KR101713638B1 - 신규한 피롤로 피리미딘 유도체 및 이를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물 - Google Patents

신규한 피롤로 피리미딘 유도체 및 이를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규한 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물 및 이의 제조방법, 상기 화합물을 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
[화학식 1]
Figure 112014111190248-pat00066

상기 식에서, R1, R2, R3, R4, R5 및 X는 명세서 중에 정의한 바와 같다.

Description

신규한 피롤로 피리미딘 유도체 및 이를 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물 {Novel pyrrolo pyrimidine derivatives and composition for preventing or treating cancer comprising the same}
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 신규한 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물 및 이의 제조방법, 상기 화합물을 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
[화학식 1]
Figure 112014111190248-pat00001
열 충격 단백질 (Heat shock proteins, Hsps)은 열, 저산소증, 중금속 및 산과다증과 같은 다양한 단백질 독성 스트레서에 의해 발현이 증가되는 분자 샤페론으로 스트레스 요인에 의한 손상으로부터 세포를 보호하고, 세포의 생리학적 상태의 회복을 가속화한다. 열 충격 단백질 (Hsps)은 정상 조건하에서 일반적인 단백질의 폴딩 및 미스폴딩 (misfolded)되거나 폴딩되지 않은 단백질의 응집의 방지를 지원하는 분자 샤페론이며, 세포의 여러 주요 기능의 조절, 세포 증식 및 세포 자멸에 있어서 중요하다.
열 충격 단백질 (Hsps)의 패밀리는 Hsp100, Hsp90, Hsp70, Hsp60 및 Hsp27과 같이 분자량에 따라 분류된다. 그 중 열 충격 단백질 90kDa (Hsp90)은 ATP-의존적 분자 샤페론으로 정상적인 조건하에서 총 세포 단백질 질량의 1-2%를 차지하며, 포유 동물에서 Hsp90α와 Hsp90β(세포질), Grp94 (소포체) 및 TRAP-1 (미토콘드리아)의 4개의 동형 단백질로 존재한다. Hsp90은 클라이언트 단백질이라고 불리는 300개 이상의 단백질의 구조 성숙, 안정화와 활성화를 촉진하거나 단백질 분해를 통해 클라이언트 단백질을 관리하는 중요한 역할을 하며, 세포 내 신호전달과 스트레스 반응에 적응하는 필수적인 역할을 한다.
Hsp90 클라이언트 단백질에는 스테로이드 호르몬 수용체 (SHRs), 단백질 키나아제, 그리고 전사 인자인 p53이 포함되어 있는데, 그 중 ErbB2/Her2, Braf, Akt/PKB, 돌연변이 p53, HIF-1α와 hTERT 같은 40개 이상의 종양 유발 단백질들이 포함되어 있으며, 이들은 암에서 돌연변이 형태로 과발현되고 암세포 증식 및 생존을 담당한다. Hsp90은 정상 세포 보다 종양 세포에서 2-10배 이상 높은 수준으로 과발현되며, Hsp90의 높은 활성은 돌연변이 클라이언트 단백질의 과발현이나 증식에 의한 것으로, 돌연변이 단백질의 안정화 및 암전이와 같은 종양 형성 과정에 참여한다. 암세포는 Hsp90의 샤페론 기능을 사용하여 돌연변이되거나 과발현된 클라이언트 단백질의 미스폴딩과 분해로부터 보호한다.
Hsp90의 기능 억제는 Hsp90의 M-도메인과 클라이언트 단백질간의 상호작용을 중단시켜, 유비퀴틴 프로테아좀 경로를 통해 상기 클라이언트 단백질의 분해를 유도하여 세포 성장의 억제 및 기능 상실을 유발한다. Hsp90 억제제는 종양 세포에서 유래한 Hsp90에 대해 정상 세포에서 보다 약 100배 이상의 높은 결합 친화성을 가져, 정상 세포에서의 Hsp90기능은 억제하지 않고 종양 세포에서의 억제를 특이적으로 표적화 할 수 있다. 이와 같은 특징으로 Hsp90은 항암제 개발을 위한 주요 타겟으로 주목받고 있다.
Hsp90의 억제제로 천연 화합물인 겔다나마이신 (geldanamycin) 및 라디시콜 (radicicol)을 확인하였으나, 겔다나마이신의 경우 낮은 용해도와 높은 독성을 가지고 있었고, 라디시콜은 생물학적 안정성이 낮아 in vivo에서 항종양 활성을 나타내지 않는 문제점이 있다. 또한, 상기 겔다나마이신을 토대로 겔다나마이신 유사체 17-AAG (tanespimycin, Kosan-BMS, WO 2005112952)가 합성되었으나, 여전히 간독성과 관련된 문제점이 남아있다.
이외에도, 여러 Hsp90 억제제가 임상 실험에 있지만, 제형, 낮은 독성, 높은 수용해도, 그리고 안정성을 완전히 만족하는 Hsp90 억제제는 없는 실정으로, 더 향상된 Hsp90 억제제의 개발이 필요한 시점이다.
이러한 배경하에, 본 발명자들은 상기 문제점을 해결하기 위하여 연구를 지속한 결과, 암세포에 대한 우수한 저해활성을 나타내면서 정상 세포에서의 독성은 현저히 낮은 항암 화합물, 특히 HSP90의 기능의 억제제로서 암의 예방 또는 치료에 유용한 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물과 이의 제조방법 및 이를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 개발하여 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 신규의 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 신규의 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물의 제조방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 신규의 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해 본 발명의 구체적인 실시예에서는, 암세포에 대한 항암 효과를 검증하였고, 그 결과, 각각의 암세포에 대하여 우수한 암세포의 증식을 저해하는 효과가 있음을 확인하였다(실험예 1).
본 발명의 또 다른 실시예에서는 본 발명에서 제조한 피롤로 피리미딘 화합물에 대하여 정상세포에서의 세포 독성을 측정하였고, 그 결과, 정상 세포에서는 세포 독성을 나타내지 않음을 확인하였다(실험예 2).
본 발명의 또 다른 실시예에서는 클라이언트 단백질의 분해 및 Hsp70 유도효과를 확인하였는데, Hsp90의 발현에는 변화가 없는 것이 확인되어, 본 발명의 화합물은 Hsp90의 기능을 저해함으로써 항암 효과를 나타내는 것을 확인하였다(실험예 3).
이와 같이, 본 발명에 따른 신규한 피롤로 피리미딘 화합물은 Hsp90의 기능 억제제로서 암세포에 대하여 선택적으로 높은 억제 활성 및 항증식 효과를 갖고 있어, 암의 예방 또는 치료용 조성물로 사용할 수 있음을 입증하였다.
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 하나의 양태로, 하기 화학식 1로 표시되는 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물에 관한 것이다:
[화학식 1]
Figure 112014111190248-pat00002
상기 화학식 1에서,
R1은 H; 불소, 염소, 브롬 및 요오드로 구성된 군에서 선택되는 할로겐 원자; 트리플루오로메틸; C1-C3 알킬 및 C1-C5 알콕시기로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함하는 치환기이고,
R2, R3, R4 및 R5는 각각 H; 불소, 염소, 브롬 및 요오드로 구성된 군에서 선택되는 할로겐 원자; C1-C6 알킬기; C1-C5 알콕시기 및 C1-C3 사슬로 연결된 다이알콕시로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함하는 치환기이고,
X는 탄소 또는 질소이며,
상기 X가 탄소인 경우, X는 H; 또는 불소, 염소, 브롬 및 요오드로 구성된 군에서 선택되는 할로겐 원자로 치환된 것이다.
상기 C1-C3 알킬기 또는 C1-C6 알킬기는, C1-C3 알킬; C1-C3 알콕시; C6-C10 아릴; 불소, 염소, 브롬 및 요오드로 구성된 군에서 선택되는 할로겐 원자; C1-C3 알콕시로 치환 또는 비치환된 페닐; 및 피리딘으로 구성된 군에서 선택되는 방향족 또는 비방향족기 중 어느 1종 이상으로 치환 또는 비치환된 것이다.
본 발명에서 치환기에 대한 정의에서, 용어 '알킬' 은 지방족 탄화수소 래디칼을 의미한다. 알킬은 알케닐이나 알키닐 부위를 포함하지 않는 "포화 알킬(saturated alkyl)" 이거나, 적어도 하나의 알케닐 또는 알키닐 부위를 포함하는 "불포화 알킬(unsaturated alkyl)" 일 수 있다. "알케닐(alkenyl)" 은 적어도 하나의 탄소-탄소 이중결합을 포함하는 그룹을 의미하며, "알키닐(alkynyl)" 은 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 포함하는 그룹을 의미한다. 알킬은 단독으로 또는 알콕시와 같이 조합하여 사용되는 경우에 각각 분지형 또는 직쇄형일 수 있다.
용어 '아릴'은 단독으로 또는 다른 래디칼과 조합하여, 방향족, 포화 또는 불포화될 수 있는 제2의 5 또는 6원성 카보사이클릭 기와 추가로 융합될 수 있는, 탄소 원자 6개를 포함하는 카보사이클릭 방향족 단환식 기를 의미한다. 아릴의 예로는 페닐, 인다닐, 1-나프틸, 2-나프틸, 테트라하이드로나프틸 등을 포함할 수 있다. 아릴은 방향족 고리 상의 적정 위치에서 다른 기와 연결될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
용어 '알콕시'는 산소 원자를 통해 다른 기에 연결된 알킬기(즉, -O-알킬)를 의미한다. 알콕시기는 치환되지 않거나 하나 이상의 적절한 치환기로 치환될 수 있다. 알콕시기의 예로는 (C1-C6)알콕시기, 예컨대 -O-메틸, -O-에틸, -O-프로필, -O-이소프로필, -0-2-메틸-1-프로필, -0-2-메틸-2-프로필, -0-2-메틸-1-부틸, -0-3-메틸-1-부틸, -0-2-메틸-3-부틸, -0-2,2-디메틸-l-프로필, -0-2-메틸-l-펜틸, 3-0-메틸-1-펜틸, -0-4-메틸-l-펜틸, -0-2-메틸-2-펜틸, -0-3-메틸-2-펜틸, -O-4-메틸-2-펜틸, -0-2,2-디메틸-l-부틸, -0-3,3-디메틸-l부틸, -0-2-에틸-l-부틸, -O-부틸, -O-이소부틸, -O-t-부틸, -O-펜틸, -O-이소펜틸, -O-네오펜틸 및 -O-헥실을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일예로, 상기 화학식 1의 피롤로 피리미딘 화합물의 예는 다음과 같다;
5-벤질-4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민(화합물 1);
5-벤질-4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민(화합물 2);
4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-5-(4-메틸벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민(화합물 3);
4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-5-(4-메톡시벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민(화합물 4);
5-(4-브로모-3-메톡시벤질)-4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민(화합물 5);
4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-5-(3-(트리플로로메틸)벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민(화합물 6);
4-클로로-5-(4-클로로벤질)-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민(화합물 7);
5,7-디벤질-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민(화합물 8);
7-(벤조[d][1,3]디옥솔-5-일메틸)-5-벤질-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민(화합물 9);
5-벤질-7-((6-브로모벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)메틸)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민(화합물 10); 및
5-벤질-4-클로로-7-((6-아이오도벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민(화합물 11).
본 발명에 따른 피롤로 피리미딘 화합물은 무기산 또는 유기산으로부터 유도된 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물의 형태로 사용될 수 있으며, 일예로, 염으로는 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 질산, 아세트산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 만델산, 타타르산, 시트르산, 아스코빈산, 팔미트산, 말레인산, 하이드록시말레인산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산 및 톨루엔설폰산으로 구성된 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있다. 또한, 상기 수화물은 화학식 1의 화합물이 물 분자와 결합하여 형성된 것을 의미할 수 있다.
또 다른 양태로, 본 발명은 상기 화학식 1로 표시되는 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물의 제조방법에 관한 것이다.
이하에서는 상기 화학식 1로 표시되는 피롤로 피리미딘 화합물을 제조하는 방법의 구체적인 예를 설명한 것이다.
제조방법: 화학식 1의 피롤로 피리미딘 화합물 제조
하기 예시된 바와 같이, 상기 화학식 1의 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 수화물의 제조방법은 하기 화학식 2의 화합물과 화학식 3의 화합물을 반응시키는 단계를 포함할 수 있다.
[화학식 2]
Figure 112014111190248-pat00003
상기 화학식 2에서, R1은 H; 불소, 염소, 브롬 및 요오드로 구성된 군에서 선택되는 할로겐 원자; 트리플루오로메틸; C1-C3 알킬 및 C1-C5 알콕시기로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함하는 치환기이다.
[화학식 3]
Figure 112014111190248-pat00004
상기 화학식 3에서,
R2, R3, R4 및 R5는 각각 H; 불소, 염소, 브롬 및 요오드로 구성된 군에서 선택되는 할로겐 원자; C1-C6 알킬기; C1-C5 알콕시기 및 C1-C3 사슬로 연결된 다이알콕시로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상을 포함하는 치환기이고,
X는 탄소 또는 질소이고,
Z는 염소, 브롬 또는 요오드이며,
상기 X가 탄소인 경우, X는 H; 또는 불소, 염소, 브롬 및 요오드로 구성된 군에서 선택되는 할로겐 원자로 치환된 것이다.
상기 화학식 2의 화합물과 화학식 3의 화합물을 반응시키는 단계는 하기 반응식 1의 방법으로 수행할 수 있다.
[반응식 1]
Figure 112014111190248-pat00005

