KR101514970B1 - 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 포함하는 아토피 또는 피부상처 치료 또는 예방용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 포함하는 아토피의 치료, 또는 완화용의 조성물에 관한 것이다. 본원의 조성물은 세라마이드의 전구체인 스핑고신을 대체한 물질을 사용하여 경제적일 뿐아니라, 아토피의 치료에도 우수한 효과가 있다.

Description

피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 포함하는 아토피 또는 피부상처 치료 또는 예방용 조성물 {Cmposition for treating or preventing atopic dermatitis or skin wound comprising phytosphingosine-1-phosphate or its derivatives}

본 발명은 피부질환의 치료에 관한 것으로, 구체적으로는 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 이용한 아토피 치료 분야에 관한 것이다.

아토피는 각종 오염물질 또는 포도상구균 등의 세균에 피부가 과민 반응을 일으켜서 발생하는 피부질환이며, 특히 건조한 성질의 피부 또는 피부가 건조한 상태에서 발병하기 쉬우며, 만성적이며 주기적인 발병과 재발을 특징으로 하고 있다.

아토피는 치명적인 질환은 아니지만, 암, 에이즈, 치매 등과 함께 인류가 해결해야 할 난치병으로 알려 많은 환자에게 있어서 일상생활을 영위하는데 심각한 장애를 초래하여 삶의 질을 떨어뜨리는 질환이다. 특히 청소년과 어린이들에게는 정서불안, 집중력의 감소 등 학업에 많은 지장을 주는 시회적 문제로 대두되고 있으며, 환경 및 심리적인 스트레스로 인해 성인에게도 증가하고 있는 추세이다. 미국의 조사 보고서에 의하면 응답자의 56%가 사회생활에 불편을 느끼고 있다고 했으며 80%는 수면장애를 경험한 것으로 나타났다.

환자의 85%가 5세 이전에 발병하고 이들 가운데 60%는 성인이 되어서도 아토피성 피부염 증세를 지니고 있다고 한다. 대체로 전체 인구의 51%가 이러한 질병을 경험하는 것으로 알려졌으나 문제는 환경적 요인에 의해 발병률이 점차 증가하고 있는데 있다. 일례로 미국의 경우 1970년대보다 최근에는 환자 발병률이 3배나 증가하였다는 보고가 이를 뒷받침한다. 한국은 세계적으로도 아토피 환자의 발병률이 높은 국가에 속하는데 아파트 주거 환경과 밀접한 관련이 있을 것으로 생각된다.

아토피는 유전적, 환경적 그리고 면역학적 요인들이 복합적으로 작용하여 발병하는 것으로 추측되고 있을 뿐 아직도 그 원인이 정확하게 밝혀지지 않고 있으며, 그 근본적인 치료법도 개발되지 않고 있다. 주요 치료방법으로는 스테로이드계 연고나 항히스타민제 등이 주로 사용되고 있으며, 병변의 진행에 따라 수반되는 피부감염증의 치료로 항생제가 사용되기도 하며 심한 경우 자외선 조사나 면역억제제 등이 사용되기도 한다.

현재까지 알려진 치료 방법 중에 스테로이드 연고가 아토피 치료에 좋은 효과를 보이지만, 장기적으로 사용할 경우 피부 면역반응의 저하 및 불균형, 피부 장벽의 회복능력 감소로 인한 홍조현상, 피부 경화, 알러지, 접촉성 피부염 등의 부작용을 초래하고, 사용을 중단 할 시 아토피 피부염이 재발되는 등의 문제점이 있다.

한국 등록 특허 제0404072 호는 광범위 피부질환 치료용 조성물에 관한 것으로, 피부를 구성하는 주요 지질 성분인 스핑고리피드 및 리소포스파티딜산을 포함하는 피부염, 세균 감염성 피부질환, 등을 치유 또는 개선시킬 수 있는 조성물을 개시한다.

이러한 문제점을 고려하여 부작용에 대해 보다 안전하고 우수한 효과를 나타내며 경제적인 아토피 치료 또는 완화용 물질의 개발이 요구된다.

