JPWO2019138899A1 - 測定試料希釈液およびキットおよび測定方法 - Google Patents
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Abstract
Description
1. 測定試料中のヘモグロビンA1c量のヘモグロビン量に対する割合であるヘモグロビンA1c(%)を定量するためのイムノクロマト用測定試料希釈液であって、陰イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤および緩衝剤を含む水溶液である、測定試料希釈液。
2. 前記陰イオン性界面活性剤はアルキル硫酸塩である、1に記載の測定試料希釈液。
3. 前記非イオン性界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルである、1または2に記載の測定試料希釈液。
4. 前記非イオン性界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルおよびポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルの混合物である、1または2に記載の測定試料希釈液。
5. 前記陰イオン性界面活性剤を0.05〜2.0wt%、かつ前記非イオン性界面活性剤を0.05〜3.0wt%含む、1から4のいずれかに記載の測定試料希釈液。
6. さらに酸化剤を含む、1から5のいずれかに記載の測定試料希釈液。
7. 前記酸化剤は亜硝酸塩である、6に記載の測定試料希釈液。
8. さらにアジ化剤を含む、1から7のいずれかに記載の測定試料希釈液。
9. 前記アジ化剤はアジ化ナトリウムである、8に記載の測定試料希釈液。
10. 1から9のいずれかに記載の測定試料希釈液、イムノクロマト試験片、およびイムノクロマトリーダーからなる、ヘモグロビンA1c量のヘモグロビン量に対する割合を定量するための測定キット。
11. 前記イムノクロマト試験片は、
(1)サンプルパッドと、
(2)前記測定試料中のヘモグロビンまたはヘモグロビンA1cを捕捉するための抗体とセルロース粒子との複合体を坦持したコンジュゲーションパッドと、
(3)測定試料中のヘモグロビンまたはヘモグロビンA1cを特異的に捕捉するための抗体を線状に固定したメンブレンと、
(4)吸収パッドと、
から構成される、10に記載の測定キット。
12. 1から11のいずれかに記載の測定試料希釈液または測定キットを用い、少なくとも下記工程(i)から(iii)をこの順に経て、測定試料中のヘモグロビンA1c量のヘモグロビン量に対する割合を定量する方法。
工程(i):測定試料と測定試料希釈液とを体積比1:49〜1:999で混合し希釈する工程
工程(ii):工程(i)の混合液を、イムノクロマト試験片のサンプルパッドに滴下する工程
工程(iii):イムノクロマト試験片のテストラインの反射吸光度とコントロールラインの反射吸光度とからヘモグロビンA1c量のヘモグロビン量に対する割合を比色定量する工程
13. 測定試料と測定試料希釈液とを体積比1:99〜1:499で混合し希釈する、12に記載の方法。
(1)HbA1c測定用テストライン検出試薬の調製
8.57mg/mLの抗HbA1cモノクローナル抗体(HbA1c Antibody、OAMA02329、AVIVA SYSTEM BIOLOGY社製)を蒸留水(大塚蒸留水、大塚製薬社製)で1.0mg/mLに調製した。次いで、1.0wt%のセルロース粒子(NanoAct(登録商標)、BL2:Dark Navy、平均粒子径365nm、旭化成社製)100μL、10mMのトリス緩衝液(204−07885、和光純薬工業社製)(pH7.0)900μL、および前記1.0mg/mL(0.1wt%)の抗HbA1cモノクローナル抗体100μLを15mLの遠沈管に加え、ボルテックスで撹拌した。次いで、37℃に調整した低温インキュベーター(IN604、ヤマト科学社製)に入れ120分間静置した。