상기 반응식 1의 제조 방법은 상기 화학식 2의 NH와 화학식 3의 Z(Cl, Br 또는 I)의 알킬 치환 반응 (국제 특허 출원 공개 US 2005/0113340)으로 수행할 수 있다.
상기 화학식 2의 화합물은 다음 참고문헌 (미국 특허 출원 공개 US2011-0028487, 국제 특허 출원 공개 WO2005-028434)과 같이 α-브로모알데하이드를 이용한 고리화 반응과 형성된 아마이드 카보닐의 클로로화 반응으로 제조할 수 있다.
상기 화학식 3의 화합물은 다음 참고문헌 (국제 특허 출원 공개 WO2013-071169, 국제 특허 출원 공개 US 2005-0113340, Bogucki, D. E. et al. J. Org. Chem. 1995, 60, 588)과 같은 방법으로 제조할 수 있다.
또 다른 양태로, 본 발명은 화학식 1로 표시되는 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
상기 약학 조성물은 마우스, 토끼, 랫트, 기니피그, 또는 햄스터와 같은 실험 동물 또는 인간을 포함한 영장류 등에 적용될 수 있으나 이에 제한되지 않으며, 바람직하게는 인간을 포함한 영장류, 더욱 바람직하게는 인간에 적용될 수 있다.
본 명세서에서, '치료'는 증상의 경감 또는 개선, 질환의 범위의 감소, 질환 진행의 지연 또는 완화, 질환 상태의 개선, 경감 또는 안정화, 부분적 또는 완전한 회복, 생존의 연장 기타 다른 이로운 치료 결과 등을 모두 포함하는 의미로 사용될 수 있다. 일예로, 본 발명에서 암의 예방 또는 치료는 암의 전이 및 증식성 질환의 치료 및/또는 완화를 포함한다.
또한 본 명세서에서 암의 치료는 모든 암세포에 대한 치료를 의미하며, 암이란, 내피 세포의 혈관신생 및 이의 유사분열 (고형 종양, 종양 전이 및 양성 종양)도 포함한다. 예를 들어, 암이란 유방암, 난소암, 자궁경부암, 전립선암, 정소암, 비뇨생식기관 암, 식도암, 후두암, 교모세포종, 위암, 피부암, 각질극세포종, 폐암, 편평세포암종, 대세포 암종, 소세포 암종, 폐선암, 골암, 결장암, 선종, 췌장암, 선암종, 갑산성암, 여포상선암, 미분화암, 유두암, 정상피종, 흑색종, 육종, 방광암, 간암, 담즙관암, 신장암, 골수성 질환, 림프성 질환, 호지킨병, 모발세포암, 구강암, 인두(구두)암, 구순암, 설암, 소장암, 결장-직장암, 대장암, 직장암, 뇌암, 중추신경계암, 백혈병, 혈관종, 트라코마 또는 화농성 육아종을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 약학적으로 허용 가능한 염은 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 질산, 아세트산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 만델산, 타타르산, 시트르산, 아스코빈산, 팔미트산, 말레인산, 하이드록시말레인산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산 및 톨루엔설폰산으로 구성된 군에서 선택되는 무기산 또는 유기산의 염일 수 있다. 또한, 또한 상기 수화물은 화학식 1의 화합물이 물 분자와 결합하여 형성된 것을 의미할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 사용태양 및 사용방법에 따라 유효성분인 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물의 함량은 당업자의 선택에 따라 적절히 조절하여 사용될 수 있다.
일예로, 상기 약학 조성물은 상기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물을 전체 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 10 중량％, 더욱 바람직하게는 0.5 내지 5 중량％의 양으로 포함할 수 있다.
상기 화학식 1로 표시되는 화합물 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물은 상기 약학 조성물 내에 단독으로 포함될 수 있으며, 또는 그 외 약리학적으로 허용 가능한 담체, 부형제, 희석제 또는 부성분과 함께 포함될 수도 있다.
상기 약학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제의 예로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로즈, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸하이드록시벤조에이트, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 프로필하이드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유, 덱스트린, 칼슘카보네이트, 프로필렌글리콜, 리퀴드 파라핀 및 생리식염수로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니며 통상의 담체, 부형제 또는 희석제 모두 사용 가능하다. 또한, 상기 약학 조성물은 통상의 충진제, 증량제, 결합제, 붕해제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, pH 조절제, 영양제, 비타민, 전해질, 알긴산 및 그의 염, 펙트산 및 그의 염, 보호성 콜로라이드, 글리세린, 향료, 유화제 또는 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.
또한, 상기 약학 조성물은 상기 유효성분 이외에도 암의 치료 또는 예방에 유효한 것으로 공지된 1종 이상의 다른 항암제 또는 기타 치료제를 더욱 포함하여 동시 또는 이시에 적용되는 병용 요법으로 사용할 수 있다. 상기 병용 요법에 적용될 수 있는 다른 항암제 또는 기타 치료제는 예를 들어, 글리벡 (Gleevec®, imatinib), 수텐트 (Sutent®, sunitinib), 허셉틴 (Herceptin®, Trastuzumab), 벌케이드 (Velcade®, Bortezomib), 덱사메타손 (dexamethasone), Hsp90 저해제, 아로마타제 저해제 또는 키나아제 저해제로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 화합물을 포함할 수 있다.
상기 약학 조성물의 투여방법은 경구 또는 비경구 모두 가능하며, 일 예로는 경구, 경피, 피하, 정맥 또는 근육을 포함한 여러 경로를 통해 투여될 수 있다. 또한, 상기 조성물의 제형은 사용방법에 따라 달라질 수 있으며, 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 본 발명이 속하는 기술분야에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 일반적으로는, 경구 투여를 위한 고형제제에는 정제(TABLETS), 알약, 연질 또는 경질 캅셀제(CAPSULES), 환제(PILLS), 산제(POWDERS) 및 과립제(GRANULES) 등이 포함되고, 이러한 제제는 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제(SUSTESIONS), 내용액제, 유제(EMULSIONS) 및 시럽제(SYRUPS) 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제 예를 들면, 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 형태는 크림(CREAM), 로션제(LOTIONS), 연고제(ONITMENTS), 경고제(PLASTERS), 액제(LIQUIDS AND SOULTIONS), 에어로솔제(AEROSOLS), 유동엑스제(FRUIDEXTRACTS), 엘릭서(ELIXIR), 침제(INFUSIONS), 향낭(SACHET), 패취제(PATCH) 또는 주사제(INJECTIONS) 등의 형태일 수 있으며, 주사용 제형이 될 경우 바람직하게는 등장성 수용액 또는 현탁액의 형태가 될 수 있다.
상기 약학 조성물은 멸균제, 방부제, 안정화제, 수화제 또는 유화 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제 등의 보조제와, 기타 치료학적으로 유용한 물질을 더 함유할 수 있으며, 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅방법에 따라 제제화할 수 있으며, 이외에도 당해 기술 분야의 공지된 적절한 방법을 사용하여 제형화 할 수 있다.
또한, 상기 약학 조성물의 투여량은 투여방법, 복용자의 연령, 성별, 환자의 중증도, 상태, 체내에서 활성 성분의 흡수도, 불활성율 및 병용되는 약물을 고려하여 결정할 수 있으며, 1회 또는 수회로 나누어 투여할 수 있다. 약학 조성물의 유효성분으로서 바람직하게는 사람을 비롯한 포유류에게 1일 기준으로 0.001 내지 100 ㎎/㎏ 체중, 바람직하게는 0.01 내지 35㎎/㎏ 체중의 양으로, 1일 1회 또는 분할하여 경구 또는 비경구 경로로 투여될 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 구현예는, 하기 화학식 1 로 표시되는 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물을 치료학적 유효량으로 투여하는 단계를 포함하는, 암의 치료방법을 제공한다.
바람직하게는 상기 치료방법은 상기 투여 단계 이전에 상기 암의 예방 또는 치료를 필요로 하는 환자를 확인하는 단계를 추가로 포함할 수 있다.
"치료학적 유효량"은 암의 예방 또는 치료에 효과적인, 포유류에 대한 유효 성분의 양을 의미하며, 상기 치료학적 유효량은 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효 성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 혈중 청소율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있으나, 바람직하게는 상술한 바와 같이, 1일 기준으로 0.001 내지 100 ㎎/㎏ 체중, 바람직하게는 0.01 내지 35 ㎎/㎏ 체중의 양으로, 1일 1회 또는 분할하여 경구 또는 비경구 경로로 투여할 수 있다.
본 발명의 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물 및 이를 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물은 낮은 세포독성을 보이면서 우수한 Hsp90 억제 활성 및 항암 효과를 나타내므로, 암의 저해는 물론이고 나아가 항암 치료에 유용하게 사용될 수 있다.
도 1은 본 발명의 화합물 1을 농도별로(0, 1, 5, 10, 20, 30 uM) MCF-7 세포주에 처리하였을 때 Hsp90, 클라이언트 단백질 EGFR(Epidermal growth factor receptor), Her2(human epidermal growth factor receptor 2), Met, 및 Akt(protein kinase B)의 분해 효과를 측정한 결과를 나타낸다. 도 1에서 "0uM"은 대조군으로 1% DMSO, "GA"는 겔다나마이신, "HSP70"은 열 충격 단백질 70kDa(70 kilodalton heat shock protein), "B-Actin"은 Beta-actin 을 나타낸다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 5-벤질-4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-7H-피롤로[ 2,3-d]피리미딘 -2-아민 (화합물 1)의 제조
[화합물 1]
Figure 112014111190248-pat00006
[전체 반응식]
Figure 112014111190248-pat00007
단계 1. 2-아미노-5-벤질-3,7- 디하이드로 -4H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -4-온의 제조
Figure 112014111190248-pat00008
아르곤 대기 하에서 하이드로시남알데하이드 (5.00 g, 37.26 mmol)를 디클로로메탄 (149 mL)과 1,4-디옥산 (15 mL) 용매에 녹인 후 브로모트리메틸실레인 (7.38 mL, 55.90 mmol)을 반응물에 적가하였다. 상온에서 1시간 교반한 후, 브로민 (1.91 mL. 37.26 mmol)을 반응 용액에 가해준 후 1시간 교반하였으며, 반응의 완결을 TLC (핵산:에틸 아세테이트 = 4:1)로 확인하였다. 반응 혼합액을 물에 넣은 후, 디클로로메탄 (150 mLx3)으로 추출한 유기용매 층을 염화나트륨 포화용액 (500 mL)으로 다시 세척한 후 유기용매 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 목적 화합물 (7.94 g, qaunt. 수율)을 얻었다. 아르곤 대기 하에, 아세토나이트릴 (74 mL)에 녹인 상기 실험에서 합성한 2-브로모-3-페닐프로파날 (7.94 g, 37.26 mmol)을 4-디아미노-6-하이드록시피리미딘 (4.7 g, 37.26 mmol), 아세트산나트륨 (6.11 g, 74.53 mmol)과 증류수 (74 mL) 혼합액에 적가하였다. 반응 혼합액을 상온에서 13시간 교반하였으며, 반응의 완결을 TLC (디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 확인하였다. 반응 후 생긴 침전물을 아세토나이트릴로 여과하여 목적 화합물 (2.46 g, 27% 수율)을 얻었다.
mp 282.4-283.7 ℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ10.70 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 7.30-7.20 (m, 4H), 7.14-7.09 (m, 1H), 6.28 (s, 1H), 6.00 (s, 2H), 3.92 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.8, 152.6, 151.6, 142.8, 129.0, 128.4, 125.9, 118.1, 114.3, 99.2, 32.2.
단계 2. 5-벤질-4- 클로로 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00009
아르곤 대기 하에서 상기 단계 (1)에서 제조한 2-아미노-5-벤질-3,7-디하이드로-4H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-온 (2.46 g, 10.23 mmol)을 아세트산무수물 (11 mL)에 녹인 후 3시간 동안 환류 교반하였으며, 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 용매를 제거하였다. 아른곤 대기 하에서 농축액을 아세토나이트릴 (51 mL)에 녹인 후 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (4.66 g, 20.46 mmol), N,N-디메틸아닐린 (2.59 mL, 20.46 mmol)과 포스포러스(V) 옥시클로라이드 (11.97 mL, 61.38 mmol)을 가한 후 100℃에서 1시간 동안 교반하였으며, 반응의 완결을 TLC (디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 확인하였다. 반응 용액을 감압 하에서 농축하여 용매를 제거한 후, 농축액을 얼음물에 넣고 2N 수산화나트륨 용액으로 pH7 지점으로 중화시켰다. 혼합 수용액을 디클로로메탄 (20 mLx3)으로 추출하였으며, 추출한 유기용매 층을 염화나트륨 포화용액 (60 mL)으로 세척한 후 유기용매 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과 및 감압 농축하였다. 아르곤 대기 하에서 농축액을 메타놀릭 3N HC1 (34 mL)에 녹인 후 50℃에서 2 시간 동안 교반하였으며, 반응의 완결을 TLC (디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 확인하였다. 반응 용액을 상온으로 냉각한 후, 2N 수산화나트륨 용액으로 pH7 지점으로 중화시켜 형성된 침전물을 여과하여 목적 화합물 (2.44 g, 92% 수율)을 얻었다.
mp 255.0-256.6℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ11.25 (s, 1H), 7.29-7.16 (m, 6H), 6.79 (s, 1H), 6.44 (s, 2H), 4.04 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.6, 155.7, 151.3, 141.5, 128.8, 128.6, 126.2, 121.9, 113.2, 107.8, 31.8.
단계 3. 5-벤질-4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-7H- 피 롤로[ 2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00010
아르곤 대기 하에서 상기 단계 (2)에서 제조한 5-벤질-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민 (300 mg, 1.16 mmol)를 N,N-디메틸포름아마이드 (2.3 mL)에 녹인 후 2-클로로메틸-4-메톡시-3,5-디메틸피리딘 (268 mg, 1.21 mmol)과 탄산칼륨 (481 mg, 3.48 mmol)을 가한 후 45℃에서 13시간 교반하였으며, 반응의 완결을 TLC (디클로로메탄:메탄올 = 10:1)로 확인하였다. 반응 용액을 상온으로 냉각한 후 감압 하에서 농축하여 용매를 제거하였다. 농축액을 칼럼 크로마토그래피 (디클로로메탄:메탄올 = 40:1)로 분리 정제하여 목적 화합물 (146 mg, 31% 수율)을 얻었다.
mp 152.0-153.1℃;
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ8.22 (s, 1H), 7.30-7.20 (m, 5H), 6.57 (s, 1H), 5.31 (s, 2H), 5.07 (s, 2H), 4.15 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.22 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ164.3, 158.3, 154.1, 154.0, 152.4, 149.5, 140.5, 128.6, 128.3, 126.0, 125.2, 124.5, 114.6, 109.3, 59.9, 47.4, 32.0, 13.3, 10.9.
실시예 2. 4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-5-(3- 메틸벤질 )-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2-아민 (화합물 2)의 제조
[화합물 2]
Figure 112014111190248-pat00011
[전체 반응식]
Figure 112014111190248-pat00012

