KR100580137B1 - 전립선 암 치료에 유용한 접합체 및 이를 포함하는 약제학적 조성물 - Google Patents

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Abstract

본원에는 유리 전립선 특이적 항원(PSA)에 의해 선택적이고도 단백질 분해적으로 절단되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩타이드와, 공지된 세포독성제를 포함하는 화학적 접합체가 기재되어 있다. 본 발명의 접합체는 절단 가능한 올리고펩타이드가 데스아세틸화된 빈카 약물 상의 4-위치의 산소 원자에 부착되어 있는 것을 특징으로 한다. 이러한 접합체는 전립선 암과 양성 전립선 비대증(BPH)을 치료하는데 유용하다.
전립선 특이적 항원(PSA), 단백질 분해, 빈카(vinca) 알칼로이드 세포독성제, 전립선암, 올리고펩타이드, 접합체, 트랜스-4-하이드록시-L-프롤린, 광학 이성체, 전립선 과형성증

Description

전립선 암 치료에 유용한 접합체 및 이를 포함하는 약제학적 조성물{Conjugates useful in the treatment of prostate cancer and a pharmaceutical composition comprising the same}
1996년에, 미국에서만 317,000명 남성에게서 전립선 암이 진단되었으며 이중 42,000명의 미국 남성들이 전립선 암으로 인해 사망한 것으로 추정되었다[참조: Garnick, M.B. (1994). The Dilemmas of Prostate Cancer. Scientific American, April: 72-81]. 따라서, 전립선 암은 (피부 악성 종양을 제외하고는) 미국에서 가장 흔히 진단되는 악성 종양이며, (폐암 다음으로) 두 번째로 높은 암-관련 사망율의 원인이 되고 있다.
전립선 특이적 항원(PSA)은 사람 전립선 상피에 의해서만 대부분 생성되는 단일쇄 33kDa 당단백질이며 사람 정액에서 0.5 내지 2.0mg/ml의 수준으로 생성된다[참조: Nadji, M., Taber, S.Z., Castro, A., et al. (1981) Cancer 48:1229; Papsidero, L., Kuriyama, M., Wang, M., et al. (1981). JNCI 66:37; Qui, S.D., Young, C.Y.F., Bihartz, D.L., et al. (1990), J. Urol. 144:1550; Wang, M.C., Valenzuela, L.A., Murphy, G.P., et al. (1979). Invest. Urol. 17:159]. 단일 탄수화물 단위는 아스파라긴 잔기 45번에 부착되어 있고 총 분자량의 2 내지 3kDa를 차지하는 것으로 간주된다. PSA는 키모트립신-유사 특이성을 지니고 있는 프로테아제이다[참조: Christensson, A., Laurell, C.B., Lilja, H. (1990). Eur. J. Biochem. 194:755-763]. PSA는 주로, 정자 포획성 겔에서 주요 단백질인, 세메노겔린(Semenogelin) I 및 세메노겔린 II, 및 피브로넥틴의 단백질 분해 작용에 의해 사정시 형성된 겔 구조물의 분해와 관련이 있는 것으로 밝혀졌다[참조: Lilja, H. (1985). J. Clin Invest. 76:1899; Lilja, H., Oldbring, J., Rannevik, G., et al. (1987). J. Clin. Invest. 80:281; McGee, R.S., Herr, J.C. (1988). Biol. Reprod. 39:499]. 이러한 겔-형성 단백질의 PSA-매개된 단백질 분해 작용으로 인해, 몇몇 가용성 세메노겔린 I 및 세메노겔린 II 단편과 가용성 피브로넥틴 단편이 생성되며, 이때 점차적으로 운동성인 정충의 사정물과 방출물이 액화된다[참조: Lilja, H., Laurell, C.B. (1984). Scand. J. Clin. Lab. Invest. 44:447; McGee, R.S., Herr, J.C. (1987). Biol. Reprod. 37:431]. 더우기, PSA는 IGFBP-3(인슐린-유사 성장 인자 결합 단백질 3)을 단백질 분해적으로 분해시켜 IGF가 PSA 분비성 세포의 성장을 특이적으로 자극하도록 할 수 있다[참조: Cohen et al., (1992) J. Clin. Endo. & Meta. 75:1046-1053].
알파 1-안티키모트립신과 복합체를 형성한 PSA는 혈청 PSA의 주된 분자형태이며 검출된 혈청 PSA의 95% 이하를 차지할 수 있다[참조: Christensson, A., Bjork, T., Nilsson, O., et al. (1993). J.Urol. 150:100-105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991). Clin. Chem. 37:1618-1625; Stenman, U.H., Leinoven, J., Alfthan, H., et al. (1991). Cancer Res. 51:222-226]. 전립선 조직(정상, 양성 과형성증 또는 악성 조직)은 효소적으로 활성인 성숙한 형태의 PSA를 우선적으로 방출시키는 것과 연관이 있는데, 이는 이러한 형태가 알파 1-안티키모트립신과의 복합체 형성에 요구되기 때문이다[참조: Mast, A.E., Enghild, J.J., Pizzo, S.V., et al. (1991). Biochemistry 30:1723-1730; Perlmutter, D.H., Glover, G.I., Rivetna, M., et al. (1990). Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:3753-3757]. 따라서, 전립선 PSA 분비성 세포의 미소환경하에서는, PSA가 어떠한 억제 분자와도 복합체를 형성하지 않은 효소적으로 활성인 성숙한 형태로 프로세싱되고 분비되는 것으로 여겨진다. PSA는 또한, 알파 2-마크로글로불린과 안정한 복합체를 형성하지만, 이로써 PSA가 캡슐화되고 PSA 에피토프가 완전히 손실되기 때문에, 이러한 복합체 형성의 생체내 중요도는 명확하지 않다. 복합체를 형성하지 않은 유리 형태의 PSA는 혈청 PSA의 소량의 분획을 차지한다[참조: Christensson, A., Bjork, T., Nilsson, O., et al. (1993). J.Urol. 150:100-105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991). Clin. Chem. 37:1618-1625]. 이러한 형태의 혈청 PSA의 크기는 정액 중에서의 PSA의 크기와 유사하지만[참조: Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991). Clin. Chem. 37:1618-1625], 유리 형태의 혈청 PSA가 지모겐(zymogen)인지, 내부적으로 절단된 불활성 형태의 성숙한 PSA이거나 효소 활성을 나타내는 PSA일 수 있는지에 관해서는 아직까지 공지된 바 없다. 그러나, 이러한 유리 형태의 혈청 PSA가 효소 활성을 나타낼 것 같지는 않은데, 이는 혈청 중의 반응되지 않은 알파 1-안티키모트립신과 알파 2-마크로글로불린 모두가, 유리 33kDa 형태의 검출된 PSA 혈청 수준과 비교해서 상당히(100 내지 1000배) 몰 과량으로 존재하기 때문이다[참조: Christensson, A., Bjork, T., Nilsson, O., et al. (1993). J.Urol. 150:100-105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991). Clin. Chem. 37:1618-1625].
PSA의 혈청 측정치가 전립선의 선암종 치료를 모니터하는데 유용하긴 하지만[참조: Duffy, M.S. (1989). Ann. Clin. Biochem. 26:379-387; Brawer, M.K. and Lange, P.H. (1989). Urol. Suppl. 5:11-16; Hara, M. and Kimura, H. (1989). J. Lab. Clin. Med. 113:541-548], 정상치 이상의 혈청 농도의 PSA가 양성 전립선 과형성증과 후속 전립선 외상에서 보고되었다[참조: Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991). Clin. Chem. 37:1618-1625]. 전립선 전이는 또한, 면역학적으로 반응성인 PSA를 분비하는 것으로 공지되어 있는데, 이는 혈청 PSA가 광범위하게 전이된 전립선 암을 나타내는 전립선 절제 수술을 받은 환자에게서 높은 수준으로 검출될 수 있기 때문이다[참조: Ford, T.F., Butcher, D.N., Masters, R.W., et al. (1985). Brit. J. Urology 57:50-55]. 따라서, PSA의 단백질 분해 활성에 의해 활성화될 수 있는 세포독성 화합물은 전립선 세포 특이적이어야 할 뿐만 아니라 PSA 분비성 전립선 전이에 대해서도 특이적이어야 한다.
본 발명의 목적은 유리 전립선 특이적 항원(PSA)에 의해 선택적이고도 단백질 분해적으로 절단되는 올리고펩타이드를 빈카(vinca) 알칼로이드 세포독성제와 함께 포함하는, 전립선 암 치료에 유용한 신규한 항암 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명의 또 다른 목적은 당해 신규한 항암 조성물을 투여하는 것을 포함하여, 전립선 암을 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
발명의 요약
유리 전립선 특이적 항원(PSA)에 의해 선택적이고도 단백질 분해적으로 절단되는 아미노산 서열을 갖는 올리고펩타이드와 빈카 알칼로이드 세포독성제를 포함하는 화학적 접합체가 기재되어 있다. 본 발명의 접합체는 절단 가능한 올리고펩타이드가 데스아세틸화된(desacetylated) 빈카 약물 상의 4-위치의 산소 원자에 부착되어 있는 것을 특징으로 한다. 이러한 접합체는 전립선 암과 양성 전립선 과형성증(BPH)을 치료하는데 유용하다.
본 발명은 전립선 암 치료에 유용한 신규한 항암 조성물에 관한 것이다. 이러한 조성물은 임의로 화학적 링커를 통하여 빈카 알칼로이드 세포독성제에 공유적으로 결합된 올리고펩타이드를 포함한다. 이러한 올리고펩타이드가 빈카 알칼로이드 세포독성제에 부착되는 지점은 빈카 알칼로이드 세포독성제의 4-위치 상의 산소 원자이다. 4-위치의 산소 원자 상에 아세틸 잔기를 갖는 이들 빈카 알칼로이드 세포독성제는 본 발명에 따르는 접합체를 형성하기에 앞서 먼저 데스아세틸화시켜야 한다는 것을 인지해야 한다. 상기 올리고펩타이드는 유리 전립선 특이적 항원(PSA)에 의해 선택적으로 인식되고 이러한 유리 전립선 특이적 항원의 효소적 활성에 의해 단백질 분해적으로 절단될 수 있는 올리고머 중에서 선택된다. 이러한 올리고펩타이드와 세포독성제와의 결합물을 접합체라 명명할 수 있다.
이상적으로, 빈카 약물의 세포독성 활성은, PSA 단백질 분해 절단 부위를 함 유하는 올리고펩타이드가 직접적으로 또는 화학적 링커를 통하여 빈카 약물에 부착되어 완전한 형태인 경우에는 크게 감소되거나 존재하지 않는다. 또한 이상적으로, 빈카 약물의 세포독성 활성은, 올리고펩타이드가 유리 PSA에 의해 절단되는 펩타이드 결합 부위에서 부착된 올리고펩타이드가 단백질 분해적으로 절단되고 연속적으로 내인성 아미노 펩티다제에 의해 가수분해가 이루어지는 경우에는 상당히 증가되거나 변형되지 않은 빈카 약물의 활성 수준으로 돌아온다.
더우기, 상기 올리고펩타이드는, 효소적으로 활성인 유리 PSA의 존재하에서의 올리고펩타이드의 절단과 비교해서, 유리 PSA에 의한 절단에 앞서 사람 혈청에 내인성인 효소와 같이 비-PSA 단백질 분해 효소의 존재하에서 훨씬 더 느린 속도로 절단되거나 절단되지 않는 올리고펩타이드 중에서 선택되는 것이 바람직하다. 빈카 약물이나 임의의 링커에 대한 올리고펩타이드의 부착 지점에서의 아미노산이 프롤린, 3-하이드록시프롤린, 3-플루오로프롤린, 피페콜산, 3-하이드록시피페콜산, 2-아제티딘, 3-하이드록시-2-아제티딘, 사르코신 등을 포함하는 그룹 중에서 선택된 2차 아미노산인 것이 바람직한 것으로 밝혀졌다. 더욱 바람직하게는, 빈카 약물이나 임의의 링커에 대한 올리고펩타이드의 부착 지점에서의 아미노산은 프롤린, 3-하이드록시프롤린, 3-플루오로프롤린, 피페콜산, 3-하이드록시피페콜산, 2-아제티딘, 3-하이드록시-2-아제티딘 등을 포함하는 그룹 중에서 선택된 사이클릭 아미노산이다.
