KR100748390B1

KR100748390B1 - 상피세포성장인자를 포함하는 상처치료용 서방성 필름 제형

Info

Publication number: KR100748390B1
Application number: KR1020050108344A
Authority: KR
Inventors: 김선희; 이상길; 이민석; 홍준표
Original assignee: 주식회사 대웅
Priority date: 2005-11-14
Filing date: 2005-11-14
Publication date: 2007-08-10
Also published as: EP1951328A1; CN101316618B; KR20070051009A; US20090047331A1; WO2007055481A1; JP4937269B2; CN101316618A; JP2009515873A; ES2453567T3; EP1951328B1; EP1951328A4

Abstract

본 발명은 유효성분인 상피세포성장인자, 키토산, 점도 조절제, 가소제 및 안정화제를 포함하는 상처치료용 서방성 필름 제형에 관한 것으로, 보다 구체적으로 유효성분인 상피세포성장인자에 키토산을 주기제로 포함하고, 여기에 추가로 EDTA 및 비타민 C 중에서 선택된 항산화제, 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 젤란검 및 풀루란 중에서 선택된 점도 조절제, 및 글리세린 등의 가소제를 포함하는 상처치료용 서방성 필름 제형에 관한 것이다.

본 발명의 필름을 상처 부위에 부착시 삼출물을 흡수하여 하이드로겔로 변하면서 상처부위를 습윤환경으로 유지시켜 상처치료에 좋은 환경을 조성하고, 기제 자체가 생체 부착성이 우수하며, 항균 기능을 보유하고 있어 단순한 연고/크림 제제에 비해 많은 장점을 제공한다.

상피세포성장인자, 키토산, 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 필름, 지속방출제제

Description

상피세포성장인자를 포함하는 상처치료용 서방성 필름 제형 {Sustained release film formulation for healing wound comprising epidermal growth factor}

도 1a 내지 1c는 본 발명에 따른 상피세포성장인자 및 키토산을 함유하는 상처치료용 필름의 1일간 in vitro 방출률을 도시한 그래프이다.

도 2는 본 발명에 따른 상피세포성장인자 및 키토산을 함유하는 상처치료용 필름의 1년간 냉장 보관 조건 하에서 유연 물질 생성율을 도시한 그래프이다.

도 3a 및 3b는 각각 본 발명에 따른 상피세포성장인자 및 키토산을 함유하는 상처치료용 필름과 대조군의 처리 전, 후의 상처부위를 촬영한 사진이다.

본 발명은 상피세포성장인자; 키토산; 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 젤란검 및 풀루란 중에서 선택된 하나 이상인 점도 조절제; 글리세린, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐알콜 및 폴리비닐피롤리돈 중에서 선택된 하나 이상인 가소제; 및 EDTA 및 비타민 C 중에서 선택된 하나 이상인 항산화제를 포함하는 상처치료용 서방성 필름 제형에 관한 것이다.

상피세포성장인자는 종래 유로가스트론(urogastrone)으로 알려진 53개의 아미노산과 3개의 이황화물(disulfide)결합을 갖는 분자량 6045의 폴리펩타이드로서, 상피세포와 간엽세포를 포함한 각종 세포들에 대해 유사분열 촉진, 세포성장 촉진 및 위산분비 억제 등의 활성이 있어 피부나 각막의 상처 치료제 또는 위궤양 치료 효과가 있는 것으로 알려져 있다(Carpenter, Experimental Cell Research, 164:1-10, 1986). 그러나 상피세포성장인자는 상온, 특히 수분의 존재하에서 매우 불안정하고, 상처부위에서 세포가 DNA를 합성하도록 유도하기 위해서는 8 내지 12시간 정도의 잠복기가 필요한데 반하여 상피세포성장인자의 반감기는 약 1시간 이내로 매우 짧아서 목적하는 효과를 나타내기 어려우며, 적용시 상처부위에 존재하는 단백질 분해효소에 의해 변성, 분해, 응집 및 침전됨으로써 생물학적 활성을 상실하기 때문에 피부의 외상에 적용하는데 어려움이 있다 (Manning et al., Pharmaceutical Res.,:903-917,1989).

