JPWO2015118993A1 - ポリカチオン性トリブロックコポリマーとポリアニオン性ポリマーの組成物を含む癒着防止用製剤 - Google Patents
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Abstract
Description
L1は、同一または異なる連結基を表し、
L2は、独立して、−C1-6アルキレン−NH−(C1-6アルキレン)q−であり、ここでqは0または1の整数であり、そして
Rは、独立して、Rの総数nの少なくとも20%が2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル−4−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−1−オキシル−3−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリン−1−オキシル−3−イル及び2,4,4−トリメチル−1,3−オキサゾリジン−3−オキシル−2−イル、2,4,4−トリメチル−1,3−チアゾリジン−3−オキシル−2−イル及び2,4,4−トリメチル−イミダゾリンジン−3−オキシル−2−イルからなる群より選ばれる環状ニトロキシドラジカル化合物の残基を表し、存在する場合には、残りのRが水素原子、ハロゲン原子またはヒドロキシ基であり、
Yは、独立して、H、C1-6アルキルで置換されていてもよいフェニルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルオキシチオカルボニルチオまたはSHからなる群より選ばれ、
mは、独立して、3〜1,000の整数であり、そして
nは、5〜5,000の整数である。
さらに、本発明は、当該組成物においてポリアニオン性ポリマーにおけるカルボキシル基の5〜40%が蛍光性色素により修飾されている組成物に関する。
また、本発明は、当該式Iで表されるトリブロックコポリマーの一部の新規コポリマー及びそれらの合成前駆体に関する。
はじめに、本明細書において使用する技術用語は、別に定義しない限り、当該技術分野において常用されている意味、内容のものとして使用している。
<癒着>
一般的に、手術によって傷ついた正常な生体内の組織または器官同士を縫合すると、その組織または器官はくっついて自然に治癒(創傷治癒)する。しかし、治癒の過程で本来は離れているべき組織同士がくっつくことがあり、これを「術後癒着」と呼ぶが、本発明にいう癒着は、このような術後癒着を包含し、広範に、本来離れているべき組織同士や器官(臓器)若しくは組織面が外傷や炎症のためにくっついてしまう状態を意味する。生体内とは、哺乳動物、特にヒトに関するものを意図しており、患者とは哺乳動物、特にヒトを意図している。
前記式Iで表されるトリブロックコポリマーは、上式中、
各L1が、好ましくは、独立して、単結合、−S−(CH2)c−、−S−(CH2)cCO−、−(CH2)cS−、−CO(CH2)cS−、
Yが、好ましくは、Hであるか、または−SH、
Rが、独立して、Rの総数nの中、一般的には20%、好ましくは50%、より好ましくは少なくとも80%、最も好ましくは約90%以上または100%が2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル−4−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−1−オキシル−3−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリン−1−オキシル−3−イル及び2,4,4−トリメチル−1,3−オキサゾリジン−3−オキシル−2−イル、2,4,4−トリメチル−1,3−チアゾリジン−3−オキシル−2−イル及び2,4,4−トリメチル−イミダゾリンジン−3−オキシル−2−イルからなる群より選ばれる環状ニトロキシドラジカル化合物の残基を表し、存在する場合には、残りのRが水素原子、ハロゲン原子またはヒドロキシ基であり、
mは、独立して、好ましくは、3〜100、より好ましくは3〜50の整数であり、そして
nは、好ましくは、5〜1000、より好ましくは10〜200の整数である、
で表される。
なお、式Iにおける連結基L1について例示する、例えば−S−(CH2)c−等の結合部位が異なる場合、記載されている方向の右側の結合子(当該事例では、(CH2)c−で表される結合子)を介して式中の酸素原子(O)に結合し、L2についてはRに対してNH−(C1−6アルキレン)q−の結合子を介して結合する、ことを意味する。
次式
で表される基を挙げることができる。
