KR101355750B1

KR101355750B1 - 안정한 액체 항체 제형

Info

Publication number: KR101355750B1
Application number: KR1020117008909A
Authority: KR
Inventors: 어드바이트 비제이 바드카; 레이 크리스틴 보하크; 케빈 로저 킹; 알란타 레아 래리
Original assignee: 화이자 인코포레이티드
Priority date: 2008-09-19
Filing date: 2009-09-18
Publication date: 2014-01-27
Also published as: EP2331090B1; MX2011003013A; EP3329911A1; CA2736864C; US20110171217A1; CN102159204B; BRPI0917888A2; DK2331090T3; AU2009294214A1; JP2012502976A; HK1160389A1; US20220175663A1; EP2331090A1; CN102159204A; HUE036126T2; AU2009294214B2; IL211295A0; RU2011108025A; IL211295A; PT2331090T

Abstract

본 발명은 일반적으로 항체의 약학 제형 분야에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 안정한 액체 항체 제형 및 이의 약학 제제 및 용도에 관한 것이다. 본 발명은 인간화된 항-NGF 항체의 액체 제형으로 예시된다.

Description

안정한 액체 항체 제형{STABLE LIQUID ANTIBODY FORMULATION}

본 발명은 항체의 약학 제형 분야에 관한 것이다. 구체적으로, 본 발명은 안정한 액체 항체 제형 및 이의 약학 제제 및 용도에 관한 것이다.

치료 또는 예방 용도로 의도된 항체 제제는 사용 전 보관 및 운송 동안 시간 경과에 따른 변성, 산화 또는 응집 효과로 인한 단백질의 구조적 보전 또는 활성의 손실을 방지하기 위해 안정화제를 필요로 한다. 이러한 문제는 치료 투여를 위해 종종 요구되는 고 농도의 항체에서 더욱 심화된다.

항체 제형의 개발의 주요 목적은 항체 용해도, 안정성 및 그의 항원 결합 효과를 유지하는 것이다. 정맥내 또는 피하 주입을 위해 사용 전 무균 여과를 필요로 하고 투여 경로를 제한하는 용액에서 응집물 및 미립자를 방지하는 것이 특히 바람직하다. 항체 응집물은 이를 함유하는 제형이 정맥내로 주입되는 경우 통증 및 아나필락시스양 부작용을 유발할 수 있다.

냉동 건조 및 동결 건조는 항체의 액체 제형에 대한 대안이다. 두 공정 모두 항체의 변성을 유도하고 특히 재구성시에 그의 항원-결합 활성을 감소시키는 경향을 갖는다.

염, 계면활성제, pH 및 긴장성 제제, 예컨대 당은 응집 문제를 극복하는데 기여할 수 있다. 항체 제제의 제형은 단백질의 변성 및 항원-결합 활성 손실을 방지하기 위해 특히 상기 인자를 조심스럽게 선택하는 것을 필요로 한다. 항체 제제의 pH 범위를 고려하여, 낮은 pH 값을 갖는 항체 제형이 정맥내로 주입되는 경우, 통증 또는 주입이 종종 일어난다. 항체 제형이 주입으로서 사용되는 경우, 대략 중성 pH 범위의 pH 값을 갖는 것이 바람직하며, 또한 대상에의 주입에 불리한 제형 내의 버블을 방지하기 위해 계면활성제 수준을 최소화하는 것이 유리하다.

단클론 항-CTLA4 항체의 액체 제형은 국제 특허 출원 공개 제 WO 2006/096491 호(파마시아 앤드 업존 컴파니(Pharmacia and Upjohn Company))로부터 공지되어 있으며, 이는 항체 20mg/ml, 히스티딘 완충제 20mM, 트레헬로스 84mg/ml, PS80 계면활성제 0.2mg/ml, EDTA 0.05mg/ml pH 5.5를 포함한다.

용액 중 고 농도의 생활성 항체를 안정하게 지지하며, 정맥내, 근육내, 복강내, 진피내 또는 피하 주입을 비롯한 비경구 투여에 적합한 안정한 액체 항체 제형이 필요하다. 버블 형성 및 아나필락시스양 부작용 위험성이 최소화된 제형이 더욱 바람직하다.

더 나아가, 항-NGF 항체에 대해 상기와 같은 안정한 액체 제형을 제공하는 것이 필요하다. NGF는 말초 및 중추 뉴런의 발생 및 유지에 있어 주요 역할을 담당하는 것으로 공지되어 있다. 신경계에서의 이러한 효과 외에도, 증가된 NGF 수준은 전신 홍반 루프스, 다발 경화증, 건선, 관절염, 간질성 방광염 및 천식을 비롯한 여러 가지 염증성 상태에도 연관되어 있다. 또한, NGF는 여러 가지 통증 상태에서 입증된 활성을 갖는다. 또한, 항-NGF 항체 E3은 암 통증, 류마티스 관절염 통증, 골관절염 통증 및 수술후 통증을 비롯한 급성 및 만성 통증 상태의 치료에 유용한 것으로 입증되어 왔다(예를 들면, 국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호 참고). NGF에 의해 매개된 염증성 및 통증 상태를 겪는 환자의 의학적 요구를 만족시키는 항-NGF 항체의 안정한 액체 항체 제제가 필요하다.

한 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 항체, 하나 이상의 긴장성 제제, 하나 이상의 완충제, 하나 이상의 킬레이트제 및 하나 이상의 계면활성제를 포함하는 액체 조성물을 제공하며, 이때 상기 조성물의 pH는 5.0 내지 7.5이다.

한 양태에서, 본 발명은 하나 이상의 항체, 하나 이상의 긴장성 제제, 하나 이상의 완충제, 하나 이상의 킬레이트제 및 하나 이상의 계면활성제를 포함하는 액체 조성물을 제공하며, 이때 상기 조성물의 pH는 5.8 내지 6.8이다.

또한, 본 발명은 하나 이상의 항체, 하나 이상의 긴장성 제제, 하나 이상의 완충제, 하나 이상의 킬레이트제 및 하나 이상의 계면활성제로 이루어지거나, 본질적으로 이루어진 액체 조성물을 제공하며, 이때 상기 조성물의 pH는 5.8 내지 6.8이다.

본 발명에 따른 액체 조성물은 용액 중 고 농도의 생활성 항체를 안정하게 지지하는 장점을 제공하고, 정맥내, 근육내, 복강내, 진피내 또는 피하 주입을 비롯한 비경구 투여에 적합하다. 또한, 버블 형성 및 아나필락시스양 부작용 위험성이 최소화된다.

본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, 액체 조성물은 하나 이상의 항체를 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 하나 보다 많은 항체가 존재할 수 있다. 1 이상, 2 이상, 3 이상, 4 이상, 5 이상, 또는 그 이상의 상이한 항체가 존재할 수 있다. 일반적으로, 2 이상의 상이한 항체는 서로 악영향을 끼치지 않는 상보성 활성을 갖는다. 항체 또는 항체 각각은 또한 항체의 효과를 향상시키고/시키거나 보완하도록 작용하는 다른 제제와 함께 사용될 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, pH는 5.0 내지 7.5, 보다 바람직하게는 약 7.5와 약 5.1, 5.2, 5.3, 5.4 및 5.5 중 어느 하나 사이의 범위일 수 있다. 더욱 바람직하게는, pH는 5.6, 5.7 및 5.8 중 어느 하나와 약 7.5, 7.4, 7.3, 7.2, 7.1, 7.0, 6.9, 6.8, 6.7, 6.6, 6.5, 6.4, 6.3, 6.2, 6.1, 6.0, 5.9, 5.8 및 5.7 중 어느 하나 사이로부터 선택된 범위이다.

바람직한 실시양태에서, pH는 약 5.5와 약 6.0, 6.2, 6.5 및 6.8 중 어느 하나 사이의 범위일 수 있고, 다르게는, pH는 약 5.8과 약 6.0, 6.2, 6.5 및 6.8 중 어느 하나 사이의 범위일 수 있다.

보다 바람직하게는 pH는 약 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4 및 7.5 중 임의의 pH 값으로부터 선택될 수 있고, 가장 바람직하게는 pH는 pH 6.0 ± 0.2이다. 이들 범위 내에서 pH 값은 항체 응집 및 단편화로부터 향상된 보호를 갖는 액체 조성물을 제공하며, 이는 주입시의 통증 또는 아나필락시드양 부작용 위험성을 감소시키기 위해 생리적 pH(약 pH 7.2 내지 7.4)에 근접하다.

본 발명의 추가의 바람직한 실시양태에 따라, 긴장성 제제는 바람직하게는 폴리올, 당류, 탄수화물, 염, 예컨대 염화나트륨, 또는 이들의 혼합물을 포함한다. 바람직하게는, 폴리올은 약 600kD 미만인 분자량(예컨대, 약 120 내지 약 400kD)을 가지며, 바람직하게는 만니톨, 트레할로스, 소르비톨, 에리트리톨, 아이소말트, 락티톨, 말티톨, 자일리톨, 글리세롤, 락티톨, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 이노시톨 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된다. 바람직하게는, 당류 또는 탄수화물은 단당류, 이당류, 다당류 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된다. 바람직하게는, 당류 또는 탄수화물은 프룩토스, 글루코스, 만노스, 수크로스, 소르보스, 자일로스, 락토스, 말토스, 수크로스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 사이클로덱스트린, 가용성 전분, 하이드록시에틸 전분, 수용성 글루칸 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된다. 바람직하게는, 긴장성 제제는 환원당, 비환원당 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된 당류를 포함한다. 더욱 바람직하게는, 긴장성 제제는 비환원당, 바람직하게는 수크로스, 트레할로스 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된 당류를 포함한다. 가장 바람직하게는, 긴장성 제제는 트레할로스, 바람직하게는 트레할로스 이수화물을 포함한다. 본 발명에 따라, 긴장성 제제, 특히 트레할로스, 바람직하게는 트레할로스 이수화물은 냉동 보관 동안, 예컨대 0 내지 10℃, 특히 5 내지 8℃, 보다 특히 5℃에서, 또는 동결 보관 및 동결 및 해동 주기에서 향상된 항체 안정성 및 응집, 산화 및 단편화 저항성을 갖는 액체 조성물을 제공한다. 트레할로스는 생성된 항체 제형이 당화반응을 겪지 않기 때문에 특히 유리하다.

액체 조성물 중 긴장성 제제의 농도는 약 1mg/ml 내지 약 300mg/ml, 약 1mg/ml 내지 약 200mg/ml 또는 약 1mg/ml 내지 약 100mg/ml의 범위에 이른다. 바람직하게는, 액체 조성물 중 긴장성 제제의 농도는 약 60mg/ml, 약 65mg/ml, 약 70mg/ml, 약 75mg/ml, 약 80mg/ml, 약 81mg/ml, 약 82mg/ml, 약 83mg/ml, 약 84mg/ml, 약 85mg/ml, 약 86mg/ml, 약 87mg/ml, 약 88mg/ml, 약 89mg/ml, 약 90mg/ml, 약 91mg/ml, 약 92mg/ml, 약 93mg/ml, 약 94mg/ml, 약 95mg/ml, 약 96mg/ml, 약 97mg/ml, 약 98mg/ml, 약 99mg/ml, 약 100mg/ml, 약 105mg/ml, 약 110mg/ml, 약 120mg/ml 또는 약 130mg/ml이다. 가장 바람직하게는, 액체 조성물 중 긴장성 제제의 농도는 약 84mg/ml이다.

긴장성 제제가 염을 포함하는 경우, 액체 조성물 중 염의 농도는 약 1mg/ml 내지 약 20mg/ml 범위에 이른다. 본 발명에 적합하고 약학적으로 허용가능한 염은 염화나트륨, 석신산나트륨, 황산나트륨, 염화칼륨, 염화마그네슘, 황산마그네슘 및 염화칼슘을 들 수 있다. 본 발명에 바람직한 염은 염화나트륨 및 염화마그네슘이며, 염화마그네슘은 또한 탈아마이드화로부터 단백질을 보호함으로써 항체 안정성을 개선시킬 수 있다. 바람직하게는, 액체 조성물 중 상기 염은 약 1mg/ml, 2mg/ml, 3mg/ml, 4mg/ml, 5mg/ml, 6mg/ml, 7mg/ml, 8mg/ml, 9mg/ml, 10mg/ml, 11mg/ml, 12mg/ml, 13mg/ml, 14mg/ml, 15mg/ml, 16mg/ml, 17mg/ml, 18mg/ml, 19mg/ml 및 20mg/ml 중 임의의 농도 범위로부터 선택될 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, 계면활성제는 바람직하게는 폴리소르베이트, 폴록사머, 트라이톤, 나트륨 도데실 설페이트, 나트륨 라우렐 설페이트, 나트륨 옥틸 글리코사이드, 라우릴-설포베타인, 미리스틸-설포베타인, 리놀레일-설포베타인, 스테아릴-설포베타인, 라우릴-사르코신, 미리스틸-사르코신, 리놀레일-사르코신, 스테아릴-사르코신, 리놀레일-베타인, 미리스틸-베타인, 세틸-베타인, 라우로아마이도프로필-베타인, 코카마이도프로필-베타인, 리놀레아마이도프로필-베타인, 미리스타마이도프로필-베타인, 팔미도프로필-베타인, 아이소스테아르아마이도프로필-베타인, 미리스타마이도프로필-다이메틸아민, 팔미도프로필-다이메틸아민, 아이소스테아르아마이도프로필-다이메틸아민, 나트륨 메틸 코코일-타우레이트, 다이나트륨 메틸 올레일-타우레이트, 다이하이드록시프로필 PEG5 리놀레암모늄 클로라이드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된다. 더욱 바람직하게는, 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 21, 폴리소르베이트 40, 폴리소르베이트 60, 폴리소르베이트 61, 폴리소르베이트 65, 폴리소르베이트 80, 폴리소르베이트 81, 폴리소르베이트 85 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된다. 보다 바람직하게는, 계면활성제는 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80, PEG3350 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된다. 가장 바람직하게는, 계면활성제는 폴리소르베이트 20이다. 본 발명에 따라, 계면활성제, 특히 폴리소르베이트 20은 향상된 항체 안정성, 및 응집 및 단편화 저항성을 갖는 액체 조성물을 제공한다.

계면활성제의 농도는 일반적으로 약 0.01mg/ml 내지 약 10mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 5.0mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 2.0mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 1.5mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 0.10mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 0.5mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 0.4mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 0.3mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 0.2mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 0.15mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 0.1mg/ml 또는 약 0.01mg/ml 내지 약 0.05mg/ml 범위에 이른다. 더욱 바람직하게는, 계면활성제의 농도는 약 0.5mg/ml, 약 0.05mg/ml, 약 0.06mg/ml, 약 0.07mg/ml, 약 0.08mg/ml, 약 0.09mg/ml, 약 0.1mg/ml, 약 0.11mg/ml, 약 0.12mg/ml, 약 0.13mg/ml, 약 0.14mg/ml, 약 0.15mg/ml, 약 0.16mg/ml, 약 0.17mg/ml, 약 0.18mg/ml, 약 0.19mg/ml 또는 약 0.2mg/ml이다. 가장 바람직하게는, 계면활성제의 농도는 약 0.1mg/ml이다. 약 0.1mg/ml의 계면활성제 농도를 갖는 실시양태는 이 농도가 용액 중 제형의 항체의 안정성 유지를 허용하면서, 또한 제형 제조, 즉 비경구 투여용 제형 및 제제의 취급 동안, 특히 제조 및 또한 운송 동안 흔들림 및 교반과 관련된 스트레스로부터 제형 내의 버블 형성 경향을 감소시키기 때문에 매우 바람직하다.

본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, 완충제는 아세테이트, 석시네이트, 글루코네이트, 시트레이트, 히스티딘, 아세트산, 포스페이트, 인산, 아스코르베이트, 타르타르산, 말레산, 글리신, 락테이트, 락트산, 아스코르브산, 이미다졸, 바이카보네이트 및 카본산, 석신산, 나트륨 벤조에이트, 벤조산, 글루코네이트, 에데테에트, 아세테이트, 말레이트, 이미다졸, 트리스 포스페이트 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다. 바람직하게는, 완충제는 히스티딘이며, 이때 히스티딘은 L-히스티딘 또는 D-히스티딘, 히스티딘의 용매화된 형태, 히스티딘의 수화된 형태(예컨대, 일수화물), 히스티딘의 무수 형태 또는 이들의 혼합물을 포함할 수 있다.

본 발명에 따라, 완충제, 특히 바람직한 완충제인 히스티딘은 주입시 통증 또는 아나필락시스양 부작용의 위험성을 감소시키기 위해 생리적 pH에 근접한 pH를 갖는 액체 조성물을 제공하며, 또한 향상된 항체 안정성, 및 응집, 산화 및 단편화 저항성을 제공한다.

완충제의 농도는 약 0.1밀리몰(mM) 내지 약 100mM에 이를 수 있다. 바람직하게는, 완충제의 농도는 약 0.5mM 내지 약 50mM이고, 더욱 바람직하게는 약 1mM 내지 약 30mM이고, 보다 바람직하게는 약 1mM 내지 약 18mM이고, 더욱 더 바람직하게는 약 1mM 내지 약 15mM이다. 바람직하게는, 완충제의 농도는 약 1mM, 약 2mM, 약 3mM, 약 4mM, 약 5mM, 약 6mM, 약 7mM, 약 8mM, 약 9mM, 약 10mM, 약 11mM, 약 12mM, 약 13mM, 약 14mM, 약 15mM, 약 16mM, 약 17mM, 약 18mM, 약 19mM, 약 20mM, 약 21mM, 약 22mM, 약 23mM, 약 24mM, 약 25mM, 약 30mM, 약 35mM, 약 40mM, 약 45mM 또는 약 50mM이다. 가장 바람직하게는, 완충제의 농도는 약 10mM이다.

본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, 킬레이트제는 아미노폴리카복실산, 하이드록시아미노카복실산, N-치환된 글리신, 2-(2-아미노-2-옥소에틸)아미노에테인 설폰산(BES), 데페록사민(DEF), 시트르산, 니아신아마이드, 데속시콜레이트 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다. 더욱 바람직하게는, 킬레이트제는 에틸렌다이아민테트라아세트산(EDTA), 다이에틸렌트라이아민 펜타아세트산 5(DTPA), 나이트릴로트라이아세트산(NTA), N-2-아세트아마이도-2-이미노다이아세트산(ADA), 비스(아미노에틸)글리콜에터, N,N,N',N'-테트라아세트산(EGTA), 트랜스-다이아미노사이클로헥세인 테트라아세트산(DCTA), 글루탐산, 아스파르트산, N-하이드록시에틸이미노다이아세트산(HIMDA), N,N-비스-하이드록시에틸글리신(비신) 및 N-(트리스하이드록시메틸메틸) 10 글리신(트리신), 글리실글리신, 나트륨 데속시콜레이트, 에틸렌다이아민; 프로필렌다이아민; 다이에틸렌트라이아민; 트라이에틸렌테트라아민(트라이엔), 에틸렌다이아민테트라아세토 EDTA; 다이나트륨 EDTA, 칼슘 EDTA 옥살산, 말레이트, 시트르산, 시트르산 일수화물 및 트라이나트륨 시트레이트-이수화물, 8-하이드록시퀴놀레이트, 아미노산, 히스티딘, 시스테인, 메티오닌, 펩타이드, 폴리펩타이드, 단백질 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다. 더욱 바람직하게는, 킬레이트제는 다이칼륨 에데테이트, 다이나트륨 에데테이트, 에데테이트 칼슘 다이나트륨, 나트륨 에데테이트, 트라이나트륨 에데테이트 및 칼륨 에데테이트를 포함한 EDTA의 염으로 이루어진 군 중에서 선택되고, 데페록사민(DEF)의 적합한 염은 데페록사민 메실레이트(DFM) 또는 이들의 혼합물이다. 본 발명에 사용되는 킬레이트제는 가능한 경우 화합물의 유리 산 또는 유리 염기 형태 또는 염 형태로서, 또한 화합물 또는 상응하는 염의 무수, 용매화물 또는 수화물 형태로서 존재할 수 있다.

가장 바람직하게는, 킬레이트제는 다이나트륨 EDTA, 칼슘 EDTA이고, 가장 바람직하게는 다이나트륨 EDTA이다.

다이나트륨 EDTA는 향상된 항체 안정성 및/또는 응집 저항성을 갖는 액체 조성물을 제공하기 때문에 특히 바람직하다.

킬레이트제의 농도는 일반적으로 약 0.01mg/ml 내지 약 50mg/ml, 약 1mg/ml 내지 약 10.0mg/ml, 약 15mg/ml 내지 약 5.0mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 1.0mg/ml 또는 약 0.03mg/ml 내지 약 0.5mg/ml에 이른다. 더욱 바람직하게는, 킬레이트제의 농도는 일반적으로 약 0.01mM 내지 약 2.0mM, 약 0.01mM 내지 약 1.5mM, 약 0.01mM 내지 약 0.5mM, 약 0.01mM 내지 약 0.4mM, 약 0.01mM 내지 약 0.3mM, 약 0.01mM 내지 약 0.2mM, 약 0.01mM 내지 약 0.15mM, 약 0.01mM 내지 약 0.1mM, 약 0.01mM 내지 약 0.09mM, 약 0.01mM 내지 약 0.08mM, 약 0.01mM 내지 약 0.07mM, 약 0.01mM 내지 약 0.06mM, 약 0.01mM 내지 약 0.05mM, 약 0.01mM 내지 약 0.04mM, 약 0.01mM 내지 약 0.03mM, 약 0.01mM 내지 약 0.02mM 또는 약 0.05mM 내지 약 0.01mM에 이른다. 바람직하게는, 킬레이트제의 농도는 약 0.01mg/ml, 0.02mg/ml, 0.03mg/ml, 약 0.04mg/ml, 약 0.05mg/ml, 약 0.06mg/ml, 약 0.07mg/ml, 약 0.10mg/ml 또는 약 0.20mg/ml일 수 있다. 더욱 바람직하게는, 킬레이트제의 농도는 약 0.045mg/ml, 약 0.046mg/ml, 약 0.047mg/ml, 약 0.048mg/ml, 약 0.049mg/ml, 약 0.05mg/ml, 약 0.051mg/ml, 약 0.052mg/ml, 약 0.053mg/ml, 약 0.054mg/ml, 약 0.055mg/ml 또는 약 0.056mg/ml이다. 가장 바람직하게는, 킬레이트제의 농도는 약 0.05mg/ml이다.

킬레이트제는 환원된 산소 종의 형성을 저하시킬 수 있고, 산성 종(예컨대, 탈아마이드화) 형성을 감소시키고, 항체 응집을 감소시키고/시키거나 항체 단편화를 감소시키고/시키거나 본 발명의 조성물 중 항체 산화를 감소시킬 수 있다. 이러한 킬레이트제는 킬레이트제의 보호가 없는 항체와 비교할 경우 제형화된 항체의 열화를 감소시키거나 방지할 수 있다.

달리 언급하지 않는 한, 본원에서 기재된 농도는 주변 조건(즉, 25℃ 및 대기압)에서의 농도이다.

본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, 액체 조성물은 추가로 항산화제를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 항산화제는 메티오닌, 나트륨 티오설페이트, 카탈라제 및 백금으로 이루어진 군 중에서 선택된다.

