KR101231938B1 - 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 콕시디움에 대한 항원충 활성을 갖는 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 콕시디움에 대한 뛰어난 항콕시디움 효과 및 증체효과를 나타내므로, 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 치료에 유용하게 이용될 수 있다.

Description

오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 치료용 조성물 {Composition comprising the extract of Galla Rhois for preventing and treating the disease caused by Coccidium}

본 발명은 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 치료용 조성물 및 사료첨가제에 관한 것이다.

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[문헌 12] Daugschies et al.. Vet. Parasitol . 103, pp. 299-308, 2002.

콕시디움증은 인수공통전염병으로서 공중보건학적 측면과 산업동물(소, 돼지, 닭 등)에 피해를 유발하는 질병으로서 축산업 전반에 걸쳐 문제를 야기하는 질병이다. 특히, 산업동물에 감염 시 증체율 감소, 사료 효율 저하, 폐사 등으로 인한 경제적 손실이 상당하다. 특히 양계산업에 있어서 전 세계적으로 연간 15억 달러 이상의 경제적 손실을 초래한다.

콕시디움(Eimeriaspp., Toxoplasmagondii)은 동물 및 사람에게 질병을 유발하여 사망에까지 이르게 하지만, 뚜렷한 치료제가 없어 미생물 치료제인 항생제를 사용하여 왔으나 높은 치료 비용에도 불구하고 치료효율은 극히 낮은 것으로 알려져 있다. 콕시디움의 감염은 혈액제품, 조직 이식, 저온 살균하지 않은 우유, 조리하지 않은 돼지고기를 먹는 것을 통하여 일어난다. 또한 콕시디움은 임신에 의한 선천성 감염의 중요한 원인 중의 하나이며, 후천성면역결핍증후군(AIDS) 환자에서 콕시디움은 콕시디움성 뇌염을 일으키고 생존율을 감소시킨다.

양계 산업에 있어서 콕시디움 감염증의 원인체는 아이메리아증(Eimeria), 류코싸이토준(Leucocytozoon), 헤모프로테우스(Haemoproeus) 톡소플라즈마(Toxopla sma), 근육포자충(Sarcocystis) 및 크립토스포리디움(Cryptosporidium) 등이 보고되고 있으나, 이들 중 Eimeria에 의한 피해가 가장 심각하다. 양돈 산업에 있어서 주요 콕시디움 감염증 원인체는 Eimeria, Isospora, Cryptosporidia 및 Toxoplasma 등으로 보고된다. 양계 산업의 특징인 집단 및 밀집 사육으로 인하여 전세계적으로 콕시디움의 폭발적인 발생을 초래하게 되었으며 이에 따라 설파제, 암푸로륨과 같은 화학요법제의 치료가 널리 이용되었고, 이 질병에 대한 예방 목적으로 개발되어 온 각종 항콕시디움 약제들을 사료에 첨가하여 지속적으로 투약함으로써 콕시디움 발생을 다소 억제 할 수 있었으나 이들 항생제를 수십 년에 걸쳐 지속적, 장기적으로 투여함으로써 항생제 내성을 가진 원충이 출현하게 되었고, 결과적으로 이미 개발된 항생제들의 사용 수명이 단축된다. 국내 축산업에서 콕시디움증 발생으로 인한 피해가 막대하며, 매년 이 질병의 예방과 치료를 위해 사용하는 각종 수입 항콕시디움 약제의 판매량이 연간 100억 원을 초과하고 있는 실정이다. 첨복포자충류인 콕시디움, 크립토스포리디움, 열원충, 콕시디움류는 대부분이 인수공통 감염병이며 사람 및 동물에 질환을 일으킴으로써 인류에 대한 피해와 함께 많은 가축 사육 농가 및 육가공 사업에 피해를 초래하고 있다.

최근 산업동물의 집단 및 밀집 사육으로 인하여 전 세계적으로 콕시디움의 폭발적인 발생을 초래하게 되었으며, 이에 따라 설파제, 암푸로륨과 같은 화학요법제의 치료가 널리 이용되었고, 이 질병에 대한 예방 목적으로 개발되어 온 각종 항콕시디움 약제들을 사료에 첨가하여 지속적으로 투약함으로써 콕시디움 발생억제가 다소 가능하였다. 그러나 이들 항생제를 수십 년에 걸쳐 지속적, 장기적으로 투여함으로써 항생제 내성을 가진 원충이 출현하게 되었고, 결과적으로 이미 개발된 항생제들의 사용 수명이 단축되었다. 이에 따라 새로운 약제들의 계속적인 개발이 필요하나 최근 약제잔류에 의한 축산식품의 안전성 규제의 강화 및 신종 개발 약제들에 대한 법적 규제의 강화 등으로 인한 신종 약품의 개발비용 증가로 연구기관 및 제약회사의 약제 개발에 대한 의욕이 상실되고 있는 실정이다.

