JPS63502106A - 抗原とｔ４リンパ球との相互作用を阻害し得るペプチド及び該ペプチドから誘導された産生物及びそれらの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ２、と７４１　ンパ・どの　互　を　し得るペブ　ド　び舌ペブ　ドか　古　さ れた産　び　れらの　用本発明はＨＬＡクラス■抗原、Ｔ４抗原及びＩＩＩＶタ ンパク質から誘導されマクロファージ、リンパ球及びＢリンパ球間の細胞協同を 阻害し得るペプチドに係る。

より詳細には本発明は、ＡＩＤＳ（後天性免疫不全症候群）の原因ウィルスと１ ４１７８球に担持されたＴ４レセプターとの相互作用を阻害し得る能力をもつペ プチド、より一般的には、マクロファージとヘルパー１４９７８球との相互作用 及びヘルパー１４９７８球と８９７８球との相互作用に対して免疫調節効果を与 える能力をもつペプチドに係る。これらの相互作用は通常はクラス■（ヒトの） ＩＬ＾クラス■抗原）の自己主要組織適合遺伝子複合体によってコードされるリ ンパ球レセプターによって媒介される。言い替えると、本発明は特に、免疫応答 を誘導し得る抗原に作用して細胞応答を調節し得るペプチドに係る。免疫応答は 通常はｌ（Ｌ＾クラス■抗原例えばＨＬＡ　ＤＲタイプの抗原によって媒介され る。

ある種のリンパ球向性ウィルスは前記のごとき細胞応答、特にＡＩＤＳの原因ウ ィルスを妨害する。

ＡＩＤＳの原因ウィルスはいくっがの研究チームによって単離され、種々の略号 、例えばＬＡＶ、　ＨＴＬＶ−１［［、＾ＲＶ２等の略号で指称されている０本 文中では以後このウィルスを最も普及した略号）１１Ｖ（以前のＬＡＶ／ＨＴＬ Ｖ−Ｉ［１＞で示す、このウィルスは実際、１４９７８球に特異的親和性（ｔｒ ｏｐｉｓｍｅ）をもつ、しかしながら、１４９７８球がそのＴ４レセプターを遮 断するモノクローナル抗体（例えば０ＲＴＨＯ社より商標０ＫＴ４として市販の モノクローナル抗体）の存在下に予めインキュベートされていると、１４９７８ 球へのウィルスの接近はｉｎ　ｖｉｔｒｏで遮断される。これは詳細に後述する ごとく、これらのモノクローナル抗体が、１４９７８球のＴ４レセプターとＬΔ ■ウィルスとの結合に関与するＴ４部位を遮断する能力をもつからである。

）ＩＬＡクラス■抗原に属する免疫応答誘発抗原に作用する抗原がＨＩ■ウィル ス中に存在する抗原に限定されないことは明らかである。例えば、この種の抗原 の別の例としてインフルエンザウィルス、エプスタイン−パールウィルス（ＥＢ Ｖ）、ラインウィルス等がある。

本発明はまた、これらペプチド及び該ペプチドから誘導された産生物の種々の用 途に係る。「これらペプチドから誘導された産生物」なる用語は、該ペプチドを 認識し得る抗体によって免疫的に認識され得る産生物を意味し、また、前記細胞 媒介のレベルで実質的に同じ効果を生じ得る産生物を意味する。

これらペプチドの用途としては例えば、ＨＬＡクラス■分子とＴ４抗原との間の 相互作用によって制御される疾患、特に）ＩＩＶによって誘発される疾患の診断 があり、またこれら疾患の治療又は予防がある。

これらペプチドの別の用途としては、ある種の）ＩＬＡクラス■抗原例えばＭＬ ＾−ＤＲに属する免疫応答誘発抗原の検出がある。

これらのペプチドはまた、ＨＬ＾抗原が所定抗原によって誘発された免疫反応を 媒介し得るタイプのとき、被検物質の免疫調節効果のｉｎ　ｖｉｔｒｏ検査に使 用される。

発明者等は、ＬＡＹウィルスが１４９７８球に感染し病気を発症させる能力は、 ウィルス抗原が適当なリンパ球レセプターを介してマクロファージによって導入 されたときにウィルス抗原担持細胞に対するリンパ球の認識能力を調節する抗原 関連のペプチド配列がＬＡＶウィルスによって妨害されるためであろうという仮 説を本発明の端緒とした。このような抗原としては、特に自己主要組織適合遺伝 子複合体から成り略号ＭＢＣとして公知の抗原がある。この略号は本文中で以後 しばしば使用される。　ＭＨＣによってコードされる抗原はヒトではＨＬ＾と指 称される。

種々のタイプの１４９７８球又はＴ８リンパ球の機能は、Ｔ４に対してクラス■ 及びＴ８に対してクラスＩのＭＨＣ系によってコードされる分子との相互作用を 含む。

これらの相互作用は夫々ヘルパー分子によって媒介されると考えられる。これら のヘルパー分子としては特に、Ｔ細胞分化抗原（特にＴ４抗原及びＴ８抗原）と 潜在的細胞間接着因子として記載された分子がある。より詳細な説明は本文末尾 に添付した参考文献目録の（１１）、（１２）及び〈１３）を参照するとよい。

発明者等は、１４９７８球と該リンパ球を認識し得るＨ）ＩＣクラス■抗原又は 該リンパ球に対する該抗原の作用を「模倣（ｍｉ＋ａｅｒ）Ｊ　シ得ると予想さ れるＬＡＶウィルスとの相互接着性能力の原因と考えられるペプチド配列の研究 に基づいて本発明に到達した。

この仮説に基づき、発明者等は多数のＭＨＣクラスＩ抗原のα鎖とＨＨＣクラス ■抗原のβ鎖と種々の単離ＬＡＶ菌株のゲノムで検出された読み取り領域の１つ によってコードされるタンパク質とに共通のペプチド配列の存在を証明した。

テトラペプチド配列＾ｒｇ−Ｐｈｅ−＾５ｐ−Ｓｅｒがら成るこの共通配列は、 ペプチド配列の一部又は全部が参考文献（１８）及び（１９）で解析された多数 のクラス■抗原及びクラス■抗原中で今日まで認識された唯一のホモロジー領域 に存在するときによりはっきりと証明される。

本文中では以後天然アミノ酸を１文字表記によ・る公式略号で示す。この略号を 以下に示しておく。

Ｈヒスチジン Ｑ　グルタミン Ｄ　アスパラギン酸 −トリプトファン 従ってテトラペプチド配列＾ｒｇ−Ｐｈｅ−＾３ｐ−Ｓｅｒは上記略号に従って ＲＦＤＳで示される。

ＬＡＶのゲノムによってコードされ得るテトラペプチド配列は、ゲノムのｕ３領 域のＬＴＲ（ｌｏｎｇ　ｔｅｒｍｉｎａｌ　ｒｅｐｅａｔ）と重なり合う３°末 端部分に存在する読み取りフェーズと相関する（２０）、　３’末端領域の読み 取りフェーズによってコードされるタンパク質のうちには、転写調節物質から成 るものく２１）、■細胞に対する細胞毒性に関与するもの（２０）等が存在し得 ることは既に示唆されていた。特にプロティンＦ（ｐ２７）は、＾１１ａｎ等、 ５ｃｉｅｎｃｅ、１９８５年１１月１５日、２３０、ｐ、８１３によって証明さ れていた。このプロティンＦは配列ＲＦＤＳを含む。

またより特定的には、多数のクラス■抗原とＬＡＶウィルスのコード可能な関連 ペプチド配列との中には同一ホモロペプチドはクラス■抗原とＬＡＶゲノムの前 記コード可能配列、との双方において先行テトラペプチド配列のＣｆ端側に等し い間隔（９個のアミノ酸残基）を隔てて存在することが観察された。このジペプ チドはクラス■抗原の対応するホモロジー領域には存在しない。

前記ホモロジー領域とＬＡＶウィルスのゲノムの対応するコード可能ポリペプチ ドとに共通のジペプチド配列（ＲＥ）がしばしば観察される。但し、前記ホモロ ジー領域では該ジペプチド配列がＲＦＤＳ配列から３つのアミノ酸残基を隔てる だけであるのに比較してウィルスのコード可能ポリペプチド配列では該ジペプチ ド配列が４つのアミノ酸残基を隔てている。またジペプチド配列ＳＬも存在する 。この配列はＲＦＤＳから１３個のアミノ酸残基を隔てている。この配列はＨＩ Ｖウィルス又はプロティンＦをＴ４タンパク質に固定する機能を果たす。

前記の観察の結果より次の表が得られた。

この表では、最初に試験又は配列決定されたポリペプチドに含まれており、参考 文献（１９）　、　（２６）　、　（２７）　、　（２８）　、　（２９）　。

（３０）及び（３１）に記載されたクラスＩ抗原又はクラス■抗原るＤＭＡの読 み取り領域によってコードされ得るべ１チド配列の一部とを共通ペプチド配列を 互いに位置合わせして示している。

表の左端には図示のペプチド配列をもつ抗原の名称を示す、共通ペプチド配列を 枠で囲んである。

本発明はこれらの観察に基づく、最初の仮説が正しいことが本発明によって証明 された。即ち、かかる配列を含むペプチドの合成によって最初の仮説が正しいこ とが証明された。配列ＲＦＤＳを含むペプチドはＴ４リンパ球に接着し得、この 修飾リンパ球に対するＬＡＶウィルスの接着を阻止することが判明した。従って これらのペプチドは前記抗原又はＬＡＶウィルスとリンパ球との相互認識に関与 する決定基の１つを構成することが判明した。このため本文中では以後アゾジオ トープ（ａｃｌｈｅｓｉｏｔｏｐｅ）ペプチドなる指称を使用する。

別の系、例えば文献＜１）、（２）及び（３）に記載のフィブロネクチンによる 多数の真核細胞の認識部位（配列ＲｔＤＳ中に局在することが判明した部位）の 決定に関与する系で得られ、た観察と同様に、本発明の場合にはペプチドＲＦＤ Ｓを逆の順序（鏡像形）のペプチド即ちペプチド５ＤＦＲで置換できることが判 明した。