항산화제의 농도는 일반적으로 약 0.01mg/ml 내지 약 50mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 10.0mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 5.0mg/ml, 약 0.01mg/ml 내지 약 1.0mg/ml 또는 약 0.01mg/ml 내지 약 0.02mg/ml에 이른다. 바람직하게는, 항산화제의 농도는 약 0.01mg/ml, 0.02mg/ml, 0.03mg/ml, 약 0.04mg/ml, 약 0.05mg/ml, 약 0.06mg/ml, 약 0.07mg/ml, 0.08mg/ml, 0.09mg/ml, 약 0.10mg/ml, 0.11mg/ml, 0.12mg/ml, 0.13mg/ml, 약 0.14mg/ml, 약 0.15mg/ml, 약 0.16mg/ml, 약 0.17mg/ml, 0.18mg/ml, 0.19mg/ml 약 0.20mg/ml, 약 0.25mg/ml, 0.3mg/ml, 0.4mg/ml, 0.5mg/ml, 0.6mg/ml, 0.7mg/ml, 0.8mg/ml, 0.9mg/ml 또는 1.0mg/ml일 수 있다. 가장 바람직하게는, 항산화제의 농도는 약 0.01mg/ml이다.

본 발명의 추가의 바람직한 실시양태에 따라, 액체 조성물은 추가로 방부제를 포함할 수 있다. 바람직하게는, 방부제는 페놀, m-크레졸, 벤질 알콜, 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈알토늄 클로라이드, 페녹시에탄올 및 메틸 파라벤으로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다.

방부제의 농도는 일반적으로 약 0.001mg/ml 내지 약 50mg/ml, 약 0.005mg/ml 내지 약 15.0mg/ml, 약 0.008mg/ml 내지 약 12.0mg/ml 또는 약 0.01mg/ml 내지 약 10.0mg/ml에 이른다. 바람직하게는, 방부제의 농도는 약 0.1mg/ml, 0.2mg/ml, 0.3mg/ml, 약 0.4mg/ml, 약 0.5mg/ml, 약 0.6mg/ml, 약 0.7mg/ml, 0.8mg/ml, 0.9mg/ml 약 1.0mg/ml, 2.0mg/ml, 3.0mg/ml, 약 4.0mg/ml, 약 5.0mg/ml, 약 6.0mg/ml, 약 7.0mg/ml, 8.0mg/ml, 9.0mg/ml, 약 9.1mg/ml, 약 9.2mg/ml, 9.3mg/ml, 9.4mg/ml, 9.5mg/ml, 9.6mg/ml, 9.7mg/ml, 9.8mg/ml, 9.9mg/ml 또는 10.0mg/ml일 수 있다. 가장 바람직하게는, 방부제의 농도는 약 0.1mg/ml 또는 9.0mg/ml이다.

본 발명의 양태에 따라, 액체 제형은 항산화제를 함유하지 않는다.

본 발명의 양태에 따라, 액체 제형은 방부제를 함유하지 않는다.

본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, 항체의 농도는 약 0.1 내지 약 200mg/ml에 이를 수 있다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 0.5mg/ml, 약 1mg/ml, 약 2mg/ml, 약 2.5mg/ml, 약 3mg/ml, 약 3.5mg/ml, 약 4mg/ml, 약 4.5mg/ml, 약 5mg/ml, 약 5.5mg/ml, 약 6mg/ml, 약 6.5mg/ml, 약 7mg/ml, 약 7.5mg/ml, 약 8mg/ml, 약 8.5mg/ml, 약 9mg/ml, 약 9.5mg/ml, 약 10mg/ml, 약 11mg/ml, 약 12mg/ml, 약 13mg/ml, 약 14mg/ml, 약 15mg/ml, 약 16mg/ml, 약 17mg/ml, 약 18mg/ml, 약 19mg/ml, 약 20mg/ml, 약 21mg/ml, 약 22mg/ml, 약 23mg/ml, 약 24mg/ml, 약 25mg/ml, 약 26mg/ml, 약 27mg/ml, 약 28mg/ml, 약 29mg/ml, 약 30mg/ml, 약 31mg/ml, 약 32mg/ml, 약 33mg/ml, 약 34mg/ml, 약 35mg/ml, 약 36mg/ml, 약 37mg/ml, 약 38mg/ml, 약 39mg/ml, 약 40mg/ml, 약 41mg/ml, 약 42mg/ml, 약 43mg/ml, 약 44mg/ml, 약 45mg/ml, 약 46mg/ml, 약 47mg/ml, 약 48mg/ml, 약 49mg/ml, 약 50mg/ml, 약 51mg/ml, 약 52mg/ml, 약 53mg/ml, 약 54mg/ml, 약 55mg/ml, 약 56mg/ml, 약 57mg/ml, 약 58mg/ml, 약 59mg/ml, 약 60mg/ml, 약 70mg/ml, 약 80mg/ml, 약 90mg/ml, 약 100mg/ml 또는 약 110mg/ml이다. 가장 바람직하게는, 항체의 농도는 약 50mg/ml 이하이고, 약 2mg/ml, 약 2.5mg/ml, 약 5mg/ml, 약 10mg/ml, 약 19mg/ml, 약 20mg/ml, 22mg/ml 및 약 50mg/ml로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다.

항체는 바람직하게는 단클론 항체, 다클론 항체, 항체 단편(예컨대, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, Fc, ScFv 등), 키메라 항체, 이중특이성 항체, 헤테로컨쥬게이트 항체, 단일 쇄(ScFv), 이의 돌연변이, 항체 부분(예컨대, 도메인 항체)을 포함하는 융합 단백질, 인간화된 항체, 인간 항체, 및 필요한 특이성을 갖는 항원 인식 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 형상, 예컨대 항체의 당화 변이체, 항체의 아미노산 서열 변이체 및 공유결합 변형된 항체로 이루어진 군 중에서 선택된다. 항체는 뮤린, 래트, 인간 또는 임의의 다른 기원(키메라 또는 인간화된 항체를 포함)일 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 인간일 수 있지만, 보다 바람직하게는 인간화된 것이다. 바람직하게는 항체는 단리되고, 더욱 바람직하게는 실질적으로 순수하다. 항체가 항체 단편인 경우, 이는 바람직하게는 원시 항체의 기능적 특징, 즉, 리간드 결합 및/또는 길항제 또는 작용제 활성을 유지한다.

본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, 항체 중쇄 불변 영역은 임의의 유형의 불변 영역, 예컨대 IgG, IgM, IgD, IgA 및 IgE; 및 임의의 동형, 예컨대 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4로부터 유래할 수 있다. 바람직하게는, 항체는 IgG2 항체이다.

본 발명에 따라, 항체는 인간 중쇄 IgG2a 불변 영역을 포함할 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 인간 경쇄 카파(kappa) 불변 영역을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 변형된 불변 영역, 예컨대 면역학적으로 불활성인 불변 영역, 예컨대 보체 매개 용해를 유발하지 않거나, 항체-의존적 세포 매개된 세포독성(ADCC)을 자극시키지 않는 불변 영역을 포함한다. 다른 실시양태에서, 불변 영역은 문헌[Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624], 국제 특허 출원 공개 제 WO 099/58572 호, 및/또는 영국 특허 출원 공개 제 9809951.8 호에 기재된 바와 같이 변형될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 다음의 돌연변이를 포함하는 인간 중쇄 IgG2a 불변 영역을 포함한다: A330P331에서 S330S331로의 돌연변이(야생형 IgG2a 서열을 기준으로 한 아미노산 번호매김)(문헌[Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624]).

본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, 항체는 높은 친화성으로 NGF(예컨대, 인간 NGF)에 결합하는 항-NGF 항체이다. 몇몇 실시양태에서, 높은 친화성은 (a) 약 2nM 미만(예컨대, 약 1nM, 800pM, 600pM, 400pM, 200pM, 100pM, 90pM, 80pM, 70pM, 60pM, 50pM, 40pM, 30pM, 20pM, 10pM, 5pM 및 그 이하 중 임의의 것)의 K_D, 및/또는 약 6×10^-5s^-1 보다 느린 k_off를 갖는 NGF의 결합; 및/또는 (b) 약 200pM, 150pM, 100pM, 80pM, 60pM, 40pM, 20pM, 10pM 및 그 이하 중 임의의 IC₅₀(NGF 약 15pM의 존재하에)을 갖는 마우스 E13.5 삼차신경 뉴런의 인간 NGF-의존적 생존의 억제(감소 및/또는 차단); 및/또는 (c) 약 50pM, 40pM, 30pM, 10pM, 20pM, 10pM, 5pM, 2pM, 1pM 및 그 이하 중 임의의 IC₅₀(NGF 약 1.5pM의 존재하에)을 갖는 마우스 E13.5 삼차신경 뉴런의 인간 NGF-의존적 생존의 억제(감소 및/또는 차단); 및/또는 (d) 약 150pM, 125pM, 100pM, 80pM, 60pM, 40pM, 30pM, 20pM, 10pM, 5pM 및 그 이하 중 임의의 IC₅₀(NGF 약 15pM의 존재하에)을 갖는 마우스 E13.5 삼차신경 뉴런의 래트 NGF-의존적 생존의 억제(감소 및/또는 차단); 및/또는 (e) 약 30pM, 25pM, 20pM, 15pM, 10pM, 5pM, 4pM, 3pM, 2pM, 1pM 및 그 이하 중 임의의 IC₅₀(NGF 약 1.5pM의 존재하에)을 갖는 마우스 E13.5 삼차신경 뉴런의 래트 NGF-의존적 생존의 억제(감소 및/또는 차단)이고/이거나, (f) trkA 수용체에 비해 보다 높은 친화성으로 NGF에 결합한다.

다른 양태에서, 항체는 (a) 약 2nM 미만(예컨대, 약 1nM, 800pM, 600pM, 400pM, 200pM, 100pM, 90pM, 80pM, 70pM, 60pM, 50pM, 40pM, 30pM, 20pM, 10pM, 5pM 및 그 이하 중 임의의 것)의 K_D, 및/또는 약 6×10^-5s^-1 보다 느린 k_off로 NGF(예컨대, 인간 NGF)에 결합하고/하거나, (b) 약 200pM, 150pM, 100pM, 80pM, 60pM, 40pM, 20pM, 10pM 및 그 이하 중 임의의 IC₅₀(NGF 약 15pM의 존재하에)으로 마우스 E13.5 삼차신경 뉴런의 인간 NGF-의존적 생존을 억제하고/하거나, (c) 약 50pM, 40pM, 30pM, 10pM, 20pM, 10pM, 5pM, 2pM, 1pM 및 그 이하 중 임의의 IC₅₀(NGF 약 1.5pM의 존재하에)을 갖는 마우스 E13.5 삼차신경 뉴런의 인간 NGF-의존적 생존을 억제하고/하거나 trkA 수용체에 비해 보다 높은 친화성으로 NGF에 결합한다. 몇몇 실시양태에서, 항체는 (a) 약 2nM 미만의 K_D로 NGF에 결합하고/하거나, (b) 약 100pM 이하의 IC₅₀으로 마우스 E13.5 삼차신경 뉴런의 인간 NGF-의존적 생존을 억제하고/하거나(이때, IC₅₀은 NGF 약 15pM의 존재하에 측정된다), (c) 약 10pM 이하의 IC₅₀으로 마우스 E13.5 삼차신경 뉴런의 인간 NGF-의존적 생존을 억제한다(이때, IC₅₀은 NGF 약 1.5pM의 존재하에 측정된다). 몇몇 실시양태에서, 항체는 (a) 약 100pM 미만의 K_D로 NGF에 결합하고/하거나, (b) 약 20pM 이하의 IC₅₀으로 마우스 E13.5 삼차신경 뉴런의 인간 NGF-의존적 생존을 억제하고/하거나(이때, IC₅₀은 NGF 약 15pM의 존재하에 측정된다), (c) 약 2pM 이하의 IC₅₀으로 마우스 E13.5 삼차신경 뉴런의 인간 NGF-의존적 생존을 억제한다(이때, IC₅₀은 NGF 약 1.5pM의 존재하에 측정된다).

항체에 의해 결합될 수 있는 에피토프는 연속 또는 불연속일 수 있다. 하나의 실시양태에서, 항체는 본질적으로 문헌[Hongo et al. , Hybridoma, 19: 215-227 (2000)]에 기재된 MAb 911, MAb 912 및 MAb 938, 본원에 정의된 항체(예컨대, 항체 E3), 및/또는 국제 특허 출원 공개 제 WO 2005019266 호(항체 4D4, 14D10, 6G9, 7H2, 14F11 및 4G6 포함) 또는 국제 특허 출원 공개 제 WO 2006131951 호(항체 Hu-aD11 포함), 국제 특허 출원 공개 제 WO 09023540 호 또는 미국 특허 제 US20090041717 호에 기재된 바와 같은 항체로 이루어진 군 중에서 선택된 항체와 동일한 hNGF 에피토프에 결합한다(상기 문헌의 전체 내용은 본원에서 참고로서 인용된다). 다른 실시양태에서, 항체는 MAb 911과 동일한 hNGF 에피토프에 본질적으로 결합한다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 상기 홍고(Hongo) 등의 문헌의 MAb 909와 동일한 에피토프에 본질적으로 결합한다. 예를 들면, 에피토프는 hNGF의 가변 영역 1(아미노산 23 내지 35) 내의 잔기 K32, K34 및 E35; hNGF의 가변 영역 4(아미노산 81 내지 88) 내의 잔기 F79 및 T81; 가변 영역 4 내의 잔기 H84 및 K88; hNGF의 가변 영역 5(아미노산 94 내지 98)와 hNGF의 C-말단(아미노산 111 내지 118) 사이의 잔기 R103; hNGF의 예비가변 영역 1(아미노산 10 내지 23) 내의 잔기 E11; hNGF의 가변 영역 2(아미노산 40 내지 49)와 hNGF의 가변 영역 3(아미노산 59 내지 66) 사이의 Y52; hNGF의 C-말단 내의 잔기 L112 및 S113; hNGF의 가변 영역 3 내의 잔기 R59 및 R69; 및 hNGF의 예비가변 영역 1 내의 잔기 V18, V20 및 G23 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 또한, 에피토프는 hNGF의 가변 영역 1, 가변 영역 3, 가변 영역 4, 가변 영역 5, N-말단 영역, 및/또는 C-말단 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 hNGF의 잔기 R103의 용매 접근성을 상당히 감소시킨다. 상기 기재된 에피토프가 인간 NGF에 관한 것이지만, 당해 분야의 숙련자는 인간 NGF의 구조를 다른 종의 NGF로 정렬하고 이러한 에피토프의 대응부분을 아마도 식별할 수 있는 것으로 이해된다.

다른 양태에서, 본 발명은 I34가 S, L, V A 또는 I이고, N35가 N, T 또는 S로 치환된 서열 번호 9를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다. 본원에서 편의성을 위해, 아미노산과 관련되거나 아미노산에 대한 용어 "치환된" 또는 "~이다"는 주어진 위치에 대한 선택된 아미노산을 지칭한다. 자명한 바와 같이, 치환 또는 선택은 서열 번호 또는 도면에 나타낸 아미노산일 수 있다. 잔기 번호는 제시된 서열 번호를 참고로 하여 즉시 결정되고, 항체의 잔기 번호매김을 따른다.

다른 양태에서, 본 발명은 M50이 M, I, G, Q, S 또는 L이고, A62가 A 또는 S이고, L63이 L 또는 V인 서열 번호 10을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 D, N 또는 G이고, Y110이 Y, K, S, R 또는 T인 서열 번호 11을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 S, A, C, G, D, N, T 또는 G이고, Y110이 임의의 아미노산인 서열 번호 11을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 G98이 G, S, A, C, V, N, D 또는 T이고, G99가 G, S, A, C, V, N, D 또는 T이고, Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 S, A, C, G, D, N, T 또는 G이고, Y110이 임의의 아미노산인 서열 번호 11을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 S26이 S 또는 F이고, D28이 D, S, A 또는 Y이고, H32가 H, N 또는 Q인 서열 번호 12를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 I51이 I, T, V 또는 A이고, S56이 S 또는 T인 서열 번호 13을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 S91이 S 또는 E이고, K92가 K, H, R 또는 S이고, Y96이 Y 또는 R인 서열 번호 14를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 S91이 S 또는 E이고, K92가 임의의 아미노산이고, T93이 임의의 아미노산이고, Y96이 Y 또는 R인 서열 번호 14를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

한 양태에서, 본 발명은 I34가 S, L, V A 또는 I이고, N35가 N, T 또는 S인 서열 번호 9에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 M50이 M, I, G, Q, S 또는 L이고, A62가 A 또는 S이고, L63이 L 또는 V인 서열 번호 10에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 D, N 또는 G이고, Y110이 Y, K, S, R 또는 T인 서열 번호 11에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 S, A, C, G, D, N, T 또는 G이고, Y110이 임의의 아미노산인 서열 번호 11에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 G98이 G, S, A, C, V, N, D 또는 T이고, G99가 G, S, A, C, V, N, D 또는 T이고, Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 S, A, C, G, D, N, T 또는 G이고, Y110이 임의의 아미노산인 서열 번호 11에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 S26이 S 또는 F이고, D28이 D, S, A 또는 Y이고, H32가 H, N 또는 Q인 서열 번호 12에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 I51이 I, T, V 또는 A이고, S56이 S 또는 T인 서열 번호 13에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 S91이 S 또는 E이고, K92가 K, H, R 또는 S이고, Y96이 Y 또는 R인 서열 번호 14에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

다른 양태에서, 본 발명은 S91이 S 또는 E이고, K92가 임의의 아미노산이고, T93이 임의의 아미노산이고, Y96이 Y 또는 R인 서열 번호 14에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

한 양태에서, 본 발명은 I34가 S, L, V A 또는 I이고, N35가 N, T 또는 S인 서열 번호 9의 CDR1 영역; M50이 M, I, G, Q, S 또는 L이고, A62가 A 또는 S이고, L63이 L 또는 V인 서열 번호 10의 CDR2 영역; 및 Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 D, N 또는 G이고, Y110이 Y, K, S, R 또는 T인 서열 번호 11의 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 인간화된 항체를 비롯한 항체)를 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 S, A, C, G, D, N, T 또는 G이고, Y110이 임의의 아미노산인 서열 번호 11의 CDR3 영역을 포함한다. 다른 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 G98이 G, S, A, C, V, N, D 또는 T이고, G99가 G, S, A, C, V, N, D 또는 T이고, Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 S, A, C, G, D, N, T 또는 G이고, Y110이 임의의 아미노산인 서열 번호 11의 CDR3 영역을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 폴리펩타이드(예컨대, 항체)는 추가로 항체 경쇄 가변 영역을 포함한다.

다른 양태에서, 본 발명은 S26이 S 또는 F이고, D28이 D, S, A 또는 Y이고, H32가 H, N 또는 Q인 서열 번호 12의 CDR1 영역; I51이 I, T, V 또는 A이고, S56이 S 또는 T인 서열 번호 13의 CDR2 영역; 및 S91이 S 또는 E이고, K92가 K, H, R 또는 S이고, Y96이 Y 또는 R인 서열 번호 14의 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 S91이 S 또는 E이고, K92가 임의의 아미노산이고, T93이 임의의 아미노산이고, Y96이 Y 또는 R인 서열 번호 14의 CDR3 영역을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 폴리펩타이드(예컨대, 항체)는 추가로 항체 중쇄를 포함한다.

다른 양태에서, 본 발명은 (a) I34가 S, L, V A 또는 I이고, N35가 N, T 또는 S인 서열 번호 9의 CDR1 영역; M50이 M, I, G, Q, S 또는 L이고, A62가 A 또는 S이고, L63이 L 또는 V인 서열 번호 10의 CDR2 영역; 및 Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 D, N 또는 G이고, Y110이 Y, K, S, R 또는 T인 서열 번호 11의 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 (b) S26이 S 또는 F이고, D28이 D, S, A 또는 Y이고, H32가 H, N 또는 Q인 서열 번호 12의 CDR1 영역; I51이 I, T, V 또는 A이고, S56이 S 또는 T인 서열 번호 13의 CDR2 영역; 및 S91이 S 또는 E이고, K92가 K, H, R 또는 S이고, Y96이 Y 또는 R인 서열 번호 14의 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 S91이 S 또는 E이고, K92가 임의의 아미노산이고, T93이 임의의 아미노산이고, Y96이 Y 또는 R인 서열 번호 14의 CDR3 영역을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 S, A, C, G, D, N, T 또는 G이고, Y110이 임의의 아미노산인 서열 번호 11의 CDR3 영역을 포함한다. 다른 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 G98이 G, S, A, C, V, N, D 또는 T이고, G99가 G, S, A, C, V, N, D 또는 T이고, Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 S, A, C, G, D, N, T 또는 G이고, Y110이 임의의 아미노산인 서열 번호 11의 CDR3 영역을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 폴리펩타이드는 추가로 항체 경쇄를 포함한다.

다른 양태에서, 본 발명은 I34가 S, L, V A 또는 I이고, N35가 N, T 또는 S인 서열 번호 9에 나타난 아미노산 서열; M50이 M, I, G, Q, S 또는 L이고, A62가 A 또는 S이고, L63이 L 또는 V인 서열 번호 10에 나타난 아미노산 서열; 및 Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 D, N 또는 G이고, Y110이 Y, K, S, R 또는 T인 서열 번호 11에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 인간화된 항체를 비롯한 항체)를 제공한다. 몇몇 실시양태에서, 폴리펩타이드는 Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 S, A, C, G, D, N, T 또는 G이고, Y110이 임의의 아미노산인 서열 번호 11에 나타난 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시양태에서, 폴리펩타이드는 G98이 G, S, A, C, V, N, D 또는 T이고, G99가 G, S, A, C, V, N, D 또는 T이고, Y100이 Y, L 또는 R이고, Y101이 Y 또는 W이고, G103이 G, A 또는 S이고, T104가 T 또는 S이고, S105가 S, A 또는 T이고, Y106이 Y, R, T 또는 M이고, Y107이 Y 또는 F이고, F108이 F 또는 W이고, D109가 S, A, C, G, D, N, T 또는 G이고, Y110이 임의의 아미노산인 서열 번호 11에 나타난 아미노산 서열을 포함한다. 몇몇 실시양태에서, 폴리펩타이드(예컨대, 항체)는 추가로 항체 경쇄 가변 영역을 포함한다.

다른 양태에서, 본 발명은 S26이 S 또는 F이고, D28이 D, S, A 또는 Y이고, H32가 H, N 또는 Q인 서열 번호 12에 나타난 아미노산 서열; I51이 I, T, V 또는 A이고, S56이 S 또는 T인 서열 번호 13에 나타난 아미노산 서열; 및 S91이 S 또는 E이고, K92가 K, H, R 또는 S이고, Y96이 Y 또는 R인 서열 번호 14에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드(예컨대, 항체)를 제공한다.

본 발명의 추가의 바람직한 실시양태에 따라, 항체는 (a) 서열 번호 3에 나타난 CDR1 영역, (b) 서열 번호 4에 나타난 CDR2 영역, 및 (c) 서열 번호 5, 11, 56, 58, 60, 62 또는 64에 나타난 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항-NGF 항체일 수 있다.

본 발명의 추가의 바람직한 실시양태에 따라, 항체는 (a) 서열 번호 6에 나타난 CDR1 영역, (b) 서열 번호 7에 나타난 CDR2 영역, 및 (c) 서열 번호 8, 14, 55, 57, 59, 61 또는 63에 나타난 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-NGF 항체일 수 있다.

본 발명의 바람직한 실시양태에 따라, 항체는 (a) 서열 번호 3에 나타난 CDR1 영역, (b) 서열 번호 4에 나타난 CDR2 영역, 및 (c) 서열 번호 5에 나타난 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항-NGF 항체일 수 있다.

본 발명에 따라, 항체는 (a) 서열 번호 6에 나타난 CDR1 영역, (b) 서열 번호 7에 나타난 CDR2 영역, 및 (c) 서열 번호 8에 나타난 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-NGF 항체일 수 있다.

