KR100242266B1 - Novel thrombin inhibitors having camphor structure - Google Patents

Abstract

본 발명은 하기 화학식 1 로 표시되는 신규한 트롬빈 억제제, 그의 제조방법 및 이 화합물을 유효성분으로 함유하는 트롬빈 억제제 조성물에 관한 것이다:The present invention relates to a novel thrombin inhibitor represented by the following formula (1), a method for preparing the same, and a thrombin inhibitor composition containing the compound as an active ingredient:

상기식에서,In the above formula,

X 및 Y 는 함께 =O 를 나타내거나, 각각 수소를 나타내거나, X 및 Y 중의 하나는 OH 를 나타내고 다른 하나는 수소를 나타내며,X and Y together represent = O, each represent hydrogen, or one of X and Y represents OH and the other represents hydrogen,

R₂및 R₃는 각각 독립적으로 저급알킬 또는 사이클로알킬을 나타내고,R ₂ and R ₃ each independently represent lower alkyl or cycloalkyl,

A 는

또는

의 그룹을 나타내고,A is

or

Represents a group of

R₅및 R₆는 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 아미노 또는 저급알킬아미노를 나타낸다.R ₅ and R ₆ each independently represent hydrogen, lower alkyl, amino or lower alkylamino.

Description

캄포 구조를 갖는 신규한 트롬빈 억제제Novel Thrombin Inhibitors with Campo Structure

본 발명은 하기 화학식 1 로 표시되는 신규한 트롬빈 억제제, 그의 제조방법 및 이 화합물을 유효성분으로 함유하는 트롬빈 억제제 조성물에 관한 것이다:The present invention relates to a novel thrombin inhibitor represented by the following formula (1), a method for preparing the same, and a thrombin inhibitor composition containing the compound as an active ingredient:

[화학식 1][Formula 1]

상기식에서,In the above formula,

X 및 Y 는 함께 =O 를 나타내거나, 각각 수소를 나타내거나, X 및 Y 중의 하나는 OH 를 나타내고 다른 하나는 수소를 나타내며,X and Y together represent = O, each represent hydrogen, or one of X and Y represents OH and the other represents hydrogen,

R₂및 R₃는 각각 독립적으로 저급알킬 또는 사이클로알킬을 나타내고,R ₂ and R ₃ each independently represent lower alkyl or cycloalkyl,

A 는

또는

의 그룹을 나타내고,A is

or

Represents a group of

R₅및 R₆는 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 아미노 또는 저급알킬아미노를 나타낸다.R ₅ and R ₆ each independently represent hydrogen, lower alkyl, amino or lower alkylamino.

일반적으로 혈액응고 과정에는 여러가지 복잡한 효소반응이 관여하고 있는 것으로 알려져 있다. 그리고, 마지막 단계는 프로트롬빈을 트롬빈으로 전환시키는 반응을 포함하고 있다. 이 과정에서 생성된 트롬빈은 혈소판을 활성화시키고, 섬유소원을 섬유소로 바꾸는 등의 역할을 수행하는데, 이때 생성된 섬유소는 중합반응에 의해 고분자물질로 바뀌고, 활성화된 혈액인자 XIII 에 의해 교차결합되어 불용성 응혈이 된다. 트롬빈은 또한 혈액응고 과정에 참여하는 혈액인자 V 와 VIII 을 활성화시키는 역할도 하여 혈액응고 반응을 더욱 가속화시킨다. 따라서, 트롬빈의 억제제는 효과적인 항응혈제로 작용하는 동시에, 혈소판 활성을 억제하고 섬유소 생성 및 안정화를 막을 수 있으므로 오래 전부터 트롬빈 활성을 억제할 수 있는 신규한 물질을 개발함으로써 혈액응고를 예방하고 각종 혈전증을 치료하기 위한 방법이 모색되어 왔다.In general, it is known that various complex enzyme reactions are involved in the coagulation process. And the last step involves the reaction of converting prothrombin to thrombin. The thrombin produced in this process activates platelets, converts fibrinogen to fibrin, etc., wherein the fibrin is converted into a polymer by a polymerization reaction and crosslinked by activated blood factor XIII to insoluble coagulation. Becomes Thrombin also plays a role in activating the blood factors V and VIII involved in the coagulation process, further accelerating the coagulation reaction. Therefore, the inhibitor of thrombin acts as an effective anticoagulant, and can inhibit platelet activity and prevent fibrin production and stabilization, thus developing a new substance that can inhibit thrombin activity for a long time, thereby preventing blood clotting and preventing various thrombosis. Methods for treatment have been sought.

이러한 사정하에서 트롬빈을 효과적으로 억제하는 트롬빈 억제제를 개발하고자 하는 연구가 광범하게 이루어져 왔다.Under these circumstances, extensive research has been made to develop thrombin inhibitors that effectively inhibit thrombin.

지금까지 효과적인 트롬빈 억제제로 개발된 화합물중에서 가장 대표적인 화합물로는 아릴설포닐알지닌계 화합물인 하기 화학식 2 의 아가트로반(Argatroban; 미합중국 특허 제 4258192 호 및 제 4201863 호)을 들 수 있다.Among the compounds developed so far as an effective thrombin inhibitor, the most representative compound is an arylsulfonyl arginine-based compound Agatroban (Argatroban (US Pat. Nos. 4258192 and 4201863)).

이 화합물은 트롬빈을 효과적으로 억제(Ki=5nM)한다고 보고되어 있으며, 이미 1990 년에 일본에서 주사용 제제로 상품화되었다(참조: Biochemistry 1984, 23, 85-90). 그러나 이 화합물은 매우 복잡한 합성과정을 거쳐야만 제조된다는 단점을 가지고 있다.This compound is reported to effectively inhibit thrombin (Ki = 5 nM) and has already been commercialized as an injectable preparation in Japan in 1990 (Biochemistry 1984, 23, 85-90). However, this compound has the disadvantage of being manufactured only after a very complicated synthesis process.

상기 화학식 2 의 아가트로반을 포함하여 지금까지 개발된 트롬빈 억제제들은 모두 소수성의 D-포켓(pocket)으로 아릴술포닐 그룹을 가지고 있다. 이에 본 발명자들은 합성이 비교적 용이하고 트롬빈 억제활성이 뛰어난 화합물을 개발하기 위해 아릴술포닐 그룹이 아닌 알킬술포닐 그룹을 갖는 다양한 형태의 새로운 술포닐계 화합물들을 제조하여 이들의 트롬빈 억제활성에 대하여 집중적인 연구를 수행하였으며, 그 결과 상기 정의된 화학식 1 의 구조를 갖는 화합물들이 뛰어난 트롬빈 억제효과를 가지는 것을 밝혀내고 본 발명을 완성하게 되었다.Thrombin inhibitors developed so far, including the agatroban of Formula 2, all have an arylsulfonyl group as a hydrophobic D-pocket. Accordingly, the present inventors have prepared various sulfonyl compounds having various types of alkyl sulfonyl groups instead of arylsulfonyl groups to develop compounds having relatively easy synthesis and excellent thrombin inhibitory activity. The study was carried out, and as a result, it was found that the compounds having the structure of Formula 1 as described above have excellent thrombin inhibitory effect and completed the present invention.

따라서, 본 발명의 목적은 트롬빈 억제활성이 뛰어난, 알킬술포닐 그룹을 갖는 신규한 트롬빈 억제제 및 그의 제조방법을 제공하는 것이다.Accordingly, it is an object of the present invention to provide a novel thrombin inhibitor having an alkylsulfonyl group excellent in thrombin inhibitory activity and a method for producing the same.

또한 본 발명은 상기 화합물을 유효성분으로 함유하는 혈액응고 예방 및 각종 혈전증 치료용 조성물에 관한 것이다.The present invention also relates to a composition for preventing blood clotting and treating various thrombosis containing the compound as an active ingredient.

이하, 본 발명을 상세히 설명하면 다음과 같다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명에 따라 제공되는 화합물은 하기 화학식 1 로 표시되는 화합물, 그의 약제학적으로 허용되는 염 및 이성체이다:Compounds provided according to the present invention are compounds represented by the following formula (1), pharmaceutically acceptable salts and isomers thereof:

[화학식 1][Formula 1]

상기식에서,In the above formula,

X 및 Y 는 함께 =O 를 나타내거나, 각각 수소를 나타내거나, X 및 Y 중의 하나는 OH 를 나타내고 다른 하나는 수소를 나타내며,X and Y together represent = O, each represent hydrogen, or one of X and Y represents OH and the other represents hydrogen,

R₂및 R₃는 각각 독립적으로 저급알킬 또는 사이클로알킬을 나타내고,R ₂ and R ₃ each independently represent lower alkyl or cycloalkyl,

A 는

또는

의 그룹을 나타내고,A is

or

Represents a group of

R₅및 R₆는 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 아미노 또는 저급알킬아미노를 나타낸다.R ₅ and R ₆ each independently represent hydrogen, lower alkyl, amino or lower alkylamino.

본 발명에 따른 화학식 1 의 화합물의 치환기에 대한 상기 정의에서 용어 ″저급알킬″은 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 및 이들의 이성체를 포함하는 탄소수 1 내지 4 의 직쇄 또는 측쇄 포화탄화수소 라디칼을 의미하고, 용어 ″사이클로알킬″은 사이클로프로필, 사이클로펜틸 등을 포함한 탄소수 3 내지 8 의 사이클릭 알킬을 의미한다.The term ″ lower alkyl ″ in the above definition for the substituents of the compound of formula 1 according to the invention means a straight or branched chain saturated hydrocarbon radical having 1 to 4 carbon atoms including methyl, ethyl, propyl, butyl and isomers thereof, The term ″ cycloalkyl ″ means cyclic alkyl having 3 to 8 carbon atoms, including cyclopropyl, cyclopentyl, and the like.

본 발명에 따르는 바람직한 화학식 1 의 화합물은 X 및 Y 가 함께 =O 를 나타내거나, (H, H) 또는 (OH, H) 를 나타내고, R₂및 R₃는 각각 독립적으로 메틸 또는 사이클로펜틸을 나타내며, A 는

또는

의 그룹을 나타내고, R₅및 R₆는 각각 독립적으로 수소, 메틸, 아미노 또는 메틸아미노를 나타내는 화합물이다.Preferred compounds of the formula (1) according to the present invention are those in which X and Y together represent = O or (H, H) or (OH, H), and R ₂ and R ₃ each independently represent methyl or cyclopentyl , A is

or

And R ₅ and R ₆ each independently represent a hydrogen, methyl, amino or methylamino compound.

