KR101069016B1 - 글리세롤디하이드라타제 및 3-하이드록시프로피온알데히드디하이드로게나제를 코딩하는 유전자로 형질전환된 재조합미생물 및 상기 재조합 미생물을 이용한3-하이드록시프로피온산의 제조방법 - Google Patents
글리세롤디하이드라타제 및 3-하이드록시프로피온알데히드디하이드로게나제를 코딩하는 유전자로 형질전환된 재조합미생물 및 상기 재조합 미생물을 이용한3-하이드록시프로피온산의 제조방법 Download PDFInfo
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Abstract
Description
조성 | 농도 |
주형 DNA | 20 ng |
정방향 프라이머 | 100 pmol |
역방향 프라이머 | 100 pmol |
dNTP mix | 400 pmol |
Ultra pfu | 1 Unit |
Ultra pfu buffer | 1X |
전체 반응 용량 | 50 μl |
유도물질 | SH-BGA1 | SH-BGKA1 | ||
IPTG (mM) | DhaB 활성a (U mg-1 protein) |
AldH 활성a (U mg-1 protein) |
DhaB 활성a (U mg-1 protein) |
Kgsadh-I 활성a (U mg-1 protein) |
Un-induced | 0 | 0 | 0 | 0 |
0.1 | 28.0 | 1.7 | 27.0 | 1.1 |
0.5 | 14.0 | 1.8 | 16.0 | 1.4 |
1.0 | 12.0 | 1.9 | 19.0 | 1.6 |
기질 |
NAD+ | NADP+ | ||
총 활성 (μmol NADH ml-1min-1) |
특이성 (U mg-1 protein) |
총 활성 (μmol NADH ml-1min-1) |
특이성 (U mg-1 protein) |
|
3-하이드록시 프로피온알데히드 |
82.05 | 38.07 | 22.84 | 10.60 |
포름알데히드(C1) | 0.25 | 0.12 | 0.000 | 0.000 |
아세트알데히드(C2) | 23.36 | 10.84 | 18.34 | 8.51 |
프로피온알데히드(C3) | 71.64 | 33.25 | 45.68 | 21.2 |
부틸알데히드(C4) | 65.25 | 30.28 | 46.09 | 21.39 |
발르알데히드(C5) | 63.52 | 29.47 | 17.78 | 8.25 |
이소발르알데히드 | 78.81 | 36.57 | 65.73 | 30.50 |
2-퓨르알데히드 | 27.72 | 12.86 | 29.99 | 13.92 |
벤즈알데히드 | 38.53 | 17.88 | 58.26 | 27.04 |
기질a | 조효소 | Vmax (U mg-1 protein) |
Km (mM) |
kcat (s-1) |
kcat/Km 103(M-1s-1) |
3-HPA | NAD+ | 32.1 ± 5.14 | 0.49 ± 0.015 | 28.54 ± 4.6 | 58.57 ± 9.37 |
NADP+ | 5.5 ± 0.88 | 0.29 ± 0.009 | 4.91 ± 0.79 | 16.92 ± 2.71 | |
3-HP | NADH | 0.3 ± 0.05 | 0.12 ± 0.004 | 0.26 ± 0.04 | 2.20 ± 0.348 |
NADPH | 0 | 0 | 0 | 0 | |
3-HPAb | NAD+ | 30.1 ± 4.81 | 0.06 ± 0.002 | 26.79 ± 4.3 | 468.6 ± 74.9 |
조성 | 농도 |
주형 DNA | 10 ng |
정방향 프라이머 | 10 pmol |
역방향 프라이머 | 10 pmol |
dNTP mix | 100 pmol |
Taq polymerase | 0.5 Unit |
Taq buffer | 1X |
총 반응 용량 | 50 μl |
균주명 | 숙주세포 | 플라즈미드 | 발효시간 | 세포농도 | 3-HP 농도 |
SH-BGA1 | E. coli BL21 | pCBGAB pQAD2 |
72 hr | 1.6 g/l | 0.90 g/l |
SH-BGKA1 | E. coli BL21 | pCGBAB pRKD |
72 hr | 1.5 g/l | 0.78 g/l |
SH-BGA2 | E. coli BL21 ΔldhA |
pCBGAB pQAD2 |
72 hr | 1.5 g/l | 0.51 g/l |
SH-BGA3 | E. coli BL21 ΔldhAΔpta-ack |
pCGBAB pRKD |
72 hr | 1.4 g/l | 0.49 g/l |
Claims (10)
- 글리세롤디하이드라타제를 코딩하는 dhaB 유전자; 글리세롤디하이드라타제 재활성화인자를 코딩하는 gdrAB 유전자; 및 α-케토글루타레이트세미알데히드 디하이드로게나제를 코딩하는 kgsadh-I 유전자로 구성되는 재조합 벡터.
- 제 1항에 있어서, 상기 dhaB 유전자는 서열번호 1로 표시되는 염기서열을 갖는 dhaB1 유전자, 서열번호 3으로 표시되는 염기서열을 갖는 dhaB2 유전자 및 서열번호 5로 표시되는 염기서열을 갖는 dhaB3 유전자로 구성되는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터.
- 제 1항에 있어서, 상기 gdrAB 유전자는 서열번호 7로 표시되는 염기서열을 갖는 gdrA 유전자 및 서열번호 9로 표시되는 염기서열을 갖는 gdrB 유전자로 구성되는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터.
- 삭제
- 제 1항에 있어서, 상기 kgsadh-I 유전자는 서열번호 13으로 표시되는 염기서 열을 갖는 것을 특징으로 하는 재조합 벡터.
- 제 1항에 따른 재조합 벡터로 형질전환된 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.
- 제 6항에 있어서, 상기 재조합 미생물은 대장균 BL21-SH-BGKA1 재조합 균주(KFCC11419P)인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.
- 제 6항에 있어서, 상기 재조합 미생물은 젖산을 생산하도록 하는 ldhA 유전자 또는 아세트산을 생산하도록 하는 pta-ack 유전자 중 어느 하나 또는 둘 이상의 유전자를 제거한 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.
- 제 8항에 있어서, 상기 재조합 미생물은 대장균 BL21-SH-BGA3ΔldhAΔpta-ack 재조합 균주(KFCC11422P)인 것을 특징으로 하는 재조합 미생물.
- 제 6항 또는 제 9항 중 어느 한 항의 재조합 미생물을 글리세롤 배지에서 배양하고, 상기 배양액으로부터 3-하이드록시프로피온산을 회수하는 것을 특징으로 하는 3-하이드록시프로피온산의 제조방법.
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Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US6852517B1 (en) | 1999-08-30 | 2005-02-08 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Production of 3-hydroxypropionic acid in recombinant organisms |
US20050239179A1 (en) | 1998-08-04 | 2005-10-27 | Metabolix, Inc. | Polyhydroxyalkanoate production from polyols |
US20070148749A1 (en) * | 2004-03-26 | 2007-06-28 | Shinzo Yasuda | Process for producting 1,3-propanediol and or/3-hydroxypropionic acid |
-
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US20050239179A1 (en) | 1998-08-04 | 2005-10-27 | Metabolix, Inc. | Polyhydroxyalkanoate production from polyols |
US6852517B1 (en) | 1999-08-30 | 2005-02-08 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Production of 3-hydroxypropionic acid in recombinant organisms |
US20070148749A1 (en) * | 2004-03-26 | 2007-06-28 | Shinzo Yasuda | Process for producting 1,3-propanediol and or/3-hydroxypropionic acid |
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Title |
---|
Metabolic Engineering, 1999, 1:141-152* |
Cited By (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
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