KR101935454B1 - 호장근 추출물을 유효성분으로 포함하는 넙치 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증(VHS)에 대한 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물 등에 관한 것으로, 본 발명의 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 조성물은 어류에 감염된 VHSV에 대한 활성을 억제하는 효과를 나타내고 이를 이용하여 높은 안정성을 가진 어류의 VHS의 예방 또는 치료를 향상시키는 효과를 나타내므로, VHSV의 감염에 대한 어류의 생존율 향상 및 어업 생산성 향상으로 인한 어업 안정성 증대에 널리 활용될 수 있다.

Description

호장근 추출물을 유효성분으로 포함하는 넙치 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물 {A feed composition for preventing or treating flatfish-viral hemorrhagic septicemia comprising Reynoutria japonica extract}

본 발명은 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물에 관한 것으로, 보다 구체적으로 본 발명은 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 사료 첨가제 조성물; 상기 사료 첨가제 조성물을 포함하는 사료; 상기 사료를 어류에 섭식시키는 단계를 포함하는 어류의 사육방법; 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스 출혈성 패혈증에 대한 예방 또는 치료용 약학 조성물; 상기 약학 조성물을 어류에 투여하는 단계를 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료방법; 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스에 대한 항바이러스용 조성물에 관한 것이다.

일반적으로 넙치 양식 산업의 심각한 피해를 입히는 주요한 원인체는 3종 이상의 복합감염증, 그 중에서도 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 (VHSV), 세균인 에드워지엘라 (Edwardsiella), 연쇄상구균 (Strepococcus), 비브리오 (Vibrio), 플렉시박터 (Flexibacter) 및 기생충인 스쿠티카충 (Miamiensis avidus)으로 잘 알려져 있다. 특히, 바이러스성 출혈성 패혈증 (Viral hemorrhagic septicemia, VHS)과 같은 바이러스성 질병은 넙치의 입식초기 저수온기에 발생하여 대량폐사를 유발하는데, 치어뿐만 아니라 성어에 있어서도 대량폐사를 유발하며, 해양오염 및 양식 수산물의 질병으로 인한 양식어가의 경제적 손실이 약 3,000억 원에 이른다고 보고되었다.

상기 VHS는 국내에서는 2001년 넙치에서 처음 보고되었으며 이후 각종 자연산 해산어에서도 보고되고 있고, 양식 넙치의 피해가 매우 심각한 치명적인 질병이다. 2011년 국내 넙치 양식장의 주요 폐사 원인체를 조사한 결과, VHSV에 의한 폐사가 전체 폐사 원인 중 약 12.5%를 차지하였으며, 이는 넙치의 바이러스 질병 중 가장 높은 비율을 차지하였다. 또한, 국내 넙치 생산량 중 절반 가량을 생산하는 제주도 지역의 경우 2007년부터 2010년까지 질병검사 의뢰 시료 중 바이러스성 출혈성 패혈증의 양성율이 30%로 가장 높게 나타났으며, 그 피해도 증가하고 있는 실정이다. 또한, VHSV는 국제수역사무국 (OIE)에서 'OIE 신고대상 질병 (OIE notifiable disease)'으로 규정되어 있어 수산물 유통시 검역 대상이 되는 질병으로 넙치를 포함한 양식 어류의 수출입에 있어서 무역장벽으로 작용하는 중요한 질병요인이기도 하다. VHSV는 무지개송어의 중요 바이러스성 질병으로 처음 보고가 되었는데 최근 다양한 어류, 송어, 무지개송어, 은연어, 강송어, 브라운송어, 스틸헤드 송어 (steelhead trout) 등의 연어과 어류뿐만 아니라 대구, 청어등과 같은 자연수계의 어류 및 넙치 등과 같은 해산양식어류에서도 널리 발생하며, 주로 유럽, 북미, 아시아 지역에서 널리 발생한다. 감염된 넙치를 육안으로 살펴보면, 체색흑화, 전신의 출혈, 복수저류로 인한 복부 팽만과 탈장, 아가미 퇴색, 무안측 체표에 붉은 반점모양의 출혈이 관찰된다. 발병 수온은 10~13℃로 넙치의 크기에 상관없이 폐사가 발생하며, 현재 치료법은 전무하며 다른 지역으로 전파되지 않도록 주의를 기울이는 것이 전부인 것이 현 실정이다. 이에 바이러스성 출혈성 패혈증에 의한 양식 어가의 경제적 손실을 줄이고, 넙치의 원활한 수출 및 유통을 위해 효과적인 바이러스성 출혈성 패혈증의 치료 방법이 절실히 요구되고 있다.

