KR101399178B1

KR101399178B1 - Hybrid polypeptides with selectable properties

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Publication number: KR101399178B1
Application number: KR1020087005846A
Authority: KR
Inventors: 오딜 에스터 레비; 마이클 알. 헨리; 캐롤린 엠. 조드카; 다이아나 루이스; 크리스토퍼 제이. 소아레스; 소우미트라 에스. 고쉬; 로렌스 드소우자; 데이비드 쥐. 파크스; 크리스틴 엠. 맥; 베로우즈 브루스 포루드
Original assignee: 아스트라제네카 파마수티컬스 엘피; 아밀린 파마슈티칼스, 엘엘씨.
Priority date: 2005-08-11
Filing date: 2006-08-11
Publication date: 2014-06-18
Also published as: CN101296942A; ZA200801138B; KR20080045185A; EA200800548A1; IL188937A0; EA014647B1; JP2009504681A; MX2008002028A

Abstract

본 발명은 일반적으로 혈장 글루코스 수준, 인슐린 수준 및/또는 인슐린 분비의 제어에 의해 완화될 수 있는 대사 질환 및 장애, 예를 들어 당뇨병 및 당뇨병-관련 상태의 치료 및 예방을 위한 작용제로서 유용한 선별가능한 신규 하이브리드 폴리펩티드에 관한 것이다. 이러한 상태 및 장애로는 고혈압, 이상지혈증, 심혈관 질환, 식사 장애, 인슐린 내성, 비만, 및 제1형, 제2형 및 임신 당뇨병 등을 비롯한 임의의 종류의 진성 당뇨병 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.The present invention relates to a method for the treatment and / or prophylaxis of metabolic diseases and disorders which can be alleviated by the control of plasma glucose levels, insulin levels and / or insulin secretion, for example, selectable novel compounds useful as agents for the treatment and prevention of diabetes and diabetes- Hybrid polypeptides. Such conditions and disorders include, but are not limited to, hypertension, dyslipidemia, cardiovascular disease, dietary disorders, insulin resistance, obesity, and any type of diabetes mellitus, including Type 1, Type 2 and gestational diabetes.

하이브리드 폴리펩티드, 생물활성 펩티드 호르몬 모듈, 혈장 글루코스, 인슐린, 대사 질환 및 장애, 당뇨병 Hybrid polypeptides, bioactive peptide hormone modules, plasma glucose, insulin, metabolic diseases and disorders, diabetes

Description

선별가능한 특성을 갖는 하이브리드 폴리펩티드 {HYBRID POLYPEPTIDES WITH SELECTABLE PROPERTIES}HYBRID POLYPEPTIDES WITH SELECTABLE PROPERTIES < RTI ID = 0.0 >

관련 출원Related application

본 명세서는, 2005년 8월 11일자로 출원되고 본원과 공동 명의의 미국 가출원 제11/201,664호, 2005년 8월 17일자로 출원된 미국 제11/206,903호 (상기 문헌들의 발명의 영문 명칭은 둘다 "Hybrid Polypeptides with Selectable Properties"임) 및 2005년 12월 12일자로 출원된 미국 제11/301,744호를 우선권 주장하며, 이들 문헌은 모두가 본원에 그 전문이 참고로 포함된다. 서열 목록의 종이 사본, 및 "Sequence Listing COPY 1" 및 "Sequence Listing COPY 2"로 표지된 2개의 콤팩트 디스크 (각각 2006년 10월 26일에 만들어진 파일명 "0701WO2_Seq_lst 10-26-06.txt"의 216 KB 크기의 파일을 함유함) 상의 컴퓨터로 판독가능한 서열 목록의 형태가 본원에 참고로 포함된다.This application claims the benefit of US Provisional Application No. 11 / 201,664, filed August 11, 2005 and co-pending US application Ser. No. 11 / 206,903, filed August 17, 2005, Both of which are herein incorporated by reference in their entireties), and U.S. Ser. No. 11 / 301,744, filed December 12, 2005, all of which are incorporated herein by reference in their entirety. And two compact discs labeled "Sequence Listing COPY 1" and "Sequence Listing COPY 2" (filed on October 26, 2006, respectively, 216 Lt; / RTI > size, containing a KB size file).

본 발명은 펩티드 화학물질, 더욱 특히 선별가능한 특성을 갖는 하이브리드 폴리펩티드에 관한 것이다.The present invention relates to peptide chemicals, more particularly hybrid polypeptides having selectable properties.

많은 대사 질환 및 장애에는 인슐린 수준 및 혈중 글루코스 수준의 조절이 매우 중요하다. 인슐린 분비는, 장내분비 세포에 의해 생성되는, 인크레틴(incretin)이라 불리는 분비촉진 호르몬에 의해 부분적으로 조절된다. 인크레틴 호르몬인 글루카곤-유사 펩티드-1 ("GLP-1")은 장관 세포에서 분비되는 펩티드 호르몬으로서, 많은 연구에서 인슐린 분비를 향상시키는 효과를 갖는 것으로 밝혀졌 다. GLP-1은 창자에서 프로글루카곤으로부터 프로세싱되고 영양분-유도 인슐린 방출을 향상시킨다 [Krcymann B., et al., Lancet, 2:1300-1303 (1987)]. 다양한 말단절단(truncated) 형태의 GLP-1은 인슐린 분비 (인슐린자극 작용) 및 cAMP 형성을 자극하는 것으로 알려져 있다 (예를 들어 [Mojsov, S., Int. J. Pep. Pro. Res., 40:333-343 (1992)] 참조). 다양한 시험관내 실험실 실험과 GLP-1, GLP-1(7-36) 아미드 (서열 61) 및 GLP-1(7-37) 산 (서열 204)의 외인성 투여에 대한 포유동물, 특히 인간의 인슐린자극 반응 사이의 관계가 확립되어 있다 (예를 들어 [Nauck, M. A., et al., Diabetologia, 36:741-744 (1993)], [Gutniak, M., et al., New Eng. J. of Med., 326(20):1316-1322 (1992)], [Nauck, M. A., et al., J. Clin. Invest., 91:301-307 (1993)] 및 [Thorens, B., et al., Diabetes, 42:1219-1225 (1993)] 참조). Control of insulin levels and blood glucose levels is crucial for many metabolic diseases and disorders. Insulin secretion is partially regulated by secretion-promoting hormones, called incretins, produced by intestinal endocrine cells. Glucagon-like peptide-1 ("GLP-1"), an incretin hormone, is a peptide hormone secreted by intestinal cells and has been shown to have an effect of enhancing insulin secretion in many studies. GLP-1 is processed from proglucagon in the gut and enhances nutrient-induced insulin release [Krcymann B., et al., Lancet, 2: 1300-1303 (1987)]. Various truncated forms of GLP-1 are known to stimulate insulin secretion (insulin stimulation) and cAMP formation (see, for example, Mojsov, S., Int. J. Pep. Pro. Res., 40 : 333-343 (1992)). In vitro laboratory experiments with various in vitro experiments with mammalian animals, particularly human insulin stimuli, for exogenous administration of GLP-1, GLP-1 (7-36) amide (SEQ ID NO: 61) and GLP-1 (7-37) The relationship between the reactions has been established (see, for example, Nauck, MA, et al., Diabetologia, 36: 741-744 (1993), Gutniak, M., et al., New Eng. Et al., J. Clin. Invest., 91: 301-307 (1993)] and [Thorens, B., et al. , Diabetes, 42: 1219-1225 (1993)).

GLP-1(7-36) 아미드 (서열 61)는 인슐린 감수성을 자극하고 생리적 농도에서 글루코스-유도된 인슐린 방출을 향상시킴으로써 인슐린 의존성 당뇨병에서 현저한 항-당뇨유발 효과를 발휘한다 [Gutniak M., et al., New Eng. J. Med., 326:1316-1322 (1992)]. 인슐린 비-의존성 당뇨병에 투여될 때, GLP-1(7-36) 아미드 (서열 61)는 인슐린 방출을 자극하고 글루카곤 분비를 저하시키고 위 공복을 억제하며 글루코스 활용을 향상시킨다 ([Nauck, 1993], [Gutniak, 1992], [Nauck, 1993]). 그러나, GLP-1형 분자는 혈청 반감기가 매우 짧아서, 당뇨병의 장기 요법에 이러한 펩티드를 사용하는 것은 어려운 일이었다.GLP-1 (7-36) amide (SEQ ID NO: 61) exhibits a significant anti-diabetic effect in insulin-dependent diabetes mellitus by stimulating insulin sensitivity and enhancing glucose-induced insulin release at physiological concentrations [Gutniak M., et al., New Eng. J. Med., 326: 1316-1322 (1992)). GLP-1 (7-36) amide (SEQ ID NO: 61), when administered to insulin non-dependent diabetes mellitus, stimulates insulin release and decreases glucagon secretion, inhibits gastric emptying and improves glucose utilization ([Nauck, 1993] , [Gutniak, 1992], [Nauck, 1993]). However, GLP-1 type molecules have a very short serum half-life, making it difficult to use such peptides for organ therapy of diabetes.

더욱 특히, GLP-1은 160개 아미노산 프로호르몬인 프로글루카곤으로부터 유 래된 30개 아미노산 펩티드이다. 췌장 및 장관에서는 여러가지 프로호르몬 전환효소의 작용으로 인해 글루카곤 및 다른 불명확한 펩티드가 생성되는 반면에 프로글루카곤이 절단되면 GLP-1과 GLP-2 및 또한 2종의 다른 펩티드가 생성된다. GLP-1의 아미노산 서열은 지금까지 연구된 모든 포유동물에서 100％ 상동성이고, 이는 중대한 생리적 역할을 암시한다. GLP-1(7-37) 산은 C-말단에서 말단절단되고 아미드화되어 GLP-1(7-36) NH₂ (서열 61)를 형성한다. 유리 산 GLP-1(7-37) OH (서열 204) 및 아미드 GLP-1(7-36) NH₂ (서열 61)의 생물학적 효과 및 대사 턴오버(turnover)는 구별할 수 없다. 통상적으로, 아미노산의 번호매김은 프로글루카곤으로부터 프로세싱된 GLP-1(1-37) OH (서열 59)를 기초로 한다. 생물학적 활성을 갖는 GLP-1 (GLP-1(7-36) NH₂) (서열 61)은 추가 프로세싱의 결과이다. 따라서, GLP-1(7-37) OH (서열 204) 또는 GLP-1(7-36) NH₂ (서열 61)의 첫번째 아미노산은 ⁷His이다. More particularly, GLP-1 is a 30 amino acid peptide derived from a 160 amino acid prohormone, proglucagon. In the pancreas and intestines, glucagon and other unidentified peptides are produced due to the action of various pro-hormone converting enzymes, whereas when the proglucagon is cleaved, GLP-1 and GLP-2 and also two other peptides are produced. The amino acid sequence of GLP-1 is 100% homologous in all mammals studied so far, suggesting a significant physiological role. GLP-1 (7-37) acid is screen ends are cut from the C- terminal amide form a _{GLP-1 (7-36) NH 2} ( SEQ ID NO: 61). The free acid GLP-1 (7-37) OH (SEQ ID NO: 204) and amide GLP-1 (7-36) NH ₂ biological effects and metabolic turn (SEQ ID NO: 61) over (turnover) can not be distinguished. Typically, the amino acid numbering is based on GLP-1 (1-37) OH (SEQ ID NO: 59) processed from proglucagon. GLP-1 biologically active (GLP-1 (7-36) NH 2) ( SEQ ID NO: 61) is the result of further processing. Accordingly, the first amino acid of GLP-1 (7-37) OH (SEQ ID NO: 204), or _{GLP-1 (7-36) NH 2} ( SEQ ID NO: 61) ⁷ is His.

위장관에서, GLP-1은 관강내(intraluminal) 글루코스의 자극에 반응하여 장관, 결장 및 직장 점막의 L-세포에 의해 생성된다. 활성 GLP-1의 혈장 반감기는 < 5분이고, 그의 대사 제거율은 약 12분 내지 13분이다 [Holst, Gastroenterology 107(6):1848-55 (1994)]. GLP-1의 대사에 관여하는 주요 프로테아제는 디펩티딜 펩티다제 (DPP) IV (CD26)이고, 이는 N-말단 His-Ala 디펩티드를 절단하여 대사물질인 GLP-1(9-37) OH (서열 205) 또는 GLP-1(9-36) NH₂ (서열 206)를 생성하고, 이 는 GLP-1 수용체의 약한 불활성 효능제 또는 길항제로서 다양하게 설명된다. GLP-1 수용체 (GLP-1R)은 463개 아미노산의 G 단백질 커플링 수용체이고, 췌장 베타 세포와 폐에 국소화되어 있고, 뇌, 지방 조직 및 신장에는 더 적은 정도로 국소화되어 있다. GLP-1(7-37) OH (서열 204) 또는 GLP-1(7-36) NH₂ (서열 61)에 의한 GLP-1R의 자극은 아데닐레이트 시클라제 활성화, cAMP 합성, 막 탈분극, 세포내 칼슘의 상승 및 글루코스-유도된 인슐린 분비의 증가를 일으킨다 [Holz et al., J. Biol. Chem. 270(30):17749-57 (1995)]. In the gastrointestinal tract, GLP-1 is produced by L-cells of the intestinal, colon and rectal mucosa in response to stimulation of intraluminal glucose. The plasma half-life of active GLP-1 is < 5 min and its metabolic clearance is about 12 to 13 minutes [Holst, Gastroenterology 107 (6): 1848-55 (1994)]. The major protease involved in the metabolism of GLP-1 is dipeptidyl peptidase (DPP) IV (CD26), which cleaves the N-terminal His-Ala dipeptide to produce the metabolite GLP-1 (9-37) OH generating a sequence 205), or GLP-1 (9-36) NH ₂ (SEQ ID NO: 206), and this is variously described as slightly inert agonist or antagonist of the GLP-1 receptor. The GLP-1 receptor (GLP-1R) is a G protein-coupled receptor of 463 amino acids, localized in the pancreatic beta cells and lungs, and localized to a lesser extent in the brain, adipose tissue and kidneys. GLP-1 (7-37) OH (SEQ ID NO: 204), or GLP-1 (7-36) stimulation of GLP-1R by NH ₂ (SEQ ID NO: 61) adenylate cyclase activation, cAMP synthesis, membrane depolarization, the cell Resulting in elevated calcium intakes and increased glucose-induced insulin secretion [Holz et al., J. Biol. Chem. 270 (30): 17749-57 (1995)).

GLP-1은 음식물 섭취에 반응하여 장관 점막으로부터 분비되는 강력한 인슐린 분비촉진제이다. GLP-1의 충분한 인크레틴 효과는 GLP-1R 넉아웃(knockout) 마우스가 글루코스 불내성이라는 사실로부터 이해된다. 당뇨 환자에서 i.v. 주입된 GLP-1의 인크레틴 반응은 보존되지만, 이들 환자에서 경구 글루코스에 대한 인크레틴 반응은 손상된다. 주입 또는 sc 주사에 의한 GLP-1 투여는 당뇨 환자에서 공복시의 글루코스 수준을 제어하고, 인슐린 분비에 대한 글루코스 역치를 유지시킨다 ([Gutniak et al., N. Engl. J. Med. 326:1316-22 (1992)], [Nauck et al., Diabet. Med. 13:(9 Suppl 5):S39-S43 (1996)], [Nauck et al., J. Clin. Endocrinol. Metab. 76:912-917 (1993)]). GLP-1은 술포닐우레아 약물과 관련이 있는 저혈당을 피하면서 생리적인 방식으로 인슐린 분비를 증대시킬 수 있는 치료제로서 큰 잠재성을 나타냈다.GLP-1 is a potent insulin secretagogue secreted from the intestinal mucosa in response to food intake. The sufficient incretin effect of GLP-1 is understood from the fact that GLP-1R knockout mice are glucose intolerant. In diabetic patients i.v. The incretin response of injected GLP-1 is preserved, but the incretin response to oral glucose is impaired in these patients. GLP-1 administration by injection or sc injection controls fasting glucose levels in diabetic patients and maintains the glucose threshold for insulin secretion (Gutniak et al., N. Engl. J. Med. 326: 1316- Nauck et al., J. Clin Endocrinol. Metab. 76: 912-943 (1996)], [Nauck et al., Diabet. Med. 917 (1993)). GLP-1 has shown great potential as a therapeutic agent to increase insulin secretion in a physiological manner while avoiding hypoglycemia associated with sulfonylurea drugs.

글루코스 항상성에 대한 GLP-1의 다른 중요한 효과는 글루카곤 분비의 억제 및 위 운동의 저해이다. 글루카곤의 췌장 알파 세포 분비에 대한 GLP-1의 억제 작용은 글루코스 신합성 및 글리코겐 분해의 감소를 통해 간 글루코스 생성을 감소시킨다. GLP-1의 상기 항-글루카곤 효과는 당뇨 환자에서 보존된다. Another important effect of GLP-1 on glucose homeostasis is inhibition of glucagon secretion and inhibition of gastric motility. The inhibitory action of GLP-1 on pancreatic alpha-cell secretion of glucagon reduces hepatic glucose production through reduced gluconeogenesis and glycogenolysis. The anti-glucagon effect of GLP-1 is conserved in diabetic patients.

위 운동 및 위 분비가 억제되는 GLP-1의 소위 회장 제동(brake) 효과는 미주신경 원심성 수용체를 통해 또는 장관 평활근에 대한 직접 작용에 의해 이루어진다. GLP-1에 의한 위산 분비의 감소는 영양분 이용률에 있어서의 지연기(lag phase)에 기여하여, 신속한 인슐린 반응이 필요 없어진다. 요약하면, GLP-1의 위장관 효과는 지연된 글루코스 및 지방산 흡수에 유의하게 기여하고 인슐린 분비 및 글루코스 항상성을 조정한다. The so-called plaque braking effect of GLP-1 in which gastric motility and gastric secretion are inhibited is achieved by direct action on the vagal efferent receptors or on the intestinal smooth muscle. The reduction of gastric acid secretion by GLP-1 contributes to the lag phase in nutrient utilization, thus eliminating the need for a rapid insulin response. In summary, the gastrointestinal effect of GLP-1 significantly contributes to delayed glucose and fatty acid uptake and regulates insulin secretion and glucose homeostasis.

GLP-1은 또한 베타 세포 특이적 유전자, 예를 들어 GLUT-1 트랜스포터, 인슐린 (PDX-1과 인슐린 유전자 프로모터와의 상호작용을 통해) 및 헥소키나제-1을 유도하는 것으로 나타났다. 따라서, GLP-1은 설치류 실험에 의해 입증된 바와 같이 정상적으로 노화와 연관된 글루코스 불내성을 잠재적으로 역전시킬 수 있다. 또한, GLP-1은 베타 세포 기능저하 상태 동안 베타 세포 기능을 복구하는 것 외에도 베타 세포 신생에 기여하고 베타 세포량을 증가시킬 수 있다.GLP-1 has also been shown to induce beta cell specific genes, such as the GLUT-1 transporter, insulin (via interaction with the insulin gene promoter with PDX-1) and hexokinase-1. Thus, GLP-1 can potentially reverse glucose intolerance normally associated with senescence, as evidenced by rodent experiments. In addition to restoring beta cell function during beta-cell dysfunction, GLP-1 may also contribute to beta cell growth and increase beta cell mass.

GLP-1의 중추적인 효과는 시상하부 GLP-1R의 작용을 통해 발휘된, 음식물 섭취의 감소와 관련이 있는 포만감 증가를 포함한다. 제II형 당뇨 환자에서 GLP-1의 48시간 연속 SC 주입은 시장기와 음식물 섭취를 감소시키고 포만감을 증가시켰다. 이러한 식욕 감퇴 효과는 GLP-1R 넉아웃 마우스에서는 나타나지 않았다. A pivotal effect of GLP-1 includes increased satiety associated with a reduction in food intake exerted through the action of the hypothalamic GLP-1R. The 48-hour continuous infusion of GLP-1 in type II diabetic patients reduced market and food intake and increased satiety. This anorexic effect was not seen in GLP-1R knockout mice.

엑센딘은 인슐린 분비와 관련된 또다른 패밀리의 펩티드이다. 엑센딘은 미 국 아리조나주에 서식하는 도마뱀인 아메리카 독도마뱀(Gila-monster) 및 멕시코 구슬 도마뱀(Mexican Beaded Lizard)의 타액에서 발견된다. 엑센딘-3은 헬로더마 호리둠(Heloderma horridum)의 타액에 존재하고, 엑센딘-4는 헬로더마 서스펙툼(Heloderma suspectum)의 타액에 존재한다 ([Eng, J., et al., J Biol. Chem., 265:20259-62, 1990], [Eng., J., et al., J. Biol. Chem., 267:7402-05 (1992)]). 엑센딘은 글루카곤-유사 펩티드 패밀리의 몇몇 구성원에 약간의 서열 유사성을 가지며 GLP-1에 대해서는 53％의 최고 동일성을 갖는다 [Goke, et al., J. Biol. Chem., 268:19650-55 (1993)].Exendin is another family of peptides related to insulin secretion. Exendin is found in the saliva of Gila-monster and Mexican Beaded Lizard, the lizards of the US state of Arizona. Exendin-3 is present in the saliva of Heloderma horridum and exendin-4 is present in the saliva of Heloderma suspectum (Eng, J., et al., J Biol. Chem., 265: 20259-62, 1990, Eng., J., et al., J. Biol. Chem., 267: 7402-05 (1992)). Exendin has some sequence similarity to some members of the glucagon-like peptide family and 53% highest identity to GLP-1 [Goke, et al., J. Biol. Chem., 268: 19650-55 (1993)].

엑센딘-4는 인슐린-분비 TC1 세포, 기니아 피그 췌장의 산재된 선포 세포 및 위의 벽 세포에 존재하는 GLP-1 수용체에 결합하고, 상기 펩티드는 또한 소마토스타틴 방출을 자극하며 단리된 위에서 가스트린 방출을 억제한다 ([Goke, et al., J. Biol. Chem., 268:19650-55 (1993)], [Schepp, et al., Eur.J. Pharmacol., 69:183-91 (1994)], [Eissele, et al., Life Sci., 55:629-34 (1994)]). 엑센딘-3 및 엑센딘-4는 췌장 선포 세포 상의 GLP-1 수용체에 결합하여 췌장 선포 세포에서 cAMP 생성 및 췌장 선포 세포로부터의 아밀라제 방출을 자극하는 것으로 밝혀졌다 ([Malhotra, R., et al., Relulatory Peptides, 41:149-56 (1992)], [Raufman, et al., J. Biol. Chem., 267:21432-37 (1992)], [Singh, et al., Regul. Pept., 53:47-59 (1994)]). 진성 당뇨병의 치료 및 과혈당증의 예방을 위해 엑센딘-3 및 엑센딘-4의 인슐린자극 활성을 이용할 것이 제안된 바 있다 (Eng, 미국 특허 제5,424,286호). Exendin-4 binds to GLP-1 receptors present in insulin-secreting TC1 cells, sporadic proliferating cells of the guinea pig pancreas, and stomach wall cells, which also stimulate somatostatin release and release gastrin release from isolated (Schepp, et al., Eur. J. Pharmacol., 69: 183-91 (1994)), , [Eissele, et al., Life Sci., 55: 629-34 (1994)). Exendin-3 and exendin-4 have been shown to bind to GLP-1 receptors on pancreatic proliferating cells and stimulate cAMP production in pancreatic proliferation cells and amylase release from pancreatic proliferation cells (Malhotra, R., et al Et al., J. Biol. Chem., 267: 21432-37 (1992)], [Singh, et al., Regul. Pept. , 53: 47-59 (1994)). It has been proposed to use insulin-stimulating activity of exendin-3 and exendin-4 for the treatment of diabetes mellitus and prevention of hyperglycemia (Eng, U.S. Patent No. 5,424,286).

말단절단된 엑센딘 펩티드, 예를 들어 엑센딘[9-39], 카르복시아미드화 분자, 및 단편 3-39 내지 9-39는 GLP-1의 강력하고 선택적인 길항제라고 보고되었다 ([Goke, et al., J. Biol. Chem., 268:19650-55 (1993)], [Raufman, J. P., et al., J. Biol. Chem., 266:2897-902 (1991)], [Schepp, W., et al., Eur. J. Pharm., 269:183-91 (1994)], [Montrose-Rafizadeh, et al., Diabetes, 45 (Suppl. 2):152A (1996)]). 엑센딘[9-39] (서열 207)는 내인성 GLP-1을 생체내에서 차단하여 인슐린 분비를 감소시킨다 ([Wang, et al., J. Clin. Invest., 95:417-21 (1995)], [D'Alessio, et al., J. Clin. Invest., 97:133-38 (1996)]). GLP-1의 인슐린자극 효과를 명백하게 담당하는 수용체가 래트 췌장 섬(islet) 세포로부터 클로닝되었다 [Thorens, B., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:8641-8645 (1992)]. 엑센딘 및 엑센딘[9-39]는 클로닝된 GLP-1 수용체에 결합한다 (래트 췌장 세포 GLP-1 수용체 [Fehmann HC, et al., Peptides, 15(3):453-6 (1994)], 인간 GLP-1 수용체 [Thorens B, et al., Diabetes, 42(11):1678-82 (1993)]). 클로닝된 GLP-1 수용체로 형질감염된 세포에서, 엑센딘-4는 효능제로 cAMP를 증가시키는 반면, 엑센딘[9-39] (서열 207)는 길항제로 엑센딘-4 및 GLP-1의 자극 작용을 차단한다 (상기 문헌). A truncated exendin peptide, such as exendin [9-39], a carboxyamidated molecule, and fragments 3-39 through 9-39, have been reported to be potent and selective antagonists of GLP-1 (Goke, et J. Biol. Chem., 266: 2897-902 (1991), Schepp, W., et al., J. Biol. Chem., 268: 19650-55 (Montrose-Rafizadeh, et al., Diabetes, 45 (Suppl. 2): 152A (1996)). Exendin [9-39] (SEQ ID NO: 207) blocks insulin secretion by blocking endogenous GLP-1 in vivo (Wang, et al., J. Clin. Invest., 95: 417-21 (1995) , D'Alessio, et al., J. Clin. Invest., 97: 133-38 (1996)). Receptors that apparently play a role in the insulin-stimulating effects of GLP-1 have been cloned from rat pancreatic islet cells [Thorens, B., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 8641-8645 (1992)). Exendin and exendin [9-39] bind to the cloned GLP-1 receptor (rat pancreatic cell GLP-1 receptor [Fehmann HC, et al., Peptides, 15 (3): 453-6 (1994) , Human GLP-1 receptor [Thorens B, et al., Diabetes, 42 (11): 1678-82 (1993)]. In cells transfected with the cloned GLP-1 receptor, exendin-4 increases cAMP as an agonist while exendin [9-39] (SEQ ID NO: 207) stimulates exendin-4 and GLP-1 as antagonists (See above).

더욱 특히, 엑센딘-4는 아메리카 독도마뱀 (헬로더마 서스펙툼)의 타액에서 발견되는 39개 아미노산의 C-말단 아미드화 펩티드이고, GLP-1 펩티드 서열에 53％ 아미노산 서열 동일성을 갖는다. 예를 들어 문헌 ([Eng, J., et al. "Isolation and Characterization of Exendin-4, and Exendin-3 Analogue from Heloderma suspectum Venom," J. Bio. Chem., 267:11, p. 7402-7405 (1992)], [Young, A. A., et al., "Glucose-Lowering and Insulin-Sensitizing Actions of Exendin-4," Diabetes, Vol. 48, p. 1026-1034, May, 1999])을 참조한다. 활성 면에서, 엑센딘-4는 GLP-1 수용체에 고도로 특이적인 효능제이고, GLP-1처럼 인슐린 분비를 자극할 수 있다. 따라서, 엑센딘-4는 GLP-1처럼 인슐린자극 펩티드라고 여겨진다.More particularly, exendin-4 is a C-terminal amidated peptide of 39 amino acids found in saliva of the American poisonous lizard (helodoma septicum) and has a 53% amino acid sequence identity to the GLP-1 peptide sequence. Chem., 267: 11, p. 7402-7405 (1986), for example, in " Isolation and Characterization of Exendin-4 and Exendin-3 Analogue from Heloderma suspectum Venom, (1992)], [Young, AA, et al., "Glucose-Lowering and Insulin-Sensitizing Actions of Exendin-4," Diabetes, Vol 48, p 1026-1034, May 1999). On the active side, exendin-4 is a highly specific agonist for the GLP-1 receptor and can stimulate insulin secretion like GLP-1. Thus, exendin-4 is thought to be an insulin-stimulating peptide such as GLP-1.

그러나, 엑센딘-4는 GLP-1과는 달리 GLP-1 서열을 생체내에서 신속하게 분해하는 디펩티딜 펩티다제 IV에 내성이 있기 때문에 인간에서 비교적 긴 반감기를 갖는다. 추가로, 엑센딘-4는 GLP-1에 비해 인슐린 분비 자극력이 더 크고, 이러한 자극 활성을 얻기 위해 엑센딘-4가 더 낮은 농도로 사용될 수 있는 것으로 나타났다. 예를 들어 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제5,424,286호를 참조한다. 따라서, 엑센딘-4 펩티드 또는 그의 유도체 (이러한 유도체의 예에 대해서는 예를 들어 본원에 참고로 포함되는 미국 특허 제6,528,486호 및 그의 대응 국제 특허 출원 WO 01/04156 참조)는 인슐린 수준의 조절곤란을 포함하는 상태 (예를 들어 당뇨병과 같은 상태)의 치료에 인슐린 또는 GLP-1보다 더 큰 잠재적 유용성을 갖는다. However, unlike GLP-1, exendin-4 has a relatively long half-life in humans because it is resistant to dipeptidyl peptidase IV that rapidly degrades the GLP-1 sequence in vivo. In addition, exendin-4 has a greater insulin secretion than GLP-1, indicating that exendin-4 can be used at lower concentrations to achieve this stimulatory activity. See, for example, U.S. Patent No. 5,424,286, which is incorporated herein by reference. Thus, exendin-4 peptides or derivatives thereof (for examples of such derivatives, see, for example, U.S. Patent No. 6,528,486 and its corresponding international patent application WO 01/04156, incorporated herein by reference) Have greater potential utility than insulin or GLP-1 for the treatment of conditions that comprise (e. G., Conditions such as diabetes).

대사 질환 및 장애와 관련이 있는 또다른 패밀리의 펩티드 호르몬은 아밀린, 칼시토닌, 칼시토닌 유전자 관련 펩티드, 아드레노메듈린 및 인터메딘 ("AFP-6"으로도 알려져 있음)을 포함하는 아밀린 패밀리의 펩티드 호르몬이다. 아밀린은 37개 아미노산 펩티드 호르몬이다. 이는 인간 제2형 당뇨병의 췌장 섬에서 아밀로이드 침적물의 주성분으로서 단리되어 정제되고 화학적으로 특징 규명되었다 [Cooper et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 84:8628-8632 (1987)]. 아밀린 분자는 2개 의 번역후 변형을 가져서, C-말단은 아미드화되고 위치 2 및 위치 7의 시스테인은 가교되어 N-말단 루프를 형성한다. 인간 아밀린 유전자의 오픈 리딩 프레임 서열은 Lys의 N-말단 코돈 앞에 Lys-Arg 2염기성 아미노산 단백질 분해 절단 신호, 및 CLAIMS-말단 위치 (단백질 아미드화 효소 PAM에 의한 아미드화에 전형적인 서열)의 Lys-Arg 단백질 분해 신호 앞에 Gly이 존재함을 보여준다 [Cooper et al., Biochem. Biophys. Acta, 1014:247-258 (1989)].Another family of peptide hormones that are involved in metabolic diseases and disorders is the amylin family, which includes amylin, calcitonin, calcitonin gene related peptides, adrenomedullin and intermedin (also known as "AFP-6 & It is a peptide hormone. Amylin is a 37 amino acid peptide hormone. It has been isolated, purified and chemically characterized as a major component of amyloid deposits in the pancreatic islets of human type 2 diabetes [Cooper et al., Proc. Natl. Acad. Sci., USA, 84: 8628-8632 (1987)). The amylin molecule has two translational modifications, the C-terminal is amidated and the cysteines at positions 2 and 7 are cross-linked to form an N-terminal loop. The open reading frame sequence of the human amylin gene includes the Lys-Arg 2 basic amino acid proteolytic cleavage signal before the N-terminal codon of Lys and the Lys-Arg 2 basic amino acid proteolytic cleavage signal at the CLAIMS-terminal position (a typical sequence for amidation with protein amidase PAM) Arg protein cleavage signal [Cooper et al., Biochem. Biophys. Acta, 1014: 247-258 (1989)).

아밀린은 위 공복을 조절하고, 글루카곤 분비 및 음식물 섭취를 저해하여, 순환되는 글루코스의 존재율을 조절한다고 여겨진다. 이는, 순환혈로부터의 글루코스 소멸 속도 및 말초 조직에 의한 그의 흡수를 조절하는 인슐린의 작용을 보충한다고 여겨진다. 이러한 작용은 아밀린이 식후 글루코스 제어에 있어서의 인슐린의 효과를 글루코스 존재율에 영향을 미치는 3개 이상의 독립적인 메카니즘에 의해 보충하는 것을 나타내는, 설치류 및 인간에서의 실험 결과로 뒷받침된다. 첫째, 아밀린은 식후 글루카곤 분비를 억제한다. 건강한 성인에 비해, 제1형 당뇨병 환자에서는 순환 아밀린이 없으며 제2형 당뇨병 환자에서는 식후 아밀린 농도가 감소되었다. 추가로, 순환 아밀린에 결합하는 아밀린 특이적 모노클로날 항체를 주입하면 다시 대조군에 비해 글루카곤 농도가 크게 상승되었다. 이러한 2가지 결과는 모두가 식후 글루카곤 분비의 조절에 있어서의 내인성 아밀린의 생리적 역할을 지적한다. 둘째, 아밀린은 위장관 운동 및 위 공복을 느리게 한다. 마지막으로, 래트 아밀린의 시상하부내 주사는 래트에서 먹이 섭취를 감소시키고 시상하부에서 신경전달물질 대사를 변경시키는 것으로 나타났다. 특정 연구에서, 음식물 섭취는 래트 아밀린 및 래트 CGRP의 시상하부내 주사 후 8시간까지 유의하게 감소되었다. 인간 시험에서, 아밀린 유사체 프람린타이드(pramlintide)는 체중 또는 체중 증가를 감소시키는 것으로 나타났다. 아밀린은 대사 질환, 예를 들어 당뇨병 및 비만을 치료하는데는데할 수 있다. 아밀린은 통증, 골 장애 및 위염의 치료, 지질, 특히 트리글리세리드의 변형, 또는 지방의 우선적인 손실 및 제지방 조직(lean tissue)의 이용 감소와 같은 신체 조성의 변화에 사용될 수도 있다.Amylin is thought to regulate gastric emptying, inhibit glucagon secretion and food intake, and regulate the presence of circulating glucose. It is believed that this supplements the action of insulin to regulate the rate of glucose excretion from circulating blood and its absorption by peripheral tissues. This effect is supported by experimental results in rodents and humans demonstrating that amylin replenishes the effect of insulin on postprandial glucose control by three or more independent mechanisms that affect the glucose presence rate. First, amylin inhibits postprandial glucagon secretion. Compared to healthy adults, type 1 diabetic patients do not have circulating amylin and postprandial amylin levels decrease in type 2 diabetic patients. In addition, when the amylin-specific monoclonal antibody conjugated to cyclic amylin was injected, the glucagon concentration was significantly increased again compared to the control group. These two results all point to the physiological role of endogenous amylin in the regulation of postprandial glucagon secretion. Second, amylin slows gastrointestinal motility and gastric emptying. Finally, intra-hypothalamic injection of rat amylin has been shown to reduce food intake in the rat and to alter neurotransmitter metabolism in the hypothalamus. In certain studies, food intake was significantly reduced until 8 hours after injection into the hypothalamus of rats amylin and rat CGRP. In human trials, the amylin analog pramlintide has been shown to reduce weight or weight gain. Amylin can be used to treat metabolic diseases, such as diabetes and obesity. Amylin may also be used in the treatment of pain, bone disorders and gastritis, in the modification of body composition, such as in lipids, especially in triglycerides, or in preferential loss of fat and in reduced utilization of lean tissue.

호르몬 칼시토닌 (CT)은 유도된 과칼슘혈증에 반응하는 그의 분비 및 그의 신속한 저칼슘 효과를 기초로 하여 명명되었다. 이는, C 세포라고 불리게 된 갑상선 내의 신경내분비 세포에서 생성되고 분비된다. CT(1-32) (서열 48)의 가장 잘 연구된 작용은 파골세포에 대한 효과이다. CT의 시험관내 효과는 파상연(ruffled border)의 신속한 손실 및 리소좀 효소의 방출 감소를 포함한다. 궁극적으로, CT에 의한 파골세포 기능의 억제는 골 흡수를 감소시킨다. 그러나, 갑상선절제술의 경우에 혈청 CT의 만성적 감소나 수질성 갑상선암에서 발견되는 증가된 혈청 CT는 그 어느 것도 혈청 칼슘 또는 골 질량의 변화와 관련이 있다고 여겨지지 않는다. 따라서, CT(1-32) (서열 48)의 주요 기능은 응급 상황에서 급성 과칼슘혈증에 대적하고/하거나 "칼슘 스트레스" 기간, 예를 들어 성장, 임신 및 수유 동안 골격을 보호하는 것이 가장 유력하다고 여겨진다 (문헌 [Becker, JCEM, 89(4):1512-1525 (2004)] 및 [Sexton, Current Medicinal Chemistry 6:1067-1093 (1999)]에 검토되어 있음). 칼시토닌 및 CGRP-I 펩티드를 모두 제거한 칼시토닌 유전자 넉아웃 마우스에서는 마우스의 기초 칼슘-관련값은 정상 수준이지만 칼슘혈 반응은 증가되었 음을 밝혀낸 최근 데이타가 이와 일치한다 [Kurihara H, et al., Hypertens Res. 2003 Feb; 26 Suppl:S105-8]. CT는 혈장 칼슘 수준에 대한 효과를 갖고, 파골세포 기능을 억제하고, 골다공증의 치료에 널리 사용된다. 치료적으로, 연어 CT (sCT)는 골 밀도를 증가시키고 골절률을 감소시키며 부작용은 최소인 것으로 여겨진다. CT는 또한 지난 25년에 걸쳐, 골격의 1개 이상의 영역에서 커지거나 변형된 뼈를 초래할 수 있는 만성 골격 장애인 뼈의 파제트병(Paget's disease)에 대한 요법제로서 성공적으로 사용되어 왔다. CT는 또한 골다공증 동안 경험하는 골 통증에 대한 무통 효과 때문에도 널리 사용되고 있지만, 상기 효과에 대한 메카니즘은 명백하게 이해되지 않고 있다. Hormonal calcitonin (CT) was named on the basis of its secretion in response to induced hypercalcemia and its rapid low calcium effect. It is produced and secreted in neuroendocrine cells in the thyroid, which are called C cells. The best studied action of CT (1-32) (SEQ ID NO: 48) is the effect on osteoclasts. The in vitro effects of CT include rapid loss of ruffled borders and reduced release of lysosomal enzymes. Ultimately, inhibition of osteoclast function by CT reduces bone resorption. However, neither the chronic decrease in serum CT in the case of thyroidectomy nor the increased serum CT found in the watery thyroid carcinoma is considered to be associated with changes in serum calcium or bone mass. Thus, the primary function of CT (1-32) (SEQ ID NO: 48) is to protect the skeleton against acute and calcium deficiency in an emergency and / or during the "calcium stress" period, for example during growth, pregnancy and lactation (Reviewed in Becker, JCEM, 89 (4): 1512-1525 (2004) and Sexton, Current Medicinal Chemistry 6: 1067-1093 (1999)). In a calcitonin gene knockout mouse in which both calcitonin and CGRP-I peptides were removed, recent data revealing that the basal calcium-related value of the mouse is normal but the calcium hemoglobin is increased [Kurihara H, et al., Hypertens Res. 2003 Feb; 26 Suppl: S105-8]. CT has effects on plasma calcium levels, inhibits osteoclast function, and is widely used for the treatment of osteoporosis. Therapeutically, salmon CT (sCT) increases bone density and reduces fracture rates, with minimal adverse effects. CT has also been successfully used over the last 25 years as a remedy for Paget's disease of the bone, a chronic skeletal disorder that can result in large or deformed bones in more than one region of the skeleton. CT is also widely used because of its analgesic effect on bone pain experienced during osteoporosis, but the mechanism for this effect is not clearly understood.

칼시토닌 유전자 관련 펩티드 (CGRP)는, 수용체가 신경계 및 심혈관계를 포함하여 체내에 널리 분포되어 있는 신경펩티드이다. 상기 펩티드는 감각 신경전달을 조정한다고 여겨지고, 지금까지 발견된 가장 강력한 내인성 혈관확장 펩티드 중 하나이다. CGRP에 대해 보고된 생물학적 효과는, 염증시 물질 P의 조정, 신경근 접합부에서의 니코틴 수용체 활성, 췌장 효소 분비의 자극, 위산 분비의 감소, 말초 혈관확장, 심장 가속, 신경-조정, 칼슘 대사의 조절, 골형성 자극, 인슐린 분비, 체온 증가 및 음식물 섭취의 감소를 포함한다 [Wimalawansa, Amylin, calcitonin gene-related peptide, calcitonin and ADM: a peptide superfamily. Crit Rev Neurobiol. 1997; 11(2-3):167-239]. CGRP의 중요한 역할은 α-CGRP의 정맥내 투여 후 평균 동맥압의 감소로 입증되는 바와 같이 그의 강력한 혈관확장 작용에 의해 다양한 기관으로의 혈류를 제어하는 것이다. 또한, 혈관확장 작용은 증가된 말초 교감신경 활성에 의해 유발된 상승된 말초 혈관 내성 및 높은 혈압을 나타낸 동종접합 넉아웃 CGRP 마우스에 대한 최근의 분석에 의해서도 뒷받침된다 [Kurihara H, et al., Targeted disruption of ADM and αCGRP genes reveals their distinct biological roles. Hypertens Res. 2003 Feb; 26 Suppl:S105-8]. 따라서, CGRP는 다른 작용 중에서도 혈관확장 효과, 혈압 강하 효과 및 심박수 증가를 유발한다고 여겨진다.The calcitonin gene related peptide (CGRP) is a neuropeptide in which receptors are widely distributed in the body including the nervous system and cardiovascular system. The peptide is believed to modulate sensory neurotransmission and is one of the most potent endogenous vasodilating peptides thus far found. The biological effects reported for CGRP include the modulation of substance P during inflammation, nicotinic receptor activity at the neuromuscular junction, stimulation of pancreatic enzyme secretion, reduction of gastric acid secretion, peripheral vasodilation, cardiac acceleration, neuro-regulation, , Osteogenic stimulation, insulin secretion, increased body temperature and decreased food intake [Wimalawansa, amylin, calcitonin gene-related peptide, calcitonin and ADM: a peptide superfamily. Crit Rev Neurobiol. 1997; 11 (2-3): 167-239). An important role of CGRP is to control blood flow to various organs by its potent vasodilatory action, as evidenced by a decrease in mean arterial pressure after intravenous administration of alpha-CGRP. In addition, vasodilation is supported by a recent analysis of homozygous knockout CGRP mice exhibiting elevated peripheral vascular resistance and high blood pressure induced by increased peripheral sympathetic activity [Kurihara H, et al., Targeted disruption of ADM and αCGRP genes reveals their distinct biological roles. Hypertens Res. 2003 Feb; 26 Suppl: S105-8]. Therefore, it is believed that CGRP causes vasodilatory effect, blood pressure lowering effect and heart rate increase among other actions.

울혈성 심부전증 환자에게 CGRP를 장기 주입하면 부작용 없이 혈역학적 기능에 지속적인 유익한 효과를 나타냈고, 이는 심부전증에서의 용도를 시사한다. CGRP 용도의 다른 예로는 신부전, 급성 및 만성 관상 동맥 허혈, 심장 부정맥의 치료, 다른 말초 혈관 질환, 예를 들어 레이노(Raynaud) 현상, 거미막하 출혈, 고혈압 및 폐 고혈압 등이 있다. 임신 및 조기 분만의 자간전 중독증 역시 잠재적으로 치료가능하다 [Wimalawansa, 1997]. 최근의 치료 용도는 편두통의 치료를 위한 CGRP 길항제의 사용을 포함한다. Long-term infusion of CGRP into patients with congestive heart failure has had a lasting beneficial effect on hemodynamic function without side effects, suggesting its use in heart failure. Other examples of CGRP applications include renal failure, acute and chronic coronary ischemia, treatment of cardiac arrhythmias, other peripheral vascular diseases such as Raynaud's phenomenon, subarachnoid hemorrhage, hypertension and pulmonary hypertension. Pre-eclampsia in pregnancy and early labor is also potentially treatable [Wimalawansa, 1997]. Recent therapeutic uses include the use of CGRP antagonists for the treatment of migraine.

아드레노메듈린 (ADM)은 펩티드를 함유하지 않는 것보다 펩티드를 함유하는 더 많은 조직에서 거의 어느 곳에서나 발현된다. ADM에 대해 검토하는 간행물 [Hinson, J. P. et al., Endocrine Reviews (2000) 21(2):138-167]에서는, 혈관확장, 세포 성장, 호르몬 분비의 조절, 및 나트륨배설증가를 비롯한 생물학적 작용 범위를 갖는 심혈관계, 세포 성장, 중추 신경계 및 내분비계에 대한 그의 효과를 상세하게 기술하고 있다. 래트, 고양이, 양 및 인간에서의 연구는 ADM의 정맥내 주입이 강력하고 지속적인 혈압 강하를 일으키고, CGRP의 경우와 유사하다는 것을 확인하였다. 그러나, 마취된 래트에서 평균 동맥압에 대한 ADM의 혈압 강하 효과는 CGRP 길항제 CGRP₈ _-37에 의해 억제되지 않았고, 이는 상기 효과가 CGRP 수용체를 통해 매개되는 것이 아님을 시사한다. 마취되거나 의식이 있거나 고혈압인 래트에서 인간 ADM의 단기 또는 장기 투여는 혈압 강하가 동반되는 총 말초 내성에 있어서 유의한 감소를 일으키고, 심박수, 심박출량 및 1회 박출량이 동반 상승한다.Adrenomedullin (ADM) is expressed almost anywhere in more tissues containing peptides than without peptides. In a publication reviewing the ADM [Hinson, JP et al., Endocrine Reviews (2000) 21 (2): 138-167), the biological activity range, including vasodilation, cell growth, regulation of hormone secretion, And its effects on cardiovascular, cell growth, central nervous system, and endocrine system. Studies in rats, cats, sheep, and humans have confirmed that intravenous infusion of ADM results in a strong and sustained drop in blood pressure, similar to that of CGRP. However, the hypotensive effect of ADM on mean arterial pressure in anesthetized rats was not inhibited by the CGRP antagonist, CGRP ₈ _-37, suggesting that not that the effect mediated via CGRP receptors. Short or long-term administration of human ADM in anesthetized, conscious or hypertensive rats results in a significant reduction in total peripheral endurance accompanied by hypotension, accompanied by heart rate, cardiac output, and stroke volume.

ADM은 또한 배아형성 및 분화에서 중요한 인자이며 래트 내피 세포에 대한 세포자멸(apoptosis) 생존 인자라고 제안된 바 있다. 이는 ADM 유전자 손실에 대해 동종접합성인 마우스가 배아형성 동안 불완전한 혈관 형성을 나타내어 임신 중기에 죽은, 최근의 마우스 ADM 넉아웃 연구에 의해 뒷받침된다. ADM +/- 이종접합 마우스는 조직 손상에 대한 감수성과 함께 높은 혈압을 가진 것으로 보고되었다 [Kurihara H, et al., Hypertens Res. 2003 Feb; 26 Suppl:S105-8]. ADM is also an important factor in embryogenesis and differentiation and has been suggested as an apoptosis survival factor for rat endothelial cells. This is supported by recent mouse ADM knockout studies in which mice homozygous for ADM gene loss died during mid-gestation with incomplete angiogenesis during embryogenesis. ADM +/- heterozygous mice have been reported to have high blood pressure with susceptibility to tissue damage [Kurihara H, et al., Hypertens Res. 2003 Feb; 26 Suppl: S105-8].

ADM은 뇌하수체, 부신, 생식 기관 및 췌장과 같은 내분비 기관에 영향을 미친다. 상기 펩티드는 뇌하수체로부터의 ACTH 방출을 억제하는 역할을 한다고 여겨진다. 부신에서, 상기 펩티드는 래트 및 인간 모두에서 부신 피질의 분비 활성에 영향을 미친다고 여겨지고, 무손상 래트에서 부신 혈관층에서 혈관확장제로서 작용하여 부신 혈류를 증가시킨다. ADM은 여성 생식로 전체에 존재한다고 밝혀졌고, 정상 임신에서는 혈장 수준이 상승한다. 자간전증의 래트 모델에서의 연구는 ADM이 고혈압을 역전시키고 임신 후기 동안 래트에게 투여될 때 태자(pup) 사망률을 감소시킬 수 있음을 보여준다. 이는 임신 초기의 동물이나 자간전증 모델에서의 비-임신 래트에는 유사한 효과를 갖지 않기 때문에, ADM이 자궁-태반 심혈관계에서 중요한 조절 역할을 할 수 있음을 시사한다. 췌장에서, ADM은 경구 글루코스 시도에 대한 인슐린 반응을 감쇠시키고 지연시켜서 글루코스 수준을 초기에 상승시키므로 억제 역할을 하는 것이 가장 유력하다고 여겨진다. ADM은 또한 신장 기능에도 영향을 미칠 수 있다. 말초 투여된 볼루스(bolus)는 평균 동맥압을 유의하게 저하시키고 신장 혈류, 사구체 여과율 및 뇨 유동을 상승시킬 수 있다. 일부 경우에, Na⁺ 배출도 증가된다. ADM affects endocrine organs such as the pituitary gland, adrenal glands, reproductive tract and pancreas. It is believed that the peptide acts to inhibit ACTH release from the pituitary gland. In the adrenal gland, the peptide is believed to affect the secretory activity of the adrenal cortex in both rats and humans, and acts as a vasodilator in the adrenal blood vessel layer in intact rat to increase adrenal blood flow. ADM has been found to be present throughout female reproductive and plasma levels rise in normal pregnancy. Studies in a rat model of preeclampsia show that ADM can reverse hypertension and reduce pup death rates when administered to rats during the late pregnancy. This suggests that ADM may play an important regulatory role in utero-placental cardiovascular system, since it has no similar effect on non-pregnant rats in pre-pregnant animals or preeclampsia models. In the pancreas, it is believed that ADM is most potent in inhibiting the action, since it dampens and delays the insulin response to oral glucose challenge and initially elevates the glucose level. ADM can also affect kidney function. Peripherally administered bolus can significantly reduce mean arterial pressure and elevate renal blood flow, glomerular filtration rate and urine flow. In some cases, Na ⁺ emissions are also increased.

ADM은 또한 뼈 및 폐에서도 다른 말초 효과를 갖는다. 뼈에 대한 연구는 심혈관계 및 유체 항상성을 넘어서는 역할을 뒷받침하였고, ADM이 태아 및 성체 설치류 골모세포에 작용함으로써 공지의 골모세포 성장 인자, 예를 들어 형질전환 성장 인자-β와 유사하게 세포 성장을 증가시킨다는 것을 입증한다. 골다공증 연구에서의 주요 과제 중 하나가 골모세포 자극을 통해 골 질량을 증가시키는 요법을 개발하는 것이므로, 이는 임상적으로 중요하다. 폐에서, ADM은 폐 혈관확장을 일으킬 뿐만이 아니라 히스타민 또는 아세틸콜린에 의해 유도된 기관지수축을 또한 억제한다. 래트 모델에서 폐 고혈압을 치료하기 위해 에어로졸화된 ADM을 사용하는 최근의 연구는, 평균 폐 동맥압 및 총 폐 내성이 염수를 투여한 래트보다 ADM을 처치한 래트에서 현저하게 더 낮다는 사실로 입증되는 바와 같이 상기 질환의 흡입 치료가 효과적임을 나타낸다. 이 결과는 전신 동맥압 또는 심박수의 변동 없이 달성되었다 [Nagaya N et al., Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2003; 285:H2125-31]. ADM also has other peripheral effects in the bones and lungs. Studies on bone have supported the role of overcoming cardiovascular and fluid homeostasis and have shown that ADM acts on fetal and adult rodent osteoblasts to induce cell growth similar to known osteoblast growth factors, . This is clinically important because one of the major challenges in osteoporosis research is to develop therapies that increase bone mass through osteoblast stimulation. In the lung, ADM not only causes pulmonary vasodilation but also suppresses bronchoconstriction induced by histamine or acetylcholine. Recent studies using aerosolized ADMs to treat pulmonary hypertension in rat models have shown that mean pulmonary artery pressure and total pulmonary resistance are significantly lower in rats treated with ADM than in saline-administered rats Lt; RTI ID = 0.0 > inhaled < / RTI > This result was achieved without changes in systemic arterial pressure or heart rate [Nagaya N et al., Am J Physiol Heart Circ Physiol. 2003; 285: H2125-31].

건강한 지원자에서, ADM의 i.v. 주입은 동맥압을 감소시키고 심박수, 심박출량, 및 cAMP, 프롤락틴, 노르에피네프린 및 레닌의 혈장 수준을 자극하는 것으로 나타났다. 이들 환자에서는 뇨 부피 또는 나트륨 배출의 증가는 거의 또는 전혀 관찰되지 않았다. 심부전 또는 만성 신부전 환자에서, i.v. ADM은 정상 대상체에서 보이는 것과 유사한 효과를 가졌고, 또한 투여된 투여량에 따라 이뇨 및 나트륨배설증가를 유도하였다 [Nicholls, MG et al. Peptides. 2001; 22:1745-1752]. 실험적 ADM 처치는 동맥 및 폐 고혈압, 패혈성 쇼크 및 허혈/재관류 손상에도 유익한 것으로 나타났다 [Beltowski J., Pol J Pharmacol. 2004; 56:5-27]. ADM 치료에 대한 다른 예로는 말초 혈관 질환, 거미막하 출혈, 고혈압, 임신 및 조기 분만의 자간전 중독증 및 골다공증 등이 있다. In a healthy volunteer, i.v. Infusion was shown to reduce arterial pressure and stimulate plasma levels of heart rate, cardiac output, and cAMP, prolactin, norepinephrine, and renin. There was little or no increase in urine volume or sodium excretion in these patients. In patients with heart failure or chronic renal failure, i.v. ADM had similar effects to those seen in normal subjects and also induced increased diuresis and sodium excretion depending on the dose administered [Nicholls, MG et al. Peptides. 2001; 22: 1745-1752]. Experimental ADM treatment has also been shown to be beneficial in arterial and pulmonary hypertension, septic shock, and ischemia / reperfusion injury [Beltowski J., Pol J Pharmacol. 2004; 56: 5-27]. Other examples of ADM treatment include peripheral vascular disease, subarachnoid hemorrhage, hypertension, pre-eclampsia of pregnancy and premature birth, and osteoporosis.

AFP-6 (즉, 인터메딘)의 발현은 주로 뇌하수체 및 위장관에서 일어난다. AFP-6에 대한 특이적 수용체는 보고된 바 없지만, 결합 연구는 AFP-6이 아밀린 패밀리의 공지된 수용체 모두에 결합하는 것을 나타낸다. AFP-6은 내인성 CGRP 수용체를 발현하는 SK-N-MC 및 L6 세포에서 cAMP 생성을 증가시키고, 이들 세포에서 그의 수용체와의 결합에 대하여 표지된 CGRP와 경쟁하는 것으로 나타났다. 간행된 생체내 연구에서, AFP-6 투여는 정상 및 자발적 고혈압 래트 모두에서 혈압 감소를 일으켰고, 이는 CRLR/RAMP 수용체와의 상호작용에 의한 것임이 가장 유력하다. 마우스에서의 생체내 투여는 위 공복 및 음식물 섭취의 억제를 일으킨다 [Roh et al. J Biol Chem. 2004 Feb 20; 279(8):7264-74]. Expression of AFP-6 (ie, intermedin) occurs primarily in the pituitary gland and gastrointestinal tract. No specific receptor for AFP-6 has been reported, but binding studies indicate that AFP-6 binds to all known receptors of the amylin family. AFP-6 has been shown to increase cAMP production in SK-N-MC and L6 cells expressing the endogenous CGRP receptor and to compete with the labeled CGRP for binding to its receptor in these cells. In published in vivo studies, AFP-6 administration caused a reduction in blood pressure in both normal and spontaneously hypertensive rats, the most likely being due to interactions with CRLR / RAMP receptors. In vivo administration in mice results in inhibition of gastric emptying and food intake [Roh et al. J Biol Chem. 2004 Feb 20; 279 (8): 7264-74).

아밀린 패밀리 펩티드 호르몬의 생물학적 작용은 일반적으로 2개의 밀접하게 관련된 제II형 G 단백질-커플링 수용체 (GPCR)인 칼시토닌 수용체 (CTR) 및 칼시토닌 수용체 유사 수용체 (CRLR)에 대한 결합을 통해 매개되는 것으로 보고된 바 있다. 클로닝 및 기능 연구는 CGRP, ADM 및 아밀린이 CTR 또는 CRLR 및 수용체 활성 변형 단백질 (RAMP)의 여러 조합물과 상호작용함을 보여주었다. 많은 세포가 다수의 RAMP를 발현한다. RAMP와 CTR 또는 CRLR의 동시발현은 칼시토닌, CGRP, ADM 및 아밀린에 대한 기능적 수용체의 생성에 필요하다고 여겨진다. RAMP 패밀리는 30％ 미만의 서열 동일성을 갖지만 공통적인 위상 기관을 갖는 3종의 구성원 (RAMP1, -2 및 -3)을 포함한다. CRLR과 RAMP1의 동시발현은 CGRP에 대한 수용체를 형성시킨다. CRLR과 RAMP2의 동시발현은 ADM에 대한 수용체를 형성시킨다. CRLR과 RAMP3의 동시발현은 ADM 및 CGRP에 대한 수용체를 형성시킨다. hCTR2와 RAMP1의 동시발현은 아밀린 및 CGRP에 대한 수용체를 형성시킨다. hCTR2와 RAMP3의 동시발현은 아밀린에 대한 수용체를 형성시킨다.The biological action of amylin family peptide hormones is generally mediated through the binding to two closely related type II G protein-coupled receptors (GPCRs), the calcitonin receptor (CTR) and the calcitonin receptor-like receptor (CRLR) It has been reported. Cloning and functional studies have shown that CGRP, ADM, and amylin interact with several combinations of CTR or CRLR and receptor active variant proteins (RAMP). Many cells express multiple RAMPs. Simultaneous expression of RAMP and CTR or CRLR is considered necessary for the production of functional receptors for calcitonin, CGRP, ADM and amylin. The RAMP family includes three members (RAMP1, -2 and -3) with less than 30% sequence identity, but with a common topological organ. Simultaneous expression of CRLR and RAMP1 forms a receptor for CGRP. Simultaneous expression of CRLR and RAMP2 forms a receptor for ADM. Simultaneous expression of CRLR and RAMP3 forms receptors for ADM and CGRP. Co-expression of hCTR2 and RAMP1 form receptors for amylin and CGRP. Co-expression of hCTR2 and RAMP3 forms a receptor for amylin.

대사 질환 및 장애와 관련이 있는 또다른 펩티드 호르몬 패밀리는 렙틴 패밀리이다. 순환 렙틴의 성숙 형태는 혈관-뇌 장벽 (BBB) 및 혈액-CSF 장벽에 의해 CNS와는 정상적으로 차단되는 146개 아미노산 단백질이다. 예를 들어 문헌 [Weigle et al., 1995. J Clin Invest 96:2065-2070]을 참조한다. 렙틴은 음식물 섭취 및 체중을 조절하는 음성 피드백 루프에서의 구심성 신호이다. 렙틴 수용체는 시토킨 수용체 패밀리의 구성원이다. 렙틴의 식욕 억제 효과는, 단백질-단백질 상호작용을 위한 복수개의 모티프를 포함하는 긴 세포질내 도메인을 코딩하는 상기 수용체의 Ob-Rb 이소형(isoform)의 동종이량체에 대한 결합에 따라 달라진다. Ob- Rb는 시상하부에서 고도로 발현되는데, 이것은 상기 뇌 영역이 렙틴 작용의 중요 부위임을 시사한다. 마우스 ob 유전자의 돌연변이는 비만, 체지방 침적 증가, 과혈당증, 과인슐린혈증, 저체온증, 및 수컷 및 암컷 동종접합 ob/ob 비만 마우스에서 갑상선 및 생식 기능의 손상을 포함하는 병태생리를 보이는 증후군을 야기한다고 입증되었다 (예를 들어 문헌 [Ingalis, et al., 1950. J Hered 41:317-318] 참조). 렙틴 또는 렙틴 수용체의 치료 용도는 (i) 당뇨병 (예를 들어 PCT 출원 공개 WO 98/55139, 동 WO 98/12224 및 동 WO 97/02004), (ii) 조혈 (예를 들어 PCT 출원 공개 WO 97/27286 및 동 WO 98/18486), (iii) 불임 (예를 들어 PCT 출원 공개 WO 97/15322 및 동 WO 98/36763), 및 (iv) 종양 저해 (예를 들어 PCT 출원 공개 WO 98/48831)를 포함한다 (이들 문헌 각각은 그 전문이 본원에 참고로 포함됨). Another family of peptide hormones related to metabolic diseases and disorders is the leptin family. The mature form of circulating leptin is a 146 amino acid protein normally blocked by the blood-brain barrier (BBB) and the blood-CSF barrier. See, e.g., Weigle et al., 1995. J Clin Invest 96: 2065-2070. Leptin is an afferent signal in the negative feedback loop that regulates food intake and body weight. The leptin receptor is a member of the cytokine receptor family. The appetite-suppressing effect of leptin depends on the binding of the receptor to the homo-dimer of the Ob-Rb isoforms encoding long intracytoplasmic domains containing multiple motifs for protein-protein interactions. Ob-Rb is highly expressed in the hypothalamus, suggesting that the brain region is a critical region of leptin action. Mutations in the mouse ob gene have been shown to cause a pathophysiologic syndrome including obesity, increased body fat deposition, hyperglycemia, hyperinsulinemia, hypothermia, and impaired thyroid and reproductive function in male and female allograft ob / ob obese mice (See, for example, Ingalis, et al., 1950. J Hered 41: 317-318). Therapeutic uses of leptin or leptin receptors include, but are not limited to: (i) diabetes (e. G., PCT Application Publication Nos. WO 98/55139, WO 98/12224 and WO 97/02004); (ii) hematopoiesis (Iii) infertility (e. G. PCT Application Publication Nos. WO 97/15322 and WO 98/36763), and (iv) tumor inhibition (e. G., PCT Application Publication No. WO 98/48831 ), Each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

렙틴 수용체 (OB-R) 유전자가 클로닝되었고 (진뱅크(GenBank) 관리 번호 AF098792), db 유전자좌에 맵핑되었다 (예를 들어 문헌 [Tartaglia, et al., 1995. Cell 83:1263-1271] 참조). 또한, 선택적 스플라이싱(alternative splicing)으로 인한 OB-R의 복수개 전사체가 확인되었다. OB-R에서의 결함은 표현형이 ob/ob 마우스와 동일한 돌연변이 당뇨병 ob/ob 마우스에서 증후군을 생성시킨다 (예를 들어 문헌 [Ghilardi, et al., 1996. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:6231-6235] 참조). 그러나, ob/ob 마우스와는 달리, 재조합 렙틴을 C57BLKS/J-m ob/ob 마우스에게 투여해도 음식물 섭취 및 체중 감소를 야기하지 않는다 (예를 들어 문헌 [Roberts and Greengerg, 1996. Nutrition Rev. 54:41-49] 참조).The leptin receptor (OB-R) gene was cloned (GenBank control number AF098792) and mapped to the db locus (see, for example, Tartaglia, et al., 1995. Cell 83: 1263-1271) . In addition, multiple transcripts of OB-R due to alternative splicing were identified. Defects in OB-R cause the syndrome in the same mutant diabetic ob / ob mice as the phenotype of ob / ob mice (see, for example, Ghilardi, et al., 1996. Proc. Natl. Acad. : 6231-6235). However, unlike ob / ob mice, administration of recombinant leptin to C57BLKS / Jm ob / ob mice does not result in food intake and weight loss (see, for example, Roberts and Greengerg, 1996. Nutrition Rev. 54: 49]).

재조합 렙틴, 렙틴 단편 및/또는 렙틴 수용체 변이체의 투여로 인한 체중 감 소 활성을 보고할 수 있는 대부분의 렙틴 관련 연구에서는 상기 구축물을 뇌실 내로 직접 투여하였다. 예를 들어 문헌 ([Weigle, et al., 1995. J Clin Invest 96:2065-2070], [Barash, et al., 1996. Endocrinology 137:3144-3147])을 참조한다. Most of the leptin-related studies that could report weight loss activity due to the administration of recombinant leptin, leptin fragment and / or leptin receptor variants directly administered the construct into the ventricle. See, for example, Weigle, et al., 1995. J Clin Invest 96: 2065-2070, [Barash, et al., 1996. Endocrinology 137: 3144-3147].

다른 연구에서는 시험 대상체에게 복강내 (i.p.) 투여한 렙틴 펩티드로 인해 유의한 체중 감소 활성이 나타났다. 문헌 [Grasso et al., 1997. Endocrinology 138:1413-1418]을 참조한다. 추가로, 렙틴 단편, 및 가장 특별하게는 전장 인간 렙틴으로부터 취한 잔기를 포함하는 18개 아미노산의 단편이 래트의 측뇌실에 이식된 캐뉼라를 통한 직접 투여시에만 체중 감소 기능을 하는 것으로 보고되었다. 예를 들어 PCT 특허 출원 WO 97/46585를 참조하고, 상기 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다. In other studies, leptin peptides administered intraperitoneally (i.p.) to the test subjects showed significant weight loss activity. See Grasso et al., 1997. Endocrinology 138: 1413-1418. In addition, it has been reported that fragments of 18 amino acids, including leptin fragments, and most particularly residues taken from full-length human leptin, exert weight-reducing functions only upon direct administration via cannula implanted into the lateral ventricle of rats. See, for example, PCT patent application WO 97/46585, which is incorporated herein by reference in its entirety.

대사 질환 및 장애와 관련이 있는 또다른 펩티드 호르몬은 콜레시스토키닌 (CCK)이다. CCK는 1928년에 담낭 수축 자극력으로 인해 장관 추출물 제제로부터 동정된 것으로 보고되었다. 이후에는 췌장 분비의 자극, 위 공복의 지연, 장관 운동의 자극 및 인슐린 분비의 자극을 비롯한 CCK의 다른 생물학적 작용이 보고되었다. 문헌 [Lieverse et al., Ann. N. Y. Acad. Sci. 713:268-272 (1994)]을 참조한다. CCK의 작용은 또한 심혈관 기능, 호흡 기능, 신경독성 및 발작, 암 세포 증식, 무통, 수면, 성 및 생식 거동, 기억, 불안 및 도파민 매개 거동에 대한 효과를 포함하는 것으로 보고되었다 [Crawley and Corwin, Peptides 15:731-755 (1994)]. CCK의 다른 보고된 효과는 췌장 성장의 자극, 담낭 수축의 자극, 위산 분비의 억 제, 췌장 폴리펩티드 방출, 및 연동운동의 수축 성분을 포함한다. CCK의 추가의 보고된 효과는 혈관확장을 포함한다 [Walsh, "Gastrointestinal Hormones," In Physiology of the Gastrointestinal Tract 3d ed. 1994; Raven Press, New York]. Another peptide hormone that is involved in metabolic diseases and disorders is cholestystokinin (CCK). CCK was reported to have been identified from the intestinal extract formulation in 1928 due to gallbladder contraction stimulation. Thereafter, other biological actions of CCK, including stimulation of pancreatic secretion, delayed gastric emptying, stimulation of intestinal motility and stimulation of insulin secretion, have been reported. See Lieverse et al., Ann. N. Y. Acad. Sci. 713: 268-272 (1994). The effects of CCK have also been reported to include effects on cardiovascular function, respiratory function, neurotoxicity and seizure, cancer cell proliferation, pain, sleep, sexual and reproductive behavior, memory, anxiety and dopamine mediated behavior [Crawley and Corwin, Peptides 15: 731-755 (1994)]. Other reported effects of CCK include irritation of pancreas growth, stimulation of gallbladder contraction, inhibition of gastric acid secretion, pancreatic polypeptide release, and contraction components of peristaltic movement. Additional reported effects of CCK include vasodilation [Walsh, "Gastrointestinal Hormones," In Physiology of the Gastrointestinal Tract 3d ed. 1994; Raven Press, New York].

글루카곤, CCK 및 봄베신의 조합물을 주사하면 개개의 화합물 사용시에 관찰된 억제에 비해 비-박탈(non-deprived) 래트에서 연유 시험식의 섭취 억제를 강화시키는 것으로 보고되었다 [Hinton et al., Brain Res. Bull. 17:615-619 (1986)]. 또한, 글루카곤 및 CCK가 래트에서 모의 먹이 섭취(sham feeding)를 상승적으로 억제하는 것도 보고되었다 ([LeSauter and Geary, Am. J. Physio. 253:R217-225 (1987)], [Smith and Gibbs, Annals N.Y. Acad. Sci. 713:236-241 (1994)]). 또한, 에스트라디올 및 CCK가 포만감에 대한 상승 효과를 가질 수 있음이 시사되었다 ([Dulawa et al., Peptides 15:913-918 (1994)], [Smith and Gibbs, 상기 문헌]). 또한, 소장내 영양분에 반응하여 소장에서 발생되는 신호가 CCK와 상승적으로 상호작용하여 음식물 섭취를 감소시킬 수 있음도 제안되었다 [Cox, Behav. Brain Res. 38:35-44 (1990)]. 추가로, CCK는 여러 종에서 포만감을 유도하는 것으로 보고되었다. 예를 들어, 래트에서 복강내, 돼지에서 동맥내, 고양이 및 돼지에서 정맥내, 원숭이, 래트, 개 및 양에서 뇌실내, 및 비만 및 비-비만 인간에서 정맥내 주사된 CCK에 의해 먹이 섭취 억제가 유발되었음이 보고되었다. 문헌 [Lieverse et al., 상기 문헌]을 참조한다. 여러 연구소에서 보고된 연구는 원숭이와 래트 둘다에서 음식에 대한 반응을 비-음식 강화물에 대한 반응과 비교하고 CCK가 음식물 섭취 후에 통상적으로 관찰되는 거동의 순서 (즉, 식후 포만 순서)를 유발한다는 것 을 보여줌으로써, 먹이 섭취 억제에 대한 저투여량의 CCK의 거동 특이성을 확인한 것으로 보고하였다. 추가로, CCK 후의 거동을 음식물 섭취 자체 또는 CCK와 조합한 후의 거동과 비교하여 CCK와 음식물 섭취 사이의 거동 유사성이 밝혀졌다는 것도 보고하였다 [Crawley and Corwin, 상기 문헌]. 생리적인 혈장 농도의 CCK가 마른 인간과 비만인 인간 모두에서 음식물 섭취를 억제하고 포만감을 증가시킨다는 것도 보고되었다. 문헌 [Lieverse et al., 상기 문헌]을 참조한다.Injection of a combination of glucagon, CCK and bombesin has been reported to enhance the suppression of consumption of the concordant test formula in non-deprived rats compared to the inhibition observed when using individual compounds [Hinton et al., Brain Res. Bull. 17: 615-619 (1986)). It has also been reported that glucagon and CCK synergistically inhibit sham feeding in rats (LeSauter and Geary, Am. J. Physio. 253: R217-225 (1987), Smith and Gibbs, Annals NY Acad. Sci. 713: 236-241 (1994)). It has also been suggested that estradiol and CCK may have a synergistic effect on satiety (Dulawa et al., Peptides 15: 913-918 (1994), Smith and Gibbs, supra). It has also been proposed that signals in the small intestine in response to nutrients in the small intestine can synergistically interact with CCK to reduce food intake (Cox, Behav. Brain Res. 38: 35-44 (1990). In addition, CCK has been reported to induce satiety in several species. For example, inhibition of food intake by intravenously injected CCK in intraperitoneal, intravesical, intramuscular, cat and pig intravenous, monkey, rat, dog and sheep in the brain, and in obese and non- Was reported to have been induced. See Lieverse et al., Supra. Studies reported in several laboratories compare the response to food to the response to non-food fortifications in both monkeys and rats and suggest that CCK induces a sequence of behaviors commonly observed after ingestion of food (ie, postharvest sequence) , It was reported that the specificity of CCK at low doses for the inhibition of food intake was confirmed. In addition, it has been reported that the behavior after CCK is similar to the behavior after combining CCK with food intake itself or with CCK [Crawley and Corwin, supra]. It has also been reported that physiological plasma concentrations of CCK inhibit food ingestion and increase satiety in both dry and obese individuals. See Lieverse et al., Supra.

CCK는 1966년에 33개 아미노산 펩티드로서 특징 규명되었다 [Crawley and Corwin, 상기 문헌]. CCK의 아미노산 서열의 종-특이적 분자 변이체가 확인되었다. 33개 아미노산 서열 및 말단절단된 펩티드, 그의 8개 아미노산 C-말단 서열 (CCK-8)은 돼지, 래트, 닭, 친칠라, 개 및 인간에서 확인된 것으로 보고되었다. 39개 아미노산 서열은 돼지, 개 및 기니아 피그에서 발견된 것으로 보고되었다. 58개 아미노산 서열은 고양이, 개 및 인간에서 발견된 것으로 보고되었다. 개구리 및 거북이는 CCK 및 가스트린 둘다에 상동성인 47개 아미노산 서열을 보이는 것으로 보고되었다. 매우 신선한 인간 창자는 CCK-83이라고 불리는 훨씬 더 큰 분자를 소량 함유하는 것으로 보고되었다. 래트에서, 주요 중간체 형태가 확인된 것으로 보고되었고, CCK-22라고 불린다 [Walsh, "Gastrointestinal Hormones," In Physiology of the Gastrointestinal Tract (3d ed. 1994; Raven Press, New York]. 비-황산화 CCK-8 및 테트라펩티드 (CCK-4 (CCK(30-33)라고 불림)가 래트 뇌에서 보고되었다. C-말단 펜타펩티드 (CCK-4 (CCK(29-33)라고 불림)는 CCK의 구조적 상동성, 및 또한 신경펩티드, 가스트린과의 상동성을 보존한다. C-말단 황산 화 옥타펩티드 서열인 CCK-8은 전체 종에서 비교적 보존된다고 보고되었다. 래트 갑상선 암종, 돼지 뇌, 및 돼지 장관으로부터 프리프로(prepro)콜레시스토키닌을 코딩하는 cDNA의 클로닝 및 서열 분석으로, 단리된 것으로 앞서 보고된 모든 CCK 서열을 함유하는 115개 아미노산의 CCK 전구체를 코딩하는 345개 뉴클레오티드가 밝혀졌다고 보고되었다 [Crawley and Corwin, 이들 문헌은]. CCK was characterized in 1966 as 33 amino acid peptides [Crawley and Corwin, supra]. Species-specific molecular variants of the amino acid sequence of CCK have been identified. It has been reported that 33 amino acid sequences and terminally truncated peptides, the 8 amino acid C-terminal sequence (CCK-8), have been identified in pigs, rats, chickens, chinchillas, dogs and humans. 39 amino acid sequences have been reported to be found in pigs, dogs and guinea pigs. The 58 amino acid sequences have been reported to be found in cats, dogs, and humans. The frogs and tortoises were reported to have 47 amino acid sequences homologous to both CCK and gastrin. The very fresh human intestines have been reported to contain small amounts of much larger molecules called CCK-83. In rats, a major intermediate form has been identified and reported as CCK-22 [Walsh, "Gastrointestinal Hormones," In Physiology of the Gastrointestinal Tract (3d ed. -8 and tetrapeptides (CCK-4 (referred to as CCK (30-33)) were reported in rat brain. The C-terminal pentapeptide (CCK-4 CCK-8, a C-terminal sulfated octapeptide sequence, has been reported to be relatively conserved across all species. It has been reported that phycoerythrin, Cloning and sequencing of cDNA encoding preprocholestikinin has been reported to reveal 345 nucleotides encoding the CCK precursor of 115 amino acids containing all the CCK sequences reported above as isolated [Crawley and Corwin, These doors It is.

CCK는 1966년에 33개 아미노산 펩티드로서 특징 규명되었다 [Crawley and Corwin, 상기 문헌]. CCK의 아미노산 서열의 종-특이적 분자 변이체가 확인되었다. 33개 아미노산 서열 및 말단절단된 펩티드, 그의 8개 아미노산 C-말단 서열 (CCK-8)은 돼지, 래트, 닭, 친칠라, 개 및 인간에서 확인된 것으로 보고되었다. 39개 아미노산 서열은 돼지, 개 및 기니아 피그에서 발견된 것으로 보고되었다. 58개 아미노산 서열은 고양이, 개 및 인간에서 발견된 것으로 보고되었다. 개구리 및 거북이는 CCK 및 가스트린 둘다에 상동성인 47개 아미노산 서열을 보이는 것으로 보고되었다. 매우 신선한 인간 창자는 CCK-83이라고 불리는 훨씬 더 큰 분자를 소량 함유하는 것으로 보고되었다. 래트에서, 주요 중간체 형태가 확인된 것으로 보고되었고, CCK-22라고 불린다 [Walsh, "Gastrointestinal Hormones," In Physiology of the Gastrointestinal Tract (3d ed. 1994; Raven Press, New York]. 비-황산화 CCK-8 및 테트라펩티드 (CCK-4 (CCK(30-33)라고 불림, 서열 208)가 래트 뇌에서 보고되었다. C-말단 펜타펩티드 (CCK-4 (CCK(29-33)라고 불림, 서열 209)는 CCK의 구조적 상동성, 및 또한 신경펩티드, 가스트린과의 상동성을 보존한다. C-말단 황산화 옥타펩티드 서열인 CCK-8은 전체 종에서 비교적 보존 된다고 보고되었다. 래트 갑상선 암종, 돼지 뇌, 및 돼지 장관으로부터 프리프로콜레시스토키닌을 코딩하는 cDNA의 클로닝 및 서열 분석으로, 단리된 것으로 앞서 보고된 모든 CCK 서열을 함유하는 115개 아미노산의 CCK 전구체를 코딩하는 345개 뉴클레오티드가 밝혀졌다고 보고되었다 [Crawley and Corwin, 상기 문헌]. CCK was characterized in 1966 as 33 amino acid peptides [Crawley and Corwin, supra]. Species-specific molecular variants of the amino acid sequence of CCK have been identified. It has been reported that 33 amino acid sequences and terminally truncated peptides, the 8 amino acid C-terminal sequence (CCK-8), have been identified in pigs, rats, chickens, chinchillas, dogs and humans. 39 amino acid sequences have been reported to be found in pigs, dogs and guinea pigs. The 58 amino acid sequences have been reported to be found in cats, dogs, and humans. The frogs and tortoises were reported to have 47 amino acid sequences homologous to both CCK and gastrin. The very fresh human intestines have been reported to contain small amounts of much larger molecules called CCK-83. In rats, a major intermediate form has been identified and reported as CCK-22 [Walsh, "Gastrointestinal Hormones," In Physiology of the Gastrointestinal Tract (3d ed. -8 and a tetrapeptide (CCK-4 (CCK (30-33), SEQ ID NO: 208) was reported in rat brain. C-terminal pentapeptide CCK- ) Preserve the structural homology of CCK, and also the homology with neuropeptides, gastrin. CCK-8, a C-terminal sulfated octapeptide sequence, has been reported to be relatively conserved across all species. , And 345 nucleotides encoding a CCK precursor of 115 amino acids containing all the CCK sequences previously reported to be isolated by cloning and sequencing cDNA encoding preprocheicystokinin from porcine gut [Crawley and Cor win, cited above].

CCK는 중추 신경계 전체 및 내분비 세포 및 상부 소장의 내장 신경에 분포한다. CCK 효능제는 CCK 자체 (또한 CCK-33이라고도 지칭됨), CCK-8 (CCK(26-33), 서열 55), 비-황산화 CCK-8, 펜타가스트린 (CCK-5 또는 CCK(29-33), 서열 209) 및 테트라펩티드, CCK-4 (CCK(30-33), 서열 208)을 포함한다. 췌장 CCK 수용체에서, CCK-8은 비-황산화 CCK-8 또는 CCK-4보다 1000배 내지 5000배 더 큰 효력으로 결합을 대체하는 것으로 보고되었고, CCK-8은 췌장 아밀라제 분비를 자극하는데 있어서 비-황산화 CCK-8 또는 CCK-4보다 대략 1000배 더 강력한 것으로 보고되었다 [Crawley and Corwin, 상기 문헌]. 대뇌 피질의 균질액에서, CCK 수용체 결합은 황산화 CCK-8과 등몰이거나 10배 또는 100배 더 높은 농도에서 비-황산화 CCK-8 및 CCK-4에 의해 대체되었다 (상기 문헌). CCK is distributed throughout the central nervous system and endocrine cells and in the visceral nerves of the upper small intestine. The CCK agonists include CCK itself (also called CCK-33), CCK-8 (CCK (26-33), SEQ ID NO: 55), non-sulfated CCK-8, penta- 33), SEQ ID NO: 209) and tetrapeptides, CCK-4 (CCK (30-33), SEQ ID NO: 208). In the pancreatic CCK receptor, CCK-8 has been reported to replace binding with effects 1000- to 5000-fold greater than non-sulfated CCK-8 or CCK-4, and CCK- -Sulfated < / RTI > CCK-8 or CCK-4 [Crawley and Corwin, supra]. In the cerebral cortex homogenate, CCK receptor binding was replaced by non-sulfated CCK-8 and CCK-4 at equimolar or 10-fold or 100-fold higher concentrations than sulfated CCK-8 (supra).

대사 질환 및 장애와 관련이 있는 또다른 패밀리의 펩티드 호르몬은 췌장 폴리펩티드 패밀리 ("PPF")이다. 췌장 폴리펩티드 ("PP")는 인슐린 추출물의 오염물질로서 발견되었고 기능적 중요성이 아니라 기원 기관의 명칭을 따라 명명되었다 [Kimmel et al., Endocrinology 83:1323-30(1968)]. PP는 독특한 구조적 모티프를 함유하는 36개 아미노산 펩티드이다. 이후에는 관련 펩티드가 장관 추출물에서 발견되었고, N-말단 및 C-말단 티로신 때문에 펩티드 YY ("PYY")로 명명되었다 [Tatemoto, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79:2514-8 (1982)]. 더 이후에는 제3의 관련 펩티드가 뇌 추출물에서 발견되었고 신경펩티드 Y ("NPY")라고 명명되었다 ([Tatemoto, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79:5485-9 (1982)], [Tatemoto et al., Nature 296:659-60 (1982)]). Another family of peptide hormones that are involved in metabolic diseases and disorders is the pancreatic polypeptide family ("PPF"). The pancreatic polypeptide ("PP") has been identified as a contaminant of insulin extract and has been named according to the name of the origin organs, not the functional significance [Kimmel et al., Endocrinology 83: 1323-30 (1968)]. PP is a 36 amino acid peptide containing a unique structural motif. Subsequently the relevant peptides were found in the intestinal extract and were named Peptide YY ("PYY") due to N-terminal and C-terminal tyrosine [Tatemoto, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79: 2514-8 (1982)). A third related peptide was later found in brain extracts and was named neuropeptide Y ("NPY ") (Tatemoto, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79: 5485-9 (1982) et al., Nature 296: 659-60 (1982)).

이러한 3종의 관련 펩티드는 다양한 생물학적 효과를 발휘하는 것으로 보고되었다. PP의 효과는 췌장 분비의 억제 및 담낭의 이완을 포함한다. 중추 투여된 PP는 먹이 섭취에서 중간 정도의 증가를 일으키는데, 이는 시상하부 및 뇌간에 국소화된 수용체에 의해 매개될 수 있다 (문헌 [Gehlert, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 218:7-22 (1998)]에 검토되어 있음).These three related peptides have been reported to exert various biological effects. The effects of PP include inhibition of pancreatic secretion and gallbladder relaxation. Central-administered PP causes a modest increase in food intake, which may be mediated by localized receptors in the hypothalamus and brainstem (Gehlert, Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 218: 7-22 (1998)]).

PYY의 방출은 식후 일어난다. PYY의 별도의 분자형은 PYY(3-36) (서열 58)이다 ([Eberlein et al., Peptides 10:797-803 (1989)], [Grandt et al., Regul. Pept. 51:151-9 (1994)]). 상기 단편은 인간 및 개 장관 추출물에서 총 PYY-유사 면역반응성의 약 40％를 구성하고, 총 혈장 PYY 면역반응성은 공복 상태에서는 약 36％ 내지 식후에는 50％를 넘게 구성한다. 이는 명백하게 PYY의 디펩티딜 펩티다제-IV (DPP4) 절단 생성물이다. PYY(3-36) (서열 58)은 Y2 및 Y5 수용체에서 선택적인 리간드인 것으로 보고되었고, 이는 N-말단 말단절단형 NPY 유사체 (즉, 그의 C-말단 단편)를 제공하는데 있어서 약리적으로 독특하다고 여겨진다. PYY의 말초 투여는 위산 분비, 위 운동, 외분비 췌장 분비 ([Yoshinaga et al., Am. J. Physio. 263:G695-701 (1992)], [Guan et al., Endocrinology 128:911-6 (1991)], [Pappas et al., Gastroenterology 91:1386-9 (1986)]), 담낭 수축 및 장관 운동 [Savage et al., Gut 28:166-70 (1987)]을 감소시키는 것으로 보고되었다. 후뇌/뇌간 또는 그 주변에 직접 주사 후 관찰되는 바와 같은 위 공복, 위 운동 및 위산 분비에 대한 PYY의 중추 주사의 효과 ([Chen and Rogers, Am. J. Physiol. 269:R787-92 (1995)], [Chen et al., Regul. Pept. 61:95-98 (1996)], [Yang and Tache, Am. J. Physiol. 268:G943-8 (1995)], [Chen et al., Neurogastroenterol. Motil. 9:109-16 (1997)])는, 말초 주사 후 관찰된 효과와는 상이할 수 있다. 예를 들어, 중추 투여된 PYY는 위산 분비가 억제되지 않고 자극된다는 점에서 말초 주사된 PYY(3-36) (서열 58)에 대해 본원에 기재한 것과는 상반되는 몇가지 효과를 갖고 있다. 위 운동은 TRH 자극과 함께인 경우에만 억제되었고 단독으로 투여될 때는 그렇지 않았으며, 더 높은 투여량에서 실제로 자극성이었는데, 이는 PP 수용체와의 상호작용을 통해서일 것이라고 추정된다. PYY는 중추 투여 후 음식 및 물 섭취를 자극하는 것으로 나타났다 ([Morley et al., Brain Res. 341:200-3(1985)], [Corpet al., Am. J. Physiol. 259:R317-23 (1990)]).Release of PYY occurs postprandial. A separate molecular form of PYY is PYY (3-36) (SEQ ID NO: 58) (Eberlein et al., Peptides 10: 797-803 (1989), Grandt et al., Regul. 9 (1994)). The fragments constitute about 40% of total PYY-like immunoreactivity in human and canine extracts, and total plasma PYY immunoreactivity constitutes from about 36% in fasting state to more than 50% in post-prandial state. It is apparently a dipeptidyl peptidase-IV (DPP4) cleavage product of PYY. PYY (3-36) (SEQ ID NO: 58) has been reported to be a ligand selective at the Y2 and Y5 receptors and is pharmacologically unique in providing N-terminally truncated NPY analogs (i.e., its C-terminal fragment) It is considered. Peripheral administration of PYY has been implicated in the pathogenesis of gastric acid secretion, gastric motility, exocrine pancreatic secretion (Yoshinaga et al., Am. J. Physio. 263: G695-701 (1992), Guan et al., Endocrinology 128: 911-6 1991), Pappas et al., Gastroenterology 91: 1386-9 (1986)), gallbladder contraction and intestinal motility [Savage et al., Gut 28: 166-70 (1987)]. (Chen and Rogers, Am. J. Physiol. 269: R787-92 (1995)), the effect of PYY on central stomach, gastric motility and gastric acid secretion as observed after direct injection into the hindlimb / [Chen et al., Neurogastroenterol (1996)], [Yang and Tache, Am. J. Physiol. 268: G943-8 (1995)], Chen et al., Regul. Pept. 61: Motil. 9: 109-16 (1997)) may be different from the effects observed after peripheral injection. For example, centrally administered PYY has several effects that are contrary to those described herein for peripheral injected PYY (3-36) (SEQ ID NO: 58) in that stomach acid secretion is stimulated without being suppressed. Stomach exercise was inhibited only with TRH stimulation, not when administered alone, but actually stimulating at higher doses, presumably through interaction with PP receptors. PYY has been shown to stimulate food and water intake after central administration (Morley et al., Brain Res. 341: 200-3 (1985), Corpet al., Am. J. Physiol. 259: R317-23 (1990)).

대사 질환 및 장애는 비만, 당뇨병, 이상지혈증, 인슐린 내성, 세포의 세포자멸 등을 비롯한 많은 형태를 취한다. 비만 및 그의 관련 장애는 미국 및 전세계에서 공통적이고 매우 심각한 공중 보건 문제이다. 상체 비만은 제2형 진성 당뇨병에 대해 공지된 최대 위험 인자이고, 심혈관 질환에 있어서의 강한 위험 인자이다. 비만은 고혈압, 아테롬성 경화증, 울혈성 심부전, 졸중, 담낭 질환, 골관절염, 수면 무호흡, 생식 장애, 예를 들어 다낭성 난소 증후군, 유방암, 전립선암 및 결장암, 및 전신 마취의 합병증 발병 증가와 관련하여 인지되는 위험 인자이다 (예 를 들어 문헌 [Kopelman, Nature 404:635-43 (2000)] 참조). 이는 수명을 단축시키고, 상기한 것 및 또한 감염, 정맥류, 흑색극세포증, 습진, 운동 불내성, 인슐린 내성, 고혈압, 고콜레스테롤혈증, 담석증, 정형외과적 손상, 및 혈전색전성 질환과 같은 장애의 동반이환에 대한 심각한 위험을 수반한다 [Rissanen et al., Br. Med. J. 301:835-7 (1990)]. 비만은 또한 인슐린 내성 증후군 또는 "증후군 X"라고도 하는 상태 군에 대한 위험 인자이기도 하다. 비만 및 관련 장애의 의료 비용에 대한 최근의 추정치는 세계적으로 1500억불이다. 비만의 발병기전은 다인성이라고 여겨지지만, 기본적인 문제는 비만 대상체에서는 과도한 지방 조직이 존재하게 될 때까지 영양분 이용률 및 에너지 소모량이 균형을 이루지 않는다는 점이다. 비만은 현재로는 치료가 어렵고 만성적이며 본질적으로 난치성인 대사 장애이다. 비만인의 체중 감소에 유용한 치료 약물은 그들의 건강에 충분한 유익한 효과를 가질 수 있다. Metabolic diseases and disorders take many forms including obesity, diabetes, dyslipidemia, insulin resistance, cell apoptosis, and the like. Obesity and its associated disorders are a common and very serious public health problem in the United States and around the world. Body mass obesity is the highest known risk factor for type 2 diabetes mellitus and is a strong risk factor for cardiovascular disease. Obesity is recognized in association with increased incidence of complications of hypertension, atherosclerosis, congestive heart failure, stroke, gallbladder disease, osteoarthritis, sleep apnea, reproductive disorders such as polycystic ovary syndrome, breast cancer, prostate cancer and colon cancer, and general anesthesia Is a risk factor (see, for example, Kopelman, Nature 404: 635-43 (2000)). This shortens the life span and is associated with the above and also disorders such as infection, varicose veins, acanthosis, eczema, exercise intolerance, insulin resistance, hypertension, hypercholesterolemia, gallstone disease, orthopedic injury, and thromboembolic disease Which is accompanied by a serious risk to the disease [Rissanen et al., Br. Med. J. 301: 835-7 (1990)). Obesity is also a risk factor for a group of conditions known as insulin resistance syndrome or "syndrome X ". A recent estimate of health care costs for obesity and related disorders is $ 150 billion worldwide. Although the mechanism of obesity is thought to be multifactorial, the basic problem is that nutrient utilization and energy expenditure are not balanced until obesity subjects have excess fat tissue. Obesity is currently a metabolic disorder that is difficult to treat, chronic, and inherently intractable. Therapeutic drugs useful for obesity weight loss can have beneficial effects on their health.

당뇨병은 인슐린의 불충분한 생성 또는 이용으로 인한 과혈당 및 당뇨를 특징으로 하는 탄수화물 대사 장애이다. 당뇨병은 선진국 인구 집단의 큰 부분의 삶의 질에 심각한 영향을 미친다. 불충분한 인슐린 생성은 제1형 당뇨병의 특징이고, 불충분한 인슐린 이용은 제2형 당뇨병의 특징이다. 그러나, 현재는 확실히 당뇨병이 있다고 진단되기 오래 전에 발병하는 많은 다른 당뇨병-관련 질환이 존재한다는 것이 널리 인식되고 있다. 또한, 당뇨병에서 글루코스 대사의 차선적 제어로 인한 영향은 넓은 스펙트럼의 관련 지질 및 심혈관 장애를 일으킨다.Diabetes is a metabolic disorder of carbohydrate characterized by hyperglycemia and diabetes due to insufficient production or use of insulin. Diabetes seriously affects a large part of the quality of life in the population of developed countries. Insufficient insulin production is characteristic of type 1 diabetes, and insufficient insulin utilization is characteristic of type 2 diabetes. However, it is now widely recognized that there are many other diabetes-related diseases that occur long before definitively diagnosed as having diabetes. In addition, the effect of the secondary control of glucose metabolism in diabetes causes a wide spectrum of related lipid and cardiovascular disorders.

이상지혈증, 또는 혈장 내 비정상 수준의 지단백질은 당뇨병에서 빈번하게 발생한다. 이상지혈증은 전형적으로 혈액 중 상승된 혈장 트리글리세리드, 낮은 수준의 HDL (고밀도 지단백질) 콜레스테롤, 정상 내지 상승된 수준의 LDL (저밀도 지단백질) 콜레스테롤, 및 증가된 수준의 작고 치밀한 LDL (저밀도 지단백질) 입자를 특징으로 한다. 이상지혈증은 당뇨병 환자에서 관상 동맥 사건 및 사망의 발생을 증가시키는 주요 원인 중 하나이다. 역학 연구는 비-당뇨병 대상체와 비교할 때 당뇨병 환자에서 관상 동맥 사망이 수배 증가된다는 것을 보임으로써 이를 확인하였다. 몇몇 지단백질 이상은 당뇨병 대상체에서 알려진 바 있다.Dyslipidemia, or abnormal levels of plasma lipoprotein, occurs frequently in diabetes. Dyslipidemia typically exhibits elevated levels of plasma triglycerides, low levels of HDL (high density lipoprotein) cholesterol, normal to elevated levels of LDL (low density lipoprotein) cholesterol, and increased levels of small, dense LDL (low density lipoprotein) particles in blood . Dyslipidemia is one of the major causes of increased incidence of coronary events and death in diabetic patients. Epidemiologic studies have confirmed this by demonstrating that coronary artery deaths are increased severalfold in patients with diabetes compared to non-diabetic subjects. Some lipoprotein abnormalities are known in diabetic subjects.

인슐린 내성은 넓은 농도 범위에 걸쳐 생물학적 작용을 발휘하는 인슐린의 능력이 감소된 것이다. 인슐린 내성에서, 신체는 이러한 결함을 보완하기 위해 비정상적으로 많은 양의 인슐린을 분비하고, 손상된 글루코스 내성 상태가 발생된다. 결함이 있는 인슐린 작용을 보완하지 못하면, 혈장 글루코스 농도가 필연적으로 상승하여 당뇨병의 임상 상태를 일으킨다. 인슐린 내성 및 관련 과인슐린혈증이 비만, 고혈압, 아테롬성 경화증 및 제2형 당뇨병에 기여함이 인식되고 있다. 인슐린 내성과 비만, 고혈압 및 협심증의 연관성은 일반적인 발병 고리로서 인슐린 내성을 갖는 증후군인 증후군 X로서 설명되었다. Insulin resistance is a reduction in the ability of insulin to exert a biological action over a wide range of concentrations. In insulin resistance, the body secretes an abnormally large amount of insulin to compensate for these defects, resulting in an impaired glucose tolerance state. Failure to compensate for defective insulin action will inevitably lead to a rise in plasma glucose concentration and a clinical state of diabetes. It is recognized that insulin resistance and association and insulinemia contribute to obesity, hypertension, atherosclerosis and type 2 diabetes. The association of insulin resistance with obesity, hypertension, and angina pectoris has been described as syndrome X, which is a syndrome with insulin resistance as a common onset ring.