本発明で用いる、ポリアニオン性ポリマーは、水性溶液中で前記式I表されるトリブロックコポリマーと安定なポリイオンコンプレックスを形成できるポリアニンオン性有機高分子化合物である。具体的なものとしては、限定されるものでないが、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリスルホン酸、ポリアニオン性多糖類、アニオン性タンパク質等からなる群から選ばれる1種またはそれ以上であり、好ましいものとしては、カルボキシメチルデキストラン、カラギーナン、キサンタンガム、コンドロイチン硫酸、ヒアルロン酸、ヘパリンからなる群より選ばれるポリアニオン性多糖類、アルブミン、ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸からなる群より選ばれるアニオン性タンパク質を挙げることができる。特に、アニオン性多糖類が好ましい。これらのポリアニオン性ポリマーの分子量は、ポリマーの種類によって最適値が異なり、限定されるものでない。しかし、ポリアクリル酸の場合、Mnが、1000〜1000000、好ましくは、1000〜100000、より好ましくは、1000〜10000であり、ポリアニオン性多糖類、例えばコンドロイチン硫酸の場合、MnまたはMwが1000〜1000000、好ましくは1000〜100000であり、アニオン性タンパク質、例えば、ポリアスパラギン酸の場合、MnまたはMwが1000〜1000000、好ましくは1000〜100000ある。これらは市販のものを、必要に応じて精製して使用することができる。
また、修飾されたアニオン性ポリマーは、前記ポリアニオン性ポリマー、例えば、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、カルボキシメチルデキストラン、キサンタンガム、ヒアルロン酸、ポリアスパラギン酸及びポリグルタミン酸が、それらのカルボキシル基と蛍光色素、例えば、フルオレセイン類、ローダミン類、アレキサフローラ類等のカルボキシル基と共有結合し得る官能基との間で共有結合することにより修飾されたものを意味する。
トリブロックコポリマーとポリアニオン性ポリマーまたは修飾されたアニオン性ポリマーは、それらを含む組成物が、一般的な水性溶液(例えば、純水もしくはイオン交換水中に溶質を溶解もしくは分散させた溶液)中でそれらの分子が会合してミセルを形成することにより、透明なポリイオンコンプレックスミセルとして存在し得る割合で使用することが望ましい。本発明の理解を容易にする目的で、このようなイオンコンプレックスミセルの概念図を図1に示す。このようなミセル溶液は、さらに本発明の目的に沿うためには、水性溶液のイオン強度、pH、温度等の変化、特に、室温等のin vitroでの調製ミセル溶液から生体内環境下または生理学的条件下への変化により、不可逆的ゲルを形成する割合でトリブロックコポリマーとポリアニオン性ポリマーまたは修飾されたアニオン性ポリマーが含められる必要がある。このような変化は、例えば、イオン強度が、イオン濃度0(ゼロ)もしくは数十mMからイオン濃度150mMのように変化することにより、また、温度の変化は、通常室温で前記ミセルが形成されるが、37℃程度以上に上昇することを意味する。したがって、本発明により提供される組成物は、生体内滞留性を示し、一方で、トリブロックコポリマーが担持する環状ニトロキシドラジカル化合物が活性酸素を消去し得るので、炎症を伴う組織または器官の癒着を効果的に防止できる。また、トリブロックコポリマーと修飾されたアニオン性ポリマーを含む組成物は、前記生体内滞留性を示し、かつ、修飾基または部分により当該組成物(ポリイオンコンプレックス)の生体内での挙動を検出することを可能にする。このような検出には、IVISイメージングを適用できる。
式I中のL1が、独立して
Yが、独立して、H、C1-6アルキルで置換されていてもよいフェニルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルオキシチオカルボニルチオまたはSHからなる群より選ばれる、トリブロックコポリマー、すなわち、下式II
Yが、独立して、H、C1-6アルキルで置換されていてもよいフェニルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルオキシチオカルボニルチオまたはSHからなる群より選ばれる、かつ、
L2、R、m及びnは、上記式Iについて定義したとおりである、
で表されるトリブロックコポリマーは、WO2013/111801に記載されておらず、また、本発明者等の知る限り、従来技術文献に未載の新規化合物である。
で表される両末端が修飾されたポリ(エチレングリコール)またはポリ(オキシエチレン)誘導体に対し、不活性溶媒、例えばトルエン等中で、ラジカル源としてのアゾ化合物、例えば、2,2’―アゾビスイソブチロニトリル(AIBN)の存在下、20〜80℃にて、18〜24時間、クロロメチルスチレン
