KR101428157B1 - 동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항균용 조성물 - Google Patents

동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항균용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 폐렴, 임질, 또는 세균성 이질의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 예방 또는 개선용 건강식품 조성물 및 사료 조성물에 관한 것이다. 본 발명에 따른 약학적 조성물, 건강식품 조성물 및 사료 조성물은 폐렴간균, 임균 또는 이질균에 대한 항균활성을 가짐으로써, 폐렴, 임균 또는 세균성 이질의 예방, 치료 또는 개선용으로 사용할 수 있으며, 천연물을 이용한 항균제로서 친환경적이고 기타 부작용의 염려가 없는 안전한 항균제를 제공할 수 있다.

Description

동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 포함하는 항균용 조성물{Antibacterial composition comprising Hermetia illucens larval extracts or fractions thereof}
본 발명은 동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 폐렴, 임질, 또는 세균성 이질의 예방 또는 치료용 약학적 조성물, 예방 또는 개선용 건강식품 조성물 및 사료 조성물에 관한 것이다.
병원성 미생물에 의한 직접 혹은 간접적인 피해는 경제, 환경, 의학적으로 많은 문제를 부각시키고 있다. 식품 산업에서의 식품 유통 과정 중의 부패로 인한 손실, 농산업에서의 농작물에 대한 과량의 화학 살충제의 사용으로 인한 인체의 유해성 및 환경오염, 항생제의 오남용으로 인한 항생제 내성 균주의 출현 등 사회 전반에서 많은 문제들을 야기시키고 있다. 특히, 최근 항생제에 고도의 내성을 보이는 미생물들이 발견되고 항생제에 대한 내성 문제가 심각해지면서, 새로운 항생제의 개발이 시급히 요구되고 있다.
또한, 일반적으로 항생제는 인간뿐 아니라 축, 수산업에 있어서도 매우 중요한 역할을 한다. 과거 축, 수산의 발전에 따라서 단위 면적당 사육두수가 증가되고 생산성을 향상시키기 위하여 질병의 예방 및 치료는 성공적인 축, 수산의 중요한 요인으로 작용하였다. 이에 다양한 항생제와 성장촉진제들이 개발되었고, 현장에서 사용되어져 왔다. 이러한 항생제 사용량의 증가는 축, 수산물에 대한 오염을 초래하였고, 더 나아가 생물농축현상을 통하여 축, 수산물을 소비하는 인간의 생명을 위협하는 상황까지도 초래하였다.
현재 사용되고 있는 대부분의 항생제는 화학적인 합성을 통해 제조된 것으로서 고비용이 소요되며, 상기와 같은 오염 및 부작용을 유발하는 등의 많은 한계를 가지고 있다. 따라서, 최근에는 천연물로부터 새로운 항균물질을 분리하고자 하는 연구가 활발하게 진행되고 있으며, 항생제의 기능을 대체할 수 있는 환경친화적인 물질의 개발이 중요한 과제이다. 천연물로부터 새로운 항균물질을 분리하기 위해서는 항균 스펙트럼이 광범위하고 장기간 투여하여도 부작용이 없이 안전하여야 한다는 점 등을 고려해야 한다.
한편, 동애등에(Hermetia illucens, black sodier fly)는 아메리카 동애등에라고 알려진 파리목 동애등에과의 대표적인 환경정화곤충이다. 동애등에는 한국, 일본, 중국, 대만 등 동남아시아와 미국 등지에 널리 분포되어 있고, 주로 축사, 퇴비사, 생활쓰레기장, 음식물쓰레기장 주변에 서식하며, 알에서 성충까지 크는 기간은 약 37~41일이다. 알에서 유충, 번데기, 성충의 생활사를 가지며, 그 중에서 유충은 유기성 폐기물을 친환경적으로 분해할 수 있다고 알려져 있는데, 약 14일 정도의 유충 기간에만 먹이활동을 하기 때문에 유충 기간에 축사나 생활쓰레기 및 음식물쓰레기와 같은 유기성폐기물이 야적되어 있는 곳에서 생활사를 이어 가게 된다. 상기 동애등에에 관하여 유기성폐기물의 분해역할에 대해서는 알려져 있으나, 동애등에로부터 유래한 추출물 및 이의 분획물의 항균활성에 대해서는 알려진 바가 없다.