세포자멸은 정상적인 발생 동안 일어나는 외재적 신호 및 내재적 신호에 의해 조절되는, 세포 자가파괴의 능동적인 과정이다. 세포자멸은 췌장 내분비 베타 세포의 조절에 있어서 중요한 역할을 수행함이 잘 입증되어 있다. 성체 포유동물에서 베타 세포량은 특정 조건, 예를 들어 임신 및 비만시에 정상혈당이 유지되도록 인슐린을 생성하기 위해 크게 변화된다는 증거가 증가하고 있다. 베타 세포량 의 제어는 세포 증식, 성장 및 프로그램된 세포 사멸 (세포자멸) 사이의 미묘한 균형에 달려있다. 이러한 균형의 교란은 글루코스 항상성의 손상을 야기할 수 있다. 예를 들어, 글루코스 불내성은 베타 세포 복제 속도가 감소될 때 노화와 함께 발병하는 것이 주목할 만하고, 인간 부검 연구는 비-당뇨병 대상체에 비해 인슐린 비-의존성 진성 당뇨병 환자에서 베타 세포량이 40％ 내지 60％ 감소됨을 반복적으로 보여주었다. 인슐린 내성은 비만에 불변적으로 동반되지만, 제2형 당뇨병이 시작하는 시점인, 베타 세포가 인슐린에 대한 수요 증가를 충족시킬 수 없게 될 때까지는 보완적 과인슐린혈증에 의해 정상혈당이 유지된다는 것이 일반적으로 공통적인 의견이다.Apoptosis is an active process of cell self destruction, regulated by extrinsic signals and intrinsic signals that occur during normal development. It is well established that apoptosis plays an important role in the regulation of pancreatic endocrine beta cells. There is increasing evidence that beta cell mass in adult mammals is significantly altered to produce insulin to maintain normal blood glucose under certain conditions, such as pregnancy and obesity. Control of beta cell mass depends on a delicate balance between cell proliferation, growth, and programmed cell death (apoptosis). This disturbance of balance can lead to impaired glucose homeostasis. For example, it is noteworthy that glucose intolerance occurs together with aging when the rate of beta cell replication is reduced, and human autopsy studies show that beta cell mass is 40% to 60% in non-insulin dependent diabetic patients compared to non-diabetic subjects, In the first place. Insulin resistance is invariably accompanied by obesity, but until beta cells, at the onset of type 2 diabetes, become unable to meet the increased demand for insulin, normal blood glucose levels are maintained by supplemental and insulinemic It is a common opinion in general.

당뇨병과 관련된 다수의 이상을 치료하려는 시도는 여러 환자들에서 이러한 이상을 해결하기 위해 수종의 항-당뇨병 의약을 투여하도록 촉진하였다. 항-당뇨병 의약의 예는 단백질, 예를 들어 인슐린 및 인슐린 유사체, 및 소분자(small molecule), 예를 들어 인슐린 감작제, 인슐린 분비촉진제 및 식욕 조절 화합물 등이다.Attempts to treat multiple anomalies associated with diabetes have prompted several patients to receive several anti-diabetic medications to address these abnormalities. Examples of anti-diabetic medicaments are proteins, such as insulin and insulin analogs, and small molecules, such as insulin sensitizers, insulin secretagogues, and appetite regulating compounds.

상기한 대사 질환, 상태 및 장애에 유용한 폴리펩티드 개발이 여전히 요구된다. 따라서, 본 발명의 목적은 하이브리드 폴리펩티드 및 이들의 제조 및 사용 방법을 제공하는 것이다. 본 발명의 화합물은 본원에서 상기 기재한 대사 질환, 상태 및 장애에 유용하다.There is still a need to develop polypeptides that are useful for the above metabolic diseases, conditions and disorders. Accordingly, it is an object of the present invention to provide hybrid polypeptides and methods of making and using them. The compounds of the present invention are useful herein for the metabolic diseases, conditions and disorders described above.

본원에 언급된 모든 문헌은 본원에서 충분히 제시된 것처럼 본원에 참고로 포함된다.All references cited herein are incorporated herein by reference as if fully set forth herein.

발명의 요약SUMMARY OF THE INVENTION

본 발명은 일반적으로 혈장 글루코스 수준, 인슐린 수준 및/또는 인슐린 분비의 제어에 의해 완화될 수 있는 대사 질환 및 장애, 예를 들어 당뇨병 및 당뇨병-관련 상태의 치료 및 예방을 위한 작용제로서 유용한 선별가능한 신규 하이브리드 폴리펩티드에 관한 것이다. 이러한 상태 및 장애로는 고혈압, 이상지혈증, 심혈관 질환, 식사 장애, 인슐린 내성, 비만, 및 제1형, 제2형 및 임신 당뇨병 등을 비롯한 임의의 종류의 진성 당뇨병 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. The present invention relates to a method for the treatment and / or prophylaxis of metabolic diseases and disorders which can be alleviated by the control of plasma glucose levels, insulin levels and / or insulin secretion, for example, selectable novel compounds useful as agents for the treatment and prevention of diabetes and diabetes- Hybrid polypeptides. Such conditions and disorders include, but are not limited to, hypertension, dyslipidemia, cardiovascular disease, dietary disorders, insulin resistance, obesity, and any type of diabetes mellitus, including Type 1, Type 2 and gestational diabetes.

본 발명의 한 측면에서, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 하이브리드 폴리펩티드가 제공된다. 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 함께 공유 연결된 2개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함하고, 이때 1개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타낸다. 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 성분 펩티드 호르몬, 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 성분 펩티드 호르몬의 단편, 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 유사체 및 유도체, 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 성분 펩티드 호르몬의 유사체 및 유도체의 단편, 및 펩티드 인핸서로부터 독립적으로 선택된다.In one aspect of the invention, hybrid polypeptides exhibiting at least one hormonal activity are provided. The hybrid polypeptides of the present invention comprise two or more bioactive peptide hormone modules covalently linked together, wherein at least one bioactive peptide hormone module exhibits at least one hormone activity of a component peptide hormone. The bioactive peptide hormone module is a component peptide hormone, a component that exhibits at least one hormone activity of the component peptide hormone, a peptide hormone fragment, an analog and a derivative that exhibits at least one hormone activity of the component peptide hormone, and at least one hormone of the component peptide hormone Fragments of analogs and derivatives of component peptide hormones that exhibit activity, and peptide enhancers.

한 실시양태에서, 하이브리드 폴리펩티드는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내며, 1개 이상의 추가의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈에 공유 연결된 1개 이상의 제1 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 함유하고, 상기 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 성분 펩티드 호르몬, 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 성분 펩티드 호르몬의 단편, 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 성분 펩티드 호르몬의 유사체 및 유도체, 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 성분 펩티드 호르몬의 유사체 및 유도체의 단편, 및 펩티드 인핸서로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 성분 펩티드 호르몬은 전형적으로 아밀린, 아드레노메듈린 (ADM), 칼시토닌 (CT), 칼시토닌 유전자 관련 펩티드 (CGRP), 인터메딘, 콜레시스토키닌 ("CCK"), 렙틴, 펩티드 YY (PYY), 글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1), 글루카곤-유사 펩티드-2 (GLP-2), 옥신토모듈린 (OXM), 나트륨배설증가 펩티드 및 엑센딘-4로 구성된 군 중 2종 이상으로부터 독립적으로 선택된다. 전형적으로, 펩티드 인핸서는 원하는 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 또는 다른 약력학적 특징을 하이브리드 폴리펩티드에 부여하는 성분 펩티드 호르몬의 구조적 모티프, 및 원하는 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 또는 다른 약력학적 특징을 하이브리드 폴리펩티드에 부여하는 성분 펩티드 호르몬의 유사체 또는 유도체의 구조적 모티프로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택된다. 추가의 실시양태에서, 1개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타낸다. 추가의 별법의 실시양태에서, 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 1개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈이 아밀린, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 아밀린의 단편, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 아밀린의 유사체 또는 유도체, 또는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 아밀린의 유사체 또는 유도체의 단편이고, 및 1개 이상의 다른 생물활성 펩티드 호르몬 모듈이 CCK, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 CCK의 단편, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 CCK의 유사체 또는 유도체, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 CCK의 유사체 또는 유도체의 단편, CT, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 CT의 단편, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 CT의 유사체 또는 유도체, 또는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 CT의 유사체 또는 유도체의 단편인 경우, 상기 하이브리드 폴리펩티드는 3종 이상의 상이한 성분 펩티드 호르몬으로부터 선택된 3개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 추가로 함유할 수 있다. 추가의 별법의 실시양태에서, 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 1개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈이 GLP-1, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 GLP-1의 단편, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 GLP-1의 유사체 또는 유도체, 또는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 GLP-1의 유사체 또는 유도체의 단편이고, 1개 이상의 다른 생물활성 펩티드 호르몬 모듈이 엑센딘 단편을 포함하는 펩티드 인핸서인 경우, 상기 하이브리드 폴리펩티드는 3개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 추가로 함유할 수 있다.In one embodiment, the hybrid polypeptide comprises at least one first bioactive peptide hormone module that exhibits at least one hormone activity and is covalently linked to at least one additional bioactive peptide hormone module, wherein the bioactive peptide hormone module Component Peptide hormone, component Peptide hormone Component showing at least one hormone activity Peptide hormone fragment, component Peptide hormone Component showing at least one hormone activity Peptide hormone analogs and derivatives Component Peptide hormone at least one hormone activity And fragments of analogs and derivatives of the peptide hormones that represent them, and peptide enhancers. The component peptide hormones are typically selected from the group consisting of amylin, adrenomedullin (ADM), calcitonin (CT), calcitonin gene related peptide (CGRP), intermedin, cholecystokinin ("CCK"), leptin, peptide YY (PYY) Is independently selected from at least two of the group consisting of analog peptide-1 (GLP-1), glucagon-like peptide-2 (GLP-2), oxytomodulin (OXM), sodium excretion enhancing peptide and exendin- do. Typically, a peptide enhancer is a structural peptide hormone that imparts desired chemical stability, form stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, receptor interaction, protease inhibition, plasma protein binding or other pharmacological properties to the hybrid polypeptide Motifs and analogs or derivatives of peptide hormones that impart the desired chemical stability, form stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, receptor interaction, protease inhibition, plasma protein binding or other pharmacological characteristics to the hybrid polypeptide And are selected independently from the group consisting of structural motifs. In a further embodiment, the one or more bioactive peptide hormone modules exhibit at least one hormonal activity of a component peptide hormone. In a further alternative embodiment, the at least one bioactive peptide hormone module exhibiting at least one hormone activity of the component peptide hormone is selected from the group consisting of amylin, a fragment of amylin exhibiting at least one hormone activity, Amylin analog or derivative thereof, or a fragment of an analog or derivative of amylin exhibiting at least one hormone activity, and wherein at least one other bioactive peptide hormone module is CCK, a fragment of CCK exhibiting at least one hormone activity, 1 An analog or derivative of CCK exhibiting at least one kind of hormone activity, an analog or derivative fragment of CCK exhibiting at least one kind of hormone activity, a CT, a fragment of CT showing at least one hormone activity, an analog of CT showing at least one hormone activity Or derivatives thereof, or analogs or derivatives of CT that exhibit at least one hormone activity In the case of a fragment of a conductor, the hybrid polypeptide may additionally contain three or more bioactive peptide hormone modules selected from three or more different component peptide hormones. In a further alternative embodiment, the at least one bioactive peptide hormone module exhibiting at least one hormone activity of the component peptide hormone is GLP-1, a fragment of GLP-1 exhibiting at least one hormone activity, at least one hormone activity 1 or a fragment of an analog or derivative of GLP-1 exhibiting at least one hormone activity and wherein at least one other bioactive peptide hormone module is a peptide enhancer comprising an exendin fragment, The hybrid polypeptide may further contain three or more bioactive peptide hormone modules.

본 발명의 성분 펩티드 호르몬은 아밀린, 아드레노메듈린 (ADM), 칼시토닌 (CT), 칼시토닌 유전자 관련 펩티드 (CGRP), 인터메딘, 콜레시스토키닌 ("CCK"), 렙틴, 펩티드 YY (PYY), 글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1), 글루카곤-유사 펩티드-2 (GLP-2), 옥신토모듈린 (OXM) 및 엑센딘-4를 포함한다. The component peptide hormones of the present invention are selected from the group consisting of amylin, adrenomedullin (ADM), calcitonin (CT), calcitonin gene related peptide (CGRP), intermedin, cholecystokinin ("CCK"), leptin, peptide YY (PYY) -Like peptide-1 (GLP-1), glucagon-like peptide-2 (GLP-2), oxytomodulin (OXM) and exendin-4.

본 발명의 펩티드 인핸서는 원하는 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정 성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 또는 다른 약력학적 특징을 하이브리드 폴리펩티드에 부여하는 성분 펩티드 호르몬의 구조적 모티프, 및 원하는 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 또는 다른 약력학적 특징을 하이브리드 폴리펩티드에 부여하는 성분 펩티드 호르몬의 유사체 또는 유도체의 구조적 모티프를 포함한다.The peptide enhancer of the present invention is a peptide peptide that imparts desired chemical stability, form stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, receptor interaction, protease inhibition, plasma protein binding or other pharmacological properties to a hybrid polypeptide Structural motifs and analogues or derivatives of peptide hormones that impart desired chemical stability, shape stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, receptor interactions, protease inhibition, plasma protein binding or other pharmacological characteristics to the hybrid polypeptide . &Lt; / RTI >

본 발명의 또다른 측면에서, 비만의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 치료 또는 예방 유효량의 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드를 투여하는 것을 포함하는, 비만의 치료 또는 예방 방법이 제공된다. 바람직한 실시양태에서, 상기 대상체는 비만이거나 과체중인 대상체이다. "비만"은 일반적으로 본원의 목적상 30 초과의 체질량 지수(body mass index)로 정의되지만, 체중을 저하시킬 필요가 있거나 이를 원하는, 체질량 지수가 30 미만인 대상체를 비롯한 임의의 대상체가 "비만"의 범위에 포함된다. 인슐린 내성, 글루코스 불내성이거나 임의의 형태의 진성 당뇨병 (예를 들어 제1형, 제2형 또는 임신 당뇨병)을 갖는 대상체가 본 발명의 방법으로 유익할 수 있다.In another aspect of the invention there is provided a method of treating or preventing obesity comprising administering to a subject in need of treatment or prevention of obesity a therapeutically or prophylactically effective amount of a hybrid polypeptide of the invention. In a preferred embodiment, the subject is an obese or overweight subject. "Obesity" is generally defined as a body mass index of greater than 30 for the purposes of this application, but any subject, including those with a body mass index of less than 30, &Lt; / RTI > A subject having insulin resistance, glucose intolerance or any form of diabetes mellitus (e. G., Type 1, type 2 or gestational diabetes) may be beneficial in the methods of the present invention.

본 발명의 또다른 측면에서, 유효량의 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 음식물 섭취의 감소, 영양분 이용률의 감소, 체중 감소 유도, 진성 당뇨병 또는 당뇨병-관련 상태의 치료, 및 지질 프로파일의 개선 (LDL 콜레스테롤 및 트리글리세리드 수준의 감소 및/또는 HDL 콜레스테롤 수준의 변화 포함)을 위한 방법이 제공된다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 방 법은 영양분 이용률을 감소시켜서 완화될 수 있는 상태 또는 장애의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 치료 또는 예방 유효량의 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드를 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 영양분 이용률을 감소시켜서 완화될 수 있는 상태 또는 장애의 치료 또는 예방에 사용된다. 다른 실시양태에서, 본 발명의 방법은 혈장 글루코스 수준, 인슐린 수준 및/또는 인슐린 분비의 제어에 의해 완화될 수 있는 상태 또는 장애의 치료 또는 예방에 사용된다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 방법은 당뇨병 및/또는 당뇨병-관련 상태의 치료에 사용된다. 이러한 상태 및 장애로는 고혈압, 이상지혈증, 심혈관 질환, 식사 장애, 인슐린 내성, 비만, 및 제I형, 제II형 및 임신 당뇨병 등을 비롯한 임의의 종류의 진성 당뇨병, 당뇨병 합병증, 신경병증 (예를 들어 엑센딘-4의 신경영양 작용에 기초함), 신경병 통증 (예를 들어 아밀린 작용에 기초함), 망막병증, 신장병증, 불충분한 췌장 베타 세포량의 상태 (예를 들어 엑센딘-4 및 GLP-1의 섬 신생 작용에 기초함) 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. In another aspect of the invention there is provided a method of reducing food intake, reducing nutrient utilization, inducing weight loss, treating diabetes mellitus or diabetic-related conditions, and administering to a subject an effective amount of a hybrid polypeptide of the invention, A method is provided for improving the profile (including a reduction in LDL cholesterol and triglyceride levels and / or a change in HDL cholesterol levels). In a preferred embodiment, the methods of the invention comprise administering a therapeutically or prophylactically effective amount of a hybrid polypeptide of the invention to a subject in need of treatment or prevention of a condition or disorder that can be alleviated by reducing nutrient utilization, Is used to treat or prevent conditions or disorders that can be alleviated by reducing nutrient utilization. In another embodiment, the methods of the invention are used for the treatment or prevention of conditions or disorders that can be alleviated by the control of plasma glucose levels, insulin levels and / or insulin secretion. In another embodiment, the methods of the invention are used for the treatment of diabetes and / or diabetes-related conditions. Such conditions and disorders include, but are not limited to, hypertension, dyslipidemia, cardiovascular disease, eating disorders, insulin resistance, obesity, and any type of diabetes mellitus, diabetic complications, neuropathy (E.g., based on neurotrophic effects of exendin-4), neuropathic pain (based on, for example, amylin action), retinopathy, nephropathy, conditions of insufficient pancreatic beta cell mass 4 and GLP-1), and the like.

본 발명은 또한 치료 또는 예방 유효량의 본 발명의 1종 이상의 하이브리드 폴리펩티드 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 제약상 허용가능한 희석제, 보존제, 가용화제, 유화제, 보조제 및/또는 하이브리드 폴리펩티드의 전달에 유용한 담체와 함께 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. The present invention also relates to a pharmaceutical composition comprising a therapeutically or prophylactically effective amount of one or more hybrid polypeptides of the invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof in combination with a carrier useful for the delivery of a pharmaceutically acceptable diluent, preservative, solubilizing agent, emulsifying agent, adjuvant and / or hybrid polypeptide &Lt; / RTI >

본 발명의 이러한 측면 및 기타 측면은 하기하는 바람직한 실시양태 및 발명의 상세한 설명을 참고로 할 때 더 명확하게 이해될 것이다.These and other aspects of the present invention will be more clearly understood by reference to the following preferred embodiments and detailed description of the invention.

도 1은 DIO 마우스 검정에서 본 발명의 예시적인 화합물의 효과를 입증한다.Figure 1 demonstrates the effect of exemplary compounds of the invention in DIO mouse assays.

도 2는 DIO 마우스 검정에서 본 발명의 예시적인 화합물의 효과를 입증한다.Figure 2 demonstrates the effect of exemplary compounds of the invention in DIO mouse assays.

도 3A 내지 도 3C는 DIO 마우스 검정에서 본 발명의 예시적인 화합물의 효과를 입증한다.Figures 3A-3C demonstrate the effect of exemplary compounds of the invention in DIO mouse assays.

도 4A 및 도 4B는 모(parent) 펩티드 화합물과 비교하여 음식물 섭취 검정에서 본 발명의 예시적인 화합물의 효과를 입증한다.Figures 4A and 4B demonstrate the efficacy of exemplary compounds of the present invention in a food intake assay as compared to a parent peptide compound.

도 5A 및 도 5B는 혈중 글루코스 저하 검정 및 음식물 섭취 검정 각각에서 본 발명의 예시적인 화합물의 효과를 입증한다.Figures 5A and 5B demonstrate the effect of exemplary compounds of the invention in blood glucose lowering assays and food ingestion assays, respectively.

도 6은 본원에서 사용한 각종 예시적인 링커의 구조를 도시한다.Figure 6 illustrates the structure of various exemplary linkers used herein.

도 7은 각종 예시적인 링커의 구조 뿐만이 아니라 예시적인 PYY 및 아밀린 패밀리 하이브리드의 서열 및 시험관내 활성 또한 도시한다.Figure 7 also shows the sequence and in vitro activity of exemplary PYY and amylin family hybrids as well as the structure of various exemplary linkers.

도 8은 각종 예시적인 링커의 구조 뿐만이 아니라 추가의 예시적인 PYY/PYY 패밀리 하이브리드의 서열 및 시험관내 활성 또한 도시한다.Figure 8 also shows the sequence and in vitro activity of additional exemplary PYY / PYY family hybrids as well as the structure of various exemplary linkers.

도 9는 예시적인 PYY 및 아밀린 패밀리 하이브리드에 의한 체중 감소를 도시한다.Figure 9 shows weight loss by exemplary PYY and amylin family hybrids.

도 10은 CCK 수용체를 갖는 세포주에서 CCK8 패밀리 하이브리드에 의한 칼슘 동원(動員)의 그래프를 도시한다.Figure 10 shows a graph of calcium mobilization by CCK8 family hybrids in cell lines with CCK receptors.

도 11A, 도 11B 및 도 11C는 아밀린 (예를 들어 아밀린-sCT-아밀린) 및 PYY (예를 들어 PYY-NPY 키메라) 패밀리 하이브리드에 의한 음식물 억제를 도시한다.Figures 11A, 11B, and 11C show food inhibition by amylin (e.g., amylin-sCT-amylin) and PYY (e.g., PYY-NPY chimera) family hybrids.

도 12A는 아밀린-sCT-아밀린/PYY 패밀리 하이브리드에 의한 전체 음식물 섭 취량 감소를 도시하고, 도 12B는 아밀린-sCT-아밀린/PYY 패밀리 하이브리드에 의한 체중 감소를 도시한다. "*"는 비히클과 비교하여 p < 0.05임을 나타낸다.Figure 12A shows total food intake reduction by amylin-sCT-amylin / PYY family hybrids, and Figure 12B shows weight loss by amylin-sCT-amylin / PYY family hybrids. "*" Indicates p < 0.05 compared to the vehicle.

도 13은 PYY/PYY 패밀리 하이브리드에 의한 음식물 섭취 억제를 도시한다. 투여량은 25 nmol/kg이었다. 약 15 내지 20％의 차이가 통계적으로 유의하다.Figure 13 shows inhibition of food intake by PYY / PYY family hybrids. The dose was 25 nmol / kg. A difference of about 15-20% is statistically significant.

도 14A 및 도 14B는 아밀린 또는 PYY 패밀리 성분을 갖는 CCK 패밀리 하이브리드에 의한 음식물 섭취 활성의 억제를 도시한다. 투여량은 25 nmol/kg이었다. 약 15 내지 20％의 차이가 통계적으로 유의하다.14A and 14B show inhibition of food intake activity by CCK family hybrids with amylin or PYY family components. The dose was 25 nmol / kg. A difference of about 15-20% is statistically significant.

도 15A 및 도 15B는 아밀린 또는 PYY 패밀리 성분을 갖는 MSH 패밀리 하이브리드에 의한 음식물 섭취 활성의 억제를 도시한다. 투여량은 25 nmol/kg이었다. 약 15 내지 20％의 차이가 통계적으로 유의하다.Figures 15A and 15B illustrate the inhibition of food intake activity by the MSH family hybrids with amylin or PYY family members. The dose was 25 nmol / kg. A difference of about 15-20% is statistically significant.

도 16A는 MSH 패밀리 성분 및 아밀린, 예를 들어 아밀린-sCT-아밀린 패밀리 성분과의 하이브리드에 의한 전체 음식물 섭취량 감소를 도시하고, 도 16B는 MSH 패밀리 성분 및 아밀린, 예를 들어 아밀린-sCT-아밀린 패밀리 성분과의 하이브리드에 의한 체중 감소를 도시한다. "*"는 비히클과 비교하여 p < 0.05임을 나타낸다.Figure 16A shows the total food intake reduction by hybridization of the MSH family component and the amylin, e.g., the amylin-sCT-amylin family component, Figure 16B, the MSH family component and the amylin, -sCT-amylin family component. < / RTI > "*" Indicates p < 0.05 compared to the vehicle.

도 17A 내지 도 17D는 FN-38 패밀리 성분 및 표시한 제2의 패밀리 성분을 함유하는 하이브리드에 의한 음식물 섭취의 억제를 도시한다. 도 17A - FN38 및 아밀린 패밀리 성분, 아밀린-sCT-아밀린 키메라 화합물 10. 도 17B - FN38 및 PYY 패밀리 성분, PYY-3-36. 도 17C - FN38 및 PYY 패밀리 성분, PYY-NPY 키메라. 도 17D - FN38 및 CCK8 패밀리 성분, CCK8. 투여량은 25 nmol/kg이었다. 약 15 내지 20％의 차이가 통계적으로 유의하다.Figures 17A-17D illustrate the inhibition of food ingestion by hybrids containing the FN-38 family component and the indicated second family component. 17A-FN38 and amylin family component, amylin-sCT-amylin chimeric compound 10. Figure 17B-FN38 and PYY family components, PYY-3-36. 17C-FN38 and the PYY family component, PYY-NPY chimera. Figures 17D-FN38 and CCK8 family components, CCK8. The dose was 25 nmol / kg. A difference of about 15-20% is statistically significant.

도 18A 및 도 18B는 엑센딘 패밀리 및 아밀린 패밀리 성분을 함유하는 하이브리드에 의한 음식물 섭취의 억제를 도시한다. 달리 나타내지 않는다면, 투여량은 25 nmol/kg이었다. 약 15 내지 20％의 차이가 통계적으로 유의하다.Figures 18A and 18B illustrate the inhibition of food ingestion by hybrids containing the exendin family and amylin family components. Unless otherwise indicated, the dose was 25 nmol / kg. A difference of about 15-20% is statistically significant.

도 19A 및 도 19B는 엑센딘/아밀린 패밀리 하이브리드에 의한, 암-주기 먹이 섭취 동안의 음식물 섭취 억제 및 장기간의 전체 음식물 섭취 억제를 도시한다.Figures 19A and 19B illustrate the inhibition of food intake during the cancer-cycle food intake and the inhibition of total food intake over time by the exendin / amylin family hybrids.

도 20A 및 도 20B는 모 분자와 비교한, 예시적인 엑센딘/아밀린-sCT-아밀린 패밀리 하이브리드에 의한 음식물 섭취의 만성 억제 및 제지방과 무관한(lean-sparing) 체중 감소 및 지방 손실 활성을 도시한다. "*"는 비히클과 비교하여 p < 0.05임을 나타낸다.20A and 20B show chronic inhibition of food ingestion and lean-sparing weight loss and fat loss activity by exemplary exendin / amylin-sCT-amylin family hybrids as compared to parent molecules Lt; / RTI > "*" Indicates p < 0.05 compared to the vehicle.

도 21A, 도 21B 및 도 21C는 래트에서 하이브리드의 14일 처치 후 대사 파라미터에 대한 효과를 입증한다.Figures 21A, 21B and 21C demonstrate the effect on the metabolic parameters after 14 days of hybrid treatment in rats.

도 22 내지 도 29는 본원에 기재한 음식물 섭취 검정에서 PPF 폴리펩티드 키메라, 예를 들어 PYY-NPY 키메라 화합물 4883 및 5705에 의한 누적 음식물 섭취의 감소력을 도시한다.Figures 22-29 illustrate the decreasing power of cumulative food intake by PPF polypeptide chimeras, such as PYY-NPY chimera compounds 4883 and 5705, in the food intake assay described herein.

본 발명은 일반적으로 혈장 글루코스 수준, 인슐린 수준 및/또는 인슐린 분비의 제어에 의해 완화될 수 있는 대사 질환 및 장애, 예를 들어 당뇨병 및 당뇨병-관련 상태의 치료 및 예방을 위한 물질로서 유용한 신규한 선별가능한 하이브리드 폴리펩티드에 관한 것이다. 이러한 상태 및 장애로는 고혈압, 이상지혈증, 심혈관 질환, 식사 장애, 인슐린 내성, 비만, 및 제1형, 제2형 및 임신 당뇨병 등을 비롯한 임의의 종류의 진성 당뇨병 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. The present invention relates generally to novel screening methods useful as agents for the treatment and prevention of metabolic diseases and disorders, such as diabetes and diabetes-related conditions, which can be alleviated by the control of plasma glucose levels, insulin levels and / or insulin secretion / RTI > hybrid polypeptides. Such conditions and disorders include, but are not limited to, hypertension, dyslipidemia, cardiovascular disease, dietary disorders, insulin resistance, obesity, and any type of diabetes mellitus, including Type 1, Type 2 and gestational diabetes.

한 측면에서, 본 발명은 "생물활성", 예를 들어 치료 효능, 기능 범위, 작용 기간, 물리화학적 특성 및/또는 다른 약력학적 특성을 기초로 하여 선별될 수 있는, 생리적, 대사적 및/또는 약력학적 활성 펩티드 모듈의 모듈 어셈블리를 포함한다. In one aspect, the invention encompasses a method of treating a subject suffering from a condition selected from the group consisting of physiological, metabolic, and / or metabolic disorders that can be screened on the basis of "biological activity ", such as therapeutic efficacy, functional range, And a module assembly of a pharmacologically active peptide module.

이론에 얽매이려는 것은 아니지만, 본 발명은 적어도 부분적으로는 선별가능한 특성을 갖는 효능있는 신규 치료제를 생성하기 위해서 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 2-성분, 3-성분 또는 그 이상의 성분 조합으로 연결하는 "도구 상자(toolbox)" 방법에 관한 것이다. "생물활성 펩티드 호르몬 모듈"은 펩티드 호르몬, 호르몬 활성을 갖는 펩티드 단편, 또는 화학적, 대사적 및/또는 다른 약력학적 안정성을 부여하는 펩티드 호르몬의 구조적 모티프일 수 있다. 펩티드 호르몬은 천연 펩티드 호르몬 뿐만이 아니라 당업계에 공지되고 본원에 기재한 바와 같은 펩티드 호르몬 유사체 및 유도체까지도 포함할 수 있다.Without wishing to be bound by theory, the present invention is directed to a "tool " that links bioactive peptide hormone modules in a two-component, three-component, or a combination of components in order to produce an efficacious novel therapeutic agent having, at least in part, Quot; toolbox "method. The "bioactive peptide hormone module" may be a peptide hormone, a peptide fragment having hormone activity, or a structural motif of a peptide hormone conferring chemical, metabolic and / or other pharmacological stability. Peptide hormones include not only natural peptide hormones, but also peptide hormone analogs and derivatives as known in the art and described herein.

본 발명의 한 측면에서, 2종 이상의 펩티드 호르몬의 특정한 물리화학적 특징을 단일 양식으로 조합하면 기능장애성 대사 회로의 여러 지점에서의 개입이 용이해 질 수 있음이 밝혀졌다. 따라서, 본 발명의 한 측면에서는 선별가능한 생물활성을 단일 폴리펩티드 작용제 내로 통합시키는 합리적 디자인의 하이브리드 폴리펩티드가 제공된다. 한 실시양태에서, 본 발명의 선별가능한 하이브리드 폴리펩티드는 생물활성 모듈을 공유 부착시키기 위해서 화학적으로 안정적인 링커의 사용을 수반할 수 있다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 선별가능한 하이브리드 폴리펩티드는 그 자체가 생물활성 모듈의 일부일 수도 있고 또는 일부를 형성할 수도 있는 절단가능한 링커의 사용을 수반할 수 있다.In one aspect of the invention, it has been found that the combination of specific physicochemical characteristics of two or more peptide hormones in a single fashion can facilitate intervention at various points in the dysfunctional metabolic pathway. Thus, in one aspect of the invention there is provided a rationally designed hybrid polypeptide that incorporates selectable biological activity into a single polypeptide agonist. In one embodiment, the selectable hybrid polypeptides of the present invention may involve the use of chemically stable linkers to allow for attachment of bioactive modules. In another embodiment, the selectable hybrid polypeptides of the present invention may themselves be part of a biological activity module or may involve the use of a cleavable linker that may form part of it.

다시, 이론에 얽매이려는 것은 아니지만, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드의 디자인은 일반적으로 (1) 원하는 효능 및 치료 용도를 위한 생물활성 펩티드 호르몬 모듈의 동정, 선택 및 페어링(pairing)하는 것, 및 (2) 성분 모듈의 생물활성을 상실하지 않으면서 생물활성 모듈 (예를 들어 천연 펩티드 호르몬, 호르몬 활성을 갖는 펩티드 호르몬 유사체 또는 유도체, 호르몬 활성을 갖는 펩티드 호르몬 단편 및 안정화 모티프 등)을 직접 또는 링커를 통해 공유 연결하는 것을 수반할 수 있다. 특정 실시양태에서, 모듈 선별 기준으로는 (a) 원하는 치료 또는 예방 징후를 위해 원하는 생체내 효능, 예를 들어 부가적 또는 상승작용적 효과, (b) 다중 치료 또는 예방 징후를 위한 연결된 모듈의 임의의 상승작용 효과 또는 이중 작용, 및/또는 (c) 원하는 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 및/또는 다른 약력학적 특징 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.Again, and without wishing to be bound by theory, the design of the hybrid polypeptides of the present invention will generally include (1) identifying, selecting and pairing bioactive peptide hormone modules for desired efficacy and therapeutic uses, and (2) (For example, natural peptide hormone, peptide hormone analogue or derivative having hormone activity, peptide hormone fragment having hormone activity, and stabilization motif, etc.) without losing the biological activity of the component module And can be accompanied by connection. In certain embodiments, the module selection criteria include (a) the desired in vivo efficacy, e.g., an additional or synergistic effect, for the desired therapeutic or prophylactic symptom, (b) an optional And / or (c) a desired chemical stability, form stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, receptor interaction, protease inhibition, plasma protein binding and / or other pharmacological properties But are not limited thereto.

단락들의 표제는 본원에서 단지 구별을 위해 사용되는 것으로서, 본원에 기재한 대상을 어떠한 방식으로도 제한하지 않음을 이해해야 한다.It should be understood that the headings of the paragraphs are used herein for the sake of brevity only and are not intended to limit the subject matter described herein in any way.

본 발명의 The 하이브리드hybrid 폴리펩티드 Polypeptide

상기한 바와 같이, 본 발명은 부분적으로는 본원에 기재한 성분 펩티드 호르몬으로부터 선별가능한 2개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함하는 하이브리드 폴리펩티드에 관한 것이다. 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 일반적으로 대사 상태 및 장애의 치료 및 예방에 유용할 것이다. 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타낼 것이고, 바람직하게는 제2 성분 펩티드 호르몬의 추가의 1종 이상의 생물활성을 포함할 수 있다. As described above, the present invention relates, in part, to a hybrid polypeptide comprising two or more bioactive peptide hormone modules selectable from the component peptide hormones described herein. The hybrid polypeptides of the invention will generally be useful for the treatment and prevention of metabolic conditions and disorders. The hybrid polypeptides of the present invention will exhibit at least one hormone activity of the component peptide hormone and may preferably comprise one or more additional biological activities of the second component peptide hormone.

한 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 2개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함할 수 있고, 여기서 상기 2개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈 각각은 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타낸다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 2개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함할 수 있고, 여기서 상기 생물활성 펩티드 호르몬 모듈 중 1개 이상은 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내고, 상기 생물활성 펩티드 호르몬 모듈 중 1개 이상은 원하는 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 및/또는 다른 약력학적 특징을 하이브리드 폴리펩티드에 부여한다.In one embodiment, the hybrid polypeptides of the invention may comprise two or more bioactive peptide hormone modules, wherein each of the two or more bioactive peptide hormone modules each exhibit at least one hormone activity of the component peptide hormone. In another embodiment, the hybrid polypeptides of the invention may comprise two or more bioactive peptide hormone modules wherein at least one of the bioactive peptide hormone modules exhibits at least one hormone activity of a component peptide hormone, One or more of the bioactive peptide hormone modules may be modified to include a desired polypeptide having a desired chemical stability, morphological stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, receptor interaction, protease inhibition, plasma protein binding and / .

바람직한 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 대사 상태 및 장애의 치료 및/또는 예방에 있어서 성분 펩티드 호르몬과 유사하거나 그보다 더 높은 효력을 가질 수 있다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 당뇨병 및/또는 당뇨병-관련 장애의 치료 및/또는 예방에 있어서 성분 펩티드 호르몬과 유사하거나 그보다 더 높은 효력을 가질 수 있다. 별법으로, 본 발명의 바람직한 하이브리드 폴리펩티드는 성분 펩티드 호르몬에 비해 제조 용이성, 안정성 및/또는 제제화 용이성이 개선된 것으로 나타날 수 있다.In a preferred embodiment, the hybrid polypeptides of the invention may have a potency similar or higher than that of the component peptide hormones in the treatment and / or prevention of metabolic conditions and disorders. In another embodiment, the hybrid polypeptides of the invention may have a potency similar or higher than that of the component peptide hormones in the treatment and / or prevention of diabetes and / or diabetes-related disorders. Alternatively, the preferred hybrid polypeptides of the invention may appear to have improved manufacturability, stability, and / or ease of formulation as compared to the component peptide hormones.

더욱 특히, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 일반적으로 1개 이상의 추가의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈에 공유 연결된 제1 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함할 것이다. 생물활성 펩티드 호르몬 모듈들은 아래에서 상세하게 설명되는 바와 같은 당업계에 공지된 임의의 방식, 예를 들어 직접 아미드 결합 또는 화학적 링커기를 포함하지만 이로 제한되지 않는 방식으로 함께 공유 연결될 수 있다. 한 실시양태에서, 화학적 링커기는 폴리펩티드 형태를 유도하거나 안정화시키는 펩티드 모방체를 포함할 수 있다.More particularly, the hybrid polypeptides of the invention will generally comprise a first bioactive peptide hormone module covalently linked to one or more additional bioactive peptide hormone modules. The bioactive peptide hormone modules may be covalently linked together in any manner known in the art, as described in detail below, including, but not limited to, direct amide linkage or chemical linker groups. In one embodiment, the chemical linker group may comprise a peptide mimetic that induces or stabilizes the polypeptide form.

제1 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 제1 성분 펩티드 호르몬으로부터 선택할 수 있고, 원하는 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 및/또는 다른 약력학적 특징을 하이브리드 폴리펩티드에 부여하는 펩티드 호르몬 (천연 펩티드 호르몬 및 또한 그의 유사체 및 유도체 포함), 호르몬 활성을 갖는 펩티드 단편 (천연 펩티드 호르몬의 단편 및 또한 그의 유사체 및 유도체 포함) 또는 펩티드 호르몬의 구조적 모티프 (천연 펩티드 호르몬 및 또한 그의 유사체 및 유도체 포함)일 수 있다. 마찬가지로, 추가의 생물활성 펩티드 모듈(들)은 성분 펩티드 호르몬으로부터 선택할 수 있고, 원하는 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 및/또는 다른 약력학적 특징을 하이브리드 폴리펩티드에 부여하는 펩티드 호르몬 (천연 펩티드 호르몬 및 또한 그의 유사체 및 유도체 포함), 호르몬 활성을 갖는 펩티드 단편 (천연 펩티드 호르몬의 단편 및 또한 그의 유사체 및 유도체 포함) 또는 호르몬 펩티드의 구조적 모티프 (천연 펩티드 호르몬 및 또한 그의 유사체 및 유도체 포함)일 수 있다. 제1 펩티드 호르몬 및 추가의 펩티드 호르몬은 생물활성 펩티드 호르몬 모듈의 원하는 특징에 따라 동일한 펩티드 호르몬일 수도 있고, 또는 펩티드 호르몬의 동일한 패밀리일 수도 있으며, 또는 상이한 펩티드 호르몬일 수도 있다. The first bioactive peptide hormone module can be selected from the first component peptide hormone and can be selected from the group consisting of the desired chemical stability, morphological stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, receptor interaction, protease inhibition, plasma protein binding and / Peptide hormones (including natural peptide hormones and also analogues and derivatives thereof) that impart pharmacodynamic characteristics to hybrid polypeptides, peptide fragments with hormone activity (including fragments of natural peptide hormones and also analogues and derivatives thereof), or structural motifs of peptide hormones (Including natural peptide hormones and also analogs and derivatives thereof). Likewise, the additional bioactive peptide module (s) may be selected from the component peptide hormones and selected for their desired chemical stability, form stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, receptor interaction, protease inhibition, (Including natural peptide hormones and also their analogs and derivatives), peptide fragments with hormone activity (including fragments of natural peptide hormones and also their analogs and derivatives), or hormone peptides that impart other pharmacodynamic characteristics to the hybrid polypeptide Structural motifs (including natural peptide hormones and also analogs and derivatives thereof). The first peptide hormone and the additional peptide hormone may be the same peptide hormone, or the same family of peptide hormones, or may be different peptide hormones, depending on the desired characteristics of the bioactive peptide hormone module.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "생물활성"은 (1) 1종 이상의 생체내 호르몬 경로에서의 생물학적 활성, 또는 (2) 이러한 생물학적 활성의 치료 효능, 기능 범위, 작용 기간, 물리화학적 특성 및/또는 다른 약력학적 특성의 조정을 지칭한다. 생물학적 활성은 당업계에 공지되고 본원에 기재한 바와 같이 표적 호르몬 수용체 결합 검정 또는 생리적인 징후를 모니터링하는 대사 연구를 통해 평가될 수 있다. 이러한 생물학적 활성의 치료 효능, 기능 범위, 작용 기간, 물리화학적 특성 및/또는 다른 약력학적 특성의 조정은 예를 들어 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 및/또는 다른 약력학적 특징에 있어서의 변화를 통해 변형될 수 있다. As used herein, the term " biological activity "is intended to encompass a biological activity in a biological system, such as (1) biological activity in one or more in vivo hormonal pathways, or (2) therapeutic efficacy, functional range, Or other pharmacological properties. Biological activity can be assessed through metabolic studies that monitor target hormone receptor binding assays or physiological indications as known in the art and described herein. Adjustment of the therapeutic efficacy, functional range, duration of action, physiochemical properties and / or other pharmacological properties of such biological activity may be dependent on, for example, chemical stability, form stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, Protease inhibition, plasma protein binding, and / or other pharmacodynamic characteristics.

한 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 성분 펩티드 호르몬의 생물학적 활성의 약 25％ 이상, 바람직하게는 약 30％, 40％, 50％, 60％, 70％, 80％, 90％, 95％, 98％ 또는 99％를 보유한다. 바람직한 하이브리드 폴리펩티드는, 당업계에 공지되거나 본원에 기재한 대사 관련 검정법 (예를 들어 수용체 결합, 음식물 섭취, 위 공복, 췌장 분비, 인슐린 분비, 혈중 글루코스 저하, 체중 감소 등) 중 하나에서 동일 검정에서의 성분 펩티드 호르몬의 효력과 동일하거나 더 큰 효력을 갖는 것이다. 별법으로, 본 발명의 바람직한 하이브리드 폴리펩티드는 성분 펩티드 호르몬에 비해 제조 용이성, 안정성 및/또는 제제화 용이성이 개선된 것으로 나타날 수 있다.In one embodiment, the hybrid polypeptides of the invention comprise at least about 25%, preferably at least about 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% , 98%, or 99%. Preferred hybrid polypeptides may be obtained from the same assay in one of the metabolic-related assays known in the art or described herein (e.g., receptor binding, food intake, gastric emptying, pancreatic secretion, insulin secretion, blood glucose lowering, &Lt; / RTI > is equal to or greater than the potency of the component peptide hormone. Alternatively, the preferred hybrid polypeptides of the invention may appear to have improved manufacturability, stability, and / or ease of formulation as compared to the component peptide hormones.

또다른 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 영양분 이용률의 감소, 음식물 섭취의 감소, 체중 증가 효과 및/또는 대사 상태 및 장애의 치료 및 예방의 측면에서 천연 성분 펩티드 호르몬의 생물학적 활성의 약 25％ 이상, 바람직하게는 약 30％, 40％, 50％, 60％, 70％, 80％, 90％, 95％, 98％ 또는 99％를 보유한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 영양분 이용률의 감소, 음식물 섭취의 감소, 체중 증가 효과 및/또는 대사 상태 및 장애의 치료 및 예방의 측면에서 천연 펩티드 호르몬의 생물학적 활성의 약 110％ 이상, 125％ 이상, 130％ 이상, 140％ 이상, 150％ 이상, 200％ 이상을 나타내거나 또는 그보다 높은 활성을 나타낸다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 개선된 성분 펩티드 호르몬 수용체 효능제 활성을 나타낸다.In yet another embodiment, the hybrid polypeptides of the present invention exhibit at least about 25% of the biological activity of a natural component peptide hormone in terms of a reduction in nutrient utilization, a decrease in food intake, a weight gain effect, and / or a treatment and prevention of metabolic conditions and disorders. , Preferably about 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 98% or 99%. In another embodiment, the hybrid polypeptides of the present invention comprise at least about 110% of the biological activity of the native peptide hormone in terms of a reduction in nutrient utilization, a decrease in food intake, a weight gain effect, and / or a treatment and prevention of metabolic conditions and disorders , 125% or more, 130% or more, 140% or more, 150% or more, 200% or more. In another embodiment, the hybrid polypeptides of the invention exhibit improved component peptide hormone receptor agonist activity.

성분 펩티드 호르몬, 유사체 및 유도체Component Peptide Hormones, Analogs and Derivatives

성분 펩티드 호르몬은 일반적으로 (a) 아밀린 패밀리, 예를 들어 아밀린, 아드레노메듈린 ("ADM"), 칼시토닌 ("CT"), 칼시토닌 유전자 관련 펩티드 ("CGRP"), 인터메딘 ("AFP-6"으로도 알려져 있음) 및 관련 펩티드, (b) 콜레시스토키닌 ("CCK"), (c) 렙틴 패밀리, 예를 들어 렙틴 및 렙틴 유사 펩티드, (d) 췌장 폴리펩티드 패밀리, 예를 들어 췌장 폴리펩티드 ("PP") 및 펩티드 YY ("PYY"), (e) 인크레틴 및 인크레틴 모방체, 예를 들어 프로글루카곤 유전자로부터 유래한 펩티드 호르몬, 예를 들어 글루카곤, 글루카곤-유사 펩티드-1 ("GLP-1"), 글루카곤-유사 펩티드-2 ("GLP-2") 및 옥신토모듈린 ("OXM"), 및 엑센딘, 예를 들어 엑센딘-3 및 엑센딘-4, (f) ANP, BNP, CNP, 및 유로딜라틴, 이들의 전구체 형태 및 이들로부터 유래된 펩티드 등을 비롯한 나트륨배설증가 펩티드, (g) 유로코르틴 패밀리, 및 (h) 뉴로메딘 패밀리, 및 이들의 유사체, 유도체 및 단편 등을 포함하는, 대사 질환 및 장애의 치료 또는 예방에 유용한 펩티드 호르몬을 포함한다. 본원에서 논의한 바와 같이, 본 발명의 성분 펩티드 호르몬은 이들 천연 펩티드 호르몬의 호르몬 활성을 보유하는 유사체 및 유도체도 포함한다. 한 실시양태에서, 이러한 유사체 및 유도체는 표적 호르몬 수용체의 효능제이다. The component peptide hormones are generally selected from the group consisting of (a) an amylin family, such as amylin, adrenomedullin ("ADM"), calcitonin ("CT"), calcitonin gene related peptide ("CGRP"), (C) leptin family such as leptin and leptin-like peptides, (d) pancreatic polypeptide family, such as the pancreatic polypeptide " AFP-6 ", and related peptides, ("PP") and Peptide YY ("PYY"), (e) Peptide hormones derived from incretin and its derivatives, such as the proglucagon gene, such as glucagon, glucagon- GLP-1 "), glucagon-like peptide-2 (" GLP-2 ") and oxytomodulin (" OXM "), and exendins such as exendin-3 and exendin- ANP, BNP, CNP, and eurosyl latin, their precursor forms and peptides derived therefrom, and the like; (g) And (h) includes the neuromedin family, and their analogues, peptide hormones useful in the treatment or prevention of, including derivatives and fragments, etc., metabolic diseases and disorders. As discussed herein, the component peptide hormones of the present invention also include analogs and derivatives that retain the hormonal activity of these natural peptide hormones. In one embodiment, such analogs and derivatives are agonists of a target hormone receptor.

"아밀린"은 1993년 8월 10일 허여된 미국 특허 제5,234,906호 (발명의 영문 명칭: "Hyperglycemic Compositions", 상기 문헌의 내용은 본원에 참고로 포함됨)에 기재된 바와 같이 아밀린이라고 지칭되는, 췌장의 베타 세포로부터 분비되는 인간 펩티드 호르몬 및 그의 종 변이체를 의미한다. 더욱 특히, 아밀린은 영양 흡수에 반응하여 췌장 베타 세포에 의해 인슐린과 함께 정상적으로 동시 분비되는 37개 아미노산의 폴리펩티드 호르몬이다 (예를 들어 문헌 [Koda et al., Lancet 339:1179-1180, 1992] 참조). 이러한 의미에서, "아밀린", "야생형 아밀린" 및 "천연 아밀린", 즉 비변형 아밀린은 서로 바꿔 사용될 수 있다. "Amylin" refers to amylin, as described in U.S. Patent No. 5,234,906, entitled " Hyperglycemic Compositions ", issued August 10,1993, the contents of which are incorporated herein by reference. Quot; means a human peptide hormone secreted from beta cells of the pancreas and its variants. More particularly, amylin is a polypeptide hormone of 37 amino acids normally co-secreted with insulin by pancreatic beta cells in response to nutrient uptake (see, e.g., Koda et al., Lancet 339: 1179-1180, 1992) Reference). In this sense, "amylin "," wild type amylin ", and "native amylin ", i.e., unmodified amylin, can be used interchangeably.

"아드레노메듈린" 또는 "ADM"은 인간 펩티드 호르몬 및 그의 종 변이체를 의미한다. 더욱 특히, ADM는 185개 아미노산의 프리프로호르몬으로부터 연속적인 효소에 의한 절단 및 아미드화에 의해 생성된다. 이 과정으로, 결국에는 52개 아미노산의 생물활성 펩티드가 생성된다."Adrenomedullin" or "ADM" means a human peptide hormone and its variants. More particularly, the ADM is generated by cleavage and amidation by a continuous enzyme from the 185 amino acid pre-pro-hormone. This process eventually produces a biologically active peptide of 52 amino acids.

"칼시토닌" 또는 "CT"는 인간 펩티드 호르몬 및 그의 종 변이체, 예를 들어 연어 칼시토닌 ("sCT")을 의미한다. 더욱 특히, CT는 더 큰 프로호르몬으로부터 절단된 32개 아미노산의 펩티드이다. 이것은 아미노 말단이 고리 형태로 조립되도록 하는 1개의 디술피드 결합을 함유한다. 칼시토닌 프리-mRNA의 선택적 스플라이싱은 칼시토닌 유전자 관련 펩티드를 코딩하는 mRNA를 생성할 수 있고, 이 펩티드는 신경 및 혈관계에서 기능한다고 여겨진다. 칼시토닌 수용체는 클로닝되어 7-막횡단, G 단백질-커플링 수용체 패밀리의 구성원인 것으로 밝혀진 바 있다."Calcitonin" or "CT" refers to human peptide hormone and its variants, such as salmon calcitonin ("sCT"). More particularly, CT is a peptide of 32 amino acids cleaved from a larger pro-hormone. It contains one disulfide bond that allows the amino end to be assembled into a ring form. Selective splicing of calcitonin free-mRNA can produce mRNA encoding a calcitonin gene-related peptide, which is thought to function in the nervous and vascular system. The calcitonin receptor has been cloned and found to be a member of the 7-membrane transgene, the G protein-coupled receptor family.

"칼시토닌 유전자 관련 펩티드" 또는 "CGRP"는 임의의 생리적 형태의 인간 펩티드 호르몬 및 그의 종 변이체를 의미한다."Calcitonin gene related peptide" or "CGRP" means any physiological form of human peptide hormone and its variants.

"인터메딘" 또는 "AFP-6"은 임의의 생리적 형태의 인간 펩티드 호르몬 및 그의 종 변이체를 의미한다."Intermedin" or "AFP-6" refers to any physiological form of human peptide hormone and its species variants.

"콜레시스토키닌" 또는 "CCK"는 인간 펩티드 호르몬 및 그의 종 변이체를 의미한다. 더욱 특히, CCK는 최초로 인간에서 동정된 33개 아미노산 서열이고, 돼지, 래트, 닭, 친칠라, 개 및 인간에서 입증된 것으로 보고된 8개 아미노산 생체내 C-말단 단편 ("CCK-8")을 포함한다. 따라서, 용어 CCK-33은 일반적으로 인간 CCK(1-33)을 나타내는 것이지만, CCK-8 (CCK(26-33), 서열 55)은 달리 명시하지 않는다면 황산화된 것과 비-황산화된 것 모두의 C-말단 옥타펩티드를 총칭하여 의미한다. 추가로, 펜타가스트린 또는 CCK-5는 C-말단 펩티드 CCK(29-33) (서열 209)를 지칭하고, CCK-4는 C-말단 테트라펩티드 CCK(30-33) (서열 208)를 지칭한다. 그러나, 본원에서 사용되는 바와 같이, CCK는 일반적으로 달리 명시하지 않는다면 황산화 및 비-황산화 형태의 CCK-33, CCK-8, CCK-5 및 CCK-4를 비롯하여 호르몬의 모든 천연 변이체를 지칭한다."Colchicystinin" or "CCK" means human peptide hormone and its variants. More particularly, CCK is the first human amino acid sequence identified in 33 amino acids and is a 8 amino acid in vivo C-terminal fragment ("CCK-8") reported to be proven in pigs, rats, chickens, . Thus, the term CCK-33 generally refers to human CCK (1-33), but CCK-8 (CCK (26-33), SEQ ID NO: 55) Quot; C-terminal octapeptide " Further, pentaagastrin or CCK-5 refers to the C-terminal peptide CCK (29-33) (SEQ ID NO: 209) and CCK-4 refers to the C-terminal tetrapeptide CCK (30-33) . However, as used herein, CCK generally refers to all naturally occurring variants of the hormone, including CCK-33, CCK-8, CCK-5 and CCK-4 in sulfated and non-sulfated forms, do.

"렙틴"은 임의의 종의 천연 렙틴, 및 생물학적으로 활성의 D-이소형, 또는 천연 렙틴 및 그의 변이체의 단편, 및 이들의 조합물을 의미한다. 렙틴은 국제 출원 공개 제WO 96/05309호 (상기 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함됨)에 기재된 ob 유전자의 폴리펩티드 생성물이다. 렙틴의 추정 유사체 및 단편은 미국 특허 제5,521,283호, 동 제5,532,336호, PCT/US96/22308 및 PCT/US96/01471 (이들 문헌 각각은 그 전문이 본원에 참고로 포함됨)에 보고되어 있다. "Leptin" refers to any species of native leptin, and biologically active D-isoforms, or fragments of native leptin and its variants, and combinations thereof. Leptin is a polypeptide product of the ob gene described in International Publication No. WO 96/05309, which is hereby incorporated by reference in its entirety. Estimated analogs and fragments of leptin are reported in U.S. Patent Nos. 5,521,283, 5,532,336, PCT / US96 / 22308 and PCT / US96 / 01471, each of which is incorporated herein by reference in its entirety.

"PP"는 임의의 생리적 형태의 인간 췌장 펩티드 폴리펩티드 또는 그의 종 변이체를 의미한다. 따라서, 용어 "PP"는 서열 290에 기재된 전장 인간 36개 아미노산 펩티드 및 PP의 종 변이체, 예를 들어 뮤린(murine), 햄스터, 닭, 소, 래트 및 개 PP를 모두 포함한다. 이러한 의미에서, "PP", "야생형 PP" 및 "천연 PP", 즉 비변형 PP는 서로 바꿔 사용될 수 있다. "PP" means any physiological form of a human pancreatic peptide polypeptide or a variant thereof. Thus, the term "PP" includes allelic variants of the full length human 36 amino acid peptides and PPs described in SEQ ID NO: 290, such as murine, hamster, chicken, cow, rat and dog PP. In this sense, "PP "," wild type PP ", and "natural PP ", i.e., unmodified PP can be used interchangeably.

"PYY"는 임의의 생리적 형태의 인간 펩티드 YY 폴리펩티드 또는 그의 종 변이체를 의미한다. 따라서, 용어 "PYY"는 전장 인간 36 아미노산 펩티드, 및 PYY의 종 변이체, 예를 들어 뮤린, 햄스터, 닭, 소, 래트 및 개 PYY를 포함한다. 이러한 의미에서, "PYY" 및 "야생형 PYY" 및 "천연 PYY", 즉 비변형 PYY는 서로 바꿔 사용될 수 있다. 본 발명의 문맥에서, 본 발명의 PYY 유사체 폴리펩티드에 대해 논의된 모든 변형은 천연 인간 PYY의 36 아미노산 서열을 기초로 한 것이다."PYY" means any physiological form of a human peptide YY polypeptide or a variant thereof. Thus, the term "PYY" includes full length human 36 amino acid peptides, and variants of PYY, such as murine, hamster, chicken, cow, rat and dog PYY. In this sense, "PYY" and "wild type PYY" and "natural PYY ", that is, unmodified PYY can be used interchangeably. In the context of the present invention, all modifications discussed for the PYY analog polypeptides of the present invention are based on the 36 amino acid sequence of native human PYY.

"GLP-1"은 임의의 생리적 형태의 인간 글루카곤-유사 펩티드-1 또는 그의 종 변이체를 의미한다. 용어 "GLP-1"은 전장 인간 GLP-1(1-37) (서열 59)과 관련하여 인간 GLP-1(1-37) (서열 59), GLP-1(7-37) (서열 204) 및 GLP-1(7-36) 아미드 (서열 61), 및 GLP-1의 종 변이체, 예를 들어 뮤린, 햄스터, 닭, 소, 래트 및 개 GLP-1을 포함한다. 이러한 의미에서, "GLP-1", "야생형 GLP-1" 및 "천연 GLP-1", 즉 비변형 GLP-1은 서로 바꿔 사용될 수 있다. "GLP-1" refers to any physiological form of human glucagon-like peptide-1 or its variants. (1-37) (SEQ ID NO: 59), GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 204) in association with the full length human GLP-1 (1-37) And GLP-1 (7-36) amide (SEQ ID NO: 61), and variants of GLP-1 such as murine, hamster, chicken, cow, rat and rat GLP-1. In this sense, "GLP-1", "wild-type GLP-1" and "native GLP-1", ie, unmodified GLP-1 can be used interchangeably.

"GLP-2"는 임의의 생리적 형태의 인간 글루카곤-유사 펩티드-2 또는 그의 종 변이체를 의미한다. 더욱 특히, GLP-2는 소장 및 대장에서 장관 내분비 세포로부터 GLP-1과 함께 동시 분비되는 33개 아미노산의 펩티드이다."GLP-2" refers to any physiological form of human glucagon-like peptide-2 or its variants. More particularly, GLP-2 is a peptide of 33 amino acids that is co-secreted with GLP-1 from intestinal endocrine cells in the small intestine and large intestine.

"OXM"은 임의의 생리적 형태의 인간 옥신토모듈린 또는 그의 종 변이체를 의미한다. 더욱 특히, OXM은 글루카곤의 29 아미노산 서열 및 그 뒤쪽의 8개 아미노산의 카르복시 말단 연장부를 포함하는 37개 아미노산 펩티드이다. "OXM" refers to any physiological form of human oxytomodulin or its variants. More particularly, OXM is a 37 amino acid peptide comprising the 29 amino acid sequence of glucagon and the carboxy terminal extension of the 8 amino acids behind it.

"엑센딘"은 아메리카 독도마뱀 (미국 아리조나에 서식하는 도마뱀) 및 멕시코 구슬 도마뱀의 타액에서 발견된 펩티드 호르몬과 그의 종 변이체를 의미한다. 더욱 특히, 엑센딘-3은 헬로더마 호리둠의 타액에 존재하고, 엑센딘-4는 헬로더마 서스펙툼의 타액에 존재한다 ([Eng, J., et al., J. Biol. Chem., 265:20259-62, 1990], [Eng., J., et al., J. Biol. Chem., 267:7402-05 (1992)]). 엑센딘은 글루카곤-유사 펩티드 패밀리의 몇몇 구성원에 약간의 서열 유사성을 가지며 GLP-1에 대해서는 53％의 최고 동일성을 갖는다 [Goke, et al., J. Biol. Chem., 268:19650-55 (1993)]. 이러한 의미에서, "엑센딘", "야생형 엑센딘" 및 "천연 엑센딘", 즉 비변형 엑센딘은 서로 바꿔 사용될 수 있다. "Exendin" refers to a peptide hormone and its variants found in saliva of the American lizard (lizard in Arizona, USA) and the Mexican bead lizard. More particularly, exendin-3 is present in the saliva of helodoma horidum, and exendin-4 is present in the saliva of heloduma suspektum (Eng, J., et al., J. Biol. Chem. , 265: 20259-62, 1990, Eng., J., et al., J. Biol. Chem., 267: 7402-05 (1992)). Exendin has some sequence similarity to some members of the glucagon-like peptide family and 53% highest identity to GLP-1 [Goke, et al., J. Biol. Chem., 268: 19650-55 (1993)]. In this sense, "exendin", "wild type exendin" and "native exendin", ie, unmodified exendin, can be used interchangeably.

"유로코르틴"은 임의의 생리적 형태의 인간 유로코르틴 펩티드 호르몬 또는 그의 종 변이체를 의미한다. 더욱 특히, Ucn-1, Ucn-2 및 Ucn-3의 3종의 인간 유로코르틴이 존재한다. 예를 들어, 인간 유로코르틴 1은 Asp-Asn-Pro-Ser-Leu-Ser-Ile-Asp-Leu-Thr-Phe-His-Leu-Leu-Arg-Thr-Leu-Leu-Glu-Leu-Ala-Arg-Thr-Gln-Ser-Gln-Arg-Glu-Arg-Ala-Glu-Gln-Asn-Arg-Ile-Ile-Phe-Asp-Ser-Val-NH₂ (서열 294)의 식을 갖는다. 래트에서 유래된 유로코르틴은 Asn2 대신 Asp2이고 Ser4 대신 Pro4라는 2개의 치환 이외에는 이와 동일하다. 인간 Ucn-2는 Ile Val Leu Ser Leu Asp Val Pro Ile Gly Leu Leu Gln Ile Leu Leu Glu Gln Ala Arg Ala Arg Ala Ala Arg Glu Gln Ala Thr Thr Asn Ala Arg Ile Leu Ala Arg Val Gly His Cys (서열 399)의 서열을 갖는다. 인간 Ucn-3은 Phe Thr Leu Ser Leu Asp Val Pro Thr Asn Ile Met Asn Leu Leu Phe Asn Ile Ala Lys Ala Lys Asn Leu Arg Ala Gln Ala Ala Ala Asn Ala His Leu Met Ala Gln Ile (서열 299)의 서열을 갖는다. Ucn-3은 아미드 형태인 것이 바람직하다. 추가의 유로코르틴 및 유사체는 문헌, 예를 들어 미국 특허 제6,214,797호에 기재되어 있다. 유로코르틴 Ucn-2 및 Ucn-3은 음식물 섭취 저해 및 항-고혈압/심근보호/근수축 특성을 보유하며, 본 발명의 하이브리드에 특히 유용하다. 스트레스코핀 (Ucn-3) 및 스트레스코핀-관련 펩티드 (Ucn-2)는 식사/절식 등과 같은 스트레스 자극 후의 만성 HPA 활성화 저해력을 따서 명명된 것으로, CRF 제2형 수용체에 특이적이며 ACTH 방출을 매개하는 CRF-R1을 활성화시키지 않는다. 유로코르틴, 예를 들어 Ucn-2 또는 Ucn-3을 포함하는 하이브리드는 혈관확장에 특히 유용하여 본원에 기재한 바와 같은 심혈관 용도, 예를 들어 CHF에 유용하다. 본 발명의 하이브리드를 함유하는 유로코르틴은 ACTH 방출 자극, 혈관확장 효과로 인한 고혈압, ACTH 상승 이외의 것으로 매개되는 염증, 고열, 식욕 장애, 울혈성 심부전, 스트레스, 불안증 및 건선과 관련된 상태의 치료 및 예방에 특히 유용하다. 이러한 화합물은 또한 항-증식 효과, 예를 들어 암 또는 종양 성장의 치료 또는 예방에도 유용하다. 특히 관심이 있는 것은 나트륨배설증가 펩티드 모듈, 아밀린 패밀리, 엑센딘 패밀리 또는 GLP1 패밀리 모듈과 조합되어 유익한 혈관확장 효과를 제공하여 향상된 심혈관 이점, 예를 들어 CHF 치료를 제공하는 유로코르틴 펩티드 호르몬 모듈이다."Eurocortin" means any physiological form of the human < RTI ID = 0.0 > Eurocortin < / RTI > peptide hormone or variant thereof. More particularly, there are three types of human eurocortins, Ucn-1, Ucn-2 and Ucn-3. For example, the human urocortin 1 is an Asp-Asn-Pro-Ser-Leu-Ser-Ile-Asp-Leu-Thr-Phe-His- Leu-Leu-Arg-Thr- Leu- Ala-Arg-Thr-Gln- Ser-Gln-Arg-Glu-Arg-Ala-Glu-Gln-Asn-Arg-Ile-Ile-Phe-Asp-Ser-Val-NH 2 having the formula (SEQ ID NO: 294) . The eurocortin derived from rat is the same except for two substitutions of Asp2 instead of Asn2 and Pro4 instead of Ser4. Human Ucn-2 is an Ile Val Leu Ser Leu Asp Val Pro Ile Gly Leu Leu Gln Ile Leu Leu Glu Gln Ala Arg Ala Arg Ala Ala Arg Glu Gln Ala Thr Asn Ala Arg Ile Leu Ala Arg Val Gly His Cys (SEQ ID NO: 399) Lt; / RTI > Human Ucn-3 is a Phe Thr Leu Ser Leu Asp Val Pro Thr Asn Ile Met Asn Leu Leu Phe Asn Ile Ala Lys Ala Lys Asn Leu Arg Ala Gln Ala Ala Ala Asn Ala His Leu Met Ala Gln Ile (SEQ ID NO: 299) . It is preferred that Ucn-3 is in the amide form. Additional Eurocortins and analogs are described in the literature, for example, in U.S. Patent No. 6,214,797. Eurocortin Ucn-2 and Ucn-3 have food intake inhibition and anti-hypertension / myocardial protection / muscle contraction properties and are particularly useful in the hybrids of the present invention. Stress cochin (Ucn-3) and stress cochin-related peptide (Ucn-2) are named after chronic HPA activation inhibition after stress stimuli such as eating / fasting, and are specific for CRF type 2 receptor It does not activate mediating CRF-R1. Hybrids, including the Eurocortins, such as Ucn-2 or Ucn-3, are particularly useful for vasodilation and are useful for cardiovascular applications as described herein, e.g., CHF. Eurocortins containing the hybrids of the present invention are useful for the treatment of conditions associated with ACTH-induced stimulation, hypertension due to vasodilatory effects, inflammation mediated by other than ACTH elevation, hyperthermia, anorexia, congestive heart failure, stress, anxiety and psoriasis And prevention. Such compounds are also useful for the treatment or prevention of anti-proliferative effects, such as cancer or tumor growth. Of particular interest are the Eurocortin peptide hormone modules that provide a beneficial vasodilator effect in combination with the sodium excretion enhancing peptide module, the amylin family, the exendin family, or the GLP1 family module to provide improved cardiovascular benefits, to be.

"뉴로메딘"은 뉴로메딘 U 및 S 펩티드, 더욱 특히 이들의 활성 호르몬 서열을 포함하는 뉴로메딘 패밀리의 펩티드를 의미한다. 예를 들어, 천연 활성 인간 뉴로메딘 U 펩티드 호르몬은 Phe Arg Val Asp Glu Glu Phe Gln Ser Pro Phe Ala Ser Gln Ser Arg Gly Tyr Phe Leu Phe Arg Pro Arg Asn (서열 308)의 뉴로메딘-U25, 특히 아미드 형태이다. 돼지 U25는 FKVDEEFQGPIVSQNRRYFLFRPRN (서열 314), 특히 그의 아미드 형태의 서열을 갖는다. 다른 뉴로메딘 U 패밀리 구성원은 하기에서 SWISS-PROT 명칭 및 입력 번호(entry number)로 열거한 것을 포함한다: NEUU_CANFA (P34962), NEUU_CAVPO (P34966), NEUU_CHICK (P34963), NEUU_HUMAN (P48645), NEUU_LITCE (P81872), NEUU_ㅡMOUSE (Q9QXK8), NEUU_PIG (P34964), NEUU_RABIT (P34965), NEUU_RANTE (P20056) 및 NEUU_RAT (P12760). 특히 관심이 있는 것은 이들의 프로세싱된 활성 펩티드 호르몬 및 그의 유사체, 유도체 및 단편이다. 뉴로메딘 U 패밀리에는 여러가지 말단절단 변이체 또는 스플라이스 변이체, 예를 들어 FLFHYSKTQKLGKSNVVEELQSPFASQSRGYFLFRPRN (서열 300)가 포함된다. 뉴로메딘 S 패밀리의 예는 ILQRGSGTAAVDFTKKDHTATWGRPFFLFRPRN (서열 315), 특히 그의 아미드 형태의 서열을 갖는 인간 뉴로메딘 S이다. 뉴로메딘 모듈을 갖는 본 발명의 하이브리드는 식욕 억제 효과를 보유하기 때문에, 비만, 당뇨병, 음식물 섭취의 감소 및 본원에 기재한 다른 관련 상태 및 장애의 치료에 유익한 가치가 있을 것이다. 특히 관심이 있는 것은 아밀린 패밀리 펩티드, 엑센딘 펩티드 패밀리 또는 GLP1 펩티드 패밀리 모듈과 조합된 뉴로메딘 모듈이다."Neuromedin" refers to neuromedin U and S peptides, more particularly peptides of the neuromedin family comprising their active hormone sequences. For example, the naturally occurring human neuromedin U peptide hormone is a neuromedin-U25 of Phe Arg Val Asp Glu Glu Phe Gln Ser Pro Phe Ala Ser Gln Ser Arg Gly Tyr Phe Leu Phe Arg Pro Arg Asn (SEQ ID NO: 308) . Pig U25 has the sequence FKVDEEFQGPIVSQNRRYFLFRPRN (SEQ ID NO: 314), particularly its amide form. Other neuromedic U family members include those listed in the SWISS-PROT name and entry number below: NEUU_CANFA (P34962), NEUU_CAVPO (P34966), NEUU_CHICK (P34963), NEUU_HUMAN (P48645), NEUU_LITCE NEUU_ MOUSE (Q9QXK8), NEUU_PIG (P34964), NEUU_RABIT (P34965), NEUU_RANTE (P20056), and NEUU_RAT (P12760). Of particular interest are their processed active peptide hormones and analogs, derivatives and fragments thereof. The neuromedin U family includes various truncation mutants or splice variants such as FLFHYSKTQKLGKSNVVEELQSPFASQSRGYFLFRPRN (SEQ ID NO: 300). An example of the neuromedin S family is ILQRGSGTAAVDFTKKDHTATWGRPFFLFRPRN (SEQ ID NO: 315), particularly human neuromedin S having a sequence of its amide form. Because the hybrids of the present invention with neuromedin modules possess an appetite suppressant effect, they will be of value in the treatment of obesity, diabetes, decreased food intake and other related conditions and disorders described herein. Of particular interest are neuromedin modules in combination with amylin family peptides, the exendin peptide family, or the GLP1 peptide family module.

본원에서 사용되는 바와 같이, "유사체"는 기준 참조 펩티드(base reference peptide) (예를 들어 PP, PYY, 아밀린, GLP-1, 엑센딘 등)의 서열로부터 유래한 서열을 가지며, 참조 아미노산 서열의 삽입, 치환, 연장 및/또는 결실을 포함하여 바람직하게는 상기 기준 펩티드와 50 또는 55％ 이상의 아미노산 서열 동일성, 더욱 바람직하게는 상기 기준 펩티드와 70％, 80％, 90％ 또는 95％ 이상의 아미노산 서열 동일성을 갖는 펩티드를 지칭한다. 한 실시양태에서, 이러한 유사체는 보존적 또는 비보존적 아미노산 치환 (비-천연 아미노산 및 L-형태와 D-형태 포함)을 포함할 수 있다. As used herein, an "analog" has a sequence derived from a sequence of a base reference peptide (eg, PP, PYY, amylin, GLP-1, exendin, etc.) Preferably 50% or 55% amino acid sequence identity with the reference peptide, more preferably 70%, 80%, 90% or 95% amino acid sequence identity with the reference peptide, including insertion, substitution, extension and / Quot; refers to peptides having sequence identity. In one embodiment, such analogs may comprise conservative or non-conservative amino acid substitutions (including non-natural amino acids and L-forms and D-forms).

"유도체"는 천연 참조 펩티드 또는 유사체의 아미노산 서열을 갖지만, 추가로 그의 아미노산 측쇄기, α-탄소 원자, 말단 아미노기 또는 말단 카르복실산기 중 1개 이상에 화학적 변형을 갖는 분자로서 정의된다. 화학적 변형은 화학적 잔기의 부가, 새로운 결합의 생성 및 화학적 잔기의 제거를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 아미노산 측쇄기에서의 변형은 리신 ε-아미노기의 아실화, 아르기닌, 히스티딘 또는 리신의 N-알킬화, 글루탐산 또는 아스파르트산 카르복실산기의 알킬화 및 글루타민 또는 아스파라진의 탈아미드화를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 말단 아미노의 변형은 데스아미노, N-저급 알킬, N-디-저급 알킬, 구속 알킬 (예를 들어 분지쇄, 시클릭, 융합, 아다만틸) 및 N-아실 변형을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 말단 카르복시기의 변형은 아미드, 저급 알킬 아미드, 구속 알킬 (예를 들어 분지쇄, 시클릭, 융합, 아다만틸), 디알킬 아미드 및 저급 알킬 에스테르 변형을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 저급 알킬은 C₁-C₄ 알킬이다. 추가로, 1개 이상의 측쇄기 또는 말단기는 펩티드 화학 분야의 당업자에게 공지된 보호기로 보호될 수 있다. 아미노산의 α-탄소는 모노메틸화되거나 디메틸화될 수 있다. "Derivative" is defined as a molecule that has the amino acid sequence of a natural reference peptide or analog, but further has a chemical modification to one or more of its amino acid side chain group, alpha-carbon atom, terminal amino group, or terminal carboxylic acid group. Chemical modifications include, but are not limited to, addition of chemical moieties, generation of new bonds and removal of chemical moieties. Modifications in the amino acid side chain groups include, but are not limited to, acylation of the lysine e-amino group, N-alkylation of arginine, histidine or lysine, alkylation of glutamic acid or aspartic acid carboxylic acid groups, and deamidation of glutamine or asparagine . Modifications of the terminal amino include, but are not limited to, deamino, N-lower alkyl, N-di-lower alkyl, constrained alkyl (e.g., branched chain, cyclic, fused, adamantyl) . Modifications of the terminal carboxy group include, but are not limited to, amides, lower alkyl amides, constrained alkyls (e.g., branched, cyclic, fused, adamantyl), dialkyl amides and lower alkyl ester modifications. Lower alkyl is a C ₁ -C ₄ alkyl. In addition, one or more side groups or terminal groups may be protected with a protecting group known to those skilled in the art of peptide chemistry. The a-carbon of the amino acid may be monomethylated or dimethylated.

"효능제"는 천연 인간 참조 펩티드의 생물학적 활성을 유발하는 화합물을 의미하며, 당업계에 공지된 수단, 예를 들어 수용체 결합/경쟁 연구로 평가시에 바람직하게는 상기 참조 펩티드보다 우수한 효력을 갖거나 또는 참조 펩티드에 비해 5배수 규모 (증가 또는 감소), 더욱 바람직하게는 4, 3, 2 또는 1배수 규모 내의 효력을 갖는다. 한 실시양태에서, 상기 용어는 천연 인간 참조 펩티드와 유사한 생물학적 효과를 유발하는 화합물, 예를 들어 (1) 음식물 섭취, 위 공복, 췌장 분비 또는 체중 감소 검정에서 천연 인간 참조 펩티드와 유사한 활성을 갖거나 또는 (2) 참조 수용체 검정 또는 표지된 참조 펩티드를 사용하는 경쟁적 결합 검정에서 특이적으로 결합하는 화합물을 지칭한다. 바람직하게는, 효능제는 이러한 검정에서 1 μM 초과의 친화도, 더욱 바람직하게는 1 내지 5 nM 초과의 친화도로 결합할 것이다. 또다른 실시양태에서, 상기 용어는 당뇨병 또는 당뇨병-관련 상태 또는 장애의 치료시에 생물학적 효과를 유발하는 화합물을 지칭한다. 이러한 효능제는 참조 펩티드의 활성 단편 또는 작은 화학 분자를 포함하는 폴리펩티드를 포함할 수 있다. "Agonist" refers to a compound that elicits the biological activity of a natural human reference peptide and is preferably an agent having an effect greater than that of the reference peptide when assessed by means known in the art, for example, Or have an effect on the scale of 5 times (increase or decrease), more preferably 4, 3, 2 or 1 times the magnitude of the reference peptide. In one embodiment, the term refers to a compound that produces a biological effect similar to a natural human reference peptide, e. G., (1) has an activity similar to a native human reference peptide in a food intake, gastric function, pancreatic secretion, Or (2) a reference receptor or a competitive binding assay using a labeled reference peptide. Preferably, the agonist will bind in this assay with an affinity of greater than 1 [mu] M, more preferably greater than 1 to 5 nM. In another embodiment, the term refers to a compound that elicits a biological effect in the treatment of a diabetes or a diabetes-related condition or disorder. Such an agonist may comprise an active fragment of the reference peptide or a polypeptide comprising a small chemical molecule.

"아미노산" 및 "아미노산 잔기"는 천연 아미노산, 비-천연 아미노산 및 변형 아미노산을 의미한다. 달리 언급되지 않는다면, 아미노산에 대하여 일반적으로 또는 명칭으로 구체적으로 임의로 언급하는 것은, D- 및 L-입체이성질체를 허용하는 구조를 갖는 경우에 이들 2가지 입체이성질체 모두에 대한 언급을 포함한다. 천연 아미노산은 알라닌 (Ala), 아르기닌 (Arg), 아스파라진 (Asn), 아스파르트산 (Asp), 시스테인 (Cys), 글루타민 (Gln), 글루탐산 (Glu), 글리신 (Gly), 히스티딘 (His), 이소류신 (Ile), 류신 (Leu), 리신 (Lys), 메티오닌 (Met), 페닐알라닌 (Phe), 프롤린 (Pro), 세린 (Ser), 트레오닌 (Thr), 트립토판 (Trp), 티로신 (Tyr) 및 발린 (Val)을 포함한다. 비-천연 아미노산은 호모-리신, 호모-아르기닌, 아제티딘카르복실산, 2-아미노아디프산, 3-아미노아디프산, 베타-알라닌, 아미노프로피온산, 2-아미노부티르산, 4-아미노부티르산, 6-아미노카프로산, 2-아미노헵탄산, 2-아미노이소부티르산, 3-아미노이소부티르산, 2-아미노피멜산, 3급-부틸글리신, 2,4-디아미노이소부티르산, 데스모신, 2,2'-디아미노피멜산, 2,3-디아미노프로피온산, N-에틸글리신, N-에틸아스파라진, 호모프롤린, 히드록시리신, 알로-히드록시리신, 3-히드록시프롤린, 4-히드록시프롤린, 이소데스모신, 알로-이소류신, N-메틸알라닌, N-메틸글리신, N-메틸이소류신, N-메틸펜틸글리신, N-메틸발린, 나프트알라닌, 노르발린, 노르류신, 오르니틴, 펜틸글리신, 피페콜산 및 티오프롤린을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 추가의 비-천연 아미노산은 가역적으로 또는 비가역적으로 화학적으로 차단되거나, 예를 들어 측쇄 관능기가 또다른 관능기로 화학적 변형된 N-메틸화 D- 및 L-아미노산 또는 잔기와 같이 N-말단 아미노기 또는 측쇄기가 화학적으로 변형된 변형 아미노산 잔기를 포함한다. 예를 들어, 변형된 아미노산은 메티오닌 술폭시드; 메티오닌 술폰; 아스파르트산-(베타-메틸 에스테르), 아스파르트산의 변형 아미노산; N-에틸글리신, 글리신의 변형 아미노산; 또는 알라닌 카르복스아미드, 알라닌의 변형 아미노산을 포함한다. 포함될 수 있는 추가의 잔기는 문헌 [Sandberg et al., J. Med. Chem. 41:2481-91, 1998]에 기재되어 있다. "Amino acid" and "amino acid residue" refer to natural amino acids, non-natural amino acids and modified amino acids. Unless specifically stated otherwise specifically, any reference to amino acids in general or by name specifically includes reference to both of these two stereoisomers when having a structure permitting D- and L-stereoisomers. Natural amino acids include alanine (Ala), arginine (Arg), asparagine (Asn), aspartic acid (Asp), cysteine (Cys), glutamine (Gln), glutamic acid (Glu), glycine (Gly), histidine Isoleucine (Ile), leucine (Leu), lysine (Lys), methionine (Met), phenylalanine (Phe), proline, serine, threonine, tryptophan (Trp), tyrosine Valine (Val). The non-natural amino acids include homo-lysine, homo-arginine, azetidinecarboxylic acid, 2-aminoadipic acid, 3-aminoadipic acid, beta-alanine, aminopropionic acid, 2-aminobutyric acid, 4- 2-aminoisobutyric acid, 2-aminoisobutyric acid, 2-aminopimelic acid, tert-butylglycine, 2,4-diaminoisobutyric acid, desmothin, 2, 2-diaminopimelic acid, 2,3-diaminopropionic acid, N-ethylglycine, N-ethylasparazine, homoproline, hydroxylysine, allo -hydroxylysine, 3-hydroxyproline, But are not limited to, proline, isodecomycin, allo-isoleucine, N-methylalanine, N-methylglycine, N-methylisoleucine, N-methylpentylglycine, N-methylvaline, naphthalanine, norvaline, norleucine, ornithine, But are not limited to, glycine, piperoc acid, and thioproline. Additional non-natural amino acids may be reversibly or irreversibly chemically blocked, for example, N-methylated D- and L-amino acids or residues in which the side chain functional group is chemically modified with another functional group, Lt; RTI ID = 0.0 > chemically < / RTI > modified amino acid residue. For example, modified amino acids include methionine sulfoxide; Methionine sulfone; Aspartic acid - (beta-methyl ester), modified amino acids of aspartic acid; Modified amino acids of N-ethylglycine, glycine; Or alanine carboxamide, a modified amino acid of alanine. Additional residues that may be included are described in Sandberg et al., J. Med. Chem. 41: 2481-91, 1998.

본원에서 사용되는 바와 같이, "5 Apa"는 5 아미노-펜타노일을 의미하고, "12 Ado"는 12-아미노 도데카노일을 의미하고, "PEG(8)"은 3,6-디옥시옥타노일을 의미하며, "PEG(13)"은 1-아미노-4,7,10-티옥사-13-트리데칸아민 숙신이모일을 의미한다. As used herein, "5 Apa" means 5 amino-pentanonyl, "12 Ado" means 12-aminododecanoyl, "PEG (8)" means 3,6- "PEG (13) " means 1-amino-4,7,10-thioxa- 13-tridecanaminesuccinimoyl.

본원에서 논의한 바와 같이, 천연 성분 펩티드 호르몬 및 그의 유사체 및 유도체는 당업계에 공지되어 있다. 참고로, 여러가지 천연 성분 펩티드 호르몬의 서열을 하기 표 1에 제공한다.As discussed herein, natural component peptide hormones and analogs and derivatives thereof are well known in the art. For reference, the sequences of various natural peptide hormones are provided in Table 1 below.

[표 1][Table 1]

이들 펩티드는 생리적으로 발현될 때 C-말단에서 아미드화되는 것이 일반적이지만, 본 발명의 목적상 그럴 필요는 없다. 즉, 이들 펩티드 뿐만이 아니라 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단은 유리 -OH기 또는 -NH₂기를 가질 수 있다. 이들 펩티드에는 또한 다른 번역후 변형이 일어날 수도 있다. 당업자는 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드가 또한 N-말단 메티오닌 잔기로 구성될 수도 있음을 이해할 것이다. These peptides are generally amidated at the C-terminus when expressed physiologically, but need not be for the purposes of the present invention. That is, not only these peptides but also the C-terminus of the hybrid polypeptide of the present invention may have a free -OH group or -NH ₂ group. These peptides may also undergo post-translational modifications. Those skilled in the art will appreciate that the hybrid polypeptides of the invention may also be comprised of N-terminal methionine residues.

본 발명에 사용되는 예시적인 펩티드 모듈은, 아펠린 36 및 아펠린 13의 2가지 형태로 존재하며 이들 2가지 모두가 AJP 수용체에서 활성인 아펠린 (LVQPRGSRNGPGPWQGGRRKFRRQRPRLSHKGPMPF-OH (서열 316) 및 pERPRLSHKGPMPF-OH (서열 317)), PRP31 및 PRP20의 2가지 형태로 존재하며 GPR10에서 동등하게 활성인 프롤락틴 방출 펩티드 (SRTHRHSMEIRTPDINPAWYASRGIRPVGRF-NH₂ (서열 318) 및 TPDINPAWYASRGIRPVGRF-NH₂ (서열 319)), 대형 가스트린 및 소형 가스트린으로 존재하지만 활성의 대부분을 펜타가스트린의 잔기 내에 보유하는 가스트린 (QLGPQGPPHLVADPSKKQGPWLEEEEEAYGWMDF-NH₂ (서열 320), pEGPWLEEEEEAYGWMDF-NH₂ (서열 321), 베타-AWMDF-NH₂ (서열 322)), CCK33 또는 CCK8 (중추 vs. 말초, KAPSGRMSIVKNLQNLDPSHRISDRDYMGWMDF-NH₂ (서열 323), DYMGWMDF-NH₂ (서열 55))로 존재하는 CCK, 코르티스타틴 17 또는 코르티스타틴 29 (QEGAPPQQSARRDRMPCRNFFWKTFSSCK-OH (서열 324) 및 DRMPCRNFFWKTFSSCK-OH (서열 325))로 존재하는 코르티스타틴, 소마토스타틴 14 또는 소마토스타틴 28 (SANSNPAMAPRERKAGCKNFFWKTFTSC-OH (서열 326), AGCKNFFWKTFTSC-OH (서열 327))로 존재하는 소마토스타틴, C-말단 10개 아미노산 서열이 활성의 대부분을 보유하는 GRP (VPLPAGGGTVLTKMYPRGNHWAVGHLM-NH₂ (서열 328), GNHWAVGHLM-NH₂ (서열 329)), C-말단 10개 아미노산 영역이 활성의 대부분을 보유하는 뉴로메딘 B (LSWDLPEPRSRASKIRVHSRGNLWATGHFM-NH₂ (서열 330), GNLWATGHFM-NH₂ (서열 331)), C-말단 9개 아미노산 영역이 활성의 대부분을 보유하는 뉴로메딘 S (ILQRGSGTAAVDFTKKDHTATWGRPFFLFRPRN-NH₂ (서열 315), PFFLFRPRN-NH₂ (서열 332)), C-말단 9개 아미노산 영역이 활성의 대부분을 보유하는 뉴로메딘 U (FRVDEEFQSPFASQSRGYFLFRPRN-NH₂ (서열 308), GYFLFRPRN-NH₂ (서열 307)), 긴 형태와 짧은 형태로 존재하는 뉴로텐신 (KIPYILKRQLYENKPRRPYIL-OH (서열 333), QLYENKPRRPYIL-OH) (서열 334), 활성이 주로 C-말단에 존재하는 Kiss-1 (GTSLSPPPESSGSPQQPGLSAPHSRQIPAPQGAVLVQREKDLPNYNWNSFGLRF-NH₂ (서열 335), EKDLPNYNWNSFGLRF-NH₂ (서열 336)), C-말단 단편이 활성을 보유하는 RF-아미드-3 (SAGATANLPLRSGRNMEVSLVRRVPNLPQRF-NH₂ (서열 337), VPNLPQRF-NH₂ (서열 338)), 디노르핀 B (리모르핀)의 대형 디노르핀 (A)로 존재하는 디노르핀 (YGGFLRRIRPKLKWDNQKRYGGFLRRQFKVVT-OH (서열 339) 및 YGGFLRRQFKVVT-OH (서열 340)), C-말단 단편이 Y2 수용체에서 활성인 PYY (YPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY-NH₂ (서열 57), SLRHYLNLVTRQRY-NH₂ (서열 341)), 7-47 영역이 활성을 보유하는 AFP-6 (TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY-NH₂ (서열 51), VGCVLGTCQVQNLS HRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY-NH₂ (서열 52)), 아드레노메듈린, 칼시토닌 및 CGRP 등을 비롯한 아밀린 패밀리, 활성에 C-말단 아미드가 일반적으로 요구되고 N-말단 연장을 허용할 수 있는 옥시토신 등을 비롯한 N-말단 연장가능한 펩티드 모듈 (및 이들의 유사체 및 단편)을 추가로 포함한다.Exemplary peptide modules for use in the present invention exist in two forms, Apelin 36 and Apelin 13, both of which are active at the AJP receptor, such as Apellin (LVQPRGSRNGPGPWQGGRRKFRRQRPRLSHKGPMPF-OH (SEQ ID NO: 316) and pERPRLSHKGPMPF-OH SEQ ID NO: 317)), present in the two types of PRP31 and PRP20 and equally active prolactin release peptide (SRTHRHSMEIRTPDINPAWYASRGIRPVGRF-NH ₂ (SEQ ID NO: 318 in the GPR10) and TPDINPAWYASRGIRPVGRF-NH ₂ (SEQ ID NO: 319)), the big gastrin and small gastrin gastrin present but that retains substantially all the activity in the residue of penta gastrin (QLGPQGPPHLVADPSKKQGPWLEEEEEAYGWMDF-NH ₂ (SEQ ID NO: 320), pEGPWLEEEEEAYGWMDF-NH ₂ (SEQ ID NO: 321), beta -AWMDF-NH ₂ (SEQ ID NO: 322)), CCK33 or CCK8 (central vs. peripheral, KAPSGRMSIVKNLQNLDPSHRISDRDYMGWMDF-NH ₂ (SEQ ID NO: 323), DYMGWMDF-NH ₂ (SEQ ID NO: 55)) CCK, Cortina statin present at 17 or Cortina statins 29 (QEGAPPQQSARRDRMPCRNFFWKTFSSCK-OH (SEQ ID NO: (SEQ ID NO: 324) and DRMPCRNFFWKTFSSCK-OH (SEQ ID NO: 325)) present in the form of cortistatin, somatostatin 14 or somatostatin 28 (SANSNPAMAPRERKAGCKNFFWKTFTSC-OH (SEQ ID NO: 326), AGCKNFFWKTFTSC- GRP which sequence retains substantially all the active (VPLPAGGGTVLTKMYPRGNHWAVGHLM-NH ₂ (SEQ ID NO: 328), GNHWAVGHLM-NH ₂ (SEQ ID NO: 329)), neuromedin B (NH-LSWDLPEPRSRASKIRVHSRGNLWATGHFM to the C- terminal 10 amino acid region retains substantially all of the active ₂ (SEQ ID NO: 330), GNLWATGHFM-NH ₂ (SEQ ID NO: 331)), C- terminal 9 neuromedin S to the amino acid region retains substantially all the active (ILQRGSGTAAVDFTKKDHTATWGRPFFLFRPRN-NH ₂ (SEQ ID NO: 315), PFFLFRPRN-NH ₂ (SEQ ID NO: 332 )), C- terminal nine amino acid region neuromedin that retains substantially all the active U (FRVDEEFQSPFASQSRGYFLFRPRN-NH ₂ (SEQ ID NO: 308), GYFLFRPRN-NH ₂ (SEQ ID NO: 307)), neurotensin present in long form and short form (KIPYILKRQLYENKPRRPYIL-OH 333), QLYENKPRRPYIL-OH) (SEQ ID NO: 334), Kiss-1 (GTSLSPPPESSGSPQQPGLSAPHSRQIPAPQGAVLVQREKDLPNYNWNSFGLRF -NH , which is active predominantly in the C- terminal ₂ (SEQ ID NO: 335), EKDLPNYNWNSFGLRF-NH ₂ (SEQ ID NO: 336)), C- terminal fragment is active RF- amide -3 (SAGATANLPLRSGRNMEVSLVRRVPNLPQRF-NH ₂ (SEQ ID NO: 337), VPNLPQRF-NH ₂ (SEQ ID NO: 338)) having an, Dino reupin B (Lee morphine) Dino present in a large gavel reupin (a) of reupin (YGGFLRRIRPKLKWDNQKRYGGFLRRQFKVVT- OH (SEQ ID NO: 339) and YGGFLRRQFKVVT-OH (SEQ ID NO: 340)), the C- terminal fragment of activity at Y2 receptors PYY (YPIKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNLVTRQRY-NH ₂ (SEQ ID NO: 57), SLRHYLNLVTRQRY-NH ₂ (SEQ ID NO: 341)), region 7-47 having an active _{AFP-6 (TQAQLLRVGCVLGTCQVQNLSHRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY-NH 2} ( SEQ ID NO: _{51), VGCVLGTCQVQNLS HRLWQLMGPAGRQDSAPVDPSSPHSY-NH 2} ( SEQ ID NO: 52)), Adreno methoxy dyulrin, amylin family, including calcitonin and CGRP, etc., C- terminal amides on the active Lt; RTI ID = 0.0 > N-terminal < / RTI > N- terminal extension peptide modules including such as oxytocin, which further comprises a (and their analogues and fragments).

