KR101427027B1 - 모과 캘러스 추출물을 함유한 피부외용제 조성물 및 그 제조방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 모과 캘러스 추출물을 함유한 피부외용제 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 모과 캘러스 추출물을 함유한 피부개선용 피부외용제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다. 본 발명에 따른 모과 캘러스 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물은 식물 배양 추출물인 모과 캘러스 추출물을 함유하고 있어, 피부세포 독성이 없고, 피부 미백, 피부 자극완화, 피부 진정 효능이 뛰어나 피부 개선용도로써 활용 가능하다.

Description

모과 캘러스 추출물을 함유한 피부외용제 조성물 및 그 제조방법 { A Skin External Composition Containing Callus Extract Derived from Chaenomeles Sinensis}

본 발명은 모과 캘러스 추출물을 함유한 피부외용제 조성물에 관한 것으로, 더욱 상세하게는, 모과 캘러스 추출물을 함유한 피부개선용 피부외용제 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다.

피부는 외부 환경과 직접 접하면서 인체를 보호하며 생화학적이고 물리적인 기능을 가지고 있는 아주 중요한 조직이다. 이 조직은 크게 3가지 즉, 표피(epidermis), 진피(dermis), 그리고, 피하(hypodermis)로 나누어진다. 멜라닌은 피부의 표피층에 존재하는 색소로서, 표피의 기저층에 존재하는 멜라노사이트(melanocyte)로부터 만들어져 케라티노사이트(keratinocyte)라는 표피 세포로 이동한다. 생체 내에는 멜라닌을 분해하는 효소가 없고, 다만 케라티노사이트가 표피에서 떨어져나갈 때 같이 피부에서 떨어져나가는 것으로 제거된다.

멜라닌 합성 과정을 살펴보면, 멜라노사이트 내의 멜라노좀이라는 소포체에서 먼저 티로시나아제(Tyrosinase)라는 효소에 의해 티로신이 도파(DOPA)를 거쳐 도파퀴논(DOPAquinone)으로 전환되고, 도파퀴논으로부터 자동 산화반응과 효소 반응으로 도파크롬(DOPAchrome)을 거쳐 흑갈색의 공중합체인 멜라닌이 생성된다. 이렇게 생성된 멜라닌은 멜라노좀을 통해 케라티노사이트로 옮겨지고 여기에서 약 28일간의 각화 과정을 거치면서 피부 표면으로 나와 각질과 함께 소실된다.

멜라닌은 햇빛 UV의 빛 에너지를 흡수하여 UV에 의한 손상으로부터 진피 이하의 피부 기관을 보호하는 역할을 하며, 피부 생체 내에 생겨난 유해산소 및 프리라디칼 등을 잡아주는 등 외부 유해인자로부터 피부를 보호해주는 유용한 역할을 수행한다. 또한, 피부 세포 내의 멜라닌 양에 따라 사람의 피부색을 결정한다. 멜라닌 색소가 많은 사람은 갈색 또는 검은 색 피부를 갖는 반면, 멜라닌 색소가 적은 사람은 흰색의 피부를 갖게 된다.

그러나 멜라닌이 비정상적으로 적게 생산되면 백반증과 같은 피부병변이 유발되고, 반대로 일광, 호르몬변화, 염증, 약제 등에 의해 멜라닌이 과도하게 합성되거나 각화작용이 원활히 이루어지지 않아 멜라닌이 완전히 없어지지 않으면 피부에 손상을 줄 뿐 만 아니라 피부의 색소가 침착되어 기미, 주근깨를 형성하며, 이와 같은 병변으로부터 나아가 피부암의 원인이 되기도 한다. 따라서, 이러한 색소 침착 현상을 방지하기 위해서는 멜라닌 생성 과정의 일부분을 저해하여 멜라닌의 생성을 감소 시켜야 한다.

오늘날 동양권의 여성들은 백옥같이 하얗고 깨끗한 피부를 선호하며 이를 미의 중요한 기준으로 삼고 있기 때문에 피부색소 이상침착의 치료 및 미용욕구 충족을 위한 미백제에 대한 개발이 활발히 이루어지고 있다.