본 발명의 대표적인 화합물에는 다음과 같은 화합물이 포함된다:Representative compounds of the invention include the following compounds:

1. (S)-3-[4-(아미노-하이드라조노-메틸)페닐]-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)- (7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드1. (S) -3- [4- (Amino-hydrazono-methyl) phenyl] -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-(7,7-dimethyl-2-oxo-bi Cyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide

2. (S)-3-[4-(아미노-하이드라조노-메틸)페닐]-N-사이클로펜틸-2-(S/R)-(+/ -)-(2-하이드록시-7,7-디메틸-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드2. (S) -3- [4- (amino-hydrazono-methyl) phenyl] -N-cyclopentyl-2- (S / R)-(+/-)-(2-hydroxy-7, 7-dimethyl-bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide

3. (S)-3-{4-[아미노-(메틸-하이드라조노)-메틸]페닐}-N-사이클로펜틸-2-(S) -(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드3. (S) -3- {4- [Amino- (methyl-hydrazono) -methyl] phenyl} -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-(7,7-dimethyl-2 -Oxo-bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide

4. (S)-3-[4-(아미노-하이드라조노-메틸)페닐]-N-사이클로펜틸-2-(7,7-디메틸-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드4. (S) -3- [4- (amino-hydrazono-methyl) phenyl] -N-cyclopentyl-2- (7,7-dimethyl-bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethane Sulfonylamino) -N-methyl-propionamide

5. (S)-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]-헵트-1-일메탄술포닐아미노)-3-{4-[이미노-(N-메틸-하이드라지노)-메틸]-페닐}-N-메틸-프로피온아미드5. (S) -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyclo [2.2.1] -hept-1-ylmethanesulfonylamino) -3- {4- [Imino- (N-methyl-hydrazino) -methyl] -phenyl} -N-methyl-propionamide

6. (S)-3-[4-(아미노메틸)-페닐]-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드6. (S) -3- [4- (aminomethyl) -phenyl] -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyclo [2.2. 1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide

본 발명에 따른 화학식 1 의 화합물은 또한 약제학적으로 허용되는 염을 형성할 수도 있다. 이러한 약제학적으로 허용되는 염에는 약제학적으로 허용되는 음이온을 함유하는 무독성 산부가염을 형성하는 산, 예를들면 염산, 황산, 질산, 인산, 브롬화수소산, 요오드화수소산 등과 같은 무기산, 타타르산, 포름산, 시트르산, 아세트산, 트리클로로아세트산 또는 트리플루오로아세트산, 글루콘산, 벤조산, 락트산, 푸마르산, 말레인산 등과 같은 유기 카본산, 메탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산 또는 나프탈렌술폰산 등과 같은 술폰산 등에 의해 형성된 산부가염이 포함된다. 또한 화학식 1 의 화합물의 약제학적으로 허용되는 염에는 수화물 또는 용매화물도 포함되는 것으로 이해하여야 한다.The compounds of formula 1 according to the invention may also form pharmaceutically acceptable salts. Such pharmaceutically acceptable salts include acids that form non-toxic acid addition salts containing pharmaceutically acceptable anions such as inorganic acids, such as hydrochloric acid, sulfuric acid, nitric acid, phosphoric acid, hydrobromic acid, hydroiodic acid, tartaric acid, formic acid, Acid addition salts formed by citric acid, acetic acid, trichloroacetic acid or trifluoroacetic acid, gluconic acid, benzoic acid, organic carbonic acid such as lactic acid, fumaric acid, maleic acid, etc., sulfonic acid such as methanesulfonic acid, benzenesulfonic acid, p-toluenesulfonic acid or naphthalenesulfonic acid, etc. This includes. It is also to be understood that pharmaceutically acceptable salts of compounds of Formula 1 also include hydrates or solvates.

한편, 본 발명에 따른 화학식 1 의 화합물은 비대칭 탄소중심을 가질 수 있으므로 라세미 화합물, 부분입체이성체 혼합물 및 개개의 부분입체이성체로서 존재할 수 있다. 본 발명의 화합물은 또한 호변이성체 형태로 존재할 수도 있다. 이들 모든 이성체 형태도 본 발명의 범위에 포함된다.On the other hand, the compound of formula 1 according to the present invention may have an asymmetric carbon center and thus may exist as racemic compounds, diastereomeric mixtures and individual diastereomers. The compounds of the present invention may also exist in tautomeric forms. All these isomeric forms are also included within the scope of the present invention.

본 발명은 또한 상기 정의된 화학식 1 의 화합물을 제조하는 방법에 관한 것이다.The invention also relates to a process for preparing the compound of formula 1 as defined above.

본 발명의 방법에 따르면, A 가

그룹을 나타내는 화학식 1 의 화합물, 즉 화학식 1a 의 화합물은 화학식 3 의 메틸머캅토 유도체를 화학식 4 의 아민 유도체와 반응시킴으로써 제조할 수 있다:According to the method of the invention, A is

Compounds of formula 1, ie, compounds of formula 1a, which represent groups can be prepared by reacting a methylmercapto derivative of formula 3 with an amine derivative of formula 4:

상기식에서, X, Y, R₂, R₃, R₅및 R₆는 각각 상기 정의한 바와 같다.Wherein X, Y, R ₂ , R ₃ , R ₅ and R ₆ are each as defined above.

본 발명에 따르는 상기 화학식 1a 의 화합물의 제조방법은 다음 반응식 1 로 표시할 수 있다.Method for producing a compound of Formula 1a according to the present invention can be represented by the following scheme 1.

상기 반응식 1 에 도시한 바와 같이, 본 발명에 따르는 A 가

그룹을 나타내는 화학식 1 의 화합물, 즉 화학식 1a 의 화합물은 화학식 3 의 메틸머캅토 화합물을 친핵체인 화학식 4 의 아민 유도체와 반응시킴으로써 제조할 수 있다. 이 반응은 바람직하게는 용매의 존재하에서 수행할 수 있다. 이러한 목적으로 바람직하게 사용될 수 있는 용매의 예로는 반응에 악영향을 미치지 않는 유기용매라면 어느 것이나 사용할 수 있으나, 일반적으로는 메탄올, 에탄올, 프로판올 등의 알콜 용매가 바람직하게 사용된다.As shown in Scheme 1, A according to the present invention is

A compound of formula (1), ie, a compound of formula (1a) representing a group, may be prepared by reacting a methylmercapto compound of formula (3) with an amine derivative of formula (4), which is a nucleophile. This reaction can preferably be carried out in the presence of a solvent. Examples of the solvent that can be preferably used for this purpose may be any organic solvent which does not adversely affect the reaction, but generally alcohol solvents such as methanol, ethanol, propanol and the like are preferably used.

본 반응에서 사용되는 반응물의 양, 반응온도, 반응시간 등을 포함한 반응조건은 특정의 반응물질에 따라 당업계의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 결정될 수 있다. 일반적으로 반응온도는 다양하게 변화시킬 수 있으나, 0℃ 내지 50℃ 에서 반응을 수행하는 것이 특히 바람직하다. 또한 반응시간은 일반적으로 0.5 내지 5 시간이 소요되나, 바람직하게는 1 내지 2 시간 동안 반응을 수행한다.Reaction conditions, including the amount of reactants used in the present reaction, the reaction temperature, the reaction time and the like can be easily determined by those skilled in the art according to the specific reactants. In general, the reaction temperature may vary, but it is particularly preferable to carry out the reaction at 0 ℃ to 50 ℃. In addition, the reaction time generally takes 0.5 to 5 hours, but preferably performs the reaction for 1 to 2 hours.

또한, A 가 -CH₂- 인 본 발명에 따르는 화학식 1 의 화합물, 즉 화학식 1b 의 화합물은 화학식 5 의 니트릴 화합물을 환원시켜 화학식 1c 의 화합물을 수득하고, 필요에 따라 수득된 화학식 1c 의 화합물을 알킬화시켜 R₅및 R₆가 각각 독립적으로 저급알킬인 화학식 1b 의 화합물을 수득하거나, 또는 화학식 5 의 니트릴 화합물을 화학식 11 의 알데히드 화합물로 전환시킨 후, 화학식 12 의 하이드라진 유도체와 반응시켜 환원적 아미노화시켜 R₅및 R₆가 각각 독립적으로 아미노 또는 저급알킬아미노를 나타내는 화학식 1b 의 화합물을 생성시킴으로써 제조할 수 있다:Further, the compound of formula 1 according to the present invention, in which A is -CH _2- , that is, the compound of formula 1b, reduces the nitrile compound of formula 5 to give the compound of formula 1c, and optionally obtains the compound of formula 1c obtained. Alkylation yields a compound of Formula 1b wherein R ₅ and R ₆ are each independently lower alkyl, or the nitrile compound of Formula 5 is converted to an aldehyde compound of Formula 11 and then reacted with a hydrazine derivative of Formula 12 Aging can be prepared by producing a compound of Formula 1b wherein R ₅ and R ₆ each independently represent amino or lower alkylamino:

상기식에서,In the above formula,

X, Y, R₂, R₃, R₅및 R₆는 각각 상기 정의한 바와 같으며,X, Y, R ₂ , R ₃ , R ₅ and R ₆ are each as defined above,

R₅' 및 R₆' 는 각각 독립적으로 수소 또는 저급알킬을 나타낸다.R ₅ ′ and R ₆ ′ each independently represent hydrogen or lower alkyl.

본 발명에 따르는 상기 화학식 1c 의 화합물의 제조방법은 다음 반응식 2 로 표시할 수 있다.Method for preparing a compound of Formula 1c according to the present invention can be represented by the following scheme 2.

상기 반응식 2 에서 보는 바와 같이, A 가 -CH₂- 를 나타내고, R₅및 R₆가 수소를 나타내는 화학식 1 의 화합물, 즉 화학식 1c 의 화합물은 화학식 5 의 니트릴 화합물을 환원시킴으로써 제조할 수 있다. 이러한 환원반응에는 통상적인 환원방법중의 어느 것이나 이용될 수 있으며, 일반적으로 팔라듐 촉매, 백금 촉매, 니켈 촉매 등과 같은 통상적인 금속 촉매를 사용하는 환원반응, 니트릴을 선택적으로 환원시킬 수 있는 전이금속 화합물, 환원제 등을 사용하는 환원반응 등이 이용될 수 있다. 본 발명에서 특히 바람직하게는, 화학식 5 의 화합물을 촉매량의 염산의 존재하에서 팔라듐/탄소 촉매를 사용하여 수소 대기하에 환원시켜 목적하는 화학식 1c 의 화합물을 수득한다.As shown in Scheme 2, the compound of formula 1 wherein A represents -CH ₂ -and R ₅ and R ₆ represent hydrogen, that is, the compound of formula 1c can be prepared by reducing the nitrile compound of formula 5. Any of conventional reduction methods may be used for such a reduction reaction, and in general, a reduction reaction using a conventional metal catalyst such as a palladium catalyst, a platinum catalyst, a nickel catalyst, and a transition metal compound capable of selectively reducing nitrile , A reduction reaction using a reducing agent or the like may be used. Especially preferably in the present invention, the compound of formula 5 is reduced under a hydrogen atmosphere using a palladium / carbon catalyst in the presence of a catalytic amount of hydrochloric acid to give the desired compound of formula 1c.

본 반응에서 사용되는 반응물의 양, 반응온도, 반응시간 등을 포함한 반응조건은 특정의 반응물질에 따라 당업계의 통상의 지식을 가진 자에 의하여 용이하게 결정될 수 있다. 일반적으로 반응온도는 다양하게 변화시킬 수 있으나, 0℃ 내지 50℃ 에서 반응을 수행하는 것이 특히 바람직하다. 또한 반응시간은 일반적으로 0.5 내지 5 시간이 소요되나, 바람직하게는 1 내지 2 시간 동안 반응을 수행한다.Reaction conditions, including the amount of reactants used in the present reaction, the reaction temperature, the reaction time and the like can be easily determined by those skilled in the art according to the specific reactants. In general, the reaction temperature may vary, but it is particularly preferable to carry out the reaction at 0 ℃ to 50 ℃. In addition, the reaction time generally takes 0.5 to 5 hours, but preferably performs the reaction for 1 to 2 hours.

이와 같이 제조된 화학식 1c 의 화합물은 당해 기술분야에서 통상적으로 사용되는 알킬화반응을 이용하여 R₅및/또는 R₆가 저급알킬인 화합물로 전환시킬 수 있다.The compound of Formula 1c thus prepared may be converted into a compound wherein R ₅ and / or R ₆ is lower alkyl using alkylation reactions commonly used in the art.

