KR101317433B1 - 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 함유하는 미백 화장용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 지구자 추출물, 길경 추출물, 밀싹 추출물 및 세이지 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장용 조성물에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 미백용 화장용 조성물은 각 성분을 단독으로 사용한 경우에 비해 티로시나제에 대한 탁월한 저해활성 및 멜라닌 생성을 효과적으로 억제하는 활성을 가져 우수한 미백효과를 나타내므로 미백용 화장용 조성물로 유용하게 이용될 수 있다.

Description

지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 함유하는 미백 화장용 조성물{The cosmetic composition for skin whitening comprising the mixture of extract of Hovenia dulcia, Platycodon grandiflorum, wheat bud and sage}

본 발명은 미백 활성 효과가 있는 화장용 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 미백 활성을 갖는 생약재 추출물을 함유하는 미백 화장용 조성물에 관한 것이다.

피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 제 기관들의 온도 및 습도 변화와 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 하고 있다. 특히, 피부는 외부 환경과 직접 접하면서 인체를 보호하며 생화학적이고 물리적인 기능을 가지는 아주 중요한 조직이다. 이러한 피부 조직은 크게 3가지 즉, 표피(epidermis), 진피(dermis), 그리고, 피하(hypodermis)로 나누어진다.

피부의 표피층에 존재하는 색소로서, 멜라닌은 표피의 기저층에 존재하는 멜라노사이트(melanocyte)로부터 만들어져 케라티노사이트(keratinocyte)라는 표피 세포로 이동하게 된다. 생체 내에는 멜라닌을 분해하는 효소가 없고, 다만 케라티노사이트가 표피에서 떨어져나갈 때 같이 피부에서 떨어져나가는 방식으로 제거된다.

멜라닌 합성 과정을 살펴보면, 멜라노사이트 내의 멜라노좀이라는 소포체에서 먼저 티로시나제(Tyrosinase)라는 효소에 의해 티로신이 도파(DOPA)를 거쳐 도파퀴논(DOPAquinone)으로 전환된다. 그 후 도파퀴논은 자동 산화반응과 효소 반응으로 도파크롬(DOPAchrome)을 거쳐 흑갈색의 공중합체인 멜라닌으로 전환된다. 이렇게 생성된 멜라닌은 멜라노좀을 통해 케라티노사이트로 옮겨지고 여기에서 약 28일간의 각화 과정을 거치면서 피부 표면으로 나와 각질과 함께 소실된다.

멜라닌은 생체 내에서 다양한 기능을 하고 있다. 예를 들면, 멜라닌은 햇빛 UV의 빛 에너지를 흡수하여 UV에 의한 손상으로부터 진피 이하의 피부 기관을 보호하는 역할을 하며, 피부 생체 내에서 생성된 유해산소 및 프리 라디칼 등을 제거하는 등 외부 유해인자로부터 피부를 보호해주는 등 생체 내에서 유용한 역할을 수행한다. 또한, 피부 세포 내의 멜라닌량에 따라 사람의 피부색을 결정하게 되는데, 멜라닌 색소가 많은 사람은 갈색 또는 검은 색 피부를 갖는 반면, 멜라닌 색소가 적은 사람은 흰색의 피부를 갖게 된다.

이러한 멜라닌의 생산량에 따라 다양한 질환을 유발할 수 있다. 멜라닌이 비정상적으로 적게 생산되는 경우, 백반증과 같은 피부병변이 유발된다. 이와 반대로 일광, 호르몬변화, 염증, 약제 등에 의한 멜라닌이 과도하게 합성되거나 각화작용이 원활히 이루어지지 않아 멜라닌이 축적되는 경우, 피부에 손상을 줄 뿐만 아니라 피부의 색소가 침착되어 기미, 주근깨를 형성하며, 이와 같은 병변으로부터 나아가 피부암의 원인이 되기도 한다. 따라서, 이러한 색소 침착 현상을 방지하기 위해서는 멜라닌 생성 과정의 일부분을 저해하여 멜라닌의 생성을 감소시켜야 한다.

오늘날 동양권의 여성들은 하얗고 깨끗한 피부를 선호하며 이를 미의 중요한 기준으로 삼고 있기 때문에 피부색소 이상 침착의 치료 및 미용욕구 충족을 위한 미백제에 대한 개발이 활발히 이루어지고 있다. 현재 피부미용을 위한 미백제의 개발에 있어서, 생성된 멜라닌 색소를 환원시켜 탈색하는 방법과 멜라닌 색소를 형성하는 효소인 티로시나제의 활성을 억제하는 방법이 알려져 있다. 그러나 멜라닌 색소를 환원시키기 위해 사용되는 토코페롤이나 비타민류 등을 사용한 미백제는 멜라닌 색소의 탈색효과가 미미한 것으로 알려져 있으며, 따라서 멜라닌색소의 생성을 억제하는 저해제에 관한 연구가 다수 진행되고 있다.