현재 피부미용을 위한 미백제의 개발에 있어서, 생성된 멜라닌 색소를 환원시켜 탈색하는 방법과 멜라닌 색소를 형성하는 효소인 티로시나제의 활성을 억제하는 방법이 알려져 있다. 그러나 멜라닌 색소를 환원시키기 위해 사용되는 토코페롤이나 비타민류 등을 사용한 미백제는 멜라닌 색소의 탈색효과가 미미한 것으로 알려져 있다. 따라서 티로시나제의 활성을 저해시킴으로써 멜라닌 색소의 생성을 억제하는 저해제가 주목받고 있다.

종래의 화장품 분야에서는 미백성분으로서, 예를 들면, 코지산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나제 효소활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민-C(L-Ascorbic acid) 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물이 사용되어 왔다. 그러나, 처방계 중에서의 안정성이 나빠 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안전성 문제 등으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다.

이들 미백물질들 외에 천연물 특히 식물 중에서 미백활성성분을 찾기 위한 연구도 계속 이루어져왔고, 이러한 천연물 중 모과는 모과 추출물을 이용한 미백 조성물에 관한 선행 특허가 있다. (특허문헌 1)

대한민국공개특허 2003-0090126

따라서, 본 발명의 목적은 모과 캘러스 배양한 배양물 자체 또는 이로부터 얻어지는 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 피부 외용제 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은, 상기 모과 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부개선용 피부외용제 조성물의 제조방법을 제공하는데 있다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위해, 본 발명은 모과 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선용 피부 외용제 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 조성물은 피부 미백용, 피부 진정용 또는 피부 자극 완화용, 피부 보습용일 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 캘러스 추출물은 총 중량에 대하여 0.1 내지 10중량％를 함유할 수 있다.

본 발명은 또한, (a) 모과 종자로부터 캘러스를 유도하여 배양하는 단계; 및 (b) 상기 캘러스를 함유하는 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 모과 캘러스 추출물을 함유하는 피부 개선용 피부 외용제 조성물의 제조방법을 제공한다.

본 발명에 따른 모과 캘러스 추출물을 함유하는 피부외용제 조성물은 식물 배양 추출물인 모과 캘러스 추출물을 함유하고 있어, 피부세포 독성이 없고, 피부 미백, 피부 자극완화, 피부 진정 효능, 피부 보습효과가 뛰어나 피부 개선용도로써 활용 가능하다.

도 1은 배지에 치상된 절취된 자엽에서 약 4주 경과된 후 유도된 모과 캘러스를 나타낸 사진이다.
도 2는 모과 캘러스 추출물의 피부세포에 대한 독성 시험 결과를 나타낸 그래프이다.
도 3은 모과 캘러스 추출물의 멜라닌 합성 억제 효과를 확인한 그래프이다.
도 4는 모과 캘러스 추출물의 티로시나아제 활성 억제 효과를 확인한 그래프이다.

다른 식으로 정의되지 않는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술적 및 과학적 용어들은 본 발명이 속하는 기술분야에서 숙련된 전문가에 의해서 통상적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다. 일반적으로, 본 명세서에서 사용된 명명법 은 본 기술분야에서 잘 알려져 있고 통상적으로 사용되는 것이다.

본 발명의 상세한 설명 등에서 사용되는 주요 용어의 정의는 다음과 같다.

모과는 모과나무(Chaenomeles Sinensis )의 열매로 타원 모양 또는 공 모양이다. 처음엔 녹색이다가 다 익으면 노란빛이 되고 울퉁불퉁해진다. 향기가 뛰어나지만 맛은 시고, 떫으며 껍질이 단단해 날로 먹기는 어렵다. 표면에 정유 성분이 있어 끈끈한데, 이것이 향과 효능을 더해 준다. 원산지는 중국이다.

본 발명은 일 관점에서, 상기 모과 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부개선용 피부 외용제 조성물에 관한 것이다.

본 발명에 있어서, 상기 모과 캘러스 추출물은 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 10중량％를 함유하는 것을 특징으로 할 수 있다. 상기 0.1 중량％ 미만인 경우, 그 효과가 미미하며, 10중량％를 초과하는 경우 안전성과 제형 안정성의 문제점이 있다.