본 발명에 사용되는 예시적인 펩티드 모듈은, 엔도텔린 I, II 및 III: ETI (CSCSSLMDKECVYFCHLDIIWVNTPEHVVPYGLGSPRS-OH (서열 342), CSCSSLMDKECVYFCHLDIIW-OH (서열 343)), ETII (CSCSSWLDKECVYFCHLDIIWVNTPEQTAPYGL GNPP-OH (서열 344), CSCSSWLDKECVYFCHLDIIW-OH (서열 345)) 및 ETIII (CTCFTYKDKE CVYYCHLDIIWINTPEQTVPYGLSNYRGSFR-NH₂ (서열 346), CTCFTYKDKECVYYCHLDIIW-OH (서열 347)), 활성이 주로 처음 10개 잔기에 존재하는 그렐린 (GSSFLSPEHQRVQQRKESKKPPAK LQP-OH (서열 348), GSSFLSPEHQ-OH (서열 349)), 글루카곤, 예를 들어 글루카곤-유사 활성을 갖는 C-말단 연장된 글루카곤인 옥신토모듈린 (HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFV QWLMNTKRNRNNIA-OH (서열 350), HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT-OH (서열 351)), 활성이 C-말단 아미드와 함께 보유되거나 C-말단 아미드 없이 보유되는 GLP-1/GLP-2, GIP1-42 및 GIP1-30의 2가지 형태로 순환하며 둘다 GIP 수용체에서 완전 활성인 GIP (YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFVNWLLAQKGKKNDWKHNITQ-OH (서열 352), YAEGTFISDYSIAM DKIHQQDFVNWLLAQK-NH₂ (서열 353)), NPW23 및 NPW30으로 존재하며 GPR7 및 GPR8에서 동등하게 활성인 신경펩티드 W (WYKHVASPRYHTVGRAAGLLMGLRRSPYLW-OH (서열 354), WYKHVASPRYHTVGRAAGLLMGL-OH (서열 355)), PACAP27 및 PACAP38의 2가지 형태로 존재하는 PACAP (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNK-NH₂ (서열 356), HSDGIFTDS YSRYRKQMAVKKYLAAVL-NH₂ (서열 357)), PHI 및 PHV (HADGVFTSDFSKLLGQLSAKKYLESLMGKR VSSNISEDPVPV-OH (서열 358), HADGVFTSDFSKLLGQLSAKKYLESLM-NH₂ (서열 359)), GRF29 및 GRF40의 2가지 형태로 존재하는 GRF (YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSRQQGESNQERG ARARL-NH₂ (서열 360), YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMS-OH (서열 361)), 전장 PTH 1-84의 활성을 보유하는 PTH 1-34 및 1-37 형태 (SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHN FVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKSQ (서열 362), SVSEIQLMHNLGK HLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVAL-OH (서열 363), SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF-OH (서열 364)), 1-36이 전장 1-86의 활성을 보유하는 PTH-RP (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRR FFLHHLIAEIHTAEIRATSEVSPNSKPSPNTKNHPVRFGSDDEGRYLTQETNKVETYKEQPLKTPGKKKKGKP-NH₂ (서열 365), AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAEI-OH (서열 366)), 더 짧은 감마-MSH1 및 더 긴 감마-MSH3가 유사한 활성을 갖는 감마-MSH (YVMGHFRWDRFGRRNSSSSGS SGAGQ-OH (서열 367), YVMGHFRWDRF-NH₂ (서열 368)), 알파-MSH가 ACTH의 활성 부분인 MSH (SYSMEHFRWGKPVGKKRRPVKVYPNGAEDESAEAFPLEF-OH (서열 369), SYSMEHFRWGKPV-NH₂ (서열 370)), 및 Α, 델타, 및 γ 엔도르핀이 더 큰 β 엔도르핀의 활성 서브펩티드인 엔도르핀 (YGGFMTSEKSQTPLVTLFKNAIIKNAYKKGE-OH (서열 371), YGGFMTSEKSQTPLVTLFKNAIIKNAY-OH (서열 372), YGGFMTSEKSQTPLVTL-OH (서열 373), YGGFMTSEKSQTPLVT-OH (서열 374)) 등을 비롯한 C-말단 연장가능한 펩티드 모듈을 추가로 포함한다.Exemplary peptide modules for use in the present invention include endothelins I, II, and III: ETI (CSCSSLMDKECVYFCHLDIIWVNTPEHVVPYGLGSPRS-OH (SEQ ID NO: 342), CSCSSLMDKECVYFCHLDIIW-OH (SEQ ID NO: 343)), ETII (CSCSSWLDKECVYFCHLDIIWVNTPEQTAPYGL GNPP-OH (SEQ ID NO: 344), CSCSSWLDKECVYFCHLDIIW -OH (SEQ ID NO: 345)) and ETIII (CTCFTYKDKE CVYYCHLDIIWINTPEQTVPYGLSNYRGSFR-NH ₂ (SEQ ID NO: 346), CTCFTYKDKECVYYCHLDIIW-OH (SEQ ID NO: 347)), ghrelin that activity is predominantly in the first 10 residues (GSSFLSPEHQRVQQRKESKKPPAK LQP-OH (SEQ ID NO: 348), (HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFV QWLMNTKRNRNNIA-OH (SEQ ID NO: 350), HSQGTFTSDYSKYLDSRRAQDFVQWLMNT-OH (SEQ ID NO: 351)), which is a C-terminal extended glucagon having a glucagon-like activity, GSSFLSPEHQ- GIP (YAEGTFISDYSIAMDKIHQQDFV), which circulates in two forms of GLP-1 / GLP-2, GIP1-42 and GIP1-30, both of which are retained with C-terminal amide or without C- NWLLAQKGKKNDWKHNITQ-OH (SEQ ID NO: _{352), YAEGTFISDYSIAM DKIHQQDFVNWLLAQK-NH 2} ( SEQ ID NO: 353)), NPW23 and the presence and activity of neuropeptide W (WYKHVASPRYHTVGRAAGLLMGLRRSPYLW-OH (SEQ ID NO: 354) equally GPR7 and GPR8 NPW30, WYKHVASPRYHTVGRAAGLLMGL-OH (SEQ ID NO: 355)), PACAP27 and two types exist PACAP (HSDGIFTDSYSRYRKQMAVKKYLAAVLGKRYKQRVKNK-NH ₂ (SEQ ID NO: 356, which in the _{PACAP38), HSDGIFTDS YSRYRKQMAVKKYLAAVL-NH 2} ( SEQ ID NO: 357)), PHI and PHV (HADGVFTSDFSKLLGQLSAKKYLESLMGKR VSSNISEDPVPV-OH (SEQ ID NO: 358), HADGVFTSDFSKLLGQLSAKKYLESLM -NH ₂ (SEQ ID NO: 359)), GRF (YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMSRQQGESNQERG ARARL -NH 2 ( SEQ ID NO: 360) present in the two types of GRF29 and GRF40, YADAIFTNSYRKVLGQLSARKLLQDIMS-OH (SEQ ID NO: 361)), to retain the activity of full-length PTH 1-84 PTH 1-34 and 1-37 forms (SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHN FVALGAPLAPRDAGSQRPRKKEDNVLVESHEKSLGEADKADVNVLTKAKSQ (SEQ ID NO: 362), SVSEIQLMHNLGK HLNSMERVEWLRKKLQDVHNFVAL-OH (SEQ ID NO: 363), SVSEIQLMHNLGKHLNSMERVEWLRKKLQDVHNF-OH 364)), the 1-36 PTH-RP (AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRR FFLHHLIAEIHTAEIRATSEVSPNSKPSPNTKNHPVRFGSDDEGRYLTQETNKVETYKEQPLKTPGKKKKGKP-NH 2 for holding the activity of the full-length 1-86 (SEQ ID NO: 365), AVSEHQLLHDKGKSIQDLRRRFFLHHLIAEIHTAEI-OH (SEQ ID NO: 366)), shorter and longer gamma -MSH1 gamma- gamma MSH3 has a similar activity -MSH (YVMGHFRWDRFGRRNSSSSGS SGAGQ-OH (SEQ ID NO: 367), YVMGHFRWDRF-NH ₂ (SEQ ID NO: 368)), alpha -MSH are of MSH (SYSMEHFRWGKPVGKKRRPVKVYPNGAEDESAEAFPLEF-OH (SEQ ID NO: 369 active part of the ACTH), SYSMEHFRWGKPV- NH ₂ (SEQ ID nO: 370)), and Α, delta, and γ endorphins larger β endorphin active sub-peptides of endorphins (YGGFMTSEKSQTPLVTLFKNAIIKNAYKKGE-OH (SEQ ID nO: 371) of, YGGFMTSEKSQTPLVTLFKNAIIKNAY-OH (SEQ ID nO: 372), YGGFMTSEKSQTPLVTL-OH (SEQ ID nO: 373 ), YGGFMTSEKSQTPLVT-OH (SEQ ID NO: 374)) and the like, as well as a C-terminal extendable peptide module.

예를 들어 멜라노코르틴은 프로-오피오멜라노코르틴 유전자에서 유래된 펩티드로서 예를 들어 알파-멜라닌세포-자극 호르몬 (알파-MSH) 및 부신피질자극 호르몬 (ACTH) 등이 있고, MC1R 내지 MC5R의 5종의 멜라노코르틴 수용체가 공지되어 있다. MC4R은 에너지 균형 및 비만에서 소정의 역할을 하는 것으로 여겨진다. 예를 들어 문헌 ([Anderson et al., Expert Opin. Ther. Patents 11:1583-1592 (2001)], [Speake et al., Expert Opin. Ther. Patents 12:1631-1638 (2002)], [Bednarek et al., Expert Opin. Ther. Patents 14:327-336 (2004)])을 참조한다. For example, melanocortin is a peptide derived from the pro-opio-melanocortin gene such as alpha-melanocyte-stimulating hormone (alpha-MSH) and adrenocorticotropic hormone (ACTH), and MC1R to MC5R Lt; RTI ID = 0.0 > melanocortin < / RTI > receptors are known. MC4R is thought to play a role in energy balance and obesity. Patents 11: 1583-1592 (2001), Speake et al., Expert Opin. Ther. Patents 12: 1631-1638 (2002), [ Bednarek et al., Expert Opin. Ther. Patents 14: 327-336 (2004)).

상기 성분 펩티드 호르몬의 유사체는 당업계에 공지되어 있지만, 일반적으로는 이러한 성분 펩티드 호르몬의 아미노산 서열에 대한 변형, 예를 들어 치환, 결실 및 삽입 및 이들의 임의의 조합을 포함한다. 치환, 삽입 및 결실은 N-말단 또는 C-말단 종결부에서 발생할 수도 있고, 또는 성분 펩티드 호르몬의 내부에서 발생할 수도 있다. 바람직한 측면에서, 본 발명의 성분 펩티드 호르몬의 유사체는 "비-필수" 아미노산 잔기의 1개 이상의 변형을 포함한다. 본 발명의 문맥에서, "비-필수" 아미노산 잔기는 생성되는 유사체의 성분 펩티드 호르몬 수용체 효능제 활성을 파괴하거나 실질적으로 감소시키지 않으면서 단편, 예를 들어 성분 펩티드 호르몬 단편의 천연 인간 아미노산 서열에서 변경될 수 있는, 즉 결실되거나 치환될 수 있는 잔기이다.Analogs of the component peptide hormones are known in the art, but generally include modifications to the amino acid sequence of such component peptide hormones, such as substitution, deletion and insertion, and any combination thereof. Substitution, insertion and deletion may occur at the N-terminal or C-terminal terminus, or may occur within the component peptide hormone. In a preferred aspect, analogs of the component peptide hormones of the invention comprise one or more variants of "non-essential" amino acid residues. In the context of the present invention, "non-essential" amino acid residues can be altered in the natural human amino acid sequence of a fragment, e. G., A component peptide hormone fragment, without destroying or substantially reducing the component peptide hormone receptor agonist activity of the resulting analog. That is, a residue that can be deleted or substituted.

바람직한 치환은 보존적 아미노산 치환을 포함한다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄 또는 물리화학적 특성 (예를 들어 정전, 수소 결합, 등입체성(isosteric), 소수성 특징)을 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에 공지되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄 (예를 들어 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄 (예를 들어 글리신, 아스파라진, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 메티오닌, 시스테인), 비-극성 측쇄 (예를 들어 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판), β-분지된 측쇄 (예를 들어 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. Preferred substitutions include conservative amino acid substitutions. A "conservative amino acid substitution" is one in which an amino acid residue is replaced with an amino acid residue having similar side chain or physicochemical properties (eg, electrostatic, hydrogen bonding, isosteric, hydrophobic characteristics). Families of amino acid residues having similar side chains are known in the art. These families include, but are not limited to, basic side chains (eg, lysine, arginine, histidine), acidic side chains (eg, aspartic acid, glutamic acid), nonpowering side chains (eg, glycine, asparagine, glutamine, serine, threonine, tyrosine, methionine , Cysteine), non-polar side chains (e.g. alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, tryptophan), beta-branched side chains (e.g. threonine, valine, isoleucine) and aromatic side chains , Phenylalanine, tryptophan, histidine).

본 발명은 또한 성분 펩티드 호르몬의 유도체에 관한 것이다. 이러한 유도체는 1개 이상의 수용성 중합체 분자, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 ("PEG") 또는 다양한 길이의 지방산 쇄 (예를 들어 스테아릴, 팔미토일, 옥타노일 등)에 접합되거나 폴리아미노산, 예를 들어 폴리-his, 폴리-arg, 폴리-lys 및 폴리-ala이 부가된 성분 펩티드 호르몬 및 이들의 유사체를 포함한다. 성분 펩티드 호르몬 또는 그의 유사체의 변형은 또한 소분자 치환체, 예를 들어 단쇄 알킬 및 구속 알킬 (예를 들어 분지쇄, 시클릭, 융합, 아다만틸) 및 방향족기를 포함할 수도 있다. 수용성 중합체 분자의 분자량은 바람직하게는 약 500 내지 약 20,000 달톤의 범위일 것이다.The present invention also relates to derivatives of the component peptide hormones. Such derivatives may be conjugated to one or more water soluble polymer molecules, such as polyethylene glycol ("PEG") or fatty acid chains of various lengths (e.g., stearyl, palmitoyl, octanoyl, -his, poly-arg, poly-lys and poly-aa-added component peptide hormones and analogs thereof. Variations of the component peptide hormones or analogues thereof may also include small molecule substituents such as short chain alkyl and constrained alkyl (e.g., branched chain, cyclic, fused, adamantyl) and aromatic groups. The molecular weight of the water soluble polymer molecule will preferably range from about 500 to about 20,000 daltons.

이러한 중합체-접합 및 소분자 치환체 변형은 하이브리드 폴리펩티드의 서열 내의 아미노산 잔기의 N-말단 또는 C-말단에서 또는 측쇄에서 1회 발생할 수 있다. 별법으로, 하이브리드 폴리펩티드를 따라 유도체화의 다중 부위가 존재할 수 있다. 1개 이상의 아미노산을 리신, 아스파르트산, 글루탐산 또는 시스테인으로 치환하는 것은 추가의 유도체화 부위를 제공할 수 있다. 예를 들어 미국 특허 제5,824,784호 및 동 제5,824,778호를 참조한다. 바람직하게는, 하이브리드 폴리펩티드는 1개, 2개 또는 3개의 중합체 분자에 접합될 수 있다. Such polymer-conjugated and small molecule substitution modifications can occur at the N-terminus or C-terminus of the amino acid residue in the sequence of the hybrid polypeptide or one time in the side chain. Alternatively, multiple sites of derivatization along the hybrid polypeptide may be present. Substitution of one or more amino acids with lysine, aspartic acid, glutamic acid, or cysteine may provide additional derivatization sites. See, for example, U.S. Patent Nos. 5,824,784 and 5,824,778. Preferably, the hybrid polypeptide can be conjugated to one, two or three polymer molecules.

수용성 중합체 분자는 바람직하게는 아미노, 카르복실 또는 티올기에 연결되고, N-말단 또는 C-말단에 의해 또는 리신, 아스파르트산, 글루탐산 또는 시스테인의 측쇄에서 연결될 수 있다. 별법으로, 수용성 중합체 분자는 디아민 및 디카르복실기와 연결될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 리신 아미노산 상의 엡실론 아미노기를 통해 1개, 2개 또는 3개의 PEG 분자에 접합된다.The water soluble polymer molecule is preferably linked to an amino, carboxyl or thiol group and can be attached at the N-terminal or C-terminal or at the side chain of lysine, aspartic acid, glutamic acid or cysteine. Alternatively, the water soluble polymer molecule may be linked with a diamine and a dicarboxylic group. In a preferred embodiment, the hybrid polypeptides of the invention are conjugated to one, two or three PEG molecules via an epsilon amino group on the lysine amino acid.

또한, 본 발명의 유도체는 1개 이상의 아미노산 잔기에 대한 화학적 변경을 갖는 성분 펩티드 호르몬 또는 유사체를 포함한다. 이러한 화학적 변경은 아미드화, 글리코실화, 아실화, 황산화, 인산화, 아세틸화 및 고리화를 포함한다. 화학적 변경은 PPF 하이브리드 폴리펩티드의 서열 내의 아미노산 잔기의 N-말단 또는 C-말단에서 또는 측쇄에서 1회 발생할 수 있다. 한 실시양태에서, 이들 펩티드의 C-말단은 유리 -OH기 또는 -NH₂기를 가질 수 있다. 또다른 실시양태에서, N-말단 종결부는 이소부틸옥시카르보닐기, 이소프로필옥시카르보닐기, n-부틸옥시카르보닐기, 에톡시카르보닐기, 이소카프로일기 (isocap), 옥타닐기, 옥틸 글리신기 (G(Oct)) 또는 8-아미노옥탄산기로 캡핑(capping)될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 고리화는 디술피드 브릿지(bridge)의 형성을 통해 수행될 수 있다. 별법으로, 하이브리드 폴리펩티드를 따라 화학적 변경된 다중 부위가 존재할 수 있다.In addition, derivatives of the invention include component peptide hormones or analogs that have chemical modifications to one or more amino acid residues. Such chemical modifications include amidation, glycosylation, acylation, sulfation, phosphorylation, acetylation and cyclization. The chemical modification may occur at the N-terminal or C-terminus of the amino acid residue in the sequence of the PPF hybrid polypeptide or in the side chain one time. In one embodiment, C- terminus of these peptides may have an advantage -OH group or -NH _2. In another embodiment, the N-terminal terminus is an isobutyloxycarbonyl group, an isopropyloxycarbonyl group, an n-butyloxycarbonyl group, an ethoxycarbonyl group, an isocapyl group, an octanyl group, an octylglycine group (G (Oct) Or capped with an 8-amino octanoic acid group. In a preferred embodiment, the cyclization can be carried out through the formation of a disulfide bridge. Alternatively, multiple sites chemically modified along the hybrid polypeptide may be present.

아밀린Amylin 패밀리family

본원에서 논의한 바와 같이, 본 발명에 유용한 성분 펩티드 호르몬은 아밀린, 아드레노메듈린 ("ADM"), 칼시토닌 ("CT"), 칼시토닌 유전자 관련 펩티드 ("CGRP"), 인터메딘 ("AFP-6"으로도 알려져 있음) 및 관련 펩티드를 비롯한 아밀린 패밀리 펩티드 호르몬을 포함한다. 천연 아밀린 패밀리 펩티드 호르몬 및 기능적 펩티드 유사체 및 유도체는 당업계에 공지되어 있다. 바람직한 특정 천연 펩티드, 펩티드 유사체 및 유도체가 본원에 기재되어 있다. 그러나, 당업계에 공지된 호르몬 활성을 나타내는 임의의 공지된 아밀린 패밀리 펩티드가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있음을 이해해야 한다.As discussed herein, the component peptide hormones useful in the present invention include amylin, adrenomedullin ("ADM"), calcitonin ("CT"), calcitonin gene related peptide ("CGRP" 6 "), and related peptides. Amylin family peptide hormones include, Natural amylin family peptide hormones and functional peptide analogs and derivatives are known in the art. Preferred specific natural peptides, peptide analogs and derivatives are described herein. However, it should be understood that any known amylin family peptides that exhibit hormone activity known in the art can be used in connection with the present invention.

당업계에 공지된 임의의 아밀린 유사체 또는 유도체를 본 발명과 관련하여 사용할 수 있다. 한 실시양태에서, 아밀린 유사체 및 유도체는 천연 아밀린의 1종 이상의 호르몬 활성을 보유한다. 특정 실시양태에서, 아밀린 유사체는 천연 아밀린이 특이적으로 결합할 수 있는 수용체의 효능제이다. 바람직한 아밀린 유사체 및 유도체는 US 2003/0026812 A1에 기재된 것을 포함하며, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다. Any amylin analog or derivative known in the art can be used in connection with the present invention. In one embodiment, amylin analogs and derivatives possess at least one hormone activity of native amylin. In certain embodiments, the amylin analog is an agonist of a receptor that can specifically bind to native amylin. Preferred amylin analogs and derivatives include those described in US 2003/0026812 A1, which is incorporated herein by reference.

예시적인 아밀린 유사체는 하기의 것을 포함한다:Exemplary amylin analogs include the following:

당업계에 공지된 바와 같이, 이러한 아밀린 유사체는 아미드화된 것이 바람직하지만, 달리 명시하지 않는다면 본 발명의 문맥에서 임의로 산 형태일 수 있다. As is known in the art, such amylin analogs are preferably amidated, but may be optionally in acid form in the context of the present invention, unless otherwise specified.

당업계에 공지된 임의의 ADM 유사체 또는 유도체를 본 발명과 관련하여 사용할 수 있다. 한 실시양태에서, ADM 유사체 및 유도체는 천연 ADM의 1종 이상의 호르몬 활성을 보유한다. 특정 실시양태에서, ADM 유사체는 천연 ADM이 특이적으로 결합할 수 있는 수용체의 효능제이다.Any ADM analog or derivative known in the art can be used in connection with the present invention. In one embodiment, the ADM analogs and derivatives possess at least one hormonal activity of the native ADM. In certain embodiments, the ADM analog is an agonist of a receptor to which the native ADM can specifically bind.

당업계에 공지된 임의의 CT 유사체 또는 유도체를 본 발명과 관련하여 사용할 수 있다. 한 실시양태에서, CT 유사체 및 유도체는 천연 CT의 1종 이상의 호르몬 활성을 보유한다. 특정 실시양태에서, CT 유사체는 천연 CT가 특이적으로 결합할 수 있는 수용체의 효능제이다. 바람직한 CT 유사체 및 유도체는 미국 특허 제4,652,627호, 동 제4,606,856호, 동 제4,604,238호, 동 제4,597,900호, 동 제4,537,716호, 동 제4,497,731호, 동 제4,495,097호, 동 제4,444,981호, 동 제4,414,149호, 동 제4,401,593호 및 동 제4,397,780호에 기재된 것을 포함하며, 이들 문헌은 본원에 참고로 포함된다. Any CT analog or derivative known in the art can be used in connection with the present invention. In one embodiment, CT analogs and derivatives possess at least one hormone activity of native CT. In certain embodiments, the CT analog is an agonist of a receptor to which native CT can specifically bind. Preferred CT analogs and derivatives are described in U.S. Patent Nos. 4,652,627, 4,606,856, 4,604,238, 4,597,900, 4,537,716, 4,497,731, 4,495,097, 4,444,981, 4,414,141 4,401,593 and 4,397,780, the disclosures of which are incorporated herein by reference.

예시적인 CT 유사체는 하기의 것을 포함한다:Exemplary CT analogs include the following:

당업계에 공지된 바와 같이, 이러한 CT 유사체는 아미드화된 것이 바람직하지만, 달리 명시하지 않는다면 본 발명의 문맥 내에서 임의로 산 형태일 수 있다.As is known in the art, such CT analogs are preferably amidated, but may be optionally in acid form within the context of the present invention unless otherwise specified.

당업계에 공지된 임의의 CGRP 유사체 또는 유도체를 본 발명과 관련하여 사용할 수 있다. 한 실시양태에서, CGRP 유사체 및 유도체는 천연 CGRP의 1종 이상의 호르몬 활성을 보유한다. 특정 실시양태에서, CGRP 유사체는 천연 CGRP가 특이적으로 결합할 수 있는 수용체의 효능제이다. 바람직한 CGRP 유사체 및 유도체는 미국 특허 제4,697,002호 및 동 제4,687,839호에 기재된 것을 포함하며, 이들 문헌은 본원에 참고로 포함된다. Any CGRP analog or derivative known in the art can be used in connection with the present invention. In one embodiment, the CGRP analogs and derivatives possess at least one hormonal activity of native CGRP. In certain embodiments, the CGRP analog is an agonist of a receptor that can specifically bind native CGRP. Preferred CGRP analogs and derivatives include those described in U.S. Patent Nos. 4,697,002 and 4,687,839, which are incorporated herein by reference.

예시적인 CGRP 유사체는 하기의 것을 포함한다:Exemplary CGRP analogs include the following:

당업계에 공지된 임의의 AFP-6 유사체 또는 유도체를 본 발명과 관련하여 사용할 수 있다. 한 실시양태에서, AFP-6 유사체 및 유도체는 천연 AFP-6의 1종 이상의 호르몬 활성을 보유한다. 특정 실시양태에서, AFP-6 유사체는 천연 AFP-6이 특이적으로 결합할 수 있는 수용체의 효능제이다. 바람직한 AFP-6 유사체 및 유도체는 WO 2003/022304에 기재된 것을 포함하며, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다. Any AFP-6 analog or derivative known in the art can be used in connection with the present invention. In one embodiment, AFP-6 analogs and derivatives possess at least one hormone activity of native AFP-6. In certain embodiments, the AFP-6 analog is an agonist of a receptor that can specifically bind native AFP-6. Preferred AFP-6 analogs and derivatives include those described in WO 2003/022304, which is incorporated herein by reference.

예시적인 AFP-6 유사체는 하기의 것을 포함한다:Exemplary AFP-6 analogs include the following:

당업계에 공지된 바와 같이, 이러한 AFP-6 유사체는 아미드화된 것이 바람직하지만, 달리 명시하지 않는다면 본 발명의 문맥에서 임의로 산 형태일 수 있다.As is known in the art, such AFP-6 analogs are preferably amidated, but may be optionally in acid form in the context of the present invention unless otherwise specified.

CCKCCK 패밀리family

hCCK 및 종 변이체를 비롯한 CCK 및 그의 다양한 유사체는 당업계에 공지되어 있다. 일반적으로, CCK는 최초로 인간에서 동정된 33개의 아미노산 서열을 갖고, 돼지, 래트, 닭, 친칠라, 개 및 인간에서 입증된 것으로 보고된 8개 아미노산의 생체내 C-말단 단편 ("CCK-8")을 포함한다. 다른 종 변이체는 돼지, 개 및 기니아 피그에서 발견된 39개 아미노산의 서열, 고양이, 개 및 인간에서 발견된 58개 아미노산 및 CCK 및 가스트린 모두에 상동성인 47개 아미노산의 서열을 포함한다. C-말단 티로신-황산화 옥타펩티드 서열 (CCK-8)은 종에 걸쳐 비교적 보존되어 있고, 소수의 설치류에서는 생물학적 활성을 위한 최소 서열일 수 있다. 따라서, 용어 CCK-33은 일반적으로 인간 CCK(1-33)을 의미하지만, CCK-8 (CCK(26-33), 서열 55)은 달리 명시하지 않는다면 황산화된 것과 비-황산화된 것 모두의 C-말단 옥타펩티드를 총칭하여 지칭한다. 추가로, 펜타가스트린 또는 CCK-5는 C-말단 펩티드 CCK(29-33) (서열 209)을 지칭하고, CCK-4는 C-말단 테트라펩티드 CCK(30-33) (서열 208)을 지칭한다. CCK and various analogs thereof, including hCCK and variants, are known in the art. Generally, CCK is the first in vivo C-terminal fragment ("CCK-8") of eight amino acids that has been identified in humans and has been identified in pigs, rats, chickens, ). Other species variants include sequences of 39 amino acids found in pigs, dogs and guinea pigs, 58 amino acids found in cats, dogs and humans, and 47 amino acid sequences homologous to both CCK and gastrin. The C-terminal tyrosine-sulfated octapeptide sequence (CCK-8) is relatively conserved across species and may be the minimal sequence for biological activity in a small number of rodents. Thus, the term CCK-33 generally refers to human CCK (1-33), but CCK-8 (CCK (26-33), SEQ ID NO: 55) Quot; C-terminal octapeptide " Further, pentaagastrin or CCK-5 refers to the C-terminal peptide CCK (29-33) (SEQ ID NO: 209) and CCK-4 refers to the C-terminal tetrapeptide CCK (30-33) .

A형 수용체 서브유형 (CCK_A)은 황산화 옥타펩티드에 선택적인 것으로 보고되었다. B형 수용체 서브유형 (CCK_B)는 뇌 전체 및 위에서 동정되었고, 황산화 또는 8개의 모든 아미노산을 요구하지 않는 것으로 보고되었다. Type A receptor subtype (CCK _A ) has been reported to be selective for sulfated octapeptides. Type B receptor subtype (CCK _B ) has been identified throughout the brain and above and has not been reported to require sulfation or all eight amino acids.

CCK 유사체에 대한 다양한 생체내 및 시험관내 스크리닝 방법이 당업계에 공지되어 있다. 그 예는 CCK-유사 활성에 대해 시험될 화합물의 신속한 정맥내 주사 후에 개 또는 기니아 피그 담낭의 수축을 수반하는 생체내 검정 및 토끼 담낭의 스트립을 사용하는 시험관내 검정을 포함한다. 문헌 [Walsh, "Gastrointestinal Hormones", In Physiology of the Gastrointestinal Tract (3d ed. 1994; Raven Press, New York)]을 참조한다. Various in vivo and in vitro screening methods for CCK analogs are known in the art. Examples include in vivo assays involving contraction of dog or guinea pig gallbladder after rapid intravenous injection of compounds to be tested for CCK-like activity and in vitro assays using strips of rabbit gallbladder. See Walsh, "Gastrointestinal Hormones ", In Physiology of the Gastrointestinal Tract (3d ed. 1994; Raven Press, New York).

예시적인 특정 CCK, 및 CCK 활성을 갖는 CCK 유사체는 하기의 것을 포함한다:Exemplary CCK, and CCK analogs with CCK activity include:

당업계에 공지된 바와 같이, 이러한 CCK 펩티드는 아미드화된 것이 바람직하지만, 달리 명시하지 않는다면 본 발명의 문맥에서 임의로 산 형태일 수 있다.As is known in the art, such CCK peptides are preferably amidated, but may be optionally in acid form in the context of the present invention, unless otherwise specified.

렙틴Leptin 패밀리family

본 발명에 유용한 성분 펩티드 호르몬은 또한 렙틴 패밀리 펩티드 호르몬을 포함한다. 천연 렙틴 패밀리 펩티드 호르몬 및 기능적 펩티드 유사체 및 유도체는 당업계에 공지되어 있다. 바람직한 특정 천연 펩티드, 펩티드 유사체 및 유도체가 본원에 기재되어 있지만, 당업계에 공지된 호르몬 활성을 나타내는 임의의 공지의 아밀린 패밀리 펩티드가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있음을 이해해야 한다.The peptide hormones useful in the present invention also include leptin family peptide hormones. Natural leptin family peptide hormones and functional peptide analogs and derivatives are known in the art. Although certain preferred natural peptides, peptide analogs and derivatives are described herein, it should be understood that any known amylin family peptides that exhibit hormonal activity known in the art can be used in connection with the present invention.

당업계에 공지된 임의의 렙틴 유사체 또는 유도체가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 렙틴 유사체 및 유도체는 천연 렙틴의 1종 이상의 호르몬 활성을 보유한다. 특정 실시양태에서, 렙틴 유사체는 천연 렙틴이 특이적으로 결합할 수 있는 수용체의 효능제이다. 바람직한 렙틴 유사체 및 유도체는 예를 들어 WO 2004/039832, WO 98/55139, WO 98/12224 및 WO 97/02004에 기재된 것을 포함하며, 이들 문헌은 모두가 본원에 참고로 포함된다.Any leptin analog or derivative known in the art can be used in connection with the present invention. In one embodiment, leptin analogs and derivatives possess at least one hormone activity of native leptin. In certain embodiments, leptin analogs are agonists of receptors to which natural leptin can specifically bind. Preferred leptin analogs and derivatives include those described, for example, in WO 2004/039832, WO 98/55139, WO 98/12224 and WO 97/02004, all of which are incorporated herein by reference.

한 실시양태에서, 렙틴 펩티드는 WO 97046585에 개시된 바와 같이 MVPIQK (서열 400), VQDDTK (서열 401), TLIK (서열 402), TIVTR (서열 403), INDISHTQSVSSK (서열 404), VTGLDFIPGLHPILTLSK (서열 405), NVIQISNDLENLR (서열 406), DLLHVLAFSK (서열 407), SCHLPWASGLETLDSLGGVLEASGYSTEVVALSR (서열 408) 및 LQGSLQDMLWQLDLSPGC (서열 409)를 포함한다.In one embodiment, leptin peptides are selected from the group consisting of MVPIQK (SEQ ID NO: 400), VQDDTK (SEQ ID NO: 401), TLIK (SEQ ID NO: 402), TIVTR (SEQ ID NO: 403), INDISHTQSVSSK (SEQ ID NO: 404), VTGLDFIPGLHPILTLSK NVIQISNDLENLR (SEQ ID NO: 406), DLLHVLAFSK (SEQ ID NO: 407), SCHLPWASGLETLDSLGGLEASGYSTEVVALSR (SEQ ID NO: 408), and LQGSLQDMLWQLDLSPGC (SEQ ID NO: 409).

한 실시양태에서, 렙틴 펩티드는 아미노산 서열 Xaan-Ser-Cys-Xaa1-Leu-Pro-Xaa2-Xaa3-Xaan (서열 410) (여기서, Xaan은 0개 잔기 길이일 수도 있고, 또는 전장 인간 또는 마우스 렙틴 서열에서 유래한 펩티드 잔기들의 인접한 스트레치 (C-말단 또는 N-말단에서의 1개 내지 7개 스트레치)일 수도 있음)을 가질 수도 있고, 또는 렙틴 펩티드가 총 15개 아미노산 이하의 길이일 수도 있다. 또다른 실시양태에서, Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3은 임의의 아미노산 치환일 수 있다. 또다른 실시양태에서, Xaa1, Xaa2 또는 Xaa3은 전장 마우스 또는 인간 렙틴 중 각 잔기의 임의의 보존적 아미노산 치환일 수 있다. 추가의 실시양태에서, Xaa1은 His 또는 Ser으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, Xaa2 또는 Xaa3은 임의의 아미노산 치환이다. 또다른 실시양태에서, Xaa2는 Trp 또는 Gln으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, Xaa1 또는 Xaa3은 임의의 아미노산 치환이다. 또다른 실시양태에서, Xaa3은 Ala 또는 Thr으로 구성된 군으로부터 선택될 수 있고, Xaa1 또는 Xaa2는 임의의 아미노산 치환이다. 또다른 실시양태에서, Xaa1은 His 또는 Ser으로 구성된 군으로부터 선택되고, Xaa2는 Trp 또는 Gln으로 구성된 군으로부터 선택되며, Xaa3은 Ala 또는 Thr으로 구성된 군으로부터 선택된다. WO 04039832를 참조한다. In one embodiment, the leptin peptide has the amino acid sequence Xaan-Ser-Cys-Xaa1-Leu-Pro-Xaa2-Xaa3-Xaan (SEQ ID NO: 410), wherein Xaan may be zero residues long, May be an adjacent stretch of peptide residues from the sequence (C-terminal or one to seven stretches at the N-terminus), or the leptin peptide may be 15 amino acids or less in total. In another embodiment, Xaal, Xaa2 or Xaa3 may be any amino acid substitution. In another embodiment, Xaal, Xaa2 or Xaa3 may be any conservative amino acid substitution of each residue in the full-length mouse or human leptin. In a further embodiment, Xaa1 can be selected from the group consisting of His or Ser, and Xaa2 or Xaa3 is any amino acid substitution. In another embodiment, Xaa2 can be selected from the group consisting of Trp or Gln, and Xaal or Xaa3 is any amino acid substitution. In another embodiment, Xaa3 can be selected from the group consisting of Ala or Thr and Xaal or Xaa2 is any amino acid substitution. In another embodiment, Xaa1 is selected from the group consisting of His or Ser, Xaa2 is selected from the group consisting of Trp or Gln, and Xaa3 is selected from the group consisting of Ala or Thr. See WO 04039832.

한 실시양태에서, 렙틴 펩티드는 천연 전장 인간 또는 마우스 렙틴의 C-말단 아미노산 잔기 116 내지 122 (이들의 성숙 형태의 위치 95 내지 101에 상응함) 및 그의 D-이소형, 단편, 유도체, 유사체 및 상동체를 포함하며, 이것은 i.p. (복강내) 투여시 시험 동물에서의 체질량 항상성 조정 능력을 보유한다. 서열 SCSLPQT (서열 411)의 구체적인 마우스 D-치환 펩티드로는 [D-Ser-1]-, [D-Cys-2]-, [D-Ser-3]-, [D-Leu-4]-, [D-Pro-5]-, [D-Gln-6]-, [D-Thr-7]-SCSLPQT (서열 411) 및 모든 [D] SCSLPQT (서열 411) 등이 있다. SCHLPWA (서열 412)의 구체적인 인간 D-치환 펩티드로는 [D-Ser-1]-, [D-Cys-2]-, [D-His-3]-, [D-Leu-4]-, [D-Pro-5]-, [D-Trp-6]-, [D-Ala-7]-SCHLPWA (서열 412) 및 모든 [D]-SCHLPWA (서열 412) 등이 있다. 또한, SCHLPWA (서열 412) 및 SCSLPQT (서열 411) 펩티드는 임의의 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개 위치에 D-치환 아미노산을 함유할 수 있다. 또한, 천연 렙틴의 N-말단 아미노산 21 내지 35, 31 내지 45, 41 내지 55 및 51 내지 65 및 그의 단편, 유도체, 유사체 및 상동체를 포함하는 렙틴-관련 펩티드도 개시되어 있다. 본 발명의 추가의 렙틴 펩티드는 마우스 및/또는 인간 전장 렙틴의 아미노산 서열 61 내지 75, 71 내지 85, 81 내지 95, 91 내지 105, 106 내지 120, 116 내지 130, 126 내지 140, 136 내지 150, 146 내지 160, 및 156 내지 167을 포함한다. WO 04039832를 참조한다.In one embodiment, the leptin peptide comprises C-terminal amino acid residues 116 to 122 (corresponding to positions 95 to 101 of the mature form thereof) and natural D-isoforms, fragments, derivatives, Includes a homology body, (Intraperitoneal) administration has the ability to regulate body mass homeostasis in test animals. Specific D-substituted peptides of the sequence SCSLPQT (SEQ ID NO: 411) include [D-Ser-1] -, [D-Cys-2] -, [D- Ser-3] , [D-Pro-5] -, [D-Gln-6] -, [D-Thr-7] -SCSLPQT (SEQ ID NO: 411) and all [D] SCSLPQT (SEQ ID NO: 411). Specific D-substituted peptides of SCHLPWA (SEQ ID NO: 412) include [D-Ser-1] -, [D-Cys-2] -, [D-His- [D-Pro-5] -, [D-Trp-6] -, [D-Ala-7] -SCHLPWA (SEQ ID NO: 412) and all of [D] -SCHLPWA (SEQ ID NO: 412). In addition, SCHLPWA (SEQ ID NO: 412) and SCSLPQT (SEQ ID NO: 411) peptides may contain D-substituted amino acids at any two, three, four, five or six positions. Also disclosed are leptin-related peptides comprising the N-terminal amino acids 21-35, 31-45, 41-55 and 51-65 of natural leptin and fragments, derivatives, analogs and homologs thereof. The additional leptin peptides of the present invention may be used in combination with the amino acid sequences 61 to 75, 71 to 85, 81 to 95, 91 to 105, 106 to 120, 116 to 130, 126 to 140, 136 to 150, 146 to 160, and 156 to 167, respectively. See WO 04039832.

한 실시양태에서, 렙틴의 서열은 하기와 같다:In one embodiment, the sequence of leptin is as follows:

(서열 413) (여기서, 위치 6의 Xaa는 Trp 또는 Gln이고, 위치 36의 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 40의 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 42의 Xaa는 Ile, Leu, Met 또는 메티오닌 술폭시드이고, 위치 44의 Xaa는 Trp 또는 Gln이며, 위치 45의 Xaa는 Gln 또는 Glu임). 또다른 실시양태는, 위치 6의 Xaa가 Trp이고, 위치 36의 Xaa가 Gln이고, 위치 40의 Xaa가 Gln이고, 위치 42의 Xaa가 Met이고, 위치 44의 Xaa가 Trp이며, 위치 45의 Xaa가 Gln인 상기 렙틴이다. 미국 특허 제5,521,283호를 참조한다.

(SEQ ID NO: 413) wherein Xaa at position 6 is Trp or Gln, Xaa at position 36 is Gln or Glu, Xaa at position 40 is Gln or Glu, Xaa at position 42 is Ile, Leu, Met or Methionine sulfoxide Xaa at position 44 is Trp or Gln, and Xaa at position 45 is Gln or Glu. Another embodiment is a compound of formula I wherein Xaa at position 6 is Trp, Xaa at position 36 is Gln, Xaa at position 40 is Gln, Xaa at position 42 is Met, Xaa at position 44 is Trp, Xaa at position 45 Is Gln. See U.S. Patent No. 5,521,283.

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한 실시양태에서, 렙틴의 천연 서열은 하기의 것을 포함한다:

In one embodiment, the natural sequence of leptin comprises:

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또다른 실시양태에서, 렙틴 펩티드의 서열은 하기와 같다:

In another embodiment, the sequence of the leptin peptide is as follows:

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(여기서, 위치 22의 Xaa는 Asn, Asp 또는 Glu이고, 위치 27의 Xaa는 Thr 또는 Ala이고, 위치 28의 Xaa는 Gln 또는 Glu이거나, 또는 존재하지 않고, 위치 54의 Xaa는 Met 또는 Ala이고, 위치 68의 Xaa는 Met 또는 Leu이고, 위치 72의 Xaa는 Asn, Asp 또는 Glu이고, 위치 77의 Xaa는 Ser 또는 Ala이고, 위치 118의 Xaa는 Gly 또는 Leu임). 상기 단백질은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환을 갖는다: 위치 97의 His이 Ser 또는 Pro으로 대체됨, 위치 100의 Trp이 Gln, Ala 또는 Leu으로 대체됨, 위치 101의 Ala이 Thr 또는 Val으로 대체됨, 위치 102의 Ser이 Arg으로 대체됨, 위치 103의 Gly이 Ala으로 대체됨, 위치 105의 Glu가 Gln으로 대체됨, 위치 106의 Thr이 Lys 또는 Ser으로 대체됨, 위치 107의 Leu이 Pro으로 대체됨, 위치 108의 Asp가 Glu으로 대체됨, 또는 위치 111의 Gly이 Asp으로 대체됨.Wherein Xaa at position 22 is Asn, Asp, or Glu, Xaa at position 27 is Thr or Ala, Xaa at position 28 is Gln or Glu, or absent, Xaa at position 54 is Met or Ala, Xaa at position 68 is Met or Leu, Xaa at position 72 is Asn, Asp, or Glu, Xaa at position 77 is Ser or Ala, and Xaa at position 118 is Gly or Leu. Wherein the protein has at least one substitution selected from the group consisting of: His is replaced by Ser or Pro, Trp at position 100 is replaced by Gln, Ala or Leu, Ala at position 101 is replaced with Thr or Val Ser in position 102 is replaced by Arg, Gly in position 103 is replaced by Ala, Glu at position 105 is replaced by Gln, Thr at position 106 is replaced by Lys or Ser, Leu at position 107 Replaced by Pro, Asp at position 108 is replaced by Glu, or Gly at position 111 is replaced by Asp.

또다른 실시양태에서, 렙틴의 서열은 하기와 같다:

In another embodiment, the sequence of leptin is as follows:

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(여기서, 위치 27의 Xaa는 Thr 또는 Ala이고, 위치 77의 Xaa는 Ser 또는 Ala이며, 위치 118의 Xaa는 Gly 또는 Leu임). 상기 단백질은 하기로 구성된 군으로부터 선택된 1개 이상의 치환, 바람직하게는 1개 내지 5개의 치환, 가장 바람직하게는 1개 내지 2개의 치환을 갖는다: 위치 97의 His이 Ser으로 대체됨, 위치 100의 Trp이 Gln으로 대체됨, 위치 101의 Ala이 Thr으로 대체됨, 위치 105의 Glu이 Gln으로 대체됨, 위치 106의 Thr이 Lys으로 대체됨, 위치 107의 Leu이 Pro으로 대체됨, 위치 108의 Asp가 Glu으로 대체됨, 또는 위치 111의 Gly이 Asp으로 대체됨. 상기 서열의 추가의 실시양태에서, 위치 27의 Xaa는 Thr이고, 위치 77의 Xaa는 Ser이고, 위치 118의 Xaa는 Gly이며, 위치 97, 100, 101, 105, 106, 107, 108 및 111의 아미노산 잔기는 하기 표와 같다:(Wherein Xaa at position 27 is Thr or Ala, Xaa at position 77 is Ser or Ala, and Xaa at position 118 is Gly or Leu). The protein has at least one substitution, preferably 1 to 5 substitutions, most preferably 1 to 2 substitutions, selected from the group consisting of: His at position 97 is replaced by Ser, position 100 Trp is replaced by Gln, Ala at position 101 is replaced by Thr, Glu at position 105 is replaced by Gln, Thr at position 106 is replaced by Lys, Leu at position 107 is replaced by Pro, Asp is replaced by Glu, or Gly at position 111 is replaced by Asp. In a further embodiment of this sequence, Xaa at position 27 is Thr, Xaa at position 77 is Ser, Xaa at position 118 is Gly, and positions 97, 100, 101, 105, 106, 107, 108 and 111 The amino acid residues are as follows:

한 실시양태에서, 렙틴의 서열은 하기와 같다:

In one embodiment, the sequence of leptin is as follows:

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(여기서, 위치 13의 Xaa는 Ile, Leu, Met 또는 메티오닌 술폭시드이고, 위치 15의 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 21의 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 22의 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 27의 Xaa는 Ile, Leu, Met 또는 메티오닌 술폭시드이고, 위치 31의 Xaa는 Asn, Asp 또는 Gln이고, 위치 34의 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 37의 Xaa는 Asn, Asp 또는 Gln이고, 위치 41의 Xaa는 Asn, Asp 또는 Gln이고, 위치 59의 Xaa는 Trp 또는 Gln이고, 위치 89의 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 93의 Xaa는 Gln 또는 Glu이고, 위치 95의 Xaa는 Ile, Leu, Met 또는 메티오닌 술폭시드이고, 위치 97의 Xaa는 Trp 또는 Gln이며, 위치 98의 Xaa는 Gln 또는 Glu임). 또다른 실시양태에서, 상기 식의 렙틴은 위치 13의 Xaa는 Met이고, 위치 15의 Xaa는 Gln이고, 위치 21의 Xaa는 Gln이고, 위치 22의 Xaa는 Gln이고, 위치 27의 Xaa는 Met이고, 위치 31의 Xaa는 Asn이고, 위치 34의 Xaa는 Gln이고, 위치 37의 Xaa는 Asn이고, 위치 41의 Xaa는 Asn이고, 위치 59의 Xaa는 Trp이고, 위치 89의 Xaa는 Gln이고, 위치 93의 Xaa는 Gln이고, 위치 95의 Xaa는 Met이고, 위치 97의 Xaa는 Trp이며, 위치 98의 Xaa는 Gln이다. 미국 특허 제5,532,336호를 참조한다.Wherein Xaa at position 13 is Ile, Leu, Met or methionine sulfoxide, Xaa at position 15 is Gln or Glu, Xaa at position 21 is Gln or Glu, Xaa at position 22 is Gln or Glu, Asp, Asp or Gln at position 31, Xaa at position 34 is Gln or Glu, Xaa at position 37 is Asn, Asp or Gln, and Xaa at position 34 is Ile, Leu, Met or methionine sulfoxide, Xaa of position 41 is Gln or Glu, Xaa at position 93 is Gln or Glu, Xaa at position 59 is Ile, Leu, Gln, Met or methionine sulfoxide, Xaa at position 97 is Trp or Gln, and Xaa at position 98 is Gln or Glu. In another embodiment, leptin of the formula is Xaa at position 13 is Met, Xaa at position 15 is Gln, Xaa at position 21 is Gln, Xaa at position 22 is Gln, Xaa at position 27 is Met , Xaa at position 31 is Asn, Xaa at position 34 is Gln, Xaa at position 37 is Asn, Xaa at position 41 is Asn, Xaa at position 59 is Trp, Xaa at position 89 is Gln, Xaa of 93 is Gln, Xaa at position 95 is Met, Xaa at position 97 is Trp, and Xaa at position 98 is Gln. See U.S. Patent No. 5,532,336.

예시적인 렙틴 유사체는 위치 43의 아미노산이 Asp 또는 Glu으로 치환된 것, 위치 48의 아미노산이 치환된 Ala인 것, 위치 49의 아미노산이 Glu으로 치환되거나 존재하지 않는 것, 위치 75의 아미노산이 Ala으로 치환된 것, 위치 89의 아미노산이 Leu으로 치환된 것, 위치 93의 아미노산이 Asp 또는 Glu으로 치환된 것, 위치 98의 아미노산이 Ala으로 치환된 것, 위치 117의 아미노산이 Ser으로 치환된 것, 위치 139의 아미노산이 Leu으로 치환된 것, 위치 167의 아미노산이 Ser으로 치환된 것, 및 이들의 임의의 조합물을 포함한다. Exemplary leptin analogs are those in which the amino acid at position 43 is substituted with Asp or Glu, the amino acid at position 48 is Ala substituted, the amino acid at position 49 is substituted or not substituted with Glu, the amino acid at position 75 is Ala The amino acid at position 89 is substituted with Leu, the amino acid at position 93 is substituted with Asp or Glu, the amino acid at position 98 is substituted with Ala, the amino acid at position 117 is substituted with Ser, The amino acid at position 139 is substituted for Leu, the amino acid at position 167 is substituted for Ser, and any combination thereof.

예시적인 특정 렙틴, 및 렙틴 활성을 갖는 렙틴 유사체는 하기의 것을 포함한다:Exemplary specific leptin, and leptin analogs having leptin activity, include the following:

PPFPPF 패밀리family

본 발명에 유용한 성분 펩티드 호르몬은 PP 및 PYY를 비롯한 PPF 펩티드 호르몬 역시 포함한다. 천연 PPF 펩티드 호르몬 및 기능적 펩티드 유사체 및 유도체는 당업계에 공지되어 있다. 바람직한 특정 천연 펩티드, 펩티드 유사체 및 유도체가 본원에 기재되어 있지만, 당업계에 공지된 호르몬 활성을 나타내는 임의의 공지의 아밀린 패밀리 펩티드가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있음을 이해해야 한다.The peptide hormones useful in the present invention also include PPF peptide hormones including PP and PYY. Natural PPF peptide hormones and functional peptide analogs and derivatives are known in the art. Although certain preferred natural peptides, peptide analogs and derivatives are described herein, it should be understood that any known amylin family peptides that exhibit hormonal activity known in the art can be used in connection with the present invention.

당업계에 공지된 임의의 PPF 유사체 또는 유도체가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, PPF 유사체 및 유도체는 천연 PPF 폴리펩티드의 1종 이상의 호르몬 활성을 보유한다. 특정 실시양태에서, PPF 유사체는 천연 PPF 폴리펩티드가 특이적으로 결합할 수 있는 수용체의 효능제이다. 바람직한 PPF 유사체 및 유도체는 WO 03/026591 및 WO 03/057235에 기재된 것을 포함하며, 이들 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다.Any PPF analog or derivative known in the art can be used in connection with the present invention. In one embodiment, the PPF analogs and derivatives possess at least one hormone activity of a native PPF polypeptide. In certain embodiments, the PPF analog is an agonist of a receptor to which a native PPF polypeptide can specifically bind. Preferred PPF analogs and derivatives include those described in WO 03/026591 and WO 03/057235, which are incorporated herein by reference in their entirety.

한 실시양태에서, 1종 이상의 PPF 호르몬 활성을 나타내는 바람직한 PPF 유사체 및 유도체는 일반적으로 폴리프롤린 모티프 및 C-말단 테일(tail) 모티프를 포함하는 2개 이상의 PYY 모티프를 포함한다. 이러한 유사체는 일반적으로 2004년 2월 11일자로 출원하여 2006년 6월 22일에 US 2006/0135747 A1으로 공개된 미국 가출원 제60/543,406호에 기재되어 있고, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다. 다른 바람직한 PPF 유사체는 PCT/US2005/004351 (발명의 영문 명칭: "Pancreatic Polypeptide Family Motifs and Polypeptides Comprising the Same", 2005년 8월 25일에 WO 2005/077094로 공개됨)에 개시되어 있으며, 상기 문헌의 내용은 본원에 참고로 포함된다. 다른 바람직한 PPF 유사체는 PCT/US2005/045471 (발명의 영문 명칭: "Pancreatic Polypeptide Family Motifs, Polypeptides and Methods Comprising the Same", 2006년 6월 22일에 WO 2006/066024로 공개됨)에 개시되어 있으며, 상기 문헌의 내용은 본원에 참고로 포함된다. 배경으로서, 연구는 Y 수용체 결합 친화도에 있어서의 차이가 2차 및 3차 구조적 차이와 상관관계가 있음을 시사하였다. 예를 들어 문헌 [Keire et al., Biochemistry 2000, 39, 9935-9942]을 참조한다. 천연 돼지 PYY는 잔기 23, 24 및 25에서 비틀림(kink)에 의해 분리된 잔기 17 내지 22 및 25 내지 33의 2개의 C-말단 나선 세그먼트, 잔기 12 내지 14 주변을 중심으로 하는 턴(turn), 및 잔기 30 및 31 근처에서 폴딩(folding)된 N-말단을 포함하는 것을 특징으로 하였다. 또한, 전장 돼지 PYY는 N-말단 및 C-말단의 잔기 내에 소수성 상호작용에 의해 안정화된 PP 폴드를 포함하는 것을 특징으로 하였다. 상기 문헌을 참조한다. In one embodiment, preferred PPF analogs and derivatives exhibiting at least one PPF hormone activity generally comprise two or more PYY motifs comprising a polyprolyl motif and a C-terminal tail motif. Such analogs are generally described in U.S. Provisional Application No. 60 / 543,406, filed February 11, 2004, and published as US 2006/0135747 A1, on June 22, 2006, the disclosure of which is incorporated herein by reference . Other preferred PPF analogs are disclosed in PCT / US2005 / 004351 ("Pancreatic Polypeptide Family Motifs and Polypeptides Comprising the Same", published as WO 2005/077094 on Aug. 25, 2005) The contents of which are incorporated herein by reference. Other preferred PPF analogs are disclosed in PCT / US2005 / 045471 (" Pancreatic Polypeptide Family Motifs, Polypeptides and Methods Comprising the Same ", published as WO 2006/066024 on Jun. 22, 2006) The contents of the document are incorporated herein by reference. As background, the study suggests that differences in Y receptor binding affinity are correlated with secondary and tertiary structural differences. See, e.g., Keire et al., Biochemistry 2000, 39, 9935-9942. Natural pig PYY has two C-terminal spiral segments of residues 17-22 and 25-33 separated by a kink at residues 23, 24 and 25, a turn around residues 12-14, And an N-terminal folded near residues 30 and 31. [ Also, the full-length pig PYY was characterized by containing a PP fold stabilized by hydrophobic interaction in the residues of the N-terminus and the C-terminus. Reference is made to the above document.

"PYY 모티프"는 일반적으로 생물학적 활성에 매우 중요한 천연 PP 패밀리 폴리펩티드의 1차, 2차 또는 3차의 구조적 성분이다. 즉, 상기 모티프의 부재 또는 방해시에는 생물학적 활성이 실질적으로 감소한다. 바람직한 PYY 모티프는 천연 PP 패밀리 폴리펩티드의 N-말단 폴리프롤린 제II형 모티프, 천연 PP 패밀리 폴리펩티드의 제II형 β-턴 모티프, 천연 PP 패밀리 폴리펩티드의 C-말단 종결부에서의 α-나선 모티프, 및 천연 PP 패밀리 폴리펩티드의 C-말단 테일 모티프를 포함한다. 더욱 특히, N-말단 폴리프롤린 영역에서는 천연 PP 패밀리 폴리펩티드의 잔기 5 및 8에 상응하는 아미노산이 일반적으로 프롤린으로 보존된다. 제II형 β-턴 모티프는 일반적으로 천연 PP 패밀리 폴리펩티드의 잔기 12 내지 14에 상응하는 아미노산을 포함할 것이다. α-나선 모티프가 충분한 수의 아미노산 잔기를 포함하여 용액 중에서 α-나선 턴이 형성되는 한은, α-나선 모티프는 일반적으로 천연 PP 패밀리 폴리펩티드의 약 잔기 14에 상응하는 아미노산으로부터 C-말단 종결부까지의 임의의 지점 및 상기 종결부를 포함하는 임의의 지점까지 연장될 수 있다. α-나선 모티프는 또한 용액 중에서 여전히 α-나선 턴이 형성되는 한은 천연 PP 패밀리 서열에 대한 아미노산 치환, 삽입 및 결실을 포함할 수도 있다. C-말단 테일 모티프는 일반적으로 천연 PP 패밀리 폴리펩티드의 마지막 약 10개의 잔기, 더욱 바람직하게는 마지막 7개, 6개 또는 5개의 잔기, 더욱 더 바람직하게는 아미노산 잔기 32 내지 35에 상응하는 아미노산을 포함한다.A "PYY motif" is a primary, secondary or tertiary structural component of a native PP family polypeptide that is generally critical for biological activity. That is, when the motif is absent or obstructed, the biological activity is substantially reduced. A preferred PYY motif is the N-terminal polyprolyn type II motif of the native PP family polypeptide, the type II beta-turn motif of the native PP family polypeptide, the [alpha] -term motif at the C-terminal terminus of the native PP family polypeptide, and And C-terminal tail motifs of native PP family polypeptides. More particularly, in the N-terminal polyprolyl region, amino acids corresponding to residues 5 and 8 of the native PP family polypeptide are generally conserved as proline. The Type II beta-turn motif will generally contain amino acids corresponding to residues 12-14 of the native PP family polypeptide. As long as the α-helical motif contains a sufficient number of amino acid residues and an α-helical turn is formed in the solution, the α-helical motif generally has an amino acid sequence corresponding to about residue 14 of the native PP family polypeptide to the C-terminal terminus To any point including the terminating end and the terminating end. The alpha-helical motif may also include amino acid substitutions, insertions and deletions to the native PP family sequence, so long as the alpha-helical turn is still formed in solution. The C-terminal tail motif generally comprises amino acids corresponding to the last about 10 residues of the native PP family polypeptide, more preferably the last 7, 6 or 5 residues, even more preferably the amino acid residues 32 to 35 do.

바람직한 PYY 유사체는 폴리프롤린 모티프 및/또는 C-말단 테일 모티프에 상응하지 않는 PYY 분자의 구역에서 내부 결실, 삽입 및 치환을 갖는 것을 포함한다. 예를 들어 위치 4, 6, 7, 9 또는 10에서의 내부 결실이 고려된다.Preferred PYY analogs include those having internal deletions, insertions and substitutions in the region of the PYY molecule that do not correspond to the polyprolactin motif and / or the C-terminal tail motif. For example, an internal deletion at position 4, 6, 7, 9 or 10 is considered.

특히 관심이 있는 또다른 실시양태에서, 성분 호르몬은 적어도 N-말단 폴리프롤린 PPF 모티프 및 C-말단 테일 PPF 모티프를 포함하는 적어도 2개의 PPF 모티프를 함유하는 PPF 폴리펩티드이다. 본원에서 사용된 바와 같이, "모티프"는 특별한 생화학적 기능을 특징으로 하는 아미노산 서열을 지칭하거나, 또는 독립적으로 폴딩된 도메인을 한정한다. 추가의 PPF 모티프는 PP, PYY 및 NPY 등을 비롯한 임의의 PP 패밀리 폴리펩티드의 모티프, 예를 들어 PYY의 제II형 α-턴 영역 모티프 또는 PYY C-말단 종결부의 α-나선 모티프에 상응할 수 있다.In another embodiment of particular interest, the component hormone is a PPF polypeptide containing at least two PPF motifs comprising at least an N-terminal polyprolylene PPF motif and a C-terminal tail PPF motif. As used herein, "motif" refers to an amino acid sequence that is characterized by a particular biochemical function, or defines independently folded domains. Additional PPF motifs may correspond to motifs of any PP family polypeptide, such as PP, PYY, and NPY, such as a type II alpha-turn region motif of PYY or an alpha-helical motif of a PYY C-terminal termini .

또다른 실시양태에서, PPF 패밀리 성분 모듈은 제2의 PP, PYY 또는 NPY 폴리펩티드의 1개 이상의 추가의 단편에 공유 연결된 PP, PYY 또는 NPY 폴리펩티드의 단편을 포함하는 PPF 키메라 폴리펩티드이고, 여기서 각각의 PP, PYY 또는 NPY 단편은 PPF 모티프를 포함한다. 별법으로, PPF 키메라는 1개, 2개, 3개 또는 4개의 폴리펩티드 세그먼트에 연결된 PP 패밀리 폴리펩티드의 단편을 포함할 수 있고, 여기서 연결된 폴리펩티드 세그먼트 중 1개 이상은 제2의 PP 패밀리 폴리펩티드의 단편이다. 특정 실시양태에서, PPF 폴리펩티드는 N-말단 PP 단편 및 C-말단 NPY 단편을 포함하지 않는다. PPF 키메라 폴리펩티드 성분 모듈은 천연 PYY(3-36)의 전체 길이에 걸쳐서 천연 PYY(3-36)에 50％ 이상의 서열 동일성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 이러한 PPF 키메라 폴리펩티드는 천연 PYY(3-36)의 전체 길이에 걸쳐서 천연 PYY(3-36)에 60％ 이상, 70％ 이상, 80％ 이상, 90％ 이상, 92％ 이상, 94％ 이상 또는 97％ 이상의 서열 동일성을 나타낼 수 있다. 이러한 PPF 키메라 폴리펩티드는 천연 PP에 50％ 이상, 60％ 이상, 70％ 이상, 80％ 이상, 90％ 이상, 92％ 이상, 94％ 이상 또는 97％ 이상의 서열 동일성을 나타낼 수 있다. 또다른 실시양태에서, 이러한 PPF 키메라 폴리펩티드는 천연 NPY에 50％ 이상, 60％ 이상, 70％ 이상, 80％ 이상, 90％ 이상, 92％ 이상, 94％ 이상 또는 97％ 이상의 서열 동일성을 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 적어도 N-말단 폴리프롤린 PPF 모티프 및 C-말단 테일 PPF 모티프를 포함할 수 있다. 이들 PPF 키메라 및 또한 다른 PYY 및 PP 유사체는 2006년 6월 22일에 공개된 US 2006/0135747 A1에 기재되어 있다. 한 실시양태에서, 임의의 PPF 패밀리 펩티드는 하이브리드 성분으로 함유되지 않는다면 본원에 기재한 바와 같이 하이브리드와 함께 제2 작용제, 예를 들어 제2 항-비만제로서 제공될 수 있다. In another embodiment, the PPF family component module is a PPF chimeric polypeptide comprising a fragment of a PP, PYY or NPY polypeptide covalently linked to one or more additional fragments of a second PP, PYY or NPY polypeptide, wherein each PP , PYY or NPY fragments include PPF motifs. Alternatively, a PPF chimera may comprise a fragment of a PP family polypeptide linked to one, two, three or four polypeptide segments, wherein at least one of the connected polypeptide segments is a fragment of a second PP family polypeptide . In certain embodiments, the PPF polypeptide does not comprise an N-terminal PP fragment and a C-terminal NPY fragment. The PPF chimeric polypeptide component module exhibits more than 50% sequence identity to native PYY (3-36) over the entire length of native PYY (3-36). In some embodiments, such PPF chimeric polypeptides comprise at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, at least 92%, at least 90%, at least 90% 94% or more, or 97% or more sequence identity. Such PPF chimeric polypeptides may exhibit sequence identity of at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, at least 92%, at least 94% or at least 97% to native PP. In another embodiment, such PPF chimeric polypeptides may exhibit at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, at least 92%, at least 94% or at least 97% have. In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide can comprise at least an N-terminal polyprolin PPF motif and a C-terminal tail PPF motif. These PPF chimeras and also other PYY and PP analogs are described in US 2006/0135747 A1 published on June 22, 2006. In one embodiment, any PPF family peptide may be provided as a second agent, e. G., A second anti-obesity agent, with a hybrid as described herein, if not contained as a hybrid component.

다시, PPF 키메라 폴리펩티드는 일반적으로 천연 인간 PP, PYY, 또는 NPY의 생물학적 활성을 적어도 일부 보유할 것이다. 일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 대사 상태 및 장애의 치료 및 예방에서 생물학적 활성을 나타낸다. Again, PPF chimeric polypeptides will generally retain at least some of the biological activity of native human PP, PYY, or NPY. In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide exhibits biological activity in the treatment and prevention of metabolic conditions and disorders.

PPF 키메라의 폴리펩티드 단편들은, 직접적인 아미드 결합 또는 화학적 링커기 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업계에 공지된 임의의 방식으로 함께 공유 연결될 수 있다. 화학적 링커기는 폴리펩티드 형태를 유도하거나 안정화시키는 펩티드 모방체를 포함할 수 있다. PPF 키메라 폴리펩티드로는 PYY-PP, PYY-NPY, PP-PYY, PP-NPY, NPY-PP 또는 NPY-PYY 키메라 등이 있다.Polypeptide fragments of PPF chimeras can be covalently linked together in any manner known in the art including, but not limited to, direct amide linkage or chemical linker groups. The chemical linker group may include a peptide mimetic that induces or stabilizes the polypeptide form. PPF chimeric polypeptides include PYY-PP, PYY-NPY, PP-PYY, PP-NPY, NPY-PP or NPY-PYY chimera.

PPF 키메라는 적어도 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개, 30개, 31개, 32개, 33개 또는 34개 아미노산 길이일 수 있다. 일부 실시양태에서, PYY 유사체 폴리펩티드는 천연 L-아미노산 잔기 및/또는 변형된 천연 L-아미노산 잔기만을 포함한다. 일부 실시양태에서, PYY 유사체 폴리펩티드는 비-천연 아미노산 잔기를 포함하지 않는다.The PPF chimera may be at least 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33 or 34 amino acids in length . In some embodiments, the PYY analog polypeptide comprises only natural L-amino acid residues and / or modified native L-amino acid residues. In some embodiments, the PYY analog polypeptide does not comprise non-naturally occurring amino acid residues.

일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 하기의 것을 포함한다:In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide comprises:

일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 PP 패밀리 유사체 폴리펩티드의 단편을 포함할 수 있다. 예를 들어, PPF 키메라 폴리펩티드는 본원에 기재한 PPF 유사체 폴리펩티드 뿐만이 아니라 PP 유사체 폴리펩티드, 및 NPY 유사체 폴리펩티드까지도 포함할 수 있다.In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide may comprise a fragment of a PP family analog polypeptide. For example, PPF chimeric polypeptides may include not only PPF analog polypeptides described herein but also PP analog polypeptides, and NPY analog polypeptides.

본 발명의 하이브리드에 사용하거나 제2 작용제로서 사용하기 위한 PYY 유사체 폴리펩티드는 본원에 기재한 검정법 (예를 들어 음식물 섭취, 위 공복, 췌장 분비, 신체 조성 또는 체중 감소 검정) 중 하나에서 동일 검정에서의 NPY, PYY, 또는 PYY(3-36)의 효력과 동일하거나 더 큰 효력을 갖는 것이다. 일부 실시양태에서, PPY 유사체 폴리펩티드는 대사 질환, 예를 들어 비만, 인슐린 내성 증후군 (증후군 X) 또는 진성 당뇨병의 치료에 유용할 수 있다. 일부 실시양태에서, PYY 유사체 폴리펩티는 PP, NPY, PYY 또는 PYY(3-36)에 비해 제조의 용이성, 안정성 및/또는 제제화의 용이성이 개선된 것으로 나타날 수 있다.PYY analog polypeptides for use in the hybrids of the present invention or for use as secondary agonists can be administered in the same assay at one of the assays described herein (e.g., food intake, gastric emptying, pancreas secretion, body composition or weight loss assay) NPY, PYY, or PYY (3-36). In some embodiments, the PPY analog polypeptide can be useful for the treatment of metabolic diseases, such as obesity, insulin resistance syndrome (syndrome X) or diabetes mellitus. In some embodiments, the PYY analog polypeptides may appear to have improved ease of manufacture, stability, and / or ease of formulation as compared to PP, NPY, PYY, or PYY (3-36).

일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 영양분 이용률의 감소, 음식물 섭취의 감소, 체중 증가 효과, 및/또는 대사 상태 및 장애의 치료 및 예방과 관련하여 천연 인간 PYY의 생물학적 활성을 약 25％ 또는 약 30％, 약 40％, 약 50％, 약 60％, 약 70％, 약 80％, 약 90％, 약 95％, 약 98％ 또는 약 99％ 이상 보유한다. 또다른 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 개선된 PYY 효능제 활성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 영양분 이용률의 감소, 음식물 섭취의 감소, 체중 증가 효과, 및/또는 대사 상태 및 장애의 치료 및 예방과 관련하여 천연 인간 PYY의 생물학적 활성의 약 110％ 이상, 약 125％ 이상, 약 130％ 이상, 약 140％ 이상, 약 150％ 이상, 약 200％ 이상을 나타내거나 또는 그보다 높은 활성을 나타낸다.In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide has a biological activity of natural human PYY of about 25% or about 30%, in association with a reduction in nutrient utilization, a decrease in food intake, a weight gain effect, and / or a treatment and prevention of metabolic conditions and disorders %, About 40%, about 50%, about 60%, about 70%, about 80%, about 90%, about 95%, about 98% In another embodiment, the PPF chimeric polypeptide exhibits improved PYY agonist activity. In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide comprises about 110% or more of the biological activity of native human PYY in association with a reduction in nutrient utilization, a decrease in food intake, a weight gain effect, and / or a treatment and prevention of metabolic conditions and disorders, At least about 125%, at least about 130%, at least about 140%, at least about 150%, at least about 200%, or more.

더욱 특히, 한 측면에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 PYY의 단편에 연결된 PP의 단편을 포함한다. 한 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 PP 또는 PP 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편이 그의 C-말단 종결부에서 PYY 또는 PYY 유사체 폴리펩티드의 C-말단 단편에 연결된, PP 또는 PP 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편을 포함한다. 또다른 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 PYY, PYY(3-36) 또는 PYY 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편이 그의 C-말단 종결부에서 PP 또는 PP 유사체 폴리펩티드의 C-말단 단편에 연결된, PYY, PYY(3-36) 또는 PYY 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편을 포함한다. More particularly, in one aspect, the PPF chimeric polypeptide comprises a fragment of PP linked to a fragment of PYY. In one embodiment, the PPF chimeric polypeptide is an N-terminal fragment of a PP or PP analog polypeptide wherein the N-terminal fragment of the PP or PP analog polypeptide is linked to the C-terminal fragment of the PYY or PYY analog polypeptide at its C- . In another embodiment, the PPF chimeric polypeptide is a PYY, PYY (3-36) or PYY analogue polypeptide wherein the N-terminal fragment of the PYY analog polypeptide is linked to the C-terminal fragment of the PP or PP analog polypeptide at its C- PYY (3-36) or an N-terminal fragment of a PYY analog polypeptide.

일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 NPY의 단편에 연결된 PYY의 단편을 포함한다. 한 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 PYY, PYY(3-36) 또는 PYY 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편이 그의 C-말단 종결부에서 NPY 또는 NPY 유사체 폴리펩티드의 C-말단 단편에 연결된, PYY, PYY(3-36) 또는 PYY 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편을 포함한다. 또다른 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 NPY 또는 NPY 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편이 그의 C-말단 종결부에서 PYY 또는 PYY 유사체 폴리펩티드의 C-말단 단편에 연결된, NPY 또는 NPY 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편을 포함한다. In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide comprises a fragment of PYY linked to a fragment of NPY. In one embodiment, the PPF chimeric polypeptide comprises a PYY, PYY (3-36), or PYY (3-36) polypeptide wherein the N-terminal fragment of the PYY analog polypeptide is linked at its C- terminus terminus to the C-terminal fragment of the NPY or NPY analog polypeptide (3-36) or an N-terminal fragment of a PYY analog polypeptide. In another embodiment, the PPF chimeric polypeptide comprises an N-terminal of the NPY or NPY analog polypeptide, wherein the N-terminal of the NPY or NPY analog polypeptide is linked to the C-terminal fragment of the PYY or PYY analog polypeptide at its C- Lt; / RTI >

일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 NPY의 단편에 연결된 PP의 단편을 포함한다. 한 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 PP 또는 PP 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편이 그의 C-말단 종결부에서 NPY 또는 NPY 유사체 폴리펩티드의 C-말단 단편에 연결된, PP 또는 PP 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편을 포함한다. 또다른 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 NPY 또는 NPY 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편이 그의 C-말단 종결부에서 PP 또는 PP 유사체 폴리펩티드의 C-말단 단편에 연결된, NPY 또는 NPY 유사체 폴리펩티드의 N-말단 단편을 포함한다. In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide comprises a fragment of PP linked to a fragment of NPY. In one embodiment, the PPF chimeric polypeptide comprises an N-terminal fragment of a PP or PP analog polypeptide, wherein the N-terminal fragment of the PP or PP analog polypeptide is linked to the C-terminal fragment of the NPY or NPY analog polypeptide at its C- . In another embodiment, the PPF chimeric polypeptide is an N-terminal of an NPY or NPY analog polypeptide, wherein the N-terminal fragment of the NPY or NPY analog polypeptide is linked to the C-terminal fragment of the PP or PP analog polypeptide at its C- Lt; / RTI >

일부 실시양태에서, PP, PP 유사체 폴리펩티드, PYY, PYY(3-36), PYY 유사체 폴리펩티드, NPY 또는 NPY 유사체 폴리펩티드의 단편은 PP, PP 유사체 폴리펩티드, PYY, PYY(3-36), PYY 유사체 폴리펩티드, NPY 또는 NPY 유사체 폴리펩티드의 임의의 4개 내지 20개의 아미노산 잔기를 포함하는 단편이다. 일부 실시양태에서, 단편의 길이는 34개 이상의 아미노산 길이를 갖는 최종 PPF 키메라 폴리펩티드가 수득되도록 선택된다.In some embodiments, fragments of PP, PP analog polypeptides, PYY, PYY (3-36), PYY analog polypeptide, NPY or NPY analog polypeptide are PP, PP analog polypeptide, PYY, PYY (3-36), PYY analog polypeptide , NPY or an NPY analog polypeptide. In some embodiments, the length of the fragment is selected to yield a final PPF chimeric polypeptide having a length of at least 34 amino acids.

PPF 키메라 폴리펩티드는 또한 이러한 PPF 키메라 폴리펩티드의 아미노산 서열에 대하여 예를 들어 치환, 결실 및 삽입 및 이들의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는 변형을 추가로 포함할 수도 있다. 일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 "비-필수" 아미노산 잔기의 1개 이상의 변형을 포함한다. "비-필수" 아미노산 잔기는 관심 활성을 파괴하거나 실질적으로 감소시키지 않으면서 천연 인간 아미노산 서열 내에서 변경될 수 있는, 즉 결실되거나 치환될 수 있는 잔기이다. The PPF chimeric polypeptide may further comprise a variant that includes, but is not limited to, for example, substitution, deletion and insertion of amino acid sequences of such PPF chimeric polypeptides and any combination thereof. In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide comprises at least one variant of a "non-essential" amino acid residue. A "non-essential" amino acid residue is a residue that can be altered within the natural human amino acid sequence, ie, deleted or substituted, without destroying or substantially reducing the activity of interest.

PPF 키메라 폴리펩티드의 유도체도 유용하다. 이러한 유도체는 1개 이상의 수용성 중합체 분자, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 ("PEG") 또는 다양한 길이의 지방산 쇄 (예를 들어 스테아릴, 팔미토일, 옥타노일, 올레오일 등)에 접합되거나 폴리아미노산, 예를 들어 폴리-his, 폴리-arg, 폴리-lys 및 폴리-ala이 부가된 PPF 키메라 폴리펩티드를 포함한다. PPF 키메라 폴리펩티드에 대한 변형은 또한 소분자 치환체, 예를 들어 단쇄 알킬 및 구속 알킬 (예를 들어 분지쇄, 시클릭, 융합, 아다만틸) 및 방향족기를 포함할 수도 있다. 일부 실시양태에서, 수용성 중합체 분자의 분자량은 바람직하게는 약 500 내지 약 20,000 달톤의 범위일 것이다. Derivatives of PPF chimeric polypeptides are also useful. Such derivatives may be conjugated to one or more water soluble polymer molecules, such as polyethylene glycol ("PEG") or fatty acid chains of various lengths (e.g., stearyl, palmitoyl, octanoyl, oleoyl, For example, poly-his, poly-arg, poly-lys and poly-aa added PPF chimeric polypeptides. Modifications to PPF chimeric polypeptides may also include small molecule substituents, such as short chain alkyl and constrained alkyl (e.g., branched, cyclic, fused, adamantyl) and aromatic groups. In some embodiments, the molecular weight of the water soluble polymer molecules will preferably range from about 500 to about 20,000 daltons.

이러한 중합체-접합 및 소분자 치환체 변형은 PPF 키메라 폴리펩티드의 서열 중 하이브리드 형성에 관여하지 않는 아미노산 잔기의 N-말단 또는 C-말단에서 또는 측쇄에서 1회 발생할 수 있다. 별법으로, PPF 키메라 폴리펩티드를 따라 유도체화의 다중 부위가 존재할 수 있다. 1개 이상의 아미노산을 리신, 아스파르트산, 글루탐산 또는 시스테인으로 치환하는 것은 추가의 유도체화 부위를 제공할 수 있다. 예를 들어 미국 특허 제5,824,784호 및 동 제5,824,778호를 참조한다. 일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 1개, 2개 또는 3개의 중합체 분자에 접합될 수 있다.Such polymer-conjugated and small molecule substitution modifications can occur at the N-terminus or C-terminus of the amino acid residue that is not involved in hybridization in the sequence of the PPF chimeric polypeptide, or in the side chain. Alternatively, multiple sites of derivatization along the PPF chimeric polypeptide may be present. Substitution of one or more amino acids with lysine, aspartic acid, glutamic acid, or cysteine may provide additional derivatization sites. See, for example, U.S. Patent Nos. 5,824,784 and 5,824,778. In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide can be conjugated to one, two or three polymer molecules.

일부 실시양태에서, 수용성 중합체 분자는 아미노, 카르복실 또는 티올기에 연결될 수 있고, N-말단 또는 C-말단에 의해 또는 리신, 아스파르트산, 글루탐산 또는 시스테인의 측쇄에서 연결될 수 있다. 별법으로, 수용성 중합체 분자는 디아민 및 디카르복실기와 연결될 수 있다. 일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 리신 아미노산 상의 엡실론 아미노기를 통해 1개, 2개 또는 3개의 PEG 분자에 접합된다.In some embodiments, the water soluble polymer molecule can be connected to an amino, carboxyl, or thiol group and can be attached at the N-terminal or C-terminal or at the side chain of lysine, aspartic acid, glutamic acid or cysteine. Alternatively, the water soluble polymer molecule may be linked with a diamine and a dicarboxylic group. In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide is conjugated to one, two, or three PEG molecules through an epsilon amino group on the lysine amino acid.

또한, PPF 키메라 폴리펩티드는 1개 이상의 아미노산 잔기에 대한 화학적 변경을 갖는 PPF 키메라 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 화학적 변경은 아미드화, 글리코실화, 아실화, 황산화, 인산화, 아세틸화 및 고리화를 포함한다. 화학적 변경은 PPF 키메라 폴리펩티드의 서열 내의 아미노산 잔기의 N-말단 또는 C-말단에서 또는 측쇄에서 1회 발생할 수 있다. 한 실시양태에서, 이들 펩티드의 C-말단은 유리 -OH기 또는 -NH₂기를 가질 수 있다. 또다른 실시양태에서, N-말단 종결부는 이소부틸옥시카르보닐기, 이소프로필옥시카르보닐기, n-부틸옥시카르보닐기, 에톡시카르보닐기, 이소카프로일기 (isocap), 옥타닐기, 옥틸 글리신기 (G(Oct)) 또는 8-아미노옥탄산기로 캡핑될 수 있다. 일부 실시양태에서, 고리화는 디술피드 브릿지의 형성을 통해 수행될 수 있다. 별법으로, PYY 유사체 폴리펩티드를 따라 화학적 변경된 다중 부위가 존재할 수 있다.PPF chimeric polypeptides also include PPF chimeric polypeptides with chemical modifications to one or more amino acid residues. Such chemical modifications include amidation, glycosylation, acylation, sulfation, phosphorylation, acetylation and cyclization. The chemical modification may occur at the N-terminal or C-terminus of the amino acid residue in the sequence of the PPF chimeric polypeptide or in the side chain one time. In one embodiment, C- terminus of these peptides may have an advantage -OH group or -NH _2. In another embodiment, the N-terminal terminus is an isobutyloxycarbonyl group, an isopropyloxycarbonyl group, an n-butyloxycarbonyl group, an ethoxycarbonyl group, an isocapyl group, an octanyl group, an octylglycine group (G (Oct) Or an 8-amino octanoic acid group. In some embodiments, the cyclization can be carried out through the formation of a disulfide bridge. Alternatively, multiple sites chemically modified along the PYY analog polypeptide may be present.

일부 실시양태에서, PPF 키메라 폴리펩티드는 US 2006/0135747 A1의 서열 238 내지 서열 347의 아미노산 서열을 갖는 것을 포함한다.In some embodiments, the PPF chimeric polypeptide comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 238 to SEQ ID NO: 347 of US 2006/0135747 Al.

예시적인 PPF 키메라 폴리펩티드는 하기 식 VI의 폴리펩티드를 포함한다:Exemplary PPF chimeric polypeptides include polypeptides of formula VI:

<식 VI>

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여기서,here,

Xaa₁은 Tyr이거나, 또는 존재하지 않고,Xaa < _{1 >} is Tyr, or is absent,

Xaa₂는 Ile 또는 Pro이거나, 또는 존재하지 않고,Xaa < _{2 >} is Ile or Pro, or is absent,

Xaa₃은 Ile, BH(볼턴-헌터(Bolton-Hunter))-변형된 Lys, Lys, Val 또는 Pro이고,Xaa ₃ is Ile, BH (Bolton-Hunter) -modified Lys, Lys, Val or Pro,

Xaa₄는 Lys, BH-변형된 Lys, Ala, Ser 또는 Arg이고,Xaa ₄ is Lys, BH-modified Lys, Ala, Ser or Arg,

Xaa₇은 Ala, Gly, 또는 His이고,Xaa ₇ is Ala, Gly, or His,

Xaa₉는 Gly 또는 Ala이고,Xaa ₉ is Gly or Ala,

Xaa₁₂는 Ala 또는 Pro이고,Xaa ₁₂ is Ala or Pro,

Xaa₁₃은 Ser 또는 Pro이고,Xaa ₁₃ is Ser or Pro,

Xaa₁₄는 Pro, Ala 또는 Ser이고,Xaa ₁₄ is Pro, Ala or Ser,

Xaa₁₆은 Glu 또는 Asp이고,Xaa ₁₆ is Glu or Asp,

Xaa₁₇은 Leu 또는 Ile이고,Xaa ₁₇ is Leu or Ile,

Xaa₁₈은 Asn 또는 Ala이고,Xaa ₁₈ is Asn or Ala,

Xaa₁₉는 Arg, Lys, BH-변형된 Lys, Gln 또는 N(Me)Ala이고,Xaa ₁₉ is Arg, Lys, BH-modified Lys, Gln or N (Me) Ala,

Xaa₂₁은 Tyr, Ala, Phe, Lys 또는 BH-변형된 Lys이고,Xaa ₂₁ is Tyr, Ala, Phe, Lys or BH-modified Lys,

Xaa₂₂는 Ala 또는 Ser이고,Xaa ₂₂ is Ala or Ser,

Xaa₂₃은 Ser, Ala, 또는 Asp이고,Xaa ₂₃ is Ser, Ala, or Asp,

Xaa₂₅는 Arg, Lys 또는 BH-변형된 Lys이고,Xaa ₂₅ is Arg, Lys or BH-modified Lys,

Xaa₂₆은 His, Ala 또는 Arg이고,Xaa ₂₆ is His, Ala or Arg,

Xaa₂₈은 Leu 또는 Ile이고,Xaa ₂₈ is Leu or Ile,

Xaa₃₀은 Leu 또는 Met이고,Xaa < ₃₀ > is Leu or Met,

Xaa₃₁은 Val, Ile 또는 Leu이고,Xaa < ₃₁ > is Val, Ile or Leu,

Xaa₃₅는 Lys, BH-변형된 Lys 또는 Arg이며,Xaa ₃₅ is Lys, BH-modified Lys or Arg,

Xaa₃₆은 Tyr, Trp, 또는 Phe이다.Xaa ₃₆ is Tyr, Trp, or Phe.

한 실시양태에서, 식 VI의 PPF 폴리펩티드는 천연 PPF 폴리펩티드, PYY(2-36), Val3hPYY(3-36), Lys25hPYY(3-36), Lys25Ile28hPYY(3-36), Lys25Ile31hPYY(3-36), Lys25Leu31hPYY(3-36), Lys25Phe36hPYY(3-36), Ile28hPYY(3-36), Ile31hPYY(3-36), Leu31hPYY(3-36), Phe36hPYY(3-36), Leu31Phe36hPYY(3-36) 또는 Pro13Ala14hPYY일 수 있다.In one embodiment, the PPF polypeptide of formula VI comprises a natural PPF polypeptide, PYY (2-36), Val3hPYY (3-36), Lys25hPYY (3-36), Lys25Ile28hPYY (3-36), Lys25Ile31hPYY Leu31PH36YPYY (3-36), Leu31Phe36hPYY (3-36), Ile28hPYY (3-36), Ile31hPYY (3-36), Leu31hPYY (3-36), Phe36hPYY (3-36), Leu31Phe36hPYY (3-36), or Pro13Ala14hPYY Lt; / RTI >

당업자가 알고 있는 바와 같이, 식 VI의 폴리펩티드는 유리 산 형태일 수도 있고, 또는 C-말단 아미드화된 것일 수도 있다.As will be appreciated by those skilled in the art, the polypeptide of formula VI may be in the free acid form, or may be C-terminal amidated.

일부 실시양태에서, PPF 폴리펩티드는 천연 인간 NPY (Tyr Pro Ser Lys Pro Asp Asn Pro Gly Glu Asp Ala Pro Ala Glu Asp Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln Arg Tyr) (서열 457)의 아미노산 잔기 18 내지 36으로 본질적으로 이루어진 C-말단 단편에 연결된, 천연 인간 PYY (Tyr Pro Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr) (서열 58)의 처음 17개 아미노산 잔기로 본질적으로 이루어진 N-말단 단편을 포함할 수 있고, 여기서 PYY 단편의 N-말단의 1개 이상의 아미노산 잔기는 결실되거나 존재하지 않을 수 있으며, PYY 및 NPY 단편의 각각에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 아미노산 치환이 존재할 수 있다. 일부 실시양태에서, PPF 폴리펩티드의 처음 17개 아미노산으로 본질적으로 이루어진 N-말단 단편은 천연 PYY의 처음 17개 아미노산에 50％ 이상, 60％ 이상, 70％ 이상, 80％ 이상, 90％ 이상, 92％ 이상, 94％ 이상 또는 97％ 이상의 서열 동일성을 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, 아미노산 잔기 18 내지 36으로 본질적으로 이루어진 PPF 폴리펩티드의 C-말단 단편은 천연 NPY의 아미노산 18 내지 36에 50％ 이상, 60％ 이상, 70％ 이상, 80％ 이상, 90％ 이상, 92％ 이상, 94％ 이상 또는 97％ 이상의 서열 동일성을 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, PYY의 N-말단 단편에 존재하는 아미노산 (예를 들어 위치 5 및 위치 8의 프롤린, 위치 6, 위치 10 및 위치 15의 글루타메이트 또는 위치 11의 아스파르테이트) 및/또는 PYY의 C-말단 단편에 존재하는 아미노산 (예를 들어 위치 20 및 위치 27의 티로신, 위치 24의 류신, 위치 29의 아스파라진, 위치 32의 트레오닌, 위치 33의 아르기닌 또는 위치 34의 글루타민)은 치환되지 않는다. 일부 실시양태에서, PPF 폴리펩티드는 US 2006/0135747 A1의 서열 266, 267, 274, 282, 320, 및 436 내지 480의 아미노산 서열을 갖는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, PPF 폴리펩티드는 N-말단 캡을 추가로 포함한다. 이들 PPF 폴리펩티드의 예로는 US 2006/0135747 A1의 서열 282, 320, 437, 441, 444, 445 내지 447, 452, 454 내지 459, 461 내지 464, 466, 468 내지 470 및 472 내지 480 등이 있다.In some embodiments, the PPF polypeptide is a native human NPY (Tyr Pro Ser Lys Pro Asp Asn Pro Gly Glu Asp Ala Pro Ala Glu Asp Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln Arg Tyr) (Tyr Pro Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His (SEQ ID NO: 457), which is linked to a C-terminal fragment consisting essentially of amino acid residues 18-36 Terminal fragment consisting essentially of the first 17 amino acid residues of the Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr (SEQ ID NO: 58), wherein one or more amino acid residues at the N-terminus of the PYY fragment are deleted 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 or 10 amino acid substitutions may be present in each of the PYY and NPY fragments. In some embodiments, the N-terminal fragment consisting essentially of the first 17 amino acids of the PPF polypeptide comprises at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, at least 92% , At least 94%, or at least 97% sequence identity. In some embodiments, the C-terminal fragment of a PPF polypeptide consisting essentially of amino acid residues 18-36 has at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90% , At least 92%, at least 94% or at least 97% sequence identity. In some embodiments, amino acids present in the N-terminal fragment of PYY (e.g., proline at position 5 and position 8, glutamate at position 6, position 10 and position 15 or aspartate at position 11) and / or PYY (E.g., tyrosine at position 20 and position 27, leucine at position 24, asparagine at position 29, threonine at position 32, arginine at position 33 or glutamine at position 34) present in the C-terminal fragment are not substituted . In some embodiments, the PPF polypeptides include those having the amino acid sequences of SEQ ID NOS: 266, 267, 274, 282, 320, and 436 to 480 of US 2006/0135747 A1. In some embodiments, the PPF polypeptide further comprises an N-terminal cap. Examples of these PPF polypeptides include SEQ ID NOS: 282, 320, 437, 441, 444, 445 to 447, 452, 454 to 459, 461 to 464, 466, 468 to 470 and 472 to 480 of US 2006/0135747 A1.

다른 PPF 폴리펩티드는 하기 식 VII의 폴리펩티드를 포함한다:Other PPF polypeptides include polypeptides of formula VII:

<식 VII>

삭제delete

여기서,here,

Xaa₆은 Glu, Gln, Ala, Asn, Asp 또는 Val이고,Xaa ₆ is Glu, Gln, Ala, Asn, Asp or Val,

Xaa₉는 Gly 또는 Ala이고,Xaa ₉ is Gly or Ala,

Xaa₁₀은 Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro 또는 Aib이고,Xaa ₁₀ is Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro or Aib,

Xaa₁₁은 Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro 또는 Aib이고,Xaa ₁₁ is Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro or Aib,

Xaa₁₂는 Ala 또는 Pro이고,Xaa ₁₂ is Ala or Pro,

Xaa₁₃은 Ser 또는 Pro이고,Xaa ₁₃ is Ser or Pro,

Xaa₁₄는 Pro, Ala 또는 Ser이고,Xaa ₁₄ is Pro, Ala or Ser,

Xaa¹⁵는 Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro 또는 Aib이고,Xaa ¹⁵ is Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro or Aib,

Xaa₁₆은 Glu 또는 Asp이고,Xaa ₁₆ is Glu or Asp,

Xaa₁₇은 Leu 또는 Ile이고,Xaa ₁₇ is Leu or Ile,

Xaa₂₂는 Ala 또는 Ser이고,Xaa ₂₂ is Ala or Ser,

Xaa₂₃은 Ser, Ala, 또는 Asp이고,Xaa ₂₃ is Ser, Ala, or Asp,

Xaa₂₆은 His, Ala 또는 Arg이고,Xaa ₂₆ is His, Ala or Arg,

Xaa₂₇은 Tyr 또는 Phe이고,Xaa ₂₇ is Tyr or Phe,

Xaa₂₈은 Leu 또는 Ile이고,Xaa ₂₈ is Leu or Ile,

Xaa₂₉는 Asn 또는 Gln이고,Xaa ₂₉ is Asn or Gln,

Xaa₃₀은 Leu 또는 Met이며,Xaa < _{30 >} is Leu or Met,

Xaa₃₁은 Val, Ile 또는 Leu이다.Xaa ₃₁ is Val, Ile or Leu.

당업자가 알고 있는 바와 같이, 식 VII의 폴리펩티드는 유리 산 형태일 수도 있고, 또는 C-말단 아미드화된 것일 수도 있다.As will be appreciated by those skilled in the art, the polypeptide of formula VII may be in the free acid form, or may be C-terminal amidated.

일부 실시양태에서, PPF 폴리펩티드는 천연 인간 NPY (US 2006/0135747 A1의 서열 4)의 아미노산 잔기 18 내지 36으로 본질적으로 이루어진 C-말단 단편에 연결된, 천연 인간 PYY (US 2006/0135747 A1의 서열 2)의 처음 17개 아미노산 잔기로 본질적으로 이루어진 N-말단 단편을 포함할 수 있고, 여기서 PYY 단편의 N-말단의 1개 이상의 아미노산 잔기는 결실되거나 존재하지 않을 수 있으며, PYY 및 NPY 단편의 각각에 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 아미노산 치환이 존재할 수 있다. 일부 실시양태에서, PPF 폴리펩티드의 처음 17개 아미노산으로 본질적으로 이루어진 N-말단 단편은 천연 PYY의 처음 17개 아미노산에 50％ 이상, 60％ 이상, 70％ 이상, 80％ 이상, 90％ 이상, 92％ 이상, 94％ 이상 또는 97％ 이상의 서열 동일성을 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, 아미노산 잔기 18 내지 36으로 본질적으로 이루어진 PPF 폴리펩티드의 C-말단 단편은 천연 NPY의 아미노산 18 내지 36에 50％ 이상, 60％ 이상, 70％ 이상, 80％ 이상, 90％ 이상, 92％ 이상, 94％ 이상 또는 97％ 이상의 서열 동일성을 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, PYY의 N-말단 단편에 존재하는 아미노산 (예를 들어 위치 3, 위치 5 및 위치 8의 프롤린, 또는 위치 7의 히스티딘) 및/또는 NPY의 C-말단 단편에 존재하는 아미노산 (예를 들어 위치 18의 알라닌, 위치 20 및 위치 36의 티로신, 위치 24의 류신, 위치 32의 트레오닌, 위치 33의 아르기닌, 위치 34의 글루타민 또는 위치 35의 아르기닌)은 치환되지 않는다. 일부 실시양태에서, PPF 폴리펩티드는 US 2006/0135747 A1의 서열 266, 437, 438, 439, 442, 462, 469, 470, 471 및 472 등과 같이 PYY-NPY 키메라의 아미노산 서열을 갖는 것들 또는 Ile, Lys, Pro, Glu, His, Pro, Gly, Glu, Asp, Ala, Ser, Pro, Glu, Glu, Leu, Ala, Arg, Tyr, Tyr, Ala, Ser, Leu, Arg, Ala, Tyr, Ile, Asn, Leu, Ile, Thr, Arg, Gln, Arg, Tyr-NH₂의 아미노산 서열을 갖는 화합물을 포함한다. 일부 실시양태에서, PPF 폴리펩티드는 N-말단 캡을 추가로 포함한다. 이들 PPF 폴리펩티드의 예로는 US 2006/0135747 A1의 서열 437, 462, 469, 470 및 472 등이 있다. 예를 들어, US 2006/0135747 A1의 서열 438은 Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Ala Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln Arg Tyr (서열 425)이다. 한 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드, 특히 비만 치료, 체중 감소, 지방의 감소 또는 재분배, 및 칼로리 섭취의 감소에 유용한 하이브리드는 US 2006/0135747 A1의 한 성분인 서열 438을 포함한다. 이러한 하이브리드는 아밀리노모방체(amylinomimetic) 성분 또는 렙틴 성분 또는 이들 둘다를 함유할 수도 있다.In some embodiments, the PPF polypeptide is a native human PYY (SEQ ID NO: 2 of US 2006/0135747 A1, linked to a C-terminal fragment consisting essentially of amino acid residues 18 to 36 of native human NPY (SEQ ID NO: 4 of US 2006/0135747 A1) ), Wherein one or more amino acid residues at the N-terminus of the PYY fragment may be deleted or absent, and each of the PYY and NPY fragments may comprise an N-terminal fragment consisting essentially of the first 17 amino acid residues One, two, three, four, five, six, seven, eight, nine or ten amino acid substitutions may be present. In some embodiments, the N-terminal fragment consisting essentially of the first 17 amino acids of the PPF polypeptide comprises at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90%, at least 92% , At least 94%, or at least 97% sequence identity. In some embodiments, the C-terminal fragment of a PPF polypeptide consisting essentially of amino acid residues 18-36 has at least 50%, at least 60%, at least 70%, at least 80%, at least 90% , At least 92%, at least 94% or at least 97% sequence identity. In some embodiments, amino acids present in the N-terminal fragment of PYY (e.g., proline at position 3, position 5 and position 8, or histidine at position 7) and / or the C-terminal fragment of NPY Tyrosine at position 20, leucine at position 24, threonine at position 32, arginine at position 33, glutamine at position 34, or arginine at position 35) are not substituted. In some embodiments, the PPF polypeptides are those having the amino acid sequence of a PYY-NPY chimera such as SEQ ID NOS: 266, 437, 438, 439, 442, 462, 469, 470, 471 and 472 of US 2006/0135747 A1, Glu, Glu, Asp, Ala, Ser, Pro, Glu, Glu, Leu, Ala, Arg, Tyr, Tyr, Ala, Ser, Leu, Arg, Ala, Tyr, Ile, Asn , it includes compounds having an amino acid sequence of Leu, Ile, Thr, Arg, Gln, Arg, Tyr-NH _2. In some embodiments, the PPF polypeptide further comprises an N-terminal cap. Examples of these PPF polypeptides include SEQ ID NOS: 437, 462, 469, 470 and 472 of US 2006/0135747 A1. For example, SEQ ID NO: 438 of US 2006/0135747 A1 shows Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Ala Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln Arg Tyr (SEQ ID NO: 425 )to be. In one embodiment, hybrids useful in the hybrids of the present invention, particularly for the treatment of obesity, weight loss, reduction or redistribution of fat, and reduction of caloric intake, comprise SEQ ID NO: 438, a component of US 2006/0135747 A1. Such hybrids may contain an amylinomimetic component or a leptin component, or both.