본원은 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 이용한 아토피 피부질환의 치료에 효과적으로 사용될 수 있는 조성물을 제공하고자 한다.

한 양태에서 본원은 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체 또는 그 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 아토피 또는 피부상처 치료용 약학 조성물을 제공한다. 본원에 따른 조성물에서 상기 유도체는 N-아세틸피토스핑고신-1-포스페이트 또는 사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트를 포함하며, 특히 사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트는 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트를 포함한다.

본원에 따른 조성물에 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체는 약 0.001 중량% 내지 1 중량%로 포함된다.

본원에 따른 일 구현예에서 N-아세틸피토스핑고신-1-포스페이트 및 사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트는 조합으로 사용된다.

본원에 따른 조성물은 피부 국소 적용에 적합한 제형을 가지며, 예를 들면 크림, 연고, 페이스트, 거품, 젤, 로션, 스프레이, 스틱 또는 에어로졸을 포함한다.

다른 측면에서 본원의 조성물은 화장품으로 제공될 수 있다.

본원의 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체 (N-아세틸피토스핑고신-1-포스페이트, 사이클릭 피토스핑고신-1-포스페이트)를 한 종 또는 그 이상으로 포함하는 조성물은 피부 면역반응의 저하 및 불균형, 피부 장벽의 회복능력 감소로 인한 홍조현상, 피부 경화, 알러지, 접촉성 피부염 등의 부작용 없이 아토피 피부염 및 창상회복과 같은 상처 치료에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 스핑고신-1-포스페이트의 대사과정을 나타낸 모식도이다.
도 2는 C57/BL6 마우스의 옆구리를 제모한 다음 피부에 염증을 유발시킨 후 본원 일 실시예에 따른 조성물의 상처 치유능을 시험한 것으로, 처리 1은 피토스핑고신-1-포스페이트를 0.01중량%로 포함하는 조성물, 처리 2는 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트를 0.01중량%로 포함하는 조성물을 각각 1회씩 피하 주사하여 10일 후 피하주사한 부위의 상처를 대조군과 비교한 사진이다.
도 3은 아토피 피부염 환자의 환부에 피토스핑고신-1-포스페이트를 포함하는 나노에멀젼을 8주간 도포한 결과를 도포전과 비교한 사진이다.
도 4는 아토피 피부염 환자의 환부에 8주간 나노에멀젼을 도포하면서 환자의 병변 및 비병변 부위의 피부 수분량 및 피부 pH의 변화를 나타낸 도표이다.
도 5는 접촉피부염(홍반) 환자에게 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트를 포함하는 나노에멀젼을 2주 및 3.5주 동안 도포한 경우 홍반이 개선된 사진이다.

본원은 하나 이상의 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체, 그 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물을 포함하는 아토피 피부염 또는 피부 상처의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.

본원에서 아토피 피부염 또는 아토피 피부질환이란 주로 유아기 혹은 소아기에 시작되는 만성적이고 재발성의 염증성 피부질환으로 소양증(가려움증)과 피부건조증, 특징적인 습진을 동반하는 피부질환을 일컫는다. 유아기에는 얼굴과 팔다리의 펼쳐진 쪽 부분에 습진으로 시작되지만, 성장하면서 특징적으로 팔이 굽혀지는 부분과 무릎 뒤의 굽혀지는 부위에 습진의 형태로 나타나게 되며, 많은 경우에 성장하면서 자연히 호전되는 경향을 보인다. 성인의 경우 접히는 부위 피부가 두꺼워지는 태선화(lichenification)가 나타나고, 유소아기에 비해 얼굴에 습진이 생기는 경우가 많다.

본원에서 피부상처란, 피부의 정상적인 기능에서 벗어나 피부장벽, 면역반응, 및 피지분비의 이상 또는 각질세포의 이상 증식, 미생물 감염, 외부적인 자극에 의해 생성되는 모든 질환으로, 아토피, 접촉피부염, 여드름, 건선, 흉터, 화상, 욕창을 포함한다.

