PL197006B1 - Koniugat do leczenia raka prostaty, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna i jej zastosowanie - Google Patents

Koniugat do leczenia raka prostaty, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna i jej zastosowanie

Info

Publication number
PL197006B1
PL197006B1 PL340768A PL34076898A PL197006B1 PL 197006 B1 PL197006 B1 PL 197006B1 PL 340768 A PL340768 A PL 340768A PL 34076898 A PL34076898 A PL 34076898A PL 197006 B1 PL197006 B1 PL 197006B1
Authority
PL
Poland
Prior art keywords
seq
ser
trans
cheese
hyp
Prior art date
Application number
PL340768A
Other languages
English (en)
Other versions
PL340768A1 (en
Inventor
Stephen F. Brady
Dong-Mei Feng
Victor M. Garsky
Original Assignee
Merck & Co Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB9804399.5A external-priority patent/GB9804399D0/en
Application filed by Merck & Co Inc filed Critical Merck & Co Inc
Publication of PL340768A1 publication Critical patent/PL340768A1/xx
Publication of PL197006B1 publication Critical patent/PL197006B1/pl

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/1013—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/10—Tetrapeptides
    • C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/1016—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/02—Linear peptides containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/06—Linear peptides containing only normal peptide links having 5 to 11 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides

Abstract

1. Koniugat do leczenia raka prostaty, zawieraj acy srodek cytotoksyczny alkaloid barwinka przy laczony do oligopeptydu, który to oligopeptyd zawiera sekwencj e aminokwasów o d lugo sci od 3 do 100 aminokwasów, która jest selektywnie proteolitycznie rozszczepiana przez wolny antygen swo- isty prostaty, przy czym srodkiem s lu zacym do przy laczenia jest ewentualnie przylaczenie poprzez lacznik chemiczny, i punkt przy laczenia oligopeptydu znajduje si e na tlenie w pozycji 4 cytotoksyczne- go alkaloidu barwinka, albo jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, przy czym srodek cytotoksyczny jest wybrany z grupy obejmuj acej nast epuj ace alkaloidy barwinka: a) winblastyna, b) 4-deacetylowinblastyna, c) winkrystyna, d) leurozydyna, i e) windezyna, lub ich izomery optyczne. 12. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, ze zawiera no snik farmaceutyczny i zdy- spergowan a w nim terapeutycznie skuteczn a ilo sc koniugatu okre slonego jak w zastrz. 1. 15. Zastosowanie kompozycji okre slonej jak w zastrz. 12 do wytwarzania leku do leczenia raka prostaty. PL PL PL PL