PPF 폴리펩티드 및 PPF 키메라가 단독으로 사용되거나 제2 작용제 또는 본 발명의 하이브리드의 성분으로 사용되는 경우, 이것은 대상체에게 지방:제지방 비율을 변경시켜서 신체 조성을 변경하는 화합물 (PPF 폴리펩티드 또는 PPF 키메라 단독으로 사용되거나 제2 작용제 또는 본 발명의 하이브리드의 성분으로서 사용됨)을 투여하는 것을 포함하는, 대상체의 신체 조성 변경을 포함하는 방법에 사용된다. PPF 폴리펩티드는 5705라고 지칭되는 PYY-NPY 키메라 및 US 2006/0135747 A1의 하기 서열로 이루어진 군에서 선택된 아미노산 서열을 포함할 수 있다: 서열 266, 267, 274, 282, 320, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, 464, 465, 466, 467, 468, 469, 470, 471, 472, 473, 474, 475, 476, 477, 478, 479 및 480. 한 실시양태에서, 체지방은 감소하고 제지방 체중(lean body mass)은 유지되거나 증가한다. 한 실시양태에서, 체지방 및 제지방 체중은 체지방 백분율(％) 및 제지방 체중 백분율(％) 각각으로 측정된다. 한 추가의 실시양태에서, 체중이 감소된다. 또다른 실시양태에서, 체중이 유지되거나 증가한다. 상기 화합물은 말초 투여될 수 있다. PPF 폴리펩티드 또는 PPF 키메라 또는 PPF-함유 하이브리드는 대상체에게 아밀린, 아밀린 효능제 또는 아밀린 유사체 효능제, 연어 칼시토닌, 콜레시스토키닌 (CCK) 또는 CCK 효능제, 렙틴 (OB 단백질) 또는 렙틴 효능제, 엑센딘 또는 엑센딘 유사체 효능제, GLP-1, GLP-1 효능제 또는 GLP-1 유사체 효능제, CCK 또는 CCK 효능제, 칼시토닌, 칼시토닌 효능제, 소분자 칸나비노이드 CB1 수용체 길항제, 리모나반트, 11 베타-히드록시스테로이드 데히드로게나제-1 억제제, 시부트라민, 및 펜테르민으로 구성된 군으로부터 선택된 1종 이상의 다른 작용제를 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 대상체는 과체중 또는 비만이다. 또다른 실시양태에서, PPF 폴리펩티드 및 PPF 키메라가 단독으로 사용되거나 제2 작용제 또는 본 발명의 하이브리드의 성분으로 사용되는 경우, 이것은 대상체에게 혈장 트리글리세리드 수준을 저하시키는 유효량의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서의 혈장 트리글리세리드 수준을 우선적으로 저하시키는 방법을 포함하는 방법에 사용되며, 이때의 콜레스테롤 수준은 더 낮은 정도로 저하된다. 추가의 실시양태에서, 트리글리세리드 수준은 저하되지만 콜레스테롤 수준은 저하되지 않는다. 추가의 실시양태에서, 트리글리세리드 수준은 저하되지만 LDL 콜레스테롤 수준은 저하되지 않는다. 추가의 실시양태에서, 트리글리세리드 수준이 저하되고, LDL 콜레스테롤 수준은 더 낮은 정도로 저하된다. 추가의 실시양태에서, 아밀라제 수준 역시 저하된다. 또다른 실시양태에서, PPF 폴리펩티드 및 PPF 키메라가 단독으로 사용되거나 제2 작용제 또는 본 발명의 하이브리드의 성분으로 사용되는 경우, 이것은 대상체에게 제지방 체중은 유지 또는 증가시키면서 체지방 또는 체지방 증가를 감소시키는데 유효한 양의 상기 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 제지방 체중은 유지 또는 증가시키면서 체지방 또는 체지방 증가를 감소시키는 방법을 포함하는 방법에 사용된다. 또다른 실시양태에서, PPF 폴리펩티드 및 PPF 키메라가 단독으로 사용되거나 제2 작용제 또는 본 발명의 하이브리드의 성분으로 사용되는 경우, 이것은 대상체에게 내장 체지방은 감소시키고 제지방 체중은 보존하거나 증가시키는데 유효한 양의 상기 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 내장 체지방을 감소시키는 방법을 포함하는 방법에 사용된다. 또다른 실시양태에서, PPF 폴리펩티드 및 PPF 키메라가 단독으로 사용되거나 제2 작용제 또는 본 발명의 하이브리드의 성분으로 사용되는 경우, 이것은 대상체에서 지방 분포를 변경시키는 방법을 포함하는 방법에 사용된다. 한 측면에서, 상기 변경은 대상체에서 내장 또는 이소성(異所性) 지방, 또는 이들 2가지 모두의 대사 증가로 인한다. 또다른 실시양태에서, PPF 폴리펩티드 및 PPF 키메라가 단독으로 사용되거나 제2 작용제 또는 본 발명의 하이브리드의 성분으로 사용되는 경우, 이것은 대상체에게 지방산 β-산화는 증가시키면서 제지방 체중은 보존하거나 증가시키는데 유효한 양의 상기 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 지방산 β-산화는 증가시키면서 제지방 체중은 보존하거나 증가시키는 방법을 포함하는 방법에 사용된다. 또다른 실시양태에서, PPF 폴리펩티드 및 PPF 키메라가 단독으로 사용되거나 제2 작용제 또는 본 발명의 하이브리드의 성분으로 사용되는 경우, 이것은 대상체에게 비-알콜성 지방간염 또는 지방이영양증을 치료하는데 유효한 양의 상기 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 비-알콜성 지방간염 또는 지방이영양증을 치료하는 방법을 포함하는 방법에 사용된다. 이러한 용도에서 특별한 관심이 있는 하이브리드는 렙틴 패밀리 또는 아밀린 패밀리의 성분, 예를 들어 아밀린-sCT-아밀린 하이브리드, 또는 이들 2가지 모두와 조합되는, 본원에 기재한 바와 같은 PPF 키메라이다. PPF-키메라/렙틴 하이브리드 또는 PPF-키메라/아밀린-sCT-아밀린 하이브리드는 어느 쪽 화합물이든 단독으로 사용되는 경우보다 우수한 효과를 제공한다. 추가의 실시양태에서, PPF-키메라/렙틴 하이브리드는 아밀리노모방체와 조합 투여되며, 예를 들어 아밀린-sCT-아밀린 키메라 또는 PPF-키메라/아밀린-sCT-아밀린 하이브리드가 렙틴과 조합 투여된다.When the PPF polypeptide and the PPF chimera are used alone or as a component of a second agent or a hybrid of the present invention, this may be achieved by administering to the subject a compound that alters the body composition by altering the ratio of fat to fatty acid (PPF polypeptide or PPF chimera alone Or used as a second agent or as a component of a hybrid of the present invention). The PPF polypeptide may comprise an amino acid sequence selected from the group consisting of PYY-NPY chimeras designated 5705 and the following sequence of US 2006/0135747 A1: SEQ ID NOs: 266, 267, 274, 282, 320, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 443, 444, 445, 446, 447, 448, 449, 450, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463, In one embodiment, body fat is reduced and lean body mass is reduced. In one embodiment, body fat is reduced and lean body mass is reduced. ) Are maintained or increased. In one embodiment, body fat and lean body mass are measured in percent body fat (%) and percent body fat (%), respectively. In one further embodiment, the body weight is reduced. In another embodiment, the weight is maintained or increased. The compound may be administered peripherally. PPF polypeptides or PPF chimeric or PPF-containing hybrids may be administered to a subject by administering to the subject an amylin, an amylin agonist or an amylin analog agonist, salmon calcitonin, a cholecystokinin (CCK) or CCK agonist, a leptin (OB protein) or leptin agonist, 1, GLP-1 agonist or GLP-1 analog agonist, CCK or CCK agonist, calcitonin, calcitonin agonist, small molecule cannabinoid CB1 receptor antagonist, rimonabant, 11beta- Wherein the method further comprises administering one or more other agents selected from the group consisting of hydroxysteroid dehydrogenase-1 inhibitors, sibutramine, and penttermin. In one embodiment, the subject is overweight or obese. In another embodiment, when the PPF polypeptide and the PPF chimera are used alone or as a component of a second agent or a hybrid of the invention, this may be achieved by administering to the subject an effective amount of a compound that reduces plasma triglyceride levels. Is used in a method including a method of preferentially lowering plasma triglyceride level in a subject, wherein the level of cholesterol is lowered to a lower degree. In a further embodiment, the triglyceride level is lowered but the cholesterol level is not lowered. In a further embodiment, the triglyceride level is lowered but the LDL cholesterol level is not lowered. In a further embodiment, triglyceride levels are lowered and LDL cholesterol levels are lowered to a lesser extent. In a further embodiment, the amylase level is also lowered. In another embodiment, when the PPF polypeptide and the PPF chimera are used alone or as a component of a second agent or a hybrid of the present invention, this may be useful in reducing the body fat or body fat gain while maintaining or increasing the fat body weight In a subject comprising administering an effective amount of a compound of the invention to a subject in need thereof, the method comprising reducing the body fat or body fat gain while maintaining or increasing the fat body weight in the subject. In another embodiment, when the PPF polypeptide and the PPF chimera are used alone or as a component of a second agent or a hybrid of the present invention, it is preferred that the amount of the body fat is reduced and the amount of fat And a method of reducing visceral fat in a subject, comprising administering the compound. In another embodiment, when the PPF polypeptide and the PPF chimera are used alone or as a component of a second agent or a hybrid of the invention, this is used in a method comprising a method of altering the fat distribution in a subject. In one aspect, the alteration is due to increased metabolism of visceral or ectopic fat in the subject, or both. In another embodiment, when the PPF polypeptide and the PPF chimera are used alone or as a component of a second agent or a hybrid of the present invention, this may be useful in increasing the fatty acid? -Oxidation to the subject, Comprising administering to a subject in need thereof an effective amount of a compound of the formula I or a pharmaceutically acceptable salt thereof. In another embodiment, when the PPF polypeptide and the PPF chimera are used alone or as a component of a second agent or a hybrid of the invention, it is preferred that the subject is treated with an amount effective to treat non-alcoholic fatty liver disease or fat dystrophy Comprising administering a therapeutically effective amount of a compound of the invention to a subject in need thereof. Hybrids of particular interest in this application are PPF chimeras as described herein, which are combined with components of the leptin family or the amylin family, such as amylin-sCT-amylin hybrids, or both. PPF-chimera / leptin hybrids or PPF-chimera / amylin-sCT-amylin hybrids offer superior effects when either compound is used alone. In a further embodiment, the PPF-chimeric / leptin hybrids are administered in combination with an amylinomimetic, for example, amylin-sCT-amylin chimeric or PPF-chimeric / amylin-sCT-amylin hybrids in combination with leptin .

본원에서 언급한 PPF 폴리펩티드 키메라가 하이브리드의 성분 모듈이 아닌 경우, 이것은 단독으로 또는 제2 작용제로서, 바람직하게는 본 발명의 하이브리드와 조합 투여될 수 있다. 이것들은 단일 또는 다회 투여로 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제와 함께 또는 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제 없이 제공될 수 있다. 이들 제약 화합물은 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제 뿐만이 아니라 임의의 다른 공지된 보조제 및 부형제와 함께 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences by E. W. Martin]에 개시된 바와 같은 통상적인 기술에 따라 제제화될 수 있다. 또한, 문헌 [Wang, Y. J. and Hanson, M. A. "Parenteral Formulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers," Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No. 10, Supp. 42:2S (1988)]을 참조하며, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다. PPF 폴리펩티드는 투여량 단위 형태로 제공될 수 있다. 예를 들어, 신체 조성에 영향을 주는 PPF 폴리펩티드의 치료 유효량은 환자의 연령 및 체중, 환자의 신체적 상태, 다른 치료제와의 조합 여부, 달성하고자 하는 궁극적인 목적, 예를 들어 전반적인 체중 감소 및/또는 제지방 체중의 유지 또는 증가, 및 또한 다른 인자 등을 비롯한 많은 인자에 따라 달라질 것이다. 그러나, 전형적인 투여량 (하이브리드의 성분이 아닌 경우)은 1일 당 제약 화합물 약 0.05 ㎍, 약 0.1 ㎍, 약 1 ㎍, 약 5 ㎍, 약 10 ㎍, 약 50 ㎍, 약 75㎍ 또는 약 100 ㎍의 하한 내지 약 50 ㎍, 약 100 ㎍, 약 500 ㎍, 약 1 mg, 약 5 mg, 약 10 mg, 약 15 mg, 약 50 mg, 약 100 mg 또는 약 150 mg의 상한을 함유할 수 있다. 또한, 다른 투여량 범위, 예를 들어 1회 투여 당 화합물 0.1 ㎍ 내지 1 mg, 또는 1회 투여 당 약 0.001 ㎍/kg 내지 약 500 ㎍/kg 역시 고려된다. 일부 실시양태에서, PPF 폴리펩티드 키메라는 1일 당 약 0.5 ㎍ 내지 약 5 mg의 투여량으로 단일 또는 다회 투여 또는 제어되는 지속 방출로, 또는 1회 투여 당 약 0.01 ㎍/kg 내지 약 500 ㎍/kg, 또는 약 0.05 ㎍/kg 내지 약 250 ㎍/kg으로 말초 투여된다. 일부 실시양태에서, PPF 폴리펩티드 키메라는 약 50 ㎍/kg 미만의 투여량으로 투여된다. 이들 범위의 투여는 물론 각 유사체 또는 유도체의 효력에 따라 달라질 것이며, 당업자가 쉽게 결정할 수 있다. 1일 투여량은 24시간의 기간 또는 24시간 중 임의의 일부 동안 연속적으로 제공되는 별개의 단위 투여량으로 전달될 수 있다. 1일 투여 회수는 1일 당 1회 내지 약 4회일 수 있지만, 그보다 많을 수도 있다. 연속 전달은 연속 주입의 형태일 수 있다. 고려되는 다른 예시적인 투여량 및 주입 속도는 별개의 투여량 당 0.005 nmol/kg 내지 약 20 nmol/kg 또는 약 0.01/pmol/kg/분 내지 약 10 pmol/kg/분의 연속 주입을 포함한다. 이러한 투여량 및 주입은 임의의 공지된 통상적인 방법 또는 향후 개발될 말초 방법, 예를 들어 정맥내 (i.v.), 피내, 근육내, 유방내, 복강내, 경막내, 안구후, 폐내 (예를 들어 기간 방출(term release)), 피하 투여 (s.c.), 경구, 설하(舌下), 비측(鼻側), 항문, 질 또는 경피 전달, 또는 특정 부위에서의 수술적 이식에 의해 전달될 수 있다. i.v. 투여되는 제약 조성물의 1회 전달 당 총 투여량의 예는 1일 당 약 1 ㎍ 내지 약 8 mg일 수 있고, s.c. 투여되는 제약 조성물의 1회 전달 당 총 투여량은 1일 당 약 6 ㎍ 내지 약 16 mg일 수 있다.If the PPF polypeptide chimera referred to herein is not a component module of a hybrid, it can be administered alone or as a second agent, preferably in combination with the hybrids of the present invention. These may be provided in single or multiple doses with a pharmaceutically acceptable carrier or excipient or without a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. These pharmaceutical compounds may be formulated according to conventional techniques as described in Remington ' s Pharmaceutical Sciences by E. W. Martin, together with pharmaceutically acceptable carriers or diluents as well as any other known adjuvants and excipients. Also described in Wang, Y. and Hanson, M. A., "Parenteral Formulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers," Journal of Parenteral Science and Technology, 10, Supp. 42: 2S (1988), the disclosures of which are incorporated herein by reference. PPF polypeptides may be provided in dosage unit form. For example, a therapeutically effective amount of a PPF polypeptide that affects body composition may be determined by the age and weight of the patient, the physical condition of the patient, whether it is combined with other therapeutic agents, the ultimate goal to achieve, such as overall weight loss and / The maintenance or increase in myofilament weight, and also other factors, and the like. However, a typical dose (unless it is a component of the hybrid) is about 0.05 μg, about 0.1 μg, about 1 μg, about 5 μg, about 10 μg, about 50 μg, about 75 μg, or about 100 μg About 100 mg, about 500 mg, about 1 mg, about 5 mg, about 10 mg, about 15 mg, about 50 mg, about 100 mg, or about 150 mg of the upper limit of the total dosage. Also, other dosage ranges are contemplated, for example from 0.1 [mu] g to 1 mg of compound per dose, or from about 0.001 [mu] g / kg to about 500 [mu] g / kg per dose. In some embodiments, the PPF polypeptide chimera is administered at a dose of about 0.5 μg to about 5 mg per day, single or multiple doses, or controlled sustained release, or from about 0.01 μg / kg to about 500 μg / kg per administration , Or from about 0.05 [mu] g / kg to about 250 [mu] g / kg. In some embodiments, the PPF polypeptide chimera is administered at a dose of less than about 50 [mu] g / kg. The administration of these ranges will, of course, vary with the potency of each analog or derivative, and can be readily determined by one skilled in the art. The daily dose may be delivered in discrete unit doses that are provided continuously for any portion of the 24 hour period or 24 hours. The daily dose may be from once to about 4 times per day, but may be higher. Continuous delivery may be in the form of continuous infusion. Other exemplary dosages and rates of injection contemplated include continuous infusion of 0.005 nmol / kg to about 20 nmol / kg or about 0.01 / pmol / kg / min to about 10 pmol / kg / min per separate dose. Such dosages and infusions may be administered by any of the known conventional methods or peripheral methods to be developed in the future such as intravenous (iv), intradermal, intramuscular, intramammary, intraperitoneal, intrathecal, Term delivery), subcutaneous (sc), oral, sublingual, nasal, anal, vaginal or transdermal delivery, or by surgical implantation at a particular site . i.v. An example of a total dose per delivery of a pharmaceutical composition to be administered may be from about 1 [mu] g to about 8 mg per day, and s.c. The total dose per delivery of the pharmaceutical composition to be administered may be from about 6 [mu] g to about 16 mg per day.

인크레틴Incretin 및 And 인크레틴Incretin 모방체Imitation

본 발명에 유용한 성분 펩티드 호르몬은 또한 GLP-1 펩티드 호르몬 역시 포함한다. GLP-1(1-37) (서열 59), GLP-1(7-37) (서열 204), 및 GLP-1(7-36) 아미드 (서열 61)를 비롯한 천연 GLP-1 펩티드 호르몬 및 기능적 펩티드 유사체 및 유도체는 당업계에 공지되어 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, GLP-1은 GLP-1 펩티드 호르몬의 모든 천연 형태를 지칭한다. 바람직한 특정 천연 펩티드, 펩티드 유사체 및 유도체가 본원에 기재되어 있으나, 당업계에 공지된 호르몬 활성을 나타내는 임의의 공지된 GLP-1 펩티드가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있음을 이해해야 한다.The component peptide hormones useful in the present invention also include GLP-1 peptide hormones. 1 peptide hormones including GLP-1 (1-37) (SEQ ID NO: 59), GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 204), and GLP-1 (7-36) amide Peptide analogs and derivatives are known in the art. As used herein, GLP-1 refers to all natural forms of GLP-1 peptide hormone. While certain preferred natural peptides, peptide analogs and derivatives are described herein, it should be understood that any known GLP-1 peptide exhibiting hormonal activity known in the art can be used in connection with the present invention.

당업계에 공지된 임의의 GLP-1 펩티드 유사체 또는 유도체가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, GLP-1 펩티드 유사체 및 유도체는 천연 GLP-1 펩티드의 1종 이상의 호르몬 활성을 보유한다. 특정 실시양태에서, GLP-1 펩티드 유사체는 천연 GLP-1 펩티드가 특이적으로 결합할 수 있는 수용체의 효능제이다. 바람직한 GLP-1 펩티드 유사체 및 유도체는 예를 들어 WO 91/11457에 기재된 것을 포함하며, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다. Any GLP-1 peptide analog or derivative known in the art can be used in connection with the present invention. In one embodiment, GLP-1 peptide analogs and derivatives possess at least one hormone activity of a native GLP-1 peptide. In certain embodiments, a GLP-1 peptide analog is an agonist of a receptor to which a native GLP-1 peptide can specifically bind. Preferred GLP-1 peptide analogs and derivatives include those described, for example, in WO 91/11457, which is incorporated herein by reference.

당업계에 공지된 GLP-1 유사체는 하기의 것을 포함한다:GLP-1 analogs known in the art include:

당업계에 공지된 바와 같이, 이러한 GLP-1 유사체는 아미드화된 것이 바람직하지만, 달리 명시하지 않는다면 본 발명의 문맥에서 임의로 산 형태일 수 있다.As is known in the art, such GLP-1 analogs are preferably amidated, but may be optionally in acid form in the context of the present invention unless otherwise specified.

다른 GLP-1 유사체 및 유도체는 미국 특허 제5,545,618호에 개시되어 있으며, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다. GLP-1 유사체 및 유도체의 바람직한 군은 미국 특허 제6,747,006호에 기재된 것을 포함하며, 상기 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다. 본 발명에 있어서 미국 특허 제5,188,666호에 기재된 분자의 용도 역시 고려되며, 상기 문헌은 명백하게 본원에 참고로 포함된다. 본 발명에 사용되는 분자의 또다른 군은 미국 특허 제5,512,549호에 기재된 화합물을 포함하며, 상기 문헌은 명백하게 본원에 참고로 포함된다. 본 발명에 사용되는 GLP-1 화합물의 또다른 바람직한 군은 WO 91/11457에 개시되어 있으며, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다. Other GLP-1 analogs and derivatives are disclosed in U.S. Patent No. 5,545,618, which is incorporated herein by reference. Preferred groups of GLP-1 analogs and derivatives include those described in U.S. Patent No. 6,747,006, which is incorporated herein by reference in its entirety. The use of the molecules described in U. S. Patent No. 5,188, 666 in the present invention is also contemplated, the disclosure of which is expressly incorporated herein by reference. Another group of molecules used in the present invention includes the compounds described in U.S. Patent No. 5,512,549, which is expressly incorporated herein by reference. Another preferred group of GLP-1 compounds for use in the present invention is disclosed in WO 91/11457, which is incorporated herein by reference.

본 발명에 유용한 성분 펩티드 호르몬은 GLP-2 펩티드 호르몬 역시 포함한다. 천연 GLP-2 펩티드 호르몬, 예를 들어 래트 GLP-2 및 그의 상동체, 예를 들어 황소 GLP-2, 돼지 GLP-2, 데구(degu) GLP-2, 소 GLP-2, 기니아 피그 GLP-2, 햄스터 GLP-2, 인간 GLP-2, 무지개 송어 GLP-2 및 닭 GLP-2 및 기능적 펩티드 유사체 및 유도체는 당업계에 공지되어 있다. 바람직한 특정 천연 펩티드, 펩티드 유사체 및 유도체가 본원에 기재되어 있지만, 당업계에 공지된 호르몬 활성을 나타내는 임의의 공지된 GLP-2 펩티드가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있음을 인식해야 한다.The peptide hormones useful in the present invention also include GLP-2 peptide hormones. Such as, for example, ox GLP-2, pig GLP-2, degu GLP-2, small GLP-2, guinea pig GLP-2 , Hamster GLP-2, human GLP-2, rainbow trout GLP-2 and chicken GLP-2 and functional peptide analogs and derivatives are known in the art. Although certain preferred natural peptides, peptide analogs and derivatives are described herein, it should be appreciated that any known GLP-2 peptide that exhibits hormone activity known in the art can be used in connection with the present invention.

당업계에 공지된 임의의 GLP-2 펩티드 유사체 또는 유도체가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, GLP-2 펩티드 유사체 및 유도체는 천연 GLP-2 펩티드의 1종 이상의 호르몬 활성을 보유한다. 특정 실시양태에서, GLP-2 펩티드 유사체는 천연 GLP-2 펩티드가 특이적으로 결합할 수 있는 수용체의 효능제이다. 바람직한 GLP-2 펩티드 유사체 및 유도체는 예를 들어 미국 특허 출원 제08/669,791호 및 PCT 출원 PCT/CA97/00252에 기재된 것을 포함하며, 이들 문헌은 2가지 모두가 본원에 참고로 포함된다. 당업계에 공지된 특정 GLP-2 유사체는 DPP-IV 내성을 부여하기 위해 Ala을 Gly으로 치환함으로써 위치 2에서 변형된 래트 또는 인간 GLP-2를 포함한다.Any GLP-2 peptide analog or derivative known in the art can be used in connection with the present invention. In one embodiment, GLP-2 peptide analogs and derivatives possess at least one hormone activity of a native GLP-2 peptide. In certain embodiments, the GLP-2 peptide analog is an agonist of a receptor to which a native GLP-2 peptide can specifically bind. Preferred GLP-2 peptide analogs and derivatives include those described, for example, in U.S. Patent Application Serial No. 08 / 669,791 and PCT application PCT / CA97 / 00252, both of which are incorporated herein by reference in their entirety. Certain GLP-2 analogs known in the art include modified rat or human GLP-2 at position 2 by replacing Ala with Gly to confer DPP-IV resistance.

또한, 본 발명에 유용한 성분 펩티드 호르몬은 옥신토모듈린 (OXM) 펩티드 호르몬 역시 포함한다. 천연 OXM 펩티드 호르몬 및 기능적 펩티드 유사체 및 유도체는 당업계에 공지되어 있다. 바람직한 특정 천연 펩티드, 펩티드 유사체 및 유도체가 본원에 기재되어 있지만, 당업계에 공지된 호르몬 활성을 나타내는 임의의 공지된 OXM 펩티드가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있음을 인식하여야 한다.Also useful as component peptide hormones in the present invention are also the auxin tomodulin (OXM) peptide hormones. Natural OXM peptide hormones and functional peptide analogs and derivatives are known in the art. Although certain preferred natural peptides, peptide analogs and derivatives are described herein, it should be appreciated that any known OXM peptide exhibiting hormonal activity known in the art can be used in connection with the present invention.

당업계에 공지된 임의의 OXM 펩티드 유사체 또는 유도체가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, OXM 펩티드 유사체 및 유도체는 천연 OXM 펩티드의 1종 이상의 호르몬 활성을 보유한다. 특정 실시양태에서, OXM 펩티드 유사체는 천연 OXM 펩티드가 특이적으로 결합할 수 있는 수용체의 효능제이다. Any OXM peptide analog or derivative known in the art can be used in connection with the present invention. In one embodiment, OXM peptide analogs and derivatives possess at least one hormone activity of a native OXM peptide. In certain embodiments, an OXM peptide analog is an agonist of a receptor to which a native OXM peptide can specifically bind.

본 발명에 유용한 성분 펩티드 호르몬은 엑센딘 펩티드 호르몬 역시 포함한다. 천연 엑센딘 펩티드 호르몬 및 기능적 펩티드 유사체 및 유도체는 당업계에 공지되어 있다. 바람직한 특정 천연 펩티드, 펩티드 유사체 및 유도체가 본원에 기재되어 있지만, 당업계에 공지된 호르몬 활성을 나타내는 임의의 공지된 엑센딘 펩티드가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있음을 인식해야 한다.The peptide hormones useful in the present invention also include exendin peptide hormones. Natural exendin peptide hormones and functional peptide analogs and derivatives are known in the art. While certain preferred natural peptides, peptide analogs and derivatives are described herein, it should be appreciated that any known exendin peptides exhibiting hormonal activity known in the art can be used in connection with the present invention.

당업계에 공지된 임의의 엑센딘 펩티드 유사체 또는 유도체가 본 발명과 관련하여 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 엑센딘 펩티드 유사체 및 유도체는 천연 엑센딘 펩티드의 1종 이상의 호르몬 활성을 보유한다. 특정 실시양태에서, 엑센딘 펩티드 유사체는 천연 엑센딘 펩티드가 특이적으로 결합할 수 있는 수용체의 효능제이다. Any exendin peptide analog or derivative known in the art can be used in connection with the present invention. In one embodiment, the exendin peptide analogs and derivatives possess at least one hormone activity of the native exendin peptide. In certain embodiments, the exendin peptide analog is an agonist of a receptor to which the native exendin peptide can specifically bind.

예시적인 엑센딘 유사체는 하기의 것을 포함한다:Exemplary exendin analogs include the following:

당업계에 공지된 바와 같이, 이러한 엑센딘 유사체는 아미드화된 것이 바람직하지만, 달리 명시하지 않는다면 본 발명의 문맥에서 임의로 산 형태일 수 있다.As is known in the art, such exendin analogs are preferably amidated, but may be optionally in acid form in the context of the present invention, unless otherwise specified.

추가의 엑센딘 유사체 및 유도체의 예는 1997년 8월 8일자로 출원된 미국 특허 출원 제60/055,404호의 이점을 청구하면서 1998년 8월 6일자로 출원된 PCT 출원 제PCT/US98/16387호 (발명의 영문 명칭: "Novel Exendin Agonist Compounds")에 기재되어 있으며, 상기 2가지 문헌 모두가 본원에 참고로 포함된다. 다른 엑센딘 유사체 및 유도체는 1997년 11월 14일자로 출원된 미국 가출원 제60/065,442호의 이점을 청구하면서 1998년 11월 13일자로 출원된 PCT 출원 제PCT/US98/24210호 (발명의 영문 명칭: "Novel Exendin Agonist Compounds")에 기재되어 있으며, 상기 2가지 문헌 모두가 본원에 참고로 포함된다. 또다른 엑센딘 유사체 및 유도체는 1997년 11월 14일자로 출원된 미국 가출원 제60/066,029호의 이점을 청구하면서 1998년 11월 13일자로 출원된 PCT 출원 제PCT/US98/24273호 (발명의 영문 명칭: "Novel Exendin Agonist Compounds")에 기재되어 있으며, 상기 2가지 문헌 모두가 본원에 참고로 포함된다. 또다른 엑센딘 유사체 및 유도체는 1996년 8월 8일자로 출원된 미국 특허 출원 제08/694,954호의 일부 계속 출원으로서 1997년 8월 8일자로 출원된 PCT 출원 제PCT/US97/14199호 (발명의 영문 명칭: "Methods for Regulating Gastrointestinal Activity")에 기재되어 있으며, 상기 2가지 문헌 모두가 본원에 참고로 포함된다. 또다른 엑센딘 유사체 및 유도체는 1997년 1월 7일자로 출원된 미국 가출원 제60/034,905호의 이점을 청구하면서 1998년 1월 7일자로 출원된 PCT 출원 제PCT/US98/00449호 (발명의 영문 명칭: "Use of Exendins and Agonists Thereof for the Reduction of Food Intake")에 기재되어 있으며, 상기 2가지 문헌 모두가 본원에 참고로 포함된다. 또다른 엑센딘 유사체 및 유도체는 2003년 12월 19일자로 출원된 US 2004/0209803 A1 (발명의 영문 명칭: "Compositions for the Treatment and Prevention of Neuropathy")에 기재되어 있으며, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다.Examples of additional exendin analogs and derivatives are disclosed in PCT Application No. PCT / US98 / 16387, filed August 6, 1998, claiming the benefit of U.S. Patent Application No. 60 / 055,404, filed August 8, 1997 &Quot; Novel Exendin Agonist Compounds "), both of which are incorporated herein by reference. Other exendin analogs and derivatives are disclosed in PCT Application No. PCT / US98 / 24210, filed November 13, 1998, entitled Advantage of U.S. Provisional Application No. 60 / 065,442, filed November 14, 1997 : "Novel Exendin Agonist Compounds ", both of which are incorporated herein by reference. Other exendin analogs and derivatives are described in PCT Application No. PCT / US98 / 24273, filed November 13, 1998, which claims the benefit of U.S. Provisional Application No. 60 / 066,029, filed November 14, "Novel Exendin Agonist Compounds ", both of which are incorporated herein by reference. Other exendin analogs and derivatives are described in PCT Application No. PCT / US97 / 14199, filed August 8, 1997, as a continuation-in-part of U.S. Patent Application No. 08 / 694,954, filed August 8, &Quot; Methods for Regulating Gastrointestinal Activity "), both of which are incorporated herein by reference. Other exendin analogs and derivatives are disclosed in PCT Application No. PCT / US98 / 00449, filed January 7, 1998, which claims the benefit of U.S. Provisional Application No. 60 / 034,905, filed January 7, &Quot; Use of Exendins and Agonists Thereof for the Reduction of Food Intake ", both of which are incorporated herein by reference. Other exendin analogs and derivatives are described in US 2004/0209803 A1, entitled " Compositions for the Treatment and Prevention of Neuropathy, " filed on December 19, 2003, .

나트륨배설증가 펩티드Sodium excretion increasing peptide

나트륨배설증가 펩티드는 심방 나트륨배설증가 펩티드 (ANP), 뇌 나트륨배설증가 펩티드 (BNP) 및 C형 나트륨배설증가 펩티드 (CNP)로 구성된 호르몬 패밀리이다. 이것들은 126개 아미노산 ANP, 108개 아미노산 BNP 및 104개 아미노산 CNP의 3종의 별개의 전구체 프로호르몬으로 합성되어 저장된다. 이것들 각각은 별개의 유전자에 의해 코딩되며, 합성 및 조절 메카니즘 부위가 상이하다. 모(parental) 나트륨배설증가 펩티드 서열은 하기의 것을 포함한다:The sodium excretion enhancing peptide is a family of hormones composed of an atrium sodium excretion enhancing peptide (ANP), a brain sodium excretion enhancing peptide (BNP) and a type C sodium excretion enhancing peptide (CNP). These are synthesized and stored as three distinct precursor prohormones, 126 amino acids ANP, 108 amino acid BNPs and 104 amino acid CNPs. Each of these is encoded by a separate gene, and the sites of synthesis and regulatory mechanisms are different. Parental sodium excretion enhancing peptide sequences include the following:

ANP 프로호르몬의 주요 합성 부위는 심방 근세포이며, 여기서 151개 아미노산의 프리프로호르몬으로 합성된다. N-말단 종결부로부터의 25개 아미노산 신호 펩티드 제거는 소포체에서 일어나며, 이로써 심장 내 ANP의 주요 저장 형태인 126개 아미노산 ANP 프로호르몬 (프로ANP)이 생성된다. 상기 프로호르몬은 4개의 생물학적 활성 펩티드 세그먼트로 구성된다: 아미노산 1 내지 30 (프로ANF 1-30, 또한 지속성 Na 자극인자로도 공지되어 있음), 31 내지 67 (프로ANF 31-67, 또한 혈관 확장인자로도 공지되어 있음), 79-98 (프로ANF 79-98, 또한 칼륨 배출인자로도 공지되어 있음), 및 99 내지 126 (ANF, 또한 심방 나트륨배설증가 인자로도 공지되어 있음). The main synthesis site of ANP prohormone is atrial myocyte, where it is synthesized as a pre-pro hormone of 151 amino acids. The removal of the 25 amino acid signal peptide from the N-terminal termini occurs in the endoplasmic reticulum, resulting in the production of the 126 amino acid ANP prohormone (proANP), a major storage form of intracardiac ANP. The prohormone is composed of four biologically active peptide segments: amino acids 1-30 (proANF 1-30, also known as persistent Na stimulator), 31-67 (proANF 31-67, also vasodilatation 79-98 (proANF 79-98, also known as potassium release factor), and 99-126 (also known as ANF, also an atrium sodium excretion enhancer).

BNP는 돼지 뇌에서 최초로 단리되었지만, 인간에서 좌뇌실로부터 합성되어 분비된다. 서열 분석은 프리프로BNP가 134개 잔기로 구성되어 있으며, 108개 아미노산 프로BNP로 절단됨을 밝혀 냈다. 프로BNP C-말단 종결부로부터의 32개 아미노산 서열 절단으로 인간 BNP (77-108)가 생성되며, 이것은 혈장에서 생리적 활성 형태이다.BNP was first isolated in the porcine brain, but is synthesized and secreted from the left ventricle in humans. Sequence analysis revealed that the prepro BNP consisted of 134 residues and was cleaved into 108 amino acid proBNP. The 32 amino acid sequence cleavage from proBNP C-terminal terminus results in human BNP (77-108), which is a physiologically active form in plasma.

CNP는 나트륨배출증가 펩티드 시스템의 3번째 구성원이고, 주로 인간 혈관 내피 세포, 신장, 및 돼지 뇌에서 발견된다. 인간 시상하부 및 중뇌에도 고농도의 CNP가 발견된다. 인간에서, 프리프로CNP는 N-말단 종결부에서 23개 잔기가 절단되어 프로CNP로 프로세싱되는 126개 아미노산 전구체이다. 상기 23개 아미노산 서열은 신호 펩티드로 작용한다. 말단 22개 (105 내지 126) 아미노산이 프로CNP로부터 절단되어 CNP의 생물학적 활성 형태를 생성한다.CNP is the third member of the sodium excretion enhancing peptide system and is found primarily in human vascular endothelial cells, kidney, and porcine brain. High concentrations of CNP are also found in the human hypothalamus and midbrain. In humans, the prepro-CNP is a 126 amino acid precursor in which 23 residues in the N-terminal terminus are cleaved and processed with proNNP. The 23 amino acid sequences serve as signal peptides. The terminal 22 (105 to 126) amino acids are cleaved from pro-CNP to produce a biologically active form of CNP.

유로딜라틴은 나트륨배출증가 펩티드 패밀리의 신장-유래 구성원이고, 동일한 ANP 프로호르몬으로부터 형성되어 아미노산 95 내지 126으로 구성된다. 이것은 4개 아미노산의 N-말단 연장부를 제외하고는 ANF (99-126)와 동일하다. 유로딜라틴은 신장에서의 나트륨 및 물 처리에 있어서의 중요한 조절자일 뿐만이 아니라 울혈성 심부전 (CHF) 환자에서도 나트륨 배출의 매개자라고도 여겨진다. Eurosilatin is a renal-derived member of the sodium excretion enhancing peptide family and is formed from the same ANP prohormone and consists of amino acids 95 to 126. [ This is the same as ANF (99-126) except for the N-terminal extension of the four amino acids. Eurosilatin is not only an important regulator of sodium and water treatment in the kidneys, but also a mediator of sodium excretion in patients with congestive heart failure (CHF).

나트륨배설증가 펩티드는 표적 세포 표면상의 고친화도 수용체에 결합하여 이들의 생물학적 효과를 발휘한다. NPR의 3종의 서브유형 - NPR-A, NPR-B 및 NPR-C -이 단리된 바 있다. 결과적으로, 한 실시양태에서는 나트륨배설증가 수용체 결합 및/또는 활성화에 대하여 하이브리드를 스크리닝하는 방법이 제공된다. 프로호르몬 변이체를 비롯한 나트륨배설증가 펩티드는 본 발명의 하이브리드에 수많은 나트륨배설증가 펩티드 호르몬 활성을 부여할 수 있다. 다른 실시양태에서의 관심은 나트륨배설증가 길항제 하이브리드이다. 나트륨배설증가는 과도하게 다량의 나트륨이 뇨로 배출되는 것이다. 나트륨배설증가는 뇨에 염이 매우 풍부(salty)하다는 점을 제외하고는 이뇨 (현저하게 다량의 뇨 배출)와 유사하다. 나트륨배설증가는 몇가지 이뇨제 사용시 및 질환 (부신의 질환 등)시에 발생하고, 탈수, 구토, 저혈압, 및 급사 위험을 특징으로 하는 식염 상실 증후군을 초래할 수 있다. ANP 프로호르몬의 4종의 독립적인 순환 펩티드 (1-30, 31-67, 79-98 및 99-126)의 외인성 투여는 생체내 혈관확장, 이뇨, 레닌-안지오텐신-알도스테론 시스템의 저해 및 향상된 나트륨배설증가 및/또는 칼륨배출증가를 일으킨다. 프로ANF 1-30, 프로ANF 31-67 및 ANF 99-126 각각은 나트륨배설증가, 혈압 저하 및 이뇨 특성을 가지며, 프로ANF 31-67 및 ANF 99-126이 혈압에 가장 큰 영향을 준다. 칼륨 항상성에 대한 ANP 펩티드의 효과는 다양하다: 프로ANF 79-98은 칼륨 배출을 자극하는 반면에 프로ANF 31-67은 수질 집합관 세포에서 Na/K ATPase를 억제하여 칼륨 손실을 줄인다. ANF 99-126에 특이적인 것은 안지오텐신 II-매개된 알도스테론 분비의 투여량-의존적 억제이지만, 프로ANF 31-67은 프로스타글란딘의 생성을 통한 나트륨배설증가 유도성을 갖는다.Sodium excretion enhancing peptides bind to high affinity receptors on the target cell surface and exert their biological effects. Three subtypes of NPR - NPR-A, NPR-B and NPR-C - have been isolated. Consequently, in one embodiment, a method is provided for screening a hybrid for sodium excretion-enhancing receptor binding and / or activation. Sodium excretion enhancing peptides, including prohormone variants, can confer numerous sodium excretion enhancing peptide hormone activities to the hybrids of the present invention. Interest in other embodiments is a sodium excretion enhancer antagonist hybrid. An increase in sodium excretion is an excess of sodium excreted in the urine. Increased sodium excretion is similar to diuretic (significantly greater urinary excretion), except that the salt is very salty in urine. Increased sodium excretion occurs during the use of several diuretics and in diseases (such as adrenal disease) and can lead to a syndrome characterized by dehydration, vomiting, hypotension, and sudden death. Exogenous administration of the four independent circulating peptides (1-30, 31-67, 79-98 and 99-126) of the ANP prohormone resulted in the inhibition of in vivo vasodilation, diuretic, renin-angiotensin-aldosterone system and enhanced sodium Resulting in increased excretion and / or increased potassium excretion. Pro ANF 1-30, Pro ANF 31-67 and ANF 99-126, respectively, have increased sodium excretion, lowered blood pressure and diuretic properties, and proANF 31-67 and ANF 99-126 have the greatest effect on blood pressure. The effects of ANP peptides on potassium homeostasis are diverse: proANF 79-98 stimulates potassium excretion whereas proANF 31-67 inhibits Na / K ATPase in water-collecting cells to reduce potassium loss. Specific to ANF 99-126 is a dose-dependent inhibition of angiotensin II-mediated aldosterone secretion, but proANF 31-67 has the ability to induce sodium excretion through the production of prostaglandins.

BNP는 정상적인 인간에서 ANF와 유사한 생물학적 효과를 발휘한다. 정상적인에게 BNP를 주입하였을 때, 나트륨 배출은 2배 증가하였고, 혈장 레닌, 안지오텐신 II 및 알도스테론 분비는 50％ 감소하였고, 또한 혈장 부피도 감소하였다.BNP exerts a biological effect similar to ANF in normal humans. When normal BNP was injected, sodium excretion was doubled, plasma renin, angiotensin II and aldosterone secretion decreased by 50%, and plasma volume also decreased.

CNP는 다른 나트륨배설증가 펩티드와 유사한 심혈관 효과를 유도하지만, 임의의 신장 효과를 매개하는 것 같지는 않다. CNP가 마취된 개에게 ANF와 동등한 투여량으로 주입되면, 혈장 cGMP가 상승하는 것과 동시에 평균 동맥압, 우심방압 및 심박출량이 감소하지만, 사구체 여과율, 신 혈류량 및 나트륨 배출은 감소된다.CNP induces cardiovascular effects similar to other sodium excretion enhancing peptides, but does not seem to mediate any kidney effects. When CNP is injected into anesthetized dogs at an equivalent dose of ANF, plasma cGMP elevates, while mean arterial pressure, right atrial pressure and cardiac output decrease, but glomerular filtration rate, renal blood flow and sodium excretion are reduced.

나트륨배설증가 펩티드는 심부전에 치료 이점을 제공할 수 있다. 울혈성 심부전 (CHF)은 바소프레신과 엔도텔린의 증가, 및 레닌-안지오텐신-알도스테론 시스템의 활성화 및 교감 신경계와 관련이 있으며 혈관수축, 나트륨 및 수분 보유, 및 해로운 혈관 및 심장 리모델링을 매개한다. 이러한 효과는 심부전 환자에서 나트륨배설증가 펩티드의 수준이 증가해도 발생한다. 본 발명의 한 실시양태는 CHF를 비롯한 심장 관련 질환 및 상태의 치료 또는 예방을 위해 나트륨배설증가 펩티드 활성의 증가를 제공하거나 이것의 치료 혈청 수준을 제공하는 하이브리드에 관한 것이다. 정상적인 개체에서의 ANF 주입은 나트륨 배출 및 뇨 유량의 지속적 증가를 초래할 수 있지만, 심부전 환자에서는 신장 반응에 있어서 현저하게 유익한 감소가 달성될 수 있다. BNP 주입은 심부전 환자에서의 나트륨 배출을 현저하게 증가시키고, 유의하게 유익한 혈류역학 효과를 발휘한다. ANP와 비교할 때, BNP의 이뇨 효과 및 나트륨배설증가 효과는 유의하게 더 높다. BNP는 ANP보다 더 서서히 제거되고, 알도스테론 분비 저해 및 ANP의 혈청 수준 증가 등을 비롯한 다른 효과도 발휘한다. BNP 펩티드는 또한 대증(symptomatic) CHF로 병원 치료를 받는 환자에서 폐 모세혈관 쐐기압, 전신적인 혈관 내성, 우심방압 및 수축기 혈압에 있어서 유익한 감소를 제공하고 심장 지수를 증가시킬 수도 있다. 비대상성 심부전 환자에서는 나트륨배설증가 펩티드 하이브리드가 폐 모세혈관 쐐기압에 있어서의 유익한 감소 및 개선된 호흡곤란 스코어를 제공할 수 있다. (호흡곤란은 호흡에 어려움이 있는 불쾌한 감각이며, 전형적으로는 심장 심부전 초기 단계와 관련이 있음). 1종, 2종 또는 3종의 나트륨배설증가 호르몬 기능을 갖는 하이브리드는 CHF 환자, 바람직하게는 대상부전의 CHF 환자, 만성 CHF 환자, 및 고혈압 환자의 예방적 치료와 치유적 치료 둘다에 유용한 제약 활성 조성물의 투여 방법을 제공한다. 하이브리드의 나트륨배설증가 부분(들)은 치료 유효 기간에 걸쳐 치료 유효 투여량으로 투여될 경우에 이러한 환자에게 치료 유효량의 나트륨배설증가 펩티드를 제공하기에 충분하다. Increased sodium excretion peptides can provide therapeutic benefits to heart failure. Congestive heart failure (CHF) is associated with increased vasopressin and endothelin, activation of the renin-angiotensin-aldosterone system and the sympathetic nervous system and mediates vasoconstriction, sodium and water retention, and detrimental blood vessel and cardiac remodeling. This effect occurs even when the level of sodium excretion increasing peptide is increased in patients with heart failure. One embodiment of the present invention is directed to a hybrid that provides an increased level of sodium excretion enhancing peptide activity or provides therapeutic serum levels thereof for the treatment or prevention of cardiac related diseases and conditions, including CHF. ANF infusion in normal individuals may result in a sustained increase in sodium excretion and urine flow, but a significantly beneficial reduction in renal response can be achieved in heart failure patients. BNP injection significantly increases sodium excretion in patients with heart failure and has a significantly beneficial hemodynamic effect. Compared with ANP, the diuretic effect of BNP and the effect of increasing sodium excretion are significantly higher. BNP is removed more slowly than ANP and exerts other effects including inhibition of aldosterone secretion and elevated serum levels of ANP. BNP peptides may also provide beneficial reductions in pulmonary capillary wedge pressure, systemic vascular resistance, right atrial pressure and systolic blood pressure, and may increase cardiac index in patients undergoing hospital treatment with symptomatic CHF. In patients with non-affective heart failure, sodium excretion enhancing peptide hybrids can provide a beneficial reduction in pulmonary capillary wedge pressure and improved breathing difficulty scores. (Dyspnea is an unpleasant sensation with difficulty breathing, typically associated with early stages of heart failure). Hybrids having one, two or three sodium excretion enhancing hormone functions are useful for the prophylactic and therapeutic treatment of both CHF patients, preferably CHF patients, chronic CHF patients, and hypertensive patients, A method of administering the composition. The sodium excretion enhancing portion (s) of the hybrid is sufficient to provide a therapeutically effective amount of a sodium excretion enhancing peptide to such a patient when administered at a therapeutically effective dose over the therapeutic lifetime.

본원에서 논의한 바와 같이, 치료 유효 나트륨배설증가 펩티드 또는 이들의 유사체의 임의의 패밀리가 사용될 수 있다. 유용한 나트륨배설증가 펩티드의 예로는 심방 나트륨배설증가 펩티드 (ANP), 뇌 나트륨배설증가 펩티드 (BNP 또는 B형 나트륨배설증가 펩티드) 및 C형 나트륨배설증가 펩티드 (CNP) 등이 있다. 나트륨배설증가 펩티드의 유용한 형태의 서열은 미국 특허 공개 20010027181에 개시되어 있으며, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다. ANP의 예로는 인간 ANP [Kangawa et al., BBRC 118:131 (1984)] 또는 여러가지 종에서 유래된 것, 예를 들어 돼지 및 래트 ANP [Kangawa et al., BBRC 121:585 (1984)] 등이 있다. 이러한 ANP는 28개 아미노산을 포함한다. 이러한 ANP는 ANP의 고리 구조 (Cys 기재의 디술피드 결합 형성) 및 상기 고리 구조의 뒤를 잇는 C-말단 부분을 갖는 펩티드로서 투여될 수 있다. 이러한 펩티드의 예는 ANP의 7-위치 내지 28-위치의 아미노산 잔기를 갖는 펩티드이며, 이것은 미국 특허 출원 공개 제20010027181호에서 제공된다. 또다른 예는 개구리 ANP이다. 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 BNP의 구체적인 예는 인간 BNP (hBNP)를 포함한다. 인간 BNP는 32개 아미노산을 포함하고, 디술피드 결합의 형성을 포함한다 ([Sudoh et al., BBRC 159:1420 (1989)] 및 미국 특허 제5,114,923호, 동 제5,674,710호, 동 제5,674,710호 및 동 제5,948,761호, 이들 문헌 각각은 본원에 참고로 포함됨). 돼지 BNP 및 래트 BNP 등을 비롯하여 인간 이외에서 기원한 각종 BNP도 공지되어 있으며 이것들이 사용될 수도 있다. 추가의 예는 닭 BNP이다. 본 발명의 방법에 사용될 수 있는 CNP의 예는 돼지 CNP를 포함한다. 돼지 CNP는 22개 아미노산을 포함하고, 상기한 ANP 및 BNP [Sudoh et al., BBRC 168:863 (1990)] (인간과 래트는 동일한 아미노산 서열을 가짐) 및 닭 CNP [Arimura et al., BBRC 174:142 (1991)]와 유사하게 디술피드 결합의 형성을 포함한다. 개구리 CNP [Yoshihara et al., BBRC 173:591 (1990)]도 사용될 수 있다. 본원에서 논의한 바와 같이, 당업자는 원한다면 공지된 방법을 이용하여 공지된 나트륨배설증가 펩티드의 아미노산 서열의 아미노산 잔기에 결실, 치환, 부가 또는 삽입, 및/또는 화학적 변형 등과 같은 변형을 가할 수 있다. 생성되는 화합물은 출발 ANP, BNP 또는 CNP의 수용체에 작용 활성을 갖는 화합물이다. 따라서, 이러한 활성을 갖는 유사체는 본 발명의 방법에 따라 사용될 하이브리드에 포함된다.As discussed herein, any family of therapeutically effective sodium excretion enhancing peptides or analogs thereof can be used. Examples of useful sodium excretion enhancing peptides include atrial sodium excretion enhancing peptide (ANP), brain sodium excretion enhancing peptide (BNP or B-type sodium excretion enhancing peptide), and C-type sodium excretion enhancing peptide (CNP). Sequences of useful forms of sodium excretion enhancing peptides are disclosed in U.S. Patent Publication No. 20010027181, which is incorporated herein by reference. Examples of ANP include human ANP [Kangawa et al., BBRC 118: 131 (1984)] or those derived from various species, such as pig and rat ANP [Kangawa et al., BBRC 121: 585 . These ANPs include 28 amino acids. Such ANP can be administered as a peptide having a cyclic structure of ANP (disulfide bond formation based on Cys) and a C-terminal portion following the cyclic structure. An example of such a peptide is a peptide having an amino acid residue at the 7-position to the 28-position of ANP, which is provided in U.S. Patent Application Publication No. 20010027181. Another example is the frog ANP. Specific examples of BNP that can be used in the methods of the invention include human BNP (hBNP). Human BNP contains 32 amino acids and includes the formation of disulfide bonds (Sudoh et al., BBRC 159: 1420 (1989) and U.S. Pat. Nos. 5,114,923; 5,674,710; 5,674,710; 5,948,761, each of which is incorporated herein by reference). Various BNPs other than human, including pig BNP and rat BNP, are also known and may be used. A further example is chicken BNP. Examples of CNPs that can be used in the methods of the invention include porcine CNPs. The pig CNP contains 22 amino acids, and the above-mentioned ANP and BNP [Sudoh et al., BBRC 168: 863 (1990)] (human and rat have the same amino acid sequence) and chicken CNP [Arimura et al., BBRC 174: 142 (1991)]. Frog CNP [Yoshihara et al., BBRC 173: 591 (1990)] can also be used. As discussed herein, one of ordinary skill in the art can apply modifications, such as deletion, substitution, addition, or insertion, and / or chemical modification, to the amino acid residues of the amino acid sequence of a known sodium excretion enhancing peptide using known methods, if desired. The resulting compound is a compound having an agonistic activity on receptors of the starting ANP, BNP or CNP. Accordingly, analogs having such activity are included in the hybrids to be used according to the method of the present invention.

또다른 실시양태에서, 1종 이상의 나트륨배설증가 기능을 보유하는 하이브리드가 고혈압 치료에 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 나트륨배설증가 하이브리드는 심박수에 해로운 효과를 주지 않으며, 부정맥과 관련이 없다. 한 실시양태에서, 상기 하이브리드는 나트륨배설증가 펩티드 기능 중 1종 이상, 2종 이상, 또는 3종 이상, 예를 들어 ANP와 BNP 활성 둘다를 포함한다. 1종 이상의 나트륨배설증가 호르몬 기능은 본원에 기재한 바와 같이 임의의 다른 호르몬 기능 또는 펩티드 인핸서와 조합될 수 있다. 또다른 실시양태에서, 나트륨배설증가 부분(들)은 천연 나트륨배설증가 펩티드에 비해 더 오랜 생체내 반감기를 갖는 더 안정적인 유사체이다. NEP 등과 같은 내인성 효소에 의한 바람직하지 못한 절단을 방지하는 유사체도 고려된다. 나트륨배설증가 기능의 하이브리드는 또한 고혈압 감소, 이뇨 유도, 나트륨배설증가 유도, 혈관 도관 확장 또는 이완, 나트륨배설증가 펩티드 수용체 (예를 들어 NPR-A) 결합, 신장으로부터의 레닌 분비 저해, 부신으로부터의 알도스테론 분비 저해, 심혈관 질환 및 장애의 치료, 울혈성 심부전에서 심장 리모델링의 감소, 정지 또는 복구, 신질환 및 신장애의 치료, 허혈성 졸중의 치료 또는 예방, 및 천식의 치료와도 관련이 있다. 상기 하이브리드는 나트륨배설증가, 이뇨 및 혈관확장 유도가 이로운 환자에게 투여될 수 있다. 상기 하이브리드는 단독으로 투여될 수도 있고, 또는 1종 이상의 하기 유형의 화합물과 조합 투여될 수도 있다: ACE 억제제, 베타-차단제, 이뇨제, 스피로놀락톤, 디곡신, 항-응고 작용제, 항-혈소판 작용제, 및 안지오텐신 수용체 차단제. 추가의 질환 또는 상태로는 신장애 및 신질환, 천식, 고혈압 및 폐 고혈압 등이 있다. 하이브리드는 또한 염증-관련 질환, 발기 부전 및 고콜레스테롤혈증의 치료에도 유용하다.In another embodiment, hybrids having one or more sodium excretion enhancing functions may be used in the treatment of hypertension. In one embodiment, the sodium excretion enhancing hybrid does not have a detrimental effect on heart rate and is not associated with arrhythmia. In one embodiment, the hybrid comprises at least one, two or more, or more than three of the sodium excretion enhancing peptide functions, for example, both ANP and BNP activities. One or more sodium excretion enhancing hormone functions may be combined with any other hormone function or peptide enhancer as described herein. In another embodiment, the sodium excretion enhancing moiety (s) is a more stable analogue with a longer in vivo half life than the natural sodium excretion enhancing peptide. Analogs that prevent undesirable cleavage by endogenous enzymes such as NEP are also contemplated. Hybrids of sodium excretion enhancing function can also be used to reduce hypertension, induce diuretic, induce increased sodium excretion, induce increased vasoconstriction or relaxation, bind to sodium excretion peptide receptor (eg NPR-A), inhibit renal secretion from the kidney, Treatment of cardiovascular diseases and disorders, reduction of cardiac remodeling in congestive heart failure, arrest or restoration, treatment of renal and renal impairment, treatment or prevention of ischemic stroke, and treatment of asthma. The hybrids may be administered to patients who are at increased risk of sodium excretion, diuresis and induction of vasodilation. The hybrids may be administered alone or in combination with one or more of the following types of compounds: ACE inhibitors, beta-blockers, diuretics, spironolactone, digoxin, anti-coagulant, anti-platelet agonists, And angiotensin receptor blockers. Additional diseases or conditions include renal and kidney disease, asthma, hypertension, and pulmonary hypertension. Hybrids are also useful in the treatment of inflammation-related diseases, impotence and hypercholesterolemia.

생물활성 펩티드 호르몬 모듈Bioactive peptide hormone module

본원에서 논의한 바와 같이, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 일반적으로 함께 공유 연결된 2개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함한다. 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 (a) 천연 성분 펩티드 호르몬, (b) 호르몬 활성을 보유하는 천연 성분 펩티드 호르몬의 유사체 또는 유도체, (c) 호르몬 활성을 보유하는 천연 성분 펩티드 호르몬의 단편, (d) 호르몬 활성을 보유하는 천연 성분 펩티드 호르몬의 유사체 또는 유도체의 단편, (e) 원하는 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 및/또는 다른 약력학적 특징을 하이브리드 폴리펩티드에 부여하는 천연 성분 펩티드 호르몬의 구조적 모티프, 또는 (f) 원하는 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 및/또는 다른 약력학적 특징을 하이브리드 폴리펩티드에 부여하는 천연 성분 펩티드 호르몬의 유사체 또는 유도체의 구조적 모티프일 수 있다. (e) 및 (f)의 구조적 모티프는 "펩티드 인핸서"로서 본원에서 총칭하여 언급될 것이다. As discussed herein, the hybrid polypeptides of the present invention generally comprise two or more bioactive peptide hormone modules covalently linked together. The bioactive peptide hormone module comprises (a) a natural component peptide hormone, (b) an analog or derivative of a natural component peptide hormone having hormone activity, (c) a fragment of a natural component peptide hormone having hormone activity, (d) (E) the desired chemical stability, form stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, receptor interaction, protease inhibition, plasma protein binding, and / or other components of the natural component peptide hormone Or (f) a structural motif of a natural component peptide hormone that imparts a pharmacodynamic characteristic to the hybrid polypeptide, or (f) a desired structural stability, morphological stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, receptor interaction, protease inhibition, / RTI > and / or other < RTI ID = 0.0 > pharmacological < Minutes peptide may be a structural motifs of analogs or derivatives of the hormone. Structural motifs of (e) and (f) will be collectively referred to herein as "peptide enhancers ".

바람직한 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 아밀린, ADM, CT, CGRP, 인터메딘, CCK(1-33), CCK-8, 렙틴, PYY(1-36) (서열 57), PYY(3-36) (서열 58), GLP-1(1-37) (서열 59), GLP-1(7-37) (서열 204), GLP-1(7-36) (서열 61), GLP-2, OXM, 엑센딘-3, 엑센딘-4, 나트륨배설증가 펩티드 호르몬, 유로코르틴 패밀리 펩티드, 예를 들어 Ucn-2 및 Ucn-3, 뉴로메딘 패밀리 펩티드, 예를 들어 뉴로메딘 U25 또는 스플라이싱 변이체 및 ANP, BNP, CNP 또는 유로딜라틴으로부터 선택되는 천연 펩티드 호르몬을 포함한다. Preferred bioactive peptide hormone modules include amylin, ADM, CT, CGRP, intermedin, CCK (1-33), CCK-8, leptin, PYY (1-36) (SEQ ID NO: 57), PYY GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 59), GLP-1 (7-37) 3, exendin-4, sodium excretion enhancing peptide hormone, Eurocortin family peptides such as Ucn-2 and Ucn-3, neuromedicine family peptides such as neuromedin U25 or splice variants and ANP , BNP, CNP or europyllatin.

다른 바람직한 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 아밀린, ADM, CT, CGRP, 인터메딘, CCK, 렙틴, PYY(1-36) (서열 57), PYY(3-36) (서열 58), GLP-1(1-37) (서열 59), GLP-1(7-37) (서열 204), GLP-1(7-36) (서열 61), GLP-2, OXM, 엑센딘-3 및 엑센딘-4, 나트륨배설증가 펩티드 호르몬, 유로코르틴 패밀리 펩티드, 예를 들어 Ucn-2 및 Ucn-3, 뉴로메딘 패밀리 펩티드, 예를 들어 뉴로메딘 U25 또는 스플라이싱 변이체 및 ANP, BNP, CNP 또는 유로딜라틴으로부터 선택되는 성분 펩티드 호르몬의 유사체 또는 유도체를 포함하고, 여기서의 유사체 또는 유도체는 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타낸다. 유사체는 성분 펩티드 호르몬의 아미노산 서열의 1개 이상의 삽입, 결실 또는 치환을 포함할 수 있고, 유도체는 본원에 충분히 기재되어 있고 당업계에 공지된 바와 같이 유사체 또는 성분 펩티드 호르몬의 아미노산 잔기의 1개 이상의 화학적 변형을 포함할 수 있다.Other preferred biologically active peptide hormone modules are amylin, ADM, CT, CGRP, intermedin, CCK, leptin, PYY (1-36) (SEQ ID NO: 57), PYY (3-36) GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 59), GLP-1 (7-37) , Ucn-2 and Ucn-3, neuromedicine family peptides such as neuromedin U25 or splice variants and ANP, BNP, CNP or eurosyl latin peptide, europium cysteine family peptides, , Wherein the analog or derivative thereof exhibits at least one hormone activity of the component peptide hormone. An analog may comprise one or more insertions, deletions or substitutions of the amino acid sequence of a component peptide hormone and the derivative may comprise one or more of the amino acid residues of the analog or component peptide hormone as fully described herein and known in the art Chemical modification.

보다 구체적으로, 유사체 및 유도체는 상기 설명하고/하거나 당업계에 공지된 임의의 것으로부터 선택할 수 있다. 본 발명의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈로서 유용한 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 특히 바람직한 유사체 및 유도체는 하기의 것을 포함한다:More specifically, analogs and derivatives may be selected from any of those described above and / or known in the art. Particularly preferred analogs and derivatives which exhibit at least one hormone activity useful as the bioactive peptide hormone module of the present invention include:

당업계에 공지된 바와 같이, 이러한 펩티드 화합물은 아미드화된 것이 바람직하지만, 달리 명시하지 않는다면 본 발명의 문맥에서 임의로 산 형태일 수 있다.As is known in the art, such peptide compounds are preferably amidated, but may be optionally in acid form in the context of the present invention, unless otherwise specified.

또다른 바람직한 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 아밀린, ADM, CT, CGRP, 인터메딘, CCK, 렙틴, PYY(1-36) (서열 57), PYY(3-36) (서열 58), GLP-1(1-37) (서열 59), GLP-1(7-37) (서열 204), GLP-1(7-36) (서열 61), GLP-2, OXM, 나트륨배설증가 펩티드, 엑센딘-3 및 엑센딘-4, 유로코르틴 패밀리 펩티드, 예를 들어 Ucn-2 및 Ucn-3, 뉴로메딘 패밀리 펩티드, 예를 들어 뉴로메딘 U25 또는 스플라이싱 변이체 및 ANP, BNP, CNP 또는 유로딜라틴으로부터 선택되는 성분 펩티드 호르몬의 단편을 포함하고, 여기서의 상기 단편은 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타낸다.Other preferred bioactive peptide hormone modules are amylin, ADM, CT, CGRP, intermedin, CCK, leptin, PYY (1-36) (SEQ ID NO: 57), PYY (3-36) GLP-1 (7-36) (SEQ ID NO: 59), GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 3 and exendin-4, the europrotin family peptides such as Ucn-2 and Ucn-3, neuromedicine family peptides such as neuromedin U25 or splice variants and ANP, BNP, CNP or eurosyl latin , Wherein said fragment exhibits at least one hormone activity of a component peptide hormone.

또다른 바람직한 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 아밀린, ADM, CT, CGRP, 인터메딘, CCK, 렙틴, PYY(1-36) (서열 57), PYY(3-36) (서열 58), GLP-1(1-37) (서열 59), GLP-1(7-37) (서열 204), GLP-1(7-36) (서열 61), GLP-2, OXM, ANP, BNP, CNP, 유로딜라틴, 엑센딘-3, 엑센딘-4, 나트륨배설증가 펩티드 호르몬, 유로코르틴 패밀리 펩티드, 예를 들어 Ucn-2 및 Ucn-3, 뉴로메딘 패밀리 펩티드, 예를 들어 뉴로메딘 U25 또는 스플라이싱 변이체 및 ANP, BNP, CNP 또는 유로딜라틴으로부터 선택되는 성분 펩티드 호르몬의 유사체 또는 유도체의 단편을 포함하고, 여기서의 상기 단편은 성분 펩티드 호르몬의 1종 이상의 호르몬 활성을 나타낸다. 다시, 유사체는 성분 펩티드 호르몬의 아미노산 서열의 1개 이상의 삽입, 결실 또는 치환을 포함할 수 있고, 유도체는 본원에 충분히 기재되어 있고 당업계에 공지된 바와 같이 유사체 또는 성분 펩티드 호르몬의 아미노산 잔기의 1개 이상의 화학적 변형을 포함할 수 있다.Other preferred bioactive peptide hormone modules are amylin, ADM, CT, CGRP, intermedin, CCK, leptin, PYY (1-36) (SEQ ID NO: 57), PYY (3-36) GLP-1 (7-36) (SEQ ID NO: 59), GLP-1 (7-37) Luciferin, luciferase, luciferase, luciferase, luciferase, lucin, exendin-3, exendin-4, sodium excretion enhancing peptide hormone, eurocortin family peptide such as Ucn-2 and Ucn-3, neuromedin family peptides, Variants and fragments of analog peptide derivatives or analog fragments selected from ANP, BNP, CNP or europyllatin, wherein said fragments exhibit at least one hormone activity of a component peptide hormone. Again, analogs may include one or more insertions, deletions, or substitutions of the amino acid sequence of a component peptide hormone, and the derivatives may include one or more of the amino acid residues of the amino acid residues of the analog or component peptide hormone as fully described herein and known in the art More than two chemical modifications.

1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 바람직한 특정 단편은 하기를 포함한다. 그러나, 상기한 유사체 및 유도체 및 하기하는 바람직한 단편을 비롯하여 당업계에 공지된 단편의 조합도 고려됨을 이해해야 한다.Preferred specific fragments exhibiting at least one hormone activity include the following. However, it should be understood that combinations of fragments known in the art, including the analogs and derivatives described above and the preferred fragments described below, are also contemplated.

다시, 당업계에 공지된 바와 같이, 이러한 펩티드 화합물은 바람직하게는 아미드화될 수 있지만, 달리 명시하지 않는다면 본 발명의 문맥에서 임의로 산 형태일 수 있다. 또한, 상기 바람직한 단편은 본원에서 논의되거나 당업계에 공지된 임의의 유사체 또는 유도체와 조합될 수 있다. 예를 들어, 바람직한 유사체 단편은 ⁵Ala,¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-28) (서열 240), ¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-27) (서열 241), ⁵Ala,¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-28) (서열 240), ¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-27) (서열 241) 또는 개시된 단편, 유사체 및 유도체의 임의의 다른 조합물을 포함할 수 있다.Again, as is well known in the art, such peptide compounds may be preferably amidated, but may be in the acid form, optionally in the context of the present invention, unless otherwise specified. In addition, the preferred fragments may be combined with any analogs or derivatives discussed herein or known in the art. For example, preferred analogous fragments include ⁵ Ala, ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe-exendin-4 (1-28) (SEQ ID NO: 240), ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe-exendin-4 (1-27) , ⁵ Ala, Leu ^14, ²⁵ Phe- exendin-4 (1-28) (SEQ ID NO: 240), ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe- exendin-4 (1-27) (SEQ ID NO: 241) or the disclosed fragments, analogs and derivatives thereof &Lt; / RTI >

또다른 바람직한 생물활성 펩티드 모듈은 원하는 화학적 안정성, 형태 안정성, 대사 안정성, 생체이용률, 기관/조직 표적화, 수용체 상호작용, 프로테아제 억제, 혈장 단백질 결합 및/또는 다른 약력학적 특징을 하이브리드 폴리펩티드에 부여하는 "펩티드 인핸서", 즉 성분 펩티드 호르몬의 구조적 모티프 (그의 유사체 및 유도체 포함)를 포함한다. 예시적인 펩티드 인핸서는 하기의 것을 포함한다. 다시, 상기한 유사체 및 유도체와 하기하는 생물활성 펩티드 모듈의 조합물도 고려됨을 이해해야 한다. 예를 들어, 당업계에 공지되고/되거나 상기한 아밀린 패밀리 펩티드 호르몬 유사체 및 유도체의 마지막 6개의 아미노산 잔기도 바람직한 생물활성 펩티드 모듈로서 고려된다. Another preferred biologically active peptide module is a "biologically active peptide" that imparts desired chemical stability, form stability, metabolic stability, bioavailability, organ / tissue targeting, receptor interaction, protease inhibition, plasma protein binding and / or other pharmacological properties to the hybrid polypeptide. Quot; peptide enhancer ", i.e., structural motifs of component peptide hormones, including analogs and derivatives thereof. Exemplary peptide enhancers include the following. Again, it should be understood that combinations of the above-mentioned analogs and derivatives with the following bioactive peptide modules are also contemplated. For example, the last six amino acid residues of amylin family peptide hormone analogs and derivatives known in the art and / or described above are also contemplated as desirable bioactive peptide modules.

펩티드 모듈 선택 고려 사항, Peptide module selection considerations, 스페이서Spacer 및 And 연결기coupler

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 일반적으로 2개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함하고, 여기서 상기 생물활성 펩티드 호르몬 모듈 중 1개 이상은 1종 이상의 호르몬 활성을 나타낸다. 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단 종결부, 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치할 수도 있고, 또는 하이브리드 폴리펩티드가 2개 초과의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함하는 경우에는 하이브리드 폴리펩티드의 내부 부분에 위치할 수도 있다.The hybrid polypeptides of the present invention generally comprise at least two bioactive peptide hormone modules wherein at least one of said bioactive peptide hormone modules exhibits at least one hormone activity. The biologically active peptide hormone module exhibiting at least one hormone activity may be located at the N-terminal terminus of the hybrid polypeptide, at the C-terminal terminus of the hybrid polypeptide, or the hybrid polypeptide may comprise more than two bioactive peptide hormone modules It may be located in the interior portion of the hybrid polypeptide.

특정 실시양태에서, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을, 생물활성 펩티드 호르몬 모듈의 C-말단 종결부가 아미드화되도록 위치시키는 것이 바람직할 수 있다. 생물활성 펩티드 호르몬 모듈의 C-말단 종결부의 아미드화는 모듈을 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치시키거나 모듈을 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단 종결부에 C-말단에서 N-말단 배향으로 배열함으로써 달성할 수 있다. 상기 2가지 배열 둘다에서, 생물활성 펩티드 호르몬 모듈의 C-말단 종결부가 아미드화에 이용될 수 있다. C-말단 아미드화가 바람직할 수 있는 구체적인 성분 펩티드 호르몬으로는 아밀린 패밀리 펩티드 호르몬, CCK, PYY, hGLP-1(7-36) (서열 61) 및 hGLP-2 등이 있다. C-말단 아미드화가 반드시 바람직한 것은 아닌 (즉, 모듈의 C-말단 종결부에서의 연장이 쉽게 허용되는) 구체적인 성분 펩티드 호르몬으로는 엑센딘-4, 엑센딘-4(1-28) (서열 237), GLP-1(7-37) (서열 204), 개구리 GLP-1(7-36) (서열 283) 및 개구리 GLP-2 등이 있다. 그러나, 이들 성분 펩티드 호르몬이 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치할 경우, 이들은 여전히 임의로 아미드화될 수 있고, 사실상 임의로 아미드화되는 것이 바람직할 수 있다. In certain embodiments, it may be desirable to position the biologically active peptide hormone module exhibiting at least one hormone activity such that the C-terminal termini of the bioactive peptide hormone module is amidated. Amidation of the C-terminal terminus of the bioactive peptide hormone module can be accomplished by placing the module at the C-terminal terminus of the hybrid polypeptide or by arranging the module in the N-terminal terminus at the C-terminus at the N-terminal terminus of the hybrid polypeptide Can be achieved. In both of these two arrangements, the C-terminal termini of the bioactive peptide hormone module can be used for amidation. Specific component peptides that may be preferred for C-terminal amidation include amylin family peptide hormone, CCK, PYY, hGLP-1 (7-36) (SEQ ID NO: 61) and hGLP-2. Exemplary component peptide hormones in which C-terminal amidation is not necessarily desirable (i.e., allowing extension at the C-terminal terminus of the module is readily acceptable) include exendin-4, exendin-4 (1-28) ), GLP-1 (7-37) (SEQ ID NO: 204), frog GLP-1 (7-36) (SEQ ID NO: 283) and frog GLP-2. However, when these component peptide hormones are located at the C-terminal terminus of the hybrid polypeptide, they may still optionally be amidated and, in fact, optionally be amidated.

생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 당업계에 공지된 임의의 방식으로 공유 연결될 수 있다. 안정적인 연결을 사용할 수도 있고, 또는 절단가능한 연결부를 이용할 수도 있다. 한 실시양태에서, 제1 모듈의 카르복시는 제2 모듈의 아미노에 직접 연결될 수 있다. 또다른 실시양태에서, 연결기는 부착된 모듈에 사용될 수 있다. 추가로, 원한다면, 당업계에 공지된 스페이서 또는 턴 인듀서(turn inducer)를 연결 안정화에 사용할 수 있다. 예를 들어, N-말단에 위치하는 생물활성 펩티드 호르몬 모듈의 C-말단 종결부의 아미드화를 원치 않을 경우, 상기 모듈은 제2 모듈에 직접 부착될 수도 있고, 또는 당업계에 공지된 임의의 적절한 연결기, 예를 들어 알킬; PEG; 아미노산, 예를 들어 Lys, Glu, β-Ala; 폴리아미노산, 예를 들어 폴리-his, 폴리-arg, 폴리-lys, 폴리-ala, Gly-Lys-Arg (GKR) 등; 2관능성 링커 (예를 들어 피어스 카탈로그(Pierce catalog, 미국 일리노이주 록포드 소재) 참조); 아미노카프로일 ("Aca"), β-알라닐, 8-아미노-3,6-디옥사옥타노일, 또는 당업계에 공지된 다른 절단가능한 링커 및 절단가능하지 않은 링커를 사용하여 부착될 수도 있다. 본원에 구체적으로 기재하여 각각을 명확하게 표현하자면, 각각의 예시된 링커-함유 하이브리드 중의 링커가 Gly 링커로 대체된 특정 하이브리드의 실시양태, 특히 Gly 링커가 Gly-Gly-Gly인 실시양태이다. 예를 들어, 예시된 종 ²⁹5 Apa-엑센딘(1-28)-¹des-Lys-h아밀린(1-7)-^11,18Arg-sCt(8-27)-h아밀린(33-37) (서열 32) (본원의 표 참조)에서, 이것의 Gly 링커 종 유사체 역시 구체적으로 의도되고 기술된다. 이러한 종은 ²⁹GlyGlyGly-엑센딘(1-28)-¹des-Lys-h아밀린(1-7)-^11,18Arg-sCt(8-27)-h아밀린(33-37) (서열 313)이고, 여기서 3개의 글리신은 엑센딘(1-28) 서열 뒤에 위치한다. 한 실시양태에서는 링커 또는 스페이서가 1개 내지 30개 잔기 길이이고, 또다른 실시양태에서는 2개 내지 30개 잔기이며, 또다른 실시양태에서는 3개 내지 30개 잔기 길이이고, 2개 내지 30개에 속하는 임의의 정수 길이이며 각 정수 단위로서 예를 들어 2, 3, 4, 5, 6, 7 등이 고려된다. 한 실시양태에서는 Gly 링커가 사용되고, 특별한 실시양태에서는 3개 잔기의 링커 Gly-Gly-Gly이 사용된다.The bioactive peptide hormone modules may be covalently linked in any manner known in the art. A stable connection may be used, or a severable connection may be used. In one embodiment, the carboxy of the first module can be directly connected to the amino of the second module. In another embodiment, the connector can be used in an attached module. Additionally, if desired, spacers or turn inducers known in the art can be used for connection stabilization. For example, if amidation of the C-terminal terminus of the N-terminal bioactive peptide hormone module is not desired, the module may be attached directly to the second module, or any suitable A linking group such as alkyl; PEG; Amino acids such as Lys, Glu, beta-Ala; Polyamino acids such as poly-his, poly-arg, poly-lys, poly-aa, Gly-Lys-Arg (GKR) and the like; Bifunctional linkers (see, e. G., The Pierce catalog, Rockford, Ill.); Aminocaproyl ("Aca"), beta -alanyl, 8-amino-3,6-dioxaoctanoyl, or other cleavable linkers and non- cleavable linkers known in the art . An embodiment of a particular hybrid in which the linker in each of the illustrated linker-containing hybrids has been replaced by a Gly linker, particularly an embodiment in which the Gly linker is Gly-Gly-Gly, is specifically described herein and is clearly shown. For example, the exemplified ²⁹ 5 Apa-exendin (1-28) ^-1 des-Lys-h amylin (1-7) ^-11,18 Arg- ^sCt (8-27) -h amylin -37) (SEQ ID NO: 32) (see table here), its Gly Linker class analog is also specifically intended and described. This species is a ²⁹ GlyGlyGly-exendin (1-28) ^-1 des-Lys-h amylin (1-7) ^-11,18 Arg- ^sCt (8-27) -h amylin (33-37) 313), wherein the three glycines are located after the exendin (1-28) sequence. In one embodiment, the linker or spacer is from 1 to 30 residues in length, in another embodiment from 2 to 30 residues, in another embodiment from 3 to 30 residues in length, and from 2 to 30 residues For example, 2, 3, 4, 5, 6, 7, etc. are considered as the integer units. In one embodiment, a Gly linker is used, and in a particular embodiment, three residues of the linker Gly-Gly-Gly are used.

N-말단에 위치하는 생물활성 펩티드 호르몬 모듈의 C-말단 종결부의 아미드화를 원하는 경우, 상기 모듈은 다시 당업계에 공지된 임의의 적절한 연결기를 사용하여 제2 모듈에 부착될 수 있다. 더 구체적으로, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 생물활성 펩티드 호르몬 모듈이 C-말단에서 N-말단 배향으로 배열되어 아미노-아미노 연결을 생성시킬 경우에 바람직한 연결기는 디카르복실산, 알킬, PEG 및 아미노산, 예를 들어 Lys, Cys 및 Glu를 포함한다.If amidation of the C-terminal terminus of the N-terminally positioned bioactive peptide hormone module is desired, the module may again be attached to the second module using any suitable connector known in the art. More specifically, when a biologically active peptide hormone module exhibiting at least one hormone activity is arranged in the N-terminal orientation at the C-terminus to produce an amino-amino linkage, preferred linkage groups include dicarboxylic acid, alkyl, PEG, and amino acid , Such as Lys, Cys, and Glu.

상기 언급한 바와 같이, 하이브리드 폴리펩티드는 바람직하게는 생물활성 펩티드 호르몬 모듈의 연결을 더욱 안정화시키기 위해서 스페이서를 포함할 수도 있다. 당업계에 공지된 임의의 스페이서 또는 턴 인듀서를 사용할 수 있다. 예를 들어, β-턴 모방체는 하기 예시한 모방체 A 및 모방체 B, 및 또한 Ala-Aib 및 Ala-Pro 디펩티드를 포함한다. 이것들의 IUPAC 명칭은, 모방체 A는 N-(3S,6S,9S)-2-옥소-3-아미노-1-아자비시클로[4.3.0]-노난-9-카르복실산이고, 모방체 B는 N-(3S,6S,9R)-2-옥소-3-아미노-7-티아-1-아자비시클로[4.3.0]-노난-9-카르복실산이다.As mentioned above, the hybrid polypeptide may preferably comprise a spacer to further stabilize the connection of the bioactive peptide hormone module. Any spacer or turn inducer known in the art may be used. For example, β-turn mimetics include mimetics A and mimetics B, and also the Ala-Aib and Ala-Pro dipeptides exemplified below. The IUPAC designation for these is that the mimic A is N- (3S, 6S, 9S) -2-oxo-3-amino-1-azabicyclo [4.3.0] 3-amino-7-thia-1-azabicyclo [4.3.0] -nonane-9-carboxylic acid is N- (3S, 6S, 9R) -2-oxo-

추가의 예시적인 Additional illustrative 조합물Combination 및 특정 실시양태 And certain embodiments

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드를 형성하기 위한 생물활성 펩티드 호르몬 모듈의 예시적인 조합물은 천연 펩티드 호르몬, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 펩티드 호르몬의 유사체 및 유도체, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 천연 펩티드 호르몬의 단편, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 펩티드 호르몬의 유사체 및 유도체의 단편, 및 펩티드 인핸서로부터 선택되는 2개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈의 조합물을 포함하며, 여기서 1개 이상의 모듈은 1종 이상의 호르몬 활성을 나타낸다.Exemplary combinations of bioactive peptide hormone modules for forming the hybrid polypeptides of the present invention include natural peptide hormones, analogs and derivatives of peptide hormones that exhibit at least one hormone activity, fragments of natural peptide hormones that exhibit at least one hormone activity , A fragment of an analog and derivative of a peptide hormone exhibiting at least one hormone activity, and a peptide enhancer, wherein at least one module has at least one hormone activity .

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 2개 이상의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함하고, 여기서 각 모듈은 성분 펩티드 호르몬으로부터 선택된다. 본 발명의 문맥에서, 하이브리드 폴리펩티드의 성분 펩티드 호르몬은 동일하거나 상이할 수 있지만, 2개 이상의 성분 펩티드 호르몬은 상이하다. 바람직한 실시양태에서, 2개 이상의 성분 펩티드 호르몬은 상이한 펩티드 호르몬 패밀리, 예를 들어 아밀린 패밀리, CCK, 렙틴 패밀리, PPF, 프로글루카곤 패밀리, 나트륨배설증가 펩티드 패밀리, 유로코르틴 패밀리 펩티드, 예를 들어 Ucn-2 및 Ucn-3, 뉴로메딘 패밀리 펩티드, 예를 들어 뉴로메딘 U25 또는 스플라이싱 변이체 및 ANP, BNP, CNP 또는 유로딜라틴 및 GLP-1 및 엑센딘 패밀리로부터 유래한 것이다. The hybrid polypeptides of the present invention comprise two or more bioactive peptide hormone modules, wherein each module is selected from the component peptide hormones. In the context of the present invention, the component peptide hormones of the hybrid polypeptide may be the same or different, but the two or more component peptide hormones are different. In a preferred embodiment, the two or more component peptide hormones are different peptide hormone families, such as the amylin family, CCK, leptin family, PPF, proglucagon family, sodium excretion enhancing peptide family, Ucn-2 and Ucn-3, neuromedin family peptides such as neuromedin U25 or splice variants and ANP, BNP, CNP or eurosylatin and the GLP-1 and exendin family.

특정 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 2개 이상의 모듈을 포함할 수 있다. 예를 들어, 하이브리드 폴리펩티드는 1종 이상의 추가의 펩티드 호르몬 유사체의 단편에 공유 연결된 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 제1 펩티드 호르몬 또는 유사체의 단편을 포함할 수 있다. 추가의 단편(들)은 임의로 1종 이상의 호르몬 활성을 나타낼 수 있다. 제1 펩티드 호르몬은 추가의 펩티드 호르몬(들)과 동일하거나 상이할 수 있지만, 1종 이상의 추가의 펩티드 호르몬은 제1 펩티드 호르몬과는 상이하고, 제1 호르몬 활성은 임의의 추가의 호르몬 활성과 동일하거나 상이할 수 있다.In certain embodiments, the hybrid polypeptides of the invention may comprise two or more modules that exhibit one or more hormonal activities. For example, the hybrid polypeptide may comprise a fragment of a first peptide hormone or analog that exhibits at least one hormone activity covalently linked to a fragment of one or more additional peptide hormone analogs. The additional fragment (s) may optionally exhibit one or more hormone activities. The first peptide hormone may be the same or different than the additional peptide hormone (s), but one or more additional peptide hormones are different from the first peptide hormone and the first hormone activity is the same as any additional hormone activity Or may be different.

다른 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 1종 이상의 펩티드 인핸서 모듈과 조합하여 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 1개 이상의 모듈을 포함할 수 있다. 예를 들어, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 제1 펩티드 호르몬의 단편은 펩티드 인핸서에 공유 연결될 수도 있고, 또는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 제1 펩티드 호르몬의 단편이 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 제2 펩티드 호르몬에 공유 연결되고, 이것이 펩티드 인핸서에 연결될 수도 있다. 별법으로, 펩티드 인핸서는 안정화 스페이서로서 2개의 펩티드 호르몬 모듈 사이에 위치할 수 있다. 다시, 제1 펩티드 호르몬은 제2 펩티드 호르몬과 동일하거나 상이할 수 있고, 제1 호르몬 활성은 제2 호르몬 활성과 동일하거나 상이할 수 있다.In another embodiment, the hybrid polypeptides of the invention may comprise one or more modules that exhibit one or more hormone activities in combination with one or more peptide enhancer modules. For example, a fragment of a first peptide hormone that exhibits at least one hormone activity may be covalently linked to a peptide enhancer, or a fragment of a first peptide hormone that exhibits at least one hormone activity may be linked to a second Linked to a peptide hormone, which may be linked to a peptide enhancer. Alternatively, the peptide enhancer may be located between the two peptide hormone modules as a stabilizing spacer. Again, the first peptide hormone may be the same as or different from the second peptide hormone, and the first hormone activity may be the same as or different from the second hormone activity.

또다른 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 2개, 3개, 4개 또는 그보다 많은 수의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함할 수 있다. 예시적인 조합물은 1개, 2개 또는 3개의 펩티드 인핸서 및 호르몬 활성을 갖는 1개의 모듈, 1개 또는 2개의 펩티드 인핸서 및 호르몬 활성을 갖는 2개의 모듈, 1개의 펩티드 인핸서 및 호르몬 활성을 갖는 3개의 모듈 등을 포함한다.In another embodiment, the hybrid polypeptides of the invention may comprise two, three, four or more bioactive peptide hormone modules. Exemplary combinations include one module with one, two or three peptide enhancers and hormone activities, one or two peptide enhancers and two modules with hormonal activity, one peptide enhancer and three with hormone activity Modules.

성분 펩티드 호르몬은 바람직하게는 아밀린, 아드레노메듈린, 칼시토닌, 칼시토닌 유전자 관련 펩티드, 인터메딘, 콜레시스토키닌, 렙틴 펩티드 YY, 글루카곤-유사 펩티드-1, 글루카곤-유사 펩티드-2, 옥신토모듈린, ANP, BNP, CNP, 유로딜라틴, 나트륨배설증가 펩티드 호르몬, 유로코르틴 패밀리 펩티드, 예를 들어 Ucn-2 및 Ucn-3, 뉴로메딘 패밀리 펩티드, 예를 들어 뉴로메딘 U25 또는 스플라이싱 변이체 및 ANP, BNP, CNP 또는 유로딜라틴 또는 엑센딘-4로부터 선택된다. The component peptide hormones are preferably selected from the group consisting of amylin, adrenomedullin, calcitonin, calcitonin gene related peptides, intermedin, cholestyokinin, leptin peptide YY, glucagon-like peptide-1, glucagon-like peptide- Such as ANP, BNP, CNP, europyllatin, sodium excretion enhancing peptide hormone, Eurocortin family peptides such as Ucn-2 and Ucn-3, neuromedicine family peptides such as neuromedin U25 or splice variants and ANP, BNP, CNP or eurosylatin or exendin-4.

더욱 특히, 바람직한 모듈 조합물은 성분 펩티드 호르몬으로서 엑센딘, 아밀린 (및/또는 sCT), BNP 및 PYY의 조합물을 비롯한 것들을 포함한다. 특정 조합물은 스페이서 또는 연결기가 존재하거나 존재하지 않는 엑센딘-4/PYY 및 PYY/엑센딘-4 조합물을 포함한다. 다른 조합물은 스페이서 또는 연결기가 존재하거나 존재하지 않는 엑센딘/아밀린 및 아밀린/엑센딘 조합물을 포함한다. 또다른 조합물은 스페이서 또는 연결기가 존재하거나 존재하지 않는 아밀린/PYY 및 PYY/아밀린 조합물을 포함한다. More particularly, preferred module combinations include those including combinations of exendin, amylin (and / or sCT), BNP and PYY as component peptide hormones. Certain combinations include exendin-4 / PYY and PYY / exendin-4 combinations in the presence or absence of a spacer or linker. Other combinations include exendin / amylin and amylin / exendin combinations in the presence or absence of a spacer or linker. Another combination includes a combination of amylin / PYY and PYY / amylin with or without spacer or linker.

한 측면에서, 바람직한 모듈 조합물은 엑센딘-4, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 엑센딘-4의 단편, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 엑센딘-4 유사체 또는 유도체, 또는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 엑센딘-4 유사체의 단편을 포함하는 제1 모듈을 1개 이상의 추가의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈과 함께 포함하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 모듈은 1개, 2개 또는 3개의 추가의 생물활성 펩티드 호르몬 모듈에 연결된다.In one aspect, a preferred modular combination comprises exendin-4, a fragment of exendin-4 that exhibits at least one hormonal activity, an exendin-4 analog or derivative that exhibits at least one hormonal activity, or one or more hormonal activities Lt; RTI ID = 0.0 > of exendin-4 < / RTI > analogs with one or more additional bioactive peptide hormone modules. In one embodiment, the first module is linked to one, two or three additional bioactive peptide hormone modules.

바람직한 실시양태에서, 엑센딘-4 펩티드를 포함하는 제1 모듈은 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 아밀린 (및/또는 sCT) 펩티드를 포함하는 제2 생물활성 펩티드 호르몬 모듈에 연결된다. 또다른 실시양태에서, 제2 모듈은 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 칼시토닌 펩티드를 포함하는 제3 생물활성 펩티드 호르몬 모듈에 추가로 연결된다. 또다른 실시양태에서, 제3 모듈은 아밀린 펩티드로부터 선택된 펩티드 인핸서를 포함하는 제4 생물활성 펩티드 호르몬 모듈에 추가로 연결될 수 있다. 한 실시양태에서, 제1 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치할 수 있다. 별법으로, 제1 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단 종결부에 위치할 수 있다. 특정 실시양태에서, 스페이서 또는 링커, 예를 들어 βAla을 상기 모듈에 연결시키고자 하는 경우에는 이것들을 삽입할 수 있다.In a preferred embodiment, a first module comprising an exendin-4 peptide is linked to a second bioactive peptide hormone module comprising an amylin (and / or sCT) peptide exhibiting at least one hormone activity. In another embodiment, the second module is further linked to a third bioactive peptide hormone module comprising a calcitonin peptide exhibiting at least one hormonal activity. In another embodiment, the third module may additionally be linked to a fourth bioactive peptide hormone module comprising a peptide enhancer selected from an amylin peptide. In one embodiment, the first module may be located at the C-terminal terminus of the hybrid polypeptide. Alternatively, the first module may be located at the N-terminal terminus of the hybrid polypeptide. In certain embodiments, spacers or linkers, such as? Ala, may be inserted if desired to be connected to the module.

바람직한 엑센딘-4 펩티드는 엑센딘-4, 엑센딘-4(1-27) (서열 236), 엑센딘-4(1-28) (서열 237), ¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-28) (서열 284) 및 ⁵Ala,¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-28) (서열 240)을 포함한다. 또한, 엑센딘(7-15) 및 그의 Ser2 유사체, HSEGTFTSD (서열 378)도 유용하다. 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 바람직한 아밀린 펩티드는 아밀린, 아밀린 단편 예를 들어 아밀린(1-17) (서열 214), 아밀린 (1-16) (서열 215), 아밀린(1-15) (서열 216) 및 아밀린(1-7) (서열 217) 및 아밀린 유사체, 예를 들어 프람린타이드, ²Ala-h-아밀린 (서열 79), ^2,7Ala-h-아밀린 (서열 80), 및 이들의 단편을 포함한다. 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 바람직한 칼시토닌 펩티드는 sCT, sCT 단편, 예를 들어 sCT(8-10), sCT(8-27) (서열 288) 및 칼시토닌 유사체, 예를 들어 ^11,18Arg-sCT (서열 108), ¹⁸Arg-sCT (서열 107), ¹⁴Glu,¹⁸Arg-sCT (서열 109), ¹⁴Glu,^11,18Arg-sCT (서열 110) 및 이들의 단편을 포함한다. 바람직한 아밀린 펩티드 인핸서는 아밀린(32-37) (서열 242), 아밀린(33-37) (서열 243) 및 아밀린(34-37) (서열 244) 및 이들의 유사체를 포함한다. 본 발명과 관련하여 유용한 아밀린-sCT 조합물은 PCT/US2005/004631 (발명의 영문 명칭: Amylin Family Agonist, 대리인 관리 번호 18528.835)에 개시된 것을 포함하며, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다. 본 발명의 하이브리드 생성에 특히 유용한 아밀린-sCT 키메라는 화합물 10 (본원 및 PCT/US2005/004631에 기재되어 있음) 및 그의 유사체 및 유도체이다.Preferred exendin-4 peptides are exendin-4, exendin-4 (1-27) (SEQ ID NO: 236), exendin-4 (1-28) (SEQ ID NO: 237), ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe-exendin-4 (1-28) (SEQ ID NO: 284) and ⁵ Ala, ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe-exendin-4 (1-28) (SEQ ID NO: 240). Also, exendin (7-15) and its Ser2 analog, HSEGTFTSD (SEQ ID NO: 378), are also useful. Preferred amylin peptides exhibiting at least one hormone activity include amylin, amylin fragments such as amylin (1-17) (SEQ ID NO: 214), amylin (1-16) (SEQ ID NO: 215), amylin Amylin (SEQ ID NO: 79), ^2,7 Ala-h-amylase (SEQ ID NO: 16) and amylin (SEQ ID NO: 21) and amylin analogs such as pramlintide, ² Ala- (SEQ ID NO: 80), and fragments thereof. Preferred calcitonin peptides exhibiting at least one hormonal activity include sCT, sCT fragments such as sCT (8-10), sCT (8-27) (SEQ ID NO: 288) and calcitonin analogs such as ^11,18 Arg-sCT SEQ ID NO: 108), ¹⁸ Arg-sCT (SEQ ID NO: 107), ¹⁴ Glu, ¹⁸ Arg-sCT (SEQ ID NO: 109), ¹⁴ Glu, ^11,18 Arg-sCT (SEQ ID NO: 110) and fragments thereof. Preferred amylin peptide enhancers include amylin (32-37) (SEQ ID NO: 242), amylin (33-37) (SEQ ID NO: 243) and amylin (34-37) (SEQ ID NO: 244) and analogs thereof. Amylin-sCT combinations useful in connection with the present invention include those disclosed in PCT / US2005 / 004631 (Amylin Family Agonist, Attorney Docket No. 18528.835), which is incorporated herein by reference. Amylin-sCT chimeras particularly useful for the production of the hybrids of the present invention are compounds 10 (as described in PCT / US2005 / 004631) and analogs and derivatives thereof.

한 측면에서, 바람직한 모듈 조합물은 엑센딘-4, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 엑센딘-4의 단편, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 엑센딘-4 유사체 또는 유도체, 또는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 엑센딘-4 유사체의 단편을 포함하는 제1 모듈을 펩티드 인핸서와 함께 포함하는 것을 포함한다. 바람직한 엑센딘-4 화합물은 엑센딘-4, 엑센딘-4(1-27) (서열 236), 엑센딘-4(1-28) (서열 237), ¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-28) (서열 284) 및 ⁵Ala,¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-28) (서열 240)을 포함한다. 바람직한 펩티드 인핸서는 PYY(25-36) (서열 257), PYY(30-36) (서열 262) 및 PYY(31-36) (서열 263)을 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치하고, 펩티드 인핸서는 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단 종결부에 위치한다. 별법으로, 제1 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단 종결부에 위치할 수 있고, 펩티드 인핸서는 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치할 수 있다. 특정 실시양태에서, 스페이서 또는 링커, 예를 들어 βAla을 상기 모듈에 연결시키고자 하는 경우에는 이것들을 삽입할 수 있다. In one aspect, a preferred modular combination comprises exendin-4, a fragment of exendin-4 that exhibits at least one hormonal activity, an exendin-4 analog or derivative that exhibits at least one hormonal activity, or one or more hormonal activities Lt; RTI ID = 0.0 > of exendin-4 < / RTI > analogs with a peptide enhancer. Preferred exendin-4 compounds are exendin-4, exendin-4 (1-27) (SEQ ID NO: 236), exendin-4 (1-28) (SEQ ID NO: 237), ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe-exendin- (1-28) (SEQ ID NO: 284) and ⁵ Ala, ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe-exendin-4 (1-28) (SEQ ID NO: 240). Preferred peptide enhancers include PYY (25-36) (SEQ ID NO: 257), PYY (30-36) (SEQ ID NO: 262) and PYY (31-36) (SEQ ID NO: 263). In one embodiment, the first module is located at the C-terminal terminus of the hybrid polypeptide and the peptide enhancer is located at the N-terminal terminus of the hybrid polypeptide. Alternatively, the first module may be located at the N-terminal terminus of the hybrid polypeptide, and the peptide enhancer may be located at the C-terminus terminus of the hybrid polypeptide. In certain embodiments, spacers or linkers, such as? Ala, may be inserted if desired to be connected to the module.

