JPWO2015083554A1 - ４Ｇ−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルルチンの結晶とその用途 - Google Patents

Abstract

新規な４Ｇ−α−グルコシルルチン結晶と４Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末、及び、それらの医薬品素材としての用途、さらには化粧品素材及び食品素材としての用途を提供することを課題とし、４Ｇ−α−グルコシルルチン１分子、エタノール１分子及び水８分子の比率で構成される４Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を提供することによって前記課題を解決する。

Description

本発明は、４^Ｇ−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルルチンの新規な結晶と当該結晶を含む結晶含有粉末及びその用途に関する。

ルチンは、フラボノイドの１種であるクエルセチンの３位の水酸基にβ−ルチノース（６−Ｏ−α−Ｌ−ラムノシル−β−Ｄ−グルコース）が結合した構造を有する配糖体である。ルチンは、マメ科エンジュの花蕾やタデ科ソバなどに含まれ、特に、韃靼種のそば種子には、多く含有されていることが知られている（特許文献１参照）。ルチンを含む食品としてはソバ茶があり、その健康性と嗜好性からも幅広く飲用されている（特許文献２参照）。また、ルチンは、毛細血管収縮作用を有することから、毛細血管の強化、出血予防、血圧調整などの生理作用を有する、いわゆるビタミンＰ様物質として、食品、医薬品、化粧品などに利用されている。さらに、ルチンは、単なるビタミンＰ強化剤にとどまらず、白血球増加による免疫増強作用に関与し、生体の健康維持、増進に重要な役割を果たしていることから、単独もしくは他のビタミンと併用した上で、黄色着色剤、酸化防止剤などとして飲食物などに、また、紫外線吸収剤などの美肌剤などとして化粧品に利用されている。さらに、ルチンは、循環器疾患などの抗感受性疾患剤として、脳出血・高血圧の予防や、網膜出血、胃弱肺出血、遺伝性毛細血管拡張症、紫斑病などの治療用医薬品としても利用されている。しかしながら、ルチン自体は、水に対する溶解度が１０ｍｇ／１００ｍｌ程度（非特許文献１）と低く、難水溶性であるため、少量の投与でより効率的に効果を発揮する事が必要とされる医薬品素材等として利用する上では、以前から問題となっていた。

本出願人は、以前にルチンの誘導体について検討を行い、ルチン分子中のβ-ルチノースを構成するグルコース残基の４位水酸基に１分子のグルコースがα−グルコシド結合を介して結合した、下記化学式１に示す構造を有する４^Ｇ−Ｏ−α−Ｄ−グルコピラノシルルチン（以下、「４^Ｇ−α−グルコシルルチン」と略称する。）を創製し、斯かる４^Ｇ−α−グルコシルルチンが、ルチンと比較して極めて高い水溶性を示すことを見出し、４^Ｇ−α−グルコシルルチンとその結晶性粉末並びにそれらの用途を特許文献３に開示した。この４^Ｇ−α−グルコシルルチンは、生体内にもともと存在する分解酵素（α−グルコシダーゼ）の作用により徐々に分解され、最終的にはＤ−グルコースとルチンとにまで完全に分解され代謝されると推察されることから、ヒトに適用しても安全な物質であると考えられる。

化学式１：

しかしながら、特許文献３の時点では、未だ、結晶構造を解析するに足る性状を備えた４^Ｇ−α−グルコシルルチンの単結晶は得られておらず、特許文献３に開示されているのは、たかだか、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶性粉末が粉末Ｘ線回折において示す主たる回折角（２θ）に止まる。また、非特許文献２にも、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶性粉末についての言及があるが、報告されているのは分解点のみである。このように、結晶構造が解明された４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶は、出願人が知る限り、未だ報告されていない。

一般に有機化合物の結晶は、分散力や静電相互作用などの比較的弱い分子間力により分子が集合したものであり、多くの準安定構造を取りうるために、しばしば結晶多形を取り得る事が従来から知られている。さらに、部分化学構造を複数持つ有機化合物は、分子が３次元的に規則配列する仕方が、１種類以上になりやすくなるために多形現象が起こりやすい事が報告されている（非特許文献３参照）。また、結晶中に溶媒が取り込まれた溶媒和の結晶（疑似結晶多形）まで含めると、その組み合わせは膨大なものとなり、故に発見される結晶多形の数は、時間とその探索に費やした労力に比例するものであると言われている（非特許文献４参照）。

一方、医薬品素材としてみた場合、有機化合物の結晶構造は、その溶解性や吸収性、体内動態、生理活性、薬理効果に影響を与えるといわれており、同じ有機化合物であっても結晶構造が異なると薬理効果等、医薬品素材として適性が大きく異なると考えられる。このため、有機化合物の医薬品素材としての使用を考える場合には、結晶構造の解明は必要不可欠であり、従来から、同一化合物の結晶多形現象が研究され、数多く報告されている（例えば、非特許文献５参照）。

この点、４^Ｇ−α−グルコシルルチンも例外ではなく、特に４^Ｇ−α−グルコシルルチンは、上述したようにクエルセチン、β−ルチノース及びグルコースという複数の部分化学構造を有する有機化合物であるので、当然に結晶多形の存在が予想され、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの医薬品素材としての用途を切り拓くには、その結晶構造が解明された４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶の確立が不可欠である。

特公平５−６３１３３号公報 特開昭６０−２６２５８５号公報 特許第３１９４１４５号公報

バイオインダストリー（ＢＩＯ ＩＮＤＵＳＴＲＹ）、８２頁−８３頁（２００９年） スズキ・ユキオ（Ｙｕｋｉｏ Ｓｕｚｕｋｉ）ら、アグリカルチュラル・アンド・バイオロジカル・ケミストリー（Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、１８１頁−１８７頁（１９９１年） ロジャー・デイビー（Ｒｏｇer Ｄａｖｅｙ）ら、フロム・モレキュールズ・トゥ・クリスタライザ−ズ（Ｆｒｏｍ Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ｔｏ Ｃｒｙｓｔａｌｌｉｚｅｒｓ）、４４頁（２００９年）（ＯＸＦＯＲＤ ＳＣＩＥＮＣＥ ＰＵＢＬＩＣＡＴＩＯＮ） 平山 令明、『結晶とはなにか』、２０５−２０６頁（２０１２年）（ブルーバックス） 平山 令明、『有機化合物結晶作成ハンドブック』、５９−６５頁（２００８年）（丸善株式会社）

本発明は、４^Ｇ−α−グルコシルルチンを医薬品素材として用いる際の上記の問題を解決し、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの医薬品素材としての用途を切り拓くために為されたもので、結晶構造が解明された４^Ｇ−α−グルコシルルチンの新規な結晶と当該結晶を含有する４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末、及び、それらの医薬品素材としての用途、さらには化粧品素材及び食品素材としての用途を提供することを課題とする。

上記の課題を解決すべく、本発明者らは、まず、特許文献３に記載された方法で４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶を得ることを試みた。すなわち、特許文献３では、９３％まで精製した４^Ｇ−α−グルコシルルチンの凍結乾燥固形物（非晶質粉末）に８０％（ｖ／ｖ）エタノール溶液を加え、加温溶解した後、種晶０．５％（ｗ／ｗ）を加えて室温下に二日間放置して結晶を析出させ、８０％（ｖ／ｖ）エタノール溶液で洗浄し、乾燥させる方法により４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶粉末を製造し、その後、８０℃で一夜真空乾燥して、高純度４^Ｇ−α−グルコシルルチン粉末（純度約９８％）が製造されている。しかしながら、この特許文献３に記載された結晶化方法を再現したところ、４^Ｇ−α−グルコシルルチンは、図７に示すように、微小な針状結晶が相互に固着した結晶としてしか晶出せず、当該結晶が単一の結晶形からなるものであるのかさえも同定不能であり、このような結晶を用いて、４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶構造を解析することは到底不可能であった。

そこで、本発明者らはさらに研究努力を重ね、試行錯誤を繰り返した結果、４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度９５％以上の非晶質粉末を７０％（ｖ／ｖ）以下のエタノール水溶液に溶解し、低温下で保持すると４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶が析出することを見出し、また、当該結晶が４^Ｇ−α−グルコシルルチン１分子、エタノール１分子及び水８分子の比率で構成される、従来未知の全く新規な４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶であることを見出し、その結晶構造を決定して本発明を完成した。因みに、本発明者らが得ることに成功した４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶は、例えば、後述するとおり、粉末Ｘ線回折において、特許文献３に記載された回折角とは異なる回折角に主たるピークを示し、特許文献３に開示されている４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶とは異なる結晶であると判断される。

すなわち、本発明は、４^Ｇ−α−グルコシルルチン１分子、エタノール１分子及び水８分子の比率で構成される４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を提供することによって上記課題を解決するものである。少なくともこのような分子比率で構成される４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は本願出願前には知られておらず、当該結晶は新規な結晶である。なお、４^Ｇ−α−グルコシルルチン分子とエタノール分子と水分子とを上記の比率で含む４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、厳密には、４^Ｇ−α−グルコシルルチン溶媒和物結晶と呼ぶべきかも知れないが、以後、本明細書では便宜上「４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶」といい、その単結晶を「４^Ｇ−α−グルコシルルチン単結晶」というものとする。

また、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、詳細には、粉末Ｘ線回折法において、主な特徴的回折角（２θ）として７．３°（ミラー指数（ｈｋｌ）：０２０）、７．６°（ミラー指数：０２１）、１３．１°（ミラー指数：０２５）、１７．５°（ミラー指数：００８）及び１８．３°（ミラー指数：１３５）を示す結晶である。

また、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、より詳細には、結晶の空間群がＣ２２２_１であり、単位格子の格子定数がａ＝８．８３３７Å、ｂ＝２４．５５５２Å、ｃ＝４０．３３９１Åであり、且つ、α＝β＝γ＝９０°の斜方晶系（ｏｒｔｈｏｒｈｏｍｂｉｃ）に属する結晶である。

加えて、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶は、４^Ｇ−α−グルコシルルチン分子、エタノール分子、水分子を構成する炭素原子、及び酸素原子が本願明細書の表２乃至表３に示す原子座標を有する結晶である。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、その好適な一態様において、単結晶の形態にある結晶である。