단계 1. 3-(m-톨일) 프로판알의 제조
Figure 112014111190248-pat00013
아르곤 대기 하에서 3-아이오도톨루엔 (1.18 mL, 9.17 mmol)을 N,N-디메틸포름아마이드 (16 mL)에 녹인 후 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (2.09 g, 9.17 mmol), 탄산수소나트륨 (1.54 g, 18.35 mmol), 알릴 알코올 (1.25 mL, 18.35 mmol)과 팔라듐(II) 아세테이트 (494 mg , 2.20 mmol)을 반응물에 가한 후 40 oC 에서 12 시간 교반하였으며, 반응의 완결을 TLC (헥산:에틸아세테이트 = 2:1)로 확인하였다. 반응 용액을 상온으로 냉각한 후 얼음물에 넣고 디클로로메탄 (20 mLx3)으로 추출하였으며, 추출한 유기용매 층을 염화나트륨 포화용액 (60 mL)으로 세척한 후 유기용매 층을 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 용매를 제거하였다. 농축액을 칼럼 크로마토그래피 (헥산:에틸아세테이트 = 7:1)로 분리 정제하여 목적 화합물 (912 mg, 67 % 수율)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ9.84 (s, 1H), 7.28 (t, J = 7.8 Hz, 2H), 7.13-7.08 (m, 2H), 2.99 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.79 (t, J = 7.1 Hz, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ201.5, 140.5, 138.2, 129.2, 128.6, 127.1, 125.4, 45.3, 28.1, 21.4.
단계 2. 2-아미노-5-(3- 메틸벤질 )-3,7- 디하이드로 -4H- 피롤로[2,3-d] 피리미딘-4-온의 제조
Figure 112014111190248-pat00014
실시예 1의 단계 (1)과 같은 방법으로 상기 단계 (1)에서 제조한 3-(m-톨일)프로판알 (912 mg, 6.15 mmol), 브로모트리메틸실레인 (1.22 mL, 9.23 mmol)과 브로민 (0.32 mL, 6.15 mmol)으로부터 2-브로모-3-(m-톨일)프로판알 (1.40 g, qaunt. 수율)을 얻었고, 4-디아미노-6-하이드록시피리미딘 (776 mg, 6.15 mmol), 아세트산 나트륨 (1.01 mg, 12.30 mmol)과 상기 실험에서 제조한 2-브로모-3-(m-톨일)프로판알 (1.40 g, 6.15 mmol)로부터 목적 화합물 (648 mg, 41% 수율)을 얻었다.
mp 286.1-287.4℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ10.69 (s, 1H), 10.12 (s, 1H), 7.13-7.08 (m, 4H), 6.93 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 6.26 (s, 1H), 6.00 (s, 2H), 3.89 (s, 2H), 2.24 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.8, 152.6, 151.6, 142.6, 137.3, 129.6, 128.3, 126.5, 126.1, 118.2, 114.4, 99.2, 32.1, 21.5.
단계 3. 4- 클로로 -5-(3- 메틸벤질 )-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00015
실시예 1의 단계 (2)와 같은 방법으로 상기 단계 (2)에서 제조한 2-아미노-5-(3-메틸벤질)-3,7-디하이드로-4H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-온 (563 mg, 2.21 mmol), 아세트산무수물 (2.5 mL), 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (1.01 g, 4.43 mmol), N,N-디메틸아닐린 (0.56 mL, 4.43 mmol), 포스포러스(V) 옥시클로라이드 (2.59 mL, 13.28 mmol)과 methanolic 메타놀릭 3N HC1 (7.4 mL)으로부터 목적 화합물 (478 mg, 79% 수율)을 얻었다.
mp 232.5-233.6℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ11.24 (s, 1H), 7.14 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 7.01-6.98 (m, 3H), 6.77 (s, 1H), 6.45 (s, 2H), 3.99 (s, 2H), 2.24 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.6, 155.6, 151.3, 141.4, 137.6, 129.4, 128.5, 126.9, 125.9, 121.8, 113.3, 107.8, 31.7, 21.5.
단계 4. 4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-5-(3-메틸벤질)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00016
실시예 1의 단계 (3)와 같은 방법으로 상기 단계 (3)에서 제조한 4-클로로-5-(3-메틸벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민 (300 mg, 1.10 mmol), 2-클로로메틸-4-메톡시-3,5-디메틸피리딘 (254 mg, 1.14 mmol)과 탄산칼륨 (456 mg, 3.30 mmol)으로부터 목적 화합물 (292 mg, 63% 수율)을 얻었다.
mp 203.4-204.5℃;
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ8.23 (s, 1H), 7.17 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 7.03-7.01 (m, 3H), 6.57 (s, 1H), 5.31 (s, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.11 (s, 2H), 3.78 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ164.3, 158.3, 154.03, 153.97, 152.4, 149.4, 140.4, 137.8, 129.4, 128.2, 126.7, 126.0, 125.7, 125.2, 124.5, 114.8, 109.3, 59.9, 47.4, 31.8, 21.4, 13.3, 10.9.
실시예 3. 4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-5-(4- 메틸벤질 )-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2-아민 (화합물 3)의 제조
[화합물 3]
Figure 112014111190248-pat00017
[전체 반응식]
Figure 112014111190248-pat00018