항-NGF 항체는 (a) 서열 번호 3에 나타난 CDR1 영역, (b) 서열 번호 4에 나타난 CDR2 영역, 및 (c) 서열 번호 5에 나타난 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역을 추가로 포함할 수 있다.

항-NGF 항체는 서열 번호 1의 아미노산 서열과 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및/또는 서열 번호 2의 아미노산 서열과 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있고, 이때 항체는 NGF에 특이적으로 결합한다. 인간화된 항-NGF 항체의 중쇄 가변 영역 및/또는 경쇄 가변 영역은 하나 이상의 개별적인 골격 돌연변이를 포함할 수 있다. 한 양태에서, 골격 돌연변이는 인간 골격 잔기를 상보성 마우스 골격 잔기로 대체시킬 수 있다. 돌연변이는 중쇄 가변 영역에서 V71K 치환을 포함할 수 있다. 항-NGF 항체는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함할 수 있고/있거나 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.

항-NGF 항체는 서열 번호 1 및 2에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 항체일 수 있다.

항-NGF 항체는 서열 번호 16의 아미노산 서열과 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역, 및/또는 서열 번호 17의 아미노산 서열과 약 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함할 수 있고, 이때 항체는 NGF에 특이적으로 결합한다.

항-NGF 항체는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 영역을 포함할 수 있고/있거나 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 영역을 포함할 수 있다.

항-NGF 항체는 서열 번호 16 및 17에 나타난 아미노산 서열을 포함하는 항체일 수 있다.

항-NGF 항체는 본원에서 정의된 항-NGF 항체와 NGF 결합을 위해 경쟁할 수 있다. 항-NGF 항체는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및/또는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 NGF 결합을 위해 경쟁할 수 있다.

항-NGF 항체는 인간 및 설치류 NGF에 특이적으로 결합하는 인간화된 친화성 성숙 항체, E3일 수 있다. 항체 E3은 국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호에 개시되어 있고, 이의 내용은 전체가 본원에 참고로 인용되어 있다. E3의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열은 각각 서열 번호 1 및 2(국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1A 및 1B)에 나타나 있다. (코티아(Chothia) 및 카바트(Kabat) CDR을 포함하는) 항체 E3의 CDR 부분은 국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1A 및 1B에 도식적으로 나타나 있다. E3 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열 및 개별적으로 연장된 CDR의 아미노산 서열 또한 하기에 나타나 있다(하기의 "항체 서열"을 참조). 항체 E3은 NGF를 격리하고 이의 수용체와의 상호작용을 방지하는데 매우 강력하다. E3 및 이의 뮤린 전구체 항체 911은 관절염, 암 통증 및 수술후 통증을 비롯한 병리학적 통증의 비-임상적 동물 모델에서 효과적인 진통제인 것으로 입증되어 왔다.

또한, 항-NGF 항체는 항체 E3(본원에서는 호환적으로 "E3"으로 명칭된다)의 단편 또는 영역을 포함할 수 있다. 하나의 실시양태에서, 단편은 국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1B 및 본원의 서열 번호 17에 나타난 항체 E3의 경쇄이다. 다른 실시양태에서, 단편은 국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1A 및 본원의 서열 번호 16에 나타난 항체 E3의 중쇄이다. 또 다른 실시양태에서, 단편은 항체 E3의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 하나 이상의 가변 영역을 함유한다. 또 다른 실시양태에서, 단편은 각각 국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1A 및 1B 및 본원의 서열 번호 17 및 16에 나타난 항체 E3의 경쇄 및/또는 중쇄로부터의 하나 이상의 CDR을 함유한다.

다른 양태에서, 항체는 ATCC No. PTA-4893 또는 ATCC No. PTA-4894의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생성되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 경쇄를 포함한다. 다른 양태에서, 항체는 ATCC No. PTA-4895의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생성되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 중쇄를 포함한다. 다른 양태에서, 항체는 (a) ATCC No. PTA-4894 또는 ATCC No. PTA-4893의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생성되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 경쇄; 및 (b) ATCC No. PTA-4895의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생성되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 인코딩되는 중쇄를 포함한다(본원에서는 편의상, 기탁된 숙주 세포에 의해 생성된 폴리뉴클레오타이드가 ATCC No. PTA-4894, ATCC No. PTA-4893 및 ATCC No. PTA-4895의 기탁 번호를 갖는 것으로 언급된다). 다른 양태에서, 항체는 ATCC No. PTA-4894 또는 ATCC No. PTA-4893의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생성되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 경쇄의 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다른 양태에서, 항체는 ATCC No. PTA-4895의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생성되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 중쇄의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 다른 양태에서, 항체는 (a) ATCC No. PTA-4894 또는 ATCC No. PTA-4893의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생성되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 경쇄의 경쇄 가변 영역, 및 (b) ATCC No. PTA-4895의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생성되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 중쇄의 중쇄 가변 영역을 포함한다. 또 다른 양태에서, 항체는 (a) ATCC No. PTA-4894의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생성되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 하나 이상의 CDR; 및/또는 (b) ATCC No. PTA-4895의 기탁 번호를 갖는 숙주 세포에 의해 생성되는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화되는 중쇄를 포함한다.

다른 양태에서, 항체는 다음의 것들 중 임의의 하나 이상을 포함한다: a) 서열 번호 1 내지 8 또는 서열 번호 3 내지 8에 나타난 항체 E3의 하나 이상의 CDR(국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1A 및 도 1B); b) 서열 번호 1 및 5에 나타난 항체 E3의 중쇄로부터의 CDR H3(국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1A); c) 서열 번호 2 및 8에 나타난 항체 E3의 경쇄로부터의 CDR L3(국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1B); d) 서열 번호 2 또는 6 내지 8에 나타난 항체 E3의 경쇄로부터의 3개의 CDR(국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1B); e) 서열 번호 1, 3 내지 5에 나타난 항체 E3의 중쇄로부터의 3개의 CDR(국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1A); 및 f) 서열 번호 1 내지 8에 나타난 항체 E3의 경쇄로부터의 3개의 CDR 및 중쇄로부터의 3개의 CDR(국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1A 및 1B). 다른 양태에서, 항체는 다음의 것들 중 임의의 하나 이상을 포함할 수 있다: a) 서열 번호 1 내지 8에 나타난 항체 E3에서 유래된 하나 이상(1, 2, 3, 4, 5 또는 6개)의 CDR(국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1A 및 1B); b) 서열 번호 1 및 5에 나타난 항체 E3의 중쇄로부터의 CDR H3에서 유래된 CDR(국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1A); 및/또는 c) 서열 번호 2 및 8에 나타난 항체 E3의 경쇄로부터의 CDR L3에서 유래된 CDR(국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1B). 몇몇 실시양태에서, CDR은 카바트 CDR, 코티아 CDR 또는 카바트와 코티아 CDR의 조합(본원에서는 "연장된" 또는 "조합된" CDR로서 언급된다)일 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 폴리펩타이드는 본원에 개시된 CDR 형상 중 임의의 것(조합, 변이체 등 포함)을 포함한다.

다른 실시양태양태에서, 항체는 (a) (i) 서열 번호 30의 CDR1 영역; (ii) 서열 번호 31의 서열을 포함하는 CDR2 영역; (iii) 서열 번호 11, 56, 58, 60, 62 및 64로 이루어진 군 중에서 선택되는 CDR3 영역을 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 (b) (i) 서열 번호 18의 CDR1 영역; (ii) 서열 번호 19의 CDR2 영역; (iii) 서열 번호 14, 55, 57, 59, 61 및 63으로 이루어진 군 중에서 선택되는 CDR3 영역을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함할 수 있다.

몇몇 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 항-NGF 항체의 중쇄의 C-말단 라이신은 삭제된다. 다양한 경우, 본원에 기재된 항-NGF 항체의 중쇄 및/또는 경쇄는 선택적으로 신호 서열을 포함할 수 있다.

다른 실시양태에서, 항체는 당해 분야에 공지된 항-NGF 항체, 예를 들면 국제 특허 출원 공개 제 WO 2005019266 호(항체 4D4, 14D10, 6G9, 7H2, 14F11 및 4G6 포함), 국제 특허 출원 공개 제 WO 2006131951 호(항체 Hu-αD11 포함), 국제 특허 출원 공개 제 WO 09023540 호 및 미국 특허 제 20090041417 호에 기재된 항체 중에서 선택될 수 있다. 항체는 당해 분야에 공지된 항-NGF 항체, 예를 들면 문헌[Hongo et al. , Hybridoma, 19: 215-227 (2000)]에 개시된 Mab911, MAb912 및 MAb938 및 국제 특허 출원 공개 제 WO 2005019266 호(항체 4D4, 14D10, 6G9, 7H2, 14F11 및 4G6 포함), 국제 특허 출원 공개 제 WO 2006131951 호(항체 Hu-αD11 포함), 국제 특허 출원 공개 제 WO 09023540 호 및 미국 특허 제 20090041417 호에 기재된 항체와 동일한 에피토프에 결합할 수 있고/있거나, 이런 항체와 NGF에의 결합을 위해 경쟁할 수 있다.

본 발명의 추가의 양태에 따라, 하나 이상의 항체 약 0.5mg/ml 내지 약 50mg/ml, 히스티딘 완충제 약 1.0mM 내지 약 15mM, 트레할로스 이수화물 약 1mg/ml 내지 약 100mg/ml, PS20 약 0.01 내지 약 0.15mg/ml 및 다이나트륨 EDTA 약 0.01 내지 약 0.1mg/ml를 포함하거나, 상기의 것으로 이루어진 액체 조성물이 제공되며, 이때 조성물은 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.0, 6.2, 6.5 또는 6.8 중 어느 하나의 값 사이의 범위, 또는 다르게는 약 pH 5.8 내지 약 pH 6.0, 6.2, 6.5 및 6.8 중 어느 하나 값 사이의 범위 중에서 선택된 pH를 갖는다.

본 발명의 추가의 양태에 따라, 하나 이상의 항체 약 2.5mg/ml, 5mg/ml, 10mg/ml, 20mg/ml, 22mg/ml 또는 약 50mg/ml, 히스티딘 완충제 약 1.0mM 내지 약 15mM, 트레할로스 이수화물 약 1mg/ml 내지 약 100mg/ml, PS20 약 0.01 내지 약 0.15mg/ml 및 다이나트륨 EDTA 약 0.01 내지 약 0.1mg/ml를 포함하거나, 상기의 것으로 이루어진 액체 조성물이 제공되며, 이때 조성물은 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.0, 6.2, 6.5 또는 6.8 중 어느 하나의 값 사이의 범위, 또는 다르게는 약 pH 5.8 내지 약 pH 6.0, 6.2, 6.5 및 6.8 중 어느 하나 값 사이의 범위 중에서 선택된 pH를 갖는다.

바람직한 실시양태에 따라, 액체 조성물은 하나 이상의 항체 약 2.5mg/ml, 5mg/ml, 10mg/ml, 20mg/ml, 22mg/ml 및 약 50mg/ml 중 임의의 값, 히스티딘 완충제 약 10mM, 트레할로스 이수화물 약 84mg/ml, PS20 약 0.1mg/ml 및 다이나트륨 EDTA 약 0.05mg/ml를 포함하거나 상기의 것으로 이루어지며, 이때 조성물은 약 pH 5.5 내지 약 pH 6.0, 6.2, 6.5 및 6.8 중 어느 하나의 값 사이의 범위, 또는 다르게는 약 pH 5.8 내지 약 pH 6.0, 6.2, 6.5 및 6.8 중 어느 하나 값 사이의 범위 중에서 선택된 pH를 가지며, 바람직하게는 5.8 내지 6.5의 pH를 갖고, 항체는 서열 번호 1의 가변 중쇄 서열 및 서열 번호 2의 가변 경쇄 서열을 포함한다.

바람직한 실시양태에 따라, 액체 조성물은 하나 이상의 항체 약 2.5mg/ml, 5mg/ml, 10mg/ml, 20mg/ml, 22mg/ml 및 약 50mg/ml 중 임의의 값, 히스티딘 완충제 약 10mM, 트레할로스 이수화물 약 84mg/ml, PS20 약 0.1mg/ml 및 다이나트륨 EDTA 약 0.05mg/ml를 포함하거나 상기의 것으로 이루어지며, 이때 조성물은 6.0 또는 6.0±0.2의 pH를 갖고, 항체는 서열 번호 1의 가변 중쇄 서열 및 서열 번호 2의 가변 경쇄 서열을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 사용되는 투여량 부피는 1ml이다.

하나의 양태에서, 냉동 건조되지 않고 냉동 건조화 처리되지 않은 액체 조성물이 제공된다.

본 발명의 추가의 양태에 따라, 조성물이 다중 동결 해동 주기 후 항체의 응집에 대해 저항성을 갖는 본 발명의 액체 조성물이 제공된다.

바람직하게는 항체는 조성물의 1회 이상의 동결 및 해동 주기 동안 응집에 대해 저항적이며, 보다 바람직하게는 항체는 다중 동결 해동 주기 동안, 바람직하게는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15회 이상의 동결 해동 주기 동안 응집에 대해 저항적이다. 가장 바람직하게는, 항체는 액체 조성물의 15회 이상의 동결 및 해동 주기 동안, 더욱 바람직하게는 4 또는 15회 주기 동안 응집에 대해 저항적이다.

더욱 바람직하게는, 항체는 동결 해동 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 액체 조성물의 다중 동결 해동 주기 후 약 10% 미만의 응집 증가를 나타내고, 보다 바람직하게는 동결 해동 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 액체 조성물의 다중 동결 해동 주기 후 약 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.5, 0% 또는 그 이하의 응집 증가를 나타낸다.

본 발명의 추가의 양태에 따라, 조성물이 약 26 또는 52주 이상 동안 약 5, 25 또는 40℃의 임의의 온도에서 보관될 수 있고, 조성물의 항체의 응집 증가가 약 35% 미만, 보다 바람직하게는 약 10% 미만인 본 발명의 액체 조성물이 제공된다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 10mg/ml 또는 약 50mg/ml이다.

바람직하게는, 약 2, 4, 8, 9, 13, 26 또는 52주의 임의의 기간 동안 약 5, 25 또는 40℃의 임의의 온도에서 보관되는 경우, 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 액체 제형의 항체의 응집 증가는 약 35% 미만, 보다 바람직하게는 약 10% 미만이다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 10mg/ml 또는 약 50mg/ml이다.

더욱 바람직하게는, 액체 조성물의 항체는 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여, 2, 4, 8, 9, 13, 26 또는 52주의 보관 기간 후 약 5, 25 또는 40℃의 임의의 온도에서 약 35% 미만, 더욱 바람직하게는 약 34%, 33%, 32%, 31%, 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10% 또는 9% 미만, 보다 바람직하게는 약 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0.5% 미만, 또는 약 0%의 응집 증가를 나타내고, 가장 바람직하게는 52주 동안 40℃에서 약 20% 미만, 또는 26주 동안 40℃에서 약 10% 미만을 나타낸다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 10mg/ml 또는 약 50mg/ml이다.

본 발명의 추가의 양태에 따라, 조성물이 약 26 또는 52주 이상 동안 약 5, 25 또는 40℃의 임의의 온도에서 보관될 수 있는 본 발명의 액체 조성물이 제공되며, 이때 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 조성물의 항체의 산화 증가는 약 35% 미만, 더욱 바람직하게는 약 10% 미만이다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 10mg/ml 또는 약 50mg/ml이다.

바람직하게는, 액체 조성물의 항체는 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 약 2, 4, 8, 9, 13, 26 또는 52주의 임의의 기간 후 약 5, 25 또는 40℃의 임의의 온도에서 약 35% 미만, 더욱 바람직하게는 약 10% 미만, 더 더욱 바람직하게는, 약 34%, 33%, 32%, 31%, 30%, 29%, 28%, 27%, 26%, 25%, 24%, 23%, 22%, 21%, 20%, 19%, 18%, 17%, 16%, 15%, 14%, 13%, 12%, 11%, 10% 또는 9% 미만, 보다 바람직하게는 약 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0.5% 미만, 또는 약 0%의 산화 증가를 나타내고, 가장 바람직하게는 52주 동안 약 31% 또는 30% 미만, 또는 26주 동안 40℃에서 약 11% 또는 10% 미만을 나타낸다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 10mg/ml 또는 약 50mg/ml이다.

본 발명의 추가의 양태에 따라, 조성물이 약 26 또는 52주 이상 동안 약 5, 25 또는 40℃의 임의의 온도에서 보관될 수 있는 본 발명의 액체 조성물이 제공되며, 이때 조성물의 항체의 활성 감소는 30% 미만이다

바람직하게는, 약 2, 4, 8, 13 또는 26주 이상의 임의의 기간 동안 약 5, 25 또는 40℃의 임의의 온도에서 보관되는 경우, 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 제형의 항체의 활성 감소는 약 30% 미만, 더욱 바람직하게는 약 25% 미만, 보다 바람직하게는 20%, 더욱 바람직하게는 약 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.5 또는 0% 미만이다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 10mg/ml 또는 약 50mg/ml이다.

본 발명의 추가의 양태에 따라, 조성물이 약 26주 이상 동안 약 5, 25 또는 40℃의 임의의 온도에서 보관될 수 있는 본 발명의 액체 조성물이 제공되며, 이때 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 조성물의 항체의 단편화 증가는 약 15% 미만이고, 바람직하게는 항체의 농도는 약 10mg/ml 또는 약 50mg/ml이다. 바람직하게는, 액체 조성물의 항체는 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 약 2, 4, 8, 9, 13 또는 26주의 임의의 보관 기간 후 약 5, 25 또는 40℃의 임의의 온도에서 약 15% 미만, 더욱 바람직하게는 약 14%, 13%, 12%, 11%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1% 또는 0.5% 미만 또는 약 0%의 단편화 증가를 나타낸다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 10mg/ml 또는 약 50mg/ml이다.

본 발명의 추가의 양태에 따라, 조성물이 약 52주 이상 동안 2 내지 8℃, 바람직하게는 5℃의 온도에서 보관될 수 있는 본 발명의 액체 조성물이 제공되며, 이때 조성물의 항체의 활성 감소는 20% 미만이다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 2.5, 5, 10, 20 또는 50mg/ml 중 임의의 값이다.

바람직하게는, 약 2, 4, 8, 13, 26 또는 52주 이상의 임의의 보관 기간 동안, 더욱 바람직하게는 약 2, 3, 6, 9, 12, 18 또는 24개월 이상의 임의의 보관 기간 동안 약 2 내지 8℃, 바람직하게는 5℃의 온도에서 보관되는 경우, 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 액체 제형의 항체의 활성 감소는 약 15% 미만, 더욱 바람직하게는 약 10% 미만이다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 2.5, 5, 10, 20 또는 50mg/ml 중 임의의 값이다.

더욱 바람직하게는, 액체 조성물의 항체는 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 보관 기간 후 약 15% 미만의 응집 증가, 더욱 바람직하게는 약 10% 미만, 보다 바람직하게는 약 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.5 또는 0% 미만의 활성 감소를 나타낸다.

본 발명의 추가의 양태에 따라, 조성물이 약 52주 이상, 또는 24개월 이상 동안 2 내지 8℃, 바람직하게는 5℃의 온도에서 보관될 수 있는 본 발명의 액체 조성물이 제공되며, 이때 조성물의 항체의 응집 증가는 20% 미만이다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 2.5, 5, 10, 20 또는 50mg/ml 중 임의의 값이다.

바람직하게는, 약 2, 4, 8, 13, 26 또는 52주 이상의 임의의 보관 기간 동안, 더욱 바람직하게는 약 2, 3, 6, 9, 12, 18 또는 24개월 이상의 임의의 보관 기간 동안 약 2 내지 8℃, 바람직하게는 5℃의 온도에서 보관되는 경우, 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 액체 제형의 항체의 응집 증가는 약 15% 미만, 더욱 바람직하게는 약 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0.5% 미만 또는 0%이다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 2.5, 5, 10, 20 또는 50mg/ml 중 임의의 값이다.

본 발명의 추가의 양태에 따라, 조성물이 약 52주 이상, 또는 24개월 이상 동안 2 내지 8℃, 바람직하게는 5℃의 온도에서 보관될 수 있는 본 발명의 액체 조성물이 제공되며, 이때 조성물의 항체의 산화 증가는 20% 미만이다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 2.5, 5, 10, 20 또는 50mg/ml 중 임의의 값이다.

바람직하게는, 약 2, 4, 8, 13, 26 또는 52주 이상의 임의의 보관 기간 동안, 더욱 바람직하게는 약 2, 3, 6, 9, 12, 18 또는 24개월 이상의 임의의 보관 기간 동안 약 2 내지 8℃, 바람직하게는 5℃의 온도에서 보관되는 경우, 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 액체 제형의 항체의 산화 증가는 약 15% 미만, 더욱 바람직하게는 약 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0.5% 미만 또는 0%이다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 2.5, 5, 10, 20 또는 50mg/ml 중 임의의 값이다.

본 발명의 추가의 양태에 따라, 조성물이 약 52주 이상, 또는 24개월 이상 동안 2 내지 8℃, 바람직하게는 5℃의 온도에서 보관될 수 있는 본 발명의 액체 조성물이 제공되며, 이때 조성물의 항체의 단편화 증가는 20% 미만이다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 2.5, 5, 10, 20 또는 50mg/ml 중 임의의 값이다.

바람직하게는, 약 2, 4, 8, 13, 26 또는 52주 이상의 임의의 보관 기간 동안, 더욱 바람직하게는 약 2, 3, 6, 9, 12, 18 또는 24개월 이상의 임의의 보관 기간 동안 약 2 내지 8℃, 바람직하게는 5℃의 온도에서 보관되는 경우, 보관 기간 전의 동일한 조성물 또는 동일하거나 거의 동일한 조성물의 등가 샘플과 비교하여 액체 제형의 항체의 단편화 증가는 약 15% 미만, 더욱 바람직하게는 약 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1 또는 0.5% 미만 또는 0%이다. 바람직하게는, 항체의 농도는 약 2.5, 5, 10, 20 또는 50mg/ml 중 임의의 값이다.

본 발명의 추가의 바람직한 양태에 따라, 포유동물의 통증의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 상기 양태 또는 실시양태에 따른 액체 조성물이 제공된다. 바람직하게는, 통증은 급성 통증, 만성 통증, 신경병성 통증, 염증성 통증, 침해성 통증, 혼합 병인 통증, 통각 과민 통증, 이질통, 내장통, 체성통 및 요통 중 하나 이상으로부터 선택된다.

본 발명의 또 다른 추가의 실시양태에 따라, 간질성 방광염 및/또는 통증성 방광 증후군 및/또는 방광 통증 증후군과 관련된 통증 및/또는 하부 요로 증후군(LUT)의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 상기 양태 또는 실시양태에 따른 액체 조성물이 제공된다.

본 발명에 따른 또 다른 추가의 양태에 따라, 통증 및/또는 만선 전립선염 및/또는 만성 골반통 증후군의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 상기 양태 또는 실시양태에 따른 액체 조성물이 제공된다. 또 다른 양태에 따라, 자궁내막증 및/또는 자궁 근종과 관련된 통증 및/또는 다른 증후군의 치료를 위한 약제의 제조에 있어서 상기 양태 또는 실시양태에 따른 액체 조성물이 제공된다.

바람직하게는, 포유동물는 설치류(예컨대, 마우스, 래트 및 토끼), 애완동물(예컨대, 고양이, 개 및 말), 농장 동물(예컨대, 소, 양, 돼지 및 염소), 스포츠 동물 및/또는 애완동물(예컨대, 고양이, 개 및 말), 영장류, 보다 바람직하게는 인간 중에서 선택된다.