또한, R₅및/또는 R₆가 아미노 또는 저급알킬아미노인 화학식 1b 의 화합물을 수득하기 위해서는 화학식 5 의 니트릴 화합물을 우선 DIBAL(디이소부틸알루미늄 하이드라이드)과 같은 시약을 사용하여 화학식 11 의 알데히드 화합물로 전환시킨 후에, 이 화학식 11 의 화합물을 화학식 12 의 하이드라진 유도체와 환원적 아미노화 반응시킨다.In addition, in order to obtain a compound of Formula 1b wherein R ₅ and / or R ₆ is amino or lower alkylamino, the nitrile compound of Formula 5 is first used a reagent such as DIBAL (diisobutylaluminum hydride) After conversion to the compound, the compound of formula 11 is subjected to reductive amination reaction with the hydrazine derivative of formula 12.

상기한 본 발명의 방법에 따른 반응이 완결된 후에 생성물은 통상적인 후처리 방법, 예를들면 크로마토그라피, 재결정화 등의 방법에 의해 분리 및 정제할 수 있다.After completion of the reaction according to the process of the present invention described above, the product can be separated and purified by conventional post-treatment methods such as chromatography, recrystallization and the like.

상기 반응식 1 및 2 에서 화학식 1 의 화합물을 제조하는데 중간체로 사용된 화학식 3 의 메틸머캅토 화합물과 화학식 5 의 니트릴 화합물은 둘다 일련의 과정에 의해 제조할 수 있으며, 예를들어 화학식 6 의 화합물을 R₂및 R₃가 치환된 아민과 커플링시켜 C-말단에 상응하는 아민 그룹을 도입시킴으로써 화학식 7 의 화합물을 수득하고, 화학식 7 의 화합물로 부터 아미노 보호그룹을 제거하여 생성된 화학식 8 의 화합물을 화학식 9 의 술포닐클로라이드 유도체와 반응시켜 반응식 2 에서 출발물질로 사용된 화학식 5 의 화합물을 수득하고, 수득된 화학식 5 의 화합물을 계속해서 염기의 존재하에서 황화수소로 포화시켜 화학식 10 의 화합물을 생성시키고 생성된 화학식 10 의 화합물을 메틸화시킴으로써 반응식 1 에서 출발물질로 사용된 화학식 3 의 화합물을 제조할 수 있다.The methylmercapto compound of Formula 3 and the nitrile compound of Formula 5, both used as intermediates in the preparation of the compounds of Formula 1 in Schemes 1 and 2, may be prepared by a series of processes, for example, the compounds of Formula 6 Compounds of formula 8 obtained by coupling R ₂ and R ₃ with substituted amines to introduce amine groups corresponding to the C-terminus, and removing amino protecting groups from compounds of formula 7 Is reacted with a sulfonylchloride derivative of formula 9 to obtain a compound of formula 5 used as starting material in Scheme 2, and the obtained compound of formula 5 is subsequently saturated with hydrogen sulfide in the presence of a base to give a compound of formula 10 And the compound of formula 3 used as starting material in Scheme 1 by methylation of the resulting compound of formula 10 The can be prepared.

상기식에서, X, Y, R₂및 R₃는 각각 상기 정의한 바와 같으며, P 는 벤질옥시카보닐, 알릴옥시카보닐, t-부톡시카보닐 또는 트리틸 그룹 등과 같은 통상적인 아미노 보호그룹을 나타낸다.Wherein X, Y, R ₂ and R ₃ are each as defined above and P is a conventional amino protecting group such as benzyloxycarbonyl, allyloxycarbonyl, t-butoxycarbonyl or trityl group, etc. Indicates.

상기한 바와 같은 화학식 3 및 5 의 화합물의 제조방법은 하기 반응식 3 으로 나타낼 수 있다.The preparation method of the compounds of Formulas 3 and 5 as described above may be represented by the following Scheme 3.

반응식 3 에서 보는 바와 같이, 화학식 3 의 화합물은 화학식 6 의 화합물을 출발물질로 하여 화학식 5 의 니트릴 화합물을 거쳐서 제조된다.As shown in Scheme 3, the compound of Formula 3 is prepared via the nitrile compound of Formula 5 using the compound of Formula 6 as a starting material.

즉, 우선 화학식 6 의 화합물을 먼저 R₂및 R₃가 치환된 아민 화합물과 커플링시켜 C-말단에 상응하는 아민 그룹을 도입시킴으로써 화학식 7 의 화합물을 수득한다.That is, a compound of formula 7 is first obtained by first coupling a compound of formula 6 with an amine compound substituted with R ₂ and R ₃ to introduce an amine group corresponding to the C-terminus.

화학식 6 화합물의 커플링반응을 위해 사용될 수 있는 공지의 커플링시약에는 디사이클로헥실카보디이미드(DCC), 3-에틸-3'-(디메틸아미노)-프로필카보디이미드(EDC), 비스-(2-옥소-3-옥사졸리디닐)-포스핀산클로라이드(BOP-Cl), 디페닐포스포릴아지드(DPPA) 등이 포함되나, 단 이들로 제한되는 것은 아니다.Known coupling reagents that can be used for the coupling reaction of compounds of formula 6 include dicyclohexylcarbodiimide (DCC), 3-ethyl-3 '-(dimethylamino) -propylcarbodiimide (EDC), bis- (2-oxo-3-oxazolidinyl) -phosphinic acid chloride (BOP-Cl), diphenylphosphoryl azide (DPPA), and the like, but are not limited thereto.

또한 이 커플링반응에서 사용된 화학식 6 의 카복실산 화합물은 그대로 사용할 수도 있으나, 바람직하게는 그의 반응성 유도체, 예를들면 산 할라이드 및 그밖의 다른 활성화 에스테르 유도체로 전환시켜 커플링반응에 사용함으로써 반응을 촉진시킬 수 있다. 카르복실산의 활성화 유도체는 아민과의 커플링반응에 의해 아미드 결합을 형성시키거나 알콜과의 커플링 반응에 의해 에스테르 결합을 형성시키기 위해 필요하다. 이러한 반응성 유도체에는 당해 기술분야에서 통상적인 방법에 의해 제조할 수 있는 통상적인 유도체들이 포함되는데, 예를들어 산 할라이드에는 산 클로라이드가 포함되고, 활성화 에스테르에는 메톡시카보닐클로라이드, 이소부틸옥시카보닐클로라이드 등의 알콕시카보닐할라이드와 커플링 시약으로 부터 유도된 카복실산의 무수물, N-하이드록시프탈이미드-유도된 에스테르, N-하이드록시숙신이미드-유도된 에스테르, N-하이드록시-5-노르보넨-2',3'-디카복시이미드-유도된 에스테르, 2,4,5-트리클로로페놀-유도된 에스테르 등이 포함되나, 단 이들로 제한되는 것은 아니다.In addition, the carboxylic acid compound represented by the formula (6) used in this coupling reaction may be used as it is, but is preferably converted into a reactive derivative thereof, such as an acid halide and other activated ester derivatives, and used in the coupling reaction to promote the reaction. You can. Activated derivatives of carboxylic acids are necessary to form amide bonds by coupling reactions with amines or to form ester bonds by coupling reactions with alcohols. Such reactive derivatives include conventional derivatives which may be prepared by conventional methods in the art, for example acid halides include acid chlorides, and activated esters include methoxycarbonyl chloride, isobutyloxycarbonyl Anhydrides of carboxylic acids derived from alkoxycarbonyl halides and coupling reagents such as chlorides, N-hydroxyphthalimide-derived esters, N-hydroxysuccinimide-derived esters, N-hydroxy-5- Norbornene-2 ', 3'-dicarboxyimide-derived esters, 2,4,5-trichlorophenol-derived esters and the like, but are not limited to these.

상기의 커플링반응에서 생성된 화학식 7 의 화합물은 그 다음에 통상적인 아미노 보호그룹 제거방법에 의해 N-말단 아미노 보호그룹을 제거하여 화학식 8 의 화합물을 수득한다. 이 화학식 8 의 화합물을 화학식 9 의 술포닐클로라이드 화합물과 반응시킴으로써 그의 N-말단 부위에 술포닐 그룹을 도입시켜 반응식 2 에서 화학식 1c 의 화합물을 제조하기 위한 출발물질로 사용된 화학식 5 의 화합물을 수득한다. 생성된 화학식 5 의 니트릴 화합물을 계속해서 피리딘 및 트리에틸아민과 같은 염기의 존재하에서 황화수소로 포화시켜 화학식 10 의 티오아미드 화합물을 생성시키고, 이 화학식 10 의 티오아미드 화합물을 메틸화시킴으로써 반응식 1에서 화학식 1a 의 화합물을 제조하기 위한 출발물질로 사용된 화학식 3 의 화합물을 제조할 수 있다. 화학식 10 화합물의 메틸화를 위해서는 요오드화메탄, 디메틸술페이트((CH₃)₂SO₂) 또는 메틸트리플레이트(CH₃OTf) 등과 같은 메틸화제를 사용할 수 있다.The compound of formula (7) produced in the above coupling reaction is then removed by the conventional amino protecting group removal method to remove the N- terminal amino protecting group to obtain a compound of formula (8). The compound of formula 8 is reacted with a sulfonylchloride compound of formula 9 to introduce a sulfonyl group at its N-terminal portion to give a compound of formula 5 used as starting material for preparing the compound of formula 1c in Scheme 2. do. The resulting nitrile compound of formula 5 is then saturated with hydrogen sulfide in the presence of a base such as pyridine and triethylamine to form a thioamide compound of formula 10, and methylated of the thioamide compound of formula 10 to formula 1a A compound of formula 3 may be prepared that is used as a starting material for preparing the compound of. For methylation of the compound of Formula 10, methylating agents such as methane iodide, dimethylsulfate ((CH ₃ ) ₂ SO ₂ ) or methyltriplate (CH ₃ OTf) may be used.

본 발명에 따른 화학식 1 의 화합물의 트롬빈 억제효과는 문헌(참조: Methods in Enzymology V. 80, p341-361; Biochemistry 27, p2144-2151, 1988)에 기재된 방법에 따라 하기 식을 이용하여 해리상수 Ki 값을 결정함으로써 측정한다.The thrombin inhibitory effect of the compound of formula 1 according to the present invention is dissociation constant Ki using the following formula according to the method described in Methods in Enzymology V. 80, p341-361; Biochemistry 27, p2144-2151, 1988 Measure by determining the value.

Ki = [E]ㆍ[I]/[EI]Ki = [E] · [I] / [EI]

상기식에서, [E] 는 억제제와 결합하고 있지 않은 효소의 농도이고, [I] 는 효소와 결합하고 있지 않은 억제제의 농도이며, [EI] 는 효소와 억제제 결합물의 농도이다.In the above formula, [E] is the concentration of the enzyme not bound to the inhibitor, [I] is the concentration of the inhibitor not bound to the enzyme, and [EI] is the concentration of the enzyme and inhibitor binding.

해리상수 Ki 는 효소와 트롬빈 억제제 화합물의 해리정도를 나타내는 것이므로 해리상수 값이 작을수록 효소에 대한 억제제의 결합성이 큰 것을 의미하며 따라서 억제활성이 큰 것으로 평가될 수 있다. 이러한 해리상수는 트롬빈의 작용을 받아 가수분해되면 발색성을 나타내는 특정 기질과 반응시키고 그 발색정도를 분광광도법에 따라 시간의 함수로 측정함으로서 구할 수 있다.Since the dissociation constant Ki represents the degree of dissociation between the enzyme and the thrombin inhibitor compound, the smaller the dissociation constant value is, the greater the binding activity of the inhibitor to the enzyme, and thus, the inhibitory activity may be evaluated to be greater. This dissociation constant can be obtained by reacting with a specific substrate that exhibits color development when hydrolyzed by the action of thrombin and measuring the color development as a function of time according to spectrophotometry.