また、本発明は４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を提供することによっても上記の課題を解決するものである。

さらに、本発明は、医薬品素材としての本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を提供することによって、上記の課題を解決するものである。すなわち、結晶構造が解明された本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの非晶質粉末に比べて、有効性や安全性の確認が容易であるので、医薬品素材として極めて有用である。

加えて、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶含有粉末は、上記の本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を種晶として用いることにより、４^Ｇ−α−グルコシルルチン含有溶液から再結晶工程を経ることなく比較的容易に得ることができる。本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶含有粉末は、相対的に純度は低いものの、再結晶工程の必要なく得ることができるので、容易に大量製造が可能となる。したがって、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶含有粉末は、廉価な結晶含有粉末として化粧品又は食品素材として利用できる。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶によれば、その結晶構造が明らかであるので、医薬品素材として用いるのに必要な４^Ｇ−α−グルコシルルチンの物理的・化学的性質の解明や、結晶多形の有無を含めた多形現象の解明が極めて容易になるという利点が得られる。また、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は医薬品素材として用いられる場合には、生体内ではＤ−グルコースとルチンに完全に分解され、代謝されるので安全である。したがって、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、ルチンが本来的に有している薬理効果と同様の薬理効果を期待して、ルチンに比べて極めて水溶性の高い医薬品素材として、より有利に用いることができるという利点が得られる。

また、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、前述したとおり本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶又は単結晶を種晶として用いることにより、高純度化の為に必要とされる複数回の再結晶工程を省略して製造する事が出来る。したがって、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶と同様な機能を有しつつ、再結晶化による収量の損失や工程コストの増加がなく比較的安価に製造することができる。それ故に、粉末原料を取り扱うことを前提に設計された製造プラントを用いた化粧品製造、食品製造の各分野において、他の単独若しくは複数の粉末状の化粧品素材、食品素材などに医薬品級に該当する本発明の結晶に対して比較的廉価に含有せしめることができるという優れた利点を備えている。

５５％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液を用いた結晶化により得られた本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶の顕微鏡写真の一例である。 本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶の粉末Ｘ線回折パターンの一例である。 Ｘ線結晶構造解析に用いた４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶（０．２０×０．２０×０．１５ｍｍ）の実体顕微鏡写真である。 本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶の単結晶Ｘ線回折パターンの一例である。 水素原子を除く４^Ｇ−α−グルコシルルチンのＯＲＴＥＰ図である。 結晶単位格子における４^Ｇ−α−グルコシルルチン分子のパッキングを示す結晶構造図である（ａ軸方向）。 公知の方法（特許文献３の実施例Ａ−６に記載の方法）により得られた４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶の顕微鏡写真の一例である。

１．４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶
本発明は、４^Ｇ−α−グルコシルルチン１分子、エタノール１分子及び水８分子の比率で構成される４^Ｇ−α−グルコシルルチンの新規な結晶、詳細には、粉末Ｘ線回折法において、主な特徴的回折角（２θ）として７．３°（ミラー指数（ｈｋｌ）：０２０）、７．６°（ミラー指数：０２１）、１３．１°（ミラー指数：０２５）、１７．５°（ミラー指数：００８）及び１８．３°（ミラー指数：１３５）を示す、さらに詳細には、後述する空間群、格子定数、及び結晶系を有し、炭素原子及び酸素原子が後記表２乃至表３に示される原子座標を有する結晶に係るものである。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、４^Ｇ−α−グルコシルルチン１分子、エタノール１分子及び水８分子の比率で構成される４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶であるかぎり、当該結晶の４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度によって限定されるものではないが、通常、９５％（ｗ／ｗ）以上、望ましくは、９８％（ｗ／ｗ）以上、さらに望ましくは、９９％（ｗ／ｗ）以上の４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度を有するものが好ましい。なお、以後特に記載がなければ％は、質量パーセント（ｗ／ｗ）を示すものとする。

なお、本明細書でいう「４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度」とは、溶液、非晶質粉末、結晶含有粉末、結晶などの形態にある４^Ｇ−α−グルコシルルチン試料を、精製水により０．０１％（ｗ／ｖ）になるよう希釈又は溶解し、０．４５μｍメンブランフィルターにより濾過した後、下記の条件によるＨＰＬＣ分析に供し、ＵＶ２５５ｎｍにおけるクロマトグラムに出現したピークの総面積から計算した４^Ｇ−α−グルコシルルチンの面積比（百分率）を意味する。

＜ＨＰＬＣ分析条件＞
ＨＰＬＣ装置：『ＬＣ−２０ＡＤ』（株式会社島津製作所製）
デガッサー：『ＤＧＵ−２０Ａ３』（株式会社島津製作所製）
カラム：『ＣＡＰＣＥＬＬ ＰＡＫ Ｃ１８ ＵＧ１２０』(株式会社資生堂製)
サンプル注入量：１０μｌ
溶離液：水／アセトニトリル／酢酸（８０／２０／０．０１（容積比））
流 速：０．７ｍｌ／分
温 度：４０℃
検 出：ＵＶ検出器『ＳＰＤ−２０Ａ』（株式会社島津製作所製）
測定波長：２５５ｎｍ
データ処理：『クロマトパックＣ−Ｒ７Ａ』（株式会社島津製作所製）

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン単結晶は、直接、Ｘ線結晶構造解析、すなわち、当業者に公知のＸ線回折による単結晶構造解析（例えば、桜井敏雄著「Ｘ線構造解析の手引き」、裳華房発行（１９８３年）などを参照）に供することにより、後述する図４に例示するような単結晶Ｘ線回折パターン（回折斑点）が得られるので、その結晶構造を解明することができる。単結晶構造解析には、市販の単結晶Ｘ線回折装置、例えば、株式会社リガク製のイメージングプレート単結晶自動Ｘ線構造解析装置「Ｒ−ＡＸＩＳ ＲＡＰＩＤ」などを用いればよく、これら市販の単結晶Ｘ線回折装置には、構造解析用のコンピューターソフトウェアが予め搭載されている。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、上記のＸ線結晶構造解析により、当該結晶における結晶学的パラメーターが決定され、さらに、４^Ｇ−α−グルコシルルチン分子の原子座標（各原子の空間的な位置関係を示す値）及び３次元構造モデルを得ることができる。具体的には、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの原子座標は、
（１）本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶に単色化されたＸ線を照射し、Ｘ線の回折パターンを得る工程；
（２）当該Ｘ線の回折パターンからＸ線回折強度データを得る工程；
（３）直接法（プログラム「ＳＩＲ９２」、エー・アルトマレ（Ａ．Ａｌｔｏｍａｒｅ）ら、ジャーナル・オブ・アプライド・クリスタログラフィー（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｃｒｙｓｔ．）、第２７巻、４３５頁、（１９９４年））により、初期構造（電子密度図）を得る工程；
（４）４^Ｇ−α−グルコシルルチンの化学構造に基づき、電子密度図に炭素原子、酸素原子、及び水素原子をそれぞれ割り付け、Ｒ値が最小になるように最小二乗法にて構造を精密化する工程；
を含む手順により得ることができる。

因みに、水素原子に関しては、単結晶の大きさが比較的小さく、Ｘ線の回折強度が弱い場合には原子座標が決定できない場合がある。そのような場合であっても、非水素原子（４^Ｇ−α−グルコシルルチンの場合は酸素原子と炭素原子）のみの原子座標を基に分子モデリングすることにより、４^Ｇ−α−グルコシルルチン分子の基本的な３次元構造を明らかにすることができる。

本発明の結晶は、結晶の空間群がＣ２２２_１であり、単位格子の格子定数がａ＝８．８３３７Å、ｂ＝２４．５５５２Å、ｃ＝４０．３３９１Åであり、且つ、α＝β＝γ＝９０°の斜方晶系（ｏｒｔｈｏｒｈｏｍｂｉｃ）の結晶である。本発明の結晶は、上記空間群、格子定数、及び結晶系を有する結晶である限り、必ずしも単結晶の形態にあるものに限定されない。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、より具体的には、結晶における４^Ｇ−α−グルコシルルチン分子の各酸素原子及び各炭素原子が後述する表２乃至表３に示される原子座標を有するものであり、図５に示すＯＲＴＥＰ図を与えるものである。

２．４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶の製造方法
本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を製造する原料となる４^Ｇ−α−グルコシルルチンの由来は特に限定されず、有機合成法によって得られるものであっても、酵素合成法によって得られるものであってもよい。通常、ルチン共存下で澱粉部分分解物にシクロマルトデキストリン・グルカノトランスフェラーゼ（以下、「ＣＧＴａｓｅ」と略称する。）等の糖転移酵素を作用させ、次いで、グルコアミラーゼを作用させ、次いで精製する方法が高純度の４^Ｇ−α−グルコシルルチンの製造に好適である。ＣＧＴａｓｅの起源は特に制限されず、例えば、パエニバチルス（Ｐａｅｎｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、サーモコッカス（Ｔｈｅｒｍｏｃｏｃｃｕｓ）属、サーモアナエロバクタ―（Ｔｈｅｒｍｏａｎａｅｒｏｂａｃｔｅｒ）属、ブレビバクテリウム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ）属、パイロコッカス（Ｐｙｒｏｃｏｃｃｕｓ）属、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ）属、ブレビバチルス（Ｂｒｅｖｉｂａｃｉｌｌｕｓ）属、サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）属、バチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属、ジオバチルス（Ｇｅｏｂａｃｉｌｌｕｓ）属由来のＣＧＴａｓｅなどが挙げられる。４^Ｇ−α−グルコシルルチンの生成率の高さから、ジオバチルス・ステアロサーモフィラス Ｔｃ−９１株（独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター 受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１１２７３）由来のＣＧＴａｓｅを用いるのがより好適である。この酵素合成法によって得られる４^Ｇ−α−グルコシルルチンは、その製造方法に由来する夾雑物を含んでいる。