ＲＦＤＳ部位がＬＡＶウィルスで担持されるか又はＴ４リンパ球（又は１８９７ ８球のごとき別のリンパ球）の特異的ＭＨＣ抗原によって担持されている限り、 リンパ球のＴ４分分子体が前記相互認識に関与し得る部位を決定するペプチド配 列を含むはずであると考えることができよう。

従って、本発明によれば、立体配置といくつかのアミノ酸残基によって担持され た電荷（ＲＦＤＳ又は５ＤＦＨの帯電残基の電荷と相補的な電荷）とから判断し て、この配列が通常はペプチドＲＡＤＳ又は５ＤＡＲの１つから形成されている ことが判明する。

このような状態は以下の模式図で示される。

ＭＨＣ，、、、、ＲＦ　Ｄ　Ｓ、、、、＞＜、、、、、Ｓ　Ｄ　Ａ　Ｒ，、、、 Ｔ４従ってより特定的には本発明は、ＲＦＤＳ、５ＤＦＲ，Ｔ分子中に存在する １つの部位を構成するＲＡＤＳ又は５ＤＡＲから選択された少なくとも１つのテ トラペプチド配列を含む任意のペプチドに係る。このペプチドは、テトラペプチ ド配列が細胞レセプターと相互作用し得る状態で露呈される立体配置をもち、ア ゾジオトープ特性を維持する。

これに関しては、ＬＡＶのエンベロープ糖タンパク質もテトラペプチド配列５Ｄ ＡＲ（ＡＲＶ　Ｚ中）又ハ５ＤＡＫ（ＬＡＶ、　ＬＶ、　ＨＴＬＶ■中）を含む ことが観察された。

一般的に本発明のペプチドは一般式 ％式％（１） ［［） 〔式中、Ｘは水素原子又はＮ−末端をもつペプチド基、ＺはＯＨ基又はＣ−末端 をもつペプチドであり、これらのベプチ、ドＸ及びＺはそれ自体がペプチド配列 から成るときはテトラペプチド配列を露呈（ｅｘｐｏｓｉｔｉｏｎ）させ得る要 件を妨害しない〕のペプチドから選択される。

本発明の好ましいペプチドはテトラペプチド自体から成る。より有効なペプチド は、同一構造中に前記テトラペプチドの１つを含むペプチドである。好ましい中 間ペプチドは、完全ペプチドの集合形態に影響を与えないアミノ酸から成るペプ チドであり、例えば２〜１０個のアラニン残基を含む鎖から成る。

一般に、本発明のテトラペプチド配列に関連し得るペプチド基（又は使用を避け たほうがよいペプチド基）の選択のための指針としては、所定のアミノ酸シリー ズの集合によって得られるポリペプチドの立体配置をモデル化し得るプログラム を使用し得る。かかるプログラムは特に参考文献（１り杉、＜１５）及び（１６ ）に記載されている。

本発明による別の好ましいペプチドは、式、Ｘ−ＲＦＤＳ−−−−−−−−ＥＬ −Ｚ　（Ｖ［）Ｘ　−ＲＥ　−−−一旺胆−−−−２＜■）〔式中、Ｘ及びＺは 前記と同義〕で示される（式中の各横線「−」は１つのアミノ酸残基を示す）。

特に好ましいペプチドは、 ＲＥＶＬＥＷＲＦＤＳＲＬＡＦＨＨＶ＾ＲＥＬ　（ｆｆ＞ＲＥＶｔ、ＥＷＲＦＤ ＳＫ’ＬＡＦＨＨＨ＾ＲＥＬ　（ＸＩ）から選択されたポリペプチド配列を含む 。

これらの配列はそれぞれ、表で示したＬ＾Ｖｉａ、　ＨＴＬＶＩ［［、＾ＲＶ２ 及びＬＶのゲノムに含まれたコード可能配列から得られたものである。下線を施 した配列の要素はより特異的な前記配列に対応する。

一般的に、本発明のペプチド配列に含まれるアミノ酸残基の総数は決定的でない 、これは主として化学合成の有利な順序によって限定される。アミノ酸の総数は 通常は５０以下である。好ましくは３０以下、より好ましくは２０以下である。

デジオトープペプチドの阻害能は特に、リンパ球（ペプチドがＲＦＤＳ又は５Ｄ ＦＲを含むとき）又はウィルス（ペプチドが５ＤＡＲ又はＲＡＤＳを含むとき） とこれらのペプチドとをブレインキュベートした後のＴ４リンパ球の膜レセプタ ーに対するＬＡＶの固定の減少、ときには抑制によって測定される。

この測定には、例えばフルオレセインイソチオシアネートに結合した標ｉ　ＬＡ Ｖウィルス（ＬＡＶ　ＦＩＴＣ）を使用し得る。

このとき、被検ペプチドのアゾジオトープ特性は、リンパ後に標識ウィルス保持 リンパ球が減少していること又は完全に消滅していることによって証明おれる。

敞検ペアチドのアゾジオトープ特性を測定するために別の任意の適当な方法も勿 論使用し得る。

また、所望の構造中のアミノ酸のいくつかを別のアミノ酸によって置換すること も勿論可能である。例えば配列ＲＦＤＳ中の残基Ｆを残基Ｙで置換してもよい、 一般的に別の立体異性アミノ酸によるいかなるアミノ酸置換を使用してもよい。

本発明のペプチドは、生物流体例えば病人の血清中で、）１１Ｖウイルスのタン パク質に対する抗体、即ちウィルスのエンベロープの配列ＲＦＤＳを含むタンパ ク質の領域に対する抗体又は配列５ＤＡＲ（又は５ＤＡＫ）を含む領域に対する 抗体を検出するための試薬として有用である。

より特定的には本発明は、これらのペプチドの用途として、当該ペプチドを特異 的に認識し得るモノクローナル又はポリクローナル抗体の製造に係る。これらの ペプチドはＴ４タンパク質とＨＬＡ系との作用を妨害することなくＴ４細胞のＬ ＡＶ固定部位に固定できるように当業者によって修飾され得る。これらペプチド は病人の血清中で抗ＨＩＶ抗体を検出するための診断キットに使用され得る。ま た、病人の血清中でウィルスタンパク質を検出するために使用することも°でき る。また、新しい細胞への感染伝播を阻止するため治療目的で病人に投与するこ ともでき、また感染防止のために予防目的でまだ罹患していない人間に投与する こともできる。

本発明はまた、単離された種々の形態のＬＡＶウィルスのゲノム中のＲＦＤＳ部 位とＥＬ部位との間及びＦＩＦＤＳ部位とＲＥ部位との間の中間領域に係る。

これらの領域の特徴は、保存度が極めて高いことである。

このよ゛うな領域として特に ＬＥＩＩＩ ＲＬＡＦ）Ｉ）ＩＶＡＲ ＫＬＡＦＨＨＶ＾Ｒ ＲＬＡＦＨＨＭ＾Ｒ がある。

この後者のタイプのペプチドを先に説明したペプチドと同じ目的で使用すること も本発明の目的に含まれる。場合によってはこれらも、ｉｎ　ｖｉｔｒｏ又はｉ ｎ　ｖｉｖｏで丁４タンパク質とＦＩＬＡ系との作用を妨害することなく７４タ ンパク質に固定し得るモノクローナル抗体又はポリクローナル抗体を製造するた めに直接使用され得る。

本発明は更に、本発明のペプチドを使用して調製され、場合によっては、該ペプ チドの免疫原性をｉｎ　ｖｉｖｏで発現するため且つこれらペプチドの特異的部 位に特異的な抗体好ましくはモノクローナル抗体を産生ずるための適当な形態に され得る免疫原組成物に係る。「特異的部位」なる用語は特にこの場合、ＲＦＤ Ｓ、　５ＤＦＲ，５ＤＡＲ，ＲＡＤＳ、　ＥＬ又はＬＥ、　ＲＥ又はＥＲのごと き前記に示した部位を示すか（ＥＬ及びＥＲも本発明の一部である）、又は関連 ＬＡＶウィルスのゲノム中のこれらペプチド基間の中間部位、特にＲＦＤＳとＥ Ｌとの間及びＲＦＤＳとＲＥとの間の中間ペプチドを示す。

更に、配列ＲＦＤＳは、別のタイプのウィルスに感染される細胞においてウィル スによる認識部位を構成しているらしいことも判明した。この場合として例えば ライノウィルスＨＲＶ１４があり、該ウィルスのタンパク質ＶＰＩは同じく配列 ＲＦＤＳを含む、別のウィルスのレベルでもこの理論が成立し、例えばエプスタ イン−バールウィルスの糖タンパク質はアゾジオトープＲ＾Ｏ８を含む。

本発明の別の好ましいペプチドは式： ％式％（） 〔式中、汐及び４は前記と同義、Ｌは＾、■又はしてあり、これらペプチドは６ 〜２０個ときには３０個に達するアミノ′ｖｉ残基を含む〕 で示されることを特徴とする。

この種のペプチドに属する好ましいヘキサペプチドは式８式％） 又は式： Ｈ２Ｎ−ｅ、ＲＦＤＳＩＩ−ＯＨ（Ｘ　ＩＶ　）で示される。

この種のペプチドに属する好ましいヘプタペプチドは式８式％） （以後式ＬＲＦＤＳＤＬ又は略号ＤＲ−７と指称）で示される。

１１Ｌ＾−ＤＲクラス■分子のβ１領域に含まれる配列はこのへブタペプチドに 対応する。

本発明の別の好ましいペプチドは式： ％式％） 〔式中（及び乙は前記と同義、 」はＹ、Ｓ、　Ｄ、　Ｆ又はＮ、特にＹ又はＤがら選択され、とは＾、■又はＬ から選択され、但しＦは任意にＹで置換され得る〕 で示される。