종래의 화장품 분야에서는 미백 성분으로서, 예를 들면, 코지산(Kojic acid), 알부틴(Arbutin) 등과 같은 티로시나제 효소활성을 억제하는 물질, 하이드로퀴논(Hydroquinone), 비타민 C 및 이들의 유도체와 각종 식물 추출물이 사용되어 왔다. 그러나, 상기 미백성분들은 제제 중에서 안정성이 나빠 분해되어 착색되거나, 이취의 발생, 생체 레벨에서의 효능, 효과의 불분명 및 안정성 문제 등으로 그 사용이 제한되고 있는 실정이다. 코지산은 티로시나제의 활성 부위에 존재하는 구리이온을 흡착시켜 효소활성을 저해하지만, 화장품에 배합 시 불안정성, 피부 부작용의 문제 및 최근 동물실험 결과 간암유발이 밝혀져 화장품 원료로 사용이 중지되었다. 비타민 C 및 그 유도체는 산화가 잘되는 불안정성 때문에 화장품 원료로서 사용이 어려우며, 하이드로퀴논은 피부에 대한 미백효과는 탁월하지만 알레르기를 유발하는 성질, 멜라닌 생성 세포에 대한 독성, 피부에의 영구 탈색화 등 피부에 대한 자극성이 높으며, 최근 발암성 물질로 규정되어 사용이 금지되어 각 나라별로 제한적인 농도만 허가하고 있다. 또한, 알부틴은 하이드로퀴논에 글루코피라노사이드(Glucopyranoside)가 결합된 유도체로 하이드로퀴논 사용시 나타나는 부작용이 적으면서 인체에 대한 독성은 없이 멜라닌 색소의 합성을 억제하는 작용이 있어, 멜라닌 색소 침착이 증가되는 피부질환의 치료제로서 이용가능성이 제시되었으나, 피부효소에 의해 일부 분해되는 단점이 있다.

상기 미백 물질의 단점을 해소할 수 있는 천연물, 특히 식물 중에서 미백 활성 성분을 찾기 위한 연구도 계속 이루어져 왔고, 그 중 상 백피(대한민국공개특허 제97-021273호), 감초(대한민국 공개특허 제97-025601호), 작약(대한민국 공개특허 제92-002111호), 계피(일본공개특허 평 5-139954호), 알로에(일본공개특허 평 5-139950호) 등 다수의 식물추출물 및 생약재 추출물 등이 티로시나제에 작용하여 멜라닌 생성을 억제한다는 사실이 밝혀졌으나, 이들 역시 안전성, 변색가능성 등의 측면에서 화장품이나 의약품에 유효농도 이상으로 사용하는 데는 많은 문제점을 갖고 있으며, 아직 뛰어난 효과를 나타내지도 못하고 있는 실정이다.

한편, 지구자(Hovenia Dulcis Fruit)는 헛개나무의 열매이다. 일명 호깨나무, 지구자 나무라고 불린다. 지구자는 간 보호 및 사염화메탄 주사로 야기된 간 독성 과정을 개선하는 효과가 알려져 있다. 그뿐 아니라 지구자를 포함하는 조성물이 인지 개선에 효과가 있음이 알려져 있다. 그러나, 지구자 추출물이 미백효과와 관련된 효과가 있다는 점은 보고된 바 없다.

또한, 길경은 초롱꽃과Campanulaceae)의 식물인 도라지(Platycodon grandiflorum A. DC.)의 뿌리로, 길경은 주로 거담, 진해작용, 기침 및 기관지염의 치료제로 사용되어왔으며, NF-kB와 NO assay를 통한 항염증 효과, 항암효과, 통증완화효과, 소화효소분비 억제효과, 콜레스테롤 대사 개선효과가 있는 것으로 알려져 있다.

또한, 밀싹은 화본과 외떡잎 식물로서, 밀싹과 같은, 밀, 보리 등 곡류의 새싹은 마디 세포가 생겨 줄기로 자리기 전에는 채소와 같은 영양성분을 갖으며 알곡과 성분이 전혀 다르다고 알려져 있다. 또한, 밀싹에는 다양한 비타민과 82종의 미네랄과 30종의 효모, 17가지의 아미노산을 함유하고 있다고 알려져 있다.

또한, 세이지는 클라리세이지(Clary sage)라고도 불리우는 허브로서, 살균 및 피부의 재생작용이 있으며 상처, 거친 피부에 사용하면 효과적이다. 세포 재생 작용으로 피부의 주름을 완화하는 효과와 두피의 과다한 피지 분비를 조절하여 지루성 비듬의 치유에 효과적이라고 알려져 있다.