단계 1. 3-(p-톨일) 프로판알의 제조
Figure 112014111190248-pat00019
실시예 2의 단계 (1)과 같은 방법으로 4-아이오도톨루엔 (2.00 g, 9.17 mmol), 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (2.09 g, 9.17 mmol), 탄산수소나트륨 (1.54 g, 18.35 mmol), 알릴 알코올 (1.25 mL, 18.35 mmol)과 팔라듐(II) 아세테이트 (494 mg , 2.20 mmol)로부터 목적 화합물 (1.11 g, 81 % 수율)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ9.82 (s, 1H), 7.49 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 7.27 (d, J = 8.0 Hz, 2H), 2.95 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.77 (t, J = 7.6 Hz, 2H), 2.43 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ201.7, 137.3, 135.8, 129.3, 128.2, 45.4, 27.7, 21.0.
단계 2. 2-아미노-5-(4- 메틸벤질 )-3,7- 디하이드로 -4H- 피롤로[2,3-d] 피리미딘-4-온의 제조
Figure 112014111190248-pat00020
실시예 1의 단계 (1)과 같은 방법으로 상기 단계 (1)에서 제조한 3-(p-톨일)프로판알 (1.11 g, 7.46 mmol), 브로모트리메틸실레인 (1.48 mL, 11.19 mmol)과 브로민 (0.38 mL. 7.46 mmol)으로부터 2-브로모-3-(p-톨일)프로판알 (1.69 g, qaunt. 수율)을 얻었고, 4-디아미노-6-하이드록시피리미딘 (940 mg, 7.46 mmol), 아세트산 나트륨 (1.22 g, 14.91 mmol)과 상기 실험에서 제조한 2-브로모-3-(p-톨일)프로판알 (1.69 g, 7.46 mmol)로부터 목적 화합물 (1.22 g, 64% 수율)을 얻었다.
mp 294.1-295.1℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ10.67 (s, 1H), 10.11 (s, 1H), 7.16 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 7.02 (d, J = 7.6 Hz, 2H), 6.24 (s, 1H), 5.99 (s, 2H), 3.87 (s, 2H), 2.23 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.7, 152.6, 151.5, 139.6, 134.6, 129.0, 128.9, 118.4, 114.2, 99.2, 31.8, 21.1.
단계 3. 4- 클로로 -5-(4- 메틸벤질 )-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00021
실시예 1의 단계 (2)와 같은 방법으로 상기 단계 (2)에서 제조한 2-아미노-5-(4-메틸벤질)-3,7-디하이드로-4H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-온 (1.06 g, 4.17 mmol), 아세트산무수물 (5 mL), 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (1.90 g, 8.33 mmol), N,N-디메틸아닐린 (1.06 mL, 8.33 mmol), 포스포러스(V) 옥시클로라이드 (4.87 mL, 24.99 mmol)과 methanolic 메타놀릭 3N HC1 (14 mL)으로부터 목적 화합물 (243 mg, 21% 수율)을 얻었다.
mp 247.4-248.5℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ11.23 (s, 1H), 7.07 (s, 4H), 6.76 (s, 1H), 6.44 (s, 2H), 3.99 (s, 2H), 2.25 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.6, 155.7, 151.3, 138.4, 135.1, 129.2, 128.7, 121.8, 113.5, 107.8, 31.4, 21.1.
단계 4. 4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-5-(4-메틸벤질)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00022
실시예 1의 단계 (3)와 같은 방법으로 상기 단계 (3)에서 제조한 4-클로로-5-(4-메틸벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민 (170 mg, 0.63 mmol), 2-클로로메틸-4-메톡시-3,5-디메틸피리딘 (144 mg, 0.65 mmol)과 탄산칼륨 (259 mg, 1.87 mmol)으로부터 목적 화합물 (152 mg, 58% 수율)을 얻었다.
mp 188.4-189.8℃;
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ8.23 (s, 1H), 7.10 (s, 4H), 6.57 (s, 1H), 5.31 (s, 2H), 5.03 (s, 2H), 4.11 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ164.3, 158.3, 154.1, 154.0, 152.4, 149.4, 137.5, 135.4, 129.0, 128.5, 126.0, 125.2, 124.4, 115.0, 109.3, 59.9, 47.4, 31.5, 21.0, 13.3, 10.9.
실시예 4. 4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-5-(4-메톡시벤질)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2-아민 (화합물 4)의 제조
[화합물 4]
Figure 112014111190248-pat00023
[전체 반응식]
Figure 112014111190248-pat00024