Description

RZECZPOSPOLITA POLSKA (12) OPIS PATENTOWY (19) PL (21) Numer zgłoszenia: 340768 (11) 197006 (13) B1
11» (22) Data zgłoszenia: 25.11.1998 (51) Int.Cl. C07K 14/47 (2006.01)
(86) Data i numer zgłoszenia międzynarodowego: A61K 38/17 (2006.01)
25.11.1998, PCT/US98/25358 A61K 47/48 (2006.01)
Urząd Patentowy (87) Data i numer publikacji zgłoszenia międzynarodowego: A61P 35/00 (2006.01)
Rzeczypospolitej Polskiej 10.06.1999, WO99/28345 PCT Gazette nr 23/99
Koniugat do leczenia raka prostaty, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna i jej zastosowanie
(30) Pierwszeństwo: 02.12.1997,US,60/067,110 (73) Uprawniony z patentu:
MERCK & CO., INC.,Rahway,US
02.03.1998,GB,9804399.5 (72) Twórca(y) wynalazku:
(43) Zgłoszenie ogłoszono: 26.02.2001 BUP 05/01 Stephen F. Brady,Rahway,US Dong-Mei Feng,Rahway,US Victor M. Garsky,Rahway,US
(45) O udzieleniu patentu ogłoszono: (74) Pełnomocnik: Sitkowska Jadwiga, PATPOL Sp. z o.o.
29.02.2008 WUP 02/08
(57) 1. Koniugat do leczenia raka prostaty, zawierający środek cytotoksyczny alkaloid barwinka przyłączony do oligopeptydu, który to oligopeptyd zawiera sekwencję aminokwasów o długości od 3 do 100 aminokwasów, która jest selektywnie proteolitycznie rozszczepiana przez wolny antygen swoisty prostaty, przy czym środkiem służącym do przyłączenia jest ewentualnie przyłączenie poprzez łącznik chemiczny, i punkt przyłączenia oligopeptydu znajduje się na tlenie w pozycji 4 cytotoksycznego alkaloidu barwinka, albo jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, przy czym środek cytotoksyczny jest wybrany z grupy obejmującej następujące alkaloidy barwinka:
a) winblastyna,
b) 4-deacetylowinblastyna,
c) winkrystyna,
d) leurozydyna, i
e) windezyna, lub ich izomery optyczne.
12. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera nośnik farmaceutyczny i zdyspergowaną w nim terapeutycznie skuteczną ilość koniugatu określonego jak w zastrz. 1.
15. Zastosowanie kompozycji określonej jak w zastrz. 12 do wytwarzania leku do leczenia raka prostaty.
PL 197 006 B1
Opis wynalazku
Tło wynalazku.
Oceniano, że w roku 1996 rak prostaty (gruczołu krokowego) zostanie zdiagnozowany u 317000 mężczyzn w Stanach Zjednoczonych Ameryki i na t ę chorobę umrze 42000 Amerykanów (Garnick, M.B. (1994), The Dilemmas of Prostate Cancer, Scientific American, kwiecień: 72-81). Tak więc rak prostaty to najczęściej diagnozowany nowotwór złośliwy (poza nowotworami skóry) u Amerykanów i druga wiodąca przyczyna (po raku płuc zgonów zwązanych z rakiem w tej grupie.
Antygen swoisty prostaty (PSA) to jednoniciowa glikoproteina 33 kDa, która jest wytwarzana niemal wyłącznie przez nabłonek prostaty ludzkiej i występuje w stężeniach 0,5 do 2,0 mg/ml w nasieniu ludzkim (Nadji, M., Taber, S.Z., Castro, A. i in. (1981) Cancer 48:1229; Papsidero, L., Kuriyama, M., Wang, M. i in. (1981). JNCI 66:37; Qui, S.D., Young, C.Y.F., Bihartz, D.L. i in. (1990), J. Urol. 144:1550; Wang, M.C., Yalenzuela, LA., Murphy, G.P. i in. (1979). Invest. Urol. 17:159). Pojedyncza jednostka węglowodanowa jest przyłączona przy reszcie asparaginy numer 45 i odpowiada za 2 do 3 kDa całkowitej masy cząsteczkowej. PSA to proteaza o specyficzności podobnej do chymotrypsyny (Christensson, A., Laurell, C.B., Lilja, H. (1990). Eur. J. Biochem. 194:755-763). Pokazano, że PSA odpowiada głównie za rozpuszczanie struktury żelowej tworzonej przy wytrysku nasienia przez proteolizę głównych białek w żelu utrzymującym nasienie, semenożeliny I i semenożeliny II oraz fibronektyny (Lilja, H. (1985). J. Clin. Invest. 76:1899; Lilja, H., Oldbring, J., Rannevik, G. i in. (1987). J. Clin. Invest. 80:281; McGee, R.S., Herr, J.C. (1988). Biol. Reprod. 39:499). Proteoliza białek tworzących żel za pośrednictwem PSA generuje kilka rozpuszczalnych fragmentów semenożeliny I i semenożeliny II oraz rozpuszczalnych fragmentów fibronektyny z upłynnieniem ejakulatu i uwolnieniem stopniowo ruchomych plemników (Lilja, H., Laurell, C.B. (1984). Scand. J. Clin. Lab. Invest. 44:447; McGee, R.S., Herr, J.C. (1987). Biol. Reprod. 37:431). Ponadto PSA może proteolitycznie rozkładać IGFBP-3 (białko insulinopodobne wiążące czynnik wzrostu 3) pozwalając IGF na pobudzanie specyficznie wzrostu komórek wydzielających PSA (Cohen i in., (1992) J. Glin. Endo. Meta. 75:1046-1053).
PSA skompleksowany z antychymotrypsyną alfa 1 jest dominującą postacią cząsteczkową PSA w surowicy i może odpowiadać za do 95% PSA wykrywanego w surowicy (Christensson, A., Bjork, T., Nilsson, O. i in. (1993). J. Urol. 150:100-105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991). Clin. Chem. 37:1618-1625; Stenman, U.H., Leinoven, J., Alfthan, H. i in. (1991). Cancer Res. 51:222-226). Tkanka prostaty (tkanka normalna, łagodnie rozrostowa, lub złośliwa) jest zaangażowana w uwalnianie głównie dojrzałej, enzymatycznie aktywnej postaci PSA, ponieważ ta postać jest wymagana do tworzenia kompleksu z antychymotrypsyną alfa 1 (Mast, A.E., Enghild, J.J., Pizzo, S.V. i in. (1991). Biochemistry 30:1723-1730; Perlmutter, D.H., Glover, G.I., Rivetna, M. i in. (1990). Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:3753-3757). Zatem uważa się, że w mikrootoczeniu komórek prostaty wydzielających PSA, PSA jest wytwarzany i wydzielany w swojej dojrzałej enzymatycznie aktywnej postaci nieskompleksowanej z żadną cząsteczką hamującą. PSA tworzy także trwałe kompleksy z makroglobuliną alfa 2, ale ponieważ powoduje to zamykanie PSA i zupełną utratę determinant antygenowych PSA, znaczenie tworzenia tego kompleksu w ustroju żywym jest niejasne. Wolna, nie skompleksowana postać PSA stanowi niewielką frakcję PSA w surowicy (Christensson, A., Bjork, T., Nilsson, O. i in. (1993). J. Urol. 150:100-105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991). Clin. Chem. 37:1618-1625). Wielkość tej postaci PSA w surowicy jest podobna do wielkości PSA w płynie nasiennym (Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991). Clin. Chem. 37:1618-1625), ale dotąd nie wiadomo, czy wolna postać PSA w surowicy może być proenzymem; rozszczepioną wewnętrznie, nieaktywną postacią dojrzałego PSA; czy też PSA wykazującym aktywność enzymu. Jednak nieprawdopodobne wydaje się, że wolna postać PSA w surowicy wykazuje aktywność enzymu, ponieważ istnieje znaczny (100 do 1000 krotnego) nadmiar molowy nieprzereagowanej antychymotrypsyny alfa 1 i makroglobuliny alfa 2 w surowicy w porównaniu z wykrywanymi w surowicy poziomami wolnej postaci PSA o wielkości 33 kDa (Christensson, A., Bjork, T., Nilsson, O. i in. (1993). J. Urol. 150:100-105; Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991). Clin. Chem. 37:1618-1625).
Pomiary PSA w surowicy są przydatne do kontroli leczenia gruczolakoraka prostaty (Duffy, M.S. (1989). Ann. Clin. Biochem. 26:379-387; Brawer, M.K. i Lange, P.H. (1989). Urol. Suppl. 5:11-16; Hara, M. i Kimura, H. (1989). J. Lab. Clin. Med. 113:541-548), chociaż stężenia PSA w surowicy większe od normalnego opisywano także w łagodnym rozroście prostaty i po urazie operacyjnym prostaty (Lilja, H., Christensson, A., Dahlen, U. (1991). Clin. Chem. 37:1618-1625). Wiadomo także, że przerzuty z prostaty wydzielają immunologicznie reaktywny PSA, ponieważ wysokie poziomy PSA w surowicy
PL 197 006 B1 można wykryć u pacjentów po wycięciu prostaty wykazujących rozległe przerzuty raka prostaty (Ford, T.F., Butcher, D.N., Masters, R.W. i in. (1985). Brit. J. Urology 57:50-55). Zatem związek cytotoksyczny, który mógłby być aktywowany przez aktywność proteolityczną PSA, powinien być swoisty dla komórek prostaty jak również swoisty dla przerzutów z prostaty wydzielających PSA.
W publikacjach WO 96/00503, WO 97/12624 i WO 97/14416 ujawniono koniugaty odszczepialnego oligopeptydu z alkaloidami barwinka, w których odszczepialny peptyd jest przyłączony do karbonylu w pozycji C-23, poprzez linker aminowy albo przez reakcję aminowego końca peptydu z grupą azydokarbonylową w pozycji C-23.
Przedmiotem niniejszego wynalazku są koniugaty chemiczne, które zawierają oligopeptydy mające sekwencje aminokwasów, które są selektywnie rozszczepiane proteolitycznie przez wolny antygen swoisty prostaty (PSA), oraz środek cytotoksyczny alkaloid barwinka. Koniugaty według wynalazku charakteryzują się przyłączeniem rozszczepialnego oligopeptydu do deacetylowanego atomu tlenu w pozycji 4 alkaloidu barwinka. Takie koniugaty są przydatne w leczeniu raka prostaty i łagodnego rozrostu prostaty (BPH).
Zatem przedmiotem wynalazku jest koniugat do leczenia raka prostaty, zawierający środek cytotoksyczny alkaloid barwinka przyłączony do oligopeptydu, który to oligopeptyd zawiera sekwencję aminokwasów o długości od 3 do 100 aminokwasów, która jest selektywnie proteolitycznie rozszczepiana przez wolny antygen swoisty prostaty, przy czym środkiem służącym do przyłączenia jest ewentualnie przyłączenie poprzez łącznik chemiczny, i punkt przyłączenia oligopeptydu znajduje się na tlenie w pozycji 4 cytotoksycznego alkaloidu barwinka, albo jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, przy czym środek cytotoksyczny jest wybrany z grupy obejmują cej nastę pują ce alkaloidy barwinka:
a) winblastyna,
b) 4-deacetylowinblastyna,
c) winkrystyna,
d) leurozydyna, i
e) windezyna, lub ich izomery optyczne.
Korzystny środek cytotoksyczny stanowi 4-deacetylowinblastyna.
Takie koniugaty zawierają oligopeptyd związany kowalencyjnie, ewentualnie poprzez łącznik chemiczny, z alkaloidem barwinka jako środkiem cytotoksycznym. Punkt przyłączenia oligopeptydu do alkaloidu barwinka znajduje się na atomie tlenu w pozycji 4 alkaloidu barwinka. Rozumie się, że te alkaloidy barwinka, które mają ugrupowanie acetylowe na atomie tlenu w pozycji 4, przed wytworzeniem koniugatów według niniejszego wynalazku muszą najpierw zostać zdeacetylowane. Oligopeptydy są wybrane z oligomerów, które są selektywnie rozpoznawane przez wolny antygen swoisty prostaty (PSA) i mogą być proteolitycznie rozszczepiane przez aktywność enzymatyczną wolnego antygenu swoistego prostaty. Takie połączenie oligopeptydu i środka cytotoksycznego można określać jako koniugat.
Przedmiotem wynalazku jest także koniugat o wzorze la:
PL 197 006 B1 w którym:
oligopeptyd oznacza oligopeptyd o długości od 3 do 100 aminokwasów, który jest specyficznie rozpoznawany przez wolny antygen swoisty prostaty (PSA) i jest zdolny do ulegania rozszczepianiu proteolitycznemu przez aktywność enzymatyczną wolnego antygenu swoistego prostaty,
XL jest wybrany z grupy obejmującej: wiązanie,
-C(O)-(CH2)uW-(CH2)u-O i -C(O)-(CH2)u-W-(CH2)u-NH-;
R jest wybrany z grupy obejmują cej a) atom wodoru, b) (C=O)R1a,
c)
d)
e)
f) etoksyskwaran; i
g) grupę kotyninylową;
R1 i R2 są niezależnie wybrane z grupy obejmującej: atom wodoru, grupę OH, grupę C1-C6-alkilową, grupę C1-C6-alkoksylową, grupę C1-C6-aralkilową i grupę arylową;
R1a oznacza grupę C1-C6-alkilową, hydroksylowaną grupę C3-C8-cykloalkilową, polihydroksylowaną grupę C3-C8-cykłoalkilową, grupę hydroksyloarylową, grupę polihydroksyloarylową albo grupę arylową, oznacza atom wodoru, grupę (C1-C3-alkil)-CO, albo chloro-podstawioną grupę (C1-C3-alkil)-CO;
W jest wybrany z grupy obejmującej grupę C1-C5-alkilową o łańcuchu prostym albo rozgałęzioną, grupę cyklopentylową, grupę cykloheksylową, grupę cykloheptylową albo grupę bicyklo[2.2.2]oktanylową;
n oznacza 1, 2, 3 albo 4;
p oznacza zero albo liczbę cał kowitą mię dzy 1 i 100; q oznacza 0 albo 1, z zastrzeż eniem, ż e jeż eli p oznacza zero, to q oznacza 1; r oznacza 1, 2 albo 3;
t oznacza 3 albo 4; u oznacza 0, 1, 2 albo 3, albo jego farmaceutycznie dopuszczalna sól albo izomer optyczny.
Przedmiotem wynalazku jest także kompozycja farmaceutyczna charakteryzująca się tym, że zawiera nośnik farmaceutyczny i zdyspergowaną w nim terapeutycznie skuteczną ilość koniugatu określonego jak powyżej.
Przedmiotem wynalazku jest także zastosowanie kompozycji określonej jak powyżej do wytwarzania leku do leczenia raka prostaty.
W idealnym przypadku, aktywność cytotoksyczna alkaloidu barwinka jest znacznie zmniejszona lub nieobecna, gdy oligopeptyd zawierający miejsce rozszczepienia proteolitycznego przez PSA przyłączony jest, albo bezpośrednio albo poprzez łącznik chemiczny, do alkaloidu barwinka i jest nienaruszony. Także idealnie, aktywność cytotoksyczna alkaloidu barwinka jest znacznie zwiększona lub powraca do aktywności niezmodyfikowanego alkaloidu barwinka przy rozszczepieniu proteolitycznym przyłączonego oligopeptydu na wiązaniu peptydowym, w którym oligopeptyd jest rozszczepiany przez wolny PSA, i jakiejkolwiek następnej hydrolizie przez aminopeptydazy endogenne.
PL 197 006 B1
Ponadto, korzystne jest, żeby oligopeptyd był wybrany z grupy obejmującej oligopeptydy, które nie są rozszczepiane albo są rozszczepiane znacznie wolniej w obecności enzymów proteolitycznych innych niż PSA, takie jak enzymy endogenne surowicy ludzkiej, przed rozszczepieniem przez wolny PSA, w porównaniu z rozszczepieniem oligopeptydów w obecności wolnego enzymatycznie aktywnego PSA. Odkryto, że aminokwas w punkcie przyłączenia oligopeptydu do alkaloidu barwinka lub ewentualny łącznik to korzystnie aminokwas drugorzędowy, wybrany z grupy obejmującej prolinę, 3-hydroksyprolinę, 3-fluoroprolinę, kwas pipekolinowy, kwas 3-hydroksypipekolinowy, 2-azetydynę, 3-hydroksy-2-azetydynę, sarkozynę i tym podobne. Korzystniej, aminokwas w punkcie przyłączenia oligopeptydu do alkaloidu barwinka lub ewentualnego łącznika oznacza aminokwas cykliczny, wybrany z grupy obejmującej prolinę, 3-hydroksyprolinę, 3-fluoroprolinę, kwas pipekolinowy, kwas 3-hydroksypipekolinowy, 2-azetydynę, 3-hydroksy-2-azetydynę i tym podobne.
Z powyższych przyczyn, pożądane jest, żeby oligopeptyd zawierał krótką sekwencję peptydową, korzystnie mniejszą niż dziesięć aminokwasów. Najkorzystniej oligopeptyd zawiera siedem lub sześć aminokwasów. Ze względu na to, że koniugat korzystnie zawiera krótką sekwencję aminokwasową, na rozpuszczalność koniugatu może mieć wpływ w większym stopniu ogólnie hydrofobowy charakter składnika środka cytotoksycznego wchodzących w skład koniugatu. Zatem do sekwencji oligopeptydowej można włączyć aminokwasy z podstawnikami hydrofilowymi albo można wybrać grupy zabezpieczające N-koniec w celu skompensowania lub zmniejszenia takiego hydrofobowego wkładu środka cytotoksycznego.
Chociaż nie jest to konieczne dla stosowania w praktyce tego aspektu wynalazku, to korzystnym wykonaniem niniejszego wynalazku jest koniugat, w którym oligopeptyd, oraz ewentualny łącznik chemiczny, jeżeli jest obecny, są odłączane od środka cytotoksycznego przez aktywność proteolityczną wolnego PSA i jakichkolwiek innych natywnych enzymów proteolitycznych obecnych w bliskości tkanki, skutkiem tego prezentując środek cytotoksyczny lub środek cytotoksyczny z zatrzymaną częścią jednostki oligopeptydu/łącznika, ale pozostający cytotoksycznym, środowisku fizjologicznemu w miejscu rozszczepienia proteolitycznego. Wynalazkiem obję te są takż e farmaceutycznie dopuszczalne sole koniugatów.
Rozumie się, że oligopeptyd, który jest sprzężony ze środkiem cytotoksycznym, czy to przez bezpośrednie wiązanie kowalencyjne czy przez łącznik chemiczny, nie musi być oligopeptydem, który ma największe rozpoznawanie przez wolny PSA i jest najłatwiej proteolitycznie rozszczepiany przez wolny PSA. Tak więc oligopeptyd, który jest wybrany do włączenia do takiej kompozycji przeciwrakowej, będzie wybierany ze względu zarówno na jego wybiórcze rozszczepianie proteolityczne przez wolny PSA jak i na aktywność cytotoksyczną koniugatu środka cytotoksycznego-reszty proteolitycznej (lub, co wydawałoby się sytuacją idealną, niezmodyfikowanego środka cytotoksycznego), który powstaje wskutek takiego rozszczepiania. Określenie wybiórcze stosowane w związku z rozszczepianiem proteolitycznym przez PSA oznacza większą szybkość rozszczepiania składnika oligopeptydowego według niniejszego wynalazku przez wolny PSA w odniesieniu do rozszczepiania oligopeptydu, który zawiera przypadkową sekwencję aminokwasów. Zatem składnik oligopeptydowy według niniejszego wynalazku jest korzystnym substratem wolnego PSA. Określenie selektywnie wskazuje także, że oligopeptyd jest proteolitycznie rozszczepiany przez wolny PSA między dwoma określonymi aminokwasami w oligopeptydzie.
Składniki oligopeptydowe według niniejszego wynalazku są selektywnie rozpoznawane przez wolny antygen swoisty prostaty (PSA) i mogą być proteolitycznie rozszczepiane przez aktywność enzymatyczną wolnego antygenu swoistego prostaty. Takie oligopeptydy zawierają oligomer wybrany z grupy obejmują cej:
PL 197 006 B1
a) AsnLysIleSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW. i),
b) LysIleSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW. 2),
c) AsnLysIleSerTyrTyr | Ser (NR ID.SEKW. 3),
d) AsnLysAlaSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW. 4),
e) SerTyrGln | SerSer (NR ID.SEKW. 5);
f) LysTyrGln | SerSer (NR ID.SEKW. 6);
g) hArgTyrGln | SerSer (NR ID.SEKW. 7);
h) hArgChaGln | SerSer (NR ID.SEKW. 8);
i) TyrGln | SerSer (NR ID.SEKW. 9);
j) TyrGln | SerLeu (NR ID.SEKW. 10);
k) TyrGln | SerNle (NR ID.SEKW. u);
1) ChgGln | SerLeu (NR ID.SEKW. 12);
m) ChgGln | SerNle (NR ID.SEKW. 13);
n) SerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW. 14);
o) SerChgGln | Ser (NR ID.SEKW. 15);
p) SerTyrGln | SerVal (NR ID.SEKW. 16);
q) SerChgGln | SerVal (NR ID.SEKW. 17);
r) SerTyrGln | SerLeu (NR ID.SEKW. 18);
s) SerChgGln | SerLeu (NR ID.SEKW. 19);
t) HaaXaaSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW. 20);
u) HaaXaaLysTyrGln | Ser (NR ID.SEKW. 21);
v) HaaXaahArgTyrGln | Ser (NR ID.SEKW. 22);
w) HaaXaahArgChaGln | Ser (NR ID.SEKW. 23);
x) HaaTyrGln | Ser (NR ID.SEKW. 24);
y) HaaXaaSerChgGln | Ser (NR ID.SEKW : 25);
z) HaaChgGln | Ser (NR ID.SEKW : 26);
gdzie Haa oznacza aminokwas cykliczny podstawiony ugrupowaniem hydrofilowym, hArg oznacza homoargininę, Xaa oznacza dowolny aminokwas, Cha oznacza cykloheksyloalaninę i Chg oznacza cykloheksyloglicynę.
W wykonaniu niniejszego wynalazku oligopeptyd stanowi oligomer, który jest wybrany z grupy obejmującej:
a)
b)
c)
d)
e) i)
h)
i)
j)
k)
l)
m)
SerSerTyrGln / Ser Ala (NR ID.SEKW.: 27);
SerSerChgGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 28);
SerSerTyrGln | SerAla (NR ID.SEKW.: 29);
SerSerChgGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 30);
4-HypSerSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 31);
4-HypSerSerChgGln | Ser (NR ID.SEKW.: 32);
AlaSerTyrGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 33);
AlaSerChgGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 34);
AlaSerTyrGln | SerAla (NR ID.SEKW.: 35);
AlaSerChgGln | SerAla (NR ID.SEKW.: 36);
4-HypAlaSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 37);
4-HypAlaSerChgGln | Ser (NR ID.SEKW.: 38);
PL 197 006 B1 gdzie 4-Hyp oznacza 4-hydroksyprolinę, Xaa oznacza dowolny aminokwas, hArg oznacza homoargininę, Cha oznacza cykloheksyloalaninę i Chg oznacza cykloheksyloglicynę.
W korzystniejszym wykonaniu niniejszego wynalazku, oligopeptyd stanowi oligomer wybrany z grupy obejmują cej:
SerSerChgGln | SerAlaPro
SerSerChgGln | SerSerPro
SerSerChgGln | SerAla4-Hyp
SerSerChgGln | SerSer4-Hyp
AbuSerSerChgGln | SerPro
AbuSerSerChgGln | Ser4-Hyp
SerSerSerChgGln | SerLeuPro
SerSerSerChgGln | SerValPro
SerAlaSerChgGln | SerLeu4-Hyp SerAlaSerChgGln | SerValPro (N-metylo-Ser) SerSerChgGln | SerLeuPip (N-metylo-Ser)SerSerChgGln | SerValPip 4-HypSerSerTyrGln | SerSerPro 4-HypSerSerTyrGln | SerSer4-Hyp 4-HypSerSerTyrGln | SerSerPro 4-HypSerSerTyrGln | SerSerSer 4-HypSerSerTyrGln | Ser4-Hyp 4-HypSerSerChgGln | SerPro 4-HypSerSerChgGln | SerSerPro 4-HypSerSerChgGln | SerLeu 4-HypSerSerChgGln | SerVal 4-HypAlaSerChgGln | SerValPro 4-HypAlaSerChgGln | SerserPip 4-HypSerSerChgGln | Ser 4-HypSerSerChgGln | SerGly SerSerChgGln | SerGly 3-PalSerSerTyrGln | Ser4-Hyp 3-PalSerSerChgGln | SerPro (3,4-DiHyp)SerSerTyrGln | SerSerPro (3,4-DiHyp)SerSerTyrGln | SerSer4-Hyp (NR ID.SEKW.: 39); (NR ID.SEKW.: 40); (NR ID.SEKW.: 41); (NR ID.SEKW.: 42); (NR ID.SEKW.: 43); (NR ID.SEKW.: 44); (NR ID.SEKW.: 45); (NR ID.SEKW.: 46); (NR ID.SEKW.: 47); (NR ID.SEKW.: 48); (NR ID.SEKW.: 49); (NR ID.SEKW.: 50); (NR ID.SEKW.: 51); (NR ID.SEKW.: 52); (NR ID.SEKW.: 53); (NR ID.SEKW.: 54); (NR ID.SEKW.: 55); (NR ID.SEKW.: 56); (NR ID.SEKW.: 57); (NR ID.SEKW.: 58); (NR ID.SEKW.: 59); (NR ID.SEKW.: 60); (NR ID.SEKW.: 61); (NR ID.SEKW.: 62); (NR ID.SEKW.: 63); (NR ID.SEKW.: 64); (NR ID.SEKW.: 65); (NR ID.SEKW.: 66); (NR ID.SEKW.: 67); i (NR ID.SEKW.: 68);