상기와 같은 상피세포성장인자의 단점 중 생물학적 불안정성 문제를 극복하고 충분한 치료효과를 나타내기 위해서는 상처 부위에서 상피세포성장인자의 유효농도가 지속적으로 유지되어야 한다고 보고되고 있다(Franklin et al., J. Lab. Clin. Med., 108:103-108,1986). 이러한 관점에서 현재 상피세포성장인자를 상처부위에 지속적으로 공급할 수 있는 형태의 서방 제제에 대한 연구 개발이 진행되고 있는데, 이들을 살펴보면 미국 특허 제4944948호에서는 중성 인지질과 음으로 하전된 인지질 및 콜레스테롤을 사용하여 상피세포성장인자를 상처부위에 지속적으로 공급하는 상피세포성장인자/리포좀 겔 제제에 대해 기술하고 있다. 그러나, 상기 발명은 상피세포성장인자를 12시간 이상 지속적으로 방출하는 방법을 제시하고 있지만 보관상의 안정성 문제를 해결하지 못해 산업적으로 응용하기에는 곤란성을 지니고 있다. 따라서 상피세포성장인자가 약제로서 충분한 치료효과를 나타내기 위해서는 장기 보관 조건에서 생물학적 활성을 유지함과 동시에 순도 및 함량 유지와 관련된 물리화학적 안정성을 유지하면서 약물의 지속 방출 특성을 보유하고 있어야 한다.

또한 유럽특허 제267015호에서는 상피세포성장인자를 친수성 셀룰로오즈 폴리머와 함께 제조하는 필름, 특히 본 발명에서 사용하는 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈와 함께 제조하는 것을 특징으로 하는 제제를 개시하고 있으나, 상피세포성장인자의 상처 치료효과가 경미한 문제점이 있다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 상피세포성장인자의 상처 치료효과를 극대화하기 위해서 자체 항균력을 보유한 키토산을 주기제로 사용하고, 임의로 상피세포성장인자의 안정성을 유지하면서 주약의 방출을 지속적으로 유지케 하기 위해 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 젤란검 또는 풀루란 등을 필름기제로 사용하며, EDTA 또는 비타민 C 등의 항산화제를 안정화제로 첨가하고, 글리세린, 프로필렌글리콜, 폴리비닐알콜, 폴리비닐피릴리돈 및 폴리에틸렌글리콜 등의 가소제를 사용하여 상피세포성장인자의 생물학적 활성과 물리화학적 안정성을 유지하면서 주약을 1일간 지속적으로 방출시킬 수 있 는 상피세포 성장인자 함유 상처치료용 서방성 필름 제형을 제공하기 위한 것이다.

본 발명에 따른 필름을 상처부위에 적용하는 경우, 건조한 필름이 삼출물을 흡수하여 수화겔로 변하게 되어 생체에 용이하게 부착될 수 있고, 주기제인 키토산이 자체 항균 기능을 지니고 있어 상피세포성장인자의 치료효과를 극대화시키며, 1일 1회 적용만으로도 유효치료농도가 유지될 수 있다.

또한, 본 발명은 상기 서방성 필름 제형에 폼형 드레싱제 또는 하이드로콜로이드형 드레싱제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 필름 제형에 관한 것이다.

본 발명의 서방성 필름 제형의 유효성분인 상피세포성장인자는 천연형과 재조합 단백질 중 어느 것이나 적용가능하며, 필름 제형 중의 상피세포성장인자의 함량은 약리학적으로 유효한 농도로 전체 중량 대비 0.1 내지 10,000μg/g, 보다 바람직하게는 1 내지 5,000μg/g을 함유하는 것이 적합하다. 상피세포성장인자의 함량이 0.1μg/g 미만일 경우는 약효가 발현되지 않으며 10,000μg/g 초과일 경우는 독성의 우려가 있다. 이때 필름 제형의 pH는 상피세포성장인자의 안정성이 유지되는 범위인 5 내지 7사이로 조정하는 것이 바람직하다.