본 발명에서는 트롬빈의 기질로서 트롬빈의 작용을 받아 가수분해되면 발색하는 물질인 크로모자임 TH(Chromozyme TH : 토실-Gly-Pro-Arg-4-니트로아닐리드아세테이트)를 사용한다. 크로모자임 TH 가 트롬빈에 의해 가수분해하면 노란색의 파라-니트로아닐리드가 생성된다. 따라서, 생성되는 파라-니트로아닐리드의 양을 시간에 따른 흡광도의 변화로 측정함으로써 본 발명에 따른 화합물의 트롬빈 억제활성을 측정할 수 있다. 즉, 흡광도의 변화로 부터 효소의 활성을 측정할 수 있으며, 이는 곧바로 트롬빈 억제제의 효소활성 억제능력과 연관될 수 있다.In the present invention, Chromozyme TH (Chromozyme TH: Tosyl-Gly-Pro-Arg-4-Nitroanilide Acetate), which is a substance that develops upon hydrolysis under the action of thrombin, is used as a substrate of thrombin. Hydrolysis of chromozyme TH with thrombin produces yellow para-nitroanilide. Therefore, the thrombin inhibitory activity of the compounds according to the invention can be measured by measuring the amount of para-nitroanilides produced by the change in absorbance over time. That is, the activity of the enzyme can be measured from the change in absorbance, which can be directly related to the ability of the thrombin inhibitor to inhibit the enzyme activity.

이와 같은 방법으로 본 발명에 따른 화학식 1 의 화합물의 트롬빈 억제활성을 측정한 결과, 본 발명의 화합물은 매우 우수한 트롬빈 억제효과를 나타내는 것으로 확인되었다. 예를들어, 실시예 1 과 2 에 따라 제조된 화합물의 트롬빈 억제능력은 공지의 트롬빈 억제제인 아가트로반(화학식 2 의 화합물)과 비교하여 볼때 Ki 가 8 배 정도 현저하게 개선되어졌음을 알 수 있었다. 또한 동물실험에서 혈전생성 억제능력을 측정한 바에 따르면 실시예 1 및 3 의 화합물은 5㎎/㎏ 의 용량에서 각각 혈전생성을 70.0% 및 79.8% 억제하는 우수한 효과를 나타내는 것으로 확인되었다As a result of measuring the thrombin inhibitory activity of the compound of formula 1 according to the present invention, it was confirmed that the compound of the present invention exhibits a very excellent thrombin inhibitory effect. For example, the thrombin inhibitory ability of the compounds prepared according to Examples 1 and 2 shows a significant improvement of Ki by 8 times compared to the known thrombin inhibitor agatroban (compound of formula 2). there was. In addition, it was confirmed that the compounds of Examples 1 and 3 exhibited an excellent effect of inhibiting thrombogenesis by 70.0% and 79.8% at doses of 5 mg / kg, respectively, based on the measurement of the ability to inhibit thrombogenesis in animal experiments.

상기 언급한 바와 같이 본 발명에 따른 화학식 1 의 화합물은 공지의 트롬빈 억제성 화합물들에 비해 트롬빈 억제능력이 뛰어나며 동물실험에서도 효과적인 트롬빈 억제제이다. 따라서 본 발명의 화합물은 혈액응고 예방 및 혈전증의 치료에 유용하다.As mentioned above, the compound of formula 1 according to the present invention is superior in thrombin inhibitory ability to known thrombin inhibitory compounds and is an effective thrombin inhibitor in animal experiments. Accordingly, the compounds of the present invention are useful for preventing blood clotting and for treating thrombosis.

따라서, 본 발명은 또한 화학식 1 의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 유효성분으로 함유하는 혈액응고 예방 및 혈전증 치료용 약제학적 조성물을 제공하는 것을 또 다른 목적으로 한다.Accordingly, another object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition for preventing blood clotting and treating thrombosis, which contains the compound of Formula 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.

본 발명의 화합물을 임상적인 목적으로 투여시에 단일용량 또는 분리용량으로 숙주에게 투여될 총 일일용량은 체중 1㎏ 당 0.001㎎ 내지 10㎎ 의 범위가 바람직하나, 특정환자에 대한 특이용량 수준은 사용될 특정화합물, 개개 환자의 체중, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률, 약제혼합 및 질환의 중증도에 따라 변화될 수 있다.The total daily dose to be administered to the host in a single dose or in separate doses when administering a compound of the present invention for clinical purposes is preferably in the range of 0.001 mg to 10 mg per kg of body weight, but the specific dose level for a particular patient may be used. Specific compounds, body weight of each patient, sex, health status, diet, time of administration, method of administration, rate of excretion, drug mixture and the severity of the disease may vary.

본 발명의 화합물은 목적하는 바에 따라 주사용 제제 및 경구용 제제로 투여할 수 있다.The compounds of the present invention can be administered in injectable and oral formulations as desired.

주사용 제제, 예를들면 멸균주사용 수성 또는 유성 현탁액은 공지된 기술에 따라 적합한 분산제, 습윤제, 또는 현탁제를 사용하여 제조할 수 있다. 사용될 수 있는 약제학적으로 허용되는 용매에는 물, 링거액 및 등장성 NaCl 용액이 있으며 멸균 고정오일은 통상적으로 용매 또는 현탁매질로서 사용한다. 모노-, 디-글리세라이드를 포함하여 어떠한 무자극성 고정오일도 이러한 목적으로 사용될 수 있으며, 또한 올레산과 같은 지방산도 주사용 제제에 사용한다.Injectable preparations, such as sterile injectable aqueous or oleaginous suspensions, can be prepared using suitable dispersing agents, wetting agents, or suspending agents according to known techniques. Pharmaceutically acceptable solvents that can be used include water, Ringer's solution and isotonic NaCl solution and sterile fixed oils are conventionally employed as a solvent or suspending medium. Any non-irritating fixed oil may be used for this purpose, including mono-, diglycerides, and also fatty acids such as oleic acid are used in the preparation of injectables.

경구투여용 고체투여 형태는 캅셀제, 정제, 환제, 산제 및 입제 등의 형태일 수 있으며, 특히 캅셀제와 정제가 유용하다. 정제 및 환제는 장피제로 제조하는 것이 바람직하다. 고체투여 형태는 본 발명에 따른 화학식 1 의 활성화합물을 슈크로즈, 락토즈, 전분 등과 같은 하나 이상의 불활성 희석제 및 마그네슘스테아레이트와 같은 윤활제, 붕해제, 결합제 등과 같은 담체와 혼합시킴으로써 제조할 수 있다.The solid dosage form for oral administration may be in the form of capsules, tablets, pills, powders and granules, and particularly, capsules and tablets are useful. Tablets and pills are preferably prepared with enteric agents. Solid dosage forms can be prepared by mixing the active compounds of formula 1 according to the invention with one or more inert diluents such as sucrose, lactose, starch and the like and carriers such as lubricants such as magnesium stearate, disintegrants, binders and the like.

한편, 본 발명의 화합물을 임상적으로 투여하여 목적하는 항응혈 효과 및 혈전용해효과를 얻고자 하는 경우에, 본 발명에 따른 화학식 1 의 활성화합물은 혈전용해제 및 혈소판 활성 억제제중에서 선택된 1 종 이상의 성분과 동시에 투여를 할 수 있다. 이러한 방식으로 본 발명의 화합물과 혼합하여 투여될 수 있는 혈전용해제로는 t-PA, 유로키나제(Urokinase), 스트렙토키나제(Streptokinase) 등이 포함될 수 있으며, 혈소판 활성 억제제로는 아스피린, 티클로피딘(Ticlopidin), 클로피드로겔(Clopidrogel), 7E3 단일항체 등이 포함된다.On the other hand, when clinically administering the compound of the present invention to obtain the desired anticoagulant effect and thrombolytic effect, the active compound of formula 1 according to the present invention is one or more components selected from thrombolytic agents and platelet activity inhibitors It can be administered at the same time. Thrombolytic agents that can be administered in combination with a compound of the present invention in this manner may include t-PA, urokinase, streptokinase, and the like, and platelet activity inhibitors include aspirin, ticlopidin, Clopidrogel, 7E3 monoclonal antibody, and the like.

그러나, 혈전의 치료 및 예방을 목적으로 본 발명에 따른 화합물을 함유하는 제제는 상술된 것으로 제한되는 것은 아니며, 혈전의 치료 및 예방에 유용한 제제라면 어떠한 것도 포함될 수 있다.However, the preparations containing the compounds according to the invention for the purpose of the treatment and prevention of thrombi are not limited to those described above, and any preparations useful for the treatment and prevention of thrombi can be included.

본 발명은 하기 실시예 및 실험예에 의해 더욱 구체적으로 설명되나, 본 발명의 범위가 이들에 의해 어떤 식으로든 제한되는 것은 아니다.The present invention is explained in more detail by the following examples and experimental examples, but the scope of the present invention is not limited in any way by these.

제조예 1Preparation Example 1

(S)-3-(4-시아노-페닐)-N-사이클로펜틸-2-(t-부틸옥시카보닐-아미노)-N-메틸-프로피온아미드의 합성Synthesis of (S) -3- (4-cyano-phenyl) -N-cyclopentyl-2- (t-butyloxycarbonyl-amino) -N-methyl-propionamide

(S)-3-(4-시아노-페닐)-2-(t-부틸옥시카보닐-아미노)-프로피온산 0.7g(2.41 밀리몰)을 디메틸포름아미드(DMF) 6㎖ 에 용해시켰다. 0℃ 로 냉각시킨 후, 1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카보디이미드 염산염(EDC) 0.7g 과 1-하이드록시벤조트리아졸 수화물(HOBT) 0.4g 을 가하고 완전히 용해될 때까지 교반하였다. 여기에 사이클로펜틸-메틸아민 0.4g(2.96 밀리몰)과 N-메틸모폴린 1.0㎖ 를 가하였다. 반응혼합물을 상온으로 서서히 상승시키고 3.5 시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 감압증류하여 휘발성 물질을 제거하였다. 수득된 잔류물을 에틸아세테이트로 희석하고 포화 탄산수소나트륨 수용액, 묽은 염산 및 포화 염수로 차례로 세척하였다. 이어서 무수 황산나트륨으로 건조시키고 여과하여 농축시켰다. 잔류물을 칼럼크로마토그라피[용출제: 에틸아세테이트/헥산(7/3, 부피비)]시켜 정제된 표제화합물 0.65g(수율: 73.0%)을 수득하였다.0.7 g (2.41 mmol) of (S) -3- (4-cyano-phenyl) -2- (t-butyloxycarbonyl-amino) -propionic acid was dissolved in 6 ml of dimethylformamide (DMF). After cooling to 0 ° C., 0.7 g of 1- (3-dimethylaminopropyl) -3-ethylcarbodiimide hydrochloride (EDC) and 0.4 g of 1-hydroxybenzotriazole hydrate (HOBT) were added until complete dissolution. Stirred. 0.4 g (2.96 mmol) of cyclopentyl-methylamines and 1.0 mL of N-methylmorpholine were added thereto. The reaction mixture was slowly raised to room temperature and stirred for 3.5 hours. After the reaction was completed, the mixture was distilled under reduced pressure to remove volatiles. The residue obtained was diluted with ethyl acetate and washed sequentially with saturated aqueous sodium hydrogen carbonate solution, diluted hydrochloric acid and saturated brine. Then dried over anhydrous sodium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by column chromatography [eluent: ethyl acetate / hexane (7/3, volume ratio)] to yield 0.65 g (yield: 73.0%) of the title compound.