본 발명에 있어서, “피부 개선용”이란, 피부 상태를 개선할 수 있는 용도를 의미하며, 여기에는, 피부 미백, 피부 윤택하게 하기 위한 용도, 피부의 염증 방지, 피부 주름 개선, 피부 진정, 피부 가려움 또는 자극 완화, 피부 보습 등을 포함한다.

본 발명에 있어서, "추출물"은 상기 모과 캘러스 자체 또는 모과 캘러스를 건조하여 분말화하거나, 캘러스를 일반적인 detergent를 이용하여 화학적인 방법 또는 프렌치 프레스 방법 등의 물리적 방법으로 파쇄하여 얻은 세포 용해물인 파쇄물, 또는, 당업계에 알려진 방법으로 세포를 배양하는 과정을 거친 후 초고속 원심분리 등의 물리적 방법을 이용하여 펠렛을 제거한 나머지 배양액, 열수추출법, 에탄올 추출법을 비롯한 유기용매 추출법 등에 의해 수득한 추출물을 의미한다.

본 발명에 있어서, "유효성분으로 함유하는"의 의미는, 피부 외용제 조성물로써 피부 미백, 피부 진정효능, 피부 자극 억제 또는 완화, 피부 염증 방지, 피부 주름 예방, 피부 주름 개선, 항산화 효과, 콜라겐 합성 증진효과, 엘라스타제 억제 효과, 세포 증식능을 나타낼 수 있을 정도로 함유하는 것을 의미한다.

본 발명에 있어서, "캘러스"는 식물체에서 잘라낸 조직을 옥신을 함유한 배지에서 배양하거나, 어떤 종류의 식물에 상처를 내거나, 상구를 옥신으로 처리하거나 할 때에 생기는 특수한 조직 또는 세포덩어리를 말한다. 보통 캘러스는 정상적인 기관형성이나 조직분화를 일으키는 능력을 잃은 무정형의 조직 또는 세포덩어리로 대부분 유세포로 되어 있다. 넓은 의미로는 아그로박테리움(agrobacterium) 등의 감염에 의해서 생기는 식물종양조직도 포함시키기도 한다.

조직배양을 통한 미분화세포덩어리인 캘러스가 형성되면, 즉, 식물체내의 세포는 증식하면 즉시 방향이 정해져서 특정한 조직 더 나아가서는 기관으로 규칙적으로 조립되어 간다. 그러나, 다양한 식물 성장 호르몬 등을 외부로부터 주게 되면 그때까지 유지되어 왔던 통제가 해제되어 세포가 제멋대로 증식하는 것으로 해석된다.

탈분화에 의해 얻어진 캘러스를 같은 조성을 가진 액체배지에 넣어서 진탕배양하면 세포는 따로 떨어져 현탁 상태로서 증식을 계속한다. 이 캘러스나 배양세포는 새로운 배지에 계대 배양함으로써 영구적으로 분열 및 증식할 수 있게 되어 완전 식물체가 노화해서 죽어가는 분화세포와는 본질적으로 차이가 있다. 몇 세대정도 계대 배양한 캘러스 또는 배양세포를 다양한 식물 성장 호르몬을 제거한 고형 배지에 도포해두면 눈과 뿌리가 나와서 개체 식물이 복원된다. 이 재생식물은 한 개의 배양세포의 분열증식에서 유래한 것이며, 그 배양세포의 근원을 말하면 배축이나 수조직에서 유도한 것이다. 다시 말하면, 식물체를 구성하는 한 개의 체세포에서 식물이 복원한다는 것이다. 원래의 식물체는 몇 억 개의 체세포로 구성되어 있고, 그 모든 것이 생식세포와 같은 개체를 창조하는데 필요한 유전자를 모두 갖추고 있다는 것을 의미한다. 모식물체로부터 분리된 식물조직세포는 적정배양환경에서 배양하면 완전한 식물체로 재생될 수 있는 잠재력 즉, 전형성능을 가지고 있다. 이 전형성능은 식물 발생학 등의 학술적인 중요성은 물론이지만 화장품 원료 등의 실용화를 위해서도 활용가치가 크다.