この種のペプチドに属する好ましいペプチドは式：％式％（） のドデカペプチド、特に式： Ｈ２−ＥＥＹＤＲＦＤＳＤＶＧＥ−ＯＨ（Ｘ　■）（以後式ＥＥＹＤＲＦＤＳＤ ＶＧＥ又ハ略号ＤＲ−１２ト指称）テ示さレルトデカペプチドから成る。

一般的に、本発明は、明細書末尾に添付した表に明記されていない別のＨＬＡ　 ＤＲ分子中に存在し得るような実質的に同様の配列を有し得る同じタイプのすべ てのペプチドに係る。

これらのペプチドの例として特に式： ％式％） 〔式中Ｘ及びＺは前記と同義、ＷはＹ、　Ｆ又はＨ〕で示されるペプチドがある 。

明記されたすべてのペプチドにおいて、基Ｘ及びＺは、（夫々Ｈ，Ｎ−及び−Ｏ Ｈでない限り）配列ＲＦＤＳ（又はＲＹＤＳ）自体のアゾジオトープ特性を変質 させないものでなければならないことは当然理解されよう。

前記のごとく、ヘルパーリンパ球のＴ４抗原に含まれる配列がＨＬＡ−ＤＲとＴ ４リンパ球との相互認識に関与すると推定されるので、前記ペプチドは対応する ペプチドによって置換されてもよい、かかるペプチドとして例えば、式：％式％ ） （以後Ｔ４−７と指称）で示されるペプチドがある。Ｔ４抗原に含まれるこれら 配列は、ＨＬ＾抗原（該当実施例ではＨＬＡ−０８分子）とＴ４リンパ球との相 互認識反応に関与すると推定される配列である（この推定は証明された）。かか るペプチドとしてＤＲＡＤＳＫＬ　（Ｘ　Ｘ　） （以後Ｔ４−７と指称）で示され前記ペプチドＤＲ−７に対応するべＫＬＮＤＲ ＡＤＳＲＲＳＬ　（Ｘ　ＸＩ　）（以後Ｔ４−１２と指称）で示されペプチドＤ Ｒ−１２に対応するペプチドがある。

従って本発明はより広範に、配列ＲＡＤＳを含むペプチド、及び該配列を包囲し 、ヒトＨＬＡ分子、特にＨＬＡ−０８分子の配列ＲＡＤＳ認識能を妨害しないペ プチド配列に係る。

より特定的には本発明は、前記ペプチドのうちで明細書の冒頭で問題にしたよう な免疫調節効果を与え得るペプチド、特に、ＨＬ＾クラス■抗原特にＩＩＬ＾− ＤＲ抗原によ、って媒介される免疫応答を通常はｉｎ　ｖｉｖｏで誘発し得る抗 原に対して免疫調節効果を与え得るペプチドに係る。

これに関しては、本発明のペプチド特に式Ｘ■、ＸＩＶ、Ｘ■、ＸＸ及びＸＸＩ で示されるペプチドが、ＨＬＡ−０８分子及び１４分子の夫々の特異的モノクロ ーナル抗体として、マクロファージとヘルパーリンパ球（Ｔ４リンパ球）との相 互作用及びＴ４リンパ球とＢリンパ球との相互作用をｉｎ　ｖｉｔｒｏで阻害し 得ることが確認された。これらペプチドの阻害特性は個別的にも証明され、また ｉｎ　ｖｉ’ｔｒｏで行なった阻害相乗試験でも証明された。後者のｉｎ　ｖｉ ｔｒｏ阻害試験は、同じインフルエンザウィルスに対するこれらのリンパ球のｉ ｎ　ｖｉｔｒ。

免疫応答を検査する＾、ＦＩＳＨＥＲ等、Ｅｕｒ、Ｊ、Ｉｍｍｕｎｏｌ、（１９ ８６）、１８：１１１１−１１１８に記載の実験系と全く同様の実験系を用いて 行なわれた。但し、ＦＩＳＩ（ＥＲ等の阻害相乗試験では阻害量を下回る投与量 の抗ＨＬ＾−ＤＲ抗体及び抗Ｔ４抗体を使用したが、本発明の試験では阻害量を 下回る投与量の互いに相補的な・この系においては、ヘルパーＴリンパ球と阻害 濃度を下回る濃度の抗Ｔ４抗体とのｉｎ　ｖｉｔｒｏインキュベーション及び８ ９７８球と阻害濃度を下回る濃度の抗１１Ｌ＾−ＤＲ抗体との１ｎｖｉｔｒｏイ ンキユベーシヨンが抗体産生を強力に阻害することに注目されたい。

従ってＨＬＡクラスＩ［ＤＲ分子（厳密にはマウス■＾に分子）に類似ノべ７’ 　チトＥＥＹＶＲＦＤＳＤＶＧＥ（ＤＲ−１２）が、Ｔリンパ球のインフルエン ザウィルス特異的増殖と該ウィルスに対する抗体の産生とを１０マイクロモルの オーダの濃度で極めて有意に且つ再現的に阻害することが証明された。この阻害 はペプチドＲＦＤＳ単独の作用下では弱い、ペプチドに含まれる配列ＲＦＤＳが 、ＨＬ＾クラス■分子の配列ＲＦＤＳを包囲するアミノ酸で包囲されているとき は、中間的な阻害結果が得られる。

これは特にペプチドＤＲ−７で観察される。

配列ＲＡＤＳを含む１２個のアミノ酸から成るペプチド、特にペプチドＫＬＮＤ ＲＡＤＳＲＲ３Ｌは穏やかではあるが有意な阻害作用を示す。

、ＨＬＡクラス■分子に類似したこれらペプチドの阻害効果は、１４分子に対す るモノクローナル抗体で得られた結果と発される増殖が抗Ｔ４抗体によって阻害 されないようなインフルエンザウィルス特異的Ｔリンパ球のクローンは、前記類 似ペプチドによる阻害にも耐性である。しかし、この同じクローンのヘルパー効 果（８９７８球の活性化）は、抗Ｔ４抗体及びＤＲに類似のこれらペプチドの双 方に対して同様に感受性である。

これらのペプチドによる細胞相互作用の阻害相乗効果を示す実験によって、ＲＦ ＤＳとＲＡＤＳとの実際の相互作用の傍証が得られた。

ＦＩＳＨＥＲ等によって記載された実験条件において、■リンパ球を阻害濃度を 下回る濃度のεεＹνＲＦＤＳＤＶＧＥと共にブレインキュベートした後に、同 じく阻害濃度を下回る濃度のＴ４類似ペプチドＫＬＮＤＲＡＤＳＲＲＳＬと共に ブレインキュベートした単球又は８９７８球と接触させると、インフルエンザウ ィルス特異的抗体の増殖又は産生がかなり阻害されることが観察された。７４分 子及びクラス■と関係のない別のペプチド又は任意の別の抗体を使用したときに はこのような相乗効果は得られない。

これらの結果が正しいことは、使用ペプチドが使用細胞に対して細胞毒性をもた ないという事実によって確認された。これらペプチドはＭＬＡクラス■分子を含 まないＴリンパ球の機能試験を阻害しない、また、ペプチドを特異的抗ペプチド 抗体とブレインキュベートするとペプチドによる阻害効果を遮断し得る。

しかしながら、保持されたＲＦＤＳ構造に隣接の配列は、）ＨＬＡＤＲ，ＤＱ及 びＤＰ分子の夫々において異なっており、１４分子との相互作用に不可欠な３次 構造の形成に１つの役割を果たすと考えられる。実際、ＨＬＡ　ＤＲに類似のペ プチドは阻害効果をも゛たない。

本発明のペプチドはペプチド合成分野で公知の方法によって調製され得る。この 合成は均質溶液中で行なわれてもよく又は固相で行なわれてもよい。

例えば、ＨＯＵＢＥＮ１４ＥＹＬの論文ｒＭｅｔｈｏｄｅ　ｄｅｒ　Ｏｒｇａｎ ｉｓｃｈｅｎＣｈｅｍｉｅＪ（有機化学の方法）、ＥＪＵＮＳＣＨ編、ｖｏｌ、 １５−　Ｉ及び■、ＴＨＩＥＭＥ、Ｓｔｕｔｔｇａｒｔ、１９７４、に記載され た均質溶液合成方法を使用し得る。

この合成方法では、連続するアミノアシルを２つずつ所望順序で順次縮合するか 、又は複数のアミノアシル残基を適当な順序で既に含むように予め形成された断 片とアミノアシルとを縮合するか、又は前記のごとき予め調製された複数の断片 を互いに縮合する。勿論ペプチド合成でよく知られた方法によって、これらアミ ノアシル又は断片によって担持された反応性官能基のうち、一方のアミン官能基 と他方のカルボキシル官能基又はその逆を除いて全部の官能基を予め保護してお く必要がある。これらの非保護官能基は、特にカルボキシル官能基の活性化後に ペプチド結合の形成に正常に関与する。また変形例として、カルボジイミド型の 従来の結合試薬例えば１−エチル−３−（３−ジメチル−アミノ１０ピル）−カ ルボジイミドを使用する結合反応を用いてもよい。使用アミノアシルが付加的酸 官能基をもつとき（特にグルタミン酸の場合）、これらの官能基は例えばｔ−ブ チルエステル基によって保護されるであろう。

アミノ酸を１つずつ順次延長する逐次合成の場合、Ｃ−末端アミノ酸と所望配列 中の隣接アミノ酸に対応するアミノ酸との縮合によって合成を開始し隣接アミノ 酸を順次縮合してＮ−末端アミノ酸に到達するのが好ましい０本発明の別の好ま しい方法としては、Ｒ，Ｄ、ＭＥＲＲＩＦＩＥＬＤＳ、ｒｓｏｌｉｄ　ｐｈａｓ ｅｐｅｐｔｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｓ」（Ｊ、＾ｍ、ｃｈｅｍ、ｓｏｃ、、４ ５．２１４９−２１５４）に記載の方法を使用してもよい。