¹H NMR(CDCl₃, ppm) δ : 7.61(2H, m), 7.32(2H, m), 5.48(1H, m), 5.01, 4.86, 4.12(2H, m, m, m), 3.0(2H, m), 2.75, 2.62(3H, s, s), 1.90-1.20(8H, m), 1.39(9H, s) ¹ H NMR (CDCl ₃ , ppm) δ: 7.61 (2H, m), 7.32 (2H, m), 5.48 (1H, m), 5.01, 4.86, 4.12 (2H, m, m, m), 3.0 (2H , m), 2.75, 2.62 (3H, s, s), 1.90-1.20 (8H, m), 1.39 (9H, s)

Mass(FAB, m/e) : 372[M+H]⁺ Mass (FAB, m / e): 372 [M + H] ⁺

제조예 2Preparation Example 2

(S)-3-(4-시아노-페닐)-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드의 합성(S) -3- (4-cyano-phenyl) -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyclo [2.2.1] hept- Synthesis of 1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide

제조예 1 에서 수득한 화합물 0.97g(2.61 밀리몰)을 메탄올 10㎖ 에 용해시킨 후, 0℃ 로 냉각시켰다. 여기에 과량(30 당량)의 아세틸클로라이드를 서서히 가하였다. 반응혼합물을 상온으로 상승시켜 1 시간 동안 교반하였다. 감압하여 휘발성 물질을 모두 제거하여 흰색 고체를 수득하였다. 수득된 고체를 진공건조시킨 후, 디메틸포름아미드 10㎖ 에 용해시켰다. 생성된 용액에 N-메틸모폴린 1.0㎖ 를 가하고 10 분 동안 교반하였다. 여기에 (1s)-(+)-10-캄포술포닐클로라이드 0.75g(3.21 밀리몰)을 가하고 1 시간 동안 교반한 후, 진공감압하여 용매를 제거하고 잔류물을 디클로로메탄과 물 40㎖ 씩을 가하여 3 회 추출하였다. 유기층을 합하여 무수 황산마그네슘으로 건조시키고 여과하고 농축시켰다. 수득된 고체를 칼럼크로마토그라피[용출제: 헥산/에틸아세테이트(2/1, 부피비)]시켜 정제된 표제화합물 1.0g(수율: 82%)을 수득하였다.0.97 g (2.61 mmol) of the compound obtained in Preparation Example 1 was dissolved in 10 ml of methanol, and then cooled to 0 ° C. An excess (30 equivalents) of acetylchloride was slowly added thereto. The reaction mixture was raised to room temperature and stirred for 1 hour. Removal of all volatiles under reduced pressure yielded a white solid. The solid obtained was dried in vacuo and then dissolved in 10 ml of dimethylformamide. 1.0 mL of N-methylmorpholine was added to the resulting solution and stirred for 10 minutes. 0.75 g (3.21 mmol) of (1s)-(+)-10-camphorsulfonyl chloride was added thereto, stirred for 1 hour, and the solvent was removed under reduced pressure under vacuum, and the residue was added to 40 ml of dichloromethane and water. Extracted once. The combined organic layers were dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated. The obtained solid was subjected to column chromatography [eluent: hexane / ethyl acetate (2/1, volume ratio)] to obtain 1.0 g (yield: 82%) of the purified title compound.

¹H NMR(CDCl₃, ppm) δ : 7.60(2H, m), 7.33(2H, m), 6.33(1H, d), 4.82, 4.67, 4.09(2H, m, m, m), 3.23, 2.80(2H, m, m), 2.79(2H, m), 2.75, 2.66(3H, s, s), 2.40(2H, m), 2.2-1.41(13H, m), 1.0, 0.98(3H, s, s), 0.86(3H, s) ¹ H NMR (CDCl ₃ , ppm) δ: 7.60 (2H, m), 7.33 (2H, m), 6.33 (1H, d), 4.82, 4.67, 4.09 (2H, m, m, m), 3.23, 2.80 (2H, m, m), 2.79 (2H, m), 2.75, 2.66 (3H, s, s), 2.40 (2H, m), 2.2-1.41 (13H, m), 1.0, 0.98 (3H, s, s), 0.86 (3H, s)

Mass(FAB, m/e) : 486[M+H]⁺ Mass (FAB, m / e): 486 [M + H] ⁺

제조예 3Preparation Example 3

(S)-3-(4-시아노-페닐)-N-사이클로펜틸-2-(S/R)-(+/-)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드의 합성(S) -3- (4-cyano-phenyl) -N-cyclopentyl-2- (S / R)-(+/-)-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyclo [2.2. 1] Synthesis of Hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide

(+/-)-캄포술포닐클로라이드를 사용하여 제조예 2 와 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물을 수득하였다(수율: 76%).The reaction was carried out according to the same method as Preparation Example 2 using (+/-)-camphorsulfonylchloride to give the title compound (yield: 76%).

¹H NMR(CDCl₃, ppm) δ : 7.60(2H, m), 7.33(2H, m), 6.33(1H, d), 4.82, 4.67, 4.09(2H, m, m, m), 3.23, 2.80(2H, m, m), 2.79(2H, m), 2.78, 2.75, 2.66, 2.65(3H, s, s, s, s), 2.40(2H, m), 2.2-1.41(13H, m), 1.0, 0.98, 0.95(3H, s, s, s), 0.86, 0.83(3H, s, s) ¹ H NMR (CDCl ₃ , ppm) δ: 7.60 (2H, m), 7.33 (2H, m), 6.33 (1H, d), 4.82, 4.67, 4.09 (2H, m, m, m), 3.23, 2.80 (2H, m, m), 2.79 (2H, m), 2.78, 2.75, 2.66, 2.65 (3H, s, s, s, s), 2.40 (2H, m), 2.2-1.41 (13H, m), 1.0, 0.98, 0.95 (3H, s, s, s), 0.86, 0.83 (3H, s, s)

Mass(FAB, m/e) : 486[M+H]⁺ Mass (FAB, m / e): 486 [M + H] ⁺

제조예 4Preparation Example 4

(S)-3-(4-시아노-페닐)-N-사이클로펜틸-2-(7,7-디메틸-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드의 합성(S) -3- (4-cyano-phenyl) -N-cyclopentyl-2- (7,7-dimethyl-bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl Synthesis of Propionamide

제조예 3 에서 수득한 화합물 60㎎(0.12 밀리몰)을 무수 디클로로메탄 2㎖ 에 용해시킨 후, 0℃ 로 냉각시켰다. 여기에 질소하에서 트리에틸실란(Et₃SiH) 46㎕(0.37 밀리몰)를 가하고 트리플루오로보란 디에틸에테르[BF₃ㆍEt₂O] 96㎕(0.62 밀리몰)를 가한 후, 상온에서 20 시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응용액을 디클로로메탄 10㎕ 로 희석하고 물 및 1N 염산 용액으로 세척하였다. 유기층을 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과하여 농축시켰다. 잔류물을 정제용 박층크로마토그라피(prep. TLC)[전개용매: 헥산/에틸아세테이트(4/1, 부피비)]시켜 표제화합물 20㎎(수율: 35%)을 수득하였다.60 mg (0.12 mmol) of the compound obtained in Preparation Example 3 was dissolved in 2 ml of anhydrous dichloromethane, and then cooled to 0 ° C. 46 µl (0.37 mmol) of triethylsilane (Et ₃ SiH) was added thereto under nitrogen and 96 µl (0.62 mmol) of trifluoroborane diethyl ether [BF ₃ · Et ₂ O] was added thereto, followed by 20 hours at room temperature. Stirred. After the reaction was completed, the reaction solution was diluted with 10 µl of dichloromethane and washed with water and 1N hydrochloric acid solution. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified thin layer chromatography (prep. TLC) [developing solvent: hexane / ethyl acetate (4/1, volume ratio)] to give 20 mg (yield: 35%) of the title compound.

¹H NMR(CDCl₃, ppm) δ : 7.60(2H, m), 7.33(2H, m), 5.7(1H, d), 4.91, 4.70, 4.03(2H, m, m, m), 3.01(2H, m), 2.82-2.65(2H, m), 2.79, 2.68(3H, s, s), 2.0-1.1(17H, m), 1.0(3H, s), 0.99(3H, s) ¹ H NMR (CDCl ₃ , ppm) δ: 7.60 (2H, m), 7.33 (2H, m), 5.7 (1H, d), 4.91, 4.70, 4.03 (2H, m, m, m), 3.01 (2H , m), 2.82-2.65 (2H, m), 2.79, 2.68 (3H, s, s), 2.0-1.1 (17H, m), 1.0 (3H, s), 0.99 (3H, s)

Mass(FAB, m/e) : 472[M+H]⁺ Mass (FAB, m / e): 472 [M + H] ⁺

제조예 5Preparation Example 5

(S)-3-(4-시아노-페닐)-N-사이클로펜틸-2-(S/R)-(+/-)-(2-하이드록시-7,7-디메틸-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드의 합성(S) -3- (4-cyano-phenyl) -N-cyclopentyl-2- (S / R)-(+/-)-(2-hydroxy-7,7-dimethyl-bicyclo [2.2 .1] Synthesis of Hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide

제조예 3 에서 수득한 화합물 60㎎(0.12 밀리몰)을 에탄올 2㎖ 에 용해시킨 후, 0℃ 로 냉각시켰다. 여기에 수소화붕소나트륨(NaBH₄) 5.4㎎(0.14 밀리몰)을 가한 후, 상온에서 30 분 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응용액을 농축시키고 에틸아세테이트 10㎖ 로 희석하였다. 유기층을 물 및 1N 염산 용액으로 세척하고 무수 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과한 다음 농축시켰다. 잔류물을 정제용 박층크로마토그라피(prep. TLC)[전개용매: 헥산/에틸아세테이트(1/1, 부피비)]시켜 정제된 표제화합물 50㎎(수율: 85%)을 수득하였다.60 mg (0.12 mmol) of the compound obtained in Preparation Example 3 was dissolved in 2 ml of ethanol, and then cooled to 0 ° C. 5.4 mg (0.14 mmol) of sodium borohydride (NaBH ₄ ) was added thereto, followed by stirring at room temperature for 30 minutes. After the reaction was completed, the reaction solution was concentrated and diluted with 10 ml of ethyl acetate. The organic layer was washed with water and 1N hydrochloric acid solution, dried over anhydrous magnesium sulfate, filtered and concentrated. The residue was purified by preparative thin layer chromatography (prep. TLC) [developing solvent: hexane / ethyl acetate (1/1, volume ratio)] to give 50 mg (yield: 85%) of the title compound.

