KR101787680B1 - 키나아제 억제제 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 CDK4/6 키나아제 억제제, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 용매화물, 또는 이들의 이성질체에 관한 것이다; 상기 CDK4/6 키나아제 억제제, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물 또는 이들의 이성질체를 포함하는 약제학적 제형, 약제학적 조성물 및 키트, 및 상기 CDK4/6 키나아제 억제제, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물 또는 이들의 이성질체의 용도. 예를 들면, 본 발명의 화합물은 세포 내에서 CDK4/6 키나아제 억제제의 활성을 감소 또는 억제하고, 및/또는 CDK4/6 키나아제에 의해 매개되는 암-관련 질환을 치료 및/또는 예방하는데 유용하다.
Description
본 발명은 의약의 기술분야에 속한다. 특히, 본 발명은 CDK4/6 키나아제 억제제, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 용매화물(solvate), 또는 이들의 입체이성질체; 상기 CDK4/6 키나아제 억제제, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체를 포함하는 약제학적 제형, 약제학적 조성물 및 키트; 상기 CDK4/6 키나아제 억제제, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체의 용도와 관련된다. 예를 들면, 본 발명의 화합물은 세포 내에서 CDK4/6 키나아제의 활성을 감소 또는 억제, 및/또는 CDK4/에 의해 매개되는 암-관련 질병을 치료 및/또는 예방하는데 유용하다.
종양발생은 종양형성유전자(oncogene)과 종양억제유전자(antioncogene)의 불균형과 관련된다. 거의 모든 종양형성유전자 또는 종양억제유전자에 있어서, 그들의 기능 및 효과는 결국 세포주기(cell cycle)에 집중된다. 따라서, 종양은 세포주기질병(cell cycle disease, CCD)으로 인식될 수 있고, 세포주기를 조절하거나 차단하는 것은 종양을 치료하는 방법들 중 하나이다. 현재, 세포주기 조절과 관련된 많은 분자들이 발견되었고, 그중에서도 사이클린-의존성 키나아제(Cyclin-Dependent-Kinase, CDK)는 세포주기 조절 네트워크의 핵심분자들이다. CDK는 촉매 서브유닛(catalytic subunit)로서 세린/트레오닌 키나아제의 한 종류이며, 세포에서 중요한 신호 분자(signaling molecule)들로서 세포주기의 각 단계에 참여한다. 연구결과들은 세포주기 조절 네트워크에서 핵심인 CDK에 있어서 어떠한 이상은 비정상적 세포주기를 가져오며, 결국 종양발생을 일으킴을 보여준다.
CDK family는 21개의 아이소폼(isoform)을 가지며, 이들은 이들의 조절 서브유닛(regulatory subunit) 사이클린에 결합함으로써 작동한다. 세포주기 조절에 있어서의 역할뿐만 아니라, CDK 아이소폼은 전사, DNA 수선(repair), 분화(differentiation) 및 프로그램된 세포사(programmed cell death)의 조절에도 관여한다. 종양세포의 증식 및 사멸을 조절함에 있어서 CDK의 핵심 역할에 기초하여, CDK family는 항암제의 발견 및 개발에 관한 가능성과 새로운 분야를 제공한다.
신약개발에 있어서, 플라보피리돌(flavopiridol), UCN-01 및 기타 같은 종류의 것으로 대표되는 CDK 억제제 1세대는 “범-CDK(pan-CDK)” 억제제로 불리며, CDK family의 모든 아이소폼을 동등하게 블로킹하며, 임상시험(clinical trial)에서 상대적으로 높은 독성을 나타내며, 그 중 몇몇은 치료적으로 효과가 있는 용량으로 투여할 수 없다. 따라서, 사람들은 치료의 선택성을 향상시키고, 몇몇 부작용들로 인한 정상 세포들의 손상을 예방하기 위해 선택적인 CDK 억제제를 개발하기 시작한다.
세포주기에 관여되는 CDK 아이소폼 중에서, CDK4/6은 대체불가능한 역할을 수행한다. 암에 관련된 세포주기 돌연변이들은 주로 G1기와 G1/S 이행기에 존재한다. CDK4/6과 사이클린 D에 의해 형성된 복합체는 종양억제유전자 산물인 Rb의 인산화(pRb)에 의해 부착된 전사인자 E2F를 방출하고, S 기와 관련된 유전자의 전사를 촉발시키며, 그 결과 세포들이 세포주기 확인점(check point)을 지나, G1 기에서 S기로 이행할 수 있도록 촉진한다. 인간 종양의 약 80%는 사이클린D- CDK4/6-INK4-Rb 경로(cyclin D- CDK4/6-INK4-Rb)에 비정상이 존재한다. 이 경로의 변경으로 인해, G1 기가 가속화되고, 종양세포는 증식속도를 올려 생존상 이득을 취하게 된다. 따라서, 이 경로의 간섭(interference)은 치료의 전략이 되었고, CDK4/6은 새로운 항-종양의 타겟이 되었다. 항-종양 타겟으로서 CDK4/6은 다음과 같은 이점을 가진다: (1) 대부분의 증식성 세포들에 있어서, 그들의 증식은 CDK2 또는 CDK4/6-의존적이나, CDK4/6 억제제는 골수억압 및 장관반응(intestinal reaction)과 같은 “범-CDK” 억제제의 세포독성을 나타내지 않는다; 및 (2) 전임상시험(preclinical test)은 사이클린 D 수준이 증가하거나, P16INK4a가 세포에서 비활성화되는 경우, 세포의 약물에 대한 민감도가 증가될 수 있음을 보여준다; 종양세포가 정상 세포에 비하여 상기 현상을 가지므로, 약물의 타겟팅 특성이 어느 정도 증가된다.
지금까지, 어떠한 CDK 억제제도 상용화 시판 허가를 받지 않았다. 선택성이 양호한 일련의 CDK4/6 억제제들이 화이자(Pfizer), 엘리 릴리 및 노바티스를 포함한 몇몇 제약 회사들에 의해 보고된 바 있고, 이들은 임상시험 중이다. 그들 중, 특별히 관심을 받는 약물들은 화이자가 개발한 PD0332991 (팔보시클립, palbociclib) 엘리 릴리가 개발한 LY2835219 (임상 3상, Phase III) 및 노바티스가 개발한 LEE-011 (임상 3상, Phase III)이다.
PD0332991
LY2835219
2013년 4월, 화이자의 PD0332991은 FDA로부터 획기적 치료제 지정(Breakthrough Therapy Designation)을 받았고; 2014년 8월, 화이자는, 국소적으로 진행성 또는 전이성 유방암을 가진 에스트로겐 수용체-양성(ER+, estrogen receptor-positive) 및 인간상피성장인자2-음성(HER2-, human epidermal growth factor 2 negative)의 폐경기 여성의 치료제로서, 레트로졸(letrozole)과 병용하는 PD0332991(palbociclib)의 승인을 받기 위한 신약 신청(NDA)을 FDA에 제출하였으며, 이전에는 전신적 치료제로서 허가를 받은 바 없었다. 그것은 CDK4/6 억제제들의 개발에 매우 긍정적인 효과를 주었다. 종양에 대한 더 나은 치료적 효과의 성취 및 시장 수요의 충족을 위하여, 본 발명자들은 높은 효능과 낮은 독성을 가진 차세대 CDK4/6 억제제 개발을 희망한다. 본 발명은 새로운 구조를 가진 선택적인 CDK4/6 억제제를 제공하며, 그러한 구조를 가진 화합물이 우수한 효능을 가지고, 혈뇌장벽(BBB, Blood brain barrier)을 효과적으로 통과할 수 있어 CDK 억제제가 뇌암을 위한 치료제로서 사용 가능함을 확인하였다.
본 발명의 일 양태에 있어서, 본 발명은 CDK4/6 키나아제를 타겟으로하는 억제제/화합물과 관련된 것이다. 특히, 본 발명의 예시로 든 기술적인 해결방법은 하기와 같다:
1. 하기 화학식 I’로 표시되는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르 또는 용매화물(solvate), 또는 이들의 입체이성질체:
<화학식 I’>
상기 A1과 A2 는 독립적으로 질소로부터 선택되고;
상기 R1은 C1-6 알킬기, C1-6 알콕시기 또는 Q1에 의해 선택적으로 치환된 3 내지 8원 시클로알킬, 상기 Q1은 C1-6 알킬기 또는 C1-6 알콕시기이고;
상기 R2는 C1-6 알킬기, C1-6 알콕시기, 시안기(cyano), 카바모일기(carbamoyl) 또는 C1-6 알킬카보닐아미노기(alkylcarbonylamino)이며;
상기 R3와 R5는 독립적으로 할로겐 또는 수소로부터 선택된 것이고, 상기 R3와 R5 중 적어도 하나는 할로겐이며;
상기 R4는 3 내지 8원 헤테로시크릴(heterocyclyl)기, 6 내지 14원 융합된 헤테로시크릴기, 5 내지 8원 헤테로아릴기, 6 내지 14원 융합된 헤테로아릴기, 페닐기, 나프틸기, 6 내지 12원 다리 걸친(bridged) 헤테로시크릴기 또는 6 내지 12원 스파이로헤테로시크릴기(spiroheterocyclyl), 및 이들이 Q2에 의해 선택적으로 치환된 것이며;
상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 할로겐, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-6 알콕시기, C1-6 알킬설포닐기, C1-6 알킬설포닐아미노기, 또는 다이-C1-6 알킬아미노기; 또는 C1-6 알킬기, 3 내지 8원 시클로알킬기, 3 내지 8원 헤테로시크릴기 또는 6 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기, 및 이들이 치환기에 의해 선택적으로 치환된 것들로부터 선택된 것이고, 상기 치환기는 아미노기, 히드록시기, 할로겐, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-6 알킬기, C1-6 알콕시기, C1-6 알킬아미노기, 다이-C1-6 알킬아미노기, C1-6 알킬설포닐기, 3 내지 8원 헤테로시크릴기 또는 3 내지 8원 시클로알킬기이고;
상기 n은 0, 1, 2, 3, 4 또는 5으로부터 선택된다.
2. 상기 해결 수단 1에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체:
상기 A1과 A2는 각각 독립적으로 질소로부터 선택되고;
상기 R1은 C1-4 알킬기 또는 C1-4 알콕시기이고;
상기 R2는 C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, 시안기, 카바모일기 또는 C1-4 알킬카보닐아미노기이며;
상기 R3 및 R5는 각각 독립적으로 할로겐으로부터 선택되고;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 질소-포함 5 내지 6원 헤테로시크릴기으로부터 선택되며; 상기 “질소-포함 5 내지 6원 헤테로시크릴기”는 바람직하게는 “질소-포함 6원 헤테로시크릴기”이고;
상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 할로겐, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알콕시기, 또는 다이-C1-4 알킬아미노기; 또는 C1-4 알킬기, 3 내지 6원 시클로알길기 또는 3 내지 6원 헤테로시크릴기, 및 이들이 치환기에 의해 선택적으로 치환된 것들로부터 선택된 것이고, 상기 치환기는 아미노기, 히드록시기, 할로겐, 트리플루오로메틸기, C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, C1-4 알킬아미노기, 다이-C1-4 알킬아미노기, 또는 3 내지 6원 시클로알킬기이며;
n은 0으로부터 선택된다.
3. 상기 해결수단 2에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체:
상기 화합물은 하기의 화학식으로 표시되는 화합물로부터 선택된다.
4. 상기 해결수단 1에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 화합물은 하기의 화학식 I의 구조를 가진다:
<화학식 I>
상기 A1과 A2 는 독립적으로 질소로부터 선택되고;
상기 R1은 C1-6 알킬기, C1-6 알콕시기 또는 Q1에 의해 선택적으로 치환된 3 내지 8원 시클로알킬, 상기 Q1은 C1-6 알킬기 또는 C1-6 알콕시기로부터 선택되며;
상기 R2는 C1-6 알킬기, C1-6 알콕시기, 시안기(cyano), 카바모일기(carbamoyl) 또는 C1-6 알킬카보닐아미노기(alkylcarbonylamino)로부터 선택되고;
상기 R3와 R5는 독립적으로 할로겐 또는 수소로부터 선택된 것이고, 상기 R3와 R5 중 적어도 하나는 할로겐이며;
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 3 내지 8원 헤테로시크릴(heterocyclyl)기, 6 내지 14원 융합된 헤테로시크릴기, 5 내지 8원 헤테로아릴기, 6 내지 14원 융합된 헤테로아릴기, 페닐기, 나프틸기, 6 내지 12원 다리 걸친(bridged) 헤테로시크릴기 또는 6 내지 12원 스파이로헤테로시크릴기(spiroheterocyclyl)로부터 선택되고;
상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 할로겐, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-6 알킬기, C1-6 알콕시기, 3 내지 8원 헤테로시크릴기 또는 6 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택된다.
5. 상기 해결수단 4에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 A1과 A2 는 독립적으로 질소로부터 선택되고;
상기 R1은 C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기로부터 선택되며;
상기 R2는 C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, 시안기(cyano), 카바모일기(carbamoyl), 또는 C1-4 알킬카보닐아미노기(alkylcarbonylamino)로부터 선택되고;
상기 R3와 R5는 독립적으로 할로겐으로부터 선택되며;
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 5 내지 7원 헤테로시크릴(heterocyclyl)기, 6 내지 11원 융합된 헤테로시크릴기, 6 내지 11원 다리 걸친 헤테로시크릴기, 또는 6 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기로부터 선택되고;
상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, 5 내지 6원 헤테로시크릴기, 또는 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택된다.
6. 상기 해결수단 5에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 A1과 A2는 독립적으로 질소로부터 선택되고;
상기 R1은 C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기로부터 선택되며;
상기 R2는 C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, 시안기(cyano), 카바모일기(carbamoyl) 또는 C1-4 알킬카보닐아미노기(alkylcarbonylamino)로부터 선택되고;
상기 R3와 R5는 독립적으로 할로겐으로부터 선택되며;
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 5 내지 7원 헤테로시크릴(heterocyclyl)기, 6 내지 11원 융합된 헤테로시크릴기, 6 내지 11원 다리 걸친 헤테로시크릴기 또는 6 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기로부터 선택되고;
상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, 5 내지 6원 헤테로시크릴기 또는 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택된다.
7. 상기 해결수단 6에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 R2는 메틸기로부터 선택되고;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 질소-포함 5 내지 6원 헤테로시크릴기로부터 선택되며; 상기 질소-포함 5 내지 6원 헤테로시크릴기는 질소원자를 통하여 상기 화학식 I의 메틸렌기에 연결되고, 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, 또는 질소-포함 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되며;
상기 질소-포함 5 내지 6원 헤테로시크릴기는, 바람직하게는 1 내지 2의 질소 원자를 포함하는 질소-포함 5 내지 6원 헤테로시크릴기이다.
8. 상기 해결수단 7에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 
, 
, 
, 
, 또는 
로부터 선택되고, 상기 Q2는 C1-4 알킬기 또는 질소-포함 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택된다.
9. 상기 해결수단 5에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 A1 및 A2는 독립적으로 질소로부터 선택되고;
상기 R1은 아이소프로필기로부터 선택되며;
상기 R2는 메틸기, 메톡시기, 시안기, 카바모일기, 또는 아세틸아미노기로부터 선택되고;
상기 R3 및 R5는 각각 독립적으로 플루오르(F)이며;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되고; 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, 6원 헤테로시크릴기 또는 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택된다.
10. 상기 해결수단 9에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 R2는 메틸기로부터 선택되고;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 질소-포함 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되며; 상기 질소-포함 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기는 질소 원자를 통해 화학식 I의 메틸렌기에 연결되고; 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, 또는 질소-포함 6원 헤테로시크릴기로부터 선택되며;
상기 질소-포함 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로 시크릴기는 바람직하게는 1 내지 2의 질소 원자를 포함하는 질소-포함 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로 시크릴기이다.
11. 상기 해결 수단 10에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 
, 
, 
, 
, 
, 
또는 
로부터 선택되고, 상기 Q2는 C1-4 알킬기 또는 질소-포함 6원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택된다.
12. 상기 해결수단 5에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 A1 및 A2는 독립적으로 질소로부터 선택되고;
상기 R1은 아이소프로필기로부터 선택되며;
상기 R2는 메틸기, 메톡시기, 시안기, 카바모일기, 또는 아세틸아미노기로부터 선택되고;
상기 R3 및 R5는 각각 플루오르(F)이며;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 6 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기로부터 선택되고; 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, 6원 헤테로시크릴기 또는 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택된다.
13. 상기 해결수단 12에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 R2는 메틸기로부터 선택되고;
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 1, 2, 또는 3개의 동일한 또는 상이한 헤테로원자를 포함하는 질소-포함 6 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기로부터 선택되며; 상기 헤테로원자는 바람직하게는 질소원자와 산소원자로부터 선택되고, 적어도 하나의 질소원자를 포함하며, 상기 6 내지 10원 융합 헤테로시크릴기는 질소원자를 통해 상기 화학식 I의 메틸렌기에 연결되고, 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, 또는 C1-4 알킬기로부터 선택된다.
14. 상기 해결 수단 13에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
또는 
로부터 선택되고, 상기 Q2는 아미노기 또는 C1-4 알킬기로부터 선택된다.
15. 상기 해결수단 5에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 A1 및 A2는 각각 독립적으로 질소로부터 선택되고;
상기 R1은 아이소프로필기로부터 선택되며;
상기 R2는 메틸기, 메톡시기, 시안기, 카바모일기, 또는 아세틸아미노기로부터 선택되고;
상기 R3 및 R5는 각각 플루오르(F)이며;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기로부터 선택되고; 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, 6원 헤테로시크릴기, 또는 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택된다.
16. 상기 해결수단 15에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 R2는 메틸기로부터 선택되고;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 질소-포함 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기로부터 선택되며; 상기 질소-포함 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기는 질소원자를 통하여 상기 화학식 I의 메틸렌기에 연결되고, 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, 또는 C1-4 알킬기로부터 선택되며;
상기 질소-포함 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기는 바람직하게는 1 내지 2의 질소 원자를 포함하는 질소-포함 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기이다.
17. 상기 해결수단 16에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
, 
또는 
로부터 선택된 것이고, 상기 Q2는 C1-4 알킬기로부터 선택된다.
18. 상기 해결수단 1에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서,
상기 화합물은 하기의 표 A에 나타낸 화합물로부터 선택된다.
| 연번 | 화학식 | 연번 | 화학식 |
| 1 |
 |
18 |
 |
| 2 |
 |
19 |
 |
| 3 |
 |
20 |
 |
| 4 |
 |
21 |
 |
| 5 |
 |
22 |
 |
| 6 |
 |
23 |
 |
| 6-1 |
 |
23-1 |
 |
| 24-1 |
 |
24 |
 |
| 6-2 |
 |
25 |
 |
| 6-2-1 |
 |
25-1 |
 |
| 7 |
 |
26 |
 |
| 7-1 |
 |
26-1 |
 |
| 8 |
 |
27 |
 |
| 8-1 |
 |
27-1 |
 |
| 9 |
 |
28 |
 |
| 9-1 |
 |
29 |
 |
| 10 |
 |
30 |
 |
| 30-1 |
 |
31-1 |
 |
| 11 |
 |
||
| 12 |
 |
31 |
 |
| 13 |
 |
32 |
 |
| 32-1 |
 |
33-1 |
 |
| 14 |
 |
33 |
 |
| 15 |
 |
34 |
 |
| 16 |
 |
35 |
 |
| 17 |
 |
본 발명은 또한 상기 개시한 화합물의 용도와 관련된 것이다. 따라서, 본 발명은 또한 하기의 예시로 든 기술적 해결수단과 관련된 것이다:
19. 상기 해결수단 1 내지 18 중 어느 하나에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체, 및 1 또는 그 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체(carrier)를 선택적으로 포함하는 약제학적 조성물.
20. 상기 해결수단 19에 따른 약제학적 조성물에 있어서, 1 또는 그 이상의 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
21. 상기 해결수단 20에 다른 약제학적 조성물에 있어서, 상기 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제는 하기로부터 선택된 1 또는 그 이상의 것이다: 메토트렉세이트(methotrexate), 카페시타빈(capecitabine), 겜시타빈(gemcitabine), 독시플루리딘(doxifluridine), 페메트렉스드 다이소듐(pemetrexed disodium), 파조파닙(pazopanib), 이마티닙(imatinib), 엘로티닙(erlotinib), 라파티닙(lapatinib), 게피티닙(gefitinib), 반데타닙(vandetanib), 허셉틴(herceptin), 베바시주맙(bevacizumab), 리툭시맙(rituximab), 트라스투주맙(trastuzumab), 파크리탁셀(paclitaxel), 비노렐빈(vinorelbine), 도세탁셀(docetaxel), 독소루비신(doxorubicin), 히드록시캠토테신(hydroxycamptothecine), 미토마이신(mitomycin), 에피루비신(epirubicin), 피라루비신(pirarubicin), 블레오마이신(bleomycin), 레트로졸(letrozole), 타목시펜(tamoxifen), 풀베스트란트(fulvestrant), 트립토렐린(triptorelin), 플루타마이드(flutamide), 류프로렐린(leuprorelin), 아나스트로졸(anastrozole), 이포스파마이드(ifosfamide), 부술판(busulfan), 시클로포스파마이드(cyclophosphamide), 카르무스틴(carmustine), 니무스틴(nimustine), 세무스틴(semustine), 메크로레타민(mechlorethamine), 멜파란(melphalan), 클로람부실(chlorambucil), 카보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 로바플라틴(lobaplatin), 토포테칸(topotecan), 캠프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan), 에베롤리무스(everolimus), 시롤리무스(sirolimus), 템시롤리무스(temsirolimus), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 아자티오프린(azathioprine), 액티노마이신 D(Actinomycin D), 다우노루비신(daunorubicin), 아드리아마이신(adriamycin), 미톡산트론(mitoxantrone), 블레오마이신(bleomycin), 미트라마이신(mithramycin) 및 아미노글루테티마이드(aminoglutethimide).
22. 대상체(subject)에서 CDK4/6 키나아제에 의해 매개되는 암-관련 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에 있어서, 상기 해결수단 1 내지 18 중 어느 하나에 따른 상기 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 이들의 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체의 용도.
23. 상기 해결수단 22에 따른 용도에 있어서, 상기 암-관련 질환은 뇌종양, 폐암, 편평상피암(squamous carcinoma), 방광상피암(bladder carcinoma), 위암, 난소암, 복막암, 췌장암, 유방암, 두경부암(head and neck cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁내막암, 직장암, 간암, 신장암, 식도선암(esophageal adenocarcinoma), 식도 편평상피암(esophageal squamous cancer), 전립선암, 여성 생식관 암, 상피내암(cancer in situ), 림프종, 신경섬유종, 갑상선암, 골암(osteocarcinoma), 피부암, 뇌암, 결장암, 고환암, 위장관 기질종양(gastrointestinal stromal tumor), 전립선신생종(prostate neoplasms), 비만세포종, 다발성 골수종, 흑색종, 교종(glioma) 또는 육종(sarcoma)으로부터 선택된다.
24. 상기 해결수단 22 또는 23에 따른 용도에 있어서, 상기 대상체는 소, 말, 염소, 돼지, 개, 고양이, 설치류, 및 영장류와 같은 포유류이고; 상기한 특히 바람직한 대상체는 인간이다.
25. 상기 해결수단 22 내지 24 중 어느 하나에 따른 용도에 있어서, 상기 약제는 1 또는 그 이상의 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제를 포함한다: 바람직하게는 상기 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제는 하기로부터 선택된 1 또는 그 이상의 것이다: 메토트렉세이트(methotrexate), 카페시타빈(capecitabine), 겜시타빈(gemcitabine), 독시플루리딘(doxifluridine), 페메트렉스드 다이소듐(pemetrexed disodium), 파조파닙(pazopanib), 이마티닙(imatinib), 엘로티닙(erlotinib), 라파티닙(lapatinib), 게피티닙(gefitinib), 반데타닙(vandetanib), 허셉틴(herceptin), 베바시주맙(bevacizumab), 리툭시맙(rituximab), 트라스투주맙(trastuzumab), 파크리탁셀(paclitaxel), 비노렐빈(vinorelbine), 도세탁셀(docetaxel), 독소루비신(doxorubicin), 히드록시캠토테신(hydroxycamptothecine), 미토마이신(mitomycin), 에피루비신(epirubicin), 피라루비신(pirarubicin), 블레오마이신(bleomycin), 레트로졸(letrozole), 타목시펜(tamoxifen), 풀베스트란트(fulvestrant), 트립토렐린(triptorelin), 플루타마이드(flutamide), 류프로렐린(leuprorelin), 아나스트로졸(anastrozole), 이포스파마이드(ifosfamide), 부술판(busulfan), 시클로포스파마이드(cyclophosphamide), 카르무스틴(carmustine), 니무스틴(nimustine), 세무스틴(semustine), 메크로레타민(mechlorethamine), 멜파란(melphalan), 클로람부실(chlorambucil), 카보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 로바플라틴(lobaplatin), 토포테칸(topotecan), 캠프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan), 에베롤리무스(everolimus), 시롤리무스(sirolimus), 템시롤리무스(temsirolimus), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 아자티오프린(azathioprine), 액티노마이신 D(Actinomycin D), 다우노루비신(daunorubicin), 아드리아마이신(adriamycin), 미톡산트론(mitoxantrone), 블레오마이신(bleomycin), 미트라마이신(mithramycin) 및 아미노글루테티마이드(aminoglutethimide).
26. 투여가 필요한 대상체(subject)에 상기 해결수단 1 내지 18 중 어느 하나에 따른 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체 또는 상기 해결수단 19 내지 21 중 어느 하나에 따른 약제학적 조성물을, 치료적 및/또는 예방적으로 효과적인 용량으로 투여하는 단계를 포함하는, CDK4/6 키나아제에 의해 매개되는 암-관련 질환의 치료 및/또는 예방 방법.
27. 상기 해결수단 26에 따른 방법에 있어서, 상기 암-관련 질환은 뇌종양, 폐암, 편평상피암(squamous carcinoma), 방광상피암(bladder carcinoma), 위암, 난소암, 복막암, 췌장암, 유방암, 두경부암(head and neck cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁내막암, 직장암, 간암, 신장암, 식도선암(esophageal adenocarcinoma), 식도 편평상피암(esophageal squamous cancer), 전립선암, 여성 생식관 암, 상피내암(cancer in situ), 림프종, 신경섬유종, 갑상선암, 골암(osteocarcinoma), 피부암, 뇌암, 결장암, 고환암, 위장관 기질종양(gastrointestinal stromal tumor), 전립선신생종(prostate neoplasms), 비만세포종, 다발성 골수종, 흑색종, 교종(glioma) 또는 육종(sarcoma)으로부터 선택된다.
28. 상기 해결수단 26 또는 27에 따른 방법에 있어서, 상기 대상체는 소, 말, 염소, 돼지, 개, 고양이, 설치류, 및 영장류와 같은 포유류이고; 상기한 특히 바람직한 대상체는 인간이다.
29. 상기 해결수단 25 내지 28 중 어느 하나에 따른 방법에 있어서, 상기 방법은 1 또는 그 이상의 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제를 투여하는 단계를 추가적으로 포함한다; 바람직하게는 상기 항-종양 약제 및/또는 면역억제제는 하기로부터 선택된 1 또는 그 이상의 것이다: 메토트렉세이트(methotrexate), 카페시타빈(capecitabine), 겜시타빈(gemcitabine), 독시플루리딘(doxifluridine), 페메트렉스드 다이소듐(pemetrexed disodium), 파조파닙(pazopanib), 이마티닙(imatinib), 엘로티닙(erlotinib), 라파티닙(lapatinib), 게피티닙(gefitinib), 반데타닙(vandetanib), 허셉틴(herceptin), 베바시주맙(bevacizumab), 리툭시맙(rituximab), 트라스투주맙(trastuzumab), 파크리탁셀(paclitaxel), 비노렐빈(vinorelbine), 도세탁셀(docetaxel), 독소루비신(doxorubicin), 히드록시캠토테신(hydroxycamptothecine), 미토마이신(mitomycin), 에피루비신(epirubicin), 피라루비신(pirarubicin), 블레오마이신(bleomycin), 레트로졸(letrozole), 타목시펜(tamoxifen), 풀베스트란트(fulvestrant), 트립토렐린(triptorelin), 플루타마이드(flutamide), 류프로렐린(leuprorelin), 아나스트로졸(anastrozole), 이포스파마이드(ifosfamide), 부술판(busulfan), 시클로포스파마이드(cyclophosphamide), 카르무스틴(carmustine), 니무스틴(nimustine), 세무스틴(semustine), 메크로레타민(mechlorethamine), 멜파란(melphalan), 클로람부실(chlorambucil), 카보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 로바플라틴(lobaplatin), 토포테칸(topotecan), 캠프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan), 에베롤리무스(everolimus), 시롤리무스(sirolimus), 템시롤리무스(temsirolimus), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 아자티오프린(azathioprine), 액티노마이신 D(Actinomycin D), 다우노루비신(daunorubicin), 아드리아마이신(adriamycin), 미톡산트론(mitoxantrone), 블레오마이신(bleomycin), 미트라마이신(mithramycin) 및 아미노글루테티마이드(aminoglutethimide).
30. 대상체에서 CDK4/6 키나아제에 의해 매개되는 암-관련 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 용도의, 상기 해결수단 1 내지 18 중 어느 하나에 따른 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 이들의 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
31. 상기 해결수단 30에 따른 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서, 상기 암-관련 질환은 뇌종양, 폐암, 편평상피암(squamous carcinoma), 방광상피암(bladder carcinoma), 위암, 난소암, 복막암, 췌장암, 유방암, 두경부암(head and neck cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁내막암, 직장암, 간암, 신장암, 식도선암(esophageal adenocarcinoma), 식도 편평상피암(esophageal squamous cancer), 전립선암, 여성 생식관 암, 상피내암(cancer in situ), 림프종, 신경섬유종, 갑상선암, 골암(osteocarcinoma), 피부암, 뇌암, 결장암, 고환암, 위장관 기질종양(gastrointestinal stromal tumor), 전립선신생종(prostate neoplasms), 비만세포종, 다발성 골수종, 흑색종, 교종(glioma) 또는 육종(sarcoma)으로부터 선택된다.
32. 상기 해결수단 30 또는 31에 따른 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 이들의 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서, 상기 대상체는 소, 말, 염소, 돼지, 개, 고양이, 설치류, 및 영장류와 같은 포유류이고; 상기한 특히 바람직한 대상체는 인간이다.
33. 1 또는 그 이상의 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제와 병행하여 사용되는, 상기 해결수단 30 내지 32 중 어느 하나에 따른 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체; 바람직하게는 상기 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제는 하기로부터 선택된 1 또는 그 이상의 것이다: 메토트렉세이트(methotrexate), 카페시타빈(capecitabine), 겜시타빈(gemcitabine), 독시플루리딘(doxifluridine), 페메트렉스드 다이소듐(pemetrexed disodium), 파조파닙(pazopanib), 이마티닙(imatinib), 엘로티닙(erlotinib), 라파티닙(lapatinib), 게피티닙(gefitinib), 반데타닙(vandetanib), 허셉틴(herceptin), 베바시주맙(bevacizumab), 리툭시맙(rituximab), 트라스투주맙(trastuzumab), 파크리탁셀(paclitaxel), 비노렐빈(vinorelbine), 도세탁셀(docetaxel), 독소루비신(doxorubicin), 히드록시캠토테신(hydroxycamptothecine), 미토마이신(mitomycin), 에피루비신(epirubicin), 피라루비신(pirarubicin), 블레오마이신(bleomycin), 레트로졸(letrozole), 타목시펜(tamoxifen), 풀베스트란트(fulvestrant), 트립토렐린(triptorelin), 플루타마이드(flutamide), 류프로렐린(leuprorelin), 아나스트로졸(anastrozole), 이포스파마이드(ifosfamide), 부술판(busulfan), 시클로포스파마이드(cyclophosphamide), 카르무스틴(carmustine), 니무스틴(nimustine), 세무스틴(semustine), 메크로레타민(mechlorethamine), 멜파란(melphalan), 클로람부실(chlorambucil), 카보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 로바플라틴(lobaplatin), 토포테칸(topotecan), 캠프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan), 에베롤리무스(everolimus), 시롤리무스(sirolimus), 템시롤리무스(temsirolimus), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 아자티오프린(azathioprine), 액티노마이신 D(Actinomycin D), 다우노루비신(daunorubicin), 아드리아마이신(adriamycin), 미톡산트론(mitoxantrone), 블레오마이신(bleomycin), 미트라마이신(mithramycin) 및 아미노글루테티마이드(aminoglutethimide).