次いで、1.0wt%のカゼイン(030−01505、和光純薬工業社製)、100mMのホウ酸緩衝液(021−02195、和光純薬工業社製)からなるブロッキング液(pH8.0)12mLを加え、さらに37℃に調整した低温インキュベーター(IN604、ヤマト科学社製)で60分間静置した。次いで、遠心分離機(MX−307、トミー精工社製)とラックインローター(TMA−300、トミー精工社製)とラック(AR510−04、トミー精工社製)を用い、10,000Gの遠心を25℃で15分間行い、抗体感作セルロース粒子を沈降させた後に上澄みを除去した。次いで、50mMのホウ酸緩衝液(021−02195、和光純薬工業社製)からなる洗浄液(pH10.0)12mLを加え、超音波分散機(UH−50、エスエムテー社製)で10秒間処理した。次いで、遠心分離機(MX−307、トミー精工社製)とラックインローター(TMA−300、トミー精工社製)とラック(AR510−04、トミー精工社製)を用い、10,000Gの遠心を25℃で15分間行い、抗体感作セルロース粒子を沈降させた後に上澄みを除去した。次いで、15wt%のスクロース(196−00015、和光純薬工業社製)、0.2wt%のカゼイン(030−01505、和光純薬工業社製)、62mMのホウ酸緩衝液(021−02195、和光純薬工業社製)からなる塗布液(pH9.2)2.0mLを加え、超音波分散機(UH−50、エスエムテー社製)で10秒間処理し、HbA1c測定用テストライン検出試薬を得た。なお、前記HbA1c測定用テストライン検出試薬中の検出粒子濃度は0.5mg/mL(0.05wt%)、抗体濃度は0.05mg/mL(0.005wt%)であった。
Dビオチン(04822−91、ナカライテスク社製)16mg、およびジメチルスルホキシド:DMSO(08904−14、ナカライテスク社製)1000μLを1.5mLマイクロチューブに加え、ボルテックスで撹拌し、Dビオチン溶液を得た。次いで、1−エチル−3−(3−ジメチルアミノプロピル)カルボジイミド塩酸塩:EDC(15022−86、ナカライテスク社製)20mg、N−ヒドロキシスクシンイミド:NHS(18948−02、ナカライテスク社製)20mg、および蒸留水(大塚蒸留水、大塚製薬社製)100μLを1.5mLマイクロチューブに加え、ボルテックスで撹拌し、EDC/NHS溶液を得た。次いで、前記Dビオチン溶液100μLおよび前記EDC/NHS溶液100μLを混合した後、25℃に調整した低温インキュベーター(IN604、ヤマト科学社製)に入れ15分間静置し、Dビオチン/EDC/NHS溶液を得た。次いで、Blocking Peptide Fragment:BPF(BPF−301、東洋紡社製)10mg、および蒸留水(大塚蒸留水、大塚製薬社製)100μLを1.5mLマイクロチューブに加え、ボルテックスで撹拌し、BPF溶液を得た。次いで、前記Dビオチン/EDC/NHS溶液100μLと前記BPF溶液100μLを混合した後、25℃に調整した低温インキュベーター(IN604、ヤマト科学社製)に入れ30分間静置し、Dビオチン−BPF溶液を得た。次いで、1.0wt%のセルロース粒子(NanoAct(登録商標)、BL2:Dark Navy、平均粒子径365nm、旭化成社製)100μL、10mMのトリス緩衝液(204−07885、和光純薬工業社製)(PH7.0)900μL、および前記Dビオチンン−BPF溶液100μLを15mLの遠沈管に加え、ボルテックスで撹拌した。次いで、37℃に調整した低温インキュベーター(IN604、ヤマト科学社製)に入れ120分間静置した。次いで、1.0wt%のカゼイン(030−01505、和光純薬工業社製)、100mMのホウ酸緩衝液(021−02195、和光純薬工業社製)からなるブロッキング液(pH8.0)12mLを加え、さらに37℃に調整した低温インキュベーター(IN604、ヤマト科学社製)で60分間静置した。