gdzie Abu oznacza kwas aminomasłowy, 4-Hyp oznacza 4-hydroksyprolinę, Pip oznacza kwas pipekolinowy, 3,4-DiHyp oznacza 3,4-dihydroksyprolinę, 3-Pal oznacza 3-pirydyloalaninę, Sar oznacza sarkozynę i Chg oznacza cykloheksyloglicynę.
Zwrot oligomery, które zawierają sekwencję aminokwasów tak jak stosowany powyżej, i w innych miejscach w szczegółowym opisie wynalazku, opisuje oligomery mające od 3 do 100 reszt aminokwasów, które zawierają w swojej sekwencji aminokwasów konkretną opisaną sekwencję aminokwasów, a przeto są proteolitycznie rozszczepiane przez wolny PSA wewnątrz opisanej sekwencji aminokwasów. Korzystnie, oligomer liczy od 5 do 10 reszt aminokwasów. Tak więc, na przykład, następujący oligomer:
hArgSerAlaChgGln | SerLeu (NR ID.SEKW.: 69);
zawiera sekwencję aminokwasów:
PL 197 006 B1
ChgGln | SerLeu (NR ID.SEKW.: 12); a więc leż y w zakresie niniejszego wynalazku.
A oligomer:
hArgSer4-HypChgGln | SerLeu (NR ID.SEKW.: 70);
zawiera sekwencję aminokwasów:
4-HypChgGln | SerLeu (NR ID. SEKW.: 71);
a więc leży w zakresie niniejszego wynalazku. Rozumie się, że takie oligomery nie obejmują semenożeliny I i semenożeliny II.
Specjalista w dziedzinie chemii peptydów łatwo uzna, że pewne aminokwasy w oligopeptydzie biologicznie aktywnym mogą być zastąpione przez inne aminokwasy homologiczne, izosteryczne i/lub izoelektronowe, gdzie aktywność biologiczna pierwotnego oligopeptydu została zachowana w oligopeptydzie zmodyfikowanym. Można także wykorzystać pewne aminokwasy nienaturalne i zmodyfikowane naturalne w celu zastąpienia odpowiadającego aminokwasu naturalnego w oligopeptydach według niniejszego wynalazku. Tak więc, na przykład, tyrozynę można zastąpić przez 3-jodotyrozynę, 2-metylotyrozynę, 3-fluorotyrozynę, 3-metylotyrozynę i jej podobne. Dodatkowo na przykład, lizyna może być zastąpiona przez N'-(2-imidazolilo)lizynę i tej podobne. Następująca lista zastąpień aminokwasów ma być ilustracyjna, i nie jest ograniczająca:
Aminokwas pierwotny Aminokwas(y) zastę pczy(e)
Ala Gly, Abu
Arg Lys, Ornityna
Asn Gln
Asp Glu
Glu Asp
Gln Asn
Gly Ala
Ile Val, Leu, Met, Nle, Nva
Leu Ile, Val, Met, Nle, Nva
Lys Arg, Ornityna
Met Leu, Ile, Nle, Val
Ornityna Lys, Arg
Phe Tyr, Trp
Ser Thr, Abu, Hyp, Ala
Thr Ser, Abu, Hyp
Trp Phe, Tyr
Tyr Phe, Trp
Val Leu, Ile, Met, Nle, Nva
Tak więc, na przykład, następujące oligopeptydy mogą zostać zsyntetyzowane technikami zna-
nymi specjalistom i należy oczekiwać, że będą proteolitycznie rozszczepiane przez wolny PSA:
AsnArglleSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 72)
AsnLysValSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 73)
AsnLysMetSerTyrGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 74)
AsnLysLeuSerTyrGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 75)
AsnLysIleSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 76)
GlnLysIleSerTyrGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 77)
Asn4-HypIleSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 78)
Asn4-HypValSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 79)
4-HypAlaSerTyrGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 80)
(3,4-dihydroksyprolina)AlaSerTyrGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 81)
3-hydroksyprolinaSerChgGln | Ser (NR ID.SEKW.: 82)
4-HypAlaSerChgGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 83)
PL 197 006 B1
Symbol | w sekwencji aminokwasów wskazuje punkt w tej sekwencji, gdzie oligopeptyd jest proteolitycznie rozszczepiany przez wolny PSA.
Związki według niniejszego wynalazku mogą mieć centra asymetryczne i występować jako racematy, mieszaniny racemiczne, i jako osobne diastereomery, przy czym niniejszym wynalazkiem objęte są wszystkie możliwe izomery, w tym izomery optyczne. O ile nie podano inaczej, to rozumie się, że nazwane aminokwasy mają naturalną stereokonfigurację L.
Aminokwasy, które są ujawnione w niniejszym wynalazku, są identyfikowane przez zwyczajowe skróty, zarówno trójliterowe, jak i jednoliterowe, jak wskazano poniżej:
Alanina
Arginina
Asparagina
Kwas asparaginowy
Asparagina lub Kwas asparaginowy
Cysteina
Glutamina
Kwas glutaminowy
Glutamina lub Kwas glutaminowy
Glicyna
Histydyna
Izoleucyna
Leucyna
Lizyna
Metionina
Fenyloalanina
Prolina
Seryna
Treonina
Tryptofan
Tyrozyna
Walina
Ala A Arg R Asn N Asp D Asx B Cys C Gln Q Glu E Glx Z Gly G His H Ile I Leu L Lys K Met M Phe F Pro P Ser S Thr T Trp W Tyr Y Val V
Następujące skróty stosuje się w opisie i na figurach dla oznaczenia wskazanych aminokwasów i ugrupowań :
hR lub hArg: homoarginina
hY lub hTyr: homotyrozyna
Cha: cykloheksyloalanina
Amf: 4-aminometylofenyloalanina
DAP: 1,3-diaminopropyl
DPL: 2-(4,6-dimetylopirymidynylo)lizyna
(imidazolilo)K: N'-(2-imidazolilo)lizyna
Me2PO3-Y: O-dimetylofosfotyrozyna
O-Me-Y: O-metylotyrozyna
TIC: kwas 1,2,3,4-tetrahydro-3-izochinolinokarboksylowy
DAP: 1,3-diaminopropan
TFA: kwas trifluorooctowy
AA: kwas octowy
3PAL: 3-pirydyloalanina
4-Hyp: 4-hydroksyprolina
dAc-Vin: 4-deacetylowinblastyna
Pip: kwas pipekolinowy
Abu: kwas 2-aminomasłowy
Nva: norwalina
Wiadomo w technice, i rozumie się w niniejszym wynalazku, że peptydylowe środki terapeutyczne takie jak koniugaty oligopeptyd-środek cytotoksyczny według niniejszego wynalazku korzystnie mają końcowe ugrupowanie aminowe podstawnika oligopeptydowego zabezpieczone odpowiednią
PL 197 006 B1 grupą zabezpieczającą, taką jak grupa acetylowa, benzoilowa, piwaloilowa i tym podobne. Takie zabezpieczenie końcowej grupy aminowej zmniejsza lub eliminuje rozkład enzymatyczny takich peptydylowych środków terapeutycznych przez działanie aminopeptydaz egzogennych, które są obecne w osoczu krwi zwierząt ciepłokrwistych. Takie grupy zabezpieczające obejmują także hydrofilowe grupy zabezpieczające, które wybiera się na podstawie obecności funkcji hydrofilowych. Grupy zabezpieczające, które zwiększają hydrofilowość koniugatów, a więc zwiększają rozpuszczalność koniugatów w wodzie, obejmują, ale bez ograniczenia do nich, hydroksylowane grupy alkanoilowe, polihydroksylowane grupy alkanoilowe, glikol polietylenowy, glikozylany, cukry i etery koronowe. N-Końcowe nienaturalne ugrupowania aminokwasowe mogą także polepszać taki rozkład enzymatyczny przez aminopeptydazy egzogenne.
Korzystnie N-końcowa grupa zabezpieczająca jest wybrana z grupy obejmującej
a) grupę acetylowa;
b)
c)
d) gdzie:
R1 i R2 są niezależnie wybrane z grupy obejmującej: a) atom wodoru,
b) niepodstawioną lub podstawioną grupę arylową, niepodstawiony lub podstawiony pierścień heterocykliczny, grupę C3-C10-cykloalkilową, grupę C2-C6-alkenylową, grupę C2-C6-alkinylową, atom chlorowca, grupę C1-C6-perfluoroalkilową, R3O-, R3C(O)NR3-, (R3)2NC(O)-, R32N-C(NR3)-, R4S(O)2NH, CN, NO2, R3C(O)-, N3, -N(R3)2, lub R4OC(O)NR3-,
c) niepodstawioną grupę C1-C6-alkilową,
d) podstawioną grupę C1-C6-alkilową, gdzie podstawnik podstawionej grupy C1-C5-alkilowej jest wybrany z grupy obejmującej niepodstawioną lub podstawioną grupę arylową, niepodstawiony lub podstawiony pierścień heterocykliczny, grupę C3-C10-cykloalkilową, grupę C2-C6-alkenylową, grupę C2-C6-alkinylową, R3O-, R4S(O)2NH, R3C(O)NR3-, (R3)2NC(O)-, R32N-C(NR3)-, CN, R3C(O)-, N3, -N(R3)2, i R4OC(O)-NR3-; lub
R1 i R2 są połączone tworząc -(CH2)S -, gdzie jeden z atomów węgla jest ewentualnie zastąpiony przez ugrupowanie wybrane z grupy obejmującej: O, S(O)m, -NC(O)-, NH i -N(COR4)-;
R3 jest wybrany z grupy obejmującej: atom wodoru, grupę arylową, podstawioną grupę arylową, pierścień heterocykliczny, podstawiony pierścień heterocykliczny, grupę C1-C6-alkilową i grupę C3-C10-cykloalkilową;
R4 jest wybrany z grupy obejmującej: grupę arylową, podstawioną grupę arylową, pierścień heterocykliczny, podstawiony pierścień heterocykliczny, grupę C1-C6-alkilową i grupę C3-C10-cykloalkilową;
m oznacza 0, 1 lub 2; n oznacza 1, 2, 3 lub 4;
p oznacza zero lub liczbę całkowitą między 1 i 100; i q oznacza 0 lub 1, z zastrzeż eniem, ż e jeżeli p oznacza zero, to q oznacza 1; i r oznacza 1, 2 lub 3;
s oznacza 3, 4 lub 5.
PL 197 006 B1
Niektóre z oligopeptydów w koniugatach według niniejszego wynalazku zawierają aminokwas cykliczny podstawiony ugrupowaniem hydrofilowym, poprzednio oznaczany określeniem Haa, który
w którym:
R5 jest wybrany z grupy obejmującej HO- i grupę C1-C6-alkoksylową;
R6 jest wybrany z grupy obejmującej atom wodoru, atom chlorowca, grupę C1-C6-alkilową, HOi grupę C1-C6-alkoksylową; i t oznacza 3 lub 4.
Struktura
oznacza cykliczne ugrupowanie aminowe mające w pierścieniu 5 lub 6 członów, takie jak amina cykliczna, która może być ewentualnie skondensowana z pierścieniem fenylowym lub cykloheksylowym. Przykłady takiego cyklicznego ugrupowania aminowego obejmują, ale nie ograniczając się do tego, następujące szczególne struktury:
Koniugaty według niniejszego wynalazku mogą mieć centra asymetryczne i występować jako racematy, mieszaniny racemiczne, i jako osobne diastereomery, przy czym niniejszym wynalazkiem objęte są wszystkie możliwe izomery, w tym izomery optyczne. Gdy którakolwiek zmienna (np. grupa arylowa, pierścień heterocykliczny, R3 itp.) występuje więcej niż raz w którymkolwiek składniku, to jej definicja przy każdym wystąpieniu jest niezależna od każdego innego wystąpienia. Na przykład, HO(CR1R2)2- oznacza HOCH2CH2-, HOCH2CH(OH)-, HOCH(CH3)CH(OH)-, itp. Połączenia podstawników i/lub zmiennych są dopuszczalne tylko wtedy, jeżeli takie połączenia dają trwałe związki.
Stosowane niniejszym określenie grupa alkilowa i alkilowa część grupy aralkilowej i podobne określenia, ma obejmować nasycone alifatyczne grupy węglowodorowe zarówno rozgałęzione jak i o łańcuchu prostym mające określoną liczbę atomów węgla; grupa alkoksylowa oznacza grupę alkilową o wskazanej liczbie atomów węgla przyłączoną przez mostek tlenowy.
Stosowane niniejszym określenie grupa cykloalkilowa ma obejmować niearomatyczne cykliczne grupy węglowodorowe mające określoną liczbę atomów węgla. Przykłady grup cykloalkilowych obejmują grupę cyklopropylową, cyklobutylową, cyklopentylową, cykloheksylową i tym podobne.
Grupy alkenylowe obejmują grupy mające określoną liczbę atomów węgla i mające jedno lub kilka wiązań podwójnych.
Przykłady grup alkenylowych obejmują grupę winylową, allilową, izopropenylową, pentenylową, heksenylową, heptenylową, cyklopropenylową, cyklobutenylową, cyklopentenylową, cykloheksenylo12
PL 197 006 B1 wą, 1-propenylową, 2-butenylową, 2-metylo-2-butenylową, izoprenylową, farnezylową, geranylową, geranylogeranylową i tym podobne.
Grupy alkinylowe obejmują grupy mając określoną liczbę atomów węgla i mające jedno wiązanie potrójne. Przykłady grup alkinylowych obejmują grupę acetylenową, 2-butynylową, 2-pentynylową, 3-pentynylową i tym podobne.
Stosowane niniejszym określenia atom chlorowca lub chlorowiec oznaczają fluor, chlor, brom i jod.
Stosowane niniejszym określenie grupa arylowa i arylowa część grupy aralkilowej i aroilowej, ma oznaczać dowolny trwały monocykliczny lub bicykliczny pierścień węglowy mający do 7 członów w każ dym pierś cieniu, w którym co najmniej jeden pierś cień jest aromatyczny. Przyk ł ady takich elementów arylowych obejmują grupę fenylową, naftylową, tetrahydronaftylową, indanylową, bifenylową, fenantrylową, antrylową lub acenaftylową.
Stosowane tu określenie pierścień heterocykliczny oznacza trwały 5- do 7-członowy monocykliczny lub trwały 8- do 11-członowy bicykliczny pierścień heterocykliczny, który jest albo nasycony albo nienasycony, i który składa się z atomów węgla i od jednego do czterech heteroatomów wybranych z grupy obejmującej N, O, i S, i obejmuje dowolną grupę bicykliczną, w której dowolny z wyżej zdefiniowanych pierścieni heterocyklicznych jest skondensowany z pierścieniem benzenowym. Pierścień heterocykliczny może być przyłączony do dowolnego heteroatomu lub atomu węgla, który powoduje stworzenie trwałej struktury. Przykłady takich elementów heterocyklicznych obejmują, ale nie ograniczając się do tego, grupę azepinylową, benzimidazolilową, benzizoksazolilową, benzofurazanylową, benzopiranylową, benzotiopiranylową, benzofurylową, benzotiazolilową, benzotienylową, ben-zoksazolilową, chromanylową, cynnolinylową, dihydrobenzofurylową, dihydrobenzotienylową, dihydrobenzotiopiranylową, dihydrobenzotiopiranylosulfonową, furylową, imidazolidynylową, imidazolinylową, imidazolilową, indolinylową, indolilową, izochromanylową, izoindolinylową, izochinolinylową, izotiazolidynylową , izotiazolilową, izotiazolidynylową, morfolinylową, naftyrydynylową, oksadiazolilową, 2-oksoazepinylową, oksazolilową, 2-oksopiperazynylową, 2-oksopiperydynylową, 2-oksopirolidynylową, piperydylową, piperazynylową, pirydylową, pirazynylową, pirazolidynylową, pirazolilową, pirydazynylową, pirymidynylową, pirolidynylową, pirolilową, chinazolinylową, chinolinylową, chinoksalinylową, tetrahydrofurylową, tetrahydroizochinolinylową, tetrahydrochinolinylową, tiamorfolinylową, tiamorfolinylosulfotlenek, tiazolilową, tiazolinylową, tienofurylową, tienotienylową i tienylową.
Stosowane tu określenia podstawiona grupa C1-C8-alkilowa, podstawiona grupa arylowa i podstawiony pierścień heterocykliczny obejmują ugrupowania zawierające od 1 do 3 podstawników oprócz punktu przyłączenia do reszty związku. Takie podstawniki dodatkowe są wybrane z grupy obejmującej F, Cl, Br, CF3, NH2, grupę N(C1-C6-alkil)2, NO2, CN, (C1-C6-alkil)O-, -OH, (C1-C6-alkil)-S(O)m-, (C1-C6-alkil)C(O)NH-, H2N-C(NH)-, (C1-C6-alkil)C(O)-, (C1-C6-alkil)OC(O)-, N3, (C1-C6-alkil)-OC(O)NH- i C1-C20-alkilową.
Gdy R1 i R2 są połączone tworząc -(CH2)S-, to tak zdefiniowane ugrupowania cykliczne i ugrupowania cykliczne zawierające heteroatom obejmują, ale nie ograniczają się do tego:
PL 197 006 B1
Stosowane tu określenie hydroksylowane oznacza podstawienie na możliwym do podstawienia atomie węgla układu pierścienia przez ugrupowanie hydroksylowe. Stosowane tu określenie polihydroksylowane oznacza podstawienie na dwóch lub więcej możliwych do podstawienia atomach węgla układu pierścienia metodą 2, 3 lub 4 ugrupowania hydroksylowe.
Stosowane tu określenie PEG oznacza pewne podstawniki zawierające glikol polietylenowy, mające oznaczoną liczbę podjednostek etylenoksylowych. Tak więc określenie PEG(2) oznacza
Stosowane tu określenie grupa (d)-(2,3-dihydroksypropionylowa) oznacza następującą strukturę:
Stosowane tu określenie grupa (2R,3S) 2,3,4-trihydroksy-butanoilowa oznacza następującą strukturę:
Stosowane tu określenie grupa chinylowa oznacza następującą strukturę:
lub jej diasteromer.
Stosowane tu określenie grupa kotyninylowa oznacza następującą strukturę:
lub jej diasteromer.
PL 197 006 B1
Stosowane tu określenie grupa galusylowa oznacza, następującą strukturę:
Stosowane tu określenie 4-etoksyskwaran oznacza następującą strukturę:
Środek cytotoksyczny, który jest wykorzystywany w koniugatach według niniejszego wynalazku, można wybrać z grupy obejmującej alkaloidy barwinka. Szczególnie przydatni członkowie tej klasy obejmują, na przykład, alkaloid barwnika wybrany z grupy obejmującej winblastynę, winkrystynę, leurozydynę, windezynę, winorelbinę, nawelbinę, leurozynę i tym podobne lub ich izomery optyczne. Rozumie się, że koniugaty według niniejszego wynalazku mają przyłączenie oligopeptydu przez atom tlenu przyłączony do pozycji C-4 alkaloidu barwinka. Zatem, pewne z alkaloidów barwinka mające ugrupowanie acetylowe na tym tlenie przed sprzężeniem z oligopeptydem (lub ewentualną jednostką łącznika) muszą najpierw zostać zdeacetylowane. Ponadto, specjalista może dokonać modyfikacji chemicznych w pożądanym środku cytotoksycznym dla ułatwienia reakcji tego związku w celu wytwarzania koniugatów według wynalazku.
Koniugat oligopeptyd-środek cytotoksyczny według niniejszego wynalazku, w którym środek cytotoksyczny oznacza korzystny środek cytotoksyczny 4-O-deacetylowinblastynę, może być opisany poniższym wzorem ogólnym la:
w którym:
oligopeptyd oznacza oligopeptyd, który jest specyficznie rozpoznawany przez wolny antygen swoisty prostaty (PSA) i jest zdolny do ulegania rozszczepianiu proteolitycznemu przez aktywność enzymatyczną wolnego antygenu swoistego prostaty,
XL jest wybrany z grupy obejmującej: wiązanie,
-C(O)-(CH2)u-W-(CH2)u-O - i -C(O)-(CH2)u-W-(CH2)u-NH-;
PL 197 006 B1
R jest wybrany z grupy obejmującej a) atom wodoru,
b) -(C=O)R1a,
c)
d) ο
Η<
h3c
ο
HO
Ο
Ο
e)
f) etoksyskwaran; i
g) grupę kotyninylową;
R1 i R2 są niezależnie wybrane z grupy obejmującej: atom wodoru, OH, grupę C1-C5-alkilową, grupę C1-C6-alkoksylową, grupę C1-C6-aralkilową i arylową;
R1a oznacza grupę C1-C6-alkilową, hydroksylowaną grupę C3-C8-cykloalkilową, polihydroksylowaną grupę C3-C8-cykloalkilową, hydroksylowaną grupę arylową, polihydroksylowaną grupę arylową lub grupę arylową,
R9 oznacza atom wodoru, grupę (C1-C3-alkil)-CO, lub podstawioną chlorem grupę (C1-C3-alkil)-CO;
W jest wybrany z grupy obejmują cej rozgałęzioną lub o prostym ł a ń cuchu grupę C1-C6-alkilową , grupę cyklopentylową, grupę cykloheksylową, grupę cykloheptylową lub grupę bicyklo[2.2.2]oktanylową;
n oznacza, 1, 2, 3 lub 4;
p oznacza zero lub liczbę cał kowitą mię dzy 1 i 100;
q oznacza 0 lub 1, z zastrzeż eniem, ż e jeż eli p oznacza zero, to q oznacza l;
r oznacza 1, 2 lub 3; t oznacza 3 lub 4; u oznacza 0, 1, 2 lub 3, lub jego farmaceutycznie dopuszczalna sól lub izomer optyczny.
Korzystnie, XL oznacza wiązanie.
W wykonaniu niniejszego wynalazku, ugrupowanie oligopeptyd-R jest wybrane z grupy obejmującej:
PL 197 006 B1
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerGly;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar;
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro;
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Val;
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-4trans-L-Hyp;
Ac-Abu-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Pro;
hydroksyacetyloAbu-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Pro;
acetylo-3-PALSer-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro;
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Val;
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Leu;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSer4-trans-L-Hyp;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerPro;
Ac-SerSerChgGlnSerGly;
Ac-SerSerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp;
Ac-SerSerChgGlnSerSerPro;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerAla;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerChg;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar;
Ac-SerSerChgGlnSerSerHyp;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro;
Ac-AbuSerSerChgGlnSer(dSer)Pro;
Ac-AbuSerSerChgGlnSerSerPro;
Ac-SerSerChgGlnSerSerPro;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)SerSerPro;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)(dSer)SerPro;
Ac-SerChgGln-SerSerPro;
Ac-SerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp;
Ac-SerChgGlnSerSerSar;
Ac-SerChgGlnSerSerAibPro;
Ac-SerChgGlnSerSerN-Me-Ala;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPip;
Ac-SerChgGlnSerSerN-Me-dA;
(NR ID.SEKW.: 84) (NR ID.SEKW.: 85) (NR ID.SEKW.: 86) (NR ID.SEKW.: 87) (NR ID.SEKW.: 88) (NR ID.SEKW.: 89) (NR ID.SEKW.: 90) (NR ID.SEKW.: 91) (NR ID.SEKW.: 92) (NR ID.SEKW.: 93) (NR ID.SEKW.: 94) (NR ID.SEKW.: 95) (NR ID.SEKW.: 96) (NR ID.SEKW.: 98) (NR ID.SEKW.: 99) (NR ID.SEKW.: 100) (NR ID.SEKW.: 103) (NR ID.SEKW.: 104) (NR ID.SEKW.: 105) (NR ID.SEKW.: 106) (NR ID.SEKW.: 107) (NR ID.SEKW.: 108) (NR ID.SEKW.: 109) (NR ID.SEKW.: 111) (NR ID.SEKW.: 114) (NR ID.SEKW.: 115) (NR ID.SEKW.: 116) (NR ID.SEKW.: 117) (NR ID.SEKW.: 118) (NR ID.SEKW.: 119) (NR ID.SEKW.: 120) (NR ID.SEKW.: 124), i (NR ID.SEKW.: 125)
PL 197 006 B1 gdzie Abu oznacza kwas aminomasłowy, 4-trans-L-Hyp oznacza 4-trans-L-hydroksyprolinę, Pip oznacza kwas pipekolinowy, 3,4-DiHyp oznacza 3,4-dihydroksyprolinę, 3-PAL oznacza 3-pirydyloalaninę, Sar oznacza sarkozynę i Chg oznacza cykloheksyloglicynę.