이에 본 발명자들은 안정성이 뛰어나면서도, 멜라닌 생성을 억제하여 미백 효과가 우수한 미백용 조성물을 개발하고자 연구 노력한 결과, 지구자 추출물과, 길경 추출물의 조합시 미백 효과가 현저하게 상승되며, 멜라닌 생선을 현저히 감소키는 점을 발견하여, 지구자 추출물 및 길경 추출물의 조합이 미백용 조성물로 유용하게 사용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 지구자 및 길경 추출물을 포함하는 미백 화장용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 지구자, 길경 및 밀싹 추출물을 포함하는 미백 화장용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 포함하는 미백 화장용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 다른 목적은 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 포함하는 기미, 주근깨 및 반점 제거 및 개선용 화장용 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 일구체예는 지구자 및 길경 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장용 조성물을 제공한다.

본 명세서에 있어서, "미백"은 멜라닌의 생성이 저해됨에 따른 결과로서 이해되는데, 구체적으로는 멜라닌의 생성이 저해됨에 따라 멜라닌의 증가에서 비롯되는 증상이 예방 또는 억제됨에 따른 결과로서 이해된다. 그러한 증상으로서 전술한 바의 기미, 주근깨, 피부노화 등이 예시될 수 있지만, 본 발명의 하기 실시예 및 실험예가 보여주는 바와 같이 본 발명의 피부 미백용 조성물에 포함되는 추출물이 멜라닌의 생성을 저해하는 효과를 보여주는 것이 명백한 이상, 상기 증상은 멜라닌의 증가에서 비롯되는 증상 예방 또는 억제함으로써 피부 미백의 결과로 이어지는 모든 증상으로 이해되어야 한다.

본 발명의 피부 미백용 조성물은 유효성분인 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물 이외에, 피부 미백 효과를 상승 또는 보강시킬 수 있도록 피부 미백 효과가 있다고 이미 알려진 화합물이나 식물 추출물을 포함할 수 있고, 또한 피부 미백 효과가 있다고 알려진 여타의 공지된 화합물이나 식물 추출물을 포함할 수 있으며, 나아가 앞으로 밝혀질 피부 미백 효과를 갖는 화합물이나 식물 추출물을 포함할 수 있다.

여기서 상기 피부 미백 효과가 있다고 이미 알려진 화합물이나 식물 추출물로서는 멀캅토숙신산, 멀캅토덱스트란, 테프레논, 디하이드록시-이소퀴놀린, 인도메타신, 3-하이드록시마뉼, 비타민 K, 티아졸리돈, 키누레닌, 레몬 추출물, 오이 추출물, 오디추출물, 감초 추출물, 로즈마리 추출물, 아세로라 체리 추출물, 은행 추출물, 카롭(carob) 추출물, 제라늄(geranium) 추출물 등을 들 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

본 발명의 지구자 추출물 또는 길경 추출물은 당시 기술분야에 공지되어 있는 임의의 생약 추출법에 의해 추출될 수 있으나, 건조한 지구자 또는 길경을 분쇄 후에 추출용매에 침지시켜 추출할 수 있다. 상기 추출용매는 물, 알코올, 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 상기 알코올로는 C₁ 내지 C₃의 저급 알코올을 이용할 수 있고, 에탄올 또는 메탄올을 이용하는 것이 바람직하나 이에 한정되지 않는다. 상기 추출용매를 지구자 또는 길경의 총 분량에 2 내지 10배 첨가하여 추출할 수 있으며, 3 내지 8배 첨가하여 추출할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 또한, 추출온도는 30 ~ 100 ℃인 것일 수 있고, 45 ~ 85 ℃인 것일 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 상기 온도의 유지는 부패, 변색 및 변취의 예방에 효과적이기 때문이다. 또한, 추출시간은 5 ~ 20 시간일 수 있으며, 10 ~ 15 시간이 될 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 또한, 추출횟수는 1 ~ 5 회 반복 추출할 수 있고, 2 ~ 3 회 반복 추출할 수 있으나, 이에 한정하지 않는다. 지구자 또는 길경의 추출 방법은 열수 추출, 중탕 추출, 초음파 추출법, Soxhlet 추출법 및 환류냉각 추출법 등 당업계의 통상적인 추출방법은 모두 사용될 수 있다.

상기 지구자 및 길경 추출물은 각각 1 ~ 10 : 1 ~ 10의 중량비율로 미백용 화장용 조성물에 함유될 수 있다. 바람직하게는 3 ~ 8 : 3 ~ 8의 중량 비율로 미백용 화장용 조성물에 함유될 수 있으며, 가장 바람직하게는 동일한 중량 비율로 함유될 수 있다.

