KR19990036271A

KR19990036271A - C-proteinase inhibitors used to treat diseases associated with collagen overproduction

Info

Publication number: KR19990036271A
Application number: KR1019980700939A
Authority: KR
Inventors: 미치 브레너; 웬-빈 호
Original assignee: 토마스 네프; 피브로겐 인코퍼레이션
Priority date: 1995-08-08
Filing date: 1996-08-08
Publication date: 1999-05-25
Also published as: CN1198096A; AU6951296A; EP0845987A4; BR9609883A; MX9801093A; CA2229098A1; JPH11511137A; WO1997005865A1; EP0845987A1

Abstract

본원 발명은 비정상적인 콜라겐 형성을 조절, 변형 및 저해을 하기위해 C-프로테나제 활성을 저해할 수 있는 유기 분자의 새로운 용도에 관계한다.The present invention relates to new uses of organic molecules capable of inhibiting C-proteinase activity to modulate, modify and inhibit abnormal collagen formation.

Description

콜라겐 과다생산과 연관된 질환의 치료에 이용되는 Ｃ-프로테나제 저해물질C-proteinase inhibitors used to treat diseases associated with collagen overproduction

콜라겐 구조 : 현재까지 19종의 콜라겐이 확인되었다. 원 섬유 콜라겐 I, II, III를 포함하는 이와 같은 콜라겐은 아미노와 카르복시단부 펩티드 연장부를 포함하는 프로콜라겐 전구분자로부터 합성된다. "프로-부분"으로 불리는 이와 같은 펩티드 연장부는 각각 N- 과 C-프로펩티드라 칭한다.Collagen Structure: To date, 19 kinds of collagen have been identified. Such collagen, including fibrillar collagen I, II, III, is synthesized from procollagen promolecules comprising amino and carboxylate peptide extensions. Such peptide extensions, called "pro-parts", are termed N- and C-propeptides, respectively.

일반적으로, 세포로부터 프로콜라겐 3중 나선 전구분자를 분비할 때 프로-부분이 절단되어 완성된 3중 나선 콜라겐 분자가 만들어진다. 절단시에 "성숙" 콜라겐 분자는 고도로 구조화된 콜라겐 섬유로 연합할 수 있는 능력을 가진다(Fessler and Fessler, 1978, Annu. Rev. Biochem. 47:129-162; Bornstein and Traub, 1979, in: The Proteins (eds. Neurath, H. and Hill, R.H.), Academic Press, New York, pp. 412-632; Kivirikko et al., 1984, in: Extracellular Matrix Biochemistry (eds. Piez, K.A. and Reddi, A.H.), Elsevier Science Publishing Co., Inc., New York, pp. 83-118; Prockop and Kivirikko, 1984, N. Engl. J. Med. 311:376-383; Kuhn, 1987, in: Structure and Function of Collagen Types (eds. Mayne, R. and Burgeson, R.E.), Academic Press, Inc., Orlando, Florida, pp. 1-42).In general, when secreting procollagen triple helix precursors from a cell, the pro-part is cleaved to produce a finished triple helix collagen molecule. Upon cleavage, "mature" collagen molecules have the ability to associate with highly structured collagen fibers (Fessler and Fessler, 1978, Annu. Rev. Biochem. 47: 129-162; Bornstein and Traub, 1979, in: The Proteins (eds. Neurath, H. and Hill, RH), Academic Press, New York, pp. 412-632; Kivirikko et al., 1984, in: Extracellular Matrix Biochemistry (eds. Piez, KA and Reddi, AH), Elsevier Science Publishing Co., Inc., New York, pp. 83-118; Prockop and Kivirikko, 1984, N. Engl. J. Med. 311: 376-383; Kuhn, 1987, in: Structure and Function of Collagen Types (eds. Mayne, R. and Burgeson, RE), Academic Press, Inc., Orlando, Florida, pp. 1-42).

콜라겐의 비정상적인 생산과 연관된 질병: 콜라겐의 비정상적인 생산 또는 생산이 조절 안되는 질병에는 심내막 경화증을 포함하는 병적 섬유증 또는 반흔, 자연발생 간질성 섬유증, 간질성 폐 섬유증, 근육주변 섬유증, 시머스 섬유증, 중심주위 섬유증, 간염, 피부섬유종, 담즙성 간경변증, 알코올성 간경변증, 급성 폐 섬유증, 자연발생 폐 섬유증, 급성 호흡기 피로 증후군, 신장 섬유종/사구체신염, 신장 섬유증/당뇨성 신장병, 공피증/전신, 공피증/국소, 해족증, 비대성 반흔, 심각한 관절 유착/관절염, 골 섬유증, 각막 반흔, 방광 섬유증, 근이상(duchenne's), 심장 섬유증, 근 섬유증/망막 분리, 식도 협착, payronles 질병 등을 포함한다. 또한 섬유증 질환은 반흔교정/성형수술, 녹내장, 백내장 섬유증, 각막 반흔, 관절 유착, 이식에 대한 숙주 질환, 건 수술, 신경 고정, dupuytren 구축, OB/GYN 유착/섬유증, 골반 유착, 십이지장 섬유증, 재협착증 등을 포함한 수술에 의해 유도되거나 개시될 수 있다. 이와 같은 질병을 치료하는 방법중 하나는 콜라겐의 병적인 과다생산을 막는 것이다. 따라서, 의료계의 주요 관심사는 콜라겐의 생산을 조절, 저해 또는 조정하는 분자의 확인과 분리에 있다.Diseases associated with abnormal production of collagen: Diseases in which abnormal production or production of collagen are not controlled include pathological fibrosis or scars, including endocardiosclerosis, spontaneous interstitial fibrosis, interstitial pulmonary fibrosis, myofascial fibrosis, cymus fibrosis, central Peripheral fibrosis, hepatitis, fibrofibrosis, biliary cirrhosis, alcoholic cirrhosis, acute pulmonary fibrosis, spontaneous pulmonary fibrosis, acute respiratory fatigue syndrome, renal fibrosis / glomerulonephritis, renal fibrosis / diabetic nephropathy, scleroderma / systemic, scleroderma / Local, pedigree, hypertrophic scar, severe joint adhesion / arthritis, bone fibrosis, corneal scar, bladder fibrosis, duchenne's, cardiac fibrosis, muscle fibrosis / retinal detachment, esophageal stricture, payronles disease and the like. Fibrotic diseases also include scar correction / plastic surgery, glaucoma, cataract fibrosis, corneal scar, joint adhesion, host disease for transplantation, tendon surgery, nerve fixation, dupuytren buildup, OB / GYN adhesion / fibrosis, pelvic adhesion, duodenal fibrosis, re It may be induced or initiated by surgery, including stenosis and the like. One way to treat such a disease is to prevent the pathological overproduction of collagen. Thus, a major concern of the medical community is in the identification and isolation of molecules that regulate, inhibit or modulate the production of collagen.

콜라겐 형성과 C-프로테나제의 관계: 최근 연구에 따르면, C-프로테나제는 콜라겐 I, II, III형을 포함하는 원섬유 콜라겐의 C-프로펩티드의 절단을 촉매하는 기본적인 필수 효소이다(미국 출원 60/002,038(1995. 8. 8)을 참조).Relationship between collagen formation and C-proteinases: According to recent studies, C-proteinase is a fundamental essential enzyme that catalyzes the cleavage of C-propeptides of fibrillar collagen, including collagen types I, II and III. See U.S. Application 60 / 002,038 (August 8, 1995).

C-프로테나제는 사람과 마우스 섬유아세포의 배양배지에서 처음으로 확인되었다(Goldberg et al., 1975, Cell 4:45-50; Kessler and Goldberg, 1978, Anal. Biochem. 86:463-469), and chick tendon fibroblasts(Duskin et al., 1978, Arch. Biochem. Biophys. 185:326-332; Leung et al., 1979, J. Biol. Chem. 254:224-232). 타입 I 프로콜라겐에서 C-단부 프로펩티드를 제거하는 산성 프로테아제 또한 확인되었다(Davidson et al., 1979, Eur. J. Biochem. 100:551).C-proteinase was first identified in culture media of human and mouse fibroblasts (Goldberg et al., 1975, Cell 4: 45-50; Kessler and Goldberg, 1978, Anal. Biochem. 86: 463-469) , and chick tendon fibroblasts (Duskin et al., 1978, Arch. Biochem. Biophys. 185: 326-332; Leung et al., 1979, J. Biol. Chem. 254: 224-232). Acidic proteases have also been identified that remove C-end propeptide from type I procollagen (Davidson et al., 1979, Eur. J. Biochem. 100: 551).

1982년에 병아리 두개관으로부터 C-프로테나제 활성을 가지는 일부 정제된 단백질을 얻었다(Njieha et al., 1982, Biochemistry 23:757-764.).In 1982, some purified proteins with C-proteinase activity were obtained from chick cranial tubes (Njieha et al., 1982, Biochemistry 23: 757-764.).

1985년에 병아리 C-프로테나제는 병아리 배 건의 조건화 배지로부터 분리, 정제하여 특징을 조사하였다(Hojima et al., 1985, J. Biol. Chem. 260:15996-16003). 뮤린 C-프로테나제는 배양된 마우스 섬유아세포의 배지로부터 정제하였다(Kessler et al., 1986, Collagen Relat. Res. 6:249-266; Kessler and Adar, 1989, Eur. J. Biochem. 186:115-121). 마지막으로, 사람 C-프로테나제를 인코드하는 cDNA는 상기 제시한 미국 관련 출원에서 제시한 것과 같이 확인되었다.In 1985, chick C-proteinase was isolated and purified from the conditioned medium of chick embryos and characterized (Hojima et al., 1985, J. Biol. Chem. 260: 15996-16003). Murine C-proteinase was purified from the culture of cultured mouse fibroblasts (Kessler et al., 1986, Collagen Relat. Res. 6: 249-266; Kessler and Adar, 1989, Eur. J. Biochem. 186: 115-121). Finally, cDNA encoding human C-proteinase was identified as set forth in the US related application presented above.

병아리와 마우스 C-프로테나제의 정제형으로 실시한 실험에서 효소는 기능을 가진 콜라겐 섬유의 형성에 필수적인 것으로 나타났다(Fertala et al., 1994, J. Biol. Chem. 269:11584).Experiments in tablet form of chick and mouse C-proteinases have shown that enzymes are essential for the formation of functional collagen fibers (Fertala et al., 1994, J. Biol. Chem. 269: 11584).

C-프로테나제 저해물질: 콜라겐 생산에 효소가 중요한 역할을 한다는 결론에 따라, 과학자들은 다수의 C-프로테나제 저해물질을 확인하였다(Hojima et al., supra). 예를 들면, C-프로테나제 저해물질로써 몇가지 금속 킬레이트가 설명되었다. 유사하게, 키모스타틴과 펩스타틴 A가 상대적으로 강력한 C-프로테나제 저해물질로 밝혀졌다. 또한, α₂-마크로글로블린, 오보스타틴과 태아 소 혈청은 부분적으로 C-프로테나제 활성을 저해하는 것으로 나타냈다.C-proteinase inhibitors: Following the conclusion that enzymes play an important role in collagen production, scientists have identified a number of C-proteinase inhibitors (Hojima et al., Supra). For example, several metal chelates have been described as C-proteinase inhibitors. Similarly, chymostatin and pepstatin A have been found to be relatively potent C-proteinase inhibitors. In addition, α ₂ -macroglobulin, ovostatin and fetal bovine serum have been shown to partially inhibit C-proteinase activity.

디티오트레톨, SDS, 콘카나발린 A, Zn²⁺, Cu²⁺, Cd²⁺는 낮은 농도에서도 저해활성이 있는 것으로 보고되고 있다. 이와 유사하게, 일부 환원제, 몇가지 아미노산, 인산염 및 황산 암모니움염이 1-10mM 농도에서 저해활성이 있는 것으로 나타났다. 또한, 효소는 염기성 아미노산 리신과 아르기닌에 의해 저해를 받는 것으로 나타났다(Leung et al., supra; Ryhanen et al., 1982, Arch. Biochem. Biophys. 215:230-236). 마지막으로, 고농도 NaCl 또는 트리스-HCl 완충액이 C-프로테나제 활성을 방해하는 것으로 밝혀졌다. 예를 들면, 0.2, 0.3, 0.5M NaCl 에 의해 C-프로테나제의 활성이 각 66, 38, 25% 감소되었다. 0.2-0.5M 농도의 트리스-HCl 완충액에 의해서는 급격히 활성이 저해된다(Hojima et al., supra). 대조적으로, 루펩틴, 포스포라미돈, 안티파인, 베스타틴, 엘라스티날과 아마스타틴과 같은 미생물 저해물질은 C-프로테나제의 활성에 효과가 없거나 적었다.Dithiotretol, SDS, Concanavalin A, Zn ²⁺ , Cu ²⁺ and Cd ²⁺ are reported to have inhibitory activity even at low concentrations. Similarly, some reducing agents, some amino acids, phosphates and ammonium sulfate were shown to have inhibitory activity at concentrations of 1-10 mM. In addition, enzymes have been shown to be inhibited by basic amino acids lysine and arginine (Leung et al., Supra; Ryhanen et al., 1982, Arch. Biochem. Biophys. 215: 230-236). Finally, high concentrations of NaCl or Tris-HCl buffer have been found to interfere with C-proteinase activity. For example, the activity of C-proteinase was reduced by 66, 38 and 25% by 0.2, 0.3, 0.5M NaCl, respectively. Activity is rapidly inhibited by Tris-HCl buffer at a concentration of 0.2-0.5 M (Hojima et al., Supra). In contrast, microbial inhibitors such as lupeptin, phosphoramidone, antipine, bestatin, elastinal and amazatin had little or no effect on the activity of C-proteinase.

다양한 검사를 이용하여 C-프로테나제 활성과 이를 저해도를 결정하였다(kessler and Goldberg, 1978, Anal. Biochem. 86:463; Njieha et al., 1982, Biochemistry 21:757-764). 이와 같은 검사의 유용성에도 불구하고, 사람 C-프로테나제의 이용에 제한 때문에 가능성이 있는 C-프로테나제 저해물질의 대규모 검사와 테스트를 실행할 수 없었다. 다수의 문헌에 기술된 것과 같이, 효소는 통상적인 생화학적 수단에 의해 분리하기가 어렵고, 이와 같은 효소를 인코드하는 cDNA 서열은 아직 보고된바 없다.Various assays were used to determine C-proteinase activity and its inhibition (kessler and Goldberg, 1978, Anal. Biochem. 86: 463; Njieha et al., 1982, Biochemistry 21: 757-764). Despite the usefulness of these tests, large-scale testing and testing of potential C-proteinase inhibitors could not be performed because of limitations in the use of human C-proteinases. As described in many literatures, enzymes are difficult to isolate by conventional biochemical means, and cDNA sequences encoding such enzymes have not yet been reported.

C-프로테나제 활성을 저해하는 화합물의 개발: 콜라겐의 형성과 성숙에 있어 기본적인 역할의 견지에서 C-프로테나제는 콜라겐의 부적절한 또는 조절 안된 생산과 연관된 질병을 치료하는데 이상적인 표적이다. 그러나, 지금까지 확인된 저해제중 어느 것도 콜라겐과 연관된 질병의 치료에 또는 C-프로테나제 활성을 저해하는데 치료요법적 효과가 증명되지는 않았다.Development of compounds that inhibit C-proteinase activity: In view of its fundamental role in the formation and maturation of collagen, C-proteinase is an ideal target for treating diseases associated with improper or unregulated production of collagen. However, none of the inhibitors identified to date have demonstrated a therapeutic effect in the treatment of diseases associated with collagen or in inhibiting C-proteinase activity.

부적절한 콜라겐의 생산을 조절하거나 변형시키기 위해 특이적으로 C-프로테나제를 저해하는 효과적인 화합물의 확인이 본원발명의 목적이다.It is an object of the present invention to identify effective compounds that specifically inhibit C-proteinases in order to modulate or modify the production of inappropriate collagen.

3. 발명의 요약3. Summary of the Invention

본 발명은 C-프로테나제 활성에 영향을 주어서 콜라겐 생산을 조절, 변형, 저해할 수 있는 유기분자에 관계한다. 특히, 본원 발명의 화합물은 다음과 같다.The present invention relates to organic molecules that can affect C-proteinase activity to regulate, modify and inhibit collagen production. In particular, the compounds of the present invention are as follows.

a. 저해제 Aa. Inhibitor A

이때, R₁은 H, 저가알킬, 모노 또는 폴리-할로알킬, 카르복시알킬, 아릴, 헤테로알릴, 아랄킬, 할로 치환된 아랄킬, 헤테로아랄킬, 비아릴, 비아릴알킬, 하이드록시알킬, 알콕시알킬, 아실옥시알킬, 멀캅토알킬, (아미노, 모노 또는 디알킬아미노)알킬, 아실아미노알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 알킬-(티오, 설피닐 또는 설포닐)-알킬에서 선택되고;Wherein R ₁ is H, lower alkyl, mono or poly-haloalkyl, carboxyalkyl, aryl, heteroallyl, aralkyl, halo-substituted aralkyl, heteroaralkyl, biaryl, biarylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxy Alkyl, acyloxyalkyl, mercaptoalkyl, (amino, mono or dialkylamino) alkyl, acylaminoalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, cycloalkylalkyl, heterocycloalkylalkyl, alkyl- (thio, sulfinyl or sulf Phonyl) -alkyl;

R₂는 H, 저가 알킬에서 선택되고;R ₂ is selected from H, lower alkyl;

R₃는 H, 저가 알킬, 모노 또는 폴리-할로알킬, 카르복시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아랄킬, 할로 치환된 아랄킬, 헤테로아랄킬, 비아릴, 비아릴알킬, 하이드록시알킬, 알콕시알킬, 아실옥시알킬, 멀캅토알킬, (아미노, 모노 또는 디알킬아미노)알킬, 아실아미노알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 알킬-(티오, 설피닐 또는 설포닐)-알킬에서 선택되고;R ₃ is H, lower alkyl, mono or poly-haloalkyl, carboxyalkyl, aryl, heteroaryl, aralkyl, halo-substituted aralkyl, heteroaralkyl, biaryl, biarylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, Acyloxyalkyl, mercaptoalkyl, (amino, mono or dialkylamino) alkyl, acylaminoalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, cycloalkylalkyl, heterocycloalkylalkyl, alkyl- (thio, sulfinyl or sulfonyl) -Selected from alkyl;

R₄는 아릴, 헤테로아릴, 알킬, 아랄킬, 헤테로아랄킬, 알킬아미노, 아릴알킬아미노에서 선택되고,R ₄ is selected from aryl, heteroaryl, alkyl, aralkyl, heteroaralkyl, alkylamino, arylalkylamino,

X는 SO₂, C=O 에서 선택되고;X is selected from SO ₂ , C═O;

Y는 OH, HOHN(하이드록시아민), H₂N, 알킬아미노에서 선택되고;Y is selected from OH, HOHN (hydroxyamine), H ₂ N, alkylamino;