ＭＥＲＲＩＦＩＥＬＤＳの方法によってペブ九ド鎖を製造するためには、極めて 多孔質のポリマー樹脂を使用し、該樹脂に鎖のＣ−末端第１アミノ酸を固定する 。このアミノ酸はそのカルボキシル基を介して樹脂に固定され、そのアミン官能 基は例えばｔ−ブチルオキシカルボニル基によって保護されている。

このようにＣ−末端第１アミノ酸を樹脂に固定し、樹脂を酸で洗浄してアミン官 能基の保護基を除去する。

アミン官能基の保護基がｔ−ブチルオキシカルボニル基の場合、樹脂をトリフル オロ酢酸で処理することによって保護基を除去し得る。

次に、Ｃ−末端アミノアシル残基から数えて所望配列の第２のアミノアシルを与 える第２アミノ酸を鎖に固定されたＣ−末端第１アミノ酸の脱保護アミン官能基 に結合する。好ましくはこの第２アミノ酸のカルボキシル官能基を例えばジクロ ロへキシルカルボジイミドによって活性化しアミン官能基を例えばｔ−ブチルオ キシカルボニルによって保護する。

このようにして所望ペプチド鎖の第１部分が得られる。

この部分は、２つのアミノ酸を含み、その末端アミン官能基は保護されている。

前記のごとくこのアミン官能基を脱保護し次にＣ−末端第２アミノ酸の付加と同 様の条件下で処理して第３アミノアシルを固定する。

このようにして、樹脂に結合されたペプチド鎖の形成済みの部分の毎回予め脱保 護されるアミン基にペプチド鎖を構成するアミノ酸を順次固定する。

所望の完全ペプチド鎖が形成されると、ペプチド鎖を構成する種々のアミノ酸の 保護基を除去し、例えばフッ化水素酸を用いてペプチドを樹脂から剥離する。

本発明はまた、前記ペプチドモノマーの水溶性オリゴマーに係る。オリゴマー形 成によって本発明のペプチドモノマーの免疫原性の増加が得られ−る。これらオ リゴマーは例えば２〜２５単位のモノマーを含み得る。但しこれらの数値が限定 的なものであると理解されてはならない。

より特定的には本発明は、接触能力（ｐｏｓｓｉｂｉｌｉｔｅ　ｄ’ｅｘ−ｐｏ ｓｉｔｉｏｎ）を妨害しない中間ペプチド鎖を介して互いに結合されたアゾジオ トープ基本単位を含むオリゴマーに係る。

これら中間ペプチド鎖は例えばジペプチド＾１ａ−＾１ａがら成る。

オリゴマー形成のためにはペプチド分野で一般に使用される任意の重合技術を使 用し得る。所望の免疫原性を獲得するために必要な数のモノマー基本単位を含む オリゴマー又はポリマーが得られるまで重合を行なう。

オリゴマー形成又はモノマー重合の好ましい方法では、該モノマーとグルタルア ルデヒドのごとき架橋剤との反応を用いる。

また、別のオリゴマー形成又は結合の方法、例えばホモ−又はへテロ−２官能結 合剤の存在下にカルボキシル末端官能基とアミン末端官能基とを介してモノマー 単位を順次結合させる方法を用いてもよい。

また、前記のごと、きノナペプチド基本単位を１つ以上含む分子を調製するため に、対応する適当なヌクレオチド配列を含む所定核酸によって形質転換された微 生物を使用する遺伝子工学の技術を用いてもよい。

本発明はまた、本発明のペプチド（又は前記オリゴマー）と生理学的に許容され る無毒性の（天然又は合成の）キャリヤー分子とをキャリヤー分子及びペプチド の夫々により担持された相補的反応基を介して共有結合させることによって得ら れた複合体に係る。適当な基の例は以下に記載する。

本発明の複合体を構成するキャリヤー分子又は高分子支持体としては、例えばテ タヌスアナトキシン、オボアルブミン、血清アルブミン、ヘモシアニン等の天然 タンパク質がある。

合成高分子担体としては、例えばポリリシン又はポリ（Ｄ−Ｌ−アラニン）−ポ リ（Ｌ−リジン）がある。

使用可能な別のタイプの高分子担体も文献に記載されており、これらは一般に２ ０，０００より高い分子量をもつ。

本発明の複合体の合成は、ペプチドと適当なキャリヤー分子とを用い、ＦＲＡＮ ＴＺ及びＲＯＢＥＲＴＳＯＮ、ｒｌｎｆｅｃｔ、　ａｎｄ　Ｉｍｍｕ−ｎｉｔｙ 」、設、１９３−１９８（１９８１）又はＰ、Ｅ、ＫＡｔｌＦＦＭ八Ｎ、「＾ｐ へｌｉｅｄａｎｄ　Ｅｎｖｉｒｏｒ＋ｍｅｎｔａｌ　Ｈｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ 」、１９８１年１０月、ｖｏｌ、４２、Ｎｏ、４．６１１−６１４に記載の公知 方法で行なうとよい。

実際に結合剤として有利に使用される化合物の非限定例を以下に示す、グルタル アルデヒド、エチルクロロホルミエート、水溶性カルボジイミド（トエチル−Ｎ °（３−ジメチルアミノ−プロピル）カルボジイミド、ＨＣｆり、ジイソシアネ ート、ビスジアゾベンジジン、ジー及びトリクロロ−５−）リアジン、臭化シア ン、ベンゾキノン、及び５ｃａｎｄ、Ｊ、Ｉａｕａｕｎｏｌ　、、１９７８、ｖ ｏｌ、８、ｐ、７−２３（＾ＶＲＡＭＥＡＳ、ＴＥＲＮＹＮＣＫ、　ＧＵＥＳＤ ＯＮ）に記載の結合剤がある。

ペプチドの１つ以上の反応性官能基とキャリヤー分子の１を使用し得る。カルボ キシル官能基とアミン官能基とを結合させる場合には、タンパク質の合成に使用 される結合剤、例えば１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）−カル ボジイミド、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール等の存在下に結合反応を生じさ せるのが有利である。また、ペプチド及びキャリヤー分子によって夫々担持され るアミノ基を互いに結合させる場合にはグルタルアルデヒドを使用するのが有利 である。

本発明の付加的特徴は、本発明の好ましいペプチドが得られる条件に関する以下 の記載より明らかにされるであろう。

火」１倒」−： ＾「−Ｐｈｅ−＾５−３ｅｒ−＾１ａ−八ｌａ−＾ｒ−Ｐｈｅ−＾Ｓ−５ｅｒの ムこのペプチドを調製するために前記ペプチド合成方法を使用し以下のごとき処 理又は以下と等価の処理を行なった。

この合成に関しては以下の略号を使用して説明する。

ＢＯＣ：ｔ−ブチルオキシカルボニル ＾ｓｐ：アスパラギン酸 Ｐｈｅ　：フェニルアラニン アミノ酸としてはｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）のみによって保護され たＮ−α−アミノ酸を使用する。

側鎖官能基は以下のごとく保護される。

Ａｒｃはトシル基によって保護される。

Δｓｐはシクロヘキシル基によって保護される。

Ｓｅｔはベンジル基によって保護される。

使用以前に無水ＮＩＬ２ＣＯ３からＣＨｚｌＪ！＊を蒸留する。

１％のスチレンジビニルベンゼンクロロメチルコポリマーから成る樹脂担体（Ｌ ａｂｏｒａｔｏｉｒｅｓ　ＢＩＯＲＡＤにより市販）を使用するのが有利である 。

Ｎ−α−ｔ−ブチルオキシカルボニル−〇−ベンジルーセリンを好ましくはセシ ウム塩の形態にエステル化する（にｌ５ＯＮ　Ｂ、Ｆ。

（１９７３）　Ｈｅ１ｖ、Ｃｈｉｍ、＾ｅｔａ　５６．１４７６）。

ＢＥＣＫＭ＾Ｎにより商標９９０Ｂとして市販されているタイプの自動シンセサ イザーで合成を行なう。

本発明のペプチドの構成アミノ酸の各々を形成済みのペプチド鎖に以下のごとく 固定する。

（ａ）樹脂をメチレンクロリドで約３分間ずつ３回洗浄して懸濁させる。

（ｂ）次に４０％トリフルオロ酢酸で約３分間１回洗浄して樹脂に含浸させる。

（ｃ）トリフルオロ酢酸で約３０分間１回洗浄して形成済みのペプチド鎖のＮ− 末端基を脱保護する。

（ｄ）次にメチレンクロリドで約３分間ずつ２回洗浄してトリフルオロ酢酸を除 去する。

（ｅ）次にイソプロピルアルコールで約３分間ずつ２回洗浄してメチレンクロリ ドを除去する。

（ｆ）次にメチレンクロリドで３分間ずつ４回洗浄して媒体を再度含浸させる。

（ｇ）ジイソプロピルエチルアミンで約３分間ずつ３回洗浄して、トリフルオロ 酢酸との塩の形態に塩化したアミン官能基を中和する。

（ｈ）メチレンクロリドで約３分間ずつ４回洗浄して余剰のジイソプロピルアミ ンを除去する。

（ｉ）後述するごとく形成済みのペプチド鎖に固定すべきアミノ酸を添加する。

（ｊ）次にメチレンクロリドで約３分間ずつ３回洗浄する。

（ｋ）次にイソプロピルアルコールによって約３分間ずつ２回洗浄してメチレン クロリドを除去する。

（７１）最後にメチレンクロリドで約３分間ずつ３回洗浄して反応媒体を溶媒に 戻す。

各アミノ酸を形成済みのペプチド鎖に固定するためには、アミン官能基がｔ−ブ チルオキシカルボニル基によって保護され酸官能基がジシクロへキシルカルボジ イミドによって活性化されたアミノ酸を（形成済みのペプチド鎖に対して該ペプ チド鎖の量の約３倍の余剰量で）使用する０次にヒドロキシベンゾトリアゾール を添加して副反応を最小に抑制する（＾ＲＥＮＤＴ＾３、ＫＯＬＯＤＺＩＥＪＺ ＫＹＫ＾、Ｍ、（１９７８）　ＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎＬｅｔｔ４０．３８６７ ）、（ＭＯＪＳＯＶ　Ｓ、、ＭＩＴＣＨＥＬＬ＾、Ｒ，（１９８０）　Ｊ、Ｏｒ ｇ。