次いで、遠心分離機(MX−307、トミー精工社製)とラックインローター(TMA−300、トミー精工社製)とラック(AR510−04、トミー精工社製)を用い、10,000Gの遠心を25℃で15分間行い、Dビオチン感作セルロース粒子を沈降させた後に上澄みを除去した。次いで、50mMのホウ酸緩衝液(021−02195、和光純薬工業社製)からなる洗浄液(pH10.0)12mLを加え、超音波分散機(UH−50、エスエムテー社製)で10秒間処理した。次いで、遠心分離機(MX−307、トミー精工社製)とラックインローター(TMA−300、トミー精工社製)とラック(AR510−04、トミー精工社製)を用い、10,000Gの遠心を25℃で15分間行い、Dビオチン感作セルロース粒子を沈降させた後に上澄みを除去した。次いで、15wt%のスクロース(196−00015、和光純薬工業社製)、0.2wt%のカゼイン(030−01505、和光純薬工業社製)、62mMのホウ酸緩衝液(021−02195、和光純薬工業社製)からなる塗布液(pH9.2)2.0mLを加え、超音波分散機(UH−50、エスエムテー社製)で10秒間処理し、HbA1c測定用コントロールライン検出試薬を得た。なお、前記HbA1c測定用コントロールライン検出試薬中の検出粒子濃度は0.5mg/mL(0.05wt%)、ブロッキング用タンパク質の標識導入比は1:7であった。
3.6mg/mLの抗Hbモノクローナル抗体(HBA1 Antibody、OAMA02326、AVIVA SYSTEM BIOLOGY社製)を蒸留水(大塚蒸留水、大塚製薬社製)で1.0mg/mLに調製した。次いで、1.0mg/mLの抗ビオチンポリクローナル抗体(Biotin Antibody、A150−111A、BETHYL社製)を蒸留水(大塚蒸留水、大塚製薬社製)で0.5mg/mLに調製した。次いで、上流側に20mm×300mmの粘着テープ部、中央に25mm×300mmのメンブレン部、下流側に15mm×300mmの粘着テープ部から構成される60mm×300mmのメンブレンカード(Hi−Flow Plus 120 Membrane Cards、HF120、Millipore社製)のメンブレン部の上流側から15mmの位置に、分注プラットフォーム(XYZ3060、BIODOT社製)と、Bio Jetノズル(BHQHR−XYZ、BIODOT社製)を用い、前記1.0mg/mLの抗Hbモノクローナル抗体を1.0μL/cmの塗布量で塗布した後、45℃に調整した乾燥機(WFO−510、東京理化器械社製)で30分間乾燥し、ライン幅約1mmのテストラインを形成した。さらに、前記テストラインを形成したメンブレンカードのメンブレン部の上流側から20mmの位置に、分注プラットフォーム(XYZ3060、BIODOT社製)と、Bio Jetノズル(BHQHR−XYZ、BIODOT社製)を用い、前記0.5mg/mLの抗ビオチンポリクローナル抗体を1.0μL/cmの塗布量で塗布した後、45℃に調整した乾燥機(WFO−510、東京理化器械社製)で30分間乾燥し、ライン幅約1mmのコントロールラインを形成することで、HbA1c測定用メンブレンカードを得た。
前記HbA1c測定用テストライン検出試薬および前記HbA1c測定用コントロールライン検出試薬を、6:1の割合(質量比)で混合した。なお、HbA1c測定用テストライン検出試薬およびHbA1c測定用コントロールライン検出試薬中の粒子濃度が同一である場合は、体積比6:1の割合で混合すればよい。次いで、10mm×300mmのコンジュゲーションパッド(GLASSFIBER DIAGNOSTIC PAD、GFDX001050、Millipore社製)の全面に、分注プラットフォーム(XYZ3060、BIODOT社製)と、Air Jetノズル(AJQHR−XYZ、BIODOT社製)を用い、前記混合液を15μL/cmの塗布量で均一に塗布した後、45℃に調整した乾燥機(WFO−510、東京理化器械社製)で30分間乾燥し、HbA1c測定用コンジュゲーションパッドを得た。