바람직한 실시양태에 따라, 액체 조성물은 혈류, 근육, 조직, 지방 또는 내부 장기로 직접적으로 투여될 수 있다. 비경구 투여에 적합한 수단은 정맥내, 동맥내, 복강내, 수막강내, 뇌실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내, 골내, 진피내 및 피하를 포함한다. 비경구 투여에 적합한 장치는 바늘(미세바늘, 미세투영기, 가용성 바늘 및 다른 미세공극 형성 기법을 포함) 주사기, 무침 주사기 및 주입 기법을 포함한다.

몇몇 실시양태에서, 약제의 투여 패턴은 매주 1회, 2주마다 1회, 3주마다 1회, 4주마다 1회, 5주마다 1회, 6주마다 1회, 7주마다 1회, 8주마다 1회, 9주마다 1회, 10주마다 1회, 15주마다 1회, 20주마다 1회, 25주마다 1회 또는 26주마다 1회 약제 투여량으로 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 항-NGF 길항제 항체는 1개월마다 1회, 2개월마다 1회, 3개월마다 1회, 4개월마다 1회, 5개월마다 1회 또는 6개월마다 1회 투여된다. 가장 바람직하게는, 약제의 투여 패턴은 8주마다 1회 약제 투여량의 투여를 포함한다.

몇몇 실시양태에서, 투여량 부피는 약 20ml, 약 15ml, 약 10ml, 약 5ml, 약 2.5ml, 약 1.5ml, 약 1.0ml, 약 0.75ml, 약 0.5ml, 약 0.25ml 또는 약 0.01ml 이하이다. 몇몇 실시양태에서, 투여량 부피는 약 20ml, 약 19ml, 약 18ml, 약 17ml, 약 16ml, 약 15ml, 약 14ml, 약 13ml, 약 12ml, 약 11ml, 약 10ml, 약 9ml, 약 8ml, 약 7ml, 약 6ml, 약 5ml, 약 4ml, 약 3ml, 약 2ml 또는 약 1ml이다. 다르게는, 약 20.5ml, 약 19.5ml, 약 18.5ml, 약 17.5ml, 약 16.5ml, 약 15.5ml, 약 14.5ml, 약 13.5ml, 약 12.5ml, 약 11.5ml, 약 10.5ml, 약 9.5ml, 약 8.5ml, 약 7.5ml, 약 6.5ml, 약 5.5ml, 약 4.5ml, 약 3.5ml, 약 2.5ml, 약 1.5ml 또는 약 0.5ml이다. 다르게는, 약 900㎕, 약 800㎕, 약 700㎕, 약 600㎕, 약 500㎕, 약 400㎕, 약 300㎕, 약 200㎕ 또는 약 100㎕, 다르게는 약 950㎕, 약 850㎕, 약 750㎕, 약 650㎕, 약 550㎕, 약 450㎕, 약 350㎕, 약 250㎕, 약 150㎕ 또는 약 50㎕이다. 가장 바람직하게는, 투여량 부피는 약 2.5ml 이하이다.

바람직한 실시양태에 따라, 항체 농도는 약 0.1 내지 약 200mg/ml에 이를 수 있다. 바람직하게는, 항체 농도는 약 0.5mg/ml, 약 1mg/ml, 약 2mg/ml, 약 2.5mg/ml, 약 3mg/ml, 약 3.5mg/ml, 약 4mg/ml, 약 4.5mg/ml, 약 5mg/ml, 약 5.5mg/ml, 약 6mg/ml, 약 6.5mg/ml, 약 7mg/ml, 약 7.5mg/ml, 약 8mg/ml, 약 8.5mg/ml, 약 9mg/ml, 약 9.5mg/ml, 약 10mg/ml, 약 11mg/ml, 약 12mg/ml, 약 13mg/ml, 약 14mg/ml, 약 15mg/ml, 약 16mg/ml, 약 17mg/ml, 약 18mg/ml, 약 19mg/ml, 약 20mg/ml, 약 21mg/ml, 약 22mg/ml, 약 23mg/ml, 약 24mg/ml, 약 25mg/ml, 약 26mg/ml, 약 27mg/ml, 약 28mg/ml, 약 29mg/ml, 약 30mg/ml, 약 31mg/ml, 약 32mg/ml, 약 33mg/ml, 약 34mg/ml, 약 35mg/ml, 약 36mg/ml, 약 37mg/ml, 약 38mg/ml, 약 39mg/ml, 약 40mg/ml, 약 41mg/ml, 약 42mg/ml, 약 43mg/ml, 약 44mg/ml, 약 45mg/ml, 약 46mg/ml, 약 47mg/ml, 약 48mg/ml, 약 49mg/ml, 약 50mg/ml, 약 51mg/ml, 약 52mg/ml, 약 53mg/ml, 약 54mg/ml, 약 55mg/ml, 약 56mg/ml, 약 57mg/ml, 약 58mg/ml, 약 59mg/ml, 약 60mg/ml, 약 70mg/ml, 약 80mg/ml, 약 90mg/ml, 약 100mg/ml 또는 약 110mg/ml이다. 가장 바람직하게는, 항체 농도는 50mg/ml 이하이고, 약 2mg/ml, 약 2.5mg/ml, 약 5mg/ml, 약 10mg/ml, 약 19mg/ml, 약 20mg/ml, 약 22mg/ml 및 약 50mg/ml로 이루어진 군 중에서 선택될 수 있다.

바람직한 실시양태에 따라, 투여량은 약 0.5mg, 약 1mg, 약 2mg, 약 3mg, 약 4mg, 약 5mg, 약 6mg, 약 7mg, 약 8mg, 약 9mg, 약 10mg, 약 11mg, 약 12mg, 약 13mg, 약 14mg, 약 15mg, 약 16mg, 약 17mg, 약 18mg, 약 19mg, 약 20mg, 약 21mg, 약 22mg, 약 23mg, 약 24mg, 약 25mg, 약 26mg, 약 27mg, 약 28mg, 약 29mg, 약 30mg, 약 31mg, 약 32mg, 약 33mg, 약 34mg, 약 35mg, 약 36mg, 약 37mg, 약 38mg, 약 39mg, 약 40mg, 약 41mg, 약 42mg, 약 43mg, 약 44mg, 약 45mg, 약 46mg, 약 47mg, 약 48mg, 약 49mg, 약 50mg, 약 51mg, 약 52mg, 약 53mg, 약 54mg, 약 55mg, 약 56mg, 약 57mg, 약 58mg, 약 59mg, 약 60mg, 약 70mg, 약 80mg, 약 90mg, 약 100mg 또는 약 110mg 이하의 항체를 함유한다. 가장 바람직하게는, 항체는 약 50mg 이하의 항체를 함유한다.

바람직한 실시양태에 따라, 투여량은 (이 투여량이 투여되는 포유류의 질량에 대해) 약 1㎍/kg, 약 10㎍/kg, 약 20㎍/kg, 약 25㎍/kg, 약 50㎍/kg, 약 100㎍/kg, 약 200㎍/kg, 약 250㎍/kg, 약 500㎍/kg, 약 1mg/kg, 약 2mg/kg, 약 3mg/kg, 약 4mg/kg, 약 5mg/kg, 약 6mg/kg, 약 7mg/kg, 약 8mg/kg, 약 9mg/kg, 약 10mg/kg 또는 약 11mg/kg인 항체 양을 함유한다. 가장 바람직하게는, 투여량은 약 20㎍/kg, 약 25㎍/kg, 약 50㎍/kg, 약 100㎍/kg, 약 200㎍/kg, 약 250㎍/kg, 1mg/kg 또는 약 2mg/kg을 함유한다.

투약 섭생법은 전문의가 얻고자 희망하는 약동학적 붕괴의 패턴에 따라 좌우될 수 있다. 예를 들면, 몇몇 실시양태에서, 1주에 1 내지 4회 투약이 고려된다. 보다 적은 회수의 투약이 이용될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 투여량은 매 2주, 매 3주, 매 4주, 매 5주, 매 6주, 매 7주, 매 8주, 매 9주, 매 10주, 매 15주, 매 20주, 매 25주 또는 보다 긴 기간 마다 1회 투여된다. 몇몇 실시양태에서, 투여량은 매 1개월, 매 2개월, 매 3개월, 매 4개월, 매 5개월, 매 6개월 또는 보다 긴 기간 마다 1회 투여된다. 가장 바람직하게는, 투여량은 매 8주 마다 1회 투여된다. 이러한 치료법의 진행은 통상적인 기법 및 분석에 의해 용이하게 모니터된다. 투약 섭생법은 시간에 따라 달라질 수 있다.

본 발명의 목적을 위해, 약제의 적절한 투약은 사용되는 항체, 치료될 통증의 유형 및 중증도, 제제가 예방 또는 치료 목적의 사전 요법을 위해 투여되는지의 여부, 제제에 대한 환자의 임상적 이력 및 반응, 및 주치의의 결정에 좌우된다. 전형적으로, 임상의는 목적하는 결과를 달성하는 투약에 도달될 때까지 약제를 투여할 것이다. 투약은 경험적으로 결정될 수 있으며, 예를 들면 개개인은 약제의 효능을 평가하는 증분의 투약이 주어지고, 통증의 지표는 예컨대 통증 수치 등급 스케일(NRS)의 변화에 따를 수 있다.

투여량 및/또는 빈도는 치료 과정에 따라 달라질 수 있다. 경험적인 고려 사항, 예컨대 항체 반감기는 일반적으로 투약의 결정에 기여할 것이다. 투여 빈도는 치료 과정에 따라 결정되고 조정될 수 있으며, 일반적으로 통증의 치료 및/또는 억제 및/또는 경감 및/또는 지연을 기준으로 하지만, 반드시 그렇지는 않다. 몇몇 개인에게는, 1회 이상의 투여가 필요할 수 있다. 투여 빈도는 치료 과정에 따라 결정되고 조정될 수 있다. 통증 및 그의 중증도에 따라 수일 또는 보다 긴 반복 투여 동안, 목적하는 증상의 억제가 발생하거나 충분한 치료 수준이 달성되어 통증이 감소할 때까지 치료가 지속된다.

액체 조성물을 포함하는 약제의 투여는 예를 들면 수용자의 생리학적 상태, 투여 목적이 치료인지 예방인지의 여부, 및 당해 분야의 숙련자에게 공지된 다른 인자에 따라 연속적 또는 간헐적일 수 있다. 액체 조성물을 포함하는 약제의 투여는 예정된 기간 동안 본질적으로 연속적이거나, 또는 일련의 간격을 둔 투여, 예컨대 통증 발생 전, 동안 또는 후일 수 있다.

바람직하게는, 투여는 정맥내, 동맥내, 복강내, 수막강내, 뇌실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내, 골내, 진피내 및 피하 중에서 선택된 비경구 투여이다. 바람직하게는, 약제는 비경구 투여용 단위 투약 무균 액체 형태이다.

치료 효능은 통증 완화를 모니터함으로써 평가될 수 있다. 통증 완화는 완화의 시간 경과를 특징으로 할 수 있다. 따라서, 몇몇 실시양태에서, 완화는 투여 후 약 24 시간 이내에 관찰된다. 다른 실시양태에서, 완화는 투여 후 약 36, 48, 60 또는 72 시간 또는 4일 이내에 관찰된다. 몇몇 실시양태에서, 통증의 빈도 및/또는 강도는 감소되고/되거나 이러한 통증을 앓는 이들의 삶의 질이 개선된다. 몇몇 실시양태에서, 통증 완화는 약제의 단일 투여 후 약 7일 이상, 약 14일 이상, 약 21일 이상, 약 28일 이상, 약 35일 이상, 약 42일 이상, 약 49일 이상, 약 56일 이상, 약 63일 이상, 약 70일 이상, 약 77일 이상, 약 84일 이상, 약 180일 이상, 또는 이보다 더 오래 동안 제공된다.

병용

임의의 양태 또는 실시양태에 따른 액체 조성물은 특히 포유동물의 통증 치료에서 다른 약리학적으로 활성인 화합물, 또는 둘 이상의 약리학적으로 활성인 화합물과 유용하게 병용될 수 있고, 하기에서 선택된 하나 이상의 제제와 병용하여 동시에, 순차적으로 또는 별개로 투여될 수 있다:

(i) 오피오이드 진통제, 예를 들면 모르핀, 헤로인, 하이드로모폰, 옥시모폰, 레보파놀, 레발로판, 메타돈, 머페리딘, 펜타닐, 코카인, 코데인, 다이하이드로코데인, 옥시코돈, 하이드로코돈, 프로폭시펜, 날메펜, 날로핀, 날록손, 날트렉손, 부프레노핀, 부토파놀, 날부핀 또는 펜타조신;

(ii) 비스테로이드성 소염제(NSAID), 예를 들면 아스피린, 다이클로페낙, 다이플루시날, 에토돌락, 펜부펜, 페노프로펜, 플루페니살, 플루비프로펜, 이부프로펜, 인도메타신, 케토프로펜, 케토롤락, 메클로페남산, 메페남산, 나부메톤, 나프로센, 옥사프로진, 페닐부타존, 피록시캄, 설린닥, 톨메틴 또는 조메피락, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염;

(iii) 바비투레이트 진정제, 예를 들면 아모바비탈, 아프로바비탈, 부타바비탈, 부타비탈, 메포바비탈, 메타비탈, 메토헥시탈, 펜토바비탈, 페노바비탈, 세코바비탈, 탈부탈, 테아미랄 또는 티오펜탈, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염;

(iv) 진정 작용을 갖는 벤조다이아제핀, 예를 들면 클로르다이아제폭사이드, 클로라제페이트, 다이아제팜, 플루라제팜, 로라제팜, 옥사제팜, 테마제팜 또는 트라이아졸람, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염;

(v) 진정 작용을 갖는 H₁ 길항제, 예를 들면 다이펜하이드라민, 피릴라민, 프로메타진, 클로르페니라민 또는 클로르사이클리진, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염;

(vi) 진정제, 예를 들면 글루테티마이드, 메프로바메이트, 메타쿠알론 또는 다이클로르알페나존, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염;

(vii) 골격근 이완제, 예를 들면 바클로펜, 카리소프로돌, 클로족사존, 사이클로벤자프린, 메토카바몰 또는 오르프레나딘, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염;

(viii) NMDA 수용체 길항제, 예를 들면 덱스트로메토판 ((+)-3-하이드록시-N-메틸모피난) 또는 이의 대사산물인 덱스트로판 ((+)-3-하이드록시-N-메틸모피난), 케타민, 메마틴, 피롤로퀴놀린 퀴논 또는 시스-4-(포스포노메틸)-2-피페리딘카복실산, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염;

(ix) 알파-아드레날린성 제제, 예를 들면 독사조신, 탐술로신, 클로니딘 또는 4-아미노-6,7-다이메톡시-2-(5-메테인-설폰아마이도-1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀-2-일)-5-(2-피리딜)퀴나졸린;

(x) 삼환상 항우울제, 예를 들면 데시프라민, 이미프라민, 아미트립틸린 또는 노르트립틸린;

(xi) 경련방지제, 예를 들면 카바마제핀 또는 발프로에이트;

(xii) 타키키닌(NK) 길항제, 특히 NK-3, NK-2 또는 NK-1 길항제, 예를 들면 (αR,9R)-7-[3,5-비스(트라이플루오로메틸)벤질]-8,9,10,11-테트라하이드로-9-메틸-5-(4-메틸페닐)-7H-[1,4]다이아조시노[2,1-g][1,7]-나프티리딘-6-13-다이온(TAK-637), 5-[[(2R,3S)-2-[(1R)-1-[3,5-비스(트라이플루오로메틸)페닐]에톡시-3-(4-플루오로페닐)-4-모폴리닐]메틸]-1,2-다이하이드로-3H-1,2,4-트라이아졸-3-온(MK-869), 라네피탄트, 다피탄트 또는 3-[[2-메톡시-5-(트라이플루오로메톡시)페닐]메틸아미노]-2-페닐피페리딘(2S,3S);

(xiii) 무스카린 길항제, 예를 들면 옥시부티닌, 톨테로딘, 프로피베린, 트로스피움 클로라이드 또는 다리페나신;

(xiv) COX-2 선택적 억제제, 예를 들면 셀레콕시브, 로페콕시브 또는 발데콕시브;

(xv) 비선택적 COX 억제제(바람직하게는, GI 보호를 가짐), 예를 들면 나이트로플루르비프로펜(HCT-1026);

(xvi) 콜타르 진통제, 특히 파라세타몰;

(xvii) 신경이완제, 예를 들면 드로페리돌;

(xviii) 바닐로이드 수용체 작용제(예를 들면 레신페라톡신) 또는 길항제(예를 들면 카프사제핀);

(xix) 베타-아드레날린 약물, 예를 들면 프로프라놀롤;

(xx) 국소 마취제, 예를 들면 메실레틴;

(xxi) 코르티코스테로이드, 예를 들면 덱사메타손;

(xxii) 세로토닌 수용체 작용제 또는 길항제;

(xxiii) 콜린(니코틴) 진통제;

(xxiv) 트라마돌(Tramadol: 상표명);

(xxv) PDEV 억제제, 예를 들면 실데나필, 바르데나필 또는 탈라다필;

(xxvi) 알파-2-델타 리간드, 예를 들면 가바펜틴 또는 프레가발린; 및

(xxvii) 카나비노이드.

도 1은 50mg/ml 항-NGF 항체로부터의 응집률(%)(SEC에 의함) 데이터의 개요이다: 40℃에서 긴장성 제제 스크리닝 연구.
도 2는 50mg/ml 항-NGF 항체로부터의 단편화율(%)(CGE에 의함) 데이터의 개요이다: 40℃에서 긴장성 제제 스크리닝 연구.
도 3은 15회 동결-해동 주기로 처리된 22mg/ml 항-NGF 항체로부터의 응집률(%)(SEC에 의함) 데이터의 개요이다.
도 4는 2.5, 5, 10, 20 및 50mg/ml에서 pH 6.0의 히스티딘 완충제 중 트레할로스, EDTA, 폴리소르베이트 20을 함유하는 항-NGF 항체 E3 제형의 장기간 안정성 연구에 대한 5℃에서의 응집률(%)(SEC에 의함) 데이터이다.
도 5는 2.5, 5, 10, 20 및 50mg/ml에서 pH 6.0의 히스티딘 완충제 중 트레할로스, EDTA, 폴리소르베이트 20을 함유하는 항-NGF 항체 E3 제형의 장기간 안정성 연구에 대한 5℃에서의 단편화율(%)(CGE에 의함) 데이터이다.
도 6은 2.5, 5, 10, 20 및 50mg/ml에서 pH 6.0의 히스티딘 완충제 중 트레할로스, EDTA, 폴리소르베이트 20을 함유하는 항-NGF 항체 E3 제형의 장기간 안정성 연구에 대한 5℃에서의 산화율(%) 데이터이다.

정의

본원에서 사용되는 용어 "제형" 또는 "조성물"은 이들이 항체와 관련되는 경우 하나 이상의 긴장성 제제, 하나 이상의 완충제, 하나 이상의 킬레이트제 및 하나 이상의 계면활성제를 포함하고, pH가 정의된 바와 같은, 약학적으로 허용가능한 부형제와 조합된 항체를 설명하는 의미이다.

용어 "약학 조성물"은 활성 성분의 생물학적 활성이 효과적이도록 하는 형태의 제제를 지칭한다.

용어 "약학적으로 허용가능한 부형제"(비히클, 첨가제)는 사용된 활성 성분의 효과량을 대상에게 제공하도록 안전하게 투여될 수 있는 것들이다. 본원에서 사용되는 용어 "부형제" 또는 "담체"는 약물용 희석제, 비히클, 방부제, 결합제 또는 안정화제로서 통상 사용되는 불활성 물질을 지칭한다. 본원에서 사용되는 용어 "희석제"는 약학적으로 허용가능한(인간에의 투여를 위해 안전하고 비독성인) 용매를 지칭하며, 본원의 액체 제형의 제제에 유용하다. 예시적인 희석제는, 무균수 또는 주사용 정균수(BWFI)를 포함하지만, 이에 제한되지 않는다.

본원에서 사용되는 용어 "항체"는 특이적 결합을 위해 무손상 항체와 결쟁하는 무손상 항체 또는 항원-결합 부분을 지칭한다. 일반적으로, 문헌[Fundamental Immunology, Ch. 7, Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)]을 참고한다. 항원-결합 부분은 재조합 DNA 기법 또는 무손상 항체의 효소학적 또는 화학적 분열에 의해 생성될 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 항원-결합 부분은 Fab, Fab', F(ab')₂, Fd, Fv, dAb, 및 폴리펩타이드에 결합하는 특이적 항원을 제공하기에 충분한 항체의 적어도 일부분을 함유하는 상보성 결정 영역(CDR) 단편, 단일-쇄 항체(scFv), 키메라 항체, 다이아바디(diabodies) 및 폴리펩타이드를 포함한다. N-말단으로부터 C-말단까지, 성숙 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 둘 다는 영역 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. 각 도메인에의 아미노산의 할당은 네셔널 인스티튜츠 오브 헬쓰, 베테스타 엠디(National Institutes of Health, Bethesda, Md.)의 면역학적 대상의 단백질 서열, 카바트(1987년 및 1991년), 문헌[Chothia & Lesk, J. MoI. Biol. 196:901-917 (1987)] 또는 문헌[Chothia et al., Nature 342:878-883 (1989)]의 정의에 따른다. 본원에서 사용되는 용어 "폴리펩타이드"는 천연 또는 인공 단백질, 단백질 단편 및 단백질 서열을 갖는 폴리펩타이드 유사체를 포함한다. 폴리펩타이드는 단량체 또는 중합체일 수 있다.

본원에서 사용되는 Fd 단편은 V_H및 CH1 도메인으로 이루어진 항체 단편을 의미하고; Fv 단편은 항체의 단일 암(arm)의 V₁및 VH 도메인으로 이루어지고; dAb 단편(문헌[Ward et al., Nature 341: 544-546 (1989)])은 V_H 도메인으로 이루어진다.

용어 "항체"와 함께 사용되는 용어 "또는 이의 항원-결합 부분"은 아미노산-말단 및/또는 카복시-말단 삭제를 가지지만, 남아있는 아미노산 서열이 천연 서열의 상응하는 위치와 동일한 폴리펩타이드를 지칭한다. 몇몇 실시양태에서, 단편은 5, 6, 8 또는 10개 이상의 아미노산 길이이다. 다른 실시양태에서, 단편은 14개 이상, 20개 이상, 50개 이상 또는 70, 80, 90, 100, 150 또는 200개 이상의 아미노산 길이이다.

본원에서 사용되는 용어 "단클론 항체"는 동종 항체 집단을 의미하며, 여기서 단클론 항체는 항원의 선택적인 결합에 관여하는 아미노산(천연 또는 비천연)으로 구성된다. 단클론 항체의 집단은 매우 특이적이고, 단일 항원 부위에 대한 것이다. 용어 "단클론 항체"는 무손상 단클론 항체 및 전장 단클론 항체뿐만 아니라, 이의 단편(예를 들면 Fab, Fab', F(ab')₂, Fv), 단일 쇄(ScFv), 이의 돌연변이체, 항체 일부를 포함하는 융합 단백질, 및 요구되는 특이성 및 항원에 결합하는 능력을 갖는 항원 인식 부위를 포함하는 면역글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 형상을 포함한다. 항체의 공급원 또는 이것이 제조되는 방식(예를 들면 하이브리도마, 파지 선택, 재조합 발현, 유전자이전 동물 등)을 한정하고자 하는 것은 아니다.

단일 쇄 항체(scFc)는 단일 단백질 쇄로서 제조되게 할 수 있는 합성 연결기를 통해 VL 영역과 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성하는 항체이다(문헌[Bird et al Science, 242: 423-426 (1988)] 및 문헌[Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85:5879-5883 (1988)]).

