KR101063853B1 - 가축용 복합 미생물제제 - Google Patents

가축용 복합 미생물제제 Download PDF

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Abstract

본 발명은 가축용 복합 미생물제제에 관한 것으로, 토양 및 분변 중 질산화작용을 통한 암모늄이온을 산화시키는 효과가 높고 단백질 분해능력이 우수한 신규 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) DH2(KCTC11427 BP)를 포함하는 것을 특징으로 한다.
사료, 미생물

Description

가축용 복합 미생물제제{Probiotics For Feed Additives}
본 발명은 복합 미생물 제제에 관한 것으로, 보다 상세하게는 숙주 동물의 장내 미생물 및 효소의 균성을 개선시키고 면역체계를 자극시키는 여러 가지 유익한 생균 및 발효대사물질을 포함한 복합미생물 제제에 관한 것이며 암모니아가스 발생 및 분변에서의 암모니아가스 발생을 감소시키는 것에 관한 것이다.
프로바이오틱스(probiotics)의 균은 장내에서 증식하여 유해균의 증식 또는 정착을 저지하거나, 그 균체 성분 및 발효대사성분이 유효물질로써 직접 생체의 정상화 또는 장내 균총의 정상화에 기여하는 기능이 있어야 한다. 또한 투여균 그 자체나 그 대사생성물이 장내유해세균에 의하여 생성되는 균체독소(enterotoxin)등의 유해물질을 무독화하거나 그 생성을 저지하여야 한다.
따라서 장내에서 암모니아, 황화수소, 각종 아민류 및 페놀류 등 부패생성물이 억제되고 비타민 B군의 생성, 비타민 E의 흡수촉진작용, 생성하는 유기산이나 아미노산 등에 의한 소화흡수의 개선 등의 효과가 있다.
본 출원인은 한국 등록특허공보 제 10-287825 호에서, 신규의 바실러스 서브틸리스를 포함하는 복합 미생물 제제를 출원하여 등록받은 바 있으나, 상기 바실러 스 서브틸리스 DH-1(KCTC-0606 BP)의 경우 내생포자의 수율 등에 관한 정보는 있으나 구체적인 환경개선과 가축의 생산성 향상에 대한 효과는 부족하였다.
따라서, 본 발명의 목적은 장내 미생물 및 효소의 균형을 개선시키고 단백질이용율을 높여 암모니아가스 발생을 감소시킬 수 있는 복합 미생물 제제를 제공하는 것이다.
본 발명은 또한 축분의 발효를 통한 환경개선을 목적으로 한다.
상기한 본 발명의 목적은 신규의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) DH2(KCTC11427 BP)를 포함하는 복합 미생물 제제에 의해 달성된다. 바람직하게는, 신규의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) DH2(KCTC11427 BP), 락토바실러스 속(lactobacillus sp.) 미생물(KCTC-0608 BP), 엔테로코커스 속(Enterococcus sp.)미생물(KCTC0609 BP), 및 사카로마이세스 세레비지에(Saccaromyces cerevisiae)(KCTC-0610 BP) 등을 포함하는 것을 특징으로 하는 복합 미생물 제제에 의해 달성된다.
본 발명은 암모니아 산화능력과, 대사능력이 뛰어난 복합균주를 사용하여 미생물 제제를 만들어 기존의 생균제와 효모 배양물의 장점을 겸비한 환경개선제제를 제공하는 것이다.
본 발명에서는 무기물(암모니아)분해능력이 우수하고, 다량의 효소(아밀라제, 프로테아제)를 생산하는 선별된 바실러스 속 균주 중 대두박에 잘 적응하고 발 효능이 우수한 균주(DH2) 선택하였다.
본 발명의 복합 미생물 제제는 생산성 향상 및 축사의 환경 개선에 기여한다.
본 발명의 신규의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) DH2(KCTC11427 BP) 균주는 토양 및 분변 중 질산화작용을 통한 암모늄이온을 산화시키는 효과가 높고 단백질 분해능력이 우수하다. 본 발명의 복합 미생물 제제에서 이 신규의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) DH2(KCTC11427 BP) 균주는 1.1×107∼1.1×109 cfu/g으로 포함될 수 있다.
본 발명의 락토바실러스 속 미생물(KCTC-0608 BP)는 유산간균으로 기질인 대두박을 유산 발효시켜 젖산, 초산 등의 유기산을 생성하며 내담즙성 및 내산성을 갖고 있는 유용균이다. 소화효소를 생성하여 사료의 소화흡수를 도와주고 대사생성물과 세포벽 성분에 흡수되어 가축의 고유 면역기전을 자극한다. 본 발명의 복합 미생물 제제에서, 락토바실러스 속 미생물(KCTC-0608 BP)은 1.8×106∼1.8×109 cfu/g으로 포함될 수 있다.
엔테로코커스 속 미생물(KCTC-0609 BP)은 돼지의 소장에서 분리된 장구균이다. 본 발명의 엔테로코커스 속 미생물(KCTC-0609 BP)은 대사 산물인 젖산, 초산 등의 유기산에 의해 소화관내 pH를 저하시켜 병원성 대장균, 살모넬라균과 같은 병 원성 세균과 장내 유해균의 증식억제 및 독소생성을 억제하는 작용이 있다. 특히, 위막성 대장염에 관하여는 독소를 생성하는 클로스트리디움 디피슬(Clostridium difficile)의 증식을 억제한다. 본 발명의 복합 미생물 제제에서, 이 엔테로코커스 속 미생물(KCTC-0609 BP)은 6.0×106∼6.0×109 cfu/g으로 포함될 수 있다.
본 발명의 사카로마이세스 세레비지에는(KCTC-0610 BP)는 유산균의 생장을 돕기 위해 부가된다. 또한, 사카로마이세스 세레비지에는, 세포벽이 분해되면 용해성 다당류의 상태로 효모세포에 있던 만난 올리고당(Mannan Oligosaccaride)이 나오는데 이 당이 유해균을 응집하여 동물의 장 밖으로 배설시키는 작용을 하게 된다. 또한, 풍부한 아미노산과 각종 비타민, 미네랄 및 미지성장인자(UGF)를 함유하며, 여러 가지 소화효소를 생성하여 사료 영양분의 소화흡수를 활발하게 하여 동물의 정상 성장과 생산성에 기여한다. 또, 단백질 이용율을 높여 분변 내 질소 함량을 낮추고 암모니아 발생량을 감소시킨다. 본 발명의 복합 미생물 제제에서, 이 사카로마이세스 세레비지에는(KCTC-0610 BP)는 1.0×106∼1.0×109 cfu/g으로 포함될 수 있다.