상기 지구자 및 길경 혼합 추출물은 이미 미백용 화장용 조성물로 잘 알려진 알부틴과 유사한 티로시나제 억제 활성(표 1 및 도 1) 및 멜라닌 합성 저해 효과(표 2 및 도 2)를 갖는 것을 확인하였다. 특히, 지구자 또는 길경 각각 추출물 0.5 ㎎/㎖ 처리시 티로시나제 억제 활성이 각각 12.5 % 및 10.5 %인데 비하여, 지구자 및 길경의 혼합 추출물 0.5 ㎎/㎖ 처리시, 티로시나제 억제 활성 경우 16%까지 현저히 증가하였다.

또한, 본 발명의 일구체예는 지구자, 길경 및 밀싹을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장용 조성물을 제공한다.

상기 조성물은 지구자, 길경 및 밀싹 추출물을 각각 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10의 중량비율로 함유될 수 있으며, 바람직하게는 3 ~ 8 : 3 ~ 8 : 3 ~ 8 의 중량 비율로 함유될 수 있으며, 가장 바람직하게는 동일한 중량 비율로 함유될 수 있다.

상기 지구자, 길경 및 밀싹의 혼합 추출물은 알부틴에 비하여 유사한 티로시나제 억제 효과(표 1 및 도 1) 및 멜라닌 합성 저해 효과(표 2 및 도 2)를 갖는 것을 확인하였다. 특히, 지구자, 길경 또는 밀싹 각각 추출물 0.5 ㎎/㎖ 처리시 티로시나제 억제 활성이 각각 12.5 %, 10.5 % 및 5.5 %인데 비하여, 지구자, 길경 및 밀싹의 혼합 추출물 0.5 ㎎/㎖ 처리시, 티로시나제 억제 활성 경우 16.5 %까지 현저히 증가하였다.

또한, 본 발명의 일구체예는 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지를 유효성분으로 함유하는 미백용 화장용 조성물을 제공한다.

본 발명의 세이지 추출물을 얻기 위해서는 상기 지구자와 같은 방법으로 추출할 수 있다.

상기 미백용 화장용 조성물은 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 각각 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10의 중량비율로 함유될 수 있으며, 바람직하게는 2 ~ 8 : 2 ~ 8 : 2 ~ 8 : 2 ~ 8의 중량 비율로 함유될 수 있으며, 가장 바람직하게는 동일한 중량 비율 또는 4 : 3 : 3 : 3 중량 비율로 함유될 수 있다.

상기 미백용 화장용 조성물은 각각의 추출물에 비하여 현저하게 향상된 티로시나제 활성 억제 효능을 갖는다. 특히, 0.5 ㎎/㎖의 농도에서 미백용 화장용 조성물로 널리 알려진 알부틴이 17.8 % 티로시나제 활성 억제 효능을 가짐에 비하여 동량의 상기 혼합 조성물은 20.5 % 티로시나제 활성 억제 효능을 가짐을 확인하여, 우수한 티로시나아제 활성 억제 효능을 가짐을 확인하였다(표 1 및 도 1).

또한, 멜라닌 합성 저해면에서도 혼합 조성물은 각각의 추출물에 비하여 우수한 효과를 가짐을 알 수 있었고, 알부틴에 비해서도 우수한 효능을 가짐을 확인하였다(표 2 및 도 2).

그뿐 아니라, 임상 실험결과 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지의 혼합 추출물의 경우 우수한 미백 증진 효과를 갖는 것을 확인하였을 뿐 아니라(표 3 및 도 3), 세포 독성도 거의 없는 것을 확인하였다(표 4 및 도 4).

또한, 본 발명의 일구체예는 지구자 및 길경 혼합 추출물, 또는 지구자, 길경 및 밀싹 혼합 추출물, 또는 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 혼합 추출물을 유효성분으로 함유하는 멜라닌 과잉 생산에 의해 발생하는 기미, 주근깨 및 반점 제거 및 개선용 화장용 조성물을 제공한다.

기미, 주근깨 또는 반점은 피부에 색소가 침착하여 발생하는 것이다. 상기 지구자 및 길경 혼합 추출물은 멜라닌 생성을 억제하고(표 2 및 도 2), 침착된 멜라닌 함량을 감소시켜 미백효과를 가지므로(표 3 및 도 3), 기미, 주근깨 또는 반점의 개선에 효과적으로 이용가능하다.

또한, 본 발명의 일구체예는 지구자 및 길경의 혼합 추출물, 또는 지구자, 길경 및 밀싹의 혼합 추출물, 또는 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지의 혼합 추출물을 함유하는 화장품을 제공한다. 상기 혼합 추출물은 전체 중량비에서 1 내지 30 중량%로 함유될 수 있으며, 5 내지 20 중량%로 함유될 수 있다.

