KR101269594B1 - Ｌ형 폴리감마글루탐산을 생산하는 신규 미생물 바실러스 메가테리움 토하 및 이로부터 생산된 ｌ형 폴리감마글루탐산 - Google Patents

Ｌ형 폴리감마글루탐산을 생산하는 신규 미생물 바실러스 메가테리움 토하 및 이로부터 생산된 ｌ형 폴리감마글루탐산 Download PDF

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Abstract

본 발명은 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 신규 미생물 및 그로부터 생산된 L형 폴리감마글루탐산에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 한국의 전통 발효식품인 토하젓으로부터 분리된 바실러스 메가테리움 Toha (Bacillus megaterium Toha, KCTC11752BP) 및 상기 균주를 이용하여 생산된 폴리감마글루탐산에 관한 것이다.
본 발명에 따른 신규 미생물 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)은 고부가가치의 미생물제제, 생균제제, 면역활성제, 동물용의약품 소재, 화장품 소재, 흡습제, 증점제 생분해성 플라스틱 용재로 사용될 수 있는 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 능력을 가진다.

Description

Ｌ형 폴리감마글루탐산을 생산하는 신규 미생물 바실러스 메가테리움 토하 및 이로부터 생산된 Ｌ형 폴리감마글루탐산{Novel Microorganism Bacillus megaterium Toha Producing L Type Poly Gamma Glutamic Acid and L Type Poly Gamma Glutamic Acid Produced by Therof}
본 발명은 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 신규 미생물 및 이로부터 생산된 L형 폴리감마글루탐산에 관한 것으로, 더욱 자세하게는 한국의 전통 발효식품인 토하젓으로부터 분리된 바실러스 메가테리움 Toha (Bacillus megaterium Toha, KCTC11752BP) 및 이로부터 생산된 L형 폴리감마글루탐산에 관한 것이다.
폴리감마글루탐산은 D, L-글루탐산이 감마-글루타밀(-glutamyl) 결합된 중합체인 점액성 물질로서, 볏짚을 이용한 한국의 전통 콩발효식품인 "청국장", 일본의 전통 콩발효식품인 "낫또", 네팔의 전통 콩발효식품인 "키네마" 등에서 분리된 바실러스 속 균주로부터 생산된다. 바실러스 속 균주에 의해 생산되어지는 폴리감마글루탐산은 구성되는 글루탐산의 입체특이성에 따라 D-글루탐산으로만 구성된 D형 폴리감마글루탐산, L-글루탐산으로만 구성된 L형 폴리감마글루탐산, 그리고 D, L-글루탐산으로 구성된 DL형 폴리감마글루탐산으로 분류된다. 상기 D,L형 폴리감마글루탐산은 식용, 수용성, 음이온성, 생분해성 고분자물질(분자량: 100 ~ 2,000 kDa)로 흡습제, 보습제 및 화장품의 원료, 에스테르 유도체의 합성에 의한 자연분해성 플라스틱의 제조를 위한 소재 물질로 이용이 가능하다.
최근, 폴리감마글루탐산의 생산과 이용에 관하여 난분해성 중합체의 대체상품 소재, 에스테르화 반응에 의한 내열성 플라스틱의 개발과 수용성 섬유 및 막생산 등에 관심을 둔 연구가 선진공업국을 중심으로 활발히 진행되고 있다. 또한, 폴리감마글루탐산에 감마선을 조사할 경우, 발생되는 물성변화 연구 및 가교결합제에 의한 수화겔(hydrogel)의 개발 및 산업화 연구가 추진되고 있다.
예를 들면, 폴리감마글루탐산의 조성, 폴리감마글루탐산 생산에 미치는 망간 이온의 영향, 초음파 분해에 의한 수용성 중합체로의 이용에 대한 연구 및 에스테르 유도체의 합성에 의한 저수용성 플라스틱의 개발(Biosci. Biotechnol. Biochem., 60:1239, 1996)과 바실러스 서브틸리스에 의한 폴리감마글루탐산 생산 및 칼슘 용해제로서의 골다공증 치료효과를 가진 건강식품으로의 활용(일본특허공개 평6-32742호) 등이 보고되고 있다. 이외에, 수계의 인 함량을 감소시켜 수질오염을 감소시키는 효과(유럽특허 제838160호)와, 방사선 조사에 의한 고겔화성, 흡수성을 가진 생분해성 흡착성 수지를 제조하여 기저귀 등의 위생용품, 식품, 원예산업에의 응용(일본특허공개 平10-251402호) 및 활용(일본특허공개 平7-300522호, 일본특허공개 平6-322358호) 등에 관한 보고가 있다.