최근 콕시디움에 대한 병원성 있는 원충주나 병원성을 감소시킨 약독주 백신이 상품화 되어 있으나 생독백신은 음수 투여하는 경우에는 물에 희석된 상태에서 장시간 경과하면 역가가 저하될 수 있다. 또한 콕시디움의 oocyst가 이중벽으로 둘러싸여 있어서 일반적인 소독약제로는 소독 효과가 거의 없는 실정이다(Daugschies et al.. Vet . parasitol . 103, pp 299-308).

오배자는 옻나무과(Anacardiaceae)에 속하는 붉나무(Rhus avanica L.)의 잎에 오배자 진딧물(Aphis chinensis J. Bell)이 자상(刺傷)을 주어 생긴 벌레집을 말하는데, 우리나라 각지에 분포한다. 오배자의 형태를 보면, 외면은 회갈색으로 연한 털이 있고, 길이는 3~7 cm, 폭 2~5 cm, 두께 2 mm 정도이며 단단하면서도 쉽게 부숴 진다. 속은 대개 비어 있거나 회백색의 죽은 벌레와 분비물이 남아 있을 때도 있고, 역겨운 냄새가 나기도 한다. 채집한 오배자는 햇볕에 말리거나 삶거나 찐다. 주성분은 피로가롤 탄닌(pyrogalloltannin)이 50~70% 함유되어 있으며, 몰식자산, 갈산(gallic acid) 등이 있다. 약효로는 수렴, 지사, 지혈제로 설사, 가래, 당뇨, 하혈, 빈혈 등에 이용한다(정보섭 외, 향약대사전, pp.380-384, 영림사, 1998).

본 과제는 사람을 포함한 동물에도 질병을 유발하는 인수공통 전염병 원인체인 세균 및 기생충에 대한 예방 및 치료제를 발굴하여 사업화를 추진하는 과제로서, 인체의 경우 본 질병에 대한 예방 및 치료제 개발이 가능하며, 최근 사회적 문제를 야기하고 있는 항생제 사용 규제에 대응할 수 있는 대체제 개발이 가능하다. 또한 산업동물 측면에서는 전염병 감염 환축의 매몰 및 침출수 유출에 의한 질병전파 및 환경오염 문제를 해결할 수 있으며, 사료첨가용으로 활용되고 있는 항생제의 무분별한 사용을 줄일 수 있고, 항생제 오남용으로 야기되는 사회적, 공중보건학적 비용을 줄일 수 있다. 또한, 항생제 내성원충의 문제점과 항생제 잔류에 의한 축산물의 안전성 문제를 최소화하여 국민의 안전한 먹거리 문화에 기여하고, 이들 질병이 사람에게 전파되는 것을 방지하여 국민보건에 이바지 하고자 한다.

이에 본 발명자들은 콕시디움에 대한 뛰어난 항원충 효과를 나타내는 천연물 제재를 개발하였고 육계실험에서 콕시디움(Eimeia tenella)에 대한 항원충 효과 및 증체 효과를 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.

상기 목적을 수행하기 위하여, 본 발명은 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 치료용 수의학 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 개선용 동물사료 첨가제 및 이를 포함하는 사료를 제공한다.

본 발명은 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.

또한, 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본원에서 정의되는 상기 추출물은 정제수를 포함한 물, C1 내지 C4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물에 가용한 추출물을 포함한다.

상기 콕시디움 세균 감염의 대상 동물은 사람, 돼지, 소, 염소 등의 포유동물; 잉어, 금붕어 등의 어류; 및 꿩, 닭, 오리, 칠면조 등의 가금류를 포함한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 오배자 추출물은, 건조된 오배자를 세절하여 건조 중량의 약 1 내지 20배, 바람직하게는 약 2 내지 6배(v/w)의 정제수를 포함한 물, C1 내지 C4의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매, 바람직하게는 물로, 20 내지 150℃, 바람직하게는 70 내지 120℃의 추출온도에서 약 1시간 내지 10일, 바람직하게는 약 2시간 내지 5시간 동안 냉침추출, 열수추출, 초음파 추출, 환류냉각 추출 등의 추출방법, 바람직하게는 환류냉각 추출방법을 이용하여 추출한 후 감압 농축하여 본 발명의 추출물을 수득할 수 있다.

본 발명은 상기의 제조공정으로 얻어진 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 치료용 수의학 조성물을 제공한다.