Następujące związki stanowią konkretne przykłady koniugatu oligopeptyd-deacetylowinblastyna według niniejszego wynalazku:
gdzie X oznacza
PL 197 006 B1
lub ich farmaceutycznie dopuszczalna sól lub izomer optyczny.
PL 197 006 B1
Oligopeptydy, podjednostki peptydowe i pochodne peptydów (także określane peptydami) według niniejszego wynalazku, mogą być zsyntetyzowane z ich składowych aminokwasów typowymi technikami syntezy peptydów, korzystnie technologią fazy stałej. Następnie peptydy oczyszcza się metodą wysokosprawnej chromatografii cieczowej w układzie faz z odwróconych (HPLC).
Standardowe metody syntezy peptydów ujawniono, na przykład, w następujących pracach: Schroeder i in., The Peptides, tom I, Academic Press 1965; Bodansky i in., „Peptide Synthesis, Interscience Publishers, 1966; McOmie (ed.) Protective Groups in Organic Chemistry, Plenum Press, 1973; Barany i in., The Peptides: Analiza, Synthesis, Biology 2, rozdział 1, Academic Press, 1980, oraz Stewart i in., Solid Phase Peptyd Synthesis, drugie wydanie, Pierce Chemical Company, 1984.
Dogodnie podstawiony aminokwas cykliczny mający podstawnik hydrofilowy, który może być włączony do koniugatów według niniejszego wynalazku za pomocą normalnych technik syntezy peptydów, albo jest sam dostępny w handlu albo jest łatwo syntetyzowany technikami znanymi lub tu opisanymi. Tak więc syntezy dogodnie podstawionych prolin są opisane w następujących artykułach i cytowanych w nich odnośnikach: J. Ezquerra i in., J. Org. Chem. 60: 2925-2930 (1995); P. Gili i W. D. Lubell, J. Org. Chem., 60:2658-2659 (1995); i M. W. Holladay i in., J. Med. Chem., 34:457-461(1991).
Farmaceutycznie dopuszczalne sole koniugatów według niniejszego wynalazku obejmują typowe nietoksyczne sole związków według niniejszego wynalazku utworzone np., z nietoksycznych kwasów nieorganicznych lub organicznych. Na przykład, takie typowe sole nietoksyczne obejmują sole pochodzące od kwasów nieorganicznych takich jak solny, bromowodorowy, siarkowy, sulfaminowy, fosforowy, azotowy i tym podobne: i sole wytworzone z kwasów organicznych takich jak octowy, propionowy, bursztynowy, glikolowy, stearynowy, mlekowy, jabłkowy, winowy, cytrynowy, askorbinowy, pamoesowy, maleinowy, hydroksymaleinowy, fenylooctowy, glutaminowy, benzoesowy, salicylowy, sulfanilinowy, 2-acetoksybenzoesowy, fumarowy, toluenosulfonowy, metanosulfonowy, etanodisulfonowy, szczawiowy, izetionowy, trifluorooctowy i tym podobne.
Koniugaty według niniejszego wynalazku, które zawierają oligopeptyd zawierający miejsce rozszczepiania przez PSA i alkaloid barwinka jako środek cytotoksyczny mogą być zsyntetyzowane technikami znanymi w chemii farmaceutycznej. Na przykład, ugrupowanie hydroksylowe na alkaloidzie barwinka może być kowalencyjnie przyłączone do oligopeptydu na końcu karboksylowym tak, że powstaje wiązanie estrowe. W tym celu można wykorzystać odczynnik taki jak połączenie HBTU i HOBT, połączenie BOP i imidazolu, połączenie DCC i DMAP, i podobne. Kwas karboksylowy można także aktywować poprzez utworzenie estru nitrofenylowego lub podobnego i poddać reakcji w obecności DBU (1,8-diazabicyklo[5,4,0]undec-7-enu).
Specjalista rozumie, że w syntezie związków według wynalazku, można potrzebować zabezpieczenia rozmaitych reaktywnych grup funkcyjnych związków wyjściowych oraz związków pośrednich, kiedy na innych częściach cząsteczki prowadzi się pożądaną reakcję. Po zakończeniu pożądanych reakcji, lub w dowolnej pożądanej chwili, normalnie takie grupy zabezpieczające zostaną usunięte, na przykład, hydrolitycznie lub hydrogenolitycznie. Takie etapy zabezpieczania, i odbezpieczania są typowe w chemii organicznej. Specjalista jest odsyłany do Protective Groups in Organic Chemistry, red. McOmie, Plenum Press, NY, NY (1973); oraz Protective Groups in Organic Synthesis, red. Greene, John Wiley & Sons, NY, NY (1981) po opisy grup zabezpieczających, które mogą być przydatne przy wytwarzaniu związków według niniejszego wynalazku.
Tylko dla przykładu, przydatne grupy zabezpieczające grupę aminową mogą obejmować, na przykład, grupy C1-C10-alkanoilowe takie jak grupa formylowa, acetylowa, dichloroacetylowa, propionylowa, heksanoilowa, 3,3-dietyloheksanoilowa, γ-chlorobutyryl i tym podobne; grupy C1-C10-alkoksykarbonylowe i C5-C15-aryloksykarbonylowe takie jak grupa tert-butoksykarbonylowa, benzyloksykarbonylowa, alliloksykarbonylowa, 4-nitrobenzyloksykarbonylowa, fluorenylometyloksykarbonylowa i cynamoiloksykarbonylowa; grupy chlorowco-(C1-C10)-alkoksykarbonylowe takie jak grupa 2,2,2-trichloroetoksykarbonylowa; i grupy C1-C15-aryloalkilowe i alkenylowe takie jak grupa benzylowa, fenetylowa, allilowa, tritylowa, i tym podobne. Inne powszechnie stosowane grupy zabezpieczające grupę aminową to grupy w postaci enamin wytworzonych przy użyciu β-keto-estrów takich jak acetylooctan metylu lub etylu.
Przydatne grupy zabezpieczające grupę karboksylową mogą obejmować, na przykład, grupy C1-C10-alkilowe takie jak grupa metylowa, tert-butylowa, decylowa; grupy chlorowco-C1-C10-alkilowe takie jak grupa 2,2,2-trichloroetylowa i 2-jodoetylowa; grupy C1-C15-aryloalkilowe takie jak grupa benzylowa, 4-metoksybenzylowa, 4-nitrobenzylowa, trifenylometylowa, difenylometylowa; grupy C1-C10-alkanoiloksymetylowe takie jak grupa acetoksymetylowa, propionoksymetylowa i tym podobne; i grupy
PL 197 006 B1 takie jak grupa fenacylowa, 4-chlorowcofenacylowa, allilowa, dimetyloallilowa, grupy tri-(C1-C3-alkilo)sililowe, takie jak grupa trimetylosililowa, β-p-toluenosulfonyloetylowa, β-p-nitrofenylotioetylowa, 2,4,6-trimetylobenzylowa, β-metylotioetylowa, ftalimidometylowa, 2,4-dinitrofenylosulfenylowa, 2-nitrobenzhydrylowa i grupy pokrewne.
Podobnie, przydatne grupy zabezpieczające grupę hydroksylową mogą obejmować, na przykład, grupę formylową, grupę chloroacetylową, grupę benzylową, grupę benzhydrylową, grupę tritylową, grupę 4-nitrobenzylową, grupę trimetylosililową, grupę fenacylową, grupę tert-butylową, grupę metoksymetylową, grupę tetrahydropiranylową i tym podobne.
W odniesieniu do korzystnego wykonania oligopeptydu połączonego z deacetylowinblastyną, następujące schematy reakcji obrazują syntezę koniugatów według niniejszego wynalazku.
Schemat reakcji I ilustruje wytwarzanie koniugatów oligopeptydów i alkaloidu barwinka winblastyny jako środka cytotoksycznego według niniejszego wynalazku, w których atom tlenu 4-deacetylowinblastyny przyłączony jest na C-końcu oligopeptydu. Chociaż inne sekwencje reakcji mogą być przydatne przy tworzeniu takich koniugatów, stwierdzono, że korzystnym sposobem jest początkowe przyłączenie pojedynczego aminokwasu do tlenu w pozycji 4 i kolejne przyłączanie pozostałej sekwencji oligopeptydów do tego aminokwasu. Stwierdzono także, że w końcowym etapie sprzęgania zamiast HOAt można stosować 3,4-dihydro-3-hydroksy-4-okso-1,2,3-benzotriazynę (ODHBT).
Schemat reakcji II obrazuje wytwarzanie koniugatów oligopeptydów według niniejszego wynalazku, w których kwas hydroksyalkanolilowy stosuje się jako łącznik między alkaloidem barwinka i oligopeptydem.
SCHEMAT REAKCJI
PL 197 006 B1
PL 197 006 B1
PL 197 006 B1
Koniugaty oligopeptyd-środek cytotoksyczny według wynalazku są przydatne w leczeniu chorób, które charakteryzują się nienormalnymi komórkami lub nienormalnym rozrostem komórek, czy to złośliwym czy łagodnym, w których te komórki charakteryzują się wydzielaniem enzymatycznie aktywnego PSA. Takie choroby obejmują, ale nie ograniczając się do tego, raka prostaty, łagodny rozrost prostaty, przerzuty raka prostaty, raka piersi, i podobne.
Koniugaty oligopeptyd-środek cytotoksyczny według wynalazku podaje się pacjentowi w postaci kompozycji farmaceutycznej, które zawiera koniugat według niniejszego wynalazku i nośnik farmaceutycznie dopuszczalny, zaróbkę lub rozcieńczalnik do niego. Stosowane określenie farmaceutycznie dopuszczalny odnosi się do tych środków, które są przydatne w leczeniu lub diagnozowaniu zwierząt ciepłokrwistych, w tym, na przykład, człowieka, konia, świni, krowy, myszy, psa, kota, lub innego ssaka, jak również ptaka lub innego zwierzęcia ciepłokrwistego. Korzystny tryb podawania to podawanie pozajelitowe, szczególnie drogą dożylną, domięśniową, podskórną, dootrzewnową, lub do naczyń chłonnych. Takie preparaty można wytworzyć stosując nośniki, rozcieńczalniki lub zaróbki znane specjaliście. W tym względzie patrz, np. Remington's Pharmaceutical Sciences, wyd. 16, 1980, Mack Publishing Company, red. Osol i in. Takie kompozycje mogą obejmować białka, takie jak białka surowicy, na przykład, albuminę surowicy ludzkiej, bufory lub substancje buforujące takie jak fosforany, inne sole, lub elektrolity i tym podobne. Przydatne rozcieńczalniki mogą obejmować, na przykład, wodę jałową, sól izotoniczną, rozcieńczony wodny roztwór glukozy, alkohol wielo-wodorotlenowy lub mieszaniny takich alkoholi, na przykład, glicerynę, glikol propylenowy, glikol polietylenowy i tym podobne. Kompozycje mogą zawierać środki konserwujące takie jak alkohol fenetylowy, metylo- i propyloparabeny, timerosal i tym podobne. Jeżeli to pożądane, to kompozycja może zawierać około 0,05 do około 0,20 procent wagowo przeciwutleniacza takiego jak pirosiarczyn sodu lub wodorosiarczyn sodu.
Stosowane niniejszym określenie kompozycja ma obejmować produkt zawierający konkretne składniki w konkretnych ilościach, jak również dowolny produkt, który powstaje, bezpośrednio lub pośrednio, przez połączenie konkretnych składników w konkretnych ilościach.
Kompozycje farmaceutyczne mogą być w postaci jałowych roztworów wodnych do wstrzykiwania. Wśród dopuszczalnych nośników i rozpuszczalników, które mogą być wykorzystywane, są woda, roztwór Ringera i izotoniczny roztwór chlorku sodu.
Jałowy preparat do wstrzykiwania może także być jałową mikroemulsją olej-w-wodzie, gdzie składnik aktywny jest rozpuszczony w fazie olejowej. Na przykład, składnik aktywny może być najpierw rozpuszczony w mieszaninie oleju sojowego i lecytyny. Następnie roztwór olejowy wprowadza się do mieszaniny wody i glicerolu i przerabia, otrzymując mikroemulsję.
Roztwory lub mikroemulsje do wstrzykiwania można wprowadzać do krwiobiegu pacjenta metodą miejscowego wstrzyknięcia glinki. Alternatywnie, korzystne może być podanie roztworu lub mikroemulsji w taki sposób, żeby utrzymać stałe stężenie w obiegu związku według niniejszego wynalazku. W celu utrzymania takiego stałego stężenia można wykorzystać urządzenie do dozowania dożylnego. Przykładem takiego urządzenia jest pompa dożylna Deltec CADD-PLUS™ model 5400.
Kompozycje farmaceutyczne mogą być w postaci jałowej wodnej lub oleistej zawiesiny do wstrzykiwania do podawania domięśniowego lub podskórnego. Ta zawiesina może być wytworzona zgodnie ze znaną techniką przy użyciu przydatnych środków dyspergujących lub zwilżających i środków zawieszających, które wymieniono wyżej. Jałowym preparatem do wstrzykiwania może także być jałowy roztwór lub zawiesina do wstrzykiwania w nietoksycznym dopuszczalnym pozajelitowo rozcieńczalniku lub rozpuszczalniku, na przykład jako roztwór w 1,3-butanodiolu. Ponadto, jako rozpuszczalnik lub środowisko do zawiesiny wykorzystuje się zwykle jałowe oleje utrwalone. W tym celu można wykorzystać dowolny łagodny olej utrwalony, w tym syntetyczne mono- lub diglicerydy. Ponadto, przy wytwarzaniu preparatów do wstrzykiwania znajdują zastosowanie kwasy tłuszczowe takie jak kwas oleinowy.
Kompozycja do podawania dożylnego korzystnie będzie wytworzona tak, że ilość podawana pacjentowi będzie wynosić od około 0,01 do około 1 g koniugatu. Korzystnie, ilość podawana będzie leżeć w zakresie około 0,2 g do około 1 g koniugatu. Koniugaty według wynalazku są skuteczne w szerokim zakresie dawkowania, zależnie od czynników takich jak leczony stan chorobowy lub modyfikowany skutek biologiczny, sposób podawania koniugatu, wiek, waga i stan pacjenta, jak również inne czynniki do określenia przez lekarza prowadzącego. Tak więc, ilość podawaną danemu pacjentowi trzeba określać indywidualnie.
PL 197 006 B1
Specjalista będzie wiedział, że chociaż w następujących przykładach przedstawiono konkretne odczynniki i warunki reakcji, to można dokonywać modyfikacji, które mają być objęte istotą i zakresem wynalazku. Następujące preparaty i przykłady są więc podane w celu dodatkowego zobrazowania wynalazku, i nie są ograniczające.
P r z y k ł a d 1
Ester 4-O-(N-Acetylo-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro)deacetylowinblastyny
Etap A: Wytwarzanie 4-deacetylowinblastyny
Próbkę 2,40 g (2,63 mmol) siarczanu winblastyny (Sigma Y-1377) rozpuszczono pod osłoną N2 w 135 ml metanolu absolutnego i potraktowano 45 ml hydrazyny bezwodnej, zaś roztwór mieszano w temperaturze 20-25°C przez 18 h. Reakcję odparowano do gę stej pasty, którą podzielono mię dzy 300 ml CH2Cl2 i 150 ml nasyconego NaHCO3. Warstwę wodną przemyto 2 porcjami po 100 ml CH2Cl2, i każ dą z 3 warstw CH2Cl2 z kolei przemyto po 100 ml H2O (2X) i nasyconego NaCl (1X). Połączone warstwy organiczne osuszono nad bezwodnym Na2SO4, a rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymując związek tytułowy jako białawą stałą substancję krystaliczną. Ten materiał przechowywano w temperaturze -20°C aż do użycia.
Etap B: Wytwarzanie estru 4-O-(prolilowego) 4-deacetylowinblastyny
Próbkę 804 mg (1,047 mmol) 4-deacetylowinblastyny, rozpuszczono w 3 ml CH2Cl2 i 18 ml bezwodnej pirydyny pod osłoną azotu, potraktowano 1,39 g chlorku kwasowego Fmoc-proliny (FmocPro-Cl, Advanced Chemtech), a mieszaninę mieszano przez 20 h w temperaturze 25°C. Gdy analiza metodą HPLC ujawniła obecność nieprzereagowanej wyjściowej deacetylowinblastyny, dodano kolejne 0,50 g Fmoc-Pro-Cl, mieszając przez kolejne 20 h do zakończenia reakcji. Dodano wodę (ok. 3 ml) w celu przereagowania z nadmiarem chlorku kwasowego, a następnie roztwór odparowano do suchej masy i podzielono między 300 ml EtOAc i 150 ml nasyconego NaHCO3, a następnie przemyto dwukrotnie nasyconym NaCl. Po osuszeniu (Na2SO4) rozpuszczalnik usunięto pod zmniejszonym ciśnieniem, otrzymując pomarańczowo-brunatną pozostałość, do której dodano 30 ml DMF i 14 ml piperydyny, i po 5 min roztwór odparowano pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując pomarańczowo-żółtą pozostałość półstałą. Po osuszeniu pod zmniejszonym ciśnieniem przez około 1 h, do tego materiału dodano w przybliżeniu 200 ml H2O i 100 ml eteru, a następnie kroplami lodowaty HOAc przy wytrząsaniu i traktowaniu ultradźwiękami aż zaszło zupełne rozpuszczenie i warstwa wodna uzyskała trwałe pH 4,5-5,0 (zwilżony papierek o zakresie pH 4-6). Wtedy warstwę wodną przemyto 1 porcją 100 ml eteru, i każdą warstwę eterową przemyto z kolei 50 ml H2O. Połączone warstwy wodne poddano preparatywnej HPLC w 2 porcjach na kolumnie Waters C4 Delta-Pak 15 μM 300A (A = 0,1% TFA/H2O; B = 0,1% TFA/CH3CN), eluowanie gradientowe 95 > 70% A/ 70 min. Połączone frakcje dały, po zatężeniu i liofilizacji, związek tytułowy.
Etap C: N-Acetylo-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Żywica
WANG
Zaczynając od 0,5 mmol (0,61 g) Fmoc-Ser(t-Bu)-żywicy WANG o stopniu obciążenia 0,82 mmol/g, zabezpieczony peptyd zsyntetyzowano na syntezatorze peptydów ABI model 430A dostosowanym do syntezy na bazie Fmoc/t-butyl. Procedura wykorzystywała dwukrotny nadmiar (1,0 mmol) każdego z następujących zabezpieczonych aminokwasów: Fmoc-Ser (t-Bu)-OH, Fmoc-Gln-OH, Fmoc-Chg-OH, Fmoc-4-trans-L-Hyp-OH; i kwas octowy (sprzęganie podwójne). Podczas każdego cyklu sprzęgania usuwano zabezpieczenie Fmoc stosując 20% piperydyny w N-metylo-2-pirolidynonie (NMP), a następnie przemywając NMP. Sprzęganie osiągano stosując DCC i aktywację HOBt w NMP. Po zakończeniu syntezy żywicę peptydową osuszono, otrzymując związek tytułowy.
Etap D: N-Acetylo-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-OH
Jedną partię 0,5 mmol powyższej żywicy peptydu zawieszono w 25 ml TFA, a następnie dodano po 0,625 ml H2O i triizopropylosilanu, następnie mieszano w temperaturze 25°C przez 2,0 h. Rozszczepianą mieszaninę przesączono, części stałe przemyto TFA, rozpuszczalniki usunięto z przesączu pod zmniejszonym ciśnieniem, i pozostałość roztarto z eterem otrzymując bladożółtą substancję stałą, którą wydzielono metodą sączenia i suszenia pod zmniejszonym ciśnieniem otrzymując związek tytułowy.
PL 197 006 B1
Warunki HPLC, układ A:
Kolumna Yydac 15 cm #218TP5415, C18
Eluent Gradient (95%A > 50%A) przez 45 min.
A = 0,1% TFA/H2O, B = 0,1% TFA/acetonitryl
Przepływ 1,5 ml/min.
Wysokorozdzielcza ES/FT-MS: 789,3
Etap E: Ester 4-O-(N-acetylo-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro) deacetylowinblastyny
Próbki 522 mg (0,66 mmol) peptydu z etapu D i 555 mg (ok. 0,6 mmol) estru 4-O-(prolilo) 4-deacetylowinblastyny z etapu B, wytworzone jak wyżej, rozpuszczono w 17 ml DMF pod osłoną N2. Następnie dodano 163 mg (1,13 mmol) 1-hydroksy-7-azabenzotriazolu (HOAt), i pH doprowadzono do 6,5-7 (zwilżony papierek o zakresie pH 5-10) stosując 2,4,6-kolidynę, a następnie chłodząc do 0°C i dodając 155 mg (0,81 mmol) chlorowodorku 1-(3-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodiimidu (EDC). Mieszanie kontynuowano w temperaturze 0-5°C aż do zakończenia sprzęgania sprawdzanego metodą analitycznej HPLC (A = 0,1% TFA/H2O; B = 0,1% TFA/CH3CN), utrzymując pH 6,5-7 przez okresowe dodawanie 2,4,6-kolidyny. Po 12 h mieszaninę reakcyjną poddano obróbce, dodając ~4 ml H2O i po 1 h mieszania zatężono do małej objętości pod zmniejszonym ciśnieniem i rozpuszczono w ok. 150 ml 5% HOAc i poddano preparatywnej HPLC w dwóch porcjach na kolumnie Waters C18 DeltaPak 15 μΜ 300A (A = 0,1% TFA/H2O; B = 0,1% TFA/CH3CN), eluowanie gradientowe 95 > 65% A/70 min). Frakcje jednorodne zawierające później eluowany produkt (oceniano metodą HPLC, układ A, 95 > 65% A/30 min) z obu partii połączono i zatężono do objętości ~50 ml i przepuszczono przez w przybliżeniu 40 ml żywicy jonowymiennej AG4X4 (cykl octanowy) a następnie liofilizowano, otrzymując związek tytułowy jako liofilizowany proszek.
Wysokorozdzielcza ES/FT-MS: 1637,0.
P r z y k ł a d 1A
Octan estru 4-O-(N-acetylo-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro) deacetylowinblastyny
Próbkę 4,50 g (3,7 mmol) soli TFA 4-O-(prolilo) deacetylowinblastyny, wytworzoną jak opisano w przykładzie 1, Etap B, rozpuszczono w 300 ml DMF pod osłoną N2, a roztwór ochłodzono do 0°C. Następnie dodano 1,72 g (10,5 mmol) 3,4-dihydro-3-hydroksy-4-okso-1,2,3-benzotriazyny (ODHBT) i pH doprowadzono do 7,0 (zwilżony papierek o zakresie pH 5-10) stosując N-metylomorfolinę (NMM), a następnie dodano 4,95 g (5,23 mmol) N-acetylo-heptapeptydu z przykładu 1, Etap D, porcjami umożliwiającymi całkowite rozpuszczenie między każdym dodaniem. pH ponownie doprowadzono do 7,0 stosując NMM i dodano 1,88 g (9,8 mmol) chlorowodorku 1-(3-dimetyloaminopropylo)-3-etylokarbodiimidu (EDC), a następnie mieszano roztwór w temperaturze 0-5°C aż do zakończenia sprzęgania jak sprawdzano metodą analitycznej HPLC (układ A), utrzymując pH ok. 7 przez okresowe dodawanie NMM. Analiza pokazała składnik główny przy czasie retencji 26,3 min poprzedzany przez składnik uboczny (ok. 10%) przy 26,1 min, zidentyfikowany jako izomer D-Ser związku tytułowego. Po 20 h mieszaninę reakcyjną poddano obróbce, dodając 30 ml H2O i po 1 h mieszania zatężono do małej objętości pod zmniejszonym ciśnieniem i rozpuszczono w ok. 500 ml 20% HOAc i poddano preparatywnej HPLC w 12 porcjach na kolumnie Waters C18 Delta-Pak 15 mM 300A (A = 0,1% TFA/H2O; B = 0,1% TFA/CH3CN), eluowanie gradientowe 85 > 65% A /90 min) z szybkością przepływu 80 ml/min.
Frakcje jednorodne (oceniono metodą HPLC, układ C) stanowiące w przybliżeniu jedną czwartą całej partii połączono, zatężono do objętości ~150 ml i przepuszczono przez w przybliżeniu 200 ml żywicy jonowymiennej Bio-Rad AG4X4 (cykl octanowy), a następnie liofilizowano eluent, co dało sól octanową związku tytułowego jako liofilizowany proszek: czas retencji (układ A) 26,7 min, czystość 98,9%; wysokorozdzielcza ES/FT-MS m/e 1636,82; analiza składu aminokwasowego 20 h, 100°C, 6N HCl (teoria/stwierdzono), Ser4/3,91 (skorygowane), Glu 1/0,92 (Gln przekształcone w Glu), Chg 1/1,11, Hyp 1/1,07, Pro 1/0,99, zawartość peptydu 0,516 mmol/mg.