또한, 폴리감마글루탐산의 용해, 침전 및 건조에 의한 고형화 생분해성 섬유나 필름 및 필름형성제로서의 이용(일본특허공개 平7-138364호, 일본특허공개 平5-117388호), 약물담체용 폴리머(참조: 일본특허공개 平6-92870호, 일본특허공개 平6-256220호) 등에 대한 보고도 있다.
한편, 한국에서는 폴리감마글루탐산의 효율적 생산(참조: 대한민국 특허출원 제1997-3404호, 대한민국 특허출원 제1997-67605호)과 물성 개선 등과 같은 기초 연구와 함께, 주식회사 태평양에 의해 바실러스 낫또 균주가 생산한 폴리감마글루탐산을 화장품의 원료물질로 이용하고자 하는 응용연구가 진행되고 있다.
L형 폴리감마글루탐산은 일정한 입체구조를 형성함으로 염의 존재하에서 보습성이 증가함이 보고되었고, 따라서 L형 폴리감마글루탐산은 신규 보습소재로의 이용에 관해 보고되고 있다 (ToYoBo CO., LTD. 2007. 4. 6).
본 발명자들은 청국장으로부터 내염성 균주인 바실러스 서브틸리스 청국장 (Bacillus subtilis var. chungkookjang, KCTC 0697BP)균주를 분리하고, 상기 바실러스 서브틸리스 청국장 균주가 D/L 글루탐산 비가 40/60인 폴리감마글루탐산을 생성하는 것을 확인한바 있다(대한민국 등록특허 제0500796호).
L 형 폴리감마글루탐산을 생산하는 균주로는 바실러스 메가테리움 WH320 균주가 알려져 있으나, 상기 균주는 고염상태에서만 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 것으로 보고되고 있다(Shimizu, K. et al, Appl. Environ. Microbiol., 73:2378, 2007, 일본특허공개 제2007-228957호).
이에, 본 발명자들은 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 새로운 균주를 개발하고자 예의 노력한 결과, 토하젓으로부터 분리한 신규 바실러스 메가테리움 Toha 균주가 저염 상태에서도, L형 함량이 높은 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 것을 확인하고, 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 목적은 신규 보습소재로 이용가능한 L 형 폴리감마글루탐산을 생산하는 신규 균주인 바실러스 메가테리움 Toha 균주(KCTC 11752BP)와 이로부터 생산된 L 형 폴리감마글루탐산을 제공하는데 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 신규 미생물 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)를 제공한다.
본 발명은 또한, 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)를 배양하는 단계 및 상기 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)의 배양 후 폴리감마글루탐산을 분리하는 단계를 포함하는 폴리감마글루탐산의 제조방법을 제공한다.
본 발명은 또한, 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)로부터 생산되고, 평균분자량이 8900kDa이고, D/L-글루탐산의 비율이 약 10/90인 L형 폴리감마글루탐산을 제공한다.
본 발명은 또한, 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP) 및 바실러스 메가테리움 Toha가 생산한 폴리감마글루탐산을 함유하는 생균제제 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)로부터 생산되고, 평균분자량이 8900kDa이고, D/L-글루탐산의 비율이 약 10/90인 L형 폴리감마글루탐산을 함유하는 면역증강용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 또한, 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)로부터 생산되고, 평균분자량이 8900kDa이고, D/L-글루탐산의 비율이 약 10/90인 L형 폴리감마글루탐산을 함유하는 기능성 식품을 제공한다.