본 발명에 있어서, "모과 캘러스"는 모과의 어느 부위로부터 유도된 것이든 모두 가능하나, 일 구체예로, 모과 종자의 발아된 유묘로부터 자엽을 절취하여 유도시킨 캘러스일 수 있고, 모과의 어느 조직이든지 일부 잘라내어 옥신 및 사이토키닌의 함량을 조절한 배지에 놓아두면 캘러스가 형성될 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 화장료 조성물 또는 약학적 조성물일 수 있다.

상기 피부외용제 조성물이 약학적 조성물일 경우, 이미 공지되어 사용되고 있는 약학적으로 허용가능한 담체를 추가적으로 포함할 수 있다. 다시말해, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제 등을 더 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 외용제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 바람직하게는 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용 약학 조성물을 제공한다. 추출물을 포함하는 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트 (calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈 (tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

본 발명의 모과 캘러스 추출물을 함유하는 미백, 피부자극완화, 보습, 진정, 피부노화방지 및 주름 개선용 조성물은 피부에 적용할 수 있는 피부 외용제 제형으로서 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제의 피부 외용제 형태의 약학조성물로 제조하여 사용할 수 있으나, 이에 한정하는 것은 아니다.

본 발명에 따른 외용제 조성물이 화장료 조성물인 경우, 본 발명의 모과 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 개선 효과를 위한 화장품 및 세안제 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 조성물을 첨가할 수 있는 제품으로는, 예를 들어, 각종 크림, 로션, 스킨 등과 같은 화장품류와 클렌징, 세안제, 비누, 트리트먼트, 미용액 등이 있다.

본 발명의 화장료는 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당, 스핑고 지질 및 해초 엑기스로 이루어진 군에서 선택된 조성물을 포함한다.

본 발명의 화장료에는 상기 필수 성분과 더불어 필요에 따라 통상 화장료에 배합되는 다른 성분을 배합해도 된다. 이외에 첨가해도 되는 배합 성분으로서는 유지 성분, 보습제, 에몰리엔트제, 계면 활성제, 유기 및 무기 안료, 유기 분체, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, 식물 추출물, pH 조정제, 알콜, 색소, 향료, 혈행 촉진제, 냉감제, 제한(制汗)제, 정제수 등을 들 수 있다.

상기 화장료 조성물에 있어서는, 화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체를 포함할 수 있다. 여기서, "화장품 제제에 있어서 수용가능한 담체"란 화장품 제제에 포함될 수 있는 이미 공지되어 사용되고 있는 화합물 또는 조성물이거나 앞으로 개발될 화합물 또는 조성물로서 피부와의 접촉시 인체가 적응 가능한 이상의 독성, 불안정성 또는 자극성이 없는 것을 말한다.

상기 담체는 본 발명의 피부 외용제 조성물에 그것의 전체 중량에 대하여 약 1 중량％ 내지 약 99.99 중량％, 바람직하게는 조성물의 중량의 약 90 중량％ 내지 약 99.99 중량 ％로 포함될 수 있다. 그러나 상기 비율은 본 발명의 피부 외용제 조성물이 제조되는 전술한 바의 제형에 따라 또 그것의 구체적인 적용 부위(얼굴, 목 등)나 그것의 바람직한 적용량 등에 따라 달라지는 것이기 때문에, 상기 비율은 어떠한 측면으로든 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 이해되어서는 안 된다.

한편, 상기 담체로서는 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료 등이 예시될 수 있다. 상기 알코올, 오일, 계면활성제, 지방산, 실리콘 오일, 습윤제, 보습제, 점성 변형제, 유제, 안정제, 자외선 차단제, 발색제, 향료로 사용될 수 있는 화합물/조성물 등은 이미 당업계에 공지되어 있기 때문에 당업자라면 적절한 해당 물질/조성물을 선택하여 사용할 수 있다.

본 발명의 일 구현예로써, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은 상기 모과 캘러스 추출물 이외에 글리세린, 부틸렌글리콜, 프로필렌글키롤, 폴리옥시에틸렌 경화피마자유, 에탄올, 트리에탄올아민 등을 포함할 수 있으며, 방부제, 항료, 색소, 정제수 등을 필요에 따라 미량 포함할 수 있다.