단계 1. 3-(4- 메톡시페닐 ) 프로판알의 제조
Figure 112014111190248-pat00025
수소 대기 하에서 트랜스-p-메톡시시남알데하이드데하이드 (1.00 g, 6.17 mmol)을 메탄올 (12 mL)에 녹인 후 팔라듐 (131 mg, 0.20 mmol)을 반응물에 가한 후 상온에서 2 시간 교반하였으며, 반응의 완결을 TLC (헥산:에틸아세테이트 = 2:1)로 확인하였다. 반응 용액을 실라이트 패드에 디클로로메탄 (20 mLx3)으로 여과하였으며, 감압 농축하여 용매를 제거하였다. 농축액을 칼럼 크로마토그래피 (헥산:에틸아세테이트 = 2:1)로 분리 정제하여 목적 화합물 (619 mg, 66% 수율)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ9.83 (s, 1H), 7.15 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.88 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 2.94 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 7.3 Hz, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ201.8, 158.1, 132.4, 129.3, 114.0, 103.8, 55.3, 45.5, 27.3.
단계 2. 2-아미노-5-(4-메톡시벤질)-3,7- 디하이드로 -4H- 피롤로[2,3-d]피리미 딘-4-온의 제조
Figure 112014111190248-pat00026
실시예 1의 단계 (1)과 같은 방법으로 상기 단계 (1)에서 제조한 3-(4-메톡시페닐)프로판알 (1.25 g, 7.59 mmol), 브로모트리메틸실레인 (1.50 mL, 11.38 mmol)과 브로민 (0.39 mL, 7.59 mmol)으로부터 2-브로모-3-(4-메톡시페닐)프로판알 (1.85 g, qaunt. 수율)을 얻었고, 4-디아미노-6-하이드록시피리미딘 (957 mg, 7.59 mmol), 아세트산 나트륨 (1.25 g, 15.18 mmol)과 상기 실험에서 제조한 2-브로모-3-(4-메톡시페닐)프로판알 (1.85 g, 7.59 mmol)로부터 목적 화합물 (1.45 g, 71% 수율)을 얻었다.
mp 268.3-270.0℃;
+isomer 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ10.72 (s, 1H), 10.66 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 10.11 (s, 1H), 7.48 (s, 1H), 7.26 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.97 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.79 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.35 (s, 1H), 6.24 (s, 1H), 6.01 (s, 1H), 5.99 (s, 2H), 3.85 (s, 3H), 3.78 (s, 2H), 3.69 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.73, 159.70, 157.7, 153.8, 152.7, 152.6, 151.7, 151.6, 136.8, 134.7, 133.1, 129.9, 129.3, 118.7, 117.9, 114.4, 114.1, 113.9, 112.9, 110.5, 99.1, 99.0, 56.6, 55.4, 31.3, 30.9.
단계 3. 4- 클로로 -5-(4-메톡시벤질)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00027
실시예 1의 단계 (2)와 같은 방법으로 상기 단계 (2)에서 제조한 2-아미노-5-(4-메톡시벤질)-3,7-디하이드로-4H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-온 (1.14 g, 4.21 mmol), 아세트산무수물 (4.7 mL), 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (1.92 g, 8.41 mmol), N,N-디메틸아닐린 (1.07 mL, 8.41 mmol), 포스포러스(V) 옥시클로라이드 (4.92 mL, 25.24 mmol)과 methanolic 메타놀릭 3N HC1 (14 mL)으로부터 목적 화합물 (903 mg, 74% 수율)을 얻었다.
mp 237.5-238.7℃;
+isomer 1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ11.28 (s, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.18-7.10 (m, 2H), 7.00 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.84 (s, 2H), 6.74 (s, 1H), 6.47 (s, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 3.70 (s, 1H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.7, 159.6, 157.9, 155.7, 154.0, 151.3, 151.2, 135.4, 133.3, 132.9, 129.8, 129.2, 122.0, 121.6, 114.1, 113.8, 113.1, 113.0, 110.7, 107.7, 107.6, 56.6, 55.4, 31.0, 30.5.
단계 4. 4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-5-(4-메톡시벤질)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00028
실시예 1의 단계 (3)와 같은 방법으로 상기 단계 (3)에서 제조한 4-클로로-5-(4-메톡시벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민 (300 mg, 1.05 mmol), 2-클로로메틸-4-메톡시-3,5-디메틸피리딘 (242 mg, 1.09 mmol)과 탄산칼륨 (431 mg, 3.12 mmol)으로부터 목적 화합물 (214 mg, 47% 수율)을 얻었다.
mp 191.6-192.8℃;
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ8.22 (s, 1H), 7.13 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.54 (s, 1H), 5.30 (s, 2H), 5.07 (s, 2H), 4.08 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.76 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ164.3, 158.3, 157.9, 154.1, 154.0, 152.4, 149.5, 149.4, 132.6, 129.6, 126.0, 125.2, 124.3, 115.2, 113.7, 59.9, 55.3, 47.4, 31.1, 13.3, 10.9.
실시예 5. 5-(4- 브로모 -3-메톡시벤질)-4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2-아민 (화합물 5)의 제조
[화합물 5]
Figure 112014111190248-pat00029
[전체 반응식]
Figure 112014111190248-pat00030

단계 1. 3-(3- 메톡시페닐 ) 프로판알의 제조
Figure 112014111190248-pat00031
실시예 2의 단계 (1)과 같은 방법으로 3-아이오도아니솔 (1.02 mL, 8.55 mmol), 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (1.95 g, 8.55 mmol), 탄산수소나트륨 (1.44 g, 17.09 mmol), 알릴 알코올 (1.16 mL, 17.09 mmol)과 팔라듐(II) 아세테이트 (1.16 mL, 17.09 mmol)로부터 목적 화합물 (904 mg, 64 % 수율)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ9.72 (s, 1H), 7.19 (t, J = 8.1 Hz, 1H), 6.77-6.73 (m, 3H), 3.74 (s, 3H), 2.88 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.69 (t, J = 7.4 Hz, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ201.4, 159.8, 142.2, 129.6, 120.6, 114.2, 111.5, 55.0, 45.0, 28.1.
단계 2. 2-아미노-5-(4- 브로모 -3-메톡시벤질)-3,7- 디하이드로 -4H-피롤로[ 2,3-d]피리미딘 -4-온의 제조
Figure 112014111190248-pat00032
실시예 1의 단계 (1)과 같은 방법으로 상기 단계 (1)에서 제조한 3-(3-메톡시페닐)프로판알 (904 mg, 5.50 mmol), 브로모트리메틸실레인 (1.09 mL, 8.26 mmol)과 브로민 (0.28 mL, 5.50 mmol) 으로부터 2-브로모-3-(4-브로모-3-메톡시페닐)프로판알 (1.34 g, 75% 수율)을 얻었고, 4-디아미노-6-하이드록시피리미딘 (694 mg, 5.50 mmol), 아세트산 나트륨 (903 mg, 11.01 mmol)과 상기 실험에서 제조한 2-브로모-3-(4-브로모-3-메톡시페닐)프로판알 (1.34 g, 5.50 mmol)로부터 목적 화합물 (1.50 g, 75% 수율)을 얻었다.
mp 288.1-289.3℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ10.76 (s, 1H), 10.21 (s, 1H), 7.44 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.03 (d, J = 2.9 Hz, 1H), 6.71 (dd, J = 8.7 Hz, 3.0 Hz, 1H), 6.28 (s, 1H), 6.04 (s, 2H), 3.99 (s, 2H), 3.67 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.7, 159.1, 152.7, 151.7, 142.5, 133.1, 117.3, 115.8, 114.9, 114.5, 113.6, 99.2, 55.6, 32.5.
단계 3. 5-(4- 브로모 -3-메톡시벤질)-4- 클로로 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2-아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00033
실시예 1의 단계 (2)와 같은 방법으로 상기 단계 (2)에서 제조한 2-아미노-5-(4-브로모-3-메톡시벤질)-3,7-디하이드로-4H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-온 (1.20 g, 3.44 mmol), 아세트산무수물 (4 mL), 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (1.57 g, 6.87 mmol), N,N-디메틸아닐린 (0.87 mL, 6.87 mmol), 포스포러스(V) 옥시클로라이드 (4.02 mL, 20.62 mmol)과 methanolic 메타놀릭 3N HC1 (12 mL)으로부터 목적 화합물 (632 mg, 50% 수율)을 얻었다.
mp 225.6-226.6℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ11.29 (s, 1H), 7.51 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.77 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.66 (s, 1H), 6.64 (s, 1H), 6.49 (s, 1H), 4.07 (s, 2H), 3.65 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.7, 159.2, 155.7, 155.6, 151.3, 141.5, 133.4, 122.2, 122.0, 117.0, 114.6, 113.7, 111.3, 107.7, 55.7, 32.5.
단계 4. 5-(4- 브로모 -3-메톡시벤질)-4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00034
실시예 1의 단계 (3)와 같은 방법으로 상기 단계 (3)에서 제조한 5-(4-브로모-3-메톡시벤질)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민 (300 mg, 0.82 mmol), 2-클로로메틸-4-메톡시-3,5-디메틸피리딘(189 mg, 0.85 mmol)과 탄산칼륨 (338 mg, 2.45 mmol)으로부터 목적 화합물 (152 mg, 27% 수율)을 얻었다.
mp 232.3-233.3℃;
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ8.21 (s, 1H), 7.45 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 6.64 (s, 2H), 6.55 (s, 1H), 5.32 (s, 2H), 5.01 (s, 2H), 4.19 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.21 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ164.3, 159.0, 158.4, 154.1, 153.9, 152.5, 149.4, 141.1, 133.1, 126.0, 125.2, 124.9, 116.4, 115.0, 113.1, 112.7, 109.3, 59.9, 55.3, 47.5, 32.5, 13.3, 10.9.
실시예 6. 4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-5-(3-( 트리플로로메틸 )벤질)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2-아민 (화합물 6)의 제조
[화합물 6]
Figure 112014111190248-pat00035
[전체 반응식]
Figure 112014111190248-pat00036