본 발명은 또한, 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)로부터 생산되고, 평균분자량이 8900kDa이고, D/L-글루탐산의 비율이 약 10/90인 L형 폴리감마글루탐산을 함유하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 신규 미생물 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)은 고부가가치의 화장품 소재, 흡습제, 생분해성 플라스틱 용재로 사용될 수 있는 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 능력을 가진다.
도 1은 본 발명에 따른 신규 미생물 바실러스 메가테리움 Toha의 투사전자현미경 사진이다.
도 2는 본 발명에 따른 신규 미생물 바실러스 메가테리움 Toha의 16S rDNA를 이용한 상동성 분석결과를 나타낸 것이다.
도 3은 본 발명에 따른 신규 미생물 바실러스 메가테리움 Toha의 NaCl 농도별 L형 폴리감마글루탐산의 D, L-글루탐산의 입체 특이성을 나타낸 그래프이다.
도 4는 신규 미생물 바실러스 메가테리움 Toha 생산 폴리감마글루탐산의 대식세포자극효과(TNF-α분비유도)를 확인한 그래프이다.
도 5는 신규 미생물 바실러스 메가테리움 Toha 생산 폴리감마글루탐산과 기존 바실러스 서브틸리스 청국장 생산 폴리감마글루탐산의의 대식세포자극효과(TNF-α분비유도)를 비교한 그래프이다.
도 6은 신규 미생물 바실러스 메가테리움 Toha의 16S rDNA의 유전자 염기서열을 나타낸 것이다.
일 관점에서, 본 발명은 신규 미생물 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)에 관한 것이다.
본 발명에서는 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 미생물을 얻기 위하여, 대한민국 각지에서 생산, 시판되고 있는 발효식품인 토하젓을 수집하여 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 균주를 탐색분리하였다. 그 결과, 한국의 전통 콩발효식품인 청국장으로부터 분리된 바실러스 서브틸리스 청국장 (Bacillus subtilis var. chungkookjang)에 의해 생산되어지는 폴리감마글루탐산과 다른 형태의 폴리감마글루탐산을 생산하는 바실러스 균주, '바실러스 메가테리움 Toha'를 수득하였다.
본 발명에 따른 바실러스 메가테리움 Toha 균주는 식용, 수용성, 음이온성 및 생분해성을 가지는 L형 폴리감마글루탐산을 생산하며, 분리 및 동정 과정은 다음과 같다.
한국 전통발효식품인 젓갈 중 고염도의 젓갈로 알려진 토하젓으로부터 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 균주를 분리하기 위하여, 각각의 토하젓 시료를 0.85% NaCl에 현탁 후, 10% NaCl이 첨가된 폴리감마글루탐산 생산 한천 평판배지 에서 배양하여 점성물질을 생산하는 균주의 집락을 순수 분리하였다. 이들 분리균을 10% NaCl이 첨가된 폴리감마글루탐산 생산 액체배지에서 배양한 후, 생산된 폴리감마글루탐산의 생산량, 평균분자량 및 D,L-glutamate 비율을 확인하여 특별한 DL-glutamate 비율을 나타내는 균주를 선별하였다.
선별된 균주는 LB 한천 평판배지에서 배양하였을 때, 노란색의 균집락을 형성하며, 37℃ 이상의 호기적 조건에서 균체의 성장이 활발한 그람양성균으로서 55℃ 이상의 배양온도에서는 균체 성장이 둔화되는 특성이 있다. 또한, 본 발명 균주는 일반적인 바실러스 서브틸리스가 지니는 식염 내성 농도보다 높은 10%의 식염(NaCl) 농도에서도 생육이 가능한 내염성 균주이며, 본 발명 분리 균주의 16S rDNA 염기서열을 종래 바실러스 속 균주의 16S rDNA 염기서열과 비교분석한 결과, 바실러스 메가테리움(Bacillus megaterium)과 매우 높은 16S rDNA 염기서열의 상동성(99.0%)을 나타내었다.
상기 선별된 균주는 오랜 시간동안 식용으로 사용되어 안전성이 입증된 토하젓에서 수득된 것이다. 따라서 상기 균주가 생산하는 고분자량의 L형 폴리감마글루탐산은 식품, 음료, 건강식품, 화장품, 의약품 등에 첨가하여 사용하는데 있어서, 안전성을 가질 수 있다.