또한 본 발명은 상기 제조공정으로 얻어진 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 추출물을 함유하는 수의학 및 약학 조성물은 조성물 총 중량에 대하여 상기 추출물을 0.1 내지 50 중량%로 포함한다.

그러나 상기와 같은 조성은 반드시 이에 한정되는 것은 아니고, 환자의 상태 및 질환의 종류 및 진행 정도에 따라 변할 수 있다.

본 발명의 추출물 자체는 독성 및 부작용이 거의 없으므로 예방 목적으로 장기간 복용 시에도 안심하고 사용할 수 있다.

본 발명의 추출물의 수의학적 투여 형태는 이들의 수의학적 허용 가능한 염의 형태로도 사용될 수 있고, 또한 단독으로 또는 타 수의학적 활성 화합물과 결합뿐만 아니라 적당한 집합으로 사용될 수 있다.

본 발명의 추출물을 포함하는 수의학 조성물 및 약학 조성물은 수의학 조성물 및 약학 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 추출물을 포함하는 수의학 조성물 및 약학 조성물에 포함될 수 있는 부형제 및 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

본 발명의 추출물을 포함하는 수의학 조성물 및 약학 조성물은 충진제, 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향신료, 유화제, 방부제 등을 추가로 포함할 수 있는데, 본 발명에 의한 수의학적 조성물이 동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 제형화 될 수 있고, 제형은 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 용액, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 좌제, 멸균 주사용액, 멸균 외용제 등의 형태일 수 있다.

본 발명에 의한 수의학 조성물 및 약학 조성물은 동물/사람의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으나, 0.1 내지 100 ㎎/㎏의 양을 1일 1회 내지 수회 투여할 수 있다. 또한 오배자 분말의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다. 따라서 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명의 조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관내 (intracerebroventricular) 주사에 의해 투여될 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 공정에서 얻어지는 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 개선용 동물사료 첨가제 및 이를 포함하는 사료를 제공한다.

상기의 동물사료 첨가제용 오배자 추출물은 20 내지 90% 고농축액이거나 분말 또는 과립 형태일 수 있다.

본 발명의 동물사료 첨가제용 추출물은 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산, 사과산 등의 유기산이나 인산나트륨, 인산칼륨, 산성피로인산염, 폴리인산염(중합인산염) 등의 인산염이나 폴리페놀, 카테킨(catechin), 알파-토코페롤, 로즈메리 추출물(rosemary extract), 비타민 C, 녹차 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산, 피틴산 등의 천연 항산화제 중 어느 하나 또는 하나 이상을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 추출물을 함유하는 동물사료 첨가제 및 이를 포함하는 사료는 보조성분으로 아미노산, 무기염류, 비타민, 항생물질, 항균물질, 항산화, 항곰팡이 효소, 살아있는 미생물 제제 등과 같은 각종보조제가 곡물, 예를 들면 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수 및 쌀; 식물성 단백질 사료, 예를 들면 평지, 콩 및 해바라기를 주성분으로 하는 것; 동물성 단백질 사료, 예를 들면 혈분, 육분, 골분 및 생선분; 당분 및 유제품, 예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조 성분, 건조 첨가제를 모두 혼합한 후, 액체 성분과, 가열 후에 액체가 되는 성분, 즉, 지질, 예를 들면 가열에 의해 임의로 액화시킨 동물성 지방 및 식물성 지방 등과 같은 주성분 이외에 영양보충제, 소화 및 흡수향상제, 성장촉진제, 질병예방제 등과 같은 물질과 함께 사용될 수 있다.

상기 동물사료 첨가제용 오배자 추출물은 동물에게 단독으로 식용 담체 중에서 다른 사료 첨가제와 조합되어 투여될 수 있다.

또한, 상기 동물사료 첨가제용 추출물은 탑 드레싱으로서 또는 이들을 동물 사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도로, 별도의 경구 제형으로, 주사 또는 경피로 또는 다른 성분과 조합하여 쉽게 투여할 수 있다. 통상적으로, 당업계에 잘 알려진 바와 같이 단독 일일 투여량 또는 분할 일일 투여량을 사용할 수 있다.