또다른 측면에서, 바람직한 모듈 조합물은 엑센딘-4, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 엑센딘-4의 단편, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 엑센딘-4 유사체 또는 유도체, 또는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 엑센딘-4 유사체의 단편을 포함하는 제1 모듈을 CCK, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 CCK의 단편, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 CCK 유사체 또는 유도체, 또는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 CCK 유사체의 단편을 포함하는 제2 모듈과 함께 포함하는 것을 포함한다. 다시, 바람직한 엑센딘-4 화합물은 엑센딘-4, 엑센딘-4(1-27) (서열 236), 엑센딘-4(1-28) (서열 237), ¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-28) (서열 284), ⁵Ala,¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-28) (서열 240) 및 ¹⁴Leu-엑센딘-4(1-28) (서열 190)을 포함한다. 바람직한 CCK 화합물은 CCK-8 및 CCK-8(Phe(CH₂SO₃))을 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치하고, 제2 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단 종결부에 위치한다. 별법으로, 제1 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단 종결부에 위치할 수 있고, 펩티드 인핸서는 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치할 수 있다. 특정 실시양태에서, 스페이서 또는 링커, 예를 들어 βAla을 상기 모듈에 연결시키고자 하는 경우에는 이것들을 삽입할 수 있다. In another aspect, a preferred modular combination comprises exendin-4, a fragment of exendin-4 that exhibits at least one hormonal activity, an exendin-4 analog or derivative that exhibits at least one hormonal activity, or at least one hormonal activity A CCK fragment exhibiting at least one type of hormone activity, a CCK analog or derivative exhibiting at least one hormone activity, or a CCK derivative exhibiting at least one hormone activity, wherein the first module comprises a fragment of exendin- Together with a second module comprising a fragment of the analog. Again, preferred exendin-4 compounds are exendin-4, exendin-4 (1-27) (SEQ ID NO: 236), exendin-4 (1-28) (SEQ ID NO: 237), ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe-exendin 4 (1-28) (SEQ ID NO: 284), ⁵ Ala, ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe-exendin-4 (1-28) (SEQ ID NO: 240) and ¹⁴ Leu-exendin- ). Preferred CCK compounds include CCK-8 and CCK-8 (Phe (CH ₂ SO ₃ )). In one embodiment, the first module is located at the C-terminal terminus of the hybrid polypeptide and the second module is located at the N-terminal terminus of the hybrid polypeptide. Alternatively, the first module may be located at the N-terminal terminus of the hybrid polypeptide, and the peptide enhancer may be located at the C-terminus terminus of the hybrid polypeptide. In certain embodiments, spacers or linkers, such as? Ala, may be inserted if desired to be connected to the module.

또다른 측면에서, 바람직한 모듈 조합물은 아밀린, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 아밀린의 단편, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 아밀린 유사체 또는 유도체 또는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 아밀린 유사체의 단편을 포함하는 제1 모듈을 펩티드 인핸서, 예를 들어 PYY(25-36) (서열 257) 또는 PYY(30-36) (서열 262)을 포함하는 제2 모듈과 함께 포함하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치하고, 펩티드 인핸서는 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단 종결부에 위치한다. 별법으로, 제1 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단 종결부에 위치할 수 있고, 펩티드 인핸서는 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치할 수 있다. 특정 실시양태에서, 스페이서 또는 링커, 예를 들어 βAla을 상기 모듈에 연결시키고자 하는 경우에는 이것들을 삽입할 수 있다. 또다른 측면에서, 바람직한 모듈 조합물은 아밀린, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 아밀린의 단편, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 아밀린 유사체 또는 유도체, 또는 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 아밀린 유사체의 단편을 포함하는 제1 모듈을 펩티드 인핸서, 예를 들어 PYY(25-36) 또는 PYY(30-36)을 포함하는 제2 모듈과 함께 포함하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치하고, 펩티드 인핸서는 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단 종결부에 위치한다. 별법으로, 제1 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단 종결부에 위치하고, 펩티드 인핸서는 하이브리드 폴리펩티드의 C-말단 종결부에 위치할 수 있다. 특정 실시양태에서, 스페이서 또는 링커, 예를 들어 βAla을 상기 모듈에 연결시키고자 하는 경우에는 이것들을 삽입할 수 있다. In another aspect, a preferred module combination comprises amylin, a fragment of amylin exhibiting at least one hormone activity, an amylin analog or derivative exhibiting at least one hormone activity, or a fragment of an amylin analog exhibiting at least one hormone activity With a second module comprising a peptide enhancer, e.g., PYY (25-36) (SEQ ID NO: 257) or PYY (30-36) (SEQ ID NO: 262). In one embodiment, the first module is located at the C-terminal terminus of the hybrid polypeptide and the peptide enhancer is located at the N-terminal terminus of the hybrid polypeptide. Alternatively, the first module may be located at the N-terminal terminus of the hybrid polypeptide, and the peptide enhancer may be located at the C-terminus terminus of the hybrid polypeptide. In certain embodiments, spacers or linkers, such as? Ala, may be inserted if desired to be connected to the module. In yet another aspect, a preferred module combination comprises amylin, a fragment of amylin that exhibits at least one hormone activity, an amylin analog or derivative that exhibits at least one hormone activity, or an amylin analog that exhibits at least one hormone activity With a second module comprising a peptide enhancer, e. G., PYY (25-36) or PYY (30-36). In one embodiment, the first module is located at the C-terminal terminus of the hybrid polypeptide and the peptide enhancer is located at the N-terminal terminus of the hybrid polypeptide. Alternatively, the first module may be located at the N-terminal terminus of the hybrid polypeptide and the peptide enhancer may be located at the C-terminus terminus of the hybrid polypeptide. In certain embodiments, spacers or linkers, such as? Ala, may be inserted if desired to be connected to the module.

다른 바람직한 모듈 조합물은 3원 조합물로서 엑센딘 및 CCK 또는 아밀린, 칼시토닌 및 CCK의 조합물을 비롯한 것들을 포함한다. 특정 조합물은 스페이서 또는 링커 및 연결기가 존재하거나 존재하지 않는 엑센딘/CCK 및 CCK/엑센딘을 포함한다. 다른 조합물은 스페이서 또는 연결기가 존재하거나 존재하지 않는 CCK/아밀린/칼시토닌 및 CCK/아밀린/칼시토닌/아밀린을 포함한다. 각각의 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 원하는 특성에 따라 독립적으로 펩티드 인핸서일 수도 있고, 또는 호르몬 활성을 나타낼 수도 있다. 한 실시양태에서, 예를 들어 화합물 10에서와 같이 아밀린/칼시토닌/아밀린은 아밀린/칼시토닌/아밀린의 키메라로서 제공된다.Other preferred module combinations include exendin and a combination of exendin and CCK or amylin, calcitonin and CCK as a ternary combination. Certain combinations include exendin / CCK and CCK / exendin with or without spacer or linker and linker. Other combinations include CCK / amylin / calcitonin and CCK / amylin / calcitonin / amylin with or without spacer or linker. Each module may independently be a peptide enhancer, or may exhibit hormone activity, depending on the desired characteristics of the hybrid polypeptide. In one embodiment, for example as in compound 10, Amylin / calcitonin / amylin is provided as a chimera of amylin / calcitonin / amylin.

또다른 바람직한 모듈 조합물은 3원 및 4원 하이브리드 분자로서 엑센딘, 아밀린 및 칼시토닌의 조합물을 비롯한 것들을 포함한다. 예시적인 조합물은 스페이서 또는 연결기가 존재하거나 존재하지 않는 엑센딘/아밀린/칼시토닌, 엑센딘/아밀린/칼시토닌/아밀린, 아밀린/칼시토닌/엑센딘, 및 아밀린/칼시토닌/아밀린/엑센딘 조합물을 포함한다. 각각의 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 원하는 특성에 따라 독립적으로 펩티드 인핸서일 수도 있고, 또는 호르몬 활성을 나타낼 수도 있다. 한 실시양태에서, 예를 들어 화합물 10에서와 같이 아밀린/칼시토닌/아밀린은 아밀린/칼시토닌/아밀린의 키메라로서 제공된다.Still other preferred module combinations include those including combinations of exendin, amylin and calcitonin as ternary and quaternary hybrid molecules. Exemplary combinations include exendin / amylin / calcitonin, exendin / amylin / calcitonin / amylin, amylin / calcitonin / exendin, and amylin / calcitonin / amylin / Exendin combination. Each module may independently be a peptide enhancer, or may exhibit hormone activity, depending on the desired characteristics of the hybrid polypeptide. In one embodiment, for example as in compound 10, Amylin / calcitonin / amylin is provided as a chimera of amylin / calcitonin / amylin.

한 실시양태에서, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 생물활성 펩티드 호르몬 모듈(들) 중 1개가 아밀린 또는 그의 유사체 또는 단편이고, 제2 생물활성 펩티드 호르몬 모듈이 CCK를 포함할 경우, 하이브리드 폴리펩티드는 바람직하게는 상이한 성분 펩티드 호르몬으로부터 선택되는 제3 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함해야 한다. 예시적인 제3 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 칼시토닌, 더욱 바람직하게는 연어 칼시토닌, 그의 유사체 또는 단편을 포함한다. In one embodiment, when one of the bioactive peptide hormone modules (s) exhibiting at least one hormone activity is amylin or an analogue or fragment thereof and the second bioactive peptide hormone module comprises CCK, the hybrid polypeptide is preferably Lt; RTI ID = 0.0 > bioactive peptide < / RTI > hormone module selected from different component peptide hormones. Exemplary third bioactive peptide hormone modules include calcitonin, more preferably salmon calcitonin, analogues or fragments thereof.

또다른 실시양태에서, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 생물활성 펩티드 호르몬 모듈(들) 중 1개가 아밀린 또는 그의 유사체 또는 단편이고, 제2 생물활성 펩티드 호르몬 모듈이 CT를 포함할 경우, 하이브리드 폴리펩티드는 바람직하게는 상이한 성분 펩티드 호르몬으로부터 선택되는 제3 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함해야 한다. 예시적인 제3 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 엑센딘-4, 그의 유사체 또는 단편을 포함한다. In another embodiment, when one of the biologically active peptide hormone modules (s) exhibiting at least one hormone activity is amylin or an analogue or fragment thereof and the second bioactive peptide hormone module comprises CT, the hybrid polypeptide Preferably a third bioactive peptide hormone module selected from different component peptide hormones. Exemplary third bioactive peptide hormone modules include exendin-4, an analogue or fragment thereof.

또다른 실시양태에서, 1종 이상의 호르몬 활성을 나타내는 생물활성 펩티드 호르몬 모듈(들) 중 1개가 GLP-1 또는 그의 유사체 또는 단편이고, 제2 생물활성 펩티드 호르몬 모듈이 엑센딘 단편을 포함하는 펩티드 인핸서일 경우, 하이브리드 폴리펩티드는 바람직하게는 제3 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함해야 한다. 예시적인 제3 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 PYY (그의 유사체, 유도체 및 단편 포함) 및 CCK (그의 유사체, 유도체 및 단편 포함)를 포함한다. In another embodiment, one of the biologically active peptide hormone module (s) exhibiting at least one hormone activity is GLP-1 or an analogue or fragment thereof, and the second bioactive peptide hormone module is a peptide enhancer comprising an exendin fragment , The hybrid polypeptide should preferably comprise a third bioactive peptide hormone module. Exemplary third bioactive peptide hormone modules include PYY (including analogs, derivatives and fragments thereof) and CCK (including analogues, derivatives and fragments thereof).

본원에 기재한 각각의 조합물과 관련하여, 성분 펩티드 호르몬에 대한 언급은 그와 관련된 유사체, 유도체, 단편, 및 또한 펩티드 인핸서에 대한 언급까지도 포함함을 이해해야 한다.With respect to each combination described herein, reference to a component peptide hormone includes references to analogs, derivatives, fragments, and also peptide enhancers associated therewith To be included.

바람직한 측면에서, 하이브리드 폴리펩티드는 하기의 것을 포함한다:In a preferred aspect, the hybrid polypeptide comprises:

예시적인 엑센딘 및 뉴로메딘 하이브리드는 하기의 것을 포함한다:Exemplary exendin and neuromedin hybrids include the following:

엑센딘-(1-28)-베타-Ala-베타-Ala-FN-38:Exendin- (1-28) -beta-Ala-beta-Ala-FN-38:

엑센딘-(1-28)-베타-Ala-베타-Ala-뉴로메딘(U25:)Exendin- (1-28) -beta-Ala-beta-Ala-neuromedin (U25 :)

엑센딘-(1-28)-베타-Ala-베타-Ala-뉴로메딘(U-9):Exendin- (1-28) -beta-Ala-beta-Ala-neuromedin (U-9)

베타-Ala-베타-Ala 스페이서는 임의적이며, Gly-Gly-Gly, 미니-PEG기 또는 당업계에 공지된 다른 링커, 특히 본원에 기재한 것들로 대체될 수 있다.The beta-Ala-beta-Ala spacer is optional and can be replaced by Gly-Gly-Gly, a mini-PEG group or other linkers known in the art, especially those described herein.

예시적인 엑센딘 및 나트륨배설증가 펩티드 하이브리드는 하기의 것을 포함하는, 엑센딘-hBNP 펩티드 하이브리드를 포함한다:Exemplary exendin and sodium excretion enhancing peptide hybrids include exendin-hBNP peptide hybrids, including:

엑센딘-(1-28)-베타-Ala-베타-Ala-hBNP:Exendin- (1-28) -beta-Ala-beta-Ala-hBNP:

엑센딘-베타-Ala-베타-Ala-hBNP:Exendin-beta-Ala-beta-Ala-hBNP:

본 발명의 모든 하이브리드에서와 같이, 베타-Ala-베타-Ala 스페이서는 임의적이며, Gly-Gly-Gly, 미니-PEG기 또는 당업계에 공지된 다른 링커, 특히 본원에 기재한 것들로 대체될 수 있다.As in all hybrids of the present invention, the beta-Ala-beta-Ala spacer is optional and can be replaced by Gly-Gly-Gly, a mini-PEG group or other linkers known in the art, have.

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 또한 이러한 하이브리드 폴리펩티드의 아미노산 서열에 대하여 예를 들어 치환, 결실 및 삽입 및 이들의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는 변형을 추가로 포함할 수도 있다. 바람직한 측면에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 "비-필수" 아미노산 잔기의 1개 이상의 변형을 포함한다. 본 발명의 문맥에서, "비-필수" 아미노산 잔기는 하이브리드 폴리펩티드의 성분 펩티드 호르몬 수용체 효능제 활성을 파괴하거나 실질적으로 감소시키지 않으면서 단편, 예를 들어 성분 펩티드 호르몬 단편의 천연 인간 아미노산 서열 내에서 변경될 수 있는, 즉 결실되거나 치환될 수 있는 잔기이다. The hybrid polypeptides of the present invention may further comprise variants that include, but are not limited to, for example, substitutions, deletions and insertions of amino acid sequences of such hybrid polypeptides, and any combination thereof. In a preferred aspect, the hybrid polypeptides of the invention comprise one or more variants of "non-essential" amino acid residues. In the context of the present invention, "non-essential" amino acid residues may be altered within the natural human amino acid sequence of a fragment, e. G., A component peptide hormone fragment, without disrupting or substantially reducing the component peptide hormone receptor agonist activity of the hybrid polypeptide That is, a residue that can be deleted or substituted.

바람직한 치환은 보존적 아미노산 치환을 포함한다. "보존적 아미노산 치환"은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄, 또는 물리화학적 특성 (예를 들어 정전, 수소 결합, 등입체성, 소수성 특징)을 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 당업계에 공지되어 있다. 이들 패밀리는 염기성 측쇄 (예를 들어 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄 (예를 들어 아스파르트산, 글루탐산), 비하전 극성 측쇄 (예를 들어 글리신, 아스파라진, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 메티오닌, 시스테인), 비-극성 측쇄 (예를 들어 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 트립토판), β-분지된 측쇄 (예를 들어 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄 (예를 들어 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다.Preferred substitutions include conservative amino acid substitutions. A "conservative amino acid substitution" is one in which an amino acid residue is replaced with a similar side chain or an amino acid residue having physicochemical properties (for example, electrostatic, hydrogen bonding, isosteric, hydrophobic characteristics). Families of amino acid residues having similar side chains are known in the art. These families include, but are not limited to, basic side chains (eg, lysine, arginine, histidine), acidic side chains (eg, aspartic acid, glutamic acid), nonpowering side chains (eg, glycine, asparagine, glutamine, serine, threonine, tyrosine, methionine , Cysteine), non-polar side chains (e.g. alanine, valine, leucine, isoleucine, proline, phenylalanine, tryptophan), beta-branched side chains (e.g. threonine, valine, isoleucine) and aromatic side chains , Phenylalanine, tryptophan, histidine).

본 발명은 또한 성분 펩티드 호르몬의 유도체에 관한 것이다. 이러한 유도체는 1개 이상의 수용성 중합체 분자, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜 ("PEG") 또는 다양한 길이의 지방산 쇄 (예를 들어 스테아릴, 팔미토일, 옥타노일 등)에 접합되거나 폴리아미노산, 예를 들어 폴리-his, 폴리-arg, 폴리-lys 및 폴리-ala가 부가된 하이브리드 폴리펩티드를 포함한다. 하이브리드 폴리펩티드에 대한 변형은 또한 소분자 치환체, 예를 들어 단쇄 알킬 및 구속 알킬 (예를 들어 분지쇄, 시클릭, 융합, 아다만틸) 및 방향족기를 포함할 수도 있다. 수용성 중합체 분자의 분자량은 바람직하게는 약 500 내지 약 20,000 달톤의 범위일 것이다.The present invention also relates to derivatives of the component peptide hormones. Such derivatives may be conjugated to one or more water soluble polymer molecules, such as polyethylene glycol ("PEG") or fatty acid chains of various lengths (e.g., stearyl, palmitoyl, octanoyl, -his, poly-arg, poly-lys and poly-aa are added. Modifications to hybrid polypeptides may also include small molecule substituents, such as short chain alkyl and constrained alkyl (e.g., branched chain, cyclic, fused, adamantyl) and aromatic groups. The molecular weight of the water soluble polymer molecule will preferably range from about 500 to about 20,000 daltons.

수용성 중합체 분자는 바람직하게는 아미노, 카르복실 또는 티올기에 연결될 수 있고, N-말단 또는 C-말단에 의해 또는 리신, 아스파르트산, 글루탐산 또는 시스테인의 측쇄에서 연결될 수 있다. 별법으로, 수용성 중합체 분자는 디아민 및 디카르복실기와 연결될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 리신 아미노산 상의 엡실론 아미노기를 통해 1개, 2개 또는 3개의 PEG 분자에 접합된다.The water soluble polymer molecule may preferably be connected to an amino, carboxyl or thiol group and may be connected at the N-terminal or C-terminal or at the side chain of lysine, aspartic acid, glutamic acid or cysteine. Alternatively, the water soluble polymer molecule may be linked with a diamine and a dicarboxylic group. In a preferred embodiment, the hybrid polypeptides of the invention are conjugated to one, two or three PEG molecules via an epsilon amino group on the lysine amino acid.

또한, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드 유도체는 1개 이상의 아미노산 잔기에 대한 화학적 변경을 갖는 하이브리드 폴리펩티드를 포함한다. 이러한 화학적 변경은 아미드화, 글리코실화, 아실화, 황산화, 인산화, 아세틸화 및 고리화를 포함한다. 화학적 변경은 PPF 하이브리드 폴리펩티드의 서열 내의 아미노산 잔기의 N-말단 또는 C-말단에서 또는 측쇄에서 1회 발생할 수 있다. 한 실시양태에서, 이들 펩티드의 C-말단은 유리 -OH기 또는 -NH₂기를 가질 수 있다. 또다른 실시양태에서, N-말단 종결부는 이소부틸옥시카르보닐기, 이소프로필옥시카르보닐기, n-부틸옥시카르보닐기, 에톡시카르보닐기, 이소카프로일기 (isocap), 옥타닐기, 옥틸 글리신기 (G(Oct)) 또는 8-아미노옥탄산기로 캡핑될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 고리화는 디술피드 브릿지의 형성을 통해 수행될 수 있다. 별법으로, 하이브리드 폴리펩티드를 따라 화학적 변경된 다중 부위가 존재할 수 있다.In addition, the hybrid polypeptide derivative of the present invention comprises a hybrid polypeptide having a chemical modification to one or more amino acid residues. Such chemical modifications include amidation, glycosylation, acylation, sulfation, phosphorylation, acetylation and cyclization. The chemical modification may occur at the N-terminal or C-terminus of the amino acid residue in the sequence of the PPF hybrid polypeptide or in the side chain one time. In one embodiment, C- terminus of these peptides may have an advantage -OH group or -NH _2. In another embodiment, the N-terminal terminus is an isobutyloxycarbonyl group, an isopropyloxycarbonyl group, an n-butyloxycarbonyl group, an ethoxycarbonyl group, an isocapyl group, an octanyl group, an octylglycine group (G (Oct) Or an 8-amino octanoic acid group. In a preferred embodiment, the cyclization can be carried out through the formation of a disulfide bridge. Alternatively, multiple sites chemically modified along the hybrid polypeptide may be present.

추가의 실시양태에서, 하이브리드는 WO 2005/077072에 개시된 임의의 하이브리드를 포함하지 않는다. 따라서, 한 실시양태에서는 신규한 하이브리드가 청구된다. 또다른 실시양태에서는, 본원에 개시된 바와 같이, 본 명세서나 WO 2005/077072 등에 개시된 임의의 하이브리드의 신규 용도를 청구한다. 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드의 예는 서열 목록에 제시되고 하기 실시예 단락에서 추가로 논의된다.In a further embodiment, the hybrid does not comprise any of the hybrids disclosed in WO 2005/077072. Thus, in one embodiment, a novel hybrid is claimed. In another embodiment, as disclosed herein, novel uses of any of the hybrids disclosed herein or in WO 2005/077072 are claimed. Examples of hybrid polypeptides of the invention are set forth in the Sequence Listing and further discussed below in the Examples section.

대사 상태 또는 장애의 치료 또는 예방에서 In the treatment or prevention of metabolic conditions or disorders 하이브리드hybrid 폴리펩티드의 용도 Uses of Polypeptides

본 발명의 하이브리드는 음식물 섭취의 감소, 식욕 감퇴, 칼로리 섭취의 감소, 포만감 유도, 영양분 이용률의 감소, 체중 감소의 유도, 신체 조성의 변화, 신체 에너지 함량 또는 에너지 소모량 변경, 지질 프로파일의 개선 (예를 들어 LDL 콜레스테롤 및 트리글리세리드 수준의 저하 및/또는 HDL 콜레스테롤 수준 변화), 위장 운동 감속화, 위 공복 지연, 식후 혈중 글루코스 변동(excursion)의 조정, 글루카곤 분비 저해 또는 억제 및 혈압 감소에 유용할 수 있다. 한 실시양태에서, 이러한 하이브리드는 엑센딘, GLP1, 아밀린 및/또는 sCT 일부를 함유한다.The hybrids of the present invention can be used to reduce food intake, decrease appetite, reduce caloric intake, induce satiety, reduce nutrient utilization, induce weight loss, change body composition, change body energy or energy expenditure, For example, lowering LDL cholesterol and triglyceride levels and / or changing HDL cholesterol levels), gastrointestinal motility slowing, stomach lag delay, post-prandial blood glucose excursion, inhibition or inhibition of glucagon secretion, and decreased blood pressure . In one embodiment, such hybrids contain exendin, GLP1, amylin and / or sCT moieties.

따라서, 특정 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드는 영양분 이용률의 감소로 완화될 수 있는 상태 또는 장애의 치료 또는 예방에 유용하며, 대상체에게 치료 또는 예방 유효량의 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함한다. 이러한 상태 및 장애로는 식사 장애, 인슐린 내성, 비만, 비정상적인 식후 과혈당, 예를 들어 제I형, 제II형 및 임신 당뇨병 등을 비롯한 임의의 종류의 당뇨병, 대사 증후군, 덤핑 증후군, 고혈압, 이상지혈증, 심혈관 질환, 고지혈증, 수면 무호흡, 암, 폐 고혈압, 담낭염, 및 골관절염 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, 이러한 하이브리드는 엑센딘, GLP1, 아밀린 및/또는 sCT 일부를 함유한다.Thus, in certain embodiments, hybrids of the invention are useful in the treatment or prevention of conditions or disorders that can be alleviated by a reduction in nutrient utilization, and include administering a therapeutically or prophylactically effective amount of a compound of the invention to the subject. Such conditions and disorders include, but are not limited to, diabetes mellitus, metabolic syndrome, dumping syndrome, hypertension, dyslipidemia, diabetes mellitus, diabetes mellitus, diabetes mellitus, including diabetes mellitus, insulin resistance, obesity, abnormal postprandial hyperglycemia, , Cardiovascular disease, hyperlipidemia, sleep apnea, cancer, pulmonary hypertension, cholecystitis, and osteoarthritis. In one embodiment, such hybrids contain exendin, GLP1, amylin and / or sCT moieties.

예시적인 펩티드 모듈 페어링은 심작용/보호성 펩티드, 예를 들어 유로코르틴과 GLP-1 또는 엑센딘, ANP, BNP 또는 CNP와 GLP-1 또는 엑센딘, 및 유로코르틴과 ANP, BNP 또는 CNP를 포함한다. 이러한 하이브리드는 심근보호성이며, 급성 또는 만성 CHF, 허혈 재관류, 심근 경색 등을 비롯하여 본원에 기재한 관련 질환 및 상태에 특히 유용하며, 항-고혈압 징후 및 협심증의 치료 또는 예방에 유용한 혈관확장 작용에도 유용하다. Ucn2 및 Ucn3이 본 발명의 하이브리드에 특히 유용하다.Exemplary peptide module pairings include peptidic peptides such as europurintin and GLP-1 or exendin, ANP, BNP or CNP and GLP-1 or exendin, and europrotin and ANP, BNP or CNP . Such hybrids are myocardial protective and are particularly useful for the associated diseases and conditions described herein, including acute or chronic CHF, ischemia reperfusion, myocardial infarction, and the like, and are useful in the treatment of, or prophylaxis of, useful. Ucn2 and Ucn3 are particularly useful for the hybrids of the present invention.

심혈관 상태 또는 질환의 비-제한적인 예는 고혈압, 심근 허혈 및 심근 재관류이다. 본 발명의 화합물은 또한 비만과 관련된 다른 상태, 예컨대 졸중, 암 (예를 들어 자궁내막암, 유방암, 전립선암 및 결장암), 담낭 질환, 수면 무호흡, 생식력 저하 및 골관절염의 치료 또는 예방에도 유용할 수 있다 (문헌 [Lyznicki et al, Am. Fam. Phys. 63:2185, 2001] 참조). 다른 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 미적인 이유로 신체 조성을 변경시키고자 하거나, 자신의 신체적 능력을 향상시키고자 하거나, 또는 더 날씬한 몸매(leaner meat source)를 만들고자 하는데 이용될 수 있다. 하이브리드는 근육량의 유의한 감소 없이 지방을 감소시켜서 신체 조성을 변화시키는데 유용하기 때문에, 제지방 체중은 유지하면서 바람직한 체지방 손실이 일어나도록 한다. 한 실시양태에서, 이러한 하이브리드는 엑센딘, GLP1, 아밀린 및/또는 sCT 일부를 함유한다.Non-limiting examples of cardiovascular conditions or diseases are hypertension, myocardial ischemia, and myocardial reperfusion. The compounds of the invention may also be useful in the treatment or prevention of other conditions associated with obesity, such as stroke, cancer (such as endometrial cancer, breast cancer, prostate cancer and colon cancer), gallbladder disease, sleep apnea, impaired fertility and osteoarthritis (Lyznicki et al, Am. Fam. Phys. 63: 2185, 2001). In another embodiment, the compounds of the present invention may be used to alter body composition for aesthetic reasons, to enhance their physical ability, or to create leaner meat sources. Since hybrids are useful for reducing body fat by reducing fat content without significant reduction in muscle mass, it is desirable to maintain a desirable body fat loss while maintaining the lean body mass. In one embodiment, such hybrids contain exendin, GLP1, amylin and / or sCT moieties.

또다른 일반적인 측면에서, 본 발명의 하이브리드는 그렐린의 분비 억제에 사용될 수 있다. 따라서, 그렐린-관련 장애, 예를 들어 프라더-윌리 증후군, 모든 유형의 당뇨병 및 그의 합병증, 비만, 폭식증, 고지혈증, 또는 영양과잉증과 연관된 다른 장애의 치료 또는 예방을 위한 메카니즘에 본 발명의 화합물이 이용될 수 있다. 한 실시양태에서, 이러한 하이브리드는 엑센딘, GLP1, 아밀린 및/또는 sCT 일부를 함유한다.In yet another general aspect, the hybrids of the invention can be used to inhibit the secretion of ghrelin. Thus, it has been found that the compounds of the present invention are useful for the treatment or prevention of ghrelin-related disorders such as Prader-Willi syndrome, all types of diabetes and its complications, obesity, bulimia, hyperlipidemia, Can be used. In one embodiment, such hybrids contain exendin, GLP1, amylin and / or sCT moieties.

또다른 일반적인 측면에서, 이제는 아밀린 및/또는 sCT 일부를 함유하는 하이브리드가 바레트 식도, 위식도 역류병 (GERD) 및 그와 관련된 상태를 치료 또는 예방하는데 유용할 수 있음이 인식된다. 이러한 상태로는 흉통, 위/장관 내용물의 입 또는 폐로의 역류에 수반되는 흉통, 삼키는데 있어서의 곤란함, 기침, 간헐적 천명(喘鳴) 및 성대 염증 (GERD와 관련이 있는 상태), 식도 침식, 식도 궤양, 식도 협착, 바레트 화생 (정상적인 식도 상피가 비정상적인 상피로 바뀜), 바레트 선암 및 폐 흡인 등을 들 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 이러한 하이브리드는 위산 억제, 담즙산 억제, 및 췌장 효소 억제 등과 같은 항-분비 특성을 보유한다. 추가로, 이러한 하이브리드는 위보호 효과를 가질 수도 있는데, 이로 인해 이것들은 바레트 식도, 및/또는 GERD 및 본원에 기재한 바와 같은 관련 또는 연관 상태의 치료 또는 예방에 특히 유용하다.In yet another general aspect, it is recognized that hybrids containing amylin and / or sCT moieties may now be useful for treating or preventing Barrett's esophagus, GERD and related conditions. These conditions include chest pain, chest pain associated with reflux of the stomach / intestinal contents into the mouth or lungs, difficulty in swallowing, cough, intermittent wheezing and vocal fold inflammation (conditions associated with GERD), esophageal erosion, Esophageal stricture, Barrett's disease (normal esophageal epithelium is turned into abnormal epithelium), Barrett's adenocarcinoma and lung aspiration. Such hybrids have anti-secretory properties such as gastric acid suppression, bile acid suppression, and pancreatic enzyme inhibition. Additionally, such hybrids may have stomach-protective effects, which are therefore particularly useful for the treatment or prevention of Barrett's esophagus, and / or GERD and related or associated conditions as described herein.

또다른 일반적인 측면에서, 하이브리드는 췌장염, 췌장 암종 및 위염의 치료 또는 예방, 특히 내시경적 역행성 담도췌관조영술 (ERCP)을 받은 환자에서의 췌장염 치료 및 예방에 추가로 유용할 수 있다. 아밀린 및/또는 sCT를 함유하는 하이브리드 효능제는 소마토스타틴과 조합될 때 놀랄만큼 우수한 치료 효과를 가질 수 있다. 따라서, 특정 실시양태에서, 췌장염의 치료 또는 예방 방법은 대상체에게 이러한 하이브리드를 투여하고, 소마토스타틴 및 소마토스타틴 효능제를 투여하는 것을 포함한다.In yet another general aspect, hybrids may be further useful for the treatment or prevention of pancreatitis, pancreatic carcinoma, and gastritis, particularly in the treatment and prevention of pancreatitis in patients undergoing endoscopic retrograde cholangiopancreatography (ERCP). Hybrid agonists containing amylin and / or sCT can have surprisingly good therapeutic effects when combined with somatostatin. Thus, in certain embodiments, methods of treating or preventing pancreatitis include administering such hybrids to a subject, and administering somatostatin and somatostatin agonists.

또다른 일반적인 측면에서, 하이브리드는 골 흡수의 감소, 혈장 칼슘의 감소, 및 무통 효과의 유도, 특히 골감소증 및 골다공증 등과 같은 골 장애의 치료에 유용하다. 다른 실시양태에서, 하이브리드는 통증 및 통증성 신경병증의 치료에 유용하다. 한 실시양태에서, 이러한 하이브리드는 엑센딘, GLP1, 아밀린 및/또는 sCT 일부를 함유한다.In another general aspect, hybrids are useful for the treatment of bone disorders such as decreased bone resorption, reduced plasma calcium, and induction of analgesic effects, particularly osteopenia and osteoporosis. In another embodiment, the hybrid is useful for the treatment of pain and painful neuropathy. In one embodiment, such hybrids contain exendin, GLP1, amylin and / or sCT moieties.

본 발명의 또다른 측면에서, 비만의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 치료 또는 예방 유효량의 하이브리드 폴리펩티드를 투여하는 것을 포함하는, 비만의 치료 또는 예방 방법이 제공된다. 바람직한 실시양태에서, 투여 대상체는 비만이거나 과체중인 대상체이다. "비만"은 일반적으로 본원의 목적상 30 초과의 체질량 지수로 정의되지만, 체중을 저하시킬 필요가 있거나 이를 원하는, 체질량 지수가 30 미만인 대상체를 비롯한 임의의 대상체가 "비만"의 범위에 포함된다. 인슐린 내성, 글루코스 불내성이거나 임의의 형태의 진성 당뇨병 (예를 들어 제1형, 제2형 또는 임신 당뇨병)을 갖는 대상체에게 이러한 하이브리드가 유익할 수 있다. 한 실시양태에서, 이러한 하이브리드는 엑센딘, PYY, GLP1, 아밀린 및/또는 sCT 일부를 함유한다.In another aspect of the invention there is provided a method of treating or preventing obesity comprising administering to a subject in need of such treatment or prevention a therapeutically or prophylactically effective amount of a hybrid polypeptide. In a preferred embodiment, the subject is obese or overweight. "Obesity" is generally defined as a body mass index of greater than 30 for the purposes of the present application, but any subject including a body mass index index of less than 30 is included in the scope of "obesity" Such hybrids may be beneficial to subjects having insulin resistance, glucose intolerance, or any form of diabetes mellitus (e. G., Type 1, type 2 or gestational diabetes). In one embodiment, such hybrids contain a portion of exendin, PYY, GLP1, amylin and / or sCT.

또다른 실시양태에서, 우선 병적 비만 대상체의 체중을 병적 비만인 체중 미만의 수준으로 감소시킨 후에 상기 대상체에게 대상체의 체중을 추가로 감소시키는 유효량의 항-비만제 조합물을 투여함으로써 병적 비만 대상체의 체중을 감소시키는 방법을 제공한다. 대상체의 체중을 병적 비만인 체중 미만으로 감소시키는 방법은 칼로리 섭취의 감소, 신체 운동 증가, 약물 요법, 비만 수술, 예를 들어 위 바이패스 수술, 또는 이들 방법의 임의의 조합을 포함한다. 한 측면에서, 항-비만제 조합물의 투여는 대상체의 체중을 더욱 감소시킨다. 또다른 실시양태에서, 체질량 지수가 40 이하인 대상체의 체중을 추가로 감소시키는 유효량의 항-비만제 조합물을 투여하여 체질량 지수가 40 이하인 대상체에서 체질량 지수를 감소시키는 방법을 제공한다.In another embodiment, an effective amount of an anti-obesity combination is first administered to the subject to reduce the body weight of the subject after the body weight of the pathological obese subject is first reduced to a level below the pathological obese subject's body weight, / RTI > Methods for reducing the body weight of a subject to less than morbid obesity body weight include reduced calorie intake, increased physical activity, pharmacotherapy, obesity surgery, such as gastric bypass surgery, or any combination of these methods. In one aspect, the administration of the anti-obesity agent combination further reduces the body weight of the subject. In another embodiment, there is provided a method of reducing BMI in a subject having a BMI of 40 or less by administering an effective amount of an anti-obesity combination that further reduces the body weight of a subject having a BMI of 40 or less.

체중을 감소시킨다는 것은, 처치 과정이 며칠이건, 몇주이건, 몇개월이건 또는 몇년이건 간에 해당 대상체가 그 처치 과정에 걸쳐서 그의 전체 체중 중 일부를 손실함을 의미한다. 별법으로, 체중을 감소시킨다는 것은, 지방량:제지방량(lean mass)의 비율 감소로 정의될 수 있다 (즉, 상기 대상체에서는 지방량이 손실되지만 제지방량은 유지되거나 증가되어 반드시 전체 체중에서 상응하는 손실이 수반되는 것은 아님). 본 실시양태에서 조합 투여된 유효량의 항-비만제는 처치 과정에 걸쳐서 대상체의 체중을 감소시키는데 효과적인 양이거나, 또는 별법으로는 처치 과정에 걸쳐서 대상체의 지방량 백분율(％)을 감소시키는데 효과적인 양이다. 특정 실시양태에서, 대상체의 체중은 처치 과정에 걸쳐서 약 1％ 이상, 약 5％ 이상, 약 10％ 이상, 약 15％ 이상 또는 약 20％ 이상 감소된다. 별법으로, 대상체의 지방량 백분율(％)은 처치 과정에 걸쳐서 약 1％ 이상, 약 5％ 이상, 약 10％ 이상, 약 15％ 이상, 약 20％ 이상 또는 약 25％ 이상 감소된다.Reducing weight means that the treatment process will lose some of its entire body weight over the course of the procedure, whether for a few days, weeks, months, or even years. Alternatively, reducing body weight can be defined as a reduction in the ratio of fat: lean mass (i.e., the fat mass is lost in the subject but the fat mass is maintained or increased, necessarily leading to a corresponding loss in total body weight Not accompanied). An effective amount of the anti-obesity agent administered in combination in this embodiment is an amount effective to reduce the body weight of the subject throughout the treatment process, or alternatively, an amount effective to reduce the percent fat mass of the subject throughout the treatment process. In certain embodiments, the body weight of the subject is reduced by at least about 1%, at least about 5%, at least about 10%, at least about 15%, or at least about 20% over the treatment period. Alternatively, the percent fat percentage of the subject is reduced by at least about 1%, at least about 5%, at least about 10%, at least about 15%, at least about 20%, or at least about 25% over the course of treatment.

본 발명의 다른 측면에서, 유효량의 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드를 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 음식물 섭취의 감소, 영양분 이용률의 감소, 체중 감소의 유도, 신체 조성의 변화 및 신체 에너지 함량의 변경 또는 에너지 소모량의 증가, 진성 당뇨병의 치료, 및 지질 프로파일의 개선 (LDL 콜레스테롤 및 트리글리세리드 수준의 감소 및/또는 HDL 콜레스테롤 수준의 변화 포함)을 위한 방법이 제공된다. 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 방법은 영양분 이용률을 감소시켜서 완화될 수 있는 상태 또는 장애의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에게 치료 또는 예방 유효량의 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드를 투여하는 것을 포함하는, 상기 대상체에서 영양분 이용률을 감소시켜서 완화될 수 있는 상태 또는 장애를 치료 또는 예방하는데 이용된다. 이러한 상태 및 장애로는 고혈압, 이상지혈증, 심혈관 질환, 식사 장애, 인슐린 내성, 비만, 및 임의의 종류의 진성 당뇨병 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, 이러한 하이브리드는 엑센딘, PYY, GLP1, 아밀린 및/또는 sCT 일부를 함유한다.In another aspect of the invention there is provided a method of reducing food intake, reducing nutrient utilization, inducing weight loss, altering body composition and altering body energy content, or reducing energy expenditure, including administration of an effective amount of a hybrid polypeptide of the invention to a subject, Methods for increasing consumption, treating diabetes mellitus, and improving lipid profiles (including decreasing LDL cholesterol and triglyceride levels and / or changing HDL cholesterol levels) are provided. In a preferred embodiment, the methods of the present invention comprise administering a therapeutically or prophylactically effective amount of a hybrid polypeptide of the invention to a subject in need of treatment or prevention of a condition or disorder that can be alleviated by reducing nutrient utilization, Is used to treat or prevent conditions or disorders that can be alleviated by reducing nutrient utilization. Such conditions and disorders include, but are not limited to, hypertension, dyslipidemia, cardiovascular disease, eating disorders, insulin resistance, obesity, and any type of diabetes mellitus. In one embodiment, such hybrids contain a portion of exendin, PYY, GLP1, amylin and / or sCT.

이론에 얽매이려는 것은 아니지만, 말초 투여된 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드가 음식물 섭취의 감소, 위 공복 지연, 영양분 이용률의 감소 및 체중 감소를 유도하는 효과는 PP 패밀리에 속하거나 또는 이와 유사한 1종 이상의 독특한 수용체 클래스와의 상호작용에 의해 결정되는 것으로 여겨진다. 더욱 특히, PYY-선호 (또는 Y7) 수용체에 유사한 수용체(들)이 관련이 있다고 여겨진다.Although not wishing to be bound by theory, it is believed that the effect of the hybrid polypeptides of the present invention administered peripherally on reducing food intake, delaying stomach laxity, decreasing nutrient utilization and inducing weight loss may be attributed to one or more unique receptors It is believed to be determined by interaction with the class. More particularly, it is believed that similar receptor (s) are involved in PYY-preference (or Y7) receptors.

항-비만, 체중 감소, 음식물 감소, 대사율 증가, 및 체지방 감소 및/또는 지방 재분포 하이브리드로서 특별한 관심이 있는 것은, CNS에 작용하는 성분을 1종 이상, 바람직하게는 2종 이상 갖는 것들이다. 특정 영역의 전뇌 (종뇌 및 간뇌 유래의 뇌 부분) 및 후뇌 또는 뇌간 (중뇌, 교뇌 및 수질 포함)이 에너지 균형 제어에 관여하는 것으로 확인된 바 있다. 음식물 섭취 및/또는 체중 조정에 관여하는 시상하부의 핵 또는 전뇌 구조의 예로는 궁상핵 (ARC), 실방핵 (PVN), 시상하부 배내측 (DMH), 복내측핵 (VMH), 및 시상하부 외측핵 (LHA) 등이 있다. 음식물 섭취 및/또는 체중 조정에 관여하는 뇌간의 핵 또는 후뇌 구조의 예로는 고속핵 (NST), 최하 구역 (AP), 및 외측부완핵 (lPBN) 등이 있다. 성취(consummatory) 운동 제어 시스템의 요소를 제어하는 뇌간 핵은 NST, AP 및 lPBN 등과 같이 뇌간 영역으로부터의 1차 또는 2차 돌출부에 의해 제어된다고 여겨진다. AP, NST 및 lPBN은 모두가 (함께 및 독립적으로) 고유의 통합적 능력을 보유하는 것으로 밝혀졌다는 것에 주목할 만하다.Of particular interest as anti-obesity, weight loss, decreased food, increased metabolic rate, and reduced body fat and / or fat redistribution are those that have one or more, preferably two or more, components that act on the CNS. It has been found that certain brain regions of the forebrain (cerebral and cerebellum-derived brain regions) and brainstem or brain regions (including midbrain, laryngeal, and water quality) are involved in energy balance control. Examples of the hypothalamic nucleus or forebrain structures involved in food intake and / or body weight regulation include ARC, PVN, DMH, VMH, and hypothalamus Lateral nucleus (LHA), and the like. Examples of the nucleus or brain structure of the brainstem involved in food intake and / or weight regulation include fast nuclear (NST), lowermost (AP), and lobed nucleus (lPBN). It is believed that the brainstem nuclei controlling the elements of the consummatory motion control system are controlled by primary or secondary protrusions from the brainstem region, such as NST, AP, and lPBN. It is noteworthy that AP, NST and lPBN have all been found (together and independently) to have inherent integrated abilities.

CNS를 대상으로 하는 다양한 항-비만제가 음식물 섭취 및/또는 체중 조정에 관여하는 시상하부에 존재하는 이들 전뇌 구조에 작용한다. 추가로, CNS를 대상으로 하는 항-비만제는 음식물 섭취 및/또는 체중 조정에 관여하는 뇌간에 존재하는 후뇌 구조에 작용한다. 이러한 항-비만제의 예는 본원에 기재되어 있다. 조합되어 항-비만 하이브리드를 형성할 수 있고 조합되어 전뇌와 후뇌 둘다에 활성을 갖는 항-비만 하이브리드를 형성할 수 있는 펩티드 패밀리 모듈의 추가 예에 관하여는 하기 표를 참조한다. 이러한 성분의 예로는 신경펩티드 Y1 (NPY1) 수용체 길항제, NPY5 수용체 길항제, 렙틴 및 렙틴 효능제, 섬모 신경영양 인자 (CNTF) 및 CNTF 효능제, 펩티드 YY (PYY) 및 PYY 효능제, 엑센딘 및 엑센딘 효능제, GLP-1 및 GLP-1 효능제, 그렐린 및 그렐린 길항제, 콜레시스토키닌 (CCK) 및 CCK 효능제, 및 아밀린 및 아밀린 효능제, 예컨대 본원에 기재한 것들 등이 있다. 추가의 펩티드 패밀리 성분 및 임상 지침은 본 출원인의 동시 계류 중인 특허 출원 PCT/US06/17529에서 찾을 수 있고, 상기 문헌은 본원에 참고로 포함된다.A variety of anti-obesity agents targeting the CNS act on these hypothalamic structures present in the hypothalamus involved in food intake and / or body weight regulation. In addition, anti-obesity agents targeting the CNS act on the brainstem structures present in the brainstem involved in food intake and / or body weight regulation. Examples of such anti-obesity agents are described herein. Reference is made to the following table for further examples of peptide family modules capable of forming anti-obesity hybrids in combination and combined to form anti-obesity hybrids with activity in both the whole brain and the hindbrain. Examples of such components include neuropeptide Y1 (NPY1) receptor antagonists, NPY5 receptor antagonists, leptin and leptin agonists, ciliary neurotrophic factor (CNTF) and CNTF agonists, peptide YY (PYY) and PYY agonists, (GLP-1 and GLP-1 agonists, ghrelin and ghrelin antagonists, cholecystokinin (CCK) and CCK agonists, and amylin and amylin agonists such as those described herein. Additional peptide family members and clinical guidelines can be found in co-pending patent application PCT / US06 / 17529 of the present applicant, which is incorporated herein by reference.

개개의 항-비만 표적 및 위치Individual anti-obesity targets and locations 신호전달 시스템Signal transmission system CNSCNS 영역 domain 음식물 섭취에 On food intake
대한 역할Role for 항-term- 비만제Obesity agent 신경펩티드 Y (NPY)Neuropeptide Y (NPY) 전뇌 (ARC/PVN)Whole brain (ARC / PVN) 섭취 증가Increased intake NPY1 및 NPY5 수용체 길항제NPY1 and NPY5 receptor antagonists 렙틴Leptin 전뇌 (ARC)Whole Brain (ARC) 섭취 감소Reduced intake 렙틴, 또는 효능제Leptin, or an agonist 섬모 신경영양 인자 (CNTF)Ciliary neurotrophic factor (CNTF) 전뇌 (ARC)Whole Brain (ARC) 섭취 감소Reduced intake CNTFCNTF 펩티드 YY (PYY)Peptide YY (PYY) 전뇌 (ARC)Whole Brain (ARC) 섭취 감소Reduced intake PYY(3-36) 효능제PYY (3-36) agonists 글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1)Glucagon-like peptide-1 (GLP-1) 전뇌 (PVN)Whole Brain (PVN) 섭취 감소Reduced intake 엑세나티드 및
다른 GLP-1 리간드,
DPP-IV 억제제Exenatide and
Other GLP-1 ligands,
DPP-IV inhibitor 그렐린Ghrelin 전뇌 (ARC)Whole Brain (ARC) 섭취 증가Increased intake 그렐린 길항제Ghrelin antagonist 콜레시스토키닌 (CCK)Cholecystokinin (CCK) 후뇌 (AP)Brain (AP) 섭취 감소Reduced intake CCK 효능제CCK agonists 아밀린Amylin 후뇌 (AP)Brain (AP) 섭취 감소Reduced intake 아밀린 효능제, 프람린티드,
아밀린 유사체Amylin agonists, pleurinides,
Amylin analog 멜라노코르틴 (MC)Melano Cortin (MC) 전뇌 (PVN/ARC)Whole brain (PVN / ARC) 효능제가 섭취를 감소시킴Efficacy Reduces intake MC4 효능제MC4 agonists

특정 실시양태에서, 하이브리드는 주로 전뇌에 작용하는 1종 이상의 펩티드 패밀리 성분을 포함할 수 있는 항-비만제이다. 다른 실시양태에서, 하이브리드는 주로 후뇌에 작용하는 1종 이상의 펩티드 패밀리 성분을 포함할 수 있는 항-비만제이다. 예시적인 펩티드 패밀리 및 성분은 NPY1 수용체 길항제, NPY5 수용체 길항제, 렙틴 또는 렙틴 효능제 또는 유사체, CNTF, NPY2 수용체 효능제 (예를 들어 PYY(3-36) 또는 PYY(3-36) 효능제), 엑센딘 또는 엑센딘 효능제 또는 유사체, GLP-1 또는 GLP-1 효능제 또는 유사체, 그렐린 길항제, CCK 또는 CCK 효능제 또는 유사체 및 아밀린 또는 아밀린 효능제 또는 유사체이다.In certain embodiments, the hybrid is an anti-obesity agent, which may comprise at least one peptide family component that is primarily responsible for the whole brain. In another embodiment, the hybrid is an anti-obesity agent that can include one or more peptide family members that act primarily on the hindbrain. Exemplary peptide families and components include, but are not limited to, NPYl receptor antagonists, NPY5 receptor antagonists, leptin or leptin agonists or analogs, CNTF, NPY2 receptor agonists such as PYY (3-36) or PYY (3-36) agonists, Exendin or exendin agonists or analogs, GLP-1 or GLP-1 agonists or analogs, ghrelin antagonists, CCK or CCK agonists or analogs and amylin or amylin agonists or analogs.

특정 실시양태에서, 하이브리드 및 그의 사용 방법은 주로 ARC, PVN, VM 및 LH 등과 같은 시상하부의 에너지 균형 중심을 표적으로 하는 제1 성분을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 하이브리드는 역시 시상하부를 표적으로 하지만 제1 성분과는 상이한 위치에서 또는 상이한 작용 메카니즘을 통해 작용하는 1종 이상의 다른 펩티드 패밀리 성분을 함유한다. 하이브리드가 1종 초과의 다른 펩티드 패밀리 성분을 함유하고 이것들 역시 시상하부를 표적으로 하는 경우, 1종 초과의 다른 펩티드 패밀리 성분은 서로 동일한 작용 메카니즘을 통해 동일한 위치를 표적으로 할 수도 있고, 또는 상이한 위치 및/또는 상이한 작용 메카니즘을 표적으로 할 수도 있다. 또다른 실시양태에서, 이 경우의 하이브리드는 제1 성분과 상이하고 서로 상이한 위치 또는 작용 메카니즘을 통한 항-비만 효과, 혈중 글루코스의 제어, 심근보호, 및/또는 고혈압 제어 등을 비롯하여 원하는 1종 이상의 추가의 유익한 치료 효과를 제공하는 1종 이상의 다른 펩티드 패밀리 성분을 함유한다. 특정 실시양태에서, 추가의 펩티드 패밀리 성분은 주로 NST, AP 및 lPBN 등과 같은 후뇌의 에너지 균형 중심을 표적으로 하는 것이다.In certain embodiments, hybrids and methods of use thereof comprise a first component that targets an energy balance center of the hypothalamus, such as primarily ARC, PVN, VM, and LH. In one embodiment, the hybrid also contains one or more other peptide family members that target the hypothalamus but act at a different location than the first component or through different mechanisms of action. Where hybrids contain more than one other peptide family member and they also target the hypothalamus, more than one other peptide family member may target the same position through the same mechanism of action to each other, And / or may target different mechanisms of action. In another embodiment, the hybrids in this case are different from the first component and have an anti-obesity effect through a different location or mechanism of action, control of blood glucose, myocardial protection, and / or hypertension control, And one or more other peptide family members that provide additional beneficial therapeutic effects. In certain embodiments, the additional peptide family members are primarily targeting the energy balance center of the hindbrain, such as NST, AP, and lPBN.

특정 실시양태에서, 하이브리드 및 그의 사용 방법은 주로 NST, AP 및 lPBN 등과 같은 후뇌의 에너지 균형 중심을 표적으로 하는 제1 성분을 포함한다. 한 실시양태에서, 상기 하이브리드는 역시 시상하부를 표적으로 하지만 제1 성분과 상이하고 서로 상이한 위치에서 또는 상이한 작용 메카니즘을 통해 작용하는 1종 이상의 다른 펩티드 패밀리 성분을 함유한다. 또다른 실시양태에서, 이 경우의 하이브리드는 제1 성분과 상이하고 서로 상이한 위치 또는 작용 메카니즘을 통한 항-비만 효과, 혈중 글루코스의 제어, 심근보호, 및/또는 고혈압 제어 등을 비롯하여 원하는 1종 이상의 추가의 유익한 치료 효과를 제공하는 1종 이상의 다른 펩티드 패밀리 성분을 함유한다. 특정 실시양태에서, 추가의 펩티드 패밀리 성분은 주로 ARC, PVN, VM 및 LH 등과 같은 시상하부의 에너지 균형 중심을 표적으로 하는 것이다.In certain embodiments, the hybrids and methods of use thereof comprise a first component targeting primarily the energy balance center of the hindbrain, such as NST, AP, and lPBN. In one embodiment, the hybrids also contain one or more other peptide family members that target the hypothalamus but are different from the first component and act at different locations or through different mechanisms of action. In another embodiment, the hybrids in this case are different from the first component and have an anti-obesity effect through a different location or mechanism of action, control of blood glucose, myocardial protection, and / or hypertension control, And one or more other peptide family members that provide additional beneficial therapeutic effects. In certain embodiments, the additional peptide family members are primarily targeting the energy balance center of the hypothalamus, such as ARC, PVN, VM, and LH.

본원에서 사용된 바와 같이, "음식물 섭취 및/또는 체중 조정에 관여하는 전뇌 구조에 작용하는" 항-비만제는 전뇌의 특정 영역, 예를 들어 특정 핵 및/또는 신경 회로의 활성을 자극하거나 저해한다. 이러한 전뇌 자극 또는 저해는 신체로의 영양분 이용률 감소를 야기한다. "음식물 섭취 및/또는 체중 조정에 관여하는 후뇌 구조에 작용하는" 항-비만제는 후뇌의 특정 영역, 예를 들어 특정 핵 및/또는 신경 회로의 활성을 자극하거나 저해한다. 이러한 후뇌 자극 또는 저해는 신체로의 영양분 이용률 감소를 야기한다. As used herein, an "anti-obesity agent " acting on the forebrain structure involved in food intake and / or body weight regulation may stimulate or inhibit the activity of certain regions of the forebrain, such as certain nuclei and / do. This whole brain stimulation or inhibition causes a decrease in nutrient utilization to the body. Anti-obesity agents that act on the hindbrain structure involved in food intake and / or weight regulation stimulate or inhibit the activity of certain areas of the hindbrain, such as certain nuclei and / or neural circuits. Such hindbrain stimulation or inhibition causes a decrease in nutrient utilization to the body.

또다른 측면에서, 대상체에서의 대사율을 증가시켜서 지방량을 감소시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 대상체의 대사율을 증가시켜서 지방량을 감소시키는데 유효한 양의 항-비만 하이브리드를 투여하는 것을 포함한다. 지방량은 전체 체질량의 백분율(％)로 표현될 수 있다. 일부 측면에서, 지방량은 처치 과정에 걸쳐서 1％ 이상, 5％ 이상, 10％ 이상, 15％ 이상, 20％ 또는 25％ 이상 감소된다. 한 측면에서, 대상체의 제지방량은 처치 과정에 걸쳐서 감소되지 않는다. 또다른 측면에서, 대상체의 제지방량은 처치 과정에 걸쳐서 유지되거나 증가된다. 또다른 측면에서, 대상체는 저열량식 또는 제한식을 한다. "저열량식"은, 동일한 대상체의 통상적인 식사에 비해 해당 대상체의 1일 열량 섭취량이 더 적다는 것을 의미한다. 한 예에서, 대상체는 1일 당 적어도 50 칼로리 더 적은 열량을 소모한다. 다른 예에서, 상기 대상체는 1일 당 적어도 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 또는 1000 칼로리 더 적은 열량을 소모한다.In another aspect, there is provided a method of increasing the metabolic rate in a subject to reduce fat mass, the method comprising administering an amount of an anti-obesity hybrid effective to reduce the fat mass by increasing the metabolic rate of the subject. Fat mass can be expressed as a percentage (%) of total body mass. In some aspects, the amount of fat is reduced by at least 1%, at least 5%, at least 10%, at least 15%, at least 20%, or at least 25% over the course of treatment. In one aspect, the fat mass of the subject is not reduced over the course of treatment. In another aspect, the fat mass of the subject is maintained or increased throughout the treatment procedure. In yet another aspect, the subject is a low calorie or restricted formula. "Low calorie" means that the subject consumes less calories per day than a normal meal of the same subject. In one example, the subject consumes at least 50 calories per day. In another example, the subject consumes at least 100, 150, 200, 250, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, or 1000 calories less per calorie per day.

한 실시양태에서, 대상체에서 지방 분포를 변경하거나, 지방량을 감소시키거나, 또는 이들 2가지 모두를 위한 방법이 제공된다. 따라서, 신체 조성을 변경하는 것이 유익한 대상체에게는 본 발명의 방법이 유익할 수도 있다. 본원에서 의도한 바와 같이, 변경된 신체 조성은 제지방 체중의 손실의 최소화, 유지 또는 증가와 더불어 체지방을 손실하거나 유지하는 것을 포함한다. 이러한 상황에서, 체중은 증가할 수도 있고 또한 감소할 수도 있다. 따라서, 대상체는 마른 체형이거나, 과체중이거나 비만 (이들 용어는 당업계에서 일반적으로 사용되는 바와 같음)일 수 있다. 또한, 본원에서 제공되는 방법은 비-지방 조직에서의 지방 감소 및 제지방량의 이용 감소도 포함할 수 있다. 상기 방법의 용도는 비-알콜성 지방간염 (NASH) 또는 지방이영양증 등과 같은 질환의 치료를 포함한다.In one embodiment, a method is provided for altering fat distribution in a subject, reducing fat mass, or both. Thus, the method of the present invention may be beneficial to an object in which it is beneficial to alter body composition. As contemplated herein, altered body composition includes loss or maintenance of body fat with minimal, maintenance, or increased loss of fat body weight. In this situation, the body weight may increase or decrease. Thus, the subject may be skinny, overweight or obese (these terms are commonly used in the art). In addition, the methods provided herein may also include a reduction in fat in non-adipose tissue and a decrease in the utilization of fat mass. The use of the method includes the treatment of diseases such as non-alcoholic fatty liver disease (NASH) or fat dystrophy.

한 실시양태에서, 대상체에서의 지방 분포 변경 방법이 제공되며, 상기 방법은 대상체에서의 지방 분포 변경 유효량의 항-비만 하이브리드를 투여하는 것을 포함한다. 한 측면에서, 상기 변경은 대상체에서 내장 지방 또는 이소성 지방, 또는 이들 2가지 모두의 대사 증가로 인한다. "지방 분포"는 신체 내 지방 침적물의 위치를 의미한다. 이러한 지방 침적 위치의 예로는 피하, 내장 및 이소성 지방 저장부 등이 있다. "피하 지방"은 피부 표면의 바로 아래쪽의 지질 침적물을 의미한다. 대상체의 피하 지방량은 피하 지방 측정에 이용가능한 임의의 방법을 이용하여 측정할 수 있다. 피하 지방 측정 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 미국 특허 제6,530,886호 (상기 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함됨)에 기재된 것 등이 있다. "이소성 지방 저장물"은 조직 및 기관의 내부 및 그 주위에 존재하며 제지방 체중 (예를 들어 골격근, 심장, 간, 췌장, 신장, 혈관)을 구성하는 지질 침적물을 의미한다. 일반적으로, 이소성 지방 저장은 신체 중 통상의 지방 조직 저장부 이외의 곳에서의 지질 축적이다. "내장 지방"은 복부내 지방 조직으로서의 지방 침적물을 의미한다. 내장 지방은 생명유지 기관을 둘러싸며, 간에 의해 대사되어 혈중 콜레스테롤을 생성할 수 있다. 내장 지방은 다낭 난소 증후군, 대사 증후군 및 심혈관 질환 등과 같은 상태의 위험도 증가와 관련이 있었다. 일부 실시양태에서, 상기 방법은 피하 지방에 비해 내장 또는 이소성 지방 또는 이들 2가지 모두를 적어도 약 5％, 10％, 15％, 20％, 25％, 30％, 40％ 또는 50％ 더 높은 비율로 대사하는 것을 수반한다. 한 측면에서, 상기 방법으로 유리한 지방 분포가 얻어진다. 한 실시양태에서, 유리한 지방 분포는 내장 지방, 이소성 지방, 또는 이들 2가지 모두에 대한 피하 지방의 비율 증가이다. 한 측면에서, 상기 방법은 예를 들어 근육 세포량 증가 등과 같은 제지방 체중 증가를 수반한다.In one embodiment, a method of altering the fat distribution in a subject is provided, the method comprising administering an effective amount of an anti-obesity hybrid in a subject. In one aspect, the alteration is due to increased metabolism of visceral or ectopic fat, or both, in the subject. "Fat distribution" refers to the location of fat deposits in the body. Examples of such fat deposition locations include subcutaneous, visceral and ectopic fat storage sites. "Subcutaneous fat" refers to lipid deposits just below the surface of the skin. Subcutaneous fat mass of a subject can be measured using any method available for subcutaneous fat measurement. Methods for determining subcutaneous fat are known in the art and include, for example, those described in U.S. Patent No. 6,530,886, which is hereby incorporated by reference in its entirety. "Ectopic fat storage" refers to lipid deposits present in and around tissues and organs and constituting a constituent fat body weight (for example, skeletal muscle, heart, liver, pancreas, kidney, blood vessel). Generally, ectopic fat storage is lipid accumulation outside of normal fat tissue storage in the body. "Visceral fat" refers to fat deposits as adipose tissue in the abdomen. Visceral fat surrounds the vital organs and can be metabolized by the liver to produce blood cholesterol. Visceral fat was associated with increased risk of conditions such as polycystic ovary syndrome, metabolic syndrome and cardiovascular disease. In some embodiments, the method further comprises administering to the subject at least about 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40% or 50% . &Lt; / RTI > In one aspect, an advantageous fat distribution is obtained with this method. In one embodiment, the favorable fat distribution is an increase in the ratio of visceral fat, ejaculatory fat, or subcutaneous fat to both. In one aspect, the method is accompanied by an increased fat weight, such as, for example, an increase in muscle cell mass.

또다른 실시양태에서, 대상체의 피하 지방량 감소 방법이 제공되며, 상기 방법은 피하 지방량을 감소시킬 필요가 있는 대상체에게 대상체의 피하 지방량 감소 유효량의 항-비만 하이브리드를 투여하는 것을 포함한다. 한 예에서, 대상체의 피하 지방량이 약 5％ 이상 감소된다. 다른 예에서, 피하 지방량이 대상체에게 항-비만 하이브리드를 투여하기 전과 비교하여 적어도 약 10％, 15％, 20％, 25％, 30％ 40％ 또는 50％ 감소된다. In another embodiment, there is provided a method of reducing subcutaneous fat mass in a subject comprising administering to a subject in need of decreasing subcutaneous fat mass an anti-obesity hybrid of subcutaneous fat-reducing effective amount of the subject. In one example, the subcutaneous fat mass of the subject is reduced by about 5% or more. In another example, the subcutaneous fat mass is reduced by at least about 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, or 50% compared to before administration of the anti-obesity hybrid to the subject.

본원에 기재한 방법은 대상체의 내장 지방량을 감소시키는데 사용될 수 있다. 한 예에서, 대상체의 내장 지방이 약 5％ 이상 감소된다. 다른 예에서, 대상체의 내장 지방이 대상체에게 항-비만 하이브리드를 투여하기 전과 비교하여 적어도 약 10％, 15％, 20％, 25％, 30％ 40％ 또는 50％ 감소된다. 내장 지방은 대상체의 내장 지방량 측정에 이용가능한 임의의 수단을 통해 측정할 수 있다. 이러한 방법의 예로는 CT 스캐닝 및 MRI를 이용한 복부 단층촬영술 등이 있다. 내장 지방을 측정하는 다른 방법은 예를 들어 미국 특허 제6,864,415호, 동 제6,850,797호 및 동 제6,487,445호에 기재되어 있다.The methods described herein can be used to reduce the visceral fat content of a subject. In one example, the visceral fat of the subject is reduced by about 5% or more. In another example, the visceral fat of the subject is reduced by at least about 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, or 50% compared to before administration of the anti-obesity hybrid to the subject. Visceral fat can be measured by any means available for measuring visceral fat mass of a subject. Examples of such methods include CT scanning and abdominal tomography using MRI. Other methods of measuring visceral fat are described, for example, in U.S. Patent Nos. 6,864,415, 6,850,797 and 6,487,445.

한 실시양태에서, 대상체에서 이소성 지방의 축적을 예방하거나 이소성 지방량을 감소시키는 방법이 제공되며, 상기 방법은 이소성 지방의 축적을 예방하거나 이소성 지방량을 감소시킬 필요가 있는 대상체에게 대상체에서의 이소성 지방의 축적 예방 유효량 또는 이소성 지방량 감소 유효량의 항-비만 하이브리드를 투여하는 것을 포함한다. 한 예에서, 대상체의 이소성 지방량이 대상체에게 항-비만 하이브리드를 투여하기 전과 비교하여 적어도 약 5％ 감소된다. 다른 예에서, 대상체의 이소성 지방량이 적어도 약 10％ 또는 적어도 약 15％, 20％, 25％, 30％ 40％ 또는 50％ 감소된다. 별법으로, 이소성 지방량은 대상체의 피하 지방과 비교할 때 비례하여 5％, 10％, 15％, 20％, 25％, 30％, 40％, 50％, 60％, 70％, 80％, 90％ 또는 100％ 감소된다. 대상체의 이소성 지방은 이소성 지방 측정에 이용가능한 임의의 방법을 이용하여 측정할 수 있다. In one embodiment, there is provided a method of preventing the accumulation of ectopic fat in a subject or reducing the ectopic fat content, said method comprising administering to a subject in need of preventing the accumulation of ectopic fat or reducing ectopic fat content, An anti-accumulation protective effective amount or an ectopic fat reduction effective amount of an anti-obesity hybrid. In one example, the ectopic fat mass of the subject is reduced by at least about 5% compared to before administration of the anti-obesity hybrid to the subject. In another example, the ectopic fat mass of the subject is reduced by at least about 10%, or at least about 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, or 50%. Alternatively, the ectopic fat content is proportional to 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% Or 100%. Ectopic fat in a subject can be measured using any method available for ectopic fat measurement.

또다른 실시양태에서, 대상체에서 더 유리한 지방 분포를 달성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 대상체에게 유리한 지방 분포 달성 유효량의, 항-비만제로서 효과적인 하이브리드를 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-비만 하이브리드의 투여는 대상체에서 내장 지방량 또는 이소성 지방량 또는 이들 2가지 모두를 감소시킨다. 한 실시양태에서, 음식물 섭취 또는 체중 조정 또는 이들 2가지 모두에 관여하는 전뇌 구조에 작용하는 1종 이상의 패밀리 모듈을 포함하는 항-비만 하이브리드가 음식물 섭취 또는 체중 조정 또는 이들 2가지 모두에 관여하는 후뇌 구조에 작용하는 1종 이상의 패밀리 모듈과 조합 투여된다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 피하 지방의 감소에 비해 내장 지방량 또는 이소성 지방량 또는 이 둘의 조합을 우선적으로 감소시킨다. 이러한 방법으로 내장 지방 또는 이소성 지방에 대한 피하 지방의 비율이 더 높아진다. 이러한 개선된 비율은 심혈관 질환, 다낭 난소 증후군, 대사 증후군, 또는 이들의 임의의 조합의 발병 위험도를 감소시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 이소성 지방 또는 내장 지방은 피하 지방보다 5％ 더 높은 비율로 대사된다. 다른 실시양태에서, 이소성 지방 또는 내장 지방은 피하 지방보다 적어도 10％ 15％, 20％, 25％, 30％, 50％, 60％, 70％, 80％, 90％ 또는 100％ 더 높은 비율로 대사된다.In another embodiment, there is provided a method of achieving a more favorable fat distribution in a subject, the method comprising administering an effective amount of a hybrid effective as an anti-obesity agent in an amount effective to achieve a fat distribution favorable to the subject. In one embodiment, the administration of an anti-obesity hybrid reduces the visceral fat or ectopic fat mass or both in the subject. In one embodiment, an anti-obesity hybrid comprising one or more family modules acting on the forebrain structure that is involved in food intake or weight adjustment, or both, is administered to the brain for food intake or weight adjustment, or both Lt; RTI ID = 0.0 > family < / RTI > In one embodiment, the method preferentially reduces visceral fat or ejaculatory fat content, or a combination of both, relative to a reduction in subcutaneous fat. In this way, the ratio of subcutaneous fat to visceral fat or ectopic fat is higher. These improved rates can reduce the risk of developing cardiovascular disease, polycystic ovary syndrome, metabolic syndrome, or any combination thereof. In one embodiment, the ectopic or visceral fat is metabolized at a rate 5% higher than the subcutaneous fat. In another embodiment, the ectopic or visceral fat is at least 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% or 100% It is metabolized.

본원에서 논의한 바와 같이 항-비만, 체중 및 지방 조성 관련 처치에 특별한 관심이 있는 것은, 아밀린 (예를 들어 아밀린-sCT-아밀린 키메라), 렙틴 및/또는 PPF (예를 들어 PYY 유사체 또는 PPY/NPY 키메라) 패밀리 모듈을 함유하는 하이브리드이다. 예를 들어, 아밀린 패밀리 모듈은 렙틴 패밀리 모듈에 부착될 수도 있고, 아밀린 패밀리 모듈이 단독으로 투여될 수도 있고, 또는 추가의 실시양태에서는 PPF 패밀리 화합물과 조합 투여 (예를 들어 따로 또는 한데 혼합하여 투여함) 될 수도 있다. 또다른 실시양태에서, 하이브리드는 단독으로 투여되거나 아밀린 패밀리 화합물과 조합 투여되는 렙틴-PPF 조합물을 함유한다. 또다른 실시양태에서, 하이브리드는 단독으로 투여되거나 렙틴 패밀리 화합물과 조합 투여되는 아밀린-PPF 조합물을 함유한다. 추가의 실시양태에서, 하이브리드는 모든 3종의 펩티드 패밀리 모듈을 함유한다. 예를 들어, 아밀린-PPF 하이브리드는 이후에 동결건조되거나 분말화된 렙틴 패밀리 화합물을 이중 챔버 전달 시스템 등에 용해시키는데 사용되는 제약상 허용가능한 멸균 용액으로 제공될 수 있다.Of particular interest in anti-obesity, weight and fat composition-related treatments as discussed herein are amylin (e.g., amylin-sCT-amylin chimeric), leptin and / or PPF PPY / NPY chimera) family module. For example, an amylin family module may be attached to a leptin family module, an amylin family module may be administered alone, or in a further embodiment, in combination with a PPF family compound (e.g., ). &Lt; / RTI > In another embodiment, the hybrid contains a leptin-PPF combination administered alone or in combination with an amylin family compound. In another embodiment, the hybrid contains an amylin-PPF combination administered alone or in combination with a leptin family compound. In a further embodiment, the hybrid contains all three peptide family modules. For example, an amylin-PPF hybrid can be provided in a pharmaceutically acceptable sterile solution which is subsequently used to dissolve lyophilized or powdered leptin family compounds into a dual chamber delivery system or the like.

또다른 측면에서, 글루코코르티코스테로이드와 조합 투여되는, 항-비만제로서 효과적인 치료 유효량의 하이브리드의 투여 방법이 제공된다. 글루코코르티코스테로이드는 지방량 증가 및 제지방량 감소라는 부작용이 있다. 따라서, 항-비만제 조합물은 글루코코르티코스테로이드의 부작용이 상쇄되도록 글루코코르티코스테로이드 사용이 유익한 조건하에 글루코코르티코스테로이드와 함께 사용될 수 있음이 고려된다.In another aspect, there is provided a method of administering a therapeutically effective amount of a hybrid effective as an anti-obesity agent in combination with a glucocorticosteroid. Glucocorticosteroids have the side effect of increasing fat mass and reducing fat mass. It is therefore contemplated that the anti-obesity combination may be used with glucocorticosteroids under beneficial conditions in which the use of glucocorticosteroids is counteracted with the side effects of the glucocorticosteroids.

추가로, 지질 저하와 관련하여, 본 발명의 하이브리드는 트리글리세리드, 총 콜레스테롤, LDL 콜레스테롤 및 VLDL 콜레스테롤 등과 같은 혈중 지질 수준의 저하 처치가 필요한 대상체에서 이러한 혈중 지질 수준을 저하시키고 더 유익한 지질 프로파일을 제공하는데 사용된다. 따라서, 한 실시양태에서, 혈중 트리글리세리드, 총 콜레스테롤, LDL 콜레스테롤, VLDL 콜레스테롤 또는 이들의 임의의 조합을 저하시킬 필요가 있는 대상체에게 지질-저하 하이브리드를 투여하는 것을 포함하는, 혈중 트리글리세리드, 총 콜레스테롤, LDL 콜레스테롤, VLDL 콜레스테롤 또는 이들의 임의의 조합을 저하시키는 방법이 제공된다. 추가의 실시양태에서, 지질-저하 하이브리드는 엑센딘 (인크레틴) 패밀리 성분, 아밀린 패밀리 성분, PPF 또는 PYY (NPY) 패밀리 성분 또는 이들의 임의의 조합물을 함유할 수 있다. 상기 방법의 한 실시양태에서, 저하될 지질은 혈장 트리글리세리드이다. 또다른 실시양태에서, 이것은 총 혈장 콜레스테롤이다. 또다른 실시양태에서, 이것은 LDL 콜레스테롤이다. 또다른 실시양태에서, 이것은 VLDL 콜레스테롤이다. 하이브리드는 공복시 지질 수준을 유지하거나 감소시키고/시키거나 식후 지질 (특히 트리글리세리드) 변동을 감소시키는데 있어서 단기 및/또는 장기적으로 효과적일 수 있다. 이러한 처치가 필요한 환자에서는 트리글리세리드가 상승되거나, LDL 콜레스테롤이 상승되거나, VLDL 콜레스테롤이 상승되거나, 또는 이들의 임의의 조합이 있을 수 있다. 이러한 환자는, 당뇨병 또는 당뇨병전증, 비만, 이상지혈증, 고콜레스테롤혈증 또는 과트리글리세리드혈증 등과 같은 지질 질환 또는 상태, 및/또는 심혈관 질환이 있으며 그외에는 정상인 것으로 여겨질 수 있는 대상을 포함할 수 있다. 하이브리드의 이러한 효과는 심장 및 아테롬성경화성 위험도가 높은 환자, 예를 들어 유전적 소인이 있거나 비만이거나 당뇨병 등인 환자에서 심장 및 아테롬성경화성 위험도를 낮추는데 유익하다. 따라서, 상기 환자는 지질 또는 콜레스테롤 수준이 상승되어 아테롬성경화증으로 고통받고 있는 사람일 수 있다. 본 발명의 방법은 대상체에서 식후 트리글리세리드 변동의 감소, 순환 지질 수준의 감소, 이상지혈증의 치료, 순환 지질 프로파일의 개선, 과트리글리세리드혈증의 치료, 고콜레스테롤혈증의 치료, 및/또는 식후 트리글리세리드 농도의 감소 방법을 제공하며, 유효량의 본 발명의 하이브리드를 이러한 처치가 필요한 대상체에게 투여하는 것을 포함한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "지질 프로파일"은 트리글리세리드 수준, HDL, LDL, 콜레스테롤 등을 비롯한 순환 지질의 균형, 비율 또는 실제 농도를 의미한다. 바람직한 측면에서, 유효량의 아밀린 또는 아밀린 효능제를 투여하는 것을 포함하는 본 발명의 방법은 환자에서 트리글리세리드 수준을 저하시키는데 유용하다. 전반적인 지질 또는 트리글리세리드 수준, 예를 들어 공복시 수준, 식후 최고 수준, 및 전반적인 식후 지질/트리글리세리드 수준 변동 (예를 들어 식후 트리글리세리드 증가의 곡선하면적 (AUC)으로 측정하여 비-아밀린 효능제 처치 상태에서의 증가와 비교함)은 이러한 방법으로 감소될 수 있다. 개개의 임상 관련 측정치, 예를 들어 공복시 지질 수준 (트리글리세리드, 콜레스테롤, HDL 및 LDL 등 포함) 및 식후 지질 (예를 들어 트리글리세리드) 수준도 본 발명의 방법으로 감소된다. 이상지혈증이 있거나 정상치에 비해 지질 수준이 변경된 환자는 아밀린 또는 아밀린 효능제 투여로 치료될 수 있다. 당뇨 및 비만 환자 뿐만이 아니라 이상지혈증 또는 심혈관 질환에 유전적 소인이 있는 환자도 본 발명의 방법에 의한 치료에 특히 적합하다. 본원에서 사용된 바와 같이, "환자에서 상승된 트리글리세리드 수준의 치료"는 처치 이전 수준에 비해 이러한 수준에서의 증가를 예방하거나 이러한 수준에서의 감소를 야기하는 것을 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "식후 트리글리세리드 변동의 감소"는 식후의 환자에서 나타난 트리글리세리드 농도에 대한 곡선에서의 최고 농도 및 전체 곡선하 면적이 둘다 저하된 것을 의미한다. 이는 전형적으로 도 2 내지 도 4에서 식후 시간으로 제공한 것과 같은 그래프에 대한 전체 곡선하면적의 저하를 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 환자에서의 "순환 지질 수준의 감소"는 혈중 지질의 측정가능한 양이 처치 전 수준에 비해 저하됨을 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, "이상지혈증의 치료"는 임상적으로 측정가능한 임의의 또는 모든 정상적이고/이거나 건강한 지질 또는 지단백질 파라미터라고 의학적으로 정의되는 것에 더 근접한 수준, 비율, 프로파일, 또는 균형으로 개선되거나 회복되는 것을 의미한다. 이것은 트리글리세리드, LDL, HDL, IDL, VLDL, 총 콜레스테롤, 아포지단백질의 수준 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에서 사용된 바와 같이, 환자에서의 "순환 지질 프로파일의 개선"은 환자의 전반적인 혈중 지질 함량이 바람직한 상태로 변화되도록 혈액 중 1종 이상의 지질의 농도 변화를 야기하는 것을 의미한다. 이것은 또한 순환 지질의 전반적인 함량/농도에 변화를 주지 않으면서 여러가지 지단백질 분획에 걸쳐 지질 분포를 이동시키는 것을 포함할 수도 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 환자에서의 "과트리글리세리드혈증의 치료"는 1종 이상의 관련 시간에, 예를 들어 공복시 또는 식후에 환자의 혈액 중에서 발견되는 트리글리세리드의 농도 저하를 야기하는 것을 의미한다. 본원에서 사용된 바와 같이, 환자에서의 "식후 순환 트리글리세리드의 감소"는 식후 (예를 들어 식후 약 4시간 내지 6시간의 기간 동안)에 순환계 중 트리글리세리드의 측정가능한 양이 유사한 식사에 대하여 처치 전 또는 미처치 환자에서 식후에 관찰된 이러한 지질의 수준에 비해 저하됨을 의미한다.In addition, with respect to lipid degradation, the hybrids of the present invention reduce such blood lipid levels and provide a more beneficial lipid profile in subjects in need of a blood lipid-lowering treatment such as triglycerides, total cholesterol, LDL cholesterol and VLDL cholesterol Is used. Thus, in one embodiment, there is provided a method of reducing the triglycerides, total cholesterol, LDL cholesterol, total cholesterol, LDL cholesterol, total cholesterol, LDL cholesterol, A method of reducing cholesterol, VLDL cholesterol, or any combination thereof is provided. In a further embodiment, the lipid-lowering hybrid may contain an exendin (incretin) family component, an amylin family component, a PPF or PYY (NPY) family moiety, or any combination thereof. In one embodiment of the method, the lipid to be degraded is plasma triglycerides. In another embodiment, this is total plasma cholesterol. In another embodiment, this is LDL cholesterol. In another embodiment, this is VLDL cholesterol. Hybrids may be effective in short and / or long term in maintaining or reducing fasting lipid levels and / or reducing postprandial lipid (especially triglycerides) fluctuations. In patients in need of such treatment, there may be elevated triglycerides, elevated LDL cholesterol, elevated VLDL cholesterol, or any combination thereof. Such a patient may include a subject who is suffering from a lipid disorder or condition such as diabetes or pre-diabetes, obesity, dyslipidemia, hypercholesterolemia or hypertriglyceridemia, and / or cardiovascular disease and otherwise may be considered normal. This effect of the hybrids is beneficial in lowering cardiovascular and atherosclerotic risk in patients at high risk of heart and atherosclerosis, for example, in patients with genetic predisposition, obesity or diabetes. Thus, the subject may be a person suffering from atherosclerosis with elevated lipid or cholesterol levels. The methods of the present invention are useful for reducing postprandial triglyceride variability in a subject, reducing circulating lipid levels, treating atherosclerosis, improving circulating lipid profile, treating hyperglycemia, treating hypercholesterolemia, and / or reducing postprandial triglyceride levels And comprises administering an effective amount of a hybrid of the invention to a subject in need of such treatment. As used herein, "lipid profile" refers to the balance, ratio, or actual concentration of circulating lipids, including triglyceride levels, HDL, LDL, cholesterol and the like. In a preferred aspect, the methods of the invention comprising administering an effective amount of an amylin or amylin agonist are useful for lowering triglyceride levels in a patient. The overall lipid or triglyceride level, for example, fasting level, post-prandial peak level, and overall postprandial lipid / triglyceride level change (for example, as measured by the curve undercut (AUC) of postprandial triglyceride increase, ) Can be reduced in this way. Individual clinical relevance measures, such as fasting lipid levels (including triglycerides, cholesterol, HDL and LDL, etc.) and postprandial lipid (e.g. triglycerides) levels are also reduced by the method of the present invention. Patients with dyslipidemia or changes in lipid levels compared to normal values can be treated with amylin or amylin agonists. Patients with diabetes and obesity as well as those with genetic predisposition to dyslipidemia or cardiovascular disease are also particularly suitable for treatment by the methods of the present invention. As used herein, "treatment of an elevated triglyceride level in a patient" means preventing an increase at this level relative to a pre-treatment level or causing a decrease at this level. As used herein, "reduction in postprandial triglyceride variability" means that both the peak concentration and the total area under the curve in the curve for the triglyceride concentration in the postprandial patient are both decreased. This typically means a decrease in the overall curve backward for the graph as provided in post-meal times in FIGS. 2-4. As used herein, "reduction in circulating lipid levels" in a patient means that a measurable amount of blood lipid is lowered compared to the pretreatment level. As used herein, "treatment of dyslipidemia" refers to the improvement of a level, ratio, profile, or balance closer to that which is medically defined as any or all normal and / or healthy lipid or lipoprotein parameters clinically measurable. Or recovered. This includes, but is not limited to, triglycerides, LDL, HDL, IDL, VLDL, total cholesterol, levels of apolipoproteins and the like. As used herein, "improvement in circulating lipid profile" in a patient means causing a concentration change of at least one lipid in the blood such that the overall blood lipid content of the patient is changed to a desired state. This may also include shifting the lipid distribution across the various lipoprotein fractions without changing the overall content / concentration of circulating lipids. As used herein, "treatment of hyperglyceridemia" in a patient means to cause a decrease in the concentration of triglycerides found in the blood of the patient at one or more relevant times, for example, fasting or postprandial. As used herein, "reduction of post-megating circulating triglycerides" in a patient means that a measurable amount of triglycerides in the circulatory system after a meal (e.g., for a period of about 4 hours to 6 hours post-meal) Which is lower than the level of lipid observed in the post-meal period in untreated patients.

본 발명의 하이브리드 및 PYY 키메라는 다른 지질-저하 약물과 함께 사용될 수 있다. 지질-저하 약물은 혈장 지질 수준을 감소시킬 수 있는 임의의 화합물을 포함한다. 예시적인 지질-저하 약물로는 스타틴, 예를 들어 아토르바스타틴, 로바스타틴, 프라바스타틴, 심바스타틴, 플루바스타틴, 세리바스타틴 또는 로수바스타틴; 담즙산 결합제, 예를 들어 콜레스티르아민 또는 콜레스티폴; 과산화소체 증식성 활성화 수용체 (PPAR) 효능제, 예를 들어 테사글리타자르, 비타민 E; 콜레스테롤 에스테르 수송 단백질 (CETP) 억제제, 예를 들어 에제티미브, JTT-705 및 토르세트라핍 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.Hybrid and PYY chimeras of the invention can be used with other lipid-lowering drugs. Lipid-lowering drugs include any compound capable of reducing plasma lipid levels. Exemplary lipid-lowering drugs include statins such as atorvastatin, lovastatin, pravastatin, simvastatin, fluvastatin, cerivastatin or rosuvastatin; Bile acid binders such as cholestyramine or cholestipol; Peroxisome proliferator activated receptor (PPAR) agonists such as teseaglitazur, vitamin E; Cholesterol ester transfer protein (CETP) inhibitors such as ezetimibe, JTT-705 and torcetrapib.

본 발명에 유용한 부가적인 검정은 신체 조성에 대한 하이브리드 화합물의 효과를 결정할 수 있는 것을 포함한다. 예시적인 검정은 대사 질환을 위한 식이-유도 비만 (DIO) 마우스 모델의 이용을 수반하는 것일 수 있다. 처치 기간 전에, 수컷 C57BL/6J 마우스에게 4주령에서 시작하여 6주 동안 고지방 사료 (#D12331, 지방으로 인한 열량이 58％임; 리서치 다이어트, 인크.(Research Diets, Inc.))를 공급할 수 있다. 연구 동안, 마우스는 고지방 먹이를 계속 먹을 수 있다. 물은 연구 기간 내내 임의로 제공받을 수 있다. DIO군과 대사 파라미터를 비교하기 위해 유사한 주령의 비-비만 마우스의 군에게는 저지방 사료 (#D12329, 지방으로 인한 열량이 11％임)를 공급할 수 있다.Additional assays useful in the present invention include those capable of determining the effect of a hybrid compound on body composition. Exemplary assays may involve the use of a diet-induced obesity (DIO) mouse model for metabolic disease. Prior to the treatment period, male C57BL / 6J mice can be fed high fat diets (# D12331, 58% fat calories; Research Diets, Inc.) starting at 4 weeks of age for 6 weeks . During the study, the mice can continue to eat high fat food. Water can be provided at random throughout the study period. To compare the DIO group and metabolic parameters, a group of similar week old non-obese mice can be fed a low fat diet (# D12329, 11% calories from fat).

비히클 (물 중 50％ 디메틸술폭시드 (DMSO)) 또는 본 발명의 화합물을 전달하는 피하 (SC) 견갑내(intrascapular) 삼투 펌프를 DIO 마우스에게 이식할 수 있다. 본 발명의 화합물을 전달하기 위한 펌프는 임의의 양, 예를 들어 1000 ㎍/kg/일의 본 발명의 화합물을 7일 내지 28일 동안 전달하도록 설정될 수 있다. Subcutaneous (SC) intrascapular osmotic pumps delivering the vehicle (50% dimethyl sulfoxide (DMSO) in water) or a compound of the invention can be implanted in DIO mice. Pumps for delivering the compounds of the present invention may be set to deliver any amount, for example 1000 μg / kg / day of the compounds of the invention for 7 to 28 days.

체중 및 음식물 섭취는 연구 기간 내내 규칙적인 간격으로 측정할 수 있다. 호흡비 (RQ, CO₂ 생성량 ÷ O₂ 소모량으로 정의됨) 및 대사율은 동물 전신의 간접 열량측정법 (옥시맥스(Oxymax), 콜럼버스 인스트루먼츠(Columbus Instruments), 미국 오하이오주 콜럼버스 소재)을 이용하여 측정할 수 있다. 마우스를 이소플루란 과다투여로 안락사시키고, 비만 지수 (양쪽 부고환 지방 패드 중량)를 측정할 수 있다. 또한, 부고환 중량의 측정 전에, 각 마우스에 대한 신체 조성 (제지방량, 지방량)은 제조업체 (루나 픽시무스(Lunar Piximus), 쥐이 이미징 시스템(GE Imaging System))의 지시에 따라 이중 에너지 X선 흡수계측기(Dual Energy X-ray Absorptiometry, DEXA)를 사용하여 분석할 수 있다. 본 발명의 방법에서, 본 발명의 바람직한 하이브리드 폴리펩티드는 본원에 기재한 검정법 (바람직하게는 음식물 섭취, 위 공복, 췌장 분비, 체중 감소 또는 신체 조성 검정) 중 하나에서 동일 검정에서의 성분 펩티드 호르몬의 효력보다 더 큰 효력을 갖는 것이다.Weight and food intake can be measured at regular intervals throughout the study period. The respiratory rate (defined as RQ, CO ₂ production ÷ O ₂ consumption) and metabolic rate are measured using an indirect calorimetric method (Oxymax, Columbus Instruments, Columbus, Ohio, USA) . Mice can be euthanized by isoflurane overdose and the obesity index (both epididymal fat pad weight) can be measured. In addition, prior to measurement of epididome weights, the body composition (lean body mass, fat mass) for each mouse was measured using a dual energy X-ray absorptometer (Lewis < RTI ID = 0.0 > (Dual Energy X-ray Absorptiometry, DEXA). In the method of the present invention, the preferred hybrid polypeptides of the present invention may be tested for efficacy of component peptide hormones in the same assay at one of the assays described herein (preferably food intake, gastric emptying, pancreas secretion, weight loss or body composition assay) It has a greater effect than that.

고혈압 경감이 필요한 대상체에서 음식물 섭취의 감소, 체중 감소, 또는 비만 치료로 인한 고혈압의 경감 이외에도, 본 발명의 화합물은 저혈압 치료에 사용될 수 있다. In addition to reducing food intake, weight loss, or alleviation of hypertension due to obesity treatment in subjects in need of hypertension relief, the compounds of the present invention may be used in the treatment of hypotension.

본 발명의 화합물은 또한 췌장섬 또는 세포에서 글루코스 반응성의 강화, 유도, 증강 또는 회복에 유용할 수도 있다. 이러한 작용은 대사 장애, 예를 들어 상기 및 미국 특허 출원 제US20040228846호에 기재된 것과 관련된 상태의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다. 이러한 활성을 결정하는 검정은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 공개된 미국 특허 출원 제US20040228846호 (상기 문헌은 그 전문이 참고로 포함됨)에는 섬 단리 및 배양 및 태아 섬 성숙의 결정을 위한 검정법이 기재되어 있다. 특허 출원 US20040228846의 실시예에서는 췌장 폴리펩티드 (PP), 신경펩티드 Y (NPY), 신경펩티드 K (NPK), PYY, 세크레틴, 글루카곤-유사 펩티드-1 (GLP-1) 및 봄베신을 비롯한 장관-유래 호르몬 펩티드를 시그마(Sigma)로부터 구입하였다. 콜라게나제 제XI형은 시그마로부터 입수하였다. RPMI-1640 배양 배지 및 소 태아 혈청은 깁코 (Gibco)로부터 입수하였다. 항-인슐린 항체를 함유하는 방사성면역검정 키트 ([¹²⁵I]-RIA 키트)는 링코(Linco) (세인트 루이스 소재)로부터 구입하였다. The compounds of the present invention may also be useful for enhancing, inducing, enhancing or restoring glucose responsiveness in pancreatic islets or cells. This action may be useful for the treatment or prevention of metabolic disorders, such as those described above and in U. S. Patent Application No. US20040228846. Assays to determine such activity are known in the art. For example, published US Patent Application No. US20040228846, which is incorporated by reference in its entirety, describes assays for isolation and culture and determination of fetal islands maturation. Examples of the patent application US20040228846 disclose a method for the treatment and / or prophylaxis of a pancreatic polypeptide (PP), a neuropeptide Y (NPY), a neuropeptide K (NPK), a PYY, a secretin, a glucagon-like peptide- Peptides were purchased from Sigma. Collagenase Form XI was obtained from Sigma. RPMI-1640 culture medium and fetal bovine serum were obtained from Gibco. Anti-radioactive immunoassay kit containing insulin antibody ^([125 I] -RIA kit) was purchased from Trincomalee (Linco) (St. Louis).

산후 래트 섬을 P-02 연령 래트로부터 얻었다. 성체 래트 섬은 6주령 내지 8주령 래트로부터 얻었다. 태아 래트 섬은 다음과 같이 얻었다. 임신한 암컷 래트를 임신 21일차에 희생시켰다. 태아를 자궁으로부터 꺼내었다. 각각의 태아로부터의 10개 내지 14개 췌장을 절개하여 행크(Hanks) 완충액에서 2회 세척하였다. 췌장을 모아서 6 mL의 1 mg/mL 콜라게나제 (제XI형, 시그마)에 현탁시키고, 일정하게 진탕하면서 37℃에서 8분 내지 10분 동안 인큐베이션하였다. 10배 부피의 빙냉 행크 완충액을 첨가하여 소화를 중지시킨 후 행크 완충액으로 3회 세척하였다. 이어서, 섬을 피콜(Ficoll) 구배로 정제하고, 1 μM IBMX를 첨가하거나 첨가하지 않은 10％ 소 태아 혈청 (FBS)/RPMI 배지에서 배양하였다. 5일의 마지막에, 20개의 섬을 손으로 집어 각 튜브에 넣고, 정적(static) 인슐린 방출에 대해 검정하였다. 일반적으로, 섬을 먼저 KRP 완충액으로 세척한 후에 일정하게 진탕하면서 3 mM (저농도) 글루코스를 함유하는 1 mL의 KRP 완충액으로 30분 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 상등액을 수거한 후, 섬을 17 mM (고농도) 글루코스로 1시간 동안 37℃에서 인큐베이션하였다. 고농도 또는 저농도 글루코스 자극으로 인해 방출된 인슐린을 [¹²⁵I]-RIA 키트를 사용하여 방사성면역검정 (RIA)으로 검정하였다. E21 태아 섬을 200 ng/mL PYY, PP, CCK, NPK, NPY, 세크레틴, GLP-1 또는 봄베신의 존재하에 5일 동안 배양하였다. The postnatal rat islets were obtained from P-02 aged rats. Adult rat islets were obtained from 6 to 8 week old rats. Fetus Rat Island was obtained as follows. The pregnant female rats were sacrificed on the 21st day of pregnancy. The fetus was taken out of the uterus. Ten to 14 pancreas from each fetus were dissected and washed twice in Hanks buffer. The pancreas was collected and suspended in 6 mL of 1 mg / mL collagenase (Type XI, Sigma) and incubated at 37 DEG C for 8-10 minutes with constant shaking. A 10-fold volume of ice cold Hank buffer was added to stop digestion and washed three times with Hank's buffer. The islets were then purified with a Ficoll gradient and cultured in 10% fetal bovine serum (FBS) / RPMI medium with or without 1 [mu] M IBMX. At the end of day 5, 20 islets were picked by hand and placed in each tube and assayed for static insulin release. Generally, the islands were first washed with KRP buffer and then incubated with 1 mL of KRP buffer containing 3 mM (low concentration) glucose for 30 minutes at 37 [deg.] C with constant shaking. After collecting the supernatant, the islets were incubated with 17 mM (high concentration) glucose for 1 hour at 37 ° C. Insulin released due to high or low glucose stimulation was assayed by radioimmunoassay (RIA) using the [ ¹²⁵ I] -RIA kit. E21 fetal islets were cultured for 5 days in the presence of 200 ng / mL PYY, PP, CCK, NPK, NPY, secretin, GLP-1 or bombesin.