다른 관점에서, 본 발명은 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)를 배양하는 단계 및 상기 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)의 배양 후 폴리감마글루탐산을 분리하는 단계를 포함하는 폴리감마글루탐산의 제조방법에 관한 것이다.
또 다른 관점에서, 본 발명은 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)로부터 생산되고, 평균분자량이 8900kDa이고, D/L-글루탐산의 비율이 약 10/90인 L형 폴리감마글루탐산에 관한 것이다.
또다른 관점에서, 본 발명은 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP) 및 바실러스 메가테리움 Toha가 생산한 폴리감마글루탐산을 함유하는 생균제제 조성물에 관한 것이다.
또다른 관점에서, 본 발명은 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)로부터 생산되고, 평균분자량이 8900kDa이고, D/L-글루탐산의 비율이 약 10/90인 L형 폴리감마글루탐산을 함유하는 면역증강용 약학조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따른 면역증강용 약학조성물의 인체에 대한 투여량은 환자의 나이, 몸무게, 성별, 투여형태, 건강상태, 투여경로 및 질환 정도에 따라 달라질 수 있다. 그러나 바람직한 효과를 위하여, 1회 투여량은 0.1~10 g/kg이 바람직하며, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다. 또한, 연령, 성별, 체중 및 건강상태에 따라 증감될 수 있다.
또다른 관점에서, 본 발명은 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)로부터 생산되고, 평균분자량이 8900kDa이고, D/L-글루탐산의 비율이 약 10/90인 L형 폴리감마글루탐산을 함유하는 기능성 식품에 관한 것이다.
또다른 관점에서, 본 발명은 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)로부터 생산되고, 평균분자량이 8900kDa이고, D/L-글루탐산의 비율이 약 10/90인 L형 폴리감마글루탐산을 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 화장료 조성물은 항산화제, 결합제, 벌크화제(bulking agent), 킬레이트제, 색소, 연화제, 에멀션 안정제, 막형성제, 충전재, 방향 성분, 젤화제, 두발 조절제, 헤어 고정제, 습윤제, 가소제, 보존제, 피부 조절제, 용매, 햇빛차단제, 계면활성제, 자외선 흡수제, 점도조절제, 왁스 등의 형태로 사용가능하다.
본 발명의 신규한 분리균주인 '바실러스 메가테리움 Toha'는 종래 폴리감마글루탐산을 생산하는 균주인 바실러스 메가테리움 균주가 높은 염농도에서 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 것과 달리 낮은 염농도에서도 고분자량의 L형 폴리감마글루탐산을 생산하였다. 전기한 결과로부터 본 발명의 균주를 바실러스 메가테리움 Toha로 분류하여 "바실러스 메가테리움 Toha" (Bacillus megaterium Toha)로 명명하고, 생명공학연구소 유전자은행(KCTC, 대전광역시 유성구 어은동 52 소재)에 KCTC 11752BP의 수탁번호로 기탁하였다.
본 발명의 바실러스 메가테리움 Toha 균주에 의해 생산되는 폴리감마글루탐산의 분자량은 8,900 kDa이었으며, 기존에 고분자량 폴리감마글루탐산을 생산하는 균주로 보고된 B. subtilis Chungkookjang에 의해 생산되는 폴리감마글루탐산처럼 고분자량이며, 그 분자량 분포도 균일한 것을 확인할 수 있다.
또한, 본 발명의 바실러스 메가테리움 Toha 균주를 NaCl을 농도별로 첨가한 LG 고체배지에서 배양하여, 폴리감마글루탐산의 단량체인 D,L-글루탐산의 구성비를 조사한 결과, 종래 폴리감마글루탐산을 생산하는 균주인 바실러스 메가테리움 균주가 높은 염농도에서 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 것과 달리(Shimizu, K. et al, Appl. Environ. Microbiol., 73:2378, 2007, 일본특허공개 제2007-228957호), 낮은 염 농도에서도 고분자량의 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 것을 확인하였다.