상기 동물사료 첨가제용 추출물을 동물 사료와 별도로 투여할 경우, 당업계에 잘 알려진 바와 같이 이들을 비-독성 제약상 허용 가능한 식용 담체와 조합하여 즉석 방출 또는 서방성 제형으로 제조할 수 있다. 이러한 식용 담체는 고체 또는 액체, 예를 들어 옥수수 전분, 락토스, 수크로스, 콩 플레이크, 땅콩유, 올리브유, 참깨유 및 프로필렌 글리콜일 수 있다. 고체 담체가 사용될 경우, 추출물의 투여형은 정제, 캡슐제, 산제, 토로키제 또는 함당정제 또는 미분산성 형태의 탑 드레싱일 수 있다. 액체 담체가 사용될 경우, 연 젤라틴 캡슐제, 또는 시럽제 또는 액체 현탁액제, 에멀젼제 또는 용액제의 투여 형태일 수 있다. 또한, 투여 형태는 보조제, 예를 들어 보존제, 안정화제, 습윤제 또는 유화제, 용액 촉진제 등을 함유할 수 있다. 또한 이들은 바이러스로 인한 질환의 개선 및 예방상 유용한 다른 물질을 함유할 수 있다.

또한, 오배자 추출물이 동물사료 첨가제로 포함되는 동물사료는 동물의 식이 요구를 충족시키는데 통상적으로 사용되는 임의의 단백질-함유 유기 곡분일 수 있다. 이러한 단백질-함유 곡분은 통상적으로 옥수수, 콩 곡분 또는 옥수수/콩 곡분 믹스로 주로 구성되어 있다.

상기의 동물사료 첨가제는 침지, 분무 또는 혼합하여 상기 동물사료에 첨가하여 이용될 수 있다.

본 발명은 포유류, 가금 및 어류를 포함하는 다수의 동물 식이에 적용할 수 있다. 보다 상세하게는, 식이는 상업상 중요한 포유류, 예를 들어 돼지, 소, 양, 염소, 실험용 설치 동물(랫트, 마우스, 햄스터 및 게르빌루스쥐), 모피 소유 동물(예를 들어, 밍크 및 여우), 및 동물원 동물(예를 들어, 원숭이 및 꼬리 없는 원숭이), 뿐만 아니라 가축(예를 들어, 고양이 및 개)에게 사용할 수 있다. 통상적으로 상업상 중요한 가금에는 닭, 터키, 오리, 거위, 꿩 및 메추라기가 포함된다. 송어와 같은 상업적으로 사육되는 어류도 포함될 수 있다.

본 발명에 따른 추출물을 포함한 동물용 사료 배합 방법은, 오배자 추출물을 동물 사료에 건조 중량 기준으로 사료 1 ㎏당 약 1 g 내지 100 g의 양으로 혼입한다.

또한, 사료 혼합물은 완전히 혼합한 후, 성분들의 분쇄 정도에 따라 경점성의 조립 또는 과립 물질이 얻어진다. 이것을 매시로서 공급하거나, 또는 추가 가공 및 포장을 위해 원하는 분리된 형상으로 형성한다. 이때, 저장 중에 분리되는 것을 방지하기 위해, 동물 사료에 물을 첨가하고, 이어서 통상의 펠릿화, 팽창화, 또는 압출 공정을 거치는 것이 바람직하다. 과잉의 물은 건조 제거될 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 공정에서 얻어지는 오배자 추출물을 유효성분으로 함유하는 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품을 제공한다.

본 발명의 추출물을 포함하는 조성물은 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 개선을 위한 약제, 식품 및 음료 등에 다양하게 이용될 수 있다. 본 발명의 추출물을 첨가할 수 있는 식품으로는, 예를 들어, 각종 식품류, 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있고, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 형태로 사용할 수 있다.

본 발명의 식품 또는 음료 중의 상기 추출물의 양은 일반적으로 본 발명의 건강식품 조성물은 전체 식품 중량의 0.01 내지 15 중량%로 가할 수 있으며, 건강 음료 조성물은 100 ㎖를 기준으로 0.02 내지 5 g, 바람직하게는 0.3 내지 1 g의 비율로 가할 수 있다.

본 발명의 건강 기능성 음료 조성물은 지시된 비율로 필수 성분으로서 상기 추출물을 함유하는 외에 액체성분에는 특별한 제한이 없으며 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물의 예는 모노사카라이드, 예를 들어, 포도당, 과당 등; 디사카라이드, 예를 들어 말토스, 슈크로스 등; 및 폴리사카라이드, 예를 들어 덱스트린, 시클로덱스트린 등과 같은 통상적인 당, 및 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당 알콜이다. 상술한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제 (타우마틴, 스테비아 추출물 (예를 들어, 레바우디오시드 A, 글리시르히진등) 및 합성 향미제 (사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 ㎖당 일반적으로 약 1 내지 20 g, 바람직하게는 약 5 내지 12 g이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 광물 (전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제 (치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일 주스 및 과일 주스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 그렇게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0 내지 약 20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

본 발명의 오배자 추출물은 콕시디움에 대한 뛰어난 항원충 효과를 나타내므로, 콕시디움에 기인한 질환의 예방 및 치료용 조성물 및 사료첨가제로 유용하게 이용될 수 있다.

