JPS6366124A - 代謝活性を有する除蛋白胸腺抽出物の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は動物の臓器から、代謝活性を有する除蛋白抽
出物の製造法に関する。

動物又は人間に由来する臓器から１１１られる除蛋白抽
出物及び蛋白含有抽出物は医療品原本４並びに化粧品原
料として用いられる。医療品としては完全な除蛋白と発
熱性物質を含まない事が必要である。

臓器から得られる水溶性代謝活性抽出物は次の様に分類
される。

蛋白含有抽出物は代謝活性、酵素成分、コラーゲン成分
その他により評価される。また除蛋白抽出物は代謝活性
、ベプタイド成分その他により評価される。

すでに述べた代謝活性の基べ−１は次のとおりである。

成長テスト、損傷治癒テスト、ＲＥｓ活性、ワールブル
グによる組織呼吸上ｙ１因子（肝ホモジネート、ミトコ
ンドリア）等。

これ等はすべての例において代謝活性抽出物の品質と応
用性を判断するための最も重要な基準である。化粧品に
おいてもまた同様である。

本発明は、動物等の臓器から除蛋白抽出物であり、月つ
高い代謝活性作用を有し、（ワールプルグチストによる
組織呼吸上昇率は通常３００％以Ｌ）、ベプタイド並び
に核酸関連成分を豊富に含有する抽出物を製造する方法
を提供す゛ることである０本発明の基本的事項は、まず
最初に得られた粗エキスが透析により除蛋白部分と蛋白
含有部分に分離することにあり、尚且つ粗エキスを製造
する過程において、透析によって得られた蛋白含有部分
についても、ペブタイドを豊富にするための酵素処理を
することにある。

最初に、リポイド部分とホルモン部分を除去するため、
臓器をア七トンで処理し、続いて低温下でのエーテル処
理を行い（−１５°Ｃ以下、４日以」−）、次いでその
抽出物を緩衝液で処理しｐＨ６〜８とする。　ｐ）１３
以下で有機酸で処理する。（酸成分８％以下、　０．０
１％以下の亜鉛塩又はマグネシウム塩を添加、クエン醜
サイクルの有機酸）　、　？！）られた抽出物を無菌ろ
過し、透析するまでの間、４℃で貯蔵する。残渣は酵素
（プロテア−ゼ）で処理する（酸素の至適温度より　５
°Ｃ低い温１■で行う）、こうして得られた、部分的に
除蛋白したベブタイドを含む抽出物は、必要に応じ防腐
剤を添加する。またｐＨ７，０に調整した後、アルドン
酸で処理し、遠心分離後、無菌ろ過し、除蛋白抽出部分
と合せ透析を行う、透析は低温で行うが、７０〜７１の
透析管を使用するのが望ましい、透析管に、無菌条件の
もとでｐ）１７．ｏに調節しメチルパラベンを加えた精
製水を入れる。又、防腐剤はメチルパラベンの他ソルビ
ン酸ナトリウム、クロレトン、ベンジン酸、ベンチルア
ルコールモ４ｋ　７１１　Ｌ　ウる。透析時間は２４〜
９６時間、温度４〜５°Ｃ０透析後、除蛋白部と蛋白含
有部が得られ、前渚は無菌ろ通接４°Ｃで貯蔵する。後
渚は冷凍乾炊により濃縮後、酵素処理を行い、有機酸も
しくはエタノール添加により残留蛋白を除＜、ｐｌｌ（
ぽ１６，２〜７５に調節後１両者を合せた除蛋白抽出物
を真空中（１１）で濃縮し、必要に応じて防腐剤を加え
調整する。真空中の濃縮は、それぞれ産生物に応じて乾
燥残分の量が６〜１５％になるまで行う６代謝活性の測
定は濃縮の終了時には勿論のこと個々の製造の１８：　
！；７Ｊりごとに行う、　１０％の乾燥残分を含む胸腺
抽出物の肝ホモジネートに対するワールブルグによる酸
素消費量のｈｇ率は３．０以上である１本発明に基き製
造した代謝活性抽出物は極めて低毒性で、例えば胸腺抽
出物（乾燥残留物５〜１０％）のＬＤ５０は２０ｇ／Ｋ
ｇ以上（マウス）である０通常のスクリーニング・テス
ト即ち自律性機能、反射、緊張、均衡、中枢性徴候、情
緒、意識に関し、１分、５分、１５分、１１１９間、６
時間および２４時間後の観察でそれぞれ正常値を示した
。胸腺抽出物による皮膚−次刺激試験（ウサギ）並びに
眼粘膜試験（ウサギ）を行った結果、何等の副作用もみ
られなかった。又、胸腺抽出物はホルモンを含まず、ま
たホルモン様作用（リポサイド・ホルモン）に帰せられ
る副作用はない。医薬品としての胸＋１１１！抽出物は
例えばジアミノオキシダーゼで処理することによりヒス
タミン及びヒスタミン様物質を除く必要がある。