단계 1. 3-(3-( 트리플루오로메틸 ) 페닐 ) 프로판알의 제조
Figure 112014111190248-pat00037
실시예 2의 단계 (1)과 같은 방법으로 3-아이오도벤조트리플루오라이드 (1.06 mL, 7.35 mmol), 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (1.68 g, 7.35 mmol), 탄산수소나트륨 (1.24 g, 14.71 mmol), 알릴 알코올 (1.00 mL, 14.71 mmol)과 팔라듐(II) 아세테이트 (396 mg, 1.77 mmol)로부터 목적 화합물 (561 mg, 38 % 수율)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ9.85 (s, 1H), 7.37-7.28 (m, 1H), 7.16 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.08 (s, 2H), 3.00 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.83 (t, J = 7.1 Hz, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ200.7, 149.4, 142.8, 129.9, 126.8, 120.9, 118.7, 44.9, 27.7.
단계 2. 2-아미노-5-(3-( 트리플루오로메틸 )벤질)-3,7- 디하이드로 -4H-피롤로[ 2,3-d]피리미딘 -4-온의 제조
Figure 112014111190248-pat00038
실시예 1의 단계 (1)과 같은 방법으로 상기 단계 (1)에서 제조한 3-(3-(트리플루오로메틸)페닐)프로판알 (1.14 g, 5.65 mmol), 브로모트리메틸실레인 (1.12 mL, 8.47 mmol)과 브로민 (0.29 mL. 5.65 mmol)으로부터 2-브로모-3-(4-클로로페닐)프로판알 (1.59 g, qaunt. 수율)을 얻었고, 4-디아미노-6-하이드록시피리미딘 (713 mg, 5.65 mmol), 아세트산 나트륨 (927 mg, 11.30 mmol)과 상기 실험에서 제조한 2-브로모-3-(4-클로로페닐)프로판알 (1.59 g, 5.65 mmol)로부터 목적 화합물 (525 mg, 30% 수율)을 얻었다.
mp 264.9-266.2℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ10.76 (s, 1H), 10.20 (s, 1H), 7.39-7.31 (m, 3H), 7.11 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 6.40 (s, 1H), 6.04 (s, 2H), 3.97 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.7, 152.7, 151.7, 148.8, 145.8, 130.3, 128.1, 125.6, 122.3, 121.3, 118.9, 118.3, 117.1, 115.5, 114.6, 99.0, 31.8.
단계 3. 4- 클로로 -5-(3-( 트리플루오로메틸 )벤질)-7H- 피롤로[2,3-d] 피리미딘-2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00039
실시예 1의 단계 (2)와 같은 방법으로 상기 단계 (2)에서 제조한 2-아미노-5-(3-(트리플루오로메틸)벤질)-3,7-디하이드로-4H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-온 (524 mg, 1.70 mmol), 아세트산무수물 (2.0 mL), 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (774 mg, 3.40 mmol), N,N-디메틸아닐린 (0.43 mL, 3.40 mmol), 포스포러스(V) 옥시클로라이드 (2.0 mL, 10.19 mmol)과 methanolic 메타놀릭 3N HC1 (6 mL)으로부터 목적 화합물 (324 mg, 56% 수율)을 얻었다.
mp 203.6-204.5℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ11.31 (s, 1H), 7.40 (t, J = 8.2 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 7.17 (s, 1H), 6.89 (s, 1H), 6.48 (s, 2H), 4.10 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.7, 155.7, 151.2, 148.8, 144.6, 130.5, 127.9, 122.2, 121.1, 118.7, 112.2, 107.6, 31.4.
단계 4. 4- 클로로 -7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일) 메틸 )-5-(3-( 트리플 루오로메틸)벤질)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00040
실시예 1의 단계 (3)와 같은 방법으로 상기 단계 (3)에서 제조한 4-클로로-5-(3-(트리플루오로메틸)벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민 (200 mg, 0.61 mmol), 2-클로로메틸-4-메톡시-3,5-디메틸피리딘 (141 mg, 0.64 mmol)과 탄산칼륨 (254 mg, 1.84 mmol)으로부터 목적 화합물 (208 mg, 71% 수율)을 얻었다.
187.4-188.2℃;
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ8.22 (s, 1H), 7.30 (t, J = 7.6 Hz, 1H), 7.15 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.60 (s, 1H), 5.32 (s, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.15 (s, 2H), 3.76 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 2.22 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ164.3, 158.4, 154.1, 153.8, 152.4, 149.5, 149.3, 143.0, 129.5, 127.0, 126.1, 125.2, 124.6, 121.1, 118.4, 113.5, 109.1, 59.9, 47.4, 31.7, 13.3, 10.9.
실시예 7. 4- 클로로 -5-(4- 클로로벤질 )-7-((4- 메톡시 -3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2-아민 (화합물 7)의 제조
[화합물 7]
Figure 112014111190248-pat00041
[전체 반응식]
Figure 112014111190248-pat00042

단계 1. 3-(4- 클로로페닐 ) 프로판알의 제조
Figure 112014111190248-pat00043
실시예 2의 단계 (1)과 같은 방법으로 4-클로로아이오도벤젠 (2.00 g, 8.39 mmol), 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (1.91 g, 8.39 mmol), 탄산수소나트륨 (1.41 g, 16.78 mmol), 알릴 알코올 (1.14 mL, 16.78 mmol)과 팔라듐(II) 아세테이트 (452 mg , 2.01 mmol)로부터 목적 화합물 (695 mg, 49 % 수율)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ9.84 (s, 1H), 7.29 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 7.16 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 2.96 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.80 (t, J = 6.9 Hz, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ201.0, 138.9, 132.1, 129.7, 128.7, 45.1, 27.4.
단계 2. 2-아미노-5-(4- 클로로벤질 )-3,7- 디하이드로 -4H- 피롤로[2,3-d]피리미 딘-4-온의 제조
Figure 112014111190248-pat00044
실시예 1의 단계 (1)과 같은 방법으로 상기 단계 (1)에서 제조한 3-(4-클로로페닐)프로판알 (695 mg, 4.12 mmol), 브로모트리메틸실레인 (0.82 mL, 6.19 mmol)과 브로민 (0.21 mL. 4.12 mmol)으로부터 2-브로모-3-(4-클로로페닐)프로판알 (1.02 g, qaunt. 수율)을 얻었고, 4-디아미노-6-하이드록시피리미딘 (713 mg, 5.65 mmol), 아세트산 나트륨 (927 mg, 11.30 mmol)과 상기 실험에서 제조한 2-브로모-3-(4-클로로페닐)프로판알 (1.02 g, 4.13 mmol) 로부터 목적 화합물 (496 mg, 44% 수율)을 얻었다.
mp 289.0-290.0℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ10.73 (s, 1H), 10.13 (s, 1H), 7.32-7.25 (m, 4H), 6.33 (s, 1H), 6.02 (s, 2H), 3.91 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.7, 152.7, 151.7, 141.9, 130.8, 130.5, 128.3, 117.5, 114.5, 99.1, 31.5.
단계 3. 4- 클로로 -5-(4- 클로로벤질 )-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00045
실시예 1의 단계 (2)와 같은 방법으로 상기 단계 (2)에서 제조한 2-아미노-5-(4-클로로벤질)-3,7-디하이드로-4H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-온 (399 mg, 1.45 mmol), 아세트산무수물 (2.5 mL), 벤질트리에틸암모늄 클로라이드 (661 mg, 2.90 mmol), N,N-디메틸아닐린 (0.4 mL, 2.90 mmol), 포스포러스(V) 옥시클로라이드 (1.70 mL, 8.71 mmol)과 methanolic 메타놀릭 3N HC1 (5 mL)으로부터 목적 화합물 (236 mg, 55% 수율)을 얻었다.
mp 272.3-273.3℃;
1H NMR (300 MHz, DMSO-d 6) δ11.29 (s, 1H), 7.31 (d, J = 7.9 Hz, 2H), 7.21 (d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.84 (s, 1H), 6.47 (s, 2H), 4.03 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, DMSO-d 6) δ159.7, 155.7, 151.2, 140.7, 130.8, 130.6, 128.6, 122.1, 112.6, 107.6, 31.1.
단계 4. 4- 클로로 -5-(4- 클로로벤질 )-7-((4- 메톡시 -3,5- 다이메틸피리딘 -2-일)메틸)-7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00046
실시예 1의 단계 (3)와 같은 방법으로 상기 단계 (3)에서 제조한 4-클로로-5-(4-클로로벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민 (197 mg, 0.67 mmol), 2-클로로메틸-4-메톡시-3,5-디메틸피리딘 (156 mg, 0.70 mmol)과 탄산칼륨 (279 mg, 2.02 mmol)으로부터 목적 화합물 (129 mg, 43% 수율)을 얻었다.
mp 178.0-179.2℃;
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ8.22 (s, 1H), 7.24 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.14 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 6.58 (s, 1H), 5.31 (s, 2H), 5.04 (s, 2H), 4.11 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 2.23 (s, 3H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ164.3, 158.4, 154.1, 153.8, 152.4, 149.5, 139.1, 131.7, 130.0, 128.4, 126.0, 125.2, 124.6, 114.1, 109.1, 59.9, 47.3, 31.4, 13.3, 10.9.
실시예 8. 5,7- 디벤질 -4- 클로로 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2-아민 (화합물 8)의 제조
[화합물 8]
Figure 112014111190248-pat00047
[전체 반응식]
Figure 112014111190248-pat00048
실시예 1의 단계 (3)와 같은 방법으로 실시예 단계 (2)에서 제조한 5-벤질-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민 (0.14 mL, 1.21 mmol), 벤질클로라이드 (0.14 mL, 1.21 mmol)과 탄산칼륨 (481 mg, 3.48 mmol)으로부터 목적 화합물 (239 mg, 59% 수율)을 얻었다.
mp 150.0-150.9℃;
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ7.33 (t, J = 7.5 Hz, 6H), 7.25 (d, J = 7.1 Hz, 2H), 7.18 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 6.46 (s, 1H), 5.23 (s, 2H), 5.07 (s, 2H), 4.19 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ158.5, 154.3, 152.6, 140.3, 137.0, 128.8, 128.7, 128.4, 127.8, 127.3, 126.1, 124.3, 115.2, 109.4, 47.6, 32.1.
실시예 9. 7-( 벤조[d][1,3]디옥솔 -5- 일메틸 )-5-벤질-4- 클로로 -7H- 피롤로[2,3-d]피리미딘 -2-아민 (화합물 9)의 제조
[화합물 9]
Figure 112014111190248-pat00049
[전체 반응식]
Figure 112014111190248-pat00050

단계 1. 5-( 클로로메틸 ) 벤조 [d][1,3] 디옥솔의 제조
Figure 112014111190248-pat00051
아르곤 대기 하에서 피페로닐 알코올 (2.00 g, 13.15 mmol)와 트리에틸아민 (1.94 mL, 13.93 mmol)을 디클로로메탄 (44 mL)에 녹인 후 0 oC로 냉각하고 DCM (18 mL) 에 녹아 있는 염화 티오닐 (1.44 mL, 19.72 mmol)을 적가하였다. 반응 용액을 상온에서 2시간 동안 교반하였으며, 반응의 완결을 TLC (헥산:에틸아세테이트 = 2:1)로 확인하였다. 반응 용액을 0 oC로 냉각하고 증류수 (65 mL), 2N 염화클로라이드 수용액 (10 mL)과 탄산수소나트륨 포화용액 (40 mL)으로 세척한 후, 디클로로메탄 (15 mLx3)으로 추출한 유기용매 층을 염화나트륨 포화용액 (25 mL)으로 다시 세척한 후 유기용매 층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 용매를 제거하였다. 농축액을 칼럼 크로마토그래피 (헥산:에틸아세테이트 = 3:1)로 분리 정제하여 목적 화합물 (2.11 g, 94% 수율)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ6.93 (s, 1H), 6.89 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.82 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.99 (s, 2H), 4.57 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ148.0, 147.9, 131.4, 122.4, 109.2, 108.3, 101.4, 46.7.
단계 2. 7-( 벤조[d][1,3]디옥솔 -5- 일메틸 )-5-벤질-4- 클로로 -7H-피롤로[ 2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00052
실시예 8과 같은 방법으로 실시예 단계 (2)에서 제조한 5-벤질-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민 (300 mg, 1.16 mmol), 상기 단계 (1)에서 제조한 5-(클로로메틸)벤조[d][1,3]디옥솔 (206 mg, 1.21 mmol)과 탄산칼륨 (481 mg, 3.48 mmol)으로부터 목적 화합물 (274 mg, 60% 수율)을 얻었다.
mp 175.8-177.1℃;
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ7.34-7.24 (m, 5H), 6.76 (s, 1H), 6.70 (s, 2H), 6.45 (s, 1H), 5.96 (s, 2H), 5.10 (s, 2H), 5.07 (s, 2H), 4.17 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ158.5, 154.2, 152.6, 148.1, 147.3, 140.3, 130.8, 128.7, 128.4, 126.1, 124.0, 120.9, 115.2, 109.4, 108.4, 108.1, 101.2, 47.4, 32.1.
실시예 10. 5-벤질-7-((6- 브로모벤조[d][1,3]디옥솔 -5-일) 메틸 )-4- 클로로 -7H-피 롤로[2,3-d]피리미 딘-2-아민 (화합물 j)의 제조
[화합물 10]
Figure 112014111190248-pat00053
[전체 반응식]
Figure 112014111190248-pat00054