이러한 이유로 인해, 당해 올리고펩타이드가 짧은 펩타이드 서열, 바람직하게는 10개 미만의 아미노산을 포함하는 것이 바람직하다. 가장 바람직하게는, 당해 올리고펩타이드는 7개 또는 6개 아미노산을 포함한다. 당해 접합체는 바람직하게는 짧은 아미노산 서열을 포함하기 때문에, 당해 접합체의 용해도는 세포독성제 성분의 일반적인 소수성 특징에 의해 상당한 정도로 영향을 받을 수 있다. 따라서, 친수성 치환체를 갖는 아미노산을 올리고펩타이드 서열에 혼입시키거나 N-말단 차단 그룹을 선택하여 이러한 세포독성제에 의한 소수성 기여를 상쇄시키거나 감소시킬 수 있다.
이러한 본 발명의 양태를 실시하는 것이 필요한 것은 아니지만, 본 발명의 바람직한 양태는 올리고펩타이드 및 (존재하는 경우) 임의의 화학적 링커가 유리 PSA 및 근접 조직 내에 존재하는 기타 천연의 단백질 분해 효소의 단백질 분해 활성에 의해 세포독성제로부터 분리됨으로써, 상기 세포독성제 또는 올리고펩타이드/링커 단위의 일부는 보유하지만 세포독성인 채로 존재하는 세포독성제를 단백질 분해적 절단 위치에서 생리학적 환경 내로 제시하는 접합체에 관한 것이다. 이러한 접합체의 약제학적으로 허용되는 염이 또한 본원에 포함된다.
직접적인 공유 결합을 통해서든지 아니면 화학적 링커를 통해서든지 세포독성제에 접합되는 올리고펩타이드가, 유리 PSA에 의해 최대한 인식되어 유리 PSA에 의해 가장 용이하게 단백질 분해적으로 절단되는 올리고펩타이드일 필요는 없음을 인지해야 한다. 따라서, 이러한 항암 조성물에 혼입되기 위해 선택되는 올리고펩타이드는 유리 PSA에 의한 이의 선택적이고도 단백질 분해적인 절단과 이러한 절단으로부터 야기되는 세포독성제-단백질 분해적 잔기 접합체(또는 이상적 상황하에서는, 변형되지 않은 세포독성제)의 세포독성 활성 모두를 고려하여 선택될 것이다. 단백질 분해적 PSA 절단과 관련하여 사용된 바와 같은 "선택적"이란 용어는 무작위적 아미노산 서열을 포함하는 올리고펩타이드의 절단에 비해 유리 PSA에 의한 본 발명의 올리고펩타이드 성분의 절단 속도가 더 크다는 것을 의미한다. 따라서, 본 발명의 올리고펩타이드 성분은 유리 PSA의 바람직한 기질이다. "선택적"이란 용어는 또한, 상기 올리고펩타이드가 이러한 올리고펩타이드 중의 2개의 특이적 아미노산 사이가 유리 PSA에 의해 단백질 분해적으로 절단된다는 것을 지시해준다.
본 발명의 올리고펩타이드 성분은 유리 전립선 특이적 항원(PSA)에 의해 선택적으로 인식되고 이러한 유리 전립선 특이적 항원의 효소적 활성에 의해 단백질 분해적으로 절단될 수 있다. 이러한 올리고펩타이드는 다음 서열 중에서 선택된 올리고머를 포함한다:
a) AsnLysIleSerTyrGln｜Ser (서열 1),
b) LysIleSerTyrGln｜Ser (서열 2),
c) AsnLysIleSerTyrTyr｜Ser (서열 3),
d) AsnLysAlaSerTyrGln｜Ser (서열 4),
e) SerTyrGln｜SerSer (서열 5),
f) LysTyrGln｜SerSer (서열 6),
g) hArgTyrGln｜SerSer (서열 7),
h) hArgChaGln｜SerSer (서열 8),
i) TyrGln｜SerSer (서열 9),
j) TyrGln｜SerLeu (서열 10),
k) TyrGln｜SerNle (서열 11),
l) ChgGln｜SerLeu (서열 12),
m) ChgGln｜SerNle (서열 13),
n) SerTyrGln｜Ser (서열 14),
o) SerChgGln｜Ser (서열 15),
p) SerTyrGln｜SerVal (서열 16),
q) SerChgGln｜SerVal (서열 17),
r) SerTyrGln｜SerLeu (서열 18),
s) SerChgGln｜SerLeu (서열 19),
t) HaaXaaSerTyrGln｜Ser (서열 20),
u) HaaXaaLysTyrGln｜Ser (서열 21),
v) HaaXaahArgTyrGln｜Ser (서열 22),
w) HaaXaahArgChaGln｜Ser (서열 23),
x) HaaTyrGln｜Ser (서열 24),
y) HaaXaaSerChgGln｜Ser (서열 25) 및
z) HaaChgGln｜Ser (서열 26);
상기 서열에서, Haa는 친수성 잔기로 치환된 사이클릭 아미노산이고, hArg는 호모아르기닌이며, Xaa는 어떠한 아미노산도 될 수 있고, Cha는 사이클로헥실알라닌이며, Chg는 사이클로헥실글리신이다.
본 발명의 한 양태에 있어서, 당해 올리고펩타이드는 다음 서열 중에서 선택된 올리고머를 포함한다:
a) SerSerTyrGln｜SerAla (서열 27),
b) SerSerChgGln｜SerSer (서열 28),
c) SerSerTyrGln｜SerAla (서열 29),
d) SerSerChgGln｜SerSer (서열 30),
e) 4-HypSerSerTyrGln｜Ser (서열 31),
f) 4-HypSerSerChgGln｜Ser (서열 32),
h) AlaSerTyrGln｜SerSer (서열 33),
i) AlaSerChgGln｜SerSer (서열 34),
j) AlaSerTyrGln｜SerSer (서열 35),
k) AlaSerChgGln｜SerAla (서열 36),
l) 4-HypAlaSerTyrGln｜Ser (서열 37),
m) 4-HypAlaSerChgGln｜Ser (서열 38);
상기 서열에서, 4-Hyp는 4-하이드록시프롤린이고, Xaa는 어떠한 아미노산도 될 수 있으며, hArg는 호모아르기닌이며, Cha는 사이클로헥실알라닌이며, Chg는 사이클로헥실글리신이다.
본 발명의 보다 바람직한 양태에 있어서, 당해 올리고펩타이드는 다음 서열 중에서 선택된 올리고머를 포함한다:
SerSerChgGln｜SerAlaPro (서열 39),
SerSerChgGln｜SerSerPro (서열 40),
SerSerChgGln｜SerAla4-Hyp (서열 41),
SerSerChgGln｜SerSer4-Hyp (서열 42),
AbuSerSerChgGln｜SerPro (서열 43),
AbuSerSerChgGln｜Ser4-Hyp (서열 44),
SerSerSerChgGln｜SerLeuPro (서열 45),
SerSerSerChgGln｜SerValPro (서열 46),
SerAlaSerChgGln｜SerLeu4-Hyp (서열 47),
SerAlaSerChgGln｜SerValPro (서열 48),
(N-메틸-Ser)SerSerChgGln｜SerLeuPip (서열 49),
(N-메틸-Ser)SerSerChgGln｜SerValPip (서열 50),
4-HypSerSerTyrGln｜SerSerPro (서열 51),
4-HypSerSerTyrGln｜SerSer4-Hyp (서열 52),
4-HypSerSerTyrGln｜SerSerPro (서열 53),
4-HypSerSerTyrGln｜SerSerSar (서열 54),
4-HypSerSerTyrGln｜Ser4-Hyp (서열 55),
4-HypSerSerChgGln｜SerPro (서열 56),
4-HypSerSerChgGln｜SerSerPro (서열 57),
4-HypSerSerChgGln｜SerLeu (서열 58),
4-HypSerSerChgGln｜SerVal (서열 59),
4-HypAlaSerChgGln｜SerValPro (서열 60),
4-HypAlaSerChgGln｜SerSerPip (서열 61),
4-HypSerSerChgGln｜Ser (서열 62),
4-HypSerSerChgGln｜SerGly (서열 63),
SerSerChgGln｜SerGly (서열 64),
3-PalSerSerTyrGln｜Ser4-Hyp (서열 65),
3-PalSerSerChgGln｜SerPro (서열 66),
(3,4-디Hyp)SerSerTyrGln｜SerSerPro (서열 67), 및
(3,4-디Hyp)SerSerTyrGln｜SerSer4-Hyp (서열 68);
상기 서열에서, Abu는 아미노부티르산이고, 4-Hyp는 4-하이드록시프롤린이며, Pip는 피페콜산이고, 3,4-디Hyp는 3,4-디하이드록시프롤린이며, 3-Pal은 3-피리딜알라닌이고, Sar은 사르코신이며, Chg는 사이클로헥실글리신이다.
상기 및 발명의 상세한 설명에서 사용되는 바와 같은 "아미노산 서열을 포함하는 올리고머"란 구절은 기재된 특정 아미노산 서열을 이들의 아미노산 서열 내에포함하므로 기재된 아미노산 서열 내에서 유리 PSA에 의해 단백질 분해적으로 절단되는 약 3개 내지 약 100개 아미노산 잔기의 올리고머를 지칭한다. 바람직하게는, 이러한 올리고머는 5 내지 10개 아미노산 잔기이다. 따라서, 예를 들면, 올리고머 hArgSerAlaChgGln｜SerLeu(서열 69)는 아미노산 서열 ChgGln｜SerLeu(서열 12)를 포함하므로 본 발명 내에 속한다. 또한, 올리고머 hArgSer4-HypChgGln｜SerLeu(서열 70)는 아미노산 서열 4-HypChgGln｜SerLeu(서열 71)를 포함하므로 본 발명 내에 속한다. 이러한 올리고머는 세메노겔린 I과 세메노겔린 II를 포함하지 않는다는 것을 인지해야 한다.
펩타이드 화학 분야의 숙련인은 생물학적으로 활성인 올리고펩타이드 중의 특정한 아미노산이 기타 동종의, 등입체성 및/또는 등전자성 아미노산으로 대체될 수 있다는 것을 용이하게 인지할 것이며, 여기서 본래의 올리고펩타이드의 생물학적 활성은 변형된 올리고펩타이드에서 보존된다. 특정의 비천연 아미노산 및 변형된 천연 아미노산을 이용하여 본 발명의 올리고펩타이드 중의 상응하는 천연 아미노산을 대체할 수 있다. 따라서, 예를 들면, 티로신을 3-요오도티로신, 2-메틸티로신, 3-플루오로티로신, 3-메틸티로신 등으로 대체할 수 있다. 추가로, 예를 들면, 리신을 N'-(2-이미다졸릴)리신 등으로 대체할 수 있다. 아미노산 대체물의 다음 목록은 예시적이며 이로써 제한되지는 않는다:
천연 아미노산 대체 아미노산(들)
Ala Gly, Abu
Arg Lys, 오르니틴
Asn Gln
Asp Glu
Glu Asp
Gln Asn
Gly Ala
Ile Val, Leu, Met, Nle, Nva
Leu Ile, Val, Met, Nle, Nva
Lys Arg, 오르니틴
Met Leu, Ile, Nle, Val
오르니틴 Lys, Arg
Phe Tyr, Trp
Ser Thr, Abu, Hyp, Ala
Thr Ser, Abu, Hyp
Trp Phe, Tyr
Tyr Phe, Trp
Val Leu, Ile, Met, Nle, Nva
따라서, 예를 들면, 다음의 올리고펩타이드는 당해 분야의 숙련인에게 널리 공지된 기술에 의해 합성할 수 있으며 유리 PSA에 의해 단백질 분해적으로 절단되는 것으로 예상된다:
AsnArgIleSerTyrGln｜Ser (서열 72),
AsnLysValSerTyrGln｜Ser (서열 73),
AsnLysMetSerTyrGln｜SerSer (서열 74),
AsnLysLeuSerTyrGln｜SerSer (서열 75),
AsnLysIleSerTyrGln｜Ser (서열 76),
GlnLysIleSerTyrGln｜SerSer (서열 77),
Asn4-HypIleSerTyrGln｜Ser (서열 78),
Asn4-HypValSerTyrGln｜Ser (서열 79),
4-HypAlaSerTyrGln｜SerSer (서열 80),
(3,4-디하이드록시프롤린)AlaSerTyrGln｜SerSer (서열 81),
3-하이드록시프롤린SerChgGln｜Ser (서열 82),
4-HypAlaSerChgGln｜SerSer (서열 83).
아미노산 서열 내에 부호 "｜"의 혼입은 이러한 서열 내에서 올리고펩타이드가 유리 PSA에 의해 단백질 분해적으로 절단되는 지점을 지시한다.
본 발명의 화합물은 비대칭 중심을 가질 수 있으며 라세미체, 라세미 혼합물 및 개개의 부분입체이성체로서 생성되며, 광학 이성체를 포함한 가능한 모든 이성체가 본 발명에 포함된다. 달리 언급하지 않는다면, 명명된 아미노산은 천연의 "L" 입체 배위를 지니는 것으로 이해해야 한다.