で表されるトリブロックコポリマー前駆体を得、次いで、
H2N−(C1-6アルキレン)q−R
式中、Rは式Iについて定義したとおりである
で表されるアミンと、溶媒、例えばジメチルフォルムアミド中で、必要により、脱ハロゲン化水素剤、例えば、ピリジンの存在下、室温〜70℃にて、3〜72時間反応させ、さらに必要により、還元条件下で処理することにより、提供できる。
<製造例1>
(1) ポリクロロメチルスチレン−b−ポリエチレングリコール−b−ポリクロロメチルスチレン(PCMS−b−PEG−b−PCMS)トリブロックコポリマーの合成
PCMS−b−PEG−b−PCMSは、次の合成スキーム1に従い合成した:
反応容器に、上記(1)で得られる、PCMS−b−PEG−b−PCMS(Mn:13263;1.12g,0.084mmol)を加えた。次に、4−アミノ−TEMPO(1.545g,0.422mmol)を20mlのジメチルスルホキシド(DMSO)に溶解し、反応容器に加え、室温で24時間攪拌を行った。反応終了後、反応溶液を透析膜(Spectra/Por molecular weight cut−off size 3,500 Spectrum Medical Industries Inc.,Houston TX)中に加え、2Lのメタノールに対して透析を行った。メタノールは2時間ごとに8回交換し、エバポレーションを行い、ベンゼン凍結乾燥を行った。収率は、90.1%であった。 1H NMR測定の結果より、クロロメチル基が100%反応し、TEMPOが導入されていることが認められた(図3参照)。
(1) Br−PEG(ポリ(エチレングリコール))−Brの合成
Br−PEG−Brは、次の合成スキーム2に従い合成した:
CTA−PEG−CTAは、次の合成スキーム3に従い合成した:
PCMS−b−PEG−b−PCMSは、次の合成スキーム4に従い合成した:
PMNT−b−PEG−b−PMNTは、次の合成スキーム5に従い合成した:
製造例1(4)で得られたPMNT−b−PEG−b−PMNTトリブロックポリマーの粉末を0.1M HCl水溶液に溶解し、PMNT鎖のアミノ基を完全にプロトン化させ、水系の凍結乾燥を行い回収した。次に、PMNT−b−PEG−b−PMNTトリブロックポリマーとコンドロイチン硫酸(CS;Mw:60k)をそれぞれNa2HPO4バッファー(0.1M)に溶解し、濃度を5mg/mlにしたカチオンPMNT−b−PEG−b−PMNT水溶液とアニオンCS水溶液を調製した。さらに、PMNT−b−PEG−b−PMNT水溶液をコンドロイチン硫酸水溶液に撹拌したなら滴下し、pHが3.0、4.0、5.0、6.0と条件を変えたポリイオンコンプレックスミセルを調製した。ここで、PMNT−b−PEG−b−PMNTとCSのモル比r=1:1となるように、ポリイオンコンプレックスミセルを調製した(モル比r=[CSの活性化されたカルボキシル基のモル数]/[PMNT−b−PEG−b−PMNTの活性化されたアミノ基のモル数])。得られたポリイオンコンプレックスミセルの平均粒径を動的光散乱(DLS)測定により行ったところ、平均粒径が45〜60nmの単峰性の粒子であることが確認された。また、図8に粒径の分布を示す。
製造例2(4)で得られたPMNT−b−PEG−b−PMNTトリブロックコポリマー100mgをメタノールに溶解し、そこへ水に溶解したポリアクリル酸(PAA;Mw:5k)17.2mgを加えた。次いで、この溶液を水に対して透析することによって、ポリイオンコンプレックスミセルを作製した。得られたポリイオンコンプレックスミセルの平均粒径を動的光散乱(DLS)測定により行ったところ、平均粒径が31nmの単峰性の粒子であることが確認された(図9参照)。
(1)実施例1で作製した各ポリイオンコンプレックス(PIC)ミセル溶液5mg/mlを遠心エバポレーションにより濃縮し、イオン強度を150mMに調整し、温度37℃の水浴中でゲル化実験を試験管反転法により検討した。実験の結果を示す図面に代わる写真を図10に示す。この図から、pH4.0のPICミセル溶液で、イオン強度150mMかつ温度37℃の環境下で不可逆的ゲルが形成したことが確認される。