34. 세포에서의 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성을 감소 및/또는 억제를 위한 제형의 제조를 위한, 상기 해결수단 1 내지 18 중 어느 하나에 따른 상기 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체의 용도.
35. 상기 해결수단 34에 따른 용도에 있어서, 상기 제형은 인 비보 또는 인비트로로 투여된다; 예를 들면, 상기 제형은 대상체의 세포 내에서의 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성을 감소 또는 억제하기 위하여, 대상체(예를 들어, 소, 말, 염소, 돼지, 개, 고양이, 설치류, 및 영장류와 같은 포유류; 예를 들어, 인간)에 투여된다; 또는 상기 제형은 인 비트로 세포 내에서의 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성을 감소 또는 억제시키기 위하여, 인비트로 세포(예를 들어, 세포주 또는 암세포와 같은 대상체에서 유래한 세포)에 투여된다.
36. 상기 해결수단 34 또는 35의 용도에 있어서, 상기 세포는 뇌종양 세포, 폐암세포, 편평상피암(squamous carcinoma) 세포, 방광상피암(bladder carcinoma) 세포, 위암세포, 난소암세포, 복막암세포, 췌장암세포, 유방암세포, 두경부암(head and neck cancer) 세포, 자궁경부암(cervical cancer) 세포, 자궁내막암세포, 직장암세포, 간암세포, 신장암세포, 식도선암(esophageal adenocarcinoma) 세포, 식도 편평상피암(esophageal squamous cancer) 세포, 전립선암세포, 여성 생식관 암세포, 상피내암(cancer in situ) 세포, 림프종 세포, 신경섬유종 세포, 갑상선암세포, 골암(osteocarcinoma) 세포, 피부암세포, 뇌암세포, 결장암세포, 고환암세포, 위장관 기질종양(gastrointestinal stromal tumor) 세포, 전립선신생종(prostate neoplasms) 세포, 비만세포종 세포, 다발성 골수종 세포, 흑색종 세포, 교종(glioma) 세포 또는 육종(sarcoma) 세포로부터 선택된다.
37. 상기 해결수단 1 내지 18 중 어느 하나에 따른 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체의 효과적인 용량을 세포에 투여하는 단계를 포함하는, 세포의 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성의 감소 또는 억제 방법.
38. 상기 해결수단 37에 따른 방법에 있어서, 상기 방법은 인 비보에서 수행되고, 예를 들어, 상기 세포는 대상체(예를 들어, 소, 말, 염소, 돼지, 개, 고양이, 설치류, 및 영장류와 같은 포유류; 예를 들어, 인간)의 세포이다; 또는 상기 방법은 인 비트로에서 수행되고, 예를 들어, 상기 세포는 인 비트로 세포(예를 들어, 세포주 또는 암세포와 같은 대상체에서 유래한 세포)이다.
39. 상기 해결수단 37 또는 38의 방법에 있어서, 상기 세포는 뇌종양 세포, 폐암세포, 편평상피암(squamous carcinoma) 세포, 방광상피암(bladder carcinoma) 세포, 위암세포, 난소암세포, 복막암세포, 췌장암세포, 유방암세포, 두경부암(head and neck cancer) 세포, 자궁경부암(cervical cancer) 세포, 자궁내막암세포, 직장암세포, 간암세포, 신장암세포, 식도선암(esophageal adenocarcinoma) 세포, 식도 편평상피암(esophageal squamous cancer) 세포, 전립선암세포, 여성 생식관 암세포, 상피내암(cancer in situ) 세포, 림프종 세포, 신경섬유종 세포, 갑상선암세포, 골암(osteocarcinoma) 세포, 피부암세포, 뇌암세포, 결장암세포, 고환암세포, 위장관 기질종양(gastrointestinal stromal tumor) 세포, 전립선신생종(prostate neoplasms) 세포, 비만세포종 세포, 다발성 골수종 세포, 흑색종 세포, 교종(glioma) 세포 또는 육종(sarcoma) 세포로부터 선택된다.
40. 세포에서의 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성을 감소 및/또는 억제 용도를 위한, 상기 해결수단 1 내지 18 중 어느 하나에 따른 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
41. 인 비보 또는 인 비트로 투여에 사용되는, 상기 해결수단 40에 따른 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체; 예를 들어, 상기 제형은 대상체의 세포 내 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제를 감소 또는 억제하기 위하여 대상체(예를 들어, 소, 말, 염소, 돼지, 개, 고양이, 설치류, 및 영장류와 같은 포유류; 예를 들어, 인간)에 투여되고; 또는 상기 제형은 인 비트로 세포 내에서의 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성을 감소 또는 억제시키기 위하여, 인비트로 세포(예를 들어, 세포주 또는 암세포와 같은 대상체에서 유래한 세포)에 투여된다.
42. 상기 해결수단 40 또는 41에 따른 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 있어서, 상기 세포는 상기 세포는 상기 세포는 뇌종양 세포, 폐암세포, 편평상피암(squamous carcinoma) 세포, 방광상피암(bladder carcinoma) 세포, 위암세포, 난소암세포, 복막암세포, 췌장암세포, 유방암세포, 두경부암(head and neck cancer) 세포, 자궁경부암(cervical cancer) 세포, 자궁내막암세포, 직장암세포, 간암세포, 신장암세포, 식도선암(esophageal adenocarcinoma) 세포, 식도 편평상피암(esophageal squamous cancer) 세포, 전립선암세포, 여성 생식관 암세포, 상피내암(cancer in situ) 세포, 림프종 세포, 신경섬유종 세포, 갑상선암세포, 골암(osteocarcinoma) 세포, 피부암세포, 뇌암세포, 결장암세포, 고환암세포, 위장관 기질종양(gastrointestinal stromal tumor) 세포, 전립선신생종(prostate neoplasms) 세포, 비만세포종 세포, 다발성 골수종 세포, 흑색종 세포, 교종(glioma) 세포 또는 육종(sarcoma) 세포로부터 선택된다.
43. 상기 해결수단 1 내지 18 중 어느 하나에 따른 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 이들의 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체, 및 선택적으로 사용설명을 포함하는 세포 내에서 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성을 감소 또는 억제하는 키트.
선행기술과 비교하여, 본 발명의 해결수단은 하기와 같은 이점을 가진다:
(1) 본 발명의 화학식 I’ 또는 화학식 (I)의 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체는 우수한 CDK4/6 키나아제 억제 활성을 가진다.
(2) 본 발명의 화학식 I’ 또는 화학식 (I)의 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체는 우수한 생물안정성(biostability), 더욱 긴시간 지속되는 효과, 및 높은 생체이용능(bioavailability)을 나타낸다.
(3) 본 발명의 화학식 I’ 또는 화학식 (I)의 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체는 우수한 혈뇌장벽 투과능을 가져, CDK 억제제를 뇌 암의 치료제로써 사용가능하게 한다.
(4) 본 발명의 화학식 I’ 또는 화학식 (I)의 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체는 낮은 독성, 우수한 약제-내성, 및 높은 안전성을 나타낸다.
본 출원의 발명의 상세한 설명 및 청구항에서, 상기 화합물은 그들의 화학식들로 명명되고, 만일 동일한 화합물에 대한 화합물의 명칭과 화학식이 서로 일치하지 않을 경우, 화학식이 우선한다.
본 출원에서, 달리 특정되지 않은 경우, 사용되는 과학적이고 기술적인 용어들은 본 발명과 관련된 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의하여 일반적으로 이해되는 의미를 가진다. 그러나, 본 발명을 더 잘 이해하기 위하여, 용어의 일부분에 대해서 정의 및 설명들이 제공된다. 또한, 만일 본 출원에서 제공되는 용어의 정의 및 설명이 당업자에 의하여 일반적으로 이해되는 의미와 다를 경우, 본 출원에서 제공되는 용어의 정의 및 설명이 우선한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “ Me”은 메틸기이다.
본 발명에서, 치환기에서의 물결선 “
”은 치환기의 라디칼이 물결선의 위치에서 백본(페닐고리와 같은)의 라디칼에 화학적 결합을 통하여 연결된다는 것을 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “할로겐”은 F, Cl, Br 및 I 원자를 말한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “C1-6 알킬기”는 “C1-4 알킬기”, “C1-3 알킬기” 등을 포함하는, 선형 또는 가지친 알킬기를 의미하고, 상기의 예시는 메틸기, 에틸기, n-프로필기, 아이소프로필기, n-부틸기, 2-메틸프로필기, 1-메틸프로필기, 1,1-다이메틸에틸기, n-펜틸기, 3-메틸부틸기, 2-메틸부틸기, 1-메틸부틸기, 1-에틸프로필기, n-헥실기, 4-메틸펜틸기, 3-메틸펜틸기, 2-메틸펜틸기, 1-메틸펜틸기, 3,3-다이메틸부틸기, 2,2-다이메틸부틸기, 1,1-다이메틸부틸기, 1,2-다이메틸부틸기, 1,3-다이메틸부틸기, 2,3-다이메틸부틸기, 2-에틸부틸기, 1,2-다이메틸프로필기, 등을 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “C1-6 알콕시기, C1-6 알킬카보닐아미노기, C1-6 알킬설포닐기, C1-6 알킬설포닐아미노기, C1-6 알킬아미노기, 다이-C1-6 알킬아미노기”는 C1-6 알킬-O-, C1-6 알킬-C(O)NH-, C1- 6알킬-SO2-,C1-6알킬-SO2NH-, C1- 6알킬-NH-, (C1- 6알킬)2-N-을 의미하고, 상기 “C1-6 알킬”은 위에서 정의한 것과 동일한 의미를 가진다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “C1-4 알콕시기, C1-4 알킬카보닐아미노기, C1-4 알킬설포닐기, C1-4 알킬설포닐아미노기, C1-4 알킬아미노기, 다이-C1-4 알킬아미노기”는 C1-4 알킬-O-, C1-4 알킬-C(O)NH-, C1-4 알킬-SO2-, C1-4 알킬-SO2NH-, C1-4 알킬-NH-, (C1-4 알킬)2-N-을 의미하고, 상기 “C1-4 알킬”은 위에서 정의한 것과 동일한 의미를 가진다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “3 내지 8원 시클로알킬기”는 3 내지 8개의 탄소원자를 가진 시클로알케인(cycloalkane)으로부터 1개의 수소가 제거된 것에서 유래한 시클로알킬기를 말하고, 예를 들어 “3 내지 6원 시클로알킬기” 및 “4 내지 6원 시클로알킬기”, 등을 포함한다. 상기의 예시는 하기를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다: 시클로프로필기, 시클로부틸기, 시클로펜틸기 및 시클로헥실기, 시클로펩틸기, 시클로옥틸기, 등.
본 명세서에서 사용되는 용어 “3 내지 8원 헤테로시크릴기”는 예를 들어 “3 내지 7원 헤테로시크릴기”, “3 내지 6원 헤테로시크릴기”, “4 내지 7원 헤티로시크릴기”, “4 내지 6원 헤테로시크릴기”, “5 내지 7원 헤테로시크릴기”, “5 내지 6원 헤테로시크릴기”, “5 내지 6원 질소-포함 헤테로시크릴기”, “6원 헤테로시크릴기”, “6원 질소-포함 헤테로시크릴기”, 등을 포함한다. 상기의 예시는 하기를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다: 아지리디닐기(aziridinyl), 2H-아지리디닐기, 다이아자시클로프로필기(diazacyclopropyl), 3H-다이아자시클로프로페닐기(diazacyclopropenyl), 아제티디닐기(azetidinyl), 1,4-다이옥사닐기(dioxanyl), 1,3-다이옥사닐기, 1,3-다이옥사시클로펜틸기(1,3-dioxacyclopentyl), 1,4-다이옥사-시클로헥사디에닐기(1,4-dioxa-cyclohexadienyl), 테트라하이드로퓨릴기(tetrahydrofuryl), 다이하이드로피로릴기(dihydropyrrolyl), 피롤리다이니릴기(pyrrolidinylyl), 이미다졸리디닐기(imidazolidinyl), 4,5-다이하이드로이미다조릴기(dihydroimidazolyl), 피라조리디닐기(pyrazolidinyl), 4,5-다이하이드로피라조릴기(dihydropyrazolyl), 2,5-다이하이드로티에닐기(dihydrothienyl), 테트라하이드로티에닐기(tetrahydrothienyl), 4,5-다이하이드로티아조릴기(dihydrothiazolyl), 피페리딜기(piperidyl), 피페라지닐기(piperazinyl), 모포리닐기(morpholinyl), 헥사하이드로피리미디닐기(hexahydropyrimidinyl), 헥사하이드로피리다지닐기(hexahydropyridazinyl), 4,5-다이하이드로-옥사조릴기(4,5-dihydro-oxazolyl), 4,5-다이하이드로아이소옥사조릴기(4,5-dihydroisoxazolyl), 2,3-다이하이드로아이소옥사조릴기(2,3-dihydroisoxazolyl), 2H-1,2-옥사지닐기(2H-1,2-oxazinyl), 6H-1,3-옥사지닐기(6H-1,3-oxazinyl), 4H-1,3-티아지닐기(4H-1,3-thiazinyl), 6H-1,3-티아지닐기(6H-1,3-thiazinyl), 2H-피라닐기(2H-pyranyl), 2H-피란-2-온기(2H-pyran-2-one), 3,4-다이하이드로-2H-피라닐기(3,4-dihydro-2H-pyranyl) 등, 바람직하게는 “5 내지 6원 질소-포함 헤테로시크릴기.
본 명세서에서 사용되는 용어 “질소 원자를 통하여 화학식 I의 메틸렌에 연결된”은 질소 원자를 통하여 화학식 I의 메틸렌에 연결된 질소-포함 그룹(예를들어, “5 내지 6원 질소-포함 헤테로시크릴기” 또는 “6원 질소-포함 헤테로시크릴기”와 같은 질소-포함 헤테로시크릴기; “6 내지 10원 질소-포함 융합된 헤테로시크릴기”와 같은 질소-포함 융합된 헤테로시크릴기; “7 내지 9원 질소-포함 다리 걸친 헤테로시크릴기” 또는 “8원 질소-포함 다리 걸친 헤테로시크릴기”와 같은 질소-포함 다리 걸친 헤테로시크릴기; “7 내지 11원 질소-포함 스파이로헤테로시크릴기”와 같은 질소-포함 스파이로헤테로시크릴기)을 말한다.
IUPAC 의 명명법에 따르면, 본 발명의 융합된 고리(fused ring)는 두 개의 인접한 원자(즉, 하나의 결합을 공유하는)를 공유하는 2 또는 그 이상의 고리 구조에 의해 형성되는 융합된 고리 구조를 말한다. 본 발명의 상기 다리 걸친 고리(bridged ring)는 두 개의 비-인접한 탄소원자를 공유하는 2 또는 그 이상의 고리구조에 의해 형성되는 다리 걸친 고리구조를 말한다. 본 발명의 스파이로고리(spiroring)는 하나의 탄소원자를 공유하는 2 또는 그 이상의 고리 구조에 의해 형성된 스파이로고리 구조를 말한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 “6 내지 14원 융합된 헤테로시크릴기”는 예를 들어, “6 내지 11원 융합된 헤테로시크릴기”, “6 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기”, “7 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기”, “9 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기”, “6 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기” 등을 포함하는, 두 개의 인접한 원자(즉, 하나의 결합을 공유하는)를 공유하는 2 또는 그 이상의 고리구조에 의해 형성되는, 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 6 내지 14원 융합된 고리 구조를 말한다. 상기의 예시는 하기를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다: 3-아자바이시클로[3.1.0]헥세인(3-azabicyclo[3.1.0]hexane), 3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵테인(3,6-diazabicyclo[3.2.0]heptane), 3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥테인(3,8-diazabicyclo[4.2.0]octane), 3,7-다이아자바이시클로[4.2.0]옥테인(3,7-diazabicyclo[4.2.0]octane), 옥타하이드로피롤로[3,4-c]피롤(옥타하이드로피롤로[3,4-c]피롤), 옥타하이드로피롤로[3,4-b]피롤(octahydropyrrolo[3,4-b]pyrrole), 옥타하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진(octahydropyrrolo[3,4-b][1,4]oxazine), 옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-c]피리딘(octahydro-1H-pyrrolo[3,4-c]pyridine), 옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-b]피리딘(octahydro-1H-pyrrolo[3,4-b]pyridine), 옥타하이드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진(octahydro-1H-pyrido[3,4-b][1,4]oxazine), 데카하이드로-2,6-나프탈렌(decahydro-2,6-naphthalene), 테트라하이드로이미다조[4,5-c]피리디닐(tetrahydroimidazo[4,5-c]pyridinyl), 3,4-다이하이드로퀴나졸리닐(3,4-dihydroquinazolinyl), 1,2-다이하이드로퀴녹사리닐(1,2-dihydroquinoxalinyl), 벤조[d][1,3]다이옥사시클로펜테닐(benzo[d][1,3]dioxacyclopentenyl), 1,3-다이하이드로아이소벤조퓨릴(1,3-dihydroisobenzofuryl), 2H-크로메닐(2H-chromenyl), 2H-크로멘-2-온(2H-chromen-2-one), 4H-크로메닐(4H-chromenyl), 4H-크로멘-4-온(4H-chromen-4-one), 크로마닐(chromanyl), 4H-1,3-벤족사지닐(4H-1,3-benzoxazinyl), 4,6-다이하이드로-1H-퓨로[3,4-d]이미다졸릴(4,6-dihydro-1H-furo[3,4-d]imidazolyl), 3a,4,6,6a-테트라하이드로-1H-퓨로[3,4-d]이미다졸릴(3a,4,6,6a-tetrahydro-1H-furo[3,4-d]imidazolyl), 4,6-다이하이드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸릴(4,6-dihydro-1H-thieno[3,4-d]imidazolyl), 4,6-다이하이드로-1H-피롤로[3,4-d]이미다졸릴(4,6-dihydro-1H-pyrrolo[3,4-d]imidazolyl), 4,5,6,7-테트라하이드로-1H-벤조[d]이미다졸릴(4,5,6,7-tetrahydro-1H-benzo[d]imidazolyl) 등.
본 명세서에서 사용되는 용어 “5 내지 8원 헤테로아릴기”는 예를 들어, “5 내지 7원 헤테로아릴기”, “5 내지 6원 헤테로아릴기” 등을 포함한다. 상기의 예시는 하기를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다: 퓨릴(furyl), 티에닐(thienyl), 피롤릴(pyrrolyl), 티아졸릴(thiazolyl), 아이소티아졸릴(isothiazolyl), 티아다이아졸릴(thiadiazolyl), 옥사졸릴(oxazolyl), 아이소옥사졸릴(isoxazolyl), 옥사다이아졸릴(oxadiazolyl), 이미다졸릴(imidazolyl), 피라졸릴(pyrazolyl), 1,2,3-트리아졸릴(1,2,3-triazolyl), 1,2,4-트리아졸릴(1,2,4-triazolyl), 1,2,3-옥사다이아졸릴(1,2,3-oxadiazolyl), 1,2,4-옥사다이아졸릴(1,2,4-oxadiazolyl), 1,2,5-옥사다이아졸릴(1,2,5-oxadiazolyl), 1,3,4-옥사다이아졸릴(1,3,4-oxadiazolyl), 피리딜(pyridyl), 2-피리돈(2-pyridone), 4-피리돈(4-pyridone), 피리미디닐(pyrimidinyl), 1,4-다이옥소시클로헥사디에닐(1,4-dioxocyclohexadienyl), 2H-1,2-옥사지닐(2H-1,2-oxazinyl), 4H-1,2-옥사지닐(4H-1,2-oxazinyl), 6H-1,2-옥사지닐(6H-1,2-oxazinyl), 4H-1,3-옥사지닐(4H-1,3-oxazinyl), 6H-1,3-옥사지닐(6H-1,3-oxazinyl), 4H-1,4-옥사지닐(4H-1,4-oxazinyl), 피리다지닐(pyridazinyl), 피라지닐(pyrazinyl), 1,2,3-트리아지닐(1,2,3-triazinyl), 1,3,5-트리아지닐(1,3,5-triazinyl), 1,2,4,5-테트라지닐(1,2,4,5-tetrazinyl), 아제피닐(azepinyl), 1,3-다이아제피닐아조시닐(1,3-diazepinyl,azocinyl) 등, 바람직하게는 “5-6 원 헤테로아릴(5-6 membered heteroaryl)”.
본 명세서에서 사용되는 용어 “6 내지 14원 융합된 헤테로아릴기”는 예를 들어, “6 내지 10원 융합된 헤테로아릴기”, “7 내지 10원 융합된 헤테로아릴기”, “9 내지 10원 융합된 헤테로아릴기” 등을 포함하는, 두 개의 인접한 원자(즉, 하나의 결합을 공유하는)를 공유하는 2 또는 그 이상의 고리 구조에 의해 형성된, 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 6 내지 14원 융합된 고리 구조를 말한다. 상기의 예시는 하기를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다: 벤조퓨라닐(benzofuranyl), 아이소벤조퓨라닐(isobenzofuranyl), 벤조티에닐(benzothienyl), 인돌릴(indolyl), 아이소인돌릴(isoindolyl), 벤족사졸릴(benzoxazolyl), 벤조이미다졸릴(benzoimidazolyl), 인다졸릴(indazolyl), 벤조트리아졸릴(benzotriazolyl), 퀴노리닐(quinolinyl), 퀴놀린-2-온(quinolin-2-one), 퀴놀린-4-온(quinolin-4-one), 아이소퀴놀린-1-온(isoquinolin-1-one), 아이소퀴놀리닐(isoquinolinyl), 아크리디닐(acridinyl), 페난트리디닐(phenanthridinyl), 벤조피리다지닐(benzopyridazinyl), 프탈라지닐(phthalazinyl), 퀴나졸리닐(quinazolinyl), 퀴녹사리닐(quinoxalinyl), 페나지닐(phenazinyl), 프테리디닐(pteridinyl), 퓨리닐(purinyl), 나프티리디닐(naphthyridinyl), 페나진(phenazine), 페노티아진(phenothiazine) 등.
본 명세서에서 사용되는 용어 “6 내지 12원 다리 걸친 헤테로시크릴기”는 두 개의 비-인접 원자를 공유하는 어느 두 개의 고리에 의해 형성된, 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 6 내지 12원 다리 걸친 고리 구조를 말하며, 상기 헤테로원자는 N, S, O, CO, SO 및/또는 SO2 등으로부터 선택된다. 상기 6 내지 12원 다리 걸친 헤테로시크릴기는 예를들어, “6 내지 11원 다리 걸친 헤테로시크릴기”, “6 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기”, “7 내지 10원 다리 걸친 헤테로시크릴기”, “7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기”, “7 내지 9원 다리 걸친 질소-포함 다리 걸친 헤테로시크릴기”, “7 내지 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기”, “8원 다리 걸친 헤테로시크릴기”, “8원 질소-포함 다리 걸친 헤테로시크릴기”등을 포함한다. 상기의 예시는 하기를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다: 
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본 명세서에서 사용되는 용어 “6 내지 12원 스파이로헤테로시크릴기”는 하나의 원자를 공유하는 적어도 두 개의 고리에 의해 형성되는, 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 6 내지 12원 스파이로고리 구조를 말하며, 상기 헤테로원자는 N, S, O, CO, SO 및/또는 SO2 등으로부터 선택된다. 상기 6 내지 12원 스파이로헤테로시크릴기는 예를 들어, “6 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기”, “7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기”, “7 내지 11원 질소-포함 스파이로헤테로시크릴기”, “7 내지 10원 스파이로헤테로시크릴기”, “7 내지 9원 스파이로헤테로시크릴기”, “7 내지 8원 스파이로헤테로시크릴기” 등을 포함한다. 상기의 예시는 하기를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다: 
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또한 본 발명은 화학식 I’의 화합물을 제조하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 하기의 도식(도식의 축약어의 의미는 아래와 같이 설명된다: DCM: 다이클로로메테인; DIPEA: N,N-다이아이소프로필에틸아민(N,N-diisopropylethylamine); DMF: N,N-다이메틸포라마이드(N,N-dimethylformamide); DMSO: 다이메틸설폭사이드(dimethyl sulfoxide); EA: 에틸아세테이트(ethyl acetate); HATU: 2-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트[2-(7-azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluronium hexafluorophosphate]; MeOH: 메탄올; NBS: N-브로모부탄이미드(N-bromobutanimide); PE: 페트롤륨 에테르(petroleum ether); THF: 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran); Xant-phos: 4,5-비스(다이페닐포스피노)-9,9-다이메틸잔틴[4,5-bis(diphenylphosphino)-9,9-dimethyl xanthene]; x-phos: 2-다이시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리아이소프로필바이페닐(2-dicyclohexylphosphino-2',4',6'-triisopropylbiphenyl)으로 표시되나 이에 제한되는 것은 아니다:
상기 R1, R2, R3, R4, R5, n, A1, A2 는 위에서 정의된 것과 동일한 의미를 가지고, X는 F, Cl, Br 및 I 로부터 선택된 할로겐을 의미; 및 할로겐화제(halogenating agent)는 I2 및 Br2로부터 선택된다.
상기 예시로 든 단계는 다음과 같다:
1. 중간체 1의 제조
원물질 1 및 유기염기를 유기용매에 용해시키고, 원물질 2를 점적하는 방식으로 천천히 저온에서 첨가한다. 교반하면서 반응을 수행한다. 반응 후, 상기 반응혼합물을 추출한다; 상기 유기상(organic phase)을 건조 및 농축시켜 중간체 1을 수득한다. 상기 유기 용매는 바람직하게는 DCM 또는 1,4-다이옥산, 및 상기 유기염기는 바람직하게는 트리에틸아민이다.
2. 중간체 2의 제조
중간체 1, 원물질 3 및 유기염기를 유기용매에 용해시키고, 옥시염화인(phosphorus oxychloride)을 점적하는 방식으로 첨가한다. 반응 후, 상기 반응 혼합물의 pH를 중성으로 조절하기 위항 염기를 첨가한다. 최종혼합물(resultatn mixture)을 추출하고, 분리된 유기상을 건조 및 농축시켜 중간체 2를 수득한다. 상기 유기 용매는 바람직하게는 DCM 또는 1,2-다이클로로에테인(1,2-dichloroethane), 및 상기 유기염기는 바람직하게는 트리에틸아민이다.
3. 중간체 3의 제조
중간체 2를 유기용매에 용해시키고, 칼륨 tert-부톡사이드(potassium tert-butoxide)를 첨가한다. 반응결과 혼합물을 100℃까지 가열하고, 2시간 동안 반응시킨다. 반응 후, 반응을 중지하기 위하여 물을 첨가한다. 상기 최종 혼합물을 추출하고, 유기상은 건조 및 농축한다. 최종잔여물을 칼럼 크로마토그래피에 주입하여 중간체 3을 수득한다. 상기 유기 용매는 바람직하게는 DCM이다.
4. 중간체 4의 제조
중간체 3 및 피나콜 붕산염(pinacol borate)을 유기용매에 용해시킨다; 팔라듐 아세트산염(palladium acetate), 트리시클로헥실 인(phosphorus trichlorohexyl), 및 칼륨 아세트산염을 추가하였다. 질소 가스의 보호 하에, 가열하며 반응을 수행한다. 반응 후, 반응 혼합물을 추출하기 위하여 물과 유기용매가 첨가된다. 유기상은 건조, 농축 및 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 중간체 4를 수득한다. 상기 유기용매는 바람직하게는 DMF 또는 1,4-다이옥산이다.
5. 중간체 5의 제조
원물질 4 및 중간체 4를 유기용매에 용해시키고, 무기염기 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐을 첨가한다. 질소 가스의 보호 하에, 가열하며 반응을 수행한다. 반응 후, 물을 첨가한다. 반응 혼합물을 추출하고, 유기상을 건조 및 농축한다. 최종 잔여물을 칼럼크로마토그래피로 분리하여 중간체 5를 수득한다. 상기 유기용매는 바람직하게는 1,4-다이옥산 또는 DMF이다.
6. 중간체 6의 제조
원물질 5를 유기용매에 용해시키고, 벤조일 퍼옥사이드(benzoyl peroxide) 및 NBS를 첨가한다. 가열 하에 반응을 수행한다. 반응 후, 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축한다. 최종 잔여물을 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 중간체 6을 제조한다. 상기 유기용매는 바람직하게는 사염화탄소(carbon tetrachloride)이다.
7. 중간체 7의 제조
중간체 6 및 원물질 6을 유기용매에 용해시키고, 무기염기를 첨가한다. 상온에서 상기 반응을 수행한다. 반응 후, 반응 혼합물을 여과시키고, 여과물을 농축하고, 잔여물을 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 중간체 7을 수득한다. 상기 유기용매는 바람직하게는 아세토니트릴(acetonitrile)이다.
8. 화학식 I’의 화합물의 제조
중간체 5 및 중간체 7을 유기용매에 용해시키고; 트리스(다이벤질리데네아세톤)다이팔라듐(tris(dibenzylideneacetone)dipalladium), 2-다이시클로헥실포스피노-2‘,4’,6‘-트리아이소프로필바이페닐(2-dicyclohexylphosphino-2',4',6'-triisopropylbiphenyl), 및 세슘 카보네이트(cesium carbonate)를 첨가한다. 질소 가스의 보호 하에, 상기 반응을 가열하여 수행한다. 반응 후, 물을 첨가한다. 반응 혼합물을 추출하고, 유기상을 건조 및 농축한다. 최종잔여물을 칼럼 크로마토그래피로 분리하여 화학식 I’의 화합물을 수득한다. 상기 유기용매는 바람직하게는 1,4-옥산 또는 DMF이다.
원물질 6은 주로 일차아민 또는 이차아민 등이다.
본 발명에 따른 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물의“약제학적으로 허용가능한 염”은 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물의 산성기(acidic group; 예를 들어, -COOH, -OH, -SO3H 등)와, 알칼리금속 또는 알칼리토금속, 암모늄염, 및 질소-포함 유기 염기를 포함하는, 적합한 무기양이온 또는 유기양이온(염기)의 반응에 의해 형성된 염; 및 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물의 염기성기(basic group; 예를 들어, -NH2 등)와, 무기산 및 유기 카복실산을 포함하는, 무기음이온 또는 유기음이온(산)의 반응에 의해 형성된 염을 말한다.