본 발명에서는, 기재된 아미노산이 다음에 지시되는 바와 같이 통상적인 3문자 약어와 1문자 약어 모두로써 확인된다:
알라닌 Ala A
아르기닌 Arg R
아스파라긴 Asn N
아스파르트산 Asp D
아스파라긴 또는 아스파르트산 Asx B
시스테인 Cys C
글루타민 Gln Q
글루탐산 Glu E
글루타민 또는 글루탐산 Glx Z
글리신 Gly G
히스티딘 His H
이소루이신 Ile I
루이신 Leu L
리신 Lys K
메티오닌 Met M
페닐알라닌 Phe F
프롤린 Pro P
세린 Ser S
트레오닌 Thr T
트립토판 Trp W
티로신 Tyr Y
발린 Val V
다음 약어는 지시된 아미노산 잔기를 의미하기 위해 본 명세서 및 도면에서 사용된다:
hR 또는 hArg 호모아르기닌
hY 또는 hTyr 호모티로신
Cha 사이클로헥실알라닌
Amf 4-아미노메틸페닐알라닌
DAP 1,3-디아미노프로필
DPL 2-(4,6-디메틸피리미디닐)리신
(이미다졸릴)K N'-(2-이미다졸릴)리신
Me2PO3-Y O-디메틸포스포티로신
O-Me-Y O-메틸티로신
TIC 1,2,3,4-테트라하이드로-3-이소퀴놀린 카복 실산
DAP 1,3-디아미노프로판
TFA 트리플루오로아세트산
AA 아세트산
3PAL 3-피리딜알라닌
4-Hyp 4-하이드록시프롤린
dAc-Vin 4-데스-아세틸빈블라스틴
Pip 피페콜산
Abu 2-아미노부티르산
Nva 노르발린
본 발명의 올리고펩타이드-세포독성제 접합체와 같은 펩티딜 치료제가 바람직하게는 아세틸, 벤조일 및 피발로일 등의 적합한 보호 그룹으로 보호된 모든 올리고펩타이드 치환체의 말단 아미노 잔기를 갖는다는 사실이 당해 분야에 널리 공지되어 있고 본 발명에서도 이로써 인지된다. 이러한 말단 아미노 그룹의 보호로 인해, 온혈동물의 혈장에 존재하는 외인성 아미노 펩티다제의 작용에 의한 상기 펩티딜 치료제의 효소적 분해가 감소되거나 제거된다. 이러한 보호 그룹에는 친수성 차단 그룹이 포함되기도 하는데, 이는 친수성 작용기의 존재를 기준으로 하여 선택된다. 당해 접합체의 친수성을 증가시키므로 이의 수성 용해도를 증가시키는 차단 그룹에는 하이드록시화 알카노일, 폴리하이드록시화 알카노일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리코실레이트, 당 및 크라운 에테르가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다. 천연이 아닌 N-말단 아미노산 잔기는 또한 외인성 아미노 펩티다제에 의한 효소적 분해를 증진시킬 수 있다.
바람직하게는, N-말단 보호 그룹은
a) 아세틸;
b)
c)
Figure 112000011142935-pct00002
d)
Figure 112000011142935-pct00003
중에서 선택된다:
상기식에서,
R1 및 R2는 a) 수소, b) 치환되지 않거나 치환된 아릴, 치환되지 않거나 치환된 헤테로사이클, C3-C10 사이클로알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, 할로겐, C1-C6 퍼플루오로알킬, R3O-, R3C(O)NR3-, (R3)2NC(O)-, R3 2N-C(NR3)-, R4S(O)2NH, CN, NO2, R3C(O)-, N3, -N(R3)2 또는 R4OC(O)NR3-, c) 치환되지 않은 C1-C6 알킬, 및 d) 치환된 C1-C6 알킬[여기서, 치환된 C1-C6 알킬 상의 치환체는 치환되지 않거나 치환된 아릴, 치환되지 않거나 치환된 헤테로사이클릭, C3-C10 사이클로알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, R3O-, R4S(O)2NH, R3C(O)NR3-, (R3)2NC(O)-, R3 2N-C(NR3)-, CN, R3C(O)-, N 3, -N(R3)2 및 R4OC(O)NR3- 중에서 선택된다] 중에서 독립적으로 선택되거나; 또는
R1 및 R2는 함께 결합하여 -(CH2)s-[여기서, 탄소 원자 중의 하나는 O, S(O)m, -NC(O)-, NH 및 -N(COR4)- 중에서 선택된 잔기에 의해 임의로 대체되고;
R3은 수소, 아릴, 치환된 아릴, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, C1-C6 알킬 및 C3-C10 사이클로알킬 중에서 선택되며;
R4는 아릴, 치환된 아릴, 헤테로사이클, 치환된 헤테로사이클, C1-C6 알킬 및 C3-C10 사이클로알킬 중에서 선택되고;
m은 0, 1 또는 2이며;
n은 1, 2, 3 또는 4이고;
p는 0 또는 1 내지 100의 정수이며;
q는 0 또는 1인데, 단 p가 0이면, q는 1이고;
r은 1, 2 또는 3이며;
s는 3, 4 또는 5이다.
본 발명에 따르는 접합체의 특정한 올리고펩타이드는 앞서 용어 "Haa"로 나타낸, 다음 식으로 나타낼 수 있는 친수성 잔기로 치환된 사이클릭 아미노산을 포함한다:
Figure 112000011142935-pct00004
상기식에서,
R5는 HO- 및 C1-C6 알콕시 중에서 선택되고;
R6은 수소, 할로겐, C1-C6 알킬, HO- 및 C1-C6 알콕시 중에서 선택되며;
t는 3 또는 4이다.
구조식
Figure 112003043454232-pct00005
은 환 내에 5 또는 6원을 갖는 사이클릭 아민 잔기를 나타내는데, 이러한 사이클릭 아민은 페닐 또는 사이클로헥실 환에 임의로 융합될 수 있다. 이러한 사이클릭 아민 잔기의 예로는 다음의 특정 구조식이 있지만 이에 제한되지는 않는다:
Figure 112000011142935-pct00006
본 발명의 접합체는 비대칭 중심을 가질 수 있으며 라세미체, 라세미 혼합물 및 개개의 부분입체이성체로서 생성되며, 광학 이성체를 포함한 가능한 모든 이성체가 본 발명에 포함된다. 모든 변수(예를 들면, 아릴, 헤테로사이클, R3 등)가 모든 성분에서 1회 이상 생성되는 경우에는, 각 경우에 있어서의 이의 정의는 매번 독립적이다. 예를 들면, HO(CR1R2)2-는 HOCH2CH2-, HOCH2CH(OH)-, HOCH(CH3)CH(OH)- 등을 나타낸다. 또한, 치환체 및/또는 변수의 조합은 이러한 조합이 안정한 화합물을 생성시키는 경우에만 허용된다.
본원에서 사용된 바와 같은 "알킬" 및 아르알킬 및 유사한 용어에서의 알킬 부분은 특정 수의 탄소 원자를 갖는 측쇄 및 직쇄의 포화 지방족 탄화수소 그룹을 나타내며; "알콕시"는 산소 브릿지를 통하여 부착된 지시된 수의 탄소 원자의 알킬 그룹을 나타낸다.
본원에서 사용된 바와 같은 "사이클로알킬"은 특정 수의 탄소 원자를 갖는 비-방향족 사이클릭 탄화수소 그룹을 나타낸다. 사이클로알킬 그룹의 예로는 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸 및 사이클로헥실 등이 포함된다.
"알케닐" 그룹에는 특정 수의 탄소 원자와 1개 또는 수 개의 이중 결합을 갖는 그룹이 포함된다. 알케닐 그룹의 예로는 비닐, 알릴, 이소프로페닐, 펜테닐, 헥세닐, 헵테닐, 사이클로프로페닐, 사이클로부테닐, 사이클로펜테닐, 사이클로헥세닐, 1-프로페닐, 2-부테닐, 2-메틸-2-부테닐, 이소프레닐, 파르네실, 제라닐 및 제라닐제라닐 등이 있다.
"알키닐" 그룹에는 특정 수의 탄소 원자와 1개의 삼중 결합을 갖는 그룹이 포함된다. 알키닐 그룹의 예로는 아세틸렌, 2-부티닐, 2-펜티닐, 3-펜티닐 등이 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 "할로겐" 또는 "할로"는 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 의미한다.
본원에서 사용된 바와 같은 "아릴" 및 아르알킬 및 아로일의 아릴 부분은 각 환에 7개 이하의 원을 갖는 안정한 모든 모노사이클릭 또는 비사이클릭 탄소 환(여 기서, 1개 이상의 환이 방향족이다)을 의미한다. 이러한 아릴 원소의 예로는 페닐, 나프틸, 테트라하이드로나프틸, 인다닐, 비페닐, 페난트릴, 안트릴 또는 아세나프틸이 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 헤테로사이클 또는 헤테로사이클릭은 포화되거나 불포화되고 탄소 원자와 N, O 및 S로 이루어진 그룹 중에서 선택된 1개 내지 4개의 헤테로 원자로 이루어지며 상기 정의된 임의의 헤테로사이클릭이 벤젠 환에 융합되는 비사이클릭 그룹을 포함하는, 안정한 5 내지 7원 모노사이클릭 또는 안정한 8 내지 11원 비사이클릭 헤테로사이클릭 환을 나타낸다. 이러한 헤테로사이클릭 환은 임의의 헤테로 원자 또는 탄소 원자에 부착되어 안정한 구조를 생성시킨다. 이러한 헤테로사이클릭 원소의 예로는 아제피닐, 벤즈이미다졸릴, 벤즈이속사졸릴, 벤조푸라자닐, 벤조피라닐, 벤조티오피라닐, 벤조푸릴, 벤조티아졸릴, 벤조티에닐, 벤족사졸릴, 크로마닐, 신놀리닐, 디하이드로벤조푸릴, 디하이드로벤조티에닐, 디하이드로벤조티오피라닐, 디하이드로벤조티오피라닐 설폰, 푸릴, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 이미다졸릴, 인돌리닐, 인돌릴, 이소크로마닐, 이소인돌리닐, 이소퀴놀리닐, 이소티아졸리디닐, 이소티아졸릴, 이소티아졸리디닐, 모르폴리닐, 나프티리디닐, 옥사디아졸릴, 2-옥소아제피닐, 옥사졸릴, 2-옥소피페라지닐, 2-옥소피페리디닐, 2-옥소피롤리디닐, 피페리딜, 피페라지닐, 피리딜, 피라지닐, 피라졸리디닐, 피라졸릴, 피리다지닐, 피리미디닐, 피롤리디닐, 피롤릴, 퀴나졸리닐, 퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 테트라하이드로푸릴, 테트라하이드로이소퀴놀리닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 티아모르폴리닐, 티아모르폴리닐 설폭사이드, 티아졸릴, 티아졸리닐, 티에노푸릴, 티에노티에닐 및 티에닐이 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "치환된 C1-C8 알킬", "치환된 아릴" 및 "치환된 헤테로사이클"에는 화합물의 나머지 부분에 대한 부착 지점 이외에도 1 내지 3개의 치환체를 함유하는 잔기가 포함된다. 이러한 부가의 치환체는 F, Cl, Br, CF3, NH2, N(C1-C6 알킬)2, NO2, CN, (C1-C6 알킬)O-, -OH, (C1-C6 알킬)S(O)m-, (C1-C6 알킬)C(O)NH-, H2N-C(NH)-, (C1-C6 알킬)C(O)-, (C1-C6 알킬)OC(O)-, N3, (C1-C6 알킬)OC(O)NH- 및 C1-C20 알킬 중에서 선택된다.