스핑고신-1-포스페이트는 세포이동, 세포증식 (세포사멸 억제), 신생혈관생성, 상처치유 등을 담당하는 신호전달물질이며 세포 표면의 에 작용해서 다양한 반응을 일으킨다. 한편, 스핑고신-1-포스페이트 함량 변화를 측정한 결과 아토피 부위와 혈액에서 스핑고신-1-포스페이트의 함량이 현저히 감소된 것이 보고된 바 있다 (J Invest Daermatol 131:266-268, 2011). 그러나 스핑고신-1-포스페이트는 1 mg 당 421,000원 (Sigma 가격)으로 매우 고가의 물질이므로 아토피 치료에 이용할 수 없었다.

본원에서는 피토스핑고신-1-포스페이트 (2-amino-3,4-dihydroxyoctadecyl hydrogen phosphate)는 하기 화학식 I로 표시된다.

[화학식 I]

본원에서 사용된 용어 "유도체"란 어떤 화합물의 일부를 화학적으로 변화시켜서 얻어지는 유사한 화합물이다. 보통은 화합물 중의 수소원자 또는 특정 원자단이 다른 원자 또는 원자단에 의하여 치환된 화합물을 말한다. 본원에서는 피토스핑고신-1-포스페이트의 유도체로 하기 화학식 IIa의 N-아세틸피토스핑고신-1-포스페이트 (N-acetyl-2-amino-3,4-dihydroxyoctadecyl hydrogen phosphate) 또는 하기 화학식 IIb의 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트 (5-amino-2-hydroxy-4-(1-

hydroxypentadecyl)-1,3,2-dioxaphosphinane 2-oxide) 가 이에 포함된다.

[화학식 IIa]

[화학식 IIb]

본원에 따른 화합물은 유기화학 분야에 공지되어 있는 통상의 지식을 이용하여 제조할 수 있으며, 예를 들어 (S. Li, W.K. Wilson, G.J. Schroepfer, Chemical synthesis of D-ribo-phytosphingosine-1-phosphate, potential modulator of cellular processes. J. Lipid Res. 40: 117-125, 1999)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 제조할 수 있으며, O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트의 제조 방법은 실시예 1에 기재하였다.

상기 화학식 I, IIa 또는 IIb의 화합물의 약학적으로 허용 가능한 염, 또는 그 용매화물은 유기화학분야에서 통상의 지식을 가진 자가 당해 기술분야에 공지된 지식을 이용하여 적절히 제조하거나 선택할 수 있다.

염은 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여시 통상적인 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말하며, 상기 염으로는 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하다. 상기 유리산은 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탄산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한, 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다. 본원에 따른 일 구현예에서 약학적으로 허용 가능한 염은 상기 화학식 I, IIa 또는 IIb의 화합물이 유리산과 함께 염을 형성하는 산부가염으로 존재할 수 있다. 또한, 본원에 따른 상기 화학식 I, IIa 또는 IIb의 화합물은 약학적으로 허용 가능한 염뿐만 아니라, 통상의 방법에 의해 제조될 수 있는 모든 염, 수화물, 용매화물을 모두 포함할 수 있다.

상기 화학식 I, IIa 또는 IIb의 화합물은 화합물 내의 암모늄 양이온과 짝을 이루는 음이온에 의해 안정화 될 수있으며, 상기 음이온은 약제학적으로 허용되면서 암모늄 양이온과 함께 짝을 이룰 수 있는 임의의 음이온일 수 있으며, 예를 들어 요오다이드(I^-), 설포네이트(SO₃ ^{2 -}), 클로라이드(Cl^-) 등이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

본원에서 사용된 용어 "치료"란 조성물의 투여 또는 도포로 아토피 피부염 증세를 호전시키거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 의미한다. 본원이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자라면, 대한의학협회 등에서 제시된 자료를 참조하여 아토피 피부염 또는 본원의 조성물이 효과가 있는 질환의 정확한 기준을 알고, 개선, 향상 및 치료된 정도를 판단할 수 있을 것이다.

본원에서 사용된 용어 "예방"은 본원에 따른 조성물의 투여로 본 조성물이 효과가 있는 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미한다. 아토피 및 피부 상처 치료에 효과가 있는 본원의 조성물은 관련 질환의 초기 증상, 또는 나타나기 전에 복용할 경우 이러한 질환을 예방할 수 있다는 것은 당업자에게 자명할 것이다.