상기 화장품은 유연화장수, 영양화장수, 영양에센스, 영양크림 및 팩으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나일 수 있으나, 피부 미백용으로 이용되는 한 다양한 형태로 이용가능하다.

본 발명의 추출물을 포함하는 화장용 조성물은 상기 추출물 이외에 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있으며, 담체와 함께 제형화할 수 있다. 본 발명의 화장용 조성물은 당업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클렌징, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화 될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 아이크림, 헤어토닉, 샴푸, 린스, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 및 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 1,3-부틸글리콜, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소 결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클렌징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

삭제

본 발명에 의한 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지를 함유하는 미백 화장용 조성물은 티로시나제 활성 억제율이 우수하며, 멜라닌 합성을 효과적으로 억제한다. 그뿐 아니라 세포 독성이 매우 낮아, 피부 미백 및 기미, 주근깨 제거 및 개선에 유용하게 이용할 수 있다.

도 1은 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 각각의 추출물 및 그의 혼합물의 티로니시나제 억제 활성을 도시한 것이다.
도 2는 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 각각의 추출물 및 그의 혼합물의 멜라닌 합성 저해 효과를 도시한 것이다.
도 3은 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 각각의 추출물 및 그의 혼합물의 패널 테스트를 통한 미백 증진 효과를 도시한 것이다.
도 4는 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 각각의 추출물 및 그의 혼합물의 세포 독성 시험 결과를 도시한 것이다.

이하, 본 발명을 다음의 실시예 및 시험예에 의거하여 더욱 상세히 설명하나, 본 발명이 하기의 실시예나 시험예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1> 지구자 추출물의 제조
건조 지구자 1 ㎏에 3차 증류수 5ℓ를 가하고 80 내지 85℃에서 3시간 동안 3회 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고 0.45㎛의 필터로 여과하고, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여 지구자 열수 추출물 90 g을 얻었다.

삭제

< 실시예 2> 길경 추출물의 제조

건조 길경 1 kg에 3차 증류수 5ℓ를 가하고 80 내지 85 ℃에서 3시간 동안 3회 가열하여 추출한 후 400 메쉬 여과포로 여과하고 0.45 ㎛의 필터로 여과하고, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여 길경 추출물 126 g을 얻었다.

< 실시예 3> 밀싹 추출물의 제조

건조 밀싹 1 kg에 3차 증류수 5 ℓ를 가하고 80 내지 85 ℃에서 3시간 동안 3회 가열하여 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고 0.45㎛의 필터로 여과하고, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여 밀싹 추출물 89 g을 얻었다.

< 실시예 4> 세이지 추출물의 제조

건조 세이지 1 kg에 3차 증류수 5 ℓ를 가하고 80 내지 85 ℃에서 3시간 동안 3회 가열하여 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고 0.45㎛의 필터로 여과하고, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여 세이지 추출물 85 g을 얻었다.

< 실시예 5> 지구자 및 길경 혼합 추출물의 제조

건조 지구자 500 g 및 길경 500 g에 3차 증류수 5 ℓ를 가하고 80 내지 85 ℃에서 3시간 동안 3회 가열하여 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고 0.45㎛의 필터로 여과하고, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여 지구자 및 길경 혼합 추출물 105 g을 얻었다.

< 실시예 6> 지구자, 길경 및 밀싹 혼합 추출물의 제조

건조 지구자 400 g, 길경 300 g 및 밀싹 300 g에 3차 증류수 5ℓ를 가하고 80 내지 85 ℃에서 3시간 동안 3회 가열하여 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고 0.45 ㎛의 필터로 여과하고, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여 지구자, 길경 및 밀싹 혼합 추출물 95 g을 얻었다.

< 실시예 7> 지구자, 길경 및 세이지 혼합 추출물의 제조

건조 지구자 400 g, 길경 300 g 및 세이지 300 g에 3차 증류수 5 ℓ를 가하고 80 내지 85 ℃에서 3시간 동안 3회 가열하여 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고 0.45 ㎛의 필터로 여과하고, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여 지구자, 길경 및 세이지 혼합 추출물 93 g을 얻었다.

< 실시예 8> 지구자, 길경 , 밀싹 및 세이지 혼합 추출물의 제조

건조 지구자 250 g, 길경 250 g, 밀싹 250 g 및 세이지 250 g에 3차 증류수 5 ℓ를 가하고 80 내지 85 ℃에서 3시간 동안 3회 가열하여 추출한 후 400메쉬 여과포로 여과하고 0.45 ㎛의 필터로 여과하고, 이 여과액을 감압증류기(EYELA, JP/N-1000)를 이용하여 농축 후 동결 건조하여 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 혼합 추출물 91 g을 얻었다.

