KR100676285B1 - 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법 및 콜라겐 용액의 제조방법 그리고 이를 이용하여 생산한 매트릭스 - Google Patents

동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법 및 콜라겐 용액의 제조방법 그리고 이를 이용하여 생산한 매트릭스 Download PDF

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Abstract

본 발명은 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법 및 콜라겐 용액의 제조방법 그리고 이를 이용하여 생산한 매트릭스에 관한 것이다.
본 발명은 이를 위해 콜라겐의 최종 처리시 일정 농도의 콜라겐 용액을 저온에서 중성으로 처리 후, 30~35도에서 일야 처리하고, 원심 분리기를 통하여 콜라겐을 농축시키고 이렇게 농축된 콜라겐은 냉장 보관된 pH 4.0-6.0 정도의 약산성의 증류수나 인산완충용액(PBS)에 녹여 1-5 mg/mL 농도의 콜라겐을 제조함을 특징으로 구성된다.
상기와 같이 구성된 본 발명은 동물의 골조직과 연골조직 및 피부조직 그리고 힘줄/건조직으로부터 콜라겐을 효율적으로 분리하는 방법을 제공함과 아울러 이렇게 분리된 조직으로부터 콜라겐 용액을 제조하는 것이며, 또한 이를 이용하여 매트릭스와 고농축 용액을 제조할 수 있도록 한 것이다.
골조직, 연골조직, 피부조직, 힘줄/건조직, 콜라겐, 콜라겐 매트릭스.

Description

동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법 및 콜라겐 용액의 제조방법 그리고 이를 이용하여 생산한 매트릭스{MANUFACTURED PRODUCT USING AND COLLAGEN SOLUTION MANUFACTURING METHOD AND COLLAGEN SEPARATION METHOD OF ANIMAL TISSUE}
도 1 은 본 발명에 적용된 연골 조직에서 분리된 2형 콜라겐 확인 사진.
삭제
도 2 는 본 발명에 적용된 1형 콜라겐의 이미지 분석기(Image analyzer)를
이용한 분석 결과치.
삭제
도 3 은 본 발명의 콜라겐을 이용하여 생산한 매트릭스 제품.
도 4 는 본 발명의 콜라겐을 이용하여 생산한 고농축 콜라겐 용액 제품.
본 발명은 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법 및 콜라겐 용액의 제조방법 그리고 이를 이용하여 생산한 매트릭스에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 동물의 골조직과 연골조직 및 피부조직 그리고 힘줄/건조직으로부터 콜라겐을 효율적으로 분리하는 방법을 제공함과 아울러 이렇게 분리된 조직으로부터 콜라겐 용액을 제조하는 것이며, 또한 이를 이용하여 매트릭스와 고농축 용액을 제조할 수 있도록 한 것이다.
주지하다시피 콜라겐[collagen]이란, 동물의 뼈·연골·이·건(腱)·피부 외에 물고기의 비늘 등을 구성하는 경단백질(硬蛋白質)로, 교원질(膠原質)이라고도 하며, 섬유상 고체로 존재하고, 전자현미경으로 보면 복잡한 가로무늬 구조로 되어 있다.
상기 콜라겐은 모든 포유동물에서 가장 빈번히 나타나는 구조 단백질이고, 전체 중량의 30% 정도를 차지하고 있는 단백질이다. 콜라겐은 현재 20여가지의 종류가 알려져 있는데, 콜라겐 1형이 대부분을 차지하고 있으며, 구조는 약 300 kda의 단량체 단백질이 특정 부위에서 공유결합으로 가교되어 있다. 따라서 성숙한 콜라겐은 불용성이며 높은 인장 강도를 갖는 특징적인 섬유형태를 형성한다. 구성 아미노산은 글리신·프롤린·하이드록시프롤린·알라닌·글루탐산 등이며, 그 중에서도 다른 단백질에 존재하지 않는 하이드록시프롤린의 함량이 높다는 것이 특징이다.
상기와 같은 콜라겐은 3가닥의 폴리펩타이드가 수소결합으로 꼬인 구조를 가지고 있는데, 물·묽은 산·묽은 알칼리에 분해되지 않지만 끓이면 한 가닥 구조인 젤라틴 형태가 되어 용해된다. 콜라겐은 젤라틴과는 달라 가온시키지 않아도 적절한 점도를 얻을 수 있음므로 겔화시킬 경우에 제조가 간편하다. 또한 젤라틴보다 고분자이기 때문에 생체 조직에 보다 가깝고, 생리 활성이 크며, 따라서 창상에 사용한 경우에 그 치유를 촉진하여 젤라틴이 오히려 조직 재생을 방해하는 경향과 좋은 대조를 나타낸다. 경화한 후에도 유연하며, 또한 가교에 요하는 시간이 짧아 겔화 시간이 단축된다. 콜라겐은 트립신, 펩신, 휘신, 파파인, 엘라스티나제 등 단백질 분해효소의 작용은 받기 어렵고, 콜라게나아제의 작용을 받는다. 조직으로부터의 분리는 유기용매 추출, 산·알칼리처리 후 트립신·펩신·휘신·파파인·엘라스티나제 등을 작용시켜 콜라겐을 얻는다.
더하여 상기 콜라겐은 물, 생리 식염수, 붕산 완충액과 같은 완충액, 또는 염화나트륨 등의 염, 단백질, 당, 지방질 등을 함유하는 수용액 등 생체에 대하여 무독의 용매에 용해하여 사용된다.
상기와 같은 콜라겐의 효율적인 분리 방법은 아직까지도 계속 연구 중에 있으며 의료용으로 사용하기 위한 정도의 콜라겐을 준비하기 위해서는 많은 양의 원료가 필요할 뿐만 아니라 분리 방법에서도 많은 발전이 필요하다.
특히 상기 콜라겐은 혈소판의 농도를 증가시키고 혈소판들을 뭉치게 할 뿐만 아니라, 모양이나 생화학적 구조를 변형시킴으로 혈소판을 활성화 시키는 것으로 알려져 지혈제로도 많이 사용되고 있다.
그리고 콜라겐을 분리하는 방법은 1950년대 이후 많이 알려져 있으나, 변성되지 않은 순수 콜라겐을 분리하는 방법은 쉽지 않고, 콜라겐을 다양한 분야에 이용하기 위해 여러 조직으로부터, 그리고 많은 양을 분리할 수 있는 방법은 필요한 요건이다.