Z는 메틸렌, 산소, 황, 아미노에서 직접 결합되어 있고;Z is directly bonded at methylene, oxygen, sulfur, amino;

n은 0 또는 1이다; 또는n is 0 or 1; or

b. 저해물질 Bb. Inhibitor B

이때 R₁은 H, 저가 알킬, 모노 또는 폴리-할로알킬, 카르복시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아랄킬, 할로 치환된 아랄킬, 헤테로아랄킬, 비아릴, 비아릴알킬, 하이드록시알킬, 알콕시알킬, 아실옥시알킬, 멀캅토알킬, (아미노, 모노 또는 디알킬아미노)알킬, 아실아미노알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 알킬-(티오, 설피닐 또는 설포닐)-알킬에서 선택되고;Wherein R ₁ is H, lower alkyl, mono or poly-haloalkyl, carboxyalkyl, aryl, heteroaryl, aralkyl, halo-substituted aralkyl, heteroaralkyl, biaryl, biarylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl , Acyloxyalkyl, mercaptoalkyl, (amino, mono or dialkylamino) alkyl, acylaminoalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, cycloalkylalkyl, heterocycloalkylalkyl, alkyl- (thio, sulfinyl or sulfonyl ) -Alkyl;

R₂는 H, 저가 알킬, 모노 또는 폴리-할로알킬, 카르복시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아랄킬, 할로 치환된 아랄킬, 헤테로아랄킬, 비아릴, 비아릴알킬, 하이드록시알킬, 알콕시알킬, 아실옥시알킬, 멀캅토알킬, (아미노, 모노 또는 디알킬아미노)알킬, 아실아미노알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 알킬-(티오, 설피닐 또는 설포닐)-알킬에서 선택되고;R ₂ is H, lower alkyl, mono or poly-haloalkyl, carboxyalkyl, aryl, heteroaryl, aralkyl, halo-substituted aralkyl, heteroaralkyl, biaryl, biarylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, Acyloxyalkyl, mercaptoalkyl, (amino, mono or dialkylamino) alkyl, acylaminoalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, cycloalkylalkyl, heterocycloalkylalkyl, alkyl- (thio, sulfinyl or sulfonyl) -Selected from alkyl;

R₃는 H, 저가 알킬, 모노 또는 폴리-할로알킬, 카르복시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아랄킬, 헤테로아랄킬, 비아릴, 비아릴알킬, 하이드록시알킬, 알콕시알킬, 아실옥시알킬, 멀캅토알킬, (아미노, 모노 또는 디알킬아미노)알킬, 아실아미노알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 알킬-(티오, 설피닐 또는 설포닐)-알킬에서 선택되고;R ₃ is H, lower alkyl, mono or poly-haloalkyl, carboxyalkyl, aryl, heteroaryl, aralkyl, heteroaralkyl, biaryl, biarylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, acyloxyalkyl, mercapto Alkyl, (amino, mono or dialkylamino) alkyl, acylaminoalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, cycloalkylalkyl, heterocycloalkylalkyl, alkyl- (thio, sulfinyl or sulfonyl) -alkyl;

R₄는 H, 저가 알킬에서 선택되고;R ₄ is selected from H, lower alkyl;

R₅는 H, 저가 알킬, 카르복시알킬, (모노 또는 디알킬아미노)알킬, 알킬-(티오, 설피닐 또는 설포닐)알킬, 알콕시알킬아실알킬에서 선택된다; 또는R ₅ is selected from H, lower alkyl, carboxyalkyl, (mono or dialkylamino) alkyl, alkyl- (thio, sulfinyl or sulfonyl) alkyl, alkoxyalkylacylalkyl; or

c. 저해제 Cc. Inhibitor C

이때, R₁은 H, 저가 알킬, 모노 또는 폴리-할로알킬, 카르복시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아랄킬, 헤테로아랄킬, 비아릴, 비아릴알킬, 하이드록시알킬, 알콕시알킬, 아실옥시알킬, 멀캅토알킬, (아미노, 모노 또는 디알킬아미노)알킬, 아실아미노알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 알킬-(티오, 설피닐 또는 설포닐)-알킬에서 선택되고;Wherein R ₁ is H, lower alkyl, mono or poly-haloalkyl, carboxyalkyl, aryl, heteroaryl, aralkyl, heteroaralkyl, biaryl, biarylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, acyloxyalkyl, Selected from mercaptoalkyl, (amino, mono or dialkylamino) alkyl, acylaminoalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, cycloalkylalkyl, heterocycloalkylalkyl, alkyl- (thio, sulfinyl or sulfonyl) -alkyl Become;

R₂는 H, 저가 알킬, 모노 또는 폴리-할로알킬, 카르복시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아랄킬, 헤테로아랄킬, 비아릴, 비아릴알킬, 하이드록시알킬, 알콕시알킬, 아실옥시알킬, 멀캅토알킬, (아미노, 모노 또는 디알킬아미노)알킬, 아실아미노알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 알킬-(티오, 설피닐 또는 설포닐)-알킬에서 선택되고;R ₂ is H, lower alkyl, mono or poly-haloalkyl, carboxyalkyl, aryl, heteroaryl, aralkyl, heteroaralkyl, biaryl, biarylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxyalkyl, acyloxyalkyl, mercapto Alkyl, (amino, mono or dialkylamino) alkyl, acylaminoalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, cycloalkylalkyl, heterocycloalkylalkyl, alkyl- (thio, sulfinyl or sulfonyl) -alkyl;

d. 저해제 Dd. Inhibitor D

e. 저해제 Ee. Inhibitor E

이때, R₁은 OH, 알콕실, 저가 알킬, 알킬아미노, 펩티드에서 선택되고,Wherein R ₁ is selected from OH, alkoxyl, lower alkyl, alkylamino, peptide,

X는 N, C에서 선택되고,X is selected from N, C,

R₅는 H, 저가 알킬, 카르복시알킬, (모노 또는 디알킬아미노)알킬, 알킬-(티오, 설피닐 또는 설포닐)알킬, 알콕시알킬아실알킬에서 선택된다.R ₅ is selected from H, lower alkyl, carboxyalkyl, (mono or dialkylamino) alkyl, alkyl- (thio, sulfinyl or sulfonyl) alkyl, alkoxyalkylacylalkyl.

본 발명은 상기 화합물의 제약학적 효과량과 제약학적 수용가능한 담체 또는 부형제로 구성된 제약학적 조성물에 관계한다. 이와 같은 조성물은 C-프로테나제 활성을 저해하여 콜라겐의 생산 및 성숙을 조절한다.The present invention relates to a pharmaceutical composition consisting of a pharmaceutically effective amount of the compound and a pharmaceutically acceptable carrier or excipient. Such compositions inhibit C-proteinase activity to regulate production and maturation of collagen.

본 발명은 C-프로테나제 활성을 변형, 저해, 조절하여 콜라겐의 비정상적인 생산과 연관된 질병을 치료하기 위한 상기 화합물 및 조성물을 이용하는 것에 관계한다.The present invention relates to the use of such compounds and compositions for modifying, inhibiting, and modulating C-proteinase activity to treat diseases associated with abnormal production of collagen.

좀더 구체적으로는 본 발명의 화합물은 류마티스 관절염, 공피증, 병적인 섬유증 또는 반흔을 포함하나 이에 국한되지 않는 질병을 치료하는 방법을 포함한다.More specifically, the compounds of the present invention include methods for treating diseases including but not limited to rheumatoid arthritis, scleroderma, pathological fibrosis or scars.

4. 정의4. Definition

"C-프로테나제"는 -Ala↓Asp-Asp- and/or -Gly↓Asp-Glu-를 통하여 절단함으로써 콜라겐 분자, 이의 유도체 또는 이의 단편 또는 이의 전구물질을 처리할 수 있는 효소를 말한다. 이 용어에는 사람 C-프로테나제와 C-프로테나제 활성을 가지는 이의 유도체, 유사체, 단편 및 변이체를 포함한다."C-proteinase" refers to an enzyme capable of treating collagen molecules, derivatives or fragments thereof, or precursors thereof by cleavage through -Ala ↓ Asp-Asp- and / or -Gly ↓ Asp-Glu-. The term includes human C-proteinases and derivatives, analogs, fragments and variants thereof having C-proteinase activity.

"제약학적 수용가능한 염"은 자유 산의 성질과 생물학적 효과를 가지고 수산화나트륨, 수산화마그네슘, 암모니아, 트리알킬아민, 디알킬아민, 모노알킬아민, 이염기아미노산, 아세테이트 나트륨, 벤조에이트 칼륨, 트리에탄올아민등과 같은 무기 또는 유기염기와 반응하여 수득할 수 있는 염을 말한다."Pharmaceutically acceptable salts" have the properties and biological effects of free acids, with sodium hydroxide, magnesium hydroxide, ammonia, trialkylamines, dialkylamines, monoalkylamines, dibasic amino acids, acetate sodium, benzoate potassium, triethanolamine It refers to a salt that can be obtained by reaction with an inorganic or organic base such as.

"알킬"은 직쇄, 분지쇄 및 고리 알킬기를 포함하는 포화 지방족 탄화수소를 말한다. 적절하게는 알킬기는 1 내지 12개 탄소를 가진다. 더욱 바람직하게는 1 내지 7개 탄소를 가지는 적절하게는 1 내지 4개 탄소를 가지는 저가 알킬이다. 일반적인 알킬기에는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 4차 부틸, 펜틸, 헥실 등을 포함한다. 알킬기는 치환되거나 치환 안될 수 있다. 치환된 기는 적절하게는 카르복실, 하이드록실, 멀캅토, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 할로, 알콕실, 알킬아미노가 된다."Alkyl" refers to saturated aliphatic hydrocarbons comprising straight, branched and cyclic alkyl groups. Suitably the alkyl group has 1 to 12 carbons. More preferably, it is a low cost alkyl having 1 to 7 carbons, suitably 1 to 4 carbons. Typical alkyl groups include methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, isobutyl, quaternary butyl, pentyl, hexyl and the like. Alkyl groups may be substituted or unsubstituted. Substituted groups are suitably carboxyl, hydroxyl, mercapto, cycloalkyl, heterocycloalkyl, halo, alkoxyl, alkylamino.

"아릴"은 공액된 pi 전자계를 가지는 적어도 하나의 고리를 가지는 방향족 기를 말하는데 여기에는 카르보사이클릭 아릴, 헤테로사이클릭 아릴 및 비아릴기를 포함하는데 이들 모두 선택적으로 치환될 수 있다. 적절하게는 아릴은 치환된 또는 치환 안된 페닐 또는 피리딜이다. 적절한 아릴 치환기는 페닐 또는 피리딜의 경우 할로겐, 트리할로메틸, 하이드록실, SH, NO₂, 아민, 이오에테르, 시아노, 알콕시등이 된다."Aryl" refers to an aromatic group having at least one ring having a conjugated pi electron system, which includes carbocyclic aryl, heterocyclic aryl, and biaryl groups, all of which may be optionally substituted. Suitably aryl is substituted or unsubstituted phenyl or pyridyl. Suitable aryl substituents are halogen, trihalomethyl, hydroxyl, SH, NO ₂ , amine, iether, cyano, alkoxy and the like for phenyl or pyridyl.

본원은 1996년 2월 14일자 출원된 "콜라겐 과다생산과 연관된 질환의 치료에 이용되는 C-프로테나제 저해물질"을 명칭으로 하는 미국 출원 08/601,203 의 연속출원이다. 그리고 이는 1995년 8월 8일자 출원된 미국 출원 60/002,038 의 연속출원이다.This application is a continuous application of US Application 08 / 601,203 filed February 14, 1996 entitled "C-Protease Inhibitors Used in the Treatment of Diseases Associated with Collagen Overproduction". And this is a serial application of US application 60 / 002,038, filed August 8, 1995.

1. 발명의 분야1. Field of Invention

콜라겐은 결합조직의 적정형성에 들어가는 것이다. 따라서, 콜라겐의 과다 또는 과소 생산 또는 비정상적인 콜라겐의 생산(잘못 처리된 콜라겐 포함)으로 인하여 여러 결합조직 질병 및 질환이 발생된다. C-프로테나제는 콜라겐의 적정 성숙에 기본적인 주요효소이고 따라서, 콜라겐 형성의 저해, 조절 또는 조정을 위한 이상적인 표적이 된다.Collagen enters the titration of connective tissue. Thus, many connective tissue diseases and disorders result from excessive or underproduction of collagen or abnormal production of collagen (including poorly treated collagen). C-proteinases are key enzymes essential for the proper maturation of collagen and thus are ideal targets for inhibition, regulation or modulation of collagen formation.

본 발명은 비정상적인 콜라겐 형성을 조절, 조정 또는 저해하기 위한 C-프로테나제 활성을 방해할 수 있는 유기분자에 관계한다. 좀더 구체적으로는, 본 발명은 부적절한 또는 제어 안된 콜라겐의 생산과 연관된 다양한 질병을 치료하기 위한 화합물과 제약학적 조성물의 이용에 관계한다.The present invention relates to organic molecules that can interfere with C-proteinase activity to modulate, modulate or inhibit abnormal collagen formation. More specifically, the present invention relates to the use of compounds and pharmaceutical compositions to treat various diseases associated with the production of inappropriate or uncontrolled collagen.

본 발명은 C-프로테나제 활성을 방해하여 콜라겐의 형성을 조절할 수 있는 화합물에 관계한다.The present invention relates to compounds capable of modulating the formation of collagen by interfering with C-proteinase activity.

더 구체적으로는, 본 발명은 섬유증 질환, 관절염 질환 또는 외과 술에 의해 유도된 또는 개시된 질환을 포함하는 다양한 결합 조직 질환을 치료하거나 또는 조정하는 치료방법으로 C-프로테나제 활성을 저해하는 화합물에 관계한다.More specifically, the present invention relates to a compound which inhibits C-proteinase activity in a method of treating or modulating various connective tissue diseases including fibrotic disease, arthritis disease or surgically induced or disclosed diseases. Related.

5.1. 화합물5.1. compound

본 발명은 일반적으로 다음의 화학식을 가지는 화합물과 이로 구성된 조성물에 관계한다.The present invention generally relates to compounds having the formula:

a. 저해제 Aa. Inhibitor A

이때, R₁은 H, 저가 알킬, 모노 또는 폴리-할로알킬, 카르복시알킬, 아릴, 헤테로아릴, 아랄킬, 할로 치환된 아랄킬, 헤테로아랄킬, 비아릴, 비아릴알킬, 하이드록시알킬, 알콕시알킬, 아실옥시알킬, 멀캅토알킬, (아미노, 모노 또는 디알킬아미노)알킬, 아실아미노알킬, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 사이클로알킬알킬, 헤테로사이클로알킬알킬, 알킬-(티오, 설피닐 또는 설포닐)-알킬에서 선택되고;Wherein R ₁ is H, lower alkyl, mono or poly-haloalkyl, carboxyalkyl, aryl, heteroaryl, aralkyl, halo-substituted aralkyl, heteroaralkyl, biaryl, biarylalkyl, hydroxyalkyl, alkoxy Alkyl, acyloxyalkyl, mercaptoalkyl, (amino, mono or dialkylamino) alkyl, acylaminoalkyl, cycloalkyl, heterocycloalkyl, cycloalkylalkyl, heterocycloalkylalkyl, alkyl- (thio, sulfinyl or sulf Phonyl) -alkyl;

X는 SO₂, C=O 에서 선택되고;X is selected from SO ₂ , C═O;

n은 0 또는 1이다;n is 0 or 1;

b. 저해물질 Bb. Inhibitor B

c. 저해제 Cc. Inhibitor C

d. 저해제 Dd. Inhibitor D

e. 저해제 Ee. Inhibitor E

X는 N, C에서 선택되고,X is selected from N, C,

R₅는 H, 저가 알킬, 카르복시알킬, (모노 또는 디알킬아미노)알킬, 알킬-(티오, 설피닐 또는 설포닐)알킬, 알콕시알킬아실알킬에서 선택된다;R ₅ is selected from H, lower alkyl, carboxyalkyl, (mono or dialkylamino) alkyl, alkyl- (thio, sulfinyl or sulfonyl) alkyl, alkoxyalkylacylalkyl;

본 발명의 구체예에서, 본 발명의 화합물은 다음과 같은 화학식을 가진다.In an embodiment of the invention, the compound of the present invention has the formula:

와 이의 제약학적 수용가능한 염.And pharmaceutically acceptable salts thereof.

또는or

와 이의 제약학적 수용가능한 염;And pharmaceutically acceptable salts thereof;

또는or

1 One

또는or

여기에서 언급하는 화학식은 토우토메리 현상을 나타낸다. 명세서내에 화학식은 가능한 토우토메리형중 하나만을 나타내기 때문에, 본 발명은 C-프로테나제 활성을 저해하여 콜라겐 생산 및 성숙을 조절할 수 있는 능력을 가지는 다른 토우토메리형도 포함한다는 것을 알아야 한다. 또한, 본 발명은 여기에서 상술하는 각 화합물의 모든 이성질체도 포함한다는 것을 알아야 한다.The chemical formula referred to here represents the phenomenon of totomary. Since the formulas in the specification represent only one of the possible totomeric forms, it is to be understood that the present invention also encompasses other totomeric forms that have the ability to inhibit C-proteinase activity to regulate collagen production and maturation. In addition, it should be understood that the present invention also encompasses all isomers of the respective compounds detailed herein.

상기 화합물과 이의 제약학적 수용가능한 염에 추가하여, 본 발명은 또한, C-프로테나제 활성을 저해하여 콜라겐의 생산 및 성숙을 조절, 저해 또는 변형시킬 수 있는 능력을 가지는 화합물의 용해된 형 또는 용해 안된 형(예를 들면, 수화형태)에 관계한다.In addition to the compounds and their pharmaceutically acceptable salts, the present invention also provides a dissolved form of a compound having the ability to inhibit C-proteinase activity to modulate, inhibit or modify the production and maturation of collagen, or It relates to the undissolved form (eg hydrated form).

전술한 화합물은 화학적으로 연관된 화합물의 준비에 이용하는 것으로 공지된 임의 공정에 의해 준비될 수 있다. 다음의 실시예에서 적정 공정을 설명한다. 필수적인 시발물질은 유기화학의 표준공정에 의해 수득할 수 있다.The aforementioned compounds may be prepared by any process known to be used for the preparation of chemically related compounds. The titration process is described in the following examples. Essential starting materials can be obtained by standard processes of organic chemistry.

C-프로테나제 활성에 영향을 주는 물질로써 각 화합물의 관련 활성 및 효과는 이용가능한 기술을 이용하여 결정한다. 적절하게는, 화합물은 콜라겐의 생산 및 숙성을 조절, 변형 및 저해하는 화합물의 능력을 결정하기 위한 일련의 선별과정을 겪게 된다. 이와 같은 선별은 생화학 검사, 세포 배양검사 및 동물모델을 포함한다.As the substances affecting C-proteinase activity, the related activities and effects of each compound are determined using the available techniques. Suitably, the compound undergoes a series of screening processes to determine the compound's ability to modulate, modify and inhibit the production and maturation of collagen. Such screening includes biochemistry, cell culture, and animal models.