다이아바디는 VH 도메인과 VL 도메인이 단일 폴리펩타이드 쇄 상에서 발현되지만, 동일한 쇄 상의 2개의 도메인 사이의 쌍을 허용하기에는 너무 짧은 연결기를 사용함으로써 도메인들이 다른 쇄의 상보성 도메인과 쌍을 이루어 2개의 항원 결합 부위를 생성하는 2가의 이중특이적 항체이다.

"키메라 항체"는 중쇄 및 경쇄의 각각의 아미노산 서열의 한 부분이 특정 종으로부터 유래되거나 특정 부류에 속하는 항체의 상응하는 서열과 상동성이지만, 쇄의 잔여 분절은 다른 것의 상응하는 서열과 상동성인 항체를 지칭한다. 전형적으로, 이러한 키메라 항체에서, 경쇄 및 중쇄 둘 다의 가변 영역은 포유동물의 한 종으로부터 유래된 항체의 가변 영역을 흉내내지만, 불변 부분은 다른 종으로부터 유래된 항체의 서열과 상동성이다. 이러한 키메라 형태가 갖는 명백한 한 가지 장점은, 예를 들면 가변 영역이 예를 들면 인간 세포 제제로부터 유래된 불변 영역과 조합되어 비인간 숙주 유기체로부터의 즉시 이용가능한 하이브리도마 또는 B 세포를 사용하여 현재 공지된 공급원으로부터 편리하게 유도될 수 있다는 것이다. 가변 영역은 제조가 용이한 장점을 갖고, 특이성이 그 공급원에 의해 영향을 받지 않지만, 불변 영역이 인간의 것이면 비인간 공급원으로부터의 불변 영역을 갖는 항체에 비해 주입되었을 때 인간에서 면역 반응을 이끌어낼 가능성이 더 적다. 그러나, 이 정의가 이러한 특정한 예로 한정되어서는 안된다.

항체의 "가변 영역"은 단독으로 또는 조합된, 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각 또한 초가변 영역으로도 공지되어 있는 3개의 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 연결된 4개의 골격 영역(FR)으로 이루어진다. 각각의 쇄의 CDR은 FR에 의해 다른 쇄의 CDR과 매우 밀접하게 유지되어 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다. CDR을 결정하는 2가지 이상의 기법이 있다: (1) 종간 서열 다양성에 근거한 접근법(즉, 문헌[Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda MD)]); 및 (2) 항원-항체 복합체의 결정학 연구에 근거한 접근법(문헌[Chothia et al. (1989) Nature 342:877; Al-lazikani et al (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948)]). 본원에서 사용되는 CDR은 이중 한가지 접근법 또는 2가지 접근법의 조합에 의해 한정된 CDR을 지칭할 수 있다.

항체의 "불변 영역"은 단독으로 또는 조합된 항체 경쇄의 불변 영역 또는 항체 중쇄의 불변 영역을 지칭한다.

본원에서 사용되는 용어 "E3", "3E" 및 "항체 E3"은 각각 서열 번호 1 및 2(국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 도 1A 및 1B)에 도시된 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 항체를 지칭하는 것으로 호환적으로 사용된다. E3의 생성 및 특성화는 그의 전체 내용이 본원에 참고로서 인용되어 있는 국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 실시예에 개시되어 있다. 몇몇 실시양태에서, 용어 "E3"은 (a) ATCC No. PTA-4893 또는 ATCC No. PTA-4894의 기탁 번호를 갖는 E3 경쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 및 (b) ATCC No. PTA-4895의 기탁 번호를 갖는 E3 중쇄를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 면역글로불린을 지칭한다.

본원에서 사용되는 용어 "단리된 항체" 또는 "정제된 항체"는 유도체의 기원 또는 공급원에 의해 다음 1 내지 4개의 항체를 지칭한다: (1) 천연 상태에서 동반되어 있는 자연적으로 결합되는 성분과 결합되지 않거나, (2) 동일한 종에서 나온 다른 단백질이 없거나, (3) 다른 종에서 나온 세포에 의해 발현되거나, 또는 (4) 천연 상태에서는 존재하지 않는 항체.

항체는 샘플의 적어도 약 60 내지 75%가 항체의 단일 종을 나타내는 경우 "실질적으로 순수하거나", "실질적으로 동종이거나" 또는 "실질적으로 정제된다". 실질적으로 순수한 항체는 전형적으로 약 50%, 60%, 70%, 80% 도는 90% w/w의 항체 샘플을 포함하며, 보다 일반적으로 약 95%, 바람직하게는 99% 이상 순수할 것이다. 항체 순도 또는 동종성은 당해 분야에 공지된 다수의 수단, 예컨대 폴리아크릴아마이드 겔 전기영동 또는 HPLC에 의해 시험될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 인간 배선 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하고자 한다. 인간 항체의 이러한 정의는 하나 이상의 인간 중쇄 폴리펩타이드 또는 하나 이상의 인간 경쇄 폴리펩타이드를 포함하는 항체를 포함한다. 본 발명의 인간 항체는, 예를 들면 CDR 및 특히 CDR3 내에 인간 배선 면역글로불린 서열에 의해 암호화되지 않은 아미노산 잔기(예컨대, 시험관내의 무작위 또는 부위-특이적 돌연변이발생 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)를 포함할 수 있다. 그러나, 본원에서 사용되는 용어 "인간 항체"는 다른 포유동물 종, 예컨대 마우스의 배선으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 골격 서열로 이식된 항체를 포함하려는 의도는 아니다.

본원에서 사용되는 "인간화된" 항체는 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 이들의 단편(예컨대, Fv, Fab, Fab', F(ab')₂ 또는 항체의 다른 항원-결합 서열)인 비인간(예컨대, 뮤린) 항체의 형태를 지칭한다. 바람직하게는, 인간화된 항체는 수용자의 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 잔기가 비인간 종(공여자 항체), 예컨대 목적하는 특이성, 친화성 및 능력을 갖는 마우스, 래트 또는 토끼의 CDR로부터의 잔기로 대체되는 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 몇몇 경우, 인간 면역글로불린의 Fv 골격 영역(FR) 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 더 나아가, 인간화된 항체는 수용자 항체 및 수입된 CDR 또는 골격 서열 중 어느 것에서도 발견되지 않지만, 더욱 정련되고 최적화된 항체 성능이 포함된 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화된 항체는 하나 이상, 전형적으로 두 개의 가변 도메인의 실질적으로 전부를 포함할 것이며, CDR 영역의 전부 또는 실질적으로 전부는 비인간 면역글로불린의 것에 상응하고, FR 영역의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 공통 서열의 것이다. 인간화된 항체는 또한 면역 글로불린 불변 영역 또는 도메인(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 것을 또한 포함할 것이다. 국제 특허 출원 공개 제 WO 99/58572 호에 기재된 바와 같이 변형된 Fc 영역을 갖는 항체가 바람직하다. 인간화된 항체의 다른 형태는 원시 항체에 대해 개조된 하나 이상의 CDR(CDR L1, CDR L2, CDR L3, CDR H1, CDR H2 또는 CDR H3)을 갖고, 이들은 또한 원시 항체로부터의 하나 이상의 CDR로부터 "유래된" 하나 이상의 CDR이라 지칭된다.

단클론 항체를 인간화하는 일반적인 4개의 단계가 존재한다. 이는 다음과 같다: (1) 출발 항체 경쇄 및 중쇄 가변 도메인의 뉴클레오타이드 및 예측된 아미노산 서열을 결정하는 단계, (2) 인간화된 항체를 고안하는 단계, 즉 인간화 과정 동안 어느 항체 골격 영역을 사용할 지를 결정하는 단계, (3) 실제 인간화 방법/기법 단계, 및 (4) 인간화된 항체의 형질감염 및 발현 단계. 예를 들면, 미국 특허 제 4,816,567 호, 제 5,807,715 호, 제 5,866,692 호, 제 6,331,415 호, 제 5,530,101 호, 제 5,693,761 호, 제 5,693,762 호, 제 5,585,089 호 및 제 6,180,370 호를 참고한다.

설치류 또는 변형된 설치류 V 영역 및 인간 불변 도메인에 융합된 상기와 결합된 상보성 결정 영역(CDR)을 갖는 키메라 항체를 비롯한, 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 항원-결합 부위를 포함하는 다수의 "인간화된" 항체 분자가 기재되어 있다. 예를 들면, 문헌[Winter et al. Nature 349: 293-299 (1991)], 문헌[Lobuglio et al. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 86: 4220-4224 (1989)], 문헌[Shaw et al. J Immunol. 138: 4534-4538 (1987)] 및 문헌[Brown et al. Cancer Res. 47: 3577-3583 (1987)]을 참고한다. 다른 문헌에는 적절한 인간 항체 불변 도메인과의 융합 전에 인간 지지 골격 영역(FR)에 이식된 설치류 CDR이 기재되어 있다. 예를 들면, 문헌[Riechmann et al. Nature 332: 323-327 (1988)], 문헌[Verhoeyen et al. Science 239: 1534-1536 (1988)] 및 문헌[Jones et al. Nature 321: 522-525 (1986)]을 참고한다. 또 다른 문헌에는 재조합으로 붙은 설치류 골격 영역에 의해 지지된 설치류 CDR이 기재되어 있다. 예를 들면, 유럽 특허 공개 공보 제 0519596 호를 참고한다. 이러한 "인간화된" 분자는 인간 수용자에서 이들 잔기의 치료적 용도의 효능 및 지속시간을 제한하는 설치류 항-인간 항체 분자에 대한 원치 않은 면역학적 반응을 최소화하도록 고안된다. 예를 들면, 항체 불변 영역은 면역학적으로 불활성(예컨대, 보체 용해를 유발하지 않음)이도록 유전공학 처리될 수 있다. 예를 들면, 국제 특허 출원 공개 제 WO 99/58572 호 및 영국 특허 출원 제 9809951.8 호를 참고한다. 또한 사용될 수 있는 항체를 인간화하는 다른 방법은 문헌[Daugherty et al., Nucl. Acids Res. 19: 2471-2476 (1991]) 및 미국 특허 제 6,180,377 호, 제 6,054,297 호, 제 5,997,867 호, 제 5,866,692 호, 제 6,210,671 호 및 제 6,350,861 호, 및 국제 특허 출원 공개 제 WO 01/27160 호에 개시되어 있다.

본원에서 사용되는 용어 "재조합 항체"는 재조합 수단에 의해 제조되거나, 발현되거나, 생성되거나, 단리된 모든 항체, 예를 들면 숙주 세포로 형질감염된 재조합 발현 벡터를 사용하여 발현된 항체, 재조합, 복합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 준비된 인간 면역글로불린 유전자 또는 항체를 위해 유전자이전된 동물(예컨대, 마우스)로부터 단리된 항체를 포함하고자 하며, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관내에서 돌연변이발생될 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "특이적으로 결합할 수 있음", "특이적으로 결합하다" 또는 "우선적으로 결합하다"는 1μM 이하, 바람직하게는 1nM 이하, 가장 바람직하게는 10pM 이하의 해리 상수로 항체가 항원에 결합하는 경우를 지칭한다. 항체 또는 폴리펩타이드에 대해 "특이적으로 결합" 또는 "우선적으로 결합"(본원에서 서로 호환적으로 사용됨)하는 에피토프는 당해 분야에서 잘 이해되는 용어이고, 이런 특이적 또는 우선적 결합을 측정하는 방법 또한 당해 분야에 잘 공지되어 있다. 분자가 다른 세포 또는 물질에 비해 특정한 세포 또는 물질에 보다 자주, 보다 신속하게, 보다 오래 및/또는 보다 큰 친화성으로 반응하거나 결합하면, 그 분자가 "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"을 나타낸다고 말해진다. 항체가 다른 물질에 결합될 때에 비해 표적에 더 큰 친화성, 결합활성(avidity)으로 보다 신속하게 및/또는 더 오래 동안 결합하는 경우, 항체가 표적에 "특이적으로 결합" 또는 "우선적으로 결합"한다. 예를 들면, NGF 에피토프에 특이적 또는 우선적으로 결합하는 항체는 다른 NGF 에피토프 또는 비-NGF 에피토프에 결합하는 경우보다 더 큰 친화성, 결합활성으로 보다 신속하게 및/또는 보다 오래 동안 결합하는 항체이다. 이 정의를 읽음으로써, 예를 들면 제 1 표적에 특이적 또는 우선적으로 결합하는 항체(또는 잔기 또는 에피토프)가 제 2 표적에는 특이적 또는 우선적으로 결합하거나 하지 않을 수 있다는 것이 이해될 것이다. 따라서, "특이적 결합" 또는 "우선적 결합"은 배타적 결합을 반드시 요구하는 것은 아니다(배타적 결합을 포함할 수도 있긴 하다).

본원에서 사용되는, 항체의 "면역특이적" 결합은 항체의 항원-조합 부위와 그 항체에 의해 인식되는 특이적 항원 간에 일어나는 항원 특이적 결합 상호작용을 지칭한다(즉, 항체는 ELISA 또는 다른 면역분석법에서 단백질과 반응하지만, 무관한 단백질과는 검출되도록 반응하지 않는다).

항체에 대하여 본원에서 사용되는 용어 "경쟁"은 제 1 항체 또는 그의 항원-결합 부분이 제 2 항체 또는 그의 항원-결합 부분의 결합과 충분히 유사한 방식으로 에피토프에 결합하여, 상기 제 1 항체와 그의 동족 에피토프의 결합 결과가 제 2 항체의 부재하의 제 1 항체의 결합과 비교하여 제 2 항체의 존재하에 검출가능하게 감소됨을 의미한다. 다르게는 제 2 항체와 그의 에피토프의 결합이 또한 제 1 항체의 존재하에 검출가능하게 감소될 수 있지만 반드시 그 경우일 필요는 없다. 즉, 제 2 항체가 제 1 항체의 그의 개별 에피토프와의 결합을 억제하지 않으면서, 제 1 항체는 제 2 항체의 그의 에피토프와의 결합을 억제할 수 있다. 그러나, 각각의 항체가 다른 항체의 그의 동족 에피토프 또는 리간드와의 결합을 검출가능하게 억제하는 경우, 동일하거나, 더 크거나, 더 적은 정도에 상관없이, 항체는 그의 개별 에피토프의 결합을 위해 서로 "교차-경쟁"한다고 말해진다. 경쟁 및 교차-경쟁 항체는 모두 본 발명에 포함된다. 이러한 경쟁 또는 교차-경쟁이 발생되는 매커니즘(예컨대, 입체 장애, 형상 변화, 또는 공통 에피토프 또는 이의 일부에의 결합)과 무관하게, 당해 분야의 숙련자는 본원에 제공된 기법을 기준으로 상기 경쟁 및/또는 교차-경쟁 항체가 본원에 포함되고 본원에 개시된 방법에 유용함을 이해할 것이다.

본원에서 사용되는 용어 "신경 성장 인자" 및 "NGF"는 NGF의 생물학적 활성의 적어도 일부를 보유하는 신경 성장 인자 및 이의 변이체를 의미한다. 본원에서 사용되는, NGF는 인간, 개과, 고양이과, 말과, 또는 소과를 포함한 모든 포유동물 종의 천연 서열 NGF를 포함한다. "NGF 수용체"는 NGF에 결합되거나 이에 의해 활성화되는 폴리펩타이드를 의미한다. NGF 수용체는 인간, 개과, 고양이과, 말과, 영장류 또는 소과를 포함하지만 이로 한정되지 않는 임의의 포유동물 종의 TrkA 수용체 및 p75수용체를 포함한다. 본원에서 사용되는 "항-NGF 항체"(이는 "항-NGF 작용제 항체"와 호환적으로 지칭된다)는 NGF에 결합하고 NGF의 생물학적 활성 및/또는 NGF 신호전달에 의해 매개되는 하류 경로를 억제, 차단, 길항, 저지 또는 감소시킬 수 있는 항체를 지칭한다. 몇몇 실시양태에서, 용어 "항-NGF 길항제 항체"는 모든 이전에 정의된 용어, 제목, 및 작용 상태 및 특성을 포함하고, 이에 의해 NGF 그 자체, NGF 생물학적 활성(수술후 통증의 임의의 양상을 매개하는 능력을 포함하지만 이로 한정되지는 않는다) 또는 생물학적 활성의 결과는 임의의 유의한 정도로 실질적으로 무효가 되거나, 감소되거나, 중화된다. 몇몇 실시양태에서, 항-NGF 길항제 항체는 NGF에 결합하고, NGF 이량체화 및/또는 NGF 수용체(예를 들면 p75 및/또는 trkA)에 대한 결합을 방지한다. 다른 실시양태에서, 항-NGF 항체는 NGF에 결합하고, trkA 수용체 이량체화 및/또는 trkA 자가인산화를 방지한다. 항-NGF 길항제 항체의 예는 본원에 제공되어 있다.

용어 "동일성"은 2개의 핵산 서열 또는 2개의 아미노산 서열의 "동일성" %를 지칭한다. 동일성%는 일반적으로 최적의 비교 목적으로 서열을 정렬하고(예를 들면, 제 2 서열과의 최적의 정렬을 위해 제 1 서열에 간극을 도입할 수 있다), 상응하는 위치에서 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드를 비교함으로써 결정된다. "최적의 정렬"은 가장 높은 동일성%를 생성하는 2개의 서열의 정렬이다. 동일성%는 서열 내부에서 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오타이드의 수를 비교함으로써 결정된다(즉, 동일성% = 동일한 위치의 수/위치의 총 수 x 100).

2개의 서열 사이의 동일성%의 결정은 당해 분야의 숙련자들에게 공지된 수학적 알고리즘을 이용하여 달성될 수 있다. 2개의 서열을 비교하기 위한 수학적 알고리즘의 예는 문헌[Karlin and Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268]의 알고리즘, 및 문헌[Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877]에서와 같은 변형된 알고리즘이다. 문헌[Altschul, et al (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410]의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램이 이런 알고리즘에 혼입되었다. BLAST 뉴클레오타이드 조사는 NBLAST 프로그램, 점수 = 100, 단어 길이 = 12를 이용하여 수행되어 본 발명의 핵산 분자에 상동성인 뉴클레오타이드 서열을 수득할 수 있다. BLAST 단백질 조사는 XBLAST 프로그램, 점수 = 50, 단어길이 = 3을 이용하여 수행되어 본 발명의 단백질 분자와 상동성인 아미노산 서열을 수득할 수 있다. 비교 목적을 위한 간극이 있는 정렬을 수득하기 위해, 갭드 BLAST(Gapped BLAST)를 문헌[Altschul et al. (1997) Nucliec Acids Res. 25:3389-3402]에 개시된 바와 같이 이용할 수 있다. 다르게는 PSI-Blast를 이용하여 분자들 사이의 거리 관계(Id.)를 검출하는 반복 조사를 수행할 수 있다. BLAST, 갭드 BLAST 및 PSI-Blast 프로그램을 이용할 경우, 각각의 프로그램의 디폴트 변수(예를 들면 XBLAST 및 NBLAST)를 이용할 수 있다. http://www.ncbi.nlm.nih.gov를 참고할 수 있다. 서열 비교에 이용되는 수학적 알고리즘의 다른 예는 문헌[Myers and Miller, CABIOS (1989)]의 알고리즘이다. GCG 서열 정렬 프로그램 패키지의 일부인 ALIGN 프로그램(버젼 2.0)이 이런 알고리즘에 혼입되었다. 당해 분야에 공지된 서열 분석을 위한 다른 알고리즘은 문헌[Torellis and Robotti (1994) Comput. Appl. Biosci., 10 :3-5]에 개시된 ADVANCE 및 ADAM; 및 문헌[Pearson and Lipman (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. 85:2444-8]에 개시된 FASTA를 포함한다. FASTA 내에서, ktup은 조사의 속도 및 민감성을 설정하는 제어 옵션이다.

"치료 효과량"은 필요한 기간 동안 필요한 투여량에서, 항-NGF 항체와 관련하여 표적 병리학적 상태, 예를 들면 염증 또는 통증의 치료 또는 예방을 비롯한 목적하는 치료 결과를 달성하기에 효과적인 양을 지칭한다. 투여량 값은 경감될 상태의 중증도에 따라 달라질 수 있음을 주지해야 한다. 또한, 임의의 특정 대상의 경우, 조성물의 투여를 투여하고 관리하는 사람의 개별적 필요성 및 전문적 판단에 따라 시간에 따라 특정 투약 섭생법을 조정해야 하며, 본원에 상술된 투여량 범위는 단지 예시적인 것이며 청구되는 조성물의 범위 또는 실시를 제한하고자 하지 않음을 이해해야 한다. 게다가, 항체 또는 항체 일부의 치료 효과량은 질병 상태, 연령, 성별 및 개체의 체중, 개체에서 목적하는 반응을 유도하는 항체 또는 항체 일부의 능력, 및 항체 제형의 투여의 바람직한 경로와 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 또한, 치료 효과량은 치료학적으로 유리한 효과가 항체 또는 항체 일부의 임의의 독성 또는 해로운 효과를 능가하는 양이다.

본원에서 사용되는 용어 "치료"는 치료적 처치 및 예방적 또는 보호적 조치 둘 다를 지칭하며, 이의 목적은 예를 들면 통증과 같은 표적화된 병리학적 상태를 예방 또는 지연(경감)시키는 것이다. 치료가 필요한 것은 상태를 이미 갖는 것들, 및 상태를 갖기 쉬운 것들, 또는 상태가 예방되는 것들을 포함한다. 본원에서 사용되는 "치료"는 유리하거나 바람직한 임상 결과를 수득하기 위한 접근법으로서, 다음 중 하나 이상을 포함하지만 이로 한정되지는 않는다: 임의의 통증 양상을 비롯한 통증과 관련된 중증도의 경감, 통증과 관련된 하나 이상의 증후군의 완화(예컨대, 통증 지속시간의 단축, 통증 민감성 또는 감각의 감소).

약물, 화합물 또는 약학 조성물의 "효과량"은 표적화된 병리학적 상태, 예를 들면 통증 감각의 경감 또는 감소와 같은 임상적 결과를 비롯한 유리하거나 바람직한 결과를 생성하기에 충분한 양이다. 효과량은 하나 이상의 투여로 투여될 수 있다. 본 발명의 목적을 위해서, 약물, 화합물 또는 약학 조성물의 효과량은 표적화된 병리학적 상태, 예를 들면 염증 또는 통증을 치료, 개선, 강도 감소하기에 충분한 양이다. 몇몇 실시양태에서, "효과량"은 휴식시의 통증(휴지기 통증) 또는 기계적으로 야기되는 통증(움직임 후의 통증 포함) 또는 이들 둘 모두를 감소시킬 수 있고, 이는 통증 자극 전, 동안 또는 후에 투여될 수 있다. 임상적 내용에서 이해되는 바와 같이, 약물, 화합물 또는 약학 조성물의 효과량은 다른 약물, 화합물 또는 약학 조성물과 함께 달성되거나 달성되지 않을 수 있다. 따라서, "효과량"은 하나 이상의 치료제의 투여라는 측면에서 고려될 수 있고, 하나 이상의 다른 제제와 함께 바람직한 결과가 달성될 수 있거나 달성되는 경우, 단일 제제가 효과량으로 주어진 것으로 간주될 수 있다.

본원에서 사용되는 "통증"은 급성 통증, 만성 통증, 및 염증 요소를 갖는 임의의 통증을 비롯한 임의의 병인의 통증을 의미한다. 본원에서 사용되는 "통증"은 통증의 침해수용 및 감각을 포함하고, 통증은 통증 점수 및 당해 분야에 잘 공지된 다른 방법을 이용하여 주관적으로 및 객관적으로 평가될 수 있다. 당해 분야에 공지되어 있는 바와 같이 통증은 1차 또는 2차 통증일 수 있다.