그러나 현재 알려진 콜라겐 분리는 포유동물 (쥐, 소, 돼지 등) 의 피부나 힘줄 등으로부터 분리하는 방법은 알려져 있으나, 골 조직으로부터 콜라겐을 분리하는 방법은 아직 없다는 문제점이 있었다.
본 발명은 상기와 같은 종래 기술의 제반 문제점을 해소하기 위하여 안출한 것으로, 동물의 다양한 조직으로부터 콜라겐을 분리한 후 이를 이용할 수 있도록 함을 제1목적으로 한 것으로, 특히 이를 위한 구체적인 제2목적은 동물의 골조직과 연골조직 및 피부조직 그리고 힘줄/건조직으로부터 콜라겐을 효율적으로 분리하는 방법을 제공하는 것이고, 제3목적은 이렇게 분리된 조직으로부터 콜라겐 용액을 제조하는 것이며, 제4목적은 이를 이용하여 매트릭스와 고농축 용액을 제조할 수 있도록 한 것이고, 제5목적은 이로 인해 제품의 품질과 신뢰성을 대폭 향상시켜 소비자로 하여금 좋은 이미지를 심어줄 수 있도록 한 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법 및 콜라겐 용액의 제조방법 그리고 이를 이용하여 생산한 매트릭스를 제공한다.
이러한 목적 달성을 위하여 본 발명은 콜라겐의 최종 처리시 일정 농도의 콜라겐 용액을 저온에서 중성으로 처리 후, 30~35도에서 일야 처리하고, 원심 분리기를 통하여 콜라겐을 농축시키고 이렇게 농축된 콜라겐은 냉장 보관된 pH 4.0.~6.0 정도의 약산성의 증류수나 인산완충용액(PBS)에 녹여 1~5 mg/mL 농도의 콜라겐을 제조함을 특징으로 하는 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 용액의 제조방법을 제공한다.
이하에서는 이러한 목적 달성을 위한 본 발명의 바람직한 실시예를 첨부된 도면에 따라 상세히 설명하면 다음과 같다.
본 발명에 적용된 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법 및 콜라겐 용액의 제조방법 그리고 이를 이용하여 생산한 제품은 도 1 내지 도 4 에 도시된 바와 같이 구성되는 것이다.
하기에서 본 발명을 설명함에 있어, 관련된 공지 기능 또는 구성에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우에는 그 상세한 설명은 생략할 것이다.
그리고 후술되는 용어들은 본 발명에서의 기능을 고려하여 설정된 용어들로서 이는 생산자의 의도 또는 관례에 따라 달라질 수 있으므로 그 정의는 본 명세서 전반에 걸친 내용을 토대로 내려져야 할 것이다.
본 발명에서는 다양한 조직으로부터 콜라겐을 효율적으로 분리할 수 있는 개선된 방법과, 특히 골조직으로부터 콜라겐을 분리하는 방법에 관한 것이며, 또한 분리된 콜라겐으로 응용할 수 있는 방법에 관한 것이다.
본 발명에서 분리된 콜라겐이란, 예를 들면 각종 동물에서 추출한 콜라겐을 산처리를 하거나, 펩신, 트립신, 키모트립신, 파파인, 휘신 등의 효소로 처리하여 항원성이 강한 펩타이드를 제거한 것이다.
상기 콜라겐의 특성은 4-10도, 산성 pH에서는 용해성을 보이며, 30-37도, 중성 pH에서는 불용성의 성질을 보인다. 또한 일정 농도에서 산성 pH에서 중성 pH 로의 변화함에 있어서 30-37도에서 정치되면 젤형태를 보이며, 일정 자극이 주어지면 젤형태에서 섬유형태의 불용성 상태를 보인다.
또한 적정 온도와 pH를 적용한 방법에서, pH 중성 적정시 4도의 조건을 유지하면서 진행하면 중성 조건에서도 용액 상의 성질을 일정 시간동안 유지된다.
더하여 콜라겐 분리는 pH 와 온도의 변화에 따른 차이, 그리고 차별적인 염농도의 차이, 알코올 침전 등을 이용하여 분리하고자 한다.
또한 중성 조건에서 30-37도의 온도에서 일정시간 정치시킴으로써 층분리를 유도하고 원심분리를 통해서 콜라겐을 침전시키는 방법을 이용하여 농축하기 위한 방법으로도 사용하고자 한다.
상기 콜라겐은 혈소판의 농도를 증가시키고 혈소판들을 뭉치게 할 뿐만 아니라, 모양이나 생화학적 구조를 변형시킴으로 혈소판을 활성화 시키는 것으로 알려져 지혈제로도 많이 사용되고 있다.
그리고 상기 콜라겐의 pH에 대한 점도는 pH 5.0-6.0 에서 가장 높은 것으로 알려져 있다.
이를 위해 본 발명은 콜라겐의 최종 처리시 일정 농도의 콜라겐 용액을 저온에서 중성으로 처리 후, 30-35도에서 일정 충격을 가하면서 일야 처리한다. 일야 처리 한 후, 원심 분리를 통하여 콜라겐을 농축시키고 농축된 콜라겐은 냉장 보관된 pH 5.0 정도의 약산성의 증류수나 PBS(Phosphate Buffer Saline;완충용액)에 녹여 1-5 mg/mL 농도의 콜라겐 용액으로 제조한다.
본 발명에서는 상기 콜라겐을 매트릭스나 고농축 용액 등의 형태로 적용할 수 있다.
즉, 도 3 에 도시된 바와 같이 매트릭스는 콜라겐의 적정 농도와 pH에서 필터 처리된 순수한 공기를 주입시켜 일정한 pore를 형성하게 하여 동결 건조 시키고 건열 건조를 통하여 제작한다.
이때 상기 콜라겐 매트릭스는 3 - 5 mg/mL 의 콜라겐 용액으로, pH 5.0-6.0 에 필터 처리된 순수 공기를 주입시켜 일정한 공극을 형성하여 동결건조하고 열처리를 통하여 포장 후, EO가스(Ethylene Oxide)나 γ-ray(감마선)을 이용하여 멸균한다. 매트릭스는 여러가지 형태로 주형에 따라 제작될 수 있고 제작된 콜라겐 매트릭스는 지혈제, 지지체 등으로 이용될 수 있고 또한 콜라겐 지혈제나 지지체는 여러가지 형태로 판매되고 있다. 더하여 상기 콜라겐 매트릭스는 피브리노겐이나 트롬빈 등과 같은 성분을 포함시켜 지혈제로의 효과를 상승시킬 수 있다. 그리고 이러한 매트릭스를 지혈제 반창고 등으로 적용하여 사용할 수 있다.