VHSV는 음성 단일가닥 RNA 바이러스로 1963년에 국제수역사무국 (OIE)의 어병 심포지엄에 처음으로 보고되었으며, 총알 모양으로 길이는 180 ㎚, 직경이 60 ㎚인 바이러스이며 크기는 11 kb이며 뉴클레오캡시드 단백질 (nucleocapsid protein) (N), 폴리머라제-관련된 인산 단백질 (polymerase-associated phosphoprotein) (P), 기질 단백질 (matrix protein) (M), 표면 당단백질 (surface glycoprotein) (G), 독특한 비리온성 단백질 (a unique non-virion protein) (NV), 및 바이러스 폴리머라제 (virus polymerase) (L)의 6가지 단백질로 구성되어 있는 랍도바이러스 (rhabdovirus)과에 속한다. 유전자형은 4가지 아형으로 구분되어지고 있으며 I - III형은 북유럽에서 분리된 형이며 IV형은 북미에서 분리된 아형으로 알려져 있다. VHSV의 구조와 항원단백질에 대한 연구, 및 이들 기초 연구를 바탕으로 불활화백신, 단백질 재조합 백신, 약독화 백신, DNA 백신에 대한 연구가 수행되고 있다.

그러나 약독화 (attenuated) 바이러스 백신은 실험 조건에서는 효과가 있는 것으로 보고되고 있으나 바이러스의 병원성 회복의 위험성과 자연계로의 확산 위험성 때문에 허가가 되지 않고 있다. 또한, 출혈성 패혈증 바이러스 G 혹은 N 유전자를 삽입한 플라스미드를 근육 주사한 DNA백신 실험에서는 강력한 면역반응이 유도되고 폐사율도 경감되었다는 보고가 무지개송어와 넙치에서 보고되고 있으나 DNA백신 유전자 조작에 대한 안전성의 문제 때문에 현재까지 허가된 DNA백신은 단 한 개뿐으로, 아직은 실용화 단계의 DNA백신은 없는 실정이며 바이러스성 출혈성 패혈증에 대한 백신은 상용화되어 있지 않다. 국내에서는 넙치에서 분리된 바이러스주에 대한 백신개발이 주로 진행되고 있으며 천연제제를 사용한 바이러스 활성 억제 연구는 거의 이루어지고 있지 않다. 특히 조추출물에서 보다 정제된 물질 군을 대상으로 연구를 진행하여 저독성 및 약재 효율성의 향상뿐만 아니라 항-VHSV에 관한 연구는 미비한 실정이다.

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 바이러스성 출혈성 패혈증을 예방 또는 치료하기 위한 방법을 개발하고자 예의 연구 노력한 결과, 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 일정한 비율로 혼합하여 사료 첨가제로 사용함으로써, 어류 특히 넙치의 바이러스성 출혈성 패혈증에 대한 우수한 저해 활성을 가지는 사료 조성물, 약학 조성물, 항바이러스용 조성물을 제공할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 하나의 목적은, 호장근 추출물울 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증(VHS)의 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물을 제공하는 것이다.

구체적으로, 본 발명의 하나의 목적은, 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증(VHS)의 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 사료 첨가제 조성물을 포함하는 사료를 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 사료를 어류에 섭식시키는 단계를 포함하는 어류의 사육방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 호장근 추출물을 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

구체적으로, 본 발명의 하나의 목적은, 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 하나의 목적은 상기 약학 조성물을 어류에 투여하는 단계를 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 호장근 추출물을 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV)에 대한 항바이러스용 조성물을 제공하는 것이다.

구체적으로, 본 발명의 하나의 목적은, 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV)에 대한 항바이러스용 조성물을 제공하는 것이다.

이를 구체적으로 설명하면 다음과 같다. 한편, 본 발명에서 개시된 각각의 설명 및 실시형태는 각각의 다른 설명 및 실시 형태에도 적용될 수 있다. 즉, 본 발명에서 개시된 다양한 요소들의 모든 조합이 본 발명의 범주에 속한다. 또한, 하기 기술된 구체적인 서술에 의하여 본 발명의 범주가 제한된다고 볼 수 없다.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 호장근 추출물을 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증(VHS)의 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물을 제공한다.