본 발명의 주기제인 키토산은 분자량이 10 내지 150 kDa인 폴리머를 사용하는 것이 바람직하다. 분자량이 10kDa 미만인 키토산은 하이드로겔로서의 점성을 유지하지 못하고, 분자량이 150kDa 초과인 키토산을 사용했을 경우에는 고분자용액의 점도가 매우 크기 때문에 제조공정상의 어려움이 있다. 또한 키토산의 사용량은 바람직하게는 전체 중량 대비 1.0 내지 10.0 w/w%이이며, 이 범위를 벗어났을 경우에는 점도가 매우 낮거나 높아서 제조에 어려움이 있다.

상피세포성장인자의 안정화 목적으로 첨가하는 항산화제는 EDTA 및 비타민 C 중에서 선택된 하나 이상을 사용하는 것이 바람직하다. 본 발명에 있어서 항산화제는 바람직하게는 전체 중량 대비 0.01 내지 10 w/w%를 사용하고, 보다 바람직하게는 0.05 내지 5 w/w%를 사용한다. 이 범위를 벗어날 경우 상피세포성장인자의 안정성 확보에 어려움이 있다. 또한, 본 발명에 있어서 안정화 목적으로 바람직하게는 인산일수소나트륨, 탄산수소나트륨 및 구연산나트륨 중에서 선택된 하나 이상인 완충제 또는 L-히스티딘, L-라이신 및 L-아르기닌 중에서 선택된 하나 이상인 아미노산을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 점도 조절제는 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 젤란검 및 풀루란 중에서 선택된 하나 이상을 사용하는 것이 바람직하다. 이 때, 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈는 점도에 따라 저점도 및 고점도 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈로 나눌 수 있는데, 저점도의 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈는 필름 보조 기제의 역할을 하고, 고점도의 하이드록시프로필셀룰로오즈는 지속방출을 조절하는 역할을 한다. 따라서 10 내지 100 cps의 저점도의 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈 및 1,000 내지 100,000 cps의 고점도의 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈를 혼합하여 사용하는 것이 바람직하다. 점도 조절제의 사용량은 바람직하게는 0.01 내지 20.0 w/w%이고, 더욱 바람직하게는 0.01 내지 5 w/w%이다. 본 범위를 벗어났을 시에는 건조 전 기제의 점도에 영향을 주어 제조상 문제가 된다.

본 발명의 서방성 필름 제형은 글리세린, 폴리프로필렌글리콜, 폴리비닐피롤리돈 및 폴리에틸린글리콜 중에서 선택된 하나 이상의 가소제를 추가로 포함한다. 가소제의 함량은 바람직하게는 1 내지 40 w/w%이고, 더욱 바람직하게는 1 내지 20 w/w%이다. 가소제의 함량이 1 w/w% 미만일 경우는 필름이 코팅지 위에서 들뜨게 되고, 40 w/w% 초과일 경우에는 건조시간 및 전체 중량이 커지기 때문에 겔화가 촉진되어 공정 시 문제가 발생할 수 있다.

본 발명의 서방성 필름 제형에 있어서, 물을 첨가하여 전체 중량을 100 w/w%로 조절한다.

삭제

본 발명에 따른 상처치료용 서방성 필름 제형은 하기의 방법에 의해 제조될 수 있다.

적합한 용기 내에서 키토산과 점도 조절제 및 가소제를 넣고 정제수와 혼합하여 완전히 균질해질 때까지 교반한다. 여기에 안정화제인 항산화제와 상피세포성장인자를 가하여 균일하게 혼합하여 필름 제조용 조성물을 제조한다. 이 때, 조성물의 점도는 바람직하게는 1,000 내지 150,000 cps이고, 보다 바람직하게는 4,000 내지 120,000 cps이다. 본 범위를 벗어날 경우 캐스팅이 어렵기 때문에 제조가 어려워진다.

상기 제조된 조성물을 4~10℃의 냉장고에서 하루정도 방치한 후 이를 코팅 처리된 용지 위에 캐스팅하고 건조시켜 상처치료용 서방성 필름 제형을 제조한다. 제조된 필름의 두께는 제조 및 취급이 용이한 범위로 바람직하게는 0.001 내지 1 mm이고, 보다 바람직하게는 0.01 내지 0.5 mm이다. 필름 내 수분 함량은 상피세포성장인자의 안정성과 필름의 제조조건에 영향을 주는 중요한 요소로 바람직하게는 1 내지 30 %이고, 보다 바람직하게는 10 내지 25 %이다.