본 발명은 또한 도 4 에 도시된 바와 같이 고농축 콜라겐 용액을 이용하기 위해서는 1 mg/mL 의 농도에서 0.22 ㎛(10-6m)필터를 통하여 멸균한 후, 농축시켜 3-7 % 의 콜라겐 용액을 제조한다. 고농축 콜라겐 용액은 주름제거를 위한 filler로 사용되고 있으며, 제품으로도 판매되고 있다. 그리고 항생제나 성장인자 등을 포함한 고농축 콜라겐을 이용하여 스프레이 방식으로 상처 부위의 조직 재생효과를 유도할 수 있다.
이하에서는 본 발명의 구체적인 실시예를 설명하도록 하겠다.
- 실시예 1
돼지 골 조직을 1 ㎛(10-6m)- 500 ㎛(10-6m) 단위로 분말화하여 0.5N HCl 산처리 한 후, 펩신을 장시간(3-7일) 반복 처리(3-5회)하여 1형 콜라겐을 분리한 다음, 분별 염처리와 알코올 처리를 통하여 콜라겐을 분리한 결과. 최초 조직 무게의 5-10% 정도를 수득할 수 있는 것으로, 이를 보다 상세히 설명하면,
1. 돼지로부터 분리된 골조직을 증류수, 알코올, 아세톤 등을 이용하여 깨끗이 세척한다.
2. 골조직을 도넛 모양 등으로 자른 후, -20℃ 에 보관한다.
3. 골조직으로부터 콜라겐을 분리하기 위하여 1-500 um 의 크기로 분말화 한다.
4. 분말화된 골조직은 알코올과 증류수를 이용하여 세척한다.
5. 세척된 골분말은 0.5N HCl 에 10-100 rpm 으로 진동(shaking) 시키면서 일야 처리한다.
6. 일야 처리 후, 펩신 처리한다. (펩신은 조직:펩신 = 10-50 : 1 의 비율로 처리하고 0.1N HCl에 녹여 사용한다.
7. 펩신 처리는 3-7 일 동안 2-5 회 반복 처리한다.
8. 펩신 처리된 골분말 용액은 12000g, 30 분, 4℃ 에서 원심분리 시킨 후, 상등액을 분리 보관하고 침전물은 7. 단계를 반복한다.
9. 분리 보관된 상등액에 최종 농도 0.5-0.8 M NaCl 을 적용하고 4시간-1일, 4℃ 처리한다.
10. 원심분리(12 000 g, 30 분, 4℃ ) 후, 상등액은 제거하고 침전물을 수거한다.
11. 침전물을 용해시켜 중성으로 적정하고 추가적으로 용액의 최종 농도가 1.6M NaCl 이 되도록 첨가한다.
12. 4시간 - 1 일 , 4℃ 처리 후, 원심분리시켜 침전물은 제거하고 상등액을 수거한다.
13. 수거된 상등액에 추가적으로 최종 농도 2.6M NaCl이 되도록 첨가하고 4hr-1일 , 4℃ 정치시킨다.
14. 원심분리 하여 상등액은 제거하고 침전물을 95% 알코올에 1-2 회 세척하고 증류수에 재현탁 시킨다.
15. 재현탁된 용액에 1N HCl을 100 mL 당 1 mL 씩 가하여 완전히 재현탁 시키고, 다시 중성으로 4℃ 에서 적정한다.
16. 중성으로 적정된 용액은 30-37 에서 4시간-1일 정치시키고 원심분리 시킨다.
17. 침전된 콜라겐은 ddH2O 나 PBS에 1-30 mg/mL 의 농도로 재현탁하여 4℃ 보관한다.
- 실시예 2.
돼지 연골 조직을 분말화 하여 0.5N HCl 산처리 한 후, 펩신을 반복 처리하여 2형 콜라겐을 분리한 다음, 분별 염처리와 알코올 처리를 통하여 콜라겐을 분리 한 결과. 최초 조직 무게의 5-10% 정도를 수득할 수 있다.
1. 돼지로부터 분리된 연골조직을 증류수, 알코올, 아세톤 등을 이용하여 깨끗이 세척한다.
2. 연골조직으로부터 콜라겐을 분리하기 위하여 1-500 um 의 크기로 분말화 한다.
3. 분말화된 연골조직은 알코올과 증류수를 이용하여 세척한다.
4. 세척된 연골 조직은 Guanidin-HCl 용액 (4M Guanidine-HCl, 0.05M Tris-HCl (pH 7.5))으로 일야(12~24시간)처리한다.
5. 일야처리된 연골 분말은 0.1N HCl로 1-2회 세척한다.
6. 연골분말은 0.5N HCl 에 10-100 rpm 으로 shaking 시키면서 일야 처리한다.
7. 일야 처리 후, 펩신 처리한다. (펩신은 조직:펩신 = 10-50 : 1 의 비율로 처리하고 0.1N HCl에 녹여 사용한다.
8. 펩신 처리는 3-7 일 동안 2-5 회 반복 처리한다.
9. 펩신 처리된 연골분말 용액은 12000g, 30 분, 4℃ 에서 원심분리 시킨 후, 상등액을 분리 보관하고 침전물은 8. 단계를 반복한다.
10. 분리 보관된 상등액에 최종 농도 0.5-0.8 M NaCl 을 적용하고 4시간-1일, 4℃ 처리한다.
11. 원심분리(12 000 g, 30 분, 4℃ ) 후, 상등액은 제거하고 침전물을 수거한다.
12. 침전물을 용해시켜 중성으로 적정하고 추가적으로 용액의 최종 농도가 2.6M NaCl 이 되도록 첨가한다.
13. 4시간-1 일 , 4℃ 처리 후, 원심분리시켜 침전물은 제거하고 상등액을 수거한다.
14. 수거된 상등액에 추가적으로 최종 농도 3.5-4.0M NaCl이 되도록 첨가하고 4시간-1일 , 4℃ 정치시킨다.