< 실험예 1> 티로시나제 억제활성의 측정

티로시나제 활성은 포메란츠 등(Pomerants S. H., 1963 J. Biol. Chem., 238, 2351-2357)의 방법을 약간 수정하여 이용하였다. 40 ㎕의 5 mM L-DOPA 용액, 80 ㎕ 의 67 mM 인산완충용액(pH 6.8) 및 40 ㎕의 시험 샘플 용액을(실시예 1 내지 8, 및 알부틴의 시험용액농도 5 ㎎/㎖) 혼합하였다. 다음으로 40 ㎕ (100 단위/ml)의 인체 티로시나제를 첨가하여 샘플 시료를 제조하였다.

그리하여 얻어진 시험 샘플용액의 최종농도는 1 ㎎/㎖이었다. 시험용액의 최종농도가 0.5 ㎎/㎖이 되도록 하기 위해서는 40 ㎕의 5 mM L-DOPA 용액, 100 ㎕ 의 67 mM 인산완충용액(pH 6.8) 및 20 ㎕ (실시예 1 내지 8, 및 알부틴의 시험용액농도 2.5 ㎎/㎖)의 시험 샘플 용액을 혼합하였고, 다음으로 40 ㎕ (100 단위/ml)의 버섯 티로시나제가 반응 혼합액에 첨가하여 샘플 시료를 제조하였다.

상기 샘플 시료의 제조시 시험 샘플 용액을 가하지 않은 것을 대조군으로서 사용하였다. 대조군의 효소 활성을 100으로 보았을 때 대조군과 비교하여 각각의 효소 저해 활성을 %로 표시하였다. 이때 실시예 1 내지 8의 조성물의 티로시나제 저해 활성의 상대적인 강도를 관찰하기 위하여 미백 화장용에 널리 이용되는 알부틴과의 상대적인 활성을 비교하였다. 티로시나제 활성의 억제 백분율은 다음과 같이 계산되었다.

여기에서 A는 샘플시료 없이 490 nm에서의 흡광도이고, B는 샘플시료 있을 때의 490 nm에서의 흡광도이다.

티로시나제 억제 활성 측정

시료	함유량( ㎎ / ㎖ )	저해활성(%)
알부틴	0.5	18.5
	1	54.5
실시예 1	0.5	12.5
	1	30.5
실시예 2	0.5	10.5
	1	23.5
실시예 3	0.5	5.5
	1	10.5
실시예 4	0.5	7.5
	1	22.5
실시예 5	0.5	16
	1	45.5
실시예 6	0.5	16.5
	1	47.5
실시예 7	0.5	15.5
	1	44.5
실시예 8	0.5	20.5
	1	60.5

< 실험예 2> 멜라닌 합성량 저해 효과

<2-1> B16 멜라노마 세포 배양

B16 멜라노마 세포는 KTCC(The Korean collection for Type Culture)에서 분양받아 사용하였다. B16 멜라노마 세포는 멜라닌을 생산하는 세포주로서 일반적으로 미백물질 스크리닝에 사용된다.

상기 세포를 배양하기 위한 배지는 10 % FBS, 1 % 페니실린/스트렙토마이신을 포함하는 DMEM 배지를 제조, 멸균하여 무균상태로 만들었다. 세포 배양은 37 ℃, 5 % CO₂의 인큐베이터에서 배양하였다. 멜라노마 세포를 3일 정도 배양하여 100 ㎜ 패트리 디쉬가 90 % 정도 찼을 때 계대하였다.

<2-2> 흡광도 측정을 통한 멜라닌 합성 억제 효과 측정

지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 각각 및 이의 혼합 추출물의 미백효과 측정을 위하여 B16 멜라노마 세포에 실시예 1 내지 8의 추출물 또는 알부틴을 각각 동일한 양을 처리한 뒤, 생성된 멜라닌 양의 변화를 측정하였다. 96웰 플레이트에 세포를 접종(seeding)하고 24시간 후 실시예 1 내지 8에서 제조한 추출물 또는 알부틴을 일정한 농도로 처리하여 다시 48시간 배양한 후, 트립신-EDTA를 이용하여 세포를 회수하였다. 회수한 세포에 10% DMSO(Dimethylsulfoxide)를 포함하는 1N NaOH를 가해 80 ℃에서 1시간 동안 반응시켜 멜라닌이 충분히 녹아나오도록 한 후, ELISA(enzyme-linked immunosorbent assay) 리더(reader)를 이용하여 파장 405 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 멜라닌 생성도는 하기 수학식 2를 이용하여 계산하였다. 그 결과, 일반적인 미백 물질로 알려진 알부틴의 경우 무치리구와 비교했을 때, 500 ㎍/㎖의 농도에서 멜라닌의 양이 72.2 %이나, 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지의 혼합 추출물을 500 ㎍/㎖의 농도에서 멜라닌의 양이 63.4 %이 생성되었다(표 2 및 도 2)