공지의 기술에 따라 본 발명의 화합물이 합성될 수 있다. 청구된 발명의 화합물을 합성하고 테스트하는 방법을 제시한다.The compounds of the present invention can be synthesized according to known techniques. Provided are methods for synthesizing and testing the compounds of the claimed invention.

6.1. 실시예 1: 화합물 합성6.1. Example 1: Compound Synthesis

6.1.1. N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(4-클로로베닐)]아미노]-아세타미드의 합성.6.1.1. Synthesis of N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N'-(4-chlorobenyl)] amino] -acetamide.

FG047(저해물질 A)로 지정된 N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'(4-클로로벤질)]아미노]-아세타미드(5)(본 명세서에서 특정 화합물은 명명을 위해 "C#"로 언급하는데 "#"는 아라비아 숫자이다)을 합성하는 적절한 방법은 다음과 같다.N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N' (4-chlorobenzyl)] amino] -acetamide (5) designated FG047 (Inhibitor A) Certain compounds in the specification are referred to as "C #" for naming, where "#" is an Arabic numeral).

에틸-2[(4-클로로벤질)아미노]-아세테이트(3)의 합성.Synthesis of ethyl-2 [(4-chlorobenzyl) amino] -acetate (3).

무수 MeOH(10㎖)에 글리신 에틸 에스테르 염화수소(1)(1.00g, 7.16m㏖)와 4-클로로벤질알데히드(2)(1.00g, 7.16m㏖)의 냉각 용액에 무수 ZnCl₂고체(75㎎, 0.55m㏖)와 NaBCNH₃고체(0.45g, 7.16m㏖)를 첨가한다. 18시간동안 실온에서 교반한 후에, 반응 혼합물은 1N HCl(20㎖) 수용액으로 냉각시키고, 추가 30분간 교반시킨다. 혼합물은 MeOH 용매의 대부분을 제거하고 에테르(20㎖)로 추출하기 위해 회전 증발기에서 농축시킨다. 수용층은 얼음조에서 45%(w/w) KOH 수용액으로 pH 10으로 염기화시키고, EtOAc (2×50㎖)로 추출한다. 복합된 EtOAc 유기층은 염으로 세척하고, Na₂SO₄에서 건조하고 농축시킨다. 생성물은 실리카 겔 크로마토그래피(4/1 헥산/EtOAc)로 정제하여 오일형태의 에틸-2[(2-클로로벤질)아미노]-아세테이트(3)를 얻는다.Anhydrous ZnCl ₂ solid (75 mg) in a cooled solution of glycine ethyl ester hydrogen chloride (1) (1.00 g, 7.16 mmol) and 4-chlorobenzylaldehyde (2) (1.00 g, 7.16 mmol) in anhydrous MeOH (10 mL). , 0.55 mmol) and NaBCNH ₃ solid (0.45 g, 7.16 mmol) are added. After stirring for 18 hours at room temperature, the reaction mixture is cooled with 1N HCl (20 mL) aqueous solution and stirred for an additional 30 minutes. The mixture is concentrated in a rotary evaporator to remove most of the MeOH solvent and extract with ether (20 mL). The aqueous layer is basified to pH 10 with 45% (w / w) KOH aqueous solution in an ice bath and extracted with EtOAc (2 × 50 mL). The combined EtOAc organic layer is washed with salt, dried over Na ₂ SO ₄ and concentrated. The product is purified by silica gel chromatography (4/1 hexanes / EtOAc) to give ethyl-2 [(2-chlorobenzyl) amino] -acetate (3) in oil form.

에틸-2-[[N-(4-메톡시벤젠-설포닐)-N-(4-클로로벤질)]아미노]아세테이트(4)의 합성.Synthesis of ethyl-2-[[N- (4-methoxybenzene-sulfonyl) -N- (4-chlorobenzyl)] amino] acetate (4).

무수 CH₂Cl₂(7㎖)에 에틸-2[(4-클로로벤질)아미노]-아세테이트(3)(600㎎, 2.64m㏖)와 염화 p-메톡시벤젠설포닐(545㎎, 2.64m㏖) 용액에 트리에틸아민(294㎎, 2.90m㏖)을 적하시킨다. 혼합물은 실온에서 15시간동안 교반시키고, 1N HCl(20㎖) 용액으로 처리한다. 생성된 두가지 상을 분리하여, 수용층은 CH₂Cl₂로 추출한다. 복합된 유기층은 소금물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 농축시킨다. 생성물은 실리카 겔 크로마토그래피(3/1∼2/1 헥산/EtOAc)로 정제하여 오일형태의 에틸-2-[[N-(4-메톡시벤젠-설포닐)-N-(4-클로로벤질)]-아미노]아세테이트(4)를 얻는다.Ethyl-2 [(4-chlorobenzyl) amino] -acetate (3) (600 mg, 2.64 mmol) and p-methoxybenzenesulfonyl chloride (545 mg, 2.64 m) in anhydrous CH ₂ Cl ₂ (7 mL). Mol) triethylamine (294 mg, 2.90 mmol) was added dropwise to the solution. The mixture is stirred at rt for 15 h and treated with 1N HCl (20 mL) solution. The two phases produced are separated and the aqueous layer is extracted with CH ₂ Cl ₂ . The combined organic layers are washed with brine, dried over MgSO ₄ and concentrated. The product was purified by silica gel chromatography (3/1 to 2/1 hexanes / EtOAc) to give ethyl-2-[[N- (4-methoxybenzene-sulfonyl) -N- (4-chlorobenzyl) in oil form. )]-Amino] acetate (4) is obtained.

N-하이드록시-2[[N'-(4-메톡시-벤젠설포닐)-N'(4-클로로벤질)]아미노]-아세타아미드(5)의 합성.Synthesis of N-hydroxy-2 [[N '-(4-methoxy-benzenesulfonyl) -N' (4-chlorobenzyl)] amino] -acetaamide (5).

MeOH(1.3㎖)에 염화수소 하이드록시아민(171㎎, 2.46m㏖)과 MeOH(1.3㎖)에 KOH(207㎎, 3.69m㏖)의 별도 용액을 끓는 점에서 준비하고, 40℃로 냉각시키고 후자용액을 전자용액에 추가한다. 30분간 반응혼합물을 얼음조에서 냉각시킨 후에 염화 칼슘 고체를 여과로 제거한다. 여과물에 에틸 에스테르(4)(487㎎, 1.23m㏖)를 첨가한다. 6시간동안 실온에서 교반시킨 후에, 반응 혼합물은 1N HCl(20㎖) 용액으로 처리하고, CH₂Cl₂로 추출한다. 유기층은 소금물로 세척하고, MgSO₄상에서 건조시키고, 농축시켜 생성물을 얻는다. 잔유물은 에테르로 연화시키고, 흰색 고체를 수득하여, 하이드록사메이트 즉 FG-047로 지정한 N-하이드록시-2[[N'-(4-메톡시-벤젠설포닐)-N'(4-클로로벤질)]-아미노]-아세타미드(5)를 얻는다.A separate solution of hydrogen chloride hydroxyamine (171 mg, 2.46 mmol) in MeOH (1.3 mL) and KOH (207 mg, 3.69 mmol) in MeOH (1.3 mL) was prepared at boiling point, cooled to 40 ° C. and the latter Add the solution to the electronic solution. After cooling the reaction mixture in an ice bath for 30 minutes, the calcium chloride solid is removed by filtration. To the filtrate is added ethyl ester (4) (487 mg, 1.23 mmol). After stirring for 6 hours at room temperature, the reaction mixture is treated with 1N HCl (20 mL) solution and extracted with CH ₂ Cl ₂ . The organic layer is washed with brine, dried over MgSO ₄ and concentrated to give the product. The residue was triturated with ether and a white solid was obtained which gave N-hydroxy-2 [[N '-(4-methoxy-benzenesulfonyl) -N' (4-chloro designated as hydroxyxamate or FG-047). Benzyl)]-amino] -acetamide (5).

mp: 124-125℃; MS(ES)(M+H)⁺:385; 1H NMR(360 MHz, DMSO-d6)δ 10.47(s, 1H, OH), 8.81(s, 1H, NH), 7.81-7.08(m, 8H, Ph), 4.34(s, 2H, CH₂CO), 3.85(s, 3H, OMe), 3.63(s, 2H, CH₂Ph).mp: 124-125 ° C .; MS (ES) (M + H) ⁺ : 385; 1 H NMR (360 MHz, DMSO-d 6) δ 10.47 (s, 1H, OH), 8.81 (s, 1H, NH), 7.81-7.08 (m, 8H, Ph), 4.34 (s, 2H, CH ₂ CO) , 3.85 (s, 3H, OMe), 3.63 (s, 2H, CH ₂ Ph).

6.1.2. N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(4-플로로벤질)]아미노]-아세타미드의 합성.6.1.2. Synthesis of N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N'-(4-fluorobenzyl)] amino] -acetamide.

FG053(저해제 A)으로 지정한 N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(4-플로로벤질)]아미노]-아세타미드(6)를 합성하는 적절한 방법은 시발물질로 4-클로로벤즈알데히드 대시에 4-플로로벤즈알데히드를 이용하여 N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'(4-클로로벤질)]아미노]-아세타미드의 합성에서 상술된 것과 기본적으로 동일하다(단락 6.1.1).N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N'-(4-fluorobenzyl)] amino] -acetamide (6) designated as FG053 (Inhibitor A) A suitable method of synthesis is N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N' (4-chloro using 4-chlorobenzaldehyde dash in 4-chlorobenzaldehyde dash as starting material. Benzyl)] amino] -acetamide is essentially identical to that described above (paragraph 6.1.1).

MS(ES)(M-1):367;¹H NMR (360 MHz, DMSO-d6)δ 10.45(s, 1H, OH), 8.83(s, 1H, NH), 7.81-7.08(m, 8H, Ph), 4.33(s, 2H, CH₂CO), 3.85(s, 3H, OMe), 3.62(s, 2H, CH₂Ph).MS (ES) (M-1): 367; ¹ H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 10.45 (s, 1H, OH), 8.83 (s, 1H, NH), 7.81-7.08 (m, 8H, Ph), 4.33 (s, 2H, CH ₂ CO ), 3.85 (s, 3H, OMe), 3.62 (s, 2H, CH ₂ Ph).

6.1.3. 하이드록사메이트의 합성.6.1.3. Synthesis of Hydroxamate.

하이드록사메이트(11)(저해제 B)를 합성하는 적절한 방법은 다음과 같다.Suitable methods for synthesizing the hydroxamate 11 (inhibitor B) are as follows.

3차 부틸 브로모아세테이트와 말론 에스테르(7)의 알킬화반응에 의해 테트라에스테르(8)를 제공한다. 비누화반응과 데카복실화반응시에, 생성된 보조제(9)는 펩티드 결합 반응을 이용하여 Glu (OBn) NHMe와 결합시켜 화합물(10)을 얻는다. 연속적인 가수분해 후에, 무수물 형성과 NH₂OH의 추가에 의해 화합물(10)은 소요의 하이드록사메이트(11)로 전환된다.Tetraester (8) is provided by alkylation of tertiary butyl bromoacetate with malon ester (7). In the saponification and decarboxylation reactions, the resulting adjuvant (9) is combined with Glu (OBn) NHMe using a peptide binding reaction to obtain compound (10). After successive hydrolysis, compound 10 is converted to the desired hydroxamate 11 by anhydride formation and addition of NH ₂ OH.

6.1.4. N-카르복시메틸 이가펩티드의 합성.6.1.4. Synthesis of N-carboxymethyl digapeptide.

FG057(저해제 D)로 지정된 N-카르복시메틸 이가펩티드(16)를 합성하는 적절한 방법은 다음과 같다.A suitable method of synthesizing the N-carboxymethyl divalent peptide 16 designated as FG057 (inhibitor D) is as follows.

문헌에 있는 과정에 따라 이용할 수 있는 블럭화합물(12)과 (13)는 전통적인 DCC/HOBt 방법에 의해 결합시켜 이가펩티드(14)를 수득률 78%로 얻는다. TFA/CH₂Cl₂를 이용한 화합물(14)의 탈보호와 NMM 존재하에 벤질 브로모아세테이트와 알킬화반응에 의해 N-카르복시메틸 이가펩티드(15)를 형성하게 되고, 이는 촉매에 의한 수소화반응에 의해 자유산(16)으로 전환된다.Block compounds (12) and (13), which can be used according to the procedures in the literature, are combined by the conventional DCC / HOBt method to obtain the divalent peptide (14) with a yield of 78%. Deprotection of compound (14) with TFA / CH ₂ Cl ₂ and alkylation with benzyl bromoacetate in the presence of NMM result in the formation of N-carboxymethyl divalent peptide (15), which is catalyzed by hydrogenation with a catalyst. The free acid 16 is converted.

본 기술에 공지된 방법을 이용하여 Boc-Glu (OBn)OH와 Boc-Asp(OBn)OH가 합성되었다.Boc-Glu (OBn) OH and Boc-Asp (OBn) OH were synthesized using methods known in the art.

Boc-Glu(OBn)NHMe(13)의 합성.Synthesis of Boc-Glu (OBn) NHMe (13).

무수 THF(100㎖)에 Boc-Glu(OBn)OH(6.7g, 20m㏖) 용액에 트리에틸아민(2.0g, 20m㏖)을 추가한다. 용액은 아르곤하에서 -78℃로 냉각시키고, 에틸 클로로포르메이트(2.2g, 20m㏖)를 한 방울씩 넣는다. 반응 혼합물은 2시간이상 -30℃로 온도를 올리고, 40% 메틸 아민 수용액(22m㏖)을 추가하고, 반응 혼합물은 실온으로 만든다. 반응물은 4시간 추가 교반시킨 후에 디에틸 에테르(50㎖)와 물(70㎖)을 추가한다. 유기층은 분리시키고, 1M NaHCO₃, 10% 시트르산, 포화 NaCl 용액으로 세척하고, MgSO₄에서 건조시킨다. 용매는 진공에서 기화시켜 흰색 고체를 얻는다(5.0g, 72% 수득률).Triethylamine (2.0 g, 20 mmol) is added to a solution of Boc-Glu (OBn) OH (6.7 g, 20 mmol) in anhydrous THF (100 mL). The solution is cooled to −78 ° C. under argon, and dropwise with ethyl chloroformate (2.2 g, 20 mmol). The reaction mixture is raised to −30 ° C. for at least 2 hours, 40% aqueous methyl amine solution (22 mmol) is added, and the reaction mixture is brought to room temperature. The reaction was stirred for an additional 4 hours before adding diethyl ether (50 mL) and water (70 mL). The organic layer is separated, washed with 1M NaHCO ₃ , 10% citric acid, saturated NaCl solution and dried over MgSO ₄ . The solvent is evaporated in vacuo to give a white solid (5.0 g, 72% yield).

¹H-NMR (200 MHz, CDCl₃):δ 1.38(s, 9H, CH₃); 1.85-2.59(m, 4H, CH₂); 2.75(d, 3H, NCH₃); 4.17(m, 1H, CH); 5.08(δ, 2H, OCH₂); 5.33(bδ, 1H, NH); 6.30(bs, 1H, NH); 7.31(s, 5H, Ph-H). ¹ H-NMR (200 MHz, CDCl ₃ ): δ 1.38 (s, 9H, CH ₃ ); 1.85-2.59 (m, 4H, CH ₂ ); 2.75 (d, 3H, NCH ₃ ); 4.17 (m, 1 H, CH); 5.08 (δ, 2H, OCH ₂ ); 5.33 (bδ, 1 H, NH); 6.30 (bs, 1 H, NH); 7.31 (s, 5 H, Ph-H).

Boc-Asp(OBn)-Glu(OBn)NHMe(14)의 합성.Synthesis of Boc-Asp (OBn) -Glu (OBn) NHMe (14).

10㎖ CH₂Cl₂에 3차-부톡시카르보닐 아미노에스테르(13)(700㎎, 2m㏖) 용액에 1.5㎖ TFA를 첨가하고, 반응 혼합물은 아르곤하에서 실온에서 1시간 교반시킨다. 초과 산은 진공에서 기화시키고, 잔류물은 디에틸에테르로 여러 차례 처리하여 감압하에서 농축시켜 무색오일을 얻고 이는 추가 정제하지 않는다. TFA-염, Boc-Asp (OBn)OH (446㎎, 2m㏖), HOBt(170㎎, 2m㏖)와 NMM(202㎎, 2m㏖)/CH₂Cl₂(10㎖)을 첨가하고, 반응물은 실온에서 12시간 아르곤기체하에 교반시킨다. 디사이클로우레아 침전물은 여과에 의해 제거하고, 여과물은 감압하에서 농축시킨다. 잔유물은 EtOAc(30㎖)로 희석하고, 다시 여과하고, 1M NaHCO₂, 10% 시트르산, 포화된 NaCl 용액으로 세척한다. 유기층은 MgSO₄에서 건조시키고, 진공하에서 농축시키고, 흰색고체(78% 수득률 867㎎)를 얻는다.1.5 ml TFA is added to a tert-butoxycarbonyl aminoester (13) (700 mg, 2 mmol) solution in 10 ml CH ₂ Cl ₂ , and the reaction mixture is stirred at room temperature under argon for 1 hour. The excess acid is evaporated in vacuo and the residue is treated several times with diethyl ether and concentrated under reduced pressure to give a colorless oil which is not further purified. TFA-salt, Boc-Asp (OBn) OH (446 mg, 2 mmol), HOBt (170 mg, 2 mmol) and NMM (202 mg, ₂ mmol) / CH ₂ Cl ₂ (10 mL) were added and the reaction Is stirred under argon gas for 12 hours at room temperature. The dicyclourea precipitate is removed by filtration and the filtrate is concentrated under reduced pressure. The residue is diluted with EtOAc (30 mL), filtered again and washed with 1M NaHCO ₂ , 10% citric acid, saturated NaCl solution. The organic layer is dried over MgSO ₄ , concentrated in vacuo and a white solid (78% yield 867 mg) is obtained.

¹H-NMR (200 MHz, CDCl₃):δ 1.41(s, 9H, CH₃); 1.85-3.05(m, 9H, 3CH₂, NCH₃); 4.40(m, 2H, CH); 5.01(m, 4H, OCH₂); 5.53(d, 1H, NH); 6.48(bs, 1H, NH); 7.15-7.38(m, 10H, Ph-H). ¹ H-NMR (200 MHz, CDCl ₃ ): δ 1.41 (s, 9H, CH ₃ ); 1.85-3.05 (m, 9H, 3CH ₂ , NCH ₃ ); 4.40 (m, 2 H, CH); 5.01 (m, 4H, OCH ₂ ); 5.53 (d, 1 H, NH); 6.48 (bs, 1 H, NH); 7.15-7.38 (m, 10H, Ph-H).