본 발명은 이하 실시예를 통하여 좀더 구체적으로 설명될 것이다. 다만, 이러한 실시예는 단지 본 발명이 좀더 이해될 수 있도록 예시적으로 제시되는 것이므로, 이들 실시예로서 본 발명의 범위를 한정해서는 안 될 것이다.

< 실시예 1 : 본 발명에 따른 서방성 필름 제형의 제조>

본 발명의 상피세포성장인자, 키토산, 점도조절제, 가소제 및 안정화제 함유 서방성 필름 제형의 제조는 다음과 같은 방법으로 실시하였다.

적합한 용기 내에서 키토산과 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 젤란검 및 풀루란 중에서 선택된 하나 이상의 점도 조절제; 및 글리세린, 폴리프로필렌글리콜, 폴리비닐피로리돈 및 폴리에틸린글리콜 중에서 선택된 가소제를 넣고 정제수와 혼합하여 완전히 균질해질 때까지 교반하였다. 여기에 안정화제인 EDTA 및 비타민 C 중에서 선택된 하나 이상의 항산화제와 대웅 상피세포성장인자 동결건조제형인 재조합 상피세포성장인자를 가하여 균일하게 혼합하고, 4~10℃의 냉장고에서 하루정도 방치한 후 이를 코팅 처리된 용지 위에서 캐스팅하고 송풍 또는 동결건조시켜 본 발명에 따른 상처치료용 서방성 필름 제형을 제조하였다.

< 실시예 2 : 본 발명에 따른 서방성 필름 제형의 구성성분에 따른 물리화학적 성질의 분석>

본 발명에 따른 서방성 필름 제형의 구성성분에 따른 물리화학적 성질을 분석하기 위해 하기 표 1에 기재된 물질을 구성성분으로 하여 실시예 1과 동일한 방법으로 상피세포성장인자 함유 필름(DWF1 내지 DWF6)를 제조하였다. 단, 캐스팅 시 필름의 두께는 1.0mm로 하고 건조 방법은 송풍건조로 40℃에서 1시간동안 진행하였다.

[표 1]

처방	조성 (100g 중)
DWF1	상피세포성장인자 1mg 키토산 1g 글리세린 10g 물 적량
DWF2	상피세포성장인자 1mg 키토산 1g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈 50cps 10g 글리세린 10g 물 적량
DWF3	상피세포성장인자 1mg 키토산 1g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈 50cps 5g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈 4000cps 1g 글리세린 10g 물 적량
DWF4	상피세포성장인자 1mg 키토산 1g 젤라틴 10g 글리세린 10g 물 적량
DWF5	상피세포성장인자 1mg 키토산 1g 폴리에틸렌글리콜 10g 글리세린 10g 물 적량
DWF6	상피세포성장인자 1mg 키토산 1g 폴리비닐피롤리돈 10g 글리세린 10g 물 적량

이렇게 제조된 DWF1 내지 DWF6 중의 상피세포성장인자의 순도를 역상 HPLC를 이용하여 분석하고, 제조된 필름의 성상, 필름 두께 및 수분함량을 확인하여 그 결과를 표 2에 나타내었다.

[표 2]

구분	성상	두께	수분함량(%)	상피세포성장인자 순도(%)
DWF1 (키토산 단독)	오그라듬	50 ± 10 μm	20 ± 5 %	92 ± 0.5 %
DWF2 (하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps)	약간 오그라듬	100 ± 10 μm	20 ± 2 %	94 ± 0.5 %
DWF3 (하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps/ 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps)	성상 우수	150 ± 10 μm	20 ± 3 %	95 ± 0.6 %
DWF4 (젤라틴)	성상 우수	140 ± 10 μm	20 ± 4 %	87 ± 0.9 %
DWF5 (폴리에틸렌글리콜)	성상 우수	100 ± 10 μm	20 ± 5 %	93 ± 0.5 %
DWF6 (폴리비닐피롤리돈)	성상 우수	100 ± 10 μm	20 ± 3 %	93 ± 0.6 %