본 발명에 따른 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물의“에스테르”는, 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물이 카복실기를 가질 때, 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물과 알코올의 에스테르화반응에 의해 형성된 에스테르; 또는 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물이 히드록시기를 가질 때, 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물과 유기산, 무기산, 또는 유기산염 등의 에스테르화반응에 의해 형성된 에스테르를 말한다. 산 또는 염기의 존재 하에서, 에스테르는 가수분해되어 상응하는 산 또는 염기를 생산할 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물의 “용매화물”은 이들의 용매 분자와의 관련성에 의해 형성된 물질을 말한다. 상기 용매는 유기용매(예를 들어, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 또는 아세토니트릴 등) 및 물 등일 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 따른 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물은 에탄올과 알코올레이트를 형성하거나, 또는 물과 수화물(hydrate)을 형성할 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물의 “입체이성질현상(stereoisomerism)”는 형태이성질현상(conformational isomerism) 및 배위이성질현상(configurational isomerism)나누어지고, 상기 배위이성질현상은 나아가 시스-트랜스 이성질현상 및 광학이성질현상으로 나누어진다. 형태이성질현상은 입체이성질현상의 일 형태이고, 이의 C-C 단일 결합의 회전 및 비틀림(distortion)은 특정한 배위를 가진 유기 분자 내, 흔히 알케인(alkane) 및 의자 및 보트형 형태이성질체를 가지는 시클로헥산(cyclohexane)과 같은 시클로알케인(cycloalkane) 화합물 내에서 원자 또는 원자단의 다른 공간적 배열을 야기한다. “입체이성질체”는 1 또는 그 이상의 비대칭적 중심을 가지고, 따라서 라세미 및 라세미 혼합물, 단일 광학이성질체, 부분입체이성질체 혼합물(diastereoisomer mixture), 및 단일 부분입체이성질체가 될 수 있는, 본 발명에 따른 화합물을 의미한다. 본 발명에 따른 상기 화합물은 비대칭적 중심을 가지고, 그것은 각각 독립적으로 두 개의 광학 이성질체로 이어진다. 본 발명의 범위는, 순수 또는 부분적으로 순수한 화합물뿐만 아니라, 이들의 가능한 모든 광학이성질체 및 부분이성질체 혼합물을 포함한다. 만일 본 발명에 따른 화합물이 알켄 C-C 이중 결합을 가질 경우, 달리 특정하지 않는 한, 본 발명에 따른 화합물은 시스-이성질체 및 트랜스-이성질체를 포함한다. 본 발명에 따른 화합물은 호변이성질체(tautomer)의 형태로 존재할 수 있고, 그것은 1 또는 그 이상의 이중결합 변이(shift)로 인한 다른 수소연결 부위(hydrogen connection site)를 가진다. 예를 들면, 케톤 및 이의 엔올 형태는 케토-엔올 호변이성질체이다. 다양한 호변이성질체 및 이의 혼합물은 모두 본 발명에 따른 화합물에 포함된다. 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물의 모든 광학이성질체, 부분광학이성질체, 라세미체, 시스-트랜스-이성질체, 호변이성질체, 기하이성질체, 및 에피메라이드(epimeride), 및 이들의 혼합물은 본 발명의 범위에 포함된다.
또한 본 발명은 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 이들의 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체, 및 1 또는 선택적으로 그 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 공한다. 상기 약제학적 조성물은 어떠한 약제학적으로 허용가능한 형태로도 제조될 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 이를 필요로하는 환자 또는 대상체에, 경구, 비경구, 직장, 또는 폐 내(intrapulmonary) 등 과 같은, 어떠한 적합한 경로로도 투여될 수 있다.
경구 투여되는 경우, 상기 약제학적 조성물은 타블렛, 캡슐, 알약, 및 과립과 같은 통상적인 고체 제형으로 제조될 수 있고; 또는 경구 용액, 경구 현탁액, 및 시럽과 같은 경우 액체 제형으로 제조될 수 있다. 상기 약제학적 조성물은 경구용 제형으로 제조될 경우, 적합한 충진제, 결합제제(binding agent), 분해제제(disintegrating), 윤활제 등과 같은 것들이 첨가될 수 있다. 비경구적으로 투여되는 경우, 상기 약제학적 조성물은 주사를 위한 멸균 파우더 및 주사를 위한 농축용액을 포함하는 주사물(injectio)로 제조될 수 있다.
상기 약제학적 조성물이 주사제로 제조될 경우, 약제분야에서의 통상적인 방법들이 사용될 수 있다. 주사제 제조시, 첨가제는 첨가되지 않을 수 있거나, 또는 약제의 특성에 따라 적합한 첨가제가 첨가된다. 직장으로 투여시, 상기 약제학적 조성물은 좌약 등으로 제조될 수 있다. 폐내 투여시, 상기 약제학적 조성물은 흡입제 또는 분사제 등으로 제조될 수 있다.
본 발명에 따른 상기 약제학적 조성물은, 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 더하여, 1 또는 그 이상의 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제를 추가적으로 포함할 수 있다. 상기 항-종양 약제 및/또는 면역억제제는 메토트렉세이트(methotrexate), 카페시타빈(capecitabine), 겜시타빈(gemcitabine), 독시플루리딘(doxifluridine), 페메트렉스드 다이소듐(pemetrexed disodium), 파조파닙(pazopanib), 이마티닙(imatinib), 엘로티닙(erlotinib), 라파티닙(lapatinib), 게피티닙(gefitinib), 반데타닙(vandetanib), 허셉틴(herceptin), 베바시주맙(bevacizumab), 리툭시맙(rituximab), 트라스투주맙(trastuzumab), 파크리탁셀(paclitaxel), 비노렐빈(vinorelbine), 도세탁셀(docetaxel), 독소루비신(doxorubicin), 히드록시캠토테신(hydroxycamptothecine), 미토마이신(mitomycin), 에피루비신(epirubicin), 피라루비신(pirarubicin), 블레오마이신(bleomycin), 레트로졸(letrozole), 타목시펜(tamoxifen), 풀베스트란트(fulvestrant), 트립토렐린(triptorelin), 플루타마이드(flutamide), 류프로렐린(leuprorelin), 아나스트로졸(anastrozole), 이포스파마이드(ifosfamide), 부술판(busulfan), 시클로포스파마이드(cyclophosphamide), 카르무스틴(carmustine), 니무스틴(nimustine), 세무스틴(semustine), 메크로레타민(mechlorethamine), 멜파란(melphalan), 클로람부실(chlorambucil), 카보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 로바플라틴(lobaplatin), 토포테칸(topotecan), 캠프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan), 에베롤리무스(everolimus), 시롤리무스(sirolimus), 템시롤리무스(temsirolimus), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 아자티오프린(azathioprine), 액티노마이신 D(Actinomycin D), 다우노루비신(daunorubicin), 아드리아마이신(adriamycin), 미톡산트론(mitoxantrone), 블레오마이신(bleomycin), 미트라마이신(mithramycin) 및 아미노글루테티마이드(aminoglutethimide)를 포함하나, 이에 제한되는 것은 아니다.
화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체
또한 본 발명은 대상체(subject)에서 CDK4/6 키나아제에 의해 매개되는 암-관련 질환의 치료 및/또는 예방을 위한 약제의 제조에 있어서, 상기 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체의 용도를 제공한다.
바람직한 실시예에 있어서, 상기 암-관련 질환은 뇌종양, 폐암, 편평상피암(squamous carcinoma), 방광상피암(bladder carcinoma), 위암, 난소암, 복막암, 췌장암, 유방암, 두경부암(head and neck cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁내막암, 직장암, 간암, 신장암, 식도선암(esophageal adenocarcinoma), 식도 편평상피암(esophageal squamous cancer), 전립선암, 여성 생식관 암, 상피내암(cancer in situ), 림프종, 신경섬유종, 갑상선암, 골암(osteocarcinoma), 피부암, 뇌암, 결장암, 고환암, 위장관 기질종양(gastrointestinal stromal tumor), 전립선신생종(prostate neoplasms), 비만세포종, 다발성 골수종, 흑색종, 교종(glioma) 또는 육종(sarcoma)으로부터 선택된다.
본 발명에 있어서, 상기 대상체 또는 환자는 동물, 바람직하게는 소, 말, 염소, 돼지, 개, 고양이, 설치류, 및 영장류와 같은 포유류이고; 상기 특히 바람직한 대상체는 인간이다.
또한 본 발명은 투여가 필요한 대상체(subject)에, 본 발명 또는 본 발명에 따른 약제학적 조성물의 상기 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 이들의 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체를 치료적 및/또는 예방적으로 효과적인 용량으로 투여하는 단계를 포함하는, CDK4/6 키나아제에 의해 매개되는 암-관련 질환의 치료 및/또는 예방 방법을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 바와 같이, 상기 용어 “효과적인 용량”은 원하는 효과를 달성하거나, 또는 적어도 부분적으로 달성하기에 충분한 용량을 말한다. 예를 들어, 질병(CDK4/6 키나아제에 의해 매개되는 암-관련 질환과 같은)을 예방하기 위해 효과적인 용량은 상기 질병(CDK4/6 키나아제에 의해 매개되는 암-관련 질환과 같은)의 질생을 예방, 억압 또는 지연하기에 충분한 용량을 말한다; 치료적으로 효과적인 용량은 상기 질병을 가진 환자의 질병 및 이의 합병증을 치료하거나 또는 적어도 부분적으로 억압하기에 충분한 용량을 말한다. 예를 들어, 치료적으로 효과적인 용량은 치료될 질병의 중증도(severity), 환자 면역계의 전반적인 상태, 연령, 체중 및 성별과 같은 환자의 일반적인 상태, 약제의 투여경로, 및 병용되는 다른 치료법 등과 같은 것에 의존될 것이다.
상기에서 상세하게 설명한 바와 같이, 본 발명의 화합물 또는 약제학적 조성물은 투여가 필요한 대상체에 어떠한 적합한 형태로 어떠한 적합한 경로로든지 투여될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물 또는 약제학적 조성물은 투여가 필요한 환자에 경구, 비경구, 직장, 또는 폐내 등의 경로로 투여될 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 약제학적 조성물은 타블렛, 캡슐, 알약, 과립, 용액, 현탁액, 시럽, 주사제(주사물, 주사를 위한 멸균 파우더 및 주사를 위한 농축용액), 좌약, 흡입제, 또는 분사제일 수 있다.
또한, 본 발명에 따른 상기 방법은 어떠한 대상체, 바람직하게는 소, 말, 염소, 돼지, 개, 고양이, 설치류, 및 영장류와 같은 포유류에 수행될 수 있고; 상기 특히 바람직한 대상체는 인간이다.
또한, 상기에서 상세하게 설명한 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 방법은, 뇌종양, 폐암, 편평상피암(squamous carcinoma), 방광상피암(bladder carcinoma), 위암, 난소암, 복막암, 췌장암, 유방암, 두경부암(head and neck cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁내막암, 직장암, 간암, 신장암, 식도선암(esophageal adenocarcinoma), 식도 편평상피암(esophageal squamous cancer), 전립선암, 여성 생식관 암, 상피내암(cancer in situ), 림프종, 신경섬유종, 갑상선암, 골암(osteocarcinoma), 피부암, 뇌암, 결장암, 고환암, 위장관 기질종양(gastrointestinal stromal tumor), 전립선신생종(prostate neoplasms), 비만세포종, 다발성 골수종, 흑색종, 교종(glioma) 또는 육종(sarcoma)을 포함하나, 이에 제한되지 않는, 다양한 암-관련 질환의 치료 및/또는 예방에 유용하다.
더욱이, 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 이들의 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체에 더하여, 본 발명에 따른 방법은 1 또는 그 이상의 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제를 대상체에 투여하는 단계를 추가적으로 포함할 수 있다. 다시 말해, 본 발명에 따른 방법에 있어서, 본 발명에 따른 상기 화합물은 1 또는 그 이상의 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제와 병용될 수 있다.
바람직한 일 실시예에 있어서, 상기 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제는 하기로부터 선택된 1 또는 그 이상의 것이다: 메토트렉세이트(methotrexate), 카페시타빈(capecitabine), 겜시타빈(gemcitabine), 독시플루리딘(doxifluridine), 페메트렉스드 다이소듐(pemetrexed disodium), 파조파닙(pazopanib), 이마티닙(imatinib), 엘로티닙(erlotinib), 라파티닙(lapatinib), 게피티닙(gefitinib), 반데타닙(vandetanib), 허셉틴(herceptin), 베바시주맙(bevacizumab), 리툭시맙(rituximab), 트라스투주맙(trastuzumab), 파크리탁셀(paclitaxel), 비노렐빈(vinorelbine), 도세탁셀(docetaxel), 독소루비신(doxorubicin), 히드록시캠토테신(hydroxycamptothecine), 미토마이신(mitomycin), 에피루비신(epirubicin), 피라루비신(pirarubicin), 블레오마이신(bleomycin), 레트로졸(letrozole), 타목시펜(tamoxifen), 풀베스트란트(fulvestrant), 트립토렐린(triptorelin), 플루타마이드(flutamide), 류프로렐린(leuprorelin), 아나스트로졸(anastrozole), 이포스파마이드(ifosfamide), 부술판(busulfan), 시클로포스파마이드(cyclophosphamide), 카르무스틴(carmustine), 니무스틴(nimustine), 세무스틴(semustine), 메크로레타민(mechlorethamine), 멜파란(melphalan), 클로람부실(chlorambucil), 카보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(cisplatin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 로바플라틴(lobaplatin), 토포테칸(topotecan), 캠프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan), 에베롤리무스(everolimus), 시롤리무스(sirolimus), 템시롤리무스(temsirolimus), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 아자티오프린(azathioprine), 액티노마이신 D(Actinomycin D), 다우노루비신(daunorubicin), 아드리아마이신(adriamycin), 미톡산트론(mitoxantrone), 블레오마이신(bleomycin), 미트라마이신(mithramycin) 및 아미노글루테티마이드(aminoglutethimide). 바람직한 실시예에 있어서, 본 발명에 따른 상기 화합물 및 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제는 어떠한 순서로도 투여될 수 있다. 예를 들어, 상기 추가적인 항-종양 약제 및/또는 면역억제제는 본 발명에 따른 화합물의 투여 전, 투여와 동시에, 투여 후에 투여될 수 있다.
또한 본 발명은 세포에서의 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성을 감소 및/또는 억제를 위한 제형의 제조를 위한, 화학식 I’ 또는 화학식 I의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 이들의 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체의 용도를 제공한다. 바람직한 일 실시예에 있어서, 상기 제형은 인 비보또는 인 비트로로 투여된다. 예를 들면, 상기 제형은 대상체의 세포 내에서의 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성을 감소 또는 억제하기 위하여, 대상체(예를 들어, 소, 말, 염소, 돼지, 개, 고양이, 설치류, 및 영장류와 같은 포유류; 예를 들어, 인간)에 투여된다; 또는 상기 제형은 인 비트로 세포 내에서의 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성을 감소 또는 억제시키기 위하여, 인비트로 세포(예를 들어, 세포주 또는 암세포와 같은 대상체에서 유래한 세포)에 투여된다. 바람직한 일 실시예에 있어서, 상기 세포는 뇌종양 세포, 폐암세포, 편평상피암(squamous carcinoma) 세포, 방광상피암(bladder carcinoma) 세포, 위암세포, 난소암세포, 복막암세포, 췌장암세포, 유방암세포, 두경부암(head and neck cancer) 세포, 자궁경부암(cervical cancer) 세포, 자궁내막암세포, 직장암세포, 간암세포, 신장암세포, 식도선암(esophageal adenocarcinoma) 세포, 식도 편평상피암(esophageal squamous cancer) 세포, 전립선암세포, 여성 생식관 암세포, 상피내암(cancer in situ) 세포, 림프종 세포, 신경섬유종 세포, 갑상선암세포, 골암(osteocarcinoma) 세포, 피부암세포, 뇌암세포, 결장암세포, 고환암세포, 위장관 기질종양(gastrointestinal stromal tumor) 세포, 전립선신생종(prostate neoplasms) 세포, 비만세포종 세포, 다발성 골수종 세포, 흑색종 세포, 교종(glioma) 세포 또는 육종(sarcoma) 세포로부터 선택된다.
또한 본 발명은 본 발명에 따른 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체의 효과적인 용량을 세포에 투여하는 단계를 포함하는, 세포의 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성의 감소 또는 억제 방법을 제공한다. 바람직한 일 실시예에 있어서, 상기 방법은 인 비보에서 수행되고, 예를 들어, 상기 세포는 대상체(예를 들어, 소, 말, 염소, 돼지, 개, 고양이, 설치류, 및 영장류와 같은 포유류; 예를 들어, 인간)의 세포이다; 또는 상기 방법은 인 비트로에서 수행되고, 예를 들어, 상기 세포는 인 비트로 세포(예를 들어, 세포주 또는 암세포와 같은 대상체에서 유래한 세포)이다. 바람직한 일 실시예에 있어서, 상기 세포는 뇌종양 세포, 폐암세포, 편평상피암(squamous carcinoma) 세포, 방광상피암(bladder carcinoma) 세포, 위암세포, 난소암세포, 복막암세포, 췌장암세포, 유방암세포, 두경부암(head and neck cancer) 세포, 자궁경부암(cervical cancer) 세포, 자궁내막암세포, 직장암세포, 간암세포, 신장암세포, 식도선암(esophageal adenocarcinoma) 세포, 식도 편평상피암(esophageal squamous cancer) 세포, 전립선암세포, 여성 생식관 암세포, 상피내암(cancer in situ) 세포, 림프종 세포, 신경섬유종 세포, 갑상선암세포, 골암(osteocarcinoma) 세포, 피부암세포, 뇌암세포, 결장암세포, 고환암세포, 위장관 기질종양(gastrointestinal stromal tumor) 세포, 전립선신생종(prostate neoplasms) 세포, 비만세포종 세포, 다발성 골수종 세포, 흑색종 세포, 교종(glioma) 세포 또는 육종(sarcoma) 세포로부터 선택된다.
또한 본 발명은 본 발명에 따른 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 에스테르, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체, 및 선택적으로 사용설명을 포함하는, 세포 내에서 CDK4 및/또는 CDK6 키나아제 활성을 감소 또는 억제하는 키트를 제공한다.
본 발명을 실시하기 위한 구체적인 실시예
본 발명은 하기의 실시예에 의하여 더 설명되지만, 이에 제한되지 않는다. 본 발명의 교시 내용에 근거하여, 관련분야의 당업자는 본 발명의 기본적인 착상 및 범위를 벗어나지 않고 다양한 변형 및 개선이 가능하다.
실험(Experiments)
본 발명에 따른 화합물의 유용한 활성 및 유익한 기술적 효과를 나타내기 위하여, 본 발명에 따른 화합물의 일부에 대하여 실험예가 제공된다.
실험예 1: 본 발명에 따른 화합물의 인 비트로 효소-억제 활성 실험
실험군 화합물: 본 발명의 화합물 1, 13 및 14, 화학명, 구조 및 이들의 제조방법은 이들의 제조예에서 찾을 수 있다.
대조군 제제: LY2835219, 이들의 구조는 배경기술에서 찾을 수 있고, 발명자에 의해 제조되었다(상기 제조방법에 관한 특허 CN102264725A를 참조 바랍니다).
하기의 실험에서 사용되는 축약어가 대표하는 의미는 하기에 서술된다.
실험방법 : 칼리퍼 모빌리티 쉬프트법(Caliper Mobility Shift method)에 의한 CDK4/6 키나아제 억제 활성의 측정
1. 키나아제용 1-배 완충액의 제조
1) CDK4 키나아제용 1-배 완충액의 제조
1000 mM HEPES (pH 7.5) 포함 저장용액(stock solution) 800 μL, 및 10% Triton X-100 포함 저장용액 40 μL를 초순수 정제수 39160 μL에 첨가하고, 최종 혼합물을 균질하게 혼합하였다.
2) CDK6 키나아제용 1-배 완충액의 제조
1000 mM HEPES (pH 7.5) 포함 저장용액 50 mL 및 30% Brij-35 포함 저장용액 50 μL를 초순수 정제수 949.95 mL에 첨가하고, 최종 혼합물을 균질하게 혼합하였다.
2. 반응정지액(Stop solution)의 제조
4% 코팅시약 3(Coating Reagent #3, 칼리퍼 디바이스에 사용되는 12-시퍼 칩(12-sipper chip)과 함께 제공됨)을 포함하는 저장용액 25 mL, 1000 mM HEPES (pH 7.5) 포함 저장용액 50 mL, 0.5 M EDTA를 포함하는 저장용액 50 mL, 및 30% Brij-35 포함 저장용액 0.25 mL를 초순수 정제수 374.75 mL에 첨가하고, 최종혼합물을 균질하게 혼합하였다.
3. 2.5-배 키나아제 용액의 제조
1) 2.5-배 CDK4/D3 키나아제 용액의 제조
CDK4/D3 효소용액(enzyme solution) 7 μL, 및 1M DTT를 포함하는 저장용액 9 μL를 1-배 CDK4 키나아제 완충제 1784 μL에 첨가하고, 최종 혼합물을 균질하게 혼합하였다.
2) 2.5-배 CDK6/D3 키나아제 용액의 제조
CDK6/D3 효소용액(enzyme solution) 18 μL, 및 1M DTT를 포함하는 저장용액 14 μL를 1-배 CDK6 키나아제 완충제 2768 μL에 첨가하고, 최종 혼합물을 균질하게 혼합하였다.
4. 2.5-배 폴리펩티드 용액의 제조
1) 2.5-배 CDK4/D3 폴리펩티드 용액의 제조
100 mM ATP를 포함하는 저장용액 10 μL, 1M MgCl2을 포함하는 저장용액 45 μL 및 FAM으로 표지된 폴리펩티드 8(FAM-tagged polypeptide 8) 45 μL을 1-배 CDK4 키나아제 완충액 1700 μL에 첨가하고, 최종혼합물을 균질하게 혼합하였다.
2) 2.5-배 CDK6/D3 폴리펩티드 용액의 제조
100 mM ATP를 포함하는 저장용액 23 μL, 1M MgCl2을 포함하는 저장용액 75 μL 및 FAM으로 표지된 폴리펩티드 8(FAM-tagged polypeptide 8) 75 μL을 1-배 CDK6 키나아제 완충액 2827 μL에 첨가하고, 최종혼합물을 균질하게 혼합하였다.
5. 5-배 실험화합물 용액의 제조
10 mM 의 실험화합물을 포함하는 DMSO 용액을 DMSO로 희석하여, 50 μM의 실험화합물을 포함하는 용액(저장용액으로 사용되었음)을 만들었다. 상기 저장용액은 DMSO로 4-배로 단계별 희석되어 각각 12.5 μM, 3.125 μM, 0.78 μM, 0.195 μM, 0.0488 μM, 12.2 nM, 3 nM, 0.76 nM, and 0.19 nM 의 실험화합물을 포함하는 용액을 제조하였고, 이들 각각은 1-배 키나아제 완충액으로 10-배 희석되어 5-배 화합물 용액을 제조하였다.
6. CDK4/6 효소적 반응
1) 5-배 실험화합물 용액 5 μL 및 2.5-배 키나아제 용액 10 μL를 384-웰플레이트에 상응하는 웰에 첨가하고, 실온에서 10분간 인큐베이션 하였다.
2) 2.5-배 폴리펩티드 용액 10 μL을 상응하는 웰에 첨가하여 효소적 반응을 시작하였고, 28˚C에서 5 시간동안 인큐베이션 하였다.
7. 효소적 분석(enzymatic assay)
25 μL의 반응정지액을 상응하는 웰에 첨가하여 반응을 정지시켰다.
8. 결과는 칼리퍼 디바이스로 리딩하였고, 하기의 공식에 의해 억제율을 계산하였으며, IC50 값을 얻기 위하여 GraphPad5.0 소프트웨어에 의한 곡선맞춤(curve fitting)을 수행하였다.
억제율 = (최대값-샘플값)/(최대값-최소값) x 100
상기 식에서, 최대값: 실험화합물을 첨가하지 않은 양성 대조군; 최소값: 효소를 첨가하지 않은 음성 대조군이다.
실험 결과는 표 1에 나타나 있다:
표 1: 본 발명에 따른 화합물의 인비트로 효소-억제활성
실험의 결론: 본 발명에 따른 상기 화합물들은 CDK4 또는 CDK6 키나아제에 대한 억제활성이 있으며, 그 억제활성은 대조군 약제와 비교될 만함이 표 1에 나타나 있다. 즉, 충분한 억제활성을 나타낸다.
실험예 2: 본 발명에 따른 화합물의 인 비트로 세포-억제 활성에 대한 분석
실험화합물: 본 발명의 화합물, 화학명, 화학식 및 이들의 제조방법은 제조예에서 찾을 수 있다.
대조군 제제: LY2835219, 이들의 구조는 배경기술에서 찾을 수 있고, 발명자에 의해 제조되었다(상기 제조방법에 관한 특허 CN102264725A를 참조 바랍니다).
하기의 실험에서 사용되는 축약어가 대표하는 의미는 하기에 서술된다.
실험방법: 세포 증식 분석은 BrdU 법(BrdU 세포증식분석 키트, Cell Signaling Technology Company).에 의해 수행되었다.
1. 시약 및 화합물의 제조
1-배 워싱 용액(liquor)의 제조
저장 용액으로서 20-배 워싱 용액을 초순수 정제수에 의해 희석하여 1-배 용액을 제조하였다.
1-배 검출항체 용액의 제조:
100-배 BrdU 검출 항체 저장용액을 검출항체 희석액으로 희석하여 10배 검출항체 용액을 제조하였다.
1-배 HRP-표지된 2차 항체 용액의 제조
HRP-표지된 항-마우스 iIgG 항체의 100-배 저장용액을 HRP-표지된 항체 희석액에 희석하여 1-배 HRP-표지된 2차 항체 용액을 제조하였다.
10-배 BrdU 용액:
1000-배 BrdU 저장용액을 상응하는 배지로 희석하여 10-배 BrdU 용액을 제조하였다.
실험화합물의 제조
실험화합물 저장용액의 제조: 실험화합물의 10 mM 저장 용액을 100% DMSO를 이용하여 제조하였다.
실험화합물의 농도구배 희석용액의 제조: 10 mM 실험화합물을 포함하는 저장용액을 DMSO로 4-배 단계 희석하여 각각 2.5 mM, 625 μM, 156 μM, 39 μM, 9.8 μM, 및 2.5 μM의 실험화합물을 포함하는 용액을 제조하였다. DMSO로 희석된 화합물 2 μL을 10% FBS 포함 배양 배지 198 μL에 첨가하여 10-배 실험화합물을 제조하였고, 상기 실험화합물의 최대농도는 100 μM이며, 상기 DMSO의 농도는 1%이고, 7개의 농도 구배가 있었다.
배양 배지의 제조
MDA-MB-435S 배지: L-15 + 10% FBS + 0.01 mg/mL 인슐린
MCF-7 배지: DMEM + 10% FBS + 0.01 mg/mL 인슐린
U87MG 배지: MEM + 10% FBS
2. 실험 단계
(1) 80% 콘플루언스로 자란 세포(지수적 성장기에 있는)를 판크레아틴(pancreatin)으로 소화시키고, 원심분리를 하여 세포를 수거하였다. MDA-MB-435S 및 U87MG 세포를 FBS-미포함 배양 배지에 재부유시켜, 계수하고, 96-웰 플레이트에 분주하였다; MDA-MB-435S 세포를 3000 세포/웰/81μL로 분주하고; U87MG 세포를 4000 세포/웰/81μL로 분주하였다. MCF-7 세포는 1% FBS 포함 배야애지에 재부유시켜, 계수하고, 96-웰 플레이트에 4000 세포/웰/81μL로 분주하였다. 플레이트는 37℃ 세포 배양기 내에 위치시켰다.
(2) 24시간 배양 후, MDA-MB-435S 세포 및 U87MG 세포의 각 웰에 FBS(9 μL)를 첨가하였고, MCF-7 세포의 각 웰에는 FBS 8 μL를 첨가하여 최종 FBS 농도를 10 %가 되게 하였다.
(3) 각 웰에 다른 농도의 10-배 실험화합물(10 μL)을 첨가하여, 실험 화합물의 최종농도가 각각 10 μM, 2.5 μM, 625 nM, 156 nM, 39 nM, 9.8 nM, 및 2.5 nM가 되게 하였고, 그룹별로 3개의 웰이 반복되도록 하였으며, 세포들을 37℃에서 72시간 동안 배양하였다.
용매 대조군(solvent control): 0.1% DMSO
빈 대조군(blank control): 세포 첨가하지 않은 배양 배지
정상 세포 대조군(normal cell control): 아무런 처리하지 않은 정상 세포
(4) 각 웰에 10-배 BrdU 용액(10 μL)을 첨가하고, 4시간 동안 배양 후 배양배지를 버렸다.
(5) 각 웰에 고정/변성 용액(10 μL)을 첨가하고, 30분 동안 실온에서 배양 후 용액을 버렸다.
(6) 각 웰에 1-배 검출항체용액(100 μL)을 첨가하고, 1시간 동안 배양한 후 용액을 버린 다음, 각 웰을 웰당 200 μL의 1-배 워싱용액으로 3회 워싱하였다.
(7) 각 웰에 1-배 HRP-표지된 2차 항체 용액 (100 μL)을 첨가하고, 30분간 실온에서 배양한 뒤 상기용액을 버린 다음, 각 웰을 웰당 200 μL의 1-배 워싱용액으로 3회 워싱하였다.
(8) 각 웰에 TMB 기질 용액(100 μL)를 첨가하고, 실온에서 30분간 배양을 수행하였다.
(9) 각 웰에 반응정지용액 (100 μL)를 첨가하고, ELISA 리더기로 450 ㅜㅡ 에서 OD 값을 측정하였다.
3. 데이터 처리
1) 세포 생존율 (%) = OD실험화합물-OD빈 대조군)/(OD정상세포대조군-OD빈 대조군)x100%,
OD빈 대조군: 빈 대조군 값; OD정상세포대조군: 정상세포대조군 값;
2) 곡선 및 IC50 값을 얻기 위하여 데이터는 GraphPad5.0 소프트웨어에 의해 처리되었다.
실험 결과는 표 2에 나타나 있다:
표 2: 본 발명에 따른 화합물의 인 비트로 세포-억제 활성
실험의 결론: 표 2에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따른 상기 화합물들은 인 비트로 세포-억제활성이 있으며, 그 억제활성은 LY2835219에 비해 우월함이 명백하다.
실험예 3: 본 발명에 따른 화합물의 누드 마우스에서의 약동학적 분석
실험화합물: 본 발명자들에 의해 제조된 본 발명의 화합물의 일부; 화학명, 및 이들의 제조방법은 제조예에서 찾아질 수 있다.
대조군 제제: LY2835219, 발명자에 의해 제조되었고(상기 제조방법에 관한 특허 CN102264725A를 참조 바랍니다), 이들의 구조는 배경기술에서 찾을 수 있다.
실험동물: 암컷 누드 마우스(BALB/c); 대조군 제제: 각 시점에 투여 경로에 따라 마우스 3마리에 투여함, 체중: 22-25g/마우스; 화합물 1: 각 시점마다 투여 경로당 마우스 3마리에 투여함; 화합물 6-1: 실험화합물 당 투여경로 당 마우스 6마리, 체중: 18-26 g/마우스.
실험화합물 용액의 제조
빈 용매 1의 제조
MC(methylcellulose) (500 mg) 및 SDS(sodium dodecylsulfate) (100 mg)을 계량하여 균질하게 혼합하고, 물(100 mL)을 첨가하였다; 최종 혼합물을 볼텍싱(voltexing) 하에서 마쇄 및 혼합하여 0.5% MC+0.1% SDS 용액을 수득하였다.
빈 용매 2의 제조
pH 5.0 완충액의 제조: 인산 이수화물 이수소 나트륨(sodium dihydrogen phosphatedihydrate) (1.56 g)을 계량하고, 정제수에 섞어 50 mL의 용액을 제조하고, 수산화 나트륨 용액을 이용하여 pH를 5.0으로 조절하였다.
빈 용매 3의 제조
0.1% Tween 80+2% HPC: HPC (hydroxypropyl cellulose) (20 g)을 계량하고, 정제수 (1000 mL)에 교반하면서 천천히 넣었다; Tween 80 (1 mL)를 첨가하고, 최종 혼합물이 맑은 용액이 될 때까지 교반하였다.
대조군 제제:
① 대조군 제제(12.18 mg)을 계량하고, 일반 생리식염수 (9.529 mL)에 첨가하였다; 최종 혼합물을 초음파 용해시키고, 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하여 1 mg/mL 의 무색 투명한 용액 1을 제조하였다. 제조된 용액을 누드 마우스의 IV 투여를 위한 대조군 제제 용액 1로 사용하였다.