본원의 조성물은 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체의 단독 또는 혼합물을 유효성분으로 포함하며, 스테로이드나 항히스타민제를 사용하지 않고 아토피 피부염의 완화 및 치료 효과를 나타낸다. 본원의 조성물에 포함되는 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체의 함량은 이에 한정되지 않으나 전체 조성물의 총 중량에 대하여 상기 각 성분을 약 0.001중량% 내지 1 중량%, 특히 약 0.005 중량% 로 포함한다.

상기 본원에 따른 조성물은 성인을 기준으로 본원에 따른 화학식 I, IIa 또는 IIb의 화합물을 1일 0.0001 내지 1000 mg/kg으로, 바람직하게는 1일 0.001 내지 1000 mg/kg의 투여량으로 투여할 수 있다.

국소투여 시에는 화학식 I, IIa 또는 IIb의 화합물을 아토피 또는 피부 상처의 치료 또는 예방을 원하는 부위에 1일 1회 내지 2회 정도 도포함으로써 투여할 수 있다. 활성성분이 1 중량% 일 때를 기준으로 일일 도포량으로는 0.5-3 mg 정도이며, 도포 부위의 면적에 따라 증감될 수 있다. 이러한 화학식 I, IIa 또는 IIb의의 화합물의 투여량 및 횟수는 환자의 나이, 성별, 질환의 진행 정도, 투여경로, 제형 등에 따라 적절히 증감하여 사용될 수 있다.

본원에 따른 조성물은 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 두 종이상 조합으로 사용할 수 있다. 본원에 따른 일 구현예에서는 피토스핑고신-1-포스페이트 및 사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트, 특히 o-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트가 조합으로 사용되며, 조합에 의한 상승효과를 기대할 수 있다.

본원의 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 포함하는 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체, 선택적으로 부형제 또는 안정화제와 함께 제형화된다.

본원에서 약학적으로 허용가능한 담체는 생리적으로 적합한 물질로, 예를 들면 임의의 용매, 분산매질, 코팅제 항박테리아 및 항진균제, 등장액, 흡수/재흡수 지연제, 등과 같은 물질을 포함한다. 한 구현예에서, 담체는 특히 주사 및 주입에 적합한 물질이 사용된다. 예를 들면 약학적으로 허용가능한 담체는 멸균수용액 또는 등장 완충 식염수 또는 분산액 및 멸균 주사액 제조용 멸균 분말을 포함할 수 있으며, 당업자라면 조성물에 포함되는 활성성분의 종류에 따라 적절한 제제를 선택할 수 있을 것이다.

필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있으며, 표적 기관에 특이적으로 작용할 수 있도록 표적 기관 특이적 항체 또는 기타 리간드를 상기 담체와 결합시켜 사용할 수 있다. 더 나아가 당해 기술분야의 적정한 방법으로 또는 레밍턴의 문헌(Remington's Pharmaceutical Science(최근판), Mack Publishing Company, Easton PA)에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바람직하게 제형화할 수 있다.

본원에 따른 조성물은 도포용으로 제조될 경우, 고체 및 반 고형의 형태로 제조될 수 있으며, 예를 들면 크림, 연고, 페이스트, 거품, 젤, 로션, 스프레이, 스틱 또는 에어로졸의 형태일 수 있다.

크림은 50%를 초과하는 물을 함유하는 수중유 에멀션이다. 여기에 사용되는 오일-함유 기재는 통상적으로 주로 지방 알코올, 예를 들면 라우릴, 세틸 또는 스테아릴 알코올, 지방산, 예를 들면 팔미트 또는 스테아르산, 액체 내지 고체 왁스, 예를 들면 이소프로필미리스테이트 또는 비스왁스 및/또는 탄화수소 화합물, 예를 들면 파라핀 오일이다. 적합한 유화제는 주로 친수 성질을 갖는 계면활성제, 예를 들면 상응하는 비이온성 유화제, 예를 들면 에틸렌 옥시드 부가물로 된 폴리알코올의 지방산 에스테르, 예를 들면 폴리글리세롤 지방산 에스테르 또는 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에테르 (Tween 상표); 폴리옥시에틸렌 지방 알코올 에테르 또는 그들의 에스테르 또는 상응하는 이온성 유화제, 예를 들면 지방 알코올 술포네이트의 알칼리 금속 염, 소듐 세틸 설페이트 또는 소듐 스테아릴 설페이트이고, 이들은 통상적으로 세틸 알코올 또는 스테아릴 알코올 같은 지방 알코올과 함께 사용된다.