멜라닌 합성 억제 효과 측정

	함유량	알부틴	실시예1	실시예2	실시예3	실시예4	실시예5	실시예6	실시예7	실시예8
멜라닌 생성도(%)	0.5 ㎎/㎖	72.2	88.4	90.2	94.2	92.6	79.8	74.6	78.8	63.4
	1 ㎎/㎖	48.8	78.2	81.4	87.6	86.2	61.2	56.8	58.2	44.8

< 실험예 3> 인체 피부에 대한 미백 효과 시험

피험자로서 건강한 20세 이상의 남녀 20명을 대상으로 피검자의 윗 팔뚝 부위에 직경 1.5 cm의 구멍 6개가 뚫린 불투명 테이프를 부착한 뒤 각 피검자의 최소 홍반량의 1.5 ∼ 2배 정도의 자외선(UVB)을 조사하여 피부의 흑화를 유도한 뒤 시험물질들을 발라서 한달 뒤부터 2주 마다 색차계를 이용하여 피부의 명암을 측정하였다. 각 시료들은 프로필렌글리콜/에탄올(8/2)의 비이클에 각각이 1 %의 농도가 되게 녹여 하루에 2회씩(아침, 저녁) 매일 바르게 하였다.피부의 명암은 'L' 값으로 표현되며 0(검정)에서 100(순백색) 사이의 값을 나타낸다(한국인은 일반적으로 50 ∼ 70의 값을 나타냄).각 시료를 도포하면 효과가 있는 경우는 L값이 점차 증가하게 되며 시료들 사이의 비교는 ΔL(최종 L값―시료를 도포하기 직전의 값)으로 표현하였다(도 3).

인체 피부에 대한 미백 효과 측정

	L값
	0주	4주	6주	8주
대조군(무첨가)	58.25±2.21	58.55±2.46	58.60±2.23	58.90±2.82
알부틴	58.21±2.15	59.12±2.89	60.12±3.21	61.54±2.23
실시예1	58.22±2.22	58.98±2.41	59.21±2.33	59.52±2.32
실시예2	58.30±2.45	58.82±1.88	59.08±2.11	59.21±1.98
실시예5	58.31±2.11	59.11±2.22	59.56±2.87	60.21±2.12
실시예6	58.22±2.36	59.12±3.11	59.84±2.69	60.87±1.98
실시예8	58.24±2.62	59.45±2.88	60.68±3.32	62.24±3.24

* 상기 수치는 평균± 표준편차로 나타낸 것이다.

상기 표 3 및 도 3에 기재된 결과에서 알 수 있듯이, 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지의 혼합 추출물은 알부틴에 비하여 우수한 미백효과를 가짐을 알 수 있었다. 또한, 지구자 및 길경의 혼합 추출물 뿐 아니라, 지구자, 길경 및 밀싹 혼합 추출물 또한 우수한 미백 효과가 있음을 알 수 있었다.

< 실험예 4> 독성 시험

실시예 1 내지 8의 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 각각의 추출물 및 혼합 추출물의 세포 독성 시험을 실시하였다. 96웰 플레이트에 세포를 접종하고 24 시간 후, 흑종초자 추출물을 일정한 농도로 처리하여 37 ℃, 5 % CO₂의 인큐베이터에서 배양하였다. 48 시간 배양 후, 배지를 제거하고 MTT(3-(4,5-dimethythiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliu, bromide) 용액 100 ㎕을 첨가하여 37 ℃에서 4 시간 동안 반응시켰다. 반응이 끝난 후, 용액을 제거하고 DMSO 100 ㎕를 첨가하여 염색된 세포를 녹인 후 ELISA 리더(reader)를 이용하여 파장 540 ㎚에서 흡광도를 측정하였다. 세포 생존율은 하기 수학식 2를 이용하여 계산하였다. 그 결과, 실시예 1 내지 8의 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 각각의 추출물 및 혼합 추출물(0.5 mg/㎖ 또는 1 mg/㎖)을 처리한 구는 무처리구와 비교하였을 때, 세포 생존율이 96.1 % 내지 98.2 %로 나타났다(표 4 및 도 4).

혼합 추출물의 세포 독성 측정

	함유량	무처리군	알부틴	실시예1	실시예2	실시예3	실시예4	실시예5	실시예6	실시예7	실시예8
세포 생존율(%)	0.5 ㎎/㎖	100	98.6	99.2	98.2	98.8	98.2	98.8	98.8	98.4	98.4
	1 ㎎/㎖	100	97.2	98.2	97.1	97.4	96.1	97.8	96.8	96.4	97.1

본 발명의 조성물은 아래와 같은 제형으로 제조할 수 있으며, 아래의 제제는 본 발명을 예시한 것일 뿐, 이에 의해 본 발명의 내용이 제한되는 것은 아니다.