¹H NMR(CDCl₃, ppm) δ : 7.60(2H, m), 7.35(2H, m), 5.67(1H, m), 4.91, 4.73, 4.59(2H, m, m, m), 4.0(1H, m), 3.19, 2.80(2H, m, m), 3.01(2H, m), 2.79 (2H, m), 2.8, 2.67, 2.66(3H, s, s), 1.8-1.2(13H, m), 1.0, 0.9(3H, s), 0.73, 0.72(3H, s, s) ¹ H NMR (CDCl ₃ , ppm) δ: 7.60 (2H, m), 7.35 (2H, m), 5.67 (1H, m), 4.91, 4.73, 4.59 (2H, m, m, m), 4.0 (1H , m), 3.19, 2.80 (2H, m, m), 3.01 (2H, m), 2.79 (2H, m), 2.8, 2.67, 2.66 (3H, s, s), 1.8-1.2 (13H, m) , 1.0, 0.9 (3H, s), 0.73, 0.72 (3H, s, s)

Mass(FAB, m/e) : 488[M+H]⁺ Mass (FAB, m / e): 488 [M + H] ⁺

실시예 1Example 1

(S)-3-[4-(아미노-하이드라조노-메틸)페닐]-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드의 합성(S) -3- [4- (amino-hydrazono-methyl) phenyl] -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyclo [ 2.2.1] Synthesis of Hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide

제조예 2 에서 수득한 화합물 30㎎(0.06 밀리몰)을 황화수소(H₂S) 가스로 포화시킨 피리딘-트리에틸아민(20:1, 부피비)의 혼합물 5㎖ 에 용해시켜 2 일간 상온에서 방치하였다. 반응이 완결된 후, 감압증류하여 휘발성 물질을 제거하고 진공펌프로 건조시켰다. 수득된 노란색 고체에 아세토니트릴 10㎖ 와 요오드화메탄(CH₃I) 0.1㎖ 를 함께 가하고 30 분간 환류시켰다. 이를 다시 감압증류하여 휘발성 물질을 제거하고 진공펌프로 건조시켰다. 잔류물을 무수 메탄올 8㎖ 에 용해시켜 교반하였다. 여기에 80% 하이드라진 수화물(H₂NNH₂ㆍH₂O) 5.6㎕(0.09 밀리몰)를 10 분 간격으로 3 회 걸쳐 나누어 가하였다. 반응이 완결된 후, 반응용액을 농축하고 잔류물을 정제용 박층크로마토그라피[전개용매: 디클로로메탄/메탄올(4/1, 부피비)]시켜 정제하여 표제화합물 25㎎(수율: 80%)을 수득하였다.30 mg (0.06 mmol) of the compound obtained in Preparation Example 2 was dissolved in 5 ml of a mixture of pyridine-triethylamine (20: 1, volume ratio) saturated with hydrogen sulfide (H ₂ S) gas, and left at room temperature for 2 days. After the reaction was completed, the mixture was distilled under reduced pressure to remove volatiles and dried with a vacuum pump. 10 ml of acetonitrile and 0.1 ml of methane iodide (CH ₃ I) were added together and the resulting yellow solid was refluxed for 30 minutes. It was distilled under reduced pressure again to remove volatiles and dried with a vacuum pump. The residue was dissolved in 8 ml of anhydrous methanol and stirred. To this, 5.6 μl (0.09 mmol) of 80% hydrazine hydrate (H ₂ NNH ₂ · H ₂ O) was added three times at 10 minute intervals. After the reaction was completed, the reaction solution was concentrated and the residue was purified by preparative thin layer chromatography [developing solvent: dichloromethane / methanol (4/1, volume ratio)] to give 25 mg (yield: 80%) of the title compound. It was.

¹H NMR(CD₃OD, ppm) δ : 7.63(2H, m), 7.42(2H, m), 4.72, 4.53, 4.28(2H, m, m, m), 3.3, 2.81(2H, m, m), 3.02(2H, m), 2.79, 2.70(3H, s, s), 2.3(2H, m), 2.0-1.2(13H, m), 0.98(3H, s), 0.78(3H, s) ¹ H NMR (CD ₃ OD, ppm) δ: 7.63 (2H, m), 7.42 (2H, m), 4.72, 4.53, 4.28 (2H, m, m, m), 3.3, 2.81 (2H, m, m ), 3.02 (2H, m), 2.79, 2.70 (3H, s, s), 2.3 (2H, m), 2.0-1.2 (13H, m), 0.98 (3H, s), 0.78 (3H, s)

Mass(FAB, m/e) : 518[M+H]⁺ Mass (FAB, m / e): 518 [M + H] ⁺

실시예 2Example 2

(S)-3-[4-(아미노-하이드라조노-메틸)페닐]-N-사이클로펜틸-2-(S/R)-(+/-)-(2-하이드록시-7,7-디메틸-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드의 합성(S) -3- [4- (amino-hydrazono-methyl) phenyl] -N-cyclopentyl-2- (S / R)-(+/-)-(2-hydroxy-7,7- Synthesis of Dimethyl-Bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide

제조예 5 에서 수득한 화합물을 사용하여 실시예 1 과 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 22㎎(수율: 68%)을 수득하였다.Using the compound obtained in Preparation Example 5, the reaction was carried out according to the same method as in Example 1 to obtain 22 mg (yield: 68%) of the title compound.

¹H NMR(CD₃OD, ppm) δ : 7.56(2H, m), 7.22(2H, m), 4.78, 4.58, 4.09(2H, m, m, m), 3.88(1H, m), 3.2, 2.6(2H, m, m), 3.02(2H, m), 2.59, 2.54(3H, s, s), 1.70-1.0(15H, m), 0.89, 0.88(3H, s, s), 0.78, 0.76(3H, s, s) ¹ H NMR (CD ₃ OD, ppm) δ: 7.56 (2H, m), 7.22 (2H, m), 4.78, 4.58, 4.09 (2H, m, m, m), 3.88 (1H, m), 3.2, 2.6 (2H, m, m), 3.02 (2H, m), 2.59, 2.54 (3H, s, s), 1.70-1.0 (15H, m), 0.89, 0.88 (3H, s, s), 0.78, 0.76 (3H, s, s)

Mass(FAB, m/e) : 520[M+H]⁺ Mass (FAB, m / e): 520 [M + H] ⁺

실시예 3Example 3

(S)-3-{4-[아미노-(메틸-하이드라조노)-메틸]페닐}-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드 염산염의 합성(S) -3- {4- [amino- (methyl-hydrazono) -methyl] phenyl} -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-(7,7-dimethyl-2-oxo Synthesis of -bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide hydrochloride

제조예 2 에서 수득한 화합물 30㎎(0.06 밀리몰)을 황화수소(H₂S) 가스로 포화시킨 피리딘-트리에틸아민(20:1, 부피비)의 혼합물 5㎖ 에 용해시켜 2 일간 상온에서 방치하였다. 반응이 완결된 후, 감압증류하여 휘발성 물질을 제거하고 진공펌프로 건조시켰다. 수득된 노란색 고체에 아세토니트릴 10㎖ 와 요오드화메탄(CH₃I) 0.1㎖ 를 함께 가하고 30 분간 환류시켰다. 이를 다시 감압증류하여 휘발성 물질을 제거하고 진공펌프로 건조시켰다. 잔류물을 메탄올 20㎖ 에 용해시킨 다음 1-부톡시카보닐-1-메틸-하이드라진[t-BOC(CH₃)NNH₂] 24㎎(0.18 밀리몰)을 3 분량으로 나누어 30 분간에 걸쳐 가하였다. 반응혼합물을 상온에서 6 시간 동안 교반한 후, 농축시켰다. 반응용액을 칼럼크로마토그라피[용출제: 메틸렌클로라이드/메탄올(9/1, 부피비)]에 의해 정제하여 화합물 32㎎ 을 수득하였다. 수득된 화합물을 다시 메탄올 15㎖ 에 용해시킨 다음 빙수욕에서 냉각시키고 아세틸클로라이드 3㎖ 를 조금씩 가하였다. 동일온도에서 10 분간 교반하고 빙수욕을 제거한 후 상온에서 20 분 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응용액을 농축하여 표제화합물 15㎎(수율: 42%)을 수득하였다.30 mg (0.06 mmol) of the compound obtained in Preparation Example 2 was dissolved in 5 ml of a mixture of pyridine-triethylamine (20: 1, volume ratio) saturated with hydrogen sulfide (H ₂ S) gas, and left at room temperature for 2 days. After the reaction was completed, the mixture was distilled under reduced pressure to remove volatiles and dried with a vacuum pump. 10 ml of acetonitrile and 0.1 ml of methane iodide (CH ₃ I) were added together and the resulting yellow solid was refluxed for 30 minutes. It was distilled under reduced pressure again to remove volatiles and dried with a vacuum pump. The residue was dissolved in 20 ml of methanol and then added 24 mg (0.18 mmol) of 1-butoxycarbonyl-1-methyl-hydrazine [t-BOC (CH ₃ ) NNH ₂ ] in 3 portions over 30 minutes. . The reaction mixture was stirred at room temperature for 6 hours and then concentrated. The reaction solution was purified by column chromatography [eluent: methylene chloride / methanol (9/1, volume ratio)] to give 32 mg of compound. The obtained compound was again dissolved in 15 ml of methanol, cooled in an ice water bath and 3 ml of acetyl chloride was added little by little. After stirring at the same temperature for 10 minutes, the ice water bath was removed, and then stirred at room temperature for 20 minutes. After the reaction was completed, the reaction solution was concentrated to give 15 mg (yield: 42%) of the title compound.

¹H NMR(CD₃OD, ppm) δ : 7.79(2H, m), 7.60(2H, m), 4.90, 4.80, 4.51(2H, m, m, m), 3.3, 2.95(2H, m), 3.1(2H, m), 2.91, 2.85(3H, s, s), 2.80(3H, s), 2.41(2H, m), 2.2-1.5(13H, m), 1.1(3H, s), 0.92(3H, s) ¹ H NMR (CD ₃ OD, ppm) δ: 7.79 (2H, m), 7.60 (2H, m), 4.90, 4.80, 4.51 (2H, m, m, m), 3.3, 2.95 (2H, m), 3.1 (2H, m), 2.91, 2.85 (3H, s, s), 2.80 (3H, s), 2.41 (2H, m), 2.2-1.5 (13H, m), 1.1 (3H, s), 0.92 ( 3H, s)

Mass(FAB, m/e) : 532[M+H]⁺ Mass (FAB, m / e): 532 [M + H] ⁺

실시예 4Example 4

(S)-3-[4-(아미노-하이드라조노-메틸)페닐]-N-사이클로펜틸-2-(7,7-디메틸-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드 염산염의 합성(S) -3- [4- (amino-hydrazono-methyl) phenyl] -N-cyclopentyl-2- (7,7-dimethyl-bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonyl Synthesis of Amino) -N-methyl-propionamide Hydrochloride

제조예 4 에서 수득한 화합물 30㎎(0.06 밀리몰)을 사용하여 실시예 3 과 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 21㎎(수율: 58%)을 수득하였다.Using 30 mg (0.06 mmol) of the compound obtained in Preparation Example 4, the reaction was carried out according to the same method as in Example 3 to obtain 21 mg (yield: 58%) of the title compound.

¹H NMR(CD₃OD, ppm) δ : 7.70(2H, m), 7.50(2H, m), 4.68, 4.50, 4.39(2H, m, m, m), 3.3-2.95(4H, m), 2.82, 2.79(3H, s, s), 2.78(3H, s), 1.90-1.0(17H, m), 1.9, 1.08(6H, s, s) ¹ H NMR (CD ₃ OD, ppm) δ: 7.70 (2H, m), 7.50 (2H, m), 4.68, 4.50, 4.39 (2H, m, m, m), 3.3-2.95 (4H, m), 2.82, 2.79 (3H, s, s), 2.78 (3H, s), 1.90-1.0 (17H, m), 1.9, 1.08 (6H, s, s)

Mass(FAB, m/e) : 517[M+H]⁺ Mass (FAB, m / e): 517 [M + H] ⁺

실시예 5Example 5

(S)-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-3-{4-[이미노-(N-메틸-하이드라지노)-메틸]-페닐}-N-메틸-프로피온아미드의 합성(S) -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -3- Synthesis of {4- [imino- (N-methyl-hydrazino) -methyl] -phenyl} -N-methyl-propionamide

제조예 2 에서 수득한 화합물 30㎎(0.06 밀리몰) 및 메틸하이드라진 8.5㎎(0.18 밀리몰)을 사용하여 실시예 1 과 동일한 방법에 따라 반응을 수행하여 표제화합물 14.7㎎(수율: 45%)을 수득하였다.The reaction was carried out according to the same method as Example 1 using 30 mg (0.06 mmol) of the compound obtained in Preparation Example 2 and 8.5 mg (0.18 mmol) of methylhydrazine, to thereby obtain 14.7 mg (yield: 45%) of the title compound. .