R1 및 R2가 결합하여 -(CH2)s-를 형성하는 경우에는, 이와 같이 정의된 사이클릭 잔기 및 헤테로 원자 함유 사이클릭 잔기로는 다음을 포함하지만, 이에 제한되는 것은 아니다:
Figure 112000011142935-pct00007
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "하이드록시화"는 하나의 하이드록실 잔기에 의해 기재된 바와 같은 환 시스템의 치환 가능한 탄소 상의 치환을 나타낸다. 본원에서 사용된 바와 같은 용어 "폴리하이드록시화"는 2, 3 또는 4개의 하이드록실 잔기에 의해 기재된 바와 같이 환 시스템의 2개 이상의 치환 가능한 탄소 상의 치환을 나타낸다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "PEG"는 지정된 수의 에틸렌옥시 아단위을 갖는 치환체를 함유하는 특정한 폴리에틸렌 글리콜을 나타낸다. 따라서, 용어 PEG(2)는 다음을 나타낸다:
Figure 112000011142935-pct00008
용어 PEG(6)은 다음을 나타낸다:
Figure 112000011142935-pct00009
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "(d)(2,3-디하이드록시프로피오닐)"은 다음 구조를 나타낸다:
Figure 112000011142935-pct00010
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "(2R,3S) 2,3,4-트리하이드록시부타노일"은 다음 구조를 나타낸다:
Figure 112000011142935-pct00011
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "퀴닐"은 다음 구조 또는 이의 부분입체이성체를 나타낸다:
Figure 112000011142935-pct00012
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "코티니닐"은 다음 구조 또는 이의 부분입체이성체를 나타낸다:
Figure 112000011142935-pct00013
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "갈릴"은 다음 구조를 나타낸다:
Figure 112000011142935-pct00014
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "4-에톡시스쿠아레이트"는 다음 구조를 나타낸다:
Figure 112000011142935-pct00015
본 발명의 접합체에 사용되는 세포독성제는 빈카 알칼로이드 세포독성제 중에서 선택된다. 이러한 부류의 특히 유용한 일원에는, 예를 들면, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 루이로시딘, 빈데신, 빈오렐빈, 나벨빈, 루이로신 등 또는 이의 광학 이성체 중에서 선택된 빈카 알칼로이드가 포함된다. 본 발명의 접합체는 산소 원자를 통하여 빈카 알칼로이드의 C-4에 부착된 올리고펩타이드의 부착물을 지닌다는 것을 인지해야 한다. 따라서, 산소 상에 아세틸 잔기를 갖는 특정한 빈카 알칼로이드는 올리고펩타이드(또는 임의의 링커 단위)와 커플링되기 전에 먼저 데스아세틸화되어야만 한다. 더우기, 당해 분야의 숙련인은 본 발명의 접합체를 보다 편리하게 제조할 목적으로 상기 화합물의 반응을 만들기 위하여 목적하는 세포독성제를 화학적으로 변형시킬 수 있다.
본 발명에 바람직한 4-데스아세틸-빈카 알칼로이드 세포독성제 그룹에는 다음 화학식 I의 약물이 포함된다:
화학식 I의 약물의 빈카 알칼로이드 그룹:
Figure 112000011142935-pct00016
상기식에서,
R7은 H, CH3 또는 CHO이고;
R9 및 R10은 단독으로 존재하는 경우에는, R10이 H 이고 R8 및 R9 중의 하나가 에틸이며 다른 하나는 H 또는 OH이고,
R9 및 R10이 함께 결합하여 이중 결합을 형성하는 경우에는, R8이 에틸이고;
R11은 수소이며;
R12는 OH, O-(C1-C3 알킬) 또는 NH2이다.
세포독성제가 바람직한 세포독성제 4-O-데스아세틸빈블라스틴인 본 발명의 올리고펩타이드-세포독성제 접합체는 다음 화학식 Ia의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 이성체로 기재될 수 있다:
Figure 112000011142935-pct00017
상기식에서,
올리고펩타이드는 유리 전립선 특이적 항원(PSA)에 의해 특이적으로 인식되고 유리 전립선 특이적 항원의 효소적 활성에 의해 단백질 분해적으로 절단될 수 있는 올리고펩타이드이고;
XL은 결합, -C(O)-(CH2)u-W-(CH2)u-O- 및 -C(O)-(CH 2)u-W-(CH2)u-NH- 중에서 선택되며;
R은 a) 수소,
b) -(C=O)R1a,
c)
Figure 112000011142935-pct00018
d)
Figure 112000011142935-pct00019
e)
Figure 112003043454232-pct00054
f) 에톡시스쿠아레이트 및
g) 코티니닐 중에서 선택되고;
R1 및 R2은 수소, OH, C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, C1-C6 아르알킬 및 아릴 중에서 독립적으로 선택되며;
R1a는 C1-C6 알킬, 하이드록시화 C3-C8 사이클로알킬, 폴리하이드록시화 C3-C8 사이클로알킬, 하이드록시화 아릴, 폴리하이드록시화 아릴 또는 아릴이고;
삭제
W는 측쇄 또는 직쇄 C1-C6 알킬, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 또는 비사이클로[2.2.2]옥타닐중에서 선택되고;
n은 1, 2, 3 또는 4이며;
p는 0 또는 1 내지 100의 정수이고;
q는 0 또는 1이고, 단 p가 0이면, q가 1이며;
r은 1, 2 또는 3이고;
삭제
u는 0, 1, 2 또는 3이다.
바람직하게는, XL은 결합이다.
본원의 한 양태에서는, 잔기 올리고펩타이드 -R이 다음 중에서 선택된다:
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro (서열 84),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerGly (서열 85),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar (서열 86),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro (서열 87),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerVal (서열 88),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSer-4-트랜스-L-Hyp (서열 89),
Ac-AbuSerSerChgGlnSerPro (서열 90),
하이드록시아세틸Abu-SerSerChgGlnSerPro (서열 91),
아세틸3-PALSerSerChgGlnSerSerPro (서열 92),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerVal (서열 93),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerLeu (서열 94),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSer-4-트랜스-L-Hyp (서열 95),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerPro (서열 96),
Ac-SerSerChgGlnSerGly (서열 98),
Ac-SerSerChgGlnSerSer-4-트랜스-L-Hyp (서열 99),
Ac-SerSerChgGlnSerSerPro (서열 100),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerAla (서열 103),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerChg (서열 104),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar (서열 105),
Ac-SerSerChgGlnSerSerHyp (서열 106),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro (서열 107),
Ac-AbuSerSerChgGlnSer(dSer)Pro (서열 108),
Ac-AbuSerSerChgGlnSerSerPro (서열 109),
Ac-SerSerChgGlnSerSerPro (서열 111),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChg(dGln)SerSerPro (서열 114),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChg(dGln)(dSer)SerPro (서열 115),
Ac-SerChgGlnSerSerPro (서열 116),
Ac-SerChgGlnSerSer-4-트랜스-L-Hyp (서열 117),
Ac-SerChgGlnSerSerSar (서열 118),
Ac-SerChgGlnSerSerAibPro (서열 119),
Ac-SerChgGlnSerSerN-Me-Ala (서열 120),
Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerPip (서열 124), 및
Ac-SerChgGlnSerSerN-Me-dA (서열 125);
상기 서열에서, Abu는 아미노부티르산이고, 4-트랜스-L-Hyp는 4-트랜스-L-하이드록시프롤린이며, Pip는 피페콜린산이고, 3,4-디Hyp는 3,4-디하이드록시프롤린이며, 3-PAL은 3-피리딜알라닌이고, Sar은 사르코신이며 Chg는 사이클로헥실글리신이다.
다음 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 이성체가 본 발명의 올리고펩타이드-데스아세틸빈블라스틴 접합체의 특정 예이다:
Figure 112000011142935-pct00021
상기식에서,
X는
Figure 112000011142935-pct00022
(서열 84)
Figure 112000011142935-pct00023
(서열 85)
Figure 112000011142935-pct00024
(서열 86)
Figure 112000011142935-pct00025
(서열 87)
Figure 112000011142935-pct00026
(서열 88)
Figure 112000011142935-pct00027
(서열 89)
Figure 112000011142935-pct00028
(서열 90)
Figure 112000011142935-pct00029
(서열 91)
Figure 112000011142935-pct00030
(서열 92)
Figure 112000011142935-pct00031
(서열 93) 또는
Figure 112000011142935-pct00032
(서열 94)
이다.
본 발명의 올리고펩타이드, 펩타이드 아단위 및 펩타이드 유도체(또한 "펩타이드"로 명명됨)는 통상적인 펩타이드 합성 기술, 바람직하게는 고체상 기술에 의해 이들의 구성원 아미노산으로부터 합성할 수 있다. 이어서, 이러한 펩타이드를 역상 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC)하여 정제한다.
펩타이드 표준 합성 방법은, 예를 들어, 다음 문헌에 기재되어 있다[참조: Schroeder et al., "The Peptides", Vol. I, Academic Press 1965; Bodansky et al., "Peptide Synthesis", Interscience Publishers, 1966; McOmie(ed.) "Protective Groups in Organic Chemistry", Plenum Press, 1973; Barany et al., "The Peptides: Analysis, Synthesis, Biology" 2, Chapter 1, Academic Press, 1980, and Stewart et al., "Solid Phase Peptide Synthesis", Second Edition, Pierce Chemical Company, 1984]. 이러한 문헌의 교시가 본원에 참조문헌으로 인용되어 있다.
표준 펩타이드 합성 기술에 의해 본 발명의 접합체 내로 혼입될 수 있는, 친수성 치환체를 갖는 적절하게 치환된 사이클릭 아미노산은 그 자체가 시판되고 있거나, 당해 분야에 널리 공지되거나 본원에 기재된 기술에 의해 용이하게 합성된다. 따라서, 적합하게 치환된 프롤린의 합성이 다음 문헌 및 인용 문헌에 기재되어 있다[참조: J. Ezquerra et al., J. Org. Chem. 60:2925-2930(1995); P. Gill and W. D. Lubell, J. Org. Chem. 60:2658-2659(1995); and M.W. Holladay et al., J. Med. Chem., 34:457-461(1991)]. 이들 문헌의 교시가 본원에 참조문헌으로 삽입되어 있다.
본 발명의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염에는, 예를 들면, 비-독성 무기 또는 유기 산으로부터 형성되는 바와 같은 본 발명의 화합물의 통상적인 비-독성 염이 포함된다. 예를 들어, 이러한 통상적인 비-독성 염으로는 염산, 브롬화수소산, 황산, 설팜산, 인산 및 질산 등과 같이 무기 산으로부터 유도된 염; 및 아세트산, 프로피온산, 석신산, 글리콜산, 스테아르산, 락트산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 아스코르브산, 파모산, 말레산, 하이드록시말레산, 페닐아세트산, 글루탐산, 벤조산, 살리실산, 설파닐산, 2-아세톡시벤조산, 푸마르산, 톨루엔설폰산, 메탄설폰산, 에탄 디설폰산, 옥살산, 이세티온산, 트리플루오로아세트산 등과 같이 유기 산으로부터 제조된 염이 있다.
PSA 절단 부위를 함유하는 올리고펩타이드와 빈카 알칼로이드 세포독성제를 함유하는 본 발명의 접합체는 의약 화학 분야에 널리 공지된 기술에 의해 합성할 수 있다. 예를 들면, 빈카 약물 상의 하이드록실 잔기를 카복실 말단에서 올리고펩타이드에 공유적으로 부착시켜 에스테르 결합을 형성시킬 수 있다. 이를 위하여, HBTU와 HOBT의 배합물, BOP와 이미다졸의 배합물 및 DCC와 DMAP의 배합물 등의 시약을 이용할 수 있다. 니트로페닐 에스테르 등을 형성시킴으로써 상기 카복실산을 활성화시키고 DBU(1,8-디아자비사이클로[5,4,0]운데크-7-엔)의 존재하에서 반응시킬 수 있다.
당해 분야의 숙련인은 본 발명의 화합물의 합성시, 출발 화합물 및 중간체 상의 각종 반응성 작용기를 보호시키면서 당해 분자의 다른 부분에 대해서는 목적하는 반응을 수행해야할 필요가 있다는 것을 인지하고 있다. 목적하는 반응이 완료된 후, 또는 목적하는 어떠한 시점에서도, 통상적으로 이러한 보호 그룹은, 예를 들어, 가수분해 또는 가수소분해 반응을 통하여 제거할 수 있다. 이러한 보호 및 탈보호 단계는 유기 화학 분야에 통상적이다. 당해 분야의 숙련인은 본 발명의 화합물을 제조하는데 유용할 수 있는 보호 그룹의 교시에 대해 다음 문헌을 참조할 수 있다[참조: Protective Groups in Organic Chemistry, McOmie, ed., Plenum Press, NY, NY(1973); and Protective Groups in Organic Synthesis, Greene, ed., John Wiley & Sons, NY, NY(1981)].
단지 예로써, 유용한 아미노-보호 그룹에는, 예를 들면, 포밀, 아세틸, 디클로로아세틸, 프로피오닐, 헥사노일, 3,3-디에틸헥사노일 및 γ-클로로부틸 등의 C1-C10 알카노일 그룹; 3급-부톡시카보닐, 벤질옥시카보닐, 알릴옥시카보닐, 4-니트로벤질옥시카보닐, 플루오레닐메틸옥시카보닐 및 신나모일옥시카보닐 등의 C1-C10 알콕시카보닐 및 C5-C15 아릴옥시카보닐 그룹; 2,2,2-트리클로로에톡시카보닐 등의 할로-(C1-C10)-알콕시카보닐; 및 벤질, 펜에틸, 알릴 및 트리틸 등의 C1-C15 아릴알킬 및 알케닐 그룹이 포함될 수 있다. 기타 통상적으로 사용된 아미노-보호 그룹은 메틸 또는 에틸 아세토아세테이트와 같이 β-케토-에스테르로 제조된 엔아민 형태의 것이다.