단계 1. 5- 브로모 -6-( 클로로메틸 ) 벤조 [d][1,3] 디옥솔의 제조
Figure 112014111190248-pat00055
아르곤 대기 하에서 실시예 9의 단계 (1)에서 제조한 5-(클로로메틸)벤조[d][1,3]디옥솔 (2.29 g, 13.42 mmol)을 아세토나이트릴 (27 mL) 에 녹인 후 N-브로모석신이마이드 (2.39 g, 16.11 mmol)을 가하였다. 반응 용액을 상온에서 13시간 동안 교반하였으며, 반응의 완결을 TLC (헥산:에틸아세테이트 = 2:1)로 확인하였다. 반응 혼합액을 물에 넣은 후, 디클로로메탄 (10 mLx3)으로 추출한 유기용매 층을 염화나트륨 포화용액 (50 mL)으로 다시 세척한 후 유기용매 층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 용매를 제거하였다. 농축액을 칼럼 크로마토그래피 (헥산:에틸아세테이트 = 5:1)로 분리 정제하여 목적 화합물 (3.32 g, 99% 수율)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ7.02 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.01 (s, 2H), 4.64 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ148.7, 147.6, 129.7, 115.2, 112.9, 110.4, 102.2, 46.6.
단계 2. 5-벤질-7-((6- 브로모벤조[d][1,3]디옥솔 -5-일) 메틸 )-4- 클로로 -7H- 피 롤로[ 2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00056
실시예 8과 같은 방법으로 실시예 단계 (2)에서 제조한 5-벤질-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민 (300 mg, 1.16 mmol), 상기 단계 (1)에서 제조한 5-브로모-6-(클로로메틸)벤조[d][1,3]디옥솔 (301 mg, 1.21 mmol)과 탄산칼륨 (481 mg, 3.48 mmol)으로부터 목적 화합물 (304 mg, 56% 수율)을 얻었다.
mp 210.3-210.8℃;
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ7.35-7.22 (m, 5H), 7.05 (s, 1H), 6.53 (s, 1H), 6.45 (s, 1H), 5.98 (s, 2H), 5.21 (s, 2H), 5.01 (s, 2H), 4.19 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ158.5, 154.3, 152.7, 148.1, 147.8, 140.2, 129.4, 128.7, 128.4, 126.2, 124.3, 115.3, 113.3, 112.8, 109.3, 109.0, 101.9, 47.5, 32.1.
실시예 11. 5-벤질-4- 클로로 -7-((6- 아이오도벤조[d][1,3]디옥솔 -5-일) 메틸 )-7H-피 롤로[2,3-d]피리미 딘-2-아민 (화합물 11)의 제조
[화합물 11]
Figure 112014111190248-pat00057
[전체 반응식]
Figure 112014111190248-pat00058