② 대조군 제제 (13.12 mg)을 계량하고, 빈 용매 1 (10.265 mL)에 첨가하였다; 최종 혼합물을 마쇄 및 균질하게 부유시켜 1 mg/mL의 균질한 용액 2를 제조하였다. 제조된 용액을 누드 마우스의 PO 투여를 위한 대조군 제제 용액 2로 사용하였다.
화합물 1:
① 화합물 1 (5.79 mg)을 계량하고, DMF (N,N-dimethylformamide) (0.556 mL)에 첨가하였다; 최종 혼합물을 초음파 용해시키고; 일반 생리식염수 (4.999 mL)에 첨가한 다음, 최종 혼합물을 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하여 맑은 용액을 수득하였다. 수득한 용액을 누드 마우스의 IV 투여를 위한 화합물 1의 용액 1로 사용하였다.
② 화합물 1 (12.20 mg)를 계량하고, 빈 용매 1 (11.706 mL)을 첨가하였다; 최종 혼합물을 마쇄하고, 균질하게 부유시켜 1 mg/mL의 균질한 용액을 제조하였다. 제조된 용액은 누드 마우스의 PO투여를 위한 화합물 1의 용액 1으로 사용되었다.
③ 화합물 1 (84.63 mg)를 계량하고, 빈 용매 1 (8.120 mL)을 첨가하였다; 최종혼합물을 마쇄하고, 균질하게 부유시켜 10 mg/mL의 균질한 용액을 제조하였다. 제조된 용액을 누드 마우스이 PO 투여를 위한 화합물 1의 용액 3으로 사용하였다.
화합물 6-1:
① 화합물 6-1 (2.01 mg)을 계량하고, 빈 용매 2 (3.928 mL)에 첨가하였다; 최종 혼합물을 초음파 용해하고, 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하여 0.5 mg/mL의 균질한 용액을 제조하였다. 제조된 용액을 누드 마우스의 IV 투여를 위한 화하물 6-1의 용액 1로 사용하였다;
② 화합물 6-1 (5.11 mg)을 계량하고, 빈 용매 3 (4.951 mL)에 첨가하였다; 최종 혼합물을 조직 마쇄기에서 1000 r/min의 속도로 균질하게 마쇄하고; 마쇄한 액체를 원심분리 튜브에 옮겨 담은 다음, 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하여 1 mg/mL의 균질한 용액을 제조하였다. 제조된 용액을 누드 마우스에 10 mg/kg의 농도로 PO 투여를 위한 화합물 6-1의 용액 2로 사용하였다;
③ 화합물 6-1 (51.10 mg)을 계량하고, 빈 용매 3 (1.496 mL)에 첨가하였다; 최종 혼합물을 조직 마쇄기에서 1000 r/min의 속도로 균질하게 마쇄하고; 마쇄한 액체를 원심분리 튜브에 옮겨 담은 다음, 상기 용매(1 mL)를 첨가하여 조직마쇄기를 워싱하였다; 워싱 후 상기 용매를 원심분리 튜브에 옮겨 담았다; 최종 혼합물을 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하여 20 mg/mL의 균질한 용액을 제조하였다. 제조된 용액을 누드 마우스에 200 mg/kg의 농도로 PO 투여를 위한 화합물 6-1의 용액 3으로 사용하였다.
실험방법
투여: 실험화합물을 하기의 표에 나열한 방법으로 투여하였다.
채혈:
채혈 시점:
대조군 제제/화합물 1, IV 투여군: 투여 전, 투여 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 및 30 시간 후 ; PO 투여군(10 mg/kg): 투여 전, 투여 0.167, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 및 30 시간 후.
화합물 1, PO 투여군(100 mg/kg): 투여 0.167, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 30, 및 48 시간 후.
화합물 6-1, IV 투여군(2.5 mg/kg) 및 PO 투여군(10 mg/kg): 투여 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8 및 24 시간 후; 화합물 6-1, PO 투여군 (100 mg/kg): 투여 0.083, 0.25, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 30, 48 시간 후.
대조군 제제/화합물 1: 안내 눈구석(intraocular canthus)에서 전혈 300 μL를 각 시점마다 채혈하고 8000 r/min에서 6 분간 고속으로 원심분리하여 혈장을 분리한다; 혈장을 80℃ 냉동고에 보관한다. 화합물 6-1: 안내 눈구석(intraocular canthus)에서 전혈 60 μL를 각 시점마다 채혈하고 항응고제 K2EDTA를 포함하는 항응고 튜브에 넣고; 혈액 샘플을 8000 r/min에서 6 분간 원심분리하여 혈장 샘플을 수득하였다.
혈장 샘플 분석
대조군 제제 및 화합물 1의 혈장 샘플을 단백질 침전을 통해 분석하였다: 200 μL의 내부표준용액(500 ng/mL 와파린 포함 아세토니트릴 용액)을 혈장 샘플에 첨가하였다; 최종혼합물을 1500 r/min에서 3 분간 볼텍스(voltex) 하고, 13000 r/m에서 5 분간 원심분리하였다; 100 μL의 상층액에 400 μL의 물을 첨가하였다; 최종혼합물을 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합한 다음 LC-MS/MS로 분석하였다.
화합물 6-1의 혈장 샘프을 단백질 침전을 통해 분석하였다: 적당한 양의 혈장에 주어진 부피의 내부 표준용액을 첨가하였다; 최종 혼합물을 볼텍스 및 원심분리하였다; 상층액을 주어진 부피의 물을 첨가하여 희석하였다; 최종 혼합물을 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합한 다음 LC-MS/MS로 분석하였다.
표 3-1: 누드 마우스에서 약물동력학(PK) 평가 결과(IV)
표 3-2: 누드 마우스에서 약물동력학(PK) 평가 결과(PO)
AUClast는 투여 0→t 시간 동안 시간-농도 곡선 아래의 면적을 의미한다.
CL은 클리어런스(clearance)를 의미한다.
Vss는 분포 평형상태의 겉보기 부피를 의미한다.
Tmax는 혈중 최고 농도를 나나태는 시점을 의미한다.
Cmax는 혈중 최고 농도를 의미한다.
F% 는 절대적 생체이용율을 의미한다.
표 3-1 및 표 3-2에서 나타낸 실험예에서 보여진 바와 같이, 같은 용량의 대조군 제제와 비교하여, 본 발명에 따른 화합물은 우수한 약물동력학적 특성을 가지며, 대조군 제제에 비하여 특히 노출 용량 및 생체이용률에 있어서 우월하고; 고 농도 투여군은 100%에 가까운 생체이용률을 가진다.
실험예 4: 본 발명에 따른 화합물의 랫트에서의 선형 약동학적 분석
실험 화합물: 본 발명의 발명자에 의해 제조된 본 발명의 화합물 1; 이의 화학명 및 제조방법은 제조예에 기재되어 있다.
대조군제제: LY2835219, 본 발명의 발명자에 의해 제조됨(제조 방법에 관하여는 특허 CN102264725A를 참조하기 바람); 이의 화학식은 배경 기술에 기재되어 있다.
실험동물: 수컷 SD 랫트 3두, 랫트 3두/투여량/실험화합물, 체중: 200-240g/랫트.
실험화합물 용액의 제조
pH 4.0 완충액 용매의 제조: 물에 시트르산(21g)을 녹이고, 물을 첨가하여 최종 부피 1000 mL의 용액 A를 얻어 추후 사용을 위해 저장하였다; 물에 인산수소이나트륨(disodium hydrogen phosphate) (71.63 g)을 녹이고, 물을 첨가하여 최종 부피 1000 mL의 용액 B를 얻어 추후 사용을 위해 저장하였다; 상기 용액 A(614.5 mL)를 상기 용액 B(385.5 mL)을 혼합하고 균질하게 쉐이킹하여 pH 4.0 완충액 용매를 제조하였다.
대조군제제:
① 1.5 mg/mL 농도의 대조군제제 LY2835219의 용액 1을 제조하기 위하여 pH 4.0 완충액 용매를 용매로 사용하였다;
② 4.5 mg/mL 농도의 대조군제제 LY2835219의 용액 2을 제조하기 위하여 pH 4.0 완충액 용매를 용매로 사용하였다;
③ 13.5 mg/mL 농도의 대조군제제 LY2835219의 용액 3을 제조하기 위하여 pH 4.0 완충액 용매를 용매로 사용하였다;
대조군제제 LY2835219를 15 mg/kg, 45 mg/kg 및 135mg/kg의 용량으로 액체로 경구투여하기 위하여 상기 용액 1-3을 사용하였다.
화합물 1:
① 13.5 mg/mL 농도의 화합물 1의 용액 4을 제조하기 위하여 pH 4.0 완충액 용매를 용매로 사용하였다;
② 상기 균질한 용액 4(4 mL)를 pH 4.0 완충액 용매로 희석하여 4.5 mg/mL 농도의 화합물 1의 용액 5을 제조하였다;
③ 상기 균질한 용액 4(1.4 mL)를 pH 4.0 완충액 용매로 희석하여 1.5 mg/mL 농도의 화합물 1의 용액 5을 제조하였다;
화합물 1을 15 mg/kg, 45 mg/kg 및 135mg/kg의 용량으로 액체로 경구투여하기 위하여 상기 용액 4-6을 사용하였다.
실험 방법
투여:
실험화합물은 하기의 표에 나열된 방법에 의하여 투여되었다:
채혈
대조군제제:
채혈 시점:
PO 투여군(15 mg/kg): 투여 0.167, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 30, 및 48 시간 후. PO 투여군(45 mg/kg): 투여 0.167, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 30, 48, 56, 및 72 시간 후. PO 투여군(135 mg/kg): 투여 0.167, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 30, 48, 56, 72, 96, 및 102 시간 후.
화합물 1:
채혈 시점:
PO 투여군(15 mg/kg): 투여 0.167, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 30, 및 48 시간 후. PO 투여군(45 mg/kg): 투여 0.167, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 30, 및 48 시간. PO 투여군(135 mg/kg): 투여 0.167, 0.5, 1, 2, 4, 6, 8, 24, 30, 48, 56, 72, 및 96 시간 후.
각 시점마다 꼬리정맥에서 전혈 100 μL를 채혈하고, K2EDTA를 포함하는 항응고 튜브에 넣고, 고속 원심분리기에서 8000 r/min으로 6 분간 원심분리하여 혈장을 분리하였다; 분리한 혈장을 80℃ 냉동고에 보관하였다.
혈장 샘플 분석
대조군 제제 및 화합물 1의 혈장 샘플을 단백질 침전을 통해 분석하였다: 30 μL의 혈장에, 200 μL의 내부표준용액(500 ng/mL PD0332991 포함 아세토니트릴 용액, 화학식은 
이고, 특허 CN101001857A를 참조하여 제조되었음)을 첨가하였다; 최종혼합물을 1500 r/min에서 10 분간 볼텍스(voltex) 하고, 4000 r/m에서 20 분간 원심분리하였다; 100 μL의 상층액에 100 μL의 물을 첨가하였다; 최종혼합물을 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합한 다음 LC-MS/MS로 분석하였다.
표 4-1: 랫트에서 대조군제제(PO)의 약물동력학(PK) 평가 결과
표 4-2: 랫트에서 화합물 1(PO)의 약물동력학(PK) 평가 결과
Tmax는 혈중 최고 농도를 나나태는 시점을 의미한다.
Cmax는 혈중 최고 농도를 의미한다.
AUClast는 투여 0→t 시간 동안 시간-농도 곡선 아래의 면적을 의미한다.
표 4-1 및 표 4-2에서 나타낸 실험예에서 보여진 바와 같이, 같은 용량의 대조군 제제와 비교하여, 본 발명에 따른 화합물은 Cmax와 AUClast에 관하여 우월하며; 용량이 증가함에 따라, AUClast는 선형성을 띄며 증가한다; 본 발명의 화합물 1은 우수한 선형 약물동력학적 특성을 가진다.
실험예
5: 인간 결장암 세포
Colo
-205를 주입한 피하 종양 모델
BALB
/c 누드 마우스에서 본 발명에 따른 화합물의 약력학(pharmacodynamics) 및 약학적 안전성의 평가
실험화합물: 본 발명의 화합물 1, 화학명, 및 제조방법은 제조예에 기재되어 있다.
대조군제제: LY2835219, 이의 화학식은 배경 기술에 기재되어 있다(제조 방법에 관하여는 특허 CN102264725A를 참조하기 바람).
하기의 실험에서 사용되는 축약어가 대표하는 의미는 하기에 서술된다.
실험동물: 암컷 누드마우스(BALB/c), 8두/용량 그룹/실험화합물, 체중: 19-27 g/마우스.
실험화합물 용액의 제조
빈 용매의 제조
0.5% MC 및 0.1% SDS를 포함하는 빈 용매의 제조: MC(2 g)을 계량하고, 초순수 정제수(350 mL)를 첨가하여 용해시켰다; SDS(00.4 g)을 첨가하고 부피를 400 mL로 맞추었다. 잘 혼합한 후, 세균을 제거하기 위하여 최종 혼합물을 0.22 μm 필터에 여과하고, 소분하여 4 ℃에 저장하여, 빈 용매를 수득하였다.
대조군제제(32 mg)을 계량하고, 용매(2.5 mL)를 첨가하였다; 최종 혼합물을 볼텍싱하에서 균질하게 혼합하여 대조군제제를 10 mg/mL의 농도로 포함하는 균질한 용액 1을 수득하였다; 균질한 용액 1(0.5 mL)에 용매(1.5 mL)를 첨가하여 대조군제제를 2.5 mg/mL의 농도로 포함하는 균질한 용액 2를 수득하였다.
화합물 1 (6.3 mg)을 계량하고, 용매(2.4 mL)를 첨가하였다; 최종 혼합물을 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하여 화합물 1을 2.5 mg/mL의 농도로 포함하는 균질한 용액 1을 수득하였다; 화합물 1(12.6 mg)을 계량하고, 용매(2.4 mL)를 첨가하였다; 최종화합물을 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하여 화합물 1을 5 mg/mL의 농도로 포함하는 균질한 용액 2를 수득하였다; 화합물 1(25.5 mg)을 계량하고, 용매(2.4 mL)를 첨가하였다; 최종화합물을 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하여 화합물 1을 10 mg/mL의 농도로 포함하는 균질한 용액 3를 수득하였다.
상기 대조군제제 및 화합물 1의 균질한 용액은 매일 투여직전에 제조하여 암소에서 보관하였다.
실험방법
세포 배양:
COLO205 암세포는 비동화한 10% FBS, 100 U/mL 스트렙토마이신 및 2 mM 글루타민을 포함한 RPMI-1640 배지에서, 37℃ 5% 이산화탄소 인큐베이터에서 배양하였다. 세포배양의 최초 농도는 5×105 세포/mL 였고, 3-4일마다 다른 배양용기로 계대하였다. in vivo 종양 접종(seeding)에는 지수성장기에 있는 종양 세포들이 사용되었다.
세포 접종(seeding) 및 그룹핑:
PBS에 부유된 COLO205 종양 세포를 실험 동물의 우측 측부 흉곽에 1×107 세포/0.1 mL로 접종하고, 종양이 800 mm3 에서 1000 mm3 부피까지 자라면 희생하였다; 무균조건 하에서 종양 표면을 얇게 벗겨 괴사 조직을 제거하였다; 잘 자란 종양 조직을 선택하였다; 상기 종양세포를 분리하여 일차배양 및 증식시킨 다음, 동물에 피하 접종하였다. 상기 종양세포들을 이 방법으로 마우스에서 2대 동안 계대하였고, 일차배양 세포는 실험동물에 우측 측부 흉곽에 동물당 5×106 세포/0.1 mL로 접종하였다. 종양이 약 100 mm3 의 부피까지 자란 때 그룹핑을 하고 투여하였다. 경구 투여를 위해, 투여 부피는 동물의 체중을 기준으로 0.1 mL/10 g으로 이었다.
투여:
실험화합물은 하기의 표에 나열된 방법으로 투여되었다:
채혈: 혈액은 안내 눈구석(intraocular canthus)에서 수집되었다. 대조군제제 및 화합물 1의 최종 투여(22일째) 후, 혈액/조양을 같은 시점에 수집하였고, 이때 각 투여용량 그룹별 8마리의 누드마우스를 A그룹과 B그룹으로 나누었다.
A 그룹 (1-4번): 혈액은 15분, 1시간 2시간에 수집되었고, 마우스는 2시간 째 채혈 후에 희생되었다.
B 그룹(5-8번): 혈액은 4시간, 8시간, 24시간에 수집되었고, 마우스는 24시간째 채혈 후에 희생되었다;
각 시점에 100 μL 의 전혈을 수집하여 K2EDTA, 항응고제를 포함하는 튜브에 넣은 다음 4500 r/min 의 속도로 4℃에서 고속원심분리기로 5분간 원심분리하여 분리된 혈장을 얻었다; 혈장은 80℃ 냉동고에 저장하였다.
혈장샘플 분석
대조군제제 및 화합물 1의 혈장샘플을 단백질 침전을 통해 분석하였다. 50 μL 의 혈장에, 150 μL 의 내부표준용액(50 ng/mL 덱사메타손을 포함하는 아세토니트릴 용액)을 첨가하였다; 최종 혼합물은 1500 r/min 속도로 3분간 볼텍싱하고, 4000 r/min의 속도로 20분간 원심분리하였다; 100 μL 상층액에, 100 μL 물을 첨가하였다; 최종혼합물은 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하고, LC-MS/MS로 분석하였다.
표 5-1: 누드마우스에서 대조군제제의 약동학 평가 결과
표 5-2: 누드마우스에서 화합물 1의 약동학 평가 결과
AUClast는 투여 0→t 시간 동안 시간-농도 곡선 아래의 면적을 의미한다.
Tmax는 혈중 최고 농도를 나나태는 시점을 의미한다.
Cmax는 혈중 최고 농도를 의미한다.
표 5-1 및 표 5-2에서 나타낸 실험결과에서 보여진 바와 같이, 대조군 제제와 비교하여, 본 발명에 따른 화합물 1은 우수한 약동학적 특성을 가진다; 화합물 1은 노출용량 AUClast 및 Cmax에 관하여 같은 용량의 대조군제제보다 우월하다.
실험예
6: 본 발명에 따른 화합물들의 혈뇌장벽 투과성 평가를 위한
랫트에서의
in
vivo
분석
실험화합물: 본 발명의 화합물 1, 본 발명의 발명자에 의해 제조됨; 그의 화학명, 제조방법은 제조예에서 찾을 수 있다.
대조군제제: LY2835219, 이의 화학식은 배경기술에서 찾을 수 있고, 본 발명의 발명자에 의해 제조됨(제조방법에 관하여는 특허 CN102264725A를 참조하기 바람).
실험동물: 수컷 SD 랫트, 3두/실험화합물/시점(time point), 체중: 250-300 g/랫트
실험화합물 용액의 제조
용매의 제조(0.5% MC)+0.1% SDS): MC(500 mg) 및 SDS(100 mg)를 균질하게 혼합하고, 물(100 mL)를 첨가하였다; 최종 혼합물을 분쇄하고 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하였다.
대조군제제(108.22 mg)을 계량하고, 용매(36.07 mL)를 첨가하였다; 최종 혼합물을 분쇄하고 균질하게 부유시켜서 균질한 용액 1을 수득하였다. 상기 용액은 대조군제제 LY2835219를 랫트에 경구투여하기 위한 액체로 사용되었다.
화합물 1(111.52 mg)을 계량하고, 용매(35.39 mL)를 첨가하였다; 최종 혼합물을 분쇄하고 균질하게 부유시켜서 균질한 용액 2를 수득하였다. 상기 용액은 화합물 1을 랫트에 경구투여하기 위한 액체로 사용되었다.
실험방법
투여:
실험화합물은 하기의 표에 나열된 방법으로 투여되었다:
수집방법:
대조군제제 및 화합물 1의 분리된 경구투여 후, 혈액을 2시간, 4시간, 24시간, 및 48시간에 심장천자하여 수거하였다; 약 8 ml의 전혈을 수거하였고, K2EDTA 항응고제를 포함하는 원심분리 튜브에 위치시켰다; 뇌척수액 및 뇌조직을 동시에 수집하였고, 각 시점에 랫트 3마리씩 사용하였다. 채혈된 전혈은 3000 r/min의 속도로 4 ℃에서 고속 원심분리기로 10분간 원심분리하여 혈장을 분리하였다; 분리된 혈장은 80℃ 냉동고에 저장하였다. 샘플 수집 후, 대조군제제 및 화합물 1의 혈장, 뇌조직, 및 뇌척수액 내 농도를 각각 측정하였다.
혈장 샘플 분석
대조군 제제 및 화합물 1의 혈장 샘플은 단백질 침전을 통하여 분석하였다: 실험 샘플을 냉동고(80℃)에서 꺼내어, 실온에서 해동시키고, 3분간 볼텍싱 하였다; 30 μL 혈장에, 200 μL의 내부표준용액(25 ng/mL PD0332991를 포함하는 아세토니트릴 용액)을 첨가하였다; 최종혼합물을 10 분간 1500 r/min의 속도로 볼텍싱하고, 4000 r/min에서 20분간 원심분리하였다; 100 μL의 상층액에, 100 μL의 물을 첨가하였다; 최종혼합물을 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하고, LC-MS/MS으로 분석하였다.
뇌조직 및 뇌척수액 샘플의 분석
대조군제제 및 화합물 1에 관한 뇌조직 및 뇌척수액 샘플을 단백질 침전을 통하여 분석하였다; 실험 샘플을 냉동고(80℃)에서 꺼내어, 실온에서 해동시키고, 3분간 볼텍싱하였다; 20 μL의 균질화한 뇌조직 샘플에, 200 μL의 내부표준용액(40 ng/mL의 덱스트로메톨판 및 50 ng/mL의 덱스트로판을 포함하는 메탄올과 물의 1:1 용액)을 첨가하였다; 최종혼합물을 3분간 1500 r/min의 속도로 볼텍싱하고, 4000 r/min으로 4℃에서 5분간 원심분리하였다; 100 μL의 상층액에, 50 μL의 0.1% 포름산-수용액을 첨가하였다; 최종혼합물을 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하고, LC-MS/MS으로 분석하였다. 뇌척수액 샘플은 상기 균질화한 뇌조직 샘플과 동일한 방법으로 처리하였다.
표 6: 본 발명에 따른 화합물 1의 랫트에서 혈뇌장벽 투과성 평가의 실험 결과
AUClast는 투여 0→t 시간 동안 시간-농도 곡선 아래의 면적을 의미한다.
Tmax는 혈중 최고 농도를 나나태는 시점을 의미한다.
Cmax는 혈중 최고 농도를 의미한다.
표 6에서 나타낸 실험결과에서 보여진 바와 같이, 혈뇌장벽 투과성 평가를 위한 분석에 의하여 본 발명에 따른 화합물들은 대조군 제제와 비교하여, 혈장에서 뇌조직으로 효과적으로 투과할 수 있고, 뇌척수액에서의 노출용량과 관련하여 대조군제제 LY2835219보다 우월하였다.
실험예
7: 인간
뇌교세포
U-
87MG를
접종한
BALB
/c 누드마우스의 피하 종양모델에서 본 발명에 따른 화합물의 약력학 및 약학적 안전성의 평가
실험화합물: 본 발명의 화합물, 본 발명의 발명자에 의해 제조됨; 그의 화학명 및 제조방법은 제조예에서 찾을 수 있다.
대조군제제: LY2835219, 이의 화학식은 배경기술에서 찾을 수 있고, 본 발명의 발명자에 의해 제조됨(제조방법에 관하여는 특허 CN102264725A를 참조하기 바람).
하기의 실험에서 사용되는 축약어가 대표하는 의미는 하기에 서술된다.
실험동물: 암컷 누드마우스(BALB/c), 10두/용량그룹/실험화합물, 체중: 18-22 g/마우스.
실험화합물 용액의 제조
0.5% MC를 포함하는 용매의 제조: 적당한 양의 MC를 주어진 부피의 초순수정제수에 녹였다; 최종혼합물은 균질하게 혼합하여 0.5% mC를 포함하는 용매 1을 수득하였다.
0.5% MC 및 0.1% SDS를 포함하는 용매의 제조: 적당한 양의 MC와 적당한 양의 SDS를 주어진 부피의 초순수정제수에 녹였다; 최종혼합물은 균질하게 혼합하여 0.5% MC 및 0.1% SDS를 포함하는 용매 2를 수득하였다.
대조군제제(508.87 mg) 및 SDS(39.37 mg)을 계량하고, 용매 1(39.7 ml)로 희석하였다; 최종혼합물을 균질하게 분쇄하여 대조군제제를 10.1 mg/mL로 포함하는 균질한 용액 1을 수득하였다; 대조군제제를 포함하는 균질한 용액 1(13.125 mL)을 취하여 용매 2(13.125 mL)를 첨가하였다; 최종혼합물을 균질하게 분쇄하여 대조군제제 5.0 mg/mL 농도의 균질한 용액 2를 수득하였다.
화합물 1(931.77 mg) 및 SDS(45.9 mg)을 계량하고, 용매 1(45.9 ml)로 희석하였다; 최종혼합물을 균질하게 분쇄하여 화합물 1을 20.0 mg/mL로 포함하는 균질한 용액 1을 수득하였다; 화합물 1(20.0 mg/mL)을 포함하는 균질한 용액 1(19.69 mL)을 취하여 용매 2(19.69 mL)를 첨가하였다; 최종혼합물을 균질하게 분쇄하여 화합물 1을 10.0 mg/mL 농도로 포함하는 균질한 용액 2를 수득하였다; 화합물 1(10.0 mg/mL)을 취하여 용매 2(13.125 mL)을 첨가하였다; 최종 혼합물을 균질하게 분쇄하여 화합물 1을 5.0 mg/mL의 농도로 포함하는 균질한 용액 3을 수득하였다.
실험방법
세포 배양:
ATCC에서 얻은 U87MG 세포를 10% FBS를 포함하는 MEM 배지에서 배양하였다; 종래의 방법으로 세포를 EDTA를 포함하는 트립신으로 처리하였다; 세포는 매주 2번씩 계대하였고, 37℃에서 5% 이산화탄소 인큐베이터로 연속적으로 배양하였다.
세포 접종(seeding) 및 그룹핑:
주기성장기에 있는 종양세포를 수집하였다; U87MG 세포를 1:1 비율의 PBS 및 마트리겔(matrigel)로 5x107/mL의 농도로 조정하였다; 0.1 mL의 세포부유액을 1mL 주사기로 각 마우스의 오른쪽 등에 피하주사 접종하였다. 종양 부피를 관찰 및 측정하고, 접종 8일 후 U87MG의 평균 종양 부피는 약 200 mm3 에 달하였다; 상기 종양을 가진 마우스들은 그룹을 나누고 실험화합물을 0.1 mL/체중 10g 당 으로 경구투여하였다.
투여:
실험화합물은 하기 표에 나열된 방법으로 투여되었다:
채혈: 혈액은 안내 눈구석(intraocular canthus)에서 수집되었다. 대조군제제 및 화합물 1의 최종 투여(22일째) 후, 혈액/조양을 같은 시점에 수집하였고, 이때 각 투여용량 그룹별 10마리의 누드마우스를, 1마리는 대기시키고, 나머지 9마리는 3개의 그룹, 즉, A, B, 및 C 그룹으로 나누었다.
A 그룹 (1-3번): 혈액은 투여 전, 투여 후 1시간 및 2시간에 수집되었고, 마우스는 2시간 째 채혈 후에 희생되었다.
B 그룹(4-6번): 혈액은 투여 후 15분, 4시간, 6시간에 수집되었고, 마우스는 6시간째 채혈 후에 희생되었다;
C 그룹(7-9번): 혈액은 투여 후 30분, 10시간, 24시간에 수집되었고, 마우스는 24시간째 채혈 후에 희생되었다;
각 시점에 300 μL 의 전혈을 수집하여 K2EDTA를 포함하는 항응고제 튜브에 넣고 8000 r/min 의 속도로 고속원심분리기에서 6분간 원심분리하여 혈장을 분리하였다; 혈장은 80℃ 냉동고에 저장하였다.
혈장샘플 분석
대조군제제 및 화합물 1의 혈장샘플을 단백질 침전을 통해 분석하였다. 30 μL 의 혈장을 96-딥웰 플레이트에 가하고, 200 μL 의 내부표준용액(25 ng/mL PD0332991을 포함하는 아세토니트릴 용액)을 첨가하였다; 최종 혼합물은 1500 r/min 속도로 3분간 볼텍싱하고, 4000 r/min의 속도로 20분간 원심분리하였다; 100 μL 상층액에, 100 μL 물을 첨가하였다; 최종혼합물은 볼텍싱 하에서 균질하게 혼합하고, LC-MS/MS로 분석하였다.
표 7-1: 누드마우스에서 대조군제제의 약동학 평가 결과
표 7-2: 누드마우스에서 화합물 1의 약동학 평가 결과
AUClast는 투여 0→t 시간 동안 시간-농도 곡선 아래의 면적을 의미한다.
Tmax는 혈중 최고 농도를 나나태는 시점을 의미한다.
Cmax는 혈중 최고 농도를 의미한다.
표 7-1 및 표 7-2에서 나타낸 실험결과에서 보여진 바와 같이, 본 발명에 따른 화합물들은 대조군 제제와 비교하여, 우수한 악동학적 특성을 가진다; 화합물 1은 노출용량 및 Cmax와 관련하여 양성 대조군제제보다 우월하였다.
제조 모식도(Preparation schemes)
예시로 든 제조 모식도는 본 발명에 따른 화합물의 일부를 위하여 제공된다. 그러나, 하기의 실험들은 본 발명의 범위를 제한하기보다는 오로지 본 발명을 설명하기 위한 목적으로서 제공되는 것이며, 이해되어야 한다. 당업자라면, 본 명세서에 포함된 교시내용을 기초로 하여, 본 발명의 사상 및 범위로부터 일탈하지 않는 범위 내에서 기술적 해결방안의 다양한 변형 또는 개선이 가능하다.
제조예
1: 5
-(
브로모메틸
)-2-
클로로피리미딘[5-(bromomethyl)
-2-
chloropyrimidine
]의 제조
2-클로로-5-메틸피리미딘(12.86 g, 0.1 몰)을 사염화탄소(300 mL)에 녹이고, N-브로모부탄이미드(25.72 g, 0.14 mol) 및 벤조일퍼옥사이드(1.29 g, 5 mmol)을 첨가하며 저어주었다. 최종혼합물은 오일배스(oil bath)에서 가열하여 환류(reflux) 시켰고, 8시간 동안 반응 후 실온으로 냉각 하였다. 혼합물을 흡입하여 여과하였다. 여과물은 농축하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨 에테르:아세틱 에테르=1:1)를 수행하여 표제의 화합물(8.7 g, 수율: 42%)을 수득하였다.
제조예 2: 2,5-다이플루오로-4-아이오도피리딘(2,5-di플루오로-4-iodopyridine)의 제조
다이아이소프로필아민(Diisopropylamine) (17 mL, 122 mmol)을 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran) (220 mL)에 첨가하고, 혼합물을 20 ℃에서 냉각하였다. 질소가스의 보호 하에, n-부틸 리튬 (49 mL, 122.5 mmol)을 천천히 첨가하였다. 그런 다음 혼합물을 20 ℃에서 0.5 시간동안 교반하고, -78 ℃까지 냉각하였다. 테트라하이드로퓨란(30 mL)에 들어있는 2,5-다이플루오로피리딘(13.3 g, 115 mmol)을 천천히 첨가하고, 상기 온도에서 4시간 동안 교반하였다. 요오드(32 g, 126 mmol)을 테트라하이드로퓨란(100 mL)에 녹이고, 상기 반응용액에 78℃에서 천천히 첨가하였다. 그런 다음 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 물(10 mL)과 테트라하이드로퓨란(30mL)을 첨가하자, 온도가 실온으로 증가하였다. 포화된 티오아황산 나트륨 용액(sodium thiosulfite)을 첨가하였다. 유기상(organic phase)을 분리하고, 수상(water phase)을 아세틱 에테르(3×100 mL)로 추출하였다. 유기상을 혼합하고, 황산나트륨무수물(anhydrous sodium sulfate)로 건조, 흡입 하에 여과하였으며, 여과물은 농축하여 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨 에테르:아세틱에테르=50:1)를 수행하여 표제의 화합물(13.5 g, 수율: 48%)을 수득하였다.