본 발명에서 사용된 용어 "호장근(Reynoutria japonica HOUTT.)"이란, 천연, 잡종 또는 변종 호장근의 모든 기관, 예를 들어, 뿌리, 줄기, 잎, 꽃을 모두 포함하여 의미할 수 있다. 상기 호장근은 마디풀목 여뀌과에 속하는 다년초 초본식물로, 우리 나라 각처의 산과 들에서 자라고 있으며, 줄기의 속은 비었으며, 어릴 때의 줄기에는 붉은 자주색의 반점이 산재한다. 어릴 때 줄기의 생김새가 호피를 닮아서 호장근이라는 이름이 붙었다(한국 민족 문화 대백과, 한국학 중앙 연구원). 한방에서는 뿌리를 호장근이라고 하며 완화, 이뇨 및 통경제로 사용하고, 민간에서는 진정제로 쓴다.

본 발명에서 사용된 용어 '호장근 추출물'은, 호장근으로부터 추출한 모든 추출물을 의미한다.

구체적으로, 본 발명의 상기 호장근 추출물은 천연물질, 구체적으로는 호장근으로부터 분리할 수 있다. 천연, 잡종, 변종 식물의 다양한 기관, 뿌리, 줄기, 잎, 꽃뿐만 아니라 식물 조직 배양물을 추출하여 분리 가능하다.

본 발명에서 호장근은 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있다.

본 발명에서 호장근은 그대로 사용하거나, 또는 이를 그대로 말려 건조된 형태로 사용하거나, 또는 이의 주피를 제거하고 쪄서 말린 건조된 형태로 사용할 수도 있으며, 건조된 호장근은 세절화하여 세절 형태로 사용할 수도 있다.

본 발명에서, 호장근 추출물은 물, C₁ 내지 C₄의 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻을 수 있다. 구체적으로, 호장근 중량의 약 2~10배, 바람직하게는 2~5배의 부피의 물, 에탄올, 메탄올과 같은 저급 알코올로, 바람직하게는 에탄올로 20~50℃, 바람직하게는 25~30℃에서 교반 추출, 초음파 추출, 100℃에서 열수 추출방법으로 2~3회 연속 추출하여 수득한 후, 여지로 여과하고 여과액을 회전식 감압 농축기로 제거한 후 잔사를 진공 동결건조, 열풍건조를 통하여 호장근 추출물을 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 호장근 추출물은 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물 및 이들 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.

상기 사료 첨가제 조성물은 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 것일 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "스테비아(Stevia rebaudiana)"는, 국화과에 속하는 다년초 여러해살이풀로서 허브차, 음료, 한약조제, 건강보조식품 등에 사용될 수 있다. 또한 스테비아 잎에는 스테비오사이드(stevioside)와 리바우디오사이드(rebaudioside)와 같은 단맛을 내는 성분을 다량 포함하고 있어, 천연감미료로도 사용될 수 있다.

본 발명에서 스테비아는 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 것을 사용할 수 있으며, 주로 잎 부위를 사용하는 것이 바람직하나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 스테비아는 그대로 사용하거나, 또는 이를 그대로 말린 건조된 형태, 또는 이를 쪄서 말린 건조된 스테비아는 분말화 하여 분말 형태로 사용할 수도 있다.

본 발명에서, 스테비아 추출물은 정제수, C1 내지 C4의 저급알콜 또는 이들의 혼합용매로 추출하여 얻을 수 있다. 구체적으로, 스테비아 중량의 약 2~10배, 바람직하게는 2~5배의 부피의 정제수, 에탄올, 메탄올과 같은 저급 알코올로, 바람직하게는 정제수로 20~80℃, 바람직하게는 50~70℃에서 교반 추출, 초음파 추출, 100℃에서 열수 추출방법으로 2~3회 연속 추출하여 수득한 후, 여지로 여과하고 여과액을 회전식 감압 농축기로 제거한 후 잔사를 진공 동결건조, 열풍건조를 통하여 스테비아 추출물을 얻을 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 스테비아 추출물은 추출처리에 의해 얻어지는 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물 및 이들 조정제물 또는 정제물 중 어느 하나 이상을 포함할 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "스테비오사이드(stevioside)"는, 스테비아 잎에 주로 함유되어 있는 설탕의 300배 당도를 가지는 천연 다당류 물질로서, 구체적으로 스테비오사이드 A1, A2, 스테비올 1,2,3, 둘코사이드, 리바우디오사이드(Rebaudioside) a,b,c,e,f 등 다양한 형태의 당으로 구성되어 있고, 혈당이나 비만 등에 영향을 주지 않으며, 또한 충치 균도 억제한다.