N-카르복시메틸-이가펩티드(15)의 합성.Synthesis of N-carboxymethyl-dipeptide (15).

10㎖ CH₂Cl₂에 Boc-Asp(OBn)-Glu(OBn)NHMe(14)(555㎎, 1m㏖) 용액에 1㎖ TFA를 첨가하고, 반응 혼합물은 아르곤하에서 실온에서 1시간 교반시킨다. 초과 산은 진공에서 기화시키고, 잔류물은 디에틸 에테르로 여러 차례 처리하여 감압하에서 농축시켜 무색오일을 얻고 이는 무수 THF(20㎖)에 용해시킨다. 이 용액에 NMM(101㎎, 1m㏖)와 벤질 브로모아세테이트(230㎎, 1m㏖)를 첨가하고, 반응물은 실온에서 12시간 아르곤기체하에 교반시킨다. 반응물은 감압하에서 농축시킨다. 잔유물은 EtOAc(20㎖)로 희석하고, 다시 여과하고, 1M NaHCO₂, 10% 시트르산, 포화된 NaCl 용액으로 세척한다. 유기층은 MgSO₄에서 건조시키고, 농축시키고, 실리카겔에서 순간 크로마토그래피(에틸아세테이트/MeOH 10:1)하여 흰색 고체 화합물(15)(410㎎) 수득률 88%를 얻는다.1 ml TFA is added to a solution of Boc-Asp (OBn) -Glu (OBn) NHMe (14) (555 mg, 1 mmol) in 10 ml CH ₂ Cl ₂ and the reaction mixture is stirred at room temperature under argon for 1 hour. The excess acid is evaporated in vacuo and the residue is treated several times with diethyl ether and concentrated under reduced pressure to give a colorless oil which is dissolved in anhydrous THF (20 mL). NMM (101 mg, 1 mmol) and benzyl bromoacetate (230 mg, 1 mmol) are added to this solution, and the reaction is stirred under argon gas for 12 hours at room temperature. The reaction is concentrated under reduced pressure. The residue is diluted with EtOAc (20 mL), filtered again and washed with 1M NaHCO ₂ , 10% citric acid, saturated NaCl solution. The organic layer was dried over MgSO ₄ , concentrated, and chromatographed on silica gel (ethyl acetate / MeOH 10: 1) to yield 88% of a white solid compound (15) (410 mg).

¹H-NMR (200 MHz, CDCl₃):δ1.83-2.95(m, 9H, 3CH₂, NCH₃); 3.30-3.60(m, 4H, CH & N CH₂); 4.39(m, 2H, CH); 5.05(m, 6H, OCH₂); 6.64(bs, 1H, NH); 7.29-(m, 15H, Ph-H). 8.02(bs. -1H, NH);¹³C-NMR (60 MHz, CDCl₃);δ 26.17, 27.24, 30.59, 36.57 (3CH₂, NCH₃); 49.59 (NCH₂); 52.54, 59.07(2CH); 66.46, 66.71, 66.86(3OCH); 128.17, 128.26, 128.34, 128.55, 128.80, 135.27, 135.44, 135.79(Ph-C); 171.25, 171.34, 172.01, 172,61, 173.05 (5C=O). ¹ H-NMR (200 MHz, CDCl ₃ ): δ 1.83-2.95 (m, 9H, 3CH ₂ , NCH ₃ ); 3.30-3.60 (m, 4H, CH & N CH ₂ ); 4.39 (m, 2 H, CH); 5.05 (m, 6H, OCH ₂ ); 6.64 (bs, 1 H, NH); 7.29- (m, 15H, Ph-H). 8.02 (bs.-1 H, NH); ¹³ C-NMR (60 MHz, CDCl ₃ ); δ 26.17, 27.24, 30.59, 36.57 (3CH ₂ , NCH ₃ ); 49.59 (NCH ₂ ); 52.54, 59.07 (2CH); 66.46, 66.71, 66.86 (3OCH); 128.17, 128.26, 128.34, 128.55, 128.80, 135.27, 135.44, 135.79 (Ph-C); 171.25, 171.34, 172.01, 172,61, 173.05 (5C = O).

N-카르복시메틸-Asp-Glu-NMe(16)의 합성.Synthesis of N-carboxymethyl-Asp-Glu-NMe (16).

메탄올(5㎖)에 벤질-보호된 N-카르복시메틸 이가펩티드(15)(68㎎, 0.113m㏖) 용액에 Pd/C 분말(50㎎)을 일부분에 첨가한다. 혼합물은 20시간동안 실온에서 H₂대기(기구압)하에 교반시킨다. 촉매는 셀라이트 패드를 통하여 여과시키고, 메탄올로 헹구어낸다. 여과물은 농축시키고, 고체는 -20℃에서 EtOAc/MeOH로부터 재혈정시켜, 생성물 N-카르복시메틸-Asp-Glu-NMe(16)(23㎎, 0.065m㏖)(흰색고체, 58% 수득률)를 얻는다.To a portion of the benzyl-protected N-carboxymethyl dipeptide (15) (68 mg, 0.113 mmol) in methanol (5 mL) was added Pd / C powder (50 mg) in portions. The mixture is stirred for 20 hours at room temperature under H ₂ atmosphere (gut pressure). The catalyst is filtered through a pad of celite and rinsed with methanol. The filtrate was concentrated and the solid was re-blooded from EtOAc / MeOH at −20 ° C. to give the product N-carboxymethyl-Asp-Glu-NMe (16) (23 mg, 0.065 mmol) (white solid, 58% yield). Get

mp: 147-149℃; NMR (360 MHz, DMSO-d6)δ8.19(d, J=8.5Hz, 1H), 7.72(m, 1H), 4.20(m, 1H), 3.45-3.20(m, 4H), 2.63-2.44(m, 5H), 2.20(m, 2H), 1.93(m, 1H), 1.72(m, 1H).mp: 147-149 ° C .; NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ8.19 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.72 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 3.45-3.20 (m, 4H), 2.63-2.44 ( m, 5H), 2.20 (m, 2H), 1.93 (m, 1H), 1.72 (m, 1H).

6.1.5. 멀캅토 화합물의 합성.6.1.5. Synthesis of Mercapto Compounds.

FG-074(저해물질 C)로 지정된 멀캅토 화합물(22)을 합성하는 적정방법은 다음과 같다.The titration method for synthesizing the mercapto compound (22) designated as FG-074 (inhibitor C) is as follows.

3차-부틸 브로모아세테이트와 디에틸 인산염(17)을 NaH하에서 알킬화시켜 90% 수득률의 인산염(18)을 얻는다. 화합물(18)을 염기로 K₂CO₃를 이용하여 포름알데히드와 Horner-Emmons 반응시켜 불포화 에스테르(19)를 형성하게 된다. LIOH와 화합물(19)을 비누화반응시키고, 티오아세트산의 Michael 첨가하여 산(20)을 얻는다. DCC/HOBt 방법을 이용하여 산(20)과 Glu(OBn)NHMe의 결합하여 순간 크로마토그래피에 의해 이성질체 혼합물인 이가펩티드(21)를 얻는다. CH₂Cl₂에서 TFA로 이가펩티드(21)의 탈보호에 의해 1가 산(22)을 얻는다.Tert-butyl bromoacetate and diethyl phosphate (17) are alkylated under NaH to give 90% yield of phosphate (18). Compound (18) is reacted with formaldehyde and Horner-Emmons using K ₂ CO ₃ as a base to form unsaturated ester (19). The saponification reaction between LIOH and compound (19) is carried out and Michael is added to obtain acid (20). The acid (20) is combined with Glu (OBn) NHMe using the DCC / HOBt method to give an isomeric mixture (ipeptide 21) by flash chromatography. Monovalent acid 22 is obtained by deprotection of divalent peptide 21 with TFA in CH ₂ Cl ₂ .

1-에틸-2-디에틸포스포노-숙신산-4-3차-부틸에스테르(18)의 합성.Synthesis of 1-ethyl-2-diethylphosphono-succinic acid-4-tert-butyl ester (18).

무수 THF(80㎖)에 NaH(0.48g, 20m㏖) 현탁액에 THF(20㎖)에 트리에틸 포스포노아세테이트(4.48g, 20m㏖) 용액을 적하시키고, 실온에서 3시간 후에 THF(20㎖)에 3차-부틸 브로모아세테이트를 적하시킨다. 생성된 현탁액은 실온에서 3시간 교반시키고, 물(50㎖)을 추가시키고, 반응혼합물은 1M HCl을 이용하여 pH 3으로 산성화시킨다. 디에틸에테르(70㎖) 추가 후에, 유기층을 분리시키고, 포화 NaCl 용액으로 세척하고, MgSO₄에 건조시키고 용매는 진공에서 기화시켜 무색오일(90% 수득률)을 얻는다.To anhydrous THF (80 mL) was added dropwise a triethyl phosphonoacetate (4.48 g, 20 mmol) solution to THF (20 mL) in a suspension of NaH (0.48 g, 20 mmol), and THF (20 mL) after 3 hours at room temperature. Tert-butyl bromoacetate is added dropwise. The resulting suspension is stirred for 3 hours at room temperature, water (50 mL) is added and the reaction mixture is acidified to pH 3 with 1M HCl. After addition of diethyl ether (70 mL), the organic layer is separated, washed with saturated NaCl solution, dried over MgSO ₄ and the solvent is evaporated in vacuo to give a colorless oil (90% yield).

1-에틸-2-메틸렌-숙신산-4-3차-부틸 에스테르(19)의 합성.Synthesis of 1-ethyl-2-methylene-succinic acid-4-tert-butyl ester (19).

3시간동안 화합물(18)(5.4g, 16m㏖), K₂CO₃(6.9g, 50m㏖), 포름알데히드(3.2g, 10m㏖) 30% 수용액 혼합물을 재환류시킨다. 냉각 후에, 혼합물은 헥산으로 추출시키고, 유기층은 물과 소금물로 세척하고, MgSO₄에서 건조시킨다. 여과와 진공하에 기화시킨 후에, 오일 잔유물을 수득한다(수득률 80%, 2.7g).The mixture (18) (5.4 g, 16 mmol), K ₂ CO ₃ (6.9 g, 50 mmol) and formaldehyde (3.2 g, 10 mmol) 30% aqueous solution mixture is refluxed for 3 hours. After cooling, the mixture is extracted with hexane and the organic layer is washed with water and brine and dried over MgSO ₄ . After evaporation under filtration and vacuum, an oil residue is obtained (yield 80%, 2.7 g).

¹H-NMR (200 MHz, CDCl₃):δ1.29(t, J = 7 Hz, 3H, CH₂); 1.43(s, 9H, CH₃); 3.24(s, 2H, CH₂); 4.20(q, J = Hz, 2H, OCH₂); 5.63, 6.28(s, 2H, =CH₂). ¹ H-NMR (200 MHz, CDCl ₃ ): δ 1.29 (t, J = 7 Hz, 3H, CH ₂ ); 1.43 (s, 9 H, CH ₃ ); 3.24 (s, 2 H, CH ₂ ); 4.20 (q, J = Hz, 2H, OCH ₂ ); 5.63, 6.28 (s, 2H, = CH ₂ ).

2-아세틸설파닐메틸-숙신산-4-3차-부틸 에스테르(20)의 합성.Synthesis of 2-acetylsulfanylmethyl-succinic acid-4-tert-butyl ester (20).

불포화된 에스테르(19)(2.3g, 11m㏖)는 THF(50㎖)에 용해시키고, 0℃에서 LIOH(264㎎, 11m㏖) 0.2M 수용액을 추가한다. 혼합물은 실온으로 만들고 추가 3시간 교반시킨다. 유기용매는 기화시키고, 수용층은 디에틸 에테르(30㎖)로 추출한다. 수용층은 1M HCl를 사용하여 pH 3으로 산성화시키고, EtOAc로 추출한다. 유기층은 물과 소금물로 세척하고, MgSO₄에서 건조시킨다. 여과와 용매의 기화 후에 흰색고체의 산이 수득된다(수득률 60%).Unsaturated ester 19 (2.3 g, 11 mmol) is dissolved in THF (50 mL) and 0.2 M aqueous solution of LIOH (264 mg, 11 mmol) is added at 0 ° C. The mixture is brought to room temperature and stirred for an additional 3 hours. The organic solvent is evaporated and the aqueous layer is extracted with diethyl ether (30 mL). The aqueous layer is acidified to pH 3 with 1M HCl and extracted with EtOAc. The organic layer is washed with water and brine and dried over MgSO ₄ . After filtration and evaporation of the solvent, a white solid acid is obtained (yield 60%).

¹H-NMR (200 MHz, CDCl₃);δ1.44(s, 9H, CH₃); 3.26(s, 2H, CH₂); 5.78, 6.42(s, 2H, =CH₂); 10.01(bs, 1H, COOH). ¹ H-NMR (200 MHz, CDCl ₃ ); δ 1.44 (s, 9H, CH ₃ ); 3.26 (s, 2 H, CH ₂ ); 5.78, 6.42 (s, 2H, = CH ₂ ); 10.01 (bs, 1 H, COOH).

산(1.0g, 5.4m㏖)을 CHCl₃에 용해시키고, 티오아세트산(1.45g, 19m㏖)을 첨가한다. 혼합물은 49시간동안 60℃에서 교반시킨다. 용매는 진공에서 기화시키고, 화합물(20)은 무색오일로 수득된다.Acid (1.0 g, 5.4 mmol) is dissolved in CHCl ₃ and thioacetic acid (1.45 g, 19 mmol) is added. The mixture is stirred at 60 ° C. for 49 h. The solvent is evaporated in vacuo and compound (20) is obtained as a colorless oil.

¹H-NMR (200 MHz, CDCl₃);δ1.44(s, 9H, CH₃); 2.34(s, 3H, CH₃); 2.45-2.75(m, 2H, CH₂); 2.96-3.33(m, 3H, CH₂, CH); 9.74(bs, 1H, COOH). ¹ H-NMR (200 MHz, CDCl ₃ ); δ 1.44 (s, 9H, CH ₃ ); 2.34 (s, 3 H, CH ₃ ); 2.45-2.75 (m, 2H, CH ₂ ); 2.96-3.33 (m, 3H, CH ₂ , CH); 9.74 (bs, 1 H, COOH).

3-아세틸티오메틸-4-옥소-5-아자-6-(R)-메틸카르바모일-8-벤질옥시카르보닐-옥탄산, 3차-부틸 에스테르(21)의 합성.Synthesis of 3-acetylthiomethyl-4-oxo-5-aza-6- (R) -methylcarbamoyl-8-benzyloxycarbonyl-octanoic acid, tert-butyl ester (21).

10㎖ CH₂Cl₂에 3차-부톡시카르보닐 아미노 에스테르(13)(700㎎, 2m㏖) 용액에 1㎖ TFA를 추가하고, 반응혼합물은 아르곤하에서 실온에서 1시간 교반시킨다. 초과산은 진공하에서 기화시키고, 잔유물은 디에틸에테르(15㎖)로 수차례 처리하고, 감압하에서 농축시켜 무색오일을 수득하는데 이는 추가 정제없이 이용할 수 있다. CH₂Cl₂(40㎖)에 TFA-염, 산(20)(525㎎, 2m㏖), HOBt(170㎎, 2m㏖)과 NMM(202㎎, 2m㏖)을 용해시킨다. CH₂CH₂(10㎖)에 DCC(412㎎, 2m㏖) 용액을 첨가하고, 반응물은 아르곤하에서 실온에서 12시간 교반시킨다. 디사이클로헥실우레아 침전물은 여과에 의해 제거하고, 여과물은 감압하에서 농축시킨다. 잔류물은 EtOAc(30㎖)로 희석시키고, 다시 여과시키고 1M NaHCO₃, 10% 시트르산 과 포화 NaCl 용액으로 씻어낸다. 유기층은 MgSO₄에서 건조시키고, 진공하에서 농축시켜 무색 오일(21)을 얻는데 이는 용출제로써 EtOAc를 이용하여 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제한다. 이성체 혼합물로서의 수득률은 72%(710㎎)이다.¹H-NMR(200 MHz, CDCl₃);δ1.36, 1.39(2s, 9H, CH₃); 1.87-3.2(m, 14H, 4CH₃, CH₃, NCH₃); 4.40(m, 2H, CH); 5.08, 5.11(2s, 2H, OCH₂); 6.43, 6.76, 7.07(bs, -2H, NH); 6.76(2d, 1H, NH); 7.31(m, 15H, Ph-H).To a solution of tert-butoxycarbonyl amino ester (13) (700 mg, 2 mmol) in 10 mL CH ₂ Cl ₂ was added 1 mL TFA, and the reaction mixture was stirred at room temperature under argon for 1 hour. The excess acid is evaporated under vacuum, the residue is treated several times with diethyl ether (15 mL) and concentrated under reduced pressure to give a colorless oil which can be used without further purification. TFA-salt, acid (20) (525 mg, 2 mmol), HOBt (170 mg, 2 mmol) and NMM (202 mg, 2 mmol) are dissolved in CH ₂ Cl ₂ (40 mL). To the CH ₂ CH ₂ (10 mL) was added a DCC (412 mg, 2 mmol) solution and the reaction was stirred for 12 h at room temperature under argon. The dicyclohexylurea precipitate is removed by filtration and the filtrate is concentrated under reduced pressure. The residue is diluted with EtOAc (30 mL), filtered again and washed with 1M NaHCO ₃ , 10% citric acid and saturated NaCl solution. The organic layer is dried over MgSO ₄ and concentrated in vacuo to give a colorless oil (21) which is purified by silica gel chromatography using EtOAc as eluent. Yield as an isomer mixture is 72% (710 mg). ¹ H-NMR (200 MHz, CDCl ₃ ); δ 1.36, 1.39 (2s, 9H, CH ₃ ); 1.87-3.2 (m, 14H, 4CH ₃ , CH ₃ , NCH ₃ ); 4.40 (m, 2 H, CH); 5.08, 5.11 (2s, 2H, OCH ₂ ); 6.43, 6.76, 7.07 (bs, -2H, NH); 6.76 (2d, 1 H, NH); 7.31 (m, 15 H, Ph-H).

3-티오메틸-4-옥소-5-아자-6-(R)-메틸카르바모일-8-카르복시-옥타노산(22) (FG 074)의 합성.Synthesis of 3-thiomethyl-4-oxo-5-aza-6- (R) -methylcarbamoyl-8-carboxy-octanoic acid (22) (FG 074).

15㎖ CH₂Cl₂에 3차-부톡시카르보닐 아미노 에스테르(21)(495㎎, 1m㏖) 용액에 TFA(1.5㎖)을 첨가하고, 반응 혼합물은 아르곤 기체하에 실온에서 1시간동안 교반시킨다. 용매와 초과량의 산은 진공하에서 기화시키고 잔유물은 디에틸 에테르(10㎖)로 수차례 처리하고 감압하에서 농축시켜 무색 오일을 얻는데 이는 실리카겔(에틸 아세테이트/MeOH 10:1; 1% 아세트산 포함)에서 순간 크로마토그래피에 의해 정제하여 흰색고체인 중간 생성물을 얻는다(84% 수득률 370㎎).TFA (1.5 mL) was added to a tert-butoxycarbonyl amino ester (21) (495 mg, 1 mmol) solution in 15 mL CH ₂ Cl ₂ , and the reaction mixture was stirred for 1 h at room temperature under argon gas. . The solvent and excess acid are evaporated under vacuum, the residue is treated several times with diethyl ether (10 ml) and concentrated under reduced pressure to give a colorless oil which is instantaneous in silica gel (ethyl acetate / MeOH 10: 1; with 1% acetic acid) Purification by chromatography yields the intermediate product, a white solid (84% yield 370 mg).

실온에서 1㎖(1.5/1) 메탄올/H₂O에서 중간 생성물(30㎎, 0.07m㏖) 용액에 LiOH·H₂O(12㎎, 0.27m㏖)을 첨가한다. 실온에서 3시간 동안 교반시킨 후에 반응 혼합물은 0.5㎖ 1N NaOH 수용액으로 냉각시키고 EtOAc(2×10㎖)로 추출한다. 복합 유기층은 소금물로 씻어내고, MgSO₄에서 건조시키고, 농축시켜 검 고체(19㎎, 0.06m㏖)의 티오 화합물(22)을 수득한다(수득률 86%).To a solution of intermediate (30 mg, 0.07 mmol) in 1 mL (1.5 / 1) methanol / H ₂ O at room temperature is added LiOH.H ₂ O (12 mg, 0.27 mmol). After stirring for 3 hours at room temperature the reaction mixture is cooled with 0.5 mL 1N NaOH aqueous solution and extracted with EtOAc (2 × 10 mL). The combined organic layer was washed with brine, dried over MgSO ₄ and concentrated to give thio compound (22) as a gum solid (19 mg, 0.06 mmol) (yield 86%).

MS (ES) (M + H)⁺: 307MS (ES) (M + H) ⁺ : 307

6.1.6. 2-[[N-(4-메톡시벤젠설포닐)-N-(4-클로로벤질)]아미노]아세트산의 합성.6.1.6. Synthesis of 2-[[N- (4-methoxybenzenesulfonyl) -N- (4-chlorobenzyl)] amino] acetic acid.

FG046(저해물질 A)로 지정한 2-[[N-(4-메톡시벤젠설포닐)-N-(4-클로로벤질)]-아미노]아세트산(23)을 합성하는 적절한 방법은 다음과 같다.A suitable method for synthesizing 2-[[N- (4-methoxybenzenesulfonyl) -N- (4-chlorobenzyl)]-amino] acetic acid (23) designated FG046 (inhibitor A) is as follows.

2-[[N-(4-메톡시벤젠설포닐)-N-(4-클로로벤질)]아미노]아세트산(23)의 합성.Synthesis of 2-[[N- (4-methoxybenzenesulfonyl) -N- (4-chlorobenzyl)] amino] acetic acid (23).

1.5:1 MeOH/H₂O(4㎖)에 에틸 에스테르 현탁 혼합물(4)(300㎎, 0.75m㏖)에 LiOH/H₂O를 첨가한다. 5시간동안 실온에서 교반후에, 혼합물은 1N HCl 용액(20㎖)으로 냉각시키고, CH₂Cl₂(2×20㎖)로 추출한다. 복합 유기층은 소금물로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 농축시킨다. 고체는 뜨거운 에테르에서 재결정하여 흰색고체(23)를 얻는다.LiOH / H ₂ O is added to ethyl ester suspension mixture 4 (300 mg, 0.75 mmol) in 1.5: 1 MeOH / H ₂ O (4 mL). After stirring at room temperature for 5 hours, the mixture is cooled with 1N HCl solution (20 mL) and extracted with CH ₂ Cl ₂ (2 × 20 mL). The combined organic layer is washed with brine, dried over MgSO ₄ and concentrated. The solid is recrystallized from hot ether to give a white solid (23).

mp : 139.5-140℃;¹H NMR (360 MHz, DMSO-d6)δ7.79-7.08(m, 4H, Ph), 4.37(s, 2H, CH₂), 3.85(s, 3H, OCH₃), 3.83(s, 2H, CH₂).mp: 139.5-140 ° C .; ¹ H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ 7.79-7.08 (m, 4H, Ph), 4.37 (s, 2H, CH ₂ ), 3.85 (s, 3H, OCH ₃ ), 3.83 (s, 2H, CH ₂ ).

6.1.7. N-하이드록시-2[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'(카르복시메틸)]아미노]아세타아미드의 합성.6.1.7. Synthesis of N-hydroxy-2 [[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N' (carboxymethyl)] amino] acetaamide.

FG055(저해물질 A)로 칭하는 N-하이드록시-2[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'(카르복시메틸)]아미노]아세타아미드(30)를 합성하는 적절한 방법은 다음과 같다.A suitable method for synthesizing N-hydroxy-2 [[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N' (carboxymethyl)] amino] acetaamide (30), called FG055 (inhibitor A) As follows.

에틸 2-[[N-(4-메톡시벤젠-설포닐)]아미노]아세테이트(26)의 합성.Synthesis of ethyl 2-[[N- (4-methoxybenzene-sulfonyl)] amino] acetate (26).

무수 CH₂Cl₂(60㎖)에 글리신 에틸 에스테르 염화수소(24)(3.0g, 21.5m㏖)와 염화 4-메톡시벤젠설포닐(25)(4.4g, 21.3m㏖) 혼합물에 트리에틸아민(4.79g, 47.3m㏖)을 첨가한다. 15시간동안 실온에서 교반시킨 후에, 반응혼합물은 1N HCl(120㎖)로 냉각시키고 CH₂Cl₂(2×100㎖)로 추출한다. 복합 유기층은 소금물로 씻어내고, MgSO₄에서 건조시켜 농축시킨다. 고체는 EtOAc/헥산에서 재결정하여 흰색고체의 설폰아미드(26)를 얻는다.Triethylamine in a mixture of glycine ethyl ester hydrogen chloride (24) (3.0 g, 21.5 mmol) and 4-methoxybenzenesulfonyl chloride (25) (4.4 g, 21.3 mmol) in anhydrous CH ₂ Cl ₂ (60 mL). (4.79 g, 47.3 mmol) is added. After stirring at room temperature for 15 hours, the reaction mixture is cooled with 1N HCl (120 mL) and extracted with CH ₂ Cl ₂ (2 × 100 mL). The combined organic layer is washed with brine, dried over MgSO ₄ and concentrated. The solid is recrystallized in EtOAc / hexanes to give a white solid sulfonamide (26).

에틸-2-[[N-(4-메톡시벤젠-설포닐)-N-3차-부틸옥시카르보닐메틸)]아미노]아세테이트(27)의 합성.Synthesis of ethyl-2-[[N- (4-methoxybenzene-sulfonyl) -N-tert-butyloxycarbonylmethyl)] amino] acetate (27).

얼음조에서 무수 THF(10㎖)에 하이드리드 나트륨(미네랄 오일에 60% 분산된)(162㎎, 4.03m㏖) 슬러리에 설폰아미드(26)(1.0g, 3.66m㏖)를 첨가하고, 브로모 3차-부틸아세테이트(785㎎, 4.03m㏖)를 첨가한다. 혼합물은 30분간 0℃에서 활발히 교반시키고, 그 다음 15시간동안 교반시킨다. 얼음조에서 반응혼합물을 냉각시킨 후에 물(25㎖)로 급냉시키고 에테르(2×50㎖)로 추출한다. 복합유기층은 소금물로 씻어내고, MgSO₄상에서 건조시키고 농축시킨다. 잔유물은 실리카 겔 크로마토그래피(2:1 헥산:EtOAc)를 사용하여 정제하면 무색 시럽(27)을 얻는다.To a slurry of hydride sodium (60% dispersed in mineral oil) (162 mg, 4.03 mmol) in anhydrous THF (10 mL) was added sulfonamide (26) (1.0 g, 3.66 mmol) in an ice bath, Parent tert-butyl acetate (785 mg, 4.03 mmol) is added. The mixture is vigorously stirred at 0 ° C. for 30 minutes and then for 15 hours. After cooling the reaction mixture in an ice bath, it was quenched with water (25 mL) and extracted with ether (2 × 50 mL). The combined organic layer is washed with brine, dried over MgSO ₄ and concentrated. The residue is purified using silica gel chromatography (2: 1 hexanes: EtOAc) to give a colorless syrup (27).

N-하이드록시-2[[N'-4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(3차-부틸옥시카르보닐-메틸)]아미노]아세타아미드(28)의 합성.Synthesis of N-hydroxy-2 [[N'-4-methoxybenzenesulfonyl) -N '-(tert-butyloxycarbonyl-methyl)] amino] acetaamide (28).

MeOH(2.7㎖)에 염화수소 하이드록실아민(377㎎, 5.43m㏖)과 MeOH(2.7㎖)에 KOH(456㎎, 8.13m㏖)의 별도 용액을 끓는 점에서 준비하여 40℃로 냉각시키고 후자용액을 전자용액에 첨가한다. 30분간 얼음조에서 냉각시킨 후에, 염화칼륨고체를 여과에 의해 제거한다. 여과물에 에틸 에스테르(27)(1.05g, 2.71m㏖)를 첨가한다. 6시간동안 실온에서 교반시킨 후에 반응 혼합물은 1N HCl 용액을 사용하여 pH 4로 중화시킨 다음 CH₂Cl₂(60㎖)과 물(20㎖) 사이에서 분할시킨다. 생성된 두 상은 분리시키고, 수용층은 CH₂Cl₂(60㎖)로 추출한다. 복합 유기층은 소금물로 씻어내고, MgSO₄에서 건조시키고, 농축시킨다. 잔유물은 실리카겔 크로마토그래피(11:1 CH₂Cl₂:MeOH)에 의해 정제하여 흰색 고체인 FG-058인 에스테르 하이드록사메이트(28)를 얻는다.Prepare a separate solution of hydrogen chloride hydroxylamine (377 mg, 5.43 mmol) in MeOH (2.7 mL) and KOH (456 mg, 8.13 mmol) in MeOH (2.7 mL) at room temperature, cool to 40 ° C, and use the latter solution. Is added to the electronic solution. After cooling in an ice bath for 30 minutes, the potassium chloride solids are removed by filtration. To the filtrate is added ethyl ester 27 (1.05 g, 2.71 mmol). After stirring for 6 hours at room temperature the reaction mixture is neutralized to pH 4 with 1N HCl solution and then partitioned between CH ₂ Cl ₂ (60 mL) and water (20 mL). The resulting two phases are separated and the aqueous layer is extracted with CH ₂ Cl ₂ (60 mL). The combined organic layers are washed with brine, dried over MgSO ₄ and concentrated. The residue is purified by silica gel chromatography (11: 1 CH ₂ Cl ₂ : MeOH) to give ester hydroxamate (28) which is a white solid, FG-058.

N-하이드록시-2[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'(카르복시메틸)]-아미노]아세타미드(29)의 합성.Synthesis of N-hydroxy-2 [[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N' (carboxymethyl)]-amino] acetamide (29).

35% CF₃COOH/CH₂Cl₂(9㎖)에 3차 부틸 에스테르 하이드록사메이트(28)(520㎎, m㏖) 용액을 0℃에서 10분간 교반시키고, 실온에서 1.5시간 교반시킨다. 혼합물은 농축시키고, 진공에서 건조시킨다. 잔유물은 EtOAc로 가습하고, 고체는 EtOAc/MeOH/헥산으로부터 재결정시켜 흰색고체인 산 하이드록사메이트(29)를 얻는다.A tertiary butyl ester hydroxamate (28) solution (520 mg, mmol) in 35% CF ₃ COOH / CH ₂ Cl ₂ (9 mL) was stirred at 0 ° C. for 10 minutes and at room temperature for 1.5 hours. The mixture is concentrated and dried in vacuo. The residue is humidified with EtOAc and the solid is recrystallized from EtOAc / MeOH / hexanes to give the acid hydroxamate (29) as a white solid.

mp: 160-161℃; MS(ES)(M+H)⁺: 319;¹H NMR(360 MHz, DMSO-d6)δ12.08(brs. 1H, CO₂H), 10.69(s, 1H, OH), 8.96(s, 1H, NH), 7.76(d, J = 8.7 Hz, 2H, Pb), 7.09(d, J = 8.7 Hz, 2H, Ph), 4.01(s, 2H, CH₂), 3.84(s, 3H, OMe), 3.83(s, 2H, CH₂).mp: 160-161 ° C .; MS (ES) (M + H) ⁺ : 319; ¹ H NMR (360 MHz, DMSO-d 6) δ 12.08 (brs. 1 H, CO ₂ H), 10.69 (s, 1H, OH), 8.96 (s, 1H, NH), 7.76 (d, J = 8.7 Hz , 2H, Pb), 7.09 (d, J = 8.7 Hz, 2H, Ph), 4.01 (s, 2H, CH ₂ ), 3.84 (s, 3H, OMe), 3.83 (s, 2H, CH ₂ ).

6.1.8. N-(4-메톡시벤젠-설포닐)-L-프롤린 하이드록사메이트의 합성.6.1.8. Synthesis of N- (4-methoxybenzene-sulfonyl) -L-proline hydroxamate.

FG054(저해제 A)로 지정한 N-(4-메톡시벤젠설포닐)-L-프롤린 하이드록사메이트를 합성하는 적절한 방법은 다음과 같다.A suitable method for synthesizing N- (4-methoxybenzenesulfonyl) -L-proline hydroxamate designated FG054 (inhibitor A) is as follows.

N-(4-메톡시벤젠설포닐)-L-프롤린 메틸 에스테르의 합성.Synthesis of N- (4-methoxybenzenesulfonyl) -L-proline methyl ester.

무수 CH₂Cl₂(17㎖)에 L-프롤린 메틸 에스테르 하이드로클로라이드(30)(1.00g, 6.03m㏖)와 염화 4-메톡시벤젠설포닐(31)(1.19g, 5.75m㏖)에 트리에틸아민(1.22g, 12.06m㏖)을 첨가한다. 15시간 실온에서 교반시킨 후에, 반응 혼합물은 수용액에서 1N HCl(30㎖)로 냉각시키고, EtOAc(2×100㎖)로 추출시킨다. 복합 EtOAc 유기층은 소금물로 씻고, Mg₂SO₄에서 건조시키고, 농축시켜 (32)를 얻는다. 이 생성물은 추가 정제없이 다음 반응에 직접 이용한다.L-proline methyl ester hydrochloride (30) (1.00 g, 6.03 mmol) in anhydrous CH ₂ Cl ₂ (17 mL) and 4-methoxybenzenesulfonyl chloride (31) (1.19 g, 5.75 mmol) Ethylamine (1.22 g, 12.06 mmol) is added. After stirring at room temperature for 15 hours, the reaction mixture is cooled with 1N HCl (30 mL) in aqueous solution and extracted with EtOAc (2 × 100 mL). The combined EtOAc organic layer is washed with brine, dried over Mg ₂ SO ₄ and concentrated to give (32). This product is used directly in the next reaction without further purification.

N-(4-메톡시벤젠설포닐)-L-프롤린 하이드록사메이트(33)의 합성.Synthesis of N- (4-methoxybenzenesulfonyl) -L-proline hydroxamate (33).

MeOH(3.4㎖)에 염화수소 하이드록실아민(465㎎, 6.68m㏖)과 MeOH(3.4㎖)에 KOH(561㎎, 10.0m㏖)의 별도 용액을 끓는 점에서 준비하여 40℃로 냉각시키고 그 다음 후자용액을 전자에 첨가한다. 30분간 얼음조에서 냉각시킨 후에, 염화 칼륨고체를 여과에 의해 제거한다. 여과물에 에틸 에스테르(32)(1.0g, 3.34m㏖)를 첨가한다. 15시간동안 실온에서 교반시킨 후에, 반응 혼합물은 1N HCl(40㎖) 용액으로 처리하고, CH₂Cl₂/MeOH(10:1)로 추출한다. 유기층은 소금물로 씻어내고, MgSO₄상에서 건조시키고, 농축시켜 생성물을 얻는다. 고체는 뜨거운 MeOH/EtOAc에서 재결정시켜 고체인 하이드록사메이트(33)를 얻는다.Prepare a separate solution of hydrogen chloride hydroxylamine (465 mg, 6.68 mmol) in MeOH (3.4 mL) and KOH (561 mg, 10.0 mmol) in MeOH (3.4 mL) at boiling point and then cool to 40 ° C. The latter solution is added to the former. After cooling in an ice bath for 30 minutes, the potassium chloride solids are removed by filtration. To the filtrate is added ethyl ester 32 (1.0 g, 3.34 mmol). After stirring at room temperature for 15 hours, the reaction mixture is treated with 1N HCl (40 mL) solution and extracted with CH ₂ Cl ₂ / MeOH (10: 1). The organic layer is washed with brine, dried over MgSO ₄ and concentrated to yield the product. The solid is recrystallized in hot MeOH / EtOAc to give the hydroxamate (33) as a solid.

6.1.9. N-(하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(4-트리플로로메틸벤질)]아미노]-아세타미드의 합성.6.1.9. Synthesis of N- (hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N'-(4-trifluoromethylbenzyl)] amino] -acetamide.

FG-066(저해제 A)로 지정한 N-(하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(4-트리플로로메틸벤질)]아미노]-아세타미드를 합성하는 적절한 방법은 시발물질을 4-클로로벤젠알데히드 대신에 4-트리플로로메틸벤자알데히드를 이용하여 N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(4-클로로벤질)]아미노]-아세타미드를 합성하는 것과 기본적으로 같다(6.1.1. 참조).N- (hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N'-(4-trifluoromethylbenzyl)] amino] -aceta designated FG-066 (inhibitor A) A suitable method for synthesizing the mead is to use N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl)-by using tritrimethylmethylbenzaaldehyde instead of 4-chlorobenzenealdehyde. It is basically the same as synthesizing N '-(4-chlorobenzyl)] amino] -acetamide (see 6.1.1.).

¹H NMR(360 MHz, DMSO-d6)δ10.50(s, 1H, OH), 8.83(s, 1H, NH), 7.81-7.08(m, 8H, Ph), 4.45(s, 2H, CH₂CO), 3.86(s, 3H, OMe), 3.67(s, 2H, CH₂Ph). ¹ H NMR (360 MHz, DMSO-d 6) δ 10.50 (s, 1H, OH), 8.83 (s, 1H, NH), 7.81-7.08 (m, 8H, Ph), 4.45 (s, 2H, CH ₂ CO), 3.86 (s, 3H, OMe), 3.67 (s, 2H, CH ₂ Ph).

6.1.10.N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(4-메톡시벤질)'아미노]-아세타미드의 합성.6.1.10. Synthesis of N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N'-(4-methoxybenzyl) 'amino] -acetamide.

FG-067(저해제 A)로 지정한 N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(4-메톡시벤질)]아미노]-아세타미드를 합성하는 적절한 방법은 시발물질로 4-클로로벤즈알데히드 대신에 4-메톡시벤즈알데히드를 이용한 N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤즈설포닐)-N-(4-클로로벤질)]아미노]-아세타미드를 합성하는 것과 기본적으로 같다(6.1.1. 참조).Synthesis of N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N'-(4-methoxybenzyl)] amino] -acetamide designated FG-067 (inhibitor A) An appropriate method is N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzsulfonyl) -N- (4-chlorobenzyl) using 4-methoxybenzaldehyde instead of 4-chlorobenzaldehyde as a starting material. Basically the same as synthesizing] amino] -acetamide (see 6.1.1.).

¹H NMR(360 MHz, DMSO-d6)δ10.42(s, 1H, OH), 8.79(s, 1H, NH), 7.81-6.86(m, 8H, Ph), 4.29(s, 2H, CH₂CO), 3.85(s, 3H, OMe), 3.73(s, 3H, OMe), 3.28(s, 2H, CH₂Ph). ¹ H NMR (360 MHz, DMSO-d 6) δ 10.42 (s, 1H, OH), 8.79 (s, 1H, NH), 7.81-6.86 (m, 8H, Ph), 4.29 (s, 2H, CH ₂ CO), 3.85 (s, 3H, OMe), 3.73 (s, 3H, OMe), 3.28 (s, 2H, CH ₂ Ph).

6.1.11. N-하이드록시-2-[[N'-(4-벤젠설포닐)-N'-(4-클로로벤질)]아미노]-아세타미드의 합성.6.1.11. Synthesis of N-hydroxy-2-[[N '-(4-benzenesulfonyl) -N'-(4-chlorobenzyl)] amino] -acetamide.

FG-080(저해제 A)로 지정된 N-하이드록시-2-[[N'-(4-벤젠설포닐)-N'-(4-클로로벤질)]아미노]-아세타미드를 합성하는 적절한 방법은 시발물질로 염화 4-메톡시벤젠설포닐대신에 염화 벤젠설포닐을 사용하여 N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(4-클로로벤질)]아미노]-아세타아미드를 합성하는 것과 기본적으로 같다.Suitable method for synthesizing N-hydroxy-2-[[N '-(4-benzenesulfonyl) -N'-(4-chlorobenzyl)] amino] -acetamide designated FG-080 (Inhibitor A) N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N'-(4-chloro using silver benzenesulfonyl chloride instead of 4-methoxybenzenesulfonyl chloride as a starting material It is basically the same as synthesizing benzyl)] amino] -acetaamide.

MS (ES) (M + H)⁺: 355.MS (ES) (M + H) ⁺ : 355.

6.1.2. N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(벤질)]아미노]-아세타미드의 합성.6.1.2. Synthesis of N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N'-(benzyl)] amino] -acetamide.

FG-061(저해제 A)로 공지된 N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(벤질)]아미노]-아세타미드를 합성하는 적절한 방법은 시발물질로 브로모 3차-부틸아세테이트 대신에 벤질 브로마이드를 이용하여 N-하이드록시-2-[[N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-N'-(카르복시메틸)]아미노]-아세타미드를 합성하는 것과 기본적으로 같다(6.1.7. 참조).Suitable method for synthesizing N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N'-(benzyl)] amino] -acetamide known as FG-061 (inhibitor A) N-hydroxy-2-[[N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -N'-(carboxymethyl)] amino] using benzyl bromide instead of bromo tert-butyl acetate as a silver starting material It is basically the same as synthesizing acetamide (see 6.1.7).

MS (ES) (M - H)⁺: 349.MS (ES) (M-H) ⁺ : 349.

6.1.3. N-(4-메톡시벤젠설포닐)-β-벤질-(L)-아스파르트산의 합성.6.1.3. Synthesis of N- (4-methoxybenzenesulfonyl) -β-benzyl- (L) -aspartic acid.

FG084(저해제 A)로 지정된 N-(4-메톡시벤젠설포닐)-β-벤질-(L)-아스파르트산을 합성하는 적절한 방법은 다음과 같다.A suitable method for synthesizing N- (4-methoxybenzenesulfonyl) -β-benzyl- (L) -aspartic acid designated FG084 (inhibitor A) is as follows.

N-(4-메톡시벤젠설포닐)-β-벤질-(L)-아스파르트산(40).N- (4-methoxybenzenesulfonyl) -β-benzyl- (L) -aspartic acid (40).

무수 CH₂Cl₂에 b-벤질-(L)-아스파르트산 HCl염(38)(2.00g, 8.96m㏖)과 염화 p-메톡시벤젠설포닐(39)(1.76g, 8.53m㏖)의 현탁 혼합물에 실온에서 트리에틸아민(1.81g, 17.91m㏖)을 첨가한다. 15시간 교반후에, 반응 혼합물은 1N HCl(60㎖)로 냉각시키고, CH₂Cl₂(3×50㎖)으로 추출한다. 복합 유기층은 소금물로 씻어내고 MgSO₄에서 건조시킨 다음 농축시켜 N-(4-메톡시벤젠설포닐)-b-벤질-(L)-아스파르트산(3.14g, 7.99m㏖, 94% 수득률)을 얻는다.Of b-benzyl- (L) -aspartic acid HCl salt (38) (2.00 g, 8.96 mmol) and p-methoxybenzenesulfonyl chloride (39) (1.76 g, 8.53 mmol) in anhydrous CH ₂ Cl ₂ To the suspension mixture is added triethylamine (1.81 g, 17.91 mmol) at room temperature. After stirring for 15 hours, the reaction mixture is cooled with 1N HCl (60 mL) and extracted with CH ₂ Cl ₂ (3 × 50 mL). The combined organic layers were washed with brine, dried over MgSO ₄ and concentrated to give N- (4-methoxybenzenesulfonyl) -b-benzyl- (L) -aspartic acid (3.14 g, 7.99 mmol, 94% yield). Get

N-벤질옥시-N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-β-벤질-(L)-아스파르트 아미드(41)N-benzyloxy-N '-(4-methoxybenzenesulfonyl) -β-benzyl- (L) -aspartamide (41)

(7/3) THF/DMF(10㎖) 무수용액에 N-(4-메톡시벤젠설포닐)-b-벤질-(L)-아스파르트산(300㎎, 0.76m㏖)과 O-벤질하이드록실아민/HCl 혼합물에 N-하이드록시벤조트리아졸(HOBT)(103㎎, 0.76m㏖), N-에틸몰폴린(204㎎, 1.68m㏖)과 디이소프로필카르보디이미드(106㎎, 0.84m㏖)를 실온에서 첨가한다. 휴일동안(2,5일) 교반후에 반응혼합물은 (1/1) 헥산/EtOAc(40㎖)로 희석시키고, 1N HCl(2×20㎖), 포화 NaHCO₃수용액(2×20㎖)과 소금물로 연속하여 씻어낸다. 유기층은 MgSO₄상에서 건조시키고 농축시킨다. 잔유물은 실리카 겔 순간 크로마토그래피((1/1) EtOAc/헥산)에 의해 정제하여 N-벤질옥시-NO-(4-메톡시벤젠설포닐)-b-벤질-(L)-아스파르트 아미드(114㎎, 0.22m㏖, 30% 수득률, 흰색고체)를 얻는다.(7/3) N- (4-methoxybenzenesulfonyl) -b-benzyl- (L) -aspartic acid (300 mg, 0.76 mmol) and O-benzylhydride in THF / DMF (10 mL) anhydrous solution N-hydroxybenzotriazole (HOBT) (103 mg, 0.76 mmol), N-ethylmorpholine (204 mg, 1.68 mmol) and diisopropylcarbodiimide (106 mg, 0.84) in a loxylamine / HCl mixture mmol) is added at room temperature. After stirring on holiday (2,5 days), the reaction mixture was diluted with (1/1) hexanes / EtOAc (40 mL), 1N HCl (2 × 20 mL), saturated aqueous NaHCO ₃ solution (2 × 20 mL) and brine. Rinse continuously with The organic layer is dried over MgSO ₄ and concentrated. The residue was purified by silica gel flash chromatography ((1/1) EtOAc / hexane) to give N-benzyloxy-NO- (4-methoxybenzenesulfonyl) -b-benzyl- (L) -aspartamide (114). Mg, 0.22 mmol, 30% yield, white solid).

mp: 128-129. C; MS (ES) (M + H)⁺: 499mp: 128-129. C; MS (ES) (M + H) ⁺ : 499

N-하이드록시-N'-(4-메톡시벤젠설포닐)-(L)-아스파르트 아미드(42).N-hydroxy-N '-(4-methoxybenzenesulfonyl)-(L) -aspart amide (42).

메탄올(7㎖)에 N-벤질옥시-NO-(4-메톡시벤젠설포닐)-b-벤질-(L)-아스파르트 아미드(102㎎, 0.20m㏖)와 10% Pd/C(43㎎) 혼합물을 20시간동안 수소기체하에서 활발히 교반시킨다. 촉매는 셀라이트 패드에 의해 여과시키고 여과물은 농축시킨다. 잔류물은 물로부터 냉동건조시켜 N-하이드록시-NO-(4-메톡시벤젠설포닐)-(L)-아스파르트 아미드(50㎎, 0.16m㏖, 77% 수득률)(흡습성 분말)를 수득한다.N-benzyloxy-NO- (4-methoxybenzenesulfonyl) -b-benzyl- (L) -aspartamide (102 mg, 0.20 mmol) and 10% Pd / C (43 mg) in methanol (7 mL) The mixture is vigorously stirred under hydrogen gas for 20 hours. The catalyst is filtered through a pad of celite and the filtrate is concentrated. The residue is lyophilized from water to give N-hydroxy-NO- (4-methoxybenzenesulfonyl)-(L) -aspartamide (50 mg, 0.16 mmol, 77% yield) (hygroscopic powder). .

¹H NMR(360 MHz, DMSO-d6)δ10.60(s, 1H), 8.78(s, 1H), 7.87(d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.93(m, 1H), 3.82(s, 3H), 2.50(m, 1H), 2.21(dd, J = 16.0, 6.5 Hz, 1H). ¹ H NMR (360 MHz, DMSO-d6) δ10.60 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 7.87 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 3.93 (m, 1H), 3.82 (s, 3H), 2.50 (m, 1H), 2.21 (dd, J = 16.0, 6.5 Hz, 1H).

6.2. 실시예 2: C-프로테나제 검사.6.2. Example 2: C-proteinase test.

6.2.1. 시험관에서 C-프로테나제 활성결정과 저해제의 IC₅₀ 6.2.1. Determination of C-proteinase Activity and Inhibitor IC ₅₀ in Vitro

다음의 검사를 이용하여 C-프로테나제 활성에서 본 발명의 여러 화합물의 활성수준과 효과를 결정한다.The following tests are used to determine the activity levels and effects of the various compounds of the invention on C-proteinase activity.

총 용적 10㎕에 0.1M 트리스-HCl, 0.1M NaCl, 0.02% Brij-35와 5mM CaCl₂용액에 있는 병아리 C-프로테나제 10Unit/㎖에 약 125㎍ 방사능라벨된 (14C) 프로콜라겐을 첨가한다. 반응은 35℃에서 15분간 진행하고, 1/3 부피의 3x 정지/적하 완충액(30mM EDTA, 30% 글리세롤, 6% SDS, 0.006% 브로모페놀-블루)을 사용하여 반응을 중단시킨다. 연속하여 샘플은 4분간 100℃로 가열시키고, 6% 폴리아크릴아미드 겔을 이용하여 SDS-PAGE(Novex)에 용해시킨다. 단백질 밴드는 자가방사사진에 의해 감지할 수 있다. 효소 활성 양은 절단 안된 프로콜라겐에 상응하는 밴드가 사라지는 것에 기초한다.Add approximately 125 μg radiolabeled (14C) procollagen to 10 Units / ml chick C-proteinase in 0.1 M Tris-HCl, 0.1 M NaCl, 0.02% Brij-35 and 5 mM CaCl ₂ solution in a total volume of 10 μL. do. The reaction proceeds for 15 minutes at 35 ° C. and stops the reaction using 1/3 volume 3 × stop / drop buffer (30 mM EDTA, 30% glycerol, 6% SDS, 0.006% bromophenol-blue). The sample was subsequently heated to 100 ° C. for 4 minutes and dissolved in SDS-PAGE (Novex) using 6% polyacrylamide gel. Protein bands can be detected by autoradiography. The amount of enzymatic activity is based on the disappearance of the band corresponding to the uncleaved procollagen.

저해제의 IC₅₀은 활성%에 대한 저해제 농도를 플로팅하고 50% 활성을 갖는 저해제 농도를 측정하여 결정한다.The IC ₅₀ of the inhibitor is determined by plotting the inhibitor concentration against% active and measuring the inhibitor concentration with 50% activity.

테스트된 저해제의 IC₅₀값을 표 1 에 나타내었다.IC ₅₀ values of the tested inhibitors are shown in Table 1.

다양한 확인된 C-프로테나제 저해제의 IC₅₀ IC ₅₀ of various identified C-proteinase inhibitors 저해제Inhibitor 일반 분류General classification IC₅₀ IC ₅₀ FG-047FG-047 AA 50μM50 μM FG-061FG-061 AA 100μM100 μM FG-053FG-053 AA 100μM100 μM FG-052¹ FG-052 ¹ BB 125μM125 μM FG-066FG-066 AA 150μM150 μM FG-067FG-067 AA 150μM150 μM FG-086(cbz-Pro-Leu-Gly-하이드록사메이트²)FG-086 (cbz-Pro-Leu-Gly-hydroxyxamate ² ) AA 200μM200 μM FG-087(Ac-PYYG-하이드록사메이트)FG-087 (Ac-PYYG-hydroxyxamate) AA 335μM335 μM FG-088(악티노닌³)FG-088 (Actinine ³ ) BB 350μM350 μM FG-054FG-054 AA 400μM400 μM FG-057FG-057 DD 1500μM1500 μM FG-058⁴ FG-058 ⁴ AA 2100μM2100 μM FG-055FG-055 AA 2600μM2600 μM

FG-051⁵ FG-051 ⁵ CC >> 100μM>> 100 μM FG-046FG-046 AA >> 1000μM>> 1000μM 1 Peptides International(IHN-3850-PI)에서 구입2 Sigma(C-8537)에서 구입3 Sigma(A-6671)에서 구입4 중간 생성물(28)(6.1.7)5 Peptides International(ISN-3835-PI)에서 구입1 Purchase from Peptides International (IHN-3850-PI) 2 Purchase from Sigma (C-8537) 3 Purchase from Sigma (A-6671) 4 Intermediate product (28) (6.1.7) 5 Peptides International (ISN-3835-PI Buy at)

6.2.2. 시험관에서 C-프로테나제 활성과 저해제의 IC₅₀을 결정하기 위한 ELISA 검사.6.2.2. ELISA assay to determine C-proteinase activity and IC ₅₀ of inhibitor in vitro.

저해제의 IC₅₀값은 여과 ELISA 검사에 의해 결정할 수도 있다. 이 검사에서 라벨 안한 사람 프로콜라겐 I 약 25㎎을 C-프로테나제와 1시간 배양시킨다(6.2.1. 참조). 반응은 40㎕ 침전 완충액(0.5x 반응 완충액, 0.1㎎㎖ 병아리 콜라겐 II, 10㎍/㎖ BSA, 7.5mM EDTA)을 추가하여 정지시킨다. 75% 에탄올 25㎕를 추가하고, 반응물을 혼합시켜 1시간동안 얼음에 두어 프로콜라겐을 침전시킨다. 가용성 C-프로펩티드는 Millipore multiscreen을 이용하여 a Millipore multiscreen vacuum manifold HV - 0.45㎛ 친수성 플레이트를 통하여 여과시켜 침전된 콜라겐으로부터 분리시킨다. 20㎕ 여과물은 제거하고, Takara Biomedicals의 프로콜라겐 타입 I C-펩티드(PIP)를 이용하여 절단된 C-프로펩티드의 양을 결정한다.IC ₅₀ values of inhibitors can also be determined by filtration ELISA assay. About 25 mg of unlabeled human procollagen I in this test is incubated with C-proteinase for 1 hour (see 6.2.1.). The reaction is stopped by addition of 40 μl precipitation buffer (0.5 × reaction buffer, 0.1 mgml chick collagen II, 10 μg / ml BSA, 7.5 mM EDTA). Add 25 μl 75% ethanol and mix the reaction and leave on ice for 1 hour to precipitate procollagen. Soluble C-propeptide is isolated from precipitated collagen by filtration through a Millipore multiscreen vacuum manifold HV-0.45 μm hydrophilic plate using Millipore multiscreen. 20 μl filtrate is removed and the amount of cleaved C-propeptide is determined using Takara Biomedicals's procollagen type I C-peptide (PIP).

hBMP-1 저해를 위해 약 20ng의 방사능라벨된(¹²⁵I) 사람 프로콜라겐 I을 총 부피 10㎕에 반응 완충액에 1∼2㎕ 5배 농축된 재조합 hBMP-1 세포 배지(Kessler et al. (1996) Science 271:360)에 첨가한다. 반응은 35℃에서 1시간동안 진행시키고, 3x 정지/적하 완충액 1/3 부피로 반응을 정지시킨 후 SDS-PAGE에서 분석한다.Recombinant hBMP-1 cell medium (Kessler et al. (1996) was concentrated with about 20ng of radiolabeled ( ¹²⁵ I) human procollagen I in a total volume of 10 μl in reaction buffer to hBMP-1 inhibition. ) Science 271: 360). The reaction proceeds at 35 ° C. for 1 hour, the reaction is stopped with 1/3 volume of 3 × stop / drop buffer and analyzed on SDS-PAGE.

저해제의 IC₅₀은 활성%에 대한 저해제 농도를 플롯하고, 50% 활성을 갖는 저해제 농도를 측정하여 결정한다. 표 2 에 IC₅₀값을 나타내었다.IC ₅₀ of inhibitors is determined by plotting inhibitor concentrations relative to% active and measuring inhibitor concentrations with 50% activity. Table 2 shows the IC ₅₀ values.

ELISA 에 의해 결정된 다양하게 확인된 C-프로테나제 저해제의 IC₅₀ IC ₅₀ of various identified C-proteinase inhibitors determined by ELISA 저해제Inhibitor 일반 집단General group IC₅₀ELISAIC ₅₀ ELISA FG-061FG-061 AA 12μM12 μM FG-047FG-047 AA 13μM13 μM FG-053FG-053 AA 22μM22 μM FG-067FG-067 AA 37μM37 μM FG-066FG-066 AA 48μM48 μM

6.2.3. C-프로테나제 활성과 저해제의 IC₅₀을 결정하기 위한 조직 배양검사6.2.3. Tissue culture assay to determine C-proteinase activity and IC ₅₀ of inhibitor

화합물로 처리하기 전과 후에 조건배지에서 프로콜라겐과 성숙한 콜라겐의 생산을 측정하여 생체에서 C-프로테나제 활성과 저해제의 IC₅₀을 결정한다. 콜라겐과 프로콜라겐의 비율은 전구물질에서 성숙한 콜라겐 물질로의 세포 전이와 직접 연관이 있고 이는 C-프로테나제 활성을 나타낸다.The production of procollagen and mature collagen in conditioned media before and after treatment with the compound determines the IC ₅₀ of C-proteinase activity and inhibitor in vivo. The ratio of collagen and procollagen is directly related to cellular transition from precursors to mature collagen material, which indicates C-proteinase activity.

또는 C-프로펩티드/세포의 배지 함량을 결정하고 처리 안된 세포와 저해제 처리된 세포를 비교한다.Or determine the media content of C-propeptide / cell and compare the untreated and inhibitor treated cells.

6.3. C-프로테나제 활성의 결정과 저해제 효과의 결정을 위한 동물모델.6.3. Animal model for determination of C-proteinase activity and determination of inhibitor effect.

콜라겐 생산에 이상이 있는 것과 관련된 임상 질환을 가진 몇가지 동물모델은 공지되어 있고 이를 이용하여 본 발명의 화합물의 생체에서 효과를 결정할 수 있다. 이와 같은 동물모델에서는 쥐에서 상처를 받은 심실 모델(Schilling et al., 1959, Surgery 46:702-710);Several animal models with clinical diseases associated with abnormalities in collagen production are known and can be used to determine the effects in vivo of the compounds of the present invention. Animal models such as ventricular wounds in mice (Schilling et al., 1959, Surgery 46: 702-710);

에스트라디올 자극된 자궁 확장 모델(Mandell et al., 1982, The Journal of Biological Chemistry 257:5268-5273), 유도성 맥관형성 모델(Matrigel)(Passaniti et al., 1992, Laboratory Investigation 67:519-528)등이 포함된다. 또한 동물 모델에는 간 섬유증 모델(Tsukamoto et al., 1990, Seminar in Liver Disease 10:56-65; Kock-Weser, 1952, Laboratory Investigation 1:324-331; Marrione, 1949, American Journal of Pathology 25:273-285; Tams, 1957, American Journal of Pathology 33:13-27; Wahl et al., 1986, Journal of Experimental Medicine 163:884-902); 폐 섬유증 모델(Kelly et al., 1980, Journal of Laboratory Clinical Medicine 96:954-964); 동맥 재협착증 모델(Jackson, 1994, Trends of Cardiovascular Medicine 4:122-130; Clowes et al., 1983, Laboratory Investigation 49:327-333); 신장 섬유증 모델(Yamamoto et al., 1987, Kidney International 32:514-525); 건 재생 모델(Franklin et al., 1986, The Journal of Laboratory and Clinical Medicine 108:103-108); 종양 생장 모델(Kiohs, et al., 1985, JNCL 75:353-359); 모델(Lahery et al., 1989, Journal of Ocular Pharmacology 5:155-179);와 복부 유착 모델(Williams et al., 1992, Journal of Surgical Research 52:65-70)과 같은 임상질병 모델을 포함한다.Estradiol stimulated uterine dilatation model (Mandell et al., 1982, The Journal of Biological Chemistry 257: 5268-5273), inducible angiogenesis model (Matrigel) (Passaniti et al., 1992, Laboratory Investigation 67: 519-528 ) Are included. Animal models also include liver fibrosis models (Tsukamoto et al., 1990, Seminar in Liver Disease 10: 56-65; Kock-Weser, 1952, Laboratory Investigation 1: 324-331; Marrione, 1949, American Journal of Pathology 25: 273 -285; Tams, 1957, American Journal of Pathology 33: 13-27; Wahl et al., 1986, Journal of Experimental Medicine 163: 884-902; Pulmonary fibrosis model (Kelly et al., 1980, Journal of Laboratory Clinical Medicine 96: 954-964); Arterial restenosis model (Jackson, 1994, Trends of Cardiovascular Medicine 4: 122-130; Clowes et al., 1983, Laboratory Investigation 49: 327-333); Renal fibrosis model (Yamamoto et al., 1987, Kidney International 32: 514-525); Gun regeneration model (Franklin et al., 1986, The Journal of Laboratory and Clinical Medicine 108: 103-108); Tumor growth model (Kiohs, et al., 1985, JNCL 75: 353-359); Clinical disease models such as models (Lahery et al., 1989, Journal of Ocular Pharmacology 5: 155-179) and abdominal adhesion models (Williams et al., 1992, Journal of Surgical Research 52: 65-70). .

6.4. 실시예 4: 세포독성의 측정.6.4. Example 4: Determination of Cytotoxicity.

세포의 생존 또는 증식에 효과가 있는지를 결정하기 위해 저해제에 대해 세포독성검사를 실시하였다. 이와 같은 검사는 신속히 증식하거나 또는 휴지세포를 이용한다. 공지 수의 세포를 접종시키고 저해제 농도에 시간을 증가시키면서 노출시킨다. 세포수 헤아리기 또는 착색(크리스탈 바이올렛)에 의해 세포수를 헤아린다.Inhibitors were tested for cytotoxicity to determine if they were effective in survival or proliferation of cells. Such tests multiply rapidly or use resting cells. Known numbers of cells are seeded and exposed to increasing inhibitor concentrations with time. Cell number is counted by cell number counting or staining (crystal violet).

세포독성은 세포 생존 및 세포 증식의 기능으로 평가한다. 세포 생존은 휴지 세포를 이용하고, 세포수에 의해 결정한다. 세포수의 감소는 세포의 손실을 나타내고, 따라서 세포생존에 영향을 가진다. 세포증식은 신속히 증식하는 세포를 이용하고, 이 또한 세포수에 의해 결정한다. 처리 안된 기준에 비해 세포수의 감소는 세포증식에 영향이 있음을 나타낸다.Cytotoxicity is assessed as a function of cell survival and cell proliferation. Cell survival is determined by the number of cells using resting cells. Reduction of cell number indicates loss of cells and thus affects cell survival. Cell proliferation utilizes rapidly proliferating cells, which are also determined by cell number. Reduction in cell number relative to untreated criteria indicates an effect on cell proliferation.

5.2. 응용5.2. Applications

본원 발명의 화합물과 조성물을 이용하여 콜라겐의 부적절한 생산 또는 성숙과 연관된 질병 예를 들면 관절염 질환, 섬유증 질환 및 다른 결합조직 질환을 치료할 수 있다.The compounds and compositions of the invention can be used to treat diseases associated with inappropriate production or maturation of collagen, such as arthritis diseases, fibrosis diseases and other connective tissue diseases.

이와 같은 질병 또는 질환에는 자연발생 간질성 섬유증, 간질성 폐 섬유증, 근육주변 섬유증, 시머스 섬유증, 중심주위 섬유증, 간염, 피부섬유종, 담즙성 간경변증, 알코올성 간경변증, 급성 폐 섬유증, 자연발생 폐 섬유증, 급성 호흡기 피로 증후군, 신장 섬유증/사구체신염, 신장 섬유증/당뇨성 신장병, 공피증/전신, 공피증/국소, 해족증, 비대성 반흔, 심각한 관절 유착/관절염, 골 섬유증, 각막 반흔, 방광 섬유증, 근 이상(duchenne's), 심장 섬유증, 근 섬유증/망막 분리, 식도 협착, payronles 질병 등을 포함한다. 또한 섬유증 질환은 반흔 교정/성형수술, 녹내장, 백내장 섬유증, 각막 반흔, 관절 유착, 이식에 의한 숙주 질환, 건 수술, 신경 고정, dupuytren 구축, OB/GYN 유착/섬유증, 골반 유착, 십이지장 섬유증, 재협착증 등을 포함한다. 또한 수술에 의해 유도되거나 개시될 수 있는데 폐 섬유증을 예로 들 수 있다.Such diseases or disorders include spontaneous interstitial fibrosis, interstitial pulmonary fibrosis, myofiber fibrosis, cymus fibrosis, peripheral fibrosis, hepatitis, cutaneous fibrosis, biliary cirrhosis, alcoholic cirrhosis, acute pulmonary fibrosis, spontaneous pulmonary fibrosis, Acute respiratory fatigue syndrome, renal fibrosis / glomerulonephritis, renal fibrosis / diabetic nephropathy, scleroderma / systemic, scleroderma / topical, pedigree, hypertrophic scar, severe joint adhesion / arthritis, bone fibrosis, corneal scar, bladder fibrosis, muscle Duchenne's, cardiac fibrosis, myofiber / retinal detachment, esophageal stricture, payronles disease, and the like. Fibrotic diseases also include scar correction / plastic surgery, glaucoma, cataract fibrosis, corneal scars, joint adhesion, host disease by transplantation, tendon surgery, nerve fixation, dupuytren construction, OB / GYN adhesion / fibrosis, pelvic adhesion, duodenal fibrosis, re Stenosis, and the like. It may also be induced or initiated by surgery, for example pulmonary fibrosis.

5.3. 제약학적 조성물과 이의 투여경로5.3. Pharmaceutical Compositions and Routes of Administration thereof

상기 확인된 화합물은 이를 필요로 하는 환자에게 투여하거나 다양한 질환을 치료하는데 효과적인 약량을 부형제 또는 적절한 담체에 혼합한 제약학적 조성물로 투여할 수도 있다. 치료요법적 효과량은 증상을 완화시킬 수 있는 충분한 양의 화합물을 말한다. 본 출원의 화합물의 투여와 제조용 기술은 "Remingron's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA, latest edition 에서 참고로 한다.The compounds identified above may be administered to a patient in need thereof, or as a pharmaceutical composition in admixture with an excipient or a suitable carrier in an amount effective for treating a variety of diseases. A therapeutically effective amount refers to a sufficient amount of compound that can alleviate the symptoms. Techniques for administration and preparation of the compounds of the present application are referenced in "Remingron's Pharmaceutical Sciences," Mack Publishing Co., Easton, PA, latest edition.

5.3.1. 투여 경로5.3.1. Route of administration

적절한 투여 경로는 경구, 직장, 경점막, 또는 내장 투여; 근육내, 피하내, 골수, 척수 등의 수내와, 포막내, 직접 심실내, 정맥내, 복막내, 비강내 또는 안구내 투여와 같은 비-경구 수송을 포함한다.Suitable routes of administration include oral, rectal, transmucosal, or visceral administration; Intramuscular, subcutaneous, bone marrow, spinal cord and the like, and non-oral transport such as intravesical, direct intraventricular, intravenous, intraperitoneal, intranasal or intraocular administration.

또는 전신 투여대신에 화합물을 국소투여할 수 있는데 예를 들면, 관절 또는 섬유증 조직에 직접적으로 화합물을 투여하는데 이때, 디포트 또는 서방형이 될 수 있다. 녹내장 수술의 복합증으로 종종 발생하는 반흔 과정을 예방하기 위해 이와 같은 화합물을 안약으로 투여할 수 있다.Alternatively, the compound may be administered locally instead of systemically, for example, the compound may be administered directly to joint or fibrotic tissue, which may be depot or sustained release. These compounds may be administered as eye drops to prevent the scar process often caused by complications of glaucoma surgery.

또한, 관절염 또는 섬유증 조직을 표적으로 하는 특이 항체로 피복된 리포좀과 같은 표적 약물 수송 시스템으로 약물을 투여할 수 있다. 리포좀은 병이 있는 조직에 선택적으로 취해질 수 있다.The drug can also be administered by a target drug transport system such as liposomes coated with specific antibodies targeting arthritis or fibrosis tissue. Liposomes can be selectively taken in diseased tissue.

5.3.2. 화합물/조성물5.3.2. Compound / Composition

본 발명의 제약학적 조성물은 통상적인 혼합, 용해, 입상화, 당제-제조, 수파, 유화, 포획화, 포집 또는 냉동건조 공정 등의 수단에 의해 만들어질 수 있다.The pharmaceutical composition of the present invention may be made by means of conventional mixing, dissolving, granulating, sugar-making, water blasting, emulsifying, capturing, collecting or lyophilizing processes.

따라서 본 발명에 따라 이용할 수 있는 제약학적 조성물은 부형제와 보조제로 구성된 제약학적으로 이용될 수 있는 조제물에 활성 화합물의 처리할 수 있는 하나이상의 생리학적 수용가능한 담체를 이용하여 통상적인 방식으로 제조될 수 있다. 선택된 투여경로에 따라 적절히 조제한다.Thus, pharmaceutical compositions which can be used according to the invention can be prepared in a conventional manner using one or more physiologically acceptable carriers which can treat the active compound in a pharmaceutically usable preparation consisting of excipients and auxiliaries. Can be. Properly prepared according to the selected route of administration.

주사시에는 본 발명의 물질은 한스 용액, 링거액 또는 생리적인 염 완충액과 같은 생리학적으로 사용가능한 완충액과 같은 수용액에서 제조될 수 있다. 경점막 투여시에는 장벽을 침투할 수 있는 적절한 침투제가 조성물에 이용될 수 있다. 이와 같은 침투제는 본 기술분야에 공지되어 있다.At the time of injection, the substances of the invention can be prepared in aqueous solutions, such as physiologically available buffers such as Hans' solution, Ringer's solution or physiological salt buffer. In transmucosal administration, a suitable penetrant may be used in the composition that can penetrate the barrier. Such penetrants are known in the art.

경구 투여시에는 본 기술 분야에 공지된 제약학적 수용가능한 담체와 활성 화합물을 복합하여 조제될 수 있다. 이와 같은 화합물은 치료가 필요한 환자에게 경구투여할 수 있는 정제, 알약, 당제, 캡슐, 액체, 겔, 시럽, 슬러리, 현탁액등으로 본 발명의 화합물을 만든다. 경구에 사용할 수 있는 제약학적 조성물은 고형 부형제로 수득되는데 선택적으로 생성 혼합물을 연마하고, 필요한 경우에 적절한 보조제를 첨가한 후에 입상 혼합물을 처리하여 정제 또는 당제를 얻을 수 있다. 적절한 부형제로는 설탕, 락토즈, 슈크로즈, 만니톨 또는 솔비톨을 포함하는 설탕과 같은 충진제; 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 겔라틴, 검 트라카탄, 메일 셀룰로오즈, 하이드록시프로필메틸-셀룰로오즈, 카르복시메틸셀룰로오즈 나트륨 그리고/또는 폴리비닐피롤리돈(PVP)과 같은 셀룰로오즈 준비물등이 있다. 필요한 경우에는, 교차결합된 폴리비닐 피롤리돈, 한천 또는 알긴산 또는 알지네이트 나트륨과 같은 이의 염이 분해제로 첨가될 수 있다.In the case of oral administration, it may be prepared by combining the active compound with a pharmaceutically acceptable carrier known in the art. Such compounds make the compounds of the present invention into tablets, pills, sugars, capsules, liquids, gels, syrups, slurries, suspensions, and the like, which can be administered orally to patients in need thereof. Pharmaceutical compositions which can be used orally are obtained as solid excipients which can optionally be ground the resulting mixture and, if necessary, added to the appropriate adjuvant and then treated with the granular mixture to obtain tablets or sugars. Suitable excipients include fillers such as sugar, including sugar, lactose, sucrose, mannitol or sorbitol; Corn starch, wheat starch, rice starch, potato starch, gelatin, gum tracatan, mail cellulose, hydroxypropylmethyl-cellulose, carboxymethylcellulose sodium and / or cellulose preparations such as polyvinylpyrrolidone (PVP) have. If necessary, crosslinked polyvinyl pyrrolidone, agar or salts thereof, such as alginic acid or sodium alginate, can be added as a disintegrant.

적절한 피복에 의해 당제 코어를 만들 수 있다. 이와 같은 목적을 위해, 농축된 당용액이 이용될 수 있는데 여기에는 선택적으로 아라비아 고무, 활석, 폴리비닐 피롤리돈, 카르보폴 겔, 폴리에틸렌 글리콜 또는 이산화티타늄, 락커용액과 적절한 유기용매 또는 용매 혼합물 등을 포함할 수 있다. 안료 또는 염료가 활성 화합물을 확인하고 상이한 조합을 특징화시키기 위해 첨가될 수 있다.The sugar core can be made by appropriate coating. For this purpose, concentrated sugar solutions can be used, optionally with gum arabic, talc, polyvinyl pyrrolidone, carbopol gel, polyethylene glycol or titanium dioxide, lacquer solutions and suitable organic solvents or solvent mixtures, etc. It may include. Pigments or dyes may be added to identify the active compound and to characterize different combinations.

경구로 이용될 수 있는 제약학적 조성물은 젤라틴으로 만들어진 푸쉬-피트(push-fit) 캡슐과 젤라틴과 글리세롤 또는 솔비톨과 같은 가소제로 만들어진 연성 캡슐을 포함한다. 푸쉬-피트 캡슐에는 활성 성분과 락토즈와 같은 충진제, 전분과 같은 결합제, 활석 또는 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제 또는 선택적으로 안정제를 포함할 수 있다. 연성캡슐에는 활성 화합물은 지방 오일, 액체 파라핀, 또는 액체 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적절한 액체에 용해시키거나 현탁시킬 수 있다. 또한 안정제가 추가될 수 있다. 경구 투여용 모든 조성물은 이와 같은 투여에 적합한 약형이 될 수 있다.Pharmaceutical compositions that can be used orally include push-fit capsules made of gelatin and soft capsules made of plasticizers such as gelatin and glycerol or sorbitol. Push-fit capsules may include the active ingredient and fillers such as lactose, binders such as starch, lubricants such as talc or magnesium stearate or, optionally, stabilizers. In soft capsules, the active compounds may be dissolved or suspended in suitable liquids, such as fatty oils, liquid paraffin, or liquid polyethylene glycols. Stabilizers may also be added. All compositions for oral administration may be in dosage forms suitable for such administration.

볼에 투여시에는 통상의 방식으로 조제된 정제 또는 당과의 형태가 될 수 있다.When administered to the cheek, it may be in the form of a tablet or a sugar prepared in a conventional manner.

흡입에 의해 투여할 때에는, 본 발명에 따라 이용에 사용할 화합물은 적절한 추진제 예를 들면 디클로로디플로로메탄, 트리클로로플로로메탄, 디클로로테트라플로로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적절한 기체를 사용하여 가압된 팩 또는 분무기로부터 에어로졸 분무형으로 통상 수송될 수 있다. 가압된 에어로졸의 경우에, 약형 단위는 측정된 양을 수송하기 위해 벨브를 제공하여 결정된다. 흡입기 또는 분무기에서 사용하기 위한 겔라틴 캡슐과 카트릿지는 락토즈 또는 전분과 같은 적절한 분말과 화합물의 혼합 분말을 포함하도록 조제된다.When administered by inhalation, the compounds to be used for use according to the invention are pressurized packs using suitable propellants such as dichlorodifluoromethane, trichlorofluoromethane, dichlorotetrafluoroethane, carbon dioxide or other suitable gas. Or from a nebulizer, usually in an aerosol spray form. In the case of a pressurized aerosol, the weak unit is determined by providing a valve to transport the measured amount. Gelatin capsules and cartridges for use in an inhaler or nebulizer are formulated to contain a mixture of a suitable powder and compound, such as lactose or starch.

볼 투여 또는 연속주입에 의해 비경구 투여용으로 화합물이 조제될 수 있다. 주사용 조성물은 앰플 또는 다중 약량 용기형과 같은 단위 약형으로 제시될 수 있다. 조성물은 현탁액, 용액 또는 오일 또는 수용성 담체에 유제와 같은 형태가 될 수 있고 현탁제, 안정제, 분산제와 같은 조성제가 포함될 수 있다.The compound may be formulated for parenteral administration by buccal administration or continuous infusion. Injectable compositions may be presented in unit dosage form, such as in ampoules or in multidose form. The composition may be in the form of an emulsion in suspension, solution or oil or in an aqueous carrier, and may include composition agents such as suspending agents, stabilizers, dispersants.

비경구 투여용 제약학적 조성물에는 수용형태의 활성 화합물의 용액을 포함한다. 또는, 활성 화합물의 현탁액은 적절한 오일 주입 현탁액으로 만들어질 수 있다. 적절한 친지성 용매 또는 담체에는 참깨 오일과 같은 지방 오일 또는 에틸 올레이트 또는 트리글리세리드 또는 리포좀과 같은 합성 지방산 에스테르를 포함한다. 수용성 주사 현탁액에는 상당히 농축된 용액의 준비를 허용하는 화합물의 용해도를 증가시키는 적절한 안정화제 또는 물질을 포함할 수 있다.Pharmaceutical compositions for parenteral administration include solutions of the active compounds in aqueous form. Alternatively, suspensions of the active compounds may be made of suitable oil injection suspensions. Suitable lipophilic solvents or carriers include fatty oils such as sesame oil or synthetic fatty acid esters such as ethyl oleate or triglycerides or liposomes. Aqueous injection suspensions may contain suitable stabilizers or substances that increase the solubility of the compounds that allow for the preparation of significantly concentrated solutions.

또는 활성 성분은 멸균 발열물질없는 물과 같은 적절한 운반체로 사용하기 전에 구성될 수 있는 분말형이 될 수 있다.Alternatively, the active ingredient may be in powder form, which may be formulated before use in a suitable vehicle, such as sterile pyrogen-free water.

화합물은 코코아 버터 또는 다른 글리세리드와 같은 통상적인 좌약 베이스를 포함하는 좌약 또는 관장제와 같은 직장 조성물로 조제될 수 있다.The compounds may be formulated in rectal compositions such as suppositories or enemas, including conventional suppository bases such as cocoa butter or other glycerides.

전술한 조성물에 추가하여, 데포트 조제물로도 만들어질 수 있다. 이와 같은 장기간 활성 조성물은 이식(예를 들면, 피하 또는 근육내) 또는 근육주사에 의해 투여될 수 있다. 따라서, 예를 들면, 화합물은 적절한 고분자 또는 소수성 물질(예를 들면 수용가능한 오일에 현탁액) 또는 이온 교환 수지 또는 분무할 수 있는 용해유도체 또는 염으로 제조될 수 있다.In addition to the compositions described above, it may also be made as a depot preparation. Such long acting compositions can be administered by implantation (eg, subcutaneously or intramuscularly) or by intramuscular injection. Thus, for example, the compounds may be prepared from suitable polymers or hydrophobic materials (eg, suspensions in acceptable oils) or ion exchange resins or sprayable solubilizers or salts.

본 발명의 소수성화합물에 사용할 수 있는 제약학적 담체에는 벤질 알코올, 비극성 계면활성제, 물과 혼합되지 않는 유기 고분자와 수용상으로 구성된 공용매 시스템이다. 공용매 시스템은 VPD 공용매 시스템이 될 수 있다. VPD는 3% w/v 벤질 알코올, 8% w/v 비극성 계면활성제 폴리솔베이트 80과 65% w/v 폴리에틸렌 글리콜 300과 나머지 용적은 순수 에탄올로 채운 용액이다. VPD 공용매 시스템(VPD:5W)은 수용액에서 5% 덱스트로즈와 1:1로 희석된 VPV로 구성된다. 이와 같은 공용매 시스템은 용해도와 독성 특징의 변화없이 상당히 변화시킬 수 있다. 또한 공용매 성분의 상태는 상당히 다양할 수 있는데: 예를 들면, 폴리솔베이트 80 대신에 독성이 낮은 비극성 계면활성제가 이용될 수 있고; 폴리에틸렌 글리콜의 분별 크기도 변화될 수 있고; 다른 생체적응성이 있는 고분자가 폴리에틸렌 글리콜 예를 들면, 폴리비닐 피롤리돈으로 대체될 수 있고; 다른 당 또는 폴리사카라이드도 덱스트로즈대신에 사용될 수 있다.Pharmaceutical carriers that can be used in the hydrophobic compounds of the present invention are cosolvent systems consisting of benzyl alcohol, nonpolar surfactants, organic polymers that are incompatible with water and the aqueous phase. The cosolvent system may be a VPD cosolvent system. VPD is a solution filled with 3% w / v benzyl alcohol, 8% w / v nonpolar surfactant polysorbate 80 and 65% w / v polyethylene glycol 300 and the remaining volume is pure ethanol. The VPD cosolvent system (VPD: 5W) consists of VPV diluted 1: 1 with 5% dextrose in aqueous solution. Such cosolvent systems can change significantly without changing solubility and toxicity characteristics. In addition, the state of the cosolvent component can vary significantly: for example, low toxicity nonpolar surfactants can be used in place of Polysorbate 80; The fractional size of polyethylene glycol can also vary; Other biocompatible polymers may be replaced with polyethylene glycols such as polyvinyl pyrrolidone; Other sugars or polysaccharides may also be used instead of dextrose.

또는 소수성 제약학적 화합물의 다른 수송 시스템이 이용될 수 있다. 소수성 약물을 위한 수송 담체 또는 운반체로는 리포좀과 유제가 공지되어 있다. 디메틸설폭시드와 같은 특정 유기용매가 이용될 수 있는데 통상 독성이 더 크다. 또한, 치료제를 포함하는 고형 소수성 고분자의 반투성 매트릭스와 같은 서방형 시스템을 이용하여 화합물을 이용할 수 있다. 다양한 서방형 물질이 알려져 있고 이는 본 기술에 숙지된 기술을 가진 자에게 공지되어 있다. 화학적 특징에 따라 서방형 캡슐은 수주에서 최고 100일까지 화합물을 방출한다.Or other transport systems of hydrophobic pharmaceutical compounds may be used. Liposomes and emulsions are known as transporting carriers or carriers for hydrophobic drugs. Certain organic solvents, such as dimethylsulfoxide, may be used and are generally more toxic. In addition, the compounds may be utilized using sustained release systems such as semipermeable matrices of solid hydrophobic polymers containing the therapeutic agent. Various sustained release materials are known and are known to those of skill in the art. Depending on the chemical nature, the sustained release capsule releases the compound from several weeks up to 100 days.

치료요법제의 화학적 특징과 생물학적 안정성에 따라 단백질 안정을 위한 추가 전략이 이용될 수 있다.Additional strategies for protein stabilization may be used depending on the chemical properties and biological stability of the therapy.

제약학적 조성물에는 적절한 고형 또는 겔상태의 담체 또는 부형제로 구성된다. 이와 같은 담체 또는 부형제의 예로는 탄산 칼슘, 인산 칼슘, 다양한 당, 전분, 셀룰로오즈 유도체, 겔라틴과 폴리에틸렌 글리콜과 같은 고분자 등을 포함하나 이에 한정시키지는 않는다.Pharmaceutical compositions consist of a suitable solid or gel carrier or excipient. Examples of such carriers or excipients include, but are not limited to, calcium carbonate, calcium phosphate, various sugars, starches, cellulose derivatives, polymers such as gelatin and polyethylene glycol.

본 발명의 C-프로테나제 저해 화합물의 대부분이 제약학적 적용가능한 짝이온과 염으로 제공될 수 있다. 이와 같은 제약학적 수용가능한 염 추가염은 수산화 나트륨, 수산화 마그네슘, 암모니아, 트리알킬아민, 디알킬아민, 모노알킬아민, 이염기성 아미노산, 아세테이트 나트륨, 벤조에이트 칼슘, 트리에탄올 아민과 같은 유기 또는 무기염기와 반응시켜 수득할 수 있는 자유산의 성질과 생물학적 효과를 보유한 염이다.Most of the C-proteinase inhibitory compounds of the invention can be provided as pharmaceutically applicable counterions and salts. Such pharmaceutically acceptable salt addition salts include organic or inorganic bases such as sodium hydroxide, magnesium hydroxide, ammonia, trialkylamines, dialkylamines, monoalkylamines, dibasic amino acids, acetate sodium, benzoate calcium, triethanol amines and the like. Salts possessing the properties and biological effects of free acids obtainable by reaction.

5.3.3. 효과적인 약량5.3.3. Effective dosage

본 발명에 이용할 수 있는 제약학적 조성물에는 소요의 목적을 얻는데 효과적인 활성 성분을 포함하는 조성물을 가진다. 특히, 치료요법적 효과량은 치료될 개체의 기존 증상을 경감시키거나 또는 발전을 막는 효과량을 의미한다. 효과량의 결정은 본 기술분야에 숙지의 지식을 가진 자의 능력에 따라 이루어지고 이는 여기에서 제공한 것에 포함된다.Pharmaceutical compositions that can be used in the present invention have a composition comprising the active ingredient effective to achieve the desired purpose. In particular, a therapeutically effective amount means an amount effective to alleviate or prevent the development of existing symptoms of the individual to be treated. Determination of the effective amount is made according to the ability of those skilled in the art and is included here as provided.

본 발명의 방법에 이용된 화합물에서 치료요법적 효과량은 세포 배양검사에서 우선 평가한다. 예를 들면, 세포배양에서 결정된 것과 같이 IC₅₀을 포함하는 계산된 농도 범위를 얻기 위해 동물 모델에서 만들어질 수 있다(예를 들면, C-프로테나제 활성의 최대저해의 ½을 얻는 테스트 화합물의 농도). 이와 같은 정보는 사람에서 사용할 수 있는 좀더 정확한 약량을 결정하는데 이용될 수 있다.Therapeutic effective amounts in the compounds used in the methods of the invention are first evaluated in cell culture assays. For example, it can be made in an animal model to obtain a calculated range of concentrations including IC ₅₀ as determined in cell culture (e.g., of test compounds to obtain ½ of the maximal inhibition of C-proteinase activity). density). Such information can be used to determine more accurate doses available to humans.

치료 효과적 약량은 환자에서 생존 연장 또는 증상을 감소시키는 화합물의 양을 말한다. 이와 같은 화합물의 독성과 치료 효과는 LD₅₀(집단의 50%를 치사시킬 수 있는 약량)과 ED₅₀(집단의 50%에 효과가 있는 약량)을 결정하기 위해 세포 배양물 또는 실험동물에서 표준 제약학적 과정에 의해 결정될 수 있다. 독성과 치료요법적 효과사이에 약량 비율은 치료요법적 색인으로 이는 LD₅₀과 ED₅₀사이에 비율로 나타낸다. 높은 치료요법 지수를 가지는 화합물이 효과적이다. 이와 같은 세포 배양검사와 동물연구에서 수득된 데이타는 사람에서 사용할 수 있는 약량범위에서 조제될 수 있다. 이와 같은 화합물의 약량은 독성이 없거나 약한 ED₅₀을 포함하는 순환 농도범위내에 있는 것이 적절하다. 약량은 이용된 약형과 이용된 투여경로에 따라 이 범위내에서 다양하다. 정확한 제형, 투여 경로와 약량은 환자의 상태에 따라 각 주치의가 선택한다(Fingl et al., 1975, in "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch. 1 p.1).A therapeutically effective dose refers to the amount of a compound that prolongs survival or reduces symptoms in a patient. Toxicity and therapeutic effects of these compounds are standard pharmaceuticals in cell culture or laboratory animals to determine LD ₅₀ (a dose that can kill 50% of the population) and ED ₅₀ (a dose that is effective for 50% of the population). Can be determined by a pharmacological process. The dose ratio between toxic and therapeutic effects is the therapeutic index, which is expressed as the ratio between LD ₅₀ and ED ₅₀ . Compounds with high therapeutic indices are effective. Data obtained from such cell culture assays and animal studies can be prepared in the dosage range that can be used in humans. It is appropriate that a dose of such a compound is within a range of circulating concentrations that include non-toxic or weak ED ₅₀ . The dosage will vary within this range depending on the dosage form employed and the route of administration utilized. The exact formulation, route of administration and dosage are selected by the attending physician according to the patient's condition (Fingl et al., 1975, in "The Pharmacological Basis of Therapeutics", Ch. 1 p.1).

약량과 투여간격은 C-프로테나제 저해 효과를 유지하고 또는 최소 효과 농도(MEC)를 가지기에 충분한 혈장 활성 수준을 제공하기 위해 개별적으로 조정할 수 있다. MEC는 각 화합물마다 다양하나 시험관 데이타로부터 평가할 수 있다. 예를 들면, 여기에서 상술하는 검사를 이용하여 50-90% C-프로테나제를 저해시키기 위한 필수 농도이다. MEC를 얻는데 필수적인 약량은 각 개인의 특징과 투여경로에 따라 달라진다. 그러나, HPLC 검사 또는 생체검사를 이용하여 혈장농도를 결정할 수 있다.Dosage and dosing intervals can be adjusted individually to maintain a C-proteinase inhibitory effect or to provide sufficient plasma activity levels to have a minimum effect concentration (MEC). MEC varies for each compound but can be evaluated from in vitro data. For example, it is the essential concentration for inhibiting 50-90% C-proteinase using the tests detailed herein. Dosages necessary to obtain a MEC will depend on the individual's characteristics and route of administration. However, plasma concentrations can be determined using HPLC or biopsy.

투여 간격은 MEC 값을 이용하여 결정한다. 화합물은 시간의 10-90%, 적절하게는 30-90%, 가장 적절하게는 50-90%동안 MEC이상의 혈장 수준을 유지하는 방법을 이용하여 투여시킨다.Dosage intervals are determined using MEC values. The compound is administered using a method that maintains plasma levels above MEC for 10-90%, suitably 30-90%, most suitably 50-90% of the time.

국소 투여 또는 선별 취득의 경우에, 약물의 효과적인 국소농도는 혈장농도와는 무관하다.In the case of topical administration or screening acquisition, the effective local concentration of the drug is independent of the plasma concentration.

투여된 조성물의 양은 치료받는 개인, 개인체중, 상태의 심각성, 투여방법 및 의사의 판단에 따라 다양해질 수 있다.The amount of the administered composition can vary depending on the individual being treated, the weight of the individual, the severity of the condition, the method of administration and the judgment of the physician.

5.3.4. 포장5.3.4. Packing

필요에 따라 조성물은 활성 성분을 포함하는 하나이상의 단위 약형을 포함하는 포장 또는 투여장치에 제공될 수 있다. 예를 들어 팩은 금속 또는 수포 팩과 같은 플라스틱 호일로 구성된다. 팩 또는 분배장치는 투여지시에 의해 이루어진다. 제약학적 수용가능한 담체내에 조성된 본 발명의 화합물로 구성된 조성물은 적절히 제조되어, 적정 용기내에 위치시키고, 지시된 조건의 치료용임을 알린다. 라벨에 표시된 적절한 지시에는 관절염 또는 다른 섬유증 질환의 치료를 포함한다.If desired, the composition may be provided in a package or device containing one or more unit dosage forms containing the active ingredient. For example, the pack consists of a plastic foil such as a metal or blister pack. The pack or dispenser is made by instructions for administration. Compositions composed of the compounds of the present invention formulated in a pharmaceutically acceptable carrier are suitably prepared, placed in a suitable container, and indicated for the treatment of the indicated conditions. Appropriate indications on the label include treatment of arthritis or other fibrotic diseases.

Claims

C-프로테나제에 저해 활성을 가지는 화합물에 있어서, 이때, 화합물은 다음의 화학식을 가지거나 이의 제약학적 수용가능한 염인 것을 특징으로 하는 화합물.A compound having inhibitory activity against C-proteinase, wherein the compound has the formula or a pharmaceutically acceptable salt thereof.

X는 SO₂, C=O 에서 선택되고;X is selected from SO ₂ , C═O;

n은 0 또는 1이다.n is 0 or 1;

X는 N, C에서 선택되고,X is selected from N, C,

제 1 항에 있어서, 화합물은 다음의 화학식을 가지거나 이의 제약학적 수용 가능한 염으로 구성된 것을 특징으로 하는 화합물.The compound of claim 1, wherein the compound has the formula or consists of a pharmaceutically acceptable salt thereof.

하기의 화학식에서 선택된 화합물로 구성된 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.Pharmaceutical composition, characterized in that consisting of a compound selected from the formula:

a)a)

X는 SO₂, C=O 에서 선택되고;X is selected from SO ₂ , C═O;

n은 0 또는 1이다; 또는n is 0 or 1; or

b)b)

c)c)

d)d)

e)e)

X는 N, C에서 선택되고,X is selected from N, C,

다음의 화학식으로 된 화합물에서 선택된 화합물과 제약학적 수용가능한 부형제 또는 담체로 구성된 것을 특징으로 하는 제약학적 조성물.A pharmaceutical composition comprising a compound selected from compounds of the formula: and a pharmaceutically acceptable excipient or carrier.

a)a)

또는or

b)b)

또는or

c)c)

또는or

d)d)

또는or

e)e)

또는or

f)f)

또는or

g)g)

또는or

h)h)

또는or

i)i)

또는or

j)j)

또는or

k)k)

또는or

l)l)

또는or

m)m)

콜라겐의 부적절한 생산과 연관된 질병을 치료하는 방법에 있어서, 제 20항에 따른 화합물의 효과량을 투여하는 것을 구성된 것을 특징으로 하는 치료 방법.A method of treating a disease associated with improper production of collagen, comprising administering an effective amount of the compound according to claim 20.

콜라겐의 부적절한 생산과 연관된 질병을 치료하는 방법에 있어서, 제 21에 따른 화합물의 효과량을 투여하는 것을 구성된 것을 특징으로 하는 치료 방법.A method for treating a disease associated with improper production of collagen, comprising administering an effective amount of the compound according to claim 21.

제 22 항에 있어서 섬유증 질환은 간 경화증과 관절명에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.23. The method of claim 22, wherein the fibrosis disease is selected from liver cirrhosis and joint name.

제 23 항에 있어서 섬유증 질환은 간 경화증과 관절명에서 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.24. The method of claim 23, wherein the fibrosis disease is selected from liver cirrhosis and joint name.