KR100929146B1 - 암세포 성장 억제 효과를 갖는 퀴나졸린 유도체 - Google Patents

암세포 성장 억제 효과를 갖는 퀴나졸린 유도체 Download PDF

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Abstract

본 발명은 암세포 성장 억제 효과를 갖는 퀴나졸린 유도체 및 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 이를 활성성분으로 함유하는 약학 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 퀴나졸린 유도체는 상피세포 성장인자 및 이의 변이체에 의해 유발되는 암세포의 성장을 선택적이고 효과적으로 억제할 수 있다.

Description

암세포 성장 억제 효과를 갖는 퀴나졸린 유도체 {QUINAZOLINE DERIVATIVES FOR INHIBITING THE GROWTH OF CANCER CELL}
본 발명은 상피세포 성장인자 및 이의 변이체에 의해 유발되는 암세포의 성장을 선택적이고 효과적으로 억제하는, 신규한 퀴나졸린 유도체 및 이의 약학적으로 허용가능한 염, 및 이를 활성성분으로 함유하는 약학 조성물에 관한 것이다.
세포 내에는 수많은 신호 전달 체계가 존재하고 이들 각 신호 전달 체계는 서로 유기적으로 연결되어 복잡한 메카니즘을 형성함으로써 세포의 증식, 성장, 사멸 등을 조절한다. 유전적, 환경적 영향에 의하여 세포 내의 조절 기능이 파괴되어 비정상적인 신호 전달의 증폭 또는 소멸이 나타날 경우 종양이 발생할 가능성이 높아진다.
단백질 티로신 키나제는 이러한 세포 내의 조절기능에 중요한 역할을 담당하며 암세포 내에서 이의 비정상적인 발현 및 변이가 많이 관찰된다. 단백질 티로신 키나제는 ATP로부터 단백질 기질 상에 위치하는 티로신으로 포스페이트기를 전달하는 것을 촉매하는 효소 부류이며, 수많은 성장 인자 수용체 단백질은 티로신 키나제로서 작용하며 이 과정에서 세포 신호 전달을 수행한다. 성장인자와 이들 수용 체간의 상호작용은 세포 성장의 정상적인 조절에 있어서 필수적이지만, 특정 조건 하에서 수용체의 돌연변이 또는 과발현으로 인해 이들 수용체에 의한 신호를 조절할 수 없게 되면 종양 세포 또는 궁극적으로 암이 유발된다.
단백질 티로신 키나제는 성장인자와 관련하여 여러 패밀리로 분류되며, 이중 상피세포 성장인자 (EGF)와 관련된 상피세포 성장인자 수용체 (EGFR) 티로신 키나제에 관한 연구가 현재 활발하게 진행되고 있다. EGFR 티로신 키나제는 수용체 부분과 티로신 키나제 부분이 있으며 세포막을 통과하여 위치함으로써 세포 외부의 신호를 세포 내부로 전달하는 역할을 한다. EGFR 티로신 키나제 패밀리는 구조적 차이에 따라 EGFR (Erb-B1), Erb-B2, Erb-B3 및 Erb-B4의 4종으로 하위 분류되며, 구성원 모두는 동형2량체 또는 패밀리의 다른 구성원과 함께 이형2량체 신호 전달 복합체를 형성할 수 있고, 1종이 넘는 패밀리의 구성원이 악성 질병에서 과발현되는 경우 상승적 변형을 초래할 수 있다. 1종이 넘는 패밀리 구성원의 과잉발현은 인간의 악성 종양에서 비교적 흔하게 나타나고 있으며 EGFR과 Erb-B2는 이형2량체 신호 전달 복합체 형성에 있어 중요한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.
현재 개발되었거나 개발중인 EGFR 티로신 키나제 억제제로는 게피티닙 (Gefitinib), 엘로티닙 (Erlotinib), 라파티닙 (Lapatinib) 등을 들 수 있고, 이들 중 게피티닙 및 엘로티닙은 선택적으로 EGFR을 저해하며, 라파티닙은 EGFR과 Erb-B2를 동시에 저해하여 종양의 성장을 억제함으로서 환자의 수명을 연장시키거나 치료의 편의를 제공하고 있다.
한편, 최근, 폐암환자에 대한 EGFR 선택적 억제제인 게피티닙의 경우, EGFR 키나제의 엑손(exon) 20 영역에서 790 위치의 아미노산인 트레오닌(threonine)이 메티오닌(methionine)으로 변이된 T790M에 대해서는 효과가 없는 것으로 밝혀졌고 (문헌[Plos Medicine 2005, 2(3), 225-235] 참조), T790M 변이 환자들에 대해서도 실제 임상효과가 없는 것으로 밝혀졌다.
따라서, EGFR 변종인 T790M에 우수한 활성을 나타내면서 기존 EGFR 억제제들이 갖고 있는 설사, 피부발진 등의 부작용을 줄일 수 있는 새로운 약물의 개발이 절실히 요구되고 있는 상황이다.
따라서, 본 발명의 목적은 부작용이 적고 상피세포 성장인자 및 이의 변이체에 의해 유발되는 암세포의 성장을 선택적이고 효과적으로 저해할 수 있는 신규한 퀴나졸린 유도체를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 퀴나졸린 유도체를 활성성분으로 함유하는 암세포 성장 억제용 약학 조성물을 제공하는 것이다.
상기 목적에 따라 본 발명은, 하기 화학식 1의 퀴나졸린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 제공한다:
Figure 112007035977473-pat00001
상기 식에서,
R1은 치환체 X를 갖는 C1-6알콕시이고;
R2는 수소 또는 할로겐으로 치환된 벤젠이고;
A는 -C(=O)- 또는 -CH2-이고;
상기 치환체 X는 C1-6알콕시 또는 헤테로사이클이고;
상기 헤테로사이클은 N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 구성원을 포함하는, 5 또는 6원의 헤테로방향족 또는 비방향족 화합물이다.