도 1은 육계에 대한 플라보 SK의 증체효과를 나타낸 도이며,
도 2는 플라보 SK의 농도에 따른 증체효과에 관한 도이며,
도 3은 플라보 SK 사육구간 투여에 따른 증체효과를 나타낸 도이며,
도 4는 콕시디움 감염 후 플라보 SK가 육계 증체에 미치는 영향을 나타낸 도이며,
도 5는 콕시디움 감염에 따른 생체 내 방어효과에 관한 도이다.

이하, 본 발명을 하기의 참고예, 실시예 및 실험예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 참고예, 실시예 및 실험예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 참고예, 실시예 및 실험예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 오배자 물 추출물의 제조

익산시 대학한약국으로부터 구입한 건조된 오배자를 분쇄하여 오배자 분말을 수득한 후, 상기에서 수득한 건조된 오배자 분말(1 kg) 질량의 3배(v/w)에 해당하는 증류수를 가하여 100℃에서 3시간 동안 환류 냉각 추출하고 여과 및 감압 농축한 후, 동결건조하여 분말상태의 오배자 추출물 620 g (이하, “GM-1”및 “플라보 SK”라 명명함. 추출율: 62%)을 수득하여 하기 실험예의 시료로 사용하였다. 한편, 추출용매로 에탄올, 메탄올, 30% 에탄올 및 70% 에탄올을 사용하는 것을 제외하고는, 상기 추출방법과 동일한 방법을 적용하여 추출물을 각각 52%, 56%, 58% 및 54%의 추출율로 수득하였다.

참고예 1. 실험 준비

1-1. 실험동물 준비

오리엔트(주)에서 공급된 6주령의 SD 랫트와 원광대학교 동물자원개발연구센터에서 계통이 유지되고 있는 병아리를 8주령에 공급받아 1주일 동안 원광대학교 동물자원개발연구센터 실험동물 사육실에서 순화사육한 후 실험에 사용하였다. 사육기간 중 온도는 23±1℃, 습도 50±5%, 소음 60 phone 이하, 조명시간 08:00-20:00(1일 12시간), 환기 시간당 10-12회의 환경에서 사육되었고, 사료는 오리엔트에서 제공한 실험동물전용사료(PicoLab Rodent DIET 20 5053, LabDiet社)를 자유급식 시켰으며, 음수는 멸균수를 자유 급수하였다. 본 연구에 사용된 실험동물에 관련된 모든 실험과정과 절차는 원광대학교 동물실험윤리위원회(Institu tional Animal Care & Use Committee, IACUC)의 규정을 준수하며 수행되었다.

1-2. 콕시디움 ( Eimeria tenella , 297-1) 충란 준비

콕시디움 oocytes(경상대학교 수의과대학)는 Potassium Diclom ate(Sigma) 보존액에 8.5×104/㎖의 갯수로 보존되어 있고, 보존액은 유독물질이므로 washing 과정을 실시한다. 보존액을 버리고 보존액 양만큼 멸균 증류수(D.W)를 넣어 4,000rpm, 25분 동안 원심분리를 3회 실행한다. 원심분리 할 때마다 상층액을 버리고 동량의 증류수(D.W)를 넣고, washing이 끝난 후 충란을 세어 농도를 구한다. 충란이 든 희석액을 먼저 증류수(D.W)로 20배 희석하고 saturated NaCl(Sigma)로 5배 희석(통상 5~10배)하여 ×100 배율에서 chamber(Difco)를 이용하여 counting한다. 충란의 최종 농도는 4.3×104/ml인 것을 실험에 사용하였다.

1-2. 군 구성

상기 참고예 1-1에서 1주일간 순화 사육한 7주령의 건강한 어린 병아리를 2군으로 구분하여 하기 표 1과 같이 군 구성하였다. 실험에 사용하는 병아리는 질병이 없고 외관상 건강한 병아리로 군 구성 시 체중 평균이 유사하게 분류하였다. 301-5농장(13,14,15동)을 시험구로하고 301-6농장(16,17,18,19동)을 대조구로 하여 2만 마리 병아리에 적용하여 실험에 적용하였다. 또한, 시험군은 일체의 투약 또는 첨가제 사용을 하지 않았고, 사료에 ‘플라보 SK’를 사료량의 0.29%를 투여하여 실험하였다. 대조군은 기존의 사육방식대로 항생제(제품번호 49071202, 제조사 CTC바이오, 상품명 아목샷) 및 영양제(골드비타원/앰피콜리/틸코신-S 액/비테인 알파)(제품번호720541, 제조사 한동, 상품명 미아리-에스)를 투약하였다. 공통적으로 두 군 모두 백신은 10일령에 ND, 14일령에 IBD 실시하였다.