연고는 70% 이하의, 예를 들면 20% 내지 50% 이하의 물 또는 수성 상을 함유하는 유중수 에멀션이다. 오일-함유 상은 파라핀 오일 및/또는 고체 파라핀과 같은 탄화수소를 주로 함유하며, 이는 예를 들면 세틸 알코올과 같은 지방 알코올 또는 그들의 에스테르 등의 히드록시 화합물 또는 수분 흡수를 향상시키기 위한 울 왁스를 함유한다. 유화제는 소르비탄 지방산 에스테르와 같은 친유성 물질에 해당한다. 또한, 연고는 예를 들면 글리세롤,프로필렌 글리콜, 소르비톨 및/또는 폴리에틸렌 글리콜 등의 폴리알코올과 같은 보습제, 뿐만 아니라 보존제를 함유한다.

페이스트는 분비물을 흡수하는 분말화된 성분, 예를 들면 이산화티탄 또는 산화 아연과 같은 금속 산화물, 및 또한 습기 또는 흡수된 분비물과 결합하는 우지 및/또는 규산 알루미늄을 함유하는 크림 및 연고이다.

거품은 에어로솔 형태의 액체 수중유 에멀션이다. 오일-함유 상의 경우, 특히, 예를 들면 파라핀 오일과 같은탄화수소 화합물, 세틸 알코올과 같은 지방 알코올, 이소프로필미리스테이트와 같은 지방산 에스테르, 및/또는왁스가 사용된다. 적합한 유화제는 특히, 주로 친수 성질을 갖는 유화제, 예를 들면 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르, 및 또한 주로 친유 성질을 갖는 유화제, 예를 들면 소르비탄 지방산 에스테르의 혼합물이다. 시판되는 첨가제가 통상적으로 추가로 사용되는데, 예를 들면 보존제이다.

젤은, 특히, 젤 형성제가 분산 또는 팽윤되어 있는 활성 물질, 특히 셀룰로오스 에테르, 예를 들면 메틸 셀룰로오스, 히드록시에틸 셀룰로오스, 카르복시메틸 셀룰로오스 또는 식물성 히드로콜로이드, 예를 들면 소듐 알기네이트, 트라가칸트 또는 아라비아 검 및 폴리아크릴레이트 증점제 시스템의 수용액 또는 현탁액이다. 젤은 예를들면, 프로필렌 글리콜 또는 글리세롤과 같은 폴리알코올을 보습제로, 및 폴리옥시에틸렌소르비탄 지방산 에스테르 같은 습윤제를 추가로 함유한다. 젤은 또한 벤질 알코올, 펜에틸 알코올, 페녹시에탄올 등과 같은 시판되는 보존제를 함유한다.

본원의 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 포함하는 약학 조성물은 아토피 피부염에 대하여 우수한 치료 효과를 제공할 뿐만 아니라, 약물에 의한 독성 및 부작용도 없어 장기간 주사 및 도포에도 안심하고 사용할 수 있다. 이에 따라, 상기 본원의 조성물이 화장품 등으로 사용될 수 있다.

따라서, 이러한 관점에서, 본원은 상기 기술한 본원의 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 포함하는 조성물은 화장품, 예를 들면, 크림, 앰플, 스킨, 에센스, 샴푸, 비누 등으로 제공될 수 있으며, 다른 측면에서 기초 화장품 조성물 (화장수, 크림, 에센스, 클렌징 폼 및 클렌징 워터와 같은 세안제, 팩, 보디오일), 색조 화장품 조성물 (화운데이션, 립스틱, 마스카라, 메이크업 베이스), 두발 제품조성물 (샴푸, 린스, 헤어컨디셔너, 헤어젤) 및 비누 등의 형태로 제조될 수 있다.