이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명에 따른 상기 화학식 1의 퀴나졸린 유도체에 있어서, 바람직하게는, R1은 2-메톡시에톡시, (테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시, 2-모폴리노에톡시, (4-메틸티아졸-5-일)에톡시 또는 2-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)에톡시이고;
R2는 3-클로로-4-플루오로페닐, 3-클로로-2-플루오로페닐, 4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐, 2,3,4-트리플루오로페닐, 3,4-다이클로로페닐, 3,4-다이클로로 -2-플루오로페닐 또는 3-클로로-2,4-플루오로페닐이다.
본 명세서에 사용된 용어 '할로겐'은 다른 언급이 없으면, 플루오로, 클로로, 브로모 또는 요오도를 의미한다.
상기 화합물 중 더욱 바람직한 화합물의 구체적인 예는 다음과 같다.
1) (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
2) (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[3-클로로-4-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
3) (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[4-브르모-3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7- (2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
4) (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[2,3,4-트리플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
5) (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[3,4-다이클로로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
6) (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[3-클로로-2,4-다이플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
7) (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[3,4-다이클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
8) (2S)-1-아크릴로일-N-{4-[3-클로로-4-플루오로페닐아미노]-7-[(테트라하 이드로퓨란-2-일)메톡시]퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드;
9) (2S)-1-아크릴로일-N-{4-[4-브로모-3-클로로-4-플루오로페닐아미노]-7- [(테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시]퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드;
10) (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7- (2-모폴리노에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
11) (2S)-1-아크릴로일-N-{4-[3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-[2-(4-메틸티아졸-5-일)에톡시]퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드;
12) (2S)-1-아크릴로일-N-{4-[3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-[2-(1H- 1,2,4-트리아졸-1-일)에톡시]퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드; 또는
13) (2S)-1-(2-{[4-(4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐아미노)-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일아미노]메틸}피롤리딘-1-일)프로프-2-엔-1-온.
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 예를 들면 하기 반응식 1 (화학식 1a의 화합물, A = -C(=O)-) 또는 반응식 2 (화학식 1b의 화합물, A = -CH2-)에 의해 제조할 수 있다 (문헌[J. Med. Chem., 1996; 39: 918] 참조).
Figure 112007035977473-pat00002
Figure 112007035977473-pat00003
상기 식에서,
R1 및 R2는 상기에서 정의한 바와 같다.
상기 반응식 1에서, 화학식 2의 화합물은, 유기 용매(예: 피리딘, 테트라하이드로퓨란, 메틸렌클로라이드, 클로로포름) 중에서 화학식 3의 화합물을 N-(tert-Boc)-프롤린과 축합반응시켜 얻을 수 있다. 축합반응에 사용되는 축합제로는 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카르보다이이미드(EDCI) 및 이의 산 부가염이 적합하다.
이어, 화학식 2의 화합물을 CHCl3와 같은 유기 용매 중에서 트라이플루오로아세트산과 같은 유기산 또는 진한 염산과 같은 무기산을 사용하여 t-부톡시카르보닐기를 탈 보호한 후, 테트라하이드로퓨란과 물의 혼합용매와 같은 유기 용매 중에서 중탄산나트륨과 같은 염기의 존재 하에 아크릴로일 클로라이드를 이용하여 아크릴화 반응시킴으로써 화학식 1a (A = -C(=O)-)의 화합물을 얻을 수 있다.
상기 반응식 2에서, 화학식 4의 화합물은, 에탄올 같은 유기 용매 중에서 아세트산과 소디움시아노보로하이드라이드 존재 하에 화학식 3의 화합물을 화학식 5의 화합물과 반응시켜 얻을 수 있다.
이어, CHCl3와 같은 유기 용매 중에서 트라이플루오로아세트산과 같은 유기산 또는 진한 염산과 같은 무기산을 사용하여 화학식 4의 화합물의 t-부톡시카르보닐기를 탈 보호한 후, 테트라하이드로퓨란과 물의 혼합용매와 같은 유기 용매 중에서 중탄산나트륨과 같은 염기의 존재하에 아크릴로일 클로라이드를 이용하여 아크릴화시킴으로써 화학식 1b (A = -CH2-)의 화합물을 얻을 수 있다.
본 발명에 따른 화학식 1의 화합물은 무기산 또는 유기산으로부터 유도된 약학적으로 허용가능한 염 형태로 사용될 수 있으며, 바람직한 염으로는 염산, 브롬화수소산, 황산, 인산, 질산, 아세트산, 글리콜산, 락트산, 피루브산, 말론산, 석신산, 글루타르산, 푸마르산, 말산, 만델산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 팔미트산, 말레산, 하이드록시말레산, 벤조산, 하이드록시벤조산, 페닐아세트산, 신남산, 살리실산, 메탄설폰산, 벤젠설폰산, 톨루엔설폰산 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 상피세포 성장인자에 의해 유발되는 암세포 및 상피세포 성장인자 변이체에 의해 유발되는 암세포의 성장을 선택적이고 효과적으로 억제하며, 다른 항암제와 함께 병용 투여함으로써 항암제의 치료효과를 강화시킬 수 있다. 즉, 본 발명에 따른 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 세포 신호 전달 억제제, 유사분열 억제제, 알킬화제, 항-대사제, 삽입 항생제, 성장 인자 억제제, 세포 주기 억제제, 토포아이소머라제 억제제, 생물 반응 개질제, 항-호르몬제, 및 항-안드로젠으로 이루어진 군 에서 선택된, 암 또는 기타 질환의 치료에 사용되는 항암제의 효과를 상승시키는데 유용하다.