본 발명의 스테비오사이드는 상업적으로 판매되는 것을 구입하여 사용하거나, 자연에서 채취 또는 재배된 스테비아로부터 추출·분리된 것을 사용할 수 있다. 이때 스테비오사이드의 추출·분리 방법은 공지된 방법을 사용할 수 있다.

본 발명에서, 호장근 추출물과 스테비아 추출물의 복합제를 사용할 경우 이들의 혼합 비율은 임의로 선택할 수 있으며, 바람직하기로는 호장근 추출물:스테비아 추출물이 1:100 내지 100:1, 더욱 바람직하기로는 1:10 내지 10:1, 가장 바람직하기로는 1:3 내지 1:5의 비율로 혼합될 수 있다.

본 발명에서, 호장근 추출물과 스테비오사이드의 복합제를 사용할 경우 이들의 혼합 비율은 임의로 선택할 수 있으며, 바람직하기로는 호장근 추출물:스테비오사이드가 1:1000 내지 1000:1, 더욱 바람직하기로는 1:100 내지 100:1, 가장 바람직하기로는 1:3 내지 1:5의 비율로 혼합될 수 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "바이러스성 출혈성 패혈증 (Viral hemorrhagic septicemia, VHS)"은, "Egtved diseases"라고도 하고, 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 (VHSV)에 의해 야기되는 어류의 전염성 질환을 의미하는데, 증상으로는 내장 기관, 피부, 근육 등의 내부기관에서 출혈이 발생하고, 외부적으로는 별다른 증상이 나타나지 않는다.

본 발명에서 사용된 용어 "바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스 (Viral hemorrhagic septicemia virus, VHSV)"는, "Egtved virus"라고도 하고, 11 kb의 negative sense 단일 가닥의 RNA를 포함하는, RNA 바이러스를 의미한다. 상기 VHSV는 지역적으로 서로 상이한 아종이 존재하고, 상호 다양한 영향을 미칠 수 있으나, 사람에게는 특별한 영향을 미치지 않는다고 알려져 있다.

본 발명에서 사용된 용어 "예방"은, 본 발명에 따른 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 조성물의 투여로 VHS의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다.

본 발명에서 사용된 용어 "치료"는, 본 발명에 따른 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 조성물의 투여로 상기 질병의 증상이 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 말한다.

본 발명의 사료 첨가제 조성물은, 넙치 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료를 위하여 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함할 수 있으며, 상기 복합제는 분말 형태로 존재할 수 있다.

본 발명의 사료첨가제 조성물은 당업계에 공지된 다양한 제조방법에 따라 적절한 유효 농도 범위에서 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 첨가하여 제조 가능하다. 구체적으로 본 발명의 사료첨가제 조성물은 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제의 혼합 비율은 임의로 선택할 수 있으나, 바람직하게는 전체 사료첨가제 조성물 중 0.01 내지 100중량%, 보다 바람직하게는 전체 사료첨가제 조성물 중 0.01 내지 50중량%의 비율로 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명의 사료 첨가제는 통상적인 사료에 첨가될 수 있는 성분을 추가로 포함할 수 있다. 예를 들어, 어류 사료첨가제는 상기 기재한 성분 이외에 추가로 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산 등의 유기산이나 인산칼륨, 인산나트륨, 중합 인산염 등의 인산염이나 폴리페놀, 카테친, 토코페롤, 비타민 C, 녹차 추출물, 키토산, 탄니산 등의 천연 항산화제 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항인플루엔자제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화 할 수 있다.

본 발명의 사료 첨가제는 사료관리법상의 보조사료에 해당하며, 탄산수소나트륨, 벤토나이트(bentonite), 산화마그네슘, 복합광물질 등의 광물질제제, 아연, 구리, 코발트, 셀레늄 등의 미량 광물질인 미네랄제제, 케로틴, 비타민 E, 비타민 A, D, E, 니코틴산, 비타민 B 복합체 등의 비타민제, 메티오닌, 리이산 등의 보호아미노산제, 지방산 칼슘염 등의 보호지방산제, 생균제(유산균제), 효모배양물, 곰팡이 발효물 등의 생균, 효모제 등이 추가로 포함될 수 있다.