15. 원심분리 하여 상등액은 제거하고 침전물을 95% 알코올에 1-2 회 세척하고 증류수에 재현탁 시킨다.
16. 재현탁된 용액에 1N HCl을 100 mL 당 1 mL 씩 가하여 완전히 재현탁 시키고, 다시 중성으로 4℃ 에서 적정한다.
17. 중성으로 적정된 용액은 30-37 에서 4시간-1일 정치시키고 원심분리 시킨다.
18. 침전된 콜라겐은 ddH2O 나 PBS에 1-30 mg/mL 의 농도로 재현탁하여 4℃ 보관한다.
- 실시예 3.
돼지 피부 조직을 절편화(500 um -5 mm) 하여 격자 크기가 200-500um 인 망에 조직을 넣고, 펩신을 반복 처리하여 1형 콜라겐을 분리한 다음, 분별 염처리와 알코올 처리를 통하여 콜라겐을 분리한 결과. 최초 조직 무게의 10-15% 정도를 수득할 수 있다.
1. 돼지로부터 분리된 피부 조직을 증류수, 알코올 등을 이용하여 깨끗이 세 척한 후, -20℃ 에 보관한다.
2. 피부 조직으로부터 콜라겐을 분리하기 위하여 500 um -5 mm 의 크기로 절편화 한다.
3. 절편화된 조직은 200 -500 um 의 망에 넣고 알코올과 증류수를 이용하여 세척한다.
4. 세척된 펩신 처리한다. (펩신은 조직:펩신 = 10-50 : 1 의 비율로 처리하고 0.1N HCl에 녹여 사용한다.
5. 펩신 처리는 2-3 일 동안 2-3 회 반복 처리한다.
6. 펩신 처리된 골분말 용액은 12000g, 30 분, 4℃ 에서 원심분리 시킨 후, 상등액을 분리 보관하고 침전물은 5. 단계를 반복한다.
7. 분리 보관된 상등액에 최종 농도 0.5-0.8 M NaCl 을 적용하고 4시간-1일, 4℃ 처리한다.
8. 원심분리(12 000 g, 30 분, 4 )후, 상등액은 제거하고 침전물을 수거한다.
9. 침전물을 용해시켜 중성으로 적정하고 추가적으로 용액의 최종 농도가 1.6M NaCl 이 되도록 첨가한다.
10. 4시간-1 일 , 4℃ 처리 후, 원심분리시켜 침전물은 제거하고 상등액을 수거한다.
11. 수거된 상등액에 추가적으로 최종 농도 2.6M NaCl이 되도록 첨가하고 4시간-1일 , 4℃ 정치시킨다.
12. 원심분리 하여 상등액은 제거하고 침전물을 95% 알코올에 1-2 회 세척하고 증류수에 재현탁 시킨다.
13. 재현탁된 용액에 1N HCl을 100 mL 당 1 mL 씩 가하여 완전히 재현탁 시키고, 다시 중성으로 4℃ 에서 적정한다.
14. 중성으로 적정된 용액은 30-37 에서 4시간-1일 정치시키고 원심분리 시킨다.
15. 침전된 콜라겐은 ddH2O 나 PBS(Phosphate Buffer Saline;완충용액)에 1-30 mg/mL 의 농도로 재현탁하여 4℃ 보관한다.
- 실시예 4.
돼지 건/힘줄 조직을 절편화(500um -5 mm) 한 후, 펩신 처리하여 1형 콜라겐을 분리한 다음, 분별 염처리와 알코올 처리를 통하여 콜라겐을 분리한 결과. 최초 조직 무게의 10-20% 정도를 수득할 수 있다.
1. 돼지로부터 분리된 힘줄/건 조직을 증류수, 알코올 등을 이용하여 깨끗이 세척한 후, -20℃ 에 보관한다.
2. 힘줄 / 건 조직으로부터 콜라겐을 분리하기 위하여 500 um - 5 mm 의 크기로 절편화 한다.
3. 절편화된 조직은 알코올과 증류수를 이용하여 세척한다.
4. 세척된 펩신 처리한다. (펩신은 조직:펩신 = 10-50 : 1 의 비율로 처리하고 0.1N HCl에 녹여 사용한다.
5. 펩신 처리는 2-3 일 동안 2-3 회 반복 처리한다.
6. 펩신 처리된 골분말 용액은 12000g, 30 분, 4℃ 에서 원심분리 시킨 후, 상등액을 분리 보관하고 침전물은 5. 단계를 반복한다.
7. 분리 보관된 상등액에 최종 농도 0.5-0.8 M NaCl 을 적용하고 4시간-1일, 4℃ 처리한다.
8. 원심분리(12 000 g, 30 분, 4℃ ) 후, 상등액은 제거하고 침전물을 수거한다.
9. 침전물을 용해시켜 중성으로 적정하고 추가적으로 용액의 최종 농도가 1.6M NaCl 이 되도록 첨가한다.
10. 4시간-1 일 , 4℃ 처리 후, 원심분리시켜 침전물은 제거하고 상등액을 수거한다.
11. 수거된 상등액에 추가적으로 최종 농도 2.6M NaCl이 되도록 첨가하고 4시간-1일 , 4℃ 정치시킨다.
12. 원심분리 하여 상등액은 제거하고 침전물을 95% 알코올에 1-2 회 세척하고 증류수에 재현탁 시킨다.
13. 재현탁된 용액에 1N HCl을 100 mL 당 1 mL 씩 가하여 완전히 재현탁 시키고, 다시 중성으로 4℃ 에서 적정한다.
14. 중성으로 적정된 용액은 30-37℃ 에서 4시간-1일 정치시키고 원심분리 시킨다.
15. 침전된 콜라겐은 ddH2O 나 PBS에 1-30 mg/mL 의 농도로 재현탁하여 4℃ 보관한다.
상기와 같은 실시예의 효과에 의해서는,
도 1 에 도시된 바와 같이 SDS-PAGE 결과, 각각 band의 분자량이 약 140 kda, 130 kda 정도임을 확인할 수 있었다.
또한 도 2 와 같은 콜라겐의 이미지 분석 결과, 1형 콜라겐의 특징인 a1:a2 = 2:1 임을 확인할 수 있었고 (시험 결과치를 얻을 수 있고), 도 3 은 본 발명의 콜라겐을 이용하여 생산한 매트릭스의 생산 제품이고, 도 4 는 본 발명의 콜라겐을 이용하여 생산한 고농축 콜라겐 용액의 생산 제품이다.