Dalsze połączenie frakcji jednorodnych i oczyszczanie z frakcji ubocznych, przerabianych tak jak wyżej przez w przybliżeniu żywicy 500 ml jonowymiennej, dało dodatkowe ilości związku tytułowego.
PL 197 006 B1
Warunki HPLC, układ A
Kolumna
Przepływ
Eluent
Długość fali
Warunki HPLC, układ C Kolumna:
Przepływ
Eluent
Długość fali
Vydac 15 cm #218TP5415, C18.
1,5 ml/min.
Gradient (95%A > 50%A) przez 45 min.
A = 0,1% TFA/H2O, B = 0,1% TFA/acetonitryl.
214 nm, 280 nm.
Vydac 15 cm #218TP5415, C18.
1,5 ml/min.
Gradient (85%A > 65%A) przez 30 min.
A = 0,1% TFA/H2O, B = 0,1% TKA/acetonitryl.
214 nm, 280 nm.
Tabela 1 przedstawia inne koniugaty peptydu-alkaloidu barwinka, które wytworzono procedurami opisanymi w przykładach 1 i 1 A, ale wykorzystując właściwe reszty aminokwasów i acylowanie grupy zabezpieczającej. O ile nie wskazano inaczej, to wytworzono i testowano sól octanową koniugatu.
TABELA 1
NR ID. SEKW. KONIUGAT PEPTYD-VIN Czas do 50% rozszczepienia substratu przez York PSA (min)
95 4-0-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-SS-4-trans-L-Hyp)-dAc-VIN 13
96 4-0-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-S-P)-dAc-VIN 1 godzina = 8%
90 4-0-(Ac-Abu-SSChgQ-SP)-dAc-VIN 80
91 4-O-((2-OH)Ac-Abu-SSChgQ-S-P)-dAc-VIN 110
92 4-O-(Ac-3-Pal-SSChgQS-P)-dAc-VIN 80
97 4-O-(Ac-3-Pal-SSChgQ(dS)-P)-dAc-VIN 3 godziny = 0%
93 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQ.SL-laktylo)-dAc-VIN 10 (nieznaczny rozkład)
94 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSV-laktylo)-dAc-VIN 7 (trwały)
88 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSV-glikolilo)-VIN 8
85 4-0-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQS-Glicyna)-(dAc)-VIN 30
86 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQS5-Sar)-(dAc)-VIN 32
84 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSSPro)-(dAc)-VIN 17
PL 197 006 B1 cd. tabeli 1
NR ID. SEKW. KONIUGAT PEPTYD-VIN Czas do 50% rozszczepienia substratu przez York PSA (min)
87 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-(d)-Pro)-(dAc)-VIN 1 godzina = 34%
98 4-O-(Ac-SSChgQS-Gly)-(dAc)-VIN 55
99 4-O-(Ac-SSChgQ-SS-4-trans-L-Hyp)-dAc-VIN 22
100 4-O-(Ac-SSChgQ-SS-P)-dAc-VIN 15
101 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-S(dS)-4-trans-L-Hyp)-dAc- VIN 1 godzina = 12%
102 (4-O)-Ac-(4-trans-L-Hyp)SSChgQ-SL-(dAc)-VIN 35
103 Ar-4-tranę-l -Ι-Ινη^ΓΗσΓΚ-Μ-Π-ΔΙ al-/rlAr\-VIN 9 7 /nrnHiikt przekształca się w 4- O-A-dAc-VIN)
104 Ac-4-trans-L-HypSSChgQSChg-(4-O-glikolilo)-VIN 12
105 Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-(4-O-Sar)-dAc)-VIN 15
102 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSL-laktylo)-(dAc)-VIN 10
106 Ac-SSChgQ.-SS-(4-O-4-trans-L-Hyp)-dAc-VIN 22
107 Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-SS(4-O-P)-windezyna 12
108 Ac-AbuSSChgQ-S(dS)-(4-O-P)-dAc-VIN 60
109 Ac-AbuSSChgQ-SS-(4-O-P)-dAc-VIN 7
110 Ac-AbuSSChgQ-(dS)-(4-O-P)-dAc-VIN 1 godzina = 0%
104 Ac-4-trans-L-HypSSChgQ.-SChg-(4-O-laktylo)-dAc-VIN 14
111 Ac-SSChgQ-SS-(4-O-P)-windezyna 22
112 4-O-[Ac-SSChgQ-S(dS)- 4-trans-L-Hyp]-dAc-VIN) 1 godzina = 14%
113 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-(dS)SP]-dAc-VIN 6 godzin (10 X ENZ)
114 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChg(dQ)SSP]-dAc-VIN 10Χ ENZ o/n = 0%
115 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChg(dQ)(dS)SP]-dAc-VIN 10Χ ENZ o/n = 0%
116 4-O-(Ac-SChgQ-SSP)-dAc-VIN 15
117 4-O-[Ac-SChgQSS4-trans-L-Hyp]-dAc-VIN 15
118 4-O-[Ac-SChgQSS-Sar]-dAc-VIN 39 n = 2
119 4-O-[Ac-SChgQSS-Aib-P]-dAc-VIN 15, 23
120 4-O-[Ac-SChgQSS(N-Me-Ala)]-dAc-VIN 30
PL 197 006 B1 cd. tabeli 1
NR ID. SEKW. KONIUGAT PEPTYD-VIN Czas do 50% rozszczepienia substratu przez York PSA (min)
121 4-O-[Ac-SChgQS-Aib-P]-dAc-VIN 1 godzina = 8%
122 4-O-[(2-OH)Ac-SChgQSS-Sar]-dAc-VIN 1 godzina = 4%
123 4-O-[Ac-SChgQSS-Pip]-dAc-VIN 15
124 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-Pip]-dAc-VIN 13
125 4-O-[Ac-SChgQSS-(N-Me-dA)]-dAc-VIN 1 godzina = 26%
4-trans-L-Hyp oznacza trans-4-hydroksy-L-prolinę, gdy n > 1; wartość stanowi średnią
P r z y k ł a d 4
Ocena rozpoznawania przez wolny PSA koniugatów oligopeptyd-alkaloid barwinka Koniugaty wytworzone jak opisano w przykładzie 3 osobno rozpuszczono w buforze do trawienia PSA (50 mM tris(hydroksymetylo)-aminometanu pH 7,4, 140 mM NaCl) i roztwór dodano do PSA w proporcji molowej 100 do 1. Alternatywnie stosowany bufor do trawienia PSA to 50 mM tris(hydroksymetylo)aminometanu pH 7,4, 140 mM NaCl. Reakcję zatrzymywano po różnych czasach reakcji dodatkiem kwasu trifluorooctowego (TFA) do końcowego stężenia 1% (obj.). Alternatywnie reakcję zatrzymuje się stosując 10 mM ZnCl2. Zatrzymaną reakcję analizowano metodą HPLC na kolumnie C18 w układzie faz odwróconych, stosując gradient wodnego roztworu 0,1% TFA/acetonitrylu. Następnie obliczano ilość czasu (w minutach) potrzebną do 50% rozszczepienia wskazanych koniugatów oligopeptyd-środek cytotoksyczny przez enzymatycznie aktywny wolny PSA. Wyniki pokazano w tabeli 1.
P r z y k ł a d 5
Test cytotoksyczności in vitro pochodnych peptydylowych alkaloidów barwinka Cytotoksyczności ulegających rozszczepianiu koniugatów oligopeptyd-alkaloid barwinka, wytworzonych jak opisano w przykładzie 3, przeciwko szczepowi komórek, o których wiadomo, że są zabijane przez niezmodyfikowany alkaloid barwinka, oceniano testem Alamar Blue. W szczególności, hodowle komórek nowotworu prostaty LNCap, komórek Colo320DM (oznaczanych C320) lub komórek T47D na 96-studzienkowych płytkach rozcieńczano pożywką zawierającą rozmaite stężenia danego koniugatu (końcowa objętość w zagłębieniu płytki 200 μΐ). Komórki Colo320DM, które nie wykazują ekspresji wolnego PSA, stosuje się jako szczep kontrolny do określania toksyczności nie opartej na mechanizmie. Komórki inkubowano przez 3 dni w temperaturze 37°C, do zagłębień dodano 20 μ! Alamar Blue. Komórki inkubowano dodatkowo i płytki odczytano czytnikiem EL-310 ELISA przy dwóch długościach fali równych 570 i 600 nm po 4 i 7 godzinach od dodania Alamar Blue. Następnie obliczono względną procentową zdolność do przeżycia przy różnych stężeniach testowanego koniugatu względem hodowli kontrolnych (bez koniugatu) i określono EC50. Wyniki pokazano w tabeli 2. O ile nie wskazano inaczej, to testowano sól octanową koniugatu.
PL 197 006 B1
TABELA 2
NR ID. SEKW. KONIUGAT PEPTYD-VIN (Środek cytotoksyczny) Zabicie komórek LNCaP w ciągu 72 h {48 h] EC50(pM)
WINBLASTYNA 0,5 (Colo320DM = 0,5)
(4-O-4-trans-L-Hyp)-dAc-VIN 0,6 (Colo320DM = 1,1) n-2
4-O-glicyna-(dAc)-VIN 0,3(Colo320DM = 1,8)
4-O-sarkozylo-(dAc)-VIN 1,3 (Colo32ODM =1,8
95 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-SS-4-trans-L-Hyp)- dAc-VIN 16,3 (Colo320DM = 13,1)
96 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-S-P)-dAc-VIN 47,9 (Colo320DM = 83,9)
96 4-O-(Ac-4-trans-L-Hyp SSChgQS-Pro)-(dAc)-VIN > 16 (Colo320DM = 26) w 5% FBS
90 4-O-(Ac-Abu-SSChgQ.-S-P)-dAc-VIN 9,7 (Colo320DM = 14,5) n = 2
90 4-O-(Ac-Abu-SSChgQ-S-P)-dAc-VIN > 5 (Colo320DM = 23,8) w 0,5% FBS
91 4-O-((2-OH)Ac-Abu-SSChgQ-S-P)-dAc-VIN 11,9 (Colo320DM = 52,5)
92 4-O-(Ac-3-Pal-SSChgQS-P)-dAc-VIN 5,8 (Colo320DM = 8,0) PS
PL 197 006 B1 cd. tabeli 2
NR ID. SEKW. KONIUGAT PEPTYD-VIN (Środek cytotoksyczny) Zabicie komórek LNCaP w ciągu 72 h {48 h} Εθ5ο(μΜ)
93 4-O-(Ac-4-trans-L-Hyp SSChgQSL-laktylo)-dAc-VIN 1,1 (Colo320DM = 13,3)
94 4-O-(Ac-4-trans-L-Hyp SSChgQSV-laktylo)-dAc-VIN 3,1 (Colo320DM = 8,1)
88 4-O-(Ac-4-trans-L-Hyp SSChgQSV-glikolilo)-VIN 4,1 (Colo320DM = 8,1)
86 4-O-(Ac-4-trans-L-Hyp SSChgQSS-Sar)-(dAc)-VIN 4,1 (Colo320DM = 13,0)
84 4-O-(Ac-4-trans-L-Hyp SSChgQSSPro)-(dAc)-VIN 3,0 (Colo320DM = 12) n = 3
87 4-O-(Ac-4-trans-L-Hyp SSChgQSS-(d)-Pro)-(dAc)- VIN 4,1 (Colo320DM = 8,1)
85 4-O-(Ac-4-trans-L-Hyp SSChgQSGly)-(dAc)-VIN 9,3 (Colo320DM= 13,5) n = O L.
98 4-O-(Ac-SSChgQS-Gly)-(dAc)-VIN 16,3 (Colo320DM = 16,3)
100 4-O-(Ac-SSChgQ-SS-4-trans-L-Hyp)-dAc-VIN 6,8 (Colo320DM = 8,1) n = 2
4-0-leucylo-(dAc)-VIN 4,5 (Colo320DM = 4,5)
4-O-Abu-(dAc)-VIN, mieszanina racemiczna 3,8 (Colo320DM = 5,5)
4-0-Abu-(dAc)-VIN, izoforma I 3,9 (Colo320DM = 2,3)
102 (4-O)-Ac-(4-trans-L-Hyp)SSChgQ-SL-(dAc)-VIN 40 (Colo320DM = 86,7)SF; 50 (97) 0,5% FBS
4-O-(prolilo)-dAc-VIN 0,7 (Colo320DM = 4,1) n = 2
(4-O-Phe)-(dAc)-VIN 3,8 (Colo320DM = 2,2)
(4-O-Ala)-(dAc)-VIN 0,6 (Colo320DM = 4,2)
103 Ac-4-trans-L-HypSSChgQS-(4-O-Ala)-(dAc)-VIN 12,5 (Colo320DM = 32,5)
4-hydroksyacetylo-VIN = 4-O-glikolilo-dAc-VIN 1,3 (Colo320DM = 3,3)
104 Ac-4-trans-L-HypSSChgQSChg-(4-0-glikolilo)-VIN 4,1 (Colo320DM = 4,1)
Ester 4-O-(d)-prolilo-(dAc)-VIN 2,0 (Colo320DM = 4,1)
Chg-(4-O-Glikolito)-VIN
105 Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-(4-O-Sar)-(dAc)-VIN 12 (Colo320DM = 12)
102 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSL-laktylo)-(dAc)- VIN 1,1 (Colo320DM= 13,3)
4-O-(V-laktylo)-dAc-VIN 1,3 (Colo320DM = 2,6)
4-O-(L-laktylo)-dAc-VIN 0,7 (Colo320DM = 2,0)
4-O-(Chg-laktylo)-dAc-VIN 4,1 (Colo320DM = 8,4)
PL 197 006 B1 cd. tabeli 2
NR ID. SEKW. KONIUGAT PEPTYD-VIN (Środek cytotoksyczny) Zabicie komórek LNCaP w ciągu 72 h {48 h} ECso(pM)
104 4-O-(Ac-4-trans-L-HypSSChgQSChg-laktylo)-dAc- VIN 8,1 (Colo320DM = 27,9) PS
106 Ac-SSChgQ-SS-(4-0-Hyp)-dAc-VIN 6,8 (Colo320DM = 8,1) n = 2
107 Ac-4-trans-L-HypSSChgQ-SS(4-O-P)-windezyna 12,5 (Colo320DM > 73)
108 AC-AbuSSChgQ-SS-(4-O-P)-dAc-VIN 12,8 (Colo320DM = 28,4)
Prolilo-windezyna 0,3 (Colo320DM = 6,9)
111 Ac-SSChgQ-SS-(4-0-P)-windezyna 32,5 (Colo320DM > 73)
4-O-(SP)-dAc-VIN 0,1 (Colo320DM = 0,3)
4-O-(SSP)-dAc-VIN 2,0 (Colo320DM = 14,5)
114 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChg(dQ)5SP]-dAc-'viN 12,2 (Coio320DM = 43,7)
115 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChg(dQ)(dS)SP]-dAc-VIN 16,3 (Colo320DM = 47,7)
116 4-O-(Ac-SChgQ-SSP)-dAc-VIN 15 (Colo320DM = 20)
4-0-pipekolilo-dAc-VIN 0,7 (Colo320DM = 0,7)
117 4-O-[Ac-SChgQSS4-trans-L-Hyp]-dAc-VIN 5,6 (Colo320DM = 5,6)
4-O-N-metyloalanylo-dAc-VIN 2,9 (Colo320DM = 2,9)
118 4-O-[Ac-SChgQSS-Sar]-dAc-VIN 0,8 (Colo = 3,0)
119 4-O-[Ac-SChgQSS-Aib-P]-dAc-VIN >25 (Colo320DM >25)
120 4-O-[Ac-SChgQSS(N-Me-Ala)]-dAc-VIN 2,3 (Colo320DM = 3,1)
123 4-O-[Ac-SChgQSS-Pip]-dAc-VIN 80 (Colo320DM>75)
124 4-O-[Ac-4-trans-L-HypSSChgQSS-Pip]-dAc-VIN 7,5 (Colo320DM = 60)
4-O-[N-Me-dA]-dAc-VIN 1,0 (Colo320DM = 1,7)
Pip oznacza kwas pipekolinowy;
Sar oznacza sarkozynę;
Chg oznacza cykloheksylo-glicynę;
Abu oznacza kwas 2-aminomasłowy;
Aib oznacza kwas 2-aminoizomasłowy.
P r z y k ł a d 6
Skuteczność koniugatów peptyd-środek cytotoksyczny w ustroju żywym
Potraktowane trypsyną komórki LNCaP.FGC lub DuPRO-1 ponownie zawiesza się w pożywce do wzrostu i odwirowuje przez 6 min przy 200 x g. Komórki ponownie zawiesza się w α-MEM bez surowicy i zlicza. Następnie właściwą objętość tego roztworu zawierającą pożądaną liczbę komórek przenosi się do stożkowej probówki do wirówki, odwirowuje jak poprzednio i ponownie zawiesza we właściwej objętości zimnej mieszaniny 1 : 1 α-MEM-Matrigel. Zawiesinę trzyma się na lodzie aż do czasu inokulacji zwierząt.
PL 197 006 B1
Samce nagich myszy Harlan Sprague Dawley (wiek 10-12 tygodni) unieruchamia się bez znieczulenia i inokuluje stosując 0,5 ml zawiesiny komórek w lewy bok metodą podskórnego wstrzyknięcia, stosując igłę 22G. Myszy otrzymują albo w przybliżeniu 5x105 komórek DuPR0 albo 1,5x107 komórek LNCaP.FGC.
Po inokulacji komórkami nowotworowymi myszy leczy się, stosując jedną z dwóch procedur:
Procedura A:
Dzień po inokulacji komórkami zwierzętom podaje się 0,1-0,5 ml objętości testowego koniugatu, alkaloidu barwinka lub nośnika jako próby kontrolnej (woda jałowa). Dawki koniugatu i leku barwinka stanowią początkowo maksymalną ilość nie śmiertelną, ale mogą być następnie obniżane. Identyczne dawki podaje się w odstępach 24 h przez 5 dni. Po 10 dniach pobiera się od myszy próbki krwi i określa się poziom PSA w surowicy. Podobne poziomy PSA w surowicy określa się w odstępach 5-10 dni. Na koniec 5,5 tygodnia myszy poświęca się i mierzy wagi wszelkich obecnych nowotworów oraz ponownie oznacza PSA w surowicy. Wagi zwierząt określa się na początku i końcu testu.
Procedura B:
Dziesiątego dnia po inokulacji komórkami, od zwierząt pobiera się próbki krwi i określa się poziomy PSA w surowicy. Następnie zwierzęta grupuje się zgodnie z ich poziomami PSA w surowicy. Po 14-15 dniach po inokulacji komórkami zwierzętom podaje się 0,1-0,5 ml objętości testowego koniugatu, leku barwinka lub nośnika jako próby kontrolnej (woda jałowa). Dawki koniugatu i leku barwinka stanowią początkowo maksymalną ilość nie śmiertelną, ale mogą być następnie obniżane. Identyczne dawki podaje się w odstępach 24 h przez 5 dni. Poziomy PSA w surowicy określa się w odstępach 5-10 dni. Na koniec 5,5 tygodnia myszy poświęca się i mierzy wagi wszelkich obecnych nowotworów oraz ponownie oznacza PSA w surowicy. Wagi zwierząt określa się na początku i końcu oznaczenia.
P r z y k ł a d 7
Oznaczanie rozszczepiania proteolitycznego koniugatów w ustroju żywym przez proteazy endogenne inne niż PSA.
Etap A: Wytwarzanie proteolitycznych ekstraktów tkanki
Wszystkie procedury wykonuje się w temperaturze 4°C. Odpowiednie zwierzęta poświęca się i wydziela właściwe tkanki i przechowuje w ciekłym azocie. Zamrożoną tkankę proszkuje się stosując moździerz i tłuczek i przenosi do homogenizatora Potter-Elvejeh i dodaje się 2 objętości Buforu A (50 mM Tris zawierającego 1,15% KCl, pH 7,5). Wtedy tkankę rozrywa się 20 uderzeniami, stosując najpierw luźno dopasowany, a następnie ciasno dopasowany tłuczek. Homogenizat odwirowuje się przy 10000 x g w rotorze z wahliwym kubełkiem (HB4-5), peletkę usuwa się, a re-supernatant odwirowuje się przy 100000 x g (Ti 70). Supernatant (cytosol) zachowuje się.
Peletkę ponownie zawiesza się w Buforze B (10 mM EDTA zawierającym 1,15% KCl, pH 7,5) stosując taką samą objętość jak stosowaną wyżej dla Buforu A. Zawiesinę homogenizuje się w homogenizatorze dounce i roztwór odwirowuje się przy 100000 x g. Supernatant odrzuca się, a peletkę ponownie zawiesza się w Buforze C (10 mM bufor z fosforanem potasu zawierający 0,25 M sacharozy, pH 7,4), stosując 1/2 objętości stosowanej wyżej, i homogenizuje się w homogenizatorze dounce.
Zawartość białka w dwóch roztworach (cytosol i błony komórkowe) oznacza się stosując test Bradforda. Następnie pobiera się próbki do testu i zamraża w ciekłym N2. Próbki przechowuje się w temperaturze -70°C.
Etap B: Test rozszczepiania proteolitycznego
Dla każdego punktu czasowego, 20 mikrogramów koniugatu peptyd-lek barwinka i 150 mikrogramów białka tkanki, wytworzonych jak opisano w Etapie A i jak określono metodą Bradforda w buforze reakcyjnym umieszcza się w roztworze o objętości końcowej równej 200 mikrolitrów w buforze (50 mM TRIS, 140 mM NaCl, pH 7,2). Reakcje testowe prowadzi się przez 0, 30, 60, 120, i 180 minut, a następnie zatrzymuje się stosując 9 mikrolitrów 0,1 M ZnCl2 i bezpośrednio umieszcza we wrzącej wodzie na 90 sekund. Produkty reakcji analizuje się metodą HPLC stosując kolumnę VYDAC C18 15 cm w wodzie /acetonitrylu (5% do 50% acetonitrylu przez 30 minut).
PL 197 006 B1
WYDRUK SEKWENCJI
<110> Merck & Co., Inc. Brady, Stephen F. Feng, Dong-Mei Garsky, Victor M.
<120> KONIUGATY PRZYDATNE W LECZENIU RAKA PROSTATY
<130> 20120Y
<150> <151> 60/067,110 1997-12-02
<160> 125
<170> FastSEQ for Windows Version 3.0
<210> <211> <212> <213> 1 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Asn Lys Ile 1 1 Ser Tyr Gin Ser 5
<210> <211> <212> <213> 2 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Lys Ile Ser 1 2 Tyr Gin Ser 5
<210> <211> <212> <213> 3 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Asn Lys Ile 1 3 Ser Tyr Tyr Ser 5
<210> <211> <212> <213> 4 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Asn Lys Ile 1 3 Ser Tyr Tyr Ser 5
<210> <211> <212> <213> 4 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220>
PL 197 006 B1 <223> całkowicie zsyntetyzowana <400> 4
Asn Lys Ala Ser Tyr Gin Ser 1 5 <210> 5 <211> 5 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <400> 5
Ser Tyr Gin Ser Ser 1 5 <210> 6 <211> 5 <212a PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <400> 6
Lys Tyr Gin Ser Ser 1 5 <210> 7 <211> 5 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> homoarginina <400> 7
Xaa Tyr Gin Ser Ser 1 5 <210> 8 <211> 5 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> homoarginina <221> WARIANT <222> (2)...(2)
PL 197 006 B1 <223> cykloheksyloalanina <400> 8
Xaa Xaa Gin Ser Ser 1 5
<210> <211> <212> <213> 9 4 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Tyr Gin Ser 1 9 Ser
<210> <211> <212> <213> 10 4 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Tyr Gin Ser 1 10 Leu
<210> <211> <212> <213> 11 4 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> MOD RES (4) . . . (4) Nie
<400> Tyr Gin Ser 1 11 Leu
<210> <211> <212> <213> 12 4 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (1) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Gin Ser 12 Leu
PL 197 006 B1 <210> 13 <211> 4 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> MOD RES (4) . . . (4) Nie
<400> Xaa Gin Ser 1 13 Leu
<210> <211> <212> <213> 14 4 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Ser Tyr Gin 1 14 Ser
<210> <211> <212> <213> 15 4 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (2) . . . (2) cykloheksyloglicyna
<400> Ser Xaa Gin 1 15 Ser
<210> <211> <212> <213> 16 5 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Ser Tyr Gin 16 Ser Val
PL 197 006 B1
1 5
<210> <211> <212> <213> 17 5 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <2 2 2 > <223> WARIANT (2)...(2) cykloheksyloglicyna
<400> Ser Xaa Gin 1 17 Ser Val 5
<210> <211> <212> <213> 18 5 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Ser Tyr Gin 1 18 Ser Leu 5
<210> <211> <212> <213> 19 5 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (2) . . . (2) cykloheksyloglicyna
<4 0 0> Ser Xaa Gin 1 19 Ser Leu 5
<210> <211> <212> <213> 20 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (i) aminokwas cykliczny podstawiony ugrupowaniem hydrofiłowym
<400> 20
PL 197 006 B1
Xaa Xaa Ser 1
Tyr Gin Ser 5 <210> 21 <211> 6 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223>
<221>
<222>
<223>
<400> Xaa Xaa Lys całkowicie zsyntetyzowana
WARIANT (1) · · (1) aminokwas cykliczny podstawiony ugrupowaniem hydrofiłowym
Tyr Gin Ser 5 <210> 22 <211> 6 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223>
<221>
<222>
<223>
<221>
<222>
<223>
<400> Xaa Xaa Xaa całkowicie zsyntetyzowana
WARIANT (1) · . · (1) aminokwas cykliczny podstawiony ugrupowaniem hydrofiłowym
WARIANT (3) . . . (3) homoarginina
Tyr Gin Ser 5 <210> 23 <211> 6 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223>
całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> aminokwas cykliczny podstawiony ugrupowaniem hydrofiłowym <221> WARIANT <222> (3)...(3) <223> homoarginina <221> WARIANT <222> (4)...(4)
PL 197 006 B1 <223> cykloheksyloalanina <400> 23
Xaa Xaa Xaa Xaa Gin Ser 1 5 <210> 24 <211> 4 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> aminokwas cykliczny podstawiony ugrupowaniem hydrofiłowym <400> 24 Xaa Tyr Gin Ser <210> 25 <211> 6 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> aminokwas cykliczny podstawiony ugrupowaniem hydrofiłowym <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna <400> 25
Xaa Xaa Ser Xaa Gin Ser 1 5 <210> 26 <211> 4 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1) ... (1) <223> aminokwas cykliczny podstawiony ugrupowaniem hydrofiłowym <221> WARIANT <222> (2)...(2) <223> cykloheksyloglicyna
PL 197 006 B1
<400> 26
Xaa Xaa Gin 1 Ser
<210> <211> <212> <213> 27 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Ser Ser Tyr 1 27 Gin Ser Ala 5
<210> <211> <212> <213> 28 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (3) . . . (3) cykloheksyloglicyna
<400> Ser Ser Xaa 1 28 Gin Ser Ser 5
<210> <211> <212> <213> 29 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Ser Ser Tyr 1 29 Gin Ser Ala 5
<210> <211> <212> <213> 30 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (3) . . . (3) cykloheksyloglicyna