유용한 카복시-보호 그룹에는, 예를 들면, 메틸, 3급-부틸, 데실 등의 C1-C10 알킬 그룹; 2,2,2-트리클로로에틸 및 2-요오도에틸 등의 할로-C1-C10 알킬; 벤질, 4-메톡시벤질, 4-니트로벤질, 트리페닐메틸, 디페닐메틸 등의 C5-C15 아릴알킬; 아세톡시메틸, 프로피온옥시메틸 등의 C1-C10 알카노일옥시메틸; 및 펜아실, 4-할로펜아 실, 알릴, 디메틸알릴, 트리-(C1-C3 알킬)실릴, 예를 들면, 트리메틸실릴, β-p-톨루엔설포닐에틸, β-p-니트로페닐티오에틸, 2,4,6-트리메틸벤질, β-메틸티오에틸, 프탈이미도메틸, 2,4-디니트로-페닐설페닐, 2-니트로벤즈하이드릴 및 관련 그룹 등의 그룹이 포함될 수 있다.
유사하게, 유용한 하이드록시 보호 그룹에는, 예를 들면, 포밀 그룹, 클로로아세틸 그룹, 벤질 그룹, 벤즈하이드릴 그룹, 트리틸 그룹, 4-니트로벤질 그룹, 트리메틸실릴 그룹, 펜아실 그룹, 3급-부틸 그룹, 메톡시메틸 그룹, 테트라하이드로피라닐 그룹 등이 포함될 수 있다.
데스아세틸빈블라스틴과 결합된 올리고펩타이드의 바람직한 양태에 관해서는, 다음 반응식이 본 발명의 접합체의 합성을 예시하고 있다.
반응식 I은 4-데스아세틸빈블라스틴의 산소 부착 지점이 올리고펩타이드의 C-말단에 존재하는 본 발명의 올리고펩타이드와 빈카 알칼로이드 세포독성제의 접합체의 제조를 예시하고 있다. 다른 반응 순서가 이러한 접합체를 형성하는데 유용할 수 있긴 하지만, 단일 아미노산이 4-산소에 초기에 부착한 다음 나머지 올리고펩타이드 서열이 상기 아미노산에 부착되는 것이 바람직한 방법인 것으로 밝혀졌다. 또한, 3,4-디하이드로-3-하이드록시-4-옥소-1,2,3-벤조트리아진(ODHBT)이 최종 커플링 단계에서 HOAt 대신 이용될 수 있는 것으로 밝혀졌다.
반응식 II는 하이드록시 알카놀릴산이 빈카 약물과 올리고펩타이드 간의 링커로서 사용되는 본 발명에 따르는 올리고펩타이드의 접합체의 제조 방법을 예시하 고 있다.
Figure 112000011142935-pct00033
Figure 112000011142935-pct00034
Figure 112000011142935-pct00035
Figure 112000011142935-pct00036
본 발명의 올리고펩타이드-세포독성제 접합체는 효소적으로 활성인 PSA의 분비를 특징으로 하는 비정상적인 세포 또는 비정상적인 세포 증식을 특징으로 하는 악성 또는 양성 질환을 치료하는데 유용하다. 이러한 질환으로는 전립선 암, 양성 전립선 과형성증, 전이성 전립선 암, 유방암 등이 있지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 올리고펩타이드-세포독성제 접합체는 본 발명의 접합체와 이에 대해 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물의 형태로 환자에게 투여한다. 본원에서 사용된 바와 같은 "약제학적으로 허용되는"이란 사람, 말, 돼지, 소, 쥐, 개, 고양이 또는 기타 포유동물을 포함한 온혈 동물 뿐만 아니라 조류 또는 기타 온혈 동물을 치료 또는 진단하는데 유용한 제제를 지칭한다. 바람직한 투여 방식은 특히 정맥내, 근육내, 피하, 복강내 또는 임파관내 경로에 의한 비경구 투여이다. 이러한 제형은 당해 분야의 숙련인에게 알려져 있는 담체, 희석제 또는 부형제를 사용하여 제조할 수 있다[참조: Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th ed., 1980, Mack Publishing Company, edited by Osol et al.]. 이러한 조성물은 혈청 단백질, 예를 들면, 사람 혈청 알부민 등의 단백질, 완충제 또는 완충 물질, 예를 들면, 인산염, 기타 염 또는 전해질 등을 포함할 수 있다. 적합한 희석제에는, 예를 들면, 멸균수, 등장성 식염수, 묽은 수성 덱스트로즈, 다가 알콜 또는 이러한 알콜의 혼합물, 예를 들면, 글리세린, 프로필렌 글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜 등이 포함될 수 있다. 당해 조성물은 펜에틸 알콜, 메틸 및 프로필 파라벤 및 티메로잘 등의 방부제를 함유할 수 있다. 경우에 따라, 당해 조성물은 메타중아황산 나트륨 또는 중아황산 나트륨 등의 산화방지제를 약 0.05 내지 약 0.20중량% 포함할 수 있다.
본원에서 사용된 바와 같은 용어 "조성물"은 특정 성분을 특정량으로 포함하는 생성물 뿐만 아니라 특정 성분을 특정량으로 혼합함으로써 직접적으로 또는 간접적으로 생성되는 모든 생성물을 포괄한다.
당해 약제학적 조성물은 멸균성 주사용 수용액의 형태일 수 있다. 이용될 수 있는 허용되는 비히클 및 용매는 물, 링거액 및 등장성 염화나트륨 용액이다.
멸균성 주사용 제제는 또한, 활성 성분이 오일 상에 용해되는 멸균성 주사용 유중수 마이크로에멀젼일 수 있다. 예를 들면, 이러한 활성 성분을 먼저 대두유와 레시틴의 혼합물에 용해시킬 수 있다. 이어서, 이러한 오일 용액을 물과 글리세롤 혼합물에 도입하고 가공하여 마이크로에멀젼을 형성할 수 있다.
주사용 액제 또는 마이크로에멀젼을 국소적 거환 주사함으로써 환자의 혈류에 도입할 수 있다. 또 다른 방법으로는, 본 발명의 화합물의 일정한 순환 농도를 유지시키는 방식으로 상기 액제 또는 마이크로에멀젼을 투여하는 것이 유리할 수 있다. 이러한 일정한 농도를 유지하기 위하여, 지속적인 정맥내 전달 장치를 이용할 수 있다. 이러한 장치의 한 예가 델텍(Deltec) CADD-PLUS™ 모델 5400 정맥내 펌프이다.
당해 약제학적 조성물은 근육내 및 피하 투여를 위한 멸균성 주사용 수성 또는 유성 현탁제의 형태일 수 있다. 이러한 현탁제는 상기 언급된 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁화제를 사용하여 당해 분야에 공지된 기술에 따라서 제형화할 수 있다. 이러한 멸균성 주사용 제제는 또한, 비-독성의 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균성 주사용 액제 또는 현탁제, 예를 들면, 1,3-부탄 디올 중의 액제일 수 있다. 또한, 멸균 고정유를 통상적으로 용매 또는 현탁화 매질로서 이용한다. 이를 위하여, 합성 모노 또는 디글리세라이드를 포함한 모든 블랜드 고정유를 이용할 수 있다. 또한, 올레산 등의 지방산이 주사용 제제에 사용된다.
정맥내 투여의 경우, 당해 조성물은 바람직하게는, 환자에게 투여된 접합체의 양이 약 0.01 내지 약 1g이 되도록 제조될 것이다. 바람직하게는, 접합체 투여량은 약 0.2 내지 약 1g의 범위 내일 것이다. 본 발명의 접합체는 치료하고자 하는 질환 상태 또는 변화시키고자 하는 생물학적 효과, 접합체가 투여되는 방식, 환자의 연령, 체중 및 상태 등의 요인 뿐만 아니라 치료 담당의에 의해 결정될 기타 요인에 따라서 광범위한 범위에 걸쳐 유효하다. 따라서, 소정의 모든 환자에게 투여된 양은 개개인의 기준에 따라서 결정되어야 한다.
당해 분야의 숙련인은 구체적인 시약과 반응 조건이 다음 실시예에서 열거되어 있긴 하지만, 본 발명의 요지 및 범주 내에 포괄되는 변형이 이루어질 수 있다는 것을 인지할 것이다. 따라서, 다음 제조방법 및 실시예가 본 발명을 추가로 예시하기 위해 제공되지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
실시예 1
데스-아세틸빈블라스틴-4-O-(N-아세틸-4-트랜스-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro) 에스테르
단계 A: 4-데스-아세틸빈블라스틴의 제조
빈블라스틴 설페이트(Sigma V-1377) 샘플 2.40g(2.63mmol)을 N2하에 무수 메탄올 135ml에 용해시키고 무수 하이드라진 45ml로 처리하며, 이 용액을 20 내지 25℃에서 18시간 동안 교반시킨다. 반응물을 진한 페이스트가 되도록 증발시키고, 이를 CH2Cl2 300ml와 포화 NaHCO3 150ml 사이에 분배시킨다. 수성 층을 CH2Cl2 100ml의 2개의 분획으로 세척하고 3개의 CH2Cl2 층 각각을 H2O 각 100ml(2X) 및 포화 NaCl(1X)로 세척한다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4에서 건조시키고, 용매를 감압하에 제거하여 표제 화합물을 회백색 결정성 고체로서 수득한다. 이 물질을 사용할 때까지 -20℃에서 저장한다.
단계 B: 4-데스-아세틸빈블라스틴 4-O-(프롤릴)에스테르의 제조
질소하에 CH2Cl2 3ml 및 무수 피리딘 18ml에 용해된 4-데스-아세틸빈블라스틴 샘플 804mg(1.047mmol)을 Fmoc-프롤린 산 클로라이드(Fmoc-Pro-Cl, Advanced Chemtech) 1.39g으로 처리하고, 이 혼합물을 25℃에서 20시간 동안 교반시킨다. HPLC로 분석하여 미반응된 출발 데스-아세틸빈블라스틴이 존재하는 것으로 나타난 경우, Fmoc-Pro-Cl 0.50g을 더 가하면서 20시간 더 교반시켜 반응을 완료시킨다. 물(약 3ml)을 가하여 과량의 산 클로라이드와 반응시킨 다음, 이 용액을 증발 건조시키고, EtOAc 300ml와 포화 NaHCO3 150ml 사이에 분배시킨 다음, 포화 NaCl로 2회 세척한다. 건조(Na2SO4)시킨 후, 용매를 감압하에 증발시켜 오렌지-갈색 잔사를 수득하고, 이 잔사에 DMF 30ml와 피페리딘 14ml를 가하고, 5분 후에, 상기 용액을 감압하에 증발시켜 오렌지-황색 반고체 잔사를 수득한다. 진공하에 약 1시간 동안 건조시킨 후, H2O 약 200ml와 에테르 100ml를 상기 물질에 가한 다음, 완전한 분해가 일어나고 수성 층이 4.5 내지 5.0의 안정한 pH를 획득(습윤된 pH 범위 4 내지 6 시험지)할 때까지 진탕 및 초음파 처리하면서 빙초산을 적가한다. 이어서, 상기 수성 층을 에테르 100ml의 1개의 분획으로 세척하고, 각 에테르 층을 H2O 50ml로 세척한다. 합한 수성 층을 95 →70% A/70분 구배 용출시키면서 워터스 C4 델타-팩 칼럼 15μM 300A(A = 0.1% TFA/H2O ; B = 0.1% TFA/CH3CN) 상에서 2개의 분획으로 분취용 HPLC에 적용시킨다. 모은 분획을 농축 및 동결건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계 C: N-아세틸-4-트랜스-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-WANG 수지
0.82mmol/g으로 부하된 Fmoc-Ser(t-Bu)-WANG 수지 0.5mmol(0.61g)으로 출발하여, 보호된 펩타이드를 Fmoc/t-부틸계 합성용으로 개조한 ABI 모델 430A 펩타이드 합성기 상에서 합성한다. 프로토콜은 다음의 보호된 아미노산 각각을 2배 과량(1.0mmol)을 사용한다: Fmoc-Ser(t-Bu)-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Chg-OH, Fmoc-4-트랜스-L-Hyp-OH; 및 아세트산(이중 커플링). 각 커플링 주기 동안, N-메틸-2-피롤리디논(NMP) 중의 20% 피페리딘을 사용한 다음 NMP로 세척하여 Fmoc 보호를 제거한다. NMP 중의 DCC 및 HOBt 활성화를 사용하여 커플링을 달성한다. 합성이 완료되면, 펩타이드 수지를 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
단계 D: N-아세틸-4-트랜스-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-OH
상기 펩타이드 수지 0.5mmol 1회분을 TFA 25ml에 현탁시킨 다음, H2O 및 트리이소프로필실란을 각각 약 0.625ml로 가한 후, 25℃에서 2.0시간 동안 교반시킨다. 절단 혼합물을 여과시키고, 고체를 TFA로 세척한 다음, 용매를 감압하에 여액으로부터 제거하며, 잔사를 에테르로 연마하여 담황색 고체를 수득하고, 이를 여과시켜 분리한 다음 진공하에 건조시켜 표제 화합물을 수득한다.