胸腺抽出物の水溶液またはアルコール溶液、または凍結
乾燥物は、面液抽出物や胎盤抽出物と併用する事により
代謝活性が増強される。

胸腺抽出物は細胞***を刺激し、成長を促進し、感染源
や毒物に対する抵抗力、免疫性を強める。胸腺は年令と
共に縮小し、更に加令が進むにつれ消失するに至る。同
時に生体に対する作用物質も減少の一途をたどる。即ち
、膵疾患による糖尿病ｙｌ”！ａにインシュリンを投与
することにより、生命維持が出来る如く、老人又は回復
期にある人に胸腺抽出物を投与することで不足する作用
物質の補填が可能となる。同様にたえまなく名花してゆ
く皮膚を若返らせる化粧品への応用も可能である。即ち
、胸腺抽出物中に含まれている０表１参照（損傷治癒）
〕細胞呼吸促進成分含有抽出物と胸腺抽出物の併用によ
る化粧品は皮膚の名花防１１−を可能にした。老化防＋
ｌ−には（医薬品又は化別品）胸腺、プロ力イン（Ａ　
、　Ａｓ１ａｎの説）の他に、細胞呼吸促進因子による
内部呼吸の上Ａによる酸素（Ｍ　、　ｖｏｎ　Ａｒｄｅ
ｎｎｅの説）も関与することは周知のとおりである０本
発明に基く胸腺抽出物も極めて高い細胞呼吸イに進作用
（に胃率＋　４．２　）を有する。

体重２２５−２５０ｇの雄のウィスター系ラットをエー
テルで麻酔し、を部の毛をきれいに剃りとる。を部の中
央に沿って４ｃｍの長さの切傷をっけ・　ｌｅｇ間隔を
あけて合計３木の切傷をつける。処理後６日日、　　Ｉ
Ｉ日口重１６日１．２１日日日に損傷部を開け、傷の線
に対し直角の方向に皮膚の切片を３個とる。（１ｃｍ巾
で傷の線のまわりを切りとる。）創傷部位を除いて脹力
を測定する。胸腺抽出物を１日当り２５　ｍｇ／Ｋｇ皮
下投与し、対照群に対しては生理的食塩水２５　Ｉ１ｇ
／Ｋｇを同様の方法で投与した。

実験に使用した動物数は各グループ各々２０匹を使用し
た。

胸腺及び血液抽出物のラットの損傷ｆｔ３癒促進作用は
表１の通りであり、胸腺抽出物＋血液抽出物〉胸ｌｌ１
１１抽出物〉血液抽出物の順で効果がみられ、血液抽出
物との併用が最もイＩ効であることがｒ−明した。本発
明に基く胸腺抽出物並びに魚卵、子宮、鶏冠からの抽出
物は皮膚構造の改善にすぐれた効果を示し、化粧品温加
削として極めて有効である。

Ｐａｄｂｅｒｇ法による荒れ肌による実験結果は表２に
示すとおりである。

Ｐａｄｂｅｒｇ法はメチレンブルーが皮膚の状態に応じ
て吸着量が異るため、その吸着量を測定することにより
判定する。即ち、多年にわたる多くの実験により「自覚
される荒れ肌」や「界面活性剤により損われた肌」はそ
の損傷の度合に比例してより多量のメチレンブルーが吸
着することが認められている０、逆にクリームでよく手
入れされた皮膚のメチレンブルー吸着量は小さな値を示
した。

Ｐａｄｂｅｒｇ法は下記の通り試験を行う。

１、試験部位の決定 ２、非イオン界面活性剤１％水溶液によるｉｔ１処理。

３．３５°Ｃの温水による水洗 ４、試験部位の清拭 ５．２３°Ｃ１相対温度６０％で被検者を３０分間順応
させる。

６、染色溶液２０１１ｎを３０秒間塗布する。

（この染色溶液＝０．５％のメチレンブルー２０％及び
１％非イオン界面活性剤８０％） ７、色素を３０秒間乾燥する。

８、色素の過剰分を０．２５％非イオン界面活性剤溶液
により除去する。

各６０秒間溶出する。

注１ニラウリル硫酸ナトリウム　　　２％精製氷　　　
　　　　　　　４８％ イソプロピルアルコール　　５０％ １０、ツアイス分光光度計により溶出液のＢｆ（Ｏｎｍ
における吸光度を測定する。