본 발명의 사료 첨가제 조성물 및 이를 포함하는 사료는 보조성분으로 해양 단백질 (어분 또는 크릴밀), 식물성 단백질 (콩 분말, 밀 글루텐, 옥수수 글루텐, 루핀 분말, 완두콩 또는 해바라기 분말), 혈분 및 골분을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 단백질원, 어류 기름 (오징어간유) 또는 식물성 기름 (평지씨 기름, 콩기름, 대두유)을 포함하는 군으로부터 선택되는 하나 이상의 에너지원, 비타민혼합물 및 무기질혼합물을 포함하나, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 사료첨가제 조성물은 포유류, 가금류, 어류 및 갑각류를 포함하는 다수의 동물 식이 즉, 사료에 적용할 수 있다.

본 발명에 따른 사료첨가제 조성물을 포함하는 어류용 사료 배합 방법은 사료첨가제 조성물을 동물사료에 건조 중량 기준으로 1kg 당 약 1g 내지 500g, 바람직하기로는 10g 내지 100g의 양으로 혼합할 수 있다. 또한 사료 혼합물을 완전히 혼합한 후, 매쉬로 공급하거나, 추가가공 공정을 통하여 팰렛화, 팽창화, 압출 공정을 거칠 수 있다.

상기 어류 사료용 사료 첨가제는 넙치 등의 어류의 사료에 직접 혼합하거나 사료와 별도로 단독으로 경구 제형, 주사 또는 경피로 다른 성분과 조합하여 쉽게 투여 할 수 있다. 투여량은 넙치 등의 어류의 체중, 건강상태, 식이, 투여방법 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 다양하다. 당 업계에서 잘 알려진 바와 같이 일일 투여량은 약 0.01~20㎎/g, 바람직하게는 0.05~10㎎/g이며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여하는 것이 더욱 바람직하다.

본 발명의 사료 첨가제는 바이러스성 출혈성 패혈증에 대한 내성 증강을 목적으로 사료에 첨가될 수 있다. 본 발명의 사료 첨가제를 사료 첨가물로 사용할 경우, 상기 사료 첨가제를 그대로 첨가하거나 다른 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 사료 첨가제의 투여 형태는 비독성 제약상 허용 가능한 담체와 조합하여 즉시 방출 또는 서방성 제형으로 제조 할 수 있다. 이러한 식용 담체는 옥수수 전분, 락토스, 수크로스와 콩 플레이트 프로필렌 글리콜일 수 있다. 고체 담체의 경우에는 정제, 산제, 토로키제로 사용될 수 있으며 액체형 담체의 경우 시럽제, 액체 현탁액제, 에멀젼제, 용액제 투여 형태일 수 있다. 또한, 투여제는 보존제, 윤화제, 용액 촉진제, 안정화제를 함유할 수 있으며 다른 염증 질환 개선제 및 바이러스 예방상 유용한 물질을 함유 할 수도 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 호장근 추출물:스테비오사이드가 1:3 내지 1:5의 비율로 혼합된 사료 첨가제 조성물을 사용하였다.

상기 목적을 달성하기 위한 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 사료 첨가제 조성물을 포함하는 사료를 제공한다.

본 발명에서 사용된 용어 "사료"는, 동물이 먹고, 섭취하며, 소화시키기 위한 또는 이에 적당한 임의의 천연 또는 인공 규정식, 한끼식 등 또는 상기 한끼식의 성분을 의미한다.

구체적으로, 본 발명에 따른 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 당업계의 공지된 다양한 형태로 사료로 제조 가능하며, 바람직하게는 농후사료, 조사료 및/또는 특수사료가 포함될 수 있다.

농후사료에는 밀, 귀리, 옥수수 등의 곡류를 포함하는 종자열매류, 곡물을 정제하고 얻는 부산물로서 쌀겨, 밀기울, 보릿겨 등을 포함하는 겨류, 콩, 유체, 깨, 아마인, 코코야자 등을 채유하고 얻는 부산물인 깻묵류와 고구마, 감자 등에서 녹말을 뺀 나머지인 녹말찌꺼기의 주성분인 잔존녹말질류 등의 찌꺼기류, 육분 (肉粉), 혈분, 우모분, 탈지분유, 우유에서 치즈, 탈지유에서 카제인을 제조할 때의 잔액인 훼이 (whey)를 건조한 건조훼이 등의 동물질 사료, 효모, 클로렐라, 해조류 등이 있다.