따라서, 본 발명에서는 활성성분으로서 화학식 1의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 암세포 성장 억제용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염 등의 활성성분의 투여량은 처리되는 대상, 질병 또는 상태의 심각도, 투여의 속도 및 처방 의사의 판단에 따른다. 유효 성분으로서 화학식 1의 화합물은 사람을 포함하는 포유동물에 대해 하루에 0.01 내지 100 ㎎/㎏ (체중), 바람직하게는 0.2 내지 50 ㎎/㎏ (체중)의 양으로 1일 1회 또는 분할하여 경구 또는 비경구적 경로를 통해 투여할 수 있다. 일부의 경우에 있어서, 상기 언급된 범위 보다 적은 투여량 수치가 보다 적합할 수 있고, 해로운 부작용을 일으키지 않으면서도 보다 많은 투여량이 사용될 수도 있으며, 보다 많은 투여량의 경우는 하루에 걸쳐 수회의 적은 투여량으로 분배된다.
본 발명의 약학 조성물은 통상적인 방법에 따라 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 제제화 할 수 있으며, 정제, 환제, 산제, 캅셀제, 시럽, 에멀젼, 마이크로에멀젼 등의 다양한 경구 투여 형태 또는 근육내, 정맥내 또는 피하투여와 같은 비경구 투여 형태로 제조될 수 있다.
본 발명의 약학 조성물이 경구제형의 형태로 제조되는 경우 사용되는 담체의 예로는 셀룰로오스, 규산칼슘, 옥수수전분, 락토오스, 수크로스, 덱스트로스, 인산칼슘, 스테아르산, 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 칼슘, 젤라틴, 탈크, 계면활 성제, 현탁제, 유화제, 희석제 등을 들 수 있다. 본 발명의 약학 조성물이 주사제의 형태로 제조되는 경우 사용되는 담체의 예로는 물, 식염수, 포도당 수용액, 유사 당수용액, 알콜, 글리콜, 에테르 (예: 폴리에틸렌글리콜 200), 오일, 지방산, 지방산에스테르, 글리세라이드, 계면활성제, 현탁제, 유화제 등을 들 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1: (2 S )-1-아크릴로일- N -{4-[3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드
1-1. N -(3-클로로-2-플루오로페닐)-7-플루오로-6-니트로퀴나졸린-4-아민 염산염
4-클로로-7-플루오로-6-니트로 퀴나졸린 염산염 1 ｇ을 이소프로판올 10 ㎖에 녹인 다음, 3-클로로-2-플루오로 아닐린 550 ㎎을 첨가하고, 반응 온도를 80℃로 올려 3 시간 동안 교반시켰다. 반응이 완결되면 반응 용액을 실온으로 냉각시킨 다음 감압 여과하였다. 얻어진 고체를 이소프로판올로 세척한 후 훈풍 건조하여 상기 목적화합물 1.3 ｇ (97%)을 얻었다.
1H-NMR (DMSO-d6, 300MHz) δ : 9.45 (d, 1H), 8.60 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.50 (m, 2H), 7.25 (t, 1H).
1-2. N -(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-(2-메톡시에톡시)-6-니트로퀴나졸린-4-아민
N-(3-클로로-4-플루오로페닐)-7-플루오로-6-니트로퀴나졸린-4-아민 염산염 1 ｇ을 다이메틸설폭사이드(DMSO) 10 ㎖에 녹이고, 여기에 2-메톡시에탄올 0.42 ㎖와 포타시움 실란올레이트 1.5 ｇ을 첨가하여 상온에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응이 완결되면 반응 용액에 얼음을 첨가하여 결정화시킨 후, 생성된 고체를 물 150 ㎖로 세척하여 감압 여과하였다. 얻어진 고체를 훈풍 건조하여 상기 목적화합물 830㎎ (79%)을 얻었다.
1H-NMR (DMSO-d6, 300MHz) δ : 10.30 (br s, 1H), 9.08 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.45 (m, 3H), 7.20 (t, 1H), 4.38 (m, 2H), 3.69 (m, 2H), 3.28 (s, 3H).
1-3. N 4 -(3-클로로-2-플루오로페닐)-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4,6-다이아민 (화학식 3의 화합물)
철 590 ㎎을 50% 에탄올 수용액 10 ㎖에 용해시키고 진한 염산 0.07 ㎖를 첨가한 후 반응 온도를 100℃로 올려서 활성화시켰다. 여기에 N-(3-클로로-2-플루오로페닐)-7-메톡시-6-니트로퀴나졸린-4-아민 830 ㎎을 첨가하고 환류시켰다. 반응이 완결되면 뜨거운 반응 용액을 셀라이트 패드에 감압여과하고, 패드를 클로로포름과 메탄올로 세척한 후 얻어진 여과액을 포화 중탄산나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기층을 황산나트륨으로 건조한 다음, 감압 여과 및 감압 증류하여 상기 목적화합물 727 ㎎ (95%)을 얻었다.
1H-NMR(CDCl3+CD3OD 1 drop, 300MHz) δ : 8.50 (s, 1H), 8.30 (m, 1H), 7.32 (s, 2H), 7.15 (m, 3H), 4.30 (m, 2H), 3.90 (m, 2H), 3.49 (s, 3H).
1-4. (2 S )- tert -부틸 2-(4-(3-클로로-2-플루오로페닐아미노)-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일카바모일)피롤리딘-1-카르복실레이트 (화학식 2의 화합물)
상기 단계 (1-3)에서 제조된 출발물질 300 ㎎을 피리딘 7 ㎖에 용해시킨 다음, (2S)-1-(tert-부톡시카르보닐)피롤리딘-2-카르복실산 356 ㎎과 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카르보다이이미드 염산염 477 ㎎을 첨가하여 14 시간 동안 교반하였다. 반응이 완결되면 피리딘을 감압 증류하고 포화 중탄산나트륨 수용액으로 세척하였다. 유기층을 황산마그네슘으로 건조한 뒤 감압 여과 및 감압 증류하여 불순한 잔사를 얻고 이를 컬럼 크로마토그래피 (클로로포름 : 메탄올 = 15 : 1) 로 분리하여 목적화합물 470 ㎎을 정량적으로 얻었다.