Ｃｈｅｍ、４５．５５５）　。

アミノ酸の各付加段階後に、ペプチド鎖に固定しなかった遊離アミノ酸の量をニ ンヒドリンテスト（ＫΔｌ５ＥＲＥ、、Ｃ０ＬＥＳＣＯＴＴ　Ｒ，Ｌ、等、（１ ９７６）、八ｎａｌ　、Ｂｉｏｃｈｅｍ、３４−２５９５）によつて測定する。

合成が終了すると、樹脂によって担持されたペプチドに固定された保護基全部を 除去する。（樹脂ｇ当たり１ｇの）クレゾールの存在下に樹脂ｇ当たりＨＦ１０ ｚｆｆｉの割合の無水フ・ン化水素酸で温度約０℃で約６０分間処理してペプチ ドを樹脂から剥離する。

フッ化水素酸の蒸発後に反応混合物をエーテルで洗浄し、５％酢酸で抽出するこ とによってペプチドを樹脂から分離する。抽出物を水で希釈して凍結乾燥する。

得られた粗ペプチドは水溶性である。移動相として５％酢酸を使用し商標ＧＦ　 ０５（１ＢＦ）として市販のタイプのカラムクロマトグラフィーでこの粗ペプチ ドを精製する。　２５４ｎｍでの吸光度を測定する。主ピークの種々の画分を均 質性の観点から検査し、これらの画分を合わせて次に、１：１０００のトリフル オロ酢酸の存在下の０〜７０％のアセトニトリル勾配を用い商標ＰＡＲＴＩＳＩ Ｌ　ＯＤＳ２（Ｗｈａｔｍａｎ、ｍａｇｎｕｍ９）として公知の材料を詰めたＨ ＰＬＣ（Ｈｉｇｈ　Ｐｒｅｓｓｕｒｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏｍａｔｏ−ｇｒ ａｐｈｙ高圧液相クロマトグラフィー）で再度精製する０両分を収集し凍結乾燥 すると総数率は２５％である。

完全酸水解後のアミノ酸の組成はペプチドの構造を証明する。

μＢｏｎｄａｐａｃｋ　Ｃ１８なる商標で市販のタイプのカラムを用い逆相高圧 液体クロマトグラフィーによって純度を測定する。カラムの溶出液は０％アセト ン−１００％リン酸バ・ンファ０．００２Ｊ　ｐＨ２，５の組成から６０％アセ トン−４０％リン酸ノく・ンファ組成に２０分間で移行するような勾配をもつ。

及糺漣ム： 式ＲＡＤＳのペプチドの４ 実施例１に記載の条件と同様の条件下で合成を行なう。

ベブチ゛ドが収率３０％で得られる。

九１漣尤： 同様にしてにＬＮＤＲＡＤＳＲＲＳＬ及び以下のポリペプチド：５ＤＦＲ八＾Ｒ ＦＤＳ ’　ＲＡＤＳ＾＾５ＤＡＲ ＳＤＡＲ八八ＲへへＳ を合成する。

同様にして、以下の左側の略号で示されるウィルス又はリンパ球の配列に対応す る配列をもつポリペプチドを合成する。

ＨＬＡ−ＤＲ２β　ＶＲＦＬＤＲＹＦＹＮＱＥＥＳＶＲＦＤＳＤＶＧＥＦＲＡＶ 置ＧＲＰＤＡＬＡＶ−Ｆ　ＳＬＨＧＭＤＤＰＥＲＥＶＬＥＷＲＦＤＳＲＬＡＦＨ ＨＶＡＲＥＬＨＰＥＹＦＨＲＶ−１４−ＶＰＩ　５ＬＶＱＬＲＫＫＬＥＬＦＴＹ ＶＲＦＤＳＥＹＴＩＬＡＴＡＳＱＰＤＳＡＮＹＴ８　ＲＬにＤＴＦＶＬＴＬＳＤ ＦＲＲＥＮＥＧＹＹＦＣＳＡＬＴ４　ＮＱに５ＦＬＴＫＧＰＳＫＬＮＤＲＡＤＳ ＲＲＳＬ圓ＤＱＧＮＦＰＬＥＢＶ　ＤＧＮＫＥＴＦＨＥＲＡＤＳＦＨＶＲＴＮＹ ＫＩＶ！ＵｕＬｉ： エンベロープ糖タンパク質に含まれる配列−ＡＲＶ２：　ＧＶＰＶＷＷＫＥＡＴ ＴＴＬＦＣＡＳＤＡＲＡＹＤＴＥＶＨＮＶＷＡＴｌａｖ　ＨＴＬＶＩ［ｌ　ＬＶ ：　ＧＶＰＶＷＷにＥＡＴＴＴＬＦＣＡＳＤＡＫＡＹＤＴＥＶＩ（ＮＶＷＡＴ実 」１烈り一： 以下のペプチドを合成する（またそのうちの幾つかを、ＦＩＳＨＥＲ等の方法に よる前記のｉｎ　ｖｉｔｒｏ細胞媒介テストで試験する）ニ ー４つのアミノ　をもつベブ　ド ＤＲ−４：ＲＥＤＳ　ＨＬ＾クラス■ −７つのアミノ　もつベプ　ド Ｔ４−７：ＤＲＡＤＳＲＫ　Ｔ４ ＤＲ−７：ＬＲＦＤＳＤＬ　ＤＲ２ −１０のアミノ　を　つペプ　ド ＲＦＤＳ−＾−＾−ＲＦＤＳ ＳＤＦＲ−＾−＾−５ＤＦＲ −１２の　ミノ　をもつベブ　′ Ｔ４−１２：ＫＬＮＤＲＡＤＳＲＲＳＬＯＲ−１２：ＥＥＹＤＲＦＤＳＤＶＧＥ ”Ｔ４リンパ球に対するＬＡＶ付着インしビターとしての本発明のべ１チドの効 率を、例えばペプチドＲＦＤＳ＾＾ＲＦＤＳを用いて得られた結果として以下に 示す。

膜レセプターに対するＬＡＶの固定を、フルオレセインに結合したＬＡＶウィル ス（ＬＡＶ　ＦＩＴＣ）の膜固定の分析によって直接測定した。簡単に説明する と、１０６の細胞を６Ｉ４１のＬＡＶＦＩＴＣとインキュベートし、洗浄し、蛍 光顕微鏡で観察する。

この方法によって、通常は精製Ｔ４＋細胞集団中に約１０％の標識細胞が検出さ れる。この固定を遮断する合成ペプチドの能力を測定するために、Ｔ４細胞を種 々の濃度のペプチドと共に４℃で３０分間プレインキユベートレな、固定しなか った余剰のペプチドを洗浄し、ＬＡＶ　ＦＩＴＣによって従来同様に標識する。

この方法によって、被検ペプチドがｌｌ１ｇ／ｗｌの低い濃度でもレセプターに 対するＬＡＶ　ＦＩＴＣの固定を完全に阻害することを観察した。

本発明のペプチドが単球、Ｔ４リンパ球及びＢリンパ球の間の細胞相互作用に影 響を与えるための好適条件を以下に説明する。

１−　Ｍ）’Ｆｄ　ＣＭＰ）ノ；　Ｊ 健康な供血者から採取した静脈血をリケミン（ｌ　ｉｑｕｅｍｉｎｅ）（２５０ ００，１／ｚ１−Ｒｏｅｈｅ）に収集し、Ｈａｎｋの１×溶液（Ｂｉｏａｅｒｉ ｅｕｘ）に希釈する０次にＦｉｅｏｌｌ）Ｉｙｐａｑｕｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ 　Ｕｐｐｓａｌａ、スエーデン）、密度１．０７７、で遠心することによって単 核細胞を単離して洗浄し、１１１のＬ−グルタミン（Ｂｉｏｍｅｒｉｅｕｘ）と １０％の＾Ｂ型ヒト補体除去血清プール（５６℃で３０分間）と抗生物質（１０ ０Ｕ／ｉｆのペニシリン、１００■／ｘｉのストレプトマイシン）とを補給した ＲＰＭ１１６４０培地（Ｃｉｂｃｏ−Ｂｉｏｃｕｌｔ、スコツトランド）に再度 浮遊させる。

ヒツジ赤血球をＨａｎｋの１×培地で３回洗浄する。　２０ｍ１の２％赤血球浮 遊液をｌｚｊ！のノイラミニダーゼＩＵ／ｍ１（ｔｅｓｔ。

Ｎｅｕｒａｍｉｎｉｄａｓｅ、　Ｂｅｈｒｉｎｇ　ｌ’１ｅｒｋｅ、西ドイツ） で３７℃で３０分間感作する。感作赤血球をｔｔａｎｋで３回洗浄し２％に再調 整する。

２．２ウシ。目皿゛（ＳｖＦの ウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ）をヒツジ赤血球に３回吸収させる−（赤血球法ｌ容 量対ウシ胎児血清１容量）。

−３７℃で３０分間を２回 一４℃で６０分間を１回。

２．３且」≧／）影矢胆裁エ リンパ球を無血清ＲＰ旧１６４０培地中で１０’／ｘｉの濃度にする。

ノイラミニダーゼで感作し０．２ｚＮのＳＶＦを吸収した２ｓｅの赤血球浮遊液 を１′１１のリンパ球浮遊液に加える。

試験管を２００３で５分間遠心し最低１時間氷に入れる。

次に赤血球法を極めて慎重に再浮遊させる。４℃のＦｉｃｏｌｌ勾配で沈降させ ることによって、■リンパ球が項著に濃縮されたロゼツト（Ｅ４）を形成した細 胞集団を細胞残渣（Ｅ−）から分離する。