이러한 배경 하에서, 본 발명자들은 천연물로부터 새로운 항균물질을 분리하기 위하여 예의 노력한 결과, 동애등에로부터 유래한 추출물 및 이의 분획물이 높은 항균활성을 가짐을 확인함으로써, 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 하나의 목적은 동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 폐렴, 임질 또는 세균성 이질의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 하나의 목적은 동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 폐렴, 임질 또는 세균성 이질의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 하나의 목적은 동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 폐렴, 임질 또는 세균성 이질의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 폐렴, 임질 또는 세균성 이질의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.
본 발명에서 사용되는 용어 "동애등에(Hermetia illucens)"는, black soldier fly 라고도 불리는 파리목 동애등에과의 곤충을 의미하며, 대표적인 환경정화곤충으로 알려져 있다. 상기 동애등에는 알, 유충, 번데기, 성충의 생활사를 가지는데 본 발명에서는 그 중에서 유충 기간의 추출물 및 이의 분획물의 항균활성을 측정하였다. 본 발명의 일실시예에서는 상기 동애등에의 유충으로부터 추출물 및 이의 분획물을 제조하여 폐렴간균, 임균 또는 이질균에 대한 항균활성을 가짐을 확인하였다(도 2 내지 5).
본 발명에서 사용되는 용어 "폐렴(pneumonia)"은, 세균, 바이러스 및 곰팡이 등의 미생물로 인한 감염으로 발생하는 폐의 염증을 의미하며, 기침, 염증 물질의 배출에 의한 가래, 숨쉬는 기능의 장애에 의한 호흡곤란 등의 폐의 정상적인 기능에 장애가 생기는 폐 증상, 구역, 구토, 설사 등의 소화기 증상 및 두통, 피로감, 근육통, 관절통 등의 신체 전반에 걸친 전신 질환이 발생하는 질환이다. 본 발명의 약학적 조성물로 예방 또는 치료가 가능한 폐렴은 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 세균성 폐렴일 수 있으며, 보다 바람직하게는 폐렴간균(Klebsiella pneumoniae)에 의하여 발생하는 폐렴일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "임질"은, 임균 감염증(gonococcal infection)이라고도 불리는 질환으로서, 임균의 감염에 의해 발생하며 성관계를 통해서 전파되는 질환을 의미한다. 남성의 경우 요도염, 여성의 경우 자궁경부염의 형태로 나타나는 것이 일반적이며, 부고환염, 전립선염, 난관염, 골반감염, 인두염, 직장염, 결막염, 패혈증, 관절염, 뇌수막염 및 심내막염 등의 형태로 균의 침범부위에 따른 증상이 나타난다. 본 발명의 약학적 조성물로 예방 또는 치료가 가능한 임질은 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 임균(Neisseria gonorrhoeae)에 의하여 발생하는 임질일 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "세균성 이질(shigellosis)"은, 이질균(Shigella)에 감염된 상태를 의미하며, 대장과 소장을 침범하는 급성 감염성 질환이다. 환자 또는 보균자가 배출한 대변을 통해 구강으로 감염되며, 발열, 구역, 복통 및 후증을 동반하는 소량의 점성, 혈성 설사의 증상을 나타낸다. 본 발명의 약학적 조성물로 예방 또는 치료가 가능한 세균성 이질은 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 이질균(Shigella)에 의하여 발생하는 세균성 이질일 수 있다.