본원에서 사용되는 치료 목적을 위한 용어 "대상"은 임의의 대상을 포함하며, 바람직하게는 표적화된 병리학적 상태, 예를 들면 염증 또는 통증의 치료가 필요한 대상이다. 본 발명의 목적을 위해, 대상은 임의의 대상이며, 바람직하게는 표적화된 병리학적 상태, 예를 들면 염증 또는 통증의 위험성이 있거나, 상기 상태가 발병하기 쉬운 대상이다. 용어 "대상"은 살아있는 유기체, 예컨대 원핵 생물 및 진핵 생물을 포함하고자 한다. 대상의 예는 포유동물, 예컨대 인간, 개, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 고양이, 마우스, 토끼, 래트, 및 유전자이전 비인간 동물을 포함한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 대상은 인간이다.

본 발명 또는 이의 바람직한 실시양태의 요소를 도입하는 경우, 단수 용어는 하나 이상의 요소가 존재한다는 것을 의미하고자 한다. 용어 "포함하는", "포함하다", "비롯한" 및 "갖는"은 열거된 요소 이외의 다른 추가의 요소가 존재할 수 있음을 포함하고 의미하고자 한다.

본원에서 사용되는 용어 "폴리뉴클레오타이드" 또는 "핵산"은 본원에서 호환적으로 사용되고, 리보뉴클레오타이드 또는 데옥시뉴클레오타이드의 뉴클레오타이드의 중합체 형태, 또는 단일 및 이중 가닥 형태일 수 있는 뉴클레오타이드의 어느 한 형태의 변형된 형태를 의미한다. "폴리뉴클레오타이드" 또는 "핵산" 서열은 달리 구체화하지 않는 한 그의 보체를 포함한다. 본원에서 사용되는 용어 "단리된 폴리뉴클레오타이드" 또는 "단리된 핵산"은 게놈, cDNA, 또는 이의 합성 기원 또는 몇몇 조합의 폴리뉴클레오타이드를 의미하며, 유도체의 기원 또는 공급원에 의해 단리된 폴리뉴클레오타이드는 다음 중 1 내지 3개를 갖는다: (1) "단리된 폴리뉴클레오타이드"가 천연에서 발견되는 폴리뉴클레오타이드의 전부 또는 일부와 결합되지 않는 것, (2) 천연에서 연결되지 않은 폴리뉴클레오타이드에 작동가능하게 연결된 것, 또는 (3) 천연에서 보다 큰 서열의 일부로서 발생되지 않은 것.

본원에서 사용되는 용어 "킬레이트제"는 금속 이온에 하나 이상의 결합(예컨대, 공유, 이온 또는 다른 결합)을 형성할 수 있는 부형제이다. 킬레이트제는 전형적으로 액체 조성물에서 안정화제로서 사용되어 종과 복합체를 형성하는 다중자리 리간드이며, 이는 다르게는 불안정성은 촉진시킬 수도 있다.

본원에서 사용되는 용어 "완충제"는 전형적으로 산-염기 컨쥬게이트 성분의 작용에 의해 액체 항체 제형으로 하여금 pH 변화를 견디게 하는 첨가된 조성물을 지칭한다. 완충제의 농도를 언급할 경우, 인용된 농도는 완충제의 유리 산 또는 유리 염기의 몰 농도를 나타내고자 한다.

본원에서 사용되는 용어 "긴장성 제제" 또는 "긴장화제"는 액체 항체 제형의 삼투압을 조정할 수 있는 부형제를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 긴장성 제제는 액체 항체 제형의 삼투압을 등장성으로 조정하여, 항체 제형이 대상의 체 조직의 세포와 생리학적으로 융화될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, "긴장성 제제"는 본원에 기재된 항체의 안정성 개선에 기여할 수 있다. "등장성" 제형은 인간 혈액과 본질적으로 동일한 삼투압을 갖는 것이다. 등장성 제형은 일반적으로 약 250 내지 350mOsm의 삼투압을 갖는다. 용어 "저장성"은 인간 혈액의 것보다 낮은 삽투압을 갖는 제형을 기술한다. 유사하게, 용어 "고장성"은 인간 혈액의 것보다 높은 삼투압을 갖는 제형을 기술하기 위해 사용된다. 등장성은 예를 들면 증기압 또는 얼음-동결 유형 삼투압 측정기를 사용하여 측정될 수 있다. 긴장성 제제는 거울상 이성질체(예컨대, L- 또는 D-거울상 이성질체) 또는 라세미 형태; 이성질체, 예컨대 알파 또는 베타(알파, 알파; 또는 베타, 베타; 또는 알파, 베타; 또는 베타, 알파 포함); 유리 산 또는 유리 염기 형태; 수화된 형태(예컨대, 일수화물); 또는 무수 형태일 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "폴리올"은 다중 하이드록실 기를 갖는 부형제를 지칭하며, 당(환원당 및 비환원당), 당 알콜 및 당 산을 포함한다.

본원에서 사용되는 용어 "계면활성제"는 액체 항체 제형의 표면 장력을 변경시킬 수 있는 부형제를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 계면활성제는 액체 항체 제형의 표면 장력을 감소시킨다. 또 다른 실시양태에서, "계면활성제"는 제형 중 임의의 항체의 안정성 개선에 기여할 수 있다. 계면활성제는 제형화된 항체의 응집을 감소시킬 수 있고/있거나, 제형 중 미립자 형성을 최소화하고/하거나, 흡착을 감소시킬 수 있다. 또한, 계면활성제는 동결/해동 주기 동안 및 그 후에 항체의 안정성을 개선시킬 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "당류"는 다가 알콜의 유도체인 분자의 부류를 지칭한다. 당류는 통상 탄수화물로서 지칭되고, 다양한 양의 당(당류) 단위, 예컨대 단당류, 이당류 및 다당류를 함유할 수 있다.

본원에서 사용되는 용어 "환원당"은 단백질 내의 리신 또는 다른 아미노 기와 공유결합하여 반응하거나 금속 이온을 환원시킬 수 있는 헤미아세탈 기를 함유하는 것이고, "비환원당"은 환원당의 상기 특성을 갖지 않는 것이다.

본원에서 사용되는 용어 "약학적으로 허용가능한 담체"는 활성 성분과 조합되었을 때 성분이 생물학적 활성을 유지하게 허용하면서 대상의 면역계에 비-반응성인 임의의 물질을 포함한다. 예로서, 임의의 표준 약학 담체, 예를 들면 포스페이트 완충된 식염수 용액, 물, 유화액, 예를 들면 오일/물 유화액, 및 다양한 유형의 습윤화제를 포함하지만, 이로 한정되지는 않는다. 에어로졸 또는 비경구 투여에 바람직한 희석제는 포스페이트 완충된 식염수 또는 정상(0.9%) 식염수이다. 이런 담체를 포함하는 조성물은 널리 알려진 종래의 방법(예를 들면, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th edition, A. Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1990]; 및 문헌[Remington, The Science and Practice of Pharmacy 20th Ed. Mack Publishing, 2000] 참조)에 의해 제형화된다.

본원에서 사용되는 용어 "K_off"는 항체/항원 복합체로부터 항체의 해리를 위한 오프(off) 속도 상수를 지칭하고자 한다.

본원에서 사용되는 용어 "Kd"는 항체-항원 상호작용의 해리 상수를 지칭하고자 한다. Kd 또는 항체의 NGF에의 결합 친화성을 측정하는 한 가지 방법은 항체의 일작용성 Fab 단편의 결합 친화성을 측정하는 것이다. 일작용성 Fab 단편을 수득하기 위해, 항체(예를 들면, IgG)를 파파인으로 분열하거나 재조합 발현시킬 수 있다. 항체의 항-NGF Fab 단편의 친화성은 표면 플라스몬 공명(미국 뉴저지주 피스카웨이 소재의 바이아코어 인코포레이티드(BIACore INC)의 BIAcore3000(상표명) 표면 플라스몬 공명(SPR) 시스템)에 의해 측정될 수 있다. CM5 칩은 공급자의 지시에 따라 N-에틸-N'-(3-다이메틸아미노프로필)-카보다이나이드 하이드로클로라이드(EDC) 및 N-하이드록시석신이마이드(NHS)를 사용하여 활성화될 수 있다. 인간 NGF(또는 임의의 다른 NGF)는 10mM 나트륨 아세테이트 pH 4.0으로 희석되고, 0.005mg/mL의 농도에서 활성화된 칩 상으로 주입된다. 개별적인 칩 채널을 가로지르는 가변 유동 시간을 이용하여 하기의 2개 범위의 항체 밀도를 달성할 수 있다: 상세한 동역학 연구를 위한 100 내지 200 반응 단위(RU), 및 스크리닝 분석을 위한 500 내지 600 RU. 정제된 Fab 샘플의 연속 희석물(추정된 K_D의 0.1 내지 10x)을 100㎕/분으로 1분동안 주입하고, 2시간까지의 해리 시간을 허용하였다. Fab 단백질의 농도는 표준물로서 공지된 농도(아미노산 분석에 의해 측정됨)의 Fab를 사용하여 ELISA 및/또는 SDS-PAGE 전기영동에 의해 측정된다. 동역학적 결합 속도(k_on) 및 해리 속도(k_off)는 BIAevaluation 프로그램을 이용하여 데이터를 1:1 랑뮈르(Langmuir) 결합 모델(문헌[Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, B. (1994). Methods Enzymology 6. 99-110])에 부합시켜 동시에 수득된다. 평형 해리 상수(K_D) 값은 k_off/k_on으로서 계산된다. 이 프로토콜은 인간 NGF, 다른 척추동물(몇몇 실시양태에서는 포유동물)의 NGF(예를 들면 마우스 NGF, 래트 NGF, 영장류 NGF)를 비롯한 임의의 NGF에 대한 항체의 결합 친화성을 측정하는데 사용하기 적합할뿐만 아니라 관련된 뉴로트로핀인 NT3, NT4/5, 및/또는 BDNF와 같은 다른 뉴로트로핀과 함께 사용하기에 적합하다.

본 발명에서 사용되는 항-NGF 길항제 항체는 당해 분야에 공지된 방법을 이용하여 식별되거나 특징화될 수 있고, 이에 의해 NGF의 생물학적 활성의 감소, 경감 또는 중화가 검출 및/또는 측정될 수 있다. 국제 특허 출원 공개 제 WO 04/065560 호에 개시된 방법을 사용할 수 있다. 다른 방법, 예를 들면 미국 특허 제 5,766,863 호 및 제 5,891,650 호에 개시된 키나아제 수용체 활성화(KIRA) 분석법을 사용하여 항-NGF제를 식별할 수 있다.

항-NGF 길항제 항체는 또한 후보자 제제, 예를 들면 항체 또는 항-NGF 항체를 NGF와 항온처리하는 단계 및 하기 특징 중 임의의 하나 이상을 모니터하는 단계에 의해 식별될 수 있다: (a) NGF에 결합하고, NGF의 생물학적 활성 또는 NGF 신호전달 기능에 의해 매개되는 하류 경로를 억제함; (b) NGF 수용체 활성화(TrkA 이량체화 및/또는 자가인산화 포함)를 억제, 차단 또는 감소시킴; (c) NGF의 청소율 증가; (d) 통증을 치료 또는 예방함; (e) NGF 합성, 생산 또는 방출의 억제(감소). 항-NGF 길항제 항체가 NGF의 생물학적 활성을 차단 또는 중화시키는 능력은 또한, 문헌[Hongo et al., Hybridoma 19:215-227 (2000)]에 개시된 바와 같이 후보자 제제가 래트의 배아 후근 신경절 생존 생물학적 분석에서 NGF 매개되는 생존을 억제하는 능력을 모니터함으로써 평가될 수 있다.

통증의 "발생률 감소"는 중증도(예를 들면 오피에이트를 비롯한 이 상태에 일반적으로 사용되는 다른 약물 및/또는 치료법(에 대한 노출)의 필요성 및/또는 양을 감소시키는 것을 포함할 수 있다), 지속기간 및/또는 빈도(예를 들면 개체의 수술후 통증 시간을 지연시키거나 증가시키는 것 포함)의 임의의 감소를 의미한다. 당업자들에게 이해되는 바와 같이, 개체는 치료에 대한 반응이 다양할 수 있고, 따라서, 예를 들면 "개체에서 류마티스 관절염 통증 또는 골관절염 통증의 발생률을 감소시키는 방법"은 이런 투여가 아마도 특정한 개체에게서 발생률을 감소시킬 수 있을 것이라는 합리적인 예상에 근거한 항-NGF 길항제 항체 투여를 반영한다.

통증 또는 통증의 하나 이상의 증후군(예컨대, 류마티스 관절염 통증 또는 골관절염 통증)의 "경감"은 항-NGF 길항체 항체를 투여하지 않은 경우와 비교하였을 때 통증의 하나 이상의 증후군의 감소 또는 개선을 의미한다. "경감"은 또한 증후군의 지속시간을 단축 또는 감소시키는 것을 포함한다.

통증 또는 통증의 하나 이상의 증후군(예컨대, 류마티스 관절염 통증 또는 골관절염 통증)의 "일시적 완화"는 본 발명에 따라 항-NGF 길항제 항체로 치료된 개체 또는 개체들의 집단에서 수술후 통증의 하나 이상의 바람직하지 않은 임상적 징후의 정도를 감소시키는 것을 의미한다.

본원에서 사용되는 통증 발병의 "지연"은 통증(예컨대, 수술후 통증, 류마티스 관절염 통증 또는 골관절염 통증)의 진행을 연장, 방해, 서행, 지연, 안정화 및/또는 연기시키는 것을 의미한다. 이러한 지연은 질병의 이력 및/또는 치료되는 개체에 따라 다양한 기간일 수 있다. 당해 분야의 숙련자들에게 명확한 바와 같이 충분하거나 유의한 지연은 사실상 개체에서 통증이 발생되지 않는 예방을 포함할 수 있다. 증후군의 발병을 "지연"시키는 방법은, 방법을 이용하지 않는 경우와 비교하였을 때, 주어진 시간 프레임에서 증후군이 발생될 가능성을 감소시키고/시키거나, 주어진 시간 프레임에서 증후군의 정도를 감소시키는 방법이다. 이런 비교는 전형적으로 통계학적으로 유의한 수의 대상을 이용한 임상 연구에 근거한다.

"통증"은 실제 또는 잠재적 조직 손상과 관련되거나 그러한 손상에 대해 설명되는 불쾌한 감각 및 감정적 경험을 의미한다. 통증은 상이한 병리생리학으로 인해 다수의 상이한 분야로 나뉠 수 있고, 이는 침해성, 염증성, 신경병성 통증 등을 포함한다. 통증의 몇몇 유형은 다중 병인론을 가지며, 따라서 하나 이상의 분야로 분류될 수 있다(예컨대, 요통, 암 통증은 둘 다 침해성 및 신경병성 요소를 갖는다).

본원에서 사용되는 "만성 통증"은 만성 장애(즉, 근원적 과정 또는 장애가 예견하는 것보다 종종 더 강하며, 근원적 장애가 치유되거나 또는 손상이 회복된 후에도 지속되는 외상, 악성 종양, 질병, 감염 또는 통증)와 관련된 통증을 의미한다. 또한, 만성 통증은, 예를 들면 침해성 및/또는 신경병성 통증 및/또는 염증성 통증 및/또는 암 통증에 수반되는 "혼합 병인 통증"일 수 있다. 결과적으로, 만성 통증은 종종 진통에 대한 반응을 예측할 수 없다. "이중 매커니즘 통증"은 말초 및 중추 민감화 둘 다에 의해 증대되고 유지되는 통증을 의미한다.

"염증성 통증"은 조직 손상 및 그에 따른 염증성 과정에 대해 반응하는 통증을 의미한다. 염증성 통증은 뉴런 기능에 또한 영향을 미칠 수 있는 반응성 염증성 과정을 겪는 손상된 조직에서 비롯될 수 있다. 염증성 통증은 생화학적 매개자(PGE₂, 브라디키닌, 사이토카인 및 뉴로펩타이드)의 통증-전달 뉴런 상의 수용체로의 결합 및 그의 작용 변경, 그의 흥분성 증가 및 그에 따른 통증 감각 증가를 수반할 수 있다. 용어 "염증성 통증"은 만성 및 급성 통증을 포함한다.

"혼합 병인 통증"은 염증성 및/또는 신경병성 및/또는 침해성 요소를 함유하는 통증을 의미한다. "이중 매커니즘 통증"은 말초 및 중추 민감화 둘 다에 의해 증대되고 유지되는 통증을 의미한다.

"신경병성 통증"은 말초 또는 중추 신경계에서 뉴런의 손상 또는 기능장애에 의해 생성되는 통증을 의미한다.

"급성 통증" 및 "급성 염증성 통증"은 급성 염증 및 급성 염증성 통증 반응을 초래하는 조직 손상의 징후가 보이거나 그러한 조직 손상이 생성되는 질병 과정 또는 유해한 화학적, 열적 또는 기계적 자극에 대한 정상적인 예측 가능한 적절한 생리학적 반응을 의미하며, 그러한 급성 통증은 종종 침해성 통증 요소를 수반한다. 일반적으로, 급성 통증의 강도는 자극의 강도에 비례하며, 자극이 지속되는 만큼 또는 조직 손상이 회복될 때까지 오래 지속된다. 급성 염증성 통증은 일반적으로 손상, 침습적 절차, 외상, 감염, 면역 반응, 알러지, 과민성 및 질병과 관련된다.

"침해성 통증"은 유해한 자극 신호전달 조직 손상 또는 절박성 조직 손상에 의해 유발되는 침해수용체에 의해 전달되는 통증을 의미한다. 침해성 통증은 구심성 뉴런을 통한 통증 신호의 척수의 배각으로의 전달을 수반하며, 2차 뉴런은 신호를 보다 높은 중심으로 전달한다. 침해성 통증은 정상적으로 또한 급성 통증의 특징인 촉진된 상태가 치유되는 즉시 치유된다.

"통각 과민"은 종종 신체의 연조직 내의 침해수용체의 손상에 의해 유발된 통증에 대한 극도의 민감성이다. 병소 형태는 전형적으로 손상과 관련되며, 다음의 두 개의 아형으로 구분되는 것을 경험할 수 있다: (1) 1차 통각 과민, 즉 손상된 조직에서 직접적으로 발생하는 통증 민감성, (2) 2차 통각 과민, 즉 주변의 비손상된 조직에서 발생하는 통증 민감성. 또한, 보다 확산된 몸 전체 형태로서 경험할 수 있다. 통각 과민은 급성 또는 만성 염증성 상태에 의해 유도될 수 있다. 이러한 통각 과민의 발병에 대한 해답은, 예컨대 말초 신경계와 상호작용하고, 통증을 초래하는 사이토카인 및 케모카인을 방출하는 면역 세포를 통해 발생되는 염증성 상태 또는 알러지 반응으로부터 발생되는 혈소판 응집 인자(PAF)의 작용이다. 염증성 상태는 이른바 자기 상승작용으로 불리는 척수 내 증폭 형태와 일치하는 패턴으로 통증 섬유의 자극을 유도할 수 있으며, 이러한 척수 내 증폭은 통각 과민을 유발하는 통로를 제공한다.

"이질통"은 정상적인 통증이 아닌 자극으로부터 발생되는 통증, 즉 다르게는 비유해 자극에 대한 과대 반응이고, 이는 정적 또는 동적 이질통일 수 있다(즉, 움직임 없이 또는 움직임과 함께 자발적으로 발생한다). 또한, 이질통은 자극된 부위보다 다른 부위에서 지각될 수 있으므로, 따라서 또한 감각 이상성일 수 있다. 이는 염증성 상태, 특히 관절 염증에 대해 일반적이다.

"체성통"은 피부 또는 심부 조직에서 기원하는 통증을 의미하며, 근골격 조직에서 발생하는 경우, "심부 체성통"으로 불린다. "내장통"은 흉부, 복부 또는 골반 내장의 침윤, 압착, 확장 또는 신장에 의해 발생하는 통증 수용체의 활성화로 인해 유발되는 통증을 의미한다.

본원에서 사용되는 "통증"은 급성 및 만성 통증, 및 염증성 요소를 갖는 임의의 통증을 비롯한 임의의 병인을 갖는 통증을 지칭한다. 통증의 예는 수술후 통증(치통 포함), 편두통, 두통 및 삼차 신경통, 화상, 상처 또는 결석과 관련된 통증, 외상과 관련된 통증(외상 두통 손상 포함), 신경병성 통증, 요통, 예컨대 만성 하부 요통, 근골격 장애, 예컨대 류마티스 관절염과 관련된 통증, 골관절염, 강직 척추염, 음성혈청반응성 (비류마티스) 관절병증, 비관절 류마티스 및 관절주위 장애와 관련된 통증, 및 암과 관련된 통증("파괴성 통증", 및 말기 암과 관련된 통증 및 골 전이로 인한 통증 포함), 말초 신경병 및 헤르페스후 신경통과 관련된 통증, 간질성 방광염 및/또는 통증성 방광 증후군 및/또는 방광통 증후군과 관련된 통증, 만성 전립선염 및/또는 만성 골반통 증후군과 관련된 통증, 자궁내막증 및/또는 자궁 근종과 관련된 통증을 포함한다. 염증성 요소를 갖는 통증의 예는 (상기 기재된 것 중 일부 외에도) 류마티스 통증, 점막염과 관련된 통증 및 월경통을 포함한다.

"수술후 통증"(호환적으로 "절개후 통증" 또는 "외상후 통증"으로 지칭됨)은 절개, 천자, 째짐, 또는 개체의 조직에의 상처(침습적 또는 비침습적이던지 간에 모든 수술 절차로부터 발생하는 것들을 포함)와 같은 외부 외상으로부터 비롯되거나 발생하는 통증을 지칭한다. 본원에서 사용되는 수술후 통증은 외부 물리적 외상없이 발생하는(비롯되거나 기원하는) 통증을 포함하지 않는다. 몇몇 실시양태에서, 수술후 통증은 내부 또는 외부(말초 포함) 통증이며, 상처, 절개, 외상, 째짐 또는 절개는 우연히(외상 상처에 의한 것으로서) 또는 고의적으로(수술 절개에 의한 것으로서) 발생할 수 있다. 본원에서 사용되는 용어 "통증"은 통증의 침해수용 및 감각을 포함하며, 통증은 통증 점수 및 당해 분야에 잘 공지된 다른 방법을 이용하여 객관적으로 및 주관적으로 평가될 수 있다. 본원에서 사용되는 수술후 통증은 이질통(즉, 정상적인 비유해한 자극에 대한 증가된 반응) 및 통각 과민(즉, 정상적인 유해한 또는 불쾌한 자극에 대한 증가된 반응)을 포함하며, 이는 또한 사실상 열 또는 기계적(촉각)일 수 있다. 몇몇 실시양태에서, 통증은 열적 민감성, 기계적 민감성 및/또는 휴지기 통증을 특징으로 한다. 몇몇 실시양태에서, 수술후 통증은 기계적으로 유도되 통증 또는 휴지기 통증을 포함한다. 다른 실시양태에서, 수술후 통증은 휴지기 통증을 포함한다.

통증은 당해 분야에 널리 알려진 1차 또는 2차 통증일 수 있다.

간질성 방광염 및/또는 통증성 방광 증후군 및/또는 방광 통증 증후군과 관련된 통증은 하복부(골반) 통증; 방광 통증; 치골위 통증; 질 통증; 음경, 고환, 음낭 및 회음부의 통증; 요도 통증; 성교통; 방광이 채워짐에 따라 증가할 수 있는 통증, 압력 또는 불편함을 포함한다.