특히, 상기 피부 외용제 조성물은 본 발명에 특별히 개시된 제조방법 이외에도, 통상적으로 알려진 제조방법을 이용하여, 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조될 수 있다.

화장료 조성물로 제조될 경우, 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 피부과학적으로 허용가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

또한, 적합한 화장품의 제형으로는, 예를 들면 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실스틱의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 피부 외용제 조성물은 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일,염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

또한, 이외에 첨가해도 되는 배합 성분은 이에 한정되는 것은 아니며, 또, 상기 어느 성분도 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 배합 가능하지만, 총중량에 대하여 바람직하게는 0.01 - 5 ％ 중량 백분율, 보다 바람직하게는 0.01 - 3 ％ 중량 백분율로 배합된다.

본 발명의 화장료는 용액, 유화물, 점성형 혼합물 등의 형상을 취할 수 있다. 본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함한다.

본 발명의 미백, 피부노화방지 및 주름 개선용 기능성 화장료 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어 유액, 크림, 화장수, 팩, 파운데이션, 로션, 미용액, 모발화장료 등을 들 수 있다.

구체적으로, 본 발명의 화장료 조성물은 스킨로션, 스킨소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스쳐 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처크림, 핸드크림, 파운데이션, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션 및 바디클린저의 제형을 포함한다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물섬유, 식물섬유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액의 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용매화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트,사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 리놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

또한, 본 발명은 다른 관점에서, (a) 모과 종자로부터 캘러스를 유도하여 배양하는 단계; 및 (b) 상기 캘러스를 함유하는 조성물을 제조하는 단계를 포함하는 모과 캘러스 추출물을 함유한 피부개선용 피부 외용제 조성물의 제조방법에 관한 것이다.

상기 (a)단계에서, 구체적으로는 모과의 종자를 발아시켜 캘러스를 유도하기 위해 적절한 배지를 선택할 수 있다. 기술분야에서 캘러스 배양에 일반적으로 사용되고 있는 배지가 있다면, 제한없이 사용가능하다. 식물에서는 일반적으로 MS(Murashige-Skoog)배지, B5배지 등을 주로 사용하고, 일 예로, MS 기초 고체 배지(Murashige and Skoog 1962, Duchefa 사, Cat No. M0221)의 조성(1L기준시)은 NH₄NO₃ 1650 mg, KNO₃ 1900 mg, CaCl₂·2H₂O 440 mg, MgSO₄·7H₂O 370 mg, KH₂PO₄ 170 mg, KI 0.83 mg, H₃BO₃ 6.2 mg, MnSO₄·4H₂O 22.3mg, ZnSO₄·7H₂O 8.6 mg, Na₂MoO₄·2H₂O 0.25 mg, CuSO₄·5H₂O 0.025 mg, CoCl₂·6H₂O 0.025 mg, FeSO₄·7H₂O 27.8 mg, Na₂EDTA·2H₂O 37.3 mg, Myoinositol 100 mg, Nicotinic acid 0.5 mg, Pyridoxine-HCl 0.5 mg, Thiamine-HCl 0.5 mg, Glycine 2 mg, Sucrose 30000 mg 이다.

본 발명에 있어서, 모과 종자로부터 캘러스를 유도하기 위한 배지로써, 상기 MS 기초 고체 배지에 Sucrose 40.0 g/L, Agar 5∼10.0 g/L, NAA 0.5 mg/L, BAP 1.0 mg/L를 첨가한 배지를 이용할 수 있다. 여기서, 상기 배지의 pH는 5.5∼6.0이고, 바람직하게는, pH 5.7∼5.8이다. 이 고체 배지에 치상하여, 캘러스 유도가 가능하다.

이것 이외에도, 종래에 모과 캘러스 유도 배지로써 알려진 다양한 배지들 또한 본 발명에서 적용가능할 것이다.

캘러스를 유용물질을 함유하는 배지에서 배양하면, 캘러스가 배지에 첨가된 유용물질을 흡수하여 캘러스 내에 유용물질을 함유하게 되므로, 캘러스는 유래된 식물의 생리 활성 뿐만 아니라, 배지 내 첨가된 유용물질에 의한 생리활성을 나타낼 수 있다. 이러한 캘러스 내 유용물질의 도입은, 상기 유도된 캘러스를 유용물질을 포함하는 배지내에 치상하는 단계를 추가적으로 수행하여 배양된 캘러스에 유용물질을 도입시킬 수도 있다.