본 발명에서 상기 약학적 조성물의 폐렴, 임질 및 세균성 이질의 예방 또는 치료 효과는 각각 폐렴간균(Klebsiella pneumoniae), 임균(Neisseria gonorrhoeae) 및 이질균(Shigella)에 대한 항균활성을 가짐으로써 달성되는 것일 수 있다. 본 발명의 일실시예에서는 동애등에의 유충으로부터 제조된 추출물 및 이의 분획물이 상기 폐렴간균, 임균 또는 이질균에 대한 항균활성을 가짐을 확인함으로써 폐렴, 임질 또는 세균성 이질의 예방 또는 치료 효과를 달성할 수 있음을 확인하였다(도 2 내지 5).
본 발명에서 사용되는 용어 "폐렴간균(Klebsiella pneumoniae)"은, 그람 음성의 단간균을 의미하며, 편모, 포자는 없고, 협막을 가지고 있는 미생물이다. 보통 한천에 잘 발달하는 통성염기성균으로 사람의 장관내, 구강 등에 상재하고 있으며, 급성 폐렴의 원인균이 되며, 기관지 폐염, 요로감염증 등에서 분리되는 미생물이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "임균(Neisseria gonorrhoeae)"은, 그람 음성의 누에콩형을 한 쌍구균을 의미하며, 협막, 편모, 아포는 존재하지 않는 미생물로, 임질의 병원체이다. 집락의 성상에 따라 T1, T2, T3 및 T4의 4종류로 나누며, T1 및 T2의 집락은 크고 진한 황금빛을 하고 있다. T2쪽이 집락의 변연이 뚜렷하고, 백금이로 건드리면 무르다. T3와 T4의 집락은 크고, T3는 엷은 다색이며 집락의 표면이 거칠거칠하고, T4는 무색투명하고 부정형이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "이질균(Shigella)"은, 장내세균과에 속하는 그람 음성, 비운동성, 내생포자 비형성의 간균을 의미하며, 한천배지에서 잘 발육하는 미생물이다. O항원의 항원적 차이에 의하여 A 내지 D의 4군 4균종(A군: S. dysenterise, 1~10형, B군: S. flexneri, 1~6 및 X, Y의 8형. C군: S. boydii, 1~15형, D군: S. sonnei, 형별 없음)으로 나누어지며, 세균성 이질 및 세균성 위소장염의 원인균이다.
본 발명의 상기 항균이란 세균에 저항하는 효능, 보다 상세하게는 약제나 생리활성물질에 의한 세균 및 진균의 생육저해작용을 의미하는 것으로서, 본 발명의 목적상 상기 폐렴간균, 임균 또는 이질균의 생육저해작용을 의미한다. 본 발명의 일실시예에서는 TB assay 및 Agar disk diffusion assay를 통하여 상기 동애등에 유충에서 유래한 추출물 또는 이의 분획물이 항균활성을 가짐을 확인하였다(도 2 내지 5).
본 발명의 동애등에 유충 추출물은 이에 제한되지는 않으나, 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 이들의 조정제물 또는 정제물일 수 있다. 상기 동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물은 당업계에 공지된 일반적인 추출방법, 분리 및 정제방법을 이용할 수 있다. 상기 추출의 방법은 이에 제한되지는 않으나, 바람직하게는 열탕 추출, 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 방법을 사용할 수 있다.
본 발명에서 상기 추출물을 제조하기 위한 추출용매는 당업계에서 통상적으로 사용하는 추출용매를 사용할 수 있으며, 이에 제한되지는 않으나 물, 헥산, 클로포름, 탄소수 1 내지 6의 알코올 또는 이들의 혼합 용매를 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 상기 알코올은 메탄올 또는 에탄올일 수 있으며, 보다 더 바람직하게는 메탄올일 수 있다. 상기 분획물을 제조하기 위한 유기용매 역시 당업계에서 통상적으로 사용하는 유기용매를 사용할 수 있으며, 바람직하게는 헥산, 클로로포름, 에탄올, 메탄올, 아세테이트, 아세톤, 아세토니트릴, 벤젠, 디클로로메탄 또는 이들의 혼합 용매를 사용할 수 있으며, 보다 바람직하게는 헥산, 클로로포름 또는 메탄올을 사용할 수 있다.