한편 본 발명은 상기의 구성부를 적용함에 있어 다양하게 변형될 수 있고 여러 가지 형태를 취할 수 있다.
그리고 본 발명은 상기의 상세한 설명에서 언급되는 특별한 형태로 한정되는 것이 아닌 것으로 이해되어야 하며, 오히려 첨부된 청구범위에 의해 정의되는 본 발명의 정신과 범위 내에 있는 모든 변형물과 균등물 및 대체물을 포함하는 것으로 이해되어야 한다.
상기에서 상세히 살펴본 바와 같이 본 발명은 동물의 다양한 조직으로부터 콜라겐을 분리한 후 이를 이용할 수 있도록 한 것으로, 특히 이를 위한 구체적인 목적은 동물의 골조직과 연골조직 및 피부조직 그리고 힘줄/건조직으로부터 콜라겐을 효율적으로 분리하는 방법을 제공하는 것이고, 이렇게 분리된 조직으로부터 콜라겐 용액을 제조하는 것이며, 이를 이용하여 매트릭스와 고농축 용액을 제조할 수 있도록 한 것이고, 이로 인해 제품의 품질과 신뢰성을 대폭 향상시켜 소비자로 하여금 좋은 이미지를 심어줄 수 있도록 한 매우 유용한 발명인 것이다.

Claims (11)

  1. 삭제
  2. 돼지의 골 조직을 ㎛(10-6m)단위로 분말화 하여 산 처리한 후, 펩신을 장시간 반복 처리하여 1형 콜라겐을 분리한 다음, 분별 염처리와 알코올 처리를 통하여 콜라겐을 분리하여 최초 조직무게의 5-10%정도를 수득하여 콜라겐을 분리하는 방법에 있어서,
    상기 돼지의 골 조직으로부터 콜라겐을 분리하는 과정은,
    1. 돼지로부터 분리된 골조직을 증류수, 알코올, 아세톤 등을 이용하여 깨끗이 세척한다.
    2. 골조직을 도넛 모양 등으로 자른 후, -20℃ 에 보관한다.
    3. 골조직으로부터 콜라겐을 분리하기 위하여 1-500 um 의 크기로 분말화 한다.
    4. 분말화된 골조직은 알코올과 증류수를 이용하여 세척한다.
    5. 세척된 골분말은 0.5N HCl 에 10-100 rpm 으로 진동(shaking) 시키면서 일야 처리한다.
    6. 일야 처리 후, 펩신 처리한다. (펩신은 조직:펩신 = 10-50 : 1 의 비율로 처리하고 0.1N HCl에 녹여 사용한다.
    7. 펩신 처리는 3-7 일 동안 2-5 회 반복 처리한다.
    8. 펩신 처리된 골분말 용액은 12000g, 30분, 4℃에서 원심분리 시킨 후, 상등액을 분리 보관하고 침전물은 7. 단계를 반복한다.
    9. 분리 보관된 상등액에 최종 농도 0.5-0.8 M NaCl 을 적용하고 4시간-1일, 4℃ 처리한다.
    10. 원심분리(12 000 g, 30 분, 4℃) 후, 상등액은 제거하고 침전물을 수거한다.
    11. 침전물을 용해시켜 중성으로 적정하고 추가적으로 용액의 최종 농도가 1.6M NaCl 이 되도록 첨가한다.
    12. 4시간-1일 , 4℃처리 후, 원심분리시켜 침전물은 제거하고 상등액을 수거한다.
    13. 수거된 상등액에 추가적으로 최종 농도 2.6M NaCl이 되도록 첨가하고 4시간-1일 , 4℃ 정치시킨다.
    14. 원심분리 하여 상등액은 제거하고 침전물을 95% 알코올에 1-2 회 세척하고 증류수에 재현탁 시킨다.
    15. 재현탁된 용액에 1N HCl을 100 mL 당 1 mL 씩 가하여 완전히 재현탁 시키고, 다시 중성으로 4℃ 에서 적정한다.
    16. 중성으로 적정된 용액은 30-37 에서 4시간-1일 정치시키고 원심분리 시킨다.
    17. 침전된 콜라겐은 ddH2O(멸균증류수)나 PBS(Phosphate Buffer Saline;완충용액)에 1-30 mg/mL 의 농도로 재현탁하여 4℃ 보관한다.
    로 이루어짐을 특징으로 하는 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법.
  3. 삭제
  4. 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐을 분리하는 방법에 있어서,
    돼지의 연골 조직을 분말화 하여 산처리 한 후, 펩신을 반복 처리하여 2형 콜라겐을 분리한 다음, 분별 염처리와 알코올 처리를 통하여 콜라겐을 분리하여 최초 조직무게의 5-10% 정도를 수득하여 콜라겐을 분리하되, 상기 돼지의 연골 조직으로부터 콜라겐을 분리하는 과정은,
    1. 돼지로부터 분리된 연골조직을 증류수, 알코올, 아세톤 등을 이용하여 깨끗이 세척한다.
    2. 연골조직으로부터 콜라겐을 분리하기 위하여 1-500㎛(10-6m)의 크기로 분말화 한다.
    3. 분말화된 연골조직은 알코올과 증류수를 이용하여 세척한다.
    4. 세척된 연골 조직은 Guanidin-HCl 용액 (4M Guanidine-HCl, 0.05M Tris-HCl (pH 7.5))으로 일야(12~24시간)처리한다.
    5. 일야처리된 연골 분말은 0.1N HCl로 1-2회 세척한다.
    6. 연골분말은 0.5N HCl 에 10-100 rpm 으로 shaking 시키면서 일야 처리한다.
    7. 일야 처리 후, 펩신 처리한다. (펩신은 조직:펩신 = 10-50 : 1 의 비율로 처리하고 0.1N HCl에 녹여 사용한다.
    8. 펩신 처리는 3-7 일 동안 2-5 회 반복 처리한다.
    9. 펩신 처리된 연골분말 용액은 12000g, 30 분, 4℃에서 원심분리 시킨 후, 상등액을 분리 보관하고 침전물은 8. 단계를 반복한다.
    10. 분리 보관된 상등액에 최종 농도 0.5-0.8 M NaCl 을 적용하고 4시간-1일, 4℃ 처리한다.