製造例1(2)で得られたPMNT−b−PEG−b−PMNTトリブロックポリマーの粉末1gを0.1M HCl水溶液に溶解し、PMNT鎖のアミノ基を完全にプロトン化させ、水系の凍結乾燥を行い回収した。次に、PMNT−b−PEG−b−PMNTトリブロックポリマーとポリアクリル酸(PAA;Mw:5k)をそれぞれリン酸バッファー(0.1M)に溶解し、濃度を5mg/mlにしたカチオンPMNT−b−PEG−b−PMNT水溶液とアニオン性PAA水溶液を調製した。さらに、PMNT−b−PEG−b−PMNTトリブロックポリマー水溶液をポリアクリル酸水溶液に撹拌しながら滴下し、pH=6.2のポリイオンコンプレックスミセルを調製した。ここで、PMNT−b−PEG−b−PMNTとPAAのモル比r=1:1となるように、ポリイオンコンプレックスミセルを調製した(モル比r=[PAAの活性化されたカルボキシル基のモル数]/[PMNT−b−PEG−b−PMNTの活性化されたアミノ基のモル数])。得られたポリイオンコンプレックスミセルの平均粒径を動的光散乱(DLS)測定により決定したところ、平均粒径が40〜50nm程度の単峰性の粒子であることが確認された(図12参照)。
実施例4で作製した各ポリイオンコンプレックスミセル溶液5mg/mlを遠心エバポレーションにより濃縮し、イオン強度を150mMに調整し、温度37℃の水浴中でゲル化実験を試験管反転法により検討した。pH4.0またはpH6.2のPICミセル溶液で、イオン強度150mMかつ温度37℃の環境下で不可逆的ゲル化したことが確認された(それぞれ、図13または図14参照)。
実施例3(2)にしたがって作製したPICミセル(pH5、N+:COO-=2:1)を癒着モデルマウスに対して腹腔内投与して癒着防止効果の評価を行った。
実施例4に従って作製したポリイオンコンプレックスミセル(pH6.2,N+:COO-=1:1)を癒着モデルマウスに対し腹腔内投与し癒着防止効果およびRIGの有する活性酸素除去能による抗炎症効果を評価した。実験手順については図16を参照されたい。
腹部を開腹、腹腔内を観察し図17に示すスコアシステムにしたがい、癒着の程度をスコア別に分類した(腸をピンセットで持ち上げた際にどの程度の臓器と接着、癒着を形成しているか評価)。
上記にしたがって作製したRIGの活性酸素(ROS)除去能を蛍光測定により評価した。具体的にはマウスの腹膜切片を採取し、PBS(1ml)中で組織をホモジナイズしたのち遠心分離し(10000rpm,10分,4℃)、上澄み(100ul)に1mMのジヒドロエチジウム(DHE)を100μl加え蛍光測定(ex=530nm,em=620nm)により活性酸素の産出を定量評価した(図19参照)。
Talcの投与により炎症が生じた部位からは好中球やマクロファージの浸潤に伴い、繊維が堆積し膜厚が増加することが報告されている。本実験では腹膜切片を採取し10%ホルマリンに1日、70%エタノールに2日浸したのち、腹膜を7μmに切り出しマッソントリクローム(MT)染色にて組織切片の観察および膜厚測定を行った。結果を図20及び図21に示す。
炎症性バイオマーカーとして知られるミオペルオキシダーゼ(MPO)活性を評価した。マウスから腹膜切片を採取し、50mMリン酸バッファー(pH6.0,Involved 0.5% hexadecyltrimethylammonium bromide)1ml中でホモジナイズ、遠心分離(10000rpm,10分,4℃)した。上澄み10μlに対して、50mM リン酸バッファー(pH6)190μl,0.5% o−dianisidine hydrochloride 5ul,20mM H2O2 5μl加えて吸光度測定(abs 460nm)を行った。それぞれの組織の全タンパク質量はBCA kit(Thermo Scientific Pierce Protein Research Products)により産出し、等量タンパク質量当たりのMPO活性の値を評価した。結果を図22に示す。
*科研製薬株式会社製:カルボキシセルロースとヒアルロン酸ナトリウ
ムからなるフィルム型の生体吸収性癒着防止材
群1: 無処理コントロール
群2: 開腹未処置
群3: 開腹後NH2−TEMPO水溶液(6.4mg/ml)を300μl
腹腔内に塗布し開腹部を閉じた。
群4: 開腹後nRIG(抗酸化能を有さないインジェクタブルゲル、30
mg/ml水溶液)を腹腔内に塗布し、開腹部を閉じた。
群5: 開腹後RIG(30mg/ml水溶液)を腹腔内に塗布し、開腹部
を閉じた。
群6: 開腹後市販セプラフィルム(5mmx5mmを二枚)腹腔内に留置
し、開腹部を閉じた。
群7: 開腹後、6.4mg/mlのNH2−TEMPO溶液75μlを市販
セプラフィルム両面にそれぞれ塗布、乾燥させたのち(5mmx5
mmを二枚)腹腔内に留置し、開腹部を閉じた。
群8: 開腹後、30mg/mlのRIG溶液75μlを市販セプラフィル
ム両面にそれぞれ塗布、乾燥させたのち(5mmx5mmを二枚)
腹腔内に留置し、開腹部を閉じた。
B.Aのイオンコンプレックスにおけるアニオン性ポリマーが標識を担持するように修飾されたもので置き換わったイオンコンプレックスの製造、及びその使用について
<製造例3>
(1)フルオレセインを担持したポリアクリル酸(PAA-FL)の合成