상기 표 2에서 볼 수 있는 바와 같이, 제조된 필름의 성상을 확인하면 단순히 키토산으로 제조된 필름인 DWF1에 비해 다른 고분자들(HPMC, 글리세린, PEG, PVP)을 혼합하여 제조하였을 때 우수함을 확인하였다. 단, 고분자로 젤라틴을 사용한 경우(DWF4), 필름기제 제조 시에 온도를 높이는 공정에서 상피세포성장인자의 분해가 발생하여 순도가 매우 저하되는 결과가 도출되었다. 특히 점도 조절제로 하이드록시프로필메틸셀룰로오스(HPMC)를 이용하였을 때 성상 뿐만 아니라 상피세포성장인자의 순도 측면에서 가장 우수하였다.

< 실시예 3 : 필름의 점도와 두께에 따른 상피세포성장인자의 방출 특성>

필름의 점도와 주성분 함량에 따른 상피세포성장인자의 방출 특성을 확인하기 위해 하기 표 3에 기재된 물질을 구성성분으로 하여 실시예 1 및 실시예 2와 같 은 방법으로 DWF7 내지 DWF12의 필름을 제조하고, 캐스팅 두께를 달리하여 DWF13 내지 DWF14의 필름을 제조한 후, 각 필름별로 점도 및 두께를 측정하여 표 3에 나타내었다.

[표 3]

처방	조성	함량(100g중)	점도	두께
DWF7	상피세포성장인자 키토산 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 풀루란 글리세린 정제수	10.0 mg 5.0 g 10.0 g 1.0 g 0.05 g 10.0g 적량	8~10mps	160± 10 ㎛
DWF8	상피세포성장인자 키토산 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 풀루란 글리세린 정제수	10.0 mg 5.0 g 10.0 g 1.0 g 0.1 g 10.0 g 적량	12~15mps	160± 10 ㎛
DWF9	상피세포성장인자 키토산 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 풀루란 글리세린 정제수	10.0 mg 5.0 g 10.0 g 0.5 g 0.05 g 10.0 g 적량	7~9mps	155± 10 ㎛
DWF10	상피세포성장인자 키토산 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 풀루란 글리세린 정제수	10.0 mg 5.0 g 10.0 g 2.0 g 0.05 g 10.0 g 적량	17~20mps	165± 10 ㎛
DWF11	상피세포성장인자 키토산 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 풀루란 글리세린 정제수	5.0 mg 5.0 g 10.0 g 1.0 g 0.05 g 10.0 g 적량	8~10mps	160± 10 ㎛

처방	조성	함량(100g 중)	점도	두께
DWF12	상피세포성장인자 키토산 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 풀루란 글리세린 정제수	1.0 mg 5.0 g 10.0 g 1.0 g 0.05 g 10.0 g 적량	8~10mps	160± 10 ㎛
DWF13 (2.0mm 캐스팅)	상피세포성장인자 키토산 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 풀루란 글리세린 정제수	(전체:125g중) 10.0 mg 6.25. g 12.5 g 1.25 g 0.125 g 12.5 g 적량	12~15mps	300± 10 ㎛
DWF14 (3.0mm 캐스팅)	상피세포성장인자 키토산 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 풀루란 글리세린 정제수	(전체:150g중) 10.0 mg 7.5 g 15.0 g 1.5 g 0.15 g 15.0 g 적량	12~15mps	455± 10 ㎛

상기에서 제조된 DWF7 내지 DWF12 필름 각각에서 주성분인 상피세포성장인자의 방출량을 측정하기 위해 방출 시험을 실시하고, 그 결과를 표 4와 도 1a 및 1b에 나타내었다.

약물의 방출 시험은 프란즈 확산 시험기를 이용하였고 방출매질은 인산완충액(pH 7.4, 0.02% 트윈20)으로 채워 32± 0.5℃로 유지시키고, 멤브레인 없이 직접 완충액에 닿도록 세팅하였다. 제조된 필름을 공여부 크기에 맞게 절단하여 적용시키고, 1, 3, 6, 9, 15, 18, 24 시간에 각각 300㎕를 취하여 액체크로마토그래피법으로 방출량을 정량하였다. 정량한 주성분값은 초기값 대비 방출 %로 나타내었다.