제조예
3: 5
-
플루오로
-4-
아이오도피리딘
-2-
아민
(5-
fluoro
-4-
iodopyridin
2-amine)의 제조
2,5-다이플루오로-4-아이오도피리딘 (4.82 g, 20 mmol)을 DMSO(40 mL)에 녹이고, 교반하며 암모니아수(40 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 안에서 12시간 동안 90 ℃에서 교반하였다. 아세틱 에테르(150 mL)를 첨가하여 유기상(organic phase)을 분리하고 유기상을 황산나트륨무수물로 건조하고 흡입 하에 여과하였다. 여과물을 농축한 다음, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인(다이클로로메테인): 메탄올=30:1)을 수행하여 표제의 화합물(2.38 g, 수율: 50%)을 수득하였다.
제조예 4: N-아이소프로필아세트아미드(N-isopropylacetamide)
아이소프로필아민(Isopropylamine) (5.0 g, 84.7 mmol) 및 트리에틸아민(triethylamine) (12.8 g, 126.7 mmol)을 다이클로로메테인(다이클로로메테인) (50 mL)에 용해시키고, 0℃로 냉각하였다. 아세트산무수물(Acetic anhydride) (17.3 g, 169.4 mmol)을 천천히 첨가하였다. 아세트산무수물을 첨가한 후, 상기 혼합물을 실온으로 가온하고, 12시간 동안 반응시켰다. 감암증류를 통해 용매를 제거하였다. 잔여물에 아세틱 에테르(acetic ether) (100 mL)와 탄산칼륨(potassium carbonate) (20 g)을 첨가하였다. 6시간 동안 교반한 후, 혼합물을 흡입 하에 여과시키고, 용매를 감압증류로 제거하여 표제의 화합물을 수득하였다(7.65 g, 수율: 89.5%).
제조예
5: (Z)-N'-(4-
브로모
-2,6-
다이플루오로페닐
)-N-
아이소프로필
아세트아미딘의
제조
4-브로모-2,6-다이플루오로아닐린(4-bromo-2,6-difluroaniline) (7.87 g, 37.9 mmol)), N-아이소프로필아세트아마이드(N-isopropylacetamide) (7.65 g, 75.7 mmol) 및 트리에틸아민 (5.7 g, 56.9 mmol)을 톨루엔(150 mL)에 용해시키고, 옥시염화인(phosphorus oxychloride)(5.8g,37.9mmol)을 천천히 첨가하였다. 옥시염화인 첨가 후, 혼합물을 가열하여 3시간 동안 환류시켰다. 그런 다음, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 감압증류로 제거하고, 다이클로로메테인(200mL)을 첨가하였다. 최종혼합물을 포화 탄산수소나트륨 수용액(2×100mL)으로 2회 세척한 후, 황산나트륨 무수물(anhydrous sodium sulfate)로 건조?斫같?, 흡입하에 여과한 후, 감압하에 증류시켜 고체 상태의 표제의 화합물(7.3 g, 수율: 66.2%)을 수득하였다.
제조예 6: 6-브로모-4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸의 제조
(Z)-N'-(4-브로모-2,6-다이플로오로페닐)-N-아이소프로필 아세트아미딘 (7.0 g, 24.1 mmol)를 N,N-다이메틸포라마이드 (50 mL)에 녹이고, 칼륨-tert-부톡사이드(potassium tert-butoxide) (3.2g, 28.9 mmol)을 첨가하였다. 최종혼합물을 100℃까지 가열하여 2 시간 동안 반응시켰다. 반응혼합물을 실온으로 냉각하고, 다이클로로메테인(100 mL)과 포화 NaCl 수용액(50 mL)을 분리된 유기상(organic phase)에 첨가하였다. 유기상을 황산나트륨 무수물로 건조시키고, 여과, 및 농축하여 조생성물(crude product)을 수득하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨 에테르: 아세틱 에테르=2:1)로 정제하여 고체 상태의 표제의 화합물(4.0 g, 수율: 61.3%)을 수득하였다.
제조예
7: 4
-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-6-(4,4,5,5-
테트라메틸
-1,3,2-
다이옥사브롤란
-2-일)-1H-벤조[d]이미다졸[4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-6-(4,4,5,5-
tetramethyl
-1,3,2-dioxaborolane-2-yl)-1H-benzo[d]imidazole]의 제조
6-브로모-4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸 (9.0 g, 33.2 mmol), 비스(피나콜라토)바이보론[bis(pinacolato)diboron] (12.65 g, 49.8 mmol), 아세트산 팔라듐(palladium acetate) (840 mg, 3.75 mmol), 트리사이클로헥실포스핀(tricyclohexylphosphine) (1.63 g, 5.8 mmol) 및 아세트산 칼륨(potassium acetate) (9.78 g, 99.8 mmol)을 DMSO (60 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 80℃까지 가열하고, 6시간 동안 반응시켰다. 물 (200 mL)와 아세틱 에테르(200 mL)를 첨가하여 수상(water phase)로부터 유기상을 분리하였다. 수상은 아세틱 에테르로 2회 추출하였고, 유기상은 황산 무수물과 혼합 및 건조하였고, 흡입 하에 여과하였다. 여과물을 농축한 다음, 실리카겔 크로마토그래피(페트롤륨 에테르: 아세틱 에테르=1:2)를 수행하여 표제의 화합물(6.0 g, 수율: 56.8%)을 수득하였다.
제조예
8: 5
-
플로오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조[d]이미다졸
-6-일)피리딘-2-아민의 제조
4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-6-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-다이옥사보롤란-2-일)-1H-벤조[d]이미다졸 [4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-6-(4,4,5,5-tetramethyl-1,3,2-dioxaborolane-2-yl)-1H-benzo[d]imidazole] (3.18 g, 10 mmol), 5-플루오로-4-아이오도피리딘-2-아민(5-fluoro-4-iodopyridin-2-amine) (2.38 g, 10 mmol), 탄산칼륨(potassium carbonate) (2.76 g, 20 mmol) 및 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 [tetrakis(triphenylphosphine)palladium] (1.15 g, 1 mmol)을 35 mL 전자파 튜브에 넣고, 1,4-다이옥산(1,4-dioxane) (15 mL) 및 물 (3 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 전자파 조건 하에 1시간 동안 반응시켰다. 물 및 아세틱 에테르를 첨가하여 수상에서 유기상을 분리하였다. 유기상은 황산나트륨 무수물로 건조하고, 흡입 하에 여과하였다. 여과물은 농축한 뒤 실리카겔크로마토그래피(페트롤륨에테르: 아세틱에테르=1:1)를 수행하여 표제의 화합물(2.1 g, 수율: 69.5%)을 수득하였다.
제조예
9: 4
-
플루오로
-6-(5-
플루오로
-2-
아이오도피리딘
-4-일)-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-벤조[d]이미다졸의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (1.0 g, 3.31 mmol)을 다이아이오도메테인(diiodomethane) (30 mL)에 녹이고, 요오드화 구리(CuI) (0.63 g, 3.32 mmol), tert-부틸-아질산염(tert-butyl nitrite) (0.341 g, 3.31 mmol) 및 요오드 (0.84 g, 3.31 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 85℃로 가열하고, 15분 간 반응시켰다. 최종혼합물을 냉각한 후, 곧바로 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨에테르: 아세틱에테르=200:1～1:1)를 수행하여 표제의 화합물(700 mg, 수율: 51.1%)을 수득하였다.
제조예 10: 5-브로모-2-아미노피리미딘(5-bromo-2-aminopyrimidine)의 제조
2-아미노피리미딘(2-aminopyrimidine) (20.0 g, 0.21mol)을 아세토니트릴(500 mL)에 녹이고, N-브로모부탄이미드(N-bromobutanimide) (37.0 g, 0.21 mol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 4시간 동안 교반하고, 흡입 하에 여과하였다. 여과케이크를 건조하여 표제의 생성물을 수득하였다.
제조예 11: 5-브로모-N,N-비스(4-메톡시벤질)피리미딘-2-아민의 제조
5-브로모-2-아미노피리미딘 (8.9 g, 51.15 mmol)을 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran) (150 mL)에 녹이고, 수소화나트륨(sodium hydride) (4.4 g, 110.0 mmol, 60%)을 얼음 배스(ice bath) 조건 하에서 천천히 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하여 30분간 교반하였다. 4-메톡시벤질클로라이드 chloride (20.0 g, 127.71 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 75℃까지 가열하여 8시간 동안 반응시켰다. 얼음물을 첨가하여 반응을 종료시키고, 상기 반응용액을 아세틱에테르(200 mL)로 추출하였다. 수상을 아세틱 에테르(50 mL)로 워싱하고, 유기상을 혼합, 건조, 농축 및 실리카겔 칼럼크로마토그래피(페트롤륨에테르:아세틱에테르=20:1)를 이용하여 분리하여 표제의 화합물(10.0 g, 수율: 47.2%)을 수득하였다.
제조예
12:
tert
-부틸 4-(2-(
비스(4-메톡시벤질)아미노
)피리미딘-5-일)피페라진-1-
카복실레이트의
제조
5-브로모-N,N-비스(4-메톡시벤질)피리미딘-2-아민(10.0g, 24.1 mmol), tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (8.97 g, 48.2 mmol), tert-부톡사이드 나트륨(sodium tert-butoxide) (4.63 g, 48.2 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 [tris(dibenzylideneacetone)dipalladium] (200 mg) 및 라세믹-2,2'-비스(다이페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸 (400 mg)을 톨루엔(200 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 80℃의 오일 배스(oil bath)에서 8시간 동안 가열하고, 용매를 로테이션 하에 증류시켜 제거하였다. 잔여물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨에테르:아세틱에테르=1:1)로 정제하여 표제의 화합물(6.2 g, 수율: 49.6%)을 수득하였다.
제조예
13: 5
-(피페라진-1-일)피리미딘-2-
아민
[5-(
piperazin
-1-
yl
)
pyrimidin
-2-amine]의 제조
Tert-부틸 4-(2-(비스(4-메톡시벤질)아미노)피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (6.2 g, 11.9 mmol)을 다이클로로메테인(30mL) 및 트리플루오로아세트산(30mL)을 혼합한 용액에 녹이고 , 실온에서 30분 동안 교반하였다. 용매는 로테이션 하에 증류하여 제거하였다. 다이클로로메테인 소량을 첨가하고, 로테이션 하의 증류를 재실시하여 용매를 제거하고, 조생성물(2.1 g)을 수득하였다. 생성물은 정제없이 다음 단계에 사용되었다.
제조예 14: tert-부틸 4-(2-아미노피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트의 제조
5-(피페라진-1-일)피리미딘-2-아민 (2.1 g, 11.7 mmol)을 다이클로로메테인(25 mL)에 녹이고, 트리에틸아민(1.77 g, 17.5 mmol)을 첨가하였다. 다이-tert-부틸 다이카보네이트(3.05 g, 14.0 mmol)를 점적방식으로 첨가하였다. 첨가한 후, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매는 로테이션 하에서 증류하여 제거하였다. 잔여물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=10:1)로 정제하여 표제의 생성물(1.52 g, 2-단계 수율: 45.8%)을 수득하였다.
제조예
15:
tert
-부틸 4-(2-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조[d]이미다졸
-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트
Tert-부틸 4-(2-아미노피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (475 mg, 1.70 mmol) 및 4-플루오로-6-(5-플루오로-2-아이오도피리딘-4-일)-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸 (350 mg, 0.85 mmol)을 1,4-다이옥산 (20 mL)에 녹이고, 세슘 카보네이트(cesium carbonate) (826 mg, 2.54 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (78 mg, 0.085 mmol) 및 2-다이시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리아이소프로필바이페닐 (81 mg, 0.17 mmol)을 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃까지 가열하고, 16 시간 동안 반응시켰다. 반응 용액을 여과하고, 여과물을 농축한 뒤 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 분리하여(페트롤륨 에테르: 아세틱 에테르=1:1) 표제의 화합물을 수득하였다(250 mg, 수율: 52.1%).
제조예
16: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(피페라진-2-일)피리디민-2-아민의 제조
Tert-부틸 4-(2-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리미딘- 2-일)아미노)피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (250 mg, 0.44 mmol)를 다이클로로메테인 (5 mL) 및 트리플루오로아세트산 (5 mL)의 혼합 용액에 녹이고, 혼합물을 20℃에서 30분간 교반하였다. 용매를 로테이션 하에 증류하여 제거하고, 다이클로로메테인(10 mL)을 첨가하였다. 용매를 로테이션 하에 증류하여 제거하고, 잔여물을 실리카겔 칼럼크로마토그래피로 분리하여(페트롤륨 에테르: 아세틱 에테르=10:1) 표제의 화합물을 수득하였다(180 mg, 수율: 88.1%).
실시예
1: 5
-((4-
에틸피페라진
-1-일)
메틸
)-N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (화합물
1)의
제조
(1) 2-클로로-5-((4-에틸피페라진-1-일)메틸)피리미딘
5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (4.14 g, 20 mmol)을 테트라하이드로퓨란(70 mL)에 녹이고, 트리에틸아민(6.06 g, 60 mmol) 및 1-에틸피페라진(4.56 g, 40 mmol)을 교반하며 첨가하였다. 혼합물을 4시간 동안 실온에서 교반하였다. 원물질이 TLC로 검출되지 않게 사라진 후, 혼합물을 흡입 하에 여과하였다. 여과물을 농축한 다음 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=30:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(3.4 g, 수율: 70.8%).
(2) 5-((4-에틸피페라진-1-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2- 메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (700 mg, 2.32 mmol), 2-클로로-5-((4-에틸피페라진-1-일)메틸)피리미딘 (557 mg, 2.32 mmol), 4,5-비스(다이페닐포스피노)-9,9-다이메틸잔틴 [4,5-bis(diphenylphosphino)-9,9-dimethylxanthene](221mg,0.38mmol), 세슘 카보네이트(2.26 g, 6.96 mmol) 및 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐(212 mg, 0.23 mmol)을 100 mL의 가지 모양의 용기에 첨가하고, 1,4-다이옥산(50mL)를 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 110℃에서 4 시간동안 반응시키고, 최종 혼합물을 흡입 하에 여과하였다. 여과물을 농축하고 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=15:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(500 mg, 수율: 42.6%).
분자식: C27H32F2N8 분자량: 506.3 LC-MS(m/z): 507.4(M+H+)
1H-NMR (400MHz, MeOD-d4):δ: 8.56 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.49 (s, 2H), 8.26 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.27 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.50 (s, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.38 - 2.64 (m, 10H), 1.70 (d, J = 7.2 Hz, 6H), 1.11 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예
2: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조[d]이미다졸
-6-일)피리딘-2-일)-5-((7-메틸-2,7-다이아자스피로[3.5]노난-2-일)메틸)피리미딘-2-아민(화합물 2)
(1) tert-부틸 2-((2-클로로피리디민-5-일)메틸)-2,7-다이아자스피로[3.5]노난- 7-카복실레이트[tert-butyl 2-((2-chloropyrimidin-5-yl)methyl)-2,7- diazaspiro[3.5]nonan- 7-carboxylate]의 제조
5-브로모메틸-2-클로로피리미딘(235 mg, 1.14 mmol)을 테트라하이드로퓨란(5 mL)에 녹이고, tert-부틸 2,7-다이아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트 하이드로클로라이드[tert-butyl 2,7-diazaspiro[3.5]nonan-7-carboxylate hydrochloride] (300 mg, 1.14 mmol) 및 트리에틸아민(345 mg, 3.42 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하고, 과량의 용매는 감압증류하여 제거하였다. 잔여물은 물(5 mL)에 희석하고, 아세틱 에테르(3 ×10mL)로 추출하였다. 유기상은 황산나트륨 무수물로 건조하고, 여과 및 로테이션 하에 건조하였다. 조생성물(crude product)을 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=20:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(240 mg, 수율: 60%).
(2) 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-2,7-다이아자스피로[3.5]노네인 [2-((2-chloropyrimidin-5-yl)methyl)-2,7-diazaspiro[3.5]nonane]의 제조
Tert-부틸 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-2,7-다이아자스피로[3.5]노난-7-카복실레이트(240 mg, 0.68 mmol)을 다이클로로메테인(2 mL)에 녹이고, 트리플루오로아세트산(1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 과량의 용매는 감압증류하여 제거하여 표제의 화합물을 수득하였다(156 mg, 수율: 91%).
(3) 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-7-메틸-2,7-다이아자스피로[3.5]노네인 [2-((2-chloropyrimidin-5-yl)methyl)-7-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonane]의 제조
2-((2-클로로피리디민-5-일)메틸)-2,7-다이아자스피로[3.5]노네인 [2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-2,7-다이아자스피로[3.5]노네인] (156 mg, 0.62 mmol)을 아세토니트릴(5 mL)에 녹이고, 37% 수용성 포름알데히드 용액(251 mg, 3.1 mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(sodium cyanoborohydride) (78 mg, 1.24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 과량의 용매는 감압증류하여 제거하고, 조생성물은 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=20:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(100 mg, 수율: 61%).
(4) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-((7-메틸-2,7-다이아자스피로[3.5]노난-2-일)메틸)피리미딘-2-아민 [N-(5-fluoro-4-(4-fluoro-1-isopropyl-2-methyl-1H-benzo[d]imidazol- 6-yl)pyridin-2-yl)-5-((7-methyl-2,7-diazaspiro[3.5]nonan-2-yl)methyl)pyrimidin-2-amine]의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민(113 mg, 0.37 mmol) 및 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-7-메틸-2,7-다이아자스피로[3.5]노네인 (100 mg, 0.37 mmol)을 1,4-다이옥산(5 mL)에 녹이고, 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐(34 mg, 0.037 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐(35 mg, 0.074 mmol) 및 세슘카보네이트(300 mg, 0.93 mmol)를 첨가하였다. 질호의 보호 하에, 혼합물을 환류 하에 하룻밤 교반하고, 여과하였다. 과량의 용매는 감압증류하여 제거하였다. 조생성물은 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=10:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(17 mg, 수율: 8.6%).
분자식: C29H34F2N8 분자량: 532.6 LC-MS(m/z): 533(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, MeOD-d 4 ) δ: 8.53 (d, J=6.0 Hz, 1H), 8.50 (s, 2H), 8.27 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.27 (d, J=11.2 Hz, 1H), 3.68 (s, 2H), 3.21-3.22 (m, 4H), 2.80-3.00 (m, 4H), 2.69 (s, 3H), 2.63 (s, 3H), 1.90-2.00 (m, 4H), 1.70 (d, J=6.8 Hz, 6H).
실시예
3: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조[d]이미다졸
-6-일)피리딘-2-일)-5-((2-메틸-2,7-다이아자스피로[3.5]노난-7-일)메틸)피리미딘-2-아민(화합물 3)
(1) tert-부틸 7-((2-클로로피리디민-5-일)메틸)-2,7-다이아자스피로[3.5]노난- 2-카복실레이트의 제조
5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘(220 mg, 1.06 mmol)을 테트라하이드로퓨란(5 mL)에 녹이고, tert-부틸 2,7-다이아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (200 mg, 0.88 mmol) 및 트리에틸아민(268 mg, 2.65 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤동안 교반하였다. 용매는 감압증류하여 제거하였다. 잔여물은 물(5 mL)로 희석하고, 아세틱 에테르(3×10 mL)로 추출하였다. 유기상은 황산나트륨 무수물로 건조하고, 여과 및 로테이션 하에 건조하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼크로마토그래피(페트롤륨 에테르: 아세틱 에테르=1:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(190 mg, 수율: 60.5%).
(2) 7-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-2,7-다이아자스피로[3.5]노난의 제조
Tert-부틸 7-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-2,7-다이아자스피로[3.5]노난-2-카복실레이트 (190 mg, 0.54 mmol)를 다이클로로메테인(2 mL)에 녹이고, 트리플루오로아세트산(1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압증류로 제거하여 표제의 화합물을 수득하였다(110 mg, 수율: 81%).
(3) 7-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-2-메틸-2,7-2,7-다이아자스피로[3.5]노난의 제조
7-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-2,7-다이아자스피로[3.5]노난 (110 mg, 0.44 mmol)을 아세토니트릴(5 mL)에 녹이고, 37% 수용성 포름알데히드 용액(178 mg, 2.2 mmol) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(sodium cyanoborohydride) (55 mg, 0.88 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 감압증류하여 제거하고, 조생성물은 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=20:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(80 mg, 수율: 68%).
(4) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-((2-메틸-2,7-다이아자스피로[3.5]노난-7-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (90 mg, 0.3 mmol) 및 7-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-2-메틸-2,7-다이아자스피로[3.5]노난 (80 mg, 0.3 mmol)을 1,4-다이옥산 (5 mL)에 녹이고, 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐(27 mg, 0.03 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐(29 mg, 0.06 mmol) 및 세슘 카보네이트(244 mg, 0.75 mmol)를 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 하룻밤 동안 환류 하에 교반하였고, 여과시켰다. 용매를 감압증류하여 제거하였다. 조생성물은 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=10:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(8 mg, 수율: 5%).
분자식: C29H34F2N8 분자량: 532.6LC-MS(m/z): 533(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, MeOD-d4) δ: 8.67 (s, 2H), 8.56 (d, J=6.0 Hz, 1H), 8.31 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.23 (d, J=11.6 Hz, 1H), 4.00-4.11 (m, 6H), 3.00-3.19 (m, 4H), 2.96 (s, 3H), 2.69 (s, 3H), 2.11-2.21 (m, 4H), 1.69 (d, J=6.8 Hz, 6H).
실시예
4: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조[d]이미다졸
-6-일)피리딘-2-일)-5-((6-메틸-2,6-다이아자스피로[3.3]헵탄-2-일)메틸)피리미딘-2-아민(화합물 4)의 제조
(1) tert-부틸 6-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-2,6-다이아자스피로[3.3]헵탄-2-카복실레이트의 제조
5-(브로모에틸렌)-2-클로로피리미딘 (326 mg, 1.57 mmol)을 아세토니트릴(10 mL)에 녹이고, 탄산칼륨(433 mg, 3.14 mmol) 및 tert-부틸2,6-다이아자스피로[3.3]헵탄-2-카복실레이트 (310 mg, 1.57 mmol)를 첨가하였다. 반응은 실온에서 16시간 동안 수행되었다. 혼합물은 흡입하에 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=20:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(330 mg, 수율: 65%).
(2) 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-2,6-다이아자스피로[3.3]헵탄의 제조
tert-부틸 6-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-5-일)메틸)-2,6-다이아자스피로[3.3]헵탄-2-카복실레이트 (330 mg, 1.01 mmol)를 다이클로로메테인(10 mL)에 녹이고, 트리플루오로아세트산(5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 농축하여 표제의 화합물 오일을 수득하였다(210 mg, 수율: 93%).
(3) 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-6-메틸-2,6-다이아자스피로[3.3]헵탄의 제조
2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸-2,6-다이아자스피로[3.3]헵탄 (210 mg, 0.94 mmol)을 아세토니트릴(5 mL)에 녹이고, 포름알데히드 용액(0.5 mL) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(65 mg, 1.04 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매는 감압증류하여 제거하였고, 조생성물은 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=10:1)을 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(150 mg, 수율: 67%).
(4) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-((-6-메틸-2,6-다이아자스피로[3.3]헵탄-2-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (190 mg, 0.63 mmol) 및 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-6-메틸-2,6-다이아자스피로[3.3]헵테인 (150 mg, 0.63 mmol)을 1,4-다이옥산(10 mL)에 녹이고, 2-다이시클로헥실포스피노- 2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐(60 mg, 0.13 mmol), 세슘카보네이트(614 mg, 1.89 mmol) 및 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐(60 mg, 0.06 mmol)을 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃까지 가열하여 16시간 동안 반응시켰다. 최종혼합물은 흡입하에 여과하였다. 여과물을 농축하고, 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=5:1)을 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(23 mg, 수율: 7%).
분자식: C27H30F2N8 분자량: 504.3 LC-MS(m/z): 505.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, CD3OD-d4) δ: 8.54 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.46 (s, 2H), 8.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.27 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.84-4.85 (m, 1H), 3.54 (s, 6H), 3.39 (s, 4H), 2.69 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 1.69 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예
5: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조[d]이미다졸
-6-일)피리딘-2-일)-5-((9-메틸-3,9-다이아자스피로[5.5]언데칸-3-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물
5)의
제조
(1) tert-부틸 9-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,9-다이아자스피로[5.5]언데칸-3-카복실레이트의 제조
5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (326 mg, 1.57 mmol)을 테트라하이드로퓨란(10 mL)에 녹이고, 트리에틸아민(158 mg, 1.57 mmol) 및 tert-부틸 3,9-다이아자스피로[5.5]언데칸-3-카복실레이트 (200 mg, 0.79 mmol)을 교반하며 첨가하였다. 반응혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 흡입 하에 여과하였다. 여과물을 농축하고, 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=30:1)을 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(210 mg, 수율: 70%).
(2) 3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,9-다이아자스피로[5.5]언데케인의 제조
Tert-부틸 9-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,9-다이아자스피로[5.5]언데칸-3-카복실레이트 (210 mg, 0.55 mmol)을 다이클로로메테인(10 mL)에 첨가하고, 트리플루오로아세트산(5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1 시간 동안 교반하고, 농축하여 표제의 화합물을 수득하였다(145 mg, 수율: 94%).
(3) 3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-9-메틸-3,9-다이아자스피로[5.5]언데케인의 제조
3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,9-다이아자스피로[5.5]언데케인 (145 mg, 0.52 mmol)을 아세토니트릴(5 mL)에 녹이고, 37% 수용성 포름알데히드 용액(0.5 mL) 및 나트륨 시아노보로하이드라이드(65 mg, 1.04 mmol)을 교반하며 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 최종혼합물을 농축하고 농축하고, 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=20:1)을 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(65 mg, 수율: 42.7%).
(4) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-((9-메틸-3,9-다이아자스피로[5.5]언데칸-3-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (77 mg, 0.26 mmol), 3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-9-메틸-3,9-다이아자스피로[5.5]언데케인 (65 mg, 0.22 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐(20 mg, 0.04 mmol), 세슘카보네이트(205 mg, 0.63 mmol) 및 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (20 mg, 0.02 mmol)을 1,4-다이옥산(10 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 110℃에서 16 시간 동안 반응시킨 다음, 반응혼합물을 흡입하에 여과하였다. 여과물을 농축하고, 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=10:1)을 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(10 mg, 수율: 8%).
분자식: C31H38F2N8 분자량: 560.7 LC-MS(m/z): 561.4 (M+H+)
1H-NMR (400 MHz, CD3OD-d4) δ: 8.54 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.49 (s, 2H), 8.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.28 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 3.53 (s, 2H), 2.98-3.07 (m, 4H), 2.71-2.68 (m, 6H), 2.50-2.52 (m, 4H), 1.66-1.71 (m, 9H), 1.61-1.65 (m, 5H).
실시예
6: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조[d]이미다졸
-6-일)피리딘-2-일)-5-((5-메틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물
6)의
제조
(1) tert-부틸 5-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카복실레이트의 제조
Tert-부틸 헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카복실레이트 (318 mg, 1.5 mmol) 및 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘(310 mg, 1.5 mmol)을 아세토니트릴(50 mL)에 녹이고, 탄산칼륨(621 mg, 4.5 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 8 시간 동안 반응시켰다. 혼합물을 여과시켰다. 여과물을 농축하고, 실리카겔 칼럼크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=50:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(430 mg, 수율: 85%).
(2) 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로피롤로[3,4-c]피롤의 제조
Tert-부틸 5-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카복실레이트 (430 mg, 1.27 mmol)을 다이클로로메테인(10 mL)에 녹이고, 트리플루오로아세트산(5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압증류하여 제거하고, 황색의 표제화합물 오일을 수득하여(302 mg crude), 정제하지 않고 바로 다음 단계에 사용되었다.
(3) 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-5-메틸옥타하이드로피롤로[3,4-c]피롤 의 제조
2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤 (302 mg 조생성물)을 메탄올(50 mL)에 녹였다. 수용성 포름알데히드 용액(37%, 1 g, 12.3 mmol)을 실온에서 첨가하고, 2시간 동안 반응시켰다. 나트륨 시아노보로하이드라이드(0.8 g, 12.7 mmol)를 첨가하고, 혼하물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 후, 반응용액을 농축하고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 (다이클로로메테인: 메탄올=20:1) 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(260 mg, 2 단계 수율: 81%).
(4) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-((5-메틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (302 mg, 1.0 mmol) 및 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-5-메틸옥타하이드로피롤로[3,4-c]피롤 (252 mg, 1.0 mmol)을 1,4-다이옥산(50 mL)에 녹이고, 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (92 mg, 0.1 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노- 2’,4’,6’-스티라이소프로필바이페닐(95 mg, 0.2 mmol) 및 세슘 카보네이트(975 mg, 3.0 mmol)을 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃까지 가열하고 8시간 동안 반응시켰다. 혼합물을 실온까지 냉각하고, 농축시켰다. 물(100 mL)과 아세틱 에테르(150 mL)을 첨가하여 수상으로부터 유기상을 분리하였다. 수상은 아세틱 에테르로 추출하고(150 mL×2), 유기상은 결합되어 포화 NaCl 용액으로 세척, 황산나트륨 무수물로 건조 및 농축하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 (다이클로로메테인: 메탄올=20:1) 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(223 mg, 수율: 43%).
분자식: C28H32F2N8 분자량: 518.6LC-MS(m/z): 519.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)δ: 10.03 (s, 1H), 8.45 (s, 2H), 8.43 (d, J=6.4Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.23 (d, J=11.6Hz, 1H), 4.80-4.83 (m, 1H), 3.34-3.49 (m, 6H), 2.66 (brs., 4H), 2.61 (s, 3H), 2.35 (brs., 5H), 1.57 (d, J=6.8Hz, 6H).
실시예
6-1: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H- 벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((시스)-5-메틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물 6-
1)의
제조
(1) tert-부틸 5-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸))-(시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카복실레이트 (300 mg, 1.41 mmol) 및 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (292.5 mg, 1.41 mmol)을 아세토니트릴(50 mL)에 녹이고, 탄산칼륨(585 mg, 4.23 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 4시간 동안 반응을 수행하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 증류하여 건조하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 (용출액은 다이클로로메테인: 메탄올=50:1 이었음) 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(402 mg, 수율: 82%).
(2) 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-(시스)-옥타하이드로피롤로[3,4-c]피롤의 제조
tert-부틸 5-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-(시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤l-2(1H)-카복실레이트 (400 mg, 1.18 mmol)를 다이클로로메테인(10 mL) 녹이고, 트리플루오로아세트산(5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압증류하여 제거하여 표제의 화합물을 었었고(300 mg 조생성물), 정제하지 않고 다음 단계로 바로 사용되었다.
(3) 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-5-메틸-(cis)-옥타하이드로피롤로[3,4-c]피롤의 제조
2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-5-메틸-(cis)-옥타하이드로피롤로[3,4-c]피롤(300 mg) 조생성물을 메탄올(50 mL)에 녹였다. 수용성 포름알데히드 용액(37%, 0.96 g, 11.8 mmol)을 실온에서 첨가하고, 2시간 동안 반응을 수행하였다. 나트륨 시아노보로하이드라이드(0.74 g, 11.8 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 12시간 동안 실온에서 교반하였다. 반응 후, 용매를 증류하여 건조시키고, 잔여물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=20:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(175 mg, 2 단계 수율: 58%).