    11. 원심분리(12 000 g, 30 분, 4℃) 후, 상등액은 제거하고 침전물을 수거한다.
    12. 침전물을 용해시켜 중성으로 적정하고 추가적으로 용액의 최종 농도가 2.6M NaCl 이 되도록 첨가한다.
    13. 4시간-1일 , 4℃ 처리 후, 원심분리시켜 침전물은 제거하고 상등액을 수거한다.
    14. 수거된 상등액에 추가적으로 최종 농도 3.5-4.0M NaCl이 되도록 첨가하고 4시간-1일 , 4℃ 정치시킨다.
    15. 원심분리 하여 상등액은 제거하고 침전물을 95% 알코올에 1-2 회 세척하고 증류수에 재현탁 시킨다.
    16. 재현탁된 용액에 1N HCl을 100 mL 당 1 mL 씩 가하여 완전히 재현탁 시키고, 다시 중성으로 4℃ 에서 적정한다.
    17. 중성으로 적정된 용액은 30-37℃ 에서 4시간-1일 정치시키고 원심분리 시킨다.
    18. 침전된 콜라겐은 ddH2O(멸균증류수)나 PBS(Phosphate Buffer Saline;완충용액)에 1-30 mg/mL 의 농도로 재현탁하여 4℃ 보관한다.
    로 이루어짐을 특징으로 하는 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법.
  5. 삭제
  6. 돼지의 피부 조직을 mm단위로 절편화 하여 일정한 격자 크기의 망에 조직을 넣고 산처리 한 후, 펩신을 반복 처리하여 1형 콜라겐을 분리한 다음, 분별 염처리와 알코올 처리를 통하여 콜라겐을 분리하여 최초 조직무게의 10-15% 정도를 수득하여 콜라겐을 분리하는 방법에 있어서,
    상기 돼지의 피부 조직으로부터 콜라겐을 분리하는 과정은,
    1. 돼지로부터 분리된 피부 조직을 증류수, 알코올 등을 이용하여 깨끗이 세척한 후, -20℃ 에 보관한다.
    2. 피부 조직으로부터 콜라겐을 분리하기 위하여 500 um -5 mm 의 크기로 절편화 한다.
    3. 절편화된 조직은 200 -500 um 의 망에 넣고 알코올과 증류수를 이용하여 세척한다.
    4. 세척된 펩신 처리한다. (펩신은 조직:펩신 = 10-50 : 1 의 비율로 처리하고 0.1N HCl에 녹여 사용한다.
    5. 펩신 처리는 2-3 일 동안 2-3 회 반복 처리한다.
    6. 펩신 처리된 골분말 용액은 12000g, 30 분, 4℃ 에서 원심분리 시킨 후, 상등액을 분리 보관하고 침전물은 5. 단계를 반복한다.
    7. 분리 보관된 상등액에 최종 농도 0.5-0.8 M NaCl 을 적용하고 4시간-1일, 4℃ 처리한다.
    8. 원심분리(12 000 g, 30 분, 4℃ ) 후, 상등액은 제거하고 침전물을 수거한다.
    9. 침전물을 용해시켜 중성으로 적정하고 추가적으로 용액의 최종 농도가 1.6M NaCl 이 되도록 첨가한다.
    10. 4시간-1일 , 4℃ 처리 후, 원심분리시켜 침전물은 제거하고 상등액을 수거한다.
    11. 수거된 상등액에 추가적으로 최종 농도 2.6M NaCl이 되도록 첨가하고 4hr-1일 , 4℃ 정치시킨다.
    12. 원심분리 하여 상등액은 제거하고 침전물을 95% 알코올에 1-2 회 세척하고 증류수에 재현탁 시킨다.
    13. 재현탁된 용액에 1N HCl을 100 mL 당 1 mL 씩 가하여 완전히 재현탁 시키고, 다시 중성으로 4℃ 에서 적정한다.
    14. 중성으로 적정된 용액은 30-37℃ 에서 4시간-1일 정치시키고 원심분리 시킨다.
    15. 침전된 콜라겐은 ddH2O(멸균증류수)나 PBS(Phosphate Buffer Saline;완충용액)에 1-30 mg/mL 의 농도로 재현탁하여 4℃ 보관한다.
    로 이루어짐을 특징으로 하는 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법.
  7. 삭제
  8. 돼지의 건/힘줄 조직을 mm단위로 절편화 한 후, 펩신 처리하여 1형 콜라겐을 분리한 다음, 분별 염처리와 알코올 처리를 통하여 콜라겐을 분리하여 최초 조직무게의 10-20% 정도를 수득하여 콜라겐을 분리하는 방법에 있어서,
    상기 돼지의 건/힘줄 조직으로부터 콜라겐을 분리하는 과정은,
    1. 돼지로부터 분리된 힘줄/건 조직을 증류수, 알코올 등을 이용하여 깨끗이 세척한 후, -20℃ 에 보관한다.
    2. 힘줄 / 건 조직으로부터 콜라겐을 분리하기 위하여 500 um -5 mm 의 크기로 절편화 한다.
    3. 절편화된 조직은 알코올과 증류수를 이용하여 세척한다.
    4. 세척된 펩신 처리한다. (펩신은 조직:펩신 = 10-50 : 1 의 비율로 처리하고 0.1N HCl에 녹여 사용한다.
    5. 펩신 처리는 2-3 일 동안 2-3 회 반복 처리한다.
    6. 펩신 처리된 골분말 용액은 12000g, 30 분, 4℃ 에서 원심분리 시킨 후, 상등액을 분리 보관하고 침전물은 5. 단계를 반복한다.
    7. 분리 보관된 상등액에 최종 농도 0.5-0.8 M NaCl 을 적용하고 4시간-1일, 4℃ 처리한다.
    8. 원심분리(12 000 g, 30 분, 4℃ ) 후, 상등액은 제거하고 침전물을 수거한다.
    9. 침전물을 용해시켜 중성으로 적정하고 추가적으로 용액의 최종 농도가 1.6M NaCl 이 되도록 첨가한다.
    10. 4시간-1일 , 4℃ 처리 후, 원심분리시켜 침전물은 제거하고 상등액을 수거한다.
    11. 수거된 상등액에 추가적으로 최종 농도 2.6M NaCl이 되도록 첨가하고 4시간-1일 , 4℃ 정치시킨다.