< 제제예 1> 유연 화장수

본 발명에 따른, 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 함유하는 유연 화장수의 제제예는 다음 표 5의 조성과 같이 제조하였다.

성분	함량(중량%)
지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물	4.0
폴리옥시에틸렌경화피마자유	0.4
글리신	3.5
디포타슘글리시리제이트	0.1
1,3-부틸렌 글리콜	3.0
소듐히아루로네이트	0.1
에탄올	5.0
항산화제	0.1
트리에탄올아민	0.1
EDTA	0.1
향료	0.05
정제수	잔량

< 제제예 2> 영양 화장수

본 발명에 따른, 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 함유하는 영양 화장수의 제제예는 다음 표 6의 조성과 같이 제조하였다.

성분	함량(중량%)
지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물	4.0
글리세린	7.0
소르비탄스테아레이트 슈크로오즈코코에이트	2.0
미네랄 오일	4.0
트리옥타노인	1.0
스테아릭에씨드	1.0
글리세릴 스테아레이트	0.5
소르비탄모노스테아레이트	1.0
디메치콘	0.5
항산화제	0.2
트리에탄올아민	0.1
카보머	0.2
EDTA	0.1
향료	0.05
정제수	잔량

< 제제예 3> 영양 에센스

본 발명에 따른, 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 함유하는 영양 에센스의 제제예는 다음 표 7의 조성과 같이 제조하였다.

성분	함량(중량%)
지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물	7.0
글리세린	5.0
1,3-부틸렌 글리콜	2.0
폴리에틸렌 글리콜	2.0
카보머	1.0
소듐하이루로네이트	0.1
글리신	3.0
폴리아크릴아마이드	2.0
히드록시에칠셀룰로우즈	0.2
에탄올	3.0
폴리옥시에틸렌경화피마자유	1.0
항산화제	0.3
트리에탄올아민	0.1
EDTA	0.1
향료	0.05
정제수	잔량

< 제제예 4> 영양 크림

본 발명에 따른, 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 함유하는 영양 크림의 제제예는 다음 표 8의 조성과 같이 제조하였다.

성분	함량(중량%)
지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물	10.0
1,3-부틸렌 글리콜	3.0
글리세린	3.0
하이드로제네이티드 레시친	1.0
옥틸도데카놀	3.0
트리옥타노인	2.0
스테아릭에씨드	1.5
세토스테아릴알콜	2.0
폴리솔베이트 60	1.5
소르비탄세스퀴올레이트	2.0
디메치콘	3.0
항산화제	0.3
산탄검	0.2
트리에탄올아민	0.1
EDTA	0.1
향료	0.05
정제수	잔량

< 제제예 5> 팩

본 발명에 따른, 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 함유하는 팩의 제제예는 다음 표 9의 조성과 같이 제조하였다.

성분	함량(중량%)
지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물	8.0
글리세린	7.0
1,3-부틸렌 글리콜	3.0
스쿠알렌	3.0
디메치콘	3.0
소듐하이루로네이트	0.1
글리신	2.0
폴리아크릴아마이드	5.0
항산화제	0.3
트리에탄올아민	0.1
EDTA	0.1
향료	0.05
정제수	잔량

Claims (15)

1. 지구자 추출물 및 길경 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장용 조성물.
2. 제1항에 있어서, 상기 지구자 및 길경 추출물을 각각 1 ~ 10 : 1 ~ 10의 중량비율로 함유하는 미백용 화장용 조성물.
3. 지구자, 길경 및 밀싹 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장용 조성물.
4. 제3항에 있어서, 지구자, 길경 및 밀싹 추출물을 각각 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10의 중량비율로 함유하는 미백용 화장용 조성물.
5. 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 유효성분으로 함유하는 미백용 화장용 조성물.
6. 제5항에 있어서, 지구자, 길경, 밀싹 및 세이지 추출물을 각각 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10 : 1 ~ 10의 중량비율로 함유하는 미백용 화장용 조성물.
7. 제1항 내지 6항의 어느 한 항에 있어서, 상기 지구자, 길경, 밀싹 또는 세이지 추출물은 물, C₁ 내지 C₃의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물로 추출되는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 화장용 조성물.
8. 제1항 내지 제6항의 어느 한 항의 조성물을 함유하는 피부 미백용 화장품.
9. 제8항에 있어서, 상기 화장품은 유연화장수, 영양화장수, 영양에센스, 영양크림 및 팩으로 이루어진 군에서 선택되는 어느 하나인 피부 미백용 화장품.
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