1H-NMR(CDCl3, 300MHz) δ : 9.10 (s, 1H), 8.95 (m, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.40 (m, 1H), 7.28 (s, 1H), 7.15 (d, 2H), 4.35 (m, 3H), 3.90 (m, 2H), 3.50 (m, 2H), 3.48 (s, 3H), 1.99 (m, 4H), 1.47 (m, 9H).
1-5. (2 S )- N -(4-(3-클로로-2-플루오로페닐아미노)-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일)피롤리딘-2-카르복시아미드
상기 단계 (1-4)에서 제조된 화합물 476 ㎎을 메틸렌클로라이드 10 ㎖에 녹이고, 트라이플루오로아세트산 10 ㎖를 첨가하여 5 시간 동안 교반하였다. 반응이 완결되면 감압 증류하여 용매를 제거하고 잔사를 포화 중탄산나트륨 수용액으로 염기화한 다음, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조한 뒤, 감압여과 및 감압 증류하여 목적화합물 320 ㎎ (82%)을 얻었다.
1H-NMR(CDCl3, 300MHz) δ : 9.12 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.35 (m, 1H), 7.55 (br s, 1H), 7.15 (m, 2H), 4.35 (m, 2H), 3.93 (m, 1H), 3.89 (m, 2H), 3.51 (s, 3H), 3.10 (m, 2H), 2.20 (m, 2H), 2.13 (m, 2H).
1-6. (2 S )-1-아크릴로일- N -[4-[3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드 (화학식 1a의 화합물; A = -C(=O)-)
상기 단계 (1-5)에서 제조된 화합물 300 ㎎을 테트라하이드로퓨란 7 ㎖에 녹인 다음, 반응 온도를 0℃로 낮추고 아크릴산 70 ㎕를 천천히 적가하였다. 피리딘 0.12 ㎖와 1-(3-다이메틸아미노프로필)-3-에틸카르보다이이미드 염산염 249 ㎎을 첨가한 다음, 반응 온도를 서서히 상온으로 올리면서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완결되면 포화 중탄산나트륨 수용액을 첨가하고 클로로포름으로 추출한 다음, 유기층을 황산나트륨으로 건조한 뒤, 감압 여과 및 감압 증류하여 얻어진 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (에틸아세테이트 : 메탄올 = 10 : 1)로 분리하여 목적화합물 35 ㎎ (10%)을 얻었다.
1H-NMR(CDCl3, 300MHz) δ : 9.99 (s, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.39 (dd, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.14 (d, 2H), 6.55 (d, 1H), 6.53 (s, 1H), 5.82 (dd, 1H), 4.94 (d, 1H), 4.34 (m, 2H), 3.96 (m, 2H), 3.77 (td, 1H), 3.62 (m, 1H), 3.50 (s, 3H), 2.64 (m, 1H), 2.14 (m, 2H), 1.95 (m, 1H).
실시예 2: (2 S )-1-아크릴로일- N -[4-[3-클로로-4-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드
실시예 (1-1)에서 3-클로로-2-플루오로아닐린 대신 3-클로로-4-플루오로아닐린을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 목적화합물 600㎎ (28%)을 얻었다.
1H-NMR(DMSO-d6, 300MHz) δ : 9.83 (s, 1H), 9.52 (s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.06 (m, 1H), 7.73 (m, 1H), 7.38 (m, 1H), 7.27 (s, 1H), 6.67 (m, 1H), 6.20 (m, 1H), 5.74 (m, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.30 (m, 2H), 3.63 (m, 2H), 3.61 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.09 (m, 2H), 1.95 (m, 2H).
실시예 3: (2 S )-1-아크릴로일- N -[4-[4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드
실시예 (1-1)에서 3-클로로-2-플루오로아닐린 대신 4-브로모-3-클로로-2-플 루오로아닐린을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 목적화합물 800㎎ (31%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 9.99 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.65 (s, 1H), 8.20 (t, 1H), 7.70 (bs, 1H), 7.43 (dd, 1H), 7.25 (s, 1H), 6.55 (m, 2H), 5.83 (m, 1H), 4.94 (m, 1H), 4.32 (m, 2H), 3.94 (m, 2H), 3.78 (m, 1H), 3.60 (m, 1H), 3.50 (s, 3H), 2.61 (m, 1H), 2.10 (m, 3H).
실시예 4: (2 S )-1-아크릴로일- N -[4-[2,3,4-트리플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드
실시예 (1-1)에서 3-클로로-2-플루오로아닐린 대신 2,3,4-트리플루오로아닐린을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 목적화합물 130 ㎎ (15%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 9.87 (s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 7.80 - 7.74 (m, 2H), 7.16 (s, 1H), 6.95 - 6.92 (m, 1H), 6.52~6.48 (m, 2H), 5.81 - 5.76 (m, 1H), 4.91 - 4.89 (m, 1H), 4.22 - 4.27 (m, 2H), 3.91 - 3.86 (m, 2H), 3.76 - 3.73 (m, 1H), 3.60 - 3.58 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 2.80 (br s, 1H), 2.55 (br s, 1H), 2.09 - 1.94 (m, 2H).
실시예 5: (2 S )-1-아크릴로일- N -[4-[3,4-다이클로로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드
실시예 (1-1)에서 3-클로로-2-플루오로아닐린 대신 3,4-다이클로로아닐린을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 목적화합물 140 ㎎ (12%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 9.92 (s, 1H), 9.58 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.20 (d, 1H), 7.84 (dd, 1H), 7.60 (d, 1H), 7.30 (s, 1H), 6.67 (m, 1H), 6.21 (m, 1H), 5.74 (m, 1H), 4.76 (m, 1H), 4.34 (t, 2H), 3.76 (m, 2H), 3.60 (m, 2H), 3.32 (s, 3H), 2.10 (m, 4H).