PAA-FLの合成は次の合成スキーム5に従い合成した。
(2)フルオレセインを担持したレドックスインジェクタブル(FL-RIG)の作製
WO2013/111801に記載された方法により合成したPMNT-b-PEG-b-PMNTトリブロックポリマー(前記式(I)中のL1が−S−CH2−であり、L2が−CH2−NH−であり、Rが4-アミノTEMPOに由来する基であり、YがHであり、m及びnがそれぞれ約22及び約454である)とPAA-FLをそれぞれリン酸バッファー(0.1M)に溶解し、濃度を5mg/mlに調整したカチオンPMNT-b-PEG-b-PMNT水溶液と濃度を5mg/mlに調整したアニオン性PAA-FL水溶液を調製した。こうして、それぞれ調製したPMNT-b-PEG-b-PMNTトリブロックポリマー水溶液をポリアクリル酸水溶液に撹拌しながら滴下しpH=6.2のポリイオンコンプレックスミセルを作製した。ここでは、PMNT-b-PEG-b-PMNTとPAAのモル比r=1:1となるように、ポリイオンコンプレックスミセルが調製された(モル比r=[PAAの活性化されたカルボキシル基のモル数]/[PMNT−b−PEG−b−PMNTの活性化されたアミノ基のモル数])。
<ゲル化>
前述のように作製したポリイオンコンプレックスミセル溶液(5mg/ml)を遠心エバポレーションにより濃縮(30mg/ml)し、イオン強度を150 mMに調整し、温度37℃の水浴中でゲル化実験を試験管反転法により検討した。
なお、製造例3(2)及びゲル化に関する概念図を図30に示す。
上記検討の結果、37℃の条件下で不可逆的ゲル化が確認された(図31)。比較のため、同様の手順でPEG-b-PMNTポリマー(WO2009/133647に記載されているか、或は記載された方法により製造される)とPAA-FLからレドックスナノ粒子溶液(30mg/ml)を作製した。この比較例の水溶液は上記のゲル化実験により生体条件下でゲル化挙動を示さなかった。
<試験4> 製造例3(2)のレドックスインジェクタブルゲル(RIG-FL)の腹腔内滞留性評価 (IVISイメージングを用いたRIG腹腔内滞留性評価)
低分子蛍光物質(アミノフルオレセイン:AFL)、FLを担持したレドックスナノ粒子溶液(FL-RNP)およびFLを担持したレドックスインジェクタブルゲル(FL-RIG)を使用し、以下のスキームにて腹腔内滞留性を評価した。
Nudeマウス(n=4、25〜30g)を使用し、飼料からの蛍光検出を防ぐためオリエンタル酵母株式会社より購入したIVID♯2を実験開始1週間前に与えて実験を行った。イソフルランの吸入麻酔下にてマウスの腹部を開腹し、サンプル(AFL,FL-RNP(ミセル濃度30mg/ml),FL-RIG(ミセル濃度30mg/ml))を300μl投与し腹部を縫合した。腹腔内滞留性評価方法としては、サンプルに担持したフルオレセインの蛍光(励起波長:500nm, 蛍光波長:540nm)を投与直後から各タイムポイントでイメージングすると共に、投与直後の蛍光強度からの蛍光減少を定量することで腹部に残存しているサンプル量を評価した。イメージングの際にはイソフルランでの麻酔下にてイメージングを行った。各サンプルのイメージング画像を図32に、サンプルの残存量を示す定量データを図33に示す。RIG投与群において、腹腔内でのゲル化により滞留性が向上し、対照群(AFL,FL-RNP)と比較して有意差が見られた。これらの結果は作製したRIGが腹腔内で組織間の接触を抑制し、癒着防止剤としての高い機能を発揮することを示唆する。
Claims (19)
- トリブロックコポリマーとポリアニオン性ポリマーを含む組成物を有効成分として含んでなる癒着防止用製剤であって、
該トリブロックコポリマーが式I
L1は、同一または異なる連結基を表し、
L2は、独立して、−C1-6アルキレン−NH−(C1-6アルキレン)q−であり、ここでqは0または1の整数であり、そして
Rは、独立して、Rの総数nの少なくとも20%が2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル−4−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−1−オキシル−3−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリン−1−オキシル−3−イル及び2,4,4−トリメチル−1,3−オキサゾリジン−3−オキシル−2−イル、2,4,4−トリメチル−1,3−チアゾリジン−3−オキシル−2−イル及び2,4,4−トリメチル−イミダゾリンジン−3−オキシル−2−イルからなる群より選ばれる環状ニトロキシドラジカル化合物の残基を表し、存在する場合には、残りのRが水素原子、ハロゲン原子またはヒドロキシ基であり、