次に赤血球を低張ショックによって溶解しリンパ球をＨａｎｋで３回洗浄する。

３−ＴＪ　び゛　の　・の 単核細胞（１０）／１１）を３７℃で１時間ベトリ皿（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に付着 させて単球を得る。ペトリ皿は補体除去ＳＶＦと共に予め４℃で１晩インキユベ ートされる。付着しなかった細胞を回収した後にポリスマン（ｒｕｂｂｅｒ　ｐ ｏｌｉｃｅｍａｎ＞及び強力なピペット吸引で付着細胞を剥離する。２回洗浄後 ４０００ｒａｄ　（ＩＢＬ１３７、Ｃｓ−１３７ソース、ＣＥ＾）を照射する。

Ｌ−メチルロイシンエステル（５ｘ　１０”／ｚｌ、最終５ｍＭ、ＳｉＦｉｍａ ）で室温で４０分間処理することによって、残りの単球を非付着細胞から分離す る＜１８＞　、ヒトへＢ型血清（最終１０％、低温洗浄）を添加して反応を終了 する。

ロゼツトＥの方法でＴリンパ球とＢリンパ球とを分離する。

Ｔ細胞はノイラミニダーゼで感作したヒツジ赤血球の存在下に０℃で１時間イン キュベートするとロゼツトを形成し得るので、Ｆｉｃｏｌ　１Ｈｙｐａｑｕｅ勾 配で沈降させることによってロゼツト形成細胞（Ｅ゛）をロゼツト非形成細胞（ Ｅ−又はＢ）から分離し得る。ヒツジ赤血球を低張ショックによって溶解する。

４−インフルエン゛ウィルス、　ロ・インターロイ　ン２Ｔの Ｂａｎｇｋｏｋインフルエンザウィルス（八／Ｂａｎｇｋｏｋ）特異的細胞株は 感作供血者の単核細胞から得られる（１９）。

５■／′Ｒ１のへ／Ｂａｎｇｋｏｋウィルスの存在下に１０％ヒト八Ｂへ血清（ ＳＡＢ）を含むＲＰＭＩ培地中でリンパ球を１０”／ｘｌの濃度にする。培養フ ラスコ（２５ｃｍ２、Ｃｏｒｎｉｎｇ）に１０ｚｌずつ分は入れる。

５％Ｃ０２を含む湿潤雰囲気中で３７℃で７日間培養後、Ｆｉｃｏｌｌ勾配で沈 降させることによって死細胞を除去する。ウィルスによって感作された幼若細胞 （ｂｌａｓｔｅ）を回収し、４０００ｒａｄｓで照射した１知（ａｕｔｏｌｏＨ ｕｅ）リンパ球又は８０００ｒａｄｓで照射しエプスタイン−バールウィルスで 樹立させた（ｉ…−ｍｏｒｔａ　Ｉ　１ｓｅ）自知Ｂ細胞株（支持細胞）の存在 下に、ＣＴＬＬ２細胞株で試験し最終１／１６０００で使用した組換インターロ イキン２（ＢＩＯにＥＮ、スイス）を含む１０％ＳＡＢのＲＰＭＩ培地中で（１ ０＋５＞＃＋Ｎに再調整する。これら０知支持細胞を支持細胞対培養細胞１：１ の割合で７日間毎日添加する。培地を５０％のＴＬ２濃縮上清と組換ＩＬ２とを 含む新しい培地と交換する。３日毎に細胞を（１０＋５）／１１１に再調整する 。

５−エプス　イン−バールウィルス（ＥＢＶによって　されたＢ細　株の産生 新しい単核細胞又は解凍した単核細胞を、マーモセットの造血系細胞株Ｂ９５− ８（Ｎ、１．Ｇ、Ｍ、Ｓ、　Ｃｏｐｅｗｏｏｄ　Ｓｔ、　Ｃａ＋ｎｄｅｎ）から 得られたＥＢＶとＴリンパ球の活性を完全に遮断する最終１、ｑ／ｌｊ！のシク ロスポリン（ｃｙｃｌｏｓｐｏｒｉｎｅ）八との存在下に、２０％ウシ胎児補体 除去血清を含むＲＰ旧培地に濃度２ｘ　１０’／ｉｆで再浮遊させる。

５％ＣＯ２を含む湿潤雰囲気下で３７℃で培養する６５日毎に培地を交換する。

６−■Ｌ２：：の；　１ ２人又は３人の供血者の血液を３７℃″′！：１晩インキュベート掻に該血液か らリンパ球を単離する。次にこれらリンパ球を再度集めて１０００ｒａｄで照射 し、し＝グルタミン（２ｍＭ）と抗生物質と２０％ヒトΔＢ型補体除去血清と２ ／４Ｉ／ｉｒｌの精製フィトヘマグルチニン（ＤＩＦＣＯ）とを補給したＲＰ旧 １６４０中で１０６＃１に調整する。

５％ＣＯ，を含む湿潤雲間、気中で３７℃で４８時間培養後、ＩＬ２濃縮上清を 回収し、濾過しく気孔率０．４５μのフィルター、５ｃｈｌｕｅｈｅｒ及び５ｅ ｈｅｌｌ、西ドイツ）、使用するまで一２０℃で冷凍する。

ＣＴＬＬＺ！Ｉ胞株で試験し前記上清に加えた組換ＩＬ２（ＢＩＯＧＥＮ、ジュ ネーブ、スイス）はまた、最終１／１６０００で細胞増殖試験に使用される。

７−緻思Ｕ弐鳳− リンパ球増殖を、マイトジェン例えばニーフィトヘマグルチニン（ＰＨ八）１／ ７００ｅ（ＤＩＦＣＯ）、又は、被検者の感作（自然又はワクチン接種）後の抗 原例えば： −カンジジン（Ｃｄ）５００呵／ｚｌ（パスツール研究所）Ｂａｎｇｋｏｋイン フルエンザ＾型ウィルス２４／ｚＮ（パスツール研究所） によって誘発する。

増殖をＰＨ八によって誘発するときは５％のＣＯ２を含む湿潤雰囲気中３７℃で 細胞を３日間インキュベートし、増殖を上記抗原によって誘発するときは６日間 インキュベートする。

使用細胞のタイプ例えば新鮮細胞であるか又は培養細胞であるかに従って試験を 多少修正する。

−新鮮細胞の場合には、１０％ヒトＡＢ型補体除去血清を含みＬ−グルタミンと 抗生物質とを補給したＲＰＭ１１６４０培地中でリンパ球を１０’／ｚｌの濃度 にする。２００屑の細胞浮遊液を丸底マイクロプレートに三層に（ｅｎ　ｔｒｉ ｐｌｅ）分配する（ＦＬＯす。

−分離された集団の場合には、１０％ヒト血清と０．２５Ｘ　１０’／ＩＩｌで 照射した単球とを含むＲＰＭＩ培地中でリンパ球を濃度１０’７ｍｌにする。１ ０成の各細胞浮遊液を丸底マイクロプレートに三層に（ｅｎ　ｔｒｉｐｌｅ）分 配する。

−インフルエンザウイルス特異的Ｔ細胞株の場合にはＴＣにＦを除去すべく予め 洗浄した１５ｘ　１０３の細胞を４０００ｒａｄｓで照射した３Ｘ１０’リンパ 球、と共に丸底マイクロプレートで合わせて、７２時間培養する。

いずれの場合にも、１〜２ｔｔＢ／ｍｌのＢａｎｇｋｏｋインフルエンザ＾型ウ ィルスで増殖を誘発する。培養終了の８時間前に、１μＣｉ／ウエルのトリチウ ム標識チミジン（ＣＥ＾）を添加して液体シンテレ−シー５ａｙカウンター（Ｍ ｉｎａｘｉ　ｔｒｉ−ｃａｒｂ　４０００、Ｐａｅｋａｒｄ）によって細胞増殖 を測定する。本発明で得られた４つの細胞株ＰＴ３．１（Ｔ４、ＰＴ２、ＦＰＴ Ｉと限界希釈で得られた従来のヘルパーアクローン５Ｂ１２（８）とについて試 験した。

８−　インフルエンザ　産　−スト ロゼットＥの方法で分離されたＴ細胞及びＢＪ胞の調製物と被照射単球とを、１ ０％ヤギ補体除去血清（Ｆｌｏｌｌ）を含むＲＰ旧１６４０培地に再浮遊させ、 １０５のＢリンパ球と５Ｘ１０’の単球と２Ｘ１０Ｓの１９７８球との割合で合 わせる。これは実験によって予め決めた最適濃度である（１６）。Ｂａｎｇｋｏ ｋＡ型ウィルスを最終濃度２Ｉ４１で添加する。

５％Ｃ０２を含む湿潤雰囲気中３７℃で細胞を７日間インキュベートする。プラ ークを遠心し２００ρの上清を、Ｌ−グルタミン（１ｍＭ）と抗生物質と１容量 のウシ胎児補体除去血清とを補給した１００ρのＲＰ旧１６４ｏで交換する。更 に５日間培養後、上清を採取して一２℃で保存する。培養上清中に存在する抗イ ンフルエンザ抗体をイムノエンザイム方法（ＥＬＩＳ＾）によって定量する。

１１へｌ支 ５０成のインフルエンザウィルス（５０Ｉ４１／１．１）３７℃で１時間 ＰＢＳで２回、３％ＰＢＳ−ＢＳ＾で１回洗浄ＰＢＳ　ニリン酸−生理食塩水バ ッファＢＳ＾：ウシアルブミン 討淀」Ｉｂ矢胞１− ５０度の３％ＰＢＳ−ＢＳＡ ３７℃で１時間 ＰＢＳで２回、３％ＰＢＳ−ＢＳ＾で１回洗浄べ　の。