なお、本明細書でいう「製造方法に由来する夾雑物」とは、製造原料であるデキストリンが分解した糖類やルチン、４^Ｇ−α−グルコシルルチン以外のルチン配糖体、ルチン分解物およびルチン以外のフラボノイド類などを意味する。夾雑物は一般的な精製方法、すなわち、ろ過、遠心分離、ゲルろ過法、吸着又はイオン交換のクロマトグラフィーなどを適宜用いることによりそれぞれ分離することができる。詳細には、精製された４^Ｇ−α−グルコシルルチンを製造する場合には、多孔性合成吸着剤による吸着性の差を利用して４^Ｇ−α−グルコシルルチンと上記の夾雑物とを分離して精製すればよい。本発明でいう多孔性合成樹脂とは、多孔性で広い吸着表面積を有し、かつ非イオン性のスチレン−ジビニルベンゼン重合体、フェノール−ホルマリン樹脂、アクリレート樹脂、メタアクリレート樹脂などの合成樹脂であり、例えば、市販されているＲｏｈｍ＆Ｈａａｓ社製造の商品名アンバーライトＸＡＤ−１、アンバーライトＸＡＤ−２、アンバーライトＸＡＤ−４、アンバーライトＸＡＤ−７、アンバーライトＸＡＤ−８、アンバーライトＸＡＤ−１１、アンバーライトＸＡＤ−１２、三菱化成工業株式会社製造の商品名ダイヤイオンＨＰ−１０、ダイヤイオンＨＰ−２０、ダイヤイオンＨＰ−３０、ダイヤイオンＨＰ−４０、ダイヤイオンＨＰ−５０、ＩＭＡＣＴＩ社製造の商品名イマクティＳｙｎ−４２、イマクティＳｙｎ−４４、イマクティＳｙｎ−４６などがある。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチンを生成せしめた反応液の精製方法は、反応液を、例えば、多孔性合成吸着剤を充填したカラムに通液すると、４^Ｇ−α−グルコシルルチンおよび比較的少量の未反応ルチンが多孔性合成吸着剤に吸着するのに対し、多量に共存するルチン配糖体、水溶性糖類は吸着されることなく、そのまま流出する。必要ならば、糖転移酵素の反応終了後、多孔性合成吸着剤に接触させるまでの間に、例えば、反応液を加熱して生じる不溶物を濾過して除去したり、ケイ酸アルミン酸マグネシウム、アルミン酸マグネシウムなどで処理して反応液中の蛋白性物質などを吸着除去したり、強酸性イオン交換樹脂（Ｈ型）、中塩基性または弱塩基性イオン交換樹脂（ＯＨ型）などで処理して脱塩するなどの精製方法を組み合せて、利用することも随意である。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶の調製に用いる高純度の４^Ｇ−α−グルコシルルチンは、結晶を形成させるために十分に高純度であればよい。４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度は、前記したＨＰＬＣ分析により確認することができる。結晶を製造するための原料としての４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度は、通常、９５％以上、望ましくは、９８％以上、より望ましくは９９％以上の４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度を有するものが好適である。

有機化合物の結晶化は、通常、当該有機化合物を含む溶液を過飽和状態にすることにより、溶解状態から非溶解状態になり、特定の条件を満たす場合に、結晶として析出するという性質に基づき行なわれる。４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶化は、具体的には、
（１）４^Ｇ−α−グルコシルルチンにエタノール水溶液を添加し、室温において溶解させる；
（２）４^Ｇ−α−グルコシルルチンが溶解した溶液の温度を低下させ、過飽和状態にする；
（３）過飽和状態にした４^Ｇ−α−グルコシルルチン溶液を、一定温度（例えば、４℃）に保持して結晶を析出させる；
という操作によって行なうことができる。また、必要に応じて種結晶を添加することにより結晶化を促進することもできる。

本発明の結晶の調製に用いる溶媒としては、エタノールと水を混合したエタノール水溶液を用いるのが好ましい。溶媒としてエタノール水溶液を用いる場合、エタノール濃度は、通常、７０％（ｖ／ｖ）以下、望ましくは、６０％（ｖ／ｖ）以下、より望ましくは、５０乃至５５％（ｖ／ｖ）が好ましい。エタノール濃度が８０％（ｖ／ｖ）以上である場合、溶液の固形分濃度にもよるが、結晶が急激に析出し、微小な針状結晶が相互に固着した形状の結晶が生成するため好ましくない。また、アルコール濃度が低すぎると結晶が析出しないか又は析出したとしても成長に長時間を要するという不都合が生じる。

結晶化の温度条件は、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの濃度、溶媒のエタノール濃度にもよるが、通常０〜４０℃、望ましくは、０〜３０℃、より望ましくは、４〜１０℃であることが好ましい。

結晶化時の溶液の固形分濃度は、結晶化の温度、溶媒のエタノール濃度にもよるが、通常、４０％（ｗ／ｗ）以下、望ましくは、３０％（ｗ／ｗ）以下、より望ましくは、１５乃至２０％（ｗ／ｗ）が好ましい。

３．４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末
本明細書でいう「４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末」とは、上記した本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を含有する粉末を意味し、そのような結晶含有粉末における４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度は、４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶が含まれる限り、食品、化粧品などの用途に応じ、適宜、選択することができ、通常、８０％以上、より望ましくは８５．０％以上から９５．０％未満のものが好適に利用できる。また、粉末Ｘ線回折により、主な特徴的回折角（２θ）として７．３°（ミラー指数（ｈｋｌ）：０２０）、７．６°（ミラー指数：０２１）、１３．１°（ミラー指数：０２５）、１７．５°（ミラー指数：００８）及び１８．３°（ミラー指数：１３５）を示す４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末である。

４．４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末の製造方法
本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を製造する原料となる４^Ｇ−α−グルコシルルチンは、結晶含有粉末が形成されるに最低限必要と考えられる純度があれば良く、原料の４^Ｇ−α−グルコシルルチン含有溶液は、８０％以上、望ましくは、９０％以上の４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度を有するものであれば、目的とする４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を原料に対して高収率で製造することが可能である。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を種晶として添加する事により、比較的高純度ではない４^Ｇ−α−グルコシルルチン含有溶液から高収率で得ることができる。よって、４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、通常の結晶品の製造工程に必要とされる複数回の再結晶工程を省略することが出来る。したがって、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、本発明の結晶と同様な機能を有しつつ、再結晶化による収量の損失や工程コストの増加がなく製造を行うことができるので、粉末原料を取り扱うことを前提に設計された製造プラントを用いる飲料を含めた食品製造、化粧品製造の各分野において、他の単独若しくは複数の粉末状の食品素材、化粧品素材などに医薬品級に該当する本発明の結晶に対して比較的廉価に含有せしめることができるという優れた利点を備えている。

５．４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶の医薬品素材としての用途
本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、従来の４^Ｇ−α−グルコシルルチンと同様に、医薬品素材又は医薬部外品素材として用いることができる。医薬品又は医薬部外品の形態としては、例えば、ドリンク剤、エキス剤、エリキシル剤、カプセル剤、顆粒剤、丸剤、眼軟膏剤、口腔粘膜貼付剤、懸濁剤、乳剤、硬膏剤、座剤、散剤、酒精剤、錠剤、シロップ剤、注射剤、チンキ剤、点眼剤、点耳剤、点鼻剤、トローチ剤、軟膏剤、芳香水剤、鼻用噴霧剤、リモナーデ剤、リニメント剤、流エキス剤、ローション剤、湿布剤、噴霧剤、塗布剤、浴剤、貼付剤、パスタ剤、パップ剤などが挙げられる。また、必要に応じて、直腸内投与、注射などの投与方法に適した剤形とすることもできる。さらには、医薬用無毒性担体を併用した上で、製剤上の一般的な手段を用いて医薬品等を製造することができる。

上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングルコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、ゼラチン、アルブミン、水、生理食塩水などが挙げられる。また、医薬用無毒性担体に加え、必要に応じて、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤、等張化剤などの慣用の添加剤を適宜添加することもできる。本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は結晶構造が明らかで、純度も極めて高い。それ故に、有効性や安全性の確認が容易であり、吸湿性が低く保存安定性が良好なため日常的に投与できるため、医薬品素材又は医薬部外品素材として有用である。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を血行改善剤として用いる場合には、単独もしくは、トコフェロール、酢酸レチノール、塩酸ピリドキシン、グリシン、エタノール、ニコチン酸アミド、甘草エキス、トウキエキスなどの他の生理活性物質の１又は複数との組成物として利用することができる。また、神経機能調節剤としては用いる場合には、単独もしくは、必要に応じて、神経疾患の治療に通常用いられる精神神経用剤、自律神経用剤、感覚器官用剤や、脂肪酸、ビタミン類、ミネラル類、漢方薬、さらには、インターフェロン−αをはじめとするインターフェロン類から選ばれる１又は複数との組成物として利用することができる。

６．４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末の化粧品素材としての用途
近年、加齢により皮膚（真皮）に老化蛋白質が生成、蓄積することにより、しわ、たるみ、黄ぐすみなど皮膚のトラブルが生じる事が報告されている。通常、皮膚はそれを構成しているケラチンやコラーゲン等の蛋白質の分解と合成が繰り返される（代謝回転）ことにより健康に維持されているが、老化蛋白質は修飾を受けているため代謝（分解）され難く、加齢とともに皮膚に蓄積してゆくこととなる。老化蛋白質は、主に二つの修飾反応により体内で形成されると言われている。一つは、糖が蛋白質と反応する「糖化（Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ）」であり、もう一つは、過酸化脂質が蛋白質と反応する「カルボニル化」である。そして、これらの反応には生体内の活性酸素が深くかかわっていることが知られている。

「糖化」とは、メイラード反応（褐変化反応）とも呼ばれ、グルコース等の還元糖が真皮のコラーゲンや角質層のケラチンと非酵素的に結合して糖化蛋白質を生じることを意味する。生成した糖化蛋白質は糖化最終産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｇｌｙｃａｔｉｏｎ Ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ：ＡＧＥｓ）とも呼ばれ、ＡＧＥｓの生成過程において、コラーゲンやケラチンは分子内及び／又は分子間で架橋され、物理的、生理的変化（変性）が引き起こされる。