상기 (b)단계에서, (a)단계에서 얻어지는 캘러스를 분말화하여 조성물에 포함시켜 제조할 수 있다. 구체적으로, 본 발명에 따른 모과 캘러스 추출물 피부 외용제 조성물에서, 상기 수상성분, 유상성분 이외에 추가적으로, 첨가제 등이 포함될 수 있다. 상기 첨가제로는 알코올, 착색제, 방향제 등이 있다.

추가적으로, 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물은, 다양한 형태로 제조될 수 있는데, 예컨대, 에멀젼, 로션, 크림(수중유적형, 유중수적형, 다중상), 용액, 현탁액(무수 및 수계), 무수 생성물(오일 및 글리콜계), 젤, 마스크, 팩, 분말 등의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명에 따른 모과 캘러스 추출물 함유 피부 외용제 조성물의 제조방법은 전술한 제조방법에 한정되는 것은 아니며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자라면 상기 제조방법을 일부 변형시킨 방법으로도 본 발명에 따른 모과 캘러스 추출물 함유 피부 외용제 조성물을 제조할 수 있다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 예시하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는 것은 당 업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.

본 발명에 따른 모과 캘러스의 제조

1. 모과캘러스의 제조

무균처리한 모과 종자를 호르몬이 첨가되지 않은 MS(Murashige-Skoog) 기초 고체 배지(Murashige and Skoog 1962, Duchefa 사, Cat No. M0221)에 파종하여 25∼28 ℃에서 14∼32시간, 바람직하게는 18시간의 일장조건(장일)으로 발아시켰다.

발아된 유묘(幼苗)로부터 하엽을 예리한 칼로 3∼5 cm정도 붙은 자엽을 절취하여 MS 기초배지(Murashige and Skoog 1962, Duchefa 사, Cat No. M0221)에 Sucrose 40.0 g/L, Agar 5∼ 10.0 g/L, 2,4-D 1 mg/L를 함유한 pH 5.5 ∼ 6.0, 바람직하게는 pH 5.7 ∼ 5.8의 MS 고체배지에 치상하였다. 약 4주 경과된 후, 배지에 치상된 절취된 자엽에서 모과 캘러스가 유도되었다. 유도된 모과 캘러스는 2주간격으로 계대배양하여 증식되었다 (도 1).

2. 모과캘러스 추출물 제조

증식된 모과 캘러스를 수확하여 깨끗한 티슈로 충분히 수분을 제거한 후 60℃로 2일 동안 건조기에서 건조하였다. 건조된 모과 캘러스 파우더 100g을 용기에 담고, 정제수 1L를 넣은 후, 80℃에서 2 시간 동안 교반하여 반응시키고, 반응 추출물을 여과하여 1L의 모과 캘러스 추출물을 제조하였다.

실험예 1 : 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물의 피부 세포에 대한 독성효과 시험(Cytotoxicity Test)

본 발명에 따른 모과 캘러스의 피부 세포에 대한 독성효과를 알아보기 위하여, 인간각질형성 세포(Human Skin Keratinocyte, HaCaT)를 사용하였다. 인간각질형성 세포를 1×10⁴cells/ml의 농도로 하여 24 well 배양판에 접종하였다. 배지는 10 ％ FBS를 함유한 DMEM(Dubelcco'S Modified Eagle Medium, BRL,USA)을 사용하였다. 10％ FBS를 함유하는 DMEM에서 48시간 배양하여 배양용기 표면적의 25 ∼ 30％만큼 배양되면, 실시예 1에서 제조된 추출물이 0.1 ％ ∼ 10 ％ 함유된 FBS-free DMEM으로 교체하여 24시간 더 배양하였다. 배양 후 3-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2,5-디페닐 테트라졸리움 브롬화물 (MTT, Sigma M5655, USA) 용액 (2.5 mg/ml)을 50㎕ 첨가하고 3시간동안 추가로 배양한 후 상등액을 제거하고, 각 well 당 200 ㎕의 Dimethylsulfoxide (DMSO, Sigma D2650, USA)용액을 가한 후 20분간 교반하여 형성된 포르마잔(formazan) 결정을 녹인 다음, 100㎕ 씩을 96 well 로 취하여 Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA)로 570 nm 에서 흡광도를 측정하였다. 피부 세포의 증식 활성 정도는 순수한 물을 사용한 대조군의 흡광 강도를 기준으로 하기 수학식에 따라 계산하여 백분율로 표시하였다.