본원에서 사용된 용어화장품이란 인체를 청결미화하여 용모를 밝게 변화시키거나 피부모발의 건강을 유지 또는 증진하기 위하여 인체에 사용되는 물품을 의미하며, 인체에 대한 작용이 경미한 것을 말한다. 통상적인 의미로서, 샴푸, 린스, 로션, 크림, 오일, 세정용 제품 및 기능성 화장품을 모두 포함하는 의도이다.

본원에서 기능성 화장품이란 물리적, 생화학적, 생물공학적 수법 등을 이용하여 해당 화장품의 기능을 특정 목적에 작용, 발현하도록 부가가치를 부여한 화장품군이나 화장품 조성이 갖는 생체방어리듬조절, 질병방지와 회복 등에 관한 체조절기능을 생체에 대하여 충분히 발현하도록 설계하여 가공한 화장품을 의미하며, 바람직하게는 피부질환 증상, 예를 들면 아토피 피부염 개선을 위한 화장품을 의미한다.

상기 기능성 화장품은 지시된 비율로 필수 성분으로서 본원의 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 포함하는 외에는 다른 성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 화장품, 예를 들면 헤어 또는 바디 세정제의 경우, 계면활성제, 유화제, 보존제, 향료 및 산화방지제를 포함하여 제조될 수 있으며, 바디크림의 경우, 식물성 오일, 유화제, 증점제, 향료, 물, 산화방지제, 및 UV 흡수제를 포함 할 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위해서 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명이 하기의 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1 O- 사이클릭피토스핑고신 -1- 포스페이트 합성

A. N-Boc-피토스핑고신의 제조

피토스핑고신을 Bull . Korean Chem . Soc ., 2003, 24, 267-268에 기재된 방법에 따라, t-부탄올 중에서 (Boc)₂O와 반응시켜 아미노기에 보호기(Boc)를 도입하여, N-Boc-피토스핑고신을 제조하였다.

B. N- Boc - 피토스핑고신 -O- 사이클릭포스페이트의 제조

1.05 당량의 POCl₃를 약 -30로 냉각된 피리딘 용매(총 부피의 1/3)에 천천히 적가하여 POCl₃/피리딘 용액을 제조하였다. 상기에서 제조한 N-Boc-피토스핑고신(1 당량)을 피리딘 용매(총 부피의 2/3)에 녹인 후 -20로 냉각한 다음 이 온도를 유지하면서 앞서 제조한 POCl₃/피리딘 용액을 추가하였다. 반응 온도가 상온까지 오른 후 감압 하에서 용매 피리딘을 제거하고 6N HCl로 pH 2로 조절 후 에틸아세테이트로 추출하였다. 이어 에틸아세테이트 추출물을 MgSO₄로 수분을 제거한 후 감압 하에서 용매를 농축하여 원하는 물질 N-Boc-피토스핑고신-O-사이클릭포스페이트를 정량적으로 얻었다.

C. O- 사이클릭피토스핑고신 -1- 포스페이트의 제조

상기 제조된 N-Boc-피토스핑고신-O-사이클릭포스페이트를 CH₂Cl₂에 녹인 후 상온에서 트리플루오로아세트산를 사용한 CH₂Cl₂ 용매 부피의 1/3을 가하여 1 시간 상온에서 교반하였다. 이어 용매를 감압 하에서 제거하고 Conc-HCl 용매를 가하여 강하게 교반하여 생성된 흰색 고체를 여과하여 얻은 후 물로 세척하고, 이어 아세톤으로 세척한 후 건조하여 최종 목적물인 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트를 염산염의 형태로서 얻었다(총 수율: 90%).

또한, 상기 얻어진 염산염을 같은 당량의 KOH 에탄올 용액으로 처리하여 염산염이 제거된 O-사이클릭 피토스핑고신-1-포스페이트를 얻었다.