前記HbA1c測定用メンブレンカードの上流側の20mm×300mmの粘着テープ部に、メンブレン部と5mm重なるよう前記HbA1c測定用コンジュゲーションパッドを貼り合わせた。次いで、さらに上流側に前記コンジュゲーションパッドと5mm重なるよう20mm×300mmのサンプルパッド(CELLULOSE FIBER SAMPLE PADS、CFSP002000、Millipore社製)を貼り合わせた。次いで、前記HbA1c測定用メンブレンカードの下流側の15mm×300mmの粘着テープ部に、メンブレン部と2mm重なるよう20mm×300mmの吸収パッド(CELLULOSE FIBER SAMPLE PADS、CFSP002000、Millipore社製)を貼り合わせた。次いで、ギロチン式カッティングモジュール(CM5000、BIODOT社製)を用い、幅4mm、長さ63mmの短冊状にカットすることで、HbA1c測定用イムノクロマト試験片を得た。
りん酸緩衝生理食塩粉末(162−19321、和光純薬工業社製)1袋、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート:Tween(登録商標)20(166−21213、和光純薬工業社製)2.0g、ドデシル硫酸ナトリウム:SDS(194−13985、和光純薬工業社製)1.0g、亜硝酸ナトリウム(199−02565、和光純薬工業社製)0.2g、アジ化ナトリウム(199−11095、和光純薬工業社製)0.2gを蒸留水(大塚蒸留水、大塚製薬社製)150mLに溶解し、蒸留水(大塚蒸留水、大塚製薬社製)で200mLにメスアップした後、500mLガラス瓶に移し、測定試料希釈液(50mM PBS、1.0wt%Tween20、0.5wt%SDS、0.1wt%亜硝酸ナトリウム、0.1wt%アジ化ナトリウム)を調製した。
市販のHbA1c標準物質であるHbA1c測定性能評価用試料(QRM HbA1c 2007−1、検査医学標準物質機構社製、L1〜L5の5水準)を、それぞれ前記測定試料希釈液にて500倍に希釈することで、HbA1c(%)がL1=5.01%、L2=5.65%、L3=7.35%、L4=9.51%、L5=11.26%で、かつHb濃度がL1〜L5=0.280g/Lの希釈HbA1c試料(L1〜L5)を得た。
前記HbA1c測定用イムノクロマト試験片を水平な台に設置した。次いで、混合時間が10秒間の前記希釈HbA1c試料(L1、L4)100μLを、マイクロピペットで分取し、サンプルパッドに緩やかに滴下し、25℃で10分間静置した。次いで、メンブレン上のコントロールラインおよびテストラインの反射吸光度(mAbs)をイムノクロマトリーダー(C10060−10、測定モード:Latex、Line、浜松ホトニクス社製)を用いて測定した。前記実験操作を前記希釈HbA1c試料(L1、L4)に対してそれぞれN=10(合計で前記HbA1c測定用イムノクロマト試験片を20本使用)で行った。感度の指標として、前記希釈HbA1c試料(L4)のテストラインの反射吸光度(mAbs)のN=10平均値と、前記希釈HbA1c試料(L1)のテストラインの反射吸光度(mAbs)のN=10平均値との差:ΔL4−L1(mAbs)を算出し、ΔL4−L1≧180mAbsを3点(excellent)、150mAbs≦ΔL4−L1<180mAbsを2点(good)、100mAbs≦ΔL4−L1<150mAbsを1点(average)、ΔL4−L1<100mAbsを0点(bad)と評価した。実施例1のHbA1c測定用イムノクロマト試験片の感度はΔL4−L1=170mAbsで2点と、高感度な測定が可能であった。