＋１．結果＝未処理皮膚の吸光度。

１２．２０日間２朝夕２回、所定の場所に検体を必ず塗
！σする。試験開始前３日間並びに試験期間中は他の化
粧品類の使用は禁止する。

１３．１−９の操作の第２１１］［＋最終操作は、試験
の４時間前に行う。

結果−使用後の吸光度 表２の数字は当初状態と試験完了時の吸光度比を％で示
したものである。Ｔの添加により極めて良好な結果が得
られた。

（実施例１） 子牛の胸腺から細胞賦活作用を有する除蛋白胸腺抽出物
の製造方法、健全な子牛を屠殺後ただちに胸腺を冷凍細
分化し、アセトン５０文を加え４８時間放置し、次いで
アセトン２５文を加え７２時間放置し、脂溶性部分を除
去する。アセトン層を分離後、残留物にエチルエーテル
１５文及び精製水５〜１０文を加え、−１５°Ｃ〜−２
５°Ｃで　１００時間以上放置後、遠心分離を行う、残
留物に緩衝液を加えて中性で２回分敲抽出を行い（■、
Ｉｆ）、残留物にりエン酸サイクルの＃　１〜８％、並
びに（１１）１〜０．００１％の亜鉛を含む溶液を加え
、　ｐＨ３以下で２回抽出する（ｍ、ｒｖ）。残留物に
プロナーゼを加え４８時間以Ｊ−反応させ、更にアルド
ン酸を加えて除蛋白する。更に１〜２時間遠心分離した
抽出物（Ｖ）と先に得られた抽出物Ｉ〜■を合せ、パラ
ベンを添加しｐＨ７，０に調整した後、透析を行う、透
析後、蛋白含有試験を行い、完全に除蛋白されたことを
確認し、無菌ろ過した上４℃で貯蔵する（抽出物Ｖｌ）
、！白含有部については冷凍乾燥により濃縮後、酵素で
加水分解、２回にわたり除蛋白を行う、遠心分離後、得
られた除蛋白抽出？見、先の除蛋白抽出物■と合せ濃縮
、防腐剤をｖ］Ｉ 加え、ＰＨ調整後約１０％の固形物を含有するまで濃縮
する。胸腺抽出物の分析値は表３及び表４に示す通りで
ある。

（￥絶倒２） 蛙の卵から１りられる代謝活性作用を有する除蛋白抽出
物、蛙の一種であルＸｅｎｏｐｕｓ　Ｉａｅｖｉｓ　Ｄ
ＡＵＤ−ＩＮの卵１００Ｋｇを均一化した後、エチルエ
ーテル２０１を加え、遠心分離により得られたｎ１抽出
物に防腐剤を加え、ｐＨ７，８に調整した後真空下での
木ハ気７ｐ７溜によりアミンを分解する。

こうして得られた脱臭粗抽出物をｐＨＢ、９に調整後１
例１におけると同様透析を行い、残留乾燥物的５％並び
にペブタイド０．７％含有の蛙の卵からの除蛋白抽出物
１１Ｋｇが得られる。この抽出物の酸素消費上昇率は約
３．５である。

（実施例３） 豚又は羊の子宮又は！丸から得られる代謝活性作用を有
する除蛋白抽出物。

２５Ｋｇの豚のす丸又は子宮或は羊のす丸又は子宮１０
０Ｋｇを細切、均一化し、アセトンにより脱脂し、ホル
モンを分離後エチルエーテル３０Ｋｇを加えた後遠心分
離により得られた粗抽出物を、例１の方法と同様にｐＨ
７，０に調整し、透析を行い、乾燥残留物約３％含有の
抽出物１８Ｋｇが１りられる（酵素消費上昇率３．７、
ベプタイド１．４％含有）。