본 발명에서 용어, "예방"은 상기 조성물의 투여로 상기 질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "치료"는 상기 조성물의 투여로 상기 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 의미한다.
본 발명의 약학적 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함될 수 있으며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함될 수 있다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
또한, 본 발명의 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.
본 발명의 약학적 조성물은 그 투여용량에 특별한 제약은 없고, 체내 흡수도, 체중, 환자의 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도 등에 따라 변화될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 유효량 범위를 고려하여 제조하도록 하며, 이렇게 제형화된 단위 투여형 제제는 필요에 따라 약제의 투여를 감시하거나 관찰하는 전문가의 판단과 개인의 요구에 따라 전문화된 투약법을 사용하거나 일정 시간 간격으로 수회 투여할 수 있다.
다른 하나의 양태로서, 본 발명은 동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 폐렴, 임질 또는 세균성 이질의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물을 제공한다. 상기 건강식품 조성물은 바람직하게는 폐렴간균, 임균 또는 이질균에 대한 항균활성을 가짐으로써 달성되는 것일 수 있으며, 이에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 조성물을 건강식품의 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 건강식품 또는 그 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용목적에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 본 발명의 조성물은 친환경적이며 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 혼합량에 큰 제한은 없다.
본 발명의 건강식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 조성물을 첨가할 수 있는 건강식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있고, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함할 수 있으며, 동물을 위한 사료로 이용되는 식품을 포함할 수 있다. 또한, 본 발명의 건강기능식품 조성물이 음료의 형태로 사용될 경우에는 통상의 음료와 같이 여러 가지 감미제, 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 외에 본 발명의 건강기능식품 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 동애등에 유충 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 폐렴, 임질 또는 세균성 이질의 예방 또는 개선용 사료 조성물을 제공한다. 상기 사료 조성물은 바람직하게는 폐렴간균, 임균 또는 이질균에 대한 항균활성을 가짐으로써 달성되는 것일 수 있으며, 이에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 조성물을 사료 첨가물로 사용할 경우, 상기 조성물을 그대로 첨가하거나 다른 사료 성분과 함께 혼합하여 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합량은 사용목적에 따라 적합하게 결정될 수 있으며, 본 발명의 조성물은 친환경적이며 안정성 면에서 문제가 없기 때문에 혼합량에 큰 제한은 없다.
본 발명의 사료의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 조성물은 보조 성분으로 아미노산, 무기염류, 비타민, 항산화, 미생물 제제 등과 같은 각종 보조제 및 분쇄 또는 파쇄된 밀, 보리, 옥수수 등의 식물성 단백질사료, 혈분, 육분, 생선분 등의 동물성 단백질 사료, 동물성 지방 및 식물성 지방과 같은 주성분 이외에도 영양 보충제, 성장 촉진제, 소화 흡수 촉진제, 질병 예방제와 함께 사용될 수 있다. 상기 사료의 투여 형태, 방법 및 제형은 다양할 수 있으며, 이는 상기에서 설명한 바와 같다.
본 발명의 사료 조성물은 포유류, 가금류, 어류 및 갑각류를 포함하는 다수의 동물 식이 즉, 사료에 적용할 수 있다. 상업용으로 중요한 돼지, 소, 염소 등의 포유류, 코끼리, 낙타 등의 동물원 동물, 개, 고양이 등의 가축에게 사용할 수 있으며, 닭, 오리, 거위 등의 가금류 및 송어, 새우와 같은 상업적으로 사육되는 어류 및 갑각류를 포함할 수 있으나, 이에 제한되지는 않는다.
본 발명에 따른 약학적 조성물, 건강식품 조성물 및 사료 조성물은 폐렴간균, 임균 또는 이질균에 대한 항균활성을 가짐으로써, 폐렴, 임균 또는 세균성 이질의 예방, 치료 또는 개선용으로 사용할 수 있으며, 천연물을 이용한 항균제로서 친환경적이고 기타 부작용의 염려가 없는 안전한 항균제를 제공할 수 있다.