前記HbA1c測定用イムノクロマト試験片を水平な台に設置した。次いで、混合時間が10秒間の前記希釈HbA1c試料(L1、L4)100μLを、マイクロピペットで分取し、サンプルパッドに緩やかに滴下し、25℃で10分間静置した。次いで、メンブレン上のコントロールラインおよびテストラインの反射吸光度(mAbs)をイムノクロマトリーダー(C10060−10、測定モード:Latex、Line、浜松ホトニクス社製)を用いて測定した。前記実験操作を前記希釈HbA1c試料(L1、L4)に対してそれぞれN=10(合計で前記HbA1c測定用イムノクロマト試験片を20本使用)で行った。精度の指標として、前記希釈HbA1c試料(L1、L4)のテストラインの反射吸光度(mAbs)をコントロールラインの反射吸光度(mAbs)で割算した補正値(L1、L4)をそれぞれ算出した後、得られた補正値(L1、L4)のN=10におけるCV(L1、L4)(%)をそれぞれ算出し、さらにCV(L1)(%)とCV(L4)(%)との平均値:CV(%)を算出し、CV<3%を3点(excellent)、3%≦CV<5%を2点(good)、5%≦CV<10%を1点(average)、CV≧10%を0点(bad)と評価した。実施例1のHbA1c測定用イムノクロマト試験片の精度はCV=3.3%で2点と、高精度な測定が可能であった。
前記HbA1c測定用イムノクロマト試験片を水平な台に設置した。次いで、混合時間が10秒間の前記希釈HbA1c試料(L1〜L5)100μLを、マイクロピペットで分取し、サンプルパッドに緩やかに滴下し、25℃で10分間静置した。次いで、メンブレン上のコントロールラインおよびテストラインの反射吸光度(mAbs)をイムノクロマトリーダー(C10060−10、測定モード:Latex、Line、浜松ホトニクス社製)を用いて測定した。前記実験操作を前記希釈HbA1c試料(L1〜L5)に対してそれぞれN=10(合計で前記HbA1c測定用イムノクロマト試験片を50本使用)で行った。相関性の指標として、前記希釈HbA1c試料(L1〜L5)のテストラインの反射吸光度(mAbs)をコントロールラインの反射吸光度(mAbs)で割算した補正値(L1〜L5)をそれぞれ算出した後、得られた補正値(L1〜L5)と、前記希釈HbA1c試料(L1〜L5)のHbA1c(%)、L1=5.01%、L2=5.65%、L3=7.35%、L4=9.51%、L5=11.26%とのピアソン相関係数:rを算出し、r≧0.95を3点(excellent)、0.90≦r<095を2点(good)、0.85≦r<0.90を1点(average)、r<0.85を0点(bad)と評価した。実施例1のHbA1c測定用イムノクロマト試験片の相関性はr=0.96で3点と、HbA1c(%)との高い相関性を有していた。
前記HbA1c測定用イムノクロマト試験片を水平な台に設置した。次いで、混合時間が10秒間および15分間の前記希釈HbA1c試料(L4)100μLを、マイクロピペットで分取し、サンプルパッドに緩やかに滴下し、25℃で10分間静置した。次いで、メンブレン上のコントロールラインおよびテストラインの反射吸光度(mAbs)をイムノクロマトリーダー(C10060−10、測定モード:Latex、Line、浜松ホトニクス社製)を用いて測定した。前記実験操作を混合時間が10秒間の希釈HbA1c試料(L4)および混合時間が15分間の希釈HbA1c試料(L4)に対してそれぞれN=10(合計で前記HbA1c測定用イムノクロマト試験片を20本使用)で行った。混合時間依存性の指標として、前記混合時間が15分間の希釈HbA1c試料(L4)のテストラインの反射吸光度(mAbs)のN=10平均値と、前記混合時間が10秒間の希釈HbA1c試料(L4)のテストラインの反射吸光度(mAbs)のN=10平均値との差:Δ15−10(mAbs)を算出し、Δ15−10≦20mAbsを3点(excellent)、20mAbs<Δ15−10≦100mAbsを2点(good)、100mAbs<Δ15−10≦200mAbsを1点(average)、Δ15−10>200mAbsを0点(bad)と評価した。実施例1のHbA1c測定用イムノクロマト試験片の混合時間依存性はΔ15−10=−10mAbsで3点と、測定試料と測定試料希釈液とを混合してからHbA1c測定用イムノクロマト試験片へ滴下するまでの時間:混合時間によるテストラインの反射吸光度の変動はほぼないことを確認した。