또한, 상기 얻어진 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트를 3 당량의 NaOH 수용액으로 처리하여 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트 디소듐염을 제조하였다. 최종적으로 얻어진 물질의 ¹H NMR (300MHz, CD₃OD:CD₃COOD=1:1) 데이터는 다음과 같다.

¹H-NMR (300MHz, MeOH-d4: AcOH-D4/1:1) ppm, 0.83(t, 3H), 1.23(bs, 24H), 1.5(m, 1H), 1.75(m, 1H), 3.7(bs, 1H), 3.8(dd, 1H), 4.1(bm, 1H), 4.18(bq, 1H), 4.4(bt, 1H).

실시예 2 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 포함하는 나노 에멀젼의 제조

본 실시예에서는 직접 제조한 피토스핑고신-1-포스페이트, N-아세틸피토스핑고신-1-포스페이트 및 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트 각각을 유효성분으로 포함하는 나노에멀젼을 제조하였으며, 그 자세한 제조방법은 대한민국 등록 특허 제 1199580호에 기재되어 있다. 그 조성은 표 1과 같다.

성분명	조성물 1 (단위 중량%)	조성물 2 (단위 중량%)	조성물 3 (단위 중량%)
피토스핑고신-1-포스페이트	0.005	0	0
N-아세틸피토스핑고신-1-포스페이트	0	0.005	0
0-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트	0	0	0.005
피이지-8 카프릴릭/카프릭글리세라이드	5	5	5
허브추출물	20	20	20
글리세린	5	5	5
병풀추출물	6	6	6
디메칠설폰	6	6	6
모란뿌리추출물	5	5	5
헥산디올	2.5	2.5	2.5
바실러스/콩 발효추출물	3	3	3
글라이코실트레할로스	1.5	1.5	1.5
흰목이버섯추출물	1.5	1.5	1.5
레시틴	1	1	1
시트릭애씨드	0.2	0.2	0.2
피토스핑고신	0.05	0.054	0.05
오일	0.5	0.5	0.5
폴리소르베이트80	0.5	0.5	0.5
폴록사머407	0.5	0.5	0.5
토코페놀아세테이트	0.5	0.5	0.5
정제수	41.245	41.245	41.245
총	100	100	100

실시예 3 피토스핑고신 -1- 포스페이트 또는 그 유도체를 포함하는 에멀젼의 C57/BL6 마우스의 상처 치유 효과

6 주령의 C57/BL6 수컷 마우스를 (오리엔트바이오에서 구입, 평균체중 20 g) 사육실에서 적응시킨 후 마우스의 옆구리 부분의 털을 깎고 제모제를 처리하여 털을 완전히 제거하였으며, 상처가 없는 마우스를 상대로 실험을 진행하였다.

제모한 마우스를 하루동안 적응시킨 후에 대조군에는 100% 알코올을 일 회 피하주사하였다. 처리군 1에서는 0.1 mL의 0.01% 피토스핑고신-1-포스페이트를 함유하는 100% 알코올을 같은 방법으로 1 회 피하 주사하였으며 (1회), 처리군 2에서는 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트를 같은 농도 (0.01%)로 하여 1 회 피하 주사하였다. 10일 경과 후 피하주사한 부위의 상처를 비교하여 염증 및 상처회복을 비교하였다 (도 2).

그 결과 100% 알코올을 피하주사한 경우에는 염증반응과 상처가 치유되지 않았으나 피토스핑고신-1-포스페이트와 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트를 함유한 100% 알코올 처리군1 및 2 에서는 염증반응이 사라지고, 상처치유의 효과를 볼 수 있었다. 피토스핑고신-1-포스페이트 및 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트간에 상처치유에서 큰 차이를 나타내지 않았다.

실시예 4 피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 유도체를 포함하는 에멀젼의 임상치료 효과

본원에 따른 조성물의 아토피 치료효과를 파악하기 위하여 아토피 피부염 환자(소아 및 청소년 포함 남/여 10명, 평균연령 19세)를 대상으로 다음과 같은 임상실험을 실시하였다. 실시예 1에서 제조된 피토스핑고신-1-포스페이트를 함유한 나노에멀젼을 아토피 환자의 환부에, 하루에 2회씩, 매일, 8주간 도포한 후에 아토피 환자의 병변 부위가 호전되는지 여부를 관찰하였다 (도 3). 또한 병변 부위 및 비병변 부위의 수분증발량(TEWL)(Tewameter로 측정, Tewameter TM 300, Courage & Khazaka, Germany)과 피부 pH를 4주와 8주간에 비교하였다 (도 4).