[표 4]

시간 (hr)	상피세포성장인자 방출량 % (평균 ± 표준편차)
시간 (hr)	DWF7	DWF8	DWF9	DWF10	DWF11	DWF12
1	3.5 ± 1.25	2.3 ± 1.23	5.4 ± 2.35	0.9 ± 0.20	2.1 ± 0.91	1.2 ± 0.09
3	5.7 ± 2.34	3.4 ± 1.10	11.3 ± 2.43	2.1 ± 1.12	4.3 ± 1.25	3.2 ± 1.20
6	23.0 ± 2.24	15.2 ± 3.2	30.2 ± 3.50	9.2 ± 1.26	19.2 ± 2.30	14.1 ± 2.34
9	47.0 ± 2.53	36.2 ± 2.35	56.3 ± 2.26	15.2 ± 2.35	38.2 ± 2.5	29.3 ± 3.23
15	69.2 ± 1.92	54.3 ± 3.26	78.2 ± 4.30	45.3 ± 3.24	62.1 ± 3.63	53.2 ± 2.12
18	79.3 ± 1.20	68.2 ± 4.24	83.2 ± 3.64	60.2 ± 3.24	70.21 ± 4.24	65.3 ± 2.51
24	97.5 ± 2.10	89.3 ± 3.24	98.1 ± 2.12	78.2 ± 4.53	91.2 ± 3.40	81.3 ± 1.92

표 4와 도 1a에서 보는 바와 같이 필름의 점도가 클수록 상피세포성장인자의 방출이 지연됨을 확인하였다. 또한 도 1b에서 볼 수 있듯이 주성분의 함량이 적은 DWF12(1.0mg)의 상피세포성장인자 방출량이 DWF11(5.0mg)에 비해 적음을 알 수 있는데, 이로써 주성분의 함량이 적을수록 방출이 지연됨을 알 수 있었다. 이를 통해 상피세포성장인자의 점도 및 함량에 따라 그의 방출 속도가 조절되어 24시간 동안 직선적인 방출을 나타냄을 확인하였다.

또한 DWF13 및 DWF14에서 상피세포성장인자 방출량을 측정하여 하기 표5 및 도1c에 나타내었다. 표 5에서 볼 수 있듯이 필름의 두께가 증가함에 따라 상피세포성장인자의 방출 속도가 지연되는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 결과를 종합해보면 필름의 점도와 두께를 조절하는 것으로도 약물의 방출 조절이 가능함을 확인하였다.

[표 5]

시간 (hr)	상피세포성장인자 방출량 % (평균 ± 표준편차)
시간 (hr)	DWF8 (160± 10 ㎛)	DWF13 (300± 10 ㎛)	DWF14 (455± 10 ㎛)
1	2.3 ± 1.23	0.3 ± 0.23	0.4 ± 0.35
3	3.4 ± 1.10	2.4 ± 1.10	1.3 ± 1.43
6	15.2 ± 3.2	8.2 ± 3.8	8.2 ± 2.50
9	36.2 ± 2.35	21.2 ± 3.35	12.3 ± 2.26
15	54.3 ± 3.26	40.3 ± 4.26	26.2 ± 4.30
18	68.2 ± 4.24	58.2 ± 2.24	41.2 ± 3.64
24	89.3 ± 3.24	79.3 ± 4.24	68.1 ± 2.12

< 실시예 4 : 안정화제 첨가에 따른 필름 내 상피세포성장인자의 안정성>

안정화제 첨가에 따른 본 발명의 서방성 필름 제형 내에서의 상피세포성장인자의 안정성을 확인하기 위해, 상피세포성장인자, 키토산, 점도조절제 및 가소제 함유 제제 조성물에 안정화제를 첨가하지 않은 경우(DWF 15), 항산화제만을 첨가한 경우(DWF 17 및 18), 아미노산만을 첨가한 경우(DWF 16), 항산화제와 아미노산을 첨가한 경우(DWF 19) 및 항산화제와 완충제를 첨가한 경우(DWF 20)에 있어서, 필름 내로부터 시간의 경과에 따른 함량과 활성을 측정하였다.

본 실험에 사용하기 위해, 하기 표 6에 기재된 물질을 구성성분으로 하여 실시예 1 및 실시예 2와 같은 방법으로 DWF15 내지 DWF20의 필름을 제조하였다.