    12. 원심분리 하여 상등액은 제거하고 침전물을 95% 알코올에 1-2 회 세척하고 증류수에 재현탁 시킨다.
    13. 재현탁된 용액에 1N HCl을 100 mL 당 1 mL 씩 가하여 완전히 재현탁 시키고, 다시 중성으로 4℃ 에서 적정한다.
    14. 중성으로 적정된 용액은 30-37℃ 에서 4시간-1일 정치시키고 원심분리 시킨다.
    15. 침전된 콜라겐은 ddH2O(멸균증류수)나 PBS(Phosphate Buffer Saline;완충용액)에 1-30 mg/mL 의 농도로 재현탁하여 4℃ 보관한다.
    로 이루어짐을 특징으로 하는 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 분리방법.
  9. 콜라겐의 최종 처리시 분리된 콜라겐 용액을 저온에서 중성으로 처리 후, 30~35도에서 일야(12~24시간)처리하고, 원심 분리기를 통하여 콜라겐을 농축시키고 이렇게 농축된 콜라겐은 냉장 보관된 pH 4.0-6.0 정도의 약산성의 증류수나 인산완충용액(PBS)에 녹여 1-5 mg/mL 농도의 콜라겐 용액을 제조함을 특징으로 하는 동물의 다양한 조직으로부터의 콜라겐 용액의 제조방법.
  10. 분리된 콜라겐 용액에 적정 농도와 pH에서 필터 처리된 순수한 공기를 주입시켜 일정한 공극을 형성하게 하여 동결 건조시켜 매트릭스를 제조하되,
    상기 매트릭스는 3-5 mg/mL의 콜라겐 용액이며, pH 5.0~6.0에 필터 처리된 순수 공기를 주입시켜 일정한 공극을 형성하여 동결 건조하고, 열처리를 통하여 포장 후, EO가스(Ethylene Oxide)나 γ-ray(감마선)를 이용하여 멸균 생산한 매트릭스.
  11. 삭제
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US11/885,386 US7781158B2 (en) 2005-03-11 2006-03-09 Method of separating collagen from the various animal tissues for producing collagen solution and product using the same
ES06716299.0T ES2439445T3 (es) 2005-03-11 2006-03-09 Método de separación de colágeno de tejido animal, método de fabricación de una solución de colágeno y producto manufacturado usando dicho método
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DK06716299.0T DK1856272T3 (da) 2005-03-11 2006-03-09 Anvendelse af fremstillet produkt og fremgangsmåde til fremstilling af kollagenopløsning og fremgangsmåde til kollagenseparation af dyrevæv
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Cited By (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011142543A2 (ko) * 2010-05-14 2011-11-17 (주)다림티센 아텔로콜라겐 분리방법 및 개질된 아텔로콜라겐 제조방법 그리고 이를 이용하여 제조된 아텔로콜라겐 및 콜라겐 기반 매트릭스
KR101105603B1 (ko) * 2011-09-05 2012-01-19 (주)유바이오시스 염침전 압축 농축법을 이용한 콜라겐 용액 제조방법
KR101188167B1 (ko) 2011-11-18 2012-10-08 (주)다림티센 에스테르화 아텔로 콜라겐 제조방법
KR101188164B1 (ko) 2011-11-18 2012-10-08 (주)다림티센 숙시닐화 아텔로 콜라겐 제조방법
KR101460245B1 (ko) 2012-04-26 2014-11-10 한국과학기술원 비세포변성 간염바이러스의 정량화를 위한 발색 병소형성 검사방법 및 영상분석을 이용한 병소 개수 자동 산출방법
KR20150102865A (ko) * 2014-02-28 2015-09-08 전남대학교산학협력단 생체적합성 콜라겐 및 이의 제조방법
KR20150134193A (ko) 2014-05-21 2015-12-01 강호창 흡수성 콜라겐 멤브레인 및 그 제조방법
WO2017090808A1 (ko) * 2015-11-23 2017-06-01 세원셀론텍(주) 콜라겐의 수득율을 높이는 방법 및 이를 이용하여 제조된 콜라겐
JP2017537692A (ja) * 2014-11-21 2017-12-21 セウォン セロンテック カンパニー リミテッドＳｅｗｏｎ Ｃｅｌｌｏｎｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 医療用材料として用いるための高濃度コラーゲンの製造方法
KR101863532B1 (ko) * 2017-06-15 2018-06-01 세원셀론텍(주) 연골조직 수복용 콜라겐의 제조 및 사용방법
KR102098134B1 (ko) 2019-02-13 2020-04-08 성균관대학교산학협력단 나노 섬유질 콜라겐 3차원 구조체 제조방법

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2010053918A1 (en) 2008-11-05 2010-05-14 Hancock Jaffe Laboratories, Inc. Composite containing collagen and elastin as a dermal expander and tissue filler
GB2482166A (en) * 2010-07-22 2012-01-25 Tissue Science Lablratories Ltd Manufacture of collagenous material from use in therapy from collagen particles
JP5753356B2 (ja) * 2010-09-13 2015-07-22 株式会社龍泉堂 活性エピトープを有する非変性ｉｉ型コラーゲンの抽出方法
CN102350007B (zh) * 2011-10-18 2015-03-04 崇州市地龙海龙生物制品开发研究所 一种人体可吸收医用整容制品制备方法
WO2015181395A1 (en) * 2014-05-30 2015-12-03 Sofradim Production Method for preparing neutralized matrix of non-antigenic collagenous material
US10736990B2 (en) 2015-02-11 2020-08-11 Mimedx Group, Inc. Collagen and micronized placental tissue compositions and methods of making and using the same
US10253090B2 (en) 2016-03-22 2019-04-09 Avicenna Nutraceutical, Llc Hydrolyzed collagen compositions and methods of making thereof
CN116966345A (zh) 2016-05-26 2023-10-31 汀布特Ip有限公司 3d可打印生物凝胶及其使用方法
US20190100785A1 (en) * 2017-10-03 2019-04-04 Robert den Hoed Method of producing undenatured collagen from cartilage with low temperature hydrolysis