¹H NMR(CD₃OD, ppm) δ : 7.80(2H, m), 7.60(2H, m), 4.80, 4.70, 4.45(2H, m, m, m), 3.3, 2.96(2H, m, m), 2.95, 2.85(3H, s, s), 2.81(3H, s), 2.45(2H, m), 2.2-1.5(13H, m), 1.1(3H, s), 0.92(3H, s) ¹ H NMR (CD ₃ OD, ppm) δ: 7.80 (2H, m), 7.60 (2H, m), 4.80, 4.70, 4.45 (2H, m, m, m), 3.3, 2.96 (2H, m, m ), 2.95, 2.85 (3H, s, s), 2.81 (3H, s), 2.45 (2H, m), 2.2-1.5 (13H, m), 1.1 (3H, s), 0.92 (3H, s)

Mass(FAB, m/e) : 532[M+H]⁺ Mass (FAB, m / e): 532 [M + H] ⁺

실시예 6Example 6

(S)-3-[4-(아미노메틸)-페닐]-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드 염산염의 합성(S) -3- [4- (aminomethyl) -phenyl] -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyclo [2.2.1] Synthesis of Hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide hydrochloride

제조예 2 에서 수득한 화합물 30㎎(0.06 밀리몰)을 메탄올 5㎖ 에 용해시키고 촉매량의 10% 팔라듐/탄소를 가한 다음 진한 염산 3 방울을 가하였다. 반응혼합물을 3 기압의 수소압하에서 1.5 시간 동안 반응시키고 여과한 후, 농축하여 표제화합물 28㎎(수율: 85%)을 수득하였다.30 mg (0.06 mmol) of the compound obtained in Preparation Example 2 was dissolved in 5 ml of methanol, 10% palladium / carbon in catalytic amount was added, followed by 3 drops of concentrated hydrochloric acid. The reaction mixture was reacted under hydrogen pressure of 3 atm for 1.5 hours, filtered and concentrated to give 28 mg (yield: 85%) of the title compound.

¹H NMR(CD₃OD, ppm) δ : 7.32(4H, m), 4.80, 4.70, 4.2(2H, m, m, m), 4.05(2H, s), 3.25, 2.8(2H, m, m), 2.98(2H, m), 2.82, 2.81(3H, s, s), 2.30(2H, m), 2.1-1.1(13H, m), 1.0(3H, s), 0.81(3H, s) ¹ H NMR (CD ₃ OD, ppm) δ: 7.32 (4H, m), 4.80, 4.70, 4.2 (2H, m, m, m), 4.05 (2H, s), 3.25, 2.8 (2H, m, m ), 2.98 (2H, m), 2.82, 2.81 (3H, s, s), 2.30 (2H, m), 2.1-1.1 (13H, m), 1.0 (3H, s), 0.81 (3H, s)

Mass(FAB, m/e) : 490[M+H]⁺ Mass (FAB, m / e): 490 [M + H] ⁺

실험예 1 : 트롬빈 억제제의 억제활성Experimental Example 1 Inhibitory Activity of a Thrombin Inhibitor

본 발명의 화합물인 트롬빈 억제제의 효소억제효과는 효소와 반응하여 색을 생성하는 기질을 사용하여 분광광도법으로 측정된 속도상수 Ki 로 결정하였다. 속도상수 Ki 값은 효소와 기질 및 억제제를 동시에 가하였을 경우에 억제제가 효소활성을 억제하는 정도를 나타낸 것이다. 트롬빈이 기질인 크로모자임 TH(토실-Gly-Pro-Arg-4-니트로아닐리드아세테이트)를 가수분해하면 파라-니트로아닐리드가 생성된다. 이렇게 생성되는 노란색의 파라-니트로아닐리드의 양을 시간에 따른 흡광도의 변화로 측정하였다. 이 속도로 부터 효소의 활성을 측정할 수 있으며, 억제제의 효소활성 억제능력을 측정할 수 있다.Enzyme inhibitory effect of the thrombin inhibitor of the present invention was determined by the rate constant Ki measured spectrophotometrically using a substrate that reacts with the enzyme to produce color. The rate constant Ki value indicates the extent to which the inhibitor inhibits the enzyme activity when the enzyme, substrate and inhibitor are added simultaneously. Hydrolysis of thrombin, a substrate, chromozyme TH (tosyl-Gly-Pro-Arg-4-nitroanilide acetate) produces para-nitroanilide. The amount of yellow para-nitroanilide thus produced was measured as a change in absorbance over time. From this rate the activity of the enzyme can be measured and the inhibitory capacity of the inhibitor can be measured.

본 발명에 따른 화합물의 트롬빈에 대한 억제활성을 후술하는 방법에 따라 측정하였다.The inhibitory activity against thrombin of the compound according to the present invention was measured according to the method described below.

1.5㎖ 큐벳에 150mM NaCl, 0.1% PEG8000(폴리에틸렌글리콜, 분자량 약 8000)이 함유되어 있는 0.1M 트리스 완충용액(pH 7.8)을 1160㎕ 씩 가하였다. 기질용액으로는 크로모자임 TH 를 디메틸술폭사이드(DMSO)에 10mM 농도로 용해시킨 후 상기 완충용액으로 희석하여 0.1mM 농도가 되도록 제조한 것을 사용하였다. 이렇게 제조한 0.1mM 기질용액 225㎕ 를 큐벳에 가하였다. 억제제 용액으로는 본 발명에 따른 트롬빈 억제제 화합물을 디메틸술폭사이드에 10㎎/㎖ 의 농도가 되도록 용해시킨 후, 상기 완충용액으로 희석하여 0.1㎎/㎖, 0.01㎎/㎖, 0.001㎎/㎖ 농도로 만든 것을 억제제의 양이 0 내지 10㎍ 사이가 되게 취한 후 트리스 완충용액으로 전체 부피가 100㎕ 가 되도록 하여 큐벳에 가하였다.1160 μl of 0.1M Tris buffer (pH 7.8) containing 150 mM NaCl and 0.1% PEG8000 (polyethylene glycol, molecular weight about 8000) was added to a 1.5 mL cuvette. The substrate solution was prepared by dissolving Chromozyme TH in dimethyl sulfoxide (DMSO) at a concentration of 10 mM and diluting with the buffer solution to a concentration of 0.1 mM. 225 µl of the 0.1 mM substrate solution thus prepared was added to the cuvette. As an inhibitor solution, the thrombin inhibitor compound according to the present invention was dissolved in dimethyl sulfoxide to a concentration of 10 mg / ml, and then diluted with the buffer solution at concentrations of 0.1 mg / ml, 0.01 mg / ml, and 0.001 mg / ml. After the preparation was taken so that the amount of inhibitor was between 0 and 10 μg, the total volume was added to the cuvette with 100 μl of Tris buffer solution.

실온에서 반응용액이 들어 있는 큐벳에 각각 상기 트리스 완충용액에 0.1㎎/㎖ 농도로 용해시킨 트롬빈(human thrombin) 15㎕ 를 가하여 효소 가수분해반응을 시작하였다. 효소를 가한 순간부터 2 분 동안 반응에 의해 생성되는 파라-니트로아닐리드의 양을 381㎚ 에서의 흡광도의 변화로 모니터하여 반응시간 대 흡광도의 연속 스펙트럼을 도시하였다. 여러 종류의 억제제 농도에 대해 위의 실험을 수행하여 연속 스펙트럼을 얻었다.At room temperature, 15 μl of thrombin dissolved in the Tris buffer solution at a concentration of 0.1 mg / ml was added to the cuvette containing the reaction solution. The amount of para-nitroanilide produced by the reaction for 2 minutes from the moment of addition of the enzyme was monitored by the change in absorbance at 381 nm to show a continuous spectrum of reaction time versus absorbance. The above experiments were performed for different inhibitor concentrations to obtain continuous spectra.

각 스펙트럼에서 반응시간 초기 30 초 이내에 기울기로 부터 초기속도 Vi 를 구한 후, 억제제 농도 대비 초기속도의 역수(1/Vi) 그래프를 도시하였다. 그래프 위의 점들을 만족하는 1 차식을 계산해낸 후 그 식의 x 절편으로 부터 이하의 효소반응식(Michaelis-Menten equation)을 사용하여 Ki 를 계산해 낼수 있다. 이 계산에 사용된 Km 값은 5.2μM 로 일정 효소농도에서 기질의 농도를 변화시킴으로서 구한 것이다.After calculating the initial velocity Vi from the slope within 30 seconds of the initial reaction time in each spectrum, an inverse (1 / Vi) graph of the initial velocity versus the inhibitor concentration is shown. After calculating the first equation that satisfies the points on the graph, Ki can be calculated from the x-intercept of the equation using the Michaelis-Menten equation. The Km value used in this calculation was 5.2 μM, determined by varying the substrate concentration at a constant enzyme concentration.

효소반응식(Michaelis-Menten equation)Michaelis-Menten equation

상기 효소반응식에서 [I] 는 억제제의 농도를 나타내고, [S] 는 기질의 농도를 의미하며, Vmax 는 최고 초기속도를 의미하고, Km 은 미카엘리스(Michaelis) 상수로 여기에서는 5.2μM 을 의미한다.In the enzyme scheme, [I] denotes the concentration of the inhibitor, [S] denotes the concentration of the substrate, Vmax denotes the maximum initial velocity, and Km denotes the Michaelis constant, which means 5.2 μM. .

이상 설명한 방법에 따라 트롬빈에 대해 측정된 본 발명에 따른 억제제의 효소활성 억제능력을 Ki 값으로 나타내었으며, 그 결과는 하기 표 1 에 나타낸 바와 같다.According to the method described above, the inhibitory capacity of the inhibitor according to the present invention measured for thrombin was expressed as Ki value, and the results are shown in Table 1 below.

트롬빈에 대한 억제제의 억제능력Inhibitor's ability to inhibit thrombin 실시예Example 억제능력(nM)Inhibitory ability (nM) 실시예Example 억제능력(nM)Inhibitory ability (nM) 1One Ki = 0.64Ki = 0.64 55 Ki = 65.1Ki = 65.1 22 Ki = 0.62Ki = 0.62 66 Ki = 87.3Ki = 87.3 33 Ki = 57.3Ki = 57.3 77 Ki = 6.51Ki = 6.51 44 Ki = 3.96Ki = 3.96 아가트로반Agatrovan Ki = 5.0Ki = 5.0

상기 표 1 에 기재된 결과로 부터 알 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 화합물은 트롬빈에 대하여 수 nM 의 탁월한 억제효과를 나타낸다.As can be seen from the results described in Table 1, the compounds according to the present invention show an excellent inhibitory effect of several nM on thrombin.

실험예 2 : 생체내 혈전형성 억제효과 실험Experimental Example 2: In vivo thrombus formation inhibitory effect experiment

하기 설명하는 방법에 따라 본 발명에 따르는 화합물의 혈전형성에 대한 억제능력을 생체내에서 측정하였다.Inhibition of the compounds according to the present invention according to the method described below for thrombus formation was measured in vivo.