<400> Ser Ser Xaa 1 30 Gin Ser Ser 5
PL 197 006 B1
<210> <211> <212> <213> 31 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> MOD RES (1) ... (1) 4 Hyp
<400> Pro Ser Ser 1 31 Tyr Gin Ser 5
<210> <211> <212> <213> 32 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> MOD RES (1) ...(1) 4Hyp
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Pro Ser Ser 1 32 Xaa Gin Ser 5
<210> <211> <212> <213> 33 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Ala Ser Tyr 1 33 Gin Ser Ser 5
<210> <211> <212> <213> 34 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (3) . . . (3) cykloheksyloglicyna
PL 197 006 B1 <400> 34
Ala Ser Xaa Gin Ser Ser 1 5 <210> 35 <211> 6 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <400> 35
Ala Ser Tyr Gin Ser Ala <210> 36 <211> 6 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (3)...(3) <223> cykloheksyloglicyna <400> 36
Ala Ser Xaa Gin Ser Ala 1 5 <210> 37 <211> 6 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <400> 37
Pro Ala Ser Tyr Gin Ser 1 5 <210> 38 <211> 6 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp
PL 197 006 B1 <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna <400> 38
Pro Ala Ser Xaa Gin Ser 1 5 <210> 39 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (3)...(3) <223> cykloheksyloglicyna <400> 39
Ser Ser Xaa Gin Ser Ala Pro 1 5 <210> 40 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (3)...(3) <223> cykloheksyloglicyna <400> 40
Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Pro 1 5 <210> 41 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (3)...(3) <223> cykloheksyloglicyna <221> MOD_RES <222> (7)...(7) <223> 4Hyp <400> 41
Ser Ser Xaa Gin Ser Ala Pro 1 5
PL 197 006 B1 <210> 42 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (3)...(3) <223> cykloheksyloglicyna <221> MOD_RES <222> (7)...(7) <223> 4Hyp <400> 42
Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Pro 1 5 <210> 43 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> Abu <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna <400> 43
Ala Ser Ser Xaa Gin Ser Pro 1 5 <210> 44 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> Abu <221> WARIANT <222> (4)....(4) <223> cykloheksyloglicyna <221> MOD_RES <222> (7)...(7) <223> 4Hyp
PL 197 006 B1
<400> 44
Ala Ser Ser 1 Xaa Gin Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 45 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (4)...(4) cykloheksyloglicyna
<400> Ser Ser Ser 1 45 Xaa Gin Ser Leu Pro 5
<210> <211> <212> <213> 46 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> o o Ό \ <223> WARIANT l Λ \ / Λ \ V 1 · · · k i cykloheksyloglicyna
<400> Ser Ser Ser 1 46 Xaa Gin Ser Val Pro 5
<210> <211> <212> <213> 47 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> MOD RES (8) . . . (8) 4Hyp
<400> Ser Ala Ser 1 47 Xaa Gin Ser Leu Pro 5
<210> <211> <212> 48 8 PRT
PL 197 006 B1 <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna <400> 48
Ser Ala Ser Xaa Gin Ser Val Pro 1 5 <210> 49 <211> 8 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> METYLOWANIE <222> (1)...(1) <223> N-metyloseryna <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna <221> WARIANT <222> (8)...(8) <223> kwas pipekolinowy <400> 49
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Leu Xaa 1 5 <210> 50 <211> 8 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> METYLOWANIE <222> (1)...(1) <223> N-metyloseryna <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna <221> WARIANT <222> (8)...(8) <223> pipekolina <400> 50
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Val Xaa 1 5
PL 197 006 B1
<210> <211> <212> <213> 51 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> MOD RES (1) ...(1) 4Hyp
<400> Pro Ser Ser ι_ 51 Tyr Gin Ser Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 52 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> MOD RES (1) . · · (1) 4Hyp
<221> <222> <223> MOD RES (8)...(8) 4Hyp
<400> Pro Ser Ser 1 52 Tyr Gin Ser Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 53 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> MOD RES (1) ... (1) 4Hyp
<400> Pro Ser Ser 1 53 Tyr Gin Ser Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 54 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
PL 197 006 B1
<221> <222> <223> MOD RES (1) . · · (1) 4Hyp
<400> Pro Ser Ser 1 54 Tyr Gin Ser Ser Ser 5
<210> <211> <212> <213> 55 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> MOD RES (1) ... (i) 4Hyp
<221> <222> <223> MOD RES (8) . . . (8) 4Hyp
<400> Pro Ser Ser 1 55 Tyr Gin Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 56 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> MOD RES (1) ... (i) 4Hyp
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Pro Ser Ser 1 56 Xaa Gin Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 57 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> MOD_RES <222> (1)...(1 <223> 4Hyp
PL 197 006 B1 <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna <400> 57
Pro Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Pro 1 5 <210> 58 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221> WARIANT <222> (4) ... (4) <223> cykloheksyloglicyna <400> 58
Pro Ser Ser Xaa Gin Ser Leu 1 5 <210> 59 ✓Ό 1 Ί \ H \ zL _L J_ / / <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna <400> 59
Pro Ser Ser Xaa Gin Ser Val 1 5 <210> 60 <211> 8 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp
PL 197 006 B1 <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna <400> 60
Pro Ala Ser Xaa Gin Ser Val Pro 1 5 <210> 61 <211> 8 <212> PRT <213a Sekwencja Sztuczna
<220> Ό O O \ udłkowiuie żsbyiiLetyzuWdiici
<221> <222> <223> MOD RES (1) · · · (1) 4Hyp
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (8) . . . (8) kwas pipekolinowy
<400> Pro Ala Ser 1 61 Xaa Gin Ser Ser Xaa 5
<210> <211> <212> <213> 62 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> MOD RES (1) - · - (i) 4 Hyp
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Pro Ser Ser 1 62 Xaa Gin Ser 5
<210> <211> <212> <213> 63 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
PL 197 006 B1
<221> <222> <223> MOD RES (1) ... (1) 4Hyp
<221> <222> <223> WARIANT (4)...(4) cykloheksyloglicyna
<400> 63
Pro Ser Ser Xaa Gin Ser Gly
1 5
<210> <211> <212> <213> 64 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (3) . . . (3) cykloheksyloglicyna
<400> Ser Ser Xaa 1 64 Gin Ser Gly 5
<210> <211> <212> <213> 65 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ...(1) 3-pirydyloalanina
<221> <222> <223> MOD RES (7) . . . (7) 4Hyp
<400> Xaa Ser Ser 1 65 Tyr Gin Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 66 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (1) 3-pirydyloalanina
PL 197 006 B1 <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna <400> 66
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Pro 1 5 <210> 67 <211> 8 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> 3,4-dihydroksyprolina <400> 67
Xaa Ser Ser Tyr Gin Ser Ser Pro 1 5 <210> 68 <211> 8 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> 3,4-dihydroksyprolina <221> MOD_RES <222> (8)...(8) <223> 4Hyp <400> 68
Xaa Ser Ser Tyr Gin Ser Ser Pro 1 5 <210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> homoarginina <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna
PL 197 006 B1 <400> 69
Xaa Ser Ala Xaa Gin Ser Leu 1 5 <210> 70 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> homoarginina <221> MOD_RES <222> (3)...(3) <223> 4Hyp <221> WARIANT <222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna <400> 70
Xaa Ser Pro Xaa Gin Ser Leu 1 5 <210> 71 <211> 5 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <221> WARIANT <222> (2)...(2) <223> cykloheksyloglicyna <400> 71
Pro Xaa Gin Ser Leu 1 5 <210> 72 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <400> 72
Asn Arg Ile Ser Tyr Gin Ser 1 5
PL 197 006 B1
<210> <211> <212> <213> 73 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Asn Lys Val 1 73 Ser Tyr Gin Ser 5
<210> <211> <212> <213> 74 10 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Asn Lys Met 1 74 Glu Thr Ser Tyr Gin Ser Ser 5 10
<210> <211> <212> <213> 75 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Asn Lys Leu 1 75 Ser Tyr Gin Ser Ser 5
<210> <211> <212> <213> 76 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> Asn Lys Ile 1 76 Ser Tyr Gin Ser 5
<210> <211> <212> <213> 77 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<400> 77
Gin Lys Ile Ser Tyr Gin Ser Ser 1 5
PL 197 006 B1
<221> <222> <223> ACETYLOWANIE (1) - · · (1) kwas N-acetylo-2-aminomasłowy
<221> <222> <223> WARIANT (4).., (4) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 90 Xaa Gin Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 91 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ...(1) kwas N-hydroksyacetylo-2-aminomasłowy
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 91 Xaa Gin Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 92 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) - .. (1) N-acetylo-3-pirydyloalanina
<221> <222> <223> WARIANT (4)...(4) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 92 Xaa Gin Ser Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 93 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
PL 197 006 B1
<221> <222> <223> WARIANT (1) . · · (1) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 93 Xaa Gin Ser Val 5
<210> <211> <212> <213> 94 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ...(i) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 94 Xaa Gin Ser Leu 5
<210> <211> <212> <213> 95 8 PRT Sekwencja. Sztuczna.
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (1) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (8) . . . (8) 4-trans-L-hydroksyprolina
<400> Xaa Ser Ser 1 95 Xaa Gin Ser Ser Xaa 5
<210> <211> <212> 96 7 PRT
PL 197 006 B1 <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina <221> WARIANT <222> (4) ... (4) <223> cykloheksyloglicyna <400> 96
Xaa Ser Ser Xaa Gin Ser Pro 1 5 <210> 97 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> N-acetylo-3-pirydyloalanina <221> WARIANT <222> (4) ... (4) <223> cykloheksyloglicyna <221> WARIANT <222> (6)...(6) <223> d-seryna <400> 97
Xaa Ser Ser Xaa Gin Xaa Pro 1 5 <210> 98 <211> 6 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> ACETYLOWANIE <222> (1)...(1) <223> N-metyloseryna <221> WARIANT <222> (3)...(3) <223> cykloheksyloglicyna <400> 98
Xaa Ser Xaa Gin Ser Gly 1 5
PL 197 006 B1
<210> <211> <212> <213> 99 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> ACETYLOWANIE (1) ... (1) N-acetyloseryna
<221> <222> <223> WARIANT (3) . . . (3) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (7) . . . (7) 4-trans-L-hydroksyprolina
<400> Xaa Ser Xaa 1 99 Gin Ser Ser Xaa 5
<210> <211> <212> <213> 100 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> ACETYLOWANIE (1) ...(1) N-acetyloseryna
<221> <222> <223> WARIANT (3) . . . (3) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Xaa 1 100 Gin Ser Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 101 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (i) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna '
PL 197 006 B1
<221> <222> <223> WARIANT (7) . . . (7) d-seryna
<221> <222> <223> WARIANT (8) . . . (8) 4-trans-L-hydroksyprolina
<400> Xaa Ser Ser 1 101 Xaa Gin Ser Xaa Xaa 5
<210> <211> <212> <213> 102 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ...(1) N-acetyło-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 102 Xaa Gin Ser Leu 5
<210> <211> <212> <213> 103 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (1) N-acetyło-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 103 Xaa Gin Ser Ala 5
<210> <211> <212> <213> 104 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzdwana
PL 197 006 B1 <221> WARIANT
<222> <223> (1) · · - (1) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (7) . . . (7) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 104 Xaa Gin Ser Xaa 5
<210> <211> <212> <213> 105 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ...(1) N-acetyło-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> MOD RES (8) . . . (8) MeGly
<400> Xaa Ser Ser 1 105 Xaa Gin Ser Ser Gly 5
<210> <211> <212> <213> 106 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> ACETYLOWANIE (1) ... (i) N-acetyloseryna
<221> <222> <223> WARIANT (3) . . . (3) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (8) . . . (8) 4-trans-L-hydroksyprólina
PL 197 006 B1 <210> 78 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> MOD_RES <222> (2)...(2) <223> 4Hyp <400> 78
Asn Pro Ile Ser Tyr Gin Ser <210> 79 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> MOD_RES <222> (2)...(2) <223> 4Hyp <400> 79
Asn Pro Val Ser Tyr Gin Ser 1 5 <210> 80 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> MOD_RES <222> (1)...(1) <223> 4Hyp <400> 80
Pro Ala Ser Tyr Gin Ser Ser 1 5 <210> 81 <211> 7 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> 3,4-dihydroksyprolina
PL 197 006 B1
<400> 81
Xaa Ala Ser 1 Tyr Gin Ser Ser 5
<210> <211> <212> <213> 82 5 PRT . Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> MOD RES (1) ... (1) 3Hyp
<221> <222> <223> WARIANT (3) . . . (3) cykloheksyloglicyna
<400> Pro Ser Xaa 1 82 Gin Ser 5
<210> <211> <212> <213> 83 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> MOD RES (1) ... (1) 4Hyp
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Pro Ala Ser 1 83 Xaa Gin Ser Ser 5
<210> <211> <212> <213> 84 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> ACETYLOWANIE (1) ... (1) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> WARIANT
<222> (4)...(4) <223> cykloheksyloglicyna
PL 197 006 B1
<400> 84
Xaa Ser Ser 1 Xaa Gin Ser Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 85 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (1) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 85 Xaa Gin Ser Gly 5
<210> <211> <212> <213> 86 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ...(1) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> MOD RES (8) . . . (8) MeGly
<400> Xaa Ser Ser 1 86 Xaa Gin Ser Ser Gly 5
<210> 87 <211> 8
<212> <213> PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) . · · (1) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
PL 197 006 B1
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<4 00> Xaa Ser Ser 1 87 Xaa Gin Ser Ser Pro 5
<210> <211> <212> \ X s_> 88 7 PRT Sekwencja Sztuczna.
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (1) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 88 Xaa Gin Ser Val 5
<210> <211> <212> <213> 89 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (1) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (8) . . . (8) 4-trans-L-hydroksyprolina
<400> Xaa Ser Ser 1 89 Xaa Gin Ser Ser Xaa 5
<210> <211> <212> <213> 90 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
PL 197 006 B1
<400> 106
Xaa Ser Xaa 1 Gin Ser Ser Xaa 5
<210> <211> <212> <213> 107 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ...(1) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 107 Xaa Gin Ser Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> <220> <223> <221> <222> <223> <221> <222> <223> 108 8 PRT Sekwencja Sztuczna całkowicie zsyntetyzowana WARIANT (1) ...(i) kwas N-acetyloaminomasłowy WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (7) . . . (7) d-seryna
<400> Xaa Ser Ser 1 108 Xaa Gin Ser Xaa Pro 5
<210> <211> <212> <213> 109 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
PL 197 006 B1
<221> <222> <223> WARIANT (1) - - · (1) kwas N-acetylo-2-aminomasłowy
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Ser 1 109 Xaa Gin Ser Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 110 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> WARIANT
<222> <223> (1)... (1) kwas N-acetylo-2-aminomasłowy
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (6) . . . (6) d-seryna
<400> Xaa Ser Ser 1 110 Xaa Gin Xaa Pro 5
<210> <211> <212> <213> 111 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> ACETYLOWANIE \ / \ / N-acetyloseryna
<221> <222> <223> WARIANT (3) . . . (3) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Ser Xaa 1 111 Gin Ser Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 112 7 PRT Sekwencja Sztuczna -
PL 197 006 B1
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (1) N-acetyloseryna
<221> <222> <223> WARIANT (3) ... (3) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> KONFLIKT (6) ... (6) d-seryna
<221> <222> <223> WARIANT (7) . . . (7) 4-trans-L-hydroksyprolina
<400> Xaa Ser Xaa 1 112 Gin Ser Xaa Pro 5
<210> <211> <212> <213> 113 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (i) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (6) . . . (6) d-seryna
<400> Xaa Ser Ser 1 113 Xaa Gin Xaa Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 114 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT . (1) ...(i) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
PL 197 006 B1
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (5) . . . (5) d-glutamina
<400> Xaa Ser Ser 1 114 Xaa Xaa Ser Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 115 8 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (i) N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
<221> <222> <223> WARIANT (4) . . . (4) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (5) . . . (5) d-glutamina
<221> <222> <223> WARIANT (6) . . . (6) d-seryna
<400> Xaa Ser Ser 1 115 Xaa Xaa Xaa Ser Pro 5
<210> <211> <212> <213> 116 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (1) N-acetyloseryna
<221> <222> <223> WARIANT (2)...(2) cykloheksyloglicyna
<400> Xaa Xaa Gin 1 116 Ser Ser Pro ' 5
PL 197 006 B1
<210> <211> <212> <213> 117 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (1) N-acetyloseryna
<221> <222> <223> WARIANT (2) . . . (2) /“•571/-1 τ-\ rr 1 -i /-'rzno __na
<221> <222> <223> WARIANT (6) . . . (6) 4-trans-L-hydroksyprolina
<400> Xaa Xaa Gin 1 117 Ser Ser Xaa 5
<210> <211> <212> <213> 118 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (i) N-acetyloseryna
<221> <222> <223> WARIANT (2) . . . (2) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> MOD RES (6) . . . (6) MeGly
<400> Xaa Xaa Gin 1 118 Ser Ser Gly 5
<210> <211> <212> <213> 119 7 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (i) N-acetyloseryna
PL 197 006 B1 <221> WARIANT <222> (2)...(2) <223> cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> MOD RES (6) . . . (6) Aib
<4 0 0> Xaa Xaa Gin 1 119 Ser Ser Ala Pro 5
<210> <211> <212> <213> 120 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ...(i) N-acetyloseryna
<221> <222> <223> WARIANT (2) . . . (2) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> WARIANT (6) . . . (6) N-metyloalanina
<400> Xaa Xaa Gin 1 120 Ser Ser Xaa 5
<210> <211> <212> <213> 121 6 PRT Sekwencja Sztuczna
<220> <223> całkowicie zsyntetyzowana
<221> <222> <223> WARIANT (1) ... (1) N-acetyloseryna
<221> <222> <223> WARIANT (2) . . . (2) cykloheksyloglicyna
<221> <222> <223> MOD RES (5) . . . (5) Aib
<400> Xaa Xaa Gin 1 121 Ser Ala Pro 5
PL 197 006 B1 <210> 122 <211> 6 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> N-hydroksyacetyloseryna <221> WARIANT <222> (2)...(2) <223> cykloheksyloglicyna <221> MOD_RES <222> (6)...(6) <223> MeGly <400> 122
Xaa Xaa Gin Ser Ser Gly 1 5 <210> 123 <211> 6 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> N-acetyloseryna <221> WARIANT <222> (2)...(2) <223> cykloheksyloglicyna <221> WARIANT <222> (6)...(6) <223> kwas pipekolinowy <400> 123
Xaa Xaa Gin Ser Ser Xaa 1 5 <210> 124 <211> 8 <212> PRT <213> Sekwencja Sztuczna <220>
<223> całkowicie zsyntetyzowana <221> WARIANT <222> (1)...(1) <223> N-acetylo-4-trans-L-hydroksyprolina
PL 197 006 B1
<221> WARIANT
<222> (4) . . . (4)
<223> cykloheksyloglicyna
<221> WARIANT
<222> (8) . . . (8)
<223> kwas pipekolinowy
<4 0 0> 124
Ser Ser Xaa Gin Ser Ser Xaa
5
<210> 125
<211> 6
<212> PRT
<213> Sekwencja Sztuczna
<220>
<223> całkowicie zsyntety:
<221> WARIANT
<222> (1) ... (1)
<223> N-acetyloseryna
<221> WARIANT
<222> (2) ... (2)
<223> cykloheksyloglicyna
<221> WARIANT
<222> (6) . . . (6)
<223> N-metylo-d-alanina
<400> 125
Xaa Gin Ser Ser Xaa
5
Zastrzeżenia patentowe