또한, 표준 설치류 먹이인 푸리나(Purina) 5008을 공급한 모든 fa/fa 수컷에서 당뇨병을 자발적으로 발생시키는 동계교배 (> F30 세대) 래트 모델인 ZDF (Zucker Diabetic Fatty) 수컷 래트를 사용하여 예시적인 생체내 검정을 제공한다. ZDF fa-fa 수컷에서, 과혈당증이 약 7주령에서 발병하기 시작하고, 글루코스 수준 (fed)은 10 내지 11주령까지 전형적으로 500 mg/DL에 도달하였다. 인슐린 수준 (fed)은 당뇨병 발생 동안 높았다. 그러나, 19주령이 되었을 때에는 인슐린이 거의 마른 대조군 수컷 새끼의 수준으로 떨어졌다. 비만 래트의 트리글리세리드 및 콜레스테롤 수준은 마른 래트보다 통상적으로 더 높다. 검정에서, 3개 군 (1개 군 당 래트 6마리)의 7주령 ZDF 래트에게 ALZA 펌프를 사용하여 14일 동안 각각 1) 비히클 대조물, 2) 100 pmol/kg/시간의 PYY 및 3) 500 pmol/kg/시간의 PYY (즉, 2가지 상이한 투여량)을 주입 처치하였다. 주입전 및 주입후 제7일 및 제14일에 1) 혈장 글루코스 수준, 2) 혈장 인슐린 수준 및 3) 혈장 트리글리세리드 (TG) 수준, 및 경구 글루코스 허용성 (OGTT) 시험치의 4가지 측정치를 얻었다. 따라서, 본 발명의 화합물을 이들 검정에 사용하여 원하는 활성에 대해 시험할 수 있다.In addition, using ZDF (Zucker Diabetic Fatty) male rats, a synchronized (> F30 generation) rat model of spontaneous diabetes mellitus in all fa / fa males that received the standard rodent diet Purina 5008, In vivo assays. In ZDF fa-fa males, hyperglycemia started to develop at about 7 weeks of age, and the glucose level (fed) typically reached 500 mg / DL until 10-11 weeks of age. The insulin level (fed) was high during the onset of diabetes. However, by 19 weeks of age, insulin had dropped to the level of a control male louse. Triglyceride and cholesterol levels in obese rats are typically higher than in dry rats. In the test, seven-week-old ZDF rats in three groups (six rats per group) received 1) vehicle control, 2) 100 pmol / kg / hr of PYY, and 3) 500 pmol / kg / hour of PYY (i.e., two different doses). Four measurements were obtained: 1) plasma glucose level, 2) plasma insulin level, and 3) plasma triglyceride (TG) level and oral glucose tolerance (OGTT) test values on days 7 and 14 after injection and after injection. Thus, the compounds of the invention can be used in these assays to test for the desired activity.

하이브리드 폴리펩티드에 대해 고려되는 다른 용도는 알쯔하이머병의 치료, 예방 또는 개시 지연을 위해 중추 신경계의 알루미늄 (Al) 농도를 감소시키는 방법을 포함한다 (미국 특허 제6,734,166호를 참조하며, 상기 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함됨). Al에 대한 효과를 결정하는 검정은 당업계에 공지되어 있고, 이배체 및 Ts 마우스를 사용한 미국 특허 제6,734,166호에서 찾을 수 있다. 상기 마우스를 개별적으로 날진(Nalgene)^® 브랜드 대사 또는 폴리프로필렌 우리에 넣고, 실험 전에 우리에 적응할 3일의 시간을 주었다. 마우스는 실험 동안 먹이 (랩다이어트(LabDiet)^® NIH 래트 및 마우스/오토(Moust/Auto) 6F5K52, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재) 및 물에 자유롭게 접근할 수 있었고, 단 안락사시키기 전 16시간 동안에는 먹이를 주지 않았다. 마우스에게 매일 활성 화합물 또는 염수를 피하 주사하였다. 한 실험에서는 제13일의 종료시에, 다른 실험에서는 제3일의 종료시에 마우스를 희생시키고, 샘플을 수집하였다. 마우스 뇌 샘플을 깨끗한 테플론 라이너(liner)로 칭량하고, 낮은 미량 원소 등급의 질산 중에서 마이크로파 소화시켜 분석용으로 준비하였다. 이어서, 유도 커플링 플라즈마 질량 분석기(Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry)를 사용하여 샘플을 Al 함량에 대해 분석하였다 [Nuttall et al., Annals of Clinical and Laboratory Science 25, 3, 264-271 (1995)]. 분석 동안 모든 조직은 배경 오염을 최소화하기 위해 HEPA 공기 여과 시스템을 사용하는 클린룸 환경에서 취급하였다. 본 발명의 하이브리드는 고혈압성 및 당뇨성 신장병증, 및 인슐린 내성 및 대사 증후군과 관련된 신장병증 등을 비롯한 신장병증의 예방 및 치료에 유용하다. 하이브리드는 무엇보다도 고혈압, 내피 기능, 신장 기능 및 사구체경화증을 개선시키거나 악화를 예방함으로써 이러한 목적을 달성한다. 한 실시양태에서, 본 발명은 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 고혈압성 및 당뇨성 신장병증 또는 인슐린 내성과 관련된 신장병증 등을 비롯한 신장병증의 예방 또는 치료 방법을 제공한다. 하이브리드는 혈관확장 성능이 감소되거나, 사구체경화증이 있거나, 또는 사구체 유량에 임의의 다른 감소가 있는 환자에서의 내피 기능을 개선시키는데에도 사용된다. 내피 기능에 있어서의 이러한 개선은 고혈압을 줄이고 또한 사구체의 모세혈관 기능도 개선시키는 작용을 한다. 추가의 실시양태에서, 본 발명의 분자는 신장병증이 ESRD로 진행되는 것을 예방하거나, 단백뇨 및/또는 사구체경화증을 예방하거나 이들의 진행을 지연시키거나 치료 또는 경감시키는데 유용하다. 하이브리드는 심장 부정맥에 걸릴 위험도를 감소시키거나, 심장 부정맥을 예방 또는 치료하는데 유용하다. 하이브리드는 심장 허혈, 심장 허혈-재관류, 및 울혈성 심부전 환자에서 항-부정맥 효과를 제공할 수 있다. 예를 들어, GLP-1은 심장 손상을 감소시키고 이들 장애에 걸린 환자의 회복을 향상시키는 것으로 밝혀진 바 있다. GLP-1을 비롯한 인크레틴은 글루코스-의존적 인슐린자극 호르몬이다. GLP-1 및 엑센딘은 위험한 저혈당 유발 없이 말초 글루코스 흡수를 효과적으로 향상시킨다. 이것들은 또한 그의 인슐린자극 작용과는 무관하게 글루카곤 분비를 강력하게 저해하여, 혈장 유리 지방산 (FFA) 수준을 인슐린이 수행할 수 있는 정도보다 실질적으로 더 많이 크게 감소시킨다. 높은 FFA 수준은 심근 허혈 동안의 주요 독성 메카니즘으로서 관련되어 있다. 또다른 실시양태에서, 하이브리드는 재관류 및 허혈과 관련된 손상을 확실하게 감소시키고 환자 회복을 향상시켜서 심장 부정맥을 예방 및 치료하는데 유용하다. 추가의 실시양태에서, 급성 졸중 또는 출혈 후의 하이브리드 처치, 바람직하게는 정맥내 투여는 인슐린 분비를 최적화하고, 뇌 동화작용을 증가시키고, 글루카곤을 저해하고 정상혈당 또는 심각한 저혈당 또는 다른 유해한 부작용의 위험은 없는 경미한 저혈당을 유지하여 인슐린 효과를 향상시키는 수단을 제공한다. 한 실시양태에서, 이러한 하이브리드는 GLP1 또는 엑센딘 일부를 함유한다. 추가의 실시양태에서, 본원에 기재한 바와 같이 GLP1 또는 엑센딘 패밀리 모듈은 CHF를 비롯한 심혈관 상태 또는 질환의 향상된 치료 또는 예방 달성을 위해서 나트륨배설증가 패밀리 펩티드, 아밀린 패밀리 펩티드, 유로코르틴 패밀리 펩티드 모듈과 조합된다.Other applications contemplated for hybrid polypeptides include methods of reducing the central (Al) concentration of the central nervous system to treat, prevent or delay the onset of Alzheimer's disease (see U.S. Patent No. 6,734,166, Incorporated herein by reference). Assays for determining the effect on Al are known in the art and can be found in U.S. Patent No. 6,734,166 using diploids and Ts mice. Put the mouse individually naljin (Nalgene) ^® brand metabolism or polypropylene us, it gave three days of time to adjust to us before the experiment. Mice were free to access food (LabDiet ^® NIH rat and Moust / Auto 6F5K52, St. Louis, Mo.) and water during the experiment, but fed 16 hours prior to euthanasia I did not give. Mice were injected subcutaneously with active compound or saline every day. In one experiment the mice were sacrificed at the end of day 13, in the other experiment at the end of day 3, and samples were collected. Mouse brain samples were weighed in a clean Teflon liner and microwave digested in low trace element grade nitric acid for analysis. The samples were then analyzed for Al content using Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry (Nuttall et al., Annals of Clinical and Laboratory Science 25, 3, 264-271 (1995)). During the analysis, all tissues were treated in a clean room environment using a HEPA air filtration system to minimize background contamination. The hybrids of the present invention are useful for the prevention and treatment of hypertension and diabetic nephropathy, and nephropathy including nephropathy associated with insulin resistance and metabolic syndrome. Hybrids achieve this goal, among other things, by improving hypertension, endothelial function, renal function and glomerulosclerosis or preventing aggravation. In one embodiment, the invention provides a method of preventing or treating nephropathy, including nephropathy associated with hypertensive and diabetic nephropathy or insulin resistance, comprising administering a compound of the invention. Hybrids are also used to improve endothelial function in patients with reduced vasodilation performance, with glomerulosclerosis, or with any other reduction in glomerular flow rate. This improvement in endothelial function serves to reduce hypertension and also to improve the capillary function of the glomeruli. In a further embodiment, the molecules of the invention are useful for preventing nephropathy from progressing to ESRD, for preventing, or delaying, treating or alleviating proteinuria and / or glomerulosclerosis. Hybrids are useful for reducing the risk of heart arrhythmia, or for preventing or treating cardiac arrhythmias. Hybrids can provide anti-arrhythmic effects in patients with cardiac ischemia, cardiac ischemia-reperfusion, and congestive heart failure. For example, GLP-1 has been shown to reduce cardiac damage and improve recovery of patients with these disorders. Incretin, including GLP-1, is a glucose-dependent insulin-stimulating hormone. GLP-1 and exendin effectively enhance peripheral glucose uptake without risking hypoglycemia. They also strongly inhibit glucagon secretion independent of their insulin-stimulating action, reducing plasma free fatty acid (FFA) levels substantially more than insulin can perform. High FFA levels have been implicated as a major toxic mechanism during myocardial ischemia. In another embodiment, the hybrid is useful for preventing and treating cardiac arrhythmias by significantly reducing damage associated with reperfusion and ischemia and improving patient recovery. In a further embodiment, the hybrid treatment, preferably intravenous administration, after acute stroke or bleeding optimizes insulin secretion, increases brain anabolism, inhibits glucagon and increases the risk of normal blood glucose or severe hypoglycemia or other adverse side effects Gt; insulin < / RTI > In one embodiment, such hybrids contain GLP1 or a portion of exendin. In a further embodiment, as described herein, the GLP1 or exendin family module may be administered in combination with an effective amount of a compound selected from the group consisting of a sodium excretion enhancing family peptide, an amylin family peptide, an europrotin family peptide Module.

울혈성 심부전은 선진국에서의 이환률 및 사망률에 가장 유의한 원인 중 하나이다. 이것은 수축력의 손실 및/또는 부피 또는 압력의 과부하를 특징으로 하는 다양한 심혈관 질환에서의 후기 증상으로 발생한다 [Fortuno, Hypertension 38:1406-1412 (2001)]. 수많은 연구들이 심장 리모델링이 CHF의 임상적 진행에 있어서의 주요 결정인자이며 그의 병인과는 관계없음을 제안한 바 있다 [Fedak, Cardiovascular Pathology 14:1-11 (2005)]. 따라서, 심장 리모델링은 울혈성 심부전의 치료에 있어서 매력적인 표적이다. 이와 같이, 심장 리모델링을 예방하거나 감소시키는 기능을 하는 작용제가 요구된다. 사실, 문헌에는 심장 리모델링을 감쇠시킬 수 있는 분자에 대한 필요성이 기재된 바 있다 [Fortuno, Hypertension 38:1406-1412 (2001)]. 문헌의 보고는 심실 리모델링을 감쇠시키는 것도 심근 발작 후의 생존을 개선시키지만, 리모델링을 악화시키는 처치는 수축기 기능을 개선시킨다고 하더라도 더 나쁜 결과와 관련이 있음을 나타낸다 (문헌 [Somasundaram, Med. Clin. N. Am., 88:1193-1207 (2004)] 참조).Congestive heart failure is one of the most important causes of morbidity and mortality in developed countries. This occurs as a late manifestation in various cardiovascular diseases characterized by a loss of contractility and / or an overload of volume or pressure [Fortuno, Hypertension 38: 1406-1412 (2001)]. Numerous studies have suggested that cardiac remodeling is a major determinant in the clinical progression of CHF and is not related to its etiology [Fedak, Cardiovascular Pathology 14: 1-11 (2005)]. Thus, cardiac remodeling is an attractive target for the treatment of congestive heart failure. Thus, agents that prevent or reduce cardiac remodeling are required. In fact, the literature describes the need for molecules that can attenuate heart remodeling [Fortuno, Hypertension 38: 1406-1412 (2001)]. Reports in the literature indicate that attenuation of ventricular remodeling also improves survival after myocardial seizure, but treatment that exacerbates remodeling is associated with worse outcomes, even if it improves systolic function (Somasundaram, Med. Am., 88: 1193-1207 (2004)).

따라서, 본원에서는 심혈관 질환의 치료, 한 실시양태에서는 급성 또는 만성 심부전의 치료, 또다른 실시양태에서는 심근 경색의 치료, 또다른 실시양태에서는 허혈성 심부전의 치료, 및 또다른 실시양태에서는 울혈성 심부전의 치료 방법을 제공한다. 한 실시양태에서, 이러한 치료는 심혈관계에 대한 과혈당-유발된 손상의 예방 또는 경감에 의해 제공된다. 한 실시양태에서, 이러한 치료는 심근보호 효과를 제공함으로써 제공된다. 또다른 실시양태에서, 이러한 치료는 심장 리모델링의 예방, 개시 지연, 감쇠 또는 경감에 의해 달성된다. 일반적으로, 심장 리모델링은 심장의 임의의 심실(cardiac chamber)의 재구조화 및 재형상화를 지칭한다. 한 실시양태에서, 심장 리모델링은 심실(ventricle)의 재구조화 및 재형상화를 지칭한다. 앞서 기재한 바와 같이, 또한 이론에 얽매이려는 것은 아니지만, 심장 리모델링은 심근 발작 후의 게놈 변화로서 이후에는 분자적, 세포적 및 간질적 변화를 수반하며 심실의 재구조화 및 재형상화를 초래한다고 설명될 수 있다. 이러한 재구조화 및 재형상화는, 임상적으로는 심장의 크기, 형상, 및 기능에 있어서의 변화라고 표현될 수 있다. 심장 리모델링은 심근에 대한 임의의 자극 또는 자극의 조합에 대한 반응으로 발생할 수 있다. 한 실시양태에서, 심장 리모델링은 심근 발작의 결과이다. 비-제한적인 예로서, 심장 리모델링은 심근 경색, 고혈압, 부피 과부하 (예를 들어 대동맥 역류로 인함), 감염, 염증, 당뇨병, 바이러스 심근병증, 및 특발성 심근병증으로 인한 심근 발작에 대한 반응으로 발생할 수 있다.Accordingly, the present invention provides a method of treating cardiovascular disease, in one embodiment treating acute or chronic heart failure, in another embodiment treating myocardial infarction, in another embodiment treating ischemic heart failure, and in another embodiment treating congestive heart failure Provide a treatment method. In one embodiment, such treatment is provided by the prevention or alleviation of hyperglycemia-induced damage to cardiovascular. In one embodiment, such treatment is provided by providing a myocardial protective effect. In another embodiment, such treatment is achieved by prevention, delayed onset, attenuation or alleviation of cardiac remodeling. In general, cardiac remodeling refers to restructuring and reshaping of any cardiac chamber of the heart. In one embodiment, cardiac remodeling refers to restructuring and reshaping of the ventricle. As noted above and also without being bound by theory, it can be argued that cardiac remodeling is a genomic change after myocardial stroke, which in turn leads to a restructuring and remodeling of the ventricle with subsequent molecular, cellular and interstitial changes have. Such restructuring and reshaping can be clinically expressed as a change in size, shape, and function of the heart. Cardiac remodeling can occur in response to any stimulus or combination of stimuli to the myocardium. In one embodiment, cardiac remodeling is the result of a myocardial seizure. As a non-limiting example, cardiac remodeling can occur as a response to myocardial infarction due to myocardial infarction, hypertension, volume overload (e.g., due to aortic reflux), infection, inflammation, diabetes, viral cardiomyopathy, and idiopathic cardiomyopathy .

한 측면에서, 심장 리모델링은 본 발명의 하이브리드 투여에 의해 예방되거나 지연되거나 감쇠되거나 또는 경감될 수 있다. 상기 하이브리드는 좌심실의 확장기 기능, E파 대 A파의 비율, 좌심실 말단의 확장기압, 심박출량, 심장 수축력, 좌심실의 질량, 좌심실의 질량 대 체중의 비율, 좌심실 부피, 좌심방 부피, 좌심실 말단의 확장기 치수 또는 수축기 치수, 경색의 크기, 운동 성능, 운동 효율 또는 심장 수축기 및/또는 확장기 기능에 대한 임의의 측정치의 심장 파라미터 중 1종 이상을 경감 (개선)시키는 능력 또는 심실의 비대 또는 상기한 심장 파라미터 중 하나에 대한 해로운 효과를 감쇠시키거나 지연시키거나 예방하는 능력을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 상기 하이브리드는 GLP-1 또는 엑센딘 수용체에 결합하는 인크레틴 패밀리의 구성원, 예를 들어 엑센딘-4를 함유한다. 본 발명의 방법에 있어서, 심장 리모델링의 예방 또는 경감은 심장 리모델링을 임의의 양만큼 감소시키는 것을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 심장 리모델링의 예방 또는 경감은 울혈성 심부전의 위험도 감소로 수행된다.In one aspect, cardiac remodeling can be prevented, delayed, attenuated or alleviated by the hybrid administration of the present invention. The hybrids are classified into three types: the left ventricular diastolic function, the ratio of E wave to A wave, the left ventricular diastolic pressure, cardiac output, cardiac contractility, left ventricular mass, left ventricular mass to weight ratio, left ventricular volume, left ventricular volume, (Improvement) of at least one of the cardiac parameters of any measure of cardiac systolic and / or diastolic function, or the hypertrophy of the ventricle or the cardiac parameters Or delaying or preventing a deleterious effect on one of the < RTI ID = 0.0 > In one embodiment, the hybrid contains a member of the incretin family, such as exendin-4, that binds to GLP-1 or an exendin receptor. In the method of the present invention, prevention or alleviation of cardiac remodeling may include reducing the cardiac remodeling by an amount. In one embodiment, the prevention or alleviation of cardiac remodeling is performed with a reduced risk of congestive heart failure.

한 실시양태에서, 심장 리모델링은 하이브리드를 투여하지 않을 때의 심장 리모델링 양의 약 1％, 2％, 5％, 10％, 20％, 30％, 40％, 50％, 60％, 70％, 80％ 또는 90％ 더 적은 양으로 경감되거나 감소된다. 또다른 실시양태에서, 심장 리모델링은 하이브리드를 투여하지 않을 때의 심장 리모델링 발생과 비교할 때 약간 감소하거나, 중간 정도로 감소하거나, 실질적으로 감소하거나, 또는 실질적으로 제거될 수 있다. 본원에서 사용된 바와 같이, 심장 리모델링의 약간의 감소는 하이브리드를 투여하지 않을 때의 심장 리모델링과 비교할 때 약 25％ 이하 만큼 감소된 심장 리모델링을 지칭한다. 심장 리모델링의 중간 정도의 감소는 하이브리드를 투여하지 않을 때의 심장 리모델링과 비교할 때 약 50％ 이하 만큼 감소된 심장 리모델링을 지칭한다. 심장 리모델링의 실질적인 감소는 하이브리드를 투여하지 않을 때의 심장 리모델링과 비교할 때 약 80％ 이하 만큼 감소된 심장 리모델링을 지칭한다. 심장 리모델링의 실질적인 제거는 하이브리드를 투여하지 않을 때의 심장 리모델링과 비교할 때 약 80％ 이상 감소된 심장 리모델링을 지칭한다.In one embodiment, cardiac remodeling comprises about 1%, 2%, 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 80% or 90% less. In another embodiment, cardiac remodeling can be slightly reduced, moderately reduced, substantially reduced, or substantially eliminated compared to cardiac remodeling occurrence when the hybrid is not administered. As used herein, a slight reduction in cardiac remodeling refers to cardiac remodeling reduced by less than about 25% when compared to cardiac remodeling when the hybrid is not administered. A moderate decrease in cardiac remodeling refers to cardiac remodeling reduced by about 50% or less as compared to cardiac remodeling when no hybrid is administered. A substantial reduction in cardiac remodeling refers to cardiac remodeling reduced by about 80% or less compared to cardiac remodeling when the hybrid is not administered. Substantial elimination of cardiac remodeling refers to cardiac remodeling reduced by about 80% compared to cardiac remodeling when no hybrid is administered.

심장 리모델링이 예방되거나 경감되거나 감쇠되거나 지연되는 정도를 평가하기 위해서, 당업자가 이용할 수 있는 임의의 수단을 사용할 수 있다. 예를 들어, 심장 리모델링은 심장의 조직학적 검사, LV량, 또는 대상체가 살아 있는 동안의 분석 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 분석을 수행하거나, 예를 들어 심장초음파검사로 심실 치수 및 벽 두께 및 운동성을 측정하거나, 또는 E파와 A파의 최고 속도 비율 (E/A 비율)을 이용하여 좌심실 (LV) 확장기 기능을 정량하여 평가할 수 있다.Any means available to those skilled in the art may be used to assess the degree to which heart remodeling is prevented or alleviated, damped or delayed. For example, cardiac remodeling may be performed by performing an analysis including, but not limited to, histological examination of the heart, LV volume, or analysis while the subject is alive, or by, for example, echocardiography, The left ventricular (LV) expander function can be quantified and evaluated by measuring mobility or using the maximum velocity ratio (E / A ratio) of the E wave and A wave.

한 실시양태에서, 하이브리드 투여로 인해 심장 리모델링이 예방되거나 경감되거나 감쇠되거나 지연되어 유익할 대상체는, 그 대상체와 관련이 있는 상태 및 위험 인자의 측면에서 당업자에 의해 확인될 수 있다. 한 실시양태에서, 대상체는 심장 리모델링이 예방되거나 경감되거나 감쇠되거나 지연될 필요가 있을 수 있다. 또다른 실시양태에서, 대상체는 심장 리모델링이 예방되거나 경감되거나 감쇠되거나 지연되는 것을 원할 수 있다. 위험 인자 중 하나는 심장에서 심장 리모델링이 일어나는 것에 대한 유전적 소인일 수 있다. 본원에서 제공되는 본 발명의 방법의 예시적인 샘플 및 대상체는 심장 리모델링과 관련이 있는 상태를 경험한 적이 있거나, 그러한 상태를 경험하고 있거나, 또는 그러한 상태를 경험할 위험이 있는 샘플 및 대상체를 포함한다. 심장 리모델링과 관련이 있는 상태는 심장 리모델링이 발생한다고 공지되어 있거나 그러한 위험이 있다고 여겨지는 임의의 상태 또는 장애일 수 있다. 심장 리모델링과 관련이 있는 상태의 예로는 심근 경색, 염증, 허혈/재관류, 산화 스트레스, 폐성심(肺性心), 최종 당화 산물(advanced glycation endproduct), 비정상적인 심벽 긴장도, 교감성 자극, 심근염, 고혈압, 바이러스 심근병증, 특발성 심근병증, 심장 이식, 및 심장 수술 등이 있다.In one embodiment, a subject that would benefit from preventive or palliative, attenuated or delayed cardiac remodeling due to hybrid administration can be ascertained by those skilled in the art in terms of the conditions and risk factors associated with the subject. In one embodiment, the subject may need to be prevented, alleviated, attenuated or delayed in cardiac remodeling. In another embodiment, the subject may wish to have heart remodeling prevented or alleviated, attenuated or delayed. One of the risk factors may be a genetic predisposition to cardiac remodeling occurring in the heart. Exemplary samples and objects of the methods of the invention provided herein include samples and subjects who have, have experienced, or are at risk of experiencing, or are experiencing, conditions associated with cardiac remodeling. A condition associated with cardiac remodeling may be any condition or disorder that is known to occur or is considered to be at risk for cardiac remodeling. Examples of conditions associated with cardiac remodeling include myocardial infarction, inflammation, ischemia / reperfusion, oxidative stress, pulmonary heart, advanced glycation endproduct, abnormal wall tension, migraine, Viral cardiomyopathy, idiopathic cardiomyopathy, heart transplantation, and cardiac surgery.

앞서 언급한 바와 같이, 상기 하이브리드는 급성 사건 또는 만성 상태의 결과로 투여될 수 있다. 급성 사건이건 만성 상태이건 간에, 본원에서 제공되는 방법은 하이브리드의 장기간 처치를 포함한다. 따라서, 장기 처치 기간의 길이는 해당 사건이 지나간 시간을 포함할 수 있고, 대상체는 급성 사건에서 회복되거나 만성 상태에서 회복된 것으로 간주된다. As noted above, the hybrids may be administered as a result of an acute event or a chronic condition. Whether it is an acute event or a chronic condition, the methods provided herein involve long-term treatment of the hybrid. Thus, the length of the long-term treatment period may include the time that the event has passed, and the object is considered recovered from an acute event or recovered from a chronic condition.

심장 리모델링의 예방, 감쇠, 지연 또는 경감을 위한 하이브리드의 장기간 투여 또는 처치는 심장 리모델링과 관련이 있는 특별한 일시적 사건 또는 일시적 상태가 없다고 확인된 경우에 행해질 수 있다. 장기간 투여는 심장 리모델링에 대한 일반적 소인을 기초로 하거나 또는 일시적이지 않은 상태 (예를 들어 일시적이지 않은 상태는 미확인된 것일 수도 있고, 또는 제거되지 않은 것일 수도 있음. 예를 들어 당뇨병)의 소인을 기초로 하여 연속적이지만 막연한 시간에 걸친 하이브리드 투여를 포함한다. 하이브리드는 본원에 제공된 방법에서 병인과 무관하게 울혈성 심부전을 나타내는 대상체에서의 심장 리모델링 예방을 위해 장기간 투여될 수 있다. 심장 리모델링의 예방 또는 경감을 위한 하이브리드의 장기간 투여는 울혈성 심부전의 위험이 있는 당뇨병과도 관련이 있을 수 있다. 하이브리드는 심장 이식을 받은 개체에서 이식된 기관을 보존하기 위해 장기간 투여될 수도 있다. 하이브리드가 장기간 투여되는 경우, 이러한 투여는 임의의 시간 동안 지속될 수 있다. 그러나, 장기간 투여는 종종 더 오랜 시간 동안 발생한다. 예를 들어 예시적인 실시양태에서, 장기간 투여는 6개월, 1년, 2년 또는 그 이상 지속된다.Prolonged administration or treatment of a hybrid for prevention, attenuation, delay or alleviation of cardiac remodeling can be done if it is determined that there is no particular transient event or transient condition associated with cardiac remodeling. Long-term administration may be based on a general postmark for cardiac remodeling or in a transient state (for example, the transient state may be unidentified or not removed, for example diabetes) , Followed by hybrid administration over a continuous but vague time course. Hybrids may be administered for prolonged periods to prevent heart remodeling in subjects exhibiting congestive heart failure, regardless of etiology, in the methods provided herein. Prolonged administration of hybrids for prevention or relief of cardiac remodeling may also be associated with diabetes at risk for congestive heart failure. Hybrids may be administered for extended periods of time to preserve implanted organs from individuals who have undergone cardiac transplantation. If the hybrid is administered over a prolonged period of time, such administration may last for any time. However, prolonged administration often occurs over a longer period of time. For example, in an exemplary embodiment, the long term administration lasts 6 months, 1 year, 2 years, or longer.

또다른 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은 심장 수축력의 개선을 야기한다. 심장 수축력의 개선은 심장 근세포의 수축력을 포함할 수 있다. 심장 수축력의 개선을 평가하기 위해서, 임의의 평가 방식이 이용될 수 있다. 예를 들어, 심박출량의 증가 또는 심박수의 감소 또는 이들 2가지 모두 등과 같은 임상적 관찰로부터 심장 수축력의 증가가 결정될 수 있다. 별법으로, 생체내에서, 심장의 증가된 수축력은 좌심실의 증가된 구획 단축률(fractional shortening)을 결정하여 평가할 수 있다. 좌심실의 구획 단축률은 심장초음파검사와 같은 임의의 이용가능한 수단으로 관찰될 수 있다. 증가된 심장 수축력을 평가하는데 있어서, 좌심실의 구획 단축률의 증가는 하이브리드 투여 전의 구획 단축률과 비교할 때 임의의 양의 증가일 수 있다. 예를 들어, 단축률에서의 상기 증가는 약 10％, 20％, 30％, 40％, 50％, 60％, 70％, 80％, 90％, 100％, 150％, 200％ 또는 약 200％ 초과일 수 있다.In another embodiment, the methods disclosed herein cause an improvement in cardiac contractility. Improvement of cardiac contractility may include contractile force of cardiac muscle cells. In order to evaluate the improvement of the cardiac contractility, any evaluation method can be used. For example, an increase in cardiac contractility may be determined from clinical observations such as an increase in cardiac output or a decrease in heart rate, or both. Alternatively, in vivo, the increased contractility of the heart can be assessed by determining the increased fractional shortening of the left ventricle. The compartment shortening rate of the left ventricle can be observed by any available means such as echocardiography. In assessing the increased cardiac contractility, the increase in fractional shortening of the left ventricle may be an increase in any amount as compared to the fractional shortening before the hybrid administration. For example, the increase in shrinkage may be about 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 150%, 200% % &Lt; / RTI >

또다른 측면에서, 하이브리드의 투여에 의한 심방 리모델링의 감소 또는 예방 방법이 제공된다. 심방 리모델링의 감소 또는 예방은 하이브리드 투여전의 심방 리모델링과 비교하여 평가될 수 있다. 심방 리모델링에 있어서의 이러한 감소 또는 예방의 치료 효과는 심방 세동에서의 감소를 포함한다. 또다른 측면에서, 하이브리드의 투여에 의한 심실 리모델링의 감소 또는 예방 방법이 제공된다. 심실 리모델링의 감소 또는 예방은 하이브리드 투여전의 심실 리모델링과 비교하여 평가될 수 있다.In another aspect, a method of reducing or preventing atrial remodeling by administration of a hybrid is provided. Reduction or prevention of atrial remodeling can be assessed in comparison to atrial remodeling prior to hybrid administration. The therapeutic effect of this reduction or prevention in atrial remodeling includes a reduction in atrial fibrillation. In yet another aspect, a method of reducing or preventing ventricular remodeling by administration of a hybrid is provided. Reduction or prevention of ventricular remodeling can be assessed relative to ventricular remodeling prior to hybrid administration.

추가의 측면에서, 예방 및 치료 방법이 제공된다. 단기 또는 장기 처치가 고려된다. 또한, 급성 처치는 지시에 따라 장기 처치로 연장될 수 있다. 장기 처치는 2주 초과인 것으로 간주된다. 특정 실시양태에서, 장기 처치는 1개월, 3개월, 6개월, 1년, 2년, 5년 초과일 수도 있고, 삶 전체에 걸쳐서일 수도 있다. 한 측면에서, 심장 리모델링과 관련이 있는 상태의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에서 심장 리모델링과 관련이 있는 상태를 치료 또는 예방하는 방법이 본원에서 제공된다. 일반적으로, 상기 방법은 대상체에게 심장 리모델링의 예방 또는 경감 유효량의 하이브리드를 투여하는 것을 포함하며, 이로 인해 리모델링과 관련이 있는 상태가 개선되거나 예방되거나 또는 지연된다. 본원에 기재한 바와 같이, 하이브리드 투여는 심혈관 이점을 제공하는 다른 작용제와의 조합 투여를 비롯한 임의의 방식으로 수행될 수 있다.In a further aspect, prophylactic and therapeutic methods are provided. Short-term or long-term treatment is considered. In addition, acute treatment can be extended to long-term treatment according to instructions. Long-term treatment is considered to be more than two weeks. In certain embodiments, the long-term treatment may be one month, three months, six months, one year, two years, five years, or throughout life. In one aspect, a method is provided herein for treating or preventing a condition associated with cardiac remodeling in a subject in need of treatment or prevention of a condition associated with cardiac remodeling. In general, the methods comprise administering to the subject a hybrid of an effective amount of preventing or alleviating heart remodeling, thereby improving, preventing or delaying a condition associated with remodeling. As described herein, hybrid administration can be performed in any manner, including in combination with other agents that provide cardiovascular benefits.

또다른 실시양태에서, 본원에서 제공되는 방법은 치료가 필요한 대상체의 식별을 추가로 포함한다. 대상체에게 하이브리드를 투여하는 것이 유익할 수 있는지를 결정하는데에는 임의의 효과적인 기준이 이용될 수 있다. 예를 들어, 심장 질환 및/또는 당뇨병의 진단 방법 및 또한 이러한 상태의 발병 위험이 있는 개체의 식별 절차는 당업자에게 공지되어 있다. 이러한 절차는 임상 시험, 신체 검사, 개인 인터뷰 및 가족력의 평가를 포함할 수 있다.In another embodiment, the methods provided herein further comprise the identification of a subject in need of treatment. Any effective criteria may be used to determine if it may be beneficial to administer the hybrid to the subject. For example, methods of diagnosing heart disease and / or diabetes and also identifying individuals at risk of developing such conditions are known to those skilled in the art. These procedures may include clinical trials, physical examinations, personal interviews, and evaluation of family history.

추가의 실시양태에서, 인슐린 내성을 저하시키거나 인슐린 감수성을 증가시킬 수 있는 하이브리드는 다낭 난소 증후군 (PCOS)의 치료에 유용하다. 본 발명의 하이브리드 투여는 PCOS를 앓고 있는 대상체에서 인슐린 내성을 감소시키거나 예방할 수 있다. 또다른 실시양태에서, 하이브리드는 PCOS를 앓고 있는 대상체에서 제2형 당뇨병의 발병을 예방한다. 추가로, 하이브리드는 PCOS를 앓고 있는 대상체에서 주기적인 월경, 배란, 또는 생식력을 회복시킬 수 있다. 한 실시양태에서, 이러한 하이브리드는 GLP1 수용체의 결합 및 활성화를 위하여 GLP1 또는 엑센딘 일부를 함유한다.In a further embodiment, hybrids that are capable of reducing insulin resistance or increasing insulin sensitivity are useful for the treatment of polycystic ovary syndrome (PCOS). Hybrid administration of the present invention can reduce or prevent insulin resistance in a subject suffering from PCOS. In another embodiment, the hybrid prevents the onset of type 2 diabetes in a subject suffering from PCOS. In addition, hybrids can restore periodic menstruation, ovulation, or fertility in subjects with PCOS. In one embodiment, such hybrids contain GLP1 or a portion of exendin for binding and activation of the GLP1 receptor.

본 발명의 화합물은 넓은 범위의 생물학적 활성을 나타내며, 일부는 항-분비 및 항-이동 특성과 관련이 있다. 화합물은 상피 세포와의 직접적인 상호작용에 의해 또는 아마도 장관 분비를 자극하는 호르몬 또는 신경전달물질의 분비를 억제하여 위장관 분비를 억제할 수 있다. 항-분비 특성은 위 및/또는 췌장 분비의 억제를 포함하고, 위염, 췌장염, 바레트 식도, 및 위식도 역류병 등을 비롯한 질환 및 장애의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.The compounds of the present invention exhibit a broad range of biological activities, some of which are associated with anti-secretory and anti-migratory properties. The compounds may inhibit gastrointestinal secretion by direct interaction with epithelial cells or perhaps by inhibiting the secretion of hormones or neurotransmitters that stimulate intestinal secretion. Anti-secretory properties include inhibition of gastric and / or pancreatic secretion and may be useful in the treatment or prevention of diseases and disorders, including gastritis, pancreatitis, Barrett's esophagus, and gastroesophageal reflux disease.

본 발명의 화합물은 과량의 장관 전해질 및 물 분비 및 흡수 감소와 관련이 있는 임의의 수의 위장관 장애 (예를 들어 문헌 [Harrison's Principles of Internal Medicine, McGraw-Hill Inco, New York, 12th Ed.] 참조), 예를 들어 감염성 설사, 염증성 설사, 짧은 창자 증후군, 또는 외과 수술, 예를 들어 회장조루술 후에 전형적으로 발생하는 설사의 치료에 유용하다. 감염성 설사의 예로는 급성 바이러스성 설사, 급성 세균성 설사 (예를 들어 살모넬라, 캄필로박터(campylobacter), 및 클로스트리듐(clostridium) 또는 원충 감염에 의한 설사), 또는 여행자 설사 (예를 들어 노르워크(Norwalk) 바이러스 또는 로타바이러스) 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 염증성 설사의 예로는 흡수불량 증후군, 열대 스프루, 만성 췌장염, 크론병, 설사, 및 과민성 대장 증후군 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 또한, 본 발명의 펩티드를 예를 들어 수술 후 또는 콜레라에 의한 위장관 장애를 수반하는 응급 또는 치명적 상황의 치료에 사용될 수 있다는 것도 밝혀졌다.The compounds of the present invention may also be used in combination with excess enteric electrolytes and any number of gastrointestinal disorders associated with reduced water uptake and absorption (see, e.g., Harrison's Principles of Internal Medicine, McGraw-Hill Inco, New York, 12th Ed. ), For example, in the treatment of diarrhea typically occurring after infectious diarrhea, inflammatory diarrhea, short bowel syndrome, or surgery, e. Examples of infectious diarrhea include acute viral diarrhea, acute bacterial diarrhea (e.g., salmonella, campylobacter , and clostridium or diarrhea caused by protozoal infection), or traveler's diarrhea (Norwalk) virus or rotavirus), but are not limited thereto. Examples of inflammatory diarrhea include, but are not limited to, malabsorption syndrome, tropical sprue, chronic pancreatitis, Crohn's disease, diarrhea, and irritable bowel syndrome. It has also been found that the peptides of the invention can be used, for example, in the treatment of emergency or critical conditions involving gastrointestinal tract disorders after surgery or by cholera.

또한, 본 발명의 화합물은 단순히 장관 손상과 관련이 있는 증상 (예를 들어 설사)의 치료가 아니라 장관 손상의 치료 또는 예방에도 유용할 수 있다. 이러한 장관 손상은 궤양 대장염, 염증성 장 장애, 장 위축, 장 점막 상실 및/또는 장 점막 기능의 상실일 수도 있고, 또는 그 결과일 수도 있다 (WO 03/105763 참고, 상기 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함됨). WO 03/105763에 기재된 바와 같은 이러한 활성에 대한 검정은 12:12 명:암 주기에 적용되고 표준 설치류 먹이 (테클라드 엘엠 485(Teklad LM 485), 미국 위스콘신주 메디슨 소재) 및 물을 마음대로 먹을 수 있는 250 내지 300 g의 11주령의 수컷 HSD 래트를 포함한다. 상기 동물을 실험전 24시간 동안 굶겼다. 만성 결장염의 간단하고 재현가능한 래트 모델은 문헌 [Morris GP, et al., "Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon." Gastroenterology. 1989; 96:795-803]에 이미 기재된 바 있다. 이 모델은 염증 및 궤양 형성의 비교적 긴 지속 기간을 나타내고, 결장 염증성 질환의 병태생리를 특별하게 제어된 방식으로 연구하고 인간에서 염증성 장 질환에 잠재적으로 적용가능한 새로운 치료법을 평가하는 기회를 제공한다. In addition, the compounds of the present invention may be useful not only for the treatment of symptoms (e.g. diarrhea) that are associated with intestinal injury but also for the treatment or prevention of intestinal injury. Such intestinal injury may or may not be the result of ulcerative colitis, inflammatory bowel disorder, intestinal atrophy, loss of intestinal mucosa and / or intestinal function (see WO 03/105763, which is incorporated herein by reference in its entirety Included as a reference). Assays for this activity as described in WO 03/105763 were applied to a 12:12 cancer cycle and were fed with standard rodent feed (Teklad LM 485, Madison, WI) and water Lt; RTI ID = 0.0 > 300 g < / RTI > of 11 week old male HSD rats. The animals were starved for 24 hours prior to the experiment. A simple and reproducible rat model of chronic colitis is described in Morris GP, et al., "Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon." Gastroenterology. 1989; 96: 795-803. This model represents a relatively long duration of inflammation and ulceration and provides an opportunity to study the pathophysiology of colon inflammatory disease in a specially controlled manner and to evaluate new therapies potentially applicable to inflammatory bowel disease in humans.

3％ 이소플루오란으로 래트를 마취시켜서 37℃로 설정된 조절형 가열 패드에 놓았다. 가바즈 바늘을 직장을 통해 결장 내로 7 cm 삽입하였다. 문헌 [Mazelin, et al., Juton Nerv Syst. 1998; 73:38-45]에 기재된 바와 같이, 50％ 에탄올 (v/v)에 용해된 합텐 트리니트로벤젠술폰산 (TNBS)을 가바즈 바늘을 통해 30 mg/kg의 투여량으로 0.4 내지 0.6 mL의 총 부피로 결장의 내강 내로 전달하였다. 대조군에 염수 용액 (NaCl 0.9％)을 결장내 투여하였다. The rats were anesthetized with 3% isofluorane and placed on an adjustable heating pad set at 37 占 폚. The needle was inserted 7 cm into the colon through the rectum. Mazelin, et al., Juton Nerv Syst. 1998; (TNBS) dissolved in 50% ethanol (v / v) at a dosage of 30 mg / kg via a Gabas needle, as described in the above-mentioned method Into the lumen of the colon. A control group was given a saline solution (0.9% NaCl) in the colon.

대장염을 유발한 지 4일 후에, 마취된 래트에서 결장을 잘라낸 후에 상기 래트는 목을 베어 안락사시켰다. 절제된 결장 및 비장의 중량을 측정하고, 전체적인 형태 손상을 스코어링하기 위해 결장의 사진을 찍었다. 염증은 충혈 및 장벽 비후 영역으로 규정되었다.Four days after colitis induced, the rats were euthanized by neck cutting after the colon was cut in anesthetized rats. The cut colon and spleen were weighed and the colon was photographed to score overall shape damage. Inflammation was defined as hyperemia and wall thickening.

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 또한 췌장 종양을 치료하거나 예방하기 위해 (예를 들어 췌장 종양의 증식을 억제하기 위해) 사용될 수도 있다. 본 발명의 방법은 종양 세포의 증식을 감소시키는 것을 포함한다. 본 발명에 따라 치료할 수 있는 양성 췌장 종양 세포의 유형은 장액 낭선종, 미세낭성 종양 및 충실성 낭성 종양을 포함한다. 본 발명의 방법은 또한 췌장의 관, 선방 또는 섬으로부터 발생하는 암종 등과 같은 악성 췌장 종양 세포의 증식 저하에도 효과적이다. 미국 특허 제5,574,010호 (상기 문헌은 그 전문이 참고로 포함됨)은 항증식 특성의 시험을 위한 예시적인 검정을 제공한다. 예를 들어, '010 특허는 PANC-1 및 MiaPaCa-2가 공급업체, 예를 들어 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection) (ATCC, 미국 메릴랜드주 로크빌 소재)으로부터 구입가능한 2종의 인간 췌장 선암종 암세포주임을 제시한다. 상기한 2종의 종양 세포를 NAPCO 물을 깔아 둔(jacketed) 37℃의 5％ C0₂ 인큐베이터 중에서 10％ 소 태아 혈청, 29.2 mg/L의 글루타민, 25 ㎍ 겐타마이신, 5 mL 페니실린, 스트렙토마이신, 및 펀지존(fungizone) 용액 (제이알에이치 바이오사이언시스(JRH Biosciences), 미국 캔자스주 레넥사 소재)으로 보충된 RPMI-1640 배양 배지에서 성장시켰다. 모든 세포주를 종양 세포의 전면성장 단층이 얻어질 때 매주 1회 내지 2회 0.25％ 트립신 (클론틱스(Clonetics), 미국 캘리포니아주 샌 디에고 소재)으로 떼어냈다. 세포를 4℃의 냉장 원심분리기에서 7분 동안 500 g로 펠렛화시키고, 트립신-무함유 강화 RPMI-1640 배양 배지에 재현탁시켰다. 트리판 블루를 사용하여 생존 세포를 혈구계 슬라이드에서 계수하였다.The hybrid polypeptides of the present invention may also be used to treat or prevent pancreatic tumors (e. G., To inhibit proliferation of pancreatic tumors). The methods of the invention include reducing proliferation of tumor cells. Types of benign pancreatic tumor cells that can be treated according to the present invention include serous cystadenoma, microcystic tumor, and follicular cystic tumor. The method of the present invention is also effective in reducing the proliferation of malignant pancreatic tumor cells such as ducts of the pancreas, oocytes, or carcinomas arising from the islets. U.S. Patent No. 5,574,010, which is incorporated herein by reference, provides an exemplary assay for testing the anti-proliferative properties. For example, the '010 patents disclose two types of human pancreas available from PANC-1 and MiaPaCa-2 suppliers, such as the American Type Culture Collection (ATCC, Rockville, Md. Adenocarcinoma Cancer cell leader is suggested. The two tumor cells were cultured in NAPCO water jacketed 5% CO ₂ incubator at 37 ° C in the presence of 10% fetal bovine serum, 29.2 mg / L glutamine, 25 ug gentamycin, 5 mL penicillin, streptomycin, And grown in RPMI-1640 culture medium supplemented with fungizone solution (JRH Biosciences, Lenexa, Kans.). All cell lines were detached once or twice weekly with 0.25% trypsin (Clonetics, San Diego, CA) when the tumor growth frontal layer was obtained. Cells were pelleted at 500 g in a refrigerated centrifuge at 4 캜 for 7 minutes and resuspended in trypsin-free enriched RPMI-1640 culture medium. Survival cells were counted on hemocyte slides using trypan blue.

각 유형의 10,000, 20,000, 40,000 및 80,000개 세포를 웰 1개 당 총 부피 200 ㎕의 배양 배지의 96웰 미세배양 플레이트 (코스타(Costar), 미국 매사추세츠주 캠브리지 소재)에 첨가하였다. PYY 또는 시험 펩티드의 첨가 전 24시간 동안 세포가 부착되도록 하였다. 펩티드 첨가 전에 신선한 배양 배지로 교체하였다. PYY 또는 시험 화합물과 함께 췌장 종양 세포의 시험관내 인큐베이션을 6시간 및 36시간 동안 계속하였다. PYY를 웰당 250 pmol, 25 pmol 및 2.5 pmol의 투여량으로 세포에 첨가하였다 (N = 14). 시험 화합물은 웰당 400 pmol, 40 pmol 및 4 pmol의 투여량으로 세포 배양액에 첨가하였다. 대조군 웰에는, 부착된 종양 세포에 대한 부피 및 물리적 침해를 모방하기 위해 2 ㎕의 0.9％ 염수를 첨가하였다. 각각의 96웰 플레이트는 실험 동안 각 플레이트 내에 18개의 비교용 대조 웰을 함유하였다. PANC-1 및 MiaPaCa-2 세포 모두에서 PYY 및 시험 화합물의 농도를 변화시키면서 96웰 플레이트를 6회 반복하였다. 10,000, 20,000, 40,000 and 80,000 cells of each type were added to a 96 well microplate culture plate (Costar, Cambridge, Mass., USA) in a total volume of 200 μl of culture medium per well. Cells were allowed to attach for 24 hours before addition of PYY or test peptide. And replaced with fresh culture medium prior to peptide addition. In vitro incubation of pancreatic tumor cells with PYY or test compound was continued for 6 hours and 36 hours. PYY was added to the cells at a dose of 250 pmol, 25 pmol and 2.5 pmol per well (N = 14). The test compound was added to the cell culture at a dose of 400 pmol, 40 pmol and 4 pmol per well. Control wells were supplemented with 2 [mu] l of 0.9% saline to mimic the volume and physical invasion of adherent tumor cells. Each 96-well plate contained 18 comparative control wells in each plate during the experiment. 96-well plates were repeated 6 times with varying concentrations of PYY and test compound in both PANC-1 and MiaPaCa-2 cells.

인큐베이션 기간 종료시에, 3-(4,5-디메틸티아졸릴-2-일)-2,5-디페닐테트라졸륨 브로마이드, MTr 테트라졸륨 브로마이드 (시그마, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)를 신선한 배양 배지에 0.5 mg/mL로 첨가하였다. 배양 배지를 교체하고, 종양 세포를 4시간 동안 MTT 테트라졸륨 브로마이드와 함게 37℃에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 종료시에는 배양 배지를 흡인하였다. 포르마존 결정 침전물을 200 ㎕의 디메틸 술폭시드 (시그마, 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)에 용해시켰다. 가용화된 포르마존의 정량화는, ELISA 판독기 (몰레큘라 디바이시즈(Molecular Devices), 미국 캘리포니아주 멘로 파크 소재) 상에서 500 nm 파장에서의 흡수 판독치를 얻어 수행하였다. MTT 검정은 미토콘드리아 NADH 의존성 데히드로게나제 활성을 측정하는데, 이것은 종양 세포의 정량적 시험관내 화학요법 반응에 대한 가장 민감하고 신뢰성있는 방법 중 하나이다 ([Alley, M. C., et al., Cancer Res., 48:589-601, 1988], [Carmichael, J., et al., Cancer Res., 47:936-942, 1987], [McHale, A. P., et al., Cancer Lett., 41:315-321, 1988] 및 [Saxton, R. E., et al., J. Clin. Laser Med. and Surg, 10(5):331-336, 1992]). 550 nm에서의 흡수 판독치의 분석은 동일한 시험 조건의 웰을 군별로 나누고 1원 ANOVA에 의해 대조군과 다양한 펩티드 농도 처치 사이에 발생하는 차이를 입증하여 분석하였다.At the end of the incubation period, 3- (4,5-dimethylthiazolyl-2-yl) -2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTr tetrazolium bromide (Sigma, St. Louis, Missouri, USA) 0.5 mg / mL. The culture medium was changed, and the tumor cells were incubated at 37 ° C with MTT tetrazolium bromide for 4 hours. At the end of the incubation, the culture medium was aspirated. The formazon crystal precipitate was dissolved in 200 [mu] l of dimethylsulfoxide (Sigma, St. Louis, Mo.). Quantification of solubilized formalin was performed by obtaining an absorbance reading at 500 nm wavelength on an ELISA reader (Molecular Devices, Menlo Park, CA). The MTT assay measures mitochondrial NADH-dependent dehydrogenase activity, which is one of the most sensitive and reliable methods for quantitative in vitro chemotherapeutic response of tumor cells (Alley, MC, et al., Cancer Res., 48 Cancer Res., 47: 936-942, 1987; McHale, AP, et al., Cancer Lett., 41: 315-321, 1988; and Saxton, RE, et al., J. Clin. Laser Med. And Surg., 10 (5): 331-336, 1992). Analysis of the absorbance readings at 550 nm was performed by dividing the wells of the same test conditions into groups and proving the differences arising between the control group and various peptide concentration treatments by one-way ANOVA.

예시적인 생체내 검정을 또한 제공한다. 인간 췌장관 선암종 Mia Paca-2를 펩티드 YY 및 시험 화합물에 의한 생체내 성장 억제에 대해 조사하였다. 70,000 내지 100,000개의 인간 Mia PaCa-2 세포를 48마리의 무흉선 수컷 마우스에게 동소(orthotopically) 이식하였다. 1주 후, 동물들에게 PYY 또는 시험 화합물을 200 pmol/kg/시간으로 미니-삼투 펌프를 통해 4주 동안 처치하였다. 짝을 이루는 배양물에는 염수를 투여하였다. 마우스를 희생시켜 종양 크기와 질량을 둘다 측정하였다. 대조군 마우스에서는 조직 절편으로 입증되는 바와 같이 췌장 내에 유의한 인간 암 성장이 있었다. 9주에, 대조군 마우스 중 90％에서는 실질적인 전이 질환이 있었다. 종양 질량은 시험 화합물 처치된 마우스에서는 60.5％ 감소하였고 PYY 처치된 마우스에서는 27％ 감소하였다.An exemplary in vivo assay is also provided. The human pancreatic duct adenocarcinoma Mia Paca-2 was investigated for inhibition of in vivo growth by peptide YY and test compounds. 70,000 to 100,000 human Mia PaCa-2 cells were orthotopically implanted in 48 athymic male mice. One week later, animals were treated with PYY or test compound at 200 pmol / kg / hr for 4 weeks via mini-osmotic pump. The mating cultures were administered with saline. Mice were sacrificed to measure both tumor size and mass. In control mice there was significant human cancer growth within the pancreas as evidenced by tissue sections. At 9 weeks, 90% of the control mice had substantial metastatic disease. Tumor mass was reduced by 60.5% in the test compound treated mice and by 27% in the PYY treated mice.

하이브리드는 또한 파킨슨병, 알쯔하이머병, 헌팅톤병, ALS, 졸중, ADD 및 신경정신적 증후군 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는, 신경 손실 또는 기능부전과 관련된 신경학적 장애 및 신경계 장애를 치유적 및 예방적으로 치료하고 포유동물에서의 학습력, 기억력 및 인지력을 향상시키거나 용이하게 하는데에도 유용하다. 이와 관련하여 특히 유용한 것은, 엑센딘 또는 GLP1 활성 부분, 더욱 구체적으로는 적어도 N-말단 7개 내지 15개 아미노산을 포함하는 부분 또는 그의 유사체, 예를 들어 HSEGTFTSD (서열 378)을 함유하는 하이브리드이다.Hybrids also include neurological and neurological disorders associated with nerve loss or dysfunction, including but not limited to Parkinson's disease, Alzheimer's disease, Huntington's disease, ALS, stroke, ADD and neuropsychiatric syndrome, And to improve or facilitate learning, memory and cognition in mammals. Particularly useful in this regard are hybrids containing a portion of an exendin or GLP1 active moiety, more particularly a moiety comprising at least 7 to 15 amino acids at the N-terminus, or an analogue thereof, such as HSEGTFTSD (SEQ ID NO: 378).

모든 징후에 대해, 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 단일 또는 분할 투여 또는 조절된 연속 방출로 약 0.5 ㎍ 내지 약 5 mg/일의 투여량으로, 1회 투여 당 약 0.01 ㎍/kg 내지 약 500 ㎍/kg, 더욱 바람직하게는 약 0.05 ㎍/kg 내지 약 250 ㎍/kg, 가장 바람직하게는 약 50 ㎍/kg 미만으로 말초 투여된다. 이러한 범위의 투여량은 물론 각각의 유사체 또는 유도체의 효력에 따라 달라질 것이고, 당업자에 의해 결정될 수 있다. For all indications, in a preferred embodiment, the hybrid polypeptides of the invention are administered at a dose of about 0.5 [mu] g to about 5 mg / day in single or divided doses or controlled sequential release, at a dose of from about 0.01 [ About 500 μg / kg, more preferably about 0.05 μg / kg to about 250 μg / kg, most preferably less than about 50 μg / kg. The dosage in this range will, of course, vary with the potency of each analog or derivative and can be determined by one skilled in the art.

본 발명의 방법에서, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 영양분 이용률을 감소시키는 장기 또는 단기 작용을 나타내는, 아밀린 또는 아밀린 유사체 효능제, 연어 칼시토닌, 콜레시스토키닌 (CCK) 또는 CCK 효능제, 렙틴 (OB 단백질) 또는 렙틴 효능제, 엑센딘 또는 엑센딘 유사체 효능제, 또는 GLP-1 또는 GLP-1 유사체 효능제를 포함하는 다른 화합물 및 조성물을 포함하지만 이로 제한되지 않는 1종 이상의 다른 화합물 및 조성물과 따로 또는 조합 투여될 수 있다. 적합한 아밀린 효능제는 예를 들어 [^25,28,29Pro-] 인간 아밀린 (서열 67) ("프람린타이드"로도 알려져 있고, 미국 특허 제5,686,511호 및 동 제5,998,367호에 기재되어 있음)을 포함한다. 사용된 CCK는 바람직하게는 CCK 옥타펩티드 (CCK-8), 더욱 바람직하게는 그의 황산화 형태이다. 렙틴은 예를 들어 문헌 ([Pelleymounter et al., Science 269:540-3 (1995)], [Halaas et al., Science 269:543-6 (1995)], [Campfield et al., Science 269:546-9 (1995)])에 논의되어 있다. 적합한 엑센딘은 엑센딘-3 및 엑센딘-4를 포함하고, 엑센딘 효능제 화합물은 예를 들어 PCT 공개 WO 99/07404, WO 99/25727 및 WO 99/25728에 기재된 것을 포함한다.In the method of the present invention, the hybrid polypeptides of the present invention are useful as amylin or amylin analogue agonists, salmon calcitonin, cholecystokinin (CCK) or CCK agonists, leptin (OB protein) Or other compounds and compositions including, but not limited to, leptin agonists, exendin or exendin analog agonists, or other compounds and compositions including GLP-1 or GLP-1 analog agonists, &Lt; / RTI > Suitable amylin agonists include, for example, [ ^25,28,29 Pro-] human amylin (SEQ ID NO: 67) (also known as "pramlintide", described in US Pat. Nos. 5,686,511 and 5,998,367) . The CCK used is preferably CCK octapeptide (CCK-8), more preferably its sulfated form. Leptin has been described for example in Pelleymounter et al., Science 269: 540-3 (1995), Halaas et al., Science 269: 543-6 (1995), Campfield et al., Science 269: 546-9 (1995)). Suitable exendins include exendin-3 and exendin-4, and exendin agonist compounds include those described, for example, in PCT publications WO 99/07404, WO 99/25727 and WO 99/25728.

본원에서 논의한 바와 같이, 본 발명의 하이브리드는 1종 이상의 다른 작용제와 따로 또는 조합 투여되어 추가의 이점을 얻거나 하이브리드 또는 다른 작용제의 효과를 향상시킬 수 있다. 예를 들어, 항-비만 하이브리드는 치료 및 원하는 치료 결과가 필요한 대상체에게 관련 위험 인자에 따라 항-비만제 또는 심근보호제 또는 항-고혈압제와 조합 투여할 수 있다. 하이브리드와 조합 투여 (따로 또는 혼합해서, 하이브리드의 투여 전, 하이브리드의 투여와 동시에 또는 하이브리드의 투여 이후)하기 위한 예시적인 항-비만제로는 파록세틴, 플루옥세틴, 펜플루라민, 플루복스아민, 세르트랄린, 및 이미프라민 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 세로토닌 (5HT) 수송 억제제 등이 있다. 항-비만제는 또한 덱스펜플루라민, 플루옥세틴, 시부트라민 (예를 들어 메리디아(MERIDIA)^®) 및 미국 특허 제6,365,633호 및 PCT 특허 출원 공개 제WO 01/27060호 및 동 제WO 01/162341호에 기재된 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는 선택적인 세로토닌 재흡수 억제제도 포함한다 (상기 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함됨). 이러한 5HT 수송 억제제 및 세로토닌 재흡수 억제제, 유사체, 유도체, 약제, 제제, 제약 조성물, 투여량 및 투여 경로는 이미 기재된 바 있다.As discussed herein, hybrids of the invention may be administered separately or in combination with one or more other agents to achieve additional benefits or to enhance the effectiveness of the hybrid or other agent. For example, an anti-obesity hybrid can be administered in combination with an anti-obesity agent or a cardioprotective agent or an anti-hypertensive agent, depending on the risk factors involved in the treatment and the subject in need of the desired therapeutic result. Exemplary anti-obesity agents for combination administration with hybrids (either separately or in combination, prior to administration of the hybrid, concurrent with administration of the hybrid, or after administration of the hybrid) include paroxetine, fluoxetine, fenfluramine, fluvoxamine, sertraline, Serotonin (5HT) transport inhibitors including but not limited to imipramine and the like. Anti-obesity agents are also Dex penpeulruramin, fluoxetine, sibutramine (e.g. Meridia (MERIDIA) ^®), and United States Patent No. 6,365,633 and PCT Patent Application Publication No. WO 01/27060 described the call and copper. WO 01/162341 No. But are not limited to, selective serotonin reuptake inhibitors, which are hereby incorporated by reference in their entirety. Such 5HT transport inhibitors and serotonin reuptake inhibitors, analogs, derivatives, agents, agents, pharmaceutical compositions, dosages and routes of administration have already been described.

항-비만제는 또한 선택적인 세로토닌 효능제, 및 미국 특허 제3,914,250호 및 PCT 출원 공개 제WO 02/36596호, 동 제WO 02/48124호, 동 제WO 02/10169호, 동 제WO 01/66548호, 동 제WO 02/44152호, 동 제WO 02/51844호, 동 제WO 02/40456호 및 동 제WO 02/40457호 (이들 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함됨) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 문헌에 기재된 바와 같은 선택적인 5-HT2C 수용체 효능제도 포함한다. 본원에서 제공되는 방법에 사용하기에 적절한 이러한 선택적인 세로토닌 효능제 및 5-HT2C 수용체 효능제, 이러한 효능제를 함유하는 조성물, 및 투여 경로는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어 문헌 ([Halford et al. (2005) Curr. Drug Targets 6:201-213] 및 [Weintraub et al. (1984) Arch. Intern. Med. 144:1143-1148])을 참조한다.Anti-obesity agents may also be used as selective serotonin agonists, as well as those disclosed in U.S. Patent No. 3,914,250 and PCT Application Publication Nos. WO 02/36596, WO 02/48124, WO 02/10169, , WO 02/44152, WO 02/51844, WO 02/40456 and WO 02/40457, the disclosures of which are incorporated herein by reference in their entirety. But not limited to, selective 5-HT2C receptor efficacy as described in the literature. Such selective serotonin agonists and 5-HT2C receptor agonists, compositions containing such agonists, and administration routes suitable for use in the methods provided herein are well known in the art. See, for example, Halford et al. (2005) Curr. Drug Targets 6: 201-213 and Weintraub et al. (1984) Arch. Intern. Med. 144: 1143-1148).

항-비만제는 또한 리모나반트 (사노피 신텔라보(Sanofi Synthelabo)) 및 SR-147778 (사노피 신텔라보) 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 중추 칸나비노이드 수용체 (CB-1 수용체)의 길항제/역 효능제도 포함한다. CB-1 길항제/역 효능제, 유도체, 약제, 제제, 제약 조성물, 투여량 및 투여 경로는 예를 들어 미국 특허 제6,344,474호, 동 제6,028,084호, 동 제5,747,524호, 동 제5,596,106호, 동 제5,532,237호, 동 제4,973,587호, 동 제5,013,837호, 동 제5,081,122호, 동 제5,112,820호, 동 제5,292,736호, 동 제5,624,941호, 유럽 특허 출원 제EP-656 354호 및 동 제EP-658546호, 및 PCT 출원 공개 제WO 96/33159호, 동 제WO 98/33765호, 동 제WO 98/43636호, 동 제WO 98/43635호, 동 제WO 01/09120호, 동 제WO 98/31227호, 동 제WO 98/41519호, 동 제WO 98/37061호, 동 제WO 00/10967호, 동 제WO 00/10968호, 동 제WO 97/29079,호, 동 제WO 99/02499호, 동 제WO 01/58869호 및 동 제WO 02/076949호 (상기 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함됨) 등에 이미 기재된 바 있다.Anti-obesity agents may also be used as antagonists / inverse potency regimens of the central cannabinoid receptor (CB-1 receptor) including, but not limited to, rimonabant (Sanofi Synthelabo) and SR-147778 . The CB-1 antagonist / inverse agonist, derivative, drug, agent, pharmaceutical composition, dosage and route of administration are described, for example, in U.S. Patent Nos. 6,344,474, 6,028,084, 5,747,524, 5,596,106, 5,532,237, 4,973,587, 5,013,837, 5,081,122, 5,112,820, 5,292,736, 5,624,941, European Patent Applications EP-656 354 and EP-658546, And PCT Application Publication Nos. WO 96/33159, WO 98/33765, WO 98/43636, WO 98/43635, WO 01/09120, WO 98/31227 , WO 98/41519, WO 98/37061, WO 00/10967, WO 00/10968, WO 97/29079, WO 99/02499, WO 01/58869 and WO 02/076949, the disclosures of which are hereby incorporated by reference in their entirety.

항-비만제는 또한 멜라노코르틴 및 멜라노코르틴 효능제도 포함한다. 수용체 MC4R은 에너지 균형 및 비만에 있어서 소정의 역할을 수행한다고 여겨진다. 예를 들어 문헌 ([Anderson et al., Expert Opin. Ther. Patents 11:1583-1592 (2001)], [Speake et al,. Expert Opin. Ther. Patents 12:1631-1638 (2002)], [Bednarek et al., Expert Opin. Ther. Patents 14:327-336 (2004)])을 참조한다. MC4R 효능제 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 멜라노코르틴 효능제, 및 본원에서 제공되는 방법에 사용하기에 적절한 이러한 효능제를 함유하는 조성물은 당업계에 공지되어 있다. MCR 효능제, MC4R 효능제, 유도체, 약제, 제제, 제약 조성물, 투여량 및 투여 경로는 예를 들어 하기하는 PCT 특허 출원서에 이미 기재된 바 있고, 이들 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다: WO 03/007949, WO 02/068388, WO 02/068387, WO 02/067869, WO 03/040117, WO 03/066587, WO 03/068738, WO 03/094918 및 WO 03/031410.Anti-obesity agents also include melanocortin and melanocortin potency regimens. The receptor MC4R is believed to play a role in energy balance and obesity. Patents 11: 1583-1592 (2001), Speake et al., Expert Opin. Ther. Patents 12: 1631-1638 (2002), " Bednarek et al., Expert Opin. Ther. Patents 14: 327-336 (2004)). Compositions containing melanocortin agonists including, but not limited to, MC4R agonists and the like, and agonists suitable for use in the methods provided herein are known in the art. MCR agonists, MC4R agonists, derivatives, drugs, agents, pharmaceutical compositions, dosages and routes of administration have already been described, for example, in the following PCT patent applications, the disclosures of which are incorporated herein by reference: WO 03/007949, WO 02/068388, WO 02/068387, WO 02/067869, WO 03/040117, WO 03/066587, WO 03/068738, WO 03/094918 and WO 03/031410.

항-비만제는 또한 2-메틸-6-(페닐에티닐)-피리딘 (MPEP) 및 (3-[(2-메틸-1,3-티아졸-4-일)에티닐]피리딘) (MTEP) 등의 화합물 및 문헌 ([Anderson et al. J. Eur. J. Pharmacol. 473:35-40 (2003)], [Cosford et al. Bioorg. Med. Chem. Lett. 13(3):351-4 (2003)] 및 [Anderson et al. J. Pharmacol. Exp. Ther. 303:1044-1051 (2002)])에 기재된 화합물 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 대사자극성(metabotropic) 글루타메이트 서브유형 5 수용체 (mGluR5) 길항제도 포함한다.The anti-obesity agent may also be a derivative of 2-methyl-6- (phenylethynyl) -pyridine (MPEP) and (3- [(2-methyl-1,3-thiazol- Chem. Lett. 13 (3): < RTI ID = 0.0 > 351- Metabotropic glutamate subtype 5 receptor, including, but not limited to, the compounds described in U. S. Patent No. 4 (2003) and Anderson et al. J. Pharmacol. Exp. Ther. 303: 1044-1051 (mGluR5) antagonist.

항-비만제는 또한 항-경련제로 알려져 있으나 체중 감소를 증가시키는 것으로 나타난 토피라메이트 (토피맥스(TOPIMAX)^® (오르토 맥네일 파마슈티칼스(Ortho McNeil Pharmaceuticals))도 포함한다. 상기 작용제는 오를리스타트와 같은 리파제 억제제도 포함할 수 있다.Anti-obesity agents are also anti-be, but is known as anticonvulsants include topira shown to increase weight loss formate (toffee Max (TOPIMAX) ^® (ortho McNeill Pharma Bucharest Carlsbad (Ortho McNeil Pharmaceuticals)) said agent is orlistat , &Lt; / RTI > and the like.

항-비만제는 또한 신경펩티드 Y1 (NPY1) 길항제 및 NPY5 길항제도 포함한다. NPY1 및 NPY5 길항제는 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어 문헌 [Duhault et al. (2000) Can. J Physiol. Pharm. 78:173-185] 및 미국 특허 제6,124,331호, 동 제6,214,853호 및 동 제6,340,683호를 참조한다. NPY1 및 NPY5 길항제, 유도체, 약제, 제제, 제약 조성물, 투여량 및 투여 경로는 이미 기재된 바 있다. 본원에서 제공되는 조성물 및 방법에 유용한 NPY1 길항제는 미국 특허 제6,001,836호, 및 PCT 출원 공개 제WO 96/14307호, 동 제WO 01/23387호, 동 제WO 99/51600호, 동 제WO 01/85690호, 동 제WO 01/85098호, 동 제WO 01/85173호 및 동 제WO 01/89528호에 기재된 것을 포함하며, 이들 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다. 본원에서 제공되는 조성물 및 사용 방법에 유용한 NPY5 길항제로는 미국 특허 제6,140,354호, 동 제6,191,160호, 동 제6,258,837호, 동 제6,313,298호, 동 제6,337,332호, 동 제6,329,395호, 동 제6,340,683호, 동 제6,326,375호 및 동 제6,335,345호, 유럽 특허 제EP-01010691호 및 동 제EP-01044970호, 및 PCT 특허 공개 제WO 97/19682호, 동 제WO 97/20820호, 동 제WO 97/20821호, 동 제WO 97/20822호, 동 제WO 97/20823호, 동 제WO 98/27063호, 동 제WO 00/64880호, 동 제WO 00/68197호, 동 제WO 00/69849호, 동 제WO 01/09120호, 동 제WO 01/85714호, 동 제WO 01/85730호, 동 제WO 01/07409호, 동 제WO 01/02379호, 동 제WO 01/02379호, 동 제WO 01/23388호, 동 제WO 01/23389호, 동 제WO 01/44201호, 동 제WO 01/62737호, 동 제WO 01/62738호, 동 제WO 01/09120호, 동 제WO 02/22592호, 동 제WO 02/48152호, 동 제WO 02/49648호 및 동 제WO 01/14376호에 기재된 화합물 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.Anti-obesity agents also include neuropeptide Y1 (NPY1) antagonists and NPY5 antagonists. NPYl and NPY5 antagonists are known in the art. See, e.g., Duhault et al. (2000) Can. J Physiol. Pharm. 78: 173-185, and U.S. Patent Nos. 6,124,331, 6,214,853, and 6,340,683. NPY1 and NPY5 antagonists, derivatives, drugs, agents, pharmaceutical compositions, dosages and routes of administration have already been described. NPY1 antagonists useful in the compositions and methods provided herein are disclosed in U.S. Patent No. 6,001,836 and PCT Application Publication Nos. WO 96/14307, WO 01/23387, WO 99/51600, 85690, WO 01/85098, WO 01/85173 and WO 01/89528, the disclosures of which are incorporated herein by reference in their entirety. NPY5 antagonists useful in the compositions and methods of use provided herein include those disclosed in U.S. Patent Nos. 6,140,354, 6,191,160, 6,258,837, 6,313,298, 6,337,332, 6,329,395, 6,340,683, 6,326,375 and 6,335,345, EP-01010691 and EP-01044970, and PCT Patent Publication Nos. WO 97/19682, WO 97/20820, WO 97/20821 WO 97/20822, WO 97/20823, WO 98/27063, WO 00/64880, WO 00/68197, WO 00/69849, WO 01/09120, WO 01/85714, WO 01/85730, WO 01/07409, WO 01/02379, WO 01/02379, WO 01/23388, WO 01/23389, WO 01/44201, WO 01/62737, WO 01/62738, WO 01/09120, WO 02 / 22592, the compounds described in WO 02/48152, WO 02/49648 and WO 01/14376, but are not limited thereto Do not.

항-비만제는 또한 멜라닌-농축 호르몬 1 수용체 (MCH1R) 길항제, 예를 들어 T-226296 (다께다(Takeda)) 및 멜라닌-농축 호르몬 2 수용체 (MCH2R) 길항제 등을 비롯한 멜라닌-농축 호르몬 (MCH) 길항제도 포함한다. MCH 수용체 길항제, 유도체, 약제, 제제, 제약 조성물, 투여량 및 투여 경로는 예를 들어 미국 특허 출원 공개 제2005/0009815호, 동 제2005/0026915호, 동 제2004/0152742호, 동 제2004/0209865호, PCT 특허 출원 공개 제WO 01/82925호, 동 제WO 01/87834호, 동 제WO 02/06245호, 동 제WO 02/04433호 및 동 제WO 02/51809호 및 일본 특허 출원 제JP 13226269호 등에 이미 기재된 바 있으며, 이들 문헌은 그 전문이 본원에 참고로 포함된다.Anti-obesity agents also include melanin-enriched hormones (MCH) including melanin-enriched hormone 1 receptor (MCH1R) antagonists such as T-226296 (Takeda) and melanin-enriched hormone 2 receptor (MCH2R) ) Antagonist. MCH receptor antagonists, derivatives, drugs, agents, pharmaceutical compositions, dosages and routes of administration are described, for example, in U.S. Patent Application Publication Nos. 2005/0009815, 2005/0026915, 2004/0152742, 0209865, PCT Patent Application Publication Nos. WO 01/82925, WO 01/87834, WO 02/06245, WO 02/04433, WO 02/51809, and Japanese Patent Application JP 13226269, etc., which are incorporated herein by reference in their entirety.

항-비만제는 또한 PCT 출원 제WO 00/21509호에 기재된 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는 아편양제제 길항제도 포함한다. 본원에서 제공되는 조성물 및 사용 방법에 유용한 구체적인 아편양제제 길항제로는 날메펜 (레벡스(REVEX)^®), 3-메톡시날트렉손 날록손, 날트렉손, 날록소나진, 베타-푸날트렉스아민, 델타1 ([D-Ala2,Leu5,Cys6]-엔케팔린 (DALCE), 날트린돌 이소티오시아네이트, 및 노르-비날토르프아민 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.Anti-obesity agents also include opioid antagonists, including, but not limited to those described in PCT application WO 00/21509. Useful specific opioid antagonist in the compositions and methods of use provided herein, nalmefene (Le Bex (REVEX) ^®), 3- methoxy-naltrexone naloxone, naltrexone, nalrok hydrogen or binary, beta-punal agent Rex amine, delta 1 ([D-Ala2, Leu5, Cys6] -enkephalin (DALCE), naltrelin isothiocyanate, and nor-nonantorphamine.

항-비만제는 또한 PCT 특허 출원 제WO 01/96302호, 동 제WO 01/68609호, 동 제WO 02/51232호 및 동 제WO 02/51838호에 기재된 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는 오렉신 길항제도 포함한다. 본원에서 제공되는 조성물 및 사용 방법에 유용한 구체적인 오렉신 길항제로는 SB-334867-A 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.Anti-obesity agents also include orexin antagonists, including but not limited to those described in PCT patent applications WO 01/96302, WO 01/68609, WO 02/51232 and WO 02/51838, . Specific orexin antagonists useful in the compositions and methods of use provided herein include, but are not limited to, SB-334867-A.

항-비만제는 또한 PYY3-36 (예를 들어 [Batterham et al. (2003) Nature 418:650-654]), NPY3-36 및 다른 Y2 효능제, 예를 들어 N-아세틸[Leu(28,31)]NPY 24-36 [White-Smith et al. (1999) Neuropeptides 33:526-533], TASP-V [Malis et al. (1999) Br. J. Pharmacol. 126:989-996], 시클로-(28/32)-Ac-[Lys28-Glu32]-(25-36)-pNPY [Cabrele et al. (2000) J. Pept. Sci. 6:97-122]와 같은 화합물 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 신경펩티드 Y2 (NPY2) 효능제도 포함하며, 이것들은 논의한 바와 같이 하이브리드 성분일 수도 있고, 또는 따로 투여될 수도 있다. 본원에서 제공되는 항-비만제는 또한 췌장 펩티드 (PP) (예를 들어 문헌 [Batterham et al. (2003) J. Clin. Endocrinol. Metab. 88:3989-3992]) 및 다른 Y4 효능제, 예를 들어 1229U91 [Raposinho et al. (2000) Neuroendocrinology 71:2-7]과 같은 화합물 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 신경펩티드 Y4 (NPY4) 효능제도 포함한다. NPY2 효능제 및 NPY4 효능제, 유도체, 약제, 제제, 제약 조성물, 투여량 및 투여 경로는 예를 들어 미국 특허 공개 제2002/0141985호 및 PCT 출원 공개 제WO 2005/077094호 등에서 이미 기재된 바 있다.Anti-obesity agents may also be used in combination with PYY3-36 (e.g. Batterham et al. (2003) Nature 418: 650-654), NPY3-36 and other Y2 agonists such as N-acetyl [Leu 31)] NPY 24-36 [White-Smith et al. (1999) Neuropeptides 33: 526-533], TASP-V [Malis et al. (1999) Br. J. Pharmacol. 126-989-996], cyclo- (28/32) -Ac- [Lys28-Glu32] - (25-36) -pNPY [Cabrele et al. (2000) J. Pept. Sci. 6: 97-122), and the like, which may be hybrid components as discussed or may be administered separately. Anti-obesity agents provided herein may also be used in combination with pancreatic peptides (PP) (e.g., Batterham et al. (2003) J. Clin. Endocrinol. Metab. 88: 3989-3992) For example, 1229U91 [Raposinho et al. (2000) Neuroendocrinology 71: 2-7], and the like, including, but not limited to, the neuropeptide Y4 (NPY4) potency regimen. NPY2 agonists and NPY4 agonists, derivatives, agents, agents, pharmaceutical compositions, dosages and routes of administration have been previously described, for example, in U.S. Patent Publication No. 2002/0141985 and PCT Application Publication No. WO 2005/077094.

항-비만제는 또한 PCT 출원 제WO 02/15905호에 기재된 것들, O-[3-(1H-이미다졸-4-일)프로판올]카르바메이트 [Kiec-Kononowicz et al. (2000) Pharmazie 55:349-355], 피페리딘-함유 히스타민 H3-수용체 길항제 [Lazewska et al. (2001) Pharmazie 56:927-932], 벤조페논 유도체 및 관련 화합물 [Sasse et al. (2001) Arch. Pharm. (Weinheim) 334:45-52], 치환된 N-페닐카르바메이트 [Reidemeister et al. (2000) Pharmazie 55:83-86] 및 프록시판 유도체 [Sasse et al. (2000) J. Med. Chem. 43:3335-3343] 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 히스타민 3 (H3) 길항제/역 효능제도 포함한다. 본원에서 제공되는 조성물 및 사용 방법에 유용한 구체적인 H3 길항제/역 효능제로는 티오페르아미드, 3-(1H-이미다졸-4-일)프로필 N-(4-펜테닐)카르바메이트, 클로벤프로피트, 요오도펜프로피트, 이모프록시판, 및 GT2394 (글리아테크(Gliatech)) 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.Anti-obesity agents are also described in PCT application WO 02/15905, O- [3- (1H-imidazol-4-yl) propanol] carbamate [Kiec-Kononowicz et al. (2000) Pharmazie 55: 349-355], piperidine-containing histamine H3-receptor antagonists [Lazewska et al. (2001) Pharmazie 56: 927-932], benzophenone derivatives and related compounds [Sasse et al. (2001) Arch. Pharm. (Weinheim) 334: 45-52], substituted N-phenylcarbamates [Reidemeister et al. (2000) Pharmazie 55: 83-86] and a proximal derivative [Sasse et al. (2000) J. Med. Chem. 43: 3335-3343], and the like, including histamine 3 (H3) antagonist / inverse potency. Specific H3 antagonists / inverse agonists useful in the compositions and methods of use provided herein include thioperamide, 3- (1H-imidazol-4-yl) propyl N- (4-pentenyl) carbamate, But are not limited to, Pete, Iodophen PROFIT, IOMO Proxy, and GT2394 (Gliatech).

항-비만제는 또한 콜레시스토키닌 (CCK) 및 CCK 효능제도 포함한다. 사용되는 콜레시스토키닌-A (CCK-A) 효능제로는 미국 특허 제5,739,106호에 기재된 것들 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 구체적인 CCK-A 효능제로는 AR-R 15849, GI 181771, JMV-180, A-71378, A-71623 및 SR146131 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.Anti-obesity agents also include cholecystokinin (CCK) and CCK efficacy regimens. Examples of the cholestystinin-A (CCK-A) agonist used include, but are not limited to, those described in U.S. Patent No. 5,739,106. Specific CCK-A agonists include but are not limited to AR-R 15849, GI 181771, JMV-180, A-71378, A-71623 and SR146131.

항-비만제는 또한 PCT 출원 공개 제WO 01/87335호 및 동 제WO 02/08250호에 기재된 것들과 같은 그렐린 길항제도 포함한다. 그렐린 길항제 역시 GHS (성장 호르몬 분비촉진 수용체) 길항제로도 알려져 있다. 따라서, 본원에서 제공되는 조성물 및 방법은 그렐린 길항제 대신 GHS 길항제를 사용할 것을 고려한다.Anti-obesity agents also include ghrelin antagonists such as those described in PCT Application Publication Nos. WO 01/87335 and WO 02/08250. Ghrelin antagonists are also known as GHS (growth hormone secretagogue receptor) antagonists. Thus, the compositions and methods provided herein contemplate the use of GHS antagonists in place of ghrelin antagonists.

항-비만제는 오베스타틴 및 오베스타틴 유사체 및 효능제를 포함한다. 오베스타틴은 그렐린과 동일한 전구체인 프리프로그렐린에서 유래되는 펩티드이다. 예를 들어 문헌 ([Zhang et al. (2005) Science 310:996-999], [Nogueiras et al. (2005) Science 310:985-986], [Pan et al. (2006) Peptides 27:911-916])을 참조한다. 그렐린의 활성과는 대조적으로, 오베스타틴은 음식물 섭취, 위 공복 활성, 공장 운동, 및 체중 증가의 감소를 통해 식욕 감퇴 호르몬으로 작용한다고 여겨진다. 사용되는 오베스타틴 펩티드로는 문헌 [Zhang et al. (2005) Science 310:996-999]에 기재된 것들 등이 있으나 이에 제한되지 않는다.Anti-obesity agents include ovastatin and ovastatin analogs and agonists. OVASTATIN is a peptide derived from pre-progrelin which is the same precursor as ghrelin. For example, see Zhang et al. (2005) Science 310: 996-999, Nogueiras et al. (2005) Science 310: 985-986, Pan et al. 916]). In contrast to the activity of ghrelin, it appears that it acts as an appetite-decreasing hormone by reducing food intake, stomach activity, plant movement, and weight gain. The overestin peptides used are described in Zhang et al. (2005) Science 310: 996-999, and the like.

또한, 아밀리노모방체, 예를 들어 프람린타이드, 아밀린-sCT-아밀린 (화합물 10), 인크레틴, 예를 들어 엑센딘-4, 및 PYY 유사체는 하이브리드와 조합 투여되는 항-비만제로 투여될 수도 있는 항-비만제이다. 예를 들어, 렙틴-화합물 10 하이브리드는 엑센딘-4, PYY 유사체 또는 이들 2가지 모두와 조합 투여될 수 있다. 또다른 실시양태에서, 렙틴-PYY 유사체 하이브리드는 엑센딘-4, 아밀리노모방체, 또는 이들 2가지 모두와 조합 투여될 수 있다.Also, amylinomimetics such as pramlintide, amylin-sCT-amylin (Compound 10), incretins such as exendin-4, and PYY analogs are anti-obesity agents administered in combination with hybrids An anti-obesity agent that may be administered. For example, leptin-compound 10 hybrids may be administered in combination with exendin-4, PYY analogs, or both. In another embodiment, leptin-PYY analog hybrids may be administered in combination with exendin-4, amylinomimetic, or both.

본원에서 논의한 바와 같이 당뇨병 및 관련 질환을 치료하는 실시양태에서 특별한 관심이 있는 것은, 엑센딘 패밀리 및 알파-MSH 모듈, 및 엑센딘 및 아밀린 패밀리 구성원을 포함하는 하이브리드이다. 특별한 관심이 있는 것은, 엑센딘이 엑센딘-4 또는 그의 유사체 또는 유도체이고 아밀린 성분이 프람린타이드 또는 아밀린-sCT-아밀린 키메라인 하이브리드이다.Of particular interest in the embodiments of treating diabetes and related disorders, as discussed herein, are hybrids comprising the exendin family and the alpha-MSH module, and exendin and amylin family members. Of particular interest is a hybrid wherein the exendin is exendin-4 or an analogue or derivative thereof and the amylin component is pramlineide or amylin-sCT-amylin chimeric.

본원에서 논의한 바와 같이 비만 및 관련 질환 및 상태를 치료 (체지방 감소)하는 실시양태에서 특별한 관심이 있는 것은, 엑센딘 패밀리와 알파-MSH 모듈, 엑센딘과 아밀린 패밀리 구성원, 아밀린 패밀리 구성원과 PYY 패밀리 구성원, 아밀린 패밀리 구성원과 CCK 패밀리 구성원, 아밀린 패밀리 구성원과 알파-MSH 패밀리 구성원, FN-38 패밀리 구성원, 아밀린 패밀리 구성원과 PYY 패밀리 구성원, PYY 패밀리 구성원과 또다른 동일하거나 상이한 PYY 패밀리 구성원, PPY 패밀리 구성원과 CCK 패밀리 구성원, PYY 패밀리 구성원과 FN-38 패밀리 구성원, CCK 패밀리 구성원과 FN-38 패밀리 구성원을 포함하는 하이브리드이다. 본원에 기재한 바와 같이, 특별한 관심이 있는 것은 엑센딘이 엑센딘-4 또는 그의 유사체 또는 유도체이고, 아밀린 성분이 프람린타이드 또는 아밀린-sCT-아밀린 키메라이고, FN38 패밀리 구성원이 FN38 또는 그의 유사체 또는 유도체이고, PYY 키메라가 PYY-NPY 키메라, 예를 들어 US 2006/0135747 A1의 서열 266, 서열 437, 서열 438, 서열 439, 서열 442, 서열 462, 서열 469, 서열 470, 서열 471 및 서열 472 및 예를 들어 PYY-NPY 키메라 5705인 하이브리드이다.Of particular interest in the embodiments of treating obesity and related diseases and conditions (body fat reduction) as discussed herein are exendin and alpha-MSH modules, exendin and amylin family members, amylin family members and PYY Family member, amylin family member and CCK family member, amylin family member and alpha-MSH family member, FN-38 family member, amylin family member and PYY family member, and another identical or different PYY family member to PYY family member , A PPY family member and a CCK family member, a PYY family member and an FN-38 family member, a CCK family member, and an FN-38 family member. As noted herein, particular interest is that the exendin is exendin-4 or an analogue or derivative thereof, the amylin component is pramlineide or amylin-sCT-amylin chimeric, the FN38 family member is FN38 or Wherein the PYY chimera is a PYY-NPY chimera, such as a sequence selected from the group consisting of SEQ ID NO: 266, SEQ ID NO: 437, SEQ ID NO: 438, SEQ ID NO: 439, SEQ ID NO: 442, SEQ ID NO: 462, SEQ ID NO: 469, SEQ ID NO: SEQ ID NO: 472 and a hybrid that is, for example, PYY-NPY Chimera 5705.

폴리펩티드 생성 및 정제Polypeptide generation and purification

본원에 기재한 하이브리드 폴리펩티드는 예를 들어 자동화 또는 반자동화 펩티드 합성기 또는 이들 2가지 모두를 사용하는 당업계 공지의 화학적 펩티드 합성 기술 또는 표준 재조합 기술을 이용하여 제조할 수 있다. The hybrid polypeptides described herein can be prepared, for example, using automated peptide synthesis techniques known in the art using either automated or semi-automated peptide synthesizers, or both.

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 통상적인 기술에 따라 용액에서 또는 고체 지지체 상에서 합성할 수 있다. 다양한 자동화 합성기가 시판되고 있으며, 공지의 프로토콜에 따라 사용될 수 있다. 예를 들어 문헌 ([Stewart and Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2d. ed., Pierce Chemical Co. (1984)], [Tam et al., J. Am. Chem. Soc. 105:6442 (1983)], [Merrifield, Science 232:341-7 (1986)] 및 [Barany and Merrifield, The Peptides, Gross and Meienhofer, eds., Academic Press, New York, 1-284 (1979)])을 참조한다. 고체상 펩티드 합성은 캡핑을 갖는 NMP/HOBt (옵션 1) 시스템 및 tBoc 또는 Fmoc 화학 ([Applied Biosystems User's Manual for the ABI 430A Peptide Synthesizer, Version 1.3B July 1, 1988, section 6, pp. 49-70] (어플라이드 바이오시스템즈, 인크.(Applied Biosystems Inc.), 미국 캘리포니아주 포스터 시티 소재) 참조)를 사용하여 자동 펩티드 합성기 (예를 들어 모델 430A, 어플라이드 바이오시스템즈 인크., 미국 캘리포니아주 포스터 시티 소재)로 수행할 수 있다. 펩티드는 또한 어드밴스드 켐 테크 신테사이저(Advanced Chem Tech Synthesizer) (모델 MPS 350, 미국 켄터키주 루이즈빌 소재)를 사용하여 조립할 수 있다. 펩티드는 예를 들어 워터스 델타 프렙(Waters Delta Prep) 3000 시스템 및 C4, C8 또는 C18 정제용 컬럼 (10 μ, 2.2×25 cm; 비닥(Vydac), 미국 캘리포니아주 헤스페리아 소재)을 사용하는 RP-HPLC (정제용 및 분석용)로 정제할 수 있다. 활성 펩티드는 쉽게 합성된 후 반응성 펩티드를 확인하도록 고안된 스크리닝 검정으로 스크리닝될 수 있다. The hybrid polypeptides of the present invention can be synthesized in solution or on a solid support according to conventional techniques. Various automation synthesizers are commercially available and can be used according to known protocols. (Tam et al., J. Am. Chem. Soc. 105: 6442 (1983)), , [Merrifield, Science 232: 341-7 (1986)] and [Barany and Merrifield, The Peptides, Gross and Meienhofer, eds., Academic Press, New York, 1-284 (1979)]. Solid phase peptide synthesis was performed using the NMP / HOBt (Option 1) system with capping and tBoc or Fmoc chemistry (Applied Biosystems User Manual for ABI 430A Peptide Synthesizer, Version 1.3B July 1, 1988, section 6, pp. 49-70) (Model 430A, Applied Biosystems Inc., Foster City, Calif.) Using an automated peptide synthesizer (see Applied Biosystems Inc., Foster City, CA) Can be performed. Peptides can also be assembled using Advanced Chem Tech Synthesizer (Model MPS 350, Louisville, KY). The peptides can be purified using, for example, a Waters Delta Prep 3000 system and a RP- HPLC column using a C4, C8 or C18 purification column (10 mu, 2.2 x 25 cm; Vydac, Hesperia, HPLC (for purification and analysis). Active peptides can be screened with screening assays designed to identify reactive peptides after they are readily synthesized.

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 별법으로 당업계에 공지된 재조합 기술에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어 문헌 [Sambrook et al., Molecular Cloning:A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor (1989)]을 참조한다. 이러한 재조합 기술에 의해 생성된 하이브리드 폴리펩티드는 폴리뉴클레오티드로부터 발현될 수 있다. 당업자는 상기 하이브리드 폴리펩티드의 다양한 단편을 코딩하는 DNA 및 RNA를 비롯한 폴리뉴클레오티드를 코돈 사용의 동의성(degeneracy)을 고려하여 야생형 cDNA로부터 얻을 수도 있고, 원한다면 유전 공학으로 제조할 수도 있음을 이해할 것이다. 이러한 폴리뉴클레오티드 서열에는 미생물 숙주에서 mRNA의 전사 및 번역을 용이하게 하는 코돈이 혼입될 수 있다. 이러한 제조 서열은 당업계에 공지된 방법에 따라 용이하게 구축될 수 있다. 예를 들어 WO 83/04053을 참조한다. 상기 폴리뉴클레오티드는 또한 임의로 N-말단 메티오닐 잔기를 코딩할 수 있다. 본 발명에 유용한 비-펩티드 화합물은 당업계에 공지된 방법으로 제조할 수 있다. 예를 들어, 인산염 함유 아미노산 및 이러한 아미노산을 함유하는 펩티드는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 제조할 수 있다. 예를 들어 문헌 [Bartlett and Landen, Bioorg Chem. 14:356-77 (1986)]을 참조한다.The hybrid polypeptides of the present invention may alternatively be produced by recombinant techniques known in the art. See, for example, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d ed., Cold Spring Harbor (1989). Hybrid polypeptides produced by such recombinant techniques can be expressed from polynucleotides. Those skilled in the art will appreciate that polynucleotides, including DNA and RNA encoding the various fragments of the hybrid polypeptides, may be obtained from wild-type cDNA, taking into account the degeneracy of codon usage, and genetically engineered, if desired. Such polynucleotide sequences may incorporate codons that facilitate mRNA transcription and translation in the microbial host. Such a production sequence can be easily constructed according to methods known in the art. See, for example, WO 83/04053. The polynucleotide may also optionally encode an N-terminal methionyl residue. Non-peptide compounds useful in the present invention can be prepared by methods known in the art. For example, phosphate-containing amino acids and peptides containing such amino acids can be prepared using methods known in the art. See, e.g., Bartlett and Landen, Bioorg Chem. 14: 356-77 (1986).

하이브리드 폴리펩티드 코딩 서열을 함유하고 발현시키기 위해 다양한 발현 벡터/숙주 시스템을 사용할 수 있다. 이들은 미생물, 예를 들어 재조합 박테리오파지, 플라스미드 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 세균; 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모; 바이러스 발현 벡터 (예를 들어 바큘로바이러스)로 감염된 곤충 세포 시스템; 바이러스 발현 벡터 (예를 들어 꽃양배추 모자이크 바이러스, CaMV; 담배 모자이크 바이러스, TMV)로 형질감염되거나 세균 발현 벡터 (예를 들어 Ti 또는 pBR322 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템; 또는 동물 세포 시스템을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 재조합 단백질 생성에 유용한 포유동물 세포는 VERO 세포, HeLa 세포, 차이니스 햄스터 난소 (CHO) 세포주, COS 세포 (예를 들어 COS-7), WI 38, BHK, HepG2, 3T3, RIN, MDCK, A549, PC12, K562 및 293 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 단백질의 재조합 발현을 위한 예시적인 프로토콜은 본원에 기재되어 있다.Various expression vector / host systems may be used to contain and express hybrid polypeptide coding sequences. These include bacteria transformed with microorganisms, such as recombinant bacteriophage, plasmid or cosmid DNA expression vectors; Yeast transformed with a yeast expression vector; Insect cell systems infected with viral expression vectors (e. G., Baculovirus); A plant cell system transfected with a virus expression vector (e.g., cauliflower mosaic virus, CaMV; tobacco mosaic virus, TMV) or transformed with a bacterial expression vector (e.g., Ti or pBR322 plasmid); Or animal cell systems. Mammalian cells useful for recombinant protein production include but are not limited to VERO cells, HeLa cells, Chinese hamster ovary (CHO) cell lines, COS cells (e.g., COS-7), WI 38, BHK, HepG2, 3T3, RIN, MDCK, A549, PC12, K562, and 293 cells. Exemplary protocols for the recombinant expression of proteins are described herein.

이와 같이, 본 발명에 의해 제공되는 폴리뉴클레오티드 서열은 신규하고 유용한 바이러스 및 플라스미드 DNA 벡터, 신규하고 유용한 형질전환 및 형질감염된 원핵 및 진핵 숙주 세포 (배양하여 성장시킨 세균, 효모 및 포유동물 세포 포함), 및 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드를 발현할 수 있는 이러한 숙주 세포의 배양 성장을 위한 신규하고 유용한 방법을 제공하는데 유용하다. 본원에서 하이브리드 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드 서열은 키메라의 성분 펩티드 호르몬(들)의 저생산이 완화되거나, 그의 수준 증가에 대한 필요성이 충족되는 예에서는 유전자 요법에 유용할 수 있다.As such, the polynucleotide sequences provided by the present invention can be used to produce new and useful viral and plasmid DNA vectors, novel and usefully transformed and transfected prokaryotic and eukaryotic host cells (including cultured germ, yeast and mammalian cells) And a novel and useful method for the growth of such host cells capable of expressing the hybrid polypeptides of the invention. A polynucleotide sequence coding for a hybrid polypeptide herein may be useful in gene therapy in instances where the low production of the component peptide hormone (s) of the chimera is relieved, or the need for increased levels thereof is met.