단계 1. (6- 아이오도벤조[d][1,3]디옥솔 -5-일)메탄올의 제조
Figure 112014111190248-pat00059
아르곤 대기 하에서 피페로닐 알코올 (2.50 g, 16.43 mmol)과 실버 트리플루오로아세테이트 (4.36 g, 19.72 mmol)을 디클로로메탄 (51 mL)에 녹인 후 메탄올 (51 mL)에 녹아있는 아이오딘 (5.00 g, 19.72 mmol)을 0 oC에서 천천히 적가하였다. 반응 용액을 상온에서 14시간 동안 교반하였으며, 반응의 완결을 TLC (헥산:에틸아세테이트 = 2:1)로 확인하였다. 반응 후 생긴 고체를 디클로로메탄으로 실라이트에 여과한 후 감압 농축하여 용매를 제거한다. 농축액을 디클로로메탄 (20 mLx3)으로 추출하였으며, 추출한 유기용매 층을 메타중아황산나트륨 포화용액 (20 mL)과 염화나트륨 포화용액 (50 mL)으로 세척한 후 유기용매 층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고 여과 및 감압 농축하여 용매를 제거하였다. 농축액을 칼럼 크로마토그래피 (헥산:에틸아세테이트 = 6:1)로 분리 정제하여 목적 화합물 (4.57 g, quant. 수율)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ7.27 (s, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.01 (s, 2H), 5.34 (s, 1H), 4.62 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ148.7, 147.9, 136.3, 118.6, 109.1, 101.7, 85.4, 69.3.
단계 2. 5-( 클로로메틸 )-6- 아이오도벤조[d][1,3]디옥솔의 제조
Figure 112014111190248-pat00060
실시예 9의 단계 (1)과 같은 방법으로 상기 단계 (1)에서 제조한 (6-아이오도벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)메탄올 (300 mg, 1.16 mmol), 트리에틸아민 (2.43 mL, 17.42 mmol) 과 염화 티오닐 (1.80 mL, 24.65 mmol) 으로부터 목적 화합물 (4.87 g, quant. 수율)을 얻었다.
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ7.30 (s, 1H), 7.01 (s, 1H), 6.03 (s, 2H), 4.66 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ148.73, 148.67, 133.2, 118.9, 110.1, 102.0, 88.2, 51.4.
단계 3. 5-벤질-4- 클로로 -7-((6- 아이오도벤조[d][1,3]디옥솔 -5-일) 메틸 )-7H-피롤로[ 2,3-d]피리미딘 -2- 아민의 제조
Figure 112014111190248-pat00061
실시예 8과 같은 방법으로 실시예 단계 (2)에서 제조한 5-벤질-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민 (205 mg, 0.79 mmol), 상기 단계 (1)에서 제조한 5-(클로로메틸)-6-아이오도벤조[d][1,3]디옥솔 (245 mg, 0.83 mmol) 과 탄산칼륨 (329 mg, 2.38 mmol)으로부터 목적 화합물 (220 mg, 53% 수율)을 얻었다.
mp 189.5-190.3℃;
1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ7.35-7.22 (m, 6H), 6.51 (s, 1H), 6.41 (s, 1H), 5.97 (s, 2H), 5.16 (s, 2H), 5.02 (s, 2H), 4.19 (s, 2H);
13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ158.5, 154.3, 152.7, 148.9, 148.1, 140.2, 132.6, 128.7, 128.4, 126.2, 124.2, 118.7, 115.4, 109.3, 108.7, 101.8, 85.8, 52.3, 32.1.
실험예 1. 암세포 억제제의 항암 효과 검증 ( MCF -7, HCT116 , SK - BR -3)
MTT assay에 사용한 세포주들은 MCF-7 (Human breast cancer), SK-BR-3 (Human breast cancer) 와 HCT116 (Human colon carcinoma cancer), 이며 모두 한국세포주은행에서 분양 받아 배양하였다. 배양액은 10 % 소태아혈청(fetal bovine serum)을 포함한 RPMI 1640 medium을 사용하였으며 37℃ 항온 항습 5% CO2 배양기(incubator)에서 배양하였다. 배양 중인 세포를 96 well microplate에 각 well당 세포수가 3 X 103이 되도록 분주하여 CO2 배양기에서 24시간 배양한 후 media를 제거하고 농도 별로 희석한 저해제(inhibitor) 용액들을 100 ㎕씩 넣어서 72시간 배양하였다. MTT 용액 (Promega, CellTiter 96)을 15 ㎕씩을 가하여 4시간 배양한 후. Stop solution (Promega, CellTiter 96)을 100 ㎕씩 가하여 형성된 blue formazan 을 녹인다. 18 시간이상 방치 후, 570 nm에서 흡광도를 측정하여 GI50(암세포를 50% 저해하는 농도)를 구하였다. 화합물 1 내지 11의 화합물을 각각 10 μM 농도 또는 농도 별로 처리 하거나 처리하지 않고 72 시간 경과한 시점에서 암세포에 대한 % 저해 활성 및 GI50를 각각 측정하여 첨가된 화합물 별로 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다.
하기 표 1은 화합물을 처리하지 않은 경우 (음성 대조군)의 암세포 활성을 100%로 하여, 화합물의 첨가 농도 별 암세포의 활성을 정량화하여 나타낸 것이다. 양성 대조군으로 BIIB021(6-chloro-9-[(4-methoxy-3,5-dimethylpyridin-2-yl-)methyl]-9H-purin-2-amine, 항암물질)과 17-AAG (17-allylamino-17-demethoxygeldanamycin, 항암물질)를 사용하였다. 상기, BIIB021 및 17-AAG 모두 임상 중인 항암물질이며, BIIB021은 실험실에서 직접 합성하였고, 17-AAG는 LC Laboratroies®에서 구매하였다.
화합물 MCF -7 SK - BR -3 HCT116
% Inhibition
10 μM		 GI50,
μM		 % Inhibition
10 μM		 GI50,
μM		 % Inhibition
10 μM		 GI50,
μM
1 85.61 0.35
±0.003		 69.9 0.69
±0.021		 88.52 0.52
±0.031
2 86.53 0.69
±0.02		 87.15 0.83
±0.11		 94.18 0.87
±0.01
3 83.20 1.09
±0.09		 81.04 1.48
±0.01		 71.33 1.72
±0.16
4 80.06 1.35
±0.08		 80.89 1.49
±0.07		 69.43 1.95
±0.24
5 62.01 4.44
±0.10		 78.70 3.94
±0.09		 80.24 3.65
±0.21
6 79.09 4.95
±0.77		 21.58 2.55
±0.57		 89.77 1.51
±0.26
7 87.97 1.05
±0.04		 72.59 1.53
±0.23		 90.09 1.08
±0.09
8 26.4 - 80.54 - 30.57 -
9 54.03 - 4.32 - 48.75 -
10 69.94 20.80
±2.40		 40.92 8.34
±0.67		 70.41 5.15
±0.15
11 74.04 6.40
±0.14		 63.8 7.55
±0.27		 74.49 5.05
±0.10
BIIB021 84.81 0.392
±0.03		 86.20 0.227
±0.015		 71.94 0.347
±0.023
17- AAG 79.74 0.498
±0.06		 88.89 0.205
±0.009		 74.44 0.140
±0.012
상기 표 1에 나타난 바와 같이, 음성 대조군 (control, DMSO를 처리한 세포)의 암세포 (%) 값을 100%로 하였을 때, 본 발명의 실시예 1 내지 11에 따른 화합물들의 암세포 억제 효과는 MCF-7 암세포 10 μM의 농도에서 최소 약 26.4%에서부터 최대 87.97%정도에 이르기 까지 암세포를 억제한 것으로 나타냈다. HCT116 암세포에서는 최소 약 30.57%에서 94.18%까지 억제하였고, SK-BR-3 암세포에서는 최소 약 4.32%에서 87.15%까지 억제하였다. 높은 %저해를 나타내는 화합물에 대하여 GI50를 측정한 결과, 화합물 1는 MCF-7 암세포에서 약 0.35±0.003μM의 농도로 양성 대조군인 17-AAG보다 높고 BIIB021과 유사한 억제 활성을 나타냈고, SK-BR-3와 HCT116에서는 약 0.69±0.021과 0.52±0.031 μM으로 합성한 화합물에서 가장 좋은 활성을 나타냈다. 화합물 2도 MCF-7, SK-BR-3와 HCT116의 암세포에서 약 0.69±0.02, 0.83±0.11와 0.87±0.01μM의 농도로 우수한 암세포 억제 활성을 확인하였다.
실험예 2. 정상 세포에서의 세포 독성 측정
실험예 1에서와 같은 방법으로 실험예 2를 진행하였으며, HFF-1 (Human Fibroblast) 정상 세포주(ATCC®, SCRC-1041)에 암세포 저해 활성이 좋은 화합물 1을 10 uM 농도로 처리하고 72 시간 경과한 시점에서 정상 세포에 대한 % 저해 활성을 측정하여 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
가장 우수한 항암활성을 보이는 화합물 1 은 세포 독성 (cytotoxicity) 측정결과 정상세포에 대해 10 uM 농도에서 46.74%를 저해효과를 보였으며, 이는 대조물질 (BIIB021과 17-AAG) 보다 세포독성이 낮고, 활성대비 28배 이상의 낮은 독성을 보였다.
화합물 HFF-1
% Inhibition
10 uM
1 46.74
BIIB021 51.28
17-AAG 65.49
따라서 본 발명에 따라 제조된 화합물은 정상 세포에는 독성이 적고 암세포를 선택적으로 억제하는 우수한 효과를 보여주었으며, 유효용량을 초과하여 과다량을 사용할 경우라도 위험성이 매우 낮아 안전하게 사용 가능함을 확인하였다.
실험예 3. MCF -7 세포주에서 클라이언트 단백질의 분해 및 Hsp70 유도 효과 측정
본 발명의 화합물 1을 대상으로 하여 MCF-7 세조주에서 Hsp90 클라이언트 단백질 EGFR, Her2, Met, 그리고 Akt의 분해 효과를 측정하였으며, Hsp70의 유도를 관찰함으로써 Hsp90의 기능 억제를 조사하였다.
MCF-7 세포에 실시예 1 화합물을 30, 20, 10, 5, 1, 0 mM 농도로 24시간 동안 처리하였고, 클라이언트 단백질, Hsp90, 그리고 Hsp70의 발현 수준들은 웨스턴 블랏팅 방법으로 측정하였다. MCF-7 세포는 1ⅹ106 cells/dish의 농도로 60 mm 배양 접시에 접종하고 하루 동안 세포들을 바닥에 부착시켰다. 화합물을 농도별 세포에 처리 후 24시간 배양하였으며, 대조군으로 1 % DMSO 또는 겔다나마이신 (1 mM, Enzo Life Sciences )을 세포에 처리 한 후 24시간 배양하였다. 세포들을 차가운 lysis 버퍼 (25 mM Tris-HCl pH 7.4, 150 mM NaCl, 1% NP40, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS)로 추출하고 SDS-PAGE로 20 mg의 용해물을 분리하였다. 이를 PVDF 막 (Bio-Rad)에 옮긴 후 막을 5% skim milk와 함께 TBST에 블랏시키고 EGFR, Her2, Met, Akt, Hsp90, Hsp70, 및 β-Actin에 대한 항체들(Cell Signaling Technology® 에서 구입)과 함께 배양하였다. 효소 (Horseradish peroxidase)에 연결된 두번째 항체의 결합 후, 단백질은 SuperSignal® West Dura Extended Euration Substrate (Thermo Scientific, USA)을 통해 측정되었고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에 나타난 바와 같이, 실시예 1 화합물이 EGFR, Her2, MET, 그리고 Akt 단백질의 수준을 감소시키며, 5 mM 농도에서 Her2와 MET 단백질의 수준을 최대로 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. 또한, Hsp70의 발현을 유도함을 확인 할 수 있었으며, Hsp90의 발현에는 변화가 없는 것으로 확인되어, 본 발명의 화합물은 Hsp90의 기능을 저해함으로써, 클라이언트 단백질의 발현 수준을 감소시켜 항암 효과를 나타낸 것을 확인할 수 있었다.
따라서, 본 발명의 화합물은 Hsp90의 기능 억제제로써의 항암 조성물로 확인되며, 추후 개발되는 화합물의 골격으로 사용될 수 있는 가능성을 입증하였다.

Claims (11)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물:
    [화학식 1]
    Figure 112016116583601-pat00062

    상기 화학식 1에서,
    상기 R1은 하나 이상의 치환기로서 각각 독립적으로 H; 염소; 브롬; 트리플루오로메틸; C1-C3 알킬 또는 C1-C3 알콕시기이고,
    R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 H; C1-C3 알킬기; C1-C3 알콕시기 또는 C1-C3 사슬로 연결된 다이알콕시이고,
    X는 탄소 또는 질소이며,
    X가 탄소인 경우, X는 H; 브롬; 및 요오드로 구성된 군에서 선택되는 원자로 치환된 것이다.
  2. 삭제
  3. 제1항에 있어서,
    하기 화합물로 이루어진 군에서 선택된 것인 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물:
    5-벤질-4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    5-벤질-4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-5-(4-메틸벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-5-(4-메톡시벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    5-(4-브로모-3-메톡시벤질)-4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-5-(3-(트리플로로메틸)벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    4-클로로-5-(4-클로로벤질)-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    5,7-디벤질-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    7-(벤조[d][1,3]디옥솔-5-일메틸)-5-벤질-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    5-벤질-7-((6-브로모벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)메틸)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민; 및
    5-벤질-4-클로로-7-((6-아이오도벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 약학적으로 허용 가능한 염은 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 질산, 아세트산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 만델산, 타타르산, 시트르산, 아스코빈산, 팔미트산, 말레인산, 하이드록시말레인산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산 및 톨루엔설폰산으로 구성된 군에서 선택되는 무기산 또는 유기산의 염인,
    피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물.
  5. 하기 화학식 1로 표시되는 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물을 유효성분으로 포함하는,
    암의 예방 또는 치료용 약학 조성물:
    [화학식 1]
    Figure 112016116583601-pat00063

    상기 화학식 1에서,
    상기 R1은 하나 이상의 치환기로서 각각 독립적으로 H; 염소; 브롬; 트리플루오로메틸; C1-C3 알킬 또는 C1-C3 알콕시기이고,
    R2, R3, R4 및 R5는 각각 독립적으로 H; C1-C3 알킬기; C1-C3 알콕시기 또는 C1-C3 사슬로 연결된 다이알콕시이고,
    X는 탄소 또는 질소이며,
    X가 탄소인 경우, X는 H; 브롬; 및 요오드로 구성된 군에서 선택되는 원자로 치환된 것이다.
  6. 삭제
  7. 제5항에 있어서,
    하기 화합물로 이루어진 군에서 선택된 것인 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물:
    5-벤질-4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    5-벤질-4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-5-(4-메틸벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-5-(4-메톡시벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    5-(4-브로모-3-메톡시벤질)-4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    4-클로로-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-5-(3-(트리플로로메틸)벤질)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    4-클로로-5-(4-클로로벤질)-7-((4-메톡시-3,5-디메틸피리딘-2-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    5,7-디벤질-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    7-(벤조[d][1,3]디옥솔-5-일메틸)-5-벤질-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민;
    5-벤질-7-((6-브로모벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)메틸)-4-클로로-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민; 및
    5-벤질-4-클로로-7-((6-아이오도벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)메틸)-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-2-아민.
  8. 제5항에 있어서,
    상기 약학적으로 허용 가능한 염은 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 질산, 아세트산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 만델산, 타타르산, 시트르산, 아스코빈산, 팔미트산, 말레인산, 하이드록시말레인산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산 및 톨루엔설폰산으로 구성된 군에서 선택되는 무기산 또는 유기산의 염인,
    암의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  9. 제5항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 피롤로 피리미딘 화합물, 이의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 수화물을 전체 약학 조성물의 총 중량에 대하여 0.5 내지 10 중량％의 양으로 포함하는 것인,
    암의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  10. 삭제
  11. 삭제
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