また、「カルボニル化」とは、脂質の酸化で生じた過酸化脂質がさらに分解されることで、アクロレイン、４−ハイドロキシ−２−ノネナール、マロンジアルデヒドなどの反応性の高いアルデヒド（カルボニル化合物）を生じ、カルボニル化合物によりコラーゲンやケラチン等が非特異的、非酵素的に修飾されてカルボニル化蛋白質を生じることを意味する。生成したカルボニル化蛋白質は脂質過酸化最終産物（Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｌｉｐｏｘｉｄａｔｉｏｎ Ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ：ＡＬＥｓ）とも呼ばれ、ＡＬＥｓの生成過程において、コラーゲンやケラチンは分子内及び／又は分子間で架橋され、物理的、生理的変化（変性）が引き起こされる。

ここで、４^Ｇ−α−グルコシルルチンは、ポリフェノールの一種であるルチンと同じく、フェノール性水酸基を有している。フェノール性水酸基は、ラジカル補足活性を有するため、活性酸素を消去して抗酸化作用を奏するので、上述した「糖化」反応や「カルボニル化」反応の原因である活性酸素の発生を抑制する。

なお、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、単独でも「糖化」反応や「カルボニル化」反応を抑制することができるものの、これらの反応の抑制作用を有する公知の植物成分と併用することも有利に実施できる。

糖化反応及びカルボニル化反応抑制効果を有する公知の植物成分としては、例えば、アーティチョーク、アイブライト、アオミズ、アキグミ、アグリモニー、アグニ果実、アケビ、アサイ果実、アシュワガンダ、アスナロ、アセンヤクノキ、アベマキ、アマチャヅル、アニス、アメリカンマンサク、アリスチン、イカリソウ、イタドリ、イチョウ、イチヤクソウ、イチゴ、イトハユリ、イトフノリ、イヌビワ、イペ樹皮、イロハモミジ、イワトユリ、ウイキョウ、ウイッチヘーゼル、ウインターグリーン、ウコン、ウメ、ウラジロガシ、エピメジウム・ブレビコルヌム、エイジツ、エキナセア、エゾウコギ、エニシダ、エルカンプーレ、エルダー、エルバ・マテ、エンドウ、オウギヤシ、オウバク、オウレン、オオアザミ、オート麦、オオバタネツケバナ、オカヒジキ、オトメユリ、オニタ、オニユリ、オリーブ、オレガノ、オレンジ、カボチャ種子、カツアバ樹皮、カノコユリ、ガラナ、カルカデ、カンアオイ、カンゾウ、カントウ、ガンビールノキ、キキョウ、ギシギシ、キンギンカ、クサギ、クスノハガシワ、クルマユリ、クルミ、ゲットウ、コケモモ、コナギ、サガラメ、ザクロ、サツマイモ、サルサパリラ、サンザシ、サンショウソウ、シソ、シカクマメ、シモツケソウ、シャクヤク、ショウヨウダイオウ、シラカバ、シラヤマギク、シロザ、シロヨメナ、セイヨウオオバコ、セイヨウサンザシ、セキセツソウ、ソバ、タカサゴユリ、タネツケバナ、ダビラ・ルゴサ、タモトユリ、チャデブグレ、チョウジ、チャノキ、チョウジノキ、チンネベリーセンナ、ツボクサ、デイジー、ディル、デビルスクロウ、ツワブキ、テッポウユリ、デビルスクロー根、テンチャ、トウニン、ドクダミ、トゲナシ、杜仲茶葉、トマト、トルメンチラ、ナガバギシギシ、ニワトコ、ノウゼンハレン、ノコンギク、ハッカ、ハカタユリ、ハギ、ハスイモ、パッションフラワー、パッションフルーツ、パフィア根、バラ、パラミツ、ヒカンザクラ、ヒマワリ、ヒメウワバミソウ、ヒメユリ、ビラコ、ビンロウジュ、フキ、フジマメ、ブドウ、ブラックコホシュ、ベニバナボロギク、マイマイカ、マタタビ、マチルス、マツ、マテバシイ、マテ茶、マドンナ・リリー、マリアアザミのソウ果、マロニエ、ミツバウツギ、ムベ、モズク、ヤシャジツ、ヤナギ、ヤブカンゾウ、ヤマトゲバンレイシ、ヤマユリ、ユキノシタ、ヨウサイ、ヨメナ、ライチ種子、リーガル・リリー、リュウキュウチク、リュウキュウバライチゴ、リンゴ未熟果、リンデン花、ルイボス、レタス、レモン、レモングラス、レモンタイム、レモンバーベナ、レモンバーム、ローズヒップ、ローズピンクバッツ、ローズマリー、ローズレッド、ローマカミツレ、ローレル、ロゼア、ロッグウッド、ワレモコウ、レンゲソウ、柿葉、甘草葉、黒大豆種皮、黒米種子、月桃葉、細葉百合、西洋ヤナギ、杜仲葉、明日葉の葉などの植物抽出物が挙げられる。

また、皮膚のトラブルとして、皮膚（真皮）の光老化による、しみ、そばかすの発生も長年大きな問題として、注目されている。このような光老化症状は、日光に含まれる紫外線及び赤外線を長年にわたり繰り返し浴びる事により発生し、特にしみは最も早く発症し、日本人では、４０歳を過ぎたころから顔に出始める。

しみ、そばかすの発症のメカニズムは、表皮角化細胞および色素細胞のメラニン生成に関わる遺伝子の変異によるものと考えられている。この変異メカニズムの詳細については、未だ明確にされていない点も多いが、角化細胞遺伝子（ＳＣＦ）の発現を促進させる転写因子の変異や色素細胞におけるＳＣＦ受容体の変異が関与していると言われている。

４^Ｇ−α−グルコシルルチンは、すでに説明したように抗酸化作用を有し、さらに紫外線吸収特性を有している為、上記のような遺伝子の変異現象に対しても有効である。具体的には、紫外線による角化細胞のＤＮＡ損傷を防ぐことにより、その結果として皮膚の光老化現象（しみ、そばかす）を抑制することが期待される。

つまり、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、皮膚のしわ、たるみ、黄ぐすみなどの原因となる老化蛋白質の生成を抑制し、さらには、しみ、そばかすの原因となる角化細胞のＤＮＡ損傷を防ぐ効果を発揮するので、アンチエイジング用皮膚外用剤の有効成分として極めて有用である。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を皮膚外用剤として使用する場合、皮膚外用剤に、慣用の助剤、例えばエデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナトリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等の金属封鎖剤、カフェイン、タンニン、ベラバミル、トラネキサム酸およびその誘導体、甘草抽出物、グラブリジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種生薬、酢酸トコフェロール、グリチルリチン酸およびその誘導体またはその塩等の薬剤、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸等の美白剤、グルコース、フルクトース、マンノース、ショ糖、トレハロース等の糖類、レチノイン酸、レチノール、酢酸レチノール、パルミチン酸レチノール等のビタミンＡ類などを適宜配合することができる。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、従来の４^Ｇ−α−グルコシルルチンと同様に、化粧品素材として用いることもできる。本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を化粧品素材として利用する最終製品としては、例えば、ローション、クリーム、乳液、ゲル、粉末、ペースト、ブロックなどの形態で、石けん、化粧石けん、漢方石鹸、肌洗い粉、洗顔クリーム、洗顔フォーム、フェイシャルリンス、ボディーシャンプー、ボディーリンス、シャンプー、リンス、髪洗い粉などの清浄用化粧品、セットローション、ヘアブロー、チック、ヘアクリーム、ポマード、ヘアスプレー、ヘアリキッド、ヘアトニック、ヘアローション、養毛料、染毛料、頭皮用トリートメントなどの頭髪化粧品、化粧水、バニシングクリーム、エモリエントクリーム、エモリエントローション、パック用化粧料（ゼリー状ピールオフタイプ、ゼリー状ふきとり型、ペースト状洗い流し型、粉末状など）、クレンジングクリーム、コールドクリーム、ハンドクリーム、ハンドローション、乳液、保湿液、アフターシェービングローション、シェービングローション、プレシェーブローション、アフターシェービングクリーム、アフターシェービングフォーム、プレシェーブクリーム、化粧用油、ベビーオイルなどの基礎化粧品、ファンデーション（液状、クリーム状、固型など）、タルカムパウダー、ベビーパウダー、ボディパウダー、パヒュームパウダー、メークアップベース、おしろい（クリーム状、ペースト状、液状、固型、粉末など）、アイシャドウ、アイクリーム、マスカラ、眉墨、まつげ化粧料、頬紅、頬化粧水などのメークアップ化粧品、香水、練香水、粉末香水、オーデコロン、パフュームコロン、オードトワレなどの芳香化粧品、日焼けクリーム、日焼けローション、日焼けオイル、日焼け止めクリーム、日焼け止めローション、日焼け止めオイルなどの日焼け止め化粧品、マニキュア、ペディキュア、ネイルカラー、ネイルラッカー、エナメルリムーバー、ネイルクリーム、爪化粧料などの爪化粧品、アイライナー化粧品、口紅、リップクリーム、練紅、リップグロスなどの***化粧品、口臭防止剤、練歯磨、マウスウォッシュなどの口腔化粧品、バスソルト、バスオイル、浴用化粧料などの入浴用化粧品などが挙げられる。本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を利用したこれら化粧品は、比較的純度が高く安全な物質であるため日常的に使用することができる。

さらに、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、他の粉末状の化粧品素材との粉末状組成物の形態で用いることもできる。混合させる他の粉末状の化粧品素材としては、例えば、白粉（おしろい）、タルク、カオリン、マイカ、セリサイト、澱粉、ベントナイト、シルクパウダー、セルロースパウダー、ナイロンパウダー、バスソルト、ソープチップ、二酸化チタン、二酸化ケイ素（シリカ）、酸化亜鉛などが挙げられる。