Group	n	기존사료	플라보 - SK	별도관리
시험군		0	X	X	플라보 - SK 미첨가
대조군		0	0	X	플라보 - SK 첨 가

실험예1. 육계에 대한 플라보SK의 증체 효과

5일 동안 기본사료(현대사료)에 적응시킨 육추에 플라보 SK 분말을 0.5% 와 1%의 2개 농도로 나누어 사료에 첨가하여 21일 동안 처리하고, 대조군은 기본사료만 공급한다. 사료 공급 후 0, 2, 4, 12, 16, 21일 째 마다 각 그룹의 체중을 측정한다.

실험결과, 도 1에서 나타낸 바와 같이 플라보 SK 분말 0.5% 농도의 처리군은 처리 후 16일째부터, 1% 농도의 처리군은 처리 후 12 일째부터 대조군에 비해 확실한 증체효과를 보였다.

실험예2. 육계에 대한 플라보SK의 농도 및 사육구간투여에 따른 증체 효과

2-1. 플라보 SK 농도에 따른 증체효과

8일 동안 기본사료에 적응시킨 육추에 플라보 SK 분말을 0.20, 0.25, 0.30 및 0.35%의 4개의 농도로 나누어 사료에 첨가하여 22일 동안 처리하고, 대조군은 기본사료만 공급한다. 사료공급 후 18, 25, 30일 째 마다 각 그룹의 체중을 측정한다.

실험결과, 도 2에서 나타낸 바와 같이 플라보 SK 분말 0.20, 0.25, 0.30 및 0.35%의 농도의 투여군은 대조군과 전체적으로 증체가 높게 나타났으며 특히 0.35%의 농도에서 대조군과 비교하여 전 구간에서 약 10%정도의 증체가 인정되었다 (도 2A, B, C 참고).

2-2. 플라보 SK 사육구간 투여에 따른 증체효과

8일 동안 기본사료에 적응시킨 육추에 플라보 SK 분말을 0.5% 농도로 사료에 첨가하여 2개의 구간을 나누어 10일 동안 처리하고, 대조군은 기본사료만 공급한다. 제 1구간은 사료공급은 1일부터 8일까지 기본사료, 8일부터 18일까지 0.5% 플라보 SK 함유 사료, 18일부터 30일까지 기본사료를 공급하며, 제 2구간은 1일부터 18일까지 기본사료, 18일부터 28일까지 0.5% 플라보 SK 함유 사료, 28일부터 30일까지 기본사료를 공급한다. 사료 공급 후 18일, 25일 30일 째 마다 각 그룹의 체중을 측정한다.

실험결과, 도 3에서 나타낸 바와 같이 플라보 SK 분말 0.5% 농도의 제 1구간 투여군은 대조군과 제2구간 투여군에 비해 18일령 체중에서 약 10%이상의 증체가 확인되었으며(도 3A 참고), 25일령 체중에서 제 1구간 투여군과 제 2구간 투여군 모두 대조군에 비해 약 10%이상의 증체가 확인되었으며(도 3B 참고), 30일령 체중에서 제 1구간 투여군과 제 2구간 투여군 모두 대조군에 비해 약 8% 이상의 증체 효과가 있는 것으로 나타났다(도 3C 참고).

실험예 3. 플라보 SK 의 항콕시듐 효과

3-1. 콕시디움 경구감염 및 약제투여

시험은 각각 비접종 음성대조군, 콕시디움 접종 양성대조군(비처리군), 2개 농도(0.5%, 0.1%)의 플라보 SK 분말 투여 후 콕시디움 접종군인 4개 군으로 각 군에서 10두로 나누어 육추를 사용한다. 플라보 SK 분말을 0.5% 와 1%의 2개 농도로 나누어 사료에 첨가하여 5일 동안 전처리하고 비처리 양성대조군은 기본사료만 공급한 후, 각각의 육추에 한 마리당 104/㎖의 농도로 경구 투여로 공격 접종한다.

3-2. 콕시듐 감염 후 플라보 SK 가 육계 증체에 미치는 영향

콕시듐 공격접종 후 12일 동안 비처리 군은 기본사료만 공급하고, 처리군은 사료 내 플라보 SK 분말을 0.5% 와 1%의 2개 농도로 나누어 첨가하여 약제공급을 계속하면서 0, 2, 4, 8, 12일째 마다 체중을 측정한다. 대조군은 콕시듐 공격접종 없이 기본사료만 공급한다.