도 1은 동애등에 유충을 유기용매 추출 시스템에 적용하여 헥산, 클로로포름, 에탄올, 메탄올 및 물 추출물을 제조하는 과정을 나타낸다.
도 2는 동애등에 유충 유래 헥산(He), 클로로포름(Ch), 에탄올(Et), 메탄올(Me), 물(DW, 멸균된 H2O) 추출물을 agar disk diffusion assay에 적용하여 폐렴간균(Klebsiella pneumoniae), 임균(Neisseria gonorrhoeae) 및 이질균(Shigella dysenteriae)에 대한 항균활성을 측정한 결과를 나타낸다.
도 3은 동애등에 유충 유래 메탄올 추출물을 agar disk diffusion assay에 적용하여 폐렴간균, 임균 및 이질균에 대한 각 농도별 항균활성을 측정한 결과를 나타낸다.
도 4는 동애등에 유충 유래 메탄올 추출물을 TB assay에 적용하여 페렴간균, 임균 및 이질균에 대한 각 농도별 항균활성을 측정한 결과를 나타낸다.
도 5는 동애등에 유충 유래 메탄올 추출물을 기반으로 하는 3차 분획물을 agar disk diffusion assay에 적용하여 페렴간균(A) 및 임균(B)에 대한 항균활성을 측정한 결과를 나타낸다.
이하, 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: 동애등에 ( Hermetia illucens ) 유충의 추출물 제조
동애등에 유충에서 유래한 추출물 및 분획물의 항균활성을 검색하기 위하여 먼저 동애등에 유충 유래 추출물을 제조하였다.
동애등에 유충 500g을 유기용매 추출 시스템에 적용하여 각각 헥산(hexane), 클로로포름(chloroform), 에탄올(ethanol), 메탄올(methanol) 및 물(H2O) 추출물을 제조하였다(도 1).
실시예 2: Agar disk diffusion assay 에 의한 항균활성의 측정
실시예 1에서 제조한 동애등에 유충 유래 추출물을 이용하여 Agar disk diffusion assay에 적용하여 다양한 종류의 미생물에 대한 항균활성을 측정하였다.
먼저 헥산, 클로로포름, 에탄올, 메탄올 및 물 추출물을 이용하여 폐렴간균(Klebsiella pneumoniae), 임균(Neisseria gonorrhoeae) 및 이질균(Shigella dysenteriae)에 대한 항균활성을 측정하였다.
agar disk diffusion assay의 실험조건은 다음과 같다. 먼저 87mm 페트리 디쉬에 고체배지용액을 부어 고정시켜 고체 균배지를 제조하고, LB(Luria-Bertani broth) 배지에 각각 해당 균주를 접종한 후, 37℃ 배양기에서 24시간 배양하였다. 다음으로, 각각의 추출물을 농도별로 제조한 후, 클린벤치 내에서 6mm 페이퍼 디스크(paper disc)에 농도별로 투여하고 1시간 건조하였다. 배양한 해당 균주를 각각 고체배지에 50㎕씩 접종한 후, 즉시 균체가 고체배지에 고르게 분포되도록 스틱으로 접종하였다. 이후, 상기에서 제조한 각각의 추출물 디스크를 고체배지 위에 올려놓고 접착시키고, 24시간 배양 후 항균활성을 측정하였다. 양성 대조군으로는 페니실린-스트렙토마이신 용액 항생제를 사용하였다.
그 결과, 동애등에 유충 유래 각 추출물의 폐렴간균, 임균 및 이질균에 대한 agar disk diffusion assay의 실험을 통하여 헥산, 클로로포름, 에탄올, 메탄올 및 물 추출물 중 메탄올 추출물은 클리어 존(clear zone)이 형성되어 항균활성을 가지고 있음을 확인하였다(도 2). 또한, 메탄올 추출물은 농도-의존적으로 매우 높은 항균활성을 가지고 있음을 확인하였다(도 3).