조사료에는 야초, 목초, 풋베기 등의 생초 (生草) 사료, 사료용 순무, 사료용 비트, 순무의 일종인 루터베어거 등의 뿌리채소류, 생초, 풋베기작물, 곡실 (穀實) 등을 사일로에 채워 놓고 젖산발효시킨 저장사료인 사일리지 (silage), 야초, 목초를 베어 건조시킨 건초, 종축용 (種畜用) 작물의 짚, 콩과 식물의 나뭇잎 등이 있다. 특수사료에는 굴껍테기, 암염 등의 미네랄 사료, 요소나 그 유도체인 디우레이드이소부탄 등의 요소사료, 천연사료원료만을 배합했을 때 부족하기 쉬운 성분을 보충하거나, 사료의 저장성을 높이기 위해서 배합사료에 미량으로 첨가하는 물질인 사료첨가물, 식이보조제 등이 있다.

상기 "식이 보조제"는 예를 들어 치료제 또는 소화제를 동물에 제공하는 제제 함유 조성물로, 통상 생체의 열량 섭취 공급원, 즉 에너지 공급원은 아니지만, 통상의 동물 사료에 추가하여 섭취되는 조성물을 의미한다.

본 발명에 따른 사료 첨가제 조성물을 포함하는 어류용 사료 배합 방법은 사료 첨가제 조성물을 어류사료에 건조 중량 기준으로 1kg 당 약 1g 내지 500g, 바람직하기로는 5g 내지 50g의 양으로 혼합하는 것이다. 또한 사료 혼합물을 완전히 혼합한 후, 매쉬로 공급하거나, 추가가공 공정을 통하여 팰렛화, 팽창화, 압출 공정을 거치는 것이 바람직하다.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 사료를 어류에 섭식시키는 단계를 포함하는 어류의 사육방법을 제공한다.

본 발명의 사료 첨가제 조성물 또는 이를 포함하는 사료는 포유류, 가금류, 어류 및 갑각류를 포함하는 다수의 동물 식이 즉, 사료에 적용할 수 있다. 상업용으로 중요한 돼지, 소, 염소 등의 포유류, 코끼리, 낙타 등의 동물원 동물, 개, 고양이 등의 가축에게 사용할 수 있다. 상업적으로 중요한 가금류에는 닭, 오리, 거위 등이 포함되며 송어와 새우와 같은 상업적으로 사육되는 어류 및 갑각류를 포함 할 수 있다.

본 발명의 사료 첨가제 조성물이 적용될 수 있는 양식어류는 바람직하게는, 넙치 (Paralichthys olivaceus), 방어 (Seriola quinqueradiata), 참돔 (Pagrus major), 자주복 (Takifugu rubripes), 부시리 (Seriola aureovittata), 송어 (Oncorhynchus masou), 무지개 송어 (Oncorhynchus mykiss), 잿방어 (Seriola dumerili), 전갱이 (Trachurus japonicus), 흑점줄전갱이(Pseudocaranx dentex), 능성어 (Epinephelus septemfasciatus), 참다랑어 (Thunnus thynnus), 잉어 (Cyprinus carpio), 제브라피쉬 (Danio rerio), 메기 (Silurus asotus), 클라리아스 가리에피누스 (Clarias gariepinus), 틸라피아 (Oreochronis niloticus), 연어 (Oncorhynchus keta), 대서양 연어 (Salmo salar) 및 송사리 (Oryzias latipes)로 구성된 군으로부터 선택되는 하나의 어류이고 이에 한정하지 않는다. 가장 바람직하게는 넙치 (Paralichthys olivaceus)일 수 있다.

본 발명의 실험예에서, 호장근 추출물 및 스테비오사이드의 복합제를 포함하는 사료 첨가제 조성물을 급이한 넙치에서 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV)에 대한 내성이 현저히 증가함을 확인하였다(표 2 및 도 1).

따라서, 본 발명의 호장근 추출물 및 스테비오사이드의 복합제는 VHS의 예방 또는 치료를 위하여 사용될 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.

상기 호장근 추출물, 스테비아, 스테비오사이드, VHS, VHSV, 예방, 치료는 상기 설명한 바와 같다.

본 발명에서 사용된 용어 "약학 조성물"은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명에서, 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 상엽 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

상기 호장근 추출물, 스테비아, 스테비오사이드, VHS, VHSV, 예방, 치료는 상기 설명한 바와 같다.