７．４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末の食品素材としての用途
本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、従来の４^Ｇ−α−グルコシルルチンと同様に、食品素材として用いることができる。本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、酸味、塩から味、渋味、旨味、苦味などの呈味を有する各種物質ともよく調和し、耐酸性、耐熱性も大きいので、普通一般の飲食物、嗜好物として用いることができる。例えば、醤油、粉末醤油、味噌、粉末味噌、もろみ、ひしお、フリカケ、マヨネーズ、ドレッシング、食酢、三杯酢、粉末すし酢、中華の素、天つゆ、麺つゆ、ソース、ケチャップ、焼肉のタレ、カレールウ、シチューの素、スープの素、ダシの素、複合調味料、みりん、新みりん、テーブルシュガー、コーヒーシュガーなどの各種調味料、ポテトチップ、フライドポテト、フライドオニオン、コーンチップス、バナナチップス、野菜チップ、揚げせんべい、大学芋、芋ケンピ、かりんとう、スナック菓子などの揚げ菓子、コロッケ、カツレツ、フライ、天麩羅、油揚げ、薩摩揚げ、揚げ玉、厚揚げ、春巻き、油揚げ麺（即席麺）などの揚げ物、せんべい、あられ、どら焼き、最中、饅頭、鯛焼き、たこ焼き、麦こがし、おこし、カリントウ、求肥、餅類、まんじゅう、ういろう、あん類、羊羮、水羊羮、錦玉、ゼリー、カステラ、飴玉などの各種和菓子、ビスケット、クラッカー、クッキー、パイ、プリン、プレッツェル、シリアル、ポップコーン、シュークリーム、ワッフル、スポンジケーキ、ドーナツ、チョコレート、チューインガム、キャラメル、キャンデーなどの各種洋菓子、スナック食品、パン、ピザ、パイ、スポンジケーキ、ワッフル、カステラ、ドーナツなどの小麦加工品、アイスクリーム、シャーベットなどの氷菓、果実のシロップ漬、氷蜜などのシロップ類、バタークリーム、カスタードクリーム、フラワーペースト、ピーナッツペースト、フルーツペーストなどのスプレッド、ペースト類、ジャム、マーマレード、シロップ漬、果糖などの果実、野菜の加工食品類、パン類、麺類、米飯類、人造肉などの穀類加工食品類、焼肉、焼き鳥、焼き豚、焼き魚、焼きおにぎり、焼きもち、チャーハン、ハンバーグ、餃子、グラタン、ハヤシライス、カレーライス、リゾット、キッシュなどの惣菜食品、サラダオイル、マーガリンなどの油脂食品類、福神漬、べったら漬、千枚漬、らっきょう漬などの漬物類、たくあん漬の素、白菜漬の素などの漬物の素類、ハム、ソーセージなどの畜肉製品類、煎り卵、ダシ巻き卵、錦糸卵、ゆで卵などの卵加工品、魚肉ハム、魚肉ソーセージ、カマボコ、チクワ、ハンペンなどの魚肉製品、ウニ、イカの塩辛、酢コンブ、さきするめ、ふぐのみりん干しなどの各種珍味類、のり、山菜、するめ、小魚、貝などで製造されるつくだ煮類、煮豆、ポテトサラダ、コンブ巻、天ぷらなどのそう菜食品、錦糸卵、乳飲料、バター、チーズなどの卵、乳製品、魚肉、畜肉、果実、野菜などのビン詰、缶詰類、合成酒、増醸酒、果実酒、洋酒などの酒類、アミノ酸飲料、ペプチド飲料、豆乳飲料、乳飲料、乳酸飲料、果汁飲料、炭酸飲料、野菜飲料、ココア飲料、コーヒー飲料、ジュース、甘酒、しるこなどの飲料、麦茶、ほうじ茶、中国茶、紅茶などの茶加工品及び茶飲料、甘栗、落花生、アーモンド、チョコレートパウダー、コーヒーパウダー、コーヒー、ココア、カレー粉、いりゴマ、いり米、いり大麦、はったい粉、きな粉、焙煎小麦胚芽食品、焙煎米胚芽食品などの焙煎加工品、調味された農産加工品、肉加工品、卵加工品、水産加工品、更にはそれらのビン、缶詰などの飲食物、プリンミックス、ホットケーキミックス、即席ジュース、即席コーヒー、即席しるこ、即席スープなど即席飲食品、サプリメント等の健康食品（機能性食品）、特別用途食品（病者用食品、高齢者用食品、育児用食品）、特定保健用食品、ゲル化剤や膨張剤等の加工材料、保存食、非常食、宇宙食などが挙げられる。本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を混合されるこれら飲食物は、ビタミンＰ強化作用、黄色着色作用、抗酸化作用、品質改良などの目的で有利に利用することができる。

さらには、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、果物などに由来する天然色素の退色又は変色防止の目的で、果汁飲料、粉末飲料、果物の水煮や、ジャム、ゼリー、ペーストなどのビン詰などに、また、酸化防止の目的で、コーヒーフレーバー、柑橘系フレーバーなどの劣化防止に用いることができる。加えて、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、ビタミン類の光分解・酸化防止、菓子類、バターなどの油脂含有食品の劣化防止、アントシアニン系色素の増色、柑橘系果汁の風味劣化防止、乳酸菌飲料の風味劣化防止、乳タンパク質の劣化防止、乳の日光臭防止、天然果汁やエキスの呈味（風味）劣化防止、日持ち向上などの目的で使用することができる。

加えて、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、従来公知のアスコルビン酸、アスコルビン酸ソーダ、カテキン、クロロゲン酸、フェルラ酸、等の水溶性抗酸化剤、カロチノイド系物質やビタミンＥなどの油溶性抗酸化剤と併用して用いることにより相加的、相乗的な抗酸化能を発揮することができる。更に本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を含む組成物は脂質代謝改善、血糖値上昇抑制、グリケーション抑制、尿酸値上昇抑制、血管強化を目的とした機能性飲食品に好適に用いられる。

また、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、他の粉末状の食品素材との粉末状組成物の形態で用いることもできる。混合させる他の粉末状の食品素材としては、例えば、ステビア抽出物、酵素処理ステビア、羅漢果抽出物、Ｌ−アスパラチルフェニアラニンメチルエステル、アセスルファムＫ、スクラロースなどの高甘味度甘味料粉末、砂糖、ブドウ糖、水あめ、マルトース、パラチノース、トレハロース、エリスリトール、ソルビトール、マルチトール、パラチニットなどの糖質粉末や穀粉、澱粉、粉糖、粉末調味料、粉末香辛料、粉末果汁、粉末油脂、粉末ペプチド、粉末卵黄、粉乳、脱脂粉乳、粉末コーヒー、粉末ココア、粉末味噌、粉末醤油、野菜粉末などが挙げられる。

本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、その他の用途として、家畜、家禽、蜜蜂、蚕、魚などの飼育動物のための飼料、餌料など、具体的には、各種キャットフード、ドッグフード、観賞魚の餌、養殖魚の餌などにビタミンＰ強化剤、抗酸化剤、嗜好性向上などの目的で配合して利用することもできる。さらには、紫外線吸収剤、劣化防止剤などとしてプラスチック製品などに配合して利用することも有利に実施できる。

以下、参考例及び実施例に基づき本発明をさらに詳しく説明する。しかしながら、以下に示す実施例は、本発明の実施の好適な例として挙げるものであり、本発明はこれらによってなんら限定されるべきものではない。

＜参考例１：４^Ｇ−α−グルコシルルチン非晶質粉末の調製＞
ルチン（試薬特級、和光純薬工業株式会社販売）５質量部を６Ｎの水酸化ナトリウム溶液に溶解し、これにデキストリン（商品名『パインデックス＃１』、松谷化学工業株式会社販売、水分７．７％）を１５質量部添加し、濃度が１５％（ｗ／ｖ）となるように、それぞれを２ｍＭのＣａＣｌ_２水溶液に添加し、５０℃に加温し、撹拌することにより完全に溶解した。塩酸を用いて溶液のｐＨを９．０に調整した後、ジオバチルス・ステアロサーモフィラス Ｔｃ−９１株（独立行政法人産業技術総合研究所、特許生物寄託センター 受託番号ＦＥＲＭ ＢＰ−１１２７３）由来のＣＧＴａｓｅをデキストリン１ｇ当たり１００単位添加し、５０℃で２４時間酵素反応を行った。次いで、１００℃で１０分間熱処理して酵素を失活させた後、６Ｎ塩酸を用いてｐＨ４．０に調整し、これにグルコアミラーゼ（商品名『ＸＬ−４』、ナガセケムテックス社販売）を、デキストリンの固形分１ｇ当たり２０単位加え５０℃で２４時間反応させた。反応後、１００℃で１０分間処理することにより酵素反応を停止させた。この反応液に活性炭を加え６０℃で１時間処理した後に珪藻土濾過した。得られた濾液を、吸着用樹脂(『ＨＰ−２０』、三菱化学製）を充填したカラムに供し、ルチンおよびルチングルコシドを樹脂に吸着させた後、水洗し、次いで、５０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液を用いてルチンおよびルチングルコシドを溶出させた。この溶出液を濃縮し、活性炭およびイオン交換樹脂を用いて精製した後、噴霧乾燥することにより４^Ｇ−α−グルコシルルチン含有非晶質粉末を３００ｇ調製した。本品は、４^Ｇ−α−グルコシルルチンを約８８％含有していた。

＜参考例２：高純度４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶性粉末の調製＞
参考例１で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチン含有非晶質粉末（４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度８８％）１００ｇに８０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液を１５０ｇ加え、加熱溶解した後、２５℃で二日間保存した。生成した結晶は結晶懸濁液を濾過することにより回収し、室温で２時間真空乾燥して結晶性粉末を７０ｇ調製した。このような結晶化の工程を数回繰り返して、高純度４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶性粉末（純度９７．４％）を約２１ｇ調製した。

＜４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶の調製＞
参考例２で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶性粉末１０ｇに、６０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液を７０ｇ加え溶解した後、４℃で一週間静置し、結晶化を行なった。晶出した結晶はガラスフィルターにて濾集し、少量の７５％エタノール水溶液で洗浄した後、室温で２時間真空乾燥した。この一連の操作により、純度９９．６％の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を５．２ｇ、原料に対し５２％の収率で得た。得られた結晶を被験試料１とした。