본 발명의 복합 미생물 제제는 다음과 같이 제조된다. 각각의 균주들을 선별, 분리한 다음 각각의 균주 배양액에서 균주배양하고, 열처리 대두박 기질에 접종하여 각 균주별 최적의 온도 및 습도 조건에서 기질 발효시킨 후 저온건조로 효소의 활성을 유지하면서 생균 및 배양물을 건조시킨다. 이것을 각각 3mm 이하의 입자로 분쇄한 다음 효소 안정제 및 부형제와 혼합한다.
본 발명의 복합 미생물 제제는 각종 사료에 약 0.1-0.2%의 양으로 첨가되어 사용된다. 돼지, 닭, 소, 개 등 다양한 가축의 사료에 사용될 수 있으며, 사료의 종류나 형태에 관계없이, 발효사료, 사일레지 사료, 가루형 사료, 펠렛형 사료 등 모두에 사용될 수 있다.
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.
I. 균주선별
토양미생물은 유기태 질소, 인, 황 등을 무기화하며 유기물을 특별한 형태의 유기물로 변화시키는 작용과 무기물의 유기화 등의 역할을 한다. 질산화, 탈질, 유황의 산화, 유산의 환원, 철의 산화, 환원, 망간의 산화, 환원 등은 토양경제에 있어 상당히 중요하고 그 반응은 토양미생물 중의 일부가 담당하고 있다.
질산화균, 탈질균의 일부, 유황세균, 유산환원균, 철산화균의 일부는 화학무기영양세균으로 불리워진다. 유기영양미생물은 유기물의 산화과정에서 생체에 필요한 자유에너지를 획득하는데, 반대로 이들은 무기물의 산화과정에 의존한다. 자유에너지의 획득반응에서는 부가적으로 유기물의 필요한 형태변화가 생기는데 질산화균은 NH4 + 또는 NO2 -를 각각 NO2 -와 NO3 -로 산화하는 과정에서 자유에너지를 얻고 있다.
토양중 질산화작용(Nitrification)의 주역은 무기영양성의 질산화세균으로 암모늄이온을 아질산이온으로 산화시키는 암모니아산화 세균과, 아질산이온을 질산이온으로 산화시키는 아질산화 세균으로 나뉜다.
Figure 112009002938117-pat00001
Bergery의 분리법에는 암모니아산화 세균으로 4속 5종, 아질산화 세균으로는 3속 3종으로 기술되어있다. 검출법은 다음과 같다.
토양 및 돈분의 현탁액을 무기배지에 직접배양하여 질산화세균을 우점시킨 후 무기배지를 이용하여 분리하였다(표 1).
표1. 무기배지 조성
무기배지 조성
(NH4)2SO4 0.5g
NaCl 0.3g
K2HPO4 1.0g
FeSO4.7H2O 0.03g
DW 1.0L
이렇게 분리된 균주를 이용하여 16s rRNA 유전자분석을 통하여 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis)라는 것을 확인하였으며, 그 결과는 도 1에 게시하였다.
효소분석을 통하여 단백질 분해효소(Protease)와 전분분해효소(Amylase)역가가 또한 우수하다는 것을 확인하였다.
그리하여 대두박을 이용한 균수율을 조사한 결과가 다음과 같았다(표2).
표2. 대두박을 이용한 발효균수 Check.
박테리아 배지 수(cfu/g)
바실러스 서브틸리스 DH2 PCA 2.5X109
상기에서 제조된 미생물을 복합 미생물제제로 제조하여 돈분 슬러리에 첨가하여 암모니아발생량을 조사하였다. 첨가량은 제제 0.1%의 양으로 첨가하였다(표3).
표 3. DH2를 포함한 복합 미생물 제제의 돈분 슬러리내 암모니아 발생량 비교
측정일자 및 발생량(ppm)
1일 2일 3일 4일 5일
대조구 15 15 14 19 19
DH2 30 8 11 12 13
실시예 1. 효능시험(돼지)
위 표 3에서 제조한 복합 미생물 제제를 0.1% 첨가한 사료를 30일간 1000두의 돼지에게 섭취시키고, 복합 미생물 제제를 첨가하지 않은 동일한 사료를 30일간 1000두의 돼지에게 섭취시켰다. 암모니아 발생 도를 측정하여 결과를 표 4에 기재하였다.
표4. 효능시험(돼지)
축사내 돈분슬러리에서 암모니아 발생량 측정(ppm)
3일 4일 5일 6일 15일 30일
대조구 61 64 63 65 65 65
시험구 34 34 35 35 35 33
실시예 2. 효능시험(양계)
위 표 3에서 제조한 복합 미생물 제제를 0.2% 첨가한 사료를 11주동안 23,755수의 닭에게 섭취시키고, 복합 미생물 제제를 첨가하지 않은 동일한 사료를 11주동안 23,755수의 닭에게 섭취시켰다. 암모니아 발생정도 및 산란율, 파란율등의 결과를 표 5, 6에 기재하였다.
표 5 효능시험(양계)
계사내 양계분에서 암모니아 발생량 측정(ppm)
주 19주령 20주령 21주령 22주령 23주령 24주령 25주령 26주령 27주령 28주령 29주령 30주령
시험구 7 6 5 5 4 3.5 3 3 3 3 3.5 4
표 6 효능시험(양계) 산란율, 파란율
주간산란율
(%) 		주령 19주령 20주령 21주령 22주령 23주령 24주령 25주령 26주령 27주령 28주령 29주령 30주령
대조구 5.8 19.1 44.5 65.2 76.9 85.7 87.2 85.6 85.5 88 90.8 91.7
시험구 1.9 10.7 39.8 69.5 78.6 85.4 88.4 88.6 87.4 88.3 90.4 91.7
주간파란율
(%) 		대조구 4.2 2.3 2.1 1.3 1.1 1.2 1 1.3 1.1 0.9 1 1
시험구 6.1 3.3 2.3 1.7 1.5 1.3 1.1 1.2 1.1 1.1 1.1 1
실시예 3. 효능시험(육계)
위 표 3에서 제조한 복합 미생물 제제를 0.2% 첨가한 사료를 4주동안 18000 수의 닭에게 섭취시키고, 복합 미생물 제제를 첨가하지 않은 동일한 사료를 4주동안 12000수의 닭에게 섭취시켰다. 암모니아 발생정도 및 생산효율을 도 2, 표7에 기재하였다. 또한 분변 내에 DH2의 활성도를 체크하기 위해 분석한 결과는 표 7과 같다.
표 7 효능시험(육계)
구분 육성율 (%) 평체( kg ) 사료요구율(%) 증체량 / day (g) 출하일령( day ) 생산지수
시험구 98.83 1.69 1.65 57.5g 29 348
대조구 98.78 1.59 1.68 49.0g 32 291
합계 98.8 1.695 1.66 53.25g 30.5 319.5
도 1은 본 발명에 의해 분리된 균주의 16s RNA 유전자 분석결과.
도 2는 본 발명의 복합 미생물 제제를 섭취한 닭의 계사내 암모니아 증감율을 나타낸 그래프.