表１：創傷ｆｈ癒に関する各種抽出物の作用ｒＩ　　数
　　処理群　　対照群　　Δ　差（２５ｍ交／Ｋｇ） （１）血液抽出物 ６２１６±１８１０３±３０１１３ １１　　　　４８９±２５　　４０１±２１６８１８　
　　８１０±５０　　７２０±２９８０２１　　　１８
３７±５５　　１４２２±５９２１５（２）胸腺抽出物 θ　　　　　２３０±１４８８±３３　　　　　１３１
１＋　　　　　　４９０±２８　　　　４１８±２４７
４１８　　　８０３±４４　　　７０１±３７　　　　
１０２２２　　　°　１７０３±４９　　１４４１±５
１　　　　２８２（３）血液抽出物＋胸腺抽出物 ６２５０±１８　　　１０５±２９　　　　１４５１１
　　　　　５３０士３１　　　　４３０±２１　　　　
　１００１８　　　９０１±４８　　　７４０±３３　
　　　１８１２１　　　１８０９±４９　　１４Ｂ６±
５５　　　　３４３Ｐ（０，０５ 表２：実施例１による胸腺抽出物（↑）配合Ｗ１０型ク
リーム使用による荒れ肌度テス）　（Ｐａｄ−ｂｅｒｇ
法） 試験期間＝２０日 ｌ）被検者年令　　　２）偽薬　　　３）Ｔ２添加剤４
　７　　　　　　　　　　　　　７Ｂ、７　　　　　　
　　　　７０．４４　０　　　　　　　　　　　　　９
７．１３　　　　　　　　　　　［１０，８４８７θ、
ｊ　　　　　　　　　　　８４．５４　２　　　　　　
　　　　　　９０．４　　　　　　　　　　　・５５．
８６　１　　　　　　　　　　　　　Ｂ４．９　　　　
　　　　　　７３．０４　６　　　　　　　　　　　　
９１．８　　　　　　　　　　４０．７４　２　　　　
　　　　　　　　７９．０　　　　　　　　　　４７．
８５　９　　　　　　　　　　　　　９５．０　　　　
　　　　　　５８．８４　３　　　　　　　　　　　　
　９１．４　　　　　　　　　　５９．３５　０　　　
　　　　　　　　　　９２．２　　　　　　　　　　８
２．０平均値　　　８４．５　　　５９．３ 表３：例１による胸腺Ｊｔｌｔｌｊ物の分析ＰＨ６，９
０ 乾燥残留物　　　　　　　　　９．８５％総窒素量　　
　　　　　０．８８％ ＪＬＣ（アミノ酎０　　　　　　　　図　１ＪＬＣ（拡
散及び拡散関連物ａ　　　　　図　２酸素消費率　　　
　　　　　　　４．２生菌数試験　　　　　　　　　　
無菌 表４：胸腺抽出物のベプタイド含量 標準ペプタイド　　　　０．０５０　　　２０．０００
溶液　１■／腸又　　０．０５０　　　２０．００００
．０５０　　　２０．ＯＱＯ 標準ベプタイド 溶ＫＮ　　　２ｔｎｇ／ｍｌ　　　　　Ｏ，０９？　　
　　　２０．６１９０．０９８　　　２０．４０８　　
　２０．４８Ｂ　　　　　０．４３４８０．０９８　　
　２０．４０Ｂ 標準ベプタイド 溶液　３＠ｇｌＷＡ文　　０．１４２　　　２１．１２
７０．１４３　　　２０．９７９ ０．１４４　　　２０．８３３ Ｓｒｅｌ　　（％） ２、１２２ 手続補正書 昭和６２年　４月１５日 １、事件の表示 昭和６１年　　　特許願　第２０９５５０号２、発明の
名称 代謝活性を有する除蛋白胸腺抽出物の製造法３、補正を
する者 事件との関係　　特許出願人 住　所　　　東京都千代田区神田佐久間町３丁目２８番
地名　称　　山川貿易株式会社 代表者　栗　山　博 ４、代理人 ５、補正命令の日付　　　（自発） ６、補正の対象 ７、補正の内容 （１）　　明細書第１４頁２行中ｒＰａｄ−ｂｅｒｇ」
をｒＰａｄｂｅｒｇ」と訂正する。

（２）　　同頁下から３行と４行中にｒＪＬｃＪとある
のを夫々ｒＴＬｃＪと訂正し、同３行中の「拡散及び拡
散関連物質」を［核酸及び核酸関連物質」と訂正する。

（３）　　第１５頁下から３行と４行を削除する。

以上

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. （１）動物又は人由来の胸腺を細分もしくは均質化した
   後、−１５℃で脱脂を行い、エーテル処理後、ｐＨ６．
   ８〜７．９の緩衝液を加え、更にｐＨ３以下の有機酸を
   加えて分離、抽出後、残渣にプロテアーゼを加え、粗エ
   キスを得る。この粗エキスを透析により除蛋白部と蛋白
   含有部とに分離し、後者は濃縮又は凍結乾燥後、酵素に
   よりペプタイド分画に至るまで加水分解し、酸・エタノ
   ール沈澱により残余蛋白を除去し、先の除蛋白部と合せ
   真空中で望ましい乾燥残分含量になるまで濃縮し、ｐＨ
   ７．０に調節後無菌ろ過することを特徴とする除蛋白胸
   腺抽出物の製造法。
2. （２）ｐＨ３以下で抽出するため、クエン酸サイクルの
   酸が０．０１％亜鉛塩添加のもとで全体として８％に至
   るまでの濃度で添加される特許請求の範囲第１項記載の
   製造法。