또한, 본 발명의 바실러스 메가테리움 Toha 균주에 의해 생산된 L형 폴리감마글루탐산은 면역반응에 주요한 역할을 하는 대식세포의 활성화 지표로서 대식세포가 분비하는 TNF-a의 분비를 유도한다는 것을 확인하였다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 미생물의 분리
한국 전통발효식품인 젓갈 중 고염도의 젓갈로 알려진 토하젓으로부터 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 균주를 분리하기 위하여, 각각의 토하젓 시료를 0.85% NaCl에 현탁시킨 다음, 10% NaCl이 첨가된 폴리감마글루탐산 생산 한천 평판배지 (L-glutamic acid 2%, Glucose 5%, MgSO4 7H2O 0.5%, (NH4)2SO4 1%, KH2PO4 0.27%, Na2HPO4 0.4%, NaCl 10%, Thiamin 0.0002%, Agar 2%)에 도말한 다음, 37℃ 항온기에서 배양하여 점성물질을 생산하는 균주의 집락을 순수 분리하였다. 이들 분리균을 10% NaCl이 첨가된 폴리감마글루탐산 생산 고체배지에 접종하여 37℃에서 배양한 후 생산된 PGA의 평균분자량 및 D,L-글루탐산 비율을 확인하여 L-글루탐산 비율이 높은 균주를 최종적으로 선별하였다.
실시예 2: 균주의 동정
선별된 균주의 동정은 AIP system을 사용한 생화학적 특성, 투사전자현미경(transmission electron microscope)을 사용한 형태학적, 16S rDNA의 분석을 통하여 동정하였다. 선별된 균주는 그람양성으로 긴 막대모양의 간균이며 호기성으로 포자를 형성하는 바실러스 속의 균주임을 확인할 수 있었다 (도 1).
선별된 균주의 정확한 동정을 위하여, 16S rDNA의 유전자 염기서열 분석을 실시하였다. 통상의 방법으로, 선별된 균주의 DNA를 분리하고, N-말단 프라이머(5'-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3': 서열번호 2)와 C-말단 프라이머(5'-AGAAAGGAGGTGATCCAGCC-3':서열번호 3)를 사용하여 16S rDNA 유전자를 PCR로 증폭한 후, 플라스미드 pGEM-T 벡터에 클로닝하여 전체 염기서열을 결정하였다.
선별된 미생물의 16S rDNA 염기서열(서열번호 1)을 종래 보고된 여러 미생물의 16S rDNA 염기배열과 상동성을 비교한 결과, 도 3에 나타난 바와 같이, 바실러스 메가테리움과와 99.0% 이상의 상동성을 보였다. 상기 결과로부터 상기 선별된 균주를 바실러스 메가테리움으로 분류하고, "바실러스 메가테리움 Toha" (Bacillus megaterium Toha)로 명명하고, 생명공학연구소 유전자은행(KCTC, 대전광역시 유성구 어은동 52 소재)에 KCTC 11752BP의 수탁번호로 기탁하였다.
실시예 3: 폴리감마글루탐산의 분자량 및 점도의 비교
바실러스 메가테리움 Toha 균주를 LG 고체배지(L-glutamic acid 2%, Glucose 5%, MgSO4 7H2O 0.5%, (NH4)2SO4 1%, KH2PO4 0.27%, Na2HPO4 0.4%, NaCl 0.5% - 10%, Thiamin 0.0002%, Agar 2%)에서 5일간 배양한 후 전기한 방법으로, 폴리감마글루탐산을 분리하고 젤 투과 크로마토그라피(Viscotek GMPWXL (7.6 mm ID X 300mm))를 이용하여 분자량을 분석하였다. 겔여과 크로마토그래피는 0.1M NaNO3 용액을 용매로, 용매의 유속은 분당 0.8 ml이며 칼럼오븐 온도 40 ℃에서 실시하였다. 표준물질로는 polyacrylamide (American Polymer Standards Corporation, USA)를 사용하였고, 굴절지수 측정기를 이용하여 폴리감마글루탐산의 분자량을 측정하였다.