실시예 6: (2 S )-1-아크릴로일- N -[4-[3-클로로-2,4-다이플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드
실시예 (1-1)에서 3-클로로-2-플루오로아닐린 대신 3-클로로-2,4-다이플루오로아닐린을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 목적화합물 135 ㎎ (14%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 9.95 (s, 1H), 9.03 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.06 (m, 1H), 7.62 (bs, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.01 (m, 1H), 6.53 (m, 2H), 5.82 (m, 1H), 4.94 (m, 1H), 4.30 (m, 2H), 3.94 (m, 2H), 3.76 (m, 1H), 3.62 (m, 1H), 3.49 (s, 3H), 2.58 (m, 1H), 2.33 (m, 1H), 2.13 (m, 2H), 1.95 (m, 1H).
실시예 7: (2 S )-1-아크릴로일- N -[4-[3,4-다이클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드
실시예 (1-1)에서 3-클로로-2-플루오로아닐린 대신 3,4-다이클로로-2-플루오로아닐린을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 목적화합물 120 ㎎ (10%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 10.03 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.36 (t, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.30 (dd, 1H), 7.24 (s, 1H), 6.55 (m, 2H), 5.83 (m, 1H), 4.95 (m, 1H), 4.33 (m, 2H), 3.95 (m, 2H), 3.76 (m, 1H), 3.62 (m, 1H), 3.51 (s, 3H), 2.61 (m, 1H), 2.13 (m, 2H), 1.97 (m, 1H).
실시예 8: (2 S )-1-아크릴로일- N -{4-[3-클로로-4-플루오로페닐아미노]-7-[(테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시]퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드
실시예 (1-1)에서 3-클로로-2-플루오로아닐린 대신 3-클로로-4-플루오로아닐린을 이용하고, 실시예 (1-2)에서 2-메톡시에탄올 대신 테트라하이드로퓨란-2-일메틸알콜을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 목적화합물 50㎎ (11%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 9.93 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 7.86 (dd, 1H), 7.65 (m, 1H), 7.11 (t, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.55 (dd, 1H), 6.45 (dd, 1H), 5.75 (dd, 1H), 5.00 (d, 1H), 4.30 (m, 1H), 3.86 (m, 4H), 3.65 (m, 2H), 2.50 (m, 1H), 2.13 (m, 4H), 1.97 (m, 2H), 1.65 (m, 1H).
실시예 9:　(2 S )-1-아크릴로일- N -{4-[4-브로모-3-클로로-4-플루오로페닐아미노]-7-[(테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시]퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드
실시예 (1-1)에서 3-클로로-2-플루오로아닐린 대신 4-브로모-3-클로로-4-플루오로아닐린을 이용하고, 실시예 (1-2)에서 2-메톡시에탄올 대신 테트라하이드로퓨란-2-일메틸알콜을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 목적화합물 65㎎ (10%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 9.92 (m, 1H), 9.03 (m, 1H), 8.63 (m, 1H), 8.20 (m, 1H), 7.74 (bs, 1H), 7.43 (m, 1H), 7.22 (m, 1H), 6.51 (m, 2H), 5.79 (m, 1H), 4.93 (m, 1H), 4.47 (m, 1H), 4.14 (m, 3H), 3.92 (m, 2H), 3.81 (m, 1H), 3.63 (m, 1H), 2.61 (m, 1H), 2.18 (m, 4H), 1.88 (m, 2H).
실시예 10: (2 S )-1-아크릴로일- N -{4-[4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-(2-모폴리노에톡시)퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드
실시예 (1-1)에서 3-클로로-2-플루오로아닐린 대신 4-브로모-3-클로로-4-플루오로아닐린을 이용하고, 실시예 (1-2)에서 2-메톡시에탄올 대신 2-모폴리노에탄올을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 목적화합물 70㎎ (11%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 10.08 (s, 1H), 9.05 (s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.17 (m, 1H), 7.71 (bs, 1H), 7.40 (dd, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.52 (m, 2H), 5.82 (m, 1H), 4.94 (m, 1H), 4.29 (m, 2H), 3.76 (m, 5H), 3.62 (m, 1H), 3.08 (m, 1H), 2.97 (m, 1H), 2.63 (m, 6H), 2.21 (m, 1H), 1.97 (m, 1H).
실시예 11: (2 S )-1-아크릴로일- N -(4-(3-클로로-2-플루오로페닐아미노)-7-(2-(4-메틸티아졸-5-일)에톡시)퀴나졸린-6-일)피롤리딘-2-카르복시아미드
실시예 (1-2)에서 2-메톡시에탄올 대신에 2-(4-메틸티아졸-5-일)에탄올을 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 목적화합물 65 ㎎ (34%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 10.07 (s, 1H), 9.06 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.31 (m, 1H), 7.70 (br s, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.16 (m, 2H), 6.48 (dd, 1H), 6.45 (dd, 1H), 5.76 (dd, 1H), 4.93 (d, 1H), 4.37 (t, 2H), 3.71 (m, 1H), 3.63-3.44 (m, 3H), 2.55 (m, 1H), 2.48 (s, 3H), 2.16 (m, 2H), 1.95 (m, 1H).
실시예 12: (2 S )-1-아크릴로일- N -{4-[3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-[2-(1 H -1,2,4-트리아졸-1-일)에톡시]퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드
실시예 (1-2)에서 2-메톡시에탄올 대신에 2-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)에탄올 이용한 것을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방법으로 목적화합물 50 ㎎ (12%)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 10.37 (s, 1H), 8.99 (s, 2H), 8.59 (t, 1H), 8.10 (t, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.13 (s, 1H), 7.08 (m, 2H), 6.54 (dd, 1H), 6.48 (dd, 1H), 5.84 (dd, 1H), 4.94 (m, 2H), 4.70 (d, 1H), 4.55 (t, 1H), 4.40 (m, 1H), 3.70 (m, 1H), 3.55 (m, 1H), 2.60 (m, 1H), 2.15 (m, 2H), 1.85 (m, 1H).