(4) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((시스)-5-메틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-일)메틸)피리미딘-2-아민e의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (302 mg, 1.0 mmol) 및 2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-5-메틸-(시스)-옥타하이드로피롤로[3,4-c]피롤 (252 mg, 1.0 mmol)을 1,4-다이옥산(50 mL)에 녹이고, 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (92 mg, 0.1 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐(95 mg, 0.2 mmol) 및 세슘 카보네이트 (975 mg, 3.0 mmol)를 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃까지 가열하여 8시간 동안 반응시켰다. 혼합물을 실온까지 냉각하고, 농축시켰다. 물(100 mL)과 아세틱 에테르(150 mL)를 첨가하여 수상으로부터 유기상을 분리하였다. 수상은 아세틱 에테르(150 mL×2)로 추출하고, 유기상은 결합되어 포화 NaCl 용액으로 세척하고, 황산나트륨 무수물로 건조, 및 농축하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피로 (용출액은 다이클로로메테인: 메탄올=20:1 이었음) 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(207 mg, 수율: 40%).
분자식: C28H32F2N8 분자량:518.60LC-MS(m/z): 519.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ:8.64(d,J=6.0Hz, 1H), 8.48-8.47 (m, 3H), 8.29 (d, J=2.4Hz, 1H), 7.64 (t, J=1.2Hz, 1H), 7.25 (d, J=9.6Hz, 1H), 4.70-4.74 (m, 1H), 3.57 (s, 2H), 3.40 (brs, 2H), 3.07 (s, 2H), 2.64-2.69 (m, 10H), 2.40-2.48 (m, 2H), 1.69 (d, J=6.8Hz, 6H).
실시예
6-2: 5-(((시스)-5-에틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리딘-2-아민 (화합물 6-
2)의
제조
(1) tert-부틸 (시스)-5-에틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카복실레이트 (424 mg, 2.0 mmol)를 메탄올(10 mL)에 녹이고, 수용성 아세트알데히드 용액(40%, 2.2 mL, 20 mmol)을 점적하여 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 나트륨 시아노보로하이드라이드(1.26 g, 20 mmol)를 천천하 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 30분 동안 추가로 교반하였다. 용매를 로테이션 하에 증류하여 제거하고, 잔여물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=10:1)로 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(317 mg, 수율: 66.0%).
(2) (시스)-2-에틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤의 제조
tert-부틸 (시스)-5-에틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-카복실레이트(317 mg, 1.32 mmol)을 다이클로로메테인(3mL)과 트리플루오로아세트산(3mL)의 혼합 용액에 녹이고, 실온에서 30분 간 교반하였다. 용매는 로테이션 하에 증류하여 제거하였다. 소량의 다이클로로메테인을 첨가하고, 용매를 로테이션 하에 증류시켜 제거하여 조생성물을 수득하였다(181 mg). 생성물은 정제하지 않고 바로 다음 단계에 사용되었다.
(3) (시스)-2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-5-에틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤의 제조
(시스)-2-에틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤 (181 mg, 1.29 mmol), 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (267 mg, 1.29 mmol) 및 탄산칼륨(178 mg, 1.29 mmol)을 아세토니트릴(15 mL)에 첨가하고, 혼합물을 오일배스에서 60℃로 1 시간동안 가열하였다. 용매를 로테이션 하에 증류하여 제거하고, 잔여물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=10:1)로 분리하여 화합물을 수득하였다(300 mg, 수율: 87.0%).
(4) 5-(((시스)-5-에틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤-2(1H)-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리딘-2-아민의 제조
(시스)-2-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-5-에틸헥사하이드로피롤로[3,4-c]피롤 (300 mg, 1.12 mmol), 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리딘-2-아민(338 mg, 1.12 mmol), 세슘 카보네이트(730 mg, 2.24 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (30 mg) 및 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐(60 mg)을 1,4-다이옥산(20 mL)에 녹였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃ 오일배스에서 8시간 동안 가열하였다. 용매는 로테이션 하에 증류하여 제거하였다. 역상 칼럼크로마토그래피(물:메탄올=10:1-1:1)을 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(176 mg, 수율: 29.5%).
분자식: C29H34F2N8 분자량: 532.6LC-MS(m/z): 533.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ: 8.64 (d, J=5.6 Hz, 2H), 8.44 (s, 2H), 8.29 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.24 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.24-7.26 (m, 1H), 4.70-4.73 (m, 1H), 3.55 (s, 2H), 2.90-3.05 (m, 2H), 2.80-2.87 (m, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.45-2.60 (m, 6H), 2.25-2.35 (m, 2H), 1.68 (d, J = 8.4 Hz, 6H), 1.15-1.18 (m, 3H).
실시예
7: N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-일)메틸)피리딘-2-아민 (화합물
7)의
제조
(1) 4-벤질-6-tert-부틸 (시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4,6-다이카복실레이트의 제조
tert-부틸 (시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-카복실레이트(342 mg, 1.5 mmol) 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (581 mg, 4.5 mmol)을 다이클로로메테인(30 mL)에 녹이고, 벤질 클로로포르메이트 (358 mg, 2.1 mmol)를 아이스 배스 조건에서 점적하여 첨가하였다. 첨가 후, 반응을 실온에서 4 시간 동안 수행하였다. 물(30 mL)을 첨가하여 수상으로부터 유기상을 분리하였다. 수상을 다이클로로메테인(50 mL×2)으로 추출하였다. 유기상은 결합되고, 포화 NaCl 용액으로 세척하고, 황산나트륨 무수물로 건조 및 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액은 페트롤륨 에테르: 아세틱 에테르 = 5:1 이었음)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(473 mg, 수율: 87%).
(2) 벤질 (시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4(4aH)-카복실레이트의 제조
4-벤질-6-tert-부틸 (시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4,6-다이카복실레이트 (473 mg, 1.3 mmol)을 다이클로로메테인(10 mL)에 녹이고, 트리플루오로 아세트산(5mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압증류하여 표제의 화합물을 수득하였고(400 mg 조생성물), 정제하지 않고 바로 다음 단계에서 사용되었다.
(3) 벤질 (시스)-6-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4(4aH)-카복실레이트의 제조
벤질 (시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4(4aH)-카복실레이트 (400 mg, 조생성물) 및 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (269 mg, 1.3 mmol)를 아세토니트릴(50 mL)에 녹이고, 탄산칼륨(538 mg, 3.9 mmol)을 첨가하였다. 반응을 실온에서 8시간 동안 수행하였다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액은 다이클로로메테인: 메탄올=50:1 이엇음)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(409 mg, 수율: 81%).
(4) 벤질 (시스)-6-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4(4aH)-카복실레이트의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (302 mg, 1.0 mmol) 및 벤질 6-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)(시스)헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4(4aH)-카복실레이트 (389 mg, 1.0 mmol)을 1,4-다이옥산(50 mL)에 녹이고, 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (92 mg, 0.1 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’- 트리아이소프로필바이페닐(95 mg, 0.2 mmol) 및 cesium carbonate (975 mg, 3.0 mmol)를 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃까지 가열하고, 8시간 동안 반응시켰다. 혼하물을 실온까지 냉각하고, 농축시켰다. 물(100 mL) 및 아세틱 에테르(150 mL)를 첨가하여 수상으로부터 유기상을 분리하였다. 수상은 아세틱 에테르(150 mL×2)로 추출하고, 유기상은 결합되어 포화 NaCl 용액으로 세척하고, 황산나트륨 무수물로 건조, 및 농축하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액은 다이클로로메테인: 메탄올=20:1 이었음)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(288 mg, 수율: 44%).
(5) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-6(2H)-일)메틸)피리딘-2-아민의 제조
벤질 6-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)(시스)헥사하이드로피롤로[3,4-b][1,4]옥사진-4(4aH)-카복실레이트 (280 mg, 0.43 mmol) 및 팔라듐-탄소 (30 mg)을 메탄올(40 mL) 및 암모니아수(6 mL)에 부유시켰다. 반응계를 진공으로 하고, 수소를 주입하였다. 반응은 실온에서 16시간 동안 수행되었다. 혼합물을 셀라이트(celite)로 여과하고, 여과물을 농축하였으며, 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(0.2%의 트리에틸아민을 첨가한 메탄올:다이클로로메테인=1:20)로 정제하여 백색 고체 형태의 표제 화합물을 수득하였다(178 mg, 수율: 80%).
분자식: C27H30F2N8O 분자량: 520.6LC-MS(m/z): 521.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)δ: 10.02 (s, 1H), 8.44-8.42 (m, 3H), 8.35 (s, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.23 (d, J=11.6Hz, 1H), 4.79-4.83 (m, 1H), 3.79 (s, 1H), 3.16-3.60 (m, 6H), 3.15 (m, 1H), 2.91-2.95 (m, 1H), 2.80-2.85 (m, 1H), 2.73-2.69 (m, 1H), 2.54-2.65 (m, 5H), 1.57 (d, J=6.8Hz, 6H).
실시예
8: (exo)-3-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3-다이아자바이시클로[3.1.0]헥산-6-아민 (화합물
8)의
제조
(1) tert-부틸 (exo)-6-((카보벤족시)아미노)-3-아자바이시클로[3.1.0]헥산-3-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (exo)-6-아미노-3-아자바이시클로[3.1.0]헥산-3-카복실레이트 (396 mg, 2.0 mmol) 및 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (774 mg, 6.0 mmol)을 다이클로로메테인(30 mL)에 녹이고, 벤질 클로로포르메이트 (409 mg, 2.4 mmol)를 아이스배스 조건 하에 점적하여 첨가하였다. 첨가 후, 반응을 실온에서 4시간 동안 수행하였다. 반응용액을 농축한 후, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨 에테르:아세틱 에테르=10:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(578 mg, 수율: 87%).
(2) 벤질 ((exo)-3-아자바이시클로[3.1.0]헥산-6-일)카바메이트의 제조
tert-부틸 (exo)-6-((카보벤족시)아미노)-3-아자바이시클로[3.1.0]헥산-3-카복실레이트 (578 mg, 1.74 mmol)을 다이클로로메테인(10 mL)에 녹이고, 트리플루오로아세트산(5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매는 감압증류하여 표제의 화합물(450 mg 조생성물)을 수득하였고, 정제하지 않고 바로 다음 단계에 사용되었다.
(3) 벤질 ((exo)-3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3-다이아자바이시클로[3.1.0] 헥산-6-일)카바메이트의 제조
벤질 ((exo)-3-아자바이시클로[3.1.0]헥산-6-일)카바메이트 (450 mg 조생성물) 및 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (415 mg, 2.0 mmol)을 아세토니트릴(50 mL)에 녹이고, 탄산칼륨(828 mg, 6.0 mmol)을 첨가하였다. 반응을 실온에서 4시간 동안 수행하였다. 반응용액을 여과하였다. 여과물을 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액은 다이클로로메테인:메탄올=50:1 이었음)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(487 mg, 2 단계 수율:78%).
(4) 벤질 (exo)-3-((2-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3-다이아자바이시클로[3.1.0]헥산-6-카바메이트의 제조
벤질 ((exo)-3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3-다이아자바이시클로[3.1.0]헥산-6-일)카바메이트 (480 mg, 1.34 mmol) 및 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (405 mg, 1.34 mmol)을 1,4-다이옥산(50 mL)에 녹이고, 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (119 mg, 0.13 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’- 트리아이소프로필바이페닐 (124 mg, 0.26 mmol) 및 세슘 카보네이트 (1.3 g, 4.02 mmol)를 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃까지 가열하여 8시간 동안 반응시켰다. 혼합물을 실온까지 냉각하고, 농축하였다. 물(100 mL) 및 아세틱 에테르(150 mL)을 첨가하여 수상으로부터 유기상을 분리하였다. 수상은 아세틱에테르(150 mL×2)로 추출하였다. 유기상은 결합되어 포화 NaCl 용액으로 세척하고, 황산나트륨 무수물로 건조, 농축하였다. 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액은 다이클로로메테인:메탄올=20:1이었음)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(527 mg, 수율: 63%).
(5) (exo)-3-((2-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3-다이아자바이시클로[3.1.0]헥산-6-아민의 제조
벤질 (exo)-3-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3-아자바이시클로[3.1.0]헥산-6-일)카바메이트 (500 mg, 0.80 mmol) 및 팔라듐-탄소(50 mg)을 메탄올(40 mL)에 부유시키고, 암모니아수(6 mL)를 점적하여 첨가하였다. 반응계를 진공으로 하고, 수소를 주입하였다. 실온에서 16시간 동안 반응시킨 후, 반응혼합물을 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액은 다이클로로메테인:메탄올=10:1이었음)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(192 mg, 수율: 49%).
분자식: C26H28F2N8 분자량: 490.6LC-MS(m/z): 491.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)δ: 10.04 (s, 1H), 8.43 (d, J=6.0Hz, 1H), 8.39 (s, 2H), 8.35 (d, J=2.0Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.23 (d, J=11.6Hz, 1H), 4.78-4.85 (m, 1H), 3.46 (s, 2H), 2.87 (d, J=8.8Hz, 2H), 2.62 (s, 3H), 2.55 (s, 1H), 2.33 (d, J=8.4Hz, 2H), 1.57-1.60 (m, 8H).
실시예
9: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((엑소)-옥타하이드로-6H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-6-일)메틸) 피리미딘-2-아민(화합물
9)의
제조
(1) 1-벤질 6-tert-부틸 (트랜스)-헥사하이드로-1H-피리디[3,4-b][1,4]옥사진-1,6(5H)-다이카복실레이트의 제조
tert-부틸 (트랜스)-옥타하이드로-6H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-6-카복실레이트 (242 mg, 1.0 mmol) 및 트리에틸아민 (120 mg, 1.2 mmol)을 다이클로로메테인(5 mL)에 첨가하였다. 벤질 클로로포르메이트 (188 mg, 1.1 mmol)를 아이스배스 조건 하에 점적하여 천천히 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온까지 가온하고, 30분간 교반하였다. 용매를 로테이션 하에 증류시켜 조생성물을 수득하였고(300 mg 조생성물), 정제하지 않고 다음 단계에 사용되었다.
(2) 벤질(트랜스)-옥타하이드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1-카복실레이트의 제조
1-벤질 6-tert-부틸 (트랜스)-헥사하이드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1,6(5H)-다이카복실레이트를 다이클로로메테인(3 mL)과 트리플루오로아세트산(3 mL)의 혼합용액에 녹였다. 혼합물을 실온에서 30분간 교반하였다. 용매는 로테이션 하에 증류하였고, 소량의 다이클로로메테인을 첨가하였다. 용매를 로테이션 하에 다시 증류하여 조생성물을 수득하였고(260 mg), 정제하지 않고 다음 단계에 사용되었다.
(3) 벤질 (트랜스)-6-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-1H- 피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1-카복실레이트의 제조
벤질 (트랜스)-옥타하이드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1-카복실레이트 (260 mg, 0.94 mmol), 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (393 mg, 1.9 mmol) 및 탄산칼륨(786 mg, 5.7 mmol)을 아세토니트릴(15mL)에 첨가하고, 혼합물을 오일배스에서 60℃로 1시간 동안 가열하였다.
용액을 로테이션 하에 증류하고, 정제 크로마토그래피(용출액은 물:아세토니트릴=10:1-1:1 이었음)로 분리하여 생성물을 수득하였다(300 mg, 3단계 수율:75%).
(4) 벤질 (트랜스)-6-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1-카복실레이트의 제조
벤질 (트랜스)-6-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1-카복실레이트 (300 mg, 0.75 mmol), 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (449 mg, 1.5 mmol), 탄산칼륨(317 mg, 2.3 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (30 mg), 및 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’- 트리아이소프로필바이페닐 (60 mg, 0.13 mmol) 을 20 mL의 1,4-다이옥산에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 오일배스에서 110℃로 8시간 동안 가열하고, 용매를 로테이션 하에 증류하여 제거하였다. 잔여물을 정제 크로마토그래피(용출액은 물:아세토니트릴=10:1-1:1 이었음)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(113 mg, 수율: 23%).
(5) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((트랜스)-옥타하이드로-6H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-6-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
벤질 (트랜스)-6-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-1H-피리도[3,4-b][1,4]옥사진-1-카복실레이트 (113 mg, 0.17 mmol)을 메탄올(5 mL)과 암모니아수(0.50 mL)에 녹였다. 팔라듐-탄소 촉매(30 mg)를 첨가하고, 수소를 주입하여 2시간 동안 환원반응을 수행하였다. 혼합물을 흡입하에 여과하고, 용액은 로테이션 하에 증류하였다. 잔여물을 정제 크로마토그래피(용출액은 물:아세토니트릴=10:1-1:1 이었음)로 분리하여 생성물을 수득하였다(30 mg, 수율: 33%).
분자식: C28H32F2N8O 분자량: 534.6 LC-MS (m/z): 535.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ:8.63-8.66(m,2H),8.44(s,2H),8.29(d,J = 2.0Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.26 (d, J = 8.0Hz, 1H), 4.70-4.73 (m, 1H), 3.84 (dd, J 1 = 2.8Hz, J 2=11.2Hz,1H),3.62-3.63(m,1H),3.47-3.48(m,2H),3.20-3.21(m,1H),2.86-3.02(m,4H),2.68(s,3H),2.35-2.40(m,1H),2.11-2.12(m,1H),1.94-2.01(m,1H),1.68(d,J = 10.8Hz, 6H), 1.66-1.63(m, 1H), 1.55-1.45(m, 1H).
실시예
10: 5((4-(8-옥사-3-다이아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-일)피페리딘-1-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (화합물 10)
(1) 1-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)피페리딘-4-올 의 제조
4-하이드록시피페리딘 (202 mg, 2 mmol) 및 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (414 mg, 2.0 mmol)을 아세토니트릴(50 mL)에 녹이고, 탄산칼륨(828 mg, 6.0 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 반응시켰다. 혼합물을 여과하고, 용매를 증류하여 제거하였다. 생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액은 다이클로로메테인:메탄올=50:1이었음)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(378 mg, 수율: 83%).
(2) 1-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)피페리딘-4-올 의 제조
1-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)피페리딘-4-올 (342 mg, 1.5 mmol) 및 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (453 mg, 1.5 mmol)을 1,4-다이옥산(50 mL)에 녹이고, 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (137 mg, 0.15 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐 (143 mg, 0.3 mmol) 및 세슘 카보네이트 (1.47 g, 4.5 mmol)을 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 100℃까지 가열하여 8시간 동안 반응시켰다. 혼합물은 실온까지 냉각하고, 농축시켰다. 물(100 mL)과 아세틱 에테르(150 mL)를 첨가하여 수상으로부터 유기상을 분리하였다. 수상은 아세틱 에테르(150 mL×2)로 추출하였다. 유기상은 결합되어 포화 NaCl 용액으로 세척하고, 황산나트륨 무수물로 건조, 농축하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액은 다이클로로메테인:메탄올=20:1 이었음)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(489 mg, 수율: 66%).
(3) 1-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)피페리딘-4-온 의 제조
1-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)피페리딘-4-올 (450 mg, 0.91 mmol)을 DMSO (6 mL)와 트리에틸아민 (4 mL)에 녹이고, 피리딘 황 트리옥사이드 (723 mg, 4.55 mmol)를 교반하며 첨가하였다. 첨가 후, 반응을 실온에서 2시간 동안 수행하였다. 물(100 mL)을 첨가하였다. 수상은 아세틱 에테르(50 mL×3)로 추출하였다. 유기상은 결합되어, 포화 NaCl 용액으로 세척하고, 황산나트륨 무수물로 건조, 농축하였다. 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액은 다이클로로메테인:메탄올=20:1이었음)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(363 mg, 수율: 81%).
(4) 5((4-(8-옥사-3-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-일)피페리딘-1-일)메틸)-N-(5- 플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
1-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)피페리딘-4-온 (300 mg, 0.61 mmol) 및 8-옥사-3-아자바이시클로[3.2.1]옥테인 하이드로클로라이드 (91.3 mg, 0.61 mmol)를 DMF (5 mL)에 녹이고, 인듐 트리클로라이드 (270 mg, 1.22 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 12시간 동안 교반하였다. 나트륨 시아노보로하이드라이드(77 mg, 1.22 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 추가로 교반하였다. 물(20 mL)과 아세틱 에테를(20 mL× 5)를 첨가하여 추출하였다. 유기상은 결합하여 농축고, 황산나트륨 무수물로 건조하였다. 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1이었음)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(133 mg, 수율: 37%).
분자식: C32H38F2N8O 분자량: 588.7 LC-MS (m/z): 589.4(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6)δ:10.01 (s, 1H), 8.43-8.42(m, 3H), 8.35(d, J = 2.0Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.23 (d, J=11.6Hz, 1H), 4.79-4.83 (m, 1H), 4.10-4.17 (m, 2H), 3.44-3.49 (m, 2H), 2.81-2.87 (m, 2H), 2.65 (s, 3H), 2.22-2.24 (m, 2H), 1.99 -2.06(m, 3H), 1.74-1.76 (m, 2H), 1.67-1.73 (m, 5H), 1.56-1.58 (m, 6H), 1.36-1.38 (m, 2H).
실시예
11: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-((8-몰포리노-3-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물
11)의
제조
(1) tert-부틸 8-몰포리노-3-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카복실레이트의 제조
tert-부틸 8-옥소-3-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카복실레이트 (226 mg, 1.0 mmol) 및 몰포린 (870 mg, 10 mmol)을 테트라하이드로퓨란(5 mL)에 녹였다. 촉매 용량의 아세트산(20 mg)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분간 교반하였다. 나트륨 시아노보로하이드라이드(95 mg, 1.5 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 아세틱 에테르(100 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 세척하였다. 유기상을 건조하고, 로테이션 하에 증류하여 조생성물을 수득하여(300 mg), 정제하지 않고 다음 단계에 사용하였다.
(2) 4-(3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-일) 몰포린의 제조
tert-부틸 8-몰포리노-3-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카복실레이트 (300 mg, 1.0 mmol)을 다이클로로메테인(5 mL)과 트리플루오로아세트산(5 mL)의 혼합 용매에 녹였다. 혼합물을 실온에서 30분간 교반하였다. 용매를 교반하여 증류하였다. 탄산칼륨(276 mg, 2.0 mmol), 5-브로모메틸-2-클로로피리미딘 (310 mg, 1.5 mmol), 및 아세토니트릴(10 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 오일배스에서 60℃로 1시간 동안 가열하였다. 용매는 로테이션 하에 증류시켜 제거하였고, 잔여물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=20:1)로 분리하여 생성물을 수득하였다(236 mg, 2단계 수율: 73%).
(3) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-((8-몰포리노-3-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
4-(3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-일)몰포린 (236 mg, 0.73 mmol), 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (332 mg, 1.1 mmol), 탄산칼륨(202 mg, 1.5 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (24 mg), 및 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’- 트리아이소프로필바이페닐 (48 mg)을 1,4-다이옥산(10 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃ 오일배스에서 8시간 동안 가열하였다. 용매는 로테이션 하에 증류하였고, 잔여물은 정제 크로마토그래피로(용출액은 물:아세토니트릴=10:1-1:1 이었음) 분리하여 생성물을 수득하였다(41 mg, 수율: 10%).
분자식: C32H38F2N8O 분자량: 588.7 LC-MS (m/z): 589.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ:8.66(d,J = 6.0 Hz, 1H), 8.36-8.52 (m, 3H), 8.28 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.70-4.74 (m, 1H), 3.71 (s, 4H), 2.69 (s, 5H), 2.34-2.42 (m, 6H), 2.10-2.15 (m, 3H), 1.68-1.79 (m, 8H), 1.05-1.30 (m, 4H).
실시예
12: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-((3-몰포리노-8-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물
12)의
제조
(1) 8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-8-다이아자스피로[3.2.1]옥탄-3-온 의 제조
5-브로모메틸-2-클로로피리미딘 (621 mg, 3.0 mmol), 3-옥소-8-아자바이시클로[3.2.1]옥테인 하이드로클로라이드 (324 mg, 2.0 mmol) 및 탄산칼륨(552 mg, 4.0 mmol)을 20 mL의 아세토니트릴에 첨가하였다. 혼합물을 가열하여 1시간 동안 환류시켰다. 용매를 로테이션 하에 증류하고, 잔여물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨에테르:아세틱에테르=5:1)로 분리하여 생성물을 수득하였다(387 mg, 수율: 77%).
(2) 8-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-8-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-온 의 제조
8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-8-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-온 (387 mg, 1.54 mmol), 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (930 mg, 3.08 mmol), 탄산칼륨(638 mg, 4.62 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (39 mg), 및 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐(78 mg)을 1,4-다이옥산(20 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃ 오일배스에서 8시간 동안 가열하였다. 용매는 로테이션 하에 증류하였고, 잔여물은 정제 크로마토그래피로(용출액은 물:아세토니트릴=10:1-1:1 이었음) 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(133 mg, 수율: 17%).
(3) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-((3-몰포리노-8-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
8-((2-((5-플루오로-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-8-아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-온 (133 mg, 0.257 mmol)을 테트라하이드로퓨란(1 mL)과 메탄올(1 mL)의 혼합 용매에 녹이고, 몰포린 (223 mg, 2.57 mmol)과 아세트산(20 mg)을 첨가하였다. 혼합물은 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 나트륨 시아노모로하이드라이드(25 mg, 0.386 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 아세틱 에테르(20 mL)를 첨가하여 수상으로부터 유기상을 분리하였다. 유기상은 포화 NaCl 용액으로 세척하고, 건조, 로테이션 하에 증류한 뒤, 정제 크로마토그래피로(용출액은 물:아세토니트릴=10:1-1:1 이었음) 분리하여 생성물을 수득하였다(40 mg, 수율: 33%).
분자식: C32H38F2N8O 분자량: 588.7 LC-MS (m/z): 589.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ:9.48(brs.,1H),8.67(d,J = 6.0Hz,1H), 8.62(s, 2H), 8.38 (d, J = 2.4Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.25 (d, J = 13.2Hz, 1H), 4.67-4.74 (m, 1H), 3.72 (s, 4H), 3.60 (s, 2H), 3.36 (s, 2H), 2.66 (s, 3H), 2.55 (brs, 5H), 2.05-2.07 (m, 2H), 1.84-1.82 (m, 2H), 1.67-1.68 (m, 10H).
실시예
13: 5
-((3-에틸-3,8-
다이아자바이시클로[3.2.1]옥탄
-8-일)
메틸
)-N- (5-
플루오로
-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (화합물
13)의
제조
(1) tert-부틸 8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥탄- 3-카복실레이트의 제조
5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (412 mg, 2 mmol)을 테트라하이드로퓨란(30 mL)과 트리에틸아민(606 mg, 6 mmol)의 혼합용매에 녹이고, tert-부틸 3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카복실레이트 (509 mg, 2.4 mmol)을 교반하며 첨가하였다. 반응은 실온에서 4시간 동안 교반하며 수행하였다. 원물질이 TLC로 검출되지 않게 사라진 후, 최종 혼합물을 흡입 하에 여과하고, 여과물을 농축하였다. 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨에테르:아세틱에테르=1:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(600 mg, 수율: 88.8%).
(2) 8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥테인의 제조
tert-부틸 8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카복실레이트 (600 mg, 1.78 mmol) 다이클로로메테인(10 mL)에 녹이고, 트리플루오로아세트산(5 mL)을 교반하며 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4기간 동안 교반하였다. 원재로가 TLC로 검출되지 않게 사라진 후, 혼합물을 흡입 하에 여과하였다. 여과물을 농축한 다음, 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=30:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(400 mg, 수율: 94.6%).
(3) 8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3-에틸-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥테인의 제조
8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥테인 (400 mg, 1.68 mmol)을 아세토니트릴(20 mL)에 녹이고, 에틸 브로마이드 (363 mg, 3.36 mmol)와 탄산칼륨(695.5 mg, 5.04 mmol)을 교반하며 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 하룻밤 교반하였다. 원물질이 TLC로 검출되지 않게 사라진 후, 최종 혼하물을 흡입 하에 여과하였다. 여과물을 농축한 다음, 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=20:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(380 mg, 수율: 85.2%).
(4) 5-((3-에틸-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥탄-8-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (200 mg, 0.66 mmol), 8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3-에틸-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥테인 (175.6 mg, 0.66 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐(63 mg, 0.13 mmol), 세슘 카보네이트 (643.5 mg, 1.98 mmol) 및 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (60 mg, 0.066 mmol)를 가지 모양의 용기에 넣고, 1,4-다이옥산(20 mL)을 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 100℃에서 4시간 동안 반응을 수행하였다. 반응 혼합물을 흡입 하에 여과하였다. 여과물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=15:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(100 mg, 수율: 28.5%).
분자식: C29H34F2N8 분자량: 532.3LC-MS(m/z): 533.3(M+H+)
1H-NMR (400MHz, MeOD-d 4) δ: 8.54-8.58(m, 3H), 8.27 (d, J=2.0Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.26 (d, J=11.6Hz, 1H), 4.84-4.88 (m, 1H), 3.37-3.60 (m, 3H), 3.00-3.21(m, 4H), 2.69 (s, 3H), 2.25-2.35 (m, 2H), 1.85-2.05 (m, 2H), 1.67-1.71 (m, 6H), 1.22-1.35(m,2H), 1.16-1.20(m, 4H).
실시예
14: 5
-((8-에틸-3,8-
다이아자바이시클로[3.2.1]옥탄
-3-일)
메틸
)-N- (5-
플루오로
-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (화합물
14)의
제조
(1) tert-부틸 8-에틸-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카복실레이트의 제조
tert-부틸 3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카복실레이트 (212 mg, 1 mmol)을 아세토니트릴(20 mL)에 녹이고, 에틸 브로마이드(129.6 mg, 1.2 mmol)와 탄산칼륨(414 mg, 3 mmol)을 교반하며 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 하룻밤 교반하였다. 원물질이 TLC에서 검출되지 않게 사라진 후, 혼합물을 흡입 하에 여과하였다. 여과물을 감압증류하여 표제의 화합물을 수득하였다(200 mg, 수율: 83.3%).
(2) 8-에틸-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥테인 의 제조
tert-부틸 8-에틸-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-카복실레이트 (200 mg, 0.83 mmol)을 다이클로로메테인(5 mL)에 녹이고, 트리플루오로아세트산(3 mL)을 교반하며 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 원물질이 TLC에서 검출되지 않게 사라진 후, 혼합물을 감압증류하여 표제의 화합물을 수득하였다(100 mg, 수율: 85.8%).
(3) 3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-8-에틸-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥테인
5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (146 mg, 0.71 mmol)을 테트라하이드로퓨란(30 mL)에 녹이고, 탄산칼륨(294 mg, 2.13 mmol)과 8-에틸-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥테인 (100 mg, 0.71 mmol)을 교반하며 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 원물질이 TLC에서 검출되지 않게 사라진 후, 혼합물을 흡입 하에 여과하였다. 여과물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=30:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(150 mg, 수율: 79.4%).
(4) 5-((8-에틸-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥탄-3-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (170 mg, 0.564 mmol), 3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-8-에틸-3,8-다이아자바이시클로[3.2.1]옥테인 (150 mg, 0.564 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐 (54 mg, 0.11 mmol), 세슘 카보네이트 (550 mg, 1.69 mmol) 및 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (52 mg, 0.057 mmol)를 100 ml의 가지-모양 용기에 넣고, 1,4-다이옥산(20 mL)을 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 110℃에서 4시간 동안 반응을 수행하고, 혼합물을 흡입 하에 여과하였다. 여과물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=15:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(120 mg, 수율: 40%).
분자식: C29H34F2N8 분자량: 532.3LC-MS(m/z): 533.3(M+H+)
1H-NMR (400MHz, MeOD-d 4) δ:8.53 (d, J=6.0 Hz, 1H), 8.50(s, 2H), 8.27 (d, J=2.4Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.26(d, J=11.2 Hz, 1H), 4.60(s, 1H), 3.95-4.02 (m, 2H), 3.59(s, 2H), 3.00-3.12 (m, 2H), 2.92(d, J=12.8 Hz, 2H), 2.69(s, 3H), 2.59 (d, J=12.8 Hz,2H), 2.11-2.16 (m, 4H), 1.69 (d, J=6.8Hz, 6H), 1.31-1.35 (m, 3H).