Claims (17)

1. Koniugat do leczenia raka prostaty, zawierający środek cytotoksyczny alkaloid barwinka przyłączony do oligopeptydu, który to oligopeptyd zawiera sekwencję aminokwasów o długości od 3 do 100 aminokwasów, która jest selektywnie proteolitycznie rozszczepiana przez wolny antygen swoisty prostaty, przy czym środkiem służącym do przyłączenia jest ewentualnie przyłączenie poprzez łącznik chemiczny, i punkt przyłączenia oligopeptydu znajduje się na tlenie w pozycji 4 cytotoksycznego alkaloidu barwinka, albo jego farmaceutycznie dopuszczalna sól, przy czym środek cytotoksyczny jest wybrany z grupy obejmującej następujące alkaloidy barwinka:
a) winblastyna,
b) 4-deacetylowinblastyna,
c) winkrystyna,
d) leurozydyna, i
e) windezyna, lub ich izomery optyczne.
2. Koniugat według zastrz. 1, w którym środek cytotoksyczny stanowi 4-deacetylowinblastyna.
PL 197 006 B1
3. Koniugat według zastrz. 1, w którym oligopeptyd zawiera oligomer wybrany z grupy obejmującej:
a) AsnLysIleSerTyrGln | Ser
b) LysIleSerTyrGln | Ser
c) AsnLysIleSerTyrTyr | Ser
d) AsnLysAlaSerTyrGln | Ser
e) SerTyrGln | SerSer
f) LysTyrGln | SerSer
g) hArgTyrGln | SerSer
h) hArgChaGln | SerSer
i) TyrGln | SerSer
j) TyrGln | SerLeu
k) TyrGln | SerNle
l) ChgGln | SerLeu
m) ChgGln | SerNle
n) SerTyrGln | Ser
o) SerChgGln | Ser
p) SerTyrGln | SerVal
q) SerChgGln | SerVal
r) SerTyrGln | SerLeu
s) SerChgGln | SerLeu
t) HaaXaaSerTyrGln | Ser
u) HaaXaaLysTyrGln | Ser
v) HaaXaahArgTyrGln | Ser
w) HaaXaahArgChaGln | Ser
x) HaaTyrGln | Ser
y) HaaXaaSerChgGln | Ser
z) HaaChgGln | Ser (NR ID.SEKW.: 1); (NR ID.SEKW.: 2); (NR ID.SEKW.: 3); (NR ID.SEKW.: 4); (NR ID.SEKW.: 5); (NR ID.SEKW.: 6); (NR ID.SEKW.: 7); (NR ID.SEKW.: 8);
(NR ID.SEKW.: 9); (NR ID.SEKW.: 10); (NR ID.SEKW.: 11); (NR ID.SEKW.: 12); (NR ID.SEKW.: 13); (NR ID.SEKW.: 14); (NR ID.SEKW.: 15); (NR ID.SEKW.: 16); (NR ID.SEKW.: 17); (NR ID.SEKW.: 18); (NR ID.SEKW.: 19); (NR ID.SEKW.: 20); (NR ID.SEKW.: 21); (NR ID.SEKW.: 22); (NR ID.SEKW.: 23); (NR ID.SEKW.: 24); (NR ID.SEKW.: 25); (NR ID.SEKW.: 26);
gdzie Haa oznacza aminokwas cykliczny podstawiony ugrupowaniem hydrofilowym, hArg oznacza homoargininę, Xaa oznacza dowolny aminokwas, Cha oznacza cykloheksyloalaninę i Chg oznacza cykloheksyloglicynę.
4. Koniugat według zastrz. 1, w którym oligopeptyd zawiera oligomer wybrany z grupy obejmującej:
PL 197 006 B1
SerSerChgGln | SerAlaPro
SerSerChgGln | SerSerPro
SerSerChgGln | SerAla4-Hyp
SerSerChgGln | SerSer4-Hyp
AbuSerSerChgGln | SerPro
AbuSerSerChgGln | Ser4-Hyp SerSerSerChgGln | SerLeupro SerSerSerChgGln | SerValpro SerAlaSerChgGln | SerLeu4-Hyp SerAlaSerChgGln | SerValPro (N-metylo-Ser) SerSerChgGln | SerLeuPip (N-metylo-Ser) SerSerChgGln | SerValPip 4-HypSerSerTyrGln | SerSerPro 4-HypSerSerTyrGln | SerSer4-Hyp 4-HypSerSerTyrGln | SerSerPro 4-HypSerSerTyrGln | SerSerSar 4-HypSerSerTyrGln | Ser4-Hyp 4-HypSerSerChgGln | SerPro 4-HypSerSerChgGln | SerSerPro 4-HypSerSerChgGln | SerLeu 4-HypSerSerChgGln | SerVal 4-HypAlaSerChgGln | SerValPro 4-HypAlaSerChgGln | SerSerPip 4-HypSerSerChgGln | Ser 4-HypSerSerChgGln | SerGly SerSerChgGln | SerGly 3-PalSerSerTyrGln | Ser4-Hyp 3-PalSerSerChgGln | SerPro (3,4-DiHyp)SerSerTyrGln | SerSerPro (3,4-DiHyp)SerSerTyrGln | SerSer4-Hyp (NR ID.SEKW.: 39); (NR ID.SEKW.: 40); (NR ID.SEKW.: 41); (NR ID.SEKW.: 42); (NR ID.SEKW.: 43); (NR ID.SEKW.: 44); (NR ID.SEKW.: 45); (NR ID.SEKW.: 46); (NR ID.SEKW.: 47); (NR ID.SEKW.: 48); (NR ID.SEKW.: 49); (NR ID.SEKW.: 50); (NR ID.SEKW.: 51); (NR ID.SEKW.: 52); (NR ID.SEKW.: 53); (NR ID.SEKW.: 54); (NR ID.SEKW.: 55); (NR ID.SEKW.: 56); (NR ID.SEKW.: 57); (NR ID.SEKW.: 58); (NR ID.SEKW.: 59); (NR ID.SEKW.: 60); (NR ID.SEKW.: 61); (NR ID.SEKW.: 62); (NR ID.SEKW.: 63); (NR ID.SEKW.: 64); (NR ID.SEKW.: 65); (NR ID.SEKW.: 66); (NR ID.SEKW.: 67); i (NR ID.SEKW.: 68);
gdzie Abu oznacza kwas aminomasłowy, 4-Hyp oznacza 4-hydroksyprolinę, Pip oznacza kwas pipekolinowy, 3,4-DiHyp oznacza 3,4-dihydroksyprolinę, 3-Pal oznacza 3-pirydyloalaninę, Sar oznacza sarkozynę i Chg oznacza cykloheksyloglicynę.
5. Koniugat według zastrz. 1, w którym oligopeptyd zawiera oligomer wybrany z grupy obejmującej:
PL 197 006 B1
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerGly
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-SerVal
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-4-trans-L-Hyp
Ac-Abu- Ser- Ser-Chg-Gln- Ser-Pro hydroksyacetyloAbu-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Pro acetylo-3-PALSer-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Val
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Leu
Ac-4-trans-L-Hyp SerSerChgGln SerSer4 - trans-L-Hyp
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerPro
Ac-SerSerChgGłnSerGly
Ac-SerSerChgGłnSerSer4-trans-L-Hyp
Ac-SerSerChgGln SerSerPro
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerAla
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerChg
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar
Ac-SerSerChgGlnSerSerHyp
A. /-»...... J'*'»-»*·%et_T I4łTt\QarQ»r,r'I*i
--Γ” Ul CUiO_U“i x x
Ac-Abu SerSerChgGlnSer(dSer) Pro
Ac-Abu SerSerChgGlnSerSerPro
Ac-SerSerChgGlnSerSerPro
Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)SerSerPro
Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)(dSer)SerPro
Ac- SerChgGln- SerSerPro
Ac-SerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp
Ac-SerChgGlnSerSerSar
Ac-SerChgGlnSerSerAibPro
Ac- SerCh gGln Ser SerN-Me-Ala
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPip
Ac- SerChgGln Ser SerN-Me-dA (NR ID.SEKW.: 84) (NR ID.SEKW.: 85) (NR ID.SEKW.: 86) (NR ID.SEKW.: 87) (NR ID.SEKW.: 88) (NR ID.SEKW.: 89) (NR ID.SEKW.: 90) (NR ID.SEKW.: 91) (NR ID.SEKW.: 92) (NR ID.SEKW.: 93) (NR ID.SEKW.: 94) (NR ID.SEKW.: 95) (NR ID.SEKW.: 96) (NR ID.SEKW.: 98) (NR ID.SEKW.: 99) (NR ID.SEKW.: 100) (NR ID.SEKW.: 103) (NR ID.SEKW.: 104) (NR ID.SEKW.: 105) (NR ID.SEKW.: 106) (NR ID.SEKW.: 107) (NR ID.SEKW.: 108) (NR ID.SEKW.: 109) (NR ID.SEKW.: 111) (NR ID.SEKW.: 114) (NR ID.SEKW.: 115) (NR ID.SEKW.: 116) (NR ID.SEKW.: 117) (NR ID.SEKW.: 118) (NR ID.SEKW.: 119) (NR ID.SEKW.: 120) (NR ID.SEKW.: 124) i (NR ID.SEKW.: 125)
PL 197 006 B1 gdzie Abu oznacza kwas aminomasłowy, 4-trans-L-Hyp oznacza 4-trans-L-hydroksyprolinę, Pip oznacza kwas pipekolinowy, 3,4-DiHyp oznacza 3,4-dihydroksyprolinę, 3-PAL oznacza 3-pirydyloalaninę, Sar oznacza sarkozynę i Chg oznacza cykloheksyloglicynę.
6. Koniugat o wzorze la:
w którym:
oligopeptyd oznacza oligopeptyd o długości od 3 do 100 aminokwasów, który jest specyficznie rozpoznawany przez wolny antygen swoisty prostaty (PSA) i jest zdolny do ulegania rozszczepianiu proteolitycznemu przez aktywność enzymatyczną wolnego antygenu swoistego prostaty,
XL jest wybrany z grupy obejmującej: wiązanie,
-C(O)-(CH2)u -W-(CH2)u-O i -C(O)-(CH2)u-W-(CH2)u -NH-;
R jest wybrany z grupy obejmującej a) atom wodoru, b) (C=O)R1a,
c)
d)
e)
f) etoksyskwaran; i
g) grupę kotyninylową;
R1 i R2 są niezależnie wybrane z grupy obejmującej: atom wodoru, grupę OH, grupę C1-C6-alkilową, grupę C1-C6-alkoksylową, grupę C1-C6-aralkilową i grupę arylową;
R1a oznacza grupę C1-C5-alkilową, hydroksylowaną grupę C3-C8-cykloalkilową, polihydroksylowaną grupę C3-C8-cykloalkilową, grupę hydroksyloarylową, grupę polihydroksyloarylową albo grupę arylową,
R9 oznacza atom wodoru, grupę (C1-C3-alkil)-CO, albo chloro-podstawioną grupę (C1-C3-alkil)-CO;
PL 197 006 B1
W jest wybrany z grupy obejmującej grupę C1-C6-alkilową o łańcuchu prostym albo rozgałęzioną, grupę cyklopentylową, grupę cykloheksylową, grupę cykloheptylową albo grupę bicyklo[2.2.2]-oktanylową;
n oznacza 1, 2, 3 albo 4;
p oznacza zero albo liczbę cał kowitą mię dzy 1 i 100; q oznacza 0 albo 1, z zastrzeżeniem, że jeżeli p oznacza zero, to q oznacza 1; r oznacza 1, 2 albo 3;
t oznacza 3 albo 4; u oznacza 0, 1, 2 albo 3, albo jego farmaceutycznie dopuszczalna sól albo izomer optyczny.
7. Koniugat według zastrz. 6, w którym oligopeptydem jest oligomer, który zawiera sekwencję aminokwasów, wybraną z grupy obejmującej:
a) AsnLysIleSerTyrGln | Ser (NRID.SEKW.: 1), b) LysIleSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 2), c) AsnLysIleSerTyrTyr | Ser (NR ID.SEKW.: 3), d) AsnLysAłaSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 4), e) SerTyrGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 5);
f) LysTyrGłn | SerSer (NR ID.SEKW.: 6);
g) hArgTyrGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 7);
h) hArgChaGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 8);
i) TyrGln | SerSer (NR ID.SEKW.: 9);
j) TyrGln | SerLeu (NR ID.SEKW.: 10);
k) TyrGln | SerNle (NRID.SEKW.: 11);
1) ChgGln | SerLeu (NR ID.SEKW.: 12);
m) ChgGln | SerNle (NR ID.SEKW.: 13);
n) SerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 14);
o) SerChgGln | Ser (NRID.SEKW.: 15);
P) SerTyrGln | SerVal (NR ID.SEKW.: 16);
q) SerChgGln | SerVal (NRID.SEKW.: 17);
r) SerTyrGln | SerLeu (NR ID.SEKW.: 18);
s) SerChgGln | SerLeu (NR ID.SEKW.: 19);
t) HaaXaaSerTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 20);
u) HaaXaaLysTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.; 21);
v) HaaXaahArgTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 22);
w) HaaXaahArgChaGln | Ser (NR ID.SEKW.: 23);
x) HaaTyrGln | Ser (NR ID.SEKW.: 24);
y) HaaKaaSerChgGln | Ser (NR ID.SEKW.: 25);
z) HaaChgGln | Ser (NR ID.SEKW.: 26);
gdzie Haa oznacza aminokwas cykliczny podstawiony ugrupowaniem hydrofilowym, hArg oznacza, homoargininę, Xaa oznacza dowolny aminokwas, Cha oznacza cykloheksyloalaninę i Chg oznacza cykloheksyloglicynę;
albo jego izomer optyczny.
PL 197 006 B1
8. Koniugat według zastrz. 7, w którym Haa oznacza trans-4-hydroksy-L-prolinę;
albo jego izomer optyczny.
9. Koniugat według zastrz. 6, w którym oligopeptyd-R jest wybrany z grupy obejmującej:
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPro;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerGly;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar;
ćuia-Ł/“n.ypOCX -oci -oci -r iu,
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-SerVal;
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser4-trans-L-Hyp;
Ac-Abu-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Pro;
hydroksyacetyloAbu- Ser- Ser-Chg-Gln- Ser- Pro;
acetylo-3-PALSer-Ser-Chg-Gln-Ser-Ser-Pro;
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Val;
Ac-4-trans-L-Hyp-Ser-Ser-Chg-Gln-Ser-Leu;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSer4-trans-L-Hyp;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerPro;
Ac-SerSerChgGlnSerGly;
Ac-SerSerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp;
Ac-SerSerChgGlnSerSerPro;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerAla;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerChg;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerSar;
Ac- SerSerChgGlnSerSerHyp;
Art Λ +- *· r* *-» o Τ <ττΓ”1-1·η .fiV-“T~L.A CVLAO”A-/_A pFUiV-A UVi ‘-'νι a a w ?
Ac-AbuSerSerChgGlnSer (dSer)Pro;
Ac-AbuSerSerChgGlnSerSerPro;
Ac- SerSerChgGlnSerSerPro;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)SerSerPro;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChg(dGln)(dSer) SerPro;
Ac- SerChgGln- SerSerPro;
Ac-SerChgGlnSerSer-4-trans-L-Hyp;
Ac-SerChgGlnSerSerSar;
Ac-SerChgGlnSerSerAibPro;
Ac-SerChgGlnSerSerN-Me-Ala;
Ac-4-trans-L-HypSerSerChgGlnSerSerPip;
Ac-SerChgGlnSerSerN-Me-dA;
(NR ID.SEKW.: 84) (NR ID.SEKW.: 85) (NR ID.SEKW /MD ΤΓΑ |1U\ IM.kJUAYW (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW. (NR ID.SEKW. (NR ID.SEKW. (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW. (NR ID.SEKW. (NR ID.SEKW. (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW. (NR ID.SEKW. (NR ID.SEKW. (NR ID.SEKW. (NR ID.SEKW.
(NR ID.SEKW (NR ID.SEKW. (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW (NR ID.SEKW i (NR ID.SEKW.
86)
88)
89)
90)
91)
92)
93)
94)
95)
96) 98) : 99) 100)
103)
104)
105)
106) 1Ω7Ϊ ·* ~ · I
108)
109)
111)
114)
115)
116)
117)
118)
119)
120)
124)
125)
PL 197 006 B1 gdzie Abu oznacza kwas aminomasłowy, 4-trans-L-Hyp oznacza 4-trans-L-hydroksyprolinę, Pip oznacza kwas pipekolinowy, 3,4-DiHyp oznacza 3,4-dihydroksyprolinę, 3-PAL oznacza 3-pirydyloalaninę, Sar oznacza sarkozynę i Chg oznacza cykloheksyloglicynę.
10. Koniugat według zastrz. 6, w którym jest wybrany z grupy obejmującej związki o wzorze:
w którym X oznacza
PL 197 006 B1
PL 197 006 B1 albo jego farmaceutycznie dopuszczalna sól albo izomer optyczny.
11. Koniugat według zastrz. 6, którym jest:
albo jego farmaceutycznie dopuszczalna sól albo izomer optyczny.
12. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera nośnik farmaceutyczny i zdyspergowaną w nim terapeutycznie skuteczną ilość koniugatu określonego jak w zastrz. 1.
13. Kompozycja farmaceutyczna, znamienna tym, że zawiera nośnik farmaceutyczny i zdyspergowaną w nim terapeutycznie skuteczną ilość koniugatu określonego jak w zastrz. 6.
14. Kompozycja według zastrz. 13, znamienna tym, że zawiera koniugat określony jak w zastrz. 10.
15. Zastosowanie kompozycji określonej jak w zastrz. 12 do wytwarzania leku do leczenia raka prostaty.
16. Zastosowanie kompozycji określonej jak w zastrz. 13 do wytwarzania leku do leczenia raka prostaty.
17. Zastosowanie według zastrz. 16, w którym kompozycja jest określona jak w zastrz. 14.
PL340768A 1997-12-02 1998-11-25 Koniugat do leczenia raka prostaty, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna i jej zastosowanie PL197006B1 (pl)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US6711097P 1997-12-02 1997-12-02
GBGB9804399.5A GB9804399D0 (en) 1998-03-02 1998-03-02 Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
PCT/US1998/025358 WO1999028345A1 (en) 1997-12-02 1998-11-25 Conjugates useful in the treatment of prostate cancer