＜４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末の調製＞
参考例１で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチン含有非晶質粉末（４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度８８％）１００ｇに、７０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液を１５０ｇ加え、加熱溶解した後、さらに種晶として、実施例１で調整した被験試料１を１．０ｇ添加、混合した後２５℃で４８時間静置し、結晶化を行った。晶出した結晶は結晶懸濁液を濾過することにより回収し、少量の７５％エタノール水溶液で洗浄した後に、室温で２時間真空乾燥して４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末（純度９３．４％）を６２ｇ調製した。得られた結晶含有粉末を被験試料２とした。

＜４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶の各種分析＞
実施例１で調製した被験試料１を用いて、以下に示した物性を測定分析した。

（１）結晶写真
被験試料１を倒立型顕微鏡（『ＴＭＳ−Ｆ型』、日本分光工業株式会社製）を用いて撮影した写真を図1に示した。図１から分かるように、実施例１で調製した結晶は、公知の方法（特許文献３の実施例Ａ−６に記載の方法）で調製した結晶（図７参照）と比較して、結晶のサイズが大きな柱状結晶を多く含んでいる事が分かる。

（２）粉末Ｘ線回折
粉末Ｘ線回折装置（『Ｘ’Ｐｅｒｔ Ｐｒｏ ＭＰＤ』、スペクトリス株式会社製）を用い、被験試料１の約５０ｍｇをシリコン製無反射板に乗せ、回転させながらＣｕ対陰極から放射される特性Ｘ線であるＣｕＫα線（Ｘ線管電流 ４０ｍＡ、Ｘ線管電圧４５ｋｖ、波長１．５４０５Å）による反射法で粉末Ｘ線回折パターンを求めた。被験試料１の粉末Ｘ線回折パターンを図２に示した。図２に示すとおり、被験試料１は主な特徴的回折角（２θ）として７．３°（ミラー指数（ｈｋｌ）：０２０）、７．６°（ミラー指数：０２１）、１３．１°（ミラー指数：０２５）、１７．５°（ミラー指数：００８）及び１８．３°（ミラー指数：１３５）に回折ピークを示した。なお、上述の特許文献３記載の結晶の主な特徴的回折角（２θ）は、４．４°、８．４°、１１．５°、１８．２°（特許文献３の実施例Ａ−４）、又は、６．８°、８．１°、１５．４°、１７．８°（特許文献３の実施例Ａ−６）であり、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶の主なピークの回折角とは明らかに異なっている。したがって、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、特許文献３で得られた結晶性４^Ｇ−α−グルコシルルチンとは異なる新規な結晶である。なお、被験試料２についても同様に粉末Ｘ線回折パターンを求めたところ、被験試料１と同様な主な特徴的回折角（２θ）を示した。

＜４^Ｇ−α−グルコシルルチン単結晶の調製＞
実施例１で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶（被験試料１）２ｇに１１ｇの５５．０％（ｖ／ｖ）エタノール水溶液を添加、攪拌・溶解し、これを４℃で２０日間保持することにより晶析した。

デジタルマイクロスコープ（『ＧＢＸ１００』、株式会社ナカデン製）を接続した実体顕微鏡下で、晶出した４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶から適切な大きさの結晶を採取し、直ちにパラトンオイルにてコーティングした後、試料ホルダーに搭載し、Ｘ線結晶構造解析用試料（被験試料３）とした。

Ｘ線結晶構造解析用の結晶を採取した残りの結晶懸濁液から、ガラスフィルターにて濾集した結晶を乾燥させたところ、４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶約０．４５ｇを得た。当該結晶の４^Ｇ−α−グルコシルルチン純度は１００％であった。これにより、被験試料３が極めて高純度な単結晶である事が予測される。また、当該結晶の粉末Ｘ線回折を行ったところ、Ｘ線回折パターンは被験試料１と同一の回折パターンを示した。

＜４^Ｇ−α−グルコシルルチンの単結晶のＸ線結晶構造解析＞
実施例４で調製した被験試料３を、試料ホルダーに搭載した後に単結晶Ｘ線回折装置（『Ｒ−ＡＸＩＳ ＲＡＰＩＤ−Ｒ』、株式会社リガク製）にセットし、窒素ガス（−１７０℃）雰囲気下にて、振動写真法により下記の条件にて結晶のＸ線回折パターンを測定した。

＜Ｘ線回折パターン測定条件＞
Ｘ線源：Ｃｕ
出 力：５０ｋＶ，１００ｍＡ
入射Ｘ線：ＣｕＫα線（λ＝１．５４１８７Å）
入射Ｘ線サイズ：約０．５ｍｍφ
結晶サイズ：０．２０×０．２０×０．１５ｍｍ
検出器：イメージングプレート
測定温度：約−１７０℃（窒素ガス吹付け法）

Ｘ線結晶構造解析に用いた４^Ｇ−α−グルコシルルチンの単結晶の実体顕微鏡写真を図３に、そのＸ線回折パターンの一例を図４にそれぞれ示す。

Ｘ線回折パターンにおいて、回折斑点（スポット）が数多く確認され、当該結晶が単結晶であることが確認された。なお、Ｘ線回折スポットの形状は比較的良好であったものの、その強度は弱めであった。観測した６０，５７５個の反射（回折）の内、固有の反射は８，３８８個であった。

上記Ｘ線回折パターンのＸ線回折強度に基づき、直接法により初期構造を求めるとともに、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの構造式を参考として構造モデルを作成し、さらに３，６９１個の反射に基づき最小二乗法により精密化した。なお、解析ソフトウェアとして、株式会社リガク製の『Ｃｒｙｓｔａｌ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ Ｖｅｒ．４．０．１』を用いた。Ｘ線結晶構造解析によって得られた４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶学的データを表１にまとめた。

表１に示すとおり、得られたＸ線回折強度データから、結晶の属する結晶系は、斜方晶系（ｏｒｔｈｏｒｈｏｍｂｉｃ）、空間群は、Ｃ２２２_１であり、格子定数は、ａ＝８．８３３７Å、ｂ＝２４．５５５２Å、ｃ＝４０．３３９１Åであり、α＝β＝γ＝９０°、Ｖ＝８７５０．１Å^３と決定された。また、結晶の単位格子当たりの４^Ｇ−α−グルコシルルチンの分子数を表すＺ値は８となり、本結晶において、結晶の単位格子当たり８分子の４^Ｇ−α−グルコシルルチンが含まれていることが判明した。

＜分子構造及び結晶構造の解析＞
直接法による解析の結果、４^Ｇ−α−グルコシルルチン分子における水素原子は同定することができなかったものの、非水素原子（炭素原子及び酸素原子）の基本骨格については、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの構造情報に基づき各原子位置に元素を配置することができた。座標データの精密化により得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン分子における各酸素原子及び炭素原子の原子座標（ｘ，ｙ，ｚ）とそれぞれの等方性温度因子（Ｂｅｑ）の値を表２及び表３（表２の続き）に示した。

さらに、精密化した座標データから計算して表示した本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶分子のＯＲＴＥＰ図を図５に示した。また、結晶の単位格子当たりの本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶分子のパッキング構造を、a軸方向から見た場合の結晶構造図として図６に示した。なお、表２及び表３における酸素原子、炭素原子の番号はそれぞれ図５の本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶分子のＯＲＴＥＰ図に記載された酸素原子、炭素原子の番号に対応している。また、表２及び表３における各数値の括弧内の数値は標準偏差を意味する。

図５に示すＯＲＴＥＰ図において、炭素番号Ｃ１乃至Ｃ１５と酸素番号Ｏ１乃至Ｏ７が、４^Ｇ−α−グルコシルルチン分子におけるクエルセチンの構造を、炭素番号Ｃ１６乃至Ｃ２７がβ-ルチノースの構造を、また、炭素番号Ｃ２８乃至Ｃ３３がβ-ルチノース構造を構成するグルコース残基の４位水酸基にα−グルコシド結合を介して結合したグルコースの構造を表している。さらに、炭素番号Ｃ３４乃至Ｃ３５と酸素番号Ｏ２２が、エタノールを１分子を含むことを表し、また、酸素番号Ｏ２３乃至Ｏ３０が、水を８分子含むこと事を表している。つまり、当該結晶は４^Ｇ−α−グルコシルルチン１分子、エタノール１分子及び水８分子の比率で構成される４^Ｇ−α−グルコシルルチンの結晶である。一方、図６に示す結晶構造図から、本結晶において、単位格子当たり８分子の４^Ｇ−α−グルコシルルチンがパッキングされていることが良く理解できる。なお、図６の結晶構造図には見かけ上数多くの４^Ｇ−α−グルコシルルチン分子が見られるが、これは単位格子に隣接する他の単位格子にパッキングされた分子も表示されているためである。

＜急性毒性試験＞
実施例１で調製した被験試料１を、試験前に４時間絶食させた５週齢のｄｄｙ系マウスに１，５００ｍｇ／ｋｇ（マウスの体重当り）を一回、経口投与し、毒性症状の発現、程度などを経時的に観察した。その結果、すべてのマウスにおいて１４日間何ら異常を認めず、また、解剖の結果も異常がなかった。よって、ＬＤ_５０は１，５００ｍｇ／ｋｇ以上と判定された。したがって、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチンの毒性は極めて低く、哺乳類に安全に投与可能な化合物であると言える。

＜融点測定＞
４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶粉末（被験試料１）と参考例１で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチン非晶質粉末（対照）を用いて、以下に示す条件で融点及び分解点を測定した。

融点および分解点の測定は、融点測定器(『Ｍｏｄｅｌ ＭＰ−２１』、ヤマト化学株式会社製)を用いて行った。試料をキャピラリー（φ１．０×１．５５×８０ｍｍ、片封じ型、日本理化学機器株式会社製）に約３ｍｇ充填後、昇温速度（５℃／ｍｉｎ）で、室温から徐々に温度を上げてゆき、粉末試料の様子を肉眼で観察した。固体粉末の融解が明確に認められた温度を融点とし、加熱により黒く炭化した温度を分解点とした。両試料の融点及び分解点について、表４に示した。