그 결과 피토스핑고신-1-포스페이트를 함유한 나노에멀젼 (조성 1)을 도포한 후 피부 수분증발량 (TEWL)을 비교한 결과 도 3에서 보는 바와 같이 병변 부위에서 수분 증발량 및 피부 pH가 감소하는 것으로 나타났다.

또한 아토피 환자 외에 접촉피부염 환자 (49세, 남) 에게 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트 함유 나노에멀젼 (조성 3)을 상기와 동일한 조건으로 2 내지 4주간 도포한 경우에도 도 5에서 보는 바와 같이 접촉피부염 (홍반)이 매우 빠르게 개선되는 것으로 나타났다.

실시예 5 피토스핑고신 -1- 포스페이트 또는 그 유도체를 포함하는 에멀젼의 개를 이용한 아토피에 대한 치료 효과

실시예 1의 조성물 1 내지 3을 물과 1:1로 희석하여 스프레이로 제조 하였고, 3 내지 5년 동안 심한 아토피를 가진 애완견 (평균나이 5세, 평균 몸무게 5Kg) 을 상대로 병변 부위에 나노에멀젼을 도포하였다. 결과는 표 2에 기재되어 있다. 그룹당 6마리를 사용하였으며, 표 2의 숫자는 각 경과 일에 호전된 마릿수를 나타낸다. 그 결과 본원에 따른 조성물이 기존 제품 (휴미락)에 비해 매우 짧은 시간에 아토피를 호전시키는 것으로 나타났다.

기존제품의 경우 한달 정도 도포하여야 효과를 볼 수 있는데 반하여 본원의 스핑고신-1-포스페이트와 그 유도체를 함유한 나노에멀젼은 매우 신속하게 아토피를 회복시키는 것으로 나타났다.

	치료 후 호전되는데 필요한 시간 (day)
	2일	3일	4일	5일
휴미락	0	0	0	1
조성물 1	1	2	2	1
조성물 2	0	1	1	3
조성물 3	1	2	2	1

표 2에서 괄호안의 숫자는 호전된 마릿수이다.

이상에서 본원의 예시적인 실시예에 대하여 상세하게 설명하였지만 본원의 권리범위는 이에 한정되는 것은 아니고 다음의 청구범위에서 정의하고 있는 본원의 기본 개념을 이용한 당업자의 여러 변형 및 개량 형태 또한 본원의 권리범위에 속하는 것이다.

본 발명에서 사용되는 모든 기술용어는, 달리 정의되지 않는 이상, 본 발명의 관련 분야에서 통상의 당업자가 일반적으로 이해하는 바와 같은 의미로 사용된다. 본원에 참고문헌으로 기재되는 모든 간행물의 내용은 본 발명에 도입된다.

Claims (8)

1. N-아세틸피토스핑고신-1-포스페이트 또는 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트 또는 그 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 아토피 예방 또는 치료용 약학 조성물.
   
2. 삭제
3. 삭제
4. 제 1 항에 있어서, 상기 N-아세틸피토스핑고신-1-포스페이트 또는 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트는 0.001 중량% 내지 1 중량%로 포함하는, 아토피 예방 또는 치료용 약학 조성물.
   
5. 삭제
6. 제 1 항에 있어서, 상기 조성물은 피부 국소 투여용 제형을 갖는 것인, 아토피 예방 또는 치료용 약학 조성물.
   
7. 제 6 항에 있어서, 상기 제형은 크림, 연고, 페이스트, 거품, 젤, 로션, 스프레이, 스틱 또는 에어로졸인, 아토피 예방 또는 치료용 약학 조성물.
   
8. N-아세틸피토스핑고신-1-포스페이트 또는 O-사이클릭피토스핑고신-1-포스페이트를 포함하는 아토피 개선용 화장료 조성물.
   

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