Claims (4)

  1. 신규의 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) DH2(KCTC11427 BP)를 포함하는 가축용 복합 미생물 제제.
  2. 제 1 항에 있어서, 락토바실러스 속(lactobacillus sp.) 미생물(KCTC-0608 BP), 엔테로코커스 속(Enterococcus sp.)미생물(KCTC0609 BP), 및 사카로마이세스 세레비지에(Saccaromyces cerevisiae)(KCTC-0610 BP)로 구성되는 미생물 중 하나 이상을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 가축용 복합 미생물 제제.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 복합 미생물 제제는 부형제, 효소제 및 허브제로 구성되는 성분 중 하나 이상을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 가축용 복합 미생물 제제.
  4. 제 2 항에 있어서, 바실러스 서브틸리스(Bacillus subtilis) DH2(KCTC11427 BP)는 1.1×107∼1.1×109 cfu/g, 락토바실러스 속(lactobacillus sp.) 미생물(KCTC-0608 BP)은 1.8×106∼1.8×109 cfu/g, 엔테로코커스 속(Enterococcus sp.)미생물(KCTC0609 BP)은 6.0×106∼6.0×109cfu/g으로, 그리고 사카로마이세스 세레 비지에(Saccaromyces cerevisiae)(KCTC-0610 BP)는 1.0×106∼1.0×109cfu/g으로 포함하는 것을 특징으로 하는 가축용 복합 미생물 제제.
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