실시예 13: (2S)-1-(2-{[4-(4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐아미노)-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일아미노]메틸}피롤리딘-1-일)프로프-2-엔-1-온
13-1. N 4 -(4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐)-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-4,6-다이아민 (화학식 3의 화합물)
실시예 (1-1)에서 3-클로로-2-플루오로아닐린 대신 4-브로모-3-클로로-4-플루오로아닐린을 이용한 것을 제외하고는, 실시예 (1-1) 내지 (1-3)과 동일한 방법에 따라 실시하여 목적화합물 0.78 g (3단계 82%)을 얻었다.
13-2. (2 S )- tert -부틸 2-{[(4-(4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐아미노)-7- (2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일아미노]메틸}피롤리딘-1-카복실레이트 (화학식 4의 화합물)
상기 단계 (13-1)에서 제조된 출발물질 600㎎과 (S)-tert-부틸-2-포밀피롤리딘-1-카르복실레이트 0.47 g을 아세트산 8㎖와 에탄올 8㎖에 묽힌 다음, 소디움시아노보로하이드라이드 270㎎을 첨가하여 상온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응이 완결되면 반응용매를 감압 증류하고 포화 중탄산나트륨 수용액으로 염기화하였다. 그리고 메틸렌클로라이드로 추출해 낸 후 유기층을 황산마그네슘으로 건조한 뒤 감압 여과 및 감압 증류하여 얻어진 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (에틸 아세테이트 : 메틸렌클로라이드 : 메탄올 = 7 : 7 : 1)로 분리하여 목적화합물 0.56 g (66 %)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 8.51 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.92 (t,1H), 7.45 (m, 1H), 7.12 (s, 1H), 5.12 (bt, 1H), 4.32 (t, 2H), 4.29 (m, 1H), 3.85 (m, 2H), 3.61 (m, 1H), 3.47 (s, 3H), 3.46 (m, 1H), 3.25 (m, 1H), 3.05 (m, 1H), 1.80 (m, 4H), 1.42 (s, 9H).
13-3. (2 S )- N 4 -(4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐)-7-(2-메톡시에톡시)- N 6 -(피롤리딘-2-일메틸)퀴나졸린-4,6-디아민
상기 단계 (13-2)에서 제조된 화합물 0.56 g을 메틸렌클로라이드 10 ㎖에 녹이고, 트라이플루오로아세트산 10 ㎖를 첨가하여 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완결되면 감압 증류하여 용매를 제거하고 잔사를 포화 중탄산나트륨 수용액으로 염기화한 다음, 클로로포름으로 추출하였다. 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조한 뒤, 감압 여과 및 감압 증류하여 목적화합물 404 ㎎ (86 %)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 8.50 (s, 1H), 8.25(t, 1H), 7.40 (m, 1H), 7.04 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 5.21 (bs, 1H), 4.28 (m, 3H), 3.82 (m, 2H), 3.57 (m, 1H), 3.45 (s, 3H), 3.32 (m, 1H), 3.05 (m, 2H), 2.03 (m, 1H), 1.87 (m, 2H), 1.62 (m, 1H).
13-4. (2S)-1-(2-{[4-(4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐아미노)-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일아미노]메틸}피롤리딘-1-일)프로프-2-엔-1-온 (화학식 1b의 화합물)
상기 단계 (13-3)에서 제조된 화합물 383 ㎎을 테트라히드로퓨란 5 ㎖와 증류수 1㎖에 녹인 다음, 중탄산나트륨 184㎎을 가하고 아크릴로일 클로라이드 0.06 ㎖를 적가 하였다. 상온에서 2시간 동안 교반한 후, 반응이 완결되면 포화 중탄산나트륨 수용액을 첨가하고 클로로포름으로 추출한 다음, 유기층을 무수 황산나트륨으로 건조한 뒤, 감압 여과 및 감압 증류하여 얻어진 잔사를 컬럼 크로마토그래피 (에틸아세테이트 : 메틸렌클로라이드 : 메탄올 = 5 : 5 : 1)로 분리하여 목적화합물 177 ㎎ (42 %)을 얻었다.
1H-NMR (CDCl3, 300MHz) δ : 8.67 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.10 (t, 1H), 7.44 (dd, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.47 (m, 2H), 5.75 (m, 1H), 5.13 (bt, 1H), 4.64 (m, 1H), 4.32 (t, 2H), 3.85 (m, 2H), 3.71 (m, 2H), 3.52 (m, 1H), 3.48 (s, 3H), 3.10 (m, 1H), 2.05 (m, 2H), 1.97 (m, 2H).
상기 실시예에서 제조된 본 발명의 화합물들을 다음과 같이 제제화하였다:
제제예 1
하기 표 1의 성분을 이용하여 통상적인 방법에 따라 상기 실시예 1 내지 13에서 제조된 화학식 1의 활성 화합물 각각을 함유하는 경구 투여용 단일 정제를 제조하였다.
Figure 112007035977473-pat00004
제제예 2
하기 표 2의 성분을 이용하여 통상적인 방법에 따라 상기 실시예 1 내지 13에서 제조된 화학식 1의 활성 화합물 각각을 함유하는 경구 투여용 경질 젤라틴 캡슐을 제조하였다.
Figure 112007035977473-pat00005
제제예 3
하기 표 3의 성분을 이용하여 통상적인 방법에 따라 상기 실시예 1 내지 13에서 제조된 화학식 1의 활성 화합물 각각을 함유하는 주사용 제제를 제조하였다. 단, 화학식 1 화합물의 염을 사용하는 경우에는 pH를 조절하지 않았다.