실험방법:Experimental method:

실험동물은 엘지화학 기술연구원 실험동물실에서 온도 20-22℃, 12 시간 간격의 명,암 조건에서 시판 표준사료를 사용하여 사육된 체중 250-300g 의 웅성 스프라그 돌리(Sprague Dawley) 흰쥐를 사용하였다. 먼저 쥐에게 체중 ㎏ 당 1.3g 의 용량으로 우레탄을 복강주사하여 마취하였다. 쥐의 복부를 절개하여 하대정맥(inferior vena cava)을 노출시킨 다음, 왼쪽 신정맥(left renal vein) 바로 아래 부위와 1.6㎝ 아래 부위의 정맥에 봉합사를 걸쳐 놓았다. 실시예 1 및 실시예 3 의 화합물을 각각 왼쪽 대퇴정맥(left femoral vein)을 통하여 체중 ㎏ 당 1㎎ 과 5㎎ 의 용량으로 각각 주입하고 5 분후에 트롬보플라스틴을 역시 대퇴정맥을 통하여 주입하였다. 계속해서 30 초후에 걸쳐 놓았던 봉합사를 결찰하였다. 봉합사를 결찰한지 15 분후에 정맥을 적출하여 생성된 혈전을 취하여 무게를 측정하였다.Experimental animals were male Sprague Dawley rats weighing 250-300 g, which were bred using commercial standard feed at 20-22 ° C, 12-hour light and dark conditions at LG Chem Institute of Experimental Animals. It was. First, rats were anesthetized by intraperitoneal injection of urethane at a dose of 1.3 g / kg body weight. The abdomen of the rat was excised to expose the inferior vena cava, and then sutures were placed over the vein just below the left renal vein and 1.6 cm below. The compounds of Examples 1 and 3 were respectively injected at doses of 1 mg and 5 mg / kg body weight through the left femoral vein, respectively, and 5 minutes later, thromboplastin was also injected through the femoral vein. . Subsequently, the sutures placed over 30 seconds later were ligated. Fifteen minutes after the sutures were ligated, the veins were removed and the thrombus produced was taken and weighed.

실험결과:Experiment result:

시험약물에 의한 정맥혈전생성 억제효과는 시료 투여 용적과 동일 용적의 10% HPCD(하이드록시프로필 β-사이클로덱스트린) 용액을 투여한 대조군의 혈전생성 정도와 비교하여 산출하였으며 그 결과는 하기 표 2 에 기재하였다.Inhibition of venous thrombogenesis by the test drug was calculated by comparing the degree of thrombus formation of the control group administered with the same volume of 10% HPCD (hydroxypropyl β-cyclodextrin) solution, and the results are shown in Table 2 below. Described.

실시예Example 억제효과 % (5㎎/㎏)Inhibitory effect% (5㎎ / ㎏) 억제효과 % (㎎/㎏)Inhibitory effect% (mg / ㎏) 1One 70.070.0 25.825.8 33 79.879.8 29.829.8

상기 표 2 에 기재된 결과로 부터, 본 발명의 화합물은 생체내에서도 우수한 혈전생성 억제효과를 나타내는 것을 알 수 있다.From the results described in Table 2, it can be seen that the compound of the present invention exhibits an excellent thrombogenic inhibitory effect in vivo.

Claims (8)

하기 화학식 1 로 표시되는 화합물, 그의 약제학적으로 허용되는 염 및 이성체:Compound represented by the following formula (1), pharmaceutically acceptable salts and isomers thereof: [화학식 1][Formula 1]

상기식에서,In the above formula, X 및 Y 는 함께 =O 를 나타내거나, 각각 수소를 나타내거나, X 및 Y 중의 하나는 OH 를 나타내고 다른 하나는 수소를 나타내며,X and Y together represent = O, each represent hydrogen, or one of X and Y represents OH and the other represents hydrogen, R₂및 R₃는 각각 독립적으로 저급알킬 또는 사이클로알킬을 나타내고,R ₂ and R ₃ each independently represent lower alkyl or cycloalkyl, A 는

또는

의 그룹을 나타내고,A is

or

Represents a group of R₅및 R₆는 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 아미노 또는 저급알킬아미노를 나타낸다.R ₅ and R ₆ each independently represent hydrogen, lower alkyl, amino or lower alkylamino. 제 1 항에 있어서, X 및 Y 가 함께 =O 를 나타내거나, (H, H) 또는 (OH, H) 를 나타내고, R₂및 R₃는 각각 독립적으로 메틸 또는 사이클로펜틸을 나타내며, A 는

또는

의 그룹을 나타내고, R₅및 R₆는 각각 독립적으로 수소, 메틸, 아미노 또는 메틸아미노를 나타내는 화합물.The compound of claim 1, wherein X and Y together represent = O, or (H, H) or (OH, H), R ₂ and R ₃ each independently represent methyl or cyclopentyl, and A is

or

And R ₅ and R ₆ each independently represent hydrogen, methyl, amino or methylamino. 제 2 항에 있어서, (S)-3-[4-(아미노-하이드라조노-메틸)페닐]-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드, (S)-3-[4-(아미노-하이드라조노-메틸)페닐]-N-사이클로펜틸-2-(S/R)-(+/-)-(2-하이드록시-7,7-디메틸-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드, (S)-3-{4-[아미노-(메틸-하이드라조노)-메틸] -페닐}-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드, (S)-3-[4-(아미노-하이드라조노-메틸)페닐]-N-사이클로펜틸-2-(7,7-디메틸-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드, (S)-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]-헵트-1-일메탄술포닐아미노)-3-{4-[이미노-(N-메틸-하이드라지노)-메틸]-페닐}-N-메틸-프로피온아미드 및 (S)-3-[4-(아미노메틸)-페닐]-N-사이클로펜틸-2-(S)-(+)-(7,7-디메틸-2-옥소-바이사이클로[2.2.1]헵트-1-일메탄술포닐아미노)-N-메틸-프로피온아미드로 구성된 그룹중에서 선택된 화합물.The compound according to claim 2, wherein (S) -3- [4- (amino-hydrazono-methyl) phenyl] -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-(7,7-dimethyl-2 -Oxo-bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide, (S) -3- [4- (amino-hydrazono-methyl) phenyl] -N -Cyclopentyl-2- (S / R)-(+/-)-(2-hydroxy-7,7-dimethyl-bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N- Methyl-propionamide, (S) -3- {4- [amino- (methyl-hydrazono) -methyl] -phenyl} -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-(7,7 -Dimethyl-2-oxo-bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide, (S) -3- [4- (amino-hydrazono-methyl) Phenyl] -N-cyclopentyl-2- (7,7-dimethyl-bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide, (S) -N-cyclopentyl -2- (S)-(+)-(7,7-dimethyl-2-oxo-bicyclo [2.2.1] -hept-1-ylmethanesulfonylamino) -3- {4- [imino- (N-methyl-low Drazino) -methyl] -phenyl} -N-methyl-propionamide and (S) -3- [4- (aminomethyl) -phenyl] -N-cyclopentyl-2- (S)-(+)-( 7,7-dimethyl-2-oxo-bicyclo [2.2.1] hept-1-ylmethanesulfonylamino) -N-methyl-propionamide. 화학식 3 의 메틸머캅토 유도체를 화학식 4 의 아민 유도체와 반응시킴을 특징으로 하여 화학식 1a 의 화합물 및 그의 염을 제조하는 방법:A method of preparing a compound of Formula 1a and salts thereof, characterized by reacting a methylmercapto derivative of Formula 3 with an amine derivative of Formula 4: [화학식 1a][Formula 1a]

[화학식 3][Formula 3]

[화학식 4][Formula 4]

상기식에서,In the above formula, X 및 Y 는 함께 =O 를 나타내거나, 각각 수소를 나타내거나, X 및 Y 중의 하나는 OH 를 나타내고 다른 하나는 수소를 나타내며,X and Y together represent = O, each represent hydrogen, or one of X and Y represents OH and the other represents hydrogen, R₂및 R₃는 각각 독립적으로 저급알킬 또는 사이클로알킬을 나타내고,R ₂ and R ₃ each independently represent lower alkyl or cycloalkyl, R₅및 R₆는 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 아미노 또는 저급알킬아미노를 나타낸다.R ₅ and R ₆ each independently represent hydrogen, lower alkyl, amino or lower alkylamino. 제 4 항에 있어서, 반응을 용매의 존재하에서 수행함을 특징으로 하는 방법.The process according to claim 4, wherein the reaction is carried out in the presence of a solvent. 화학식 5 의 니트릴 화합물을 환원시켜 화학식 1c 의 화합물을 수득하거나, 수득된 화학식 1c 의 화합물을 알킬화시켜 R₅및 R₆가 각각 독립적으로 저급알킬인 화학식 1b 의 화합물을 수득하거나, 또는 화학식 5 의 니트릴 화합물을 화학식 11 의 알데히드 화합물로 전환시킨 후, 화학식 12 의 하이드라진 유도체와 반응시켜 환원적 아미노화시켜 R₅및 R₆가 각각 독립적으로 아미노 또는 저급알킬아미노를 나타내는 화학식 1b 의 화합물을 생성시킴을 특징으로 하여 화학식 1b 의 화합물 및 그의 염을 제조하는 방법:The nitrile compound of formula 5 is reduced to give a compound of formula 1c, or the obtained compound of formula 1c is alkylated to yield a compound of formula 1b wherein R ₅ and R ₆ are each independently lower alkyl, or a nitrile of formula 5 The compound is converted to an aldehyde compound of formula 11 and then reacted with a hydrazine derivative of formula 12 to reductive amination to yield a compound of formula 1b in which R ₅ and R ₆ each independently represent amino or lower alkylamino To prepare a compound of Formula 1b and salts thereof: [화학식 1b][Formula 1b]

[화학식 1c][Formula 1c]

[화학식 5][Formula 5]

[화학식 11][Formula 11]

[화학식 12][Formula 12]

상기식에서,In the above formula, X 및 Y 는 함께 =O 를 나타내거나, 각각 수소를 나타내거나, X 및 Y 중의 하나는 OH 를 나타내고 다른 하나는 수소를 나타내며,X and Y together represent = O, each represent hydrogen, or one of X and Y represents OH and the other represents hydrogen, R₂및 R₃는 각각 독립적으로 저급알킬 또는 사이클로알킬을 나타내고,R ₂ and R ₃ each independently represent lower alkyl or cycloalkyl, R₅및 R₆는 각각 독립적으로 수소, 저급알킬, 아미노 또는 저급알킬아미노를 나타내며,R ₅ and R ₆ each independently represent hydrogen, lower alkyl, amino or lower alkylamino, R₅' 및 R₆' 는 각각 독립적으로 수소 또는 저급알킬을 나타낸다.R ₅ ′ and R ₆ ′ each independently represent hydrogen or lower alkyl. 제 6 항에 있어서, 화학식 5 의 화합물을 촉매량의 염산의 존재하에서 팔라듐/탄소 촉매를 사용하여 수소 대기하에 환원시킴을 특징으로 하는 방법.7. The process of claim 6, wherein the compound of formula 5 is reduced under a hydrogen atmosphere using a palladium / carbon catalyst in the presence of a catalytic amount of hydrochloric acid. 활성성분으로서 제 1 항에 따르는 화학식 1 의 화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염을 함유하는 트롬빈 억제제 조성물.A thrombin inhibitor composition comprising as an active ingredient the compound of formula 1 according to claim 1 or a pharmaceutically acceptable salt thereof.