본 발명은 또한 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드의 재조합 DNA 생성 방법을 제공한다. 이러한 하이브리드 폴리펩티드를 코딩하는 핵산을 함유하는 숙주 세포로부터 하이브리드 폴리펩티드를 생성하는 방법이 제공되며, 상기 방법은 (a) 이러한 DNA 분자의 발현을 용이하게 하는 조건하에서 이러한 하이브리드 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 함유하는 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 (b) 이러한 하이브리드 폴리펩티드를 수득하는 단계를 포함한다.The present invention also provides a method for producing recombinant DNA of a hybrid polypeptide of the present invention. There is provided a method of producing a hybrid polypeptide from a host cell containing a nucleic acid encoding such a hybrid polypeptide, the method comprising: (a) contacting the hybrid polypeptide with a polynucleotide encoding such a hybrid polypeptide under conditions that facilitate expression of such DNA molecule , And (b) obtaining such a hybrid polypeptide.

숙주 세포는 원핵세포 또는 진핵세포일 수 있고, 세균, 포유동물 세포 (예를 들어 차이니스 햄스터 난소 (CHO) 세포, 원숭이 세포, 새끼 햄스터 신장 세포, 암세포 또는 다른 세포), 효모 세포 및 곤충 세포를 포함한다. The host cell may be a prokaryotic or eukaryotic cell and may be a bacterium, a mammalian cell (such as a Chinese hamster ovary (CHO) cell, a monkey cell, a fetal hamster kidney cell, a cancer cell or other cell), a yeast cell, .

또한, 재조합 단백질의 발현을 위한 포유동물 숙주 시스템도 당업자에게 공지되어 있다. 숙주 세포 균주는 발현된 단백질을 프로세싱하거나 단백질 활성 제공에 유용한 특정 번역후 변형을 생성하는 특별한 능력에 대해 선택할 수 있다. 폴리펩티드의 이러한 변형으로는 아세틸화, 카르복실화, 글리코실화, 인산화, 지질화 및 아실화 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 단백질의 "프리프로" 형태를 절단하는 번역후 프로세싱은 또한 정확한 삽입, 폴딩 및/또는 기능에 중요할 수도 있다. 여러가지 숙주 세포, 예를 들어 CHO, HeLa, MDCK, 293, WI38 등은 이러한 번역후 활성을 위한 특정 세포 기구 및 특징적인 메카니즘을 가지며, 도입된 외래 단백질의 정확한 변형 및 프로세싱이 확실히 일어나도록 선택할 수 있다.In addition, mammalian host systems for expression of recombinant proteins are known to those skilled in the art. Host cell strains may be selected for their particular ability to process the expressed protein or to produce certain post-translational modifications useful for providing protein activity. Such modifications of the polypeptide include, but are not limited to, acetylation, carboxylation, glycosylation, phosphorylation, lipidation, and acylation. Post-translational processing that cleaves the "prepro" form of the protein may also be important for correct insertion, folding and / or function. Various host cells, such as CHO, HeLa, MDCK, 293, WI38, etc., have a specific cellular machinery and characteristic mechanism for such post-translational activity, and can be selected to ensure correct transformation and processing of the introduced foreign protein .

별법으로, 효모 시스템이 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드를 생성시키는데 사용될 수 있다. 하이브리드 폴리펩티드 cDNA의 코딩 영역은 PCR로 증폭된다. 효모 프리-프로-알파 리더 서열을 코딩하는 DNA는, 알파 접합 인자 유전자의 뉴클레오티드 1 내지 20을 포함하는 프라이머 및 상기 유전자의 뉴클레오티드 255 내지 235에 상보적인 또다른 프라이머를 사용하는 PCR 반응에서 효모 게놈 DNA로부터 증폭된다 [Kurjan and Herskowitz, Cell, 30:933-43 (1982)]. 프리-프로-알파 리더 코딩 서열 및 하이브리드 폴리펩티드 코딩 서열 단편은, 프로모터가 성숙 하이브리드 폴리펩티드에 융합된 프리-프로-알파 인자로 구성된 융합 단백질의 발현을 지시하도록 효모 알콜 데히드로게나제 (ADH2) 프로모터를 함유하는 플라스미드에 라이게이션된다. 문헌 [Rose and Broach, Meth. Enz. 185:234-79, Goeddeled., Academic Press, Inc., San Diego, California (1990)]에서 교시되는 바와 같이, 벡터는 클로닝 부위의 하류에 ADH2 전사 종결자, 효모 "2-미크론" 복제 기점, 효모 leu-2d 유전자, 효모 REP1 및 REP2 유전자, 이. 콜라이(E. coli) β-락타마제 유전자 및 이. 콜라이 복제 기점을 추가로 포함한다. β-락타마제 및 leu-2d 유전자는 각각 세균 및 효모에서의 선별을 위한 것이다. 또한, leu-2d 유전자는 효모 내의 플라스미드의 카피수 증가를 용이하게 하여, 더 높은 수준의 발현을 유도한다. REP1 및 REP2 유전자는 플라스미드 카피수 조절에 관여하는 단백질을 코딩한다.Alternatively, a yeast system may be used to generate the hybrid polypeptides of the present invention. The coding region of the hybrid polypeptide cDNA is amplified by PCR. The DNA encoding the yeast pre-pro-alpha leader sequence can be obtained by PCR using a primer comprising nucleotides 1 to 20 of the alpha junction factor gene and another primer complementary to nucleotides 255 to 235 of the gene, (Kurjan and Herskowitz, Cell, 30: 933-43 (1982)). The pre-pro-alpha leader coding sequences and the hybrid polypeptide coding sequence fragments can be produced by introducing a yeast alcohol dehydrogenase (ADH2) promoter to direct the expression of a fusion protein comprised of a pre-pro-alpha factor whose promoter is fused to a mature hybrid polypeptide Lt; / RTI > containing plasmid. See Rose and Broach, Meth. Enz. The vector comprises an ADH2 transcription terminator downstream of the cloning site, a yeast "2-micron" origin of replication, a < RTI ID = Yeast leu-2d gene, yeast REP1 and REP2 genes, E. coli < RTI ID = 0.0 > ss-lactamase < / RTI >Lt; / RTI > The β-lactamase and leu-2d genes are for selection in bacteria and yeast, respectively. In addition, the leu-2d gene facilitates an increase in the number of plasmids in the yeast, leading to a higher level of expression. The REP1 and REP2 genes encode proteins involved in the regulation of plasmid copy number.

앞의 단락에서 기재한 DNA 구축물은 공지의 방법, 예를 들어 아세트산리튬 처리를 이용하여 효모 세포로 형질전환된다 [Steams et al., Meth. Enz. 185:280-97 (1990)]. ADH2 프로모터는 성장 배지 중의 글루코스 고갈시에 유도된다 [Price et al., Gene 55:287 (1987)]. 프리-프로-알파 서열은 세포로부터 융합 단백질의 분비를 야기한다. 동시에, 효모 KEX2 단백질은 성숙 PYY 유사체 폴리펩티드로부터 프리-프로 서열을 절단한다 [Bitter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:5330-4 (1984)]. The DNA constructs described in the preceding paragraphs are transformed into yeast cells using known methods, such as lithium acetate treatment [Steams et al., Meth. Enz. 185: 280-97 (1990)). The ADH2 promoter is induced upon glucose depletion in the growth medium (Price et al., Gene 55: 287 (1987)). The pre-pro-alpha sequence results in secretion of the fusion protein from the cell. At the same time, the yeast KEX2 protein cleaves the pre-prosequence from mature PYY analog polypeptides [Bitter et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 5330-4 (1984)].

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 또한 시판되는 발현 시스템, 예를 들어 피치아(Pichia) 발현 시스템 (인비트로겐(Invitrogen), 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)을 제조업체의 지시에 따라 사용하여 효모에서 재조합적으로 발현될 수도 있다. 상기 시스템은 또한 분비를 지시하는 프리-프로-알파 서열에 따라 달라지지만, 삽입체의 전사는 메탄올에 의한 유도시 알콜 옥시다제 (AOX1) 프로모터에 의해 구동된다. 분비된 하이브리드 폴리펩티드는 효모 성장 배지로부터, 예를 들어 세균 및 포유동물 세포 상등액으로부터 하이브리드 폴리펩티드를 정제하는데 이용되는 방법으로 정제된다. The hybrid polypeptides of the present invention can also be used to produce recombinantly expressed expression in yeast using commercially available expression systems, such as the Pichia expression system (Invitrogen, San Diego, Calif., USA) It is possible. The system also depends on the pre-pro-alpha sequence directing secretion, but the transcription of the insert is driven by the alcohol oxidase (AOX1) promoter upon induction by methanol. Secreted hybrid polypeptides are purified from yeast growth medium, for example, by methods used to purify hybrid polypeptides from bacterial and mammalian cell supernatants.

별법으로, 하이브리드 폴리펩티드를 코딩하는 cDNA는 바큘로바이러스 발현 벡터 pVL1393 (파밍겐(PharMingen), 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재)으로 클로닝될 수 있다. 이어서, 상기 하이브리드 폴리펩티드-함유 벡터를 제조업체의 지시 (파밍겐)에 따라 사용하여 sF9 단백질-무함유 배지 중에서 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포를 감염시키고 재조합 단백질을 생성한다. 헤파린-세파로스(Sepharose) 컬럼 (파마시아(Pharmacia), 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재) 및 순차적 분자 사이징(sizing) 컬럼 (아미콘(Amicon), 미국 매사추세츠주 베벌리 소재)을 사용하여 단백질을 배지로부터 정제 및 농축시키고, PBS 중에 재현탁시킨다. SDS-PAGE 분석은 단일 밴드를 보여주고 단백질의 크기를 확인해 주며, 프로톤 2090 펩티드 서열 분석기(Proton 2090 Peptide Sequencer) 상에서의 에드만(Edman) 서열 분석을 통해 그의 N-말단 서열을 확인한다. Alternatively, the cDNA encoding the hybrid polypeptide can be cloned into the baculovirus expression vector pVL1393 (PharMingen, San Diego, Calif.). The hybrid polypeptide-containing vector is then used according to the manufacturer's instructions (Pharmingen) to infect Spodoptera frugiperda cells in sF9 protein-free medium to generate recombinant proteins. Protein was eluted from the medium using a heparin-Sepharose column (Pharmacia, Piscataway, NJ) and a sequential molecular sizing column (Amicon, Beverly, Mass., USA) Purified and concentrated and resuspended in PBS. SDS-PAGE analysis shows a single band, confirms the size of the protein, and confirms its N-terminal sequence through Edman sequencing on a Proton 2090 Peptide Sequencer.

예를 들어, 하이브리드 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 서열은 원하는 프로모터 및 임의로 리더 서열을 함유하는 플라스미드로 클로닝될 수 있다 (예를 들어 문헌 [Better et al., Science 240:1041-3 (1988)] 참조). 상기 구축물의 서열은 자동화 서열 분석으로 확인할 수 있다. 이어서, 상기 플라스미드를 세균의 CaCl₂ 인큐베이션 및 열 쇼크 처리를 이용하는 표준 절차에 따라 이. 콜라이 균주 MC1061로 형질전환시킨다 [Sambrook et al., 상기 문헌]. 형질전환된 세균을 카르베니실린으로 보충한 LB 배지에서 성장시키고, 발현된 단백질의 생성은 적합한 배지 중에서의 성장으로 유도된다. 리더 서열이 존재하는 경우, 이것은 하이브리드 폴리펩티드의 분비에 영향을 미치고 분비 동안에 절단될 것이다. 분비된 재조합 단백질은 본원에서 하기 기재된 방법에 따라 세균 배양 배지로부터 정제된다. For example, a DNA sequence encoding a hybrid polypeptide can be cloned into a plasmid containing the desired promoter and optionally a leader sequence (see, for example, Better et al., Science 240: 1041-3 (1988) . The sequence of the construct can be confirmed by automated sequence analysis. The plasmid was then subjected to standard procedures using CaCl ₂ incubation of bacteria and heat shock treatment. Transformed with E. coli strain MC1061 (Sambrook et al., Supra). The transformed bacteria are grown in LB medium supplemented with carbenicillin and the production of the expressed protein is induced by growth in a suitable medium. If a leader sequence is present, this affects the secretion of the hybrid polypeptide and will be cleaved during secretion. Secreted recombinant proteins are purified from bacterial culture media according to the methods described herein below.

별법으로, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 곤충 시스템에서 발현될 수 있다. 단백질 발현을 위한 곤충 시스템은 당업자에게 공지되어 있다. 이러한 시스템 중 하나에서는 오토그래파 캘리포르니카(Autographa californica) 핵 다각체병 바이러스 (AcNPV)가 스포돕테라 프루기페르다 세포에서 또는 트리코플루시아 라르배(Trichoplusia larvae)에서 외래 유전자를 발현하는 벡터로서 사용된다. 하이브리드 폴리펩티드 코딩 서열을 바이러스의 비-필수 영역, 예를 들어 폴리헤드린(polyhedrin) 유전자로 클로닝하여 폴리헤드린 프로모터의 제어하에 배치한다. 하이브리드 폴리펩티드의 성공적인 삽입은 폴리헤드린 유전자를 불활성화시키고 외피 단백질 외피가 결핍된 재조합 바이러스를 생성시킬 것이다. 이어서, 재조합 바이러스를 사용하여 스포돕테라 프루기페르다 세포 또는 트리코플루시아 라르배를 감염시키고, 여기서 하이브리드 폴리펩티드가 발현된다 ([Smith et al., J. Virol. 46:584 (1983)], [Engelhard et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:3224-7 (1994)]). Alternatively, the hybrid polypeptides of the present invention may be expressed in an insect system. Insect systems for protein expression are known to those skilled in the art. One such system is the Autographa californica nuclear polyhedrosis virus (AcNPV), a vector that expresses foreign genes in Spodoptera frugiperda cells or in Trichoplusia larvae Is used. The hybrid polypeptide coding sequence is cloned into a non-essential region of the virus, for example the polyhedrin gene, and placed under the control of the polyhedrin promoter. Successful insertion of the hybrid polypeptide will inactivate the polyhedrin gene and produce a recombinant virus deficient in the coat protein envelope. The recombinant virus is then used to infect a Spodoptera frugiperda cell or a tricofluariale cell where the hybrid polypeptide is expressed (Smith et al., J. Virol. 46: 584 (1983)], [Engelhard et al., Proc Natl Acad Sci USA 91: 3224-7 (1994)]).

또다른 예에서, 하이브리드 폴리펩티드를 코딩하는 DNA 서열을 PCR로 증폭시켜 적절한 벡터, 예를 들어 pGEX-3X (파마시아, 미국 뉴저지주 피스카타웨이 소재)로 클로닝할 수 있다. pGEX 벡터는 벡터에 의해 코딩되는 글루타티온-S-트랜스퍼라제 (GST) 및 벡터의 클로닝 부위에 삽입된 DNA 단편에 의해 코딩되는 단백질을 포함하는 융합 단백질을 생성하도록 디자인된다. PCR을 위한 프라이머는 예를 들어 적절한 절단 부위를 포함하도록 생성될 수 있다. 이어서, 재조합 융합 단백질을 융합 단백질의 GST 부분으로부터 절단시킬 수 있다. pGEX-3X/PYY 유사체 폴리펩티드 구축물을 이. 콜라이 XL-1 Blue 세포 (스트라타젠(Stratagene), 미국 캘리포니아 라 졸라 소재)로 형질전환시키고, 개개의 형질전환체를 단리하여 37℃에서 LB 배지 (카르베니실린으로 보충함) 중에서 파장 600 nm에서의 광학 밀도 0.4로 성장시킨 후, 0.5 mM 이소프로필 β-D-티오갈락토피라노시드 (시그마 케미칼 컴퍼니(Sigma Chemical Co.), 미국 미주리주 세인트 루이스 소재)의 존재하에 4시간 동안 추가로 인큐베이션시킨다. 개개의 형질전환체로부터의 플라스미드 DNA를 정제하고 자동화 서열 분석기로 부분적 서열 분석하여, 원하는 PPF 하이브리드 폴리펩티드-코딩 유전자가 적절한 배향으로 존재함을 확인한다.In another example, the DNA sequence encoding the hybrid polypeptide can be amplified by PCR and cloned into a suitable vector, e. G. PGEX-3X (Pharmacia, Piscataway, NJ). The pGEX vector is designed to produce a fusion protein comprising a glutathione-S-transferase (GST) encoded by a vector and a protein encoded by a DNA fragment inserted into the cloning site of the vector. Primers for PCR can be generated, for example, to include appropriate cleavage sites. The recombinant fusion protein can then be cleaved from the GST portion of the fusion protein. pGEX-3X / PYY analog polypeptide construct. The cells were transformed with E. coli XL-1 Blue cells (Stratagene, La Jolla, Calif., USA) and the individual transformants were isolated and lysed in LB medium (supplemented with carbenicillin) at 370C at a wavelength of 600 nm And then incubated for an additional 4 hours in the presence of 0.5 mM isopropyl [beta] -D-thiogalactopyranoside (Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo.) . Plasmid DNA from individual transformants is purified and partially sequenced with an automated sequencer to confirm that the desired PPF hybrid polypeptide-coding gene is present in the proper orientation.

세균 내에 불용성 봉입체(inclusion body)로서 생성된다고 예상되는 융합 단백질은 다음과 같이 정제할 수 있다. 세포를 원심분리로 수거하고, 0.15 M NaCl, 10 mM Tris, pH 8, 1 mM EDTA로 세척하고, 0.1 mg/mL 리소자임 (시그마 케미칼 컴퍼니)으로 15분 동안 실온에서 처치한다. 용해물을 초음파분해하여 투명하게 하고, 세포 파편을 10분 동안 12,000×g에서 원심분리하여 펠렛화한다. 융합 단백질-함유 펠렛을 50 mM Tris, pH 8 및 10 mM EDTA에 재현탁하고 50％ 글리세롤 상에 적층하여 30분 동안 6000×g에서 원심분리한다. 펠렛을 Mg⁺⁺ 및 Ca⁺⁺가 없는 표준 인산염 완충 염수 용액 (PBS)에 재현탁시킨다. 재현탁된 펠렛을 변성 SDS 폴리아크릴아미드겔에 분획화함으로써 융합 단백질을 추가로 정제한다 [Sambrook et al., 상기 문헌]. 겔을 0.4 M KCl에 침지시켜 단백질을 가시화하고, 이를 잘라내어 SDS가 없는 겔-운행 완충액에서 전기용출한다. GST/PYY 유사체 폴리펩티드 융합 단백질이 세균 내에서 가용성 단백질로서 생성되는 경우, GST 정제 모듈 (파마시아 바이오테크(Pharmacia Biotech))을 사용하여 정제할 수 있다.Fusion proteins expected to be produced as insoluble inclusion bodies in bacteria can be purified as follows. Cells are harvested by centrifugation, washed with 0.15 M NaCl, 10 mM Tris, pH 8, 1 mM EDTA and treated with 0.1 mg / mL lysozyme (Sigma Chemical Co.) for 15 minutes at room temperature. The lysate is sonicated to make it transparent and the cell debris is pelleted by centrifugation at 12,000 x g for 10 minutes. The fusion protein-containing pellet is resuspended in 50 mM Tris, pH 8 and 10 mM EDTA, laminated on 50% glycerol and centrifuged at 6000 x g for 30 minutes. The pellet is resuspended in standard phosphate buffered saline (PBS) without Mg ⁺⁺ and Ca ⁺⁺ . The fusion protein is further purified by fractionating the resuspended pellet into denaturing SDS polyacrylamide gel (Sambrook et al., Supra). The gel is immersed in 0.4 M KCl to visualize the protein, which is cut out and electroeluted in a gel-running buffer without SDS. When a GST / PYY analog polypeptide fusion protein is produced as a soluble protein in bacteria, it can be purified using a GST purification module (Pharmacia Biotech).

융합 단백질은 PPF 하이브리드 폴리펩티드로부터 GST를 절단하도록 소화시킬 수 있다. 소화 반응 (20 내지 40 ㎍ 융합 단백질, 20 내지 30 유닛의 인간 트롬빈 (0.5 mL PBS 중 4000 U/mg (시그마))을 16 내지 48시간 동안 실온에서 인큐베이션하고, 변성 SDS-PAGE 겔 상에 로딩하여 반응 생성물을 분획화한다. 겔을 0.4 M KCl에 침지시켜 단백질 밴드를 가시화한다. 하이브리드 폴리펩티드의 예상 분자량에 상응하는 단백질 밴드의 정체성(identity)은 자동화 서열 분석기 (어플라이드 바이오시스템즈 모델 473A)를 사용하는 부분 아미노산 서열 분석으로 확인할 수 있다. The fusion protein can be digested to cleave the GST from the PPF hybrid polypeptide. Digestion reaction (20-40 ug fusion protein, 20-30 units of human thrombin (4000 U / mg (Sigma) in 0.5 mL PBS) was incubated for 16-48 hours at room temperature and loaded onto denaturing SDS- PAGE gel Protein bands are visualized by immersing the gel in 0.4 M KCl. The identity of the protein bands corresponding to the expected molecular weight of the hybrid polypeptide can be determined using an automated sequencer (Applied Biosystems Model 473A) Partial amino acid sequence analysis.

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드의 재조합 발현의 특히 바람직한 방법에서, 293 세포를 인산칼슘 방법으로 pCMV 벡터 (5' CMV 프로모터, 3' HGH 폴리 A 서열) 내에 하이브리드 폴리펩티드 cDNA를 함유하는 플라스미드 및 pSV2neo (neo 내성 유전자 함유)로 동시형질감염시킬 수 있다. 바람직하게는, 벡터는 형질감염시키기 전에 ScaI로 선형화시켜야 한다. 유사하게, neo 유전자가 삽입된 유사한 pCMV 벡터를 사용하는 또다른 구축물을 사용할 수 있다. 10일 내지 14일 동안 0.5 mg/mL G418 (네오마이신 유사 항생제)를 함유하는 성장 배지 중에서의 제한 희석을 통해 단일 세포 클론으로부터 안정적인 세포주를 선별한다. 세포주는 ELISA 또는 웨스턴 블롯을 이용하여 하이브리드 폴리펩티드 발현에 대해 스크리닝하고, 고발현 세포주를 대규모 성장을 위해 증식시킨다. In a particularly preferred method of recombinant expression of the hybrid polypeptides of the present invention, 293 cells are transformed with the calcium phosphate method into a plasmid containing the hybrid polypeptide cDNA in the pCMV vector (5 'CMV promoter, 3' HGH polyA sequence) and pSV2neo RTI ID = 0.0 > transfected < / RTI > Preferably, the vector should be linearized with ScaI before transfection. Similarly, another construct using a similar pCMV vector with the inserted neo gene can be used. Stable cell lines are selected from single cell clones by limiting dilution in growth medium containing 0.5 mg / mL G418 (neomycin-like antibiotic) for 10-14 days. Cell lines are screened for hybrid polypeptide expression using ELISA or Western blot, and high expression cell lines are propagated for large scale growth.

형질전환된 세포는 장기간 고수율 단백질 생성을 위해 사용하는 것이 바람직하고, 따라서 안정적인 발현이 바람직하다. 일단 이러한 세포가 원하는 발현 카세트와 함께 선별가능한 마커를 함유하는 벡터로 형질전환되면, 선별 배지로 교체하기 전에 세포를 영양강화 배지 내에서 1일 내지 2일 동안 성장시킬 수 있다. 선별가능한 마커는 선별을 위한 내성을 부여하도록 디자인되고, 그의 존재는 도입된 서열을 성공적으로 발현하는 세포의 성장 및 회수를 허용한다. 안정적으로 형질전환된 세포의 내성 응집체를 세포에 적절한 조직 배양 기술을 사용하여 증식시킬 수 있다.Transformed cells are preferably used for long-term high yield protein production, and stable expression is therefore desirable. Once these cells are transformed into vectors containing selectable markers with the desired expression cassette, the cells can be grown for 1-2 days in nutrient-enriched media before replacement with the selection medium. Selectable markers are designed to confer resistance to selection, and their presence permits the growth and recovery of cells that successfully express the introduced sequence. Resistant aggregates of stably transformed cells can be propagated to cells using appropriate tissue culture techniques.

재조합 단백질 생성을 위해 형질전환된 세포를 회수하는데에는 수많은 선별 시스템을 사용할 수 있다. 이러한 선별 시스템으로는 각각 tk-, hgprt- 또는 aprt- 세포 중에서의 HSV 티미딘 키나제, 히포크산틴-구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 및 아데닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 유전자 등이 있으나 이에 제한되지 않는다. 또한, 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여하는 dhfr, 미코페놀산에 대한 내성을 부여하는 gpt, 아미노글리코시드 G418에 대한 내성을 부여하고 또한 클로르술푸론에 대한 내성을 부여하는 neo, 및 히그로마이신에 대한 내성을 부여하는 hygro에 대한 선별의 기초로서 항-대사물질 내성을 이용할 수 있다. 유용할 수 있는 추가의 선별가능한 유전자는, 세포가 트립토판 대신 인돌을 이용하도록 하는 trpB, 또는 세포가 히스티딘 대신 히스티놀을 이용하도록 하는 hisD를 포함한다. 형질전환체의 확인을 위한 시각적 표시를 제공하는 마커는 안토시아닌, β-글루쿠로니다제 및 그의 기질 GUS, 및 루시퍼라제 및 그의 기질 루시페린을 포함한다. A number of screening systems can be used to recover transformed cells for recombinant protein production. Such screening systems include, but are not limited to, HSV thymidine kinase, hippocatin-guanine phosphoribosyl transferase and adenine phosphoribosyl transferase genes in tk-, hgprt-, or aprt-cells, respectively. In addition, it is also known that dhfr conferring resistance to methotrexate, gpt conferring resistance to mycophenolic acid, neo imparting resistance to aminoglycoside G418 and conferring tolerance to chlorsulfuron, and hygromycin Anti-metabolite tolerance can be used as a basis for screening for resistance to hygro. Additional selectable genes that may be useful include trpB, which allows cells to use indole instead of tryptophan, or hisD, which allows cells to use histinol instead of histidine. Markers that provide a visual indication for identification of transformants include anthocyanin, beta -glucuronidase and its substrate GUS, and luciferase and its substrate luciferin.

본 발명의 많은 하이브리드 폴리펩티드는 자동화 펩티드 합성 및 재조합 기술의 조합을 이용하여 생성할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 결실, 치환 및 삽입을 비롯한 변형과 PEG화 반응의 조합을 함유할 수 있다. 이러한 하이브리드 폴리펩티드 단계별로 생성할 수 있다. 제1 단계에서, 결실, 치환, 삽입, 및 이들의 임의의 조합의 변형을 함유하는 중간체 폴리펩티드를 기재한 바와 같은 재조합 기술로 생성할 수 있다. 이어서, 본원에 기재한 바와 같은 임의의 정제 단계 후에 중간체 폴리펩티드를 적절한 PEG화 시약 (예를 들어 넥타르 테라퓨틱스(Nektar Therapeutics), 미국 캘리포니아주 산 카를로스 소재)로부터)을 사용하는 화학적 변형을 통해 PEG화시켜 원하는 하이브리드 폴리펩티드를 수득한다. 당업자는 상기한 절차가 결실, 치환, 삽입, 유도체화로부터 선택된 변형, 및 당업계에 공지되어 있고 본 발명에서 고려되는 다른 변형 수단의 조합을 함유하는 하이브리드 폴리펩티드에 적용하기 위해 일반화될 수 있음을 인지할 것이다. Many of the hybrid polypeptides of the present invention can be generated using a combination of automated peptide synthesis and recombinant techniques. For example, the hybrid polypeptides of the invention may contain a combination of modifications and PEGylation reactions, including deletion, substitution, and insertion. These hybrid polypeptides can be generated stepwise. In the first step, the intermediate polypeptides containing deletions, substitutions, insertions, and variants of any combination thereof may be generated by recombinant techniques as described. Subsequently, after any purification step as described herein, the intermediate polypeptides can be chemically modified using suitable PEGylation reagents (e.g., from Nektar Therapeutics, Carlsbos, California, USA) PEGylation to obtain the desired hybrid polypeptide. Those skilled in the art will recognize that the above procedures can be generalized for application to hybrid polypeptides containing deletion, substitution, insertion, variants selected from derivatization, and combinations of other variants of the methods known in the art and contemplated in the present invention something to do.

본 발명에 의해 생성된 하이브리드 폴리펩티드를 정제하는 것이 바람직할 수 있다. 펩티드 정제 기술은 당업자에게 공지되어 있다. 이들 기술은 한 수준에서, 세포 환경의 폴리펩티드 및 비-폴리펩티드 분획으로의 조질 분획화를 포함한다. 폴리펩티드를 다른 단백질로부터 분리시키면, 관심 폴리펩티드를 크로마토그래피 및 전기영동 기술을 이용하여 추가로 정제하여 부분 또는 완전 정제 (또는 균질상태(homogeneity)로 정제)를 달성할 수 있다. 순수한 펩티드의 제조에 특히 적합한 분석 방법은 이온-교환 크로마토그래피, 배제 크로마토그래피, 폴리아크릴아미드 겔 전기영동, 및 등전점 전기이동(isoelectric focusing)이다. 펩티드 정제의 특히 효율적인 방법은 역상 HPLC를 수행한 후에 액체 크로마토그래피/질량 분광분석법 (LC/MS) 및 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화법(Matrix-Assisted Laser Desorption Ionization, MALDI) 질량 분광분석법으로 정제된 생성물을 특징 규명하는 것이다. 추가의 순도 확인은 아미노산 분석 결정으로 얻어진다. It may be desirable to purify the hybrid polypeptides produced by the present invention. Peptide purification techniques are known to those skilled in the art. These techniques, at one level, include crude fractionation into cellular and non-polypeptide fractions. Upon separation of the polypeptide from other proteins, the polypeptide of interest may be further purified using chromatography and electrophoresis techniques to achieve partial or complete purification (or purification to homogeneity). Particularly suitable analytical methods for the preparation of pure peptides are ion-exchange chromatography, exclusion chromatography, polyacrylamide gel electrophoresis, and isoelectric focusing. Particularly efficient methods of peptide purification include purification of the purified product by liquid chromatography / mass spectrometry (LC / MS) and matrix assisted laser desorption ionization (MALDI) mass spectrometry after reverse phase HPLC It is to characterize. Additional purity confirmation is obtained by amino acid analysis.

본 발명의 특정 측면은 코딩된 단백질 또는 펩티드의 정제, 및 특정 실시양태에서는 실질적인 정제에 관한 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "정제된 펩티드"는 다른 성분으로부터 단리가능한 조성물을 지칭하고자 하는 것이고, 여기서의 펩티드는 자연계에서 입수가능한 상태에 비해 임의의 정도로 정제된 것이다. 따라서, 정제된 펩티드는 또한 자연계에서 발생할 수 있는 환경으로부터 유리된 펩티드를 지칭한다. Certain aspects of the invention relate to the purification of a coded protein or peptide, and in certain embodiments, substantial purification. As used herein, the term "purified peptide" is intended to refer to a composition that can be isolated from other components, wherein the peptide is purified to any degree relative to the state available in nature. Thus, purified peptides also refer to peptides liberated from the environment that may occur in nature.

일반적으로, "정제된"은 다양한 다른 성분이 제거되도록 분획화되고, 실질적으로 그의 발현된 생물학적 활성을 보유하는 펩티드 조성물을 지칭한다. 용어 "실질적으로 정제된"이 사용되는 경우, 이러한 표현은 해당 펩티드가 조성물의 주성분을 형성하여, 예를 들어 펩티드가 약 50％, 약 60％, 약 70％, 약 80％, 약 90％, 약 95％ 이상을 구성하는 조성물을 지칭한다.In general, "purified" refers to a peptide composition that is fractionated to remove various other components and retains substantially its expressed biological activity. When used herein, the term "substantially purified " is used to indicate that the peptide forms a major component of the composition such that the peptide has about 50%, about 60%, about 70%, about 80% Gt; 95% < / RTI > by weight of the composition.

펩티드 정제에 사용하기에 적합한 다양한 기술은 당업자에게 공지되어 있을 것이다. 이들 기술은 예를 들어 황산암모늄, PEG, 항체 등을 사용하는 침전; 열 변성 및 이후의 원심분리; 크로마토그래피 단계, 예를 들어 이온 교환, 겔 여과, 역상, 히드록실아파티트 및 친화도 크로마토그래피; 등전점 전기이동; 겔 전기영동; 이러한 기술 및 다른 기술의 조합을 포함한다. 당업계에 일반적으로 공지된 바와 같이, 다양한 정제 단계를 수행하는 순서는 변화될 수도 있고 또는 특정 단계가 생략될 수도 있으며, 여전히 실질적으로 정제된 단백질 또는 펩티드의 제조에 적합한 방법을 생성시킬 것으로 여겨진다. Various techniques suitable for use in peptide purification will be known to those skilled in the art. These techniques include, for example, precipitation using ammonium sulphate, PEG, antibodies, etc.; Thermal denaturation and subsequent centrifugation; Chromatography steps such as ion exchange, gel filtration, reverse phase, hydroxylapatite and affinity chromatography; Isoelectric point transfer; Gel electrophoresis; These and other combinations of techniques are included. As is generally known in the art, the order of performing the various purification steps may be varied, or certain steps may be omitted, and still generate a process that is suitable for the production of substantially purified proteins or peptides.

펩티드가 언제나 최상의 정제 상태로 제공된다는 일반적인 요건은 존재하지 않는다. 실제로는, 실질적으로 덜 정제된 생성물이 특정 실시양태에서 유용할 것으로 고려된다. 부분 정제는 더 적은 정제 단계를 조합하여 사용함으로써, 또는 동일한 일반적인 정제 방식을 상이한 형태로 사용함으로써 달성할 수 있다. 예를 들어, HPLC 장치를 이용하여 수행된 양이온-교환 컬럼 크로마토그래피는 일반적으로 저압 크로마토그래피 시스템을 이용하는 동일한 기술보다 더 큰 "-배수" 정제를 생성하는 것으로 이해된다. 상대적인 정제 정도가 더 낮은 방법은 단백질 생성물의 전체 회수 또는 발현된 단백질 활성의 유지에 있어서 유리할 수 있다. There is no general requirement that peptides are always provided in the best purified state. In practice, substantially less purified products are contemplated as being useful in certain embodiments. Partial purification can be achieved by using less purification steps in combination, or by using the same general purification method in different forms. For example, cation-exchange column chromatography performed using an HPLC apparatus is generally understood to produce larger "-drain" tablets than the same technique using a low pressure chromatography system. A lower degree of relative purification may be advantageous in the overall recovery of the protein product or in maintaining the expressed protein activity.

임의로, 이러한 하이브리드 폴리펩티드를 공정에서 수득된 다른 성분으로부터 정제하고 단리할 수 있다. 폴리펩티드의 정제 방법은 미국 특허 제5,849,883호에서 찾을 수 있다. 상기 문헌은 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드를 단리하고 정제하는데 유용할 수 있는 G-CSF 조성물의 단리 및 정제를 위한 구체적인 예시 방법을 기재한다. 상기 특허의 개시내용으로부터, 당업자는 주어진 공급원으로부터 하이브리드 폴리펩티드를 정제하는데 사용할 수 있는 수많은 정제 기술을 잘 알 것임이 명백하다. Optionally, such hybrid polypeptides can be purified and isolated from other components obtained in the process. A method for purifying a polypeptide can be found in U.S. Patent No. 5,849,883. This document describes specific exemplary methods for the isolation and purification of G-CSF compositions that may be useful for isolating and purifying the hybrid polypeptides of the invention. From the teachings of the patent, it is clear that the skilled artisan will be aware of numerous refinement techniques that can be used to purify hybrid polypeptides from a given source.

또한, 음이온 교환 및 면역친화도 크로마토그래피의 조합이 본 발명의 정제된 하이브리드 폴리펩티드 조성물을 생성하는데 사용될 수 있음이 고려된다. It is also contemplated that a combination of anion exchange and immunoaffinity chromatography may be used to produce the purified hybrid polypeptide compositions of the present invention.

제약 조성물Pharmaceutical composition

본 발명은 또한 치료 또는 예방 유효량의 본 발명의 1종 이상의 하이브리드 폴리펩티드, 또는 그의 제약상 허용가능한 염을 하이브리드 폴리펩티드의 전달에 유용한 제약상 허용가능한 희석제, 보존제, 가용화제, 유화제, 보조제 및/또는 담체와 함께 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다. 이러한 조성물은 다양한 완충액 내용물 (예를 들어 Tris-HCl, 아세테이트, 인산염), pH 및 이온 강도의 희석제; 첨가제, 예를 들어 세정제 및 가용화제 (예를 들어 트윈 80(Tween 80), 폴리소르베이트 80(Polysorbate 80)), 항-산화제 (예를 들어 아스코르브산, 나트륨 메타비술파이트), 보존제 (예를 들어 티메르솔, 벤질 알콜), 및 증량제 (예를 들어 락토스, 만니톨)을 포함할 수 있고, 물질은 중합성 화합물, 예를 들어 폴리락트산, 폴리글리콜산 등의 미립자 제제 내로 혼입되거나 리포좀과 함께 혼입될 수 있다. 이러한 조성물은 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드의 물리적인 상태, 안정성, 생체내 방출 속도, 및 생체내 제거율에 영향을 미칠 것이다 (예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 1435-712, 18th ed., Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania (1990)] 참조). The invention also relates to a pharmaceutical composition comprising a therapeutically or prophylactically effective amount of one or more hybrid polypeptides of the invention, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, in combination with a pharmaceutically acceptable diluent, preservative, solubilizer, emulsifier, adjuvant and / &Lt; / RTI > Such compositions may include diluents of various buffer contents (e.g., Tris-HCl, acetate, phosphate), pH and ionic strength; Additives such as detergents and solubilizers (e.g. Tween 80, Polysorbate 80), anti-oxidants (e.g. ascorbic acid, sodium metabisulfite), preservatives (E.g., thimerosol, benzyl alcohol), and extenders (e.g., lactose, mannitol), and the material may be incorporated into a particulate formulation such as a polymeric compound, for example, polylactic acid, polyglycolic acid, Can be incorporated. Such compositions will affect the physical state, stability, rate of in vivo release, and rate of in vivo clearance of the hybrid polypeptides of the invention (see, for example, Remington's Pharmaceutical Sciences 1435-712, 18th ed., Mack Publishing Co.). , Easton, Pennsylvania (1990)).

일반적으로, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 개별 성분 폴리펩티드가 그의 약리 특성 면에서 유용한 것과 동일한 방식으로 유용할 것이다. 바람직한 용도 중 하나는 대사 질환 및 장애의 치료 또는 예방을 위해 이러한 하이브리드 폴리펩티드를 말초 투여하는 것이다. 특히, 본 발명의 화합물은 영양분 이용률을 감소시키고, 음식물 섭취를 감소시키고, 식욕을 저해하며, 체중 감소를 일으키기 위한 작용제로서의 활성을 갖는다. 또다른 실시양태에서, 바람직한 용도는 당뇨병 또는 당뇨병-관련 상태 및 장애의 치료를 위해 이러한 하이브리드 폴리펩티드를 투여하는 것이다. In general, the hybrid polypeptides of the invention will be useful in the same manner as the individual component polypeptides are useful in their pharmacological properties. One of the preferred uses is for the peripheral administration of such hybrid polypeptides for the treatment or prevention of metabolic diseases and disorders. In particular, the compounds of the present invention have activity as agents for reducing nutrient utilization, reducing food intake, inhibiting appetite, and causing weight loss. In another embodiment, a preferred use is to administer such a hybrid polypeptide for the treatment of diabetes or diabetes-related conditions and disorders.

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 주사, 경구 투여, 비측 투여, 폐 투여, 국소 투여, 또는 당업자가 인지하는 다른 유형의 투여를 위한 제형을 포함하여, 말초 투여를 위해 제제화할 수 있다. 더욱 특히, 본 발명에 따른 제약 조성물의 투여는, 표적 조직이 이용가능하기만 하다면 어떠한 일반적인 경로로도 이루어질 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 제약 조성물은 대상체에게 임의의 통상적인 말초 방법에 의해, 예를 들어 정맥내, 피내, 근육내, 유방내, 복강내, 경막내, 안구후, 폐내 (예를 들어 기간 방출), 경구, 설하, 비측, 항문, 질 또는 경피 전달, 또는 특정 부위에서의 수술적 이식에 의해 도입될 수 있다. 처치는 단일 투여 또는 시간에 따른 복수의 투여로 이루어질 수 있다. 본 발명의 조성물의 제어된 지속 방출도 고려된다. The hybrid polypeptides of the invention may be formulated for peripheral administration, including formulations for injection, oral administration, nasal administration, pulmonary administration, topical administration, or other types of administration as would be appreciated by those skilled in the art. More particularly, the administration of a pharmaceutical composition according to the present invention can be by any conventional route as long as the target tissue is available. In a preferred embodiment, the pharmaceutical composition is administered to a subject by any conventional peripheral means, for example, intravenously, intradermally, intramuscularly, intramammary, intraperitoneally, intrathecally, , Oral, sublingual, nasal, anal, vaginal or transdermal delivery, or by surgical implantation at a particular site. The treatment may consist of a single dose or multiple administrations over time. Controlled sustained release of the compositions of the present invention is also contemplated.

제제는 액체일 수도 있고 또는 고체일 수도 있으며, 예를 들어 재구성을 위해 동결건조될 수 있다. 본 발명의 수성 조성물은 제약상 허용가능한 담체 또는 수성 매질에 용해되거나 분산된 유효량의 하이브리드 폴리펩티드를 포함한다. 어구 "제약상 또는 약리상 허용가능한"은 동물 또는 인간에게 투여될 때 유해하거나, 알러지 또는 다른 부적당한 반응을 일으키지 않는 분자적 실체 및 조성물을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "제약상 허용가능한 담체"는 임의의 모든 용매, 분산 매질, 코팅제, 항균제 및 항진균제, 등장화제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 제약상 활성 물질을 위한 이러한 매질 및 작용제의 사용은 당업계에 공지되어 있다. 임의의 통상적인 매질 또는 작용제가 활성 성분과 불혼화성인 경우를 제외하고는, 치료 조성물에서 그의 사용이 고려된다. 보충적 활성 성분도 조성물 내에 혼입시킬 수 있다. 일부 경우에, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드 및 또다른 음식물 섭취의 감소제, 당뇨병 치료제, 혈장 글루코스 저하제 또는 혈장 지질 변경제, 예를 들어 아밀린, 아밀린 효능제 유사체, CCK 또는 CCK 효능제, 또는 렙틴 또는 렙틴 효능제, 또는 엑센딘 또는 엑센딘 효능제 유사체를 조합 투여하기 위한 단일 조성물 또는 용액으로 제공하는 것이 편리할 것이다. 다른 경우에, 추가의 작용제를 상기 하이브리드 폴리펩티드와 따로 투여하는 것이 더 유리할 수 있다. The formulations may be liquid or solid, for example, lyophilized for reconstitution. The aqueous compositions of the present invention comprise an effective amount of a hybrid polypeptide dissolved or dispersed in a pharmaceutically acceptable carrier or aqueous medium. The phrase " pharmaceutical or pharmacologically acceptable "refers to molecular entities and compositions that are detrimental when administered to an animal or human, or cause no allergic or other untoward reaction. As used herein, "pharmaceutically acceptable carrier" includes any and all solvents, dispersion media, coatings, antibacterial and antifungal agents, isotonic and absorption delaying agents and the like. The use of such media and agents for pharmaceutically active substances is well known in the art. Except insofar as any conventional media or agent is incompatible with the active ingredient, its use in the therapeutic compositions is contemplated. Supplementary active ingredients may also be incorporated into the compositions. In some cases, the inventive hybrid polypeptides and other food intake reducers, diabetic therapeutic agents, plasma glucose lowering agents or plasma lipid modifying agents such as amylin, amylin agonist analogs, CCK or CCK agonists, or leptin Or a single composition or solution for the combined administration of a leptin agonist, or exendin or exendin agonist analog. In other cases, it may be more advantageous to administer the additional agent separately from the hybrid polypeptide.

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 계면활성제, 예를 들어 히드록시프로필셀룰로스와 적합하게 혼합된 물 중 유리 염기 또는 약리상 허용가능한 염의 용액으로서 투여용으로 제조할 수 있다. 제약상 허용가능한 염은 무기산, 예를 들어 염산 또는 인산, 또는 유기산, 예를 들어 아세트산, 옥살산, 타르타르산, 만델산 등을 사용하여 형성된 산 부가염 (단백질의 유리 아미노기를 갖고 형성됨)을 포함한다. 유리 카르복실기를 갖고 형성된 염은 또한 무기 염기, 예를 들어 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘 또는 철 수산화물, 및 유기 염기, 예를 들어 이소프로필아민, 트리메틸아민, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유래될 수 있다. 이러한 생성물은 당업자에게 공지된 절차에 의해 쉽게 제조된다. 분산액은 또한 글리세롤, 액체 폴리에틸렌 글리콜 및 그의 혼합물 및 오일 중에서 제조될 수도 있다. 통상의 저장 및 사용 조건하에, 이들 제제는 미생물 성장 방지를 위한 보존제를 함유한다. The hybrid polypeptides of the present invention may be formulated for administration as a solution of a free base or a pharmacologically acceptable salt in water suitably mixed with a surfactant, for example, hydroxypropylcellulose. Pharmaceutically acceptable salts include acid addition salts formed with inorganic acids such as hydrochloric or phosphoric acids, or with organic acids such as acetic acid, oxalic acid, tartaric acid, mandelic acid and the like (formed with free amino groups of the protein). Salts formed with free carboxyl groups can also be derived from inorganic bases such as sodium, potassium, ammonium, calcium or iron hydroxides and organic bases such as isopropylamine, trimethylamine, histidine, procaine and the like. These products are readily prepared by procedures known to those skilled in the art. Dispersions may also be prepared in glycerol, liquid polyethylene glycols and mixtures thereof and oils. Under ordinary conditions of storage and use, these preparations contain a preservative for the prevention of microbial growth.

한 실시양태에서, 본 발명의 제약 조성물은 예를 들어 주사 또는 주입을 통한 비경구 투여에 적합하도록 제제화된다. 바람직하게는, 하이브리드 폴리펩티드는 수성 담체 내에, 예를 들어 pH 약 3.0 내지 약 8.0, 바람직하게는 pH 약 3.5 내지 약 7.4, 3.5 내지 6.0 또는 3.5 내지 약 5.0의 등장성 완충 용액 중에 현탁된다. 유용한 완충액은 시트르산나트륨-시트르산 및 인산나트륨-인산, 및 아세트산나트륨/아세트산 완충액을 포함한다. 저장소 또는 "저장부" 서방형 제제 형태가 사용되어, 치료 유효량의 제제를 경피 주사 또는 전달 후 수시간 또는 수일에 걸쳐 혈류 내로 전달할 수 있다. In one embodiment, the pharmaceutical compositions of the present invention are formulated to be suitable for parenteral administration, e. G. By injection or infusion. Preferably, the hybrid polypeptide is suspended in an aqueous carrier, for example, in an isotonic buffer solution having a pH of about 3.0 to about 8.0, preferably a pH of about 3.5 to about 7.4, 3.5 to 6.0, or 3.5 to about 5.0. Useful buffer solutions include sodium citrate-citric acid and sodium phosphate-phosphoric acid, and sodium acetate / acetic acid buffer. A depot or "reservoir" sustained release dosage form may be used to deliver a therapeutically effective amount of the formulation into the bloodstream for several hours or days after percutaneous injection or delivery.

주사용으로 적합한 제약 조성물은 멸균 수용액 또는 분산액, 및 멸균 주사가능 용액 또는 분산액의 즉석 제조를 위한 멸균 분말을 포함한다. 모든 경우에, 해당 형태는 멸균되어야 하고 용이한 주사가능성이 존재할 정도로 유동성이어야 한다. 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 제조 및 저장 조건하에 안정하고, 미생물, 예를 들어 세균 및 진균의 오염 작용으로부터 보호되어야 하는 것이 바람직하다. 담체는 예를 들어 물, 에탄올, 폴리올 (예를 들어 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 그의 적합한 혼합물, 및 식물성 오일을 함유하는 용매 또는 분산 매질일 수 있다. 적당한 유동성은 예를 들어 코팅제, 예를 들어 레시틴의 사용에 의해, 분산액의 경우에는 요구되는 입도의 유지에 의해, 및 계면활성제의 사용에 의해 유지될 수 있다. 미생물 작용의 방지는 다양한 항균제 및 항진균제, 예를 들어 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르브산, 티메로살 등에 의해 달성할 수 있다. 많은 경우에, 등장화제 (예를 들어 당 또는 염화나트륨)을 포함시키는 것이 바람직할 것이다. 주사가능 조성물의 장기간 흡수는 흡수를 지연시키는 작용제 (예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 및 젤라틴)를 조성물 내에 사용함으로써 달성할 수 있다. Pharmaceutical compositions suitable for injectable use include sterile aqueous solutions or dispersions and sterile powders for the extemporaneous preparation of sterile injectable solutions or dispersions. In all cases, the form must be sterile and fluid to the extent that easy injectability exists. It is preferred that the hybrid polypeptides of the invention are stable under the conditions of manufacture and storage and must be protected from the contaminating action of microorganisms such as bacteria and fungi. The carrier may be, for example, a solvent or dispersion medium containing water, ethanol, a polyol (such as glycerol, propylene glycol and liquid polyethylene glycol, etc.), suitable mixtures thereof, and vegetable oils. Proper fluidity can be maintained, for example, by the use of coating agents such as lecithin, by the maintenance of the required particle size in the case of dispersions, and by the use of surfactants. Prevention of microbial action can be achieved by various antibacterial and antifungal agents, for example, parabens, chlorobutanol, phenol, sorbic acid, thimerosal, and the like. In many cases, it will be desirable to include isotonic agents (e. G., Sugars or sodium chloride). Prolonged absorption of the injectable composition can be achieved by using an agent (e.g., aluminum monostearate and gelatin) that slows the absorption in the composition.

멸균 주사가능 용액은 요구되는 양의 활성 화합물을 적절한 용매에, 필요한 경우에는 상기 열거한 다양한 다른 성분과 함께 혼입시킨 후, 멸균 여과하여 제조할 수 있다. 일반적으로, 분산액은 다양한 멸균된 활성 성분을 염기성 분산 매질 및 상기 열거한 것 중의 요구되는 다른 성분을 함유하는 멸균 비히클 중에 혼입시켜 제조한다. 멸균 주사가능 용액을 제조하기 위한 멸균 분말의 경우에 바람직한 제조 방법은, 미리 멸균 여과된 용액으로부터 활성 성분 + 임의의 추가의 원하는 성분의 분말을 수득하는 진공 건조 및 동결 건조 기술이다. Sterile injectable solutions may be prepared by incorporating the active compound in the required amount in the appropriate solvent, if necessary, with the various other ingredients enumerated above, followed by sterile filtration. Generally, dispersions are prepared by incorporating the various sterilized active ingredients into a sterile vehicle containing the basic dispersion medium and the other ingredients required in those enumerated above. In the case of sterile powders for the preparation of sterile injectable solutions, the preferred preparation method is a vacuum drying and freeze drying technique which yields a powder of the active ingredient + any additional desired ingredient from a previously sterile-filtered solution.

일반적으로, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드의 치료 또는 예방 유효량은 수용자의 연령, 체중, 및 상태 또는 질환, 상태 또는 장애의 중증도에 따라 결정될 것이다. 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 697-773]을 참조한다. 또한, 문헌 [Wang and Hanson, Parenteral Formulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers, Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No. 10, Supp. 42:2S (1988)]도 참조한다. 전형적으로, 체중 1 kg 당 약 0.001 ㎍/일 내지 약 1000 ㎍/일의 투여량이 사용될 수 있지만, 당업자가 인지할 바와 같이 더 많거나 더 적은 양이 사용될 수도 있다. 투여는 매일 1회 이상일 수도 있고, 또는 덜 빈번할 수도 있으며, 본원에 기재한 바와 같이 다른 조성물과 조합 투여할 수도 있다. 본 발명은 본원에 기술된 투여량에 제한되지 않음을 이해해야 한다. In general, the therapeutically or prophylactically effective amount of the hybrid polypeptides of the invention will be determined by the age, weight, and condition of the recipient, or the severity of the disease, condition, or disorder. See, e.g., Remington's Pharmaceutical Sciences 697-773. Also, Wang and Hanson, Parenteral Formulations of Proteins and Peptides: Stability and Stabilizers, Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No. 10, Supp. 42: 2S (1988). Typically, doses of from about 0.001 [mu] g / day to about 1000 [mu] g / day per kg of body weight may be used, although more or less amounts may be used as will be appreciated by those skilled in the art. The administration may be one or more times daily, or may be less frequent, and may be combined with other compositions as described herein. It is to be understood that the invention is not limited to the dosages set forth herein.

적절한 투여량은 관련 투여량-반응 데이타와 함께 대사 상태 또는 장애의 수준을 결정하기 위한 확립된 검정을 이용하여 확정할 수 있다. 최종 투약법은 약물의 작용을 변형시키는 인자, 예를 들어 약물의 구체적인 활성, 손상의 중증도 및 환자의 반응, 환자의 연령, 상태, 체중, 성별 및 식이, 임의의 감염의 중증도, 투여 시간 및 기타 임상적 요인을 고려하여 담당의사가 결정할 것이다. 연구가 수행됨에 따라, 구체적인 질환 및 상태에 대한 적절한 투여량 수준 및 처치 지속 기간에 관한 추가의 정보를 알게 될 것이다. Appropriate dosages can be determined using established assays to determine the level of metabolic status or disorder with the relevant dose-response data. The final dosage regimen will depend on factors that modulate the action of the drug, such as the specific activity of the drug, the severity of the damage and the response of the patient, the age, condition, weight, sex and diet of the patient, the severity of any infection, Your doctor will decide on the clinical factors. As the study is carried out, you will find additional information on the appropriate dose level and duration of treatment for the specific disease and condition.

유효 투여량은 단일 또는 분할 투여량으로 투여되는 50 kg 환자의 경우에 전형적으로 약 1 내지 30 ㎍ 내지 약 5 mg/일, 바람직하게는 약 10 내지 30 ㎍ 내지 약 2 mg/일, 더욱 바람직하게는 약 5 내지 100 ㎍ 내지 약 1 mg/일, 가장 바람직하게는 약 5 ㎍ 내지 약 500 ㎍/일일 것이다. 바람직하게는, 투여량은 1회 투여 당 약 0.01 내지 약 100 ㎍/kg이다. 투여될 정확한 투여량은 당업자가 결정할 수 있고 특정 화합물의 효력, 및 개인의 연령, 체중 및 상태에 따라 달라진다. 투여는 예를 들어 영양분 이용률 저해, 음식물 섭취 저해, 체중 증가 저해, 혈중 글루코스 또는 혈장 지질 조정을 원할 때마다, 예를 들어 증상의 제1 징후에서 또는 비만, 진성 당뇨병, 또는 인슐린 내성 증후군의 진단후 곧 시작해야 한다. 투여는 임의의 경로, 예를 들어 주사, 바람직하게는 피하 또는 근육내, 경구, 비측, 경피 등으로 이루어질 수 있다. 특정 경로, 예를 들어 경구 투여에 대한 투여량은 감소된 생체이용률을 고려하여 예를 들어 약 5배 내지 100배 증가될 수 있다. Effective doses will typically be from about 1 to 30 [mu] g to about 5 mg / day, preferably from about 10 to 30 [mu] g to about 2 mg / day for a 50 kg patient to be administered in single or divided doses, Will range from about 5 to 100 [mu] g to about 1 mg / day, most preferably from about 5 [mu] g to about 500 [mu] g / day. Preferably, the dosage is from about 0.01 to about 100 [mu] g / kg per dose. The exact dosage to be administered will depend on the age and weight and condition of the individual, as determined by those skilled in the art, and the efficacy of the particular compound. Administration may be used, for example, whenever desired to inhibit nutrient utilization, inhibit food intake, inhibit weight gain, adjust blood glucose or plasma lipid levels, for example, in the first indication of symptoms or in the treatment of obesity, diabetes mellitus, or diagnosis of insulin resistance syndrome We should start soon. Administration may be by any route, for example injection, preferably subcutaneous or intramuscular, oral, nasal, transdermal, and the like. The dosage for a particular route, e. G., Oral administration, may be increased, for example, by about 5-fold to 100-fold, taking into account the reduced bioavailability.

비경구 투여는 약품의 치료적 순환 수준을 유지하기 위해 초기 볼루스(bolus)에 이은 연속 주입으로 수행될 수 있다. 당업자는 우수 의료 실무 및 개별 환자의 임상 상태에 의해 결정되는 바와 같은 유효 투여량 및 투약법을 쉽게 최적화할 것이다. Parenteral administration may be performed with an initial bolus followed by a continuous infusion to maintain the therapeutic circulation level of the drug. Those skilled in the art will readily optimize effective dosages and dosages as determined by good clinical practice and the clinical condition of the individual patient.

투여 빈도는 작용제의 약력학적 파라미터 및 투여 경로에 따라 달라질 것이다. 최적의 제약 제형은 당업자가 투여 경로 및 원하는 투여량에 따라 결정할 것이다. 예를 들어 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 상기 문헌, pages 1435-1712]을 참조한다. 이러한 제형은 투여된 작용제의 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출 속도 및 생체내 제거율에 영향을 미칠 수 있다. 투여 경로에 따라, 적합한 투여량은 체중, 체표면적 또는 기관 크기에 따라 계산될 수 있다. 적절한 치료 투여량을 결정하기 위해 필요한 계산의 추가의 상세화는 특히 본원에 개시된 투여량 정보 및 검정, 및 동물 또는 인간 임상 시험에서 관찰된 약력학 데이타의 측면에서 불필요한 실험 없이 당업자가 일상적으로 수행할 수 있다. The frequency of administration will depend on the pharmacodynamic parameters of the agonist and the route of administration. The optimal pharmaceutical formulations will be determined by those skilled in the art depending on the route of administration and the desired dosage. See, e.g., Remington's Pharmaceutical Sciences, supra, pages 1435-1712. Such formulations may affect the physical state, stability, rate of in vivo release and rate of in vivo clearance of the administered agent. Depending on the route of administration, suitable dosages can be calculated according to body weight, body surface area or organ size. Further elaboration of the calculations necessary to determine the appropriate therapeutic dose can be routinely performed by those skilled in the art without undue experimentation, particularly in view of the dosage information and assays disclosed herein and the pharmacokinetic data observed in animal or human clinical trials .

본 발명의 제약 조성물 및 치료 방법은 인간 의약 및 수의학 의약의 영역에서 유용할 수 있음이 이해될 것이다. 따라서, 치료하고자 하는 대상체는 포유동물, 바람직하게는 인간 또는 다른 동물일 수 있다. 수의학적 목적에서, 대상체는 가축, 예를 들어 소, 양, 돼지, 말 및 염소, 애완 동물, 예를 들어 개 및 토끼, 외국 및/또는 동물원 동물, 실험실 동물, 예를 들어 마우스, 래트, 토끼, 기니아 피그 및 햄스터, 및 가금류, 예를 들어 닭, 칠면조, 오리 및 거위를 포함한다. It will be appreciated that the pharmaceutical compositions and methods of treatment of the present invention may be useful in the areas of human and veterinary medicine. Thus, the subject to be treated may be a mammal, preferably a human or other animal. For veterinary purposes, the subject may be a mammal such as a domestic animal, such as a cow, a sheep, a pig, a horse and a goat, a pet, such as a dog and a rabbit, a foreign and / Guinea pigs and hamsters, and poultry such as chickens, turkeys, ducks and geese.

또한, 본 발명은 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드, 제약 용도를 위해 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드를 제조하는데 적합한 성분, 및 제약 용도를 위해 상기 하이브리드 폴리펩티드 및 성분을 사용하기 위한 지침서를 포함하는 키트를 고려한다. The invention also contemplates kits comprising the hybrid polypeptides of the invention, components suitable for producing the hybrid polypeptides of the invention for pharmaceutical use, and instructions for using the hybrid polypeptides and components for pharmaceutical applications.

본 발명의 이해를 돕기 위해, 하기 실시예를 포함시켰다. 본 발명에 관한 실험은 물론 본 발명을 구체적으로 제한하는 것으로 해석되어서는 안되고, 당업자의 범위 내에 있는 현재 알려져 있거나 나중에 개발될 본 발명의 변형은 본원에 기재되고 뒤쪽에서 특허 청구되는 본 발명의 범위 내에 속하는 것으로 간주된다.For better understanding of the present invention, the following examples were included. Experiments of the present invention should of course not be construed as specifically limiting the present invention and modifications of the presently known or later developed invention which are within the scope of those skilled in the art are within the scope of the present invention described herein and claimed below Are considered to belong.

본 발명은, 본 발명을 더 충분히 예시하기 위해 제공되지만 본 발명의 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안되는 하기 비-제한적인 실시예를 언급하며 더 상세하게 설명된다. 실시예는 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드의 제조, 및 본 발 명의 이들 하이브리드 폴리펩티드의 시험관내 및/또는 생체내 시험을 예시한다. 당업자는 이들 실시예에 설명된 기술이 본 발명의 실시에 잘 기능하는, 본 발명자들에 의해 설명된 기술을 대표하고, 따라서 본 발명의 실시를 위한 바람직한 방식을 구성함을 이해할 것이다. 그러나, 당업자는 본 발명의 사상과 범위로부터 벗어나지 않으면서 본 명세서에서 개시된 구체적인 방법에서 많은 변화가 이루어질 수 있고 여전히 비슷하거나 유사한 결과를 얻을 것임을 이해할 것임을 인지해야 한다. The present invention is described more fully hereinafter with reference to the following non-limiting examples, which are provided to more fully illustrate the present invention but should not be construed as limiting the scope of the invention. Examples illustrate the preparation of the hybrid polypeptides of the present invention and in vitro and / or in vivo tests of these hybrid polypeptides of the present invention. Those skilled in the art will understand that the techniques described in these embodiments represent the techniques described by the inventors, which function well in the practice of the invention, and thus constitute a preferred way of practicing the invention. It should be appreciated, however, by one skilled in the art that many changes may be made in the specific methods disclosed herein without departing from the spirit and scope of the invention, and still obtain similar or similar results.

실시예Example 1: One: 하이브리드hybrid 폴리펩티드 제조 Polypeptide manufacture

본 발명의 펩티드는 0.050 내지 0.100 mmol에서 0.43 내지 0.49 mmol/g으로 로딩한 링크(Rink) 아미드 수지 (노바바이오켐(Novabiochem)) 또는 미리-로딩된 왕(Wang) 수지 (Fmoc-Tyr(tBu)-왕 수지) 0.63 mmol/g (노바바이오켐)를 사용하여 심포니(Symphony) 펩티드 합성기 (프로테인 테크놀로지스, 인크.(Protein Technologies, Inc.)) 상에서 조립될 수 있다. Fmoc 아미노산 (5.0 당량, 0.250 내지 0.500 mmol) 잔기를 1-메틸-2-피롤리디논 중에 0.10 M의 농도로 용해시켰다. 다른 모든 시약 (HBTU, 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 및 N,N-디이소프로필에틸아민)은 0.55 M 디메틸포름아미드 용액으로서 제조하였다. 이어서, Fmoc 보호된 아미노산을 HBTU (2.0 당량, 0.100 내지 0.200 mmol), 1-히드록시벤조트리아졸 수화물 (1.8 당량, 0.090 내지 0.18 mmol), N,N-디이소프로필에틸아민 (2.4 당량, 0.120 내지 0.240 mmol)을 사용하여 2시간 동안 수지 결합된 아미노산에 커플링시켰다. 마지막 아미노산 커플링 후, 펩티드를 디메틸포름아미드 중 20％ (v/v) 피페리딘을 사용하여 1시간 동안 탈보호시켰다. 일단 펩티드 서열이 완성되면, 심포 니 펩티드 합성기가 수지를 절단하도록 프로그램시켰다. 수지로부터 펩티드의 트리플루오로아세트산 (TFA) 절단은 93％ TFA, 3％ 페놀, 3％ 물 및 1％ 트리이소프로필실란을 사용하여 1시간 동안 수행하였다. 절단된 펩티드는 tert-부틸 메틸 에테르를 사용하여 침전시키고, 원심분리하여 펠렛화하고 동결건조시켰다. 펠렛을 물 (10 mL 내지 15 mL) 중에 재용해시켜 여과하고, C18 컬럼 및 0.1％ TFA를 함유하는 아세토니트릴/물 구배를 사용하는 역상 HPLC를 통해 정제하였다.The peptides of the present invention can be prepared by reacting a Rink amide resin (Novabiochem) or a pre-loaded Wang resin (Fmoc-Tyr (tBu)) loaded at 0.050-0.100 mmol with 0.43-0.49 mmol / (Protein Technologies, Inc.) using 0.63 mmol / g (Nova Biochem) from Sigma Chemical Co.). Fmoc amino acid (5.0 equiv., 0.250-0.500 mmol) was dissolved in 1-methyl-2-pyrrolidinone at a concentration of 0.10 M. All other reagents (HBTU, 1-hydroxybenzotriazole hydrate and N, N-diisopropylethylamine) were prepared as 0.55 M dimethylformamide solution. The Fmoc protected amino acid was then reacted with HBTU (2.0 eq., 0.100-0.60 mmol), 1-hydroxybenzotriazole hydrate (1.8 eq., 0.090-0.18 mmol), N, N- diisopropylethylamine (2.4 eq. &Lt; / RTI > 0.240 mmol) was coupled to the resin bound amino acid for 2 hours. After the last amino acid coupling, the peptide was deprotected with 20% (v / v) piperidine in dimethylformamide for 1 h. Once the peptide sequence was complete, the symphony peptide synthesizer was programmed to cleave the resin. Trifluoroacetic acid (TFA) cleavage of the peptide from the resin was carried out for 1 hour using 93% TFA, 3% phenol, 3% water and 1% triisopropylsilane. The digested peptides were precipitated using tert-butyl methyl ether, pelleted by centrifugation and lyophilized. The pellet was redissolved in water (10 mL to 15 mL), filtered and purified via reverse phase HPLC using a C18 column and an acetonitrile / water gradient containing 0.1% TFA.

지방산 (예를 들어 옥탄산 및 스테아르산)을 사용하여 본 발명의 펩티드를 N-캡핑하기 위한 일반적인 절차는 다음과 같았다: 링크 아미드 수지 상의 펩티드 (0.1 mmol)를 NMP (5 mL) 중에 현탁시켰다. 별도의 바이알에서, HBTU (0.3 mmol), HOBt (0.3 mmol)을 DMF (5 mL) 중에 용해시킨 후에 DIEA (0.6 mmol)를 첨가하였다. 상기 용액을 수지에 첨가하고, 이 현탁액을 2시간 동안 진탕시켰다. 용매를 여과하여 NMP (5 mL×4) 및 CH₂Cl₂ (20 mL)로 철저하게 세척하여 건조시키고 1시간 동안 TFA 절단시켰다. 원하는 펩티드의 수득량은 절단 및 정제 후에 약 40 mg이었다. The general procedure for N-capping the peptides of the invention using fatty acids (for example octanoic acid and stearic acid) was as follows: The peptide (0.1 mmol) on the linkamide resin was suspended in NMP (5 mL). In a separate vial, HBTU (0.3 mmol), HOBt (0.3 mmol) was dissolved in DMF (5 mL) followed by DIEA (0.6 mmol). The solution was added to the resin and the suspension was shaken for 2 hours. The solvent was filtered off, washed thoroughly with NMP (5 mL x 4) and CH ₂ Cl ₂ (20 mL), dried and TFA cleaved for 1 h. The yield of the desired peptide was about 40 mg after cleavage and purification.

PEG 변형은 시판되는 활성화 PEG 에스테르를 사용하여 리신의 유리 엡실론-아미노기 또는 정제된 펩티드의 말단 아미노기에 대해 용액 중에서 수행할 수 있다. 생성되는 PEG화 유도체는 역상 HPLC에 의해 균질상태로 정제하고, 순도는 LC/MS 및 MALDI-MS로 확인하였다. PEG modification can be performed in solution for the free amino groups of the free epsilon-amino group of lysine or the purified peptide using commercially available activated PEG esters. The resulting pegylated derivatives were purified to homogeneity by reverse phase HPLC and the purity was confirmed by LC / MS and MALDI-MS.

본 발명의 특정한 예시적인 하이브리드 폴리펩티드를 하기 표 1-1에 나타내었다. 구현된 화합물에 대하여 다양한 변형, 예를 들어 화학적 변형, 예컨대 글리 코실화, PEG 변형 등; 아미노산 변형, 예컨대 치환, 삽입 및 결실 등이 실시되었다. 또한, C-말단이 아미드화된 것으로 나타냈지만, 본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 별법으로 유리 산 형태로도 존재할 수 있음이 이해된다. Specific exemplary hybrid polypeptides of the invention are shown in Table 1-1 below. Various modifications, e. G. Chemical modifications, such as glycosylation, PEG modifications, etc., to the compounds implemented; Amino acid modifications such as substitution, insertion and deletion were performed. In addition, although the C-terminal has been shown to be amidated, it is understood that the hybrid polypeptides of the present invention may alternatively exist in the free acid form.

[표 1-1][Table 1-1]

성분 펩티드 패밀리의 각종 조합을 포함하는 추가의 예시적인 하이브리드는 하기 표에 기재되어 있다. 본원에서 논의한 바와 같이, 이것들의 유사체 및 유도체 하이브리드 역시 구체적으로 고려된다. "#" 표시는 각 성분에 대한 연결 위치를 나타낸다. 나타낸 링커는 본원에 기재한 바와 같다. CCK-8은 DY(SO₃H)MGWMDF-NH₂이지만, "CCK-8^*"은 황산화된 페닐알라닌 형태 DF(CH₂SO₃H)MGWMDF-NH₂이다.

Additional exemplary hybrids, including various combinations of the component peptide families, are described in the following table. As discussed herein, their analog and derivative hybrids are also specifically contemplated. The "#" mark indicates the connection position for each component. The linkers shown are as described herein. CCK-8 is DY (SO ₃ H) MGWMDF-NH ₂ , while "CCK-8 ^* " is sulfated phenylalanine form DF (CH ₂ SO ₃ H) MGWMDF-NH ₂ .

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실시예Example 2: 결합 검정 2: Combination test

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드를 당업자에게 일반적으로 공지된 결합 검정 방법을 이용하여 다양한 수용체 결합 검정으로 시험할 수 있다. 이러한 검정은 본원에 기재한 것을 포함한다.The hybrid polypeptides of the invention can be tested in a variety of receptor binding assays using binding assays generally known to those skilled in the art. Such assays include those described herein.

아밀린 결합 검정: 아밀린 수용체에 대한 본 발명의 몇몇 예시적인 화합물의 결합 평가는 래트 뇌로부터 제조된 중격의지핵(nuclueus accumbens) 막에서 다음과 같이 수행할 수 있다. 수컷 스프라그-돌리(Sprague-Dawley)^® 래트 (200 내지 250 g)를 목을 베어 희생시켰다. 뇌를 꺼내어 차가운 인산염 완충 염수 (PBS)에 넣었다. 배쪽면(ventral surface)으로부터, 후삭이 측면에 접하고 이들 후삭으로부터 중앙으로 45°각도로 연장되는 시상하부로 전측(rostral) 절개를 만들었다. 중격의지핵 및 주변 영역을 함유하는 상기 기초 전뇌 조직을 칭량하고 빙냉 20 mM HEPES 완충액 (20 mM HEPES 산, 23℃에서 NaOH를 사용하여 pH 7.4로 조정함) 중에 균질화시켰다. 막을 15분 동안 신선한 완충액 중에서 48,000×g에서 원심분리하여 3회 세척하였다. 최종 막 펠렛을 0.2 mM 페닐메틸술포닐 플루오라이드 (PMSF)를 함유하는 20 mM HEPES 완충액 중에 재현탁시켰다. Amylin Binding Assay : Binding evaluation of some exemplary compounds of the invention to amylin receptors can be performed in a nuclueus accumbens membrane prepared from rat brain as follows. Male Sprague-Dawley (Sprague-Dawley) were sacrificed to cut the neck ^® rats (200 to 250 g). The brain was removed and placed in cold phosphate buffered saline (PBS). From the ventral surface, a rostral incision was made in the hypothalamus, where the abutment abutted the side and extended 45 ° from the apex to the center. The basal forebrain containing the septal nucleus and surrounding area was weighed and homogenized in ice-cold 20 mM HEPES buffer (20 mM HEPES acid, adjusted to pH 7.4 with NaOH at 23 [deg.] C). The membranes were washed three times by centrifugation at 48,000 x g in fresh buffer for 15 minutes. The final membrane pellet was resuspended in 20 mM HEPES buffer containing 0.2 mM phenylmethylsulfonyl fluoride (PMSF).

¹²⁵I-아밀린 결합을 측정하기 위해서 (문헌 [Beaumont K et al. Can J Physiol Pharmacol. 1995 Jul; 73(7):1025-9] 참조), 원래의 습윤 중량 조직 4 mg으로부터 얻은 막을 0.5 mg/mL 바시트라신, 0.5 mg/mL 소 혈청 알부민 및 0.2 mM PMSF를 함유하는 20 mM HEPES 완충액 중에서 12 내지 16 pM의 ¹²⁵I-아밀린과 함께 인큐베이션하였다. 용액을 60분 동안 2℃에서 인큐베이션하였다. 방사성 표지된 펩티드의 비특이적 결합을 감소시키기 위해 4시간 동안 0.3％ 폴리에틸렌이민에 미리 침지시켜 둔 GF/B 유리 섬유 필터 (와트만 인크.(Whatman Inc.), 미국 뉴저지주 클리프톤 소재)로 여과하여 인큐베이션을 종결하였다. 필터를 여과 직전에는 5 mL의 차가운 PBS로 세척하고 여과 직후에는 15 mL의 차가운 PBS로 세척하였다. 필터를 제거하고, 방사성을 감마-계수기에서 77％의 계수 효율로 평가하였다. 경쟁 곡선은 10^-12 내지 10^-6 M의 미표지 시험 화합물의 존재하에 결합을 측정하여 생성하였고, 4-파라미터 로지스틱 방정식을 사용하여 비선형 회귀법으로 분석하였다 (인플로트(Inplot) 프로그램, 그래프패드 소프트웨어(GraphPAD Software), 미국 캘리포니아주 샌디에고 소재). To determine ¹²⁵ I-amylin binding (see Beaumont K et al. Can J Physiol Pharmacol. 1995 Jul; 73 (7): 1025-9), the membrane obtained from 4 mg of the original wet weight tissue was treated with 0.5 mg / mL bacitracin, 0.5 mg / mL bovine serum albumin and incubated with ¹²⁵ I- amylin of 12 to 16 pM in 20 mM HEPES buffer containing 0.2 mM PMSF. The solution was incubated at < RTI ID = 0.0 > 2 C < / RTI > To reduce nonspecific binding of radiolabeled peptides, the cells were filtered through a GF / B glass fiber filter (Whatman Inc., Clifton, NJ) pre-soaked in 0.3% polyethyleneimine for 4 hours, Respectively. The filter was washed immediately before filtration with 5 mL of cold PBS and immediately after filtration was washed with 15 mL of cold PBS. The filters were removed and the radioactivity was evaluated in a gamma-counter at a count efficiency of 77%. Competition curves were generated by measuring binding in the presence of 10 ^-12 to 10 ^-6 M of unlabeled test compound and analyzed by nonlinear regression using a four-parameter logistic equation (Inplot program, (GraphPAD Software, San Diego, CA).

CGRP 수용체 결합 검정: CGRP 수용체에 대한 본 발명의 화합물의 결합의 평가는 CGRP 수용체를 발현한다고 공지된 SK-N-MC 세포 [Muff, R. et. al., Ann NY Acad. Sci. 1992:657, 106-16]로부터 제조된 막을 사용하는 것을 제외하고는 아밀린에 대해 설명한 바와 본질적으로 같다. 결합 검정은 13,500 cpm ¹²⁵I-hCGRP/웰 또는 21.7 pM/웰 (아머샴(Amersham))을 사용하는 것을 제외하고는 아밀린에 대해 설명한 바와 동일하게 수행하였다. CGRP Receptor Binding Assay : Assessment of binding of compounds of the invention to CGRP receptors was performed using SK-N-MC cells known to express CGRP receptors [Muff, R. et. al., Ann NY Acad. Sci. 1992: 657, 106-16]. &Lt; / RTI > Binding assays were performed as described for amylin except that 13,500 cpm ¹²⁵ I-hCGRP / well or 21.7 pM / well (Amersham) was used.

아드레노메듈린 결합 검정: 아드레노메듈린 수용체에 대한 결합은 웰 1개 당 최적 25 내지 30,000개 세포를 사용하는 시클릭 AMP에 대한 퍼킨 엘머(Perkin Elmer) 알파스크린(AlphaScreen)™ 검정을 사용하여, 아드레노메듈린 수용체를 함유하는 HUVEC을 사용하여 조사할 수 있다 [Kato J et. al., Eur J Pharmacol. 1995, 289:383-5]. HUVEC의 경우에는 cAMP 수준의 상승이 CHO 세포에 비해 크지 않다. 따라서, CHO 세포는 아드레노메듈린 수용체를 발현하지 않고, 따라서 원하는 경우에는 음성 대조군으로서 선택할 수 있다. Adrenomedullin Binding Assay : Binding to the adrenomedullin receptor was performed using Perkin Elmer AlphaScreen (TM) assay for cyclic AMP using optimal 25-30,000 cells per well , And HUVEC containing adrenomedullin receptor [Kato J et al. al., Eur J Pharmacol. 1995, 289: 383-5]. In the case of HUVEC, the increase of cAMP level is not as large as that of CHO cells. Thus, CHO cells do not express the adrenomedullin receptor and thus can be selected as negative control if desired.

칼시토닌 수용체 결합 검정: 칼시토닌 수용체에 대한 결합은 당업계에 공지된 바와 같이 칼시토닌 수용체도 발현하는 CHO 세포 또는 T47D 세포를 사용하여 조사할 수 있다 ([Muff R. et. al, Ann NY Acad Sci. 1992, 657:106-16] 및 [Kuestner R. E. et. al. Mol Pharmacol. 1994, 46:246-55]). Calcitonin receptor binding assays : Binding to calcitonin receptors can be investigated using CHO cells or T47D cells expressing calcitonin receptors as well known in the art (Muff R. et al., Ann NY Acad Sci. 1992 , 657: 106-16 and Kuestner RE et al. Mol Pharmacol. 1994, 46: 246-55).

렙틴 결합 검정: 2종의 시험관내 생물학적 검정을 통상적인 방식으로 이용하여, 렙틴 결합 및 수용체 활성화를 평가하였다 (예를 들어 문헌 [White, et al., 1997. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 94:10657-10662] 참조). 알칼리성 포스파타제 ("AP")-렙틴 ("OB") 융합 단백질 ("AP-OB")을, 재조합 마우스 렙틴 (양성 대조군) 또는 펩티드의 부재 또는 존재하에 긴 (신호전달) 형태의 마우스 OB 수용체 ("OB-RL")로 형질감염된 COS-7 세포에 의한 렙틴 결합의 억제를 측정하는데 사용할 수 있다. 신호 도입 검정은 AP 리포터 및 OB-RL 구축물로 동시형질감염된 GT1-7 세포에서 수행할 수 있다. 마우스 렙틴 또는 펩티드를 사용한 자극에 대한 반응에 있어서 분비된 알칼리성 포스파타제 ("SEAP")의 활성은 화학발광으로 측정할 수 있 다. Leptin Binding Assay : Two in vitro biological assays were used in a conventional manner to assess leptin binding and receptor activation (see, for example, White, et al., 1997. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 10657-10662). Alkaline phosphatase ("AP ") -leptin (" OB ") fusion protein ("AP- OB") is conjugated to mouse OB receptors in long (signal transduction) form in the absence or presence of recombinant mouse leptin (positive control) Can be used to measure inhibition of leptin binding by COS-7 cells transfected with "OB-RL"). Signal transduction assays can be performed on co-transfected GT1-7 cells with AP reporter and OB-RL constructs. The activity of secreted alkaline phosphatase ("SEAP") in response to stimulation with mouse leptin or peptide can be measured by chemiluminescence.

Y1 수용체 결합 검정: 신경펩티드 Y1 수용체를 내인성 발현하는 SK-N-MC 세포의 전면성장 배양물로부터 막을 제조하였다. 막을 60 pM [¹²⁵I]-인간 펩티드 YY (2200 Ci/mmol, 퍼킨엘머 라이프 사이언시스(PerkinElmer Life Sciences)) 및 미표지 활성 화합물과 함께 60분 동안 주변 온도에서 96웰 폴리스티렌 플레이트에서 인큐베이션하였다. 이어서, 웰 내용물을 퍼킨 엘머 플레이트 수거기를 사용하여 96웰 유리 섬유 플레이트 상으로 수거하였다. 건조된 유리 섬유 플레이트를 섬광제(scintillant)와 혼합하고 퍼킨 엘머 섬광 계수기 상에서 계수하였다. Y1 Receptor Binding Assay : Membranes were prepared from a frontal growth culture of SK-N-MC cells expressing endogenously the neuropeptide Y1 receptor. The membranes were incubated with a 60 pM [ ¹²⁵ I] -human peptide YY (2200 Ci / mmol, PerkinElmer Life Sciences) and an unlabeled active compound in a 96 well polystyrene plate at ambient temperature for 60 minutes. The well contents were then collected on a 96 well glass fiber plate using a Perkin Elmer plate collector. The dried glass fiber plates were mixed with a scintillant and counted on a Perkin Elmer scintillation counter.

Y2 수용체 결합 검정: 신경펩티드 Y2 수용체를 내인성 발현하는 SK-N-BE 세포의 전면성장 배양물로부터 막을 제조하였다. 막을 30 pM [¹²⁵I]-인간 펩티드 YY (2200 Ci/mmol, 퍼킨엘머 라이프 사이언시스) 및 미표지 활성 화합물과 함께 60분 동안 주변 온도에서 96웰 폴리스티렌 플레이트에서 인큐베이션하였다. 이어서, 웰 내용물을 퍼킨 엘머 플레이트 수거기를 사용하여 96웰 유리 섬유 플레이트 상으로 수거하였다. 건조된 유리 섬유 플레이트를 섬광제와 혼합하고 퍼킨 엘머 섬광 계수기 상에서 계수하였다. Y2 Receptor Binding Assay : Membranes were prepared from the full-grown cultures of SK-N-BE cells endogenously expressing neuropeptide Y2 receptors. The membrane was incubated with a 30 pM [ ¹²⁵ I] -human peptide YY (2200 Ci / mmol, Perkin Elmer Life Sciences) and an unlabeled active compound in a 96 well polystyrene plate at ambient temperature for 60 minutes. The well contents were then collected on a 96 well glass fiber plate using a Perkin Elmer plate collector. The dried glass fiber plates were mixed with a scouring agent and counted on a PerkinElmer scintillation counter.

Y4 수용체 결합 검정: CHO-K1 세포를 신경펩티드 Y4 유전자를 코딩하는 cDNA로 일시적으로 형질감염시킨 다음, 48시간 후에는 전면성장 세포 배양물로부터 막을 제조하였다. 막을 18 pM [¹²⁵I]-인간 췌장 폴리펩티드 (2200 Ci/mmol, 퍼킨엘머 라이프 사이언시스) 및 미표지 활성 화합물과 함께 60분 동안 주변 온도에서 96웰 폴리스티렌 플레이트에서 인큐베이션하였다. 이어서, 웰 내용물을 퍼킨 엘머 플레이트 수거기를 사용하여 96웰 유리 섬유 플레이트 상으로 수거하였다. 건조된 유리 섬유 플레이트를 섬광제와 혼합하고 퍼킨 엘머 섬광 계수기 상에서 계수하였다. Y4 Receptor Binding Assay : CHO-K1 cells were transiently transfected with cDNA encoding the neuropeptide Y4 gene, and after 48 hours a membrane was prepared from the full-grown cell culture. The membrane was incubated with a 18 pM [ ¹²⁵ I] -human pancreatic polypeptide (2200 Ci / mmol, Perkin Elmer Life Sciences) and an unlabeled active compound in a 96 well polystyrene plate at ambient temperature for 60 minutes. The well contents were then collected on a 96 well glass fiber plate using a Perkin Elmer plate collector. The dried glass fiber plates were mixed with a scouring agent and counted on a PerkinElmer scintillation counter.

Y5 수용체 결합 검정: CHO-K1 세포를 신경펩티드 Y5 유전자를 코딩하는 cDNA로 일시적으로 형질감염시킨 다음, 48시간 후에는 전면성장 세포 배양물로부터 막을 제조하였다. 막을 44 pM [¹²⁵I]-인간 펩티드 YY (2200 Ci/mmol, 퍼킨엘머 라이프 사이언시스) 및 활성 화합물과 함께 60분 동안 주변 온도에서 96웰 폴리스티렌 플레이트에서 인큐베이션하였다. 이어서, 웰 내용물을 퍼킨 엘머 플레이트 수거기를 사용하여 96웰 유리 섬유 플레이트 상으로 수거하였다. 건조된 유리 섬유 플레이트를 섬광제와 혼합하고 퍼킨 엘머 섬광 계수기 상에서 계수하였다. Y5 Receptor Binding Assay : CHO-K1 cells were transiently transfected with the cDNA encoding the neuropeptide Y5 gene, and after 48 hours a membrane was prepared from the full-grown cell culture. The membranes were incubated with a 44 pM [ ¹²⁵ I] -human peptide YY (2200 Ci / mmol, Perkin Elmer Life Sciences) and active compound in a 96 well polystyrene plate at ambient temperature for 60 minutes. The well contents were then collected on a 96 well glass fiber plate using a Perkin Elmer plate collector. The dried glass fiber plates were mixed with a scouring agent and counted on a PerkinElmer scintillation counter.

GLP -1 수용체 결합 검정: GLP-1 수용체 결합 활성 및 친화도는 수용체 공급원이 RINm5F 세포 막이고, 리간드는 [¹²⁵I]GLP-1인 결합 대체 검정을 이용하여 측정할 수 있다. 균질화된 RINm5F 세포 막을 40,000 cpm [¹²⁵I]GLP-1 추적자(tracer)를 함유하는 20 mM HEPES 완충액 중에서 시험 화합물의 농도를 변화시키면서 2시간 동안 23℃에서 계속 혼합하면서 인큐베이션하였다. 반응 혼합물을 0.3％ PEI 용액으로 미리 침지시켜 둔 유리 필터 패드를 통해 여과하고 빙냉 인산염 완충 염수로 세정하였다. 결합 계수는 섬광 계수기를 사용하여 결정하였다. 결합 친화도는 그래프패트 프리즘(GraphPad Prism) 소프트웨어 (그래프패드 소프트웨어, 인크.(GraphPad Software, Inc.), 미국 캘리포니아주 샌 디에고 소재)를 사용하여 계 산하였다. GLP- 1 Receptor Binding Assay : GLP-1 receptor binding activity and affinity can be measured using a binding substitution assay in which the receptor source is the RINm5F cell membrane and the ligand is [ ¹²⁵ I] GLP-1. Homogenized RINm5F cell membranes were incubated with continuous mixing at 23 째 C for 2 hours with varying concentrations of test compound in 20 mM HEPES buffer containing 40,000 cpm [ ¹²⁵ I] GLP-1 tracer. The reaction mixture was pre-soaked with 0.3% PEI solution, filtered through a glass filter pad and rinsed with ice-cold phosphate buffered saline. The coupling coefficient was determined using a scintillation counter. Binding affinities were calculated using GraphPad Prism software (GraphPad Software, Inc., San Diego, Calif.).

예시적인 하이브리드에 대하여 시험관내 수용체 결합, 및 성분 모듈의 특이적 수용체 활성화를 비롯한 수용체 활성화를 하기 표에 나타내었다.Receptor activation, including in vitro receptor binding, and specific receptor activation of component modules for exemplary hybrids is shown in the following table.

실시예Example 3: 마우스 음식물 섭취 검정 3: Mouse food intake test

본 발명의 하이브리드 폴리펩티드는 마우스 음식물 섭취 검정에서 식욕 저해에 대해 시험하고 식이-유도 비만 (DIO) 마우스에서 체중 증가에 대한 그의 효과에 대해 시험할 수 있다. 스크리닝을 위한 실험 프로토콜을 아래에 기재한다.The hybrid polypeptides of the invention can be tested for appetite inhibition in mouse food intake assays and tested for their effects on body weight gain in diet-induced obesity (DIO) mice. An experimental protocol for screening is described below.

암컷 NIH/스위스(NIH/Swiss) 마우스 (8주령 내지 24주령)를 0600에 빛을 사용한 12시간:12시간 명:암 주기로 집단 수용하였다. 물 및 표준 펠렛형 마우스 먹이는 언급되는 것을 제외하고는 마음대로 먹을 수 있었다. 실험 1일 전에는 동물들을 대략 1500시부터 굶겼다. 실험 당일 아침에 동물들을 실험군으로 나누었다. 전형적인 연구에서, n = 4개 우리 (3마리 마우스/우리)였다.Female NIH / Swiss (NIH / Swiss) mice (8 to 24 weeks old) were grouped into a 12 hour: 12 hour name: cancer cycle using light at 0600. Water and standard pelleted mice were allowed to eat at will except as noted. One day before the experiment, animals starved from about 1500. On the morning of the experiment, animals were divided into experimental groups. In a typical study, n = 4 mice (3 mice / us).

시간 = 제0분일 때 모든 동물에게 비히클 또는 화합물을 전형적으로는 약 10 nmol/kg 내지 75 nmol/kg 범위의 양으로 복강내 주사하고, 그 직후에는 사전 칭량된 양 (10 내지 15 g)의 표준 먹이를 공급하였다. 먹이를 치우고, 먹이 소모량을 측정하기 위해 다양한 시간, 전형적으로는 제30분, 제60분 및 120분에 칭량하였다 [Morley, Flood et al., Am. J. Physio. 267:R178-R184, 1994]. 음식물 섭취량은 제0분에 처음 제공된 먹이의 중량으로부터 예를 들어 제30분, 제60분, 제120분, 제180분 및/또는 제240분 시점에 남은 먹이의 중량을 차감하여 계산하였다. 유의한 처치 효과가 ANOVA로 확인되었다 (p < 0.05). 유의한 차이가 있는 경우, 던넷(Dunnett's) 시험 (프리즘 v. 2.01, 그래프패드 소프트웨어 인크., 미국 캘리포니아주 샌 디에고 소재)을 이용하여 시험 평균을 대조군 평균과 비교하였다.When time = 0 min, all animals were injected ip with a vehicle or compound typically in an amount ranging from about 10 nmol / kg to 75 nmol / kg, followed immediately by the pre-weighed amount (10-15 g) standard Feeding. Weighed at various times, typically at the 30th, 60th and 120th minutes to remove food and measure food consumption [Morley, Flood et al., Am. J. Physio. 267: R178-R184, 1994). The food intake was calculated by subtracting the weight of the food left at the 0th minute from the weight of the food served at the 30th minute, the 60th minute, the 120th minute, the 180th minute and / or the 240th minute, for example. Significant treatment effects were confirmed by ANOVA (p <0.05). In the case of significant differences, the test averages were compared to the control averages using the Dunnett's test (Prism v. 2.01, GraphPad Software Inc, San Diego, CA).

본원에서 하이브리드 합성에 사용된 모 분자의 음식물 섭취 검정에서의 활성 및 서열은 다음과 같다:The activities and sequences in the food intake assay of the parent molecules used in the hybrid synthesis herein are as follows:

실시예Example 4: 체중, 지방 재분포, 및 4: Weight, fat redistribution, and 제지방My Fat 체중 검정 Weight black

체중 및 관련 효과에 대한 검정은 다음과 같이 수행할 수 있다:Assays for body weight and related effects can be performed as follows:

스프라그-돌리 래트에서의 식이-유도 비만 (DIO)은 비만 및 에너지 항상성의 조절 연구에 유용한 모델이다. 이들 래트는 지방 및 에너지가 비교적 높은 먹이 제공시에 비만이 되기 쉬운 (Crl:CD^®(SD)BR) 래트 계열로부터 개발되었다. 예를 들어 문헌 ([Levin (1994) Am. J. Physiol. 267:R527-R535], [Levin et al. (1997) Am. J. Physiol. 273:R725-R730])을 참조한다. DIO 수컷 래트는 찰스 리버 래버러토리즈, 인크.(Charles River Laboratories, Inc.) (미국 매사추세츠주 윌밍톤 소재)로부터 입수하였다. 상기 래트를 12시간/12시간 명:암 주기의 22℃ 상자형 우리에 개별적으로 가두었다. 래트는 중간 정도의 고지방 먹이 (지방으로 인한 열량(kcal)이 32％, 리써치 다이어트 D1226B)에 마음대로 접근하도록 유지시켰다. 상기 동물은 전형적으로 평균 체중이 약 500 g이었다. 레빈(Levin) DIO 래트를 7일 동안 우리 환경에 적응시켰다. 3일간의 야간 적응 동안, 동물들에게 비히클을 단독 복강내 (IP) 주사하였다. 시험일에는 래트에게 6일 내지 14일 연일 야간 동안 암 주기 개시시에 화합물 또는 비히클 (10％ DMSO)을 단독 IP 주사로 투여하였다. 음식물 섭취는 연구 기간 내내 자동 음식물 섭취 측정 시스템 (바이오다크(BioDAQ), 리서치 다이어트)로 5초 간격마다 측정하였다. 체중은 밤마다 기록하였다.Dietary-induced obesity (DIO) in Sprague-Dawley rats is a useful model for the regulation of obesity and energy homeostasis. These rats were developed from rats that are likely to become obese (Crl: CD ^® (SD) BR) rats when providing relatively high fat and energy. See, for example, Levin (1994) Am. J. Physiol. 267: R527-R535, Levin et al. (1997) Am. J. Physiol. 273: R725-R730). DIO male rats were obtained from Charles River Laboratories, Inc. (Wilmington, Mass., USA). The rats were individually housed in a 22 < 0 > C box with a 12 hour / 12 hour arm cycle. The rats maintained a moderate access to high-fat diets (32% caloric (kcal) due to fat, Research Diet D1226B). The animals typically had an average weight of about 500 grams. We adapted Levin DIO rats to our environment for 7 days. During the 3-day night adaptation, the animals were injected intraperitoneally (IP) with the vehicle. On the test day, rats were administered a single compound IP injection of a compound or vehicle (10% DMSO) at the onset of the onset of cancer during the day 6-14 days night. Food intake was measured every 5 seconds with an automatic food intake measurement system (BioDaQ, research diet) throughout the study period. Body weight was recorded every night.

약물 처치 전후로 NMR (에코 메디칼 시스템즈(Echo Medical Systems), 미국 텍사스주 휴스톤 소재)을 이용하여 신체 조성을 측정하였다. 신체 조성 측정을 위해서, 래트를 통풍이 잘되는 플렉시글라스(plexiglass) 튜브에 잠깐 (약 1분) 넣어 두었다가 설치류용 특수 NMR 기기에 넣었다. 이것으로, 지방 및 제지방 (건조) 조직의 실제 그램수 (g)에 있어서의 변화 (예를 들어, 처치 후의 체지방 그램수 (g) - 기준선의 체지방 그램수 (g) = 체지방 그램수 (g)의 변화량) 및 지방 및 제지방 (건조) 조직에 대한 신체 조성의 변화율 (％) (예를 들어, 처치 후의 체지방 비율 (％) - 기준선의 체지방 비율 (％) = 체지방 비율 (％)의 변화)를 계산할 수 있었다. 모든 데이타는 평균 ± SEM으로 표시하였다. 분산 분석 (ANOVA) 및 사후(post-hoc) 시험을 이용하여 군별 차이를 시험하였다. P-값 < 0.05는 유의하다고 간주되었다. 통계적 분석 및 그래프 작도는 윈도우즈(Windows)용 프리즘^® 4 (그래프패드 소프트웨어, 인크., 미국 캘리포니아주 샌 디에고 소재)를 이용하여 수행하였다. 몇몇 초기 연구에서는, 윈도우즈용 시스타트(SYSTAT)^® (시스타트 소프트웨어, 인크.(SYSTAT Software, Inc.), 미국 캘리포니아주 포인트 리치몬드 소재)을 이용하여 분석하였다. 아밀리노모방체, 엑센딘, PYY 유사체 및/또는 렙틴을 함유하는 하이브리드의 경우, 체지방 변화는 제지방 조직에서의 유의한 감소를 수반하지 않았다. 그래프 및 결과는 전형적으로 체중, 체지방에 있어서의 비히클-보정된 변화율(％) 및 체단백질에 있어서의 변화율(％)로 제시된다.Body composition was measured using NMR (Echo Medical Systems, Houston, Tex., USA) before and after drug treatment. For body composition measurement, the rats were placed in a ventilated plexiglass tube for a minute (approximately 1 minute) and then placed in a special NMR instrument for rodents. Thus, the change in the actual number of grams (g) of the fat and fat (dry) tissues (for example, the number of grams of body fat g after treatment-grams of body fat g of the reference line = grams of body fat g Change in body composition (%) (for example, percentage of body fat after treatment-ratio of body fat in baseline (%) = change in body fat percentage (%)) ) Can be calculated. All data were expressed as mean ± SEM. Variance analysis (ANOVA) and post-hoc tests were used to test differences between groups. A P-value < 0.05 was considered significant. Statistical analysis and graph plotting was performed using a Windows (Windows) Prism ^® 4 (Graph Pad Software, Inc., San Diego, Calif material) for. In some earlier studies, SYSTAT ^® (SYSTAT Software, Inc., Point Richmond, Calif., USA) was used for analysis. In the case of hybrids containing amylinomimetics, exendins, PYY analogs and / or leptin, body fat changes did not involve a significant reduction in the parenteral tissue. The graph and results are typically presented in terms of body weight, vehicle-corrected percent change in body fat, and percent change in body protein.