測定試料希釈液の組成を変更する以外は実施例1と同様にしてHbA1c測定用イムノクロマト試験片を作製し評価した。使用した測定試料希釈液の組成および得られた評価結果を表1に示す。なお、表1中のLDSはドデシル硫酸リチウム(121−02741、和光純薬工業社製)を、Tween(登録商標)80はポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノオレエート(163−21625、和光純薬工業社製)を、TritonX(登録商標)100はポリオキシエチレン(10)オクチルフェニルエーテル(160−24751、和光純薬工業社製)を、NP−40はNonidet(登録商標)P−40(23640−65、ナカライテスク社製)を、KNO2は亜硝酸カリウム(169−27325、和光純薬工業社製)を、PIPESはPIPES緩衝液(pH7.5)(28104−16、ナカライテスク社製)を、Trisはトリス緩衝液(pH7.5)(204−07885、和光純薬工業社製)をそれぞれ示す。
希釈測定試料の調製工程において、市販のHbA1c標準物質であるHbA1c測定性能評価用試料(QRM HbA1c 2007−1、検査医学標準物質機構社製、L1〜L5の5水準)を、それぞれ測定試料希釈液にて500倍に希釈する代わりに、50倍(実施例28)、100倍(実施例29)、1000倍(実施例30)、2000倍(実施例31)に希釈する以外は実施例1と同様にしてHbA1c測定用イムノクロマト試験片を作製し評価した。得られた評価結果を表1に示す。
測定試料希釈液の組成を変更する以外は実施例1と同様にしてHbA1c測定用イムノクロマト試験片を作製し評価した。使用した測定試料希釈液の組成および得られた評価結果を表2に示す。
りん酸緩衝生理食塩粉末(162−19321、和光純薬工業社製)1袋、ドデシル硫酸ナトリウム:SDS(194−13985、和光純薬工業社製)10gを蒸留水(大塚蒸留水、大塚製薬社製)150mLに溶解し、蒸留水(大塚蒸留水、大塚製薬社製)で200mLにメスアップした後、500mLガラス瓶に移し、サンプルパッド塗布液(50mM PBS、5wt%SDS)を調整した。次いで、20mm×300mmのサンプルパッド(CELLULOSE FIBER SAMPLE PADS、CFSP002000、Millipore社製)の全面に、分注プラットフォーム(XYZ3060、BIODOT社製)と、Air Jetノズル(AJQHR−XYZ、BIODOT社製)を用い、前記サンプルパッド塗布液を30μL/cmの塗布量で均一に塗布した後、45℃に調整した乾燥機(WFO−510、東京理化器械社製)で30分間乾燥し、界面活性剤を担持したサンプルパッドを得た。HbA1c測定用イムノクロマト試験片の作製工程において、20mm×300mmのサンプルパッド(CELLULOSE FIBER SAMPLE PADS、CFSP002000、Millipore社製)の代わりに前記界面活性剤を担持したサンプルパッドを使用する以外は比較例2と同様にしてHbA1c測定用イムノクロマト試験片を作製し評価した。使用した測定試料希釈液の組成および得られた評価結果を表2に示す。
りん酸緩衝生理食塩粉末(162−19321、和光純薬工業社製)1袋、ポリオキシエチレン(20)ソルビタンモノラウレート:Tween(登録商標)20(166−21213、和光純薬工業社製)20gを蒸留水(大塚蒸留水、大塚製薬社製)150mLに溶解し、蒸留水(大塚蒸留水、大塚製薬社製)で200mLにメスアップした後、500mLガラス瓶に移し、サンプルパッド塗布液(50mM PBS、10wt%Tween20)を調整した。