만성 전립선염 및/또는 만성 골반통 증후군과 관련된 통증은 하복부(골반) 통증; 하부위 통증; 방광 통증; 치골위 통증; 음경, 고환, 음낭 및 회음부의 통증; 요도 통증; 성교통; 방광이 채워짐에 따라 증가할 수 있는 통증, 압력 또는 불편함; 배뇨통; 및 사정 통증을 포함한다.

하부 요로 증후군(LUT)은 저장(자극성), 배설(폐색성) 및 배뇨후 증후군으로서 정의될 수 있는 3가지 군의 요 증후군을 포함한다. 저장 증후군은 절박뇨, 빈뇨, 야뇨증, 절박성 요실금 및 스트레스성 요실금을 포함하고, 이들은 과민성 방광(OAB) 및 양성 전립선 비대증(BPH)과 관련될 수 있다. 배설 증후군은 배뇨지연, 열악한 흐름, 간헐성, 힘주기 및 배뇨통을 포함한다. 배뇨후 증후군은 소변이 조금씩 떨어지는 현상, 배설후 조금씩 떨어지는 현상 및 불완전하게 비운 느낌을 포함한다.

자궁내막증 및/또는 자궁 근종과 관련된 통증 및/또는 다른 증후군은 월경통; 만성 비월경, 골반통; 성교통; 배변곤란; 월경과다; 하복부 통증 또는 하부 요통; 불임증 및 생식능력 저하; 배뇨통; 배뇨에 대한 팽만감 및 통증; 구역, 구토 및/또는 설사를 포함할 수 있다. 증후군은 또한 복막강 외부에 위치한 근종 또는 자궁내막 병변과 관련된 증후군을 포함할 수 있고, 예를 들면 흉부 자궁내막증 증후군은 각혈, 기흉 또는 혈액가슴으로서 나타나고, 폐 평활근종은 호흡곤란 및 폐 종괴로서 나타난다.

하기 실시예는 예시적인 것이며, 본 발명은 제한한지 않는다. 국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호는 본 발명에서 사용되는 항체를 설명하기 위해 언급된다. 국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 전체 내용은 본원에서 참고로서 인용된다.

실시예

실시예 1: 항체 생성 및 정제

완전 항체의 발현을 위해서, 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 2개의 포유동물 발현 벡터(경쇄의 경우 Eb.911.E3 또는 Eb.pur.911.3E 및 중쇄의 경우 Db.911.3E; 본원에 개시되어 있음)에 클로닝하고, 리포펙타민을 사용하여 일시적 발현을 위해 HEK 293 세포로 형질감염시켰다. 표준 방법에 의해 단백질 A를 이용하여 항체를 정제하였다.

항-NGF 항체 E3의 발생, 생성, 정제 및 특성화는 국제 특허 출원 공개 제 WO 2004/058184 호의 실시예에 기재되어 있고, 이의 전체 내용은 본원에서 참고로서 인용되어 있다. E3 경쇄 및 E3 중쇄가 혼입된 벡터는 미국 버지니아주 매나사스 유니버시티 불러바드 10801 소재의 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)에 기탁되었다.

이들 기탁에 대한 상세한 내용은 본원에 그 전체가 참고로 인용되고 있는 국제 특허 출원 공개 제 WO 2004058184 호에서 발견할 수 있다.

포유동물 세포에서 항체 E3을 발현시키는데 사용하기 위해 3가지의 포유동물 발현 벡터를 고안하고 구축하였다.

벡터 Db.911.3E는 E3 항체의 중쇄 가변 영역 및 인간 IgG2a 불변 영역을 포함하는 발현 벡터로서, 중쇄의 일시적 또는 안정적 발현에 적합하다. Db.911.3E는 하기 영역에 상응하는 뉴클레오타이드 서열로 구성된다: 뮤린 사이토메갈로바이러스 프로모터 영역(뉴클레오타이드 1 내지 612); 합성 인트론(뉴클레오타이드 619 내지 1507); DHFR 코딩 영역(뉴클레오타이드 707 내지 1267); 인간 성장 호르몬 신호 펩타이드(뉴클레오타이드 1525 내지 1602); 항체 3E 중쇄 가변 영역(뉴클레오타이드 1603 내지 1965); A330P331에서 S330S331로의 돌연변이(아미노산 번호는 야생형 IgG2a 서열을 기준으로 함; 문헌[Eur. J. Immunol. (1999) 29:2613-2624] 참고)를 함유하는 인간 중쇄 IgG2a 불변 영역; SV40 말기 폴리아데닐화 신호(뉴클레오타이드 2974-3217); SV40 인핸서 영역(뉴클레오타이드 3218 내지 3463); 파지 f1 영역(뉴클레오타이드 3551 내지 4006); 및 베타 락타마제(AmpR) 암호화 영역(뉴클레오타이드 4443 내지 5300). Db.911.3E는 2003년 1월 8일자로 ATCC에 기탁되었고, ATCC 기탁번호 PTA-4895가 할당되었다.

벡터 Eb.911.3E는 E3 항체의 경쇄 가변 영역 및 인간 카파 쇄 불변 영역을 포함하는 발현 벡터이고, 경쇄의 일시적 발현에 적합하다. Eb.911.3E는 하기 영역에 상응하는 뉴클레오타이드 서열로 구성된다: 뮤린 사이토메갈로바이러스 프로모터 영역(뉴클레오타이드 1 내지 612); 인간 EF-1 인트론(뉴클레오타이드 619 내지 1142); 인간 성장 호르몬 신호 펩타이드(뉴클레오타이드 1173 내지 1150); 항체 E3 경쇄 가변 영역(뉴클레오타이드 1251 내지 1571); 인간 카파 쇄 불변 영역(뉴클레오타이드 1572 내지 1892); SV40 말기 폴리아데닐화 신호(뉴클레오타이드 1910 내지 2153); SV40 인핸서 영역(뉴클레오타이드 2154 내지 2399); 파지 f1 영역(뉴클레오타이드 2487 내지 2942) 및 베타 락타마제(AmpR) 암호화 영역(뉴클레오타이드 3379-4236). Eb.911.3E는 2003년 1월 8일자로 ATCC에 기탁되었고, ATCC 기탁번호 PTA-4893이 할당되었다.

벡터 Eb.pur.911.3E는 E3 항체의 경쇄 가변 영역 및 인간 카파 쇄 불변 영역을 포함하는 발현 벡터이고, 경쇄의 안정한 발현에 적합하다. Eb.pur.911.3E는 하기 영역에 상응하는 뉴클레오타이드 서열로 구성된다: 뮤린 사이토메갈로바이러스 프로모터 영역(뉴클레오타이드 1 내지 612); 인간 EF-1 인트론(뉴클레오타이드 619 내지 1758); pac 유전자(퓨로마이신R) 암호화 영역(뉴클레오타이드 739 내지 1235); 인간 hsp70 5'UTR 영역(뉴클레오타이드 1771 내지 1973); 인간 성장 호르몬 신호 펩타이드(뉴클레오타이드 1985 내지 2062); 항체 E3 경쇄 가변 영역(뉴클레오타이드 2063 내지 2383); 인간 카파 쇄 불변 영역(뉴클레오타이드 2384 내지 2704); SV40 말기 폴리아데닐화 신호(뉴클레오타이드 2722 내지 2965); SV40 인핸서 영역(뉴클레오타이드 2966 내지 3211); 파지 f1 영역(뉴클레오타이드 3299 내지 3654) 및 베타 락타마제(AmpR) 암호화 영역(뉴클레오타이드 4191-5048). Eb.pur.911.3E는 2003년 1월 8일자로 ATCC에 기탁되었고, ATCC 기탁번호 PTA-4894가 할당되었다.

일시적 세포 발현은 다음과 같이 수행되었다: 150mm 접시 중의 CHO 및 HEK293T 세포를 25㎍의 각각의 플라스미드(즉, 중쇄를 함유하는 하나의 플라스미드 및 경쇄를 함유하는 하나의 플라스미드)로 일시적 공동-형질감염시켰다. 제조자의 지시에 따라 DNA를 100㎕의 리포펙타민 2000(인비트로겐)과 혼합하였다. DNA-지질 복합체가 혈청 또는 항체 없이 5시간동안 DMEM/F12 배지 중의 세포와 접촉하게 두었다. 이러한 배양후, 이틀 동안 임의의 첨가제 없이 배지를 Opti-MEM(인비트로겐)으로 발현을 위해 변경시켰다. 항체를 함유하는 세포 상층액을 연속적으로 4회 수확하고 후속적으로 배지를 교환하였다. 맵셀렉트 프로테인(MapSelect Protein) A 수지(아머샴 바이오사이언시즈(Amersham biosciences) 17-5199-02)를 이용한 친화성 크로마토그래피에 의해 상층액을 정제하였다. 항체를 0.3M 글리신, 0.6M NaCl 완충제 pH 8 중의 단백질 A 수지에 결합시킨 후, 0.1M 시트레이트 완충제, pH 3으로 용리시켰다. 항체를 함유한 단편을 1M 트리스 완충제 pH8.0으로 즉각 중화시켰다. 그런 다음, 항체 단편을 투석하고 PBS에서 농축하였다. 항체를 선택하고 다음과 같이 분석하였다.

바이아코어 분석

항-NGF Fab 및 단클론 항체의 친화성이 BIAcore3000(상표명) 표면 플라스몬 공명(SPR) 시스템(미국 뉴저지주 피스카웨이 소재의 바이아코어 인코포레이티드)에 의해 측정될 수 있다. CM5 칩은 공급자의 지시에 따라 N-에틸-N'-(3-다이메틸아미노프로필)-카보다이나이드 하이드로클로라이드(EDC) 및 N-하이드록시석신이마이드(NHS)를 사용하여 활성화되었다. 인간 NGF를 10mM 나트륨 아세테이트 pH 4.0으로 희석하고, 0.005mg/mL의 농도에서 활성화된 칩 상으로 주입하였다. 개별적인 칩 채널을 가로지르는 가변 유동 시간을 이용하여 하기 2개 범위의 항체 밀도를 달성하였다: 상세한 동역학 연구를 위한 100 내지 200 반응 단위(RU), 및 스크리닝 분석을 위한 500 내지 600 RU. 칩을 에탄올아민으로 블록킹하였다. 재생 연구는 피어스 용출 완충제(미국 일리노이주 록포드 소재의 피어스 바이오테크놀로지(Pierce Biotechnology), 제품 번호 21004) 및 4M NaCl(2:1)의 혼합물이 200회 주입동안 칩 상의 hNGF의 활성을 유지시키면서도 결합된 Fab를 효과적으로 제거한다는 것을 보여주었다. HBS-EP 완충제(0.01M HEPES, pH 7.4, 0.15 NaCl, 3mM EDTA, 0.005% 계면활성제 P29)를 모든 바이아코어 분석을 위한 작업 완충제로 이용하였다.

스크리닝 분석

라이브러리로부터의 Fab 클론의 친화성을 결정하기 위해 스크리닝 바이어코어 분석을 최적화시켰다. 작은 배양 용균액의 상층액을 50㎕/분에서 2분동안 주입하였다. BIAevalution 소프트웨어를 이용하여 단일 기하급수적 해리 속도(k_off)를 측정하기 위해 10 내지 15분의 해리 시간을 사용하였다. 라이브러리를 만드는데 이용된 주형과 동일한 범위(클론 8L2-6D5, k_off 1x10^-3s^-1)에서 k_off 속도를 나타내는 샘플을 확인하기 위해 주입하고, 더 나은 k_off 값을 수득하도록 45분까지의 해리 시간을 허용하였다. 개선된(더 느린) k_off 값을 나타내는 클론을 대규모에서 발현시키고, 전체 동역학 변수, k_on 및 k_off를 정제된 단백질 상에서 측정하였다. 이 분석은 약 2배 이상의 친화성 차이를 검출할 수 있었다.

친화성 결정 분석

정제된 Fab 샘플의 순차적 희석(추정된 K_D의 0.1 내지 10X)을 100㎕/분에서 1분동안 주입하고, 2시간까지의 해리 시간을 허용하였다. Fab 단백질의 농도를 (아미노산 분석에 의해 결정된) 공지된 농도의 Fab를 표준물로서 이용하여 ELISA 및/또는 SDS-PAGE 전기영동에 의해 측정하였다. BIAevalution 프로그램을 이용하여 데이터를 1:1 랑뮈르 결합 모델에 부합시킴으로써 동적 결합 속도(k_on) 및 해리 속도(k_off)를 동시에 수득하였다(문헌[Karlsson, R. Roos, H. Fagerstam, L. Petersson, B. (1994). Methods Enzymology 6. 99-110]). 평형 해리 상수(K_D) 값을 k_off/k_on으로 계산하였다.

실시예 2: 완충제 및 pH 분석

본 연구는 항체 응집 및 단편화에 대한 4가지 상이한 완충제의 효과를 평가하기 위해 수행하였다.

구체적으로, 항-NGF 항체 E3을 포함하고, 아세테이트, 석시네이트, 히스티딘 또는 시트레이트로 완충된 4개의 액체 제형을 제조하였다. 그 후, 제형을 5, 25 및 40℃에서 보관하고, 항체 응집, 단편화 및 산화 측정을 0, 4, 9 및 13주에 실시하였다.

제조 과정은 다음과 같이 요약할 수 있다: 완충제를 제조하고, pH를 조정하고, 무균 여과하였다(상세하게는 하기 표 2.1 및 2.2를 참고). 그 후, 항체를 농축하고, 완충제를 교환하였다. 항체를 UV로 분석한 후, 각각의 완충제로 20mg/ml로 희석하였다. 그 후, 20mg/ml 용액을 무균 여과하였다. 마지막으로, 무균 용액을 여과하고, 마개로 막고, 오버실(overseal)로 캡핑하였다.

응집 분석:

하기 표 2.2의 항체 제형을 0, 4, 9 및 13주 동안 5, 25 및 40℃의 온도에서 보관하였다.

각각의 제형을 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하여 응집에 대해 분석하였다. 크기 배제 크로마토그래피를 TSK 겔 G3000SWXL-G2000SWXL 컬럼, pH 7.0의 이동상 0.2M 인산나트륨 완충제, 1ml/분의 유속 및 214nm의 UV 검출을 사용하여 수행하였다.

응집 수준을, 각 제형에 대한 크로마토그램 피크 아래의 면적을 적분하고, 총 피크 면적의 비율로서 고분자량 종 피크 아래의 적분된 면적을 기록함으로써 계산하였다. 하기 표 2.3에서 알 수 있는 바와 같이, 특히 pH 6에서 히스티딘-완충된 제형은 최저 응집 수준을 나타내었고, 그 다음에는 아세테이트, 석시네이트, 시트레이트 완충된 제형 순서로 나타났다.

단편화 분석:

또한, 각각의 제형을 감소된 모세관 겔 전기영동(rCGE)을 사용하여 단편화에 대해 분석하였다. 단백질을 펼쳤고(변성시켰고), 레드-CGE에서 그의 이황화 결합의 분열에 따른 구조인 "막대형"이 되었다. "환원된" 단백질을 중쇄 및 경쇄로 분리하여, 단편화된 종에 따른 양자화를 허용하였다. 감소된-CGE는 단편화율(불순물(%))을 정량화하는 신뢰할 만한 방법으로서 고려된다. 각각의 제형에 대한 적절한 시간에서 단편화율을 측정하였다. 단편화 수준을 총 밴드 부피의 비율로서 계산하였다. 하기 표 2.4에서 알 수 있는 바와 같이, 특히 pH 6에서의 히스티딘-완충된 제형이 최저 수준의 단편화를 나타내었다.

산화 분석:

0, 4, 9 및 13주 동안 5, 25 및 40℃의 온도에서 보관한 후 리신-C 맵핑 방법을 사용하여 항-NGF 항체 E3의 아미노산 위치 X 및 Y에서 메티오닌 잔기의 산화 수준을 측정하였다. 그 후, 시험된 각각의 제형의 샘플을 표준 조건하에 pH 8.0에서 트리스 완충제 중 Lyc-C 효소로 분해시키고, 역상 고 성능 액체 크로마토그래피에 의해 분석하였다. 물 중 0.1% TFA 및 아세토나이트릴 구배 용리액 중 0.085% TFA를 갖는 그레이스 비대 프로테인(Grace Vydae Protein) C4 분석 컬럼을 사용하여 분리를 달성하였다. 항-NGF 항체 E3 중 메티오닌 아미노산의 산화율을 기록하였다.

하기 표 2.5에서의 결과는 시트레이트 제형의 산화율이 가장 크다는 것을 나타낸다.

[표 2.1]

[표 2.2]

[표 2.3]

[표 2.4]

[표 2.5]

실시예 3: 긴장성 제제, 즉 트레할로스 대 수크로스 대 소르비톨의 분석

긴장성 제제, 특히 트레할로스, 수크로스 및 소르비톨의 항-NGF 항체 E3 제형의 안정성에 대한 효과를 비교하기 위한 연구를 수행하였다.

구체적으로, 항-NGF 항체 E3, 및 트레할로스, 수크로스 또는 소르비톨을 포함하는 3개의 액체 제형을 하기 표 3.1에 열거한 바와 같이 제조하였다. 그 후, 제형을 5, 25 및 40℃에서 보관하고, 항체 응집, 단편화 및 산화 측정을 2, 4, 8, 13 및 26주에 실시하였다.

하기 표 3.1의 제형의 제조 과정은 다음과 같이 요약할 수 있다: 완충제를 제조하고, pH를 조정하고, 무균 여과하였다(상세하게는 하기 표 3.1을 참고). 원료 부형제 용액을 제조하고, 무균 여과하였다. 그 후, 항체를 농축하고, 완충제를 교환하였다. 농축된 항체를 UV로 분석한 후, 각각의 완충제로 50mg/ml로 희석하고, 필요한 농도로 각각의 부형제를 합하였다. 그 후, 50mg/ml 용액을 무균 여과하였다. 마지막으로, 무균 용액을 여과하고, 마개로 막고, 오버실링하였다. 모든 제형은 pH 6.0이며, 항-NGF 항체 E3 농도는 50mg/ml이다.

응집 분석:

하기 표 3.1의 항체 제형을 2, 4, 8, 13 및 26주 동안 5, 25 및 40℃의 온도에서 보관하였다.

각각의 제형을 실시예 2에 기재된 방법을 사용하여 응집에 대해 분석하였다. 응집 수준을 계산하고 도 1에 나타내었다.

단편화 분석:

또한, 각각의 제형을 실시예 2에 기재된 방법을 사용하여 단편화에 대해 분석하였다. 도 2에서 알 수 있는 바와 같이, 트레할로스 제형은 13주 보관시에 최저 수준의 단편화를 나타내었다.

[표 3.1]

실시예 4: 긴장성 제제 스크리닝 연구: 트레할로스 대 수크로스

긴장성 제제, 특히 트레할로스 및 수크로스의 항-NGF 항체 E3 제형의 안정성 및 활성에 대한 효과를 비교하기 위한 연구를 수행하였다. 묽은 산 용액 중 수크로스의 프룩토스 및 글루코스로의 가수분해는 널리 알려져 있다. 또한, 글루코스 분자는 단백질의 아미노산 서열의 리신 잔기와 무작위로 결합하는 것으로 알려져 있다. 이는 당화반응으로서 공지되어 있다. 따라서, 수크로스를 함유하는 산성 pH로 완충된 단백질 제형은 수크로스 가수분해와 이후 당화반응을 경험할 수 있다. 당화된 단백질은 비당화된 단백질보다 더 즉시 분해 과정을 겪을 수 있다. 따라서, 액체 단백질 제형 중 수크로스의 존재는 저장 수명에 대한 단백질의 품질에 악영항을 줄 수 있다. 이와 반대로, 트레할로스는 이러한 가수분해를 바탕으로 한 분해를 겪는 것으로 알려지지 않았으며, 단백질 제형에 바람직한 긴장성 변형제일 수 있다.

구체적으로, 항-NGF 항체 E3 및 수크로스를 포함하는 6개의 액체 제형, 및 항-NGF 항체 E3 및 트레할로스를 포함하는 2개의 액체 제형을 하기 표 4.1에서와 같이 제조하였다. 그 후, 제형을 5, 25 및 40℃에서 보관하고, 항체 응집 및 당화반응 측정을 2, 4, 8, 13 및 26주에 실시하였다.

하기 표 4.1의 제형의 제조 과정은 다음과 같이 요약할 수 있다: 완충제를 제조하고, pH를 조정하고, 무균 여과하였다(상세하게는 하기 표 4.1을 참고). 원료 부형제 용액을 제조하고, 무균 여과하였다. 그 후, 항체를 농축하고, 완충제를 교환하였다. 농축된 항체를 UV로 분석한 후, 각각의 완충제로 10mg/ml 또는 50mg/ml로 희석하고, 필요한 농도로 각각의 부형제를 합하였다. 그 후, 10mg/ml 또는 50mg/ml 용액을 무균 여과하였다. 마지막으로, 무균 용액을 여과하고, 마개로 막고, 오버실링하였다.

응집 분석:

하기 표 4.1의 항체 제형을 2, 4, 8, 13 및 26주 동안 5, 25 및 40℃의 온도에서 보관하였다.

각각의 제형을 실시예 2에 기재된 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하여 응집에 대해 분석하였다. 응집 수준을 계산하고 표 4.2에서 비교하였으며, 트레할로스는 조사된 동일한 항체 농도에 대해 수크로스와 비교하여 보다 낮은 수준의 응집이 아닐지라도 낮은 것으로서 입증되었음을 알 수 있다.

당화반응 분석:

표 4.1에 따른 수크로스 또는 트레할로스 긴장성 제제를 포함하는 제형 샘플(10mg/ml 항체, 10mM 히스티딘 pH 6.0)에 대해 0, 2, 4, 8 및 13주 동안 25, 40 및 50℃에서 제형을 보관한 후 질량 분광분석 맵핑 방법에 의해 항-NGF 항체 E3 중 리신 잔기의 당화반응 수준을 측정하였다. 당화반응은 긴장성 제제의 가수분해 비율에 비례하는 것으로 밝혀졌다. 트레할로스의 가수분해가 입증되지 않았으므로, 트레할로스는 항체 제형의 당화반응이 방지되기 때문에 항체 제형에 대해 수크로스 보다 바람직한 긴장성 제제이며, 수크로스는 104주 동안 25℃에서 보관한 제형에서 1 내지 2% 가수분해를 나타냈다.

[표 4.1]

[표 4.2]

[표 4.3]

실시예 5: 계면활성제 및 중합체 안정화제의 분석

계면활성제 및 중합체 안정화제, 특히 PS20, PS80, PEG3350, PEG3350+PS20의 항-NGF 항체 E3 제형의 안정성에 대한 효과를 비교하기 위한 연구를 수행하였다.

구체적으로, 항-NGF 항체 E3 및 PS20, PS80, PEG3350, PEG3350+PS20을 포함하는 4개의 액체 제형을 하기 표 5.1에서와 같이 제조하였다. 그 후, 제형을 5, 25 및 40℃에서 보관하고, 항체 응집, 단편화 및 산화 측정을 2, 4, 8, 13 및 26주에 실시하였다.

모든 제형은 pH 6.0이고, 항-NGF 항체 E3 농도는 50mg/ml이다. 하기 표 5.1의 제형의 제조 과정은 다음과 같이 요약할 수 있다: 완충제를 제조하고, pH를 조정하고, 무균 여과하였다(상세하게는 하기 표 5.1을 참고). 원료 부형제 용액을 제조하고, 무균 여과하였다. 그 후, 항체를 농축하고, 완충제를 교환하였다. 농축된 항체를 UV로 분석한 후, 각각의 완충제로 50mg/ml로 희석하고, 필요한 농도로 각각의 부형제를 합하였다. 그 후, 50mg/ml 용액을 무균 여과하였다. 마지막으로, 무균 용액을 여과하고, 마개로 막고, 오버실링하였다. 하기 표 5.2 및 5.3에 결과를 나타내었다.