５０Ｉｉｉの被検上清 ３７℃で１時間 ＰＢＳで２回、２％ＰＢＳ−ＢＳ八で１回洗浄ル　１ホスフアターゼに結合した 　ロブリンの５０／ｉｉ！のに１１）Ｉ　ＩｇＧ−アルカリホス７７ターゼ３７ ℃で１時間 ＰＢＳで２回、２％ＰＢＳ−ＢＳ八で１回洗浄ｐＨ９，６、ＨｇＣ１２１、０７ Ｍの炭酸水素塩バッファで３回洗浄吐１」Ｊ［叉又− １００度のｐ−ニトロフェニルリン酸ジナトリウム＜１ｍｇ７ｍ１）ＮＵＬＴＩ ＳＫＡＮ　ＴＩＴＥＲＴＥＸスペクトロメーター（ＦＬＯＷ）で４０５ｎｍの光 学密度読み取り。

ＤＲ−４：ＲＦＤＳ　ＨＬ＾クラス■ −７の　染ノ　か　ペプ　ド Ｔ４−７：ＤＲＡＤＳＲＫ　Ｔ４ ＤＲ−７：ＬＲＦＤＳＤＬ　ＤＲ２ ＤＲ−１２：ＥＥＹＤＲＦＤＳＤＶＧＥｌｌ−モノクローナル ＯＫＴ、＾（ＩｉｒＧ２）、ＯＫＴＪ（ＩｇＧ１）：マウスで産生され所謂誘発 Ｔリンパ球を検出するＯＫＴシリーズのモノクローナル抗体（ｏｒｔｈｏ−ｄｉ ａｇｎｏｓｔｉｃ）。

１０Ｔ、（ＩｇＧ２ａ）、ＩＯＭ＋　（ＩｇＣｌ）：マウスで産生されフルオロ クロム（Ｎｏｒｄｉｃ）に結合したマウスの抗免疫グロブリン抗グロブリンによ って検出されるモノクローナル抗体（Ｉｍｎ＋ｕｎｏ　Ｔｅｃｈ）であり、ｌ０ Ｔｘは成熟Ｔリンパ球の集合を検出し、ＩＯＭ＋　（ｒｇＧｌ）は単球を検出す る。

Ｌ２４３　（ＩｇＧ２ａ　）、Ｃ＾２０６（ＩｇＧ２ａ）　：ＨＬ＾−ＤＲ，Ｌ ２４３及び２０６分子を検出するモノクローナル抗体（Ｂｅｃｋｏｎ−Ｄｉｃｋ ｉｎｓｏｎ）。

Ｌｅｕｌ　（Ｉｇｌ；２ｇ）　： Ｔ集団（ＣＤ５）を検出するモノクローナル抗体（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎ −ｓｏｎ）。

結果 １、Ｔリンパ　の １．２．鈑ｌコ１１【＠１ＵＷ 第１図 この図は、以下の試験における（増殖率の関数たる）光学密度の変化を培地中の ペプチド濃度（ｐｇ＃ｆ＞の関数として示す。

Ｂａｎｇｋｏｋインフルエンザ＾型ウィルスによって誘発された６日間の細胞増 殖試験において、１２個のアミノ酸を含むペプチドＤＲ−１２を使用した場合か なりの阻害（６６％）が観察される。この阻害は投与量依存性で再現性がある。

またこの阻害は、１０．ｃｗ／ｉｐのペプチド濃度では個体によって５０〜７０ が示す阻害率８６％に極めて近い値である。１２個のアミノ酸を含む別のペプチ ドＴ４−１２を使用した場合は阻害効果はあまり高くない（３８％）、マたその 値が一定しない′。

第２図 配列ＲＦＤＳを包囲するアミノ酸の数が夫々に異なる３種類のペプチド濃度即ち ＤＲ−１２、ＤＲ−７及びＤＲ−４の阻害効果を比較する。ペプチド配列の長さ く第２図の横軸上のｐ）と阻害強度（第２図の縦座標）との間に相関がみられる 。

これらの結果は再現性があり、ツベルクリン系又は破傷風系（図示せず）のごと き別の増殖系でも再現される。

トリバンブルーで細胞を計数して、ペプチドによるこの阻害が細胞毒性によるも のでないことを確認した。逆にＰＨへのごときレクチンによって誘発された系で は阻害は全く観察されない。

免Ｌ１ ＰＢＬ単独　８９３ ＰＢＬ＋ＰＨ八（１／７００）　４７．５２７ＰＢＬ＋ＰＨ＾＋０ＫＴ４−Ｄ（ ＩＩｔＦ１／ｘ１）　４４．０８３ＰＢＬ＋ＰＨ＾＋Ｌ２４３（０，１■／肩ｌ ）　４０．１１９ＰＢＬ＋ＰＨ＾＋ＤＲ−１２（５■＃１’）　’　４９．７９ ６ＰＢＬ＋ＰＨ＾＋ＤＲ−１２（１０ｕｇ＃＋１）　５１．５７０１．３．　、 　白　Ｔ　の ４種類のＢａｎｇｋｏｋＡ型ウィルス特異的つルパーＴ細胞株を、１２個のアミ ノ酸を含むペプチド、即ち最終５／Ｊｇ／ｙｌのＤＲ−１２及びＴ４−１２で試 験した。これらの２種類のペプチドで６０％〜９０％の極めて高度な阻害が観察 される。ペプチドＤＲ−１２の効果と抗体０ＫＴ４−への効果との間に相関がみ られる。ヘルパーＴクローン５Ｂ１２（ＦＩＳＨＥＲ等）においても同様の阻害 相関が観察され、ペプチドＤＲ−１２及び抗体０ＫＴ４−＾の双方による阻害は 全く生じない、結果を以下の表１に示す。

衣１ 、インフルエン　Ｔ６　に　されたペブ　ドのペプチド使用量５Ｉ４１／肩！ Ｔ細胞株　ＤＲ−１２０ＫＴ４−＾Ｔ４−１２　ＤＲ−１２０ＫＴ４〜八Ｔ４− １２ＰＴ３　９０　８５　８０　／　／　／ＭＴ４　８０　８５　５５　／　／ 　／ＰＴ２　４０　７５　７５　／　／　／ＦＰＴＩ　６０　８５．７０　／　 ／　／り「−ン５Ｂ１２　０　１２　０　７５　９０　２０阻害Ｏ％：ＰＴ３二 ６０００ｃｐｍ、　ＨＴ４：６３００．　ＰＴ２：５０００、ＥＰＴＩ　：４５ ００ＳＢ１２：１５２００ ２、ペプチド　の、ｔＪインキュベーション′の１ンバ」トケ贋ｍ ペプチドＤＲ−１２によって誘発された阻害のメカニズムを説明するために、精 製リンパ球集団をペプチドとインキュベートするか又はＴ４及びＨＬ＾−ＤＲ分 子特異的モノクローナル抗体とインキュベートした。

まずリンパ球集団の分離に使用される種々の処理、特にし−ロイシンメチルエス テルが、■リンパ球の機能と抗原又はマイトジェンによる刺激後のＴリンパ球の 増殖能力とに影響を与えないことを確認した。また、インキュベーション中の不 測の妨害を避けるためにＴ集団がら単球が十分に除去されていることを確認した 。結果を表２に示す。

表又 の幾　ｉ　び　Ｊ ＰＭ Ｔ十輸γ＋ＰＨ＾　５６，０００ Ｔ十用γ＋ＩＬ２　５５，０００ Ｔ＋　ｍ７　＋　ｃｄ　１７，０００ Ｔ十ｅｃｌ　２，２４Ｂ ■単独　１，０００ 単球単独　１８４ 鍋γ：単球 Ｃｄ：カンジジン 抗Ｔ４抗体（最終ＩＩ！ＦＡ／ｍｆｆ１の７４−Ｄ）を用いてこれまでに得られ た結果モデルに基づいて、ＤＲと等価のペプチドと抗Ｔ４抗体との間及びＴ４と 等価のペプチドと抗１１Ｌ＾−ＯＲ抗体（最終２０〜１０″３Ｍ）との間の阻害 相乗効果を証明する試験を行なった。

結果を表３及び表４に示す。

宍」− Ｔ４　びＤＲと　価のベプ　ドとのＵＵインキュベーション″のＴＩンバ・の ペプチド使用量：最終１■／ｘｌ 老」− Ｔ４　びＤＲと　のベブ　ド　の、インキュベーション実験１は、ペプチドＤＲ −１２とＴ４−１２との間、ＤＲ−１２と抗ＨＬ＾−ＤＲ抗体：２０との間及び モノクローナル抗体０ＫＴ４Ｄと２０６との間、０ＫＴ４ＤとＴ４−１２との間 に阻害相乗効果があることを示す。

実験２でもＤＲ−１２と７４−１２との間及びＴ４−１２と０ＫＴ４Ｄとの間に 同じ阻害相乗効果がみられる。

°実験２及び実験３においては異なる長さの別のペプチド０Ｒ−７、ＤＲ−４を も試験した。この実験でも０Ｒ−４の阻害効果は全く観察されなかったが、ペプ チドＤＲ−７の場合にはＤＲ−７をＴ４−１２と相乗的に使用するとＤＲ−４と ＤＲ−１２との中間の効果が観察された。

抗体Ｌｅｕｌ（最終ＩＩ！ｇ／ｚ１）を用いた試験によれば、阻害は単なるイン キュベーションに結び付く非特異的効果に起因するものでないことが判明した。

しかしながら、単球を、ペプチドＤＲ−１２と共にインキュベートするか、又は ０ＫＴ４−Ｄと相乗的に使用されたペプチドＤＲ−１２と共にインキュベートす ると阻害が観察されることこれらペプチドＤＲが８Ｒ胞に対する１９７８球のヘ ルパー機能を遮断し得るか否かを試験した。ロゼツトＥにより分離した集団を、 種々のペプチド０Ｒ−１２、ＤＲ−４の存在下に２×１０ＳＥ“及び１．５Ｘ　 １０５Ｅ−の割合で合わせて、これらのペプチドの効果をモノクローナル抗体０ ＫＴ４−への効果と比較する。