Yは、独立して、H、C1-6アルキルで置換されていてもよいフェニルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルオキシチオカルボニルチオからなる群より選ばれ、
mは、独立して、3〜1,000の整数であり、そして
nは、20〜5,000の整数である、
で表され、かつ、
該アニオン性ポリマーがポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリスルホン酸、ポリアニオン性多糖類、アニオン性タンパク質からなる群より選ばれる1種またはそれ以上である、
癒着防止用製剤。 - アニオン性ポリマーが、ポリアニオン性多糖類である、請求項1〜4のいずれか1項に記載の癒着防止用製剤。
- アニオン性ポリマーが、ポリアクリル酸、ポリメタクリル酸からなる群より選ばれる請求項1に記載の癒着防止用製剤。
- ポリアニオン性多糖類が、カルボキシメチルデキストラン、カラギーナン、キサンタンガム、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ヘパリンからなる群より選ばれる1種または2種以上の混合物である、請求項5に記載の癒着防止用製剤。
- トリブロックコポリマーのアミノ基のモル数とポリアニオン性ポリマーのアニオン性基のモル数が、1またはそれを超える数:1である、請求項1〜6のいずれかに記載の癒着防止用製剤。
- 生理学的水性条件下で不可逆的ゲルを形成する、請求項1〜7のいずれかに記載の癒着防止用製剤。
- 生体内組織または器官の癒着防止用製剤を製造するためのトリブロックコポリマーとポリアニオン性ポリマーを含む組成物の使用であって、
該トリブロックコポリマーが式I
L1は、同一または異なる連結基を表し、
L2は、独立して、−C1-6アルキレン−NH−(C1-6アルキレン)q−であり、ここでqは0または1の整数であり、そして
Rは、独立して、Rの総数nの少なくとも20%が2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル−4−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−1−オキシル−3−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリン−1−オキシル−3−イル及び2,4,4−トリメチル−1,3−オキサゾリジン−3−オキシル−2−イル、2,4,4−トリメチル−1,3−チアゾリジン−3−オキシル−2−イル及び2,4,4−トリメチル−イミダゾリンジン−3−オキシル−2−イルからなる群より選ばれる環状ニトロキシドラジカル化合物の残基を表し、存在する場合には、残りのRが水素原子、ハロゲン原子またはヒドロキシ基であり、
Yは、独立して、H、C1-6アルキルで置換されていてもよいフェニルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルオキシチオカルボニルチオからなる群より選ばれ、
mは、独立して、3〜1,000の整数であり、そして
nは、20〜5,000の整数である、
で表され、かつ、
該アニオン性ポリマーがポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリスルホン酸、ポリアニオン性多糖類、アニオン性タンパク質からなる群より選ばれる1種またはそれ以上である、使用。 - 投与を必要とする生体内局所にトリブロックコポリマーとポリアニオン性ポリマーを含む組成物を患者における組織または器官の癒着防止に有効量投与することを含んでなる癒着方法であって、
該トリブロックコポリマーが式I
L1は、同一または異なる連結基を表し、
L2は、独立して、−C1-6アルキレン−NH−(C1-6アルキレン)q−であり、ここでqは0または1の整数であり、そして
Rは、独立して、Rの総数nの少なくとも20%が2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル−4−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−1−オキシル−3−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリン−1−オキシル−3−イル及び2,4,4−トリメチル−1,3−オキサゾリジン−3−オキシル−2−イル、2,4,4−トリメチル−1,3−チアゾリジン−3−オキシル−2−イル及び2,4,4−トリメチル−イミダゾリンジン−3−オキシル−2−イルからなる群より選ばれる環状ニトロキシドラジカル化合物の残基を表し、存在する場合には、残りのRが水素原子、ハロゲン原子またはヒドロキシ基であり、