対照とした非晶質粉末は、明確な融点を示さず、２３２℃付近で黒色化が始まり、２３５℃で完全に黒く炭化し分解した。一方、被験試料1は、９３〜９５℃付近で融解し、さらに加熱を続けると２３９〜２４１℃付近で黒く炭化し分解した。なお、非特許文献２に記載されている結晶性４^Ｇ−α−グルコシルルチンの分解点は、２３２〜２３５℃で、本発明に係る４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶の分解点とは異なる。このように分解点からみても本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は従来公知の４^Ｇ−α−グルコシルルチンの粉末とは明確に区別される新規な結晶である。

＜動的水分吸着量＞
４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶粉末（被験試料１）と参考例１で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチン非晶質粉末（対照）について、以下に示す条件で動的水分吸着量を測定した。

動的水分吸着量の測定は、水分吸脱着測定装置（『ＩＧＡｓｏｒｐ』、ハイデン社製）を用いて行った。当該装置内で、メッシュホルダーに充填した粉末試料（約２０ｍｇ）を、純度９９．９％の窒素ガスを２５０ｍｌ/ｍｉｎの流速で1時間流した後、試料の乾燥重量を測定し、その後、２５℃、相対湿度６０．０％をスタートとして段階的（６０．０、７５．２、８４．２及び９０．１）に上昇させ変化させて、水分を吸着した試料の重量を測定した。なお、湿度条件は、各相対湿度条件下で試料を最低１時間保持した後に、試料重量が一定の重量で平衡に達した時、若しくは２４時間経過した時に次の相対湿度になるように設定した。

相対湿度６０．０％の条件下での重量を元に、各相対湿度条件下での重量増加率を算出した結果を表５に示した。さらに、最終段階の相対湿度（ＲＨ）９０．１％で保持した後の粉末の形態についても併せて表５に示した。

表５に示すとおり、動的水分吸着量試験後の４^Ｇ−α−グルコシルルチン非晶質粉末の重量増加率は約１４％であったのに対し、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶のそれは７％未満と低かった。また、試験後の４^Ｇ−α−グルコシルルチン非晶質粉末が粘張な液状の形態を示したのに対し、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は依然として粉末の形態を維持していた。この結果は、対照の４^Ｇ−α−グルコシルルチン非晶質粉末が非晶質であるために吸湿し潮解するのに対して、本発明の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、結晶であるために相対的に吸湿性が低く、粉末としても安定である事を物語っている。

＜錠剤＞
アスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原 登録商標『ＡＡ２Ｇ』）２０質量部に結晶性β−マルトース１３質量部、コーンスターチ４質量部および実施例１の方法で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶３質量部を均一に混合した後、打錠して錠剤を得た。

本品は、４^Ｇ−α−グルコシルルチンとアスコルビン酸２−グルコシドとの複合ビタミン剤で、アスコルビン酸の安定性もよく、飲み易い錠剤である。

＜液剤＞
塩化ナトリウム６質量部、塩化カリウム０．３質量部、塩化カルシウム０ ． ２質量部、乳酸ナトリウム３.１質量部、トレハロース（株式会社林原 登録商標『トレハ』）４４質量部、実施例１の方法で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶２質量部及びアスコルビン酸２−グルコシド（株式会社林原 登録商標『ＡＡ２Ｇ』）０．５質量部を、精製水１，０００質量部に溶解し、常法にしたがって膜濾過した後、滅菌したプラスチック製容器に３０ｍｌずつ充填して４^Ｇ−α−グルコシルルチンを含有する液剤を得た。

本品は、ビタミン、カロリー及びミネラルの補給作用を兼備し、眼精疲労や重度の筋硬直を伴う疾病を治療するための点眼剤や注射剤として有用である。

＜カプセル剤＞
酢酸カルシウム・一水塩１０質量部、Ｌ−乳酸マグネシウム・三水塩５０質量部、マルトース５７質量部、実施例１の方法で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶２０質量部及びエイコサペンタエン酸２０％含有γ−シクロデキストリン包接化合物１２質量部を均一に混合し、顆粒成形機にかけて顆粒とした後、常法に従って、ゼラチンカプセルに封入して、１カプセル当たり１５０ｍｇ入のカプセル剤を製造した。

本品は、高品質の血中コレステロール低下剤、免疫賦活剤、美肌剤、感受性疾患の予防剤、治療剤、健康増進用食品などとして有利に利用できる。

＜用時溶解型の注射剤＞
実施例４の方法で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチンの単結晶１質量部と、増量剤としてのグルコース９９質量部を水に溶解し、常法に従って精製濾過してパイロジェンフリーとし、この溶液を２０ｍＬ容アンプルに４^Ｇ−α−グルコシルルチン１００ｍｇとなるように分注した後、凍結乾燥し、封入して注射剤を製造した。

本注射剤は、単体で、または、他のビタミン、ミネラルなどと混合して筋肉内又は静脈内に投与することができる。また、本品は、低温貯蔵の必要もなく、使用に際しての生理食塩水などへの溶解性は極めて良好である。本品は、ビタミンＰ補給としてのみならず、抗酸化剤として活性酸素の除去、過酸化脂質の生成抑制などの効果を発揮し、ウイルス性疾患、細菌性疾患、循環器疾患、悪性腫瘍など各種疾患の予防剤、治療剤に有利に利用できる。

＜固形製剤＞
実施例１の方法で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶２０質量部に対し、これにショ糖７０質量部、デキストリン１０質量部、適量の香料を加え、混合機を用い撹拌混合し、４^Ｇ−α−グルコシルルチン固形製剤を製造した。

本品は、他の食品素材と容易に混合可能であり、長期間保存しても褐変や固結を起こしにくいルチン固形製剤である。本品やこれを配合した組成物は、生体内でルチンの生理機能を発揮するので、栄養食品用剤として経口的に摂取することができる。さらに、本品は、糖尿病性血管障害の原因となる糖化最終産物（ＡＧＥｓ）の形成抑制作用も有する固形製剤である。

＜経口経管栄養剤＞
結晶性α−マルトース２０質量部、グリシン１．１質量部、グルタミン酸ナトリウム０．１８質量部、食塩１．２質量部、クエン酸１質量部、乳酸カルシウム０．４質量部、炭酸マグネシウム０．１質量部、実施例４の方法で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチンの単結晶０．１質量部、チアミン０．０１質量部およびリボフラビン０．０１質量部からなる配合物を調製した。この配合物２４ｇずつをラミネートアルミ製小袋に充填し、ヒートシールして経口経管栄養剤を調製した。

本経口経管栄養剤は、一袋約３００〜５００ｍｌの滅菌水に溶解し、経口栄養補給液または鼻腔、胃、腸などへの経管栄養補給液として有利に利用できる。

＜軟膏＞
酢酸ナトリウム・三水塩１質量部、乳酸カルシウム４質量部をグリセリン１０質量部と均一に混合し、この混合物を、ワセリン５０質量部、木ロウ１０質量部、ラノリン１０質量部、ゴマ油１４．５質量部、実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末１質量部及びハッカ油０．５質量部の混合物に加えて、更に均一に混和して軟膏を製造した。

本品は、抗酸化性を有し、安定性が高く、高品質の日焼け止め、美肌剤、色白剤などとして、更には外傷、火傷の治癒促進剤などとして有利に利用できる。

＜入浴剤＞
ＤＬ−乳酸ナトリウム２１質量部、ピルビン酸ナトリウム８質量部、実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末５質量部及びエタノール４０質量部を、精製水２６質量部及び着色料、香料の適量と混合し、入浴剤を製造した。

本品は、入浴用の湯に１００乃至１０，０００倍に希釈して入浴剤として利用することができる。さらに、本品は、美肌や色白効果を有しており、洗顔用水、化粧水などに適宜希釈して利用することができる。

＜乳液＞
ポリオキシエチレンベヘニルエーテル０．５質量部、テトラオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール１質量部、親油型モノステアリン酸グリセリン１質量部、ピルビン酸０．５質量部、ベヘニルアルコール０．５質量部、アボガド油１質量部、実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末１質量部、ビタミンＥ及び防腐剤の適量を、常法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸ナトリウム１質量部、１，３−ブチレングリコール５質量部、カルボキシビニルポリマー０．１質量部及び精製水８５．３質量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、更に香料の適量を加えて攪拌混合し乳液を製造した。

本品は、日焼け止め、しみ・そばかす防止、美肌、色白用の乳液として有利に利用でき、さらにはＡＧＥｓやＡＬＥｓの生成を阻害し、しわやたるみ、くすみの防止用乳液として有利に利用することができる。

＜化粧用クリーム＞

モノステアリン酸ポリオキシエチレングリコール２質量部、自己乳化型モノステアリン酸グリセリン５質量部、実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末２質量部、流動パラフィン１質量部、トリオクタン酸グリセリル１０質量部及び防腐剤の適量を、常法に従って加熱溶解し、これにＬ−乳酸２質量部、１，３−ブチレングリコール５質量部及び精製水６６質量部を加え、ホモゲナイザーにかけ乳化し、更に香料の適量を加えて攪拌混合しクリームを製造した。

本品は、抗酸化性を有し、安定性が高く、高品質の日焼け止め、しみ・そばかす防止、美肌、色白用の化粧クリームとして有利に利用でき、さらにはＡＧＥｓやＡＬＥｓの生成を阻害し、しわやたるみ、くすみ防止用の化粧クリームとして有利に利用することができる。

＜レモンフレーバー＞
レモンオイル５０ｇに６５％（ｖ／ｖ）エタノール５００ｇを加え室温下で１０分間撹枠した後、静置して分離する上層のテルペン層を除去し、エタノール層を濾紙で濾過してレモンフレーバー４９５ｇを得た。得られたレモンフレーバーに実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を０．０４質量％添加溶解し、保存安定性に優れたレモンフレーバーを調製した。

本品は、４^Ｇ−α−グルコシルルチンを含有していることから、ビタミンＰ様作用が強化されており、レモンの香気香味の変敗、異味異臭が発生せず、保存安定性に優れたレモンフレーバーである。

＜チューインガム＞
ガムベース３質量部を柔らかくなるまで加熱融解し、これにトレハロース含量約５０％（ｗ／ｗ）の粉末緑黄色野菜を７質量部加え、さらに、適量の着色料及び着香料とともに、実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を固形分重量含量０．１％になるように加えた後、常法により練り合わせ、成型し、包装して４^Ｇ−α−グルコシルルチンを含有するチューインガムを得た。