본 발명에서 사용된 용어 "약학 조성물"은, 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 구체적으로, 상기 약학 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다. 본 발명에서, 상기 약학 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 상엽 추출물과 이의 분획물들에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는 데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.

상기 본 발명의 약학 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여될 수 있는데, 본 발명에서 "약제학적으로 유효한 양"이란, 의학적 치료 또는 예방에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 질환의 중증도, 약물의 활성, 개체의 연령, 체중, 건강, 성별, 개체의 약물에 대한 민감도, 사용된 본 발명의 조성물의 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율 치료기간, 사용된 본 발명의 조성물과 배합 또는 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하다.

본 발명의 약학조성물의 투여량은 예를 들어, 상기 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 본 발명의 약학 조성물을 어류에 하루 동안 1 내지 20 ㎎/㎏, 보다 바람직하게는 1 내지 10 ㎎/㎏으로 투여할 수 있고, 본 발명의 조성물의 투여빈도는 특별히 이에 제한되지 않으나, 1일 1회 투여하거나 또는 용량을 분할하여 수회 투여할 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 약학 조성물을 어류에 투여하는 단계를 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료 방법을 제공한다.

상기 약학 조성물, VHS, VHSV, 예방, 치료는 상기 설명한 바와 같다.

본 발명에서 사용된 용어 "투여"란, 어떠한 적절한 방법으로 대상에게 본 발명의 약학 조성물을 도입하는 것을 말하며, 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다

본 발명의 바이러스성 출혈성 패혈증을 치료하는 방법에 있어서, 상기 약학 조성물의 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 어떠한 일반적인 경로를 통하여도 투여될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 특별히 이에 제한되지 않으나, 목적하는 바에 따라 복강내 투여, 정맥내 투여, 근육내 투여, 피하 투여, 피내 투여, 경구 투여, 비내 투여, 폐내 투여, 직장내 투여될 수 있다. 또한, 상기 조성물은 활성 물질이 표적 세포로 이동할 수 있는 임의의 장치에 의해 투여될 수 있다.

상기 목적을 달성하기 위한 또 다른 하나의 양태로서, 본 발명은 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스(VHSV)에 대한 항바이러스용 조성물을 제공한다.

상기 호장근 추출물, 스테비아, 스테비오사이드, VHS, VHSV는 상기 설명한 바와 같다.

본 발명의 상기 호장근 추출물, 및 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드의 복합제를 포함하는 VHS에 대한 조성물은 천연물 기반으로서 종래 포르말린과 같은 항바이러스성 물질에 비하여 인체나 어류에 피해를 주지 않으면서 소독 효과를 나타내는 이점이 있다. 포르말린은 저가의 강력한 살균소독제 이지만 자극성 냄새를 발산하는 독극물일 뿐만 아니라 발암성 물질로 분류됨에 따라 해양오염 방지법, 약사법, 및 식품위생법 등에서 그 사용을 엄격하게 제한하고 있다. 또한, 본 발명의 항바이러스용 조성물의 경우 다른 항생제와 병용하여 그 효과를 극대화시킬 수 있다.

본 발명의 일 실시예에 의하면, 본 발명의 호장근 추출물 복합제는 어류에 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스의 감염을 억제하여 생존율을 증가시킨다(표 2 및 도 1).

본 발명의 호장근 추출물, 또는 상기 호장근 추출물에 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 조성물은 어류에 감염된 VHSV에 대한 활성을 억제하는 효과를 나타내고 이를 이용하여 높은 안정성을 가진 어류의 VHS의 예방 또는 치료를 향상시키는 효과를 나타내므로, VHSV의 감염에 대한 어류의 생존율 향상 및 어업 생산성 향상으로 인한 어업 안정성 증대에 널리 활용될 수 있다.

도 1은, 넙치를 대상으로 호장근 추출물 복합제의 VHSV에 대한 누적 폐사율을 비교 도식한 것이다.

이하 본 발명을 실시예를 통하여 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실시예 1. 호장근 추출물 및 복합제의 제조

본 발명에서 사용한 호장근은 일반적으로 자연에서 쉽게 채집할 수 있는 것으로 추출물을 효율적으로 얻기 위하여 세절 형태로 분쇄하여 사용하였다.