그 결과, 표 1에 나타낸 바와 같이 바실러스 메가테리움 Toha 균주가 생산하는 폴리감마글루탐산은 Mw(평균 분자량, weight average molecular weight)가 약 8,900 kDa, 분자량 분포도(polydispersity)가 약 4.2임을 알 수 있었다. 이로써 바실러스 메가테리움 Toha 균주가 생산하는 폴리감마글루탐산이 기존에 고분자량 폴리감마글루탐산을 생산하는 균주로 보고된 B. subtilis Chungkookjang에 의해 생산되는 폴리감마글루탐산처럼 고분자량이며, 그 분자량 분포도 균일한 것을 확인할 수 있다.
폴리감마글루탐산의 분자량
PGA 생산균주 평균분자량 (kDa) polydipersity
B.subtilis Chungkookjang 7,000 5.3
B.megaterium Toha 8,900 4.2
B.megaterium WH320 1,000 ~ 2,000
또한, 바실러스 메가테리움 Toha 균주가 생산하는 8,900 kDa 폴리감마글루탐산을 가온처리하여 분자량별 시료를 제조하여 기존의 바실러스 서브틸리스 청국장에서 생산된 폴리감마글루탐산의 점도와 비교한 결과, 동일한 분자량대의 폴리감마글루탐산의 점도가 유사한 것을 확인할 수 있다.
폴리감마글루탐산의 점도 (1 %, in DW)
평균분자량 B.subtilis Chungkookjang 생산 PGA의 점도 B.megaterium Toha 생산 PGA의 점도
8,000 kDa 670 680
5,000 kDa 500 490
1,500 kDa 90 80
500 kDa 27 25
50 kDa 6 5
실시예 4 : 폴리감마글루탐산의 D, L-글루탐산의 입체 특이성 조사
본 발명의 분리균주가 생산하는 폴리감마글루탐산의 구성성분인 D,L-글루탐산의 조성을 조사하였다.
본 발명의 분리균주가 생산하는 폴리감마글루탐산의 단량체인 D,L-글루탐산의 구성비를 조사하고자, 본 발명의 분리균주를 폴리감마글루탐산 생산 배지에 접종하여 37℃ 항온기에서 48시간 동안 배양한 다음, 상기의 분리방법과 동일하게 분리하여 얻은 폴리감마글루탐산 시료에 0.1 N 염산을 가하여 탈기시킨 후, 105 ℃에서 10시간 동안 가수분해하였다.
상기 가수분해 산물의 아미노산 조성 분석은 18% Acetonitrile을 함유하는 50mM triethyl amine-H3PO4 (pH 3.7) 용매를 이용하여 Nova-pak C18 (Waters) HPLC 컬럼을 사용하여 분석하였다. 입체 이성질체의 분리는 FDAA를 이용하여 D,L-글루탐산의 아미노 말단부위를 유도체화 시킨 후, UV측정기 (UV detector)를 이용하여 340nm에서 D,L-글루탐산의 표준곡선에 준해 폴리감마글루탐산의 구성 성분인 D,L-글루탐산을 정량하였다. 생산된 폴리감마글루탐산을 구성하는 단량체인 D,L-글루탐산의 함량을 조사한 결과는 표 3에 나타낸 바와 같이, 본 발명의 분리균주가 생산하는 폴리감마글루탐산에서는 D/L-글루탐산의 비율은 약 10/90으로 L형 폴리감마글루탐산을 생산함을 확인하였다.
폴리감마글루탐산의 D,L-글루탐산 구성비
PGA 생산균주 DL-glutamate 비율
D-glutamate L-glutamate
B. subtilis Chungkookjang 60 40
B. megaterium Toha 10 90
실시예 5 : NaCl 농도별 폴리감마글루탐산의 D, L-글루탐산의 입체 특이성 조사
바실러스 메가테리움 Toha 균주가 생산하는 폴리감마글루탐산의 단량체인 D,L-글루탐산의 구성비가 NaCl 농도가 증가함에 따라 변화하는지 확인하기 위하여, 본 발명의 분리균주를 NaCl을 농도별로 첨가한 LG 고체배지를 제조하여 37℃ 항온기에서 48시간 동안 배양한 후, 상기의 방법과 동일한 방법으로 폴리감마글루탐산의 단량체인 D,L-글루탐산의 구성비를 조사하였다. 그 결과, 도 3에 나타낸 것과 같이, 종래 폴리감마글루탐산을 생산하는 균주인 바실러스 메가테리움 균주가 높은 염농도에서 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 것과 달리(Shimizu, K. et al, Appl. Environ. Microbiol., 73:2378, 2007, 일본특허공개 제2007-228957호), 낮은 염 농도에서도 고분자량의 L형 폴리감마글루탐산을 생산하였다.