Publications (2)

Publication Number Publication Date
PL340768A1 PL340768A1 (en) 2001-02-26
PL197006B1 true PL197006B1 (pl) 2008-02-29

Family

ID=26313204

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PL340768A PL197006B1 (pl) 1997-12-02 1998-11-25 Koniugat do leczenia raka prostaty, zawierająca go kompozycja farmaceutyczna i jej zastosowanie

Country Status (26)

Country Link
US (2) US20060148718A1 (pl)
EP (1) EP1036093A1 (pl)
JP (1) JP2001525337A (pl)
KR (1) KR100580137B1 (pl)
CN (1) CN1181092C (pl)
AR (1) AR016427A1 (pl)
AU (1) AU744652B2 (pl)
BG (1) BG65486B1 (pl)
BR (1) BR9815116A (pl)
CA (1) CA2311615A1 (pl)
DZ (1) DZ2665A1 (pl)
EA (1) EA002745B1 (pl)
EE (1) EE200000333A (pl)
HR (1) HRP20000367A2 (pl)
HU (1) HUP0100350A3 (pl)
ID (1) ID24735A (pl)
IL (1) IL136167A0 (pl)
IS (1) IS5502A (pl)
NO (1) NO20002804L (pl)
NZ (1) NZ504615A (pl)
PE (1) PE20000009A1 (pl)
PL (1) PL197006B1 (pl)
SK (1) SK8282000A3 (pl)
TR (1) TR200002260T2 (pl)
TW (1) TW577897B (pl)
WO (1) WO1999028345A1 (pl)

Families Citing this family (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DK1144011T3 (da) * 1998-12-11 2010-07-05 Coulter Pharm Inc Pro-drug-forbindelser og fremgangsmåde til fremstilling deraf
GB9924759D0 (en) * 1999-10-19 1999-12-22 Merck Sharp & Dohme Process for preparing peptide intermediates
US7842581B2 (en) 2003-03-27 2010-11-30 Samsung Electronics Co., Ltd. Methods of forming metal layers using oxygen gas as a reaction source and methods of fabricating capacitors using such metal layers
JP2010536790A (ja) 2007-08-17 2010-12-02 パーデュー・リサーチ・ファウンデーション Ｐｓｍａ結合性リガンド−リンカー結合体及び使用方法
US9951324B2 (en) 2010-02-25 2018-04-24 Purdue Research Foundation PSMA binding ligand-linker conjugates and methods for using
CN104955484B (zh) * 2012-08-15 2019-01-15 文森医学公司 用于***癌成像的***特异性抗原药剂及其使用方法
AU2013341711A1 (en) * 2012-11-12 2015-05-21 Redwood Bioscience, Inc. Compounds and methods for producing a conjugate
BR112015011118B1 (pt) 2012-11-15 2022-12-13 Endocyte, Inc Conjugado; composição farmacêutica; e uso de um conjugado
WO2014178839A1 (en) 2013-04-30 2014-11-06 Hewlett-Packard Development Company, L.P. Memory access rate
TN2016000137A1 (en) 2013-10-18 2017-10-06 Deutsches Krebsforsch Labeled inhibitors of prostate specific membrane antigen (psma), their use as imaging agents and pharmaceutical agents for the treatment of prostate cancer.
US10188759B2 (en) 2015-01-07 2019-01-29 Endocyte, Inc. Conjugates for imaging
CA3203072A1 (en) 2020-12-22 2022-06-30 Andrea CASAZZA Compounds comprising a tetrapeptidic moiety
WO2022167664A1 (en) 2021-02-07 2022-08-11 Cobiores Nv Compounds comprising a tetrapeptidic moiety

Family Cites Families (17)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4203898A (en) * 1977-08-29 1980-05-20 Eli Lilly And Company Amide derivatives of VLB, leurosidine, leurocristine and related dimeric alkaloids
US4296105A (en) * 1978-08-03 1981-10-20 Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire Derivatives of doxorubicine, their preparation and use
US4719312A (en) * 1978-10-02 1988-01-12 Merck & Co., Inc. Lysosometropic detergent therapeutic agents
US4376765A (en) * 1980-03-31 1983-03-15 Institut International De Pathologie Cellulaire Et Moleculaire Medicaments, their preparation and compositions containing same
US4639456A (en) * 1980-06-10 1987-01-27 Omnichem S.A. Vinblastin-23-oyl amino acid derivatives
ATE64396T1 (de) * 1983-04-29 1991-06-15 Omnichem Sa Konjugierte vinblastin-verbindungen und ihre derivate, verfahren zu ihrer herstellung und diese enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen.
FR2546163B1 (fr) * 1983-05-16 1987-10-09 Centre Nat Rech Scient Nouveaux derives acyles hydrosolubles de peptides ou d'amino-acides, leur preparation et leur application
FR2626882B1 (fr) * 1988-02-08 1991-11-08 Ire Celltarg Sa Conjugues de derives de vinca comportant une chaine detergente en position c-3
US5391723A (en) * 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
EP0647450A1 (en) * 1993-09-09 1995-04-12 BEHRINGWERKE Aktiengesellschaft Improved prodrugs for enzyme mediated activation
US5866679A (en) * 1994-06-28 1999-02-02 Merck & Co., Inc. Peptides
US6143864A (en) * 1994-06-28 2000-11-07 Merck & Co., Inc. Peptides
US5599686A (en) * 1994-06-28 1997-02-04 Merck & Co., Inc. Peptides
EP0855910A4 (en) * 1995-10-18 2000-07-05 Merck & Co Inc CONJUGATES USEFUL FOR TREATING BENIN PROSTATIC ADENOMA
JP2001501601A (ja) * 1996-09-12 2001-02-06 メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド 前立腺ガンの治療において有用な共役体
US5998362A (en) * 1996-09-12 1999-12-07 Merck & Co., Inc. Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
HRP970566A2 (en) * 1996-10-30 1998-08-31 Jones Deborah Defeo Conjugates useful in the treatment of prostate canser

Also Published As

Publication number Publication date
BG65486B1 (bg) 2008-09-30
EA002745B1 (ru) 2002-08-29
NO20002804D0 (no) 2000-05-31
EE200000333A (et) 2001-08-15
AU744652B2 (en) 2002-02-28
ID24735A (id) 2000-08-03
AR016427A1 (es) 2001-07-04
HUP0100350A2 (hu) 2001-08-28
HRP20000367A2 (en) 2000-12-31
NZ504615A (en) 2003-05-30
IL136167A0 (en) 2001-05-20
US20070021350A1 (en) 2007-01-25
BG104563A (en) 2001-04-30
BR9815116A (pt) 2000-10-10
JP2001525337A (ja) 2001-12-11
US20060148718A1 (en) 2006-07-06
TW577897B (en) 2004-03-01
TR200002260T2 (tr) 2000-12-21
CN1181092C (zh) 2004-12-22
IS5502A (is) 2000-05-19
KR100580137B1 (ko) 2006-05-16
DZ2665A1 (fr) 2003-03-22
PL340768A1 (en) 2001-02-26
PE20000009A1 (es) 2000-01-27
CA2311615A1 (en) 1999-06-10
WO1999028345A1 (en) 1999-06-10
EP1036093A1 (en) 2000-09-20
SK8282000A3 (en) 2000-11-07
CN1284086A (zh) 2001-02-14
KR20010032687A (ko) 2001-04-25
NO20002804L (no) 2000-07-21
EA200000603A1 (ru) 2000-12-25
AU1612399A (en) 1999-06-16
HUP0100350A3 (en) 2001-09-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20020103136A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20060148718A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU715632B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU726434B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU740597B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US6174858B1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20070244055A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
JP2000506494A (ja) 良性前立腺過形成の治療に有用な複合体
US20030232760A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US6127333A (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20030133927A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20040081659A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
US20020115596A1 (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
AU749063B2 (en) Conjugates useful in the treatment of prostrate cancer
MXPA00005434A (en) Conjugates useful in the treatment of prostate cancer
CZ20002056A3 (cs) Konjugáty použitelné v léčbě karcinomu prostaty

Legal Events

Date Code Title Description
LAPS Decisions on the lapse of the protection rights

Effective date: 20091125