스테비오사이드 20Kg을 정제수(200 L)에 녹이고 추출장비에 호장근 100 ㎏을 넣고 제조된 스테비오사이드 용액을 첨가한 후 정제수(200L)를 가하여 60℃에서 24시간 동안 추출하고, 이를 여과지로 여과하여 제조 하였다.

실험예 2. 호장근 추출물 복합제의 VHSV 저해효과

먼저, 상기 실시예 1 의 호장근 복합추출물을 포함하는 조성물에 대해 생체 내에서 항VHSV 효과를 검증하기 위하여, 넙치는 (9.0±0.8cm/6.3±1.4g) 각 그룹별로 200마리씩 구성하였고, 시판 펠렛 사료를 먹였을 때 매일 어체중당 5%이상의 사료를 먹였으므로, 본 실험은 5%의 어체중에 해당하는 60 g의 사료에 호장근 추출물 복합제를 1%함량으로 첨가하여 실험실과 양식장에서 넙치에 경구투여하였다. 각 실험어에 2주와 6주간에 걸쳐 사료를 섭식시켰으며, 각각의 섭식기간이 끝난 직후 각 그룹 당 15마리씩 무작위로 선발하여 복강감염을 통해 VHSV에 인위감염시켜 21일간 생존 여부를 관찰하였다.

인위감염실험은 모든 개체에 2×10^7.8 VHSV/fish 및 10^7.8 VHSV/fish의 농도로 복강 주사하였다(표 1). 이후 약 1톤 규모의 원형 수조에서 함께 사육하였다. 환수는 1일 2회 실시하였으며, 냉각기를 사용하여 수온을 약 14℃ 정도로 유지하였고, 사육기간 동안에는 절식하였다. 이어, 3주 후의 폐사율을 비롯하여 상대생존율 (Relative Percent Survival, RPS = (1-실험군 페사율/대조군 폐사율)× 100)을 계산하였고 (수학식 1), 호장근 추출물 복합제의 VHSV에 대한 항바이러스 효과를 분석하였다.

구분	병원체	감염농도
복강 주사감염	VHSV	2 x 107.8/fish
복강 주사감염	VHSV	1 x 107.8/fish

그 결과 VHSV 복강감염 대조구는 최종적으로 93.3%와 60.0%의 폐사율을 보였고, 실험실 및 양식현장에서 제조한 호장근 추출물 복합제 10 mg/g/day를 투여한 그룹에서, 53.5%, 33.3%, 46.7%, 및 26.7%의 최종 폐사율을 나타내었다(표 2). 또한, 호장근 추출물 복합제 (급이 사료 내 1% 함유; 5mg/Kg)시 2주간 투여한 그룹에서 강한 VHSV 폐사율 개선의 효과를 볼 수 있었다(도 1).

접종농도		Control	10 ㎕/g	10 ㎕/g
			양식장	실험실
2 x 107.8/mL	Mortality	93.3	53.3	46.7
	RPS	0.0	42.9	50.0
1 x 107.8/mL	Mortality	60.0	33.3	26.7
	RPS	0.0	44.4	55.6

따라서, 상기 호장근 추출물 복합제를 사료 첨가제 조성물로 사용 할 경우, 바이러스성 출혈성 패혈증을 효과적으로 예방 및 치료할 수 있음을 알 수 있다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허 청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

Claims (9)

1. 호장근 추출물을 유효성분으로 포함하는 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용 사료 첨가제 조성물.
   
2. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 것인, 조성물.
   
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 사료 첨가제 조성물은 VHSV(Viral hemorrhagic septicemia virus)로 유발된 바이러스성 출혈성 패혈증의 예방 또는 치료용인 것인, 조성물.
   
4. 제1항 또는 제2항의 사료 첨가제 조성물을 포함하는, 사료.
   
5. 제4항의 사료를 어류에 섭식시키는 단계를 포함하는, 어류의 사육방법.
   
6. 호장근 추출물을 유효성분으로 포함하는, 바이러스성 출혈성 패혈증에 대한 예방 또는 치료용 약학 조성물.
   
7. 제6항에 있어서, 상기 조성물은 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 것인, 조성물.
   
8. 호장근 추출물을 유효성분으로 포함하는, 바이러스성 출혈성 패혈증 바이러스에 대한 항바이러스용 조성물.
   
9. 제8항에 있어서, 상기 조성물은 스테비아 추출물 또는 스테비오사이드를 추가로 포함하는 것인, 조성물.

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