실시예
15: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(피페라진-1-일-메틸)피리미딘-2-아민 (화합물
15)의
제조
(1) tert-부틸 4-(2-클로로피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트의 제조
5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (500 mg, 2.42 mmol)을 테트라하이드로퓨란(15 mL)에 녹이고, tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (372 mg, 2 mmol)와 트리에틸아민(404 mg, 4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 반응 후, 혼하물을 감압 하에 농축하고, 물(15 mL)로 희석한 다음, 아세틱 에테르(20 mL×3)로 추출하였다. 상(phases)들을 분리하였다. 유기상은 황산나트륨 무수물로 건조하고, 여과한 후 농축하였다. 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨에테르:아세틱에테르=1:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(520 mg, 수율: 83%).
(2) tert-부틸 4-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)피페라진-1-카복실레이트의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (302 mg, 1 mmol) 및 4-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)피페라진-1-카복실레이트 (312 mg, 1 mmol)을 1,4-다이옥산 (15 mL)에 녹이고, 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (92 mg, 0.1 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐 (95 mg, 0.2 mmol) 및 세슘 카보네이트 (815 mg, 2.5 mmol)을 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 하룻밤 동안 환류하여 교반하고, 여과하였다. 여과물은 감압하여 농축시켰다. 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=30:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(350 mg, 수율: 60%).
(3) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(피페라진-1-일메틸)피리미딘-2-아민의 제조
tert-부틸 4-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)피페라진-1-카복실레이트 (200 mg, 0.346 mmol)를 다이클로로메테인 (5 mL)에 녹이고, 트리플루오로아세트산(2 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 감압 하에 농축하였다. 다이클로로메테인과 포화 탄산수소나트륨 용액을 첨가하였다. 상(phases)들을 분리하였다. 유기상은 건조, 여과 및 진공에서 농축하였다. 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(0.5%의 트리에닐아민을 첨가한 다이클로로메테인:메탄올=30:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(110 mg, 수율: 67%).
분자식: C25H28F2N8 분자량: 478.5LC-MS(m/z): 479.3(M+H+)
1H-NMR (400MHz, DMSO-d 6)δ: 10.03 (s, 1H), 8.42-8.47 (m, 3H), 8.35 (d, J=2.0Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.23 (d, J=11.6 Hz, 1H), 4.78-4.85 (m, 1H), 3.34 (s, 2H), 2.62-2.66 (m, 7H), 2.20-2.31 (m, 5H), 1.58 (d, J=6.8 Hz, 6H).
실시예
16: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(피페라진-1-일)피리미딘-2-아민 (화합물
16)의
제조
(1) tert-부틸 4-(피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트의 제조
5-브로모피리미딘 (3.16 g, 20 mmol), tert-부틸 피페라진-1-카복실레이트 (3.72 g, 20 mmol), 2,2'-비스(다이페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸(2.49g,4mmol), 세슘 카보네이트(13.0 g,40 mmol) 및 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (1.83 g, 2 mmol)을 100 mL의 가지모양 용기에 넣고; 톨루엔(80 mL)를 첨가하였다. 반응을 90℃에서 질소가스의 보호 하에 12시간 동안 수행하였다. 혼합물을 흡입 하에 여과하고, 여과물을 농축하였고, 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=50:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(3.1 g, 수율: 58.7%).
(2) tert-부틸 4-(2-브로모피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트의 제조
tert-부틸 4-(피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (2.64 g, 10 mmol)를 계량하여 아세토니트릴(125 mL)에 첨가하였다. N-브로모부탄이미드(1.78 g,10 mmol)을 교반하며 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응용액을 농축하였다. 아세틱에테르(100 mL)와 물(100 mL)을 첨가하여 상을 분리하였다. 유기상을 농축한 다음, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=30:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(40 mg, 수율: 1.17%).
(3) tert-부틸 4-(2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (36 mg, 0.12 mmol), tert-부틸 4-(2-브로모피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (40 mg, 0.12 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐 (11.4 mg, 0.024 mmol), 세슘 카보네이트 (97.7 mg, 0.3 mmol) 및 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (11 mg, 0.012 mmol)를 25 mL의 가지모양 용기에 넣고, 1,4-다이옥산(10 mL)을 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 110℃에서 2시간 동안 반응시키고, 최종혼합물을 흡입하에 여과하였다. 여과물을 농축한 다음 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=20:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(15 mg, 수율: 22.2%).
(4) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(피페라진-1-일)피리미딘-2-아민의 제조
tert-부틸 4-(2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (15 mg, 0.027 mmol)을 다이클로로메테인(2 mL)에 녹였다. 트리플루오로아세트산(2 mL)을 교반함 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반하였다. 반응용액을 농축하고, 잔여물을 아세틱 에테르로 희석하였다(10 mL). 암모니아 가스를 용액이 염기성이 될 때까지 주입하였다. 용액을 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=20:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(7 mg, 수율: 56.0%).
분자식: C24H26F2N8 분자량: 464.5LC-MS(m/z): 465.4(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, MeOD-d 4 ) δ: 8.77 (d, J=6.0 Hz, 1H), 8.53 (s, 1H), 8.31 (d, J=2.8 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.81 (s, 1H), 7.30 (d, J=11.2 Hz, 1H), 4.86-4.93 (m, 1H), 3.16-3.18 (m, 4H), 3.04-3.06 (m, 4H), 2.69 (s, 3H), 1.70 (d, J=6.8 Hz, 6H).
실시예
17: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(4-메틸피페라진-1-일)피리미딘-2-아민 (화합물
17)의
제조
(1) N,N-비스(4-메톡시벤질)-5-(4-메틸피페라진-1-일)피리미딘-2-아민의 제조
5-브로모-N,N-비스(4-메톡시벤질)피리미딘-2-아민 (2.0 g, 4.83 mmol)을 톨루엔(20 mL)에 녹이고, N-메틸피페라진 (483 mg, 4.83 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (221 mg, 0.24 mmol), 2,2'-비스(다이페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸 (301 mg, 0.48 mmol) 및 나트륨 tert-부톡사이드 (930 mg, 9.7 mmol)를 첨가하였다. 질소를 주입하여 반응계를 대체하고, 80℃에서 18시간 동안 교반하며 반응을 수행하였다. 혼합물을 실온까지 냉각하고, 여과하였다. 여과물을 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=30:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(859 mg, 수율: 41%).
(2) 5-(4-메틸피페라진-1-일)피리미딘-2-아민의 제조
N,N-비스(4-메톡시벤질)-5-(4-메틸피페라진-1-일)피리미딘-2-아민 (800 mg, 1.8 mmol)을 트리플루오로아세트산(10 mL)과 다이클로로메테인(10 mL)의 혼합용액에 녹였다. 혼합물을 40℃까지 가열하고, 18시간 동안 반응시켰다. 반응용액을 감압 하에 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(285 mg, 수율: 82%).
(3) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(4-메틸피페라진-1-일)피리미딘-2-아민의 제조
5-(4-(다이메틸아미노)피페리딘-1-일)피리미딘-2-아민 (193 mg, 1.0 mmol), 4-플루오로-6-(5-플루오로-2-아이오도피리딘-4-일)1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸 (413 mg, 1.0 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐 (47.7 mg, 0.10 mmol), 세슘 카보네이트 (815 mg, 2.5 mmol) 및 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (45.8 mg, 0.05 mmol)를 1,4-다이옥산(20 mL)에 녹였다. 질소를 주입하여 반응계 내의 공기를 대체하였다. 혼합물을 120℃까지 가열하고, 8시간 동안 반응시키고, 여과하였다. 여과물을 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(52.6 mg, 수율: 11%).
분자식: C25H28F2N8 분자량: 478.6LC-MS(m/z):479.0(M+H+)
1H-NMR (400MHz, DMSO-d 6)δ:9.66 (s, 1H), 8.36 (d, J=6Hz, 1H), 8.29-8.31 (m, 3H), 7.73 (s, 1H), 7.20 (d, J=11.6Hz, 1H), 4.79-4.83 (m, 1H), 3.07-3.10 (m, 4H), 2.61(s, 3H), 2.43-2.46 (m, 4H), 2.20 (s, 3H), 1.57 (d, J=6.8Hz, 6H).
실시예
18: 5
-(4-
에틸피페라진
-1-일)-N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (화합물
18)의
제조
(1) 5-(4-에틸피페라진-1-일)-N,N-비스(4-메톡시벤질)피리미딘-2-아민의 제조
5-브로모-N,N-비스(4-메톡시벤질)피리미딘-2-아민 (800 mg, 1.94 mmol)을 톨루엔(20 mL)에 녹이고, N-에틸피페라진 (330 mg, 2.89 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (89 mg, 0.097 mmol), 2,2'-비스(다이페닐포스피노)-1,1'- 바이나프틸 (121 mg, 0.194 mmol) 및 나트륨 tert-부톡사이드 (372 mg, 3.88 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 질소가스의 보호 하에 80℃에서 18시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온까지 냉각하고, 여과하였다. 여과물을 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(메탄올:다이클로로메테인=0-1:30)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(440 mg, 수율: 51%).
(2) 5-(4-에틸피페라진-1-일)피리미딘-2-아민의 제조
5-(4-에틸피페라진-1-일)-N,N-비스(4-메톡시벤질)피리미딘-2-아민 (440 mg, 0.98 mmol)을 트리플루오로아세트산 (5 mL)에 녹였다. 혼합물을 40℃까지 가열하고, 18시간 동안 반응시켰다. 용매를 감압 하에 제거하여 표제의 화합물을 수득하였고(180 mg, 수율: 89%), 다음 단계에 바로 사용되었다.
(3) 5-(4-에틸피페라진-1-일)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
4-플루오로-6-(5-플루오로-2-아이오도피리딘-4-일)1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸 (359 mg, 0.87 mmol) 및 5-(4-에틸피페라진-1-일)피리미딘-2-아민 (180 mg, 0.87 mmol)을 톨루엔(10 mL)에 녹였다. 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐(80 mg, 0.087 mmol), 4,5-비스(다이페닐포스피노)-9,9-다이메틸잔틴 (50 mg, 0.087 mmol) 및 나트륨 tert-부톡사이드 (209 mg, 2.18 mmol)를 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 100℃까지 가열하고, 16시간 동안 반응시켰다. 혼합물을 실온으로 냉각하고 메탄올(5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 셀라이트로 여과하였다. 여과물을 진공으로 농축하고, 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(메탄올:다이클로로메테인=0-1:10)로 정제하여 백색 고체형태의 표제의 화합물을 수득하였다(18 mg, 수율: 4.2%).
분자식: C26H30F2N8 분자량: 492.6LC-MS(m/z): 493(M+H+)
1H-NMR(400MHz, MeOD-d 4)δ: 8.46 (d, J=5.2 Hz, 1H), 8.34 (s, 2H), 8.22 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.25 (d, J=11.2 Hz, 1H), 4.55-4.62 (m,1H), 3.20-3.28 (m, 4H), 2.80-2.91 (m, 4H), 2.72-2.75 (m, 2H), 2.68 (s, 3H), 1.69 (d, J=6.8 Hz, 6H), 1.22 (t, J=7.2 Hz, 3H).
실시예
19: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(4-(옥사시클로부탄-3-일)피페라진-1-일)피리미딘-2-아민 (화합물
20)의
제조
(1) 6-(2-브로모-5-플루오로피리딘-4-일)-4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d] 이미다졸의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (906 mg, 3.0 mmol)을 아세토니트릴(30 mL)에 녹이고, tert-부틸 나이트라이트(340 mg, 3.3 mmol)을 천천히 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 30분간 교반하고, CuBr2(1.00 g,4.5 mmol)를 첨가하였다. 최종혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 흡입하에 여과하였다. 용매를 로테이션 하에 증류하여 제거하고, 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨 에테르:아세틱에테르=1:1)로 정제하여 표제의 화합물(498 mg, 수율: 45.4%)을 수득하였다.
(2) tert-부틸 4-(2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)피페라진1-카복실레이트의 제조
tert-부틸 4-(2-아미노피리미딘-5-일)피페라진-1-카복실레이트 (380 mg, 1.36 mmol), 6-(2-브로모-5-플루오로피리딘-4-일)-4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸 (498 mg, 1.36 mmol), 세슘 카보네이트 (447 mg, 1.36 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (38 mg) 및 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐 (76 mg)을 1,4-다이옥산(20 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃의 오일배스에서 8시간 동안 가열하고, 용매를 로테이션 하에 증류하여 제거하였다. 잔여물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨 에테르:아세틱에테르=10:1-1:1)로 정제하여 표제의 화합물(256 mg, 수율: 33.3%)을 수득하였다.
(3) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(4-(옥사시클로부탄-3-일)피페라진-1-일)피리미딘-2-아민의 제조
N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(피페라진-1-일)피리미딘-2-아민 (170 mg, 0.366 mmol)을 메탄올(5 mL)에 녹이고, 3-옥세타논(39.5 mg, 0.549 mmol)을 점적하여 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 나트륨 시아노보로하이드라이드(34.6 mg, 0.549 mmol)을 천천히 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분간 추가로 교반하였다. 용매를 로테이션 하에 증류하여 제거하고, 잔여물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 정제하여 생성물을 수득하였다(82 mg, 수율: 42.1%).
분자식: C27H30F2N8O 분자량: 520.6 LC-MS (m/z): 521.3(M+H+)
1H-NMR(400 MHz, MeOD) δ: 8.47 (m, J = 6.4 Hz, 1H), 8.30 (s, 2H), 8.20 (d, J = 2.4Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.26 (d, J = 8.0Hz, 1H), 4.72 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.59-4.64 (m, 3H), 3.50-3.55 (m, 1H), 3.19 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 2.68 (s, 3H), 2.52 (t, J = 4.8 Hz, 4H), 1.68 (d, J = 6.8Hz, 6H).
실시예
20: 5
-(4-(
다이메틸아미노
)피페리딘-1-일)-N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (화합물
21)의
제조
(1) 5-(4-(다이메틸아미노)피페리딘-1-일)-N,N-비스(4-메톡시벤질)피리미딘- 2-아민의 제조
질소가스의 보호 하에, 반응 용기 안에 있는 톨루엔 (50 mL)에 5-브로모-N,N-비스(4-메톡시벤질)-피리미딘-2-아민 (2.0 g, 4.84 mmol), N,N-다이메틸피페리딘-4-아민 (620 mg, 4.84 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (221 mg, 0.24 mmol), 2,2'-비스(다이페닐포스피노)-1,1'-바이나프틸 (301 mg, 0.48 mmol) 및 나트륨 tert-부톡사이드 (930 mg, 9.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃로 가열하고, 16시간 동안 반응시켰다.
반응 후 혼합물을 실온으로 냉각, 여과하였고, 여과물은 농축 후 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨에테르:아세틱 에테르=5:1)로 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(758 mg, 수율: 34%).
(2) 5-(4-(다이메틸아미노)피페리딘-1-일)피리미딘-2-아민의 제조
5-(4-(다이메틸아미노)피페리딘-1-일)-N,N-비스(4-메톡시벤질)피리미딘-2- 아민 (758 mg, 1.64 mmol)을 녹인 다이클로로메테인 (20 mL) 용액에 트리플루오로아세트산 (10 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 40 ℃로 가열하고, 16시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 반응 용액을 실온으로 냉각, 농축시키고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=20:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(282 mg, 수율: 78%).
(3) 5-(4-(다이메틸아미노)피페리딘-1-일)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
5-(4-(다이메틸아미노)피페리딘-1-일)피리미딘-2-아민 (282 mg, 1.28 mmol), 4-플루오로-6-(5-플루오로-2-아이오도피리딘-4-일)-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸 (528 mg, 1.28 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐 (61 mg, 0.13 mmol), 세슘 카보네이트 (1.2 g, 3.7 mmol) 및 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (58 mg, 0.06 mmol)를 1,4-다이옥산 (20 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 반응을 120℃에서 2시간 동안 수행하고, 흡입 하에 여과하였다. 여과물을 농축하고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(40 mg, 수율: 6%).
분자식: C27H32F2N8 분자량: 506.6LC-MS(m/z): 507.1(M+H+)
1H-NMR(400 MHz, MeOD) δ: 8.46 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.34 (s, 2H), 8.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.25 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.57 (s, 1H), 3.71-3.76 (m, 2H), 2.96-3.11 (m, 1H), 2.77-2.83 (m, 2H ), 2.72 (s, 6H), 2.68 (s, 3H), 2.11-2.14 (m, 2H), 1.78-1.82 (m, 2H), 1.69 (d, J = 6.8 Hz, 6H).
실시예
21: 5
-(4-(
시클로프로필메틸
)피페라진-1-일)-N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (화합물
22)의
제조
(1) 5-(4-(시클로프로필메틸)피페라진-1-일)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(피페라진-1-일)피리미딘-2-아민 (90 mg, 0.194 mmol)을 메탄올(5 mL)에 녹이고, 시클로프로페인카복스알데히드(cyclopropanecarboxaldehyde) (68 mg, 0.97 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 30분간 교반하였다. 나트륨 시아노보로하이드라이드 (122 mg, 1.94 mmol)를 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 20℃에서 16시간 동안 교반하였다. 물 (10 mL) 및 아세틱 에테르 (20 mL)를 첨가하여 상을 분리하였다. 유기상을 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(19 mg, 수율: 18.9%).
분자식: C28H32F2N8 분자량: 518.6LC-MS(m/z): 519.2(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, MeOD) d: 8.41 (s, 1H), 8.09-8.20 (m, 3H), 7.74 (s, 1H), 7.17-7.19 (m, 1H), 4.89-4.91(m, 1H), 2.95-3.15 (m, 4H), 2.68 (s, 3H), 2.52-2.68 (m, 4H), 2.26-2.29 (m, 2H), 1.67 (d, J = 6.8Hz, 6H), 1.29-1.31 (m, 1H), 0.55-0.57 (m, 2H), 0.21-0.29 (m, 2H).
실시예
22: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-b]피롤-5(1H)-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물
23)의
제조
(1) tert-부틸 (시스)-5-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)헥사하이드로피롤로[3,4-b] 피롤-1(2H)-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-b]피롤-1(2H)-카복실레이트 (250 mg, 1.18 mmol)와 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (490 mg, 2.37 mmol)를 계량하여 테트라하이드로퓨란 (10 mL)에 첨가하고, 트리에틸아민 (238 mg, 2.36 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 최종 혼합물을 바로 농축하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨에테르:아세틱 에테르=3:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(300 mg, 수율: 75.2%).
(2) tert-부틸 (시스)-5-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)헥사하이드로피롤로[3,4-b]피롤-1(2H)-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (시스)-5-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)헥사하이드로피롤로[3,4-b]피롤-1(2H)-카복실레이트 (300 mg, 0.89 mmol), 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (269 mg, 0.89 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐 (87 mg, 0.18 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐(82 mg, 0.09 mmol) 및 세슘 카보네이트 (587 mg, 1.8 mmol)를 계량하여 1,4-다이옥산 (5 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃까지 가열하여 16시간 동안 반응하였다. 혼합물을 흡입 하에 여과하고, 여과물을 농축하였으며, 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=30:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(370 mg, 수율: 68.7%).
(3) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(((시스)-헥사하이드로피롤로[3,4-b]피롤-5(1H)-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
tert-부틸 (시스)-5-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)헥사하이드로피롤로[3,4-b]피롤-1(2H)-카복실레이트 (370 mg, 0.61 mmol)을 계량하고, 다이클로로메테인 (8 mL)에 녹였다. 트리플루오로아세트산 (1 mL)를 아이스 배스 조건 하에 첨가하였다. 그런 다음 혼합물을 실온으로 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 반응용액을 로테이션 하에 증류시키고, 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹여, 탄산수소나트륨으로 중화한 뒤 농축하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=15:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(250 mg, 수율: 81.2%).
분자식: C27H30F2N8 분자량: 504.6LC-MS(m/z): 505.3(M+H+)
1H-NMR (400MHz, MeOD-d 4)δ:8.51-8.54(m,3H),8.28(d,J=2.4 Hz, 1H), 7.80 (s, 1H), 7.27 (d, J=11.2 Hz, 1H), 4.85-4.95 (m, 1H), 4.12-4.18 (m, 1H), 3.58 (s, 2H), 3.35-3.42 (m, 1H), 3.16-3.27 (m, 1H), 3.08-3.15 (m, 1H), 2.96-3.05 (m, 1H), 2.77-2.83 (m, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.40-2.55 (m, 2H), 2.15-2.28 (m, 1H), 1.85-1.95 (m, 1H), 1.69 (d, J=7.2 Hz, 6H).
실시예
23: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((시스)-옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b]피리딘-6-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물
24)의
제조
(1) tert-부틸 (시스)-6-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-1H-피롤로 [3,4-b]피리딘-1-카복실레이트의 제조
5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (183.4 mg, 0.884 mmol)을 테트라하이드로퓨란(10 mL)에 녹이고, 트리에틸아민 (134.3 mg, 1.33 mmol) 및 tert-부틸 (시스)-옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-b]피리딘-1-카복실레이트(100 mg, 0.442 mmol)을 교반하면서 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 흡입 하에 여과하였다. 여과물을 농축하고, 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=100:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(102 mg, 수율: 65.4%).
(2) tert-부틸 (시스)-6-((2-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조 [d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-b]피리딘-1-카복실레이트의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (85.6 mg, 0.283 mmol), tert-부틸 (시스)-6-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-b] 피리딘-1-카복실레이트 (100 mg, 0.283 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐 (27 mg, 0.0566 mmol), 세슘 카보네이트 (276.6 mg, 0.849 mmol) 및 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (25.9 mg, 0.0283 mmol)을 1,4-다이옥산 (10 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 반응을 110℃에서 6시간 동안 수행하고, 혼합물을 흡입 하에 여과하였다. 여과물을 농축하고, 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=50:1)로 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(80 mg, 수율: 45.6%).
(3) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(((시스)-옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b]피리딘-6-일)메틸)피리미딘-2-아민 의 제조
tert-부틸 (시스)-6-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-b]피리딘-1-카복실레이트 (80 mg, 0.129 mmol)을 다이클로로메테인 (5 mL)에 녹였다. 트리플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 후, 혼합물을 포화 탄산수소나트륨 용액으로 세척하고 유기상과 수상으로 분리하였다. 유기상을 황산나트륨 무수물로 건조하고 농축하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=20:1)로 분리하여 백색 고체 형태의 표제의 화합물을 수득하였다(30 mg, 수율: 44.8%).
분자식: C28H32F2N8 분자량: 518.6LC-MS(m/z): 519.3(M+H+)
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 9.31 (s, 1H), 8.66 (d, J=6.0 Hz, 1H), 8.55 (s, 2H), 8.37 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.24-7.26 (m, 1H), 4.65-4.75 (m, 1H), 3.71 (s, 2H), 3.22-3.25 (m, 1H), 2.84-2.94 (m, 3H), 2.68-2.72 (m, 6H), 2.39-2.48 (m, 1H), 1.58-1.73 (m, 11H).
실시예
24: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((시스)-옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-b]피리딘-1-일)메틸)피리미딘-2-아민(화합물
25)의
제조
(1) tert-부틸 (시스)-1-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-6H-피롤로 [3,4-b]피리딘-6-카복실레이트 의 제조
5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (183.4 mg, 0.884 mmol)을 테트라하이드로퓨란(10 mL)에 녹이고, 트리에틸아민 (134.3 mg, 1.33 mmol)과 tert-부틸 (시스)-옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b]피리딘-6-카복실레이트 (100 mg, 0.442 mmol)을 교반하며 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 혼합물을 흡입 하에 여과하고, 여과물을 농축하고, 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=100:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(125 mg, 수율: 80.1%).
(2) tert-부틸 (시스)-1-((2-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조 [d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b]피리딘-6-카복실레이트의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (85.6 mg, 0.283 mmol), tert-부틸 (시스)-1-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b] 피리딘-6-카복실레이트 (100 mg, 0.283 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’- 트리아이소프로필바이페닐 (27 mg, 0.0566 mmol), 세슘 카보네이트 (276.6 mg, 0.849 mmol) 및 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (25.9 mg, 0.0283 mmol)를 1,4-다이옥산 (10 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 반응을 110℃에서 6시간동안 수행하였다. 혼합물을 흡입 하에 여과하고, 여과물을 농축하였고, 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인: 메탄올=50:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(95 mg, 수율: 54.2%).
(3) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(((시스)-옥타하이드로-1H-피롤로[3,4-b]피리딘-1-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
tert-부틸 (시스)-1-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)옥타하이드로-6H-피롤로[3,4-b]피리딘-6-카복실레이트 (95 mg, 0.154 mmol)을 다이클로로메테인 (5 mL)에 녹였다. 트리플루오로아세트산 (1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 후, 혼합물을 포화 탄산수소나트륨 용액으로 세척하였다. 유기상을 황산나트륨 무수물로 건조하고, 농축하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 분리하여 백색 고체 형태의 표제의 화합물을 수득하였다(40 mg, 수율: 50.3%).
분자식: C28H32F2N8 분자량: 518.6LC-MS(m/z): 519.3(M+H+)
1H-NMR (400MHz, CDCl3)δ:10.30(s,1H),8.69(d,J=6.0 Hz, 1H), 8.62 (s, 2H), 8.49 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.25 (d, J=10.8 Hz, 1H), 4.68-4.75 (m, 1H), 3.81-3.92 (m, 2H), 3.27-3.41 (m, 3H), 3.09 (d, J=13.6 Hz, 1H), 2.92 (s, 1H), 2.84(d, J=10.8 Hz, 1H), 2.68 (s, 3H), 2.48-2.55 (m, 1H), 1.95-2.01 (m, 1H), 1.48-1.72 (m, 10H).
실시예
25: 5
-(((
1S,6R
)-3,8-
다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄
-8-일)
메틸
)-N- (5-
플루오로
-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (화합물
26)의
제조
(1) tert-부틸 (1S,6R)-8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로 [4.2.0]옥탄-3-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (1S,6R)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (240 mg, 1.13 mmol) 및 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (352 mg, 1.70 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (20 mL)에 첨가하고, 트리에틸아민 (228 mg, 2.26 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 바로 농축하고, 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=50:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(310 mg, 수율: 81.0%).
(2) tert-부틸 (1S,6R)-8-((2-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H 벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (1S,6R)-8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (310 mg, 0.91 mmol), 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (275 mg, 0.91 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’- 트리아이소프로필바이페닐 (86 mg, 0.18 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (82 mg, 0.09 mmol) 및 세슘 카보네이트 (743 mg, 2.28 mmol)를 계량하고 1,4-다이옥산 (40 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃까지 가열하고, 16시간 동안 반응시켰다. 혼합물을 흡입 하에 여과, 여과물을 농축하고, 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=30:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(340 mg, 수율: 61.8%).
(3) 5-(((1S,6R)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-8-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
tert-부틸 (1S, 6R)-8-((2-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (340 mg, 0.56 mmol)을 계량하고, 다이클로로메테인 (8 mL)에 첨가하였다. 트리플루오로아세트산 (6 mL)를 아이스 배스 조건 하에 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온까지 가온하고 2시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 농축하고 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹이고, 탄산수소나트륨으로 중화시키고 농축하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(260 mg, 수율: 92.1%).
1H-NMR (400MHz, MeOD-d 4) δ: 8.54 (d, J=6.4Hz, 1H), 8.52 (s, 2H), 8.27 (d, J=2.4Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.24 (d, J=11.2Hz, 1H), 4.87-4.92 (m, 1H), 3.76 (d, J=13.2Hz, 1H), 3.38-3.47 (m, 3H), 3.35 (s, 3H), 3.18 (d, J=14.0Hz, 1H), 2.91-3.07 (m, 3H), 2.84-2.88 (m, 1H), 2.48-2.52 (m, 1H), 2.17-2.21 (m, 1H), 2.01-2.07 (m, 1H), 1.69 (d, J=6.8Hz, 6H).
실시예
26: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((1S,6R)-3-메틸-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-8-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물 27)의 제조
N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(((1S,6R)-3-메틸-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-8-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
5-(((1S,6R)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-8-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (100 mg, 0.20 mmol)을 메탄올 (4 mL)에 첨가하였다. 아이스 배스 조건 하에서, 수용성 포름알데히드 용액 (0.5 mL, 37%)과 나트륨 시아노보로하이드라이드 (100 mg, 1.6 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온까지 가온하고 1시간 동안 교반하였다.
반응용액을 정제 박막 크로마토 그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)를 수행하여 표제의 화합물을 수득하였다(70 mg, 수율: 68.1%).
분자식: C28H32F2N8 분자량: 518.6LC-MS(m/z): 519.3(M+H+)
1H-NMR (400MHz, MeOD-d 4) δ: 8.55 (d, J=6.4Hz, 1H), 8.52 (s, 2H), 8.25 (d, J=2.4Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.27 (d, J=11.6Hz, 1H), 4.85-4.89 (m, 1H), 3.68 (d, J=12.8Hz, 1H), 3.39 (d, J=13.2Hz, 1H), 3.23-3.28 (m, 1H), 2.91-2.93 (m, 2H), 2.78 (d, J=12.4Hz, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.17-2.25 (m, 1H), 1.96-2.02 (m, 3H), 1.88-1.95 (m, 1H), 1.69 (d, J=7.2Hz, 6H).
실시예
27: 5
-(((
1R,6S
)-3,8-
다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄
-8-일)
메틸
)-N- (5-
플루오로
-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (화합물 28)의 제조
(1) tert-부틸 (1R,6S)-8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로 [4.2.0]옥탄-3-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (1R,6S)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (200 mg, 0.94 mmol) 및 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (390 mg, 1.88 mmol)을 테트라하이드로퓨란(10 mL)에 첨가하고, 트리에틸아민 (285 mg, 2.82 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하고, 바로 농축하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨 에테르:아세틱 에테르=3:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(195 mg, 수율: 61.7%).
(2) tert-부틸 (1R,6S)-8-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (1R,6S)-8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (100 mg, 0.30 mmol), 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (90 mg, 0.30 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’-트리아이소프로필바이페닐 (30 mg, 0.06 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (28 mg, 0.03 mmol) 및 세슘 카보네이트 (295 mg, 0.91 mmol)를 계량하여 1,4-다이옥산 (5 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃까지 가열하고, 16시간 동안 반응하였다. 혼합물을 흡입 하에 여과하고, 여가물을 농축하고, 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=30:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(104 mg, 수율: 56.7%).
(3) 5-(((1R,6S)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-8-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4- 플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
tert-부틸 (1R,6S)-8-((2-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (104 mg, 0.17 mmol)을 계량하여 다이클로로메테인 (8 mL)에 첨가하였다. 트리플루오로아세트산 (1 mL)를 아이스 배스 조건 하에 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온까지 가온하고, 2시간 동안 교반하였다. 반응용액을 로테이션 하에 증류시키고, 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹이고, 탄산수소나트륨으로 중화한 뒤, 농축하였다. 조생성물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=15:1)로 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(44 mg, 수율: 52.9%).
분자식: C27H30F2N8 분자량: 504.6LC-MS(m/z): 505.3(M+H+)
1H-NMR (400MHz, CDCl3) δ: 8.64 (d, J=6.0 Hz, 1H), 8.44 (s, 2H), 8.23 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 7.26-7.29 (m, 1H), 4.68-4.83 (m, 1H), 3.60-3.63 (m, 1H), 3.31-3.40 (m, 1H), 2.95-3.09 (m, 3H), 2.83-2.93 (m, 1H), 2.75-2.80 (m, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.60-2.65 (m, 1H), 2.20-2.40 (m, 2H), 1.85-2.05 (m, 2H), 1.69 (d, J=6.8Hz, 6H).
실시예
28: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((1R,6S)-3-메틸-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-8-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물 29)의 제조
(1) tert-부틸 (1R,6S)-8-(2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0] 옥탄-3-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (1R,6S)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (100 mg, 0.47 mmol) 및 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (97.5 mg, 0.47 mmol)을 테트라하이드로퓨란 무수물(10 mL)에 녹이고, 트리에틸아민 (71.2 mg, 0.71 mmol)을 점적하여 첨가하였다. 반응을 실온에서 4시간 동안 수행하였다. 반응 혼합물을 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(용출액은 다이클로로메테인:메탄올=30:1이었음)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(97.3 mg, 수율: 61%).