세포독성효과(％) = (추출물 처리시의 흡광도/대조군의 흡광도) × 100

상기 모과 캘러스 추출물을 인간각질형성 세포(keratinocyte)에 처리하여 피부세포에 대한 독성효과를확인한 결과, 도 2에 나타난 바와 같이, 0.1 ％ ∼ 10 ％ 농도의 모과 캘러스 추출물을 처리하였을 경우, 피부세포에 대한 독성이 없음을 확인하였다.

실험예 2 : 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물의 미백효능 관련 B16 멜라노마 세포에서의 멜라닌 합성 억제 시험

멜라노마(Melanoma) B16 세포(1.5 × 10⁴ cells/well)는 α-MSH(a melanocyte-stimulating hormone)로 자극(stimulation) 되었고, 다양한 농도의 모과 캘러스를 72시간동안 처리하였다. PBS로 세척 후, 세포들은 80 ℃에서 1N NaOH 100 ㎕로 녹여졌다. ELISA reader를 이용하여 450 nm에서 흡광도 측정하였다.

모과 캘러스 추출물의 B16 Melanoma 세포에서 멜라닌 합성에 대한 저해 정도를 확인하기 위하여 살아있는 세포당 멜라닌 함량을 측정한 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 모과 캘러스 추출물의 처리는 멜라노마 세포에서 멜라닌 함량을 눈에 띠게 감소하였다. 72시간 배양시간동안 대조군에 비하여 1 ％ 농도 이상의 모과 캘러스 추출물이 처리된 시험군에서 10％, 5％ 모과 캘러스 추출물의 경우에는 22％, 10％ 모과 캘러스 추출물의 경우에는 25％ 정도의 멜라닌 합성감소를 확인하였다.

실험예 3 : 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물의 미백효능 관련 머쉬룸 티로시나제 활성 측정 시험

티로시나제(Tyrosinase)의 L-DOPA 산화활성(oxidation activity)은 ELISA reader로 측정되었다. 머쉬룸 티로시나제(Mushroom tyrosinase)는 Sigma-Aldrich에서 구입하였다. 5 mM L-dopa 10 ㎕, 90 ㎕ 0.1 M sodium phosphate buffer (pH 6.8), 다양한 농도의 모과 캘러스를 96-well plate에 넣었다. 마지막으로 40 ㎕의 티로시나제 효소를 넣고 mix한 후, 37 ℃에서 15분간 반응하였다. 반응물로부터 Dopachrome 형성의 초기 비율은 ELISA reader를 이용하여 490nm에서 흡광도의 증가로 측정한다.

티로시나제는 멜라닌 합성에서 중요한 티로신을 L-DOPA로 전환하고, 도파퀴논(Dopaquinone)을 형성하도록 L-DOPA를 산화시킨다. 도파 옥시다제 활성(DOPA oxidase activity)는 머쉬룸 티로시나제로 측정되었고, 다양한 농도의 모과 캘러스를 넣어줌으로써 억제되었다.

In vitro 티로시나제 DOPA 산화 저해 연구법을 통하여 최대 5％ 까지의 모과 캘러스 추출물의 티로시나제 저해활성을 조사한 결과, 도 4에 나타난 바와 같이, 대조군에 비해서 0.5 ％ ∼ 5 ％ 의 모과 캘러스 추출물의 처리에 의해서는 대조군에 비해서 25％ 정도로 티로시나제 활성이 억제되어서 가장 유효적인 효능을 보였다.

실험예 4 : 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물의 피부 진정효과 시험

본 발명에 따른 모과 캘러스 추출물 함유 조성물의 적용 시 피부 자극 완화 효과(피부 진정효과)를 살펴보기 위해, 20∼40대 남여 20명을 대상으로 피부 자극 완화 시험을 하였다.