[표 6]

처방	조성 (100g 중)	필름 두께
DWF15 (-)	상피세포성장인자 1.0 mg 키토산 5.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 10.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 1.0 g 풀루란 0.05 g 글리세린 10.0 g 정제수 적량	160±10 ㎛
DWF16 (L-히스티딘)	상피세포성장인자 1.0 mg 키토산 5.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 10.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 1.0 g 풀루란 0.05 g 글리세린 10.0 g L-히스티딘 0.1 g 정제수 적량	160±10 ㎛
DWF17 (EDTA)	상피세포성장인자 1.0 mg 키토산 5.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 10.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 1.0 g 풀루란 0.05 g 글리세린 10.0 g EDTA Disodium 0.05 g 정제수 적량	160±10 ㎛

처방	조성 (100g 중)	필름 두께
DWF18 (아스코르빈산)	상피세포성장인자 1.0 mg 키토산 5.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 10.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 1.0 g 풀루란 0.05 g 글리세린 10.0 g 아스코르빈산 0.05 g 정제수 적량	160±10 ㎛
DWF19 (EDTA+L-히스티딘)	상피세포성장인자 1.0 mg 키토산 5.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 10.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 1.0 g 풀루란 0.05 g 글리세린 10.0 g EDTA Disodium 0.05 g L-히스티딘 0.1 g 정제수 적량	160±10 ㎛
DWF20 (EDTA+포스페이트버퍼)	상피세포성장인자 1.0 mg 키토산 5.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈50cps 10.0 g 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈4000cps 1.0 g 풀루란 0.05 g 글리세린 10.0 g EDTA Disodium 0.05 g 인산일수소나트륨 0.142g 정제수 적량	160±10 ㎛

상기에서 제조된 DWF15 내지 DWF20 필름들을 알루미늄 포장지로 기밀포장하여 상온(25℃)에서 3개월간 및 냉장(2-8℃)에서 1년간 보관하면서 시간경과에 따른 각 필름 내 상피세포성장인자의 함량과 활성을 확인하여 그 값을 표 7과 도 2에 나타내었다.

[표 7]

구 분	25℃(3개월)		2 ~ 8℃(1년)
구 분	함량(%)	활성(%)	함량(%)	활성(%)
DWF15	77.0	68.0	87.3	87.1
DWF16	90.9	89.1	94.4	93.3
DWF17	93.7	91.2	98.1	97.2
DWF18	92.8	91.5	96.9	97.1
DWF19	95.0	94.5	99.9	98.9
DWF20	94.5	93.9	98.2	99.1

상기 표 7에서 볼 수 있듯이 안정화제가 없는 DWF15에 비해 안정화제를 첨가한 다른 처방들의 유연물질 생성률이 매우 낮음을 확인하였다. 또한 아미노산을 첨가한 필름(DWF16)과 항산화제를 첨가한 경우(DWF17, DWF18) 안정성이 다소 우수하였고, 아미노산과 항산화제를 함께 사용(DWF19)하거나 항산화제와 완충제를 사용(DWF20)하였을 경우 안정성이 가장 우수하였다.

< 실시예 5 : 동물 약효 시험 >

본 발명에 따른 서방성 필름 제형에서 상피세포성장인자의 약효를 확인하기 위해 하이드록시프로필셀룰로오즈로 제조된 상피세포성장인자 필름을 대조군으로 하고, 실시예 4의 표6에 기재된 DWF20을 실시예 1과 같은 방법으로 제조한 필름을 실험군으로 하여 비교 실험 하였다. 비교실험 조건은 하기 표 8과 같다.