(2) tert-부틸 (1R,6S)-8-((2-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (84.6 mg, 0.28 mmol) 및 tert-부틸 (1R,6S)-8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로 [4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (95 mg, 0.28 mmol)을 1,4-다이옥산 (15 mL)에 녹이고, 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (25.6 mg, 0.028 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’- 트리아이소프로필바이페닐 (26.7 mg, 0.056 mmol) 및 세슘 카보네이트 (273.7 mg, 0.84 mmol)을 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃까지 가열하고, 8시간 동안 반응하였다. 혼합물을 실온으로 냉각하고 농축하였다. 물 (30 mL) 및 아세틱 에테르 (50 mL)를 첨가하여 유기상을 수상으로부터 분리하였다. 수상은 아세틱 에테르(50 mL×2)로 추출하고, 유기상은 결합하여 포화 NaCl 용액으로 세척하고, 황산나트륨 무수물로 건조한 뒤, 농축하였다. 조생성물은 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=20:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(88.2 mg, 수율: 52%).
(3) 5-(((1R,6S)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-8-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
tert-부틸 (1R,6S)-8-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (88 mg, 0.146 mmol)을 다이클로로메테인 (5 mL)에 첨가하였다. 트리플루오로아세트산 (1 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 증류하여 제거하였다. 잔여물은 포화 탄산수소나트륨 용액으로 pH 8로 조절하고, 다이클로로메테인: 메탄올 (10:1) (20 mL×3)의 혼합 용액으로 추출하였다. 유기상은 결합하여 황산나트륨 무수물로 건조하고, 농축하여 표제의 화합물(100 mg 조생성물)을 수득하였고, 정제없이 바로 다음 단계에 사용되었다.
(4) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(((1R,6S)-3-메틸-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-8-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
5-(((1R,6S)-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-8-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (100 mg 조생성물)을 메탄올 (5 mL)에 녹이고, 수용성 포름알데히드 용액 (37%, 118 mg, 1.46 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응을 2시간 동안 수행하고, 나트륨 시아노보로하이드라이드 (91.7 g, 1.46 mmol)를 첨가하고 실온에서 1시간 동안 추가로 교반하였다. 반응 후, 페트롤륨 에테르(50 mL)를 반응 용액에 첨가하고, 용액을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 정제하여 표제의 화합물을 수득하였다(20 mg, 2단계 수율: 26.4%).
분자식: C28H32F2N8 분자량: 518.6LC-MS(m/z): 519.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, MeOD-d 4)δ: 8.55 (d, J=6.0 Hz, 1H), 8.52 (s, 2H), 8.27 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.25 (d, J=11.2 Hz, 1H), 4.86-4.92 (m, 1H), 3.68 (d, J=13.2 Hz, 1H), 3.37 (d, J=13.2 Hz, 1H), 3.27-3.31 (m, 1H), 2.89-2.95 (m, 2H), 2.85 (d, J=11.6 Hz, 2H), 2.68 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.23-2.25 (m, 1H), 2.01-2.07 (m, 5H), 1.69 (d, J=6.8 Hz, 6H).
실시예
29: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((시스)-6-메틸-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-8-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물 30)의 제조
(1) tert-부틸 (시스)-8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-6-메틸-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트의 제조
트리에틸아민 (336 mg, 3.33 mmol)을 tert-부틸 (시스)-6-메틸-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (250 mg, 1.11 mmol) 및 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (660 mg, 3.19 mmol)을 테트라하이드로퓨란(20 mL)에 녹인 용액에 첨가하고, 혼합물을 20℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 후, 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔여물을 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨 에테르: 아세틱 에테르=2:1)로 분리하여 생성물을 수득하였다(200 mg, 수율: 51.2%).
(2) tert-부틸 (시스)-8-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-6-메틸-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (시스)-8-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-6-메틸-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (200 mg, 0.57 mmol), 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (206 mg, 0.68 mmol), 세슘 카보네이트 (370 mg, 1.14 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (26 mg, 0.029 mmol) 및 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’- 트리아이소프로필바이페닐 (27 mg, 0.057 mmol)을 1,4-다이옥산 (5 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃의 오일 배스에서 8시간 동안 가열하였다. 반응 후, 반응 용액을 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 정제하여 생성물을 수득하였다(50 mg, 수율: 14.2%).
(3) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(((시스)-6-메틸-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-8-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
tert-부틸 (시스)-8-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-6-메틸-3,8-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (50 mg, 0.08 mmol)을 다이클로로메테인 (5 mL)에 첨가하였다. 트리플루오로아세트산 (3 mL)를 점적하여 반응계에 첨가하였다. 혼합물을 20℃에서 5시간 동안 혼합하였다. 반응 후, 반응 용액을 감압 하에 농축하고, 잔여물을 다이클로로메테인에 녹이고, 트리에틸아민 (2 mL)을 점적하여 첨가하였다. 감압증류로 추가 농축한 후, 잔여물 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=5:1)로 분리하여 생성물을 수득하였다(12 mg, 수율: 28.6%).
분자식: C28H32F2N8 분자량: 518.6LC-MS(m/z): 519.3(M+H+)
1H-NMR(400 MHz, MeOD) δ: 8.52 (brs, 3H), 8.27 (brs, 1H), 7.79 (brs, 1H), 7.27 (brs, 1H), 4.60-4.68 (m, 1H), 3.73-3.81 (m, 1H), 3.43-3.46 (m, 1H), 3.06-3.14 (m, 3H), 2.90-3.03 (m, 2H), 2.68-2.73 (m, 4H), 2.19 (m, 1H), 1.82-1.85 (m, 1H), 1.69 (s, 6H), 0.80-0.90 (m, 2H).
실시예
30: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((시스)-1-메틸-3,7-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-7-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물 31)의 제조
(1) tert-부틸 (시스)-7-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-1-메틸-3,7- 다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (시스)-1-메틸-3,7-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (0.12 g, 0.53 mmol) 및 트리에틸아민 (0.11 g, 1.09 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (5 mL)에 녹이고, 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (0.13 g, 0.63 mmol)을 첨가하엿다. 반응을 25 ℃에서 18시간 동안 교반하며 수행하였다. 반응용액을 농축하고 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨에테르:아세틱에테르=5:1)로 정제하여 황색 고체 형태의 표제의 화합물을 수득하였다(0.15 g, 수율: 80.2%).
(2) tert-부틸 (시스)-7-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-1-메틸-3,7-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트의 제조
5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (0.1 g, 0.33 mmol) 및 tert-부틸 (시스)-7-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-1-메틸-3,7-다이아자바이시클로 [4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (0.11 g, 0.31 mmol)을 1,4-다이옥산 (10 mL)에 녹이고, 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (0.03 g, 0.03 mmol), 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’- 트리아이소프로필바이페닐(0.02g, 0.04 mmol) 및 세슘 카보네이트 (0.2 g, 0.61 mmol)를 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 100℃로 가열하고, 교반하면서 6시간 동안 반응하였다. 반응용액을 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=50:1)로 정제하여 황색 고체 형태의 표제의 화합물을 수득하였다(0.12 g, 수율: 62.2%).
(3) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(((시스)-1-메틸-3,7-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-7-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
tert-부틸 (시스)-7-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-1-메틸-3,7-다이아자바이시클로[4.2.0]옥탄-3-카복실레이트 (0.12 g, 0.19 mmol)을 다이클로로메테인 (5 mL)에 녹였다. 트리플루오로아세트산 (3 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하며 반응시켰다. 반응 용액을 농축하였다. 아세틱 에테르(30 mL)를 첨가하였다. 수용성 포화 탄산수소나트륨 수용액(10mL×2)을 세척에 사용하였다. 유기상을 황산나트륨 무수물로 건조하고 여과하였다. 여과물을 농축한 다음, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=20:1)를 수행하여 황색 고체 상태의 표제의 화합물을 수득하였다(58 mg, 수율: 47.2%).
분자식: C28H32F2N8 분자량: 518.62LC-MS(m/z): 519.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ: 10.07 (s, 1H), 9.08 (brs, 1H), 8.46 (s, 2H), 8.42 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.23 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.77-4.85 (m, 1H), 3.62 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.14 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 2.93-3.08 (m, 6H), 2.62 (s, 3H), 2.54 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 1.72-1.79 (m, 1H), 1.57 (d, J = 7.2 Hz, 6H), 1.47-1.56 (m, 1H), 1.15-1.29 (m, 4H).
실시예
31: (((
1S,5S
)-3,6-
다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄
-3-일)
메틸
)-N- (5-
플루오로
-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (화합물 32)의 제조
(1) tert-부틸 (1R,5S)-3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로 [3.2.0]헵탄-6-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (1R,5S)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-6-카복실레이트 (350.0 mg, 1.77 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (15 mL)에 녹이고, 트리에틸아민 (715.0 mg, 7.08 mmol) 및 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (734.0 mg, 3.54 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 2시간 동안 추가로 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응용액을 농축하고, 아세틱 에테르(50 mL)와 물(30 mL)을 첨가하여 상을 분리하였다. 수상을 아세틱 에테르(30 mL)로 추출하고, 유기상을 결합, 농축하고, 잔여물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨에테르:아세틱 에테르=1:1)로 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(500 mg, 수율: 87.0%).
(2) tert-부틸 (1R,5S)-3-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]옥탄-6-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (1R,5S)-3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-6-카복실레이트 (500.0 mg, 1.54 mmol), 및 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d] 이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (465.5 mg, 1.54 mmol)을 1,4-다이옥산 (15 mL)에 녹이고, 세슘 카보네이트 (1.0 g, 3.08 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (141.0 mg, 0.154 mmol) 및 2-다이시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리아이소프로필바이페닐 (147.0 mg, 0.308 mmol)을 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃로 가열하고, 16시간 동안 반응시켰다. 반응용액을 여과하였다. 여과물을 농축하고, 잔여물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(400 mg, 수율: 44.0%).
(3) (((1S,5S)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-3-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4- 플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
tert -부틸 (1R,5S)-3-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]옥탄-6-카복실레이트 (300 mg, 0.508 mmol)을 다이클로로메테인 (5 mL)과 트리플루오로아세트산 (2 mL)의 혼합 용액에 녹였다. 혼합물을 20℃에서 30분간 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 다이클로로메테인 (10 mL)을 첨가하였다. 추가로 농축한 후, 잔여물을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(160 mg, 수율: 64.2%).
분자식: C26H28F2N8 분자량: 490.6LC-MS(m/z): 491.3(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d 6 )d: 10.04 (s, 1H), 8.58 (s, 2H), 8.44 (d, J = 6.0Hz, 1H)，8.36 (d, J = 2.4Hz, 1H)，7.75(s, 1H), 7.22 (d, J = 11.2Hz, 1H)，4.81-4.86 (m, 1H)，4.62-4.67 (m, 1H), 3.87-3.92 (m, 1H), 3.74 (d, J = 14.0Hz, 1H), 3.63 (d, J = 13.6Hz, 1H)，3.49-3.55 (m, 2H), 3.18-3.21 (m, 1H), 3.05-3.11 (m, 1H), 2.96 (d, J = 8.0Hz, 1H), 2.62 (s, 3H), 2.11-2.19 (m, 2H), 1.57 (d, J = 7.2Hz, 6H).
실시예
32: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((1R,5S)-6-메틸-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-3-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물 33)의 제조
(1) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(((1R,5S)-6-메틸-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-3-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
5-(((1S,5S)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-3-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (100 mg, 0.204 mmol)을 메탄올 (5 mL)에 녹이고, 수용성 포름알데히드 용액(0.5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 0.5시간 동안 교반하고, 나트륨 시아노보로하이드라이드 (64.0 mg, 1.01 mmol)를 용액에 첨가하고, 0.5시간 동안 추가로 교반하였다. 샘플을 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=5:1)로 바로 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(20 mg, 수율: 19.4%).
분자식: C27H30F2N8 분자량: 504.6LC-MS(m/z): 505.2(M+H+)
1H-NMR (400 MHz, MeOD) d: 8.60 (s, 2H), 8.55 (d, J = 6.0Hz, 1H), 8.26 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.26 (d, J = 11.2Hz, 1H), 4.90-4.93 (m, 1H), 4.62-4.71 (m, 1H), 3.91-3.98 (m, 1H), 3.82 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.63 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 3.23-3.25 (m, 1H), 3.04-3.06 (m, 1H), 2.88 (brs, 3H), 2.69 (s, 3H), 2.35-2.38 (m, 1H), 2.18-2.26 (m, 2H), 2.02-2.04 (m, 1H), 1.69 (d, J = 7.2 Hz, 6H).
실시예
33: 5
-(((
1R,5R
)-3,6-
다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄
-3-일)
메틸
)-N-(5-
플루오로
-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민 (화합물 34)의 제조
(1) tert-부틸 (1S,5R)-3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로 [3.2.0]헵탄-6-카복실레이트의 제조
트리에틸아민 (0.77 g, 7.57 mmol)을 tert-부틸 (1S,5R)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-6-카복실레이트 (500 mg, 2.52 mmol) 및 5-브로모메틸-2-클로로피리미딘 (784 mg, 3.78 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (20 mL)에 녹인 용액에 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 후, 용액을 감압 하에 농축하고, 칼럼 크로마토그래피(페트롤륨에테르:아세틱 에테르=2:1)로 분리하여 생성물을 수득하였다(750 mg, 수율: 91.6%).
(2) tert -부틸 (1S,5R)-3-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H- 벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-6-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (1S,5R)-3-((2-클로로피리미디닐-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-6-카복실레이트 (200 mg, 0.62 mmol), 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸 -6-일)피리딘-2-아민 (223 mg, 0.78 mmol), 세슘 카보네이트 (401 mg, 1.23 mmol), Pd2(dba)3(11mg,0.012mmol), 및 X-Phos(11 mg,0.024mmol)를 1,4-다이옥산(5mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃에서 8시간 동안 반응하였다. 반응 후, 혼합물을 감압 하에 농축하고, 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 분리하여 생성물을 수득하였다(210 mg, 수율: 57.7%).
(3) 5-(((1R,5R)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-3-일)메틸)-N-(5-플루오로-4-(4- 플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)피리미딘-2-아민의 제조
tert-부틸 (1S,5R)-3-((2-((5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)아미노)피리미딘-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-6-카복실레이트 (210 mg, 0.36 mmol)을 다이클로로메테인 (10 mL)에 첨가하였다. 트리플루오로아세트산 (3 mL)를 점적하여 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 후, 반응용액을 감압 하에 농축하였다. 잔여물을 다이클로로메테인에 녹이고, 트리에틸아민 (2 mL)을 점적하여 첨가하였다. 감압 하에 추가로 농축한 후, 잔여물을 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=5:1)로 분리하여 생성물을 수득하였다(120 mg, 수율: 68.8%).
분자식: C26H28F2N8 분자량: 490.6LC-MS(m/z): 491.3(M+H+)
1H-NMR(400 MHz, CDCl3)δ: 8.60 (s, 2H), 8.55 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.27 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.79 (s, 1H), 7.27 (d, J = 11.2 Hz, 1H), 4.56-4.61 (m, 1H), 3.91 (t, J = 9.6 Hz, 1H), 3.75 (q, J = 12.4 Hz, 2H), 3.52-3.62 (m, 1H), 3.12-3.26 (m, 2H), 3.01 (d, J = 10.0 Hz, 1H), 2.68 (s, 3H), 2.22-2.35 (m, 1H), 2.15-2.22 (m, 1H), 1.89 (s, 1H), 1.69 (d, J = 10.0 Hz, 6H).
실시예
34: N-(5-
플루오로
-4-(4-
플루오로
-1-
아이소프로필
-2-
메틸
-1H-
벤조
[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-일)-5-(((1S,5R)-6-메틸-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-3-일)메틸)피리미딘-2-아민 (화합물 35)의 제조
(1) tert-부틸 (1S,5R)-3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로 [3.2.0]헵탄-6-카복실레이트의 제조
tert-부틸 (1S,5R)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-6-카복실레이트 (256 mg, 1.29 mmol), 5-(브로모메틸)-2-클로로피리미딘 (267 mg, 1.29 mmol) 및 탄산칼륨 (178 mg, 1.29 mmol)을 아세토니트릴(15mL)에 첨가하고, 혼합물을 60℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응용액을 농축하고, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 정제하여 표제의 생성물을 수득하였다(300 mg, 수율: 71.6%).
(2) (1R,5R)-3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵테인의 제조
tert-부틸 (1S,5R)-3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-6-카복실레이트 (300 mg, 0.92 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)과 트리플루오로아세트산 (3 mL)의 혼합용액에 녹이고, 실온에서 30분간 교반하였다. 반용용액을 농축하고, 소량의 다이클로로메테인을 첨가하였다. 혼합물을 다시 농축하여 조생성물(201 mg)을 수득하였다. 생성물을 정제없이 다음 단계에 사용하였다.
(3) (1S,5R)-3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-6-메틸-3,6-다이아자바이시클로 [3.2.0]헵테인의 제조
(1R,5R)-3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵테인(201 mg, 0.89 mmol)을 메탄올 (10 mL)에 녹이고, 수용성 포름알데히드 용액(40%, 0.67 mL, 8.9 mmol)을 점적하여 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 나트륨 시아노보로하이드라이드 (561 mg, 8.9 mmol)를 천천히 첨가하였다. 첨가 후, 혼합물을 실온에서 30분간 추가로 교반하였다. 반응용액을 농축하고, 칼럼 크로마토그래피(다이클로로메테인:메탄올=10:1)로 정제하여 생성물을 수득하였다(124 mg, 2-단계 수율: 56.2%).
(4) N-(5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일) 피리딘-2-일)-5-(((1S,5R)-6-메틸-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵탄-3-일)메틸)피리미딘-2-아민의 제조
(1S,5R)-3-((2-클로로피리미딘-5-일)메틸)-6-메틸-3,6-다이아자바이시클로[3.2.0]헵테인(124 mg, 0.52 mmol), 5-플루오로-4-(4-플루오로-1-아이소프로필-2-메틸-1H-벤조[d]이미다졸-6-일)피리딘-2-아민 (157 mg, 0.52 mmol), 세슘 카보네이트 (338 mg, 1.04 mmol), 트리스(다이벤질이데네아세톤)다이팔라듐 (30 mg) 및 2-다이시클로헥실포스피노-2’,4’,6’- 트리아이소프로필바이페닐 (60 mg)을 1,4-다이옥산 (10 mL)에 첨가하였다. 질소가스의 보호 하에, 혼합물을 110℃에서 8시간 동안 가열하였다. 반응용액을 농축하고, 역상 정제 크로마토그래피(물:메탄올=10:1-1:1)로 분리하여 표제의 화합물을 수득하였다(26 mg, 수율: 10.0%).
분자식: C27H30F2N8 분자량: 504.6LC-MS(m/z): 505.3(M+H+)
1H-NMR(400 MHz, MeOD) δ: 8.59 (s, 2H), 8.56 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 8.28 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.23 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 4.25-4.27(m, 1H), 3.71-3.74 (m, 3H), 3.64-3.69 (m, 1H), 3.23-3.30 (m, 2H), 3.06-3.15 (m, 1H), 2.93-2.98 (m, 1H), 2.68 (s, 3H), 2.56 (s, 3H), 2.13-2.19 (m, 2H), 1.68 (d, J = 8.4 Hz, 6H).
Claims (23)
- 하기 화학식 (I’)로 표시되는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물(solvate), 또는 이들의 입체이성질체:
<화학식 I’>
상기 A1과 A2 는 각각 질소이고;
상기 R1은 C1-4 알킬기이며;
상기 R2는 C1-4 알킬기이고;
상기 R3와 R5는 각각 할로겐이며;
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 5 내지 6원 헤테로시크릴(heterocyclyl)기, 6 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기, 7 내지 9원 다리 걸친(bridged) 헤테로시크릴기 또는 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기(spiroheterocyclyl)로부터 선택되고;
상기 5 내지 6원 헤테로시크릴기는 1 내지 2의 질소원자를 포함하고; 상기 6 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기는 1, 2, 또는 3의 서로 같거나 다른 헤테로원자를 포함하며, 상기 헤테로원자는 질소 및 산소 원자로부터 선택되되, 적어도 하나의 질소원자를 포함하고; 상기 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기는 1 내지 2의 질소원자를 포함하며; 상기 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기는 1 내지 2의 질소원자를 포함하고;
상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 할로겐, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 의 알콕시기, 또는 다이-C1-4 알킬아미노기; 또는 각각 치환기(substituent)에 의해 선택적으로 치환된, C1-4 알킬기, 3 내지 6원 시클로알킬기, 질소 및 산소 원자로부터 선택된 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 3 내지 6원 헤테로시크릴기, 또는 질소 및 산소 원자로부터 선택된 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되고, 상기 치환기는 아미노기, 히드록시기, 할로겐, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, C1-4 알킬아미노기, 다이-C1-4 알킬아미노기, 또는 3 내지 6원 시클로알킬기로부터 선택되며;
상기 n은 0, 또는 1로부터 선택된다.
- 제 1 항에 있어서,
상기 A1과 A2는 각각 질소이고;
상기 R1은 C1-4 알킬기이며;
상기 R2는 C1-4 알킬기이고;
상기 R3 및 R5는 각각 할로겐이며;
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 5 내지 6원 헤테로시크릴기이고; 상기 5 내지 6원 헤테로시크릴기는 1 내지 2의 질소 원자를 포함하며;
상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 할로겐, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알콕시기, 또는 다이-C1-4 알킬아미노기; 또는 각각 치환기에 의해 선택적으로 치환된 C1-4 알킬기, 3 내지 6원 시클로알킬기, 또는 질소 또는 산소로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 3 내지 6원 헤테로시크릴기로부터 선택되고, 상기 치환기는 아미노기, 히드록시기, 할로겐, 트리플루오로메틸기, C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, C1-4 알킬아미노기, 다이-C1-4알킬아미노기, 또는 3 내지 6원 시클로알킬기로부터 선택되고;
n은 0인 것을 특징으로 하는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물(solvate), 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 2 항에 있어서, 상기 5 내지 6원 헤테로시크릴기는 질소-포함 6원 헤테로시크릴기인 것을 특징으로 하는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 2 항에 있어서,
상기 화합물은 하기의 화학식으로 표시되는 화합물로부터 선택된 것임을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체:
,
,
,
,
,
, 및
.
- 제 1 항에 있어서,
상기 화합물은 하기의 화학식 (I)의 구조를 가지고,
<화학식 I>
상기 A1과 A2는 각각 질소이고;
상기 R1은 C1-4 알킬기이며;
상기 R2는 C1-4 알킬기이고;
상기 R3와 R5는 각각 할로겐이며;
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 5 내지 6원 헤테로시크릴(heterocyclyl)기, 6 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기, 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기, 또는 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기로부터 선택되고;
상기 5 내지 6원 헤테로시크릴기는 1 내지 2의 질소원자를 포함하고; 상기 6 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기는 1, 2, 또는 3의 서로 같거나 다른 헤테로원자를 포함하며, 상기 헤테로원자는 질소 원자 및 산소 원자로부터 선택되되, 적어도 하나의 질소 원자를 포함하고; 상기 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기는 1 내지 2의 질소원자를 포함하고; 상기 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기는 1 내지 2의 질소원자를 포함하며;
상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, 질소 또는 산소원자로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 5 내지 6원 헤테로시크릴기, 또는 질소 또는 산소원자로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 5 항에 있어서,
상기 A1과 A2 는 각각 질소이고;
상기 R1은 아이소프로필기이며;
상기 R2는 메틸기이고;
상기 R3와 R5는 각각 플루오르이며;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 5 내지 6원 헤테로시크릴(heterocyclyl)기이고, 상기 5 내지 6원 헤테로시크릴기는 1 내지 2의 질소원자를 포함하며;
상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, 질소 또는 산소원자로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 6원 헤테로시크릴기, 또는 질소 또는 산소원자로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기인 것을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 6 항에 있어서,
상기 R2는 메틸기이고;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 질소-포함 5 내지 6원 헤테로시크릴기이고 상기 질소-포함 5 내지 6원 헤테로시크릴기는 1 내지 2의 질소 원자를 포함하며; 상기 질소-포함 5 내지 6원 헤테로시크릴기는 질소원자를 통하여 상기 화학식 I의 메틸렌기에 연결되고, 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, C1-4 알콕시기, 또는 질소-포함 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 7 항에 있어서,
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된,
,
,
, 또는
로부터 선택되고, 상기 Q2는 C1-4 알킬기, 또는 질소-포함 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 5 항에 있어서,
상기 A1 및 A2는 각각 질소이고;
상기 R1은 아이소프로필기이며;
상기 R2는 메틸기이고;
상기 R3 및 R5는 각각 플루오르(F)이며;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기이고, 상기 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기는 1 내지 2의 질소원자를 포함하며; 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, 질소 또는 산소원자로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 6원 헤테로시크릴기, 또는 질소 또는 산소원자로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 9 항에 있어서,
상기 R2는 메틸기이고;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 질소-포함 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되고, 상기 질소-포함 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기는 1 내지 2의 질소원자를 포함하며; 상기 질소-포함 7 내지 9원 다리 걸친 헤테로시크릴기는 질소 원자를 통해 화학식 I의 메틸렌기에 연결되고; 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, 또는 질소-포함 6원 헤테로시크릴기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 10 항에 있어서,
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된,,
,
,
,
,
또는
로부터 선택되고, 상기 Q2는 C1-4 알킬기 또는 질소-포함 6원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 5 항에 있어서,
상기 A1 및 A2는 각각 질소이고;
상기 R1은 아이소프로필기이며;
상기 R2는 메틸기이고;
상기 R3 및 R5는 각각 플루오르(F)이며;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 6 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기이고, 상기 6 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기는 1, 2, 또는 3의 서로 같거나 다른 헤테로 원자를 포함하며, 상기 헤테로원자는 질소 원자 및 산소 원자로부터 선택되되 적어도 하나의 질소 원자를 포함하고;
상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, 질소 또는 산소원자로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 6원 헤테로시크릴기, 또는 질소 또는 산소원자로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 12 항에 있어서,
상기 R2는 메틸기이고;
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된, 1, 2, 또는 3개의 동일한 또는 상이한 헤테로원자를 포함하는 6 내지 10원 융합된 헤테로시크릴기이며;
상기 헤테로원자는 질소원자와 산소원자로부터 선택되고, 적어도 하나의 질소 원자를 포함하며, 상기 6 내지 10원 융합 헤테로시크릴기는 질소원자를 통해 상기 화학식 I의 메틸렌기에 연결되고, 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, 또는 C1-4 알킬기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 13 항에 있어서,
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된,,
,
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또는
로부터 선택된 것이고,
상기 Q2는 아미노기 또는 C1-4 알킬기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 5 항에 있어서,
상기 A1 및 A2는 각각 질소이고;
상기 R1은 아이소프로필기이며;
상기 R2는 메틸기이고;
상기 R3 및 R5는 각각 플루오르(F)이며;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기이고, 상기 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기는 1 내지 2개의 질소 원자를 포함하며; 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, C1-4 알킬기, 질소 또는 산소원자로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 6원 헤테로시크릴기, 또는 질소 또는 산소원자로부터 선택되는 적어도 하나의 헤테로원자를 포함하는 8원 다리 걸친 헤테로시크릴기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 15 항에 있어서,
상기 R2는 메틸기이고;
상기 R4는 Q2에 의해 선택적으로 치환된 질소-포함 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기이고, 상기 질소-포함 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기는 1 내지 2개의 질소원자를 포함하며; 상기 질소-포함 7 내지 11원 스파이로헤테로시크릴기는 질소원자를 통하여 상기 화학식 I의 메틸렌기에 연결되고, 상기 Q2는 아미노기, 히드록시기, 트리플루오로메틸기, 시안기, 또는 C1-4 알킬기로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 16 항에 있어서,
상기 R4는 각각 Q2에 의해 선택적으로 치환된,,
,
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,
,
또는
로부터 선택되고, 상기 Q2는 C1-4 알킬기인 것을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체.
- 제 1 항에 있어서,
상기 화합물은 하기의 화학식으로부터 선택된 것임을 특징으로 하는, 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체:
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- 제 1 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 따른 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 이들의 입체이성질체, 및 1 이상의 약제학적으로 허용가능한 담체(carrier)를 선택적으로 포함하는, 다음의 CDK4/6 키나아제에 의해 매개되는 암-관련 질환의 예방 또는 치료용 약제학적 조성물:
상기 CDK4/6 키나아제에 의해 매개되는 암-관련 질환은 뇌종양, 폐암, 편평상피암(squamous carcinoma), 방광상피암(bladder carcinoma), 위암, 난소암, 복막암, 췌장암, 유방암, 두경부암(head and neck cancer), 자궁경부암(cervical cancer), 자궁내막암, 직장암, 간암, 신장암, 식도선암(esophageal adenocarcinoma), 식도 편평상피암(esophageal squamous cancer), 전립선암, 여성 생식관 암, 상피내암(cancer in situ), 림프종, 신경섬유종, 갑상선암, 골암(osteocarcinoma), 피부암, 뇌암, 결장암, 고환암, 위장관 기질종양(gastrointestinal stromal tumor), 전립선신생종(prostate neoplasms), 비만세포종, 다발성 골수종, 흑색종, 교종(glioma) 또는 육종(sarcoma)으로부터 선택된다.
- 제 19 항에 있어서,
1 이상의 추가적인 항-종양 약제 또는 면역억제제를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물.
- 제 20 항에 있어서,
상기 추가적인 항-종양 약제 또는 면역억제제는 하기의 것으로부터 선택되는 1 이상인 것을 특징으로 하는 약제학적 조성물: 메토트렉세이트(methotrexate), 카페시타빈(capecitabine), 겜시타빈(gemcitabine), 독시플루리딘(doxifluridine), 페메트렉스드 다이소듐(pemetrexed disodium), 파조파닙(pazopanib), 이마티닙(imatinib), 엘로티닙(erlotinib), 라파티닙(lapatinib), 게피티닙(gefitinib), 반데타닙(vandetanib), 허셉틴(herceptin), 베바시주맙(bevacizumab), 리툭시맙(rituximab), 트라스투주맙(trastuzumab), 파크리탁셀(paclitaxel), 비노렐빈(vinorelbine), 도세탁셀(docetaxel), 독소루비신(doxorubicin), 히드록시캠토테신(hydroxycamptothecine), 미토마이신(mitomycin), 에피루비신(epirubicin), 피라루비신(pirarubicin), 블레오마이신(bleomycin), 레트로졸(letrozole), 타목시펜(tamoxifen), 풀베스트란트(fulvestrant), 트립토렐린(triptorelin), 플루타마이드(flutamide), 류프로렐린(leuprorelin), 아나스트로졸(anastrozole), 이포스파마이드(ifosfamide), 부술판(busulfan), 시클로포스파마이드(cyclophosphamide), 카르무스틴(carmustine), 니무스틴(nimustine), 세무스틴(semustine), 메크로레타민(mechlorethamine), 멜파란(melphalan), 클로람부실(chlorambucil), 카보플라틴(carboplatin), 시스플라틴(시스platin), 옥살리플라틴(oxaliplatin), 로바플라틴(lobaplatin), 토포테칸(topotecan), 캠프토테신(camptothecin), 토포테칸(topotecan), 에베롤리무스(everolimus), 시롤리무스(sirolimus), 템시롤리무스(temsirolimus), 6-머캡토퓨린(6-mercaptopurine), 6-티오구아닌(6-thioguanine), 아자티오프린(azathioprine), 액티노마이신 D(Actinomycin D), 다우노루비신(daunorubicin), 아드리아마이신(adriamycin), 미톡산트론(mitoxantrone), 블레오마이신(bleomycin), 미트라마이신(mithramycin) 및 아미노글루테티마이드(aminoglutethimide).
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