HPLC 조건, 시스템 A:
칼럼... Vydac 15cm #218TP5415, C18
용출액... 45분에 걸친 구배(95%A →50%A)
A = 0.1% TFA/H2O, B = 0.1% TFA/아세토니트릴
유속... 1.5ml/분
고분해능 ES/FT-MS: 789.3
단계 E: 데스-아세틸빈블라스틴-4-O-(N-아세틸-4-트랜스-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln- Ser-Ser-Pro) 에스테르
상기와 같이 제조된, 단계 D로부터의 펩타이드 522mg(0.66mmol)과 단계 B로부터의 4-데스-아세틸빈블라스틴 4-O-(프롤릴) 에스테르 555mg(약 0.6mmol)의 샘플을 N2하에 DMF 17ml에 용해시킨다. 이어서, 1-하이드록시-7-아자벤조트리아졸(HOAt) 163mg(1.13mmol)을 가하고, 2,4,6-콜리딘을 사용하여 pH를 6.5 내지 7(습윤된 5 내지 10 범위의 pH 시험지)로 조정한 다음, 0℃로 냉각시키고, 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(EDC) 155mg(0.81mmol)을 가한다. 분석용 HPLC(A = 0.1% TFA/H2O, B = 0.1% TFA/CH3CN)에 의해 모니터한 바와 같이 커플링이 완료될 때까지 0 내지 5℃에서 교반을 지속시키면서 2,4,6-콜리딘을 주기적으로 가함으로써 pH를 6.5 내지 7로 유지시킨다. 12시간 후, H2O 약 4ml를 가함으로써 반응물을 후처리하고, 1시간 동안 교반시킨 후, 진공하에 소 용적으로 농축시키며 5% HOAc 약 150ml에 용해시킨 다음, 95 →65% A/70분 구배 용출시키면서 워터스 C18 델타-팩 칼럼 15μM 300A(A = 0.1% TFA/H2O ; B = 0.1% TFA/CH3CN) 상에서 2개의 분획으로 분취용 HPLC에 적용시킨다. 샘플 둘다로부터 나중에 용출되는 생성물(HPLC로 평가됨, 시스템 A, 95 →65% A/30분)을 함유하는 균질한 분획을 모으고 약 50ml 용적으로 농축시키며 AG4X4 이온 교환 수지(아세테이트 사이클) 약 40ml 내로 통과시킨 다음, 동결 건조시켜 표제 화합물을 동결건조된 분말로서 수득한다.
고분해능 ES/FT-MS: 1637.0
실시예 1A
데스-아세틸빈블라스틴-4-O-(N-아세틸-4-트랜스-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro) 에스테르 아세테이트
실시예 1, 단계 B에서 기재된 바와 같이 제조된 4-O-(프롤릴) 데스-아세틸빈블라스틴 TFA 염 4.50g(3.7mmol)의 샘플을 N2 하에 DMF 300ml에 용해시키고, 이 용액을 0℃로 냉각시킨다. 이어서, 3,4-디하이드로-3-하이드록시-4-옥소-1,2,3-벤조트리아진(ODHBT) 1.72g(10.5mmol)을 가하고, N-메틸모르폴린(NMM)을 사용하여 pH를 7.0(습윤된 5 내지 10 범위 pH 시험지)로 조정한 다음, 실시예 1, 단계 D의 N-아세틸-헵타펩타이드 4.95g(5.23mmol)을 적가하여 각 첨가 사이에 완전한 분해가 일어나도록 한다. NMM을 사용하여 상기 pH를 다시 7.0으로 조정하고, 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 하이드로클로라이드(EDC) 1.88g (9.8mmol)를 가한 다음, 분석용 HPLC(시스템 A)으로 모니터한 바와 같이 커플링이 완료될 때까지 상기 용액을 0 내지 5℃에서 교반시키면서 NMM을 주기적으로 가함으로써 pH를 약 7로 유지시킨다. 분석 결과, 26.1분 체류 시간에서 소량 성분(약 10%)이 나타났으며, 그 다음에 주 성분이 26.3분 체류 시간으로 나타났는데, 이 소량 성분이 표제 화합물의 D-Ser 이성체로서 동정되었다. 20시간 후, H2O 30ml를 가함으로써 반응물을 후처리하고, 1시간 동안 교반시킨 후, 진공하에 소 용적으로 농축시키며 20% HOAc 약 500ml에 용해시킨 다음, 80ml/분의 유속으로 85 →65% A/90분 구배 용출시키면서 워터스 C18 델타-팩 칼럼 15mM 300A(A = 0.1% TFA/H2O ; B = 0.1% TFA/CH3CN) 상에서 12개의 분획으로 분취용 HPLC에 적용시킨다.
총 샘플의 대략 1/4을 나타내는 균질한 분획(HPLC로 평가됨, 시스템 C)을 모으고 약 150ml 용적으로 농축시키며 바이오-래드(Bio-Rad) AG4X4 이온 교환 수지(아세테이트 사이클) 약 200ml 내로 통과시킨 다음, 용출액을 동결 건조시켜 표제 화합물의 아세테이트 염을 동결건조된 분말로서 수득한다: 체류 시간(시스템 A) 26.7분, 98.9% 순도; 고분해능 ES/FT-MS m/e 1636.82; 아미노산 조성 분석 20시간, 100℃, 6N HCl(이론치/실측치), Ser4/3.91(교정됨), Glu 1/0.92(Gln이 Glu로 전환됨), Chg 1/1.11, Hyp 1/1.07, Pro 1/0.99, 펩타이드 함량 0.516mmol/mg.
이온 교환 수지 대략 500ml를 통하여 상기와 같이 처리하면서, 균질한 분획을 추가로 혼합하고, 부 분획으로부터 정제하여, 부가량의 표제 화합물을 수득한다.
HPLC 조건, 시스템 A:
칼럼... Vydac 15cm #218TP5415, C18
유속... 1.5ml/분
용출액... 45분에 걸친 구배(95%A →50%A)
A = 0.1% TFA/H2O, B = 0.1% TFA/아세토니트릴
파장... 214nm, 280nm
HPLC 조건, 시스템 C:
칼럼... Vydac 15cm #218TP5415, C18
유속... 1.5ml/분
용출액... 30분에 걸친 구배(85%A →65%A)
A = 0.1% TFA/H2O, B = 0.1% TFA/아세토니트릴
파장... 214nm, 280nm
표 1은 적당한 아미노산 잔기와 차단 그룹 아실화를 이용하는 것을 제외하고는, 실시예 1 및 1A에 기재된 과정에 의해 제조되는 기타 펩타이드-빈카 약물 접합체를 제시하고 있다. 달리 언급되지 않는 한, 당해 접합체의 아세테이트 염이 제조되고 시험된다.
서열 번호 펩타이드-VIN 접합체 York PSA에 의한 50% 기질 절단까지 소요된 시간(분)
95 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQ-SS-4-트랜스-L-Hyp)-dAc-VIN 13
96 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQ-S-P)-dAc-VIN 1시간=8%
90 4-O-(Ac-Abu-SSChgQ-SP)-dAc-VIN 80
91 4-O-((2-OH)Ac-Abu-SSChgQ-S-P)-dAc-VIN 110
92 4-O-(Ac-3-Pal-SSChgQS-P)-dAc-VIN 80
97 4-O-(Ac-3-Pal-SSChgQ(ds)-P)-dAc-VIN 3시간=0%
93 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSL-락틸)-dAc-VIN 10(약간 분해)
94 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSV-락틸)-dAc-VIN 7(안정)
88 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSV-글리콜릴)-VIN 8
85 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQS-글리신)-(dAc)-VIN 30
86 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQss-Sar)-(dAc)-VIN 32
84 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSSPro)-(dAc)-VIN 17
87 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSS-(d)-Pro)-(dAc)-VIN 1시간=34%
98 4-O-(Ac-SSChgQS-Gly)-(dAc)-VIN 55
99 4-O-(Ac-SSChgQ-SS-4-트랜스-L-Hyp)-dAc-VIN 22
100 4-O-(Ac-SSChgQ-SS-P)-dAc-VIN 15
101 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQ-S(dS)-4-트랜스-L-Hyp)-dAc-VIN 1시간=12%
4-트랜스-L-Hyp는 트랜스-4-하이드록시-L-프롤린이다 n>1인 경우; 수치는 평균치이다
서열 번호 펩타이드-VIN 접합체 York PSA에 의한 50% 기질 절단까지 소요된 시간(분)
102 (4-O)-Ac-(4-트랜스-L-Hyp)SSChgQ-SL-(dAc)-VIN 35
103 Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQS-(4-O-Ala)-(dAc)-VIN 23(prod는 4-O-A-dAc-VIN으로 전환됨)
104 Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSChg-(4-O-글리콜릴)-VIN 12
105 Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSS-(4-O-Sar)-(dAc)-VIN 15
102 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSL-락틸)-(dAc)-VIN 10
106 Ac-SSChgQ-SS-(4-O-4-트랜스-L-Hyp)-dAc-VIN 22
107 Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQ-SS(4-O-P)-빈데신 12
108 Ac-AbuSSChgQ-S(dS)-(4-O-P)-dAc-VIN 60
109 Ac-AbuSSChgQ-SS-(4-O-P)-dAc-VIN 7
110 Ac-AbuSSChgQ-(dS)-(4-O-P)-dAc-VIN 1시간=0%
104 Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQ-SChg-(4-O-락틸)-dAc-VIN 14
111 Ac-SSChgQ-SS-(4-O-P)-빈데신 22
112 4-O-[Ac-SSChgQ-S(dS)-4-트랜스-L-Hyp]-dAc-VIN 1시간=14%
113 4-O-[Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQ-(dS)SP]-dAc-VIN 6시간(10x ENZ)
114 4-O-[Ac-4-트랜스-L-HypSSChg(dQ)SSP]-dAc-VIN 10x ENZ o/n=0%
115 4-O-[Ac-4-트랜스-L-HypSSChg(dQ)SSP]-dAc-VIN 10x ENZ o.n=0%
116 4-O-(Ac-SChgQ-SSP)-dAc-VIN 15
117 4-O-[Ac-SChgQSS4-트랜스-L-Hyp]-dAc-VIN 15
118 4-O[-Ac-SChgQSS-Sar]-dAc-VIN 39n=2
119 4-O-[Ac-SchgQSS-Aib-P]-dAc-VIN 15, 23
120 4-O-[Ac-SChgQSS(N-Me-Ala)-dAc-VIN 30
121 4-O-[Ac-SChgQS-Aib-P]-dAc-VIN 1시간=8%
122 4-O-[(2-OH)Ac-SChgQSS-Sar]-dAc-VIN 1시간=4%
123 4-O-[Ac-SChgQSS-Pip]-dAc-VIN 15
124 4-O-[AC-4-트랜스-L-HypSSChgQSS-Pip]-dAc-VIN 13
125 4-O-[Ac-SSChgQSS-(N-Me-dA)]-dAc-VIN 1시간=26%
실시예 4
유리 PSA에 의한 올리고펩타이드-빈카 약물 접합체의 인식에 관한 평가
실시예 3에서 기재된 바와 같이 제조된 접합체를 PSA 분해 완충액(50mM 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄 pH 7.4, 140mM NaCl)에 개별적으로 용해시키고 이 용액을 100 대 1의 몰비로 PSA에 가한다. 또 다른 방법으로, 이용되는 PSA 분해 완충액은 50mM 트리스(하이드록시메틸)-아미노메탄 pH 7.4, 140mM NaCl이다. 트리플루오로아세트산(TFA)를 최종 1%(용적/용적)에 가함으로써 각종 반응 시간 후에 반응물을 급냉시킨다. 또 다른 방법으로는, 상기 반응물을 10mM ZnCl2로 급냉시킨다. 이와 같이 급냉시킨 반응물을 수성 0.1% TFA/아세토니트릴 구배를 사용하여 역상 C18 칼럼 상에서 HPLC에 의해 분석한다. 이어서, 효소적으로 활성인 유리 PSA를 이용하여 언급된 올리고펩타이드-세포독성제 접합체를 50% 절단하는데 소요되는 시간(분)을 산정한다. 그 결과가 표 1에 제시되어 있다.