TWI770078B (zh) * 2017-11-10 2022-07-11 惠合再生醫學生技股份有限公司 膠原蛋白處理方法
US10934342B1 (en) * 2017-11-16 2021-03-02 OrthoGraft Pvt. Ltd. Method for manufacture of demineralized bone material
TWI687437B (zh) * 2018-06-29 2020-03-11 臺鹽實業股份有限公司 高純度未變性膠原蛋白及其製造方法
CN109369799A (zh) * 2018-10-31 2019-02-22 白晋 一种可溶性胶原蛋白冻干片的制备方法
CN109207545B (zh) * 2018-12-03 2020-08-28 杭州蓝朗生物技术有限公司 一种胶原蛋白提取方法
CN109602896A (zh) * 2019-01-11 2019-04-12 无限极（中国）有限公司 一种胶原蛋白肽和弹性蛋白肽的组合物及其制备方法和应用
CN110038158A (zh) * 2019-05-27 2019-07-23 中国人民解放军第四军医大学 光固化3d打印哈弗氏***人工骨支架的配方及其制备方法
CN111748030A (zh) * 2020-06-24 2020-10-09 华南理工大学 一种可溶性非变性ii型胶原蛋白及其制备方法
CN112410392A (zh) * 2020-11-11 2021-02-26 武汉盛世伟度生物科技有限公司 一种i型胶原蛋白的提取方法及其应用
CN112501229B (zh) * 2020-12-14 2021-07-06 广州天启生物科技有限公司 一种牛骨胶原肽的生产工艺
CN113201569B (zh) * 2021-06-21 2022-08-30 江南大学 一种牛ⅰ型胶原蛋白的纯化方法
CN114794297B (zh) * 2022-05-23 2023-06-06 甘肃农业大学 可食动物皮液态胶原蛋白及其制备的液态胶原蛋白果冻
CN115109144A (zh) * 2022-06-30 2022-09-27 成都汉丁新材料科技有限公司 一种生物活性胶原肽的制备方法和生物活性胶原肽

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20020029859A (ko) * 2000-10-14 2002-04-20 지귀환 제 1 형 아텔로교원질의 직접 분리추출 방법
KR20030072512A (ko) * 2002-03-04 2003-09-15 이재관 유기용매를 이용한 가용성 콜라겐의 제조방법
KR20040055931A (ko) * 2002-12-23 2004-06-30 (주)바이오 앤 바이오 콜라겐펩타이드의 제조방법 및 이를 이용한식품·의약품·화장품

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4294753A (en) * 1980-08-04 1981-10-13 The Regents Of The University Of California Bone morphogenetic protein process
US4434094A (en) * 1983-04-12 1984-02-28 Collagen Corporation Partially purified osteogenic factor and process for preparing same from demineralized bone
US4550080A (en) * 1984-06-05 1985-10-29 Asahi Kasei Kogyo Kabushiki Kaisha Process for the preparation of a plasminogen activator
US4975526A (en) * 1989-02-23 1990-12-04 Creative Biomolecules, Inc. Bone collagen matrix for zenogenic implants
US5814328A (en) * 1997-01-13 1998-09-29 Gunasekaran; Subramanian Preparation of collagen using papain and a reducing agent
WO2004090151A2 (en) * 2003-04-11 2004-10-21 Ecodynamic Biolab Inc. Method for extracting collagen comprising microbial fermentation

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20020029859A (ko) * 2000-10-14 2002-04-20 지귀환 제 1 형 아텔로교원질의 직접 분리추출 방법
KR20030072512A (ko) * 2002-03-04 2003-09-15 이재관 유기용매를 이용한 가용성 콜라겐의 제조방법
KR20040055931A (ko) * 2002-12-23 2004-06-30 (주)바이오 앤 바이오 콜라겐펩타이드의 제조방법 및 이를 이용한식품·의약품·화장품

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
1020020029859 *
1020030072512 *
1020040055931 *

Cited By (14)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011142543A2 (ko) * 2010-05-14 2011-11-17 (주)다림티센 아텔로콜라겐 분리방법 및 개질된 아텔로콜라겐 제조방법 그리고 이를 이용하여 제조된 아텔로콜라겐 및 콜라겐 기반 매트릭스
WO2011142543A3 (ko) * 2010-05-14 2012-05-31 (주)다림티센 아텔로콜라겐 분리방법 및 개질된 아텔로콜라겐 제조방법 그리고 이를 이용하여 제조된 아텔로콜라겐 및 콜라겐 기반 매트릭스
KR101158338B1 (ko) * 2010-05-14 2012-06-22 (주)다림티센 아텔로콜라겐 분리방법
KR101105603B1 (ko) * 2011-09-05 2012-01-19 (주)유바이오시스 염침전 압축 농축법을 이용한 콜라겐 용액 제조방법
KR101188167B1 (ko) 2011-11-18 2012-10-08 (주)다림티센 에스테르화 아텔로 콜라겐 제조방법
KR101188164B1 (ko) 2011-11-18 2012-10-08 (주)다림티센 숙시닐화 아텔로 콜라겐 제조방법
KR101460245B1 (ko) 2012-04-26 2014-11-10 한국과학기술원 비세포변성 간염바이러스의 정량화를 위한 발색 병소형성 검사방법 및 영상분석을 이용한 병소 개수 자동 산출방법
KR20150102865A (ko) * 2014-02-28 2015-09-08 전남대학교산학협력단 생체적합성 콜라겐 및 이의 제조방법
KR101697324B1 (ko) 2014-02-28 2017-01-19 전남대학교산학협력단 생체적합성 콜라겐 및 이의 제조방법
KR20150134193A (ko) 2014-05-21 2015-12-01 강호창 흡수성 콜라겐 멤브레인 및 그 제조방법
JP2017537692A (ja) * 2014-11-21 2017-12-21 セウォン セロンテック カンパニー リミテッドＳｅｗｏｎ Ｃｅｌｌｏｎｔｅｃｈ Ｃｏ．，Ｌｔｄ． 医療用材料として用いるための高濃度コラーゲンの製造方法
WO2017090808A1 (ko) * 2015-11-23 2017-06-01 세원셀론텍(주) 콜라겐의 수득율을 높이는 방법 및 이를 이용하여 제조된 콜라겐
KR101863532B1 (ko) * 2017-06-15 2018-06-01 세원셀론텍(주) 연골조직 수복용 콜라겐의 제조 및 사용방법
KR102098134B1 (ko) 2019-02-13 2020-04-08 성균관대학교산학협력단 나노 섬유질 콜라겐 3차원 구조체 제조방법

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