실시예 6 : 폴리감마글루탐산에 의한 대식세포에서의 TNF-α의 분비 유도
본 발명의 바실러스 메가테리움 Toha 균주에 의해 생산된 L형 폴리감마글루탐산이 면역계의 일차적인 면역반응에 주요한 역할을 하는 대식세포(macrophage)의 활성화에 미치는 영향을 확인하였다.
대식세포의 활성화에 대한 지표로서 대식세포가 분비하는 주요한 사이토카인으로, innate immunity의 반응을 매개하는 TNF-α의 분비를 검사하였다.
이를 위해 Balb/c 마우스의 대식세포주인 RAW 264.7(ATCC TIB-71)를 DMEM (100U/ml 페니실린-스트렙토마이신, 10% FBS 첨가) 배지에 부유시킨 후, 6 well 플레이트에 5 x 105cell/well로 분주하여 12시간 동안 CO2 배양기에서 배양한 다음 폴리감마글루탐산을 0.1% 농도로 FBS가 포함되지 않은 DMEM 배지에 희석하여 24시간 동안 배양하였다. 24시간 후, 각 well의 배양 상등액을 수거하였고, 수거된 배양 상등액에 존재하는 TNF-α의 분비량을 ELISA 키트(BD Bioscience, USA)를 이용하여 측정하였다. TNF-α의 항마우스 단클론항체를 4℃에서 96웰 플레이트에 12시간 동안 코팅한 후 표준용액 100㎕와 배양상등액 100㎕를 넣고 상온에서 1시간 동안 반응시켰다. 그 후 세척완충액(250㎕/well)으로 3회 세척한 다음, 제1차 항체인 biotinylated 항마우스 TNF-α 각각의 다클론 항체 100㎕을 첨가하여 1시간 동안 상온에서 반응시킨 후, 세척 완충액(250㎕/well)으로 3회 세척하였다. 이후에 제2차 항체인 아비딘-호오스래디쉬-퍼옥시다아제 컨쥬게이트(avidin- horseradish peroxidase conjugate)를 100㎕ 넣어 상온에서 1시간동안 반응시키고 3회 세척한 후, TMB 발색용액으로 15분 동안 반응시킨 다음 50㎕의 고정 용액(stop solution)으로 발색을 고정시켰다. 그리고 450nm에서 ELISA 리더로 측정하여 TNF-α 각각의 양을 분석하였다. 양성 대조군으로서는 lipopolysaccaride (LPS, E. coli)를 1 ng/ml의 농도로 첨가하여 사용하였다.
그 결과, 폴리감마글루탐산이 대식세포 자극제로서 효과를 가진다는 것을 확인할 수 있었으며 (도 4), 이로부터 본 바실러스 메가테리움 Toha 균주에 의해 생산된 L형 폴리감마글루탐산이 면역반응에 주요한 역할을 하는 대식세포의 활성화 지표로서 대식세포가 분비하는 TNF-α의 분비를 유도한다는 것을 확인할 수 있었다.
또한, 기존 바실러스 서브틸리스 청국장 생산 폴리감마글루탐산과 본 바실러스 메가테리움 Toha 생산 폴리감마글루탐산의 대식세포 자극에 의한 TNF-α의 분비능을 비교 분석한 결과 도 5에서 보는 바와 같이 8,000 kDa의 경우 바실러스 메가테리움 Toha가 생산한 폴리감마글루탐산의 대식세포 자극에 의한 TNF-α의 분비능이 기존 바실러스 서브틸리스 청국장 생산 폴리감마글루탐산에 비해 1.4배, 5,000 kDa의 경우 1.5배, 1,500 kDa의 경우 1.7 배 우수함을 확인하였다.