テクスチャー、呈味ともに良好な本品は、血行を改善・維持し、肩こり、腰痛、筋肉痛などに伴う筋硬直を緩和したり予防するためのチューインガムとして有用である。

＜健康食品＞
脱脂乳８５質量部、脱脂粉乳３質量部、トレハロース（株式会社林原 登録商標『トレハ』）６質量部、寒天０.１質量部、糖転移ビタミンＰ類として実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末３質量部、粉末糖転移ヘスペリジン４質量部、ブルーベリーエキス１質量部、及び精製水２質量部を調合タンクに入れ、撹拌しながら５５℃に加熱して完全に溶解した。次いで、常法にしたがって混合物を均質化し、殺菌冷却器により殺菌し、スターターを３％（ｗ／ｗ）接種し、プラスチック容器に充填した後、３７℃で５時間発酵させて糖転移ビタミンＰを含有するヨーグルトタイプの健康食品を得た。

風味、呈味ともに良好な本品は、血行を改善・維持し、肩こり、腰痛、筋肉痛などに伴う筋硬直を緩和したり予防するための健康食品として有用である。また、本品は、ブルーベリー由来天然色素の退色も防止され、乳タンパクの劣化防止機能を有したヨーグルトタイプの健康食品である。

＜乳酸菌飲料＞
脱脂粉乳１７５質量部、実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末３０質量部及びラクトスクロース高含有粉末（株式会社林原 登録商標『乳果オリゴ』）を水１，５００質量部に溶解し、６５℃で３０分間殺菌し、４０℃に冷却後、これに、常法に従って、乳酸菌のスターターを３０質量部植菌し、３７℃で８時間培養して乳酸菌飲料を得た。

本品は、ビタミンＰ様作用を有する４^Ｇ−α−グルコシルルチンやオリゴ糖を含有し、乳酸菌を安定に保つだけでなく、ビフィズス菌増殖促進作用、整腸作用を有し、また、乳タンパクの劣化が防止された、長期間風味が良好に維持される乳酸菌飲料である。

＜健康補助食品＞
実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を１質量部とトレハロース（株式会社林原 登録商標『トレハ』）９９質量部を均一に混合した後、ガラス瓶に５０ｇずつ充填した製品とした。

溶解性と取扱い性に優れた本品は、血行を改善・維持し、肩こり、腰痛、筋肉痛などに伴う筋硬直を緩和したり予防するための健康補助食品として有用である。

＜フキの水煮＞
フキを皮むきし、適当な長さに切断して、薄い食塩水に数時間浸し、これを実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末と青色１号とを配合して調製した緑色着色料を含有する液で煮込んで、緑色の鮮かなフキの水煮を得た。

本品は、各種和風料理の材料として色どりを添えるとともに、食物繊維としての生理効果をも発揮する。

＜求肥＞
モチ種澱粉１質量部に水１．２質量部を混合し、加熱糊化しつつ、これに砂糖１．５質量部、結晶性β−マルトース（株式会社林原 登録商標『サンマルト』）０．７質量部、水飴０．３質量部および実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末０．２質量部を混和し、以後、常法に従って、成形、包装して求肥を製造した。

本品は、風味、口当りとも良好な求肥で、きびだんご風の和菓子である。

＜混合甘味料＞
はちみつ１００質量部、異性化糖５０質量部、黒砂糖２質量部および実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末１質量部を混合して混合甘味料を得た。

本品はビタミンＰ様作用を強化した甘味料であり、健康食品として好適である。

＜ハードキャンディー＞
還元麦芽糖水飴１，５００質量部を加熱し、減圧下で水分約２％以下になるまで濃縮し、これにクエン酸１５質量部および実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末１質量部および少量のレモン香料を混和し、次いで、常法に従って、成形、包装してハードキャンディーを得た。

本品は、ビタミンＰ様作用を強化した黄色のレモンキャンディーであって、低う蝕性、低カロリーである。

＜酢酸飲料＞
リンゴ酢１０質量部、米酢６質量部、クエン酸２質量部、リンゴ酸２質量部、異性化糖３８質量部、酵素処理ステビア０．７質量部、ソルビット１質量部、リンゴエッセン０．５質量部、リンゴ果汁（１／５濃縮）２質量部、実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末０．１質量部に精製水を加えて全体を１００質量部とした酢酸飲料を調製した。

本品は、ビタミンＰ様作用を強化した、酢酸飲料であり、ルチンが有する生理機能の即効的、持続的発揮が期待できる。

＜オレンジジュース＞
オレンジ果汁５０質量部、クエン酸０．１質量部、砂糖５質量部、実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末０．１質量部、Ｌ−アスコルビン酸（ビタミンＣ）０．１質量部、香科適量および水４６質量部を混合し、次いで、常法に従って、容器に充墳、殺菌してオレンジジュース製品を得た。

本品は、ビタミンＰ、ビタミンＣが強化されており、４^Ｇ−α−グルコシルルチンを含有していることから、オレンジ由来天然色素の色調、オレンジの風味ともに劣化しにくく、光による分解も受けにくいオレンジジュースである。

＜グレープフルーツゼリー＞
マルチトール６質量部、安定剤１．２質量部、グレープフルーツ砂のう1質量部、ｐＨ調整剤０．９質量部、グレープフルーツ果汁（1／６濃縮）、実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末０．１質量部、酵素処理ステビア０．０４質量部、ベニバナ黄色０．０１質量部に精製水を加えて全体を１００質量部としてグレープフルーツゼリーを調製した。

本品は、ビタミンＰ様作用を強化したゼリーであり、摂取することにより、ルチンの有する生理機能の即効的、持続的発揮が期待できる。また、４^Ｇ−α−グルコシルルチンを含有していることから、グレープフルーツ果汁の風味の劣化が防止されたゼリーである。

＜サンドクリーム＞
結晶性マルトース１，２００質量部、ショートニング１，０００質量部、実施例２の方法で得た４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末１０質量部、レシチン１質量部、レモンオイル１質量部、バニラオイル１質量部を常法により混和してサンドクリームを製造した。

本品は、ビタミンＰ様作用を強化した、黄色着色したサンドクリームで、油脂の酸化が防止され、口当り、溶け具合、風味とも良好である。

＜抗酸化剤＞
実施例２の方法で調製した４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末１０質量部およびクエン酸ナトリウム０．２質量部を混和し、抗酸化剤を得た。

本品は、強い抗酸化作用を有するため、抗酸化剤、安定剤、退色防止剤、品質改良剤などとして有利に利用できる。具体的には、マーガリン、パタークリームなどの油性食品、不飽和脂肪酸、油性ビタミン、油性ホルモンなどの抗感受性疾患剤、乳液、クリームなどの化粧品、更には、退色し易い天然色素を含有する飲食物などに適宜混合する事により上記の機能が発揮される。

本発明は、４^Ｇ−α−グルコシルルチン１分子とエタノール１分子及び水８分子の比率で構成される４^Ｇ−α−グルコシルルチンの新規結晶と当該結晶含有粉末、及びそれらの医薬品素材、化粧品素材、食品素材としての用途を提供するものである。本発明に係る４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶は、それ自体が、有効かつ安全で安定した医薬品素材として、ルチンと同様に、ルチンが有効であるとされる循環器疾患、網膜出血、胃弱肺出血、遺伝性毛細血管拡張症、紫斑病、アレルギー、生活習慣病などの各種疾患の予防又は治療剤として使用することができるばかりでなく、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの溶解性、安定性などの固体物性や、結晶多形の有無や転移現象を解明するための試薬としても極めて有用である。

加えて、本発明に係る４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末は、化粧品素材として、コラーゲン変性抑制剤、日焼け防止剤、経口育毛剤、むくみ改善剤及び痩身剤などに使用することが出来、また食品素材として、退色防止剤、光分解抑制剤、難水溶物質の可溶化剤、油脂の酸化防止剤などに用いることができる。本発明は、４^Ｇ−α−グルコシルルチンの医薬品素材、化粧品及び食品素材としての用途を大きく切り拓くものであり、その産業上の有用性は極めて大きい。

図２において
ａ： ７．３°（ミラー指数（ｈｋｌ）：０２０）のピーク
ｂ： ７．６°（ミラー指数：０２１）のピーク
ｃ：１３．１°（ミラー指数：０２５）のピーク
ｄ：１７．５°（ミラー指数：００８）のピーク
ｅ：１８．３°（ミラー指数：１３５）のピーク

Claims (9)

1. ４^Ｇ−α−グルコシルルチン１分子とエタノール１分子及び水８分子の比率で構成される４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶。
2. 粉末Ｘ線回折法において、主な特徴的回折角（２θ）として７．３°（ミラー指数（ｈｋｌ）：０２０）、７．６°（ミラー指数：０２１）、１３．１°（ミラー指数：０２５）、１７．５°（ミラー指数：００８）及び１８．３°（ミラー指数：１３５）を示す請求項１記載の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶。
3. 結晶の空間群がＣ２２２_１であり、単位格子の格子定数がａ＝８．８３３７Å、ｂ＝２４．５５５２Å、ｃ＝４０．３３９１Åであり、且つ、α＝β＝γ＝９０°の斜方晶系（ｏｒｔｈｏｒｈｏｍｂｉｃ）である請求項１又は２記載の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶。
4. ４^Ｇ−α−グルコシルルチン分子を構成する炭素原子及び酸素原子が明細書表２乃至表３に示す原子座標を有する請求項１乃至３のいずれかに記載の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶。
5. 単結晶の形態にある請求項１乃至４のいずれかに記載の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶。
6. 請求項１乃至５のいずれかに記載の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末。
7. 請求項１乃至５のいずれかに記載の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を含有する医薬品素材。
8. 請求項６記載の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末を含有する化粧品又は食品素材。
9. 請求項１乃至４のいずれかに記載の４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を種晶として用いることにより４^Ｇ−α−グルコシルルチン含有溶液から４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶を晶析せしめることを特徴とする４^Ｇ−α−グルコシルルチン結晶含有粉末の製造方法。