실험결과, 도 4에서 나타낸 바와 같이 콕시디움 감염 대조군에서 감염에 따라 증체가 지연되는 경향을 보이고 플라보 SK 분말 0.5% 농도의 처리군은 감염 대조군과 큰 차이점을 보이지 않는 반면, 1% 농도의 처리군은 처리 후 12 일째 대조군에 비해 확실한 증체 효과를 보였고 결과적으로 콕시디움 감염에 따른 지연된 증체율의 극복 효과가 있는 것으로 판단된다.

3-3. 분변수거 및 분변 속 충란검사

약제투여기간이 끝난 다음날 닭장의 분변을 모두 제거하고, 다음날부터 5일 동안 매일 분변을 수거한다. 수거한 분변 sample은 희석과정을 통해 분변 속 충란 개수를 세어준다. 즉, 먼저 증류수(DW)로 1000배 희석한 후 균질화 되면 1차 희석하고, saturated NaCl로 2차 희석하여 ×100 배율에서 chamber를 이용해 counting한다.

실험결과, 도5 에서 나타낸 바와 같이 콕시디움 감염 대조군과 비교해서 감염 후 7일째에 플라보 SK 분말 0.5% 농도의 처리군은 약 40%, 1% 농도의 처리군은 약 60%의 억제효과를 보였고, 감염 후 7일째에 1% 농도의 처리군은 약 50%의 억제효과를 보였고 결과적으로, 콕시디움 감염에 따른 생체 내 방어효과 실험에서 농도 구배에 따라 충란 배출수의 감소율 40%와 60%를 각각 보임에 따라 항콕시디움 효과가 있는 것으로 판단된다.

실험예 4. 시험물질에 의한 독성여부 평가

본 실험에서는 6주령의 SD 랫트 (오리엔트(주))를 사용하여, 식품의약품안전청의 독성시험기준 (식품의약품안전청, 의약품 등의 독성시험기준, 식품의약품안전청고시 2005-60호, 2005)에 따라 2,000 ㎎/㎏을 최고 용량으로 정하고, 정제 증류수로 희석하여 5 ㎎/㎏, 50 ㎎/㎏ 및 500 ㎎/㎏의 시험물질을 제조하였다. 투여는 임상에서의 주요 적용경로인 경구투여로 하였으며, 투여방법은 동물을 경배부 피부 고정법으로 고정한 후 금속제 경구투여용 존대를 이용하여 위내에 직접주입 하였다. 1일 1회 당일 체중을 기준으로 체중 ㎏당 10 ㎖을 투여액량으로 하여 투여하였고, 시험동물에 시험물질투여 후 2시간 동안은 사료를 제한하였으며, 이후 시험기간 동안 사료와 물은 계속 공급하였다.

식품의약품안전청의 독성시험기준 및 국제경제협력기구의 급성독성시험 가이드라인 (OECD Guideline for the Testing Chemicals revised draft guideline 420, Organization for Economic Cooperation and Development (OECD), 2001)에 독성시험기준에 따라 투여 후 처음 6시간 동안을 특별한 주의를 가지고 시험동물의 피부, 털, 눈, 점막, 호흡기, 순환기, 자율신경계, 중추신경계, 신체 운동 활동성, 행동형태 및 시험동물의 진전(tremors), 경련(convulsions), 유연(salivation), 설사(diarrhoea), 기면(lethargy), 수면(sleep), 혼수(coma) 등의 유무를 관찰하였다. 투여 후 14 일 동안 1일 1회씩 일반 임상증상을 관찰하고 시험동물의 개별 체중은 시험물질을 투여하기 전과 후, 시험기간 동안 1일 1회씩 측정하였다.

투여 후 14일째 랫트를 에틸에테르(DUKSAN pharmaceutical Co., LTD)로 마취하고, 방혈 치사시킨 후 모든 장기를 적출하여, 개체 시험동물의 육안적 병변 관찰 후 장기의 무게를 측정하였다.

오배자 추출물의 단회 경구투여에 의한 급성독성시험결과, 본 연구에 사용된 시험동물 및 조건에서 투여된 최고 용량인 2,000 ㎎/㎏에서 사망하는 개체가 관찰되지 않았으며, 사용한 어떠한 용량에서도 식품의약품안전청의 독성시험기준에 따라 관찰된 모든 지표에서 오배자 추출물의 투여에 의한 독성은 유발되지 않았다. 결론적으로 오배자 추출물은 급성독성시험 권고 최대용량인 2,000 ㎎/㎏에서도 독성이 없이 안전함을 확인하였다.