한국생명공학연구원 KCTC11752BP 20100825
서열목록 전자파일 첨부

Claims (10)

  1. 염농도 0.1~2%에서도 L형 폴리감마글루탐산을 생산하는 것을 특징으로 하는 신규 미생물 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP).
  2. 제1항에 있어서, 발효식품에서 유래된 것을 특징으로 하는 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP).
  3. 제1항에 있어서, 서열번호 1로 표시되는 16S rDNA 서열을 가지는 것을 특징으로 하는 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP).
  4. 삭제
  5. 제1항의 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)를 배양하는 단계 및 상기 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)의 배양 후 폴리감마글루탐산을 분리하는 단계를 포함하는 폴리감마글루탐산의 제조방법.
  6. 삭제
  7. 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP) 및 바실러스 메가테리움 Toha가 생산한 폴리감마글루탐산을 함유하는 생균제제 조성물.
  8. 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)로부터 생산되고, 평균분자량이 8900kDa인 L형 폴리감마글루탐산을 함유하는 면역증강용 약학 조성물.
  9. 바실러스 메가테리움 Toha (KCTC 11752BP)로부터 생산되고, 평균분자량이 8900kDa인 L형 폴리감마글루탐산을 함유하는 기능성 식품.

  10. 삭제
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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101583600B1 (ko) * 2015-06-10 2016-01-21 장영웅 신규한 바실러스 메가테리움 균주 및 이의 용도

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9974785B2 (en) 2014-07-08 2018-05-22 Sunshine Lake Pharma Co., Ltd. Aromatic heterocyclic derivatives and pharmaceutical applications thereof
CN111801078B (zh) * 2018-03-20 2022-03-01 大王制纸株式会社 带型一次性尿布
JP6488040B1 (ja) * 2018-03-20 2019-03-20 大王製紙株式会社 テープタイプ使い捨ておむつ
KR20230035254A (ko) * 2020-05-26 2023-03-13 자이모켐 인코포레이티드 생분해성 고성능 흡수성 중합체 및 이의 방법
CN113025533B (zh) * 2021-04-20 2023-03-28 江南大学 一株产丁酸的芽孢杆菌菌株筛选及其应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0632742A (ja) * 1992-07-15 1994-02-08 Kikkoman Corp カルシウムイオン可溶化剤の製造法
KR970067605A (ko) * 1996-03-13 1997-10-13 조셉 제이. 스위니 처리 챔버의 세정 동안 서셉터를 보호하기 위한 세라믹 웨이퍼 사용 방법 및 그 장치
KR100500796B1 (ko) 2001-01-11 2005-07-12 주식회사 바이오리더스 고분자량의 폴리-감마-글루탐산을 생산하는 내염성 균주 바실러스 서브틸리스 청국장

Family Cites Families (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2035738C (en) * 1990-02-07 2001-04-24 Zongling Liu Biological agent for control of crop fungal disease
US7364875B2 (en) * 2003-10-30 2008-04-29 Cresent Innovations, Inc. Method for producing medical and commercial grade poly-gamma-glutamic acid of high molecular weight
JP5119435B2 (ja) * 2006-02-03 2013-01-16 国立大学法人高知大学 光学純度の高いポリ−γ−グルタミン酸の製造方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPH0632742A (ja) * 1992-07-15 1994-02-08 Kikkoman Corp カルシウムイオン可溶化剤の製造法
KR970067605A (ko) * 1996-03-13 1997-10-13 조셉 제이. 스위니 처리 챔버의 세정 동안 서셉터를 보호하기 위한 세라믹 웨이퍼 사용 방법 및 그 장치
KR100500796B1 (ko) 2001-01-11 2005-07-12 주식회사 바이오리더스 고분자량의 폴리-감마-글루탐산을 생산하는 내염성 균주 바실러스 서브틸리스 청국장

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Applied and Environmental Microbiology, Vol.73, pp.2378-2379 (2007.04.) *
Applied and Environmental Microbiology, Vol.73, pp.2378-2379 (2007.04.)*

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101583600B1 (ko) * 2015-06-10 2016-01-21 장영웅 신규한 바실러스 메가테리움 균주 및 이의 용도

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