐 중에서 선택되거나,
    R2 및 R3은 이들을 연결하는 탄소 원자와 함께, 1 내지 2개의 헤테로원자를 갖는 치환되거나 비치환된 5- 또는 6-원 고리를 형성하고, 여기에서 상기 헤테로원자는 N, O 또는 S이고, 상기 치환기는 C1-6알킬이다.)
  2. 제 1 항에 있어서, R2가 H, 아미노 및 -(CH2)nNHR8 중에서 선택되고, 여기에서 n이 1 내지 3이고, R8이 H 또는 C1-2 알킬이고; R3이 H 및 C1-2 알킬 중에서 선택되고; R4, R5 및 R6이 각각 독립적으로 할로겐, C1-2 알킬 및 할로겐 치환된 C1-2 알킬 중에서 선택되고; R7이 H 및 할로겐 중에서 선택되거나,
    R2 및 R3이 이들을 연결하는 탄소 원자와 함께, 1개의 질소 원자를 갖는 치환되거나 비치환된 5- 또는 6-원 고리를 형성하고, 여기에서 상기 치환기가 C1-3 알킬인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  3. 제 2 항에 있어서, R2가 아미노 및 -(CH2)nNHR8 중에서 선택되거나, R2 및 R3이 이들을 연결하는 탄소 원자와 함께, 1개의 질소 원자를 갖는 치환되거나 비치환된 5- 또는 6-원 고리를 형성하고, 여기에서 상기 치환기가 C1-3 알킬인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  4. 제 2 항에 있어서, R1, R2 및 R3 중 하나 이상이 아미노이고, 나머지가 H이며; R4, R5 및 R6이 동일하고 F 및 Cl 중에서 선택되고; R7이 H인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
  5. 제 1 항에 있어서, 하기의 화합물들 중 하나인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염:
    Figure 112017026545532-pct00023
  6. 신생혈관형성의 이상 증식을 억제하기 위한 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물.
  7. 제 6 항에 있어서, 신생혈관형성의 이상 증식을 억제하기 위한 약학 조성물이 VEGFR2 억제제인 약학 조성물.
  8. 제 6 항에 있어서, 신생혈관형성의 이상 증식을 억제하기 위한 약학 조성물이 항안부 신생혈관형성 약학 조성물인 약학 조성물.
  9. 제 6 항에 있어서, 신생혈관형성의 이상 증식을 억제하기 위한 약학 조성물이 맥락막 신생혈관형성 억제제인 약학 조성물.
  10. 제 6 항에 있어서, 신생혈관형성의 이상 증식을 억제하기 위한 약학 조성물이 습성 황반변성, 당뇨성 망막병증 또는 신생혈관성 녹내장을 치료 또는 예방하기 위한 약학 조성물인 약학 조성물.
  11. 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병을 치료하기 위한 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물.
  12. 제 11 항에 있어서, 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병이 안부 신생혈관형성과 관련된 질병인 약학 조성물.
  13. 제 11 항에 있어서, 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병이 맥락막 신생혈관형성과 관련된 질병인 약학 조성물.
  14. 제 11 항에 있어서, 신생혈관형성의 이상 증식과 관련된 질병이 습성 황반변성, 당뇨성 망막병증 또는 신생혈관성 녹내장인 약학 조성물.
  15. 이상 단백질 키나제에 의해 야기되는, 염증 및 악성 종양으로부터 선택되는 질병을 치료하기 위한 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는 약학 조성물.
  16. 제 15 항에 있어서, 단백질 키나제가 VEGFR2, PDGFR-β, KIT, AURORA-B, FGFR2, SRC, JAK2 또는 P38-α인 약학 조성물.
  17. 유효량의 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 포함하는, 습성 황반변성, 당뇨성 망막병증 또는 신생혈관성 녹내장을 치료 또는 예방하기 위한 약학 조성물.
  18. 제 17 항에 있어서, 상기 조성물이 안과용 제제인 약학 조성물.
  19. 하기 화학식 II로 표시되는 중간체 화합물:
    화학식 II
    Figure 112017026545532-pct00024

    (상기 화학식 II에서, R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 H, 할로겐, C1-6 알킬 및 할로겐 치환된 C1-6 알킬 중에서 선택되고; R7은 H, C1-6 알킬 및 할로겐 중에서 선택된다.)
  20. 제 19 항에 있어서, 상기 R4, R5 및 R6은 각각 독립적으로 할로겐, C1-2 알킬 및 할로겐 치환된 C1-2 알킬 중에서 선택되고; R7은 H 및 할로겐인 중간체 화합물.
  21. 제 19 항에 있어서, 상기 R4, R5 및 R6은 동일하며, F 또는 Cl이고, R7은 H 또는 할로겐 중에서 선택되는 중간체 화합물.
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