コノ試験を３種類の最終濃度、０．ＩＩｑ／ｘ１、ｌｑ　／ｘｌ及７ｆ　１０． ｑ　／肩ｌで行なう（第４図）。

効果は特異的抗原増殖試験で得られた結果と全く同等である。また、種々の長さ のペプチドの効果を比較する（第５．６．７図）、阻害最大はペプチドＤＲ−１ ２で得られ、次に大きい効果はペプチドＤＲ−７で得られる。ペプチドＤＲ−４ では阻害が微少で全くないこともある。

４、ベブ　の、　ン　ユベーシ　ン　の座Ｊヱ１１渣− １９７８球を０ＫＴ４−＾抗体（最終０．１■７ｍｌ又は１■／ｗｌ）又はペプ チドＤＲ−１２（最終１４／ｉ１又は５４／ｚｆ）と共にインキュベートするこ とによってｉｎν１ｔｒｏ抗体応答に関する同様の実験を行なった。Ｂリンパ球 をペプチドＴ４−１２（最終１ｔ４１／ｘｌ又は５Ｒｇ／ｗｌと共にインキュベ ートする（第８図）。

増殖試験と平行にＤＲ−１２とＴ４−１２との間及び０ＫＴ４＾とＴ４−１２と の間の阻害相乗効果を観察する。　ＤＲ−１２と０ＫＴ４＾との間に現性である 。

インフルエンザウィルスによって誘発された１９７８球の増殖阻害及び同じウィ ルスに対する制限ＨＬ＾−ＤＲ特異的抗体の産生阻害に関する試験をＨＬ＾及び Ｔ４に類似の種々のペプチドを用いて行なった。その結果は以下のごとく要約で 一配列ＲＦＤＳを含みＤＲ類似の、アミノ酸を夫々１２個及び７個含む２種類の ペプチドは濃度次第でインフルエンザウィルスの増殖及びインフルエンザウィル ス特異的ヘルパーＴの効果をかなり阻害する。

−得られた阻害は抗Ｔ４抗体の添加で得られる効果と同様である。特に重要な観 察は、制限ＨＬ＾−ＤＲＴクローン（ＳＢ１２）特異的増殖がＴ４抗体及びペプ チドＤＲ−１２のいずれによっても阻害されないこと、しかし抗インフルエンザ 抗体の産生に対するこのクローンのヘルパー効果が抗Ｔ４抗体及びペプチドＤＲ −１２の双方によって阻害されることである。

−配列ＲＡＤＳを含むＴ４類似の、１２個のアミノ酸を含むペプチドを用いると 、Ｔの増殖及び抗インフルエンザ抗体応答に一定でないがある程度の阻害効果が 生じ、。

−■リンパ球をペプチドＤＲ−１２又は抗Ｔ４抗体と共にブレインキュベートし 、単球又はＢリンパ球をペプチドＴ４−１２又は抗ＨＬへ−ＤＲ抗体と共にブレ インキュベートすると、■の増殖及び抗体産生に相乗的阻害効果が得られる。

ペプチドＤＲ−１２及びＤＲ−７の阻害効果を説明する幾つかの仮説が考えられ る。

−これらペプチドが１９７８球の表面で１４分子に有効に固定しこれにより活性 化に必要でＴ−８協同に不可欠なＴ４クラスＨの相互作用が阻害される。

阻害程度と試験した免疫応答の制限ＨＬ＾−ＤＲ特性との間に十分な相関が存在 するのでこの仮説には信憑性がある。

クローンＳＢの特異的増殖はペプチド０Ｒ−１２又は抗Ｔ４抗体のいずれによっ ても阻害されないが、抗Ｔ４によるヘルパー機能は阻害される。またペプチドＤ Ｒ−１２は２つの阻害が極めて類似していることを示す。

また前記の反応を利用して、Ｔ４リンパ球スはＨＬ＾分子のレベルで免疫調節作 用に対する所定物質の能力を試験することができ、また、種々のタイプの試験細 胞中で所定抗原によって誘発された相互作用が所定の１（ＬＡ分子のタイプ例え ばＨＬ＾〜ＤＲに由来するか否かを検査し得る。

例えば、特定の分子が単球と１９７８球との間及びＴリンバ球とＢリンパ球との 間で所定抗原によって誘発される相互作用を阻害する能力をもつことが確認され た場合、前記ＦＩＳＨＥＲの試験の相補的ペプチドの一方に置換してこの特定分 子を使用すると、この特定分子の作用モードが置換されたペプチドと同様である か否かを検出することが可能である。

また、特定抗原によって誘発された免疫反応に所定の）ＩＬ＾クラス■分子特に ＨＬ＾−０８分子が関与するか否かを検出するために本発明のペプチドを使用す ることも可能である。このためには前記の試験を使用し、例えばインフルエンザ の場合にはインフルエンザ−ウィルスをこのウィルスが関与する段階で特定抗原 によって置換する。該特定分子の作用モードにＨＬ＾−０８分子が関与するか否 かは、細胞協同の阻害が観察されるか否かに依存する。

本発明が記載の実施態様に全く限定されないこと、逆にそのすべての変形を包含 することは前記の記載からも勿論明らかであろう。

本文中で言及し特に明細書末尾に添付した参考文献目録に含まれる技術文献は本 発明の詳細な説明するために必要な限りで本明細書に含まれるものと理解された い。

（３０）　Ｍｅｉｌｏｒ　Ａ、Ｌ、ｅｔ　ａｌ、Ｃｅ１ｌ　コロ：１３９．　１ ９８４゜（３１）　Ｍａｒｃｈｅ　Ｐ、Ｎ、ｅｔ　ａｌ、工ｍｍｕｎｏｇｅｎｅ ｔｉｃｓ　２１ニア１．　１９８５゜（３２）　Ｎａ１ｒｎ　Ｒ，ｅｔ　ａｌ、 Ｂ主ｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ　２０：４７：３９．　１９８１゜国際調査報告 入ｗＪ＝ｘ　Ｔｏ　°ｚｒ’、Ｅ　ＩＮＴＥＲ−ＮＡτ工０ＮＡｆｆｌ　Ｓ三人 ＲＣＨＲＥ？ＯＲＴ　ＯＮ

Claims (19)

【特許請求の範囲】
1. １．一般式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｘは水素原子又はＨ−末端をもつペプチド基、ＺはＯＨ基又はＣ−末端 をもつペプチドであり、これらペプチドＸ及びＺはそれ自体がペプチド配列から 構成されるとき内部テトラペプチド配列を露呈させる要件を妨害しない〕のいず れかで示されるペプチド。
2. ２．同一構造中に前記テトラペプチドの１つと対応する鏡像テトラペプチドとを 含み、２つのテトラペプチドは、これら２つのテトラペプチドの各々の露呈能力 を妨害しない別の中間ペプチド基によって互いに結合されていることを特徴とす る請求の範囲１に記載のペプチド。
3. ３．２〜１０個のアラニン残基を含む鎖から成ることを特徴とする請求の範囲２ に記載のペプチド。
4. ４．式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中「−」がアミノ酸残基を示し、Ｘ及びＺが前記と同義である〕 を特徴とする請求の範囲１に記載のペプチド。
5. ５．【配列があります】 から選択されたペプチド。
6. ６．含有アミノ酸の総数が５０以下、好ましくは３０未満、より好ましくは２０ 未満であることを特徴とする請求の範囲１から５のいずれかに記載のペプチド。
7. ７．式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＸＩＩ）〔式中Ｘ及びＺは前記と同義、Ｊ はＡ、Ｖ又はＬ〕で示され、６〜２０個ときには３０個のアミノアシル残基を含 むことを特徴とする請求の範囲１に記載のペプチド。
8. ８．【配列があります】 から選択されることを特徴とする請求の範囲７に記載のペプチド。
9. ９．式 ▲数式、化学式、表等があります▼（ＸＶＩ）〔式中Ｘ及びＹは前記と同義、 ＢはＹ、Ｓ、Ｄ、Ｆ又はＮから選択され特にＹ又はＤであり、ＪはＡ、Ｖ又はＬ から選択され、Ｆが任意にＹで置換されてもよい〕で示され、１２〜２０個とき には３０個のアミノアシル残基を含むことを特徴とする請求の範囲１に記載のペ プチド。
10. １０．ドデカペプチドから成ることを特徴とする請求の範囲９に記載のペプチド 。
11. １１．式 ＥＥＢＪＲＦＯＳＤＶＧＥ 〔式中Ｂは前記と同義〕 で示されることを特徴とする請求の範囲１０に記載のペプチド。
12. １２．ＢがＹであることを特徴とする請求の範囲１０に記載のぺプチド。
13. １３．２０個以内、ときには３０個のアミノアシル残基を含み得るＲＡＤＳ配列 を含むペプチドであって、該ＲＡＤＳ配列の両側にヒトＨＬＡ分子特にＨＬＡ− ＤＲ分子により認識されＲＡＤＳ配列の能力を妨害しないペプチド配列を含むこ とを特徴とするペプチド。
14. １４．【配列があります】 から選択されるペプチド。
15. １５．請求の範囲１から１４のいずれかに記載のペプチドの１つを特異的に認識 し得る能力をもつことを特徴とする好ましくはモノクローナルの抗体。
16. １６．ＬＡＶウィルス又はＴ４リンパ球を請求の範囲１から１５のいずかに記載 のペプチドと接触させることを特徴とするＬＡＶウィルスのＴ４リンパ球への接 着阻害方法。
17. １７．生物流体例えば病人の血清中でのＲＦＤＳ配列を含むＬＡＶウィルスゲノ ム領域に対する抗体の検出方法であって、ウィルス検出の基礎になる免疫反応を 生じさせる適当な条件下で該生物流体をウィルスと接触させることを特徴とする 検出方法。
18. １８．【配列があります】 の１つから選択されたペプチド。
19. １９．請求の範囲１８のペプチドの１つに対して特異的なモノクローナル抗体。