Yは、独立して、H、C1-6アルキルで置換されていてもよいフェニルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルオキシチオカルボニルチオからなる群より選ばれ、
mは、独立して、3〜1,000の整数であり、そして
nは、20〜5,000の整数である、
で表され、かつ、
アニオン性ポリマーがポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、ポリスルホン酸、ポリアニオン性多糖類、アニオン性タンパク質からなる群より選ばれる1種またはそれ以上である、方法。 - トリブロックコポリマーと修飾されたポリアニオン性ポリマーを含む組成物であって、
該トリブロックコポリマーが式I
L1は、同一または異なる連結基を表し、
L2は、独立して、−C1-6アルキレン−NH−(C1-6アルキレン)q−であり、ここでqは0または1の整数であり、そして
Rは、独立して、Rの総数nの少なくとも20%が2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル−4−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−1−オキシル−3−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリン−1−オキシル−3−イル及び2,4,4−トリメチル−1,3−オキサゾリジン−3−オキシル−2−イル、2,4,4−トリメチル−1,3−チアゾリジン−3−オキシル−2−イル及び2,4,4−トリメチル−イミダゾリンジン−3−オキシル−2−イルからなる群より選ばれる環状ニトロキシドラジカル化合物の残基を表し、存在する場合には、残りのRが水素原子、ハロゲン原子またはヒドロキシ基であり、
Yは、独立して、H、C1-6アルキルで置換されていてもよいフェニルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルオキシチオカルボニルチオからなる群より選ばれ、
mは、独立して、3〜1,000の整数であり、そして
nは、20〜5,000の整数である、
で表され、かつ、
該修飾されたアニオン性ポリマーがポリアクリル酸、ポリメタクリル酸、カルボキシメチルデキストラン、キサンタンガム、ヒアルロン酸、ポリグルタミン酸及びポリアスパラギン酸からなる群より選ばれ、該アニオン性ポリマー分子中のカルボキシル基の5〜40%を介して蛍光性色素が共有結合しているものである、
組成物。 - 組成物が個体における組織または器官の癒着防止または生体内滞留性を評価するために使用される、請求項12に記載の組成物。
- 式II
L1’は、独立して
L2は、独立して、−C1-6アルキレン−NH−(C1-6アルキレン)q−であり、ここでqは0または1の整数であり、そして
Rは、独立して、Rの総数nの少なくとも20%が2,2,6,6−テトラメチルピペリジン−1−オキシル−4−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリジン−1−オキシル−3−イル、2,2,5,5−テトラメチルピロリン−1−オキシル−3−イル及び2,4,4−トリメチル−1,3−オキサゾリジン−3−オキシル−2−イル、2,4,4−トリメチル−1,3−チアゾリジン−3−オキシル−2−イル及び2,4,4−トリメチル−イミダゾリンジン−3−オキシル−2−イルからなる群より選ばれる環状ニトロキシドラジカル化合物の残基を表し、存在する場合には、残りのRが水素原子、ハロゲン原子またはヒドロキシ基であり、
Yは、独立して、H、C1-6アルキルで置換されていてもよいフェニルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルチオカルボニルチオ、C1-6アルキルオキシチオカルボニルチオからなる群より選ばれ、
mは、独立して、3〜1,000の整数であり、そして
nは、20〜5,000の整数である、
で表される、
トリブロックコポリマー。 - 請求項17に記載のコポリマーの製造方法であって、
次式a
で表される両末端が修飾されたポリ(エチレングリコール)を、不活性溶媒中で、ラジカル源としてのアゾ化合物の存在下で、クロロメチルスチレンと重合させることにより、次式b
で表されるトリブロックコポリマーを得、次いで、
H2N−(C1-6アルキレン)q−R
式中、Rは式IIについて定義したとおりである、
で表されるアミン化合物と反応させる工程を含んでなる、製造方法。
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