응집 분석:

하기 표 5.1의 항체 제형을 2, 4, 8, 13 및 26주 동안 5, 25 및 40℃의 온도에서 보관하였다.

각각의 제형을 실시예 2에 기재된 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하여 응집에 대해 분석하였다. 응집 수준을 계산하고 표 5.2에서 비교하였으며, 0.2mg/ml의 농도의 PS20이 조사된 0.2mg/ml의 PS80 및 1mg/ml의 PEG3350과 비교하여 동일한 수준의 응집을 나타내는 것으로 관찰되었다. 0.1mg/ml의 농도의 PS20은 또한 동일한 결과를 나타낸다(40℃의 데이터).

단편화 분석:

또한, 각각의 제형을 실시예 2에 기재된 방법을 사용하여 단편화에 대해 분석하였다. 40℃ 샘플로부터 모은 데이터를 하기 표 5.3에 나타내었고, 0.2mg/ml의 농도의 PS20이 조사된 0.2mg/ml의 PS80 및 1mg/ml의 PEG3350과 비교하여 동일한 수준의 단편화를 나타내는 것으로 관찰되었다. 0.1mg/ml의 농도의 PS20은 또한 동일한 결과를 나타내는 것으로 관찰되었다.

[표 5.1]

[표 5.2]

[표 5.3]

실시예 6: 항산화제의 분석

항산화제, 특히 메티오닌의 항-NGF 항체 E3 제형의 안정성에 대한 효과를 비교하기 위한 연구를 수행하였다.

구체적으로, 메티오닌을 갖거나 갖지 않은 항-NGF 항체 E3을 포함하는 9개의 액체 제형을 제조하였다. 모든 제형은 pH 6.0, 및 항-NGF 항체 E3 농도 10 또는 50mg/ml, 트레할로스 또는 수크로스 84mg/ml, PS20 0.1mg/ml, 10mM 히스티딘 ± 0.05mg/ml EDTA를 가졌다.

제형의 제조 과정은 다음과 같이 요약할 수 있다: 완충제를 제조하고, pH를 조정하고, 무균 여과하였다. 원료 부형제 용액을 제조하고, 무균 여과하였다. 그 후, 항체를 농축하고, 완충제를 교환하였다. 농축된 항체를 UV로 분석한 후, 각각의 완충제로 10 또는 50mg/ml로 희석하고, 필요한 농도로 각각의 부형제를 합하였다. 그 후, 10 또는 50mg/ml 용액을 무균 여과하였다. 마지막으로, 무균 용액을 여과하고, 마개로 막고, 오버실링하였다.

그 후, 제형을 5, 25 및 40℃에서 보관하고, 항체 응집, 단편화 및 산화 측정을 2, 4, 8, 13, 26 및 52주에 실시하였다.

응집 분석:

항체 제형을 0, 8, 13, 26 및 52주 동안 5, 25 및 40℃의 온도에서 보관하였다.

각각의 제형을 실시예 2에 기재된 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하여 응집에 대해 분석하였다. 계산된 응집 수준을 비교하였으며, 메티오닌을 갖거나 갖지 않는 5 또는 25℃에서 26주 동안 보관된 샘플과 유의적으로 상이하지 않았으며, 메티오닌의 존재는 응집에 식별할 만한 영향을 주지 않는다.

단편화 분석:

항체 제형을 0, 8, 13 및 26주 동안 5, 25 및 40℃의 온도에서 보관하였고, 단편화 측정을 26주에 실시하였다.

각각의 제형을 실시예 2에 기재된 방법을 사용하여 단편화에 대해 분석하였다. 계산된 단편화 수준을 비교하였으며, 메티오닌을 갖거나 갖지 않는 5 또는 25℃에서 26주 동안 보관된 샘플과 유의적으로 상이하지 않았으며, 메티오닌의 존재는 단편화에 식별할 만한 영향을 주지 않는다.

산화 분석:

0, 13, 26 및 52주 동안 5, 25 및 40℃의 온도에서 보관한 후 리신-C 맵핑 방법을 사용하여 항-NGF 항체 E3의 아미노산 위치 X 및 Y에서 메티오닌 잔기의 산화 수준을 측정하였다. 항-NGF 항체 E3 중 메티오닌 아미노산의 산화율을 실시예 2에서와 같이 기록하였다.

하기 표 6.1에서의 결과는 항체의 산화율이 장기간 보관 중 메티오닌의 존재에 의해 감소된다는 것을 나타낸다.

[표 6.1]

실시예 7: 트레할로스를 사용한 또는 사용하지 않는 동결 해동 안정성 연구

50mg/ml 항-NGF 항체 E3, 10mM 히스티딘 완충제 pH 6.0 및 84mg/ml 트레할로스를 포함하는 항체 제형을 제조하고, 트레할로스가 없는 동일한 샘플을 제조하였다. 샘플을 4주기의 동결 해동에 가하고, 샘플에 대한 응집을 결정하였다. 동결 해동 주기는 -70℃에서 72시간 동결, 및 5℃에서 48시간 해동이다.

각각의 제형을 실시예 2에 기재된 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하여 응집에 대해 분석하였다. 계산된 응집 수준을 표 7.1에서 비교하였으며, 트레할로스를 포함하는 샘플이 항체의 응집에 대해 동결 해동 효과로부터 완전히 보호되는 것으로 나타났다. 트레할로스를 갖는 샘플은 시간에 따른 응집 수준의 분명한 증가를 보이지 않았다.

[표 7.1]

실시예 8: 트레할로스를 갖는 항- NGF 항체 E3 제형의 다중 동결 해동 안정성

22mg/ml 항-NGF 항체 E3, 10mM 히스티딘 완충제 pH 6.0 및 84mg/ml 트레할로스, 0.05mg/ml 다이나트륨 EDTA 및 0.1mg/ml 폴리소르베이트 20을 포함하는 항체 제형(112746-124 및 112746-125)을 제조하였다. 샘플을 15주기의 동결 해동에 가하고, 샘플에 대한 응집을 결정하였다.

각각의 제형을 실시예 2에 기재된 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하여 응집에 대해 분석하였다. 계산된 응집 수준을 도 3에서 비교하였으며, 트레할로스를 포함하는 모든 샘플이 항체의 응집에 대해 동결 해동 효과로부터 완전히 보호되는 것으로 나타났다. 트레할로스를 갖는 샘플은 시간에 따른 응집 수준의 분명한 증가를 보이지 않았다.

실시예 9: 10 및 50 mg / ml 항- NGF 항체 E3 에서 장기간 안정성 연구: 안정화제로서 트레할로스의 효과

10mg/ml 항-NGF 항체 E3, 10mM 히스티딘 완충제 pH 6.0 및 84mg/ml 트레할로스를 포함하는 항체 제형을 제조하고, 트레할로스가 없는 동일한 샘플을 제조하였다. 연구된 샘플의 상세한 설명은 하기 표 9.1에 제시되어 있다. 샘플을 2, 4, 8, 13, 26 및 52주 동안 5, 25 및 40℃의 온도에서 보관하고, 샘플에 대한 응집을 결정하였다. 각각의 제형을 실시예 2에 기재된 크기 배제 크로마토그래피(SEC)를 사용하여 응집에 대해 분석하였다. 수집된 데이터는 트레할로스를 포함하는 샘플이 40℃의 가속 조건에서 보관시 항체의 응집에 대한 효과로부터 높은 수준의 보호를 나타냈다.

[표 9.1]

[표 9.2]

실시예 10: 2.5, 5, 10, 20 및 50 mg / ml 에서 pH 6.0의 히스티딘 완충제 중 트레할로스 , EDTA , 폴리소르베이트 20을 함유하는 항- NGF 항체 E3 제형의 장기간 안정성 연구

2.5, 5, 10, 20 또는 50mg/ml 항-NGF 항체 E3, 10mM 히스티딘 완충제 pH 6.0 및 84mg/ml 트레할로스, 0.05mg/ml EDTA 및 0.1mg/ml 폴리소르베이트 20을 포함하는 항체 제형을 제조하였다. 샘플을 24개월 이하 및 이상 동안 5 내지 8℃의 온도에서 보관하고, 응집, 단편화 및 산화에 대해 샘플을 결정하였다.

수집되고 도 4, 5 및 6에 제시된 데이터는 2.5, 5, 10, 20 또는 50mg/ml mAb 농도에서 항-NGF 항체 E3의 제형이 52주 이하 동안 안정하다는 것을 나타냈다.

본 발명에 따른 액체 항체 조성물의 예는 다음과 같다:

서열 번호 1의 가변 중쇄 서열 및 서열 번호 2의 가변 경쇄 서열을 포함하는 항체 약 2.5mg/ml, 5mg/ml, 10mg/ml, 20mg/ml, 22mg/ml 및 약 50mg/ml 중 어느 하나,

히스티딘 완충제 약 10mM,

트레할로스 이수화물 약 84mg/ml,

폴리소르베이트 20 약 0.01중량/부피,

다이나트륨 EDTA 약 0.005%.

상기 조성물의 pH는 6.0±0.2이다. 액체 항체 조성물의 총 부피는 바람직하게는 약 1ml이다.

항체 서열

중쇄 가변 영역 E3(카바트 CDR은 밑줄쳐져 있고; 코티아 CDR은 굵은 이탤릭체로 표시되어 있다 )

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLI GYDLN WIRQPPGKGLEWIG IIWGDGTTDYNSAVKS RVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAR GGYWYATSYYFDY WGQGTLVTVS(서열 번호 1)

경쇄 가변 영역 E3(카바트 CDR은 밑줄쳐져 있고; 코티아 CDR은 굵은 이탤릭체로 표시되어 있다 )

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITC RASQSISNNLN WYQQKPGKAPKLLIY YTSRFHS GVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYC QQEHTLPYT FGQGTKLEIKRT(서열 번호 2)

E3 중쇄 연장된 CDR

CDRH1: GFSLIGYDLN(서열 번호 3)

CDRH2: IIWGDGTTDYNSAVKS(서열 번호 4)

CDRH3: GGYWYATSYYFDY(서열 번호 5)

E3 경쇄 연장된 CDR

CDRL1: RASQSISNNLN(서열 번호 6)

CDRL2: YTSRFHS(서열 번호 7)

CDRL3: QQEHTLPYT(서열 번호 8)

마우스 단클론 항체 911 연장된 CDR

911 중쇄 연장된 CDR

CDRH1: GFSLIGYDIN(서열 번호 9)

CDRH2: MIWGDGTTDYNSALKS(서열 번호 10)

CDRH3: GGYYYGTSYYFDY(서열 번호 11)

911 경쇄 연장된 CDR

CDRL1: RASQDISNHLN(서열 번호 12)

CDRL2: YISRFHS(서열 번호 13)

CDRL3: QQSKTLPYT(서열 번호 14)

E3 중쇄 아미노산 서열(전체)

QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGFSLIGYDLNWIRQPPGKGLEWIGIIWGDGTTDYNSAVKSRVTISKDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCARGGYWYATSYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(서열 번호 16)

3E 경쇄 아미노산 서열(완전 항체)

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQSISNNLNWYQQKPGKAPKLLIYYTSRFHSGVPSRFSGSGSGTDFTFTISSLQPEDIATYYCQQEHTLPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC(서열 번호 17)

다음과 같이 언급되는 다른 추가의 CDR 서열:

RASQSISNNLN(서열 번호 18)

YTSRFHS(서열 번호 19)

GFSLIGYDLN(서열 번호 30)

IIWGDGTTDYNSAV(서열 번호 31)

QQEHTLPYT(서열 번호 55)

GGYWYATSYYFDY(서열 번호 56)

QQESTLPYT(서열 번호 57)

GGYWYSTSYYFDY(서열 번호 58)

QQEKTLPYT(서열 번호 59)

GGYYYATSYYFDY(서열 번호 60)

QQERTLPYT(서열 번호 61)

GGYWYATSYYFDY(서열 번호 62)

QQERTLPYT(서열 번호 63)

GGYYYATSYYFDY(서열 번호 64)

3E 중쇄 뉴클레오타이드 서열(완전 항체)

GCCAAGAGAGCCACAGGTGTATACCCTGCCACCATCCAGAGAGGAGATGACCAAGAACCAGGTGTCCCTGACCTGTCTGGTGAAGGGATTCTATCCATCCGACATCGCCGTGGAGTGGGAGTCCAACGGACAGCCAGAGAACAACTATAAGACCACCCCTCCAATGCTGGACTCCGACGGATCCTTCTTCCTGTATTCCAAGCTGACCGTGGACAAGTCCAGATGGCAGCAGGGAAACGTGTTCTCTTGTTCCGTGATGCACGAGGCCCTGCACAACCACTATACCCAGAAGAGCCTGTCCCTGTCTCCAGGAAAGTAA(서열 번호 65)

3E 중쇄 가변 도메인 뉴클레오타이드 서열

CAGGTGCAGCTGCAGGAGTCTGGCCCAGGACTGGTGAAGCCTTCCGAGACCCTGTCCCTCACCTGCACTGTCTCTGGGTTCTCACTTATCGGCTATGATCTTAACTGGATCCGACAGCCTCCAGGGAAGGGACTGGAGTGGATTGGGATTATCTGGGGTGATGGAACCACAGACTATAATTCAGCTGTCAAATCCCGCGTCACCATCTCAAAAGACACCTCCAAGAACCAGTTCTCCCTGAAGCTGAGCTCTGTGACCGCCGCGGACACGGCCGTGTATTACTGTGCGAGAGGAGGTTATTGGTACGCCACTAGCTACTACTTTGACTACTGGGGCCAGGGCACCCTGGTCACCGTCTCCTCA(서열 번호 66)

3E 경쇄 뉴클레오타이드 서열(완전 항체)

GATATCCAGATGACACAGTCCCCATCCTCCCTGTCTGCCTCTGTGGGTGACCGCGTCACCATCACCTGCCGCGCATCTCAGTCCATTAGCAATAATCTGAACTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCAAAGCCCCAAAACTCCTGATCTACTACACCTCACGCTTCCACTCAGGTGTCCCATCACGCTTCAGTGGCAGTGGCTCTGGTACAGATTTCACCTTCACCATTAGCAGCCTGCAACCAGAAGATATTGCCACTTATTACTGCCAACAGGAGCATACCCTTCCATATACCTTCGGTCAAGGCACCAAGCTGGAGATCAAACGCACTGTGGCTGCACCATCTGTCTTCATCTTTCCTCCATCTGATGAGCAGTTGAAATCCGGAACTGCCTCTGTTGTGTGCCTGCTGAATAACTTCTATCCACGCGAGGCCAAAGTACAGTGGAAGGTGGATAACGCCCTCCAATCCGGTAACTCCCAGGAGAGTGTCACAGAGCAGGACAGCAAGGACAGCACCTACAGCCTCAGCAGCACCCTGACCCTGAGCAAAGCAGACTACGAGAAACACMAAGTCTACGCCTGCGAAGTCACCCATCAGGGCCTGAGTTCTCCAGTCACAAAGAGCTTCAACCGCGGTGAGTGCTAA(서열 번호 67)

3E 경쇄 가변 도메인 뉴클레오타이드 서열

GATATCCAGATGACACAGTCCCCATCCTCCCTGTCTGCCTCTGTGGGTGACCGCGTCACCATCACCTGCCGCGCATCTCAGTCCATTAGCAATAATCTGAACTGGTATCAGCAGAAGCCAGGCAAAGCCCCAAAACTCCTGATCTACTACACCTCACGCTTCCACTCAGGTGTCCCATCACGCTTCAGTGGCAGTGGCTCTGGTACAGATTTCACCTTCACCATTAGCAGCCTGCAACCAGAAGATATTGCCACTTATTACTGCCAACAGGAGCATACCCTTCCATATACCTTCGGTCAAGGCACCAAGCTGGAGATCAAACGC(서열 번호 68)

상기 서열 및 본원에 개시된 다른 서열은 첨부된 서열 목록에 제공되어 있다.

본원에 개시된 실시예 및 실시양태는 단지 예시 목적이고, 이에 비추어 다양한 변경 및 변화가 당업자에게 제안될 것이고, 본원의 범주 및 영역에 포함되는 것으로 이해된다.

아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)

PTA-4893

20030108

아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)

PTA-4894

20030108

아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(ATCC)

PTA-4895

20030108

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Claims

하나 이상의 항체, 하나 이상의 긴장성 제제, 하나 이상의 완충제, 하나 이상의 킬레이트제 및 하나 이상의 계면활성제를 포함하는, 통증을 치료하기 위한 액체 조성물로서,
pH가 5.8 내지 6.8이고,
하나 이상의 완충제가 히스티딘이고,
하나 이상의 긴장성 제제가 트레할로스이고,
하나 이상의 항체가 서열 번호 1에 나타난 중쇄 가변 영역 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열, 및 서열 번호 2에 나타난 경쇄 가변 영역 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하고,
하나 이상의 킬레이트제가 아미노폴리카복실산, 하이드록시아미노카복실산, N-치환된 글리신, 2-(2-아미노-2-옥소에틸)아미노에테인 설폰산(BES), 데페록사민(DEF), 시트르산, 니아신아마이드, 데속시콜레이트 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택되고,
하나 이상의 계면활성제가 폴리소르베이트, 폴록사머, 트라이톤, 나트륨 도데실 설페이트, 나트륨 라우렐 설페이트, 나트륨 옥틸 글리코사이드, 라우릴-설포베타인, 미리스틸-설포베타인, 리놀레일-설포베타인, 스테아릴-설포베타인, 라우릴-사르코신, 미리스틸-사르코신, 리놀레일-사르코신, 스테아릴-사르코신, 리놀레일-베타인, 미리스틸-베타인, 세틸-베타인, 라우로아마이도프로필-베타인, 코카마이도프로필-베타인, 리놀레아마이도프로필-베타인, 미리스타마이도프로필-베타인, 팔미도프로필-베타인, 아이소스테아르아마이도프로필-베타인, 미리스타마이도프로필-다이메틸아민, 팔미도프로필-다이메틸아민, 아이소스테아르아마이도프로필-다이메틸아민, 나트륨 메틸 코코일-타우레이트, 다이나트륨 메틸 올레일-타우레이트, 다이하이드록시프로필 PEG5 리놀레암모늄 클로라이드, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택되는
액체 조성물.
삭제
제 1 항에 있어서,
긴장성 제제가 비환원당, 바람직하게는 트레할로스 이수화물인 액체 조성물.
제 3 항에 있어서,
트레할로스 이수화물이 약 1mg/ml 내지 약 100mg/ml인 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
계면활성제가 폴리소르베이트, 바람직하게는 폴리소르베이트 20(PS20)인 액체 조성물.
제 5 항에 있어서,
폴리소르베이트의 농도가 약 0.01mg/ml 내지 약 0.15mg/ml인 액체 조성물.
삭제
제 1 항에 있어서,
히스티딘 완충제의 농도가 약 1.0mM 내지 약 15mM인 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
킬레이트제가 바람직하게는 약 0.01mg/ml 내지 약 0.1mg/ml의 농도의 다이나트륨 에틸렌다이아민테트라아세트산(EDTA)인 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
항체 농도가 약 50mg/ml 이하인 액체 조성물.
제 10 항에 있어서,
항체 농도가 약 2mg/ml, 약 2.5mg/ml, 약 5mg/ml, 약 10mg/ml, 약 20mg/ml, 약 22mg/ml 및 약 50mg/ml로 이루어진 군 중에서 선택되는 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
항산화제 및/또는 방부제를 추가로 포함하는 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
항산화제, 방부제 또는 둘 다를 포함하지 않는 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
하나 이상의 항체 약 0.5mg/ml 내지 약 50mg/ml, 히스티딘 완충제 약 1.0mM 내지 약 15mM, 트레할로스 이수화물 약 1mg/ml 내지 약 100mg/ml, PS20 약 0.01mg/ml 내지 약 0.15mg/ml 및 다이나트륨 EDTA 약 0.01mg/ml 내지 약 0.1mg/ml를 포함하고, pH가 5.8 내지 6.8인 액체 조성물.
제 13 항에 있어서,
하나 이상의 항체 약 0.5mg/ml 내지 약 50mg/ml, 히스티딘 완충제 약 1.0mM 내지 약 15mM, 트레할로스 이수화물 약 1mg/ml 내지 약 100mg/ml, PS20 약 0.01mg/ml 내지 약 0.15mg/ml 및 다이나트륨 EDTA 약 0.01mg/ml 내지 약 0.1mg/ml로 이루어지고, pH가 5.8 내지 6.8인 액체 조성물.
제 14 항 또는 제 15 항에 있어서,
하나 이상의 항체 약 2.5mg/ml, 5mg/ml, 10mg/ml, 20mg/ml, 22mg/ml 또는 약 50mg/ml, 히스티딘 완충제 약 10mM, 트레할로스 이수화물 약 84mg/ml, PS20 약 0.1mg/ml 및 다이나트륨 EDTA 약 0.05mg/ml를 포함하거나, 상기 구성으로 이루어지고, pH가 6.0±0.2인 액체 조성물.
제 14 항 또는 제 15 항에 있어서,
하나 이상의 항체 약 2.5mg/ml, 5mg/ml, 10mg/ml, 20mg/ml, 22mg/ml 또는 약 50mg/ml, 히스티딘 완충제 약 10mM, 트레할로스 이수화물 약 84mg/ml, PS20 약 0.1mg/ml 및 다이나트륨 EDTA 약 0.05mg/ml를 포함하거나, 상기 구성으로 이루어지고, pH가 5.8 내지 6.5인 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
하나 이상의 항체가 인간 또는 인간화된 단클론 항체인 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
하나 이상의 항체가 면역글로불린 G2(IgG2) 항체인 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
하나 이상의 항체가 약 2nM 이하의 Kd로 인간 신경 성장 인자(NGF)에 결합하는 액체 조성물.
삭제
제 1 항에 있어서,
하나 이상의 항체가 서열 번호 16에 나타난 중쇄 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열, 및 서열 번호 17에 나타난 경쇄 아미노산 서열과 90% 이상 동일한 아미노산 서열을 포함하는 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
항체가 서열 번호 1의 가변 중쇄 서열, 및 서열 번호 2의 가변 경쇄 서열을 포함하는 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
냉동 건조되지 않은 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
다중 동결 해동 주기 후 항체의 응집에 대해 저항성인 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
약 40℃의 온도에서 약 26주 이상의 기간 동안 보관될 수 있고 이때 항체의 응집 증가가 약 10% 미만인 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
약 40℃의 온도에서 약 26주 이상의 기간 동안 보관될 수 있고 이때 항체의 산화 증가가 약 10% 미만인 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
약 40℃의 온도에서 약 26주 이상의 기간 동안 보관될 수 있고 이때 항체의 활성 감소가 약 10% 미만인 액체 조성물.
제 1 항에 있어서,
2 내지 8℃의 온도에서 약 26주 이상의 기간 동안 보관될 수 있고 이때 항체의 응집 증가가 약 10% 미만인 액체 조성물.
삭제
제 1 항, 제 3 항 내지 제 6 항, 제 8 항 내지 제 15 항, 제 18 항 내지 제 20 항 및 제 22 항 내지 제 29 항 중 어느 한 항에 있어서,
매 8주 마다 1회의 투여량으로 포유동물에게 투여되는 액체 조성물.
제 31 항에 있어서,
투여량 부피가 약 2.5ml 이하인 액체 조성물.
제 31 항에 있어서,
투여량이 항체 50mg 이하를 함유하는 액체 조성물.
제 31 항에 있어서,
투여량의 투여가 정맥내 또는 피하인 액체 조성물.