실시예 5
빈카 약물의 펩티딜 유도체의 세포독성에 관한 시험관내 검정
변형되지 않은 빈카 약물에 의해 치사되는 것으로 공지되어 있는 세포주에 대하여, 실시예 3에 기재된 바와 같이 제조된 절단 가능한 올리고펩타이드-빈카 약물 접합체의 세포독성을 알라마 블루(Alamar Blue) 검정으로 평가한다. 구체적으로 언급하면, 96웰 플레이트 중의 LNCap 전립선 종양 세포, 즉 Colo320DM 세포(C320으로 명명됨) 또는 T47D 세포의 세포 배양물을 소정 접합체의 각종 농도를 함유하는 배지(최종 플레이트 웰 용적 200㎕)로 희석시킨다. 유리 PSA를 발현하지 않는 Colo320DM 세포를 대조용 세포주로서 사용하여 비-기전 이용 독성을 결정한다. 상기 세포를 37℃에서 3일 동안 배양하고, 알라마 블루 20㎕를 상기 검정용 웰에 가한다. 이 세포를 추가로 배양하고 검정용 플레이트를, 알라마 블루를 가한지 4 및 7시간 후에 570 및 600nm의 이중 파장에서 EL-310 ELISA 판독기 상에서 판독한다. 이어서, 시험된 각종 농도의 접합체에서의 상대적인 생존율(%)을 대조용 배양물(접합체를 전혀 함유하지 않음)에 대하여 산정하고 EC50을 결정한다. 그 결과가 표 2에 제시되어 있다. 달리 언급되지 않는 한, 접합체의 아세테이트 염이 시험된다.
서열번호 펩타이드-VIN 접합체(세포독성제) 72시간(48시간)에서 LNCaP 세포 사멸 EC50(μM)
빈블라스틴 0.5 (Colo320DM=0.5)
(4-O-4-트랜스-L-Hyp)-dAc-VIN 0.6 (Colo320DM=1.1) n=2
4-O-글리신-(dAc)-VIN 0.3 (Colo320DM=1.8)
4-O-사르코실-(dAc)-VIN 1.3 (Colo320DM=1.8)
95 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSchgQ-SS-4-트랜스-L-Hyp)- dAc-VIN 16.3 (Colo320DM=13.1)
96 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQ-S-P)-dAc-VIN 47.9 (Colo320DM=83.9)
96 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSchgQS-Pro)-(dAc)-VIN 5% FBS중 >16 (Colo320DM=26)
90 4-O-(Ac-Abu-SSChgQ-S-P)-dAc-VIN 9.7 (Colo320DM=14.5) n=2
90 " 0.5% FBS중 >5 (Colo320DM=23.8)
91 4-O-((2-OH)Ac-Abu-SSChgQ-S-P)-dAc-VIN 11.9 (Colo320SDM=52.5)
92 4-O-(Ac-3-Pal-SSChgQS-P)-dAc-VIN 5.8 (Colo320DM=8.0) PS
93 4-O-(Ac-4-트랜스-L-Hyp SSChgQSL-락틸)-dAc-VIN 1.1 (Colo320DM=13.3)
94 4-O-(Ac-4-트랜스-L-Hyp SSChgQSV-락틸)-dAc-VIN 3.1 (Colo320DM=8.1)
88 4-O-(Ac-4-트랜스-L-Hyp SSChgQSV-글리콜릴)-VIN 4.1 (Colo320DM=8.1)
86 4-O-(Ac-4-트랜스-L-Hyp SSChgQSS-Sar)-(dAc)-VIN 4.1 (Colo320DM=13.0)
84 4-O-(Ac-4-트랜스-L-Hyp SSChgQSSPro)-(dAc)-VIN 3.0 (Colo320DM=12) n=3
87 4-O-(Ac-4-트랜스-L-Hyp SSChgQSS-(d)-Pro)-(dAc)-VIN 4.1 (Colo320DM=8.1)
85 4-O-(Ac-4-트랜스-L-Hyp SSchgQSGly)-(dAc)-VIN 9.3 (Colo320DM=13.5) n=2
98 4-O-(Ac-SSChgQS-Gly)-(dAc)-VIN 16.3 (Colo320DM=16.3)
100 4-O-(Ac-SSChgQ-SS-4-트랜스-L-Hyp)-dAc-VIN 6.8 (Colo320DM=8.1) n=2
서열번호 펩타이드-VIN 접합체 72시간(48시간)에서 LNCaP 세포 사멸 EC50(mM)
4-O-루이실-(dAc)-VIN 4.5 (Colo320DM=4.5)
4-O-Abu-(dAc)-VIN/라세미 혼합물 3.8 (Colo320DM=5.5)
4-O-Abu-(dAc)-VIN/I형 이성체 3.9 (Colo320DM=2.3)
102 (4-O)-Ac-(4-트랜스-L-Hyp)SSChgQ-SL-(dAc)-VIN 0.5% FBS
4-O-(프롤릴)-dAc-VIN 0.7 (Colo320DM=4.1) n=2
(4-O-Phe)-(dAc)-VIN 3.8 (Colo320DM=2.2)
(4-O-Ala)-(dAc)-VIN 0.6 (Colo320DM=4.2)
103 Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQS-(4-O-Ala)-(dAc)-VIN 12.5 (Colo320DM=32.5)
4-하이드록시아세틸-VIN=4-O-글리콜릴-dAc-VIN 1.3 (Colo320DM=3.3)
104 Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSChg-(4-O-글리콜릴)-VIN 4.1 (Colo320DM=4.1)
4-O-(d)-프롤릴-(dAc)-VIN 에스테르 2.0 (Colo320DM=4.1)
Chg-(4-O-글리콜릴)-VIN
105 Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSS-(4-O-Sar)-(dAc)-VIN 12 (Colo320DM=12)
102 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSL-락틸)-(dAc)-VIN 1.1 (Colo320DM=13.3)
4-O-(V-락틸)-dAc-VIN 1.3 (Colo320DM=2.6)
4-O-(L-락틸)-dAc-VIN 0.7 (Colo320DM=2.0)
4-O-(Chg-락틸)-dAc-VIN 4.1 (Colo320DM=8.4)
104 4-O-(Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSChg-락틸)-dAc-VIN 8.1 (Colo320DM=27.9) PS
106 Ac-SSChgQ-SS-(4-O-Hyp)-dAc-VIN 6.8 (Colo320DM=8.1) n=2
107 Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQ-SS(4-O-P)-빈데신 12.5 (Colo320DM > 73)
108 Ac-AbuSSChgQ-SS-(4-O-P)-dAc-VIN 12.8 (Colo320DM=28.4)
프롤릴-빈데신 0.3 (Colo320DM=6.9)
111 Ac-SSChgQ-SS-(4-O-P)-빈데신 32.5 (Colo320DM=73)
4-O-(SP)-dAc-VIN 0.1 (Colo320DM=0.3)
4-O-(SSP)-dAc-VIN 2.0 (Colo320DM=14.5)
114 4-O-[Ac-4-트랜스-L-HypSSChg(dQ)SSP]-dAc-VIN 12.2 (Colo320DM=43.7)
115 4-O-[Ac-4-트랜스-L-HypSSChg(dQ)(dS)SP]-dAc-VIN 16.3 (Colo320DM=47.7)
116 4-O-(Ac-SChgQ-SSP)-dAc-VIN 15 (Colo320DM=20)
4-O-피페콜릴-dAc-VIN 0.7 (Colo320DM=0.7)
117 4-O-[Ac-SChgQSS4-트랜스-L-Hyp]-dAc-VIN 5.6 (Colo320DM=5.6)
4-O-N-메틸알라닐-dAc-VIN 2.9 (Colo320DM=2.9)
118 4-O-[Ac-SChgQSS-Sar]-dAc-VIN 0.8 (Colo=3.0)
119 4-O-[Ac-SChgQSS-Aib-P]-dAc-VIN > 25 (Colo230DM > 25)
120 4-O-[Ac-SChgQSS(N-Me-Ala)]-dAc-VIN 2.3 (Colo320DM=3.1)
123 4-O-[Ac-SChgQSS-Pip]-dAC-VIN 80 (Colo320DM > 75)
124 4-O-[Ac-4-트랜스-L-HypSSChgQSS-Pip]-dAc-VIN 7.5 (Colo320DM=60)
4-O-[N-Me-dA]-dAc-VIN 1.0 (Colo320DM=1.7)
Pip는 피페콜린산이고; Sar는 사르코신이며; Chg는 사이클로헥실글리신이고; Abu는 2-아미노부티르산이며; Aib는 2-아미노이소부티르산이다
실시예 6
펩티딜-세포독성제 접합체의 생체내 효능
LNCaP.FGC 또는 DuPRO-1 세포를 트립신으로 처리하고, 성장 배지에 재현탁시킨 다음 200xg로 6분 동안 원심분리시킨다. 이 세포를 혈청 비함유 α-MEM에 재현탁시키고 계수한다. 이어서, 목적하는 수의 세포를 함유하는 상기 용액의 적당한 용적을 원뿔형 원심관에 옮기고, 앞서와 같이 원심분리시킨 다음, 적당한 용적의 α-MEM-매크리겔의 찬 1:1 혼합물에 재현탁시킨다. 이 현탁액을 동물에게 접종할 때까지 빙상에서 보관한다.
할란 스프라그 돌리(Harlan Sprague Dawley) 숫컷 누드 마우스(10 내지 12주생)를 마취시키지 않고 감금한 다음, 세포 현탁액 0.5ml를 22G 바늘을 사용하여 피하 주사함으로써 좌측 옆구리에 접종한다. 마우스에게 약 5x105 DuPRO 세포 또는 1.5X107 LNCaP.FGC 세포를 제공한다.
종양 세포를 접종한 후, 상기 마우스를 두 프로토콜 중의 하나의 프로토콜로 처리한다.
프로토콜 A:
세포 접종한지 1일 후에, 상기 동물에게 시험 접합체, 빈카 약물 또는 비히클 대조물(멸균수) 0.1 내지 0.5ml를 투여한다: 이러한 접합체와 빈카 약물의 투여량은 초기에는 최대 비치사량이지만, 점차적으로 보다 낮게 적정할 수 있다. 동일한 용량을 5일 동안 24시간 간격으로 투여한다. 10일 후, 마우스로부터 혈액 샘플을 채취하고 PSA의 혈청 수준을 측정한다. 유사한 혈청 PSA 수준을 5 내지 10일 간격으로 측정한다. 5.5주가 끝날 무렵, 상기 마우스를 희생시키고 존재하는 모든 종양의 중량을 측정하고 혈청 PSA 수준을 다시 측정한다. 당해 검정의 시작과 끝에 동물의 체중을 결정한다.
프로토콜 B:
세포 접종한 지 10일 후에, 혈액 샘플을 상기 동물로부터 채취하고 혈청 PSA 수준을 측정한다. 이어서, 이들의 PSA 혈청 수준치에 따라서 동물들을 여러 그룹으로 나눈다. 세포 접종한지 14 내지 15일 후에, 상기 동물에게 시험 접합체, 빈카 약물 또는 비히클 대조물(멸균수) 0.1 내지 0.5ml를 투여한다. 이러한 접합체와 빈카 약물의 투여량은 초기에는 최대 비치사량이지만, 점차적으로 보다 낮게 적정할 수 있다. 동일한 용량을 5일 동안 24시간 간격으로 투여한다. 혈청 PSA 수준을 5 내지 10일 간격으로 결정한다. 5.5주가 끝날 무렵, 상기 마우스를 희생시키고 존재하는 모든 종양의 중량을 측정하고 혈청 PSA 수준을 다시 측정한다. 당해 검정의 시작과 끝에 동물의 체중을 측정한다.
실시예 7
내인성 비-PSA 프로테아제에 의한 접합체의 단백질 분해적 절단에 관한 시험관내 결정법
단계 A: 단백질 분해적 조직 추출물의 제조
모든 과정을 4℃에서 수행한다. 적당한 동물을 희생시키고 관련 조직을 분리한 다음 액체 질소하에 저장한다. 동결된 조직을 모르타르와 막자를 사용하여 분쇄시키고, 분쇄된 조직을 포터-엘베이예(Potter-Elvejeh) 균질화기로 옮기고 완충액 A(1.15% KCl, pH 7.5를 함유하는 50mM 트리스 2용적을 가한다. 이어서, 상기 조직을 먼저 느슨한 핏팅 막자를 사용한 다음 조이는 핏팅 막자를 사용하여 20회의 스트로크로 파쇄시킨다. 균질물을 날개 회전자(HB4-5)에서 10,000xg로 원심분리시키고, 펠렛을 경사 제거한 다음, 재-상등액을 100,000xg(Ti 70)으로 원심분리시킨다. 이 상등액(세포질)을 수거한다.