Group	실험군	n	Gross lesion	Pathological lesion
Ⅰ	오배자 추출물 투여군	10	0	0
Ⅱ	대조군	10	0	0

하기에 본 발명의 오배자 추출물을 포함하는 조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.

제제예1 . 사료 조성물

오배자 추출물(GM-1) 240g

부형제(말분) 760g

상기의 혼합물의 조성비는 비교적 사료조성물에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 사료조성물 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 대한약전 산제제법에 준하여 제조에 사용할 수 있다.

제제예 2. 산제의 제조

오배자 추출물(GM-1) 20 mg

유당 100 mg

탈크 10 mg

상기의 성분들을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조한다.

제제예 3. 정제의 제조

오배자 추출물(GM-1) 10 mg

옥수수전분 100 mg

유당 100 mg

스테아린산 마그네슘 2 mg

상기의 성분들을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조한다.

제제예 4. 캅셀제의 제조

오배자 추출물(GM-1) 10 mg

결정성 셀룰로오스 3 mg

락토오스 14.8 mg

마그네슘 스테아레이트 0.2 mg

통상의 캡슐제 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조한다.

제제예 5. 주사제의 제조

오배자 추출물(GM-1) 10 mg

만니톨 180 mg

주사용 멸균 증류수 2974 mg

Na2HPO4,12H2O 26 mg

통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플당(2㎖) 상기의 성분 함량으로 제조한다.

제제예 6. 액제의 제조

오배자 추출물(GM-1) 20 mg

이성화당 10 g

만니톨 5 g

정제수 적량

통상의 액제의 제조방법에 따라 정제수에 각각의 성분을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 다음 상기의 성분을 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체를 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조한다.

제제예 7. 건강 식품의 제조

오배자 추출물(GM-1) 1000 ㎎

비타민 혼합물 적량

비타민 A 아세테이트 70 ㎍

비타민 E 1.0 ㎎

비타민 B1 0.13 ㎎

비타민 B2 0.15 ㎎

비타민 B6 0.5 ㎎

비타민 B12 0.2 ㎍

비타민 C 10 ㎎

비오틴 10 ㎍

니코틴산아미드 1.7 ㎎

엽산 50 ㎍

판토텐산 칼슘 0.5 ㎎

무기질 혼합물 적량

황산제1철 1.75 ㎎

산화아연 0.82 ㎎

탄산마그네슘 25.3 ㎎

제1인산칼륨 15 ㎎

제2인산칼슘 55 ㎎

구연산칼륨 90 ㎎

탄산칼슘 100 ㎎

염화마그네슘 24.8 ㎎

상기의 비타민 및 미네랄 혼합물의 조성비는 비교적 건강식품에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하며, 통상의 건강식품 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 과립을 제조하고, 통상의 방법에 따라 건강식품 조성물 제조에 사용할 수 있다.

제제예 8. 건강 음료의 제조

오배자 추출물(GM-1) 1000 ㎎

구연산 1000 ㎎

올리고당 100 g

매실농축액 2 g

타우린 1 g

정제수를 가하여 전체 900 ㎖

통상의 건강음료 제조방법에 따라 상기의 성분을 혼합한 다음, 약 1시간동안 85℃에서 교반 가열한 후, 만들어진 용액을 여과하여 멸균된 2ℓ 용기에 취득하여 밀봉 멸균한 뒤 냉장 보관한 다음 본 발명의 건강음료 조성물 제조에 사용한다.

상기 조성비는 비교적 기호음료에 적합한 성분을 바람직한 실시예로 혼합 조성하였지만, 수요계층, 수요국가, 사용용도 등 지역적, 민족적 기호도에 따라서 그 배합비를 임의로 변형 실시하여도 무방하다.

Claims (10)

1. 오배자 물 추출물을 유효성분으로 함유하는 아이메리아(Eimeria) 원충의 감염 질환의 예방 및 치료용 수의학 조성물.
2. 삭제
3. 삭제
4. 오배자 물 추출물을 유효성분으로 함유하는 아이메리아(Eimeria) 원충의 감염 질환의 예방 및 치료용 약학 조성물.
5. 삭제
6. 오배자 물 추출물을 유효성분으로 함유하는 아이메리아(Eimeria) 원충의 감염 질환의 예방 및 개선용 동물사료 첨가제.
7. 삭제
8. 제 6항의 동물사료 첨가제를 포함하는 사료.
9. 오배자 물 추출물을 유효성분으로 함유하는 아이메리아(Eimeria) 원충의 감염 질환의 예방 및 개선용 건강기능식품.
10. 제 9항에 있어서, 분말, 과립, 정제, 캡슐 또는 음료인 건강기능식품.
    
    

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