Figure 112007035977473-pat00006
제제예 4
하기 표 4의 성분을 이용하여 통상적인 방법에 따라 상기 실시예 1 내지 13에서 제조된 화학식 1의 활성 화합물 각각을 함유하는 주사용 제제를 제조하였다.
Figure 112007035977473-pat00007
시험예 1: EGFR 효소 저해
96-웰 (well) 미세판의 각 웰에 10 ㎕의 EGF 수용체 (EGFR type 1 키나제)를 넣어준 후, EGFR 저해제로서 상기 실시예 1 내지 13에서 제조된 화합물들, 및 공지된 EGFR 저해제로서 이레사 (Iressa, 아스트라제네카사) 및 라파티닙 (Lapatinib, 글락소스미스클라인사) 각각을 정해진 농도로 단계적으로 희석하여 각 웰당 10 ㎕씩 첨가한 후 10분 동안 상온에서 배양하였다. 배양 후, 기질로 사용되는 폴리 (Glu, Tyr) 4:1 (시그마사)을 10 ㎕씩 각 웰에 첨가한 후 10 ㎕의 ATP를 첨가하여 키나제 반응을 개시하였다. 상온에서 1시간 배양 후에 100 mM EDTA를 10 ㎕씩 각 웰에 첨가하여 키나제 반응을 종결시킨 다음 5분 동안 교반기에서 서서히 혼합해 주었다. 각 웰에 10 ㎕의 10 X 항-포스포티로신 (anti-phosphotyrosine) 항체 (판베라사), 10 ㎕의 10 X PTK (프로테인 티로신 키나제, protein tyrosine kinase) 그린 트레이서 (판베라사) 및 30 ㎕의 FP (편광, fluorescence polarization) 희석 완충용액을 첨가한 후 30분 동안 상온에서 어두운 상태로 배양하였다. 배양 후에 VICTORⅢ 형광량계 (fluorescence meter, 퍼킨엘머사)를 이용하여 각 웰의 편광 (FP) 값을 측정하고 (이때, 여기필터: 488 nm 및 방출필터: 488 nm), EGFR 저해제를 처리하지 않은 웰에서 측정된 편광값 (mP)을 최대값으로 하고 100% 저해한 값을 최소값 (0%)으로 할 때, 50% 저해된 농도를 산출하여 IC50 값으로 정하였다. IC50 산출 및 결과 분석은 마이크로소프트 엑셀을 이용하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
시험예 2: EGFR 변이 효소 (T790M) 저해
96-웰 (well) 미세판의 각 웰에 10 ㎕의 EGF 변이수용체 (EGFR T790M 키나제, 업스테이트사)를 넣어준 후, EGFR 저해제로서 상기 실시예 1 내지 13에서 제조된 화합물들, 및 공지된 EGFR 저해제로서 이레사 (Iressa, 아스트라제네카사) 및 라파티닙 (Lapatinib, 글락소스미스클라인사) 각각을 정해진 농도로 단계적으로 희석하여 각 웰당 10 ㎕씩 첨가한 후 10분 동안 상온에서 배양하였다. 이후 반응은 상기 시험예 1과 동일한 조건에서 실험하였다. 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
시험예 3: 암세포 성장 억제 시험
암세포 성장 억제 시험을 위해 피부암 세포주인 A431 (ATCC: CRL-1555), 유방암 세포주인 SK-Br3 (ATCC: HTB-30), 및 결장직장암 세포주인 SW-620 (ATCC: CCL-227)을 사용하였으며, 배양 배지로는 4.5 g/ℓ 글루코스 (glucose) 및 1.5 g/ℓ 수소화탄산나트륨을 포함하고 10% FBS (fetal bovine serum)가 첨가된 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지를 사용하였다.
액체 질소 탱크에 보관되어 있던 암세포주를 꺼내어 37℃에서 빠르게 녹인 후 원심분리하여 냉동보관 배지를 제거하였다. 원심분리하여 얻은 세포 펠렛 (pellet)을 배양 배지에 잘 섞어서 배양 플라스크에 넣어 37℃, 5% 이산화탄소 조건으로 배양하였다. 2 내지 3 일 후 세포가 안정적으로 배양되면 플라스크의 배지를 제거하고, DPBS (Dulbecco's Phosphate Buffered Saline)로 세척한 뒤, 트립신 (Tripsin)-EDTA 용액을 사용하여 세포를 플라스크에서 떼어낸 다음, A431의 경우 100,000 세포/㎖가 되도록, SK-Br3의 경우 200,000 세포/㎖가 되도록 배양 배지로 희석하여 준비하였다. 96-웰 미세판에 준비된 세포를 100 ㎕씩 분주하고 37℃, 5% 이산화탄소 조건으로 1 일간 배양하였다.
시험물질로서 상기 실시예 1 내지 13에서 제조된 화합물들 및 공지된 EGFR 저해제로서 이레사 및 라파티닙을 각각 세포 배양급의 99.5% DMSO에 25 mM이 되도록 용해시켰다. 시험물질이 DMSO에 잘 용해되지 않는 경우에는 1% 염산 용액을 소량 첨가하여 용해시켰으며, 시험물질의 완전한 용해를 위해 약 40℃의 물 수조에 중탕으로 30 분 정도 보관하였다. 시험물질의 용액을 배양 배지로 희석하여 최종 100 μM의 농도로 만든 후 10 배씩 희석하여 10-6 μM까지 희석한 용액을 준비하였다 (최종 DMSO의 농도는 1% 이하가 되도록 한다).