앞서 완충액 A로 사용된 바와 같은 단계에서 사용된 바와 동일한 용적을 이용하여 상기 펠렛을 완충액 B(1.15% KCl, pH 7.5를 함유하는 10mM EDTA)에 재현탁시킨다. 이 현탁액을 다운스(dounce) 균질화기에서 균질화시키고, 상기 용액을 100,000xg로 원심분리시킨다. 이 상등액을 경사분리 제거하고, 상기 펠렛을 상기 사용된 용적의 1/2을 사용하여 완충액 C(0.25M 슈크로즈, pH 7.4를 함유하는 10mM 인산칼륨 완충액)에 재현탁시키며, 다운스 균질화기로 균질화시킨다.
브래드포드(Bradford) 검정을 이용하여 두 용액(세포질 및 막)의 단백질 함량을 결정한다. 이어서, 검정 분취액을 분취하고 이를 액체 N2 하에 동결시킨다. 이 분취량을 -70℃에서 저장한다.
단계 B: 단백질 분해적 절단 검정
매 시간마다, 단계 A에 기재된 바와 같이 제조되고 반응 완충액에서 브래드포드에 의해 측정된 바와 같은, 펩타이드-빈카 약물 접합체 20마이크로그램과 조직 단백질 150마이크로그램을 완충액(50mM 트리스, 140mM NaCl, pH 7.2) 중의 최종 용적 200마이크로리터 용액 속에 놓아둔다. 검정 반응을 0, 30, 60, 120 및 180분 동안 수행한 다음, 이를 0.1M ZnCl2 9마이크로리터로 급냉시키고, 즉시 비등수 속에 90초 동안 놓아 둔다. 반응 생성물을 물/아세토니트릴 중의 VYDAC C18 15cm 칼럼(30분에 걸쳐 5% 내지 50% 아세토니트릴)을 사용하여 HPLC로 분석한다.
<110> Merck & Co., Inc. <120> Conjugates useful in the treatment of prostate cancer <130> 20120Y <150> US 60/067,110 <151> 1997-12-02 <150> GB 9804399.5 <151> 1998-03-02 <160> 125 <170> KOPATIN 1.5 <210> 1 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <400> 1 Asn Lys Ile Ser Tyr Gln Ser 1 5 <210> 2 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <400> 2 Lys Ile Ser Tyr Gln Ser 1 5 <210> 3 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <400> 3 Asn Lys Ile Ser Tyr Tyr Ser 1 5 <210> 4 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <400> 4 Asn Lys Ala Ser Tyr Gln Ser 1 5 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <400> 5 Ser Tyr Gln Ser Ser 1 5 <210> 6 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <400> 6 Lys Tyr Gln Ser Ser 1 5 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> 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<221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> cyclohexylglycine <400> 116 Xaa Xaa Gln Ser Ser Pro 1 5 <210> 117 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> N-acetyl serine <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> cyclohexylglycine <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> 4-trans-L-hydroxyproline <400> 117 Xaa Xaa Gln Ser Ser Xaa 1 5 <210> 118 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> N-acetyl serine <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> cyclohexylglycine <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> MeGly <400> 118 Xaa Xaa Gln Ser Ser Gly 1 5 <210> 119 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> N-acetyl serine <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> cyclohexylglycine <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> Aib <400> 119 Xaa Xaa Gln Ser Ser Ala Pro 1 5 <210> 120 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> N-acetyl serine <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> cyclohexylglycine <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> N-methyl-alanine <400> 120 Xaa Xaa Gln Ser Ser Xaa 1 5 <210> 121 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> N-acetyl serine <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> cyclohexylglycine <220> <221> MOD_RES <222> (5)..(5) <223> Aib <400> 121 Xaa Xaa Gln Ser Ala Pro 1 5 <210> 122 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> N-hydroxyacetyl serine <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> cyclohexylglycine <220> <221> MOD_RES <222> (6)..(6) <223> MeGly <400> 122 Xaa Xaa Gln Ser Ser Gly 1 5 <210> 123 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> N-acetyl serine <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> cyclohexylglycine <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> pipecolinic acid <400> 123 Xaa Xaa Gln Ser Ser Xaa 1 5 <210> 124 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> N-acetyl-4-trans-L-hydroxyproline <220> <221> VARIANT <222> (4)..(4) <223> cyclohexylglycine <220> <221> VARIANT <222> (8)..(8) <223> pipecolinic acid <400> 124 Xaa Ser Ser Xaa Gln Ser Ser Xaa 1 5 <210> 125 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> completely synthesized <220> <221> VARIANT <222> (1)..(1) <223> N-acetyl serine <220> <221> VARIANT <222> (2)..(2) <223> cyclohexylglycine <220> <221> VARIANT <222> (6)..(6) <223> N-methyl-d-alanine <400> 125 Xaa Xaa Gln Ser Ser Xaa 1 5

Claims (23)

  1. 삭제
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 삭제
  6. 삭제
  7. 화학식 Ia의 접합체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 이성체.
    화학식 Ia
    Figure 112003043454232-pct00037
    상기식에서,
    올리고펩타이드는 유리 전립선 특이적 항원(PSA)에 의해 특이적으로 인식되고 유리 전립선 특이적 항원의 효소적 활성에 의해 단백질 분해적으로 절단될 수 있는 올리고펩타이드이고;
    XL은 결합, -C(O)-(CH2)u-W-(CH2)u-O- 및 -C(O)-(CH2)u-W-(CH2)u-NH- 중에서 선택되며;
    R은
    a) 수소,
    b) -(C=O)R1a,
    c)
    Figure 112003043454232-pct00038
    d)
    Figure 112003043454232-pct00039
    e)
    Figure 112003043454232-pct00055
    f) 에톡시스쿠아레이트 및
    g) 코티니닐 중에서 선택되고;
    R1 및 R2은 수소, OH, C1-C6 알킬, C1-C6 알콕시, C1-C6 아르알킬 및 아릴 중에서 독립적으로 선택되며;
    R1a는 C1-C6 알킬, 하이드록시화 C3-C8 사이클로알킬, 폴리하이드록시화 C3-C8 사이클로알킬, 하이드록시화 아릴, 폴리하이드록시화 아릴 또는 아릴이고;
    W는 측쇄 또는 직쇄 C1-C6 알킬, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 또는 비사이클로[2.2.2]옥타닐 중에서 선택되고;
    n은 1, 2, 3 또는 4이며;
    p는 0 또는 1 내지 100의 정수이고;
    q는 0 또는 1이고, 단 p가 0이면, q가 1이며;
    r은 1, 2 또는 3이고;
    u는 0, 1, 2 또는 3이다.
  8. 제7항에 있어서, 올리고펩타이드가
    a) AsnLysIleSerTyrGln｜Ser (서열 1),
    b) LysIleSerTyrGln｜Ser (서열 2),
    c) AsnLysIleSerTyrTyr｜Ser (서열 3),
    d) AsnLysAlaSerTyrGln｜Ser (서열 4),
    e) SerTyrGln｜SerSer (서열 5),
    f) LysTyrGln｜SerSer (서열 6),
    g) hArgTyrGln｜SerSer (서열 7),
    h) hArgChaGln｜SerSer (서열 8),
    i) TyrGln｜SerSer (서열 9),
    j) TyrGln｜SerLeu (서열 10),
    k) TyrGln｜SerNle (서열 11),
    l) ChgGln｜SerLeu (서열 12),
    m) ChgGln｜SerNle (서열 13),
    n) SerTyrGln｜Ser (서열 14),
    o) SerChgGln｜Ser (서열 15),
    p) SerTyrGln｜SerVal (서열 16),
    q) SerChgGln｜SerVal (서열 17),
    r) SerTyrGln｜SerLeu (서열 18),
    s) SerChgGln｜SerLeu (서열 19),
    t) HaaXaaSerTyrGln｜Ser (서열 20),
    u) HaaXaaLysTyrGln｜Ser (서열 21),
    v) HaaXaahArgTyrGln｜Ser (서열 22),
    w) HaaXaahArgChaGln｜Ser (서열 23),
    x) HaaTyrGln｜Ser (서열 24),
    y) HaaXaaSerChgGln｜Ser (서열 25) 및
    z) HaaChgGln｜Ser (서열 26)
    (여기서, Haa는 친수성 잔기로 치환된 사이클릭 아미노산이고, hArg는 호모아르기닌이며, Xaa는 어떠한 아미노산도 될 수 있고, Cha는 사이클로헥실알라닌이며, Chg는 사이클로헥실글리신이다) 중에서 선택된 아미노산 서열을 포함하는, 최대 100개 아미노산 잔기의 올리고머인 접합체 또는 이의 광학 이성체.
  9. 제8항에 있어서, Haa가 트랜스-4-하이드록시-L-프롤린인 접합체 또는 이의 광학 이성체.
  10. 제7항에 있어서, 올리고펩타이드 -R이
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro (서열 84),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerGly (서열 85),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar (서열 86),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro (서열 87),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerVal (서열 88),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSer-4-트랜스-L-Hyp (서열 89),
    Ac-AbuSerSerChgGlnSerPro (서열 90),
    하이드록시아세틸Abu-SerSerChgGlnSerPro (서열 91),
    아세틸3-PALSerSerChgGlnSerSerPro (서열 92),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerVal (서열 93),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerLeu (서열 94),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSer-4-트랜스-L-Hyp (서열 95),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerPro (서열 96),
    Ac-SerSerChgGlnSerGly (서열 98),
    Ac-SerSerChgGlnSerSer-4-트랜스-L-Hyp (서열 99),
    Ac-SerSerChgGlnSerSerPro (서열 100),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerAla (서열 103),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerChg (서열 104),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar (서열 105),
    Ac-SerSerChgGlnSerSerHyp (서열 106),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro (서열 107),
    Ac-AbuSerSerChgGlnSer(dSer)Pro (서열 108),
    Ac-AbuSerSerChgGlnSerSerPro (서열 109),
    Ac-SerSerChgGlnSerSerPro (서열 111),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChg(dGln)SerSerPro (서열 114),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChg(dGln)(dSer)SerPro (서열 115),
    Ac-SerChgGlnSerSerPro (서열 116),
    Ac-SerChgGlnSerSer-4-트랜스-L-Hyp (서열 117),
    Ac-SerChgGlnSerSerSar (서열 118),
    Ac-SerChgGlnSerSerAibPro (서열 119),
    Ac-SerChgGlnSerSerN-Me-Ala (서열 120),
    Ac-4-트랜스-L-HypSerSerChgGlnSerSerPip (서열 124) 및
    Ac-SerChgGlnSerSerN-Me-dA (서열 125)
    (여기서, Abu는 아미노부티르산이고, 4-트랜스-L-Hyp는 4-트랜스-L-하이드록시프롤린이며, Pip는 피페콜린산이고, 3,4-디Hyp는 3,4-디하이드록시프롤린이며, 3-PAL은 3-피리딜알라닌이고, Sar은 사르코신이며, Chg는 사이클로헥실글리신이다) 중에서 선택되는 접합체.
  11. 제7항에 있어서, 다음 화학식의 화합물 중에서 선택되는 접합체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 이성체.
    Figure 112003043454232-pct00041
    상기식에서,
    X는
    Figure 112003043454232-pct00042
    (서열 84)
    Figure 112003043454232-pct00043
    (서열 85)
    Figure 112003043454232-pct00044
    (서열 86)
    Figure 112003043454232-pct00045
    (서열 87)
    Figure 112003043454232-pct00046
    (서열 88)
    Figure 112003043454232-pct00047
    (서열 89)
    Figure 112003043454232-pct00048
    (서열 90)
    Figure 112003043454232-pct00049
    (서열 91)
    Figure 112003043454232-pct00050
    (서열 92)
    Figure 112003043454232-pct00051
    (서열 93) 또는
    Figure 112003043454232-pct00052
    (서열 94)
    이다.
  12. 제7항에 있어서, 다음 화학식의 접합체, 또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 광학 이성체.
    Figure 112000011142935-pct00053
  13. 삭제
  14. 약제학적 담체와 이에 분산된 치료학적 유효량의 제7항에 따른 화합물을 포함하는, 전립선 암 치료용 약제학적 조성물.
  15. 약제학적 담체와 이에 분산된 치료학적 유효량의 제11항의 화합물을 포함하는, 전립선 암 치료용 약제학적 조성물.
  16. 삭제
  17. 삭제
  18. 삭제
  19. 삭제
  20. 약제학적 담체와 이에 분산된 치료학적 유효량의 제7항에 따른 화합물을 포함하는, 양성 전립선 과형성증 치료용 약제학적 조성물.
  21. 약제학적 담체와 이에 분산된 치료학적 유효량의 제11항에 따른 화합물을 포함하는, 양성 전립선 과형성증 치료용 약제학적 조성물.
  22. 삭제
  23. 삭제
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