[표 8]

	대조군	비교군
	일반 필름 [25ug/1매(20cm²)]	본원발명의 서방성 필름 제형(DWF20) [50ug/1매(20cm²)]
용법 및 용량	하루 2회 1장씩 상처부위에 붙인다. (12시간 간격)	하루 1장 상처부위에 붙인다.
평가기간	4일
상처부위면적	약 20cm²

상처가 난 후 1일 경과 후의 상처부위를 촬영한 사진을 도 3a에, 상기 대조군 및 비교군을 상처부위에 처리하고 나서 4일 경과 후 상처부위를 촬영한 사진을도 3b에 도시하였다. 사진에서 볼 수 있듯이 대조군보다 상피세포성장인자, 키토 산, 점도 조절제, 가소제, 항산화제 및 완충제를 함유한 본원 발명의 필름을 처리하였을 때 쥐의 상처가 매우 빠르게 치유되는 것을 확인하였다. 이는 상피세포성장인자를 하루 2번 적용하는 것보다 본원 발명의 상처치료용 서방성 필름 제형을 1회 적용함으로써 약물이 상처부위에 지속적으로 방출되어 환부에서의 유효치료농도가 유지되는 효과가 나타났기 때문으로 사료된다.또한 키토산을 첨가함으로써 항균효과가 증진되어 상처치유에 더욱 효과가 나타났기 때문으로 사료된다.

본 발명을 통해 유효성분인 상피세포성장인자에 키토산, 점도 조절제, 가소제 및 안정화제를 포함하는 서방성 필름 제형을 제공함으로써 상처치료효과를 극대화할 수 있다. 또한, 본 발명의 지속성 필름 제형은 하루 2~3회 상처부위에 도포해야 하는 연고/크림 제제또는 젤제형과 달리 상처부위에 하루 한번 부착함으로서 유효치료농도가 유지되기 때문에 약물적용을 위해 환부로부터 드레싱을 제거하지 않아도 되므로 상처부위의 노출이 낮고, 환자 및 의료진들의 편의성을 증진하는 효과를 기대할 수 있었다.

또한, 본 발명의 필름은 삼출물을 흡수하여 하이드로겔로 변하면서 상처부위를 습윤환경으로 유지시키므로 상처치료에 좋은 환경을 조성하고, 기제 자체가 생체 부착성이 우수하고, 냉장조건에서 1년 이상의 안정성을 나타내며 항균 기능을 보유하고 있어 단순한 연고/크림 제제 또는 젤제형에 비해 장점이 많다.

Claims

상피세포성장인자; 키토산; 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈, 젤란검 및 풀루란 중에서 선택된 하나 이상인 점도 조절제; 글리세린, 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌글리콜, 폴리비닐알콜 및 폴리비닐피롤리돈 중에서 선택된 하나 이상인 가소제; 및 EDTA 및 비타민 C 중에서 선택된 하나 이상인 항산화제를 포함하는 상처치료용 서방성 필름 제형.
제1항에 있어서, 인산일수소나트륨, 탄산수소나트륨 및 구연산 나트륨 중에서 선택된 하나 이상인 완충제를 추가로 포함하는 필름 제형.
제1항에 있어서, L-히스티딘, L-라이신 및 L-아르기닌 중에서 선택된 하나 이상인 아미노산을 추가로 포함하는 필름 제형.
제1항에 있어서, 키토산은 분자량이 10 kDa 내지 150 kDa인 필름 제형.
제1항 또는 제4항에 있어서, 키토산의 함량이 전체 중량 대비 1 내지 10 w/w%인 필름 제형.
제1항에 있어서, 상피세포성장인자의 함량이 전체 중량 대비 0.1 내지 10,000μg/g인 필름 제형.
제1항에 있어서, 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈는 점도가 5 내지 100,000 cps인 것 중에서 선택된 하나 이상인 필름 제형.
제1항 또는 제7항에 있어서, 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈는 10 내지 100cps의 저점도 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈 및 1,000 내지 100,000 cps의 고점도 하이드록시프로필메틸셀룰로오즈를 포함하는 필름 제형.
제1항 또는 제7항에 있어서, 점도 조절제의 함량이 전체 중량 대비 0.01 내지 20 w/w %인 필름 제형.
제1항에 있어서, 가소제의 함량이 전체 중량 대비 1 내지 40 w/w%인 필름 제형.
제1항에 있어서, 항산화제의 함량이 전체 중량 대비 0.01 내지 10 w/w%인 필름 제형.
제1항에 있어서, 필름 제형의 점도가 1,000 내지 150,000 cps인 필름 제형.
제1항에 있어서, 필름의 두께가 0.001 내지 1 mm인 필름 제형.
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