실시예 3: TB assay 에 의한 항균활성의 측정
실시예 1에서 제조한 동애등에 유충 유래 추출물 중 실시예 2에서 높은 항균활성을 나타내는 메탄올 추출물을 TB assay에 적용하여 다양한 종류의 미생물에 대한 항균활성을 측정하였다. 메탄올 추출물을 이용하여 폐렴간균(Klebsiella pneumoniae), 임균(Neisseria gonorrhoeae) 및 이질균(Shigella)에 대한 항균활성을 측정하였다.
TB assay의 과정은 다음과 같다. 먼저 LB(Luria-Bertani broth) 배지에 각각 해당 균주를 접종한 후, 37℃ 배양기에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, 각각의 균주를 96-웰 플레이트(well plate)의 각 웰에 100㎕씩 첨가하고 실험 추출용액을 농도별로 투여한 후, 12시간에 각 균주의 흡광도를 측정하고 정상 배양균주의 흡광도와 비교하여 항균활성 %를 계산하였다.
그 결과, 동애등에 유충 유래 메탄올 추출물의 폐렴간균, 임균 및 이질균에 대한 TB assay의 실험을 통하여, 상기 추출물은 농도-의존적으로 매우 높은 항균활성을 가짐을 확인하였다(도 4). 이러한 결과는 동애등에 유충에서 유래한 메탄올 추출물이 폐렴간균, 임균 및 이질균에 대한 항균용 조성물로서 이용 가능함을 의미한다.
실시예 4: 동애등에 메탄올 추출물의 분획물을 이용한 항균활성의 측정
고속 액체 크로마토그래피(high performance liquid chromatography, HPLC)를 이용하여 동애등에 메탄올 추출물에서 항균활성을 나타내는 선구물질의 분획을 확보하고자 하였다. open column으로 C18을 이용하여 분획물을 수득하였다.
상기 분획물의 수득조건은 다음과 같다. 먼저 혼합용매를 제조하기 위하여 헥산, 클로로포름 및 메탄올을 순차적으로 배합하였다. 즉, 헥산 100%에서 클로로포름 100%까지 순차적으로 혼합하고, 이후 클로로포름 100%에서 메탄올 100%까지 순차적으로 혼합하여 배합한 후 혼합용매를 open column에 첨가하고 용출시킨 후 그 용출 용액을 농축하여 소분획물을 획득하였다. 상기와 같은 open column과 C18을 이용한 소분획물의 획득 과정을 3차에 걸쳐 실시하였다.
상기 수득한 분획물 중 3차 open column 분획물에서 상기 실시예 3과 같은 agar disk diffusion assay의 실험을 통하여 항균활성을 측정하였다. 그 결과, 3차 open column 분획물 중 5번 분획물이 항균활성을 나타냄을 확인하였다(도 5). 이러한 결과는 동애등에 유충 유래 메탄올 추출물의 분획물에 항균활성을 나타내는 선구물질이 포함되어 있음을 의미한다.

Claims (6)

  1. 동애등에 유충 메탄올 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 폐렴, 임질 및 세균성 이질로 구성된 군에서 선택된 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 폐렴간균(Klebsiella pneumoniae), 임균(Neisseria gonorrhoeae) 및 이질균(Shigella dysenteriae)으로 구성된 군에서 선택된 미생물에 대한 항균활성을 가지는 것인 조성물.
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 동애등에 유충 메탄올 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 폐렴, 임질 및 세균성 이질로 구성된 군에서 선택된 질환의 예방 또는 개선용 건강식품 조성물.
  6. 동애등에 유충 메탄올 추출물 또는 이의 분획물을 유효성분으로 포함하는 폐렴, 임질 및 세균성 이질로 구성된 군에서 선택된 질환의 예방 또는 개선용 사료 조성물.

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