배양된 세포가 들어 있는 96-웰 미세판의 배양액을 제거한 뒤 이미 희석하여 둔 시험물질의 용액을 100 ㎕씩 넣어주었다. 시험물질을 넣은 96-웰 미세판을 37℃, 5% 이산화탄소 조건으로 72 시간 배양하였다. 96-웰 미세판 내의 배지를 제거한 뒤 10% 삼염화아세트산을 50 ㎕ 넣고 37℃에서 1 시간 동안 반응시켜 세포를 플레이트 바닥에 고정시켰다. 10% 삼염화아세트산 용액을 제거하고 잘 건조한 뒤 SRB (Sulforhodamine-B) 염료 용액을 100 ㎕씩 넣어주고 10 분 동안 반응시켰다. SRB 염료 용액은 SRB를 1% 아세트산으로 용해시켜 0.4%의 농도로 제조하였다. 염료 용액을 제거하고 물을 이용하여 플레이트에 묻은 염료를 깨끗이 제거한 뒤 잘 건조시켰다. 물로 완전히 제거되지 않을 경우 1% 아세트산을 이용하였다. 10 mM 트라이스마 베이스 (trisma base) 150 ㎕를 각 웰에 분주하여 충분하게 섞어준 뒤 미세판 판독기 (microplate reader)로 570 nm 파장에서 흡광도를 측정하였다. 세포 성장 정도를 통해 분석되는 IC50 값은 시험물질을 처리하지 않은 웰에서 배양된 세포의 최종 농도값에서 처음 세포 농도값을 빼서 그 값을 100%으로 하였을 때 세포 성장을 50% 억제한 시험물질의 농도로 산출하였다. IC50 산출 및 결과 분석은 마이크로소프트 엑셀을 이용하였으며, 그 결과를 하기 표 5에 나타내었다.
Figure 112007035977473-pat00008
상기 표 5로부터 알 수 있듯이, 본 발명의 화학식 1의 화합물들은 EGFR 키나제, EGFR T790M 돌연변이 키나제, EGFR이 과발현된 A431 세포주 및 Erb-B2가 과발현된 SK-Br3 세포주의 성장을 낮은 약물농도에서 효과적으로 억제하여 우수한 항암활성을 나타낸 반면, EGFR 및 Erb-B2가 과발현되지 않은 SW-620 세포주의 성장 억제에는 거의 영향을 미치지 않았으며, 특히 대조약물인 이레사 및 라파티닙과 비교시 전반적으로 우수한 활성을 나타내었다. 따라서, 본 발명의 화합물은 상피세포 성장인자 수용체가 과발현된 암세포 및 EGFR 변이 암세포의 성장을 효과적으로 억제할 수 있다.
본 발명의 신규 퀴나졸린 유도체는 상피세포 성장인자 및 이의 변이체에 의해 유발되는 암세포의 성장을 선택적이고 효과적으로 억제할 수 있다.

Claims (6)

  1. 하기 화학식 1의 퀴나졸린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    화학식 1
    Figure 712008004898287-pat00009
    상기 식에서,
    R1은 치환체 X를 갖는 C1-6알콕시이고;
    R2는 수소 또는 할로겐으로 치환된 벤젠이고;
    A는 -C(=O)-이고;
    상기 치환체 X는 C1-6알콕시 또는 헤테로사이클이고;
    상기 헤테로사이클은 N, O 및 S로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 4개의 구성원을 포함하는, 5 또는 6원의 헤테로방향족 또는 비방향족 화합물이다.
  2. 제 1 항에 있어서,
    R1이 2-메톡시에톡시, (테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시, 2-모폴리노에톡시, (4-메틸티아졸-5-일)에톡시 또는 2-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)에톡시이고;
    R2가 3-클로로-4-플루오로페닐, 3-클로로-2-플루오로페닐, 4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐, 2,3,4-트리플루오로페닐, 3,4-다이클로로페닐, 3,4-다이클로로-2-플루오로페닐 또는 3-클로로-2,4-플루오로페닐인 것을 특징으로 하는,
    퀴나졸린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염.
  3. 제 1 항에 있어서,
    하기 화합물들로 이루어진 군으로부터 선택되는 퀴나졸린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염:
    (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
    (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[3-클로로-4-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
    (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[4-브르모-3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
    (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[2,3,4-트리플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
    (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[3,4-다이클로로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
    (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[3-클로로-2,4-다이플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
    (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[3,4-다이클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-(2-메톡시에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
    (2S)-1-아크릴로일-N-{4-[3-클로로-4-플루오로페닐아미노]-7-[(테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시]퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드;
    (2S)-1-아크릴로일-N-{4-[4-브로모-3-클로로-4-플루오로페닐아미노]-7-[(테트라하이드로퓨란-2-일)메톡시]퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드;
    (2S)-1-아크릴로일-N-[4-[4-브로모-3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-(2-모폴리노에톡시)퀴나졸린-6-일]피롤리딘-2-카르복시아미드;
    (2S)-1-아크릴로일-N-{4-[3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-[2-(4-메틸티아졸-5-일)에톡시]퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드; 및
    (2S)-1-아크릴로일-N-{4-[3-클로로-2-플루오로페닐아미노]-7-[2-(1H-1,2,4-트리아졸-1-일)에톡시]퀴나졸린-6-일}피롤리딘-2-카르복시아미드.
  4. 활성성분으로서 제 1 항의 화학식 1의 퀴나졸린 유도체 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는, 암세포 성장 억제용 약학 조성물.
  5. 제 4 항에 있어서,
    상기 조성물이 세포 신호 전달 억제제, 유사 분열 억제제, 알킬화제, 항-대사제, 삽입 항생제, 성장 인자 억제제, 세포 주기 억제제, 토포아이소머라제 억제제, 생물 반응 개질제, 항-호르몬제, 항-안드로젠 및 이들의 혼합물로 이루어진 군으로부터 선택된 항암제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는, 암세포 성장 억제용 약학 조성물.
  6. 제 4 항에 있어서,
    상기 암세포가 상피세포 성장인자 및 이의 변이체에 의해 유발되는 것임을 특징으로 하는, 암세포 성장 억제용 약학 조성물.
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