다른 실험에서, 수컷 C57BL/6 마우스 (연구 개시시에 4주령)에게 고지방 (HF, 음식물 열량(kcal)의 58％가 지방) 또는 저지방 (LF, 음식물 열량(kcal)의 11 ％가 지방) 먹이를 공급하였다. 4주 후에 먹이를 제공할 때에는, 소정 투여량의 하이브리드 폴리펩티드를 2주 동안 연속적으로 피하 전달하는 삼투 펌프 (알제트(Alzet) # 2002)를 각 마우스에게 이식하였다. 체중 및 음식물 섭취를 매주 측정하였다 [Surwit et al., Metabolism-Clinical and Experimental, 44:645-51, 1995]. 시험 화합물의 효과를 처치군 당 14 마리 이상의 마우스의 체중 변화율(％) (즉, 출발 체중으로부터의 변화율(％))의 평균 ± 표준편차로 표현함 (p < 0.05 ANOVA, 던넷 시험, 프리즘 v. 2.01, 그래프패드 소프트웨어 인크., 미국 캘리포니아주 샌 디에고 소재). In another experiment, male C57BL / 6 mice (four weeks old at the start of the study) were fed high fat (HF, 58% of the calorie (kcal) fat) or low fat (LF, 11% of the calorie . When feeding four weeks later, a osmotic pump (Alzet # 2002) was subcutaneously implanted into each mouse to subcutaneously deliver a predetermined dose of the hybrid polypeptide for two weeks. Weight and food intake were measured weekly [Surwit et al., Metabolism-Clinical and Experimental, 44: 645-51, 1995]. (P <0.05 ANOVA, Dunnett's test, prism v. 2.01) (p <0.05). The effect of the test compound was expressed as the mean ± standard deviation of the percentage change in body weight of 14 or more mice per treatment group , GraphPad Software Inc., San Diego, CA).

엑센딘 / PYY 하이브리드: 본 발명의 예시적인 하이브리드 폴리펩티드를 C-말단 말단절단형 엑센딘 (예를 들어 엑센딘-4(1-28) 또는 ⁵Ala,¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-28)) 및 18 내지 36 내지 31 내지 36 영역에 걸쳐 있는 N-말단 말단절단형 PYY을 사용하여 합성하였다. 따라서, 예시적인 하이브리드 폴리펩티드는 일반적으로 2개의 모듈을 포함하며, 제1 모듈은 엑센딘-4 유사체의 단편이고, 제2 모듈은 PYY 말단절단체로부터 선택된 펩티드 인핸서이다. 비교를 위해, β-알라닌 디펩티드 스페이서도 복수개의 변이체에서 펩티드 빌딩 블록들 사이에 혼입시켰다 (표 4-1 참조). Exendin / PYY Hybrid : Exemplary hybrid polypeptides of the invention can be conjugated to a C-terminal truncated exendin (e.g., exendin-4 (1-28) or ⁵ Ala, ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe-exendin- ) And 18 to 36 to 31 to 36 regions of N-terminal truncated PYY. Thus, an exemplary hybrid polypeptide generally comprises two modules, wherein the first module is a fragment of the exendin-4 analog and the second module is a peptide enhancer selected from the PYY termination group. For comparison, a beta-alanine dipeptide spacer was also incorporated between peptide building blocks in a plurality of variants (see Table 4-1).

[표 4-1][Table 4-1]

표 4-1에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 예시적인 특정 화합물은 음식물 섭취 검정에서 효능을 나타냈다. 특정 펩티드는 또한 DIO 검정에서 75 nmol/kg로 시험 되었고, PYY보다 더 효능있다는 것이 입증되었다 (도 1). 본원에서의 다른 하이브리드의 경우에 관찰된 바와 같이, 하이브리드는 모 분자를 인식하는 1종, 2종 또는 3종의 수용체와의 결합을 보유할 수 있다. 하이브리드는 각 모 분자로부터 또는 원한다면 오직 1종의 모 분자로부터의 1종 이상의 수용체를 인식하도록 디자인된 것이었다. 본원에서의 다른 하이브리드의 경우에 관찰된 바와 같이, 링커 (각 인접 호르몬 부분 사이의 스페이서로 작용할 수 있음)의 사용은 수용체(들) 결합 및 시험관내 및 생체내 활성, 예를 들어 체중 감소를 비롯한 증가된 활성을 제공할 수 있다. 본원에서의 결과는 PYY의 C-말단 부분이 활성을 조정할 수 있음을 보여준다.As shown in Table 4-1, certain exemplary compounds of the present invention showed efficacy in food intake assays. Certain peptides were also tested at 75 nmol / kg in DIO assays and were shown to be more potent than PYY (Figure 1). As observed in the case of other hybrids herein, hybrids may possess binding to one, two or three receptors that recognize the parent molecule. Hybrids were designed to recognize one or more receptors from each parent molecule or, if desired, from only one parent molecule. As observed in the case of the other hybrids herein, the use of a linker (which may serve as a spacer between each adjacent hormone moiety) may be used to alter receptor (s) binding and in vitro and in vivo activity, Can provide increased activity. The results here show that the C-terminal portion of PYY can modulate its activity.

엑센딘 / 아밀린 하이브리드: 본 발명의 추가의 예시적인 하이브리드 폴리펩티드를 C-말단 말단절단형 엑센딘 (1-27) (서열 236), C-말단 말단절단형 아밀린 펩티드 (예를 들어 아밀린(1-7) (서열 217), ^2,7Ala-아밀린(1-7) (서열 285) 및 아밀린(33-27) (서열 243), 및 임의의 sCT 단편 (예를 들어 sCT(8-10), ^11,18Arg-sCT(8-27) (서열 289) 및 ¹⁴Glu,^11,18Arg-sCT(8-27) (서열 286)로부터 제조하였다. 2종의 하이브리드 폴리펩티드 모두가 식욕 저해에는 매우 활성이었지만 (표 4-2 참조), 동일 투여량의 래트 아밀린보다 우수하였고, 작용 개시가 모 분자의 활성 프로파일과 상이하였다 (데이타는 나타내지 않음). 화합물 5는 1 nmol/kg의 투여량에서 래트 아밀린만큼 효과적이었다. Exendin / amylin Hybrids : Additional exemplary hybrid polypeptides of the present invention can be used with C-terminal truncated exendin (1-27) (SEQ ID NO: 236), C-terminal truncated amylin peptide (e.g., (SEQ ID NO: 217), ^2,7 Ala-amylin (1-7) (SEQ ID NO: 285) and amylin (33-27) (SEQ ID NO: 243), and any sCT fragment ^{11, 18} Arg-sCT (8-27) (SEQ ID NO: 289) and ¹⁴ Glu, ^11,18 Arg-sCT (8-27) (SEQ ID NO: 286). Both hybrid polypeptides were highly active for appetite inhibition (See Table 4-2), but was superior to the same dose of rat amylin and the onset of action was different from the activity profile of the parent molecule (data not shown). Compound 5 was administered at a dose of 1 nmol / It was as effective as amylin.

[표 4-2][Table 4-2]

또한, 2종의 화합물은 모두가 DIO 검정에서의 스크리닝에서 우수한 효능을 나타냈다 (도 2).In addition, both compounds showed excellent efficacy in screening in the DIO assay (Figure 2).

추가의 예시적인 화합물을 혈중 글루코스 수준에 대한 효과 및 음식물 섭취 검정에서 검정하였다. 이러한 시험에는 화합물 14 및 화합물 15가 포함되었다. 베타Ala 링커를 포함하는 화합물 14는 ²⁹βAla-βAla-엑센딘(1-28),h아밀린(1-7)-^11,18Arg-sCt(8-27)-h아밀린(33-37) (서열 33) (별법으로는, 엑센딘(1-28)-βAla-β Ala-h아밀린(1-7)-^11,18Arg-sCt(8-27)-h아밀린(33-37)이라고 기재하기도 함)이었고, 화합물 15는 Gly 링커를 함유하였다: ²⁹GlyGlyGly-엑센딘(1-28),h아밀린(1-7)-^11,18Arg-sCt(8-27)-h아밀린(33-37) (서열 312). 더 긴 엑센딘(1-28)이 엑센딘(1-27)보다 증가된 활성을 제공하였다.Additional exemplary compounds were tested in blood glucose levels and in food intake assays. Compound 14 and compound 15 were included in this test. Compound 14, which includes the beta Ala linker, binds to ^29? Ala-? Ala-exendin (1-28), ^haxylin (1-7) ^{-11,18 Arg- sCt} (8-27) ) (SEQ ID NO: 33) (alternatively, exendin (1-28) -βAla-β Ala-h amylin (1-7) ^-11,18 Arg- ^sCt (8-27) 37), and compound 15 contained a Gly linker: ²⁹ GlyGlyGly-exendin (1-28), ^haxylin (1-7) ^-11,18 Arg- ^sCt (8-27) - (33-37) (SEQ ID NO: 312). The longer exendin (1-28) provided increased activity than exendin (1-27).

혈중 글루코스 수준을 저하시키는 효과에 대하여 시험하기 위해 혈중 글루코스 검정을 수행하였다. 암컷 NIH/스위스 마우스 (8주령 내지 20주령)를 0600에 빛을 사용한 12시간:12시간 명:암 주기로 집단 수용하였다. 물 및 표준 펠렛형 마우스 먹이는 언급되는 것을 제외하고는 마음대로 먹을 수 있었다. 실험 당일 아침에 동물들을 실험 군으로 나누고, 대략 0630시부터 굶겼다. 전형적인 연구에서, n = 2개 우리 (3마리 마우스/우리)였다. 시간 = 제0분일 때 혈중 글루코스 샘플을 취하고, 그 직후에 비히클 또는 화합물을 약 1 nmol/kg 내지 25 nmol/kg 범위의 양으로 복강내 주사하였다. 혈중 글루코스를 제30분, 제60분, 제120분, 제180분 및 제240분에 측정하였다. 처치전 백분율(％)은 예를 들어 제30분, 제60분, 제120분, 제180분 및/또는 제240분 시점에서의 혈중 글루코스를 시간 = 제0분일 때의 혈중 글루코스로 나누어 계산하였다. 유의한 처치 효과가 ANOVA로 확인되었다 (p < 0.05). 유의한 차이가 있는 경우, 던넷 시험 (프리즘 v. 4.01, 그래프패드 소프트웨어 인크., 미국 캘리포니아주 샌 디에고 소재)을 이용하여 시험 평균을 대조군 평균과 비교하였다. 예시적인 화합물에 대한 결과를 도 5A에 제시하였다. 점은 평균 ± 표준편차를 나타낸다. t = 0에서 펩티드를 복강내 (IP) 주사한 직후에 2 시간 굶긴 NIH/스위스 마우스에게 기준 샘플을 주사하였다. 샘플을 t = 제30분, 제60분, 제120분, 제180분 및 제240분에 취하였다. 혈중 글루코스를 원터치(OneTouch)^® 울트라(Ultra)^® (라이프스캔, 인크.(LifeScan, Inc.), 존슨앤드존슨 컴퍼니(Johnson ＆ Johnson Company), 미국 캘리포니아주 밀피타스 소재)로 측정하였다. * p < 0.05 vs. 비히클 대조군; ANOVA, 던넷 시험.Blood glucose assays were performed to test for the effect of lowering blood glucose levels. Female NIH / Swiss mice (8- to 20-week old) were group-housed at 0600 with 12 h light: 12 h name: cancer cycle. Water and standard pelleted mice were allowed to eat at will except as noted. On the morning of the experiment, animals were divided into experimental groups and starved from approximately 0630 hrs. In a typical study, n = 2 mice (3 mice / we). Time = 0th minute blood glucose samples were taken and immediately thereafter the vehicle or compound was intraperitoneally injected in an amount ranging from about 1 nmol / kg to 25 nmol / kg. Blood glucose was measured at 30 minutes, 60 minutes, 120 minutes, 180 minutes and 240 minutes. Percentage before treatment (%) was calculated, for example, by dividing blood glucose at the 30th minute, 60th minute, 120th minute, 180th minute and / or 240th minute by blood glucose at time = 0 minute . Significant treatment effects were confirmed by ANOVA (p <0.05). If there were significant differences, the test averages were compared to the control averages using the Dunnett test (Prism v. 4.01, GraphPad Software Inc, San Diego, CA). The results for the exemplary compounds are shown in Figure 5A. The point represents the mean ± standard deviation. Reference samples were injected into NIH / Swiss mice for 2 hours immediately after intraperitoneal (IP) injection of the peptide at t = 0. Samples were taken at t = 30 min, 60 min, 120 min, 180 min and 240 min. Blood glucose was measured with a single touch (OneTouch) ^® Ultra (Ultra) ^® (LifeScan, Inc.. (LifeScan, Inc.), Johnson & Johnson Company (Johnson & Johnson Company), California, Milpitas material). * p < Vehicle control; ANOVA, Dunnett test.

음식물 섭취 검정을 앞서 기재한 바와 같이 수행하였다. 결과는 도 5B에 나타내었다. 점은 n = 4개 우리 (3마리 마우스/우리)의 평균 ± 표준편차를 나타낸다. t = 0에서 밤새 굶긴 NIH/스위스에게 펩티드를 복강내 (IP) 주사하였다. 주사 직후에 음식물을 도입하고, 소모량을 t = 제30분, 제60분 및 제120분에 측정하였다. * p < 0.05 vs. 비히클 대조군; ANOVA, 던넷 시험.Food intake assays were performed as previously described. The results are shown in Figure 5B. Points represent the mean ± standard deviation of n = 4 we (3 mice / we). Peptides were intraperitoneally (IP) injected to starved NIH / Switzerland overnight at t = 0. Food was introduced immediately after injection and consumption was measured at t = 30 min, 60 min and 120 min. * p < Vehicle control; ANOVA, Dunnett test.

모 화합물 10 및 엑센딘 화합물은 글루코스 검정에서 반대 효과를 나타냈다. 이것들을 연결시키면 상반되는 효과가 나타나거나, 기껏해야 더 효력이 있는 모 화합물에서 관찰되는 효과가 약화된 결과로 나타날 것이라고 예측되었었다. 그러나, 글루코스 검정에서는 예시적인 하이브리드 화합물이 엑센딘(1-28)만큼 효능이 있었고, 작용 기간도 더 길었다.The parent compound 10 and the exendin compound showed opposite effects in the glucose assay. It was predicted that linking these would have the opposite effect, or at best the weaker effect observed in the more potent parent compound. However, in the glucose assay, the exemplary hybrid compounds were as efficacious as exendin (1-28) and longer in duration of action.

음식물 섭취 데이타에서, 상기한 예시적인 화합물은 식욕 억제 작용을 보였다. 활성은 일반적으로 개별 투여된 모 화합물보다 양호하였다. 활성은, 조합 투여되었으나 약물 농도는 절반인 모 화합물 (하이브리드 3 nmol/kg vs. 동시 투여된 모 화합물은 전체 6 nmol/kg)와 유사하였고, 따라서 하이브리드의 우수성을 추가로 입증하였다. 링커의 부가는 하이브리드의 활성을 증가시켰다. 이 경우에, Gly-Gly-Gly 링커는 베타Ala-베타Ala 링커보다 더 효과적이었다. In the food intake data, the above exemplary compounds showed an appetite suppressant effect. The activity was generally better than the individual administered parent compound. The activity was similar to that of the parent compound (3 nmol / kg of the hybrid versus 6 nmol / kg of the total parent compound at the same time) in combination but the drug concentration was half, thus further demonstrating the superiority of the hybrid. The addition of the linker increased the activity of the hybrid. In this case, the Gly-Gly-Gly linker was more effective than the beta Ala-beta Ala linker.

엑센딘 / CCK -8 하이브리드: 본 발명의 추가의 예시적인 하이브리드 폴리펩티드를, 전장 엑센딘-4로부터 제조하거나, 또는 CCK-8의 N-말단 아미드를 보존하면서 CCK-8의 N-말단에 직접 또는 링커를 통해 부착된, C-말단 말단절단형 엑센딘-4로부터 제조하였다 (표 4-3). 추가로, 천연 Tyr(S0₃)를 혼입한 특정 하이브리드를 제조하고, 더 안정적인 Phe(CH₂S0₃)기를 혼입한 또다른 하이브리드를 제조하였다. 제조된 모든 하이브리드 폴리펩티드는 음식물 섭취 억제에 있어서 활성이었다 (표 4-3). Exendin / CCK- 8 Hybrid : A further exemplary hybrid polypeptide of the invention can be prepared either from the full-length exendin-4 or directly at the N-terminus of CCK-8, while preserving the N-terminal amide of CCK- C-terminal truncated exendin-4 attached through a linker (Table 4-3). In addition, specific hybrids incorporating natural Tyr (SO ₃ ) were prepared and another hybrid incorporating the more stable Phe (CH ₂ SO ₃ ) group was prepared. All of the hybrid polypeptides produced were active in inhibiting food intake (Table 4-3).

[표 4-3][Table 4-3]

예시적인 엑센딘/CCK-8 하이브리드 폴리펩티드를 25 nmol/kg으로 DIO 검정에서 시험하였다 (도 3A 및 도 3B). 데이타는 초기 체중 감소를 보인 후, 모든 화합물에서 반동(rebound) 효과를 보였다. 흥미롭게도, 반동 효과는 가수분해에 더 안정적인 Phe(CH₂SO₃) 잔기를 혼입한 하이브리드 (도 3A 및 도 3C 비교) 뿐만이 아니라 엑센딘과 CCK 잔기 사이에 링커, 예를 들어 링커 8-아미노-3,6-디옥사옥타노일을 혼입한 하이브리드 (도 3A 및 도 3B 비교)에서도 감소하는 것으로 나타났다. 제2일에 약 -2.8％ 변화를 생성하는데에는 10배 더 많은 양의 CCK-8 (250 nmol/kg/ 일)이 필요했으며, 이것은 제7일에 HF 먹이 대조군 수준으로 반동되었다.Exemplary exendin / CCK-8 hybrid polypeptides were tested in a DIO assay at 25 nmol / kg (FIGS. 3A and 3B). Data showed initial weight loss and rebound effects in all compounds. Interestingly, the recoil effect is due not only to hybrids incorporating Phe (CH ₂ SO ₃ ) moieties more stable in hydrolysis (compare FIGS. 3A and 3C) but also to linkers between exendin and CCK moieties, such as linker 8- But also in hybrids incorporating 3,6-dioxaoctanoyl (compare Figures 3A and 3B). A 10-fold higher amount of CCK-8 (250 nmol / kg / day) was required to produce a change of about -2.8% on day 2, which was rebounded to the HF fed control level on day 7.

아밀린 / PYY 하이브리드: 각 펩티드의 말단절단된 세그먼트를 함유하는 아밀린/PYY 하이브리드 폴리펩티드를 합성하였다. 음식물 섭취 검정에서의 생체내 활성을 표 4-4에 나타내었다. Amylin / PYY Hybrid : An amylin / PYY hybrid polypeptide containing a truncated segment of each peptide was synthesized. The in vivo activities in the food intake test are shown in Table 4-4.

[표 4-4][Table 4-4]

본 발명의 예시적인 하이브리드 폴리펩티드가 그의 모 성분 펩티드 호르몬보다 효력이 있는지를 확인하기 위해서, 예시적인 화합물을 활성이 더 큰 모 분자의 최소 효능 투여량으로 음식물 섭취 검정에서 시험하였다. 그 결과를 도 4A 및 도 4B에 나타내었고, 또한 수집한 모 펩티드의 효과도 비교하고 있다 (화합물 1, 11 및 12는 성분 펩티드 호르몬, 그의 유사체 또는 단편임). 데이타는 여러가지 펩티드가, 수집된 모 펩티드와 적어도 동등한 효력을 가짐을 나타낸다. 생체내 연구와 병행하여, 시험관내 수용체 결합 및 기능 검정 (시클라제 활성)을 모든 화합물에 대해 수행하였다 (데이타는 나타내지 않음).To demonstrate that the exemplary hybrid polypeptides of the present invention are more potent than their parent component peptide hormones, exemplary compounds were tested in a food intake assay at a minimal potent dose of the parent with a higher activity. The results are shown in Figures 4A and 4B and also compares the effect of the collected peptides (Compounds 1, 11 and 12 are component peptide hormones, analogs or fragments thereof). The data indicate that various peptides have at least the same potency as the collected peptides. In parallel with in vivo studies, in vitro receptor binding and functional assays (cyclase activity) were performed on all compounds (data not shown).

아밀린 - sCT / 렙틴 하이브리드: 본원에 기재한 아밀린-sCT-아밀린 키메라인 화합물 10에 연결된 렙틴 펩티드 단편을 함유하는 추가의 예시적인 하이브리드를 제조하였다. 화합물 16은 [Ser117,dLeu119]렙틴(116-122)-아밀린(1-7)- [^11,18Arg]sCT(8-27)-아밀린(33-37) (서열 397)이다. 상기 화합물은 아밀린 및 CT 수용체에 결합하였고 (RBA = 수용체 결합 검정), CGRP 수용체에 약간 결합하였다. 상기 화합물은 또한 CT 수용체를 활성화시킬 수도 있었다 (C1A 검정). Amylin - sCT / leptin Hybrids : Additional exemplary hybrids containing leptin peptide fragments linked to amylin-sCT-amylin chimericin compound 10 described herein were prepared. Compound 16 is [Ser117, dLeu119] leptin (116-122) -amylin (1-7) - [ ^11,18 Arg] sCT (8-27) ^-amylin (33-37) (SEQ ID NO: 397). The compound binds to amylin and CT receptors (RBA = receptor binding assay) and binds slightly to the CGRP receptor. The compound could also activate the CT receptor (C1A assay).

상기 대표적 분자를 본원에 기재한 바와 같은 음식물 섭취 검정에서의 활성에 대하여 시험하였다. 렙틴은 본 검정에서 활성이 아니었지만, 화합물 16은 1 mg/kg에서 식욕 억제 활성을 보였다. 화합물 16은 식욕 억제 효과에 있어서 래트 아밀린 (25 nmol/kg)보다도 우수하였다. 화합물 10이 대조군에 비해 음식물 섭취율을 91 내지 95％ 감소시켜 훨씬 더 효과적이었지만, 화합물 16은 누적 섭취량을 대조군의 34 내지 38％로 감소시켰다. 추가의 예시적인 실시양태는 렙틴 펩티드 N-말단과 아밀린(1-7)-[^11,18Arg]sCT(8-27)-아밀린(33-37) 화합물의 헤드-헤드(head-to-head) 연결을 포함한다.The representative molecules were tested for activity in a food intake assay as described herein. Leptin was not active in this assay, but Compound 16 showed an appetite suppressant activity at 1 mg / kg. Compound 16 was superior to rat amylin (25 nmol / kg) in the appetite suppressing effect. Compound 16 reduced cumulative intakes to 34-38% of the control, while Compound 10 was much more effective in reducing food intake by 91-95% compared to the control. Additional exemplary embodiments include head-to-head of leptin peptide N-terminus and amylin (1-7) - [ ^11,18 Arg] sCT (8-27) ^-amylin (33-37) -head connection.

CCK / 아밀린 - sCT 하이브리드: CCK와 아밀린-sCT 키메라의 예시적인 하이브리드는 관련 수용체 특이성 및 활성화를 입증하였다. 서열 DF(P-CH₂SO₃)MGWMDFGKR KCNTATCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY (서열 398)를 갖는 예시적인 화합물은 CT 수용체 결합 검정에서 0.044 nM, CGRP 수용체 결합 검정에서 4.4 nM, 아밀린 수용체 결합 검정에서 0.083 nM, 및 GLP 수용체 시클라제 (RIN) 검정에서 1000 nM의 IC₅₀을 나타내었다. CCK / amylin - sCT Hybrid : Exemplary hybrids of CCK and amylin-sCT chimeras have demonstrated relevant receptor specificity and activation. Exemplary compounds having the sequence DF (P-CH ₂ SO ₃ ) MGWMDFGKR KCNTATCATQRLANELVRLQTYPRTNVGSNTY (SEQ ID NO: 398) were 0.044 nM in the CT receptor binding assay, 4.4 nM in the CGRP receptor binding assay, 0.083 nM in the amylin receptor binding assay, Showed an IC ₅₀ of 1000 nM in the cyclase (RIN) assay.

실시예Example 5: 음식물 섭취, 체중 및 체중 증가의 감소 5: Reduction of food intake, weight and weight gain

본원에 기재한 바와 같이, 본 발명의 예시적인 하이브리드 폴리펩티드를 마우스 및 래트에서 식욕 저해, 체중 감소 및 체중 증가의 감소와 관련하여 추가로 시험하였다. 모 화합물 역시 단독으로 또는 조합물로 검정하였다. 도 9 내지 도 21은 본원에 기재한 바와 같은 검정에서 예시적인 하이브리드의 생체내 작용을 입증한다. As described herein, exemplary hybrid polypeptides of the invention have been further tested in connection with decreased appetite suppression, weight loss and weight gain in mice and rats. The parent compounds were also tested alone or in combination. 9-21 demonstrate the in vivo action of an exemplary hybrid in assays as described herein.

마우스에서 예시적인 하이브리드 및 이들의 모 화합물에 의한 음식물 섭취 억제의 생체내 활성을 하기 표에 나타내었다. 값은 표시한 시간 동안 주입한 후의 음식물 섭취의 억제율(％)로 나타내었다. "ns"는 비히클에 비해 "유의하지 않음"을 의미한다.The in vivo activities of the exemplary hybrids in mice and inhibition of food ingestion by their parent compounds are shown in the following table. Values are expressed as percent inhibition of food intake after injection for the indicated time. "ns" means "not significant" relative to the vehicle.

마우스 DIO 모델에서 예시적인 하이브리드 및 이들의 모 화합물에 의한 체중 억제의 생체내 활성을 하기 표에 나타내었다. 값은 표시한 시간 동안 주입한 후의 체중 억제율(％)로 나타내었다.The in vivo activities of weight loss inhibition by exemplary hybrids and their parent compounds in the mouse DIO model are shown in the following table. Values are expressed as% body weight reduction after injection for the indicated time.

마우스 DIO 모델에서 예시적인 하이브리드 및 이들의 모 화합물에 의한 체중 억제의 생체내 활성은 하기 표에서 입증된다. 값은 표시한 시간 동안 주입한 후의 체중 억제율(％)로 나타내었다.The in vivo activities of weight loss inhibition by exemplary hybrids and their parent compounds in the mouse DIO model are demonstrated in the table below. Values are expressed as% body weight reduction after injection for the indicated time.

래트 모델 (매일 주사)에서 예시적인 하이브리드 및 이들의 모 화합물에 의한 체중 억제의 생체내 활성은 하기 표에서 입증된다. 값은 체중 억제율(％)로 나타내었다. 굵은 글자의 값은 비히클에 비해 유의함을 나타낸다.The in vivo activities of weight loss inhibition by exemplary hybrids and their parent compounds in rat models (daily injections) are demonstrated in the following table. The values were expressed as percent body weight inhibition. Values in bold indicate significance relative to vehicle.

래트 모델에서의 체중 억제에 대하여 예시적인 하이브리드 및 이들의 모 화합물에 의한 체중 및 체중 증가 감소의 생체내 활성은 표시한 기간에 걸친 주입 및 표시한 기간에 걸친 1일 1회 주사 둘다에 대하여 하기 표에서 입증된다. 값은 체중 억제율(％)로 나타내었다. 8시간의 기간에 걸친 야간-시간 먹이 섭취에서 제6일의 음식물 섭취의 억제율(％)도 측정하였다. 달리 나타내지 않는다면, 하이브리드는 15 nmol/kg/일로 제공되었다. 체중은 약 2％의 차이가 통계적으로 유의하다. 음식물 섭취량은 약 20％의 차이가 통계적으로 유의하다. Exemplary hybrids for weight control in rat models and in vivo activity of body weight and weight gain reduction by parent compounds thereof are shown in the following table for both injections over the indicated time periods and once daily injections over the indicated time periods &Lt; / RTI > The values were expressed as percent body weight inhibition. The% inhibition of food intake on day 6 in the night-time food intake over an 8-hour period was also measured. Unless otherwise indicated, the hybrid was provided at 15 nmol / kg / day. The difference in body weight by about 2% is statistically significant. Food intake is statistically significant at a difference of about 20%.

실시예Example 7: 혈중 7: Serum 글루코스Glucose 저하 Lowering

표시한 기간에 걸쳐 레빈 래트에서 수행한 OGTT 검정에서 예시적인 하이브리드 및 이들의 모 화합물에 의한 혈중 글루코스 저하의 생체내 활성은 하기 표에서 입증된다. 값은 혈중 글루코스 수준의 감소율(％)로 나타내었다. 굵은 글자의 값은 비히클에 비해 유의함을 나타낸다.The in vivo activities of blood glucose reduction by exemplary hybrids and their parent compounds in the OGTT assay performed in Levin rats over the indicated periods are demonstrated in the table below. Values are expressed as percent reduction in blood glucose levels. Values in bold indicate significance relative to vehicle.

실시예Example 8: 위 공복 활성 8: stomach stomach activity

표시한 기간에 걸쳐 레빈 래트에서 수행한, 예시적인 하이브리드 및 이들의 모 화합물에 의한 위 공복에 대한 생체내 활성은 하기 표에서 입증된다. 값은 위 공복 억제율(％) 및 아세트아미노펜 통과(pass)율(％)로 나타내었다. Exemplary hybrids performed in Levin rats over the indicated periods and in vivo activity against stool fasting by parent compounds thereof are demonstrated in the following table. Values are expressed as percent stomach uptake (%) and percent acetaminophen (pass).

실시예Example 9: 9: PPFPPF 폴리펩티드에 의한, 단기적 및 장기적인 음식물 섭취의 저해 Inhibition of Short-term and Long-term Food Intake by Polypeptides

암컷 NIH/스위스 마우스 (8주령 내지 24주령)를 0600에 빛을 사용한 12시간:12시간 명:암 주기로 집단 수용하였다. 물 및 표준 펠렛형 마우스 먹이는 언급되는 것을 제외하고는 마음대로 먹을 수 있었다. 실험 1일 전에는 동물들을 대략 1500시부터 굶겼다. 실험 당일 아침에 동물들을 실험군으로 나누었다. 전형적인 연구에서, n = 4개 우리 (3마리 마우스/우리)였다.Female NIH / Swiss mice (8 to 24 weeks old) were grouped into a 12 hour: 12 hour name: cancer cycle using 0600 light. Water and standard pelleted mice were allowed to eat at will except as noted. One day before the experiment, animals starved from about 1500. On the morning of the experiment, animals were divided into experimental groups. In a typical study, n = 4 mice (3 mice / us).

시간 = 제0분일 때 모든 동물들에게 비히클 또는 화합물을 약 10 nmol/kg 내지 100 nmol/kg 범위의 양으로 복강내 주사하고, 그 직후에는 사전 칭량된 양 (10 내지 15 g)의 표준 먹이를 공급하였다. 먹이를 치우고, 먹이 소모량을 측정하기 위해 제30분, 제60분 및 120분에 칭량하였다 [Morley, Flood et al., Am. J. Physiol. 267:R178-R184, 1994]. PPF 폴리펩티드가 음식물 섭취에 미치는 단기 효과를 연구하는 경우, 음식물 섭취량은 제0분에 처음 제공된 먹이의 중량으로부터 제30분, 제60분, 제120분 및 제180분 시점에 남은 먹이의 중량을 차감하여 계산하였다. 유사하게, 물 섭취량은 처음에 제공된 물의 중량 (g)으로부터 상기 시점에 남은 물의 그램수 (g)를 차감하여 계산하였다. PPF 폴리펩티드가 더 오랜 기간의 (장기) 음식물 섭취 및/또는 신체 조성에 미치는 효과를 연구하는 경우, 2주의 기간에 걸친 음식물 소모량을 측정하였다. PPF 폴리펩티드가 더 오랜 기간의 음식물 섭취 및/또는 신체 조성에 미치는 이러한 효과 연구를 위해, 마우스를 처치 시작 전 1주일 동안 개별적으로 가두었다. 실험 내내 음식물 섭취량과 체중을 매일 모니터링하였다. 처치 기간 동안, 비히클 (물 중 50％ 디메틸술폭시드) 및 PYY(3- 36) (1 mg/kg/일)을 이소플루란 마취하에 견갑내 영역에 배치한 알제트^® 삼투 펌프 (듀렉트 코포레이션(Durect Corp.), 미국 캘리포니아주 큐퍼티노 소재; 모델 1003D, 2001 및 2004; 각각 3일, 7일 및 28일 연구용)를 이용한 연속 피하 (s.c.) 주입으로 투여하였다. 각 연구 종료시에, 동물들을 이소플루란 과다투여로 2시간 내지 4시간 후에 신속하게 희생시켰다. 심장 천자로 Na-헤파린-세정된 주사기에 혈액을 모으고, 혈장은 즉시 동결시켰다. 일부 연구에서는, 이중 에너지 X선 흡수계측기 (DEXA; 픽시무스(PixiMus), 쥐이 루나(GE Lunar))를 이용하여 신체 조성을 측정하였다. 일부 연구에서는, 동물들을 구속 튜브에 넣어 2분 동안 NMR을 실시하는 설치류용 NMR 기기 (에코엠알아이-700(EchoMRI-700)™)를 사용하여 처치전 및 처치후의 신체 조성 (예를 들어 지방 및 단백질의 양)을 측정하여 지방량 및 제지방량 (g)을 정량하였다. 양쪽 부고환 지방 패드 및 견갑내 갈색 지방 조직 (BAT)을 동물로부터 절개해 낼 수 있고, 이들 기관의 중량을 측정하였다. 절제된 간 샘플을 RNALater (암비온(Ambion), 미국 텍사스주 오스틴 소재)에 넣어 -20℃에 저장할 수 있다.At time = 0 min, all animals are given an intraperitoneal injection of vehicle or compound in an amount ranging from about 10 nmol / kg to 100 nmol / kg, followed immediately by a pre-weighed amount (10-15 g) of standard food Respectively. Were weighed at 30, 60 and 120 min to remove food and measure food consumption [Morley, Flood et al., Am. J. Physiol. 267: R178-R184, 1994). When studying the short-term effect of PPF polypeptide on food intake, the food intake is calculated by subtracting the weight of the food remaining at the 30th, 60th, 120th and 180th minutes from the weight of the food initially provided at 0th minute Respectively. Similarly, the water intake was calculated by subtracting the number of grams (g) of water left at this point from the weight (g) of water initially provided. Food consumption over a period of two weeks was measured when studying the effects of PPF polypeptides on longer (long term) food intake and / or body composition. To study this effect of PPF polypeptides on food intake and / or body composition for longer periods of time, mice were individually confined for one week prior to commencement of treatment. Food intake and body weight were monitored daily throughout the experiment. During the treatment period, vehicle (50% in water-dimethyl sulfoxide) and PYY (3- 36) a jet Al ^® osmotic pumps arranged to (1 mg / kg / day) to shoulder the region under isoflurane anesthesia (dew collected Corporation (Sc) infusion using Durect Corp., Cupertino, CA; Model 1003D, 2001 and 2004; for 3 days, 7 days and 28 days, respectively, for study). At the end of each study, animals were rapidly sacrificed after 2 hours to 4 hours of isoflurane overdosage. Blood was collected in a Na-heparin-rinsed syringe as a cardiac puncture, and the plasma was immediately frozen. In some studies, body composition was measured using dual energy X-ray absorptiometry (DEXA; PixiMus, GE Lunar). In some studies, body composition (e.g., fat and / or fat) before and after treatment was measured using a rodent NMR instrument (EchoMRI-700 ™) in which animals were placed in a constrained tube and subjected to NMR for 2 minutes The amount of fat and the amount of fat (g) were determined by measuring the amount of protein. Both epididymal fat pads and shoulder blind brown adipose tissue (BAT) were dissected from the animal and the weights of these organs were determined. Samples of the resected liver can be stored at -20 ° C in RNALater (Ambion, Austin, Texas, USA).

도 22 내지 도 29는 본원에 기재한 음식물 섭취 검정에서 PPF 폴리펩티드 키메라, 특히 PPY-NPY 키메라, 예를 들어 화합물 4883 및 5705에 의한 누적 음식물 섭취량 감소 능력을 보여준다. Figures 22-29 show cumulative food intake abatement capacity by PPF polypeptide chimeras, particularly PPY-NPY chimeras, such as compounds 4883 and 5705, in the food intake assay described herein.

도 22는 화합물 5705 투여시 3시간에 걸쳐 비히클 단독 투여시에 비해 누적 음식물 섭취량이 감소되었음을 보여준다. 도 23A 및 도 24A는 음식물 섭취량 (g) 에서의 변화를 보여주고, 도 23B 및 도 24B는 13일 동안 비히클 또는 화합물 4883 또는 화합물 5705 (500 ㎍/kg/일의 투여량)를 연속 투여한 마우스에서의 체중 변화 (비히클-보정된 체중 변화율(％))를 보여준다. PPF 폴리펩티드의 투여 시작 다음날인 이른 시기에는 화합물 4883 또는 화합물 5705를 처치한 동물에서 음식물 섭취 및 체중이 감소되는 경향이 있는 것으로 보였다.Figure 22 shows that cumulative food intake was reduced over 3 hours of administration of compound 5705 compared to vehicle alone. Figures 23A and 24A show the change in food intake (g), and Figures 23B and 24B show changes in the mice or mice treated with vehicle 4883 or Compound 5705 (dose of 500 / / kg / day) (Vehicle-corrected weight change rate (%)). In the early days after the start of administration of the PPF polypeptide, it appeared that food intake and body weight tended to decrease in the animals treated with compound 4883 or compound 5705.

도 25 및 도 26은 13일 동안 비히클 또는 화합물 4883 또는 화합물 5705 (500 ㎍/kg/일의 투여량)를 연속 투여한 마우스에서 화합물 4883 또는 화합물 5705의 투여시 1일 물 섭취 및 뇨 배출에 있어서의 변화를 보여준다. Figures 25 and 26 show the effect of vehicle 4883 or compound 5705 on the daily water uptake and urine output on administration of vehicle 4883 or compound 5705 (dose of 500 [mu] g / kg / day) .

도 27은 13일 동안 비히클 또는 화합물 4883 또는 화합물 5705 (500 ㎍/kg/일의 투여량)의 연속 투여가 신체 조성에 미치는 효과를 NMR로 평가한 것을 보여준다. 도 28A 및 도 28B은 13일 동안 비히클 또는 화합물 4883 또는 화합물 5705 (500 ㎍/kg/일의 투여량)를 연속 투여한 마우스에서 그램수 (g)로 측정한 물 변화량 및 변화율(％)을 보여준다. Figure 27 shows the NMR evaluation of the effects of continuous administration of vehicle or compound 4883 or compound 5705 (dose of 500 [mu] g / kg / day) for 13 days on body composition. Figures 28A and 28B show the water change and percent change (%) measured in grams (g) in mice given continuous dosing of vehicle or compound 4883 or compound 5705 (dose of 500 ㎍ / kg / day) for 13 days .

도 29는 14일 동안 화합물 4883 또는 화합물 5705 (500 ㎍/kg/일의 투여량)의 연속 투여가 뇨 전해질에 미치는 효과를 보여준다.Figure 29 shows the effect of continuous administration of compound 4883 or compound 5705 (dose of 500 [mu] g / kg / day) on the urine electrolyte for 14 days.

본 발명을 바람직한 예 및 실시양태의 측면에서 설명하였지만, 당업자에게는 본 발명의 변형 및 변경이 명백할 것임을 이해해야 한다. 따라서, 첨부되는 청구의 범위는 본 발명의 청구 범위 내에 포함되는 이러한 모든 균등한 변형을 포함하는 것이다.While the invention has been described in terms of preferred embodiments and embodiments, it is to be understood by those skilled in the art that modifications and variations of the invention will be apparent. It is, therefore, to be understood that the appended claims are intended to cover all such equivalent variations as fall within the scope of the appended claims.

SEQUENCE LISTING (26Oct06).txt <110> LEVY, ODILE ESTHER HANLEY, MICHAEL R. JODKA, CAROLYN M. LEWIS, DIANA Y. SOARES, CHRISTOPHER J. GHOSH, SOUMITRA S. D'SOUZA, LAWRENCE J. PARKES, DAVID MACK, CHRISTINE M. FOROOD, BRUCE B. <120> HYBRID POLYPEPTIDES WITH SELECTABLE PROPERTIES <130> 0701WO2 <140> 11/201,664 <141> 2005-08-11 <140> 11/206,903 <141> 2005-08-17 <140> 11/301,744 <141> 2005-12-12 <160> 457 <170> PatentIn Ver. 3.3 <210> 1 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 1 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu 35 40 45 Val Thr Arg Gln Arg Tyr 50 <210> 2 <211> 51 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 2 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Arg His Tyr 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lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 7 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Ala Ser Leu Arg 20 25 30 His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 8 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 8 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Arg His Tyr Leu 20 25 30 Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 9 <211> 47 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 9 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Asn Arg Tyr Tyr 20 25 30 Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 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construct <220> <221> MOD_RES <222> (29)..(30) <223> Beta-alanine <220> <223> C-term amidated <400> 12 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 13 <211> 47 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 13 His Gly Glu Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Asn Arg Tyr Tyr 20 25 30 Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 45 <210> 14 <211> 43 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 14 His Gly Glu Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Ala Ser Leu Arg 20 25 30 His Tyr Leu Asn 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Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (29) <223> 12-Ado <220> <223> C-term amidated <400> 27 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Lys Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 28 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (29) <223> 12-Ado <220> <223> C-term amidated <400> 28 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu Gln 35 40 45 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 29 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (29) <223> 3,6-dioxactoanoyl <220> <223> C-term amidated <400> 29 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Lys Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 30 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (29) <223> 3,6-dioxactoanoyl <220> <223> C-term amidated <400> 30 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu Gln 35 40 45 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 31 <211> 61 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Aib <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Lys(formyl) <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Aib <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Lys(formyl) <220> <223> C-term amidated <400> 39 Ser Thr Ala Val Leu Xaa Lys Leu Ser Gln Glu Leu Xaa Lys Leu Gln 1 5 10 15 Thr Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 40 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Isocaproyl-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Aib <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Lys(formyl) <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Aib <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Lys(formyl) <220> <223> C-term amidated <400> 40 Ser Thr Ala Val Leu Xaa Lys Leu Ser Gln Glu Leu Xaa Lys Leu Glu 1 5 10 15 Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 41 <211> 43 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Amidated terminus <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Sulfonated Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Succinoyl-Cys <400> 41 Phe Asp Met Trp Gly Met Tyr Asp Cys Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly 1 5 10 15 Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg 20 25 30 His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 42 <211> 43 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Amidated terminus <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Sulfonated Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Bis-Cys(N-Acetyl) <400> 42 Phe Asp Met Trp Gly Met Tyr Asp Cys Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly 1 5 10 15 Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg 20 25 30 His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 43 <211> 43 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Amidated terminus <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Sulfonated Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Gly-Aminoxymethylcarbonyl <220> <223> C-term amidated <400> 43 Phe Asp Met Trp Gly Met Tyr Asp Gly Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly 1 5 10 15 Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg 20 25 30 His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 44 <211> 37 <212> PRT <213> Rattus sp. <400> 44 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 45 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 46 <211> 52 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Tyr Arg Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys 1 5 10 15 Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln 20 25 30 Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser 35 40 45 Pro Gln Gly Tyr 50 <210> 47 <211> 32 <212> PRT <213> Oncorhynchus sp. <400> 47 Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 30 <210> 48 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe 1 5 10 15 Asn Lys Phe His Thr Phe Pro Gln Thr Ala Ile Gly Val Gly Ala Pro 20 25 30 <210> 49 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Ala Cys Asp Thr Ala Thr Cys Val Thr His Arg Leu Ala Gly Leu Leu 1 5 10 15 Ser Arg Ser Gly Gly Val Val Lys Asn Asn Phe Val Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Lys Ala Phe 35 <210> 50 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Thr His Arg Leu Ala Gly Leu Leu 1 5 10 15 Ser Arg Ser Gly Gly Met Val Lys Ser Asn Phe Val Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Lys Ala Phe 35 <210> 51 <211> 47 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Thr Gln Ala Gln Leu Leu Arg Val Gly Cys Val Leu Gly Thr Cys Gln 1 5 10 15 Val Gln Asn Leu Ser His Arg Leu Trp Gln Leu Met Gly Pro Ala Gly 20 25 30 Arg Gln Asp Ser Ala Pro Val Asp Pro Ser Ser Pro His Ser Tyr 35 40 45 <210> 52 <211> 40 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Val Gly Cys Val Leu Gly Thr Cys Gln Val Gln Asn Leu Ser His Arg 1 5 10 15 Leu Trp Gln Leu Met Gly Pro Ala Gly Arg Gln Asp Ser Ala Pro Val 20 25 30 Asp Pro Ser Ser Pro His Ser Tyr 35 40 <210> 53 <211> 47 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 53 Pro His Ala Gln Leu Leu Arg Val Gly Cys Val Leu Gly Thr Cys Gln 1 5 10 15 Val Gln Asn Leu Ser His Arg Leu Trp Gln Leu Val Arg Pro Ala Gly 20 25 30 Arg Arg Asp Ser Ala Pro Val Asp Pro Ser Ser Pro His Ser Tyr 35 40 45 <210> 54 <211> 40 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 54 Val Gly Cys Val Leu Gly Thr Cys Gln Val Gln Asn Leu Ser His Arg 1 5 10 15 Leu Trp Gln Leu Val Arg Pro Ala Gly Arg Arg Asp Ser Ala Pro Val 20 25 30 Asp Pro Ser Ser Pro His Ser Tyr 35 40 <210> 55 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Tyr(SO3) <400> 55 Asp Tyr Met Gly Trp Met Asp Phe 1 5 <210> 56 <211> 167 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Met His Trp Gly Thr Leu Cys Gly Phe Leu Trp Leu Trp Pro Tyr Leu 1 5 10 15 Phe Tyr Val Gln Ala Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys 20 25 30 Thr Leu Ile Lys Thr Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr 35 40 45 Gln Ser Val Ser Ser Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro 50 55 60 Gly Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala 65 70 75 80 Val Tyr Gln Gln Ile Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln 85 90 95 Ile Ser Asn Asp Leu Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala 100 105 110 Phe Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu 115 120 125 Asp Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val 130 135 140 Val Ala Leu Ser Arg Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln 145 150 155 160 Leu Asp Leu Ser Pro Gly Cys 165 <210> 57 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 57 Tyr Pro Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 58 <211> 34 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 58 Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn 1 5 10 15 Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln 20 25 30 Arg Tyr <210> 59 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 59 His Asp Glu Phe Glu Arg His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val 1 5 10 15 Ser Ser Thr Leu Glu Gly Gln Ala Ala Leu Glu Phe Ile Ala Trp Leu 20 25 30 Val Lys Gly Arg Gly 35 <210> 60 <211> 37 <212> PRT <213> Xenopus laevis <220> <221> MOD_RES <222> (37) <223> Ser-OH <400> 60 His Ala Glu Gly Thr Tyr Thr Asn Asp Val Thr Glu Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ala Lys Glu Phe Ile Glu Trp Leu Ile Lys Gly Lys Pro Lys 20 25 30 Lys Ile Arg Tyr Ser 35 <210> 61 <211> 30 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 61 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Leu Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 30 <210> 62 <211> 33 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 62 His Ala Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Glu Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 63 <211> 31 <212> PRT <213> Xenopus sp. <220> <221> MOD_RES <222> (31) <223> Pro-OH <400> 63 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Asn Asp Met Thr Asn Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Gly Trp Leu Ile Lys Gly Arg Pro 20 25 30 <210> 64 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 65 <211> 39 <212> PRT <213> Heloderma suspectum <400> 65 His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 66 <211> 39 <212> PRT <213> Heloderma suspectum <400> 66 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 <210> 67 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 68 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 69 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 70 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 71 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 72 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 72 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 73 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 73 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 74 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 74 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 75 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 75 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 76 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> 2,7-Cyclo bridge <400> 76 Lys Asp Asn Thr Ala Thr Lys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 77 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 78 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 79 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Lys Ala Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 80 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Lys Ala Asn Thr Ala Thr Ala Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 81 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 81 Ser Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 82 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 82 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 83 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 83 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 84 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 84 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 85 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 85 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 86 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 86 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 87 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 87 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 88 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 88 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 89 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 89 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 90 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 90 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 91 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 91 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Ile His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 92 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 92 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Ile His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 93 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 93 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Ile 1 5 10 15 His Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 94 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 94 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 95 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 95 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Ala Val Leu Ser Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 96 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 96 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Ile Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 97 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 97 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Leu Pro Thr Asp Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 98 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 98 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Ser Leu Pro Thr Asp Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 99 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 99 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 His Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Pro Ser Thr Asp Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 100 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 100 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ala Leu Ser Pro Thr Asp Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 101 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 101 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Ala Ile Leu Pro Pro Thr Asp Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 102 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 102 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Thr Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser His Asn Leu Gly Pro Ala Leu Pro Pro Thr Asp Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 103 <211> 32 <212> PRT <213> Oncorhynchus sp. <400> 103 Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Gly Leu Gly Lys Leu Ser Glu Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Arg 20 25 30 <210> 104 <211> 32 <212> PRT <213> Oncorhynchus sp. <400> 104 Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Glu Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr Leu Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Arg 20 25 30 <210> 105 <211> 31 <212> PRT <213> Oncorhynchus sp. <400> 105 Cys Gly Ser Leu Ser Thr Cys Gly Leu Gly Lys Leu Ser Glu Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Arg 20 25 30 <210> 106 <211> 32 <212> PRT <213> Oncorhynchus sp. <400> 106 Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Glu Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr 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<211> 146 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> leptin genus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..() <223> Xaa is Asn, Asp or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..() <223> Xaa is Thr or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28)..() <223> Xaa is Gln, Glu, or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (54)..() <223> Xaa is Met or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (68)..() <223> Xaa is Met or Leu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (72)..() <223> Xaa is Asn, Asp or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (77)..() <223> Xaa is Ser or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (118)..() <223> Xaa is Gly or Leu <400> 420 Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15 Ile Val Thr Arg Ile Xaa Asp Ile Ser His Xaa Xaa Ser Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45 Leu Thr Leu Ser Lys Xaa Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile 50 55 60 Leu Thr Ser Xaa Pro Ser Arg Xaa Val Ile Gln Ile Xaa Asn Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95 His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Xaa Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140 Gly Cys 145 <210> 421 <211> 146 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> leptin genus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..() <223> Xaa is Thr or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (77)..() <223> Xaa is Ser or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (118)..() <223> Xaa is Gly or Leu <400> 421 Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15 Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Xaa Gln Ser Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45 Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile 50 55 60 Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Xaa Asn Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95 His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Xaa Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140 Gly Cys 145 <210> 422 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> leptin genus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..() <223> Xaa is Ile, Leu, Met or methionine sulfoxide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..() <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..() <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..() <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..() <223> Xaa is Ile, Leu, Met or methionine sulfoxide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..() <223> Xaa is Asn, Asp or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (34)..() <223> Xaa is Gln or Glun <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37)..() <223> Xaa is Asn, Asp or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41)..() <223> Xaa is Asn, Asp or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (59)..() <223> Xaa is Trp or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (89)..() <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (93)..() <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (95)..() <223> Xaa is Ile, Leu, Met or methionine sulfoxide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (97)..() <223> Xaa is Trp or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (98)..() <223> Xaa is Gln or Glu <400> 422 Ile Pro Gly Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Xaa Asp Xaa Thr 1 5 10 15 Leu Ala Val Tyr Xaa Xaa Ile Leu Thr Ser Xaa Pro Ser Arg Xaa Val 20 25 30 Ile Xaa Ile Ser Xaa Asp Leu Glu Xaa Leu Arg Asp Leu Leu His Val 35 40 45 Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Xaa Ala Ser Gly Leu Glu 50 55 60 Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr 65 70 75 80 Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu Xaa Gly Ser Leu Xaa Asp Xaa Leu 85 90 95 Xaa Xaa Leu Asp Leu Ser Pro Gly Cys 100 105 <210> 423 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PPF genus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> Xaa is Tyr or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..() <223> Xaa is Ile, Pro, or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..() <223> Xaa is Ile, Bolton-Hunter-modified Lys, Lys, Val, or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..() <223> Xaa is Lys, Bolton-Hunter-modified Lys, Ala, Ser, or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7)..() <223> Xaa is Ala, Gly, or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..() <223> Xaa is Gly or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..() <223> Xaa is Ala or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..() <223> Xaa is Ser or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..() <223> Xaa is Pro, Ala, or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..() <223> Xaa is Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..() <223> Xaa is Leu or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18)..() <223> Xaa is Asn or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..() <223> Xaa is Arg, Lys, Bolton-Hunter-modified Lys, Gln, or N(Me)Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..() <223> Xaa is Tyr, Ala, Phe, Lys or Bolton-Hunter-modified Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..() <223> Xaa is Ala or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..() <223> Xaa is Ser, Ala, or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..() <223> Xaa is Arg, Lys or Bolton-Hunter-modified Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..() <223> Xaa is His, Ala, or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28)..() <223> Xaa is Leu or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..() <223> Xaa is Leu or Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..() <223> Xaa is Val, Ile, or Leu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (35)..() <223> Xaa is Lys, Bolton-Hunter-modified Lys, or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36)..() <223> Xaa is Tyr, Trp, or Phe <400> 423 Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Glu Xaa Pro Xaa Glu Asp Xaa Xaa Xaa Glu Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Tyr Xaa Asn Xaa Xaa Thr 20 25 30 Arg Gln Xaa Xaa 35 <210> 424 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PPF genus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> Xaa is Tyr or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..() <223> Xaa is Ile, Pro, or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4)..() <223> Xaa is Lys, Bolton-Hunter-modified Lys, Ala, Ser, or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6)..() <223> Xaa is Glu, Gln, Ala, Asn, Asp, or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9)..() <223> Xaa is Gly or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (10)..() <223> Xaa is Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro, or Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (11)..() <223> Xaa is Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro, or Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (12)..() <223> Xaa is Ala or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (13)..() <223> Xaa is Ser or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..() <223> Xaa is Pro, Ala, or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15)..() <223> Xaa is Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro, or Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16)..() <223> Xaa is Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17)..() <223> Xaa is Leu or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19)..() <223> Xaa is Arg, Lys, BH-modified Lys, Gln, or N(Me)Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21)..() <223> Xaa is Tyr, Ala, Phe, Lys, or BH-modified Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22)..() <223> Xaa is Ala or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23)..() <223> Xaa is Ser, Ala, or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25)..() <223> Xaa is Arg, Lys or Bolton-Hunter-modified Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26)..() <223> Xaa is His, Ala, or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27)..() <223> Xaa is Tyr or Phe <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28)..() <223> Xaa is Leu or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..() <223> Xaa is Asn or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..() <223> Xaa is Leu or Met <220> <221> MISC_FEATURE <222> (31)..() <223> Xaa is Val, Ile, or Leu <400> 424 Xaa Xaa Pro Xaa Pro Xaa His Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Ala Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 425 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PPY-NPY chimera <400> 425 Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Ala 1 5 10 15 Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln 20 25 30 Arg Tyr <210> 426 <211> 59 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <400> 426 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Lys Cys Asn Thr Ala 20 25 30 Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu Gln Thr 35 40 45 Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 <210> 427 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> sulfated (SO3H) tyrosine <400> 427 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Asp Tyr Met Gly 20 25 30 Trp Met Asp Phe 35 <210> 428 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (30)..(30) <223> sulfated (CH2SO3H) tyrosine <400> 428 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Asp Tyr Met Gly 20 25 30 Trp Met Asp Phe 35 <210> 429 <211> 63 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <400> 429 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Gly Lys 20 25 30 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His 35 40 45 Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 430 <211> 67 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(30) <223> beta-Alanine beta-Alanine linker <400> 430 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Lys Cys 20 25 30 Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg 35 40 45 Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly Ser 50 55 60 Asn Thr Tyr 65 <210> 431 <211> 62 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(30) <223> beta-Alanine beta-Alanine linker <400> 431 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Lys Cys 20 25 30 Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg 35 40 45 Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 432 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <400> 432 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His 1 5 10 15 Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 433 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is succinimide beta-Alanine <400> 433 Xaa Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu 1 5 10 15 Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg 20 25 30 Gln Arg Tyr 35 <210> 434 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is thiopropyl beta-Alanine <400> 434 Xaa Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu 1 5 10 15 Leu His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr 20 25 30 Tyr <210> 435 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is maleimide butyl beta-Alanine <400> 435 Xaa Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu 1 5 10 15 Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg 20 25 30 Gln Arg Tyr 35 <210> 436 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <400> 436 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 437 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is maleimide butyl beta-Alanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> sulfated (CH2SO3H) phenylalanine <400> 437 Xaa Asp Phe Met Gly Trp Met Asp Phe 1 5 <210> 438 <211> 43 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..(2) <223> sulfated (para-CH2SO3) phenylalanine <400> 438 Asp Phe Met Gly Trp Met Asp Phe Gly Lys Arg Lys Cys Asn Thr Ala 1 5 10 15 Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln Thr 20 25 30 Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr 35 40 <210> 439 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> Xaa is succinimide beta-ALanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..(3) <223> sulfated (CH2SO3H) phenylalanine <400> 439 Xaa Asp Phe Met Gly Trp Met Asp Phe 1 5 <210> 440 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybird component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(1) <223> N-terminal acetyl <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(15) <223> beta-Alanine beta-Alanine <400> 440 Ser Tyr Ser Met Glu His Phe Arg Trp Gly Lys Pro Val Xaa Xaa Lys 1 5 10 15 <210> 441 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29)..(30) <223> beta-Alanine beta-Alanine linker <400> 441 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Lys Cys 20 25 30 <210> 442 <211> 47 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> N-terminal acetyl <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(15) <223> beta-Alanine beta-Alanine <400> 442 Ser Tyr Ser Met Glu His Phe Arg Trp Gly Lys Pro Val Xaa Xaa Lys 1 5 10 15 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His 20 25 30 Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 35 40 45 <210> 443 <211> 49 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> N-terminal acetyl <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14)..(15) <223> beta-Alanine beta-Alanine <400> 443 Ser Tyr Ser Met Glu His Phe Arg Trp Gly Lys Pro Val Xaa Xaa Ile 1 5 10 15 Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg 20 25 30 Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg 35 40 45 Tyr <210> 444 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> thiopropyl beta-Alanine <400> 444 Xaa Phe Leu Phe His Tyr Ser Lys Thr Gln Lys Leu Gly Lys Ser Asn 1 5 10 15 Val Val Glu Glu Leu Gln Ser Pro Phe Ala Ser Gln Ser Arg Gly Tyr 20 25 30 Phe Leu Phe Arg Pro Arg Asn 35 <210> 445 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> succinimide beta-Alanine <400> 445 Xaa Phe Leu Phe His Tyr Ser Lys Thr Gln Lys Leu Gly Lys Ser Asn 1 5 10 15 Val Val Glu Glu Leu Gln Ser Pro Phe Ala Ser Gln Ser Arg Gly Tyr 20 25 30 Phe Leu Phe Arg Pro Arg Asn 35 <210> 446 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> N-terminal succinimide <400> 446 Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Ala 1 5 10 15 Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln 20 25 30 Arg Tyr <210> 447 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> succinimide beta-Alanine <400> 447 Xaa Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu 1 5 10 15 Ala Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg 20 25 30 Gln Arg Tyr 35 <210> 448 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <400> 448 Asp Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp 1 5 10 15 Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr 20 25 30 Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 449 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..() <223> Xaa is mini-PEG3 linker <400> 449 Asp Xaa Gly Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu 1 5 10 15 Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val 20 25 30 Thr Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 450 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> Xaa is thiopropyl beta-Alanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3)..() <223> sulfated (CH2SO3H) phenylalanine <400> 450 Xaa Asp Phe Met Gly Trp Met Asp Phe 1 5 <210> 451 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> Xaa is thiopropyl beta-Alanine <400> 451 Xaa Asp Tyr Met Gly Trp Met Asp Phe 1 5 <210> 452 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> maleimide butyl beta-Alanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..() <223> Xaa is maleimide butyl beta-Alanine <400> 452 Xaa Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu 1 5 10 15 Ala Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg 20 25 30 Gln Arg Tyr 35 <210> 453 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <400> 453 Cys Gly Gly Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu 1 5 10 15 Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val 20 25 30 Thr Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 454 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..() <223> Xaa is mini-PEG linker <400> 454 Asp Xaa Gly Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu 1 5 10 15 Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val 20 25 30 Thr Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 455 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..() <223> Xaa is beta-Alanine <400> 455 Cys Xaa Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg 20 25 30 Gln Arg Tyr 35 <210> 456 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2)..() <223> Xaa is beta-Alanine <400> 456 Gly Xaa Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Ala Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 457 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 457 Tyr Pro Ser Lys Pro Asp Asn Pro Gly Glu Asp Ala Pro Ala Glu Asp 1 5 10 15 Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 1 SEQUENCE LISTING (26Oct06) .txt <110> LEVY, ODILE ESTHER HANLEY, MICHAEL R. JODKA, CAROLYN M. LEWIS, DIANA Y. SOARES, CHRISTOPHER J. GHOSH, SOUMITRA S. D'SOUZA, LAWRENCE J. PARKES, DAVID MACK, CHRISTINE M. FOROOD, BRUCE B. <120> HYBRID POLYPEPTIDES WITH SELECTABLE PROPERTIES <130> 0701WO2 <140> 11 / 201,664 <141> 2005-08-11 <140> 11 / 206,903 <141> 2005-08-17 <140> 11 / 301,744 <141> 2005-12-12 <160> 457 <170> PatentIn Ver. 3.3 <210> 1 <211> 54 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 1 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Ser Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu 35 40 45 Val Thr Arg Gln Arg Tyr 50 <210> 2 <211> 51 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 2 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Ser Ser His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg 35 40 45 Gln Arg Tyr 50 <210> 3 <211> 58 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 3 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Ser Ser Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His 35 40 45 Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 50 55 <210> 4 <211> 56 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (40) <223> Beta-domain <220> <223> C-term amidated <400> 4 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Ser Xaa Xaa Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu 35 40 45 Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 50 55 <210> 5 <211> 53 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (40) <223> Beta-domain <220> <223> C-term amidated <400> 5 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Ser Xaa Xaa Arg His Tyr Leu Asn Leu Val 35 40 45 Thr Arg Gln Arg Tyr 50 <210> 6 <211> 47 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (40) <223> Beta-domain <220> <223> C-term amidated <400> 6 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Ser Xaa Xaa Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 45 <210> 7 <211> 43 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 7 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Ala Ser Leu Arg 20 25 30 His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 8 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 8 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Arg His Tyr Leu 20 25 30 Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 9 <211> 47 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 9 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Asn Arg Tyr Tyr 20 25 30 Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 45 <210> 10 <211> 45 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (29) <223> Beta-domain <220> <223> C-term amidated <400> 10 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Ala Ser 20 25 30 Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 45 <210> 11 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (29) <223> Beta-domain <220> <223> C-term amidated <400> 11 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Arg His 20 25 30 Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 12 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (29) <223> Beta-domain <220> <223> C-term amidated <400> 12 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 13 <211> 47 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 13 His Gly Glu Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Asn Arg Tyr Tyr 20 25 30 Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 45 <210> 14 <211> 43 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 14 His Gly Glu Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Ala Ser Leu Arg 20 25 30 His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 15 <211> 40 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 15 His Gly Glu Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Phe Leu Lys Asn Arg His Tyr Leu 20 25 30 Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 16 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <223> C-term amidated <400> 16 His Gly Glu Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu 1 5 10 15 Glu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 17 <211> 45 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (29) <223> Beta-domain <220> <223> C-term amidated <400> 17 His Gly Glu Gly Ala Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu 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Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES <222> (41) <223> Tyr (SO3) <220> <223> C-term amidated <400> 20 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Ser Asp Tyr Met Gly Trp Met Asp Phe 35 40 45 <210> 21 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES <30> <223> Tyr (SO3) <220> <223> C-term amidated <400> 21 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Asp Tyr Met Gly 20 25 30 Trp Met Asp Phe 35 <210> 22 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES <30> <223> Phe (CH 2 SO 3) <220> <223> C-term amidated <400> 22 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Asp Phe Met Gly 20 25 30 Trp Met Asp Phe 35 <210> 23 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES (29) <223> Preparation of 8-amino-3,6-dioxaoctanoyl <220> <221> MOD_RES <31> <223> Tyr (SO3) <220> <223> C-term amidated <400> 23 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Asp Tyr Met 20 25 30 Gly Trp Met Asp Phe 35 <210> 24 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard and human construct <220> <221> MOD_RES (29) <223> Preparation of 8-amino-3,6-dioxaoctanoyl <220> <221> MOD_RES <31> <223> Phe (CH 2 SO 3) <220> <223> C-term amidated <400> 24 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Asp Phe Met 20 25 30 Gly Trp Met Asp Phe 35 <210> 25 <211> 59 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <223> C-term amidated <400> 25 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Lys Cys Asn Thr Ala 20 25 30 Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu Gln Thr 35 40 45 Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 <210> 26 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <223> C-term amidated <400> 26 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Lys Ala Asn Thr Ala 20 25 30 Thr Ala Val Leu Gly 35 <210> 27 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES (29) <223> 12-Ado <220> <223> C-term amidated <400> 27 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Lys Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 28 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES (29) <223> 12-Ado <220> <223> C-term amidated <400> 28 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu Gln 35 40 45 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 29 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES (29) <223> 3,6-dioxactoanoyl <220> <223> C-term amidated <400> 29 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Lys Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 30 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES (29) <223> 3,6-dioxactoanoyl <220> <223> C-term amidated <400> 30 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu Gln 35 40 45 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 31 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES (29) <223> 5-Apa <220> <223> C-term amidated <400> 31 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Lys Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 32 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES (29) <223> 5-Apa <220> <223> C-term amidated <400> 32 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu Gln 35 40 45 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 33 <211> 62 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (29) <223> Beta-domain <220> <223> C-term amidated <400> 33 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Lys Cys 20 25 30 Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg 35 40 45 Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 34 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (29) <223> Beta-domain <220> <223> C-term amidated <400> 34 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 35 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES (29) <223> 4,7,10-trioxa-13-tridecanamine succinimidyl <220> <223> C-term amidated <400> 35 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Lys Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 36 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES (29) <223> 4,7,10-trioxa-13-tridecanamine succinimidyl <220> <223> C-term amidated <400> 36 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu Gln 35 40 45 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 37 <211> 43 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Chimeric human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Tyr (SO3) <220> <223> C-term amidated <400> 37 Asp Tyr Met Gly Trp Met Asp Phe Gly Lys Arg Lys Cys Asn Thr Ala 1 5 10 15 Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln Thr 20 25 30 Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr 35 40 <210> 38 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> C-term amidated <400> 38 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 39 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Isocaproyl-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Aib <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Lys (formyl) <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Aib <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Lys (formyl) <220> <223> C-term amidated <400> 39 Ser Thr Ala Val Leu Xaa Lys Leu Ser Gln Glu Leu Xaa Lys Leu Gln 1 5 10 15 Thr Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 40 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Isocaproyl-Ser <220> <221> MOD_RES <222> (6) <223> Aib <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Lys (formyl) <220> <221> MOD_RES <222> (13) <223> Aib <220> <221> MOD_RES <222> (14) <223> Lys (formyl) <220> <223> C-term amidated <400> 40 Ser Thr Ala Val Leu Xaa Lys Leu Ser Gln Glu Leu Xaa Lys Leu Glu 1 5 10 15 Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 41 <211> 43 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Amidated terminus <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Sulfonated Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Succinoyl-Cys <400> 41 Phe Asp Met Trp Gly Met Tyr Asp Cys Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly 1 5 10 15 Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg 20 25 30 His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 42 <211> 43 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Amidated terminus <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Sulfonated Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (9) Bis-Cys (N-Acetyl) <400> 42 Phe Asp Met Trp Gly Met Tyr Asp Cys Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly 1 5 10 15 Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg 20 25 30 His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 43 <211> 43 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (1) <223> Amidated terminus <220> <221> MOD_RES <222> (7) <223> Sulfonated Tyr <220> <221> MOD_RES <222> (9) <223> Gly-Aminoxymethylcarbonyl <220> <223> C-term amidated <400> 43 Phe Asp Met Trp Gly Met Tyr Asp Gly Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly 1 5 10 15 Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg 20 25 30 His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 44 <211> 37 <212> PRT <213> Rattus sp. <400> 44 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser Asn Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 45 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 45 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 46 <211> 52 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 46 Tyr Arg Gln Ser Met Asn Asn Phe Gln Gly Leu Arg Ser Phe Gly Cys 1 5 10 15 Arg Phe Gly Thr Cys Thr Val Gln Lys Leu Ala His Gln Ile Tyr Gln 20 25 30 Phe Thr Asp Lys Asp Lys Asp Asn Val Ala Pro Arg Ser Lys Ile Ser 35 40 45 Pro Gln Gly Tyr 50 <210> 47 <211> 32 <212> PRT <213> Oncorhynchus sp. <400> 47 Cys Ser Asn Leu Ser Thr Cys Val Leu Gly Lys Leu Ser Gln Glu Leu 1 5 10 15 His Lys Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Gly Thr Pro 20 25 30 <210> 48 <211> 32 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 48 Cys Gly Asn Leu Ser Thr Cys Met Leu Gly Thr Tyr Thr Gln Asp Phe 1 5 10 15 Asn Lys Phe His Thr Phe Pro Gln Thr Ala Ile Gly Val Gly Ala Pro 20 25 30 <210> 49 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 49 Ala Cys Asp Thr Ala Thr Cys Val Thr His Arg Leu Ala Gly Leu Leu 1 5 10 15 Ser Arg Ser Gly Gly Val Val Lys Asn Asn Phe Val Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Lys Ala Phe 35 <210> 50 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 50 Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Thr His Arg Leu Ala Gly Leu Leu 1 5 10 15 Ser Arg Ser Gly Gly Met Val Lys Ser Asn Phe Val Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Lys Ala Phe 35 <210> 51 <211> 47 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 51 Thr Gln Ala Gln Leu Leu Arg Val Gly Cys Val Leu Gly Thr Cys Gln 1 5 10 15 Val Gln Asn Leu Ser His Arg Leu Trp Gln Leu Met Gly Pro Ala Gly 20 25 30 Arg Gln Asp Ser Ala Pro Val Asp Pro Ser Ser Pro His Ser Tyr 35 40 45 <210> 52 <211> 40 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 52 Val Gly Cys Val Leu Gly Thr Cys Gln Val Gln Asn Leu Ser His Arg 1 5 10 15 Leu Trp Gln Leu Met Gly Pro Ala Gly Arg Gln Asp Ser Ala Pro Val 20 25 30 Asp Pro Ser Ser Pro His Ser Tyr 35 40 <210> 53 <211> 47 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 53 Pro His Ala Gln Leu Leu Arg Val Gly Cys Val Leu Gly Thr Cys Gln 1 5 10 15 Val Gln Asn Leu Ser His Arg Leu Trp Gln Leu Val Arg Pro Ala Gly 20 25 30 Arg Arg Asp Ser Ala Pro Val Asp Pro Ser Ser Pro His Ser Tyr 35 40 45 <210> 54 <211> 40 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 54 Val Gly Cys Val Leu Gly Thr Cys Gln Val Gln Asn Leu Ser His Arg 1 5 10 15 Leu Trp Gln Leu Val Arg Pro Ala Gly Arg Arg Asp Ser Ala Pro Val 20 25 30 Asp Pro Ser Ser Pro His Ser Tyr 35 40 <210> 55 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Tyr (SO3) <400> 55 Asp Tyr Met Gly Trp Met Asp Phe 1 5 <210> 56 <211> 167 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 56 Met His Trp Gly Thr Leu Cys Gly Phe Leu Trp Leu Trp Pro Tyr Leu 1 5 10 15 Phe 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Leu Ile Glu Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 63 <211> 31 <212> PRT <213> Xenopus sp. <220> <221> MOD_RES <31> <223> Pro-OH <400> 63 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Asn Asp Met Thr Asn Tyr Leu Glu Glu 1 5 10 15 Lys Ala Ala Lys Glu Phe Val Gly Trp Leu Ile Lys Gly Arg Pro 20 25 30 <210> 64 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 64 His Ser Gln Gly Thr Phe Thr Ser Asp Tyr Ser Lys Tyr Leu Asp Ser 1 5 10 15 Arg Arg Ala Gln Asp Phe Val Gln Trp Leu Met Asn Thr Lys Arg Asn 20 25 30 Arg Asn Asn Ile Ala 35 <210> 65 <211> 39 <212> PRT <213> Heloderma suspectum <400> 65 His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Ser 35 <210> 66 <211> 39 <212> PRT <213> Heloderma suspectum <400> 66 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser 20 25 30 Ser Gly Ala Pro Pro Ser 35 <210> 67 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 67 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 68 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 68 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 69 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 69 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 70 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 70 Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val Arg Ser Ser Asn Asn Phe Gly Pro Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 71 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 71 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 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76 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> 2,7-Cyclo bridge <400> 76 Lys Asp Asn Thr Ala Thr Lys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Pro Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 77 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 77 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 78 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 78 Ala Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 79 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 79 Lys Ala Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu 1 5 10 15 Val His Ser Ser Asn Asn Phe Gly Ala Ile Leu Ser Ser Thr Asn Val 20 25 30 Gly Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 80 <211> 37 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 80 Lys Ala Asn Thr Ala 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<223> Description of Artificial Sequence: Chimeric human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (2) <223> Phe (CH 2 SO 3) <400> 203 Asp Phe Met Gly Trp Met Asp Phe Gly Lys Arg Lys Cys Asn Thr Ala 1 5 10 15 Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln Thr 20 25 30 Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr 35 40 <210> 204 <211> 31 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 204 His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Ser Val Ser Ser Thr Leu Glu Gly 1 5 10 15 Gln Ala Ala Leu Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 30 <210> 205 <211> 29 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 205 Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Thr Leu Glu Gly Gln Ala 1 5 10 15 Ala Leu Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly 20 25 <210> 206 <211> 28 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 206 Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Thr Leu Glu Gly Gln Ala 1 5 10 15 Ala Leu Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg 20 25 <210> 207 <211> 31 <212> PRT <213> Heloderma suspectum <400> 207 Asp Leu Ser Lys Gln 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(29) <223> 12-Ado <400> 380 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Lys Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Glu Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 381 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hybrid lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (29). (29) <223> 12-Ado <400> 381 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Glu Glu Leu His Arg Leu Gln 35 40 45 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 382 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hybrid lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (29). (29) <223> 3,6-dioxactoanoyl <400> 382 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Lys Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Glu Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 383 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hybrid lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (29). (29) <223> 3,6-dioxactoanoyl <400> 383 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Glu Glu Leu His Arg Leu Gln 35 40 45 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 384 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hybrid lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (29). (29) <223> 5-Apa <400> 384 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Lys Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Glu Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 385 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hybrid lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (29). (29) <223> 5-Apa <400> 385 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Glu Glu Leu His Arg Leu Gln 35 40 45 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 386 <211> 62 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hybrid lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (29) <223> <400> 386 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Lys Cys 20 25 30 Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Glu Glu Leu His Arg 35 40 45 Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 387 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hybrid lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (29) <223> <400> 387 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Glu Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 388 <211> 61 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hybrid lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (29). (29) <223> 4,7,10-trioxa-13-tridecanamine succinimidyl <400> 388 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Lys Cys Asn 20 25 30 Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Glu Glu Leu His Arg Leu 35 40 45 Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 389 <211> 60 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hybrid lizard, human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (29). (29) <223> 4,7,10-trioxa-13-tridecanamine succinimidyl <400> 389 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Cys Asn Thr 20 25 30 Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Glu Glu Leu His Arg Leu Gln 35 40 45 Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 390 <211> 43 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hybrid human and salmon construct <220> <221> MOD_RES <222> (2) (2) <223> Tyr (SO3) <400> 390 Asp Tyr Met Gly Trp Met Asp Phe Gly Lys Arg Lys Cys Asn Thr Ala 1 5 10 15 Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln Thr 20 25 30 Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr 35 40 <210> 391 <211> 68 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> Hybird lizard human construct <220> <221> MISC_FEATURE <223> C-term amidated <220> <221> MOD_RES &Lt; 222 > (29) <223> <400> 391 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn 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Asp Leu Ser Pro 130 135 140 Gly Cys 145 <210> 417 <211> 146 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27) <223> Xaa is Thr or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28) <223> Xaa is Gln or absent <400> 417 Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15 Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Xaa Xaa Ser Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45 Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile 50 55 60 Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95 His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140 Gly Cys 145 <210> 418 <211> 146 <212> PRT <213> rhesus <400> 418 Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Ser Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15 Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Val 35 40 45 Leu Thr Leu Ser Gln Met Asp Gln Thr Leu Ala Ile Tyr Gln Gln Ile 50 55 60 Leu Ile Asn Leu Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Ser Asn Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95 His Leu Pro Leu Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Glu Ser Leu Gly Asp 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Leu Ser Ser Thr Ser Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140 Gly Cys 145 <210> 419 <211> 146 <212> PRT <213> Rattus norvegicus <400> 419 Val Pro Ile His Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15 Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Thr Gln Ser Val Ser Ala 20 25 30 Arg Gln Arg Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45 Leu Ser Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile 50 55 60 Leu Thr Ser Leu Pro Ser Gln Asn Val Leu Gln Ile Ala His Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Leu Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95 Ser Leu Pro Gln Thr Arg Gly Leu Gln Lys Pro Glu Ser Leu Asp Gly 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Leu Ser Ser Thr Ser Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Ile Leu Gln Gln Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140 Glu Cys 145 <210> 420 <211> 146 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> leptin genus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22) <223> Xaa is Asn, Asp or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27) <223> Xaa is Thr or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28) <223> Xaa is Gln, Glu, or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (54) <223> Xaa is Met or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (68). () <223> Xaa is Met or Leu <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (72) <223> Xaa is Asn, Asp or Glu <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (77) <223> Xaa is Ser or Ala <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (118) <223> Xaa is Gly or Leu <400> 420 Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15 Ile Val Thr Arg Ile Xaa Asp Ile Ser His Xaa Xaa Ser Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45 Leu Thr Leu Ser Lys Xaa Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile 50 55 60 Leu Thr Ser Xaa Pro Ser Arg Xaa Val Ile Gln Ile Xaa Asn Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95 His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Xaa Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140 Gly Cys 145 <210> 421 <211> 146 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> leptin genus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27) <223> Xaa is Thr or Ala <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (77) <223> Xaa is Ser or Ala <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (118) <223> Xaa is Gly or Leu <400> 421 Val Pro Ile Gln Lys Val Gln Asp Asp Thr Lys Thr Leu Ile Lys Thr 1 5 10 15 Ile Val Thr Arg Ile Asn Asp Ile Ser His Xaa Gln Ser Val Ser Ser 20 25 30 Lys Gln Lys Val Thr Gly Leu Asp Phe Ile Pro Gly Leu His Pro Ile 35 40 45 Leu Thr Leu Ser Lys Met Asp Gln Thr Leu Ala Val Tyr Gln Gln Ile 50 55 60 Leu Thr Ser Met Pro Ser Arg Asn Val Ile Gln Ile Xaa Asn Asp Leu 65 70 75 80 Glu Asn Leu Arg Asp Leu Leu His Val Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys 85 90 95 His Leu Pro Trp Ala Ser Gly Leu Glu Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly 100 105 110 Val Leu Glu Ala Ser Xaa Tyr Ser Thr Glu Val Val Ala Leu Ser Arg 115 120 125 Leu Gln Gly Ser Leu Gln Asp Met Leu Trp Gln Leu Asp Leu Ser Pro 130 135 140 Gly Cys 145 <210> 422 <211> 105 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> leptin genus <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (13) <223> Xaa is Ile, Leu, Met or methionine sulfoxide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15) <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21) <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22) <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27) <223> Xaa is Ile, Leu, Met or methionine sulfoxide <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (31) <223> Xaa is Asn, Asp or Gln <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (34) <223> Xaa is Gln or Glun <220> <221> MISC_FEATURE <222> (37) .. () <223> Xaa is Asn, Asp or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (41) <223> Xaa is Asn, Asp or Gln <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (59) .. () <223> Xaa is Trp or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (89). () <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (93) <223> Xaa is Gln or Glu <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (95) <223> Xaa is Ile, Leu, Met or methionine sulfoxide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (97). () <223> Xaa is Trp or Gln <220> <221> MISC_FEATURE <222> (98) <223> Xaa is Gln or Glu <400> 422 Ile Pro Gly Leu His Pro Ile Leu Thr Leu Ser Lys Xaa Asp Xaa Thr 1 5 10 15 Leu Ala Val Tyr Xaa Xaa Ile Leu Thr Ser Xaa Pro Ser Arg Xaa Val 20 25 30 Ile Xaa Ile Ser Xaa Asp Leu Glu Xaa Leu Arg Asp Leu Leu His Val 35 40 45 Leu Ala Phe Ser Lys Ser Cys His Leu Pro Xaa Ala Ser Gly Leu Glu 50 55 60 Thr Leu Asp Ser Leu Gly Gly Val Leu Glu Ala Ser Gly Tyr Ser Thr 65 70 75 80 Glu Val Val Ala Leu Ser Arg Leu Xaa Gly Ser Leu Xaa Asp Xaa Leu 85 90 95 Xaa Xaa Leu Asp Leu Ser Pro Gly Cys 100 105 <210> 423 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PPF genus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa is Tyr or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> Xaa is Ile, Pro, or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) Xaa is Ile, Bolton-Hunter-modified Lys, Lys, Val, or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) Xaa is Lys, Bolton-Hunter-modified Lys, Ala, Ser, or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (7) <223> Xaa is Ala, Gly, or His <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> Xaa is Gly or Ala <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (12) <223> Xaa is Ala or Pro <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (13) <223> Xaa is Ser or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> Xaa is Pro, Ala, or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16) <223> Xaa is Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17) <223> Xaa is Leu or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (18) .. () <223> Xaa is Asn or Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19) .. () Xaa is Arg, Lys, Bolton-Hunter-modified Lys, Gln, or N (Me) Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21) Xaa is Tyr, Ala, Phe, Lys or Bolton-Hunter-modified Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22) <223> Xaa is Ala or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23) <223> Xaa is Ser, Ala, or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25) Xaa is Arg, Lys or Bolton-Hunter-modified Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26) <223> Xaa is His, Ala, or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28) <223> Xaa is Leu or Ile <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (30) <223> Xaa is Leu or Met <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (31) <223> Xaa is Val, Ile, or Leu <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (35) Xaa is Lys, Bolton-Hunter-modified Lys, or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (36) &Lt; 223 > Xaa is Tyr, Trp, or Phe <400> 423 Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Glu Xaa Pro Xaa Glu Asp Xaa Xaa Xaa Glu Xaa 1 5 10 15 Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Tyr Xaa Asn Xaa Xaa Thr 20 25 30 Arg Gln Xaa Xaa 35 <210> 424 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PPF genus <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa is Tyr or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> Xaa is Ile, Pro, or absent <220> <221> MISC_FEATURE <222> (4) Xaa is Lys, Bolton-Hunter-modified Lys, Ala, Ser, or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (6) Xaa is Glu, Gln, Ala, Asn, Asp, or Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (9) <223> Xaa is Gly or Ala <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (10) Xaa is Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro, or Aib <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (11) Xaa is Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro, or Aib <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (12) <223> Xaa is Ala or Pro <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (13) <223> Xaa is Ser or Pro <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> Xaa is Pro, Ala, or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (15) Xaa is Glu, Ala, Asp, Asn, Gln, Gly, Pro, or Aib <220> <221> MISC_FEATURE <222> (16) <223> Xaa is Glu or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (17) <223> Xaa is Leu or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (19) .. () Xaa is Arg, Lys, BH-modified Lys, Gln, or N (Me) Ala <220> <221> MISC_FEATURE <222> (21) Xaa is Tyr, Ala, Phe, Lys, or BH-modified Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (22) <223> Xaa is Ala or Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (23) <223> Xaa is Ser, Ala, or Asp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (25) Xaa is Arg, Lys or Bolton-Hunter-modified Lys <220> <221> MISC_FEATURE <222> (26) <223> Xaa is His, Ala, or Arg <220> <221> MISC_FEATURE <222> (27) &Lt; 223 > Xaa is Tyr or Phe <220> <221> MISC_FEATURE <222> (28) <223> Xaa is Leu or Ile <220> <221> MISC_FEATURE <222> (29). () <223> Xaa is Asn or Gln <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (30) <223> Xaa is Leu or Met <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (31) <223> Xaa is Val, Ile, or Leu <400> 424 Xaa Xaa Pro Xaa Pro Xaa His Pro Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 1 5 10 15 Xaa Ala Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 425 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> PPY-NPY chimera <400> 425 Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Ala 1 5 10 15 Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln 20 25 30 Arg Tyr <210> 426 <211> 59 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <400> 426 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Lys Cys Asn Thr Ala 20 25 30 Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg Leu Gln Thr 35 40 45 Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 <210> 427 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (30) <223> sulfated (SO3H) tyrosine <400> 427 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Asp Tyr Met Gly 20 25 30 Trp Met Asp Phe 35 <210> 428 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (30) <223> sulfated (CH2SO3H) tyrosine <400> 428 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Asp Tyr Met Gly 20 25 30 Trp Met Asp Phe 35 <210> 429 <211> 63 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <400> 429 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Gly Lys 20 25 30 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His 35 40 45 Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 430 <211> 67 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (29) <223> beta-Alanine beta-Alanine linker <400> 430 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Lys Cys 20 25 30 Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val Arg 35 40 45 Ser Ser Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly Ser 50 55 60 Asn Thr Tyr 65 <210> 431 <211> 62 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (29) <223> beta-Alanine beta-Alanine linker <400> 431 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Lys Cys 20 25 30 Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His Arg 35 40 45 Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 50 55 60 <210> 432 <211> 31 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <400> 432 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His 1 5 10 15 Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 20 25 30 <210> 433 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa is succinimide beta-Alanine <400> 433 Xaa Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu 1 5 10 15 Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg 20 25 30 Gln Arg Tyr 35 <210> 434 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa is thiopropyl beta-Alanine <400> 434 Xaa Lys Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu 1 5 10 15 Leu His Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr 20 25 30 Tyr <210> 435 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa is maleimide butyl beta-Alanine <400> 435 Xaa Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu 1 5 10 15 Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg 20 25 30 Gln Arg Tyr 35 <210> 436 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <400> 436 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Phe Leu Val 1 5 10 15 Arg Ser Ser Asn Leu Gly Pro Val Leu Pro Pro Thr Asn Val Gly 20 25 30 Ser Asn Thr Tyr 35 <210> 437 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa is maleimide butyl beta-Alanine <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (3) <223> sulfated (CH2SO3H) phenylalanine <400> 437 Xaa Asp Phe Met Gly Trp Met Asp Phe 1 5 <210> 438 <211> 43 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) (2) <223> sulfated (para-CH2SO3) phenylalanine <400> 438 Asp Phe Met Gly Trp Met Asp Phe Gly Lys Arg Lys Cys Asn Thr Ala 1 5 10 15 Thr Cys Ala Thr Gln Arg Leu Ala Asn Glu Leu Val Arg Leu Gln Thr 20 25 30 Tyr Pro Arg Thr Asn Val Gly Ser Asn Thr Tyr 35 40 <210> 439 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa is succinimide beta-alanine <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (3) <223> sulfated (CH2SO3H) phenylalanine <400> 439 Xaa Asp Phe Met Gly Trp Met Asp Phe 1 5 <210> 440 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybird component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> N-terminal acetyl <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> beta-Alanine beta-Alanine &Lt; 400 > 440 Ser Tyr Ser Met Glu His Phe Arg Trp Gly Lys Pro Val Xaa Xaa Lys 1 5 10 15 <210> 441 <211> 32 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE &Lt; 222 > (29) <223> beta-Alanine beta-Alanine linker <400> 441 His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu 1 5 10 15 Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Xaa Xaa Lys Cys 20 25 30 <210> 442 <211> 47 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> N-terminal acetyl <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> beta-Alanine beta-Alanine <400> 442 Ser Tyr Ser Met Glu His Phe Arg Trp Gly Lys Pro Val Xaa Xaa Lys 1 5 10 15 Cys Asn Thr Ala Thr Cys Val Leu Gly Arg Leu Ser Gln Glu Leu His 20 25 30 Arg Leu Gln Thr Tyr Pro Arg Thr Asn Thr Gly Ser Asn Thr Tyr 35 40 45 <210> 443 <211> 49 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> N-terminal acetyl <220> <221> MISC_FEATURE <222> (14) <223> beta-Alanine beta-Alanine <400> 443 Ser Tyr Ser Met Glu His Phe Arg Trp Gly Lys Pro Val Xaa Xaa Ile 1 5 10 15 Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg 20 25 30 Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg 35 40 45 Tyr <210> 444 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> thiopropyl beta-Alanine <400> 444 Xaa Phe Leu Phe His Tyr Ser Lys Thr Gln Lys Leu Gly Lys Ser Asn 1 5 10 15 Val Val Glu Glu Leu Gln Ser Pro Phe Ala Ser Gln Ser Arg Gly Tyr 20 25 30 Phe Leu Phe Arg Pro Arg Asn 35 <210> 445 <211> 39 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> succinimide beta-Alanine <400> 445 Xaa Phe Leu Phe His Tyr Ser Lys Thr Gln Lys Leu Gly Lys Ser Asn 1 5 10 15 Val Val Glu Glu Leu Gln Ser Pro Phe Ala Ser Gln Ser Arg Gly Tyr 20 25 30 Phe Leu Phe Arg Pro Arg Asn 35 <210> 446 <211> 34 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> N-terminal succinimide <400> 446 Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu Ala 1 5 10 15 Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg Gln 20 25 30 Arg Tyr <210> 447 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> succinimide beta-Alanine <400> 447 Xaa Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu 1 5 10 15 Ala Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg 20 25 30 Gln Arg Tyr 35 <210> 448 <211> 41 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <400> 448 Asp Pro Pro Pro Pro Pro Pro Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp 1 5 10 15 Ala Ser Pro Glu Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr 20 25 30 Leu Asn Leu Val Thr Arg Gln Arg Tyr 35 40 <210> 449 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> Xaa is mini-PEG3 linker <400> 449 Asp Xaa Gly Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu 1 5 10 15 Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val 20 25 30 Thr Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 450 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa is thiopropyl beta-Alanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (3) <223> sulfated (CH2SO3H) phenylalanine <400> 450 Xaa Asp Phe Met Gly Trp Met Asp Phe 1 5 <210> 451 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa is thiopropyl beta-Alanine <400> 451 Xaa Asp Tyr Met Gly Trp Met Asp Phe 1 5 <210> 452 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Maleimide butyl beta-Alanine <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1) <223> Xaa is maleimide butyl beta-Alanine <400> 452 Xaa Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu Leu 1 5 10 15 Ala Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr Arg 20 25 30 Gln Arg Tyr 35 <210> 453 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <400> 453 Cys Gly Gly Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu 1 5 10 15 Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val 20 25 30 Thr Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 454 <211> 37 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> Xaa is mini-PEG linker <400> 454 Asp Xaa Gly Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu 1 5 10 15 Glu Leu Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val 20 25 30 Thr Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 455 <211> 35 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> Xaa is beta-Alanine <400> 455 Cys Xaa Ile Lys Pro Glu Ala Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Asn Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg His Tyr Leu Asn Leu Val Thr Arg 20 25 30 Gln Arg Tyr 35 <210> 456 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial <220> <223> hybrid component <220> <221> MISC_FEATURE <222> (2) <223> Xaa is beta-Alanine <400> 456 Gly Xaa Pro Lys Pro Glu His Pro Gly Glu Asp Ala Ser Pro Glu Glu 1 5 10 15 Leu Ala Arg Tyr Tyr Ala Ser Leu Arg Ala Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 <210> 457 <211> 36 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 457 Tyr Pro Ser Lys Pro Asp Asn Pro Gly Glu Asp Ala Pro Ala Glu Asp 1 5 10 15 Met Ala Arg Tyr Tyr Ser Ala Leu Arg His Tyr Ile Asn Leu Ile Thr 20 25 30 Arg Gln Arg Tyr 35 One

Claims

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제2 생물활성 펩티드 호르몬 모듈에 공유 연결된 제1 생물활성 펩티드 호르몬 모듈을 포함하는 하이브리드 폴리펩티드이며, 여기서A first bioactive peptide hormone module covalently linked to a second bioactive peptide hormone module, wherein

제1 생물활성 펩티드 호르몬은 엑센딘-4, 엑센딘-4(1-27), 엑센딘-4(1-28), 엑센딘-4(1-29), 엑센딘-4(1-30), ¹⁴Leu-엑센딘-4(1-28), ¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-27), ¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-28), 및 ⁵Ala,¹⁴Leu,²⁵Phe-엑센딘-4(1-28), 및 엑센딘-4와 95% 이상의 아미노산 동일성을 갖는 펩티드로부터 선택되고; The first bioactive peptide hormone is exendin-4, exendin-4 (1-27), exendin-4 (1-28), exendin-4 (1-29), exendin-4 (1-30 ), Leu- ¹⁴ exendin-4 (1-28), ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe- exendin-4 (1-27), ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe- exendin-4 (1-28), and ⁵ Ala , ¹⁴ Leu, ²⁵ Phe-exendin-4 (1-28), and peptides having an amino acid identity of 95% or greater with exendin-4;

제2 생물활성 펩티드 호르몬은 체중을 감소시키며, 서열 KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY를 포함하고,The second biologically active peptide hormone reduces body weight and comprises the sequence KCNTATCVLGRLSQELHRLQTYPRTNTGSNTY,

생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 잔기 길이가 1 내지 30개인 Gly 링커를 사용하여 공유 연결되고,The bioactive peptide hormone modules are covalently linked using a Gly linker with a residue length of 1 to 30,

제1 생물활성 펩티드 호르몬 모듈은 하이브리드 폴리펩티드의 N-말단에 위치하고,The first bioactive peptide hormone module is located at the N-terminus of the hybrid polypeptide,

하이브리드 폴리펩티드의 C-말단은 아미드화된 것인,Wherein the C-terminus of the hybrid polypeptide is amidated,

하이브리드 폴리펩티드.Hybrid polypeptide.

제2항에 있어서, 제1 생물활성 펩티드 호르몬이 엑센딘-4와의 아미노산 서열 동일성이 95％ 이상인 하이브리드 폴리펩티드.3. The hybrid polypeptide according to claim 2, wherein the first bioactive peptide hormone has an amino acid sequence identity of 95% or more with exendin-4.

제2항 또는 제3항에 있어서, 링커의 잔기 길이가 2 내지 30개인 하이브리드 폴리펩티드.The hybrid polypeptide according to claim 2 or 3, wherein the linker has a residue length of 2 to 30.

제2항 또는 제3항에 있어서, 링커의 잔기 길이가 3 내지 30개인 하이브리드 폴리펩티드.4. The hybrid polypeptide according to claim 2 or 3, wherein the linker has a residue length of 3 to 30.

제2항 또는 제3항에 있어서, 링커가 Gly-Gly-Gly로 이루어진 것인 하이브리드 폴리펩티드.4. The hybrid polypeptide according to claim 2 or 3, wherein the linker is Gly-Gly-Gly.

제2항 또는 제3항의 하이브리드 폴리펩티드를 포함하는, 당뇨병의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물.3. A pharmaceutical composition for use in the treatment of diabetes comprising the hybrid polypeptide of claim 2 or 3.

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제7항에 있어서, 당뇨병이 제2형 당뇨병인 제약 조성물.8. The pharmaceutical composition according to claim 7, wherein the diabetes is type 2 diabetes.

제6항의 하이브리드 폴리펩티드를 포함하는, 당뇨병의 치료에 사용하기 위한 제약 조성물.A pharmaceutical composition for use in the treatment of diabetes, comprising the hybrid polypeptide of claim 6.

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제10항에 있어서, 당뇨병이 제2형 당뇨병인 제약 조성물.11. The pharmaceutical composition according to claim 10, wherein the diabetes is type 2 diabetes.

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