자극원으로 1％ SLS(Sodium Lauryl Sulfate)을 이용하고, 실시예 1에서 제조한 모과 캘러스 추출물을 정제수에 하기 표 1에 기재된 각각의 농도로 함유시킨 조성물을 제조하여, 10일간 사용하도록 하여, 1％ SLS (Sodium Lauryl Sulfate) 에 의해 유발되는 자극에 대한 완화 효과를 비교하여 보았다. 매일 아침, 저녁으로 사용하게 한 다음 자극 여부 및 강도를 설문지에 표시하게 하였다. 시험 결과의 평가는 1일 1회로 하였으며, 주관적 자극과 객관적 자극으로 나누어 표시하게 하였으며, 그 결과는 다음과 같다.

모과 캘러스 추출물은 1％ SLS 에 비하여 자극의 완화효과가 매우 뛰어났으며, 특히, 모과 캘러스 추출물이 1％ 함유된 조성물이 1％ SLS에 의해 유발된 피부자극의 완화 효과가 매우 뛰어났고, 전반적으로는, 모과 캘러스 추출물 함량이 늘어날 수록 피부 진정효과가 뛰어난 것으로 나타났다.

실험예 5 : 본 발명에 따른 피부 외용제 조성물의 보습 효과 시험

본 발명에 따른 모과 캘러스 추출물 함유 피부외용제 조성물을 수분측정기[Corneometer CM 825, Courage+Khazaka 사]를 사용하여 다음과 같은 방법으로 보습 효과를 측정하였다.

20 - 30대 20명을 대상으로 상박부 2 X 2 cm², 12 구획을 물로 여러 차례 세정한 후, 자극없이 수분을 제거하였다. 5분경과 후, 정제수와 실시예 1에 기재된 방법에 따라 제조된 모과 캘러스 추출물 함유 조성물을 각각 2 구획에 대하여 10 ㎕씩 점적하여 고르게 도포하였다. 10분 후, 수분측정기(Corneometer)를 이용하여 하나의 구획당 5회 측정하였다. 1 구획에 대하여 5분 간격으로 6회, 다음 수학식에 의해 측정하고 데이터 값은 20명에 대한 평균치로 나타내었다. 실내온도는 22℃, 상대습도는 30 ％였다.

수분율 (％) = 시료 도포 후 수분측정기의 수치 - 시료 도포 전 수분측정기의 수치

상기 표 2에 나타난 결과와 같이, 정제수와 비교하여, 1％를 함유한 모과 캘러스 추출물 함유 조성물이 가장 뛰어난 보습효과를 갖는다는 것을 확인하였다. 따라서, 모과 캘러스 추출물 함량이 늘어날 수록 보습효과가 뛰어난 것으로 나타났다.

화장료 조성물의 제조

본 발명의 실시예 1의 모과 캘러스 추출물을 유효성분으로 함유하는 화장품으로 영양화장수, 크림, 에센스 등의 유화 제형의 화장품 및 유연화장수 등의 가용화 제형의 화장품을 제조하였다.

제조예 2-1: 화장수

다음 처방에 따라 통상의 화장수 제조 방법에 따라 제조하였다.

제조예 2-2: 에센스

다음 처방에 따라 통상의 에센스 제조 방법에 따라 제조하였다.

제조예 2-3: 로션

다음 처방에 따라 통상의 로션 제조 방법에 따라 제조하였다.

제조예 2-4: 크림

다음 처방에 따라 통상의 크림 제조 방법에 따라 제조하였다.

제조예 2-5: 젤

다음 처방에 따라 통상의 젤 제조 방법에 따라 제조하였다.

이상으로 본 발명의 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (4)

1. 모과 (Chaenomeles Sinensis) 캘러스의 열수 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 피부 외용제 조성물.
   
2. 모과 (Chaenomeles Sinensis) 캘러스의 열수 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 진정용 또는 자극 완화용 피부 외용제 조성물.
   
3. 모과 (Chaenomeles Sinensis) 캘러스의 열수 추출물을 유효성분으로 함유하는 피부 보습용 피부 외용제 조성물.
   
4. 삭제

Images