次いで、20mm×300mmのサンプルパッド(CELLULOSE FIBER SAMPLE PADS、CFSP002000、Millipore社製)の全面に、分注プラットフォーム(XYZ3060、BIODOT社製)と、Air Jetノズル(AJQHR−XYZ、BIODOT社製)を用い、前記サンプルパッド塗布液を30μL/cmの塗布量で均一に塗布した後、45℃に調整した乾燥機(WFO−510、東京理化器械社製)で30分間乾燥し、界面活性剤を担持したサンプルパッドを得た。HbA1c測定用イムノクロマト試験片の作製工程において、20mm×300mmのサンプルパッド(CELLULOSE FIBER SAMPLE PADS、CFSP002000、Millipore社製)の代わりに前記界面活性剤を担持したサンプルパッドを使用する以外は比較例5と同様にしてHbA1c測定用イムノクロマト試験片を作製し評価した。使用した測定試料希釈液の組成および得られた評価結果を表2に示す。
2:コンジュゲーションパッド
3:メンブレン
4:吸収パッド
5:バッキングシート
6:テストライン
7:コントロールライン
8:粘着シート
Claims (13)
- 測定試料中のヘモグロビンA1c量のヘモグロビン量に対する割合であるヘモグロビンA1c(%)を定量するためのイムノクロマト用測定試料希釈液であって、陰イオン性界面活性剤、非イオン性界面活性剤および緩衝剤を含む水溶液である、測定試料希釈液。
- 前記陰イオン性界面活性剤はアルキル硫酸塩である、請求項1に記載の測定試料希釈液。
- 前記非イオン性界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルである、請求項1または2に記載の測定試料希釈液。
- 前記非イオン性界面活性剤はポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルおよびポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテルの混合物である、請求項1または2に記載の測定試料希釈液。
- 前記陰イオン性界面活性剤を0.05〜2.0wt%、かつ前記非イオン性界面活性剤を0.05〜3.0wt%含む、請求項1から4のいずれかに記載の測定試料希釈液。
- さらに酸化剤を含む、請求項1から5のいずれかに記載の測定試料希釈液。
- 前記酸化剤は亜硝酸塩である、請求項6に記載の測定試料希釈液。
- さらにアジ化剤を含む、請求項1から7のいずれかに記載の測定試料希釈液。
- 前記アジ化剤はアジ化ナトリウムである、請求項8に記載の測定試料希釈液。
- 請求項1から9のいずれかに記載の測定試料希釈液、イムノクロマト試験片、およびイムノクロマトリーダーからなる、ヘモグロビンA1c量のヘモグロビン量に対する割合を定量するための測定キット。
- 前記イムノクロマト試験片は、
(1)サンプルパッドと、
(2)前記測定試料中のヘモグロビンまたはヘモグロビンA1cを捕捉するための抗体とセルロース粒子との複合体を坦持したコンジュゲーションパッドと、
(3)測定試料中のヘモグロビンまたはヘモグロビンA1cを特異的に捕捉するための抗体を線状に固定したメンブレンと、
(4)吸収パッドと、
から構成される、請求項10に記載の測定キット。 - 請求項1から11のいずれかに記載の測定試料希釈液または測定キットを用い、少なくとも下記工程(i)から(iii)をこの順に経て、測定試料中のヘモグロビンA1c量のヘモグロビン量に対する割合を定量する方法。
工程(i):測定試料と測定試料希釈液とを体積比1:49〜1:999で混合し希釈する工程
工程(ii):工程(i)の混合液を、イムノクロマト試験片のサンプルパッドに滴下する工程
工程(iii):イムノクロマト試験片のテストラインの反射吸光度とコントロールラインの反射吸光度とからヘモグロビンA1c量のヘモグロビン量に対する割合を比色定量する工程 - 測定試料と測定試料希釈液とを体積比1:99〜